EP2015746A2 - Verwendung von substituierten glycerinderivaten zur herstellung einer pharmazeutischen zubereitung - Google Patents

Verwendung von substituierten glycerinderivaten zur herstellung einer pharmazeutischen zubereitung

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EP2015746A2
EP2015746A2 EP07722324A EP07722324A EP2015746A2 EP 2015746 A2 EP2015746 A2 EP 2015746A2 EP 07722324 A EP07722324 A EP 07722324A EP 07722324 A EP07722324 A EP 07722324A EP 2015746 A2 EP2015746 A2 EP 2015746A2
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EP
European Patent Office
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sub
radical
use according
alkyl
pharmaceutical preparation
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP07722324A
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English (en)
French (fr)
Inventor
Dieter Mueller-Enoch
Thomas Haehner
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Haehner Thomas
Universitaet Ulm
Original Assignee
Individual
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Filing date
Publication date
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    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/683—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols
    • A61K31/685—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols one of the hydroxy compounds having nitrogen atoms, e.g. phosphatidylserine, lecithin
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
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    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
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    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
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    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the invention relates to the use of substituted glycerol derivatives or pharmaceutically acceptable salts of these compounds, for the preparation of a pharmaceutical preparation as well as such preparations themselves, in particular for administration to humans.
  • liver disease the so-called fatty liver, which can develop into liver inflammation or hepatitis, and in the later stages to cirrhosis of the liver.
  • the risk and the extent of the liver damage depends directly on the amount and duration of alcohol consumption, whereby the risk varies individually.
  • Alcohol-induced inflammation of the liver is a possibly life-threatening disease, which may be accompanied by fever, jaundice and an increase in white blood cells.
  • Such alcohol-induced liver inflammation can be cured by complete alcohol abstinence, scarring excluded in cirrhosis.
  • hepatides are also produced in persons who do not engage in alcohol abuse or do not drink any alcohol at all. Such hepatides are induced, for example, by environmental toxins, for example when working in coating plants and / or by medicaments.
  • Alzheimer's disease is a progressive dementia disease that ultimately leads to complete loss of memory and personality. It is caused by protein deposits in nerve cells, the plaques, which are formed from ß-amyloid or so-called ⁇ -proteins. The egg- The true cause is unknown so far, whereby both metabolic disorders, gene mutations, as well as so-called slow virus infections or prions are discussed.
  • Alzheimer's disease it is known that in the brain of transgenic mice, a trigger of plaque formation is lipid oxidation leading to a G-amyloid precursor protein which forms the known plaques.
  • Parkinson's disease is a degeneration of dopaminergic neurons in the substantia nigra of the brain. It is the most common neurological disease in old age. Beginning signs are here in particular trembling movements (tremor), a depressive mood, apathy as well as slowed thinking. Again, it is believed that reactive oxygen species are involved in the development of the disease.
  • cytochromes are a variety of different enzymes whose active center has a heme structure. They catalyze the transfer of electrons to an acceptor in a variety of oxidation and Hydroxil michiganson.
  • cytochromes of the P450 family CYP-450
  • CYP-450 cytochromes of the P450 family
  • monooxygenases which are among the most important enzymes of the metabolism of hydrophobic exogenous substances and the modification of hydrophobic hormones called steroids.
  • Cytochrome P450 enzymes therefore play an important role in detoxification. It is estimated that approximately half of all current drugs are hydroxylated by cytochrome P450 enzymes of the liver. The residence time of many drugs in the body is therefore considerably reduced by the activity of cytochrome P450 enzymes. The vast majority of cytochrome P450 is found in mammals in the liver, as this is the central detoxification organ. Cytochrome P450 is usually present in the form bound to the membrane of the endoplasmic reticulum.
  • Cytochrome P450 enzymes also play a key role in mediating the resistance of insects to insecticides and plants to herbicides.
  • cytochrome P450 has a six-coordinate heme group, which undergoes a reaction in the following scheme
  • the cytochrome P450 itself is present in a variety of different forms, such as 1A1, 2B1, 2C9, 2J2, 2E1, 3A1, etc.
  • the rat cytochrome P450 2B1 and human cytochrome P450 2E1 differ in their amino acid sequence by about 60%, ie that both the structures of the active and catalytic centers as well as the size and shape of the access channels for the substrate differ considerably. This ultimately leads to the fact that both enzymes metabolize completely different classes of substrates.
  • the isoform 2E1 reacts with much smaller molecules, such as ethanol, acetone or p-nitrophenol.
  • chemotherapeutic agents used in cancer therapy are also broken down by cytochrome P450 enzymes.
  • Cytochrome P450 2J2 is an epoxygenase that converts the substrate arachidonic acid into four different isomeric epoxyeicosatrienoid (EET) acids.
  • EET isomeric epoxyeicosatrienoid
  • EETs inhibit angiogenesis, i. H. promote the formation of new blood vessels. This process plays an important role in the growth of tumors (Pozzi A. et al. "Characterization of 5,6- and 8,9-epoxy-eicosatrienoic Acids (5,6- and 8,9-EET as Potent in Vivo Angiogenic Lipids Chem. 280: 27138-27146, 2005). J. Biol. Chem.
  • Müller-Enoch et al. describe in Z. Naturforsch. (2001) 56c, pages 1082-1090, the inhibition of cytochrome P450 2B1 of the rat by means of lysophosphatidyl cholines, lysophosphatidylinositol and arachidonic and oleic acids or by means of monoacylglycerols, monooleylglycerols, and monopalmitoylglycerols.
  • the object of the present invention is to provide compositions for the preparation of a pharmaceutical preparation which can be used for the prevention or treatment of cancers, pathological consequences of alcohol abuse, viral hepatitis, steato-hepatitis, acute and chronic pancreatitis, Alzheimer's disease, Parkinson's disease, toxic kidney diseases , acute renal failure, diabetes mellitus, Wilson's disease, siderosis, ischemia-reperfusion injury, and / or arteriosclerosis, for use as an antidote to environmental toxins and drug intoxication, to prolong the residence time of drugs in the organism, or to combat toxic side effects in the administration of chemotherapeutic agents.
  • ROS reactive oxygen species
  • oxygen radicals such as the superoxide anion (O 2 " " ) and the hydroxyl radical (• OH)
  • O 2 " " oxygen radicals
  • OH hydroxyl radical
  • the compounds of the invention have the formula
  • R1 / R6 / R7 / R8 may in principle take the form RX.
  • R is an aliphatic or aromatic hydrocarbon radical preferably having 6 to 40 carbon atoms, which has a particularly terminal, hydrophilic radical A and X is at least one free carbon atom. or heteroelectron pair and / or Pl-electron-containing radical.
  • the radical R is in particular lipophilic.
  • the radical R is an alkyl radical. Thus, it may be straight-chain or branched, have single, double or triple bonds and be substituted. It usually has an aliphatic backbone with 6 to 26, in particular 8 to 22 carbon atoms. Useful hydrocarbon chains with a backbone of 10 to 15, in particular 10 to 13 carbon atoms. If R is an alicyclic or aromatic hydrocarbon radical which may be condensed and / or lipophilicly substituted, it usually has at least 5 or 6 and at most 40 or at most 25 carbon atoms. Further expedient minimum lengths are 7 or 8 C atoms and further expedient maximum lengths are 22 or 20 C atoms.
  • Suitable radicals X are heterocycles, as well as alkynyl radicals.
  • the heterocycles are in particular nitrogen, oxygen and / or sulfur-containing heterocycles.
  • the heterocycles may be aromatic and / or non-aromatic and usually have 5 or 6 ring atoms.
  • X can also be a condensed heterocycle. Examples of such heterocycles are imidazole, pyrrole, pyrazole, pyridine, pyrazine, indole, isoindole, indazole.
  • Preferred heterocycles are 6 and in particular 5 atoms having rings with one, two or three heteroatoms. Further suitable heterocycles are, for example, thiazoles, triazoles, furans.
  • Preferred alkynes have the structure -C ⁇ C-Ri 2 , wherein Ri 2 is a hydrogen or an optionally substituted Cr to C 15 or maximum C-io-alkyl radical, which in turn may optionally have double or triple bonds. Usually, however, Ri 2 has a maximum of 5, in particular a maximum of 3 C atoms. In a further expedient embodiment of the invention, the radical X is for example
  • radicals X are expediently radicals which coordinate with the prosthetic heme group.
  • Ri which is normally a hydrogen or a C 6 - or C 7 - to C 26 or C 2 o-alkyl chain, in one preferred embodiment has one or more double and / or triple bonds.
  • the hydrocarbon backbone can be formed with alicyclic and / or aromatic hydrocarbon, which may be necessary because of the ring structures up to 40 carbon atoms.
  • Ri has an ⁇ -double bond and an ⁇ -permanent triple bond such.
  • a ⁇ -acetylenic sphingosine it is also possible to arrange the triple bond in a long molecule in the middle, and that it coordinates with the heme, such.
  • the terminal triple bond may be substituted by a heterocycle or other heme coordinating group.
  • Ri may have one or more substituents. If R 1 contains a terminal heterocycle, then this heterocycle can have one of the definitions given for R 6 to Rs.
  • the radicals R 2 to R 5 may be identical or different and are usually a C 1 to C 5 alkyl radical or hydrogen.
  • the alkyl radicals may optionally be substituted and, for example, an alkanol, alkylamine or aikylthiol radical be. Particular preference is given to hydrogen, methyl, ethyl and propyl radicals or derivatives thereof.
  • Re to Rs are connected via the bond B 6 , B 7 and B 8 with the respective glycerol C atom and may be identical or different and hydrogen, a CQ or C 7 to C 26 or C 20 , in particular Cs or C 9 to C22 or Ci 8 be alkyl radical.
  • These alkyl radicals can be both substituted and unsubstituted, preference being given to those substituents which have one or more triple bonds between the C 4 or Cg to C 15 or Cu C atoms.
  • the hydrocarbon backbone can be formed with alicyclic and / or aromatic hydrocarbons, in which case up to 40 or up to 25 carbon atoms may be necessary because of the ring structures.
  • the length of the aliphatic backbone comprises 6 or 9-26 or 13 carbon atoms, if R1 is an imidazole radical.
  • R1 is an imidazole radical.
  • a representative of this preferred group is, for example, 12-imidazolyl-dodecanol or 1-imidazolyl-dodecane.
  • the length of the aliphatic backbone comprises 6 or 14-26 or 18 carbon atoms if R1 is an ethynyl radical.
  • R1 is an ethynyl radical.
  • Representative of this preferred group is e.g. 17-Octadecinyl-1 acid.
  • the length of the aliphatic backbone comprises 9-13 carbon atoms when R1 is ethynyl.
  • Representatives of this preferred group are e.g. 2,2-dimethyl-11-dodecynoic acid, 10-undecynyl sulfate, 10-undecynoic acid or 10-undecinol.
  • At least one of the radicals R ⁇ to Rs is a glycoside, in particular a monosaccharide, which is optionally substituted, for example by means of a sulfate or an amino radical.
  • di- or oligosaccharides are quite suitable for the purpose of the invention.
  • Preferred saccharides are pentoses and hexoses and mixed saccharides.
  • the glycosides can also be thiosugars.
  • At least one of R ⁇ to R 8 is a positively or negatively charged amino acid residue, particularly an amino acid having an additional amino group, wherein amino acid groups of the structure - (CH 2 ) H -N + (Rg-Rn) is a convenient alternative embodiment represent.
  • n is usually an integer between 1 and 5, with 1 to 3, in particular 2 being preferred.
  • the radicals Rg to Rn are usually hydrogen or a methyl, ethyl or propyl group.
  • R 9 to Rn may be the same or different.
  • one of the X with one of the Re to R 8 radicals together form a phosphocholine group or other phosphate esters, such as. B.
  • the heme-coordinating group is a bonded via a nitrogen atom imidazole or ethynyl (-C ⁇ CRi 2 ), wherein R 12 is hydrogen or a substituted or unsubstituted aliphatic Ci to C 12 hydrocarbon radical.
  • the use according to the invention makes it possible to reduce the formation of such reactive oxygen species and to treat the abovementioned diseases.
  • these compounds offer the possibility of inhibiting the formation and proliferation of tumor tissue, since the application of the compounds used according to the invention avoids the conversion of arachidonic acid into the proliferation-promoting and apoptosis-inhibiting epoxyeicosatrienoid acids.
  • the compounds according to the invention further develop such that the functional groups of the hydrocarbon radicals R 1 , R 6 , R 7 , Rs, ie the terminal hydrocarbon radicals, the alcoholic OH group, the sulfate or the Co-A group or the organic acid group are modified by addition of another, hydrophilic residue.
  • the compounds according to the invention which contain the heme-coordinating hydrocarbon radical already described comprise compounds having the basic structure of sphingosines, mono-, di- and triglycerides, as well as imidazolated or ethinylated phosphoglycerides, glycolipids, sphingolipids, gangliosides and cerebrosides, in particular their imidazolated or ethinylated forms.
  • hydrophilic moiety does not interfere with the binding of the molecule to the active site of cytochrome P450. This can be precisely controlled by choosing the length of the carbon backbone.
  • one of R 1, R 6 , R 7 , Re is a choline or ethanolamine, an ⁇ -, ⁇ - or ⁇ -hydroxyamino acid, such as, for example, serine, threonine, inositol or else galactose.
  • B 6 , B 7 and Bs may be the same or different and represent O, S, NH, PO 4 , Se, SO 4.
  • the bond B 6 , 7i8 which represents the respective carbon atom of the glycerol or polyol moiety R 6 , 7 , s is usually an ether, and / or an ester bond between an alcoholic polyol or glycerol and an or- ganic and / or inorganic acid group of R ⁇ j, a, such as.
  • Examples of such compounds are e.g. 12-imidazolyl-dodecanol-i-phosphatidylcholine, 10-imidazolyl-decanol-i-phosphatidylcholine or 17-octadecynyl-1-phosphatidylcholine.
  • the compounds used in the invention include in particular mono-, di- or triglycerides, phospholipids and glycolipids.
  • the use according to the invention has the advantage that the compounds are not directly accessible to enzymes of the ⁇ -oxidation metabolism and therefore are not metabolized immediately.
  • heme-coordinating monoglycerides are produced, which are also referred to as lysolipids, and which serve with the help of lipoproteins, ie non-covalent aggregates of lipids and proteins that form micelle-like particles and the transport of water-insoluble lipids in the blood ,
  • heme-coordinating monoglycerides such as. B. ethinylated or imidazoliere monoglycerides according to the above definition, which have already been administered as such. Since certain pathogenic tissues, such as tumors, have a high energy conversion, and promote the self-vascularization by release of growth factors (VEGF, PDGF), loaded with said heme-coordinating monoglycerides lipoproteins migrate with the blood stream preferably in these tissues. The "packaging" of the heme-coordinating hydrocarbon radicals in the form of lysolipids thus allows targeted transport of the same into the said target organs.
  • VEGF growth factors
  • the heme-coordinating compounds have the property of interacting with the active site of cytochrome P450 to inhibit its activity.
  • the compounds have a potential role in cancer therapy. It is hoped that its delivery will inhibit cytochrome P450-mediated conversion of arachidonic acid to epoxyeicosatrienoid acid. The latter, as already mentioned, promote cell division and proliferation and inhibit apoptosis. It is also to be hoped that the administration of such a compound inhibits the hydroxylation of chemotherapeutic agents, which ultimately leads to their excretion. Such a compound could thus be used for both direct and adjuvant tumor therapy. For this reason, the above-mentioned preferred embodiment, which enables a targeted transport into solid organs and tumors, is particularly promising.
  • hydrophilic radical R 2 does not impair the binding of the molecule to the active site of the cytochrome P450. This can be precisely controlled by choosing the length of the carbon backbone.
  • the invention further provides a pharmaceutical preparation comprising a compound of the invention in a pharmaceutically acceptable carrier.
  • a pharmaceutical preparation comprising a compound of the invention in a pharmaceutically acceptable carrier.
  • inflammations or pancreatitis in addition to alcohol abuse, can also be caused by toxic substances. These include, in particular, environmental toxins, such as occupational chemicals or even medicines. Also, viral infections or metabolic endocrine factors can cause such pancreatitis, with reactive oxygen species in all cases involved in disease development and disease progression.
  • the pharmaceutical according to the invention has been found to be suitable. It has been shown that ⁇ -islet cells of the islets of Langerhans are particularly sensitive to oxidative processes and that they rapidly decrease with increased oxidative stress. This oxidative stress can be avoided with the pharmaceutical according to the invention, but at least reduce massively.
  • the pharmaceutical of the invention has been found to be effective. It has been found, for example, that with the substances according to the invention the concentration of dopamine can be increased by reduced degradation.
  • toxic kidney diseases as well as other diseases, such as. B. by side effects in the administration of chemotherapeutic agents, in particular cell toxins, such as metal complexes such as cisplatin, carboplatin, titanocene dichloride or gold complexes are caused to be treated with the medicament of the invention.
  • chemotherapeutic agents in particular cell toxins, such as metal complexes such as cisplatin, carboplatin, titanocene dichloride or gold complexes are caused to be treated with the medicament of the invention.
  • the organotoxicity of metal complexes or other toxic agents such as halogenated hydrocarbons, both mono- and also polihalogenated hydrocarbons including halohydrothane type vapor anesthetics, and corresponding aromatic hydrocarbons, nitrosamines, Acrylamide or medicinal products such as paracetamol, methotrexate, isoniazid or aminoglycoride antibiotics or x-ray contrast agents.
  • the medicament according to the invention is thus also suitable for the treatment of the organotoxicity of environmental poisons, in particular as an antidote for this to organs such as liver, kidney, central nervous system, pancreas, etc.
  • cytotoxic drugs in cancer treatment, and may increase against this background as adjuvant therapy, the prospects of success of chemotherapy.
  • the pharmaceutical preparation according to the invention for the treatment of acute renal failure, in particular those renal failure caused by drug intoxication, hemolytic diseases, hemolytic uremic syndrome (Gasser syndrome), rhabdomyolysis gangue of striated skeletal muscle), caused by circulatory ischemic processes and / or a viral infection.
  • acute renal failure in particular those renal failure caused by drug intoxication, hemolytic diseases, hemolytic uremic syndrome (Gasser syndrome), rhabdomyolysis gangue of striated skeletal muscle), caused by circulatory ischemic processes and / or a viral infection.
  • the agent according to the invention is thus also particularly suitable for the prevention of reperfusion damage in transplanted organs.
  • transplanted organs Such organs are kept in a cooled nutrient solution until their transplantation into the body of a new recipient. After transplantation, these are then re-perfused with body fluids after connection to the circulatory system of the recipient, which leads to reperfusion damage.
  • the substances according to the invention have proved to be especially inhibitors of the human isoforms of gene family 2 of cytochrome P450, in particular of isoforms 2E1 and 2J2 and diseases caused by them.
  • the pharmaceutical preparation is incorporated in liposomes.
  • the compounds forming the basis of the preparation have long hydrocarbon radicals makes their incorporation into liposomes a very suitable form of administration.
  • Such liposomes are suitable for intravenous, intramuscular, intraperitoneal, percutaneous or even oral administration.
  • an administration as an aerosol is suitable.
  • the compounds according to the invention can also be administered directly as such. Also in this case, the above administration modes are suitable.
  • a) 12-imidazolyl-1-dodecanoic acid is synthesized according to a method described in Alterman et al. ("Fatty acid discrimination and omega-hydroxylation by cytochrome P4504A1 and a cytochrome P4504A1 / NADPH-P450 reducase fusion protein", Archives of Biochemistry and Biophysics 1995, 320: 289-296).
  • 12-bromo-1-dodecanol is oxidized with Jones' reagent to 12-bromo-1-dodecanoic acid.
  • the white solid acid is then esterified with diazomethane to the corresponding methyl ester.
  • the methyl ester is added directly with imidazole and reacted at 8O 0 C for five hours to 12-imidazolyl-1-dodecanoic acid methyl ester.
  • the resulting thick mass is partitioned between water and dichloromethane, the organic phase is dried over Na 2 SO 4 and evaporated.
  • the oily residue is purified by chromatography on salicagel and then dissolved in a mixture of methanol and tetrahydrofuran (3: 4), mixed with LiOHeH 2 O and the mixture is refluxed for two hours. warms. After evaporation of the solvents, the white residue is redissolved in water, extracted with dichloromethane, acidified to pH 5-6 and extracted again with ethyl acetate. The ethyl acetate extract is dried over Na 2 SO 4 , filtered and evaporated. The white solid residue is recrystallized from methanol / ether to give 12-imidazolyl-1-dodecanoic acid.
  • 12-imidazolyl-1-dodecanol and 1-imidazolyldodecane are synthesized according to a method described in Lu et al. ("Heme-coordinating analogs of lauric acid as inhibitors of fatty acid ⁇ -hydroxylation", Archives of Biochemistry and Biophysics 1997, 337: 1-7).
  • 12-bromo-1-dodecanol and imidazole are heated in a molar ratio of 1: 3 at 80 0 C for five hours.
  • the crude product is partitioned between water and dichloromethane.
  • the organic phase is dried over Na 2 SO 4 and evaporated.
  • the 12-imidazolyl-1-dodecanol is recrystallized from benzene / n-hexane.
  • 1-imidazolyldodecane is prepared from 1-bromododecane and imidazole in the molar ratio 1: 3 with stirring and heating at 85 ° C.
  • the crude product is dissolved in dichloromethane and shaken out three times with water.
  • the organic phase is dried over Na 2 SO 4 , filtered and evaporated.
  • the oily evaporation residue is crystallized from n-hexane to yield 1-imidazolyldodecane.
  • Phosphatidylcholine is reacted under acidic conditions in the presence of dicyclohexylcarbodiimide to form an O-phosphorylthiourea.
  • dicyclohexylcarbodiimide to form an O-phosphorylthiourea.
  • 12-imidazolyl-1-dodecanol which nucleophilically attacks on the phosphoryl group and forms an ester linkage therewith to form 12-imidazolyl-1-phosphatidylcholine.
  • Dicyclohexylurea precipitates.
  • 4-diethylamino-pyridine 4-diethylamino-pyridine.
  • the reaction mechanism is similar to that of Steglich esterification in which dicyclohexylcarbodiimide is used to esterify an organic acid with an alcohol.
  • the purified 3-benzyl-sn-glycerol is treated with a fatty acid, e.g. Palmitate, dissolved in carbon tetrachloride.
  • a fatty acid e.g. Palmitate
  • 4-diethylaminopyridine and dicyclohexylcarbodiimide gives rise to ester bonds between the alcohol groups of 3-benzyl-sn-glycerol and the carboxyl groups of the fatty acids, whereby dicyclohexylurea precipitates.
  • This reaction mechanism is also called "Steglich esterification".
  • 1,2-Dipalmitoyl-3-benzyl-sn-glyceride is dissolved in tetrahydrofuran and hydrogenolysed in the presence of a catalyst (10% Pd / C) with elemental hydrogen.
  • a catalyst (10% Pd / C) with elemental hydrogen.
  • the benzyl radical is substituted by a hydrogen atom, and there is 1, 2-dipalmitoyl-sn-glyceride.
  • Phosphoryl trichloride is treated with triethylamine dissolved in tetrahydrofuran and stirred in ice. Subsequently, 1, 2-dipalmitoyl-sn-glyceride dissolved in tetrahydrofuran is added dropwise. This initially produces 1, 2-dipalmi- toyl-sn-glyceride-3-phosphoryl dichloride.
  • the mixture is purified, cooled, treated with sodium carbonate and hexane and shaken.
  • the bond between the phosphate radical and the chloride is hydrolyzed.
  • the product formed is the sodium salt of 1,2-dipalmitoyl-sn-glyceride-3-phosphoryl bromoethyl ester.
  • 1-Di-dipalmitoyl-sn-glyceride-S-phosphoryl-bromoethyl ester is dissolved in a mixture of diethyl ether and distilled water containing CaCl 2 "2H 2 O.
  • the pH is adjusted to 7.5 by adding Palitzsch buffer. Subsequently, the enzyme phospholipase IK 2 is added and stirred at 35 ° C for 60 min. In this case, the ester bond is hydrolyzed at position 2 of the glycerol, and there is the corresponding 1-PalmitoyI-sn-glyceride-3-PhosphoaIkylester carrying an OH group at position 2, and a free fatty acid.
  • the resulting molecule can now be selectively esterified at position 2 of the glycerol residue with a labeled fatty acid, e.g. an imidazolated or ethinylated fatty acid.
  • a labeled fatty acid e.g. an imidazolated or ethinylated fatty acid.
  • the phosphoalkyl ester at position 3 can be reacted with a suitable alcohol, e.g. Choline, serine, ethanolamine or inositol, to be transesterified.
  • the obtained 1-palmitoyl-sn-glyceride-3-phosphoalkyl ester is dissolved in carbon tetrachloride, an imidazolated or ethynylated fatty acid is added, and the mixture is stirred.
  • the added fatty acid may be e.g. 17-octadecic acid available from Sigma Aldrich. It may also be 12-imidazolyl-1-dodecanoic acid, which can be synthesized as described under 1..
  • Step 2 a "Steglich esterification” is carried out in which 4-diethylaminopyridine and dicyclohexylcarbodiimide are added to the mixture, whereby an ester bond is formed between the remaining OH group on the glycerine residue and the carboxyl group of the labeled fatty acid.
  • the precipitated dicyclohexylurea is removed and the solvent evaporated.
  • the product obtained is a 1-palmitoyi-2-acyl-sn-glyceride-3-phosphoalkyl ester.
  • i-Palmitoyl-acyl-sn-glyceride-S-phosphoryl-bromoethyl ester is dissolved in chloroform. Subsequently, 2-propanol-trimethylamine is added. The reaction vessel is incubated at 50 0 C, then the solvent is evaporated with nitrogen. The reaction product is purified to yield a gelatinized 1-palmitoyl-acyl-sn-glyceride-S-phosphatidylcholine.
  • the labeled 1-palmitoyl-2-acyl-sn-glyceride-3-phosphatidylserine represented by the above-mentioned is incorporated into Dissolved CH 2 Cl 2 and added trifluoroacetic acid and perchloric acid. The mixture is then stirred in the cold and washed with water and methanol. After phase separation, the lower phase is extracted with Na 2 CO 3 and evaporated. Upon addition of methanol, crystals are formed which are labeled 1-palmitoyl-2-acyl-sn-glyceride-3-phosphatidylethanolamine.
  • the attached tables list some exemplary compounds of the invention. It is immediately apparent to the person skilled in the art that a multiplicity of further compounds can be subsumed under the cited claims.
  • the aliphatic radicals may be straight-chain or branched, have single, double or triple bonds and be substituted, and have an aliphatic backbone with 6 or 9 to 26 or 19 carbon atoms.
  • the hydrocarbon backbone can be formed with alicyclic and / or aromatic hydrocarbons, which may be necessary because of the ring structures up to 40 carbon atoms.
  • hydrophilic radicals are other alcohols such as inositol or ethanolamine or their glycerides.

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Abstract

Eine Verbindung der Formel (I) oder pharmazeutisch akzeptable Salze davon können zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung zur Vorbeugung oder Behandlung von Krebserkrankungen, pathologischer Folgen des Alkoholmissbrauchs, viraler Hepatitis, Steato-Hepatitis, akuter und chronischer Pankreatitis, toxischer Nierenerkrankungen, hepatischer Insulinresistenz bei Diabetes mellitus, Leberschäden bei Morbus Wilson und/oder Siderosen, Ischämie-Reperfusionsschäden, als Antidote gegen Umweltgifte und Medikamentenintoxikation, zur Verlängerung der Verweildauer von Medikamenten im Organismus, und/oder zur Bekämpfung toxischer Nebenwirkungen bei der Verabreichung von Chemotherapeutika verwendet werden. Dabei sind B6, B7 und B8 gleich oder verschieden und bedeuten 0, S, NH, PO4, Se, SO4. R1 ist gleich H oder eine C6- bzw. C7- bis C26- bzw. C20-Alkylkette, und R2, R3, R4 und R5 können gleich oder verschieden sein und ein H oder eine C1- bis C3- Alkyl, Alkanol, Alkylamin und/oder Alkylthiol-Gruppe bedeuten. R6, R7 und R8 können gleich oder verschieden sein und H, ein substituierter oder unsubstituierter C6- bzw. C7- bis C26-Alkylrest, ein Glycosidrest, ein positiv oder negativ geladener Aminosäurerest, ein - (CH2)n-N+(R9, R10, R11) bedeuten, wobei R9, R10, R11 H, Methyl-, Ethyl- und/oder Propylrest ist, und wobei mindestens zwei der R2, R3, R4 und R5 gemeinsam einen Polyolrest bilden können und n eine ganze Zahl von 1 bis 5 bedeutet.

Description

Verwendung von substituierten Glycerinderivaten zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung
Beschreibung
Die Erfindung betrifft die Verwendung von substituierten Glycerinderivaten oder pharmazeutisch akzeptablen Salzen dieser Verbindungen, zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung sowie derartige Zubereitungen selbst, insbesondere zur Applikation am Menschen.
Übermäßiger dauerhafter Alkoholkonsum führt meist zu einer Lebererkrankung, der so genannten Fettleber, die sich zu einer Leberentzündung bzw. Hepatitis und im Spätstadium zu einer Leberzirrhose entwickeln kann. Dabei hängt das Risiko und das Ausmaß des jeweiligen Leberschadens direkt von der Menge und der Dauer des Alkoholkonsums ab, wobei das Risiko individuell unterschiedlich ist. Eine alkoholbedingte Entzündung der Leber (Alkoholhepatitis) stellt eine ggf. lebensbedrohliche Erkrankung dar, die mit Fieber, Gelbsucht sowie einer Erhöhung der weißen Blutkörperchen einhergehen kann. Derartige alkoholbedingte Leberentzündungen sind durch völlige Alkoholabstinenz ausheilbar, Vernarbungen bei der Leberzirrhose ausgenommen.
Neben dieser alkoholinduzierten sogenannten Fettleberhepatitis oder alkoholischen Steato-Hepatitis (ASH) entstehen auch Hepatiden bei Personen, die keinen Alkoholmissbrauch betreiben, oder überhaupt keinen Alkohol zu sich nehmen. Solche Hepatiden werden beispielsweise durch Umweltgifte, beispielsweise bei Arbeiten in Lackierwerken und/oder auch durch Medikamente induziert.
Die Alzheimersche Erkrankung ist eine fortschreitende Demenzerkrankung, welche letztlich zum völligen Verlust des Gedächtnisses und der Persönlichkeit führt. Hervorgerufen wird sie durch Proteinablagerungen in Nervenzellen, den Plaques, welche aus ß-Amyloid- bzw. so genannten τ-Proteinen gebildet werden. Die ei- gentliche Ursache ist bislang unbekannt, wobei sowohl metabolische Störungen, Genmutationen, sowie so genannte Slow-Virus-Infektionen bzw. Prionen diskutiert werden.
Bei der Alzheimerschen Erkrankung ist bekannt, dass im Gehirn von transgenen Mäusen ein Auslöser der Plaque-Bildung eine Lipidoxidation ist, die zu einem G- Amyloid-Vorläuferprotein führt, welches die bekannten Plaques ausbildet.
Bei der Parkinsonschen Erkrankung handelt es sich um eine Degeneration dopa- minerger Neurone in der Substantia Nigra des Gehirns. Dabei handelt es sich um die häufigste neurologische Erkrankung im höheren Lebensalter. Beginnende Anzeichen sind hier insbesonders zitternde Bewegungen (Tremor), eine depressive Grundstimmung, Apathie sowie verlangsamtes Denken. Auch hier wird vermutet, dass reaktive Sauerstoffspezies an der Entstehung der Krankheit beteiligt sind.
Es ist bekannt, dass Oxidationsprozesse im Stoffwechsel mit Hilfe von Cytochro- men erfolgen. Bei den Cytochromen handelt es sich um eine Vielzahl verschiedener Enzyme, deren aktives Zentrum eine Hämstruktur aufweist. Sie katalysieren bei einer Vielzahl von Oxidations- und Hydroxilierungsreaktionen den Transfer von Elektronen auf einen Akzeptor.
Eine wichtige Rolle spielen z.B. die Cytochrome der P450-Familie (CYP-450). Hierbei handelt es sich um Monooxygenasen, die ubiquitär sind und zu den wichtigsten Enzymen des Metabolismus hydrophober körperfremder Stoffe und der Modifikation hydrophober Hormone, der Steroide, gehören.
Eine der Hauptaufgaben der Cytochrom-P450-Enzyme ist es, körperfremde Stoffe durch Hydroxylierung zu solubilisieren und auf diese Weise der renalen Exkre- tion zuzuführen. Cytochrom-P450-Enzyme spielen daher eine wichtige Rolle bei der Entgiftung. Es wird geschätzt, dass ca. die Hälfte aller derzeitigen Arzneistoffe durch Cyto- chrom-P450-Enzyme der Leber hydroxyliert wird. Die Verweildauer vieler Arzneistoffe im Körper wird daher durch die Aktivität von Cytochrom-P450-Enzymen z.T. erheblich vermindert. Die überwiegende Menge an Cytochrom P450 findet sich bei Säugetieren in der Leber, da diese das zentrale Entgiftungsorgan darstellt. Cytochrom P450 liegt in der Regel in an die Membran des endoplasmatischen Reticulums gebundener Form vor.
Auch bei der Vermittlung der Resistenz von Insekten gegen Insektizide und der Pflanzen gegen Herbizide spielen Cytochrom-P450-Enzyme eine Schlüsselrolle.
In seiner Grundstruktur weist Cytochrom P450 eine sechsfach koordinierte Häm- gruppe auf, an der eine Reaktion folgendem Schema
RH + O2 + 2H+ + 2 e → ROH + H2O
katalysiert wird. Dabei werden die beiden für diese Reaktion erforderlichen Elektronen z.B. von mit dem Enzymkomplex assoziierten NADPH-Cytochrom P450- Reduktase bereitgestellt. Auf diese Weise entstehen am P450 u. a. auch cytoto- xische, reaktive Sauerstoffspezies (ROS).
Das Cytochrom P450 selbst liegt in einer Vielzahl verschiedener Formen vor, wie 1A1 , 2B1 , 2C9, 2J2, 2E1 , 3A1 etc. So unterscheiden sich beispielsweise das Cytochrom P450 2B1 der Ratte und humanes Cytochrom P450 2E1 in ihrer Aminosäurensequenz zu circa 60 %, d. h. dass sich sowohl die Strukturen der aktiven und katalytischen Zentren sowie die Größe und Form der Zugangskanäle für das Substrat ganz erheblich unterscheiden. Dies führt letztlich auch dazu, dass beide Enzyme völlig verschiedene Substratklassen metabolisieren. Die Isoform 2E1 reagiert mit wesentlich kleineren Molekülen, beispielsweise Ethanol, Aceton oder auch p-Nitrophenol. Diese Varianz ist für sämtliche Isoformen der P450-Hämproteine geradezu charakteristisch, d.h. es kann nicht von einer Isoform auf eine andere geschlossen werden. Die mit der Isoform 2B1 der Ratte gewonnenen Erkenntnisse sind daher nicht auf die 2E1 Isoform des Menschen übertragbar.
Aber auch innerspezifisch treten durch Polymorphismen individuelle Varianzen der Funktion einer gegebenen Cytochrom P450-Form auf. Dies ist eine Ursache dafür, dass bei gleicher Dosierung eines Medikaments Intensität und Dauer von Wirkungen und Nebenwirkungen von Patient zu Patient sehr unterschiedlich sein können.
Es ist bekannt, dass sowohl bei Alkoholkonsum als auch bei der nichtalkoholischen Fettleberhepatitis die Synthese des Cytochroms P450-2E1 induziert wird. Die Funktion und Wirkungsweise dieser von anderen Cytochromen stark verschiedenen Isoform ist beispielsweise von M. H. Wang et al. in Archives of Bio- chemistry and Biophysics, (1995) Vol. 317, Seite 299 bis 304 beschrieben. Danach weist das Enzym einen ca. 15 A langen Kanal auf, an deren Ende das reaktive Zentrum mit einem ein zentrales Eisenatom aufweisenden Hämring sitzt.
Seit längerem wurde vermutet, dass auch Chemotherapeutika, wie sie in der Krebstherapie zum Einsatz kommen, durch Cytochrom P450-Enzyme abgebaut werden.
In einer jüngeren Studie von Jiang et al. ("Cytochrome P450 2J2 Promotes the Neoplastic Phenotype of Carcinoma CeIIs and Is Up-regulated in Human Tumors" in Cancer Res. 2005, 65: 4707-4715) wurde jedoch erstmals gezeigt, dass Cytochrom P450 sogar eine krebsfördernde Wirkung haben kann.
Es wurde gezeigt, dass die Genexpression von Cytochrom P450 2J2 in menschlichen Tumoren hochreguliert wird. Bei Cytochrom P450 2J2 handelt es sich um eine Epoxygenase, die das Substrat Arachidonsäure in vier verschiedene isomere Epoxyeicosatrienoide Säuren (EET) überführt. In der Studie wurde ferner ge- zeigt, dass EET eine apoptosehemmende Wirkung aufweisen, da sie die Tumorzellen vor der Wirkung von Tumornekrosefaktoren schützen, und auf diese Weise die Lebensdauer der Krebszellen erhöhen. Überdies fördern sie die Mitose sowie die Proliferation von Tumorzellen.
Es konnte ebenfalls gezeigt werden, dass EETs die Angiogenese, d. h. die Bildung neuer Blutgefäße fördern. Dieser Vorgang spielt eine wichtige Rolle beim Wachstum von Tumoren (Pozzi A. et al. „Characterization of 5,6- and 8,9-Epoxy- eicosatrienoic Acids (5,6- and 8,9-EET as Potent in Vivo Angiogenic Lipids", J. Biol. Chem. 280:27138-27146, 2005).
In einer Schrift von Schattenberg et al. („Hepatocyte CYP2E1 overexpression and steatohepatitis lead to impaired hepatic insulin signalling" in J. Biol. Chem. 2005; 280: 9887-9894) wird hingegen erstmals eine Überexpression von Cytochrom P450 mit Diabetes in Verbindung gebracht.
Müller-Enoch et al. beschreiben in Z. Naturforsch. (2001 ) 56c, Seite 1082-1090 die Inhibierung von Cytochrom-P450 2B1 der Ratte mittels Lysophosphatidylcho- linen, Lysophosphatidylinositol sowie Arachidon- und Oleinsäuren bzw. mittels Monoacylglycerolen, Monooleylglycerolen, und Monopalmitoylglycerolen.
Des weiteren wird von T. Haehner, D. Müller-Enoch et al. in Z. Naturforschung (2004) 59c, Seite 599-605 den Einfluß von einkettigen Lipidmolekülen auf die Aktivität der Isoform Cytochrom P 450 2B1 der Ratte beschrieben.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, Mittel zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung bereit zu stellen, die sich zur Vorbeugung oder Behandlung von Krebserkrankungen, pathologischer Folgen des Alkoholmissbrauch, viraler Hepatitis, Steato-Hepatitis, akuter und chronischer Pankreatitis, Alzheimererkrankung, Morbus Parkinson, toxischer Nierenerkrankungen, akutem Nierenversagen, Diabetes mellitus, Morbus Wilson, Siderosen, Ischämie-Reperfusions- schäden, und/oder Arteriosklerose, zur Verwendung als Antidot gegen Umwelt- gifte und Medikamentenintoxikation, zur Verlängerung der Verweildauer von Medikamenten im Organismus, oder zur Bekämpfung toxischer Nebenwirkungen bei der Verabreichung von Chemotherapeutika eignet.
Diese Aufgabe wird mit einer Verbindung gemäß der in den Ansprüchen definierten Merkmale erfüllt.
Es wurde nämlich überraschenderweise gefunden, dass sich die vorgenannten Erkrankungen mit derartigen Verbindungen therapieren lassen. Diese Verbindungen hemmen die Bildung von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS), insbesonders Sauerstoffradikalen wie des Superoxidanion (O2"") sowie des Hydroxylradikals (•OH), die nicht in einer direkten Redoxreaktion verbraucht werden am Cyto- chrom P450, insbesonders an den Isoformen der Gruppe 2, speziell 2E1 , sowie 2J2.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen weisen die Formel
R5 I R4-C-B6-R6
I
R3-C-B7-R7
auf. Ebenso kann es sich übrigens um pharmazeutisch akzeptable Salze dieser Verbindungen handeln.
Die Reste R1/R6/R7/R8 können grundsätzlich die Form R-X annehmen. Dabei steht R für einen aliphatischen oder aromatischen Kohlenwasserstoffrest mit vorzugsweise 6 bis 40 Kohlenstoffatomen, der einen insbesonders endständigen, hydrophilen Rest A aufweist und X für einen, mindestens ein freies Kohlenstoff- oder Heteroelektronenpaar und/oder Pl-Elektronen aufweisenden Rest. Der Rest R ist insbesondere lipophil.
Üblicherweise ist der Rest R ein Alkylrest. So kann er geradkettig oder verzweigt sein, Einfach-, Doppel- oder Dreifachbindungen aufweisen und substituiert sein. Üblicherweise weist er ein aliphatisches Rückgrat mit 6 bis 26, insbesondere 8 bis 22 Kohlenstoffatome auf. Zweckmäßig sind Kohlenwasserstoffketten mit einem Rückgrat von 10 bis 15, insbesondere 10 bis 13 Kohlenstoffatomen. Ist R ein alicyclischer oder aromatischer Kohlenwasserstoffrest, der kondensiert und/oder lipophil substituiert sein kann, so weist er üblicherweise mindestens 5 bzw. 6 und höchstens 40 bzw. höchstens 25 Kohlenstoffatome auf. Weitere zweckmäßige Mindestlängen sind 7 bzw. 8 C-Atome und weitere zweckmäßige Maximallängen sind 22 bzw. 20 C-Atome.
Zweckmäßige Reste X sind Heterocyclen, sowie Alkinylreste. Die Heterocyclen sind insbesonders Stickstoff, Sauerstoff und/oder Schwefel enthaltende Heterocyclen. Die Heterocyclen können aromatisch und/oder nicht aromatisch sein und weisen üblicherweise 5 oder 6 Ringatome auf. In geeigneten Fällen kann X auch ein kondensierter Heterocyclus sein. Beispiele derartiger Heterocyclen sind Imi- dazol, Pyrrol, Pyrazol, Pyridin, Pyrazin, Indol, Isoindol, Indazol. Bevorzugte Heterocyclen sind 6 und insbesondere 5 Atome aufweisende Ringe mit ein, zwei oder drei Heteroatomen. Weitere geeignete Heterocyclen sind beispielsweise Thiazole, Triazole, Furane.
Bevorzugte Alkine weisen die Struktur -C≡C-Ri2 auf, wobei Ri2 ein Wasserstoff oder ein gegebenenfalls substituierter Cr bis C15- bzw. maximal C-io-Alkylrest ist, der wiederum gegebenenfalls Doppel- oder Dreifachbindungen aufweisen kann. Üblicherweise weist Ri2 jedoch maximal 5, insbesonders maximal 3 C-Atome auf. In einer weiteren zweckmäßigen erfindungsgemäßen Ausgestaltung steht der Rest X beispielsweise für
- primäre, sekundäre und tertiäre Amine, - substituierte oder nicht substituierte Diazofunktionen wie z. B. Hydrazine und Hydrazone,
- Nitril, Isonitril,
- S-haltige funktionelle Gruppen, wie z. B. Thio- und Isothiocyanate, Alkylsulfi- de, Sulfoxide, Thiolgruppen,
Methylendioxyfunktion,
- Alkyläther und Alkylthioäther.
Die Reste X sind zweckmäßigerweise Reste, die mit der prosthetischen Häm- gruppe koordinieren.
R-i, welches normalerweise ein Wasserstoff oder eine C6- bzw. C7- bis C26- bzw. C2o-Alkyl kette darstellt, weist in einer bevorzugten Ausführungsform eine oder mehrere Doppel- und/oder Dreifachbindungen auf. Ebenso lässt sich das Kohlenwasserstoffrückgrat mit alizyklischen und/oder aromatischen Kohlenwasserstoff formen, wobei hier wegen der Ringstrukturen bis zu 40 Kohlenstoffatome nötig werden können. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform weist Ri eine α-ständige Doppelbindung und eine ω-ständige Dreifachbindung auf wie z. B. ein ω-acetylenisches Sphingosin. Prinzipiell ist es auch möglich die Dreifachbindung in einem langen Molekül so in der Mitte anzuordnen, und dass es mit dem Häm koordiniert, wie z. B. bei den Eicosatetrainsäuren oder ω-acetyle- nisiertes Sphingosin. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform kann die endständige Dreifachbindung durch einen Heterocyclus oder eine andere Häm- koordinierende Gruppe substituiert sein. Prinzipiell kann Ri ein oder mehrere Substituenten aufweisen. Enthält R1 einen endständigen Heterocyclus, dann kann dieser Heterocyclus eine der für R6 bis Rs angeführten Definitionen aufweisen.
Die Reste R2 bis R5 können gleich oder verschieden sein und sind üblicherweise ein C1 bis C5 Alkylrest oder Wasserstoff. Die Alkylreste können gegebenenfalls substituiert sein und beispielsweise ein Alkanol, Alkylamin oder Aikylthiolrest sein. Besonders bevorzugt sind Wasserstoff, Methyl-, Ethyl- und Propylreste bzw. deren Derivate.
Re bis Rs sind über die Bindung B6, B7 bzw. B8 mit dem jeweiligen Glycerin-C- Atom verbunden und können gleich oder verschieden sein und Wasserstoff, ein CQ bzw. C7 bis C26 bzw. C20, insbesonders Cs bzw. C9 bis C22 bzw. Ci8 Alkylrest sein. Diese Alkylreste können sowohl substituiert als auch unsubstituiert sein, wobei vorzugsweise solche Substituenten bevorzugt sind, die zwischen den C4 bzw. Cg bis C-15 bzw. Cu C-Atomen eine oder mehrere Dreifachbindungen aufweisen. Ebenso lässt sich das Kohlenwasserstoffrückgrat mit alizyklischen und/oder aromatischen Kohlenwasserstoffen formen, wobei hier wegen der Ringstrukturen bis zu 40 bzw. bis zu 25 Kohlenstoffatome nötig werden können.
Es hat sich gezeigt, dass bei erfindungsgemäßen Verbindungen, bei denen mindestens einer der Reste R-i, Rβ, R7 und/oder R8 ein Häm-koordinierendes Kohlenwasserstoffrückgrat aufweist, wie z.B. 17-Octadecinyl-1 -Säure, sich in vitro als besonders effektiv gezeigt haben, die Verweildauer dieser Stoffe im Blut wesentlich verlängert werden kann, wenn der Carboxyterminus eines solchen Moleküls z.B. durch einen Sulfatrest ersetzt, oder ein dem Carboxyterminus nahegelegenes C-Atom des aliphatischen Rückgrats durch Addition von 2 Methylgruppen oder durch Einfügung eines aliphatischen oder aromatischen Ringes substituiert wird. Auf diese Weise wird auch die in-vivo-Aktivität entsprechend der in-vitro- Aktivität verbessert.
So weist z.B. 2,2-Dimethyl-11-Dodecinylsäure in vitro eine vergleichbar hohe Inhibition der Cytochrom-P450-Aktivität wie 10-Undecinylsäure auf, wogegen sie in vivo letzterer weit überlegen ist.
Bevorzugt ist dabei vorgesehen, dass die Länge des aliphatischen Rückgrats 6 bzw. 9 - 26 bzw. 13 Kohlenstoffatome umfasst, wenn es sich bei R1 um einen Imdidazolrest handelt. Ein Vertreter dieser bevorzugten Gruppe ist z.B. das 12- Imidazolyl-Dodecanol oder das 1-lmidazolyl-Dodecan. Bezüglich der Strukturfor- mein dieser und weiterer Substanzen wird auf die beiliegenden Tabellen verwiesen.
Bevorzugt ist weiterhin vorgesehen, dass die Länge des aliphatischen Rückgrats 6 bzw. 14 - 26 bzw. 18 Kohlenstoffatome umfasst, wenn es sich bei R1 um einen Ethinylrest handelt. Vertreter dieser bevorzugten Gruppe ist z.B. 17-Octadecinyl- 1 -Säure.
Ebenso bevorzugt umfasst die Länge des aliphatischen Rückgrats 9 - 13 Kohlenstoffatome, wenn es sich bei R1 um einen Ethinylrest handelt. Vertreter dieser bevorzugten Gruppe sind z.B. 2,2-Dimethyl-11-Dodecinylsäure, 10-Undecinyl- Sulfat, 10-Undecinylsäure oder 10-Undecinol.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform sind zumindest eines der Reste Rβ bis Rs ein Glycosid, insbesonders ein Monosaccharid, welches gegebenenfalls substituiert ist, beispielsweise mittels einem Sulfat oder einem Aminorest. In einzelnen Ausführungsformen sind auch Di- oder Oligosaccharide für den erfindungsgemäßen Verwendungszweck durchaus geeignet. Bevorzugte Saccharide sind Pentosen und Hexosen sowie gemischte Saccharide. Prinzipiell können die Glycoside auch Thiozucker sein.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist mindestens einer der Rβ bis R8 ein positiv oder negativ geladener Aminosäurerest, insbesonders eine Aminosäure mit einer zusätzlichen Aminogruppe, wobei Aminosäuregruppen der Struktur -(CH2)H-N+(Rg-Rn) eine zweckmäßige alternative Ausführung darstellen. Dabei ist n üblicherweise eine ganze Zahl zwischen 1 und 5, wobei 1 bis 3, insbesonders 2 bevorzugt ist. Die Reste Rg bis Rn sind üblicherweise Wasserstoff oder eine Methyl-, Ethyl- oder Propylgruppe. Dabei können R9 bis Rn gleich oder verschieden sein. In einer ganz bevorzugten Ausführungsform bilden eine der X mit einem der Re bis R8-Reste zusammen eine Phosphocholingruppe oder weitere Phosphatester, wie z. B. Phosphatidylethanolamin-, Phosphatidylserin- oder Phosphatidylinositol-Reste aus. In einer zweckmäßigen Ausgestaltung der Erfindung ist die Häm-koordinierende Gruppe ein über ein Stickstoffatom gebundener Imidazolrest oder ein Ethinylrest (-C≡CRi2), wobei R12 Wasserstoff oder ein substituierter oder unsubstituierter aliphatischer Ci bis C12 Kohlenwasserstoffrest ist.
Die erfindungsgemäße Verwendung ermöglicht es, die Bildung von solchen reaktiven Sauerstoffspezies zu verringern und die oben erwähnten Krankheiten zu therapieren.
Darüber hinaus kann die zur Verstoffwechslung führende Hydroxylierung von körperfremden Stoffen, insbesondere Arzneimitteln, vermieden oder verlangsamt werden. Auf diese Weise wird die Verweildauer dieser Stoffe im Körper verlängert und/oder toxische Nebenwirkungen verringert bzw. sogar ganz verhindert. Dies ist z.B. bei Chemotherapien von großer Bedeutung. Ein Beispiel hierfür ist die Wirkung der Platine.
Überdies bieten diese Verbindungen die Möglichkeit, die Bildung und die Proliferation von Tumorgewebe zu hemmen, da durch Applikation der erfindungsgemäß verwendeten Verbindungen die Umsetzung von Arachidonsäure in die proliferati- onsfördernden und apoptosehemmenden Epoxyeicosatrienoiden Säuren vermieden wird.
Es hat sich nunmehr gezeigt, dass die Biokompatibilität der genannten Verbindungen, insbesonders solche, die unter physiologischen Bedingungen schlecht löslich sind und/oder aufgrund bestimmter Eigenschaften Zellmembranen schlecht passieren können und daher unzureichend zum Wirkort gelangen, durch weitere unten beschriebene Maßnahmen verbessert werden kann. Dies gilt auch für solche Verbindungen, die durch körpereigene Enzymaktivität abgebaut oder leicht über die renale Exkretion ausgeschieden werden. So werden einige der erfindungsgemäß verwendeten Verbindungen, die ein Häm-koordinierendes Kohlenwasserstoffrückgrat enthalten, nach der Verabreichung schnell von Muskel- oder Fettzellen resorbiert, so dass nur noch ein geringer Anteil bis zum Wirkort gelangt, weshalb diese in höheren Dosen verabreicht werden müssen.
Aus diesem Grunde ist in einer weiteren Ausgestaltung der Erfindung vorgesehen, die erfindungsgemäßen Verbindungen dergestalt weiterzubilden, dass die funktionellen Gruppen der Kohlenwasserstoffreste R1, R6, R7, Rs, also die terminalen Kohlenwasserstoffreste, die alkoholische OH-Gruppe, die Sulfat- oder die Co-A-Gruppe oder die organische Säuregruppe durch Addition eines weiteren, hydrophilen Rests modifiziert werden.
Die erfindungsgemäß verwendeten Verbindungen, die den bereits beschriebenen Häm-koordinierenden Kohlenwasserstoffrest enthalten, umfassen Verbindungen mit der Grundstruktur der Sphingosine, Mono-, Di- und Triglyceride, sowie imida- zolierte oder ethinylierte Phosphoglyceride, Glykolipide, Sphingolipide, Gangliosi- de und Cerebroside, insbesondere deren imidazolierte oder ethinylierte Formen.
Wichtig ist hierbei, dass der hydrophile Rest die Bindung des Moleküls an das aktive Zentrum des Cytochroms P450 nicht beeinträchtigt. Dies kann durch Wahl der Länge des Kohlenstoffrückgrats genau gesteuert werden.
In einer weiteren alternativen Ausführung ist eines der R-i, R6, R7, Re ein Cholin oder Ethanolamin, eine α-, ß- oder γ-Hydroxyaminosäure, wie z.B. Serin, Threo- nin, Inositol oder auch Galactose.
B6, B7 und Bs können gleich oder verschieden sein und stellen O, S, NH, PO4, Se, SO4 dar. Die Bindung B6,7i8, welche das jeweilige Kohlenstoffatom des Glycerin- bzw. Polyolteils R6,7,s verknüpft, ist üblicherweise eine Ether-, und/oder eine Esterbindung zwischen einem alkoholischen Polyol bzw. Glyzerin und einer or- ganischen und/oder anorganischen Säuregruppe von Rβj,a, wie z. B. eine -C-O- C(O)-R6,7,8-Gruppe oder eine -C-O-P(O)-O-R6,7,8-Gruppe.
Beispiele für solche Verbindungen sind z.B. 12-lmidazolyl-dodecanol-i-Phospha- tidylcholin, lO-lmidazolyl-decanol-i-Phosphatidylcholin oder 17-Octadecinyl-1- Phosphatidylcholin.
Die erfindungsgemäß verwendeten Verbindungen umfassen insbesonders Mono-, Di- oder Triglyceride, Phospholipide sowie Glykolipide.
Die erfindungsgemäße Verwendung hat den Vorteil, dass die Verbindungen nicht unmittelbar für Enyzme des ß-Oxidationsstoffwechsels zugänglich sind und daher nicht sofort metabolisiert werden.
Es hat sich gezeigt, dass die in einer erfindungsgemäßen Ausführungsform verwendeten Phosphoglyceride und Triglyceride, die an einer oder mehreren Stellen des Glycerinrests mit einem Rest Ri, Re, R7, Re substituiert sind, insbesonders mit solchen Resten, die einen Häm-koordinierenden Kohlenwasserstoffrest aufweisen, ohne wesentlichen Abbau zu den soliden Organen und Tumoren verbracht werden. Es wird vermutet, dass diese nach der Resorption im Darm zunächst hydrolysiert werden, wobei einer oder mehrere Kohlenwasserstoffreste abgespalten werden. Auf diese Weise werden u. a. Häm-koordinierende Mono- glyceride erzeugt, die auch als Lysolipide bezeichnet werden, und die mit Hilfe von Lipoproteinen, also nicht-kovalenten Aggregaten aus Lipiden und Proteinen, die micellenähnliche Partikel ausbilden und dem Transport von wasserunlöslichen Lipiden im Blut dienen.
Dasselbe gilt im Übrigen auch für Häm-koordinierende Monoglyceride, wie z. B. ethinylierte bzw. imidazolierte Monoglyceride gemäß der obigen Definition, die bereits als solche verabreicht wurden. Da bestimmte pathogene Gewebe, wie z.B. Tumoren, einen hohen Energieumsatz haben, und durch Ausschüttung von Wachstumsfaktoren (VEGF, PDGF) die eigene Vaskularisierung fördern, wandern die mit den genannten Häm-koordinie- renden Monoglyceriden beladenen Lipoproteine mit dem Blutstrom bevorzugt in diese Gewebe. Die „Verpackung" der Häm-koordinierenden Kohlenwasserstoffreste in Form von Lysolipiden ermöglicht also einen gezielten Transport derselben in die genannten Zielorgane.
Wie bereits oben erwähnt, weisen die Häm-koordinierenden Verbindungen die Eigenschaft auf, dass sie in Wechselwirkung mit dem aktiven Zentrum des Cyto- chroms P450 treten und so dessen Aktivität hemmen.
Vor diesem Hintergrund kommt den Verbindungen eine potenzielle Rolle in der Krebstherapie zu. Es steht zu hoffen, dass bei ihrer Gabe die durch Cytochrom P450 vermittelte Umwandlung von Arachidonsäure in Epoxyeicosatrienoide Säuren gehemmt wird. Letztere fördern, wie bereits erwähnt, die Zellteilung und -Proliferation und hemmen die Apoptose. Ebenso ist zu hoffen, dass bei Gabe einer solchen Verbindung die Hydroxylierung von Chemotherapeutika, die letzlich zu deren Exkretion führt, gehemmt wird. Eine solche Verbindung könnte damit sowohl für eine direkte als auch für eine adjuvante Tumortherapie verwendet werden. Aus diesem Grunde ist die oben genannte bevorzugte Ausführungsform, die einen gezielten Transport in solide Organe und Tumore ermöglicht, besonders erfolgversprechend.
Wichtig ist auch in diesen Fällen, dass der hydrophile Rest R2 die Bindung des Moleküls an das aktive Zentrum des Cytochroms P450 nicht beeinträchtigt. Dies kann durch Wahl der Länge des Kohlenstoffrückgrats genau gesteuert werden.
Erfindungsgemäß ist weiterhin eine Pharmazeutische Zubereitung vorgesehen, enthaltend eine erfindungsgemäße Verbindung in einem pharmazeutisch akzeptablen Träger. Mögliche Indikationen für eine erfindungsgemäße Verbindung bzw. deren pharmazeutische Zubereitung liegen überdies in der Behandlung der Folgen von Alkoholmissbrauch. Dies sind insbesonders Leberschäden oder auch andere alkoholbedingte, entzündliche Prozesse. Neben den rein alkoholisch bedingten Leberschäden können auch ernährungsbedingte und endokrine Faktoren, wie z. B. Adipositas, aber auch Diabetes mellitus und Hyperlipidämie ebenfalls alkoholunabhängig eine schwere Leberschädigung verursachen, die über eine Fettleberhepatitis (nicht-alkoholische Steato-Hepatitis = NASH) bis hin zur Leberzirrhose reichen kann. Derartige alkoholische und nicht-alkoholische Fettlebererkrankungen gehen häufig mit einer viralen Infektion der Leber einher. Dabei kann es zu einem sehr schnellen Fortschreiten der Erkrankung kommen. Es hat sich gezeigt, dass dies z. B. auch auf eine synergistische Produktion von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) und den damit verbundenen Zellschäden zurückzuführen ist. Alle vorgenannten Erkrankungen bzw. deren Ursachen oder Folgen sind mit den erfinderischen Verbindungen, die zu einer Inhibition der Cytochrom P450- Alktivität führen, behandelbar.
Es wurde auch gefunden, dass diese Substanzen sich gut zur Behandlung von Entzündungen der Bauchspeicheldrüse eignen. Derartige Entzündungen bzw. Pankreatitiden können neben Alkoholmissbrauch auch durch toxische Substanzen hervorgerufen werden. Hierzu zählen insbesonders Umweltgifte, wie Berufschemikalien oder auch Medikamente. Auch virale Infektionen oder metabolisch- endokrine Faktoren können derartige Pankreasentzündungen verursachen, wobei in allen Fällen reaktive Sauerstoffspezies an der Krankheitsentstehung und am Fortschreiten der Erkrankung beteiligt sind.
Auch bei der Behandlung von Diabetes mellitus, sowohl bei Diabetes mellitus Typ 2 als auch Typ 1 , hat sich das erfindungsgemäße Pharmazeutikum als geeignet erwiesen. Es hat sich nämlich gezeigt, dass ß-lnselzellen der Langerhansschen Inseln gegenüber oxidativen Prozessen besonders empfindlich sind und dass diese bei erhöhtem oxidativen Stress rapide abnehmen. Dieser oxidative Stress lässt sich mit dem erfindungsgemäßen Pharmazeutikum vermeiden, zumindest jedoch massiv verringern.
Auch bei der Behandlung der Alzheimer-Erkrankung sowie beim Morbus Parkinson hat sich das erfindungsgemäße Pharmazeutikum als wirksam erwiesen. Dabei hat es sich beispielsweise gezeigt, dass sich mit den erfindungsgemäßen Substanzen die Konzentration von Dopamin durch verminderten Abbau erhöhen lässt.
Auch toxische Nierenerkrankungen, sowie andere Erkrankungen, wie sie z. B. durch Nebenwirkungen bei der Verabreichung von Chemotherapeutika, insbesondere Zellgiften, wie Metall-Komplexe wie Cisplatin, Carboplatin, Titanocen- dichlorid oder Goldkomplexe hervorgerufen werden, sind mit dem erfindungsgemäßen Arzneimittel zu behandeln. Hierbei hat es sich insbesonders gezeigt, dass sich die Organotoxizität von Metall-Komplexen oder auch anderen toxischen Mitteln, wie halogenierten Kohlenwasserstoffen und zwar sowohl mono- wie auch polihalogenierte Kohlenwasserstoffe darunter auch Dampfnarkotika vom HaIo- than-Typ, sowie entsprechende aromatische Kohlenwasserstoffe, Nitrosamine, Acrylamid oder Arzneimittel, wie Paracetamol, Methotrexat, Isoniazid oder Ami- noglykorid-Antibiotika oder Röntgen-Kontrastmittel verhindern lässt. Das erfindungsgemäße Arzneimittel ist somit auch zur Behandlung der Organotoxizität von Umweltgiften, insbesonders als Antidot hierfür an Organen, wie Leber, Niere, zentrales Nervensystem, Pankreas etc. geeignet.
Es ermöglicht so z.B. auch eine höhere Dosierung von Cytostatika in der Krebstherapie, und kann auch vor diesem Hintergrund als adjuvante Therapie die Erfolgsaussichten der Chemotherapie erhöhen.
Ebenso geeignet ist die erfindungsgemäße pharmazeutische Zubereitung zur Behandlung des akuten Nierenversagens, insbesonders solchen Nierenversagen, die durch medikamentöse Intoxikation, hämolytische Erkrankungen, das hämolytisch-urämische Syndrom (Gasser Syndrom), die Rhabdomyolyse (Unter- gang der quergestreiften Skelettmuskulatur), durch zirkulatorisch-ischämische Prozesse und/oder eine virale Infektion hervorgerufen wurde. Darüber hinaus hat sie sich zur Behandlung von Schäden erwiesen, die durch Quetschung der quergestreiften Muskulatur (Crush-Syndrom) und/oder deren Untergang bei Verabreichung von Medikamenten (wie z. B. CSE Inhibitoren, z. B. Lipobay) erwiesen.
Ganz besonders hat es sich als geeignet erwiesen, Schäden zu vermeiden, die durch Reperfusion von biologischen Geweben entstehen, wie beispielsweise nach Organinfarkten, insbesonders dem Herzen, sowie dem Hirn (Herzinfarkt, Schlaganfall). So konnte beispielsweise in Tierexperimenten gezeigt werden, dass derartige Reperfusionsschäden zu 60 - 80 % der Gewebszerstörung beitragen bzw. dass die Ausbreitung des Gewebstodes um diesen Faktor verringert werden kann. Seit längerem weiß man, dass eine Hauptursache der Reperfusionsschäden Sauerstoffradikale sind, die während der Ischämie gebildet werden.
Das erfindungsgemäße Mittel ist somit auch besonders geeignet zur Vermeidung von Reperfusionsschäden bei transplantierten Organen. Derartige Organe werden bis zu ihrer Transplantation in den Körper eines neuen Empfängers in einer gekühlten Nährlösung gehalten. Nach der Transplantation werden diese dann nach Anschluß an das Kreislaufsystem des Empfängers wieder mit Körperflüssigkeiten durchströmt, was zu Reperfusionsschäden führt. Durch eine Verabreichung des erfindungsgemäßen Mittels vor und während der Lagerung, sowie kurz vor dem Implantieren in den Empfängerorganismus, kann auch dieses wichtige Transplantationsproblem gelöst werden.
Die erfindungsgemäßen Substanzen haben sich insbesonders als Inhibitoren der humanen Isoformen der Genfamilie 2 des Cytochroms P450 und zwar insbesonders der Isoformen 2E1 und 2J2 und durch diese verursachten Erkrankungen erwiesen.
In einer besonders bevorzugten Ausgestaltung der Erfindung ist vorgesehen, dass die pharmazeutische Zubereitung in Liposomen eingebunden ist. Aufgrund der Tatsache, dass die der Zubereitung zugrunde liegenden Verbindungen lange Kohlenwasserstoffreste aufweisen, ist deren Einbindung in Liposomen eine sehr geeignete Verabreichungsform. Solche Liposomen eignen sich für eine intravenöse, intramuskuläre, intraperitoneale, percutane oder auch orale Verabreichung. Ebenso ist auch eine Verabreichnung als Aerosol geeignet.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können jedoch auch als solche direkt verabreicht werden. Auch in diesem Falle sind die oben genannten Verabreichungsarten geeignet.
Synthesewege
Im Folgenden werden mehrere Wege zur Synthese verschiedener erfindungsgemäßer Verbindungen aufgezeigt:
1. Synthese von 12-lmidazoIyM-Dodecansäure
a) 12-lmidazolyl-1-dodecansäure wird synthetisiert gemäß einem Verfahren, das in der Schrift von Alterman et al. ("Fatty acid discrimination and omega-hydroxy- lation by cytochrome P4504A1 and a cytochrome P4504A1/NADPH-P450 reduc- tase fusion protein", Archives of Biochemistry and Biophysics 1995, 320:289- 296) beschrieben ist.
Hierzu wird 12-Bromo-1-dodecanol mit Jones' Reagenz zu 12-Bromo-1-dodecan- säure oxidiert. Die weiße feste Säure wird anschließend mit Diazomethan zum entsprechenden Methylester verestert. Der Methylester wird direkt mit Imidazol versetzt und bei 8O0C fünf Stunden lang zum 12-lmidazolyl-1-dodecansäure-Me- thylester umgesetzt. Die so erhaltene dicke Masse wird zwischen Wasser und Di- chlormethan aufgetrennt, die organische Phase wird über Na2SO4 getrocknet und eingedampft. Der ölige Rückstand wird an Salicagel chromatographisch gereinigt und anschließend in einer Mischung aus Methanol und Tetrahydrofuran (3:4) gelöst, mit LiOHeH2O versetzt und die Mischung unter Rückfluss zwei Stunden er- wärmt. Nach Verdampfen der Lösungsmittel wird der weiße Rückstand wieder in Wasser gelöst, mit Dichlormethan extrahiert, auf pH 5-6 angesäuert und erneut mit Ethylacetat extrahiert. Der Ethylacetat-Extrakt wird über Na2SO4 getrocknet, filtriert und eingedampft. Der weiße feste Rückstand wird aus Methanol/Ether umkristallisiert und liefert 12-lmidazolyl-1-dodecansäure.
b) 12-lmidazolyl-1-Dodecanol und 1-lmidazolyldodecan werden gemäß einem Verfahren synthetisiert, das in der Schrift von Lu et al. ("Heme-coordinating ana- logs of lauric acid as inhibitors of fatty acid ω-hydroxylation", Archives of Bioche- mistry and Biophysics 1997, 337:1-7) beschrieben ist. Hierzu werden 12-Bromo- 1-Dodecanol und Imidazol im Molverhältnis 1 :3 bei 800C fünf Stunden lang erhitzt. Das Rohprodukt wird zwischen Wasser und Dichlormethan verteilt. Die organische Phase wird über Na2SO4 getrocknet und eingedampft. Das 12-lmidazo- Iyl-1-Dodecanol wird aus Benzol/n-Hexan umkristallisiert.
c) 1-lmidazolyldodecan wird aus 1-Bromododecan und Imidazol im Molverhältnis 1 :3 unter Rühren und Erhitzen bei 85°C hergestellt. Das Rohprodukt wird in Dichlormethan gelöst und dreimal mit Wasser ausgeschüttelt. Die organische Phase wird über Na2SO4 getrocknet, filtriert und eingedampft. Der ölige Eindamp- fungsrückstand wird aus n-Hexan zur Kristallisation gebracht und liefert 1-lmida- zolyldodecan.
2. Synthese von 12-lmidazolyl-i-Phosphatidylcholin
Phosphatidylcholin wird unter sauren Bedingungen in Gegenwart von Dicyclohe- xylcarbodiimid zu einem O-Phosphoryl-thiohamstoff umgesetzt. Dem Reaktionsgemisch wird 12-lmidazolyl-1-Dodecanol hinzugefügt, das nucleophil an der Phosphorylgruppe angreift und mit dieser eine Esterbindung ausbildet, so dass 12-lmidazolyl-1 -Phosphatidylcholin gebildet wird. Dabei fällt Dicyclohexylharnstoff aus. Für das Gelingen dieser Reaktion ist als Katalysator 4-Diethylamino-pyridin erforderlich. Der Reaktionsmechanismus ähnelt dem der Steglich-Veresterung, bei der Dicyc- lohexylcarbodiimid verwendet wird, um eine organische Säure mit einem Alkohol zu verestern.
3. Synthese von I-Palmitoyl^-Imidazolyl-Glycero-S-Phosphatidylcholin
Das Prinzip zur Synthese eines Phosphatidylcholin-Diglycerids, das eine nicht modifizierte Fettsäure sowie eine gelabelte (d.h. in unserem Falle eine ethiny- lierte oder imidazolierte) Fettsäure trägt, ist von Eibl et al. ("Synthesis of labeled phospholipids in high yield", Methods Enzymol. 1983; 98:623-32) beschrieben.
3a. Synthese von 1 ,2-Dipalmitoyl-3-Benzyl-Glycerid.
Hierzu wird 1 ,2-lsopropyliden-sn-Glycerin in p-Xylen aufgelöst und unter Hinzugabe von Kalium-tert-Butylat und Benzylchlorid gerührt. Nach Beendigung der Reaktion werden in gleichen Teilen Wasser sowie Diisopropylether hinzugegeben, und es wird eine Phasentrennung durchgeführt. Das in der oberen Phase enthaltene 3-Benzyl-sn-Glycerin wird durch Verdampfung gewonnen und weiteren Reinigungschritten unterzogen.
Anschließend wird das gereinigte 3-Benzyl-sn-Glycerin mit einer Fettsäure, z.B. Palmitat, in Tetrachlorkohlenstoff gelöst. Unter Hinzugabe von 4-Diethylaminopy- ridin und Dicyclohexylcarbodiimid entstehen Esterbindungen zwischen den Alkoholgruppen des 3-Benzyl-sn-Glycerins und den Carboxylgruppen der Fettsäuren, wobei Dicyclohexylharnstoff ausfällt. Dieser Reaktionsmechanismus wird auch als „Steglich-Veresterung" bezeichnet.
Der ausgefallene Dicyclohexylharnstoff wird entfernt, und das Lösungsmittel abgedampft. Nach weiteren Reinigungsschritten erhält man als Produkt 1 ,2- Dipalmitoyl-3-Benzyl-sn-Glycerid. 3b. Synthese von 1 ,2-Dipalmitoyl-sn-Glycerid.
1 ,2-Dipalmitoyl-3-Benzyl-sn-Glycerid wird in Tetra hydrofu ran gelöst und in Anwesenheit eines Katalysators (10% Pd/C) mit elementarem Wasserstoff hydrogeno- lysiert. Dabei wird der Benzylrest durch ein Wasserstoffatom substituiert, und es entsteht 1 ,2-Dipalmitoyl-sn-Glycerid.
3c. Phosphorylierung des 1 ,2-Dipalmitoyl-sn-Glycerids
Phosphoryltrichlorid wird mit in Tetrahydrofuran gelöstem Triethylamin versetzt und im Eis gerührt. Anschließend wird tropfenweise in Tetrahydrofuran gelöstes 1 ,2-Dipalmitoyl-sn-Glycerid hinzugegeben. Dabei entsteht zunächst 1 ,2-Dipalmi- toyl-sn-Glycerid-3-Phosphoryldichlorid.
Anschließend wird erneut in Tetrahydrofuran gelöstes Triethylamin hinzugegeben, tropfenweise in Tetrahydrofuran gelöstes Bromoethanol beigefügt und die Temperatur auf 25 0C erhöht. Dabei entsteht hauptsächlich 1 ,2-Dipalmitoyl-sn- Glycerid-3-Phosphoryl-Bromoethylester-Monochlorid, und nur zu einem geringen Anteil als Nebenprodukt der entsprechende Di-Bromoethylester.
Das Gemisch wird aufgereinigt, gekühlt, mit Natriumcarbonat und Hexan versetzt und geschüttelt. Dabei wird die Bindung zwischen dem Phosphatrest und dem Chlorid hydrolysiert. Es entsteht als Produkt das Natriumsalz des 1 ,2-Dipalmitoyl- sn-Glycerid-3-PhosphoryI-Bromoethylesters.
In ähnlicher Weise werden die Natriumsalze des 1 ,2-Dipalmitoyl-sn-Glycerid-3- Phosphoryl-(N-Butoxycarbonyl)-Ethanolaminesters sowie 1 ,2-Dipalmitoyl-sn-Gly- cerid-3-Phosphoryl-(N-Butoxycarbonyl)-tert-Butylserinesters dargestellt. 3d. Hydrolysierung des 1 ,2-Dipalmitoyl-sn-Glycerid-3-Phosphoalkylesters
1 ^-Dipalmitoyl-sn-Glycerid-S-Phosphoryl-Bromoethylester, oder einer der erwähnten, alternativ dargestellten Phosphoalkylester, wird in einem Gemisch aus Dieethylether und destilliertem Wasser, das CaCI2"2H20 enthält, gelöst.
Der pH wird durch Hinzugabe von Palitzsch-Puffer auf 7.5 eingestellt. Anschließend wird das Enzym Phospholipase IK2 hinzugefügt und 60 min bei 35° C gerührt. Dabei wird die Esterbindung an Position 2 des Glycerinrests hydrolysiert, und es entsteht der entsprechende 1-PalmitoyI-sn-Glycerid-3-PhosphoaIkylester, der an Position 2 eine OH-Gruppe trägt, sowie eine freie Fettsäure.
Das erhaltene Molekül kann nun an Position 2 des Glycerinrests gezielt mit einer gelabelten Fettsäure verestert werden, z.B. einer imidazolierten oder ethinylierten Fettsäure. Ebenso kann der Phospoalkylester an Position 3 mit einem geeigneten Alkohol, z.B. Cholin, Serin, Ethanolamin oder Inositol, umgeestert werden.
3e. Veresterung mit einer gelabelten Fettsäure an Position 2
Der erhaltene 1-Palmitoyl-sn-Glycerid-3-Phosphoalkylester wird in Tetrachlormethan gelöst, es wird eine imidazolierte oder ethinylierte Fettsäure hinzugegeben, und das Gemisch wird gerührt.
Bei der hinzugegebenen Fettsäure kann es sich z.B. um 17-Octadecinsäure handeln, die bei Sigma Aldrich erhältlich ist. Ebenso kann es sich um 12-lmidazolyl- 1-Dodecansäure handeln, die wie unter 1. beschrieben synthetisiert werden kann.
Anschließend wird erneut eine „Steglich-Veresterung" durchgeführt, in dem dem Gemisch 4-Diethylaminopyridin und Dicyclohexylcarbodiimid hinzugegeben wird. Dabei wird eine Esterbindung zwischen der verbliebenen OH-Gruppe am Glyce- rinrest und der Carboxylgruppe der gelabelten Fettsäure ausgebildet. Der ausgefallene Dicyclohexylharnstoff wird entfernt, und das Lösungsmittel abgedampft. Nach weiteren Reinigungsschritten erhält man als Produkt einen 1- Palmitoyi-2-Acyl-sn-Glycerid-3-Phosphoalkylester.
3f. Umesterung des Phosphoalkylesters an Position 3 des Glycerinrests
i-Palmitoyl^-Acyl-sn-Glycerid-S-Phosphoryl-Bromoethylester wird in Chloroform gelöst. Anschließend wird 2-Propanol-Trimethylamin hinzugefügt. Das Reaktionsgefäß wird bei 500C inkubiert, anschließend wird das Lösungsmittel mit Stickstoff verdampft. Das Reaktionsprodukt wird aufgereinigt und auf diese Weise ein gela- beltes 1 -Palmitoyl^-Acyl-sn-Glycerid-S-Phosphatidylcholin gewonnen.
Um gelabeltes 1-Palmitoyl-2-Acyl-sn-Glycerid-3-Phosphatidylserin darzustellen, wird der wie oben erwähnt dargestellte gelabelte 1-Palmitoyl-2-Acyl-sn-Glycerid- 3-Phosphoryl-(N-Butoxycarbonyl)-Ethanolaminester in CH2CI2 gelöst und Trifluor- essigsäure sowie Perchlorsäure hinzugegeben. Anschließend wird in der Kälte gerührt und mit Wasser und Methanol gewaschen. Nach einer Phasentrennung wird die untere Phase mit Na2CO3 extrahiert und verdampft. Nach Hinzufügung von Methanol bilden sich Kristalle, bei denen es sich um gelabeltes 1-Palmitoyl-2- Acyl-sn-Glycerid-3-Phosphatidylethanolamin handelt.
Ähnlich wird verfahren, um gelabeltes i-Palmitoyl^-Acyl-sn-Glycerid-S-Phospha- tidylserin darzustellen. Ausgangsmaterial ist in diesem Fall der wie oben erwähnt dargestellte gelabelte 1 -Palmitoyl-2-Acyl-sn-Glycerid-3-Phosphoryl-(N-Butoxycar- bonyl)-tert-Butylserinester.
Tabellen
In den beigefügten Tabellen sind einige beispielhafte erfindungsgemäße Verbindungen aufgelistet. Für den Fachmann ist dabei unmittelbar erkennbar, dass eine Vielzahl von weiteren Verbindungen unter den genannten Ansprüchen subsummierbar sind. So können die aliphatischen Reste geradkettig oder verzweigt sein, Einfach-, Doppel- oder Dreifachbindungen aufweisen und substituiert sein, und ein aliphati- sches Rückgrat mit 6 bzw. 9 bis 26 bzw. 19 Kohlenstoffatomen aufweisen. Ebenso lässt sich das Kohlenwasserstoffrückgrat mit alizyklischen und/oder aromatischen Kohlenwasserstoffen formen, wobei hier wegen der Ringstrukturen bis zu 40 Kohlenstoffatome nötig werden können.
Als hydrophile Reste kommen auch andere Alkohole wie Inositol oder Ethanola- min bzw. deren Glyceride in Frage.

Claims

Patentansprüche
1. Verwendung einer Verbindung der Formel
R5
I R4-C-B6-R6
I
R3-C-B7-R7
I
R2-C-Be-Re I Ri
oder pharmazeutisch akzeptable Salze dieser Verbindung,
zur Herstellung einer pharmazeutischen Zubereitung zur Vorbeugung oder Behandlung von Krebserkrankungen, pathologischer Folgen des Alkoholmissbrauchs, viraler Hepatitis, Steato-Hepatitis, akuter und chronischer Pankreatitis, toxischer Nierenerkrankungen, hepatischer Insulinresistenz bei Diabetes mellitus, Leberschäden bei Morbus Wilson und/oder Sidero- sen, Ischämie-Reperfusionsschäden, als Antidote gegen Umweltgifte und Medikamentenintoxikation, zur Verlängerung der Verweildauer von Medikamenten im Organismus, und/oder zur Bekämpfung toxischer Nebenwirkungen bei der Verabreichung von Chemotherapeutika, wobei B6, B7 und Bs gleich oder verschieden sind und O, S, NH, PO4, Se, SO4 bedeuten und R1 gleich H oder eine C6- bzw. C7- bis C26- bzw. C2o-Alkylkette ist, R2, R3, R4 und R5 gleich oder verschieden sind und ein H oder eine Ci bis C3 Al- kyl, Alkanol, Alkylamin und/oder Alkylthiol ist, wobei R2 bis R5 gleich oder verschieden sein können, R6, R7 und Rs gleich oder verschieden sind und H, ein substituierter oder unsubstituierter C6 bzw. C7 bis C26-Alkylrest, ein Glycosidrest, ein positiv oder negativ geladener Aminosäurerest, ein -(CH2)n-N+(R9, R10, R-11) bedeuten, wobei R9, R10, Rn H, Methyl-, Ethyl- und/oder Propylrest ist, und wobei mindestens zwei der R2, R3, R4 und R5 gemeinsam einen Polyolrest bilden können und n eine ganze Zahl von 1 bis 5 bedeutet.
2. Verwendung nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass eines der Bβ-Re, B7-R7 und/oder Ba-Re ein Phosphorcholinderivat ist.
3. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass n = eine ganze Zahl von 1 bis 3 ist.
4. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass Ri ein C12 bis Ci6 Alkylrest ist.
5. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass Ri ein oder mehrere Doppel- und/oder Dreifachbindungen aufweist.
6. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass mindestens zwei der Reste R2 bis R5 gemeinsam einen Polyolrest bilden.
7. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der Rest Ri Lecithin oder Kephalinrest ist.
8. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass eines der B6-R6 bis Bs-Rs ein Phophatidylethanolamin, ein Phosphatidylserin und/oder ein Phosphatidylinositolrest ist.
9. Pharmazeutische Zubereitung, enthaltend eine Verbindung gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche in einem pharmazeutisch verträglichen Träger.
10. Pharmazeutische Zubereitung nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Zubereitung in Liposomen gebunden ist.
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