EP1478731A1 - Phenalenon-derivative, verfahren zur herstellung und verwendung derselben - Google Patents

Phenalenon-derivative, verfahren zur herstellung und verwendung derselben

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Publication number
EP1478731A1
EP1478731A1 EP03739452A EP03739452A EP1478731A1 EP 1478731 A1 EP1478731 A1 EP 1478731A1 EP 03739452 A EP03739452 A EP 03739452A EP 03739452 A EP03739452 A EP 03739452A EP 1478731 A1 EP1478731 A1 EP 1478731A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
formula
compound
alkyl
alkenyl
compounds
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP03739452A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Laszlo Vertesy
Michael Kurz
Ziyu Li
Luigi Toti
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sanofi Aventis Deutschland GmbH
Original Assignee
Aventis Pharma Deutschland GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Aventis Pharma Deutschland GmbH filed Critical Aventis Pharma Deutschland GmbH
Publication of EP1478731A1 publication Critical patent/EP1478731A1/de
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D307/92—Naphthofurans; Hydrogenated naphthofurans
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P31/04—Antibacterial agents
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    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
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    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
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    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/04—Oxygen as only ring hetero atoms containing a five-membered hetero ring, e.g. griseofulvin, vitamin C
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/22—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group aromatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/80—Penicillium

Definitions

  • Phenalenone derivatives process for making and using same.
  • the present invention relates to phenalenone derivatives, processes for their preparation, and their use as medicaments.
  • Cancer is a mostly fatal disease of humans and animals, which is caused by the uncontrolled growth of endogenous cells. Cancer is the name given to the formation of malignant tumors (malignancies), neoplasms (tumors or carcinomas) or malignant degeneration and maturation disorders of white blood cells (leukemia, blood cancer). Cancer or tumor cells are formed by the transformation of the body's own cells. The malignancy of the cancerous cell is expressed in the autonomy of growth, that is, in its capacity to be uninhibited and unclassified in the blueprint of the organs and under
  • Tissue destruction infiltrating to grow A sure sign of malignancy is the formation of tumor-distant colonies (metastases) after haematogenous or lymphogenic spread of tumor cells. Cancer is one of the most common causes of death in humans and therefore there is a great need for methods and means of curing or treating malignant degeneration.
  • the possibility of treating malignant tumors includes not only radical removal of the tumor, but also radiological therapy with X-rays, ⁇ -, ⁇ -, ⁇ -rays, immunotherapy and chemotherapy. Immunotherapy is currently only applicable to a limited extent. Under the
  • Chemotherapy of tumors is the administration of cytotoxic agents for the treatment of tumors and residual tumor cells after local surgical treatment or radiation. These substances specifically engage in certain processes of cell division, so that tissues with a high proportion of dividing cells, such as the rapidly growing tumor tissue, react more sensitively.
  • alkylating compounds such as cyclophosphamide (The Merck Index, 12th Ed., Page 463), antimetabolites such as methotrexate (The Merck Index, 12th ed.
  • Phenalen is a condensed, not completely aromatic ring system, which decomposes in the air. Phenalenone is its oxidation product with a carbonyl group in position 1.
  • Japanese Patent Application JP 60199849 describes the phenalenone derivative 2,7,8,9-tetrahydroxy-4-methoxy-5-methyl-phenale ⁇ -1-one, which is effective as a PDE inhibitor and for the treatment of arteriosclerosis, bronchial asthma, diabetes and cancers can be used.
  • the invention has for its object to provide alternative phenalenone derivatives that can be used in tumor therapy.
  • the invention relates to a compound of the formula (I-A)
  • 2.0 is C 1 -C 6 -alkyl, C 2 -C 6 -alkenyl or C 2 -C 6 -alkynyl, in which alkyl, alkenyl and alkynyl are straight or branched and are optionally monosubstituted or disubstituted by
  • R 1 and R 2 are H or C 1 -C 6 -alkyl.
  • Chirality centers may be in the R or S configuration unless otherwise specified.
  • the invention relates to both the optically pure compounds and stereoisomer mixtures, such as mixtures of enantiomers and Diasteromerengemische, in any ratio.
  • the compounds according to the invention differ from substances known from the literature by the polarity, the chemical structure, the biological activity or by further physical properties.
  • the strain Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142 forms on glucose, starch, oatmeal or glycerol-containing nutrient solutions the compounds of the formulas (II-A) and (IIB) called Penilenone, which are summarized below as compounds of the formula (II ),
  • the compounds of formulas (II-A) and (II-B) are tautomers and can not be isolated separately from one another under customary conditions (eg room temperature). Compounds of formulas (II-A) and (II-B) are referred to collectively below as the compound of formula (II).
  • the compounds of the formulas (III-A) and (III-B) are also tautomers and can not be isolated separately from one another under customary conditions (for example room temperature).
  • Compounds of formulas (III-A) and (III-B) are hereinafter referred to collectively as the compound of formula (III).
  • the invention therefore furthermore relates to a compound of the formula (I), which has the formula (II), or a pharmacologically acceptable one
  • the invention therefore further relates to a process for the preparation of a compound of the formula (II), characterized in that
  • the compound of formula (II) is optionally converted into a pharmacologically acceptable salt.
  • the invention relates to a process for the preparation of a compound of formula (I), characterized in that
  • microorganism Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, or one of its variants or mutants is cultivated in an aqueous nutrient medium, 2. a) a compound of the formula (II) is isolated and purified, or b) the compound of the formula (III) is isolated and purified,
  • the compound of formula (I) is optionally converted into a pharmacologically acceptable salt.
  • strain Penicillium herquei Bainer & Sartory forms the penilenone and the by-products on glucose, starch, oatmeal or glycerol-containing nutrient solutions.
  • the fungus Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142 has a gray to bright green substrate mycelium and very little aerial mycelium. Exudates are not formed on malt medium and colors are not eliminated in the medium.
  • the strain, in culture forms the compact sporangia characteristic of Penicillium, 200-400 x 3.5-4.0 ⁇ m, which are rough on the surface.
  • the "Metulae" are relatively short, usually 4-6 10-12 x 3.0-5.0 microns and club-shaped.
  • the phialides are arranged in 6-10 "verticilli", 7-10 x 3.0 microns, ampoule-shaped.
  • the conidia are elliptical to apiculate, 3.5-5.0 x 3.0-3.5 ⁇ m, with a smooth cell wall
  • the conidia are formed in parallel chains up to 100 ⁇ m long.
  • the said method comprises the cultivation of Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, its mutants and / or variants under aerobic conditions in a culture medium containing at least one carbon and nitrogen source, inorganic salts and optionally trace elements.
  • the cultivation is carried out at a temperature between 20 ° and 35 ° C and at a pH between 2 and 9.
  • strain DSM 14142 and their mutants and variants can be used, as far as they produce the compounds of the invention.
  • Such mutants can be prepared in a manner known per se by physical means, for example irradiation, such as ultraviolet or X-ray, or chemical mutagens, such as ethyl methanesulfonate (EMS); 2-hydroxy-4-methoxy-benzophenone (MOB) or N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG).
  • EMS ethyl methanesulfonate
  • MOB 2-hydroxy-4-methoxy-benzophenone
  • MNNG N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine
  • Suitable carbon sources for the fermentation are assimilable carbohydrates and sugar alcohols, such as glucose, lactose, sucrose or D-mannitol, as well as carbohydrate-containing natural products, e.g. Malt extract or yeast extract.
  • nitrogen-containing nutrients are: amino acids, peptides and proteins and their degradation products, such as casein, peptones or tryptones, also meat extracts, yeast extracts, ground seeds, such as corn, wheat, beans, soy, rice or cotton plant, distillation residues of Alcohol production, meat flours or yeast extracts, but also ammonium salts and nitrates, in particular but also synthetically or biosynthetically derived peptides.
  • the nutrient solution may contain, for example, chlorides, carbonates, sulfates or phosphates of the alkali metals or alkaline earth metals, iron, zinc, cobalt and manganese.
  • the formation of the compounds according to the invention proceeds particularly well, e.g. in a nutrient solution containing about 0.05 to 5%, preferably 1 to 2% malt extract; and 0.05 to 3%, preferably 0.05 to 1% yeast extract; 0.2 to 5%, preferably 0.5 to 2% glucose; and 0.5 to 3%, preferably 1.5% to 3% oatmeal contains.
  • the percentages are in each case based on the weight of the entire nutrient solution.
  • Penicillium herquei Bainer & Sartory forms a mixture of the compounds according to the invention.
  • the composition of the Nutrient solution may vary the quantitative proportion of one or more of the compounds of the invention.
  • the synthesis of individual compounds can be controlled by the composition of the media, so that a compound is not prepared or in an amount below the detection limit of the microorganism.
  • the cultivation of the microorganism takes place aerobically, that is, for example, submerged with shaking or stirring in shake flasks or fermenters or on solid medium, optionally with the introduction of air or oxygen. It can be carried out in a temperature range of about 15 to 30 ° C, preferably at about 20 to 30 ° C, especially at 25 to 30 ° C.
  • the pH range should be between 4 and 10, preferably between 6.5 and 7.5.
  • the microorganism is cultivated under these conditions generally over a period of 48 to 720 hours, preferably 72 to 350 hours.
  • the preculture is obtained z. B., by inoculating the mycelium in a nutrient solution and about 20 to 120 hours, preferably 48 to 72 hours to grow.
  • the mycelium can be obtained, for example, by growing the stem for about 1 to 42 days, preferably 21 to 35 days, on a solid or liquid nutrient medium, for example yeast malt agar, oatmeal agar or potato dextrose agar.
  • the fungus Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142 the compounds of the invention by a surface or stand culture on form solid nutrient media.
  • Solid nutrient media are prepared by adding, for example, agar or gelatin to aqueous nutrient media.
  • the compounds according to the invention can occur both in the mycelium and in the culture filtrate, usually the major amount is in the cell mass. It is therefore appropriate to separate the fermentation solution by filtration or centrifugation.
  • the filtrate is extracted with an adsorption resin as a solid phase.
  • the mycelium, but also the surface culture is suitably extracted with an organic solvent, for example methanol or propanol-2.
  • the extractions can be carried out in a wide pH range, but it is expedient to work in a neutral or slightly acidic medium, preferably between pH 3 and pH 7.
  • the extracts can z. B. concentrated in vacuo and dried.
  • the compounds of formula (II) and formula (III) are substances which are unstable unless special measures are taken during the isolation and purification process. It has been found that the Penilenone can be obtained in very good yields from the cultures of the strain DSM 14142, if 1) during the isolation and purification process is carried out under reducing conditions, eg. B. always in the presence of ascorbic acid, is carried out 2) isolation in an acid medium at a pH of less than 7, preferably in the pH range of 2 to 5) during the cleaning step only mild agents are used 3 ", such For example, adsorption resins as chromatographic supports, and 4) the presence of amines is excluded throughout the process.
  • reducing conditions eg. B. always in the presence of ascorbic acid
  • a suitable method of isolating the compounds of the invention is the solvent distribution in a conventional manner.
  • Another method of purification is the chromatography on adsorption resins such. On Diaion® HP-20 (Mitsubishi Casei Corp., Tokyo), Amberlite® XAD 7 (Rohm and Haas, USA), Amberchrom® CG, (Toso Haas, Philadelphia, USA) or the like.
  • phase carrier z. B. RP ⁇ and RPi ⁇ , as z. B. in the context of high pressure liquid chromatography (HPLC) have become well known.
  • HPLC high pressure liquid chromatography
  • Normal-phase chromatography supports such as.
  • silica gel or Al 2 0 3 or others in a conventional manner.
  • An alternative isolation method is the use of molecular sieves, such as. B. Fractogel® TSK HW-40, Sephadex® G-25 and others, in a conventional manner.
  • An additional process for the isolation and purification of the compounds according to the invention consists in the use of anion exchangers, preferably in the pH range from 4 to 7; and cation exchangers, preferably in the pH range from 2 to 5.
  • anion exchangers preferably in the pH range from 4 to 7
  • cation exchangers preferably in the pH range from 2 to 5.
  • buffer solutions to which parts of organic solvents have been added.
  • a particularly advantageous purification method for isolating the compounds according to the invention is crystallization, which is carried out in a manner known per se.
  • the compounds of the formula (I) according to the invention can be converted into the corresponding pharmacologically acceptable salts by methods known to the person skilled in the art.
  • pharmacologically acceptable salts of the invention Compounds according to the invention are understood as meaning both inorganic and organic salts, as described in Remington's Pharmaceutical Sciences (17th Edition, page 1418 [1985]). Salts are in particular alkali, ammonium, alkaline earth salts, salts with physiologically acceptable amines and salts with inorganic or organic acids such.
  • HCI, HBr, H 2 S0 4 maleic acid, fumaric acid in question.
  • metal ions such as with calcium, magnesium, zinc, iron or others in question.
  • the compounds of formula (I) have a pronounced tendency to complex ions, preferably cations.
  • the compounds of the formula (I) according to the invention have potent cytostatic effects, they are therefore suitable for the therapy and / or prophylaxis of diseases caused by uncontrolled growth of tissue or cells, or tumor diseases. It is particularly noteworthy that the compounds of the invention have no cross-resistance with conventional cytostatics.
  • the kinases are among the transferases that transfer phosphate residues from adenosine triphosphate to other substrates. Proteins and enzymes are usually phosphorylated and modified in their activity by the protein kinases on serine, threonine or tyrosine side chains, which has been recognized as a common regulatory principle in metabolism and signal transduction. In the case of cancers, the diseased tissue proliferates unchecked; an intervention in the regulation of kinase-driven proliferation is therefore desirable.
  • the cascade of cell proliferation involves a number of kinases. Several of these kinases are inhibited by the compounds of the invention.
  • an antimicrobial inhibitory effect of the compounds of formula (I) according to the invention on bacteria such as Staphylococcus aureus, Streptomyces murinus and against fungi such as Aspergillus niger, which can cause persistent, life-threatening infectious diseases.
  • the Antimicrobial activity can be detected, for example, by so-called agar-diffusion tests.
  • penilenone on an agar plate containing Streptomyces murinus culture in a solution of 1 mg per mL produces an inhibition zone of 11 mm and in a solution of 0.1 mg per mL a zone of inhibition of 8 mm.
  • the compounds of the formula (I) according to the invention are therefore also suitable for the therapy and / or prophylaxis of bacterial infections and / or fungal diseases.
  • the compounds of formula (I) can also be used as antioxidants.
  • Antioxidants oxidation inhibitors
  • Antioxidants are organic compounds that inhibit or prevent undesirable changes in the substances to be protected due to oxygen effects. Antioxidants are needed, for example, in plastics for protection against aging, in fats for protection against rancidity, in oils against gumming, in odor-deteriorating flavors, in foods, and in medicines.
  • the effect of the antioxidants is usually that they act as a radical scavenger for the occurring during the oxidation of free radicals.
  • the antioxidant activity of atrovenetin (compound of formula (III)) has already been described by Y. Ishikawa et al. J. Am. Oil Chem. Soc. 68, 666-668, 1991.
  • the compounds of the formula (I) are highly active antioxidants which significantly exceed the activity of the atrovenetin: while the atrovenetin in solution and in solid form reacts only slowly with atmospheric oxygen (for example in hours), for example the penilenone of the formula ( II) with oxygen within seconds or in a few minutes.
  • atmospheric oxygen for example in hours
  • penilenone of the formula ( II) with oxygen within seconds or in a few minutes.
  • this increased affinity of penilenone for oxygen is of decisive advantage for very oxidation-sensitive substances.
  • Another chemical property of the compounds of the invention is the ability to complex with polyvalent, preferably 2- and 3-valent cations, such as Ca 2+ , Mg 2+ , Zn 2+ , Fe 3+ .
  • Complexing ability may be beneficial for the preparation of drugs, for example, inhibitors of matrix metallo-proteases (MMP 's ) have become known are to bind the zinc of these enzymes.
  • MMP 's matrix metallo-proteases
  • other possible uses for diseases are also conceivable, the expression of which manifests itself in an abnormal metal ion concentration in the organism.
  • the compounds of the formula (I) according to the invention may likewise be active in the treatment of rheumatic diseases, for example rheumatoid arthritis.
  • rheumatic diseases for example rheumatoid arthritis.
  • the mechanism of action of reducing oxidative stress in rheumatoid arthritis by radical scavengers or antioxidants has been described, for example, by Ostrakhovitch and Afanas (Biochemical Pharmacology, 2001, 743-746).
  • the present invention accordingly also relates to the use of the compounds of the formula (I) according to the invention as medicaments, in particular for the treatment and / or prophylaxis of tumor diseases, bacterial infections, mycoses, rheumatic diseases and diseases which are manifested by the inhibition of matrix metalloids. Treat proteases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition containing at least one of the compounds according to the invention.
  • Said drug is prepared by mixing at least one compound of formula (I) with one or more physiologically acceptable excipients and placed in a suitable dosage form.
  • the medicaments according to the invention can be administered enterally (orally), parenterally (intramuscularly or intravenously), rectally or locally (topically). They can be administered in the form of solutions, powders (tablets, capsules including microcapsules), ointments (creams or gel), or suppositories.
  • physiologically acceptable excipients for such formulations are the pharmaceutical customary liquid or solid fillers and extenders, solvents, emulsifiers, lubricants, flavoring agents, dyes and / or buffer substances in question.
  • nutrient solution malt extract 2.0%, yeast extract 0.2%, glucose 1.0% (NH 4 ) 2 HP0 4 0.05%, pH 6.0
  • a sterile 300 ml Erlenmeyer flask 100 ml of nutrient solution (malt extract 2.0%, yeast extract 0.2%, glucose 1.0% (NH 4 ) 2 HP0 4 0.05%, pH 6.0) in a sterile 300 ml Erlenmeyer flask are prepared with the strain Penicillium Bainer & Sartory, DSM 14142, and incubated for 4 days at 25 ° C and 140 rpm on a rotary shaker. 2 ml of this preculture are then inoculated for the production of the main cultures.
  • Example 3 Preparation of a major culture culture of Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142.
  • the maximum production of one or more compounds of Penilenons invention is reached after about 144 hours.
  • a 96-144 h old submersed culture inoculation amount approx. 10% from the same nutrient solution is sufficient.
  • the conditions for these fermenters are: 0 temperature 25 ° C
  • the penilenone-containing fractions 23 to 26 (mixture of the compounds of the formulas (II-A) and (II-B), comprising compounds of the formula (II)) and the atrovenetin-containing fractions 43 to 51 (mixture of the compounds of the formulas ( III-A) and (III-B), 0 summarizing compounds of the formulas (III) mentioned), which by HPLC-
  • Example 5 Isolation or purification by HPLC.
  • penilenone The physicochemical and spectroscopic properties of penilenone can be summarized as follows:
  • Appearance Yellow, in medium polar and polar organic solvents soluble, in water little soluble crystalline substance.
  • the melting point is not determinable because of the decomposition. Stable in a mildly acidic environment under reducing conditions. Under the influence of oxygen, in a neutral environment or in the presence of amines, penilenone turns green.
  • UV maxima 215 nm, 248 (Sh) nm, 275 (Sh), 389 nm.
  • Example 7 Obtaining the penilenone monomethyl ether derivatives of the formulas (IV-A) 5 and (IV-B).
  • reaction ended by addition of water and the solvent distilled off in vacuo.
  • the reaction product is then separated on a Nucleosil HD® column (21 mm x 250 mm).
  • the eluent used was a gradient of 10% to 99% acetonitrile in 0.1% acetic acid.
  • UV maxima 216 nm, 242 nm, 280 nm (Sh), 387 nm.
  • UV maxima 213 nm, 241 nm and 390 nm.
  • Example 8 Obtaining the Atrovenetin Derivatives (V-A) and (V-B).
  • VA atrovenetin monomethyl ether
  • VB atrovenetin monomethyl ether
  • V-A Atrovenetin monomethyl ether
  • UV maxima 218 nm, 260 nm (Sh), 394 nm.
  • V-B Atrovenetin monomethyl ether
  • UV maxima 222 nm, 282 nm, 385 nm.

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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft Phenalenon-Derivate, deren Herstellung durch Fermentierung des Mikroorganismus Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, sowie durch Derivatisierung der während der Fermentation gebildeten Phenalenone, und die Verwendung der Phenalenon-Derivative als Arzneimittel, beispielsweise gegen Tumorerkrankungen, bakterielle Infektionen und/oder Mykosen und rheumatischen Erkrankungen.

Description

Beschreibung
Phenalenon-Derivate, Verfahren zur Herstellung und Verwendung derselben.
Die vorliegende Erfindung betrifft Phenalenon-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung, und deren Verwendung als Arzneimittel.
Krebs ist eine zumeist tödlich verlaufende Erkrankung von Mensch und Tier, die durch das unkontrollierte Wachsen von körpereigenen Zellen verursacht wird. Krebs ist die Bezeichnung für die Bildung von bösartigen Geschwülsten (Malignome), von Neoplasmen (Tumoren bzw. Carcinoma) oder für die maligne Entartung sowie Reifungsstörung weißer Blutzellen (Leukämie, Blutkrebs). Krebs- oder Tumorzellen entstehen durch Umwandlung körpereigener Zellen. Die Bösartigkeit der Krebszelle drückt sich in der Autonomie des Wachstums aus, das heißt in ihrer Fähigkeit, ungehemmt und ohne Einordnung in den Bauplan der Organe und unter
Gewebszerstörung infiltrierend zu wachsen. Ein sicheres Zeichen der Malignität ist die Bildung tumorferner Absiedlungen (Metastasen) nach hämatogener oder lymphogener Ausbreitung von Tumorzellen. Krebs gehört zu den häufigsten Todes-ursachen des Menschen und deshalb besteht ein großer Bedarf an Methoden und Mitteln zur Heilung oder Behandlung von malignen Entartungen.
Die Möglichkeit einer Therapie maligner Tumoren umfaßt neben der- wenn möglich radikalen - operativen Entfernung des Tumors, die radiologische Therapie mit Röntgenstrahlen, α-, ß-, γ-Strahlen, die Immuntherapie und die Chemotherapie. Die Immuntherapie ist derzeit nur in eingeschränktem Maß anwendbar. Unter der
Chemotherapie von Tumoren versteht man die Gabe von Zellgiften (Cytostatika) zur Behandlung von Tumoren und von verbliebenen Tumorzellen nach lokaler chirurgischer Behandlung oder Bestrahlung. Diese Stoffe greifen spezifisch in bestimmte Vorgänge der Zellteilung ein, so daß Gewebe mit hohem Anteil an sich teilenden Zellen, wie das rasch wachsende Tumorgewebe, empfindlicher reagieren. Zum Einsatz kommen alkylierende Verbindungen, wie z. B. das Cyclophosphamid (The Merck Index, 12. Ed. Seite 463), Antimetabolite, wie das Methotrexat (The Merck Index, 12. Ed. Seite 1025), Alkaloide, wie das Vincristin (The Merck Index, 12. Ed. Seite 1704) und Antibiotika, wie das Daunomycin (The Merck Index, 12. Ed. Seite 479) sowie das Adriamycin (The Merck Index, 12. Ed. Seite 581-582). All diese Agenzien haben aber aufgrund von massiven Nebenwirkungen große Nachteile, so daß der Tod der Erkrankten nur hinausgezögert, nicht jedoch abgewendet wird. Zudem treten bei entarteten (Krebs-) Zellen Resistenzen gegen die angewandten Mittel auf, die derzeitigen Medikamente wirken dann nicht mehr cytostatisch, wohl aber toxisch infolge der Nebenwirkungen. Zudem hat sich gezeigt, daß eine kombinierte bzw. sequentielle Anwendung von Cytostatika die Wirksamkeit eines einzelnen Cytostatikums (Monotherapie) übertrifft und dadurch möglich ist, daß sich die erheblichen Nebeneffekte bei der Polychemotherapie nicht addieren. Aus all diesen Gründen werden neue Chemotherapeutika dringend benötigt und deshalb weltweit gesucht.
Es sind bereits Naturstoffe mit Phenalenon-Grundstruktur beschrieben worden. Phenalen ist ein kondensiertes, nicht vollständig aromatisches Ringsystem, welches sich an der Luft zersetzt. Phenalenon ist dessen Oxidationsprodukt mit einer Carbonyl- Gruppe in 1 -Position.
Die Patentanmeldung WO 99/60992 beschreibt generisch Phenalenone, die in allen Positionen außer C1 mit Wasserstoff oder C C -Alkyl, bevorzugt Methyl, oder C1-C4- Alkoxy, vorzugsweise Methoxy substituiert sein können, zur Verwendung als Haarfärbemittel.
Die japanische Patentanmeldung JP 60199849 beschreibt das Phenalenon-Derivat 2,7,8,9-Tetrahydroxy-4-methoxy-5-methyl-phenaleή-1-on, das als PDE-Inhibitor wirksam ist und zur Behandlung von Arteriosklerose, Bronchialasthma, Diabetes und Krebserkrankungen verwendet werden kann.
D. A. Frost & G. A. Morrison; J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1 , 20, 2388-2396, 1973 beschreiben die Isolierung von Norxanthoherquein (2,3,4,7,8,9-Hexahydroxy-5-methyl- phenalen-1-on) aus Penicillium herquei Bainer & Sartory. D. H. R. Barton et al. (Tetrahedron, 6, 48, 1959) beschreiben die Isolierung von Atrovenetin aus Penicillium atrovenetum sowie aus Penicillium herquei Bainer & Sartory. Atroventin wird in Y. Ishikawa et al. (J. Am. Oil Chem. Soc. 68, 666-668, 1991) als Antioxidant, und in WO 00/45165 als anti-neoplastisch wirksames Cytostatikum beschrieben.
N. Narasimhachi et al. (J. Antibiotics, 25, 155, 1972) und J. Simpson (Chem. Soc. Perkin Trans. 1 , 1979, 1233-1238) beschreiben tautomeren Formen der Verbindung Desoxyherqueinon (2-O-Methyl-Atrovenetin), die aus Penicillium herquei isolierbar sind und antibiotische Wirksamkeit gegen Gram-positive Organismen zeigen.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, alternative Phenalenon-Derivate bereitzustellen, die in der Tumortherapie verwendet werden können.
Die Erfindung betrifft eine Verbindung der Formel (l-A)
oder eine Verbindung der Formel (l-B)
wobei X entweder eine Gruppe der Formel (l-C)
oder der Formel (l-D) bedeutet,
(l-D),
und R1 und falls vorhanden R2 gleichzeitig 1.0 H, oder
2.0 CrC6-Alkyl, C2-C6-Alkenyl oder C2-C6-Alkinyl bedeuten, worin Alkyl, Alkenyl und Alkinyl gerade oder verzweigt sind und gegebenenfalls ein- oder zweifach substituiert sind durch:
2.1 -OH,
2.2 O, ^
2.3 -O-Ci-Ce- Alkyl, worin Alkyl gerade oder verzweigt ist,
2.4 -O-C2-C6- Alkenyl, worin Alkenyl gerade oder verzweigt ist, 2.5 -Aryl,
2.6 -NH-C Cs- Alkyl, worin Alkyl gerade oder verzweigt ist,
2.7 - H-C2-C6- Alkenyl, worin Alkenyl gerade oder verzweigt ist,
2.8 - H2 oder
2.9 Halogen, worin die Substituenten 2.1 bis 2.9 auch noch weiter substituiert sein können durch -
CN, -Amid oder -Oxim-Funktionen, '
und/oder eine stereoisomere Form der Verbindung der Formel (l-A) oder der Formel (I- B) und/oder Gemische diese Form in jedem Verhältnis, und/oder ein physiologisch verträgliche Salz der Verbindung der Formel (l-A) oder (l-B). Vorzugsweise sind R1 und R2 H oder C-ι-C6-Alkyl.
Chiralitätszentren können, wenn nicht anders angegeben, in der R- oder in der S- Konfiguration vorliegen. Die Erfindung betrifft sowohl die optisch reinen Verbindungen als auch Stereoisomerengemische, wie Enantiomerengemische und Diasteromerengemische, in jedem Verhältnis.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen unterscheiden sich von literaturbekannten Substanzen durch die Polarität, die chemische Struktur, die biologische Wirksamkeit oder durch weitere physikalischen Eigenschaften.
Der Stamm Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, bildet auf Glukose-, Stärke-, Haferflocken- oder Glycerinhaltigen Nährlösungen die Penilenon genannten Verbindungen der Formeln (ll-A) und (I l-B), die nachfolgend zusammenfassend als Verbindungen der Formel (II) bezeichnet werden,
sowie Atrovenetin der Formeln (lll-A) und (lll-B), die nachfolgend zusammenfassend als Verbindungen der Formel (III) bezeichnet werden,
Verbindungen der Formeln (l-A) und (l-B), für die R1 ungleich H ist, sind isomere Formen, die getrennt voneinander isolierbar sind, und die ineinander überführt werden können, beispielsweise indem der Rest R1 abgespalten wird, wonach R1 gleich H ist, und anschliessend ausgehend vom jeweils anderen Tautomer zum anderen Isomer der Verbindung der Formel (l-A) oder (l-B) mit R1 ungleich H derivatisiert wird. Nachfolgend werden die Verbindungen der Formeln (l-A) und (l-B) zusammenfassend als Verbindung der Formel (I) bezeichnet.
Die Verbindungen der Formeln (ll-A) und (ll-B) sind Tautomere und können unter üblichen Bedingungen (z. B. Raumtemperatur) nicht getrennt voneinander isoliert werden. Verbindungen der Formeln (ll-A) und (ll-B) werden nachfolgend zusammenfassend als Verbindung der Formel (II) bezeichnet.
Die Verbindungen der Formeln (lll-A) und (lll-B) sind ebenfalls Tautomere und können unter üblichen Bedingungen (z. B. Raumtemperatur) nicht getrennt voneinander isoliert werden. Verbindungen der Formeln (lll-A) und (lll-B) werden nachfolgend zusammenfassend als Verbindung der Formel (111) bezeichnet.
Verbindungen der Formeln (l-A) und (l-B), für die R1 gleich H ist, können gemäß der vorliegenden Erfindung selektiv derivatisiert werden, indem die Hydroxygruppen mit alkylierenden Agentien in an sich bekannter Weise zur Reaktion gebracht werden, wie sie beispielsweise von Jerry March im Buch Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 4th Edition, 1992, beschrieben. Alkylierende Agentien sind beispielsweise Diazomethan-Dehvate, vorzugsweise Trimethylsilyldiazomethan. Um Umsetzungen selektiv durchzuführen, kann es vorteilhaft sein vor der Reaktion geeignete, in an sich bekannterWeise, Schutzgruppen einzuführen. Die Schutzgruppen werden nach der Reaktion abgespalten und anschließend wird das Reaktionsprodukt gereinigt.
Bisher wurde keine selektive Alkylierung von Phenalenonen zu den erfindungsgemäßen Verbindungen beschrieben. Beispielsweise führt die. Reaktion von Desoxyherqueinon mit Diazomethan laut Suga et al. (Bull. Chem Soc. Jpn., 56, 3661- 3666, 1983) zum Desoxyherqueinon-dimethylether bzw. zur isomeren Verbindung ent- Atrovenetin-trimethylether. Verbindungen der Formeln (l-A) und (l-B), für die R1 gleich H ist, können beispielsweise durch Etherspaltung von Verbindungen der Formeln (l-A) und (l-B), für die R1 ungleich H ist, hergestellt werden. Etherspaltungen können nach ansich bekannten Methoden durchgeführt werden, wie beispielsweise von Jerry March im Buch Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 4th Edition, 1992, beschrieben.
Die Erfindung betrifft daher ferner ein Verbindung der Formel (I), dadurch gekennzeichnet, daß sie die Formel (II) hat, oder ein pharmakologisch verträgliches
Salz der Verbindung der Formel (II).
Die Erfindung betrifft daher weiterhin ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (II), dadurch gekennzeichnet, daß
1. der Mikroorganismus Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, bzw. einer ihrer Varianten oder Mutanten in einem wäßrigen Nährmedium kultiviert wird, 2. eine Verbindung der Formel (II) isoliert und gereinigt wird, und
3. die Verbindung der Formel (II) gegebenenfalls in ein pharmakologisch verträgliches Salz überführt wird.
Ferner betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I), dadurch gekennzeichnet, daß
1. der Mikroorganismus Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, bzw. einer ihrer Varianten oder Mutanten in einem wäßrigen Nährmedium kultiviert wird, 2. a) eine Verbindung der Formel (II) isoliert und gereinigt wird, oder b) die Verbindung der Formel (III) isoliert und gereinigt wird,
3. a) die Verbindung der Formel (II) zu einer Verbindung der Formel (I) derivatisiert wird, oder b) die Verbindung der Formel (III) zu einer Verbindung der Formel (I) derivatisiert wird, und
4. die Verbindung der Formel (I) gegebenenfalls in ein pharmakologisch verträgliches Salz überführt wird.
Der Stamm Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, bildet auf Glukose-, Stärke- Haferflocken- oder Glycerinhaltigen Nährlösungen das Penilenon sowie die Nebenprodukte.
Ein Isolat von Penicillium herquei Bainer & Sartory wurde bei der Deutschen Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSM), Mascheroder Weg 1 B, 38124 Braunschweig, Deutschland nach den Regeln des Budapester Vertrages am 6. März, 2001 unter der folgenden Nummer hinterlegt: DSM 14142.
Der Pilz Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142 besitzt ein grau bis leuchtend grünes Substratmycel und ganz wenig Luftmycel. Exudate werden auf Malz- Medium nicht gebildet und Farben werden nicht ins Medium ausgeschieden. Der Stamm bildet in Kultur die für Penicillium charakteristischen kompakten Sporangien, 200-400 x 3.5-4.0 μm, die rauh sind auf der Oberfläche. Die „Metulae" sind relativ kurz, meist 4-6 10-12 x 3.0-5.0 μm und keulenförmig. Die Phialiden sind in 6-10 „verticilli" angeordnet, 7-10 x 3.0 μm, ampullenförmig. Die Konidien sind elliptisch bis „apiculate", 3.5-5.0 x 3.0-3.5 μm, mit einer glatten Zellwand. Die Konidien werden in parallelen Ketten, bis 100 μm lang, gebildet.
Das besagte Verfahren umfasst die Kultivierung von Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, seiner Mutanten und/oder Varianten unter aeroben Bedingungen in einem mindestens jeweils eine Kohlenstoff- und Stickstoffquelle, anorganischen Salze und gegebenenfalls Spurenelemente enthaltenden Kulturmedien. Vorzugsweise wird die Kultivierung bei einer Temperatur zwischen 20° und 35°C und bei einem pH zwischen 2 und 9 durchgeführt.
Anstelle des Stammes DSM 14142 können auch deren Mutanten und Varianten eingesetzt werden, soweit sie die erfindungsgemäßen Verbindungen herstellen. Solche Mutanten können in an sich bekannter Weise durch physikalische Mittel, beispielsweise Bestrahlung, wie mit Ultraviolett- oder Röntgenstrahlen, oder chemische Mutagene, wie beispielsweise Ethylmethansulfonat (EMS); 2-Hydroxy-4- methoxy-benzophenon (MOB) oder N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (MNNG) erzeugt werden.
Als bevorzugte Kohlenstoffquellen für die Fermentation eignen sich assimilierbare Kohlenhydrate und Zuckeralkohole, wie Glukose, Laktose, Saccharose oder D-Mannit sowie kohlenhydrathaltige Naturprodukte, wie z.B. Malzextrakt oder Hefextrakt. Als stickstoffhaltige Nährstoffe kommen in Betracht: Aminosäuren, Peptide und Proteine sowie deren Abbauprodukte, wie Casein, Peptone oder Tryptone, ferner Fleischextrakte, Hefeextrakte, gemahlene Samen, beispielsweise von Mais, Weizen, Bohnen, Soja, Reis oder der Baumwollpflanze, Destillations-rückstände der Alkoholherstellung, Fleischmehle oder Hefeextrakte, aber auch Ammoniumsalze und Nitrate, insbesondere aber auch synthetisch bzw. biosynthetisch gewonnene Peptide. Als anorganische Salze kann die Nährlösung beispielsweise Chloride, Carbonate, Sulfate oder Phosphate der Alkali- oder Erdalkalimetalle, Eisen, Zink, Kobalt und Mangan enthalten.
Die Bildung der erfindungsgemäßen Verbindungen verläuft besonders gut z.B. in einer Nährlösung, die etwa 0,05 bis 5 %, bevorzugt 1 bis 2 % Malzextrakt; und 0,05 bis 3 %, bevorzugt 0.05 bis 1 % Hefeextrakt; 0,2 bis 5 %, bevorzugt 0,5 bis 2 % Glucose; und 0,5 bis 3 %, bevorzugt 1.5% bis 3 % Haferflocken enthält. Die Angaben in Prozent sind jeweils bezogen auf das Gewicht der gesamten Nährlösung.
In dieser Nährlösung bildet Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, ein Gemisch der erfindungsgemäßen Verbindungen. Je nach Zusammensetzung der Nährlösung kann der mengenmäßige Anteil eines oder mehrerer der erfindungsgemäßen Verbindungen variieren. Außerdem kann durch die Medienzusammensetzung die Synthese einzelner Verbindungen gesteuert werden, so daß ein Verbindung gar nicht bzw. in einer Menge unterhalb der Nachweisgrenze vom Mikroorganismus hergestellt wird.
Die Kultivierung des Mikroorganismus erfolgt aerob, also beispielsweise submers unter Schütteln oder Rühren in Schüttelkolben oder Fermentern oder auf Festmedium, gegebenenfalls unter Einführen von Luft oder Sauerstoff. Sie kann in einem Temperaturbereich von etwa 15 bis 30°C, vorzugsweise bei etwa 20 bis 30°C, insbesonders bei 25 bis 30°C durchgeführt werden. Der pH-Bereich sollte zwischen 4 und 10 liegen, vorzugsweise zwischen 6.5 und 7.5. Man kultiviert: den Mikroorganismus unter diesen Bedingungen im allgemeinen über einen Zeitraum von 48 bis 720 Stunden, vorzugsweise 72 bis 350 Stunden. Vorteilhaft kultiviert man in mehreren Stufen, d. h. man stellt zunächst eine oder mehrere Vorkulturen in einem flüssigen Nährmedium her, die dann in das eigentliche Produktions-medium, die Hauptkultur, beispielsweise im Volumenverhältnis 1 :10-1 :100, überimpft werden. Die Vorkultur erhält man z. B., indem man das Mycel in eine Nährlösung überimpft und etwa 20 bis 120 Stunden, bevorzugt 48 bis 72 Stunden, wachsen läßt. Das Mycel kann beispielsweise erhalten werden, indem man den Stamm etwa 1 bis 42 Tage, bevorzugt 21 bis 35 Tage, auf einem festen oder flüssigen Nährboden, beispielsweise Hefe-Malz- Agar, Haferflocken-Agar oder Kartoffeldextrose-Agar, wachsen läßt.
Der Fermentationsverlauf und das Screening nach Mutanten und Varianten, die die erfindungsgemäßen Verbindungen produzieren, kann entsprechend dem Fachmann bekannten Methoden, wie z. B. durch Austestung der biologischen Aktivität in Bioassays oder durch chromatographische Methoden wie Dünnschichtchromatographie (DC) oder Hochleistungsflüssigkeits-Chromatographie (HPLC) verfolgt werden.
Der Pilz Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, kann die erfindungsgemäßen Verbindungen durch eine Oberflächen- oder Standkultur auf festen Nährböden bilden. Feste Nährböden werden durch Zugabe zum Beispiel von Agar oder Gelatine zu wäßrigen Nährmedien hergestellt. Darüber hinaus ist es möglich, die erfindungsgemäßen Verbindungen durch Fermentation des Pilzes Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, im Submersverfahren, d. h. in wäßriger Aufschlämmung zu gewinnen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können sowohl im Mycel als auch im Kulturfiltrat vorkommen, gewöhnlich befindet sich die Hauptmenge in der Zellmasse. Es ist deshalb zweckmäßig, die Fermentationslösung durch Filtration oder Zentrifugation zu trennen. Das Filtrat wird mit einem Adsorptionsharz als feste Phase extrahiert. Das Mycel, aber auch die Oberflächenkultur wird zweckmäßiger Weise mit einem organischen Lösungsmittel, beispielsweise Methanol oder Propanol-2 extrahiert.
Die Extraktionen können in einem weiten pH-Bereich durchgeführt werden, es ist jedoch zweckmäßig, im neutralen oder schwach sauren Milieu, vorzugsweise zwischen pH 3 und pH 7 zu arbeiten. Die Extrakte können z. B. im Vakuum konzentriert und getrocknet werden.
Die Verbindungen der Formel (II) und der Formel (III) sind Substanzen, die unbeständig sind, wenn nicht besondere Maßnahmen während des Isolierungs- und Reinigungsprozesses ergriffen werden. Es wurde gefunden, daß die Penilenone in sehr guten Ausbeuten aus den Kulturen des Stammes DSM 14142 gewonnen werden können, wenn 1 ) während des Isolierungs- und Reinigungsprozesses unter reduzierenden Bedingungen gearbeitet wird, z. B. stets in Gegenwart von Ascorbinsäure, 2) die Isolierung in saurem Milieu bei einem pH-Wert kleiner als 7, vorzugsweise im pH-Bereich von 2 bis 5, erfolgt, 3) während" des Reinigungsschrittes nur milde Agentien verwendet werden, wie zum Beispiel Adsortionsharze als chromatographische Träger, und 4) die Gegenwart von Aminen während des gesamten Verfahrens ausgeschlossen wird.
Eine geeignete Methode der Isolierung der erfindungsgemäßen Verbindungen ist die Lösungsmittelverteilung in an sich bekannter Weise. Eine andere Methode der Reinigung ist die Chromatographie an Adsorptionsharzen wie z. B. an Diaion® HP-20 (Mitsubishi Casei Corp., Tokyo), an Amberlite® XAD 7 (Rohm and Haas, USA), an Amberchrom® CG, (Toso Haas, Philadelphia, USA) oder an ähnlichen. Geeignet sind darüber hinaus unter den angegebenen Umständen zahlreiche Reverse-, Phase Träger, z. B. RPβ und RPiβ, wie sie z. B. im Rahmen der Hochdruckflüssigkeits- Chromatographie (HPLC) allgemein bekannt geworden sind. Eine weitere Reinigungsmöglichkeit besteht unter den angegebenen Umständen in der Verwendung von sog. Normal-Phasen-Chromatographie-Trägem, wie z. B. Kieselgel oder Al203 oder anderen in an sich bekannter Weise. Ein alternatives Isolierungsverfahren ist die Verwendung von Molekularsieben, wie z. B. Fractogel® TSK HW-40, Sephadex® G-25 und andere, in an sich bekannter Weise.
Es ist darüber hinaus möglich, die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I) nach Anreicherung durch Kristallisation zu gewinnen, wobei beispielsweise organische Lösungsmittel und ihre Gemische, wasserfrei oder mit Wasserzusatz benutzt werden können.
Ein zusätzliches Verfahren zur Isolierung und Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen besteht in der Verwendung von Anionenaustauschern, vorzugsweise im pH-Bereich von 4 bis 7; und Kationenaustauschern, vorzugsweise im pH-Bereich von 2 bis 5. Besonders geeignet ist hierfür die Verwendung von Pufferlösungen, denen man Anteile von organischen Lösungsmitteln hinzugefügt hat.
Es ist aber auch möglich, die erfindungsgemäßen Verbindungen durch Sublimieren zu isolieren und/oder zu reinigen.
Eine besonders vorteilhafte Reinigungsmethode zur Isolierung der erfindungsgemäßen Verbindungen ist die Kristallisation, die in an sich bekannter Weise durchgeführt wird.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I) können nach dem Fachmann bekannten Methoden in die entsprechenden pharmakologisch verträglichen Salze übergeführt werden. Unter pharmakologisch verträglichen Salzen der erfindungs- gemäßen Verbindungen versteht man sowohl anorganische als auch organische Salze, wie sie in Remingtons Pharmaceutical Sciences (17. Auflage, Seite 1418 [1985]) beschrieben sind. Als Salze kommen insbesondere Alkali-, Ammonium-, Erdalkalisalze, Salze mit physiologisch verträglichen Aminen und Salze mit anorganischen oder organischen Säuren wie z. B. HCI, HBr, H2S04, Maleinsäure, Fumarsäure in Frage. Es kommen aber auch Komplexe mit Metall-Ionen, wie zum Beispiel mit Calcium, Magnesium, Zink, Eisen oder anderen in Frage. Die Verbindungen der Formel (I) haben eine ausgeprägte Neigung, Ionen, vorzugsweise Kationen, komplex zu binden.
Es wurde überraschend gefunden, daß die erfindungsgemäße Verbindungen der Formel (I) starke cytostatische Wirkungen aufweisen, sie eignet sich daher zur Therapie und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, die durch unkontrolliertes Wachstum von Gewebe oder Zellen verursacht werden, oder Tumorerkrankungen. Es ist besonders bemerkenswert, daß die erfindungsgemäße Verbindungen keinerlei Kreutzresistenz mit herkömmlichen Cytostatika aufweisen.
Es ist gefunden worden, daß die Verbindungen der Formel (I) Protein-Kinasen hemmen. Die Kinasen gehören zu den Transferasen, die Phosphat-Reste von Adenosin-triphophat auf andere Substrate übertragen. Proteine und Enzyme werden durch die Proteinkinasen meist an Serin-, Threonin- oder Tyrosin-Seitenketten phosphoryliert und in ihrer Aktivität modifiziert, was als verbreitetes Regulations-prinzip im Stoffwechsel und der Signaltransduktion erkannt worden ist. Im Fall der Krebserkrankungen vermehrt sich das kranke Gewebe unkontrolliert; ein Eingriff in die Regulation der Kinasegesteuerten Proliferation ist daher wünschenswert. In der Kaskade der Zellvermehrung sind eine Anzahl von Kinasen beteiligt. Mehrere dieser Kinasen werden durch die erfindungsgemäßen Verbindungen gehemmt.
Hervorzuheben ist darüber hinaus eine antimikrobielle Hemmwirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I) auf Bakterien, wie beispielsweise Staphylococcus aureus, Streptomyces murinus und gegen Pilze, wie Aspergillus niger, die hartnäckige, lebensbedrohende Infektionskrankheiten verursachen können. Die antimikrobielle Wirksamkeit kann zum Beispiel durch sogenannte Agar-diffusionsteste nachgewiesen werden. So bewirkt Penilenon auf einer Agarplatte mit Streptomyces murinus - Kultur in einer Lösung von 1 mg pro mL einen Hemmhof von 11 mm und in einer Lösung von 0.1 mg pro mL einen Hemmhof von 8 mm. Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I) eignen sich daher ebenfalls zur Therapie und/oder Prophylaxe von bakteriellen Infektionen und/oder Pilzerkrankungen.
Die Verbindungen der Formel (I) können auch als Antioxidantien benutzt werden. Antioxidantien (Oxidationsinhibitoren) sind organische Verbindungen, die unerwünschte, durch Sauerstoff-Einwirkungen bedingte Veränderungen in den zu schützenden Stoffen hemmen oder verhindern. Antioxidantien werden zum Beispiel benötigt in Kunststoffen zum Schutz gegen Alterung, in Fetten zum Schutz gegen Ranzigkeit, in Ölen gegen Verharzung, in Aromastoffen gegen Geruchsverschlechterung, in Lebensmitteln, und in Arzneimitteln. Die Wirkung der Antioxidantien besteht meist darin, daß sie als Radikalfänger für die bei der Oxidation auftretenden freien Radikale wirken. Die antioxidative Wirkung von Atrovenetin (Verbindung der Formel (III)) wurde bereits beschrieben von Y. Ishikawa et al. J. Am. Oil Chem. Soc. 68, 666-668, 1991. Mikrobielle Antioxantien sind aber in ihrer Wirkung häufig zu schwach oder nicht gut verträglich. Es besteht daher ein großer Bedarf an neuen, wirksamen und verträglichen Antioxidantien. Die Verbindungen der Formel (I) sind hoch aktive Antioxidantien, die das Atrovenetin in seiner Wirkung erheblich übertreffen: Während das Atrovenetin in Lösung und in fester Form mit Luftsauerstoff nur langsam reagiert (zum Beispiel in Stunden), verbindet sich beispielsweise das Penilenon der Formel (II) mit Sauerstoff innerhalb von Sekunden oder in wenigen Minuten. Diese erhöhte Affinität des Penilenons zu Sauerstoff ist aber für sehr oxidationsempfindliche Stoffe von entscheidendem Vorteil.
Eine andere chemische Eigenart der erfindungsgemäßen Verbindungen ist die Fähigkeit zur Komplexbildung mit mehrwertigen, vorzugsweise 2- und 3-wertigen Kationen, wie zum Beispiel mit Ca2+, Mg2+, Zn2+, Fe3+. Die Komplexbildungs-Fähigkeit kann für die Herstellung von Arzneimitteln von Vorteil sein, so sind zum Beispiel Inhibitoren der Matrix-Metallo-Proteasen (MMP's) bekannt geworden, die in der Lage sind, das Zink dieser Enzyme zu binden. Es sind aber auch andere Einsatzmöglichkeiten bei Erkrankungen denkbar, deren Ausprägung sich in einer abnormalen Metallionen-Konzentration im Organismus manifestieren. Auch ist es möglich, die Komplexbildungsfähigkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen außerhalb der Medizin nutzbar zu machen, beispielsweise in der Wassertechnik, in Körperpflegemitteln, und in der Polymerisationstechnik (Ullmans Enzyklopädie der Technischen Chemie, 5. Auflage, A 10, 95-100, 1985-1995).
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I) können ebenfalls in der Behandlung von rheumatischen Erkrankungen, beispielsweise rheumatischer Arthritis wirken. Das Wirkprinzip der Verminderung von oxidativem Stress in rheumatischer Arthritis durch Radikalfänger oder Antioxidanzien wurde beispielsweise beschrieben von Ostrakhovitch und Afanas (Biochemical Pharmacology, 2001 , 743-746).
Die vorliegende Erfindung betrifft demzufolge auch die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I) als Arzneimittel, inbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Tumorerkrankungen, bakteriellen Infektionen, Mycosen, rheumatischen Erkrankungen und von Erkrankungen, die sich durch die Hemmung von Matrix-Metallo-Proteasen behandeln lassen.
Des Weiteren betrifft die vorliegende Erfindung ein Arzneimittel mit einem Gehalt an mindestens einer der erfindungsgemäßen Verbindungen.
Das besagte Arzneimittel wird durch Mischung von mindestens einer Verbindung der Formel (I) mit einem oder mehreren physiologisch annehmbaren Hilfsstoffen hergestellt und in eine geeignete Darreichungsform gebracht.
Die erfindungsgemäßen Arzneimittel können enteral (oral), parenteral (intramuskulär oder intravenös), rektal oder lokal (topisch) angewendet werden. Sie können in Form von Lösungen, Pulvern (Tabletten, Kapseln einschließlich Mikrokapseln), Salben (Cremes oder Gel), oder Suppositorien verabreicht werden. Als physiologisch annehmbare Hilfsstoffe für derartige Formulierungen kommen die pharmazeutisch üblichen flüssigen oder festen Füllstoffe und Streckmittel, Lösemittel, Emulgatoren, Gleitstoffe, Geschmackskorrigentien, Farbstoffe und/oder Puffersubstanzen in Frage. Als zweckmäßige Dosierung werden 0.1 - 1000, vorzugsweise 0.2 - 100 mg/kg Körpergewicht verabreicht. Sie werden zweckmäßig in Dosierungseinheiten verabreicht, die mindestens die wirksame Tagesmenge der erfindungsgemäßen Verbindungen, z. B. 30 - 3000, vorzugsweise 50 - 1000 mg enthalten.
Die folgenden Beispiele sollen der näheren Erläuterung der Erfindung dienen, ohne die Breite der Erfindung in irgendeiner Weise begrenzen zu wollen.
Beispiel 1 Herstellung einer Glycerinkultur von Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142
30 ml Nährlösung (Malzextrakt 2,0%, Hefeextrakt 0,2 %, Glucose 1 ,0 % (NH4)2 HP04 0,05 %, pH 6,0) in einem sterilen 100 ml Erlenmeyerkolben werden mit dem Stamm Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, beimpft und 6 Tage bei 25° C und 140 UpM auf einer rotierenden Schüttelmaschine inkubiert. 1,5 ml dieser Kultur werden anschließend mit 2,5 ml 80 %igem Glycerin verdünnt und bei -135°C gelagert.
Beispiel 2 Herstellung einer Vorkultur im Erlenmeyerkolben von Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142
100 ml Nährlösung (Malzextrakt 2,0%, Hefeextract 0,2 %, Glucose 1 ,0 % (NH4)2 HP04 0,05 %, pH 6,0) in einem sterilen 300 ml Erlenmeyerkolben werden mit dem Stamm Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, beimpft und 4 Tage bei 25° C und 140 UpM auf einer rotierenden Schüttelmaschine inkubiert. 2 ml dieser Vorkultur werden anschließend für die Herstellung der Hauptkulturen beimpft.
Beispiel 3 Herstellung einer Hauptkulturultur von Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142. Ein steriler 300 ml Erlenmeyerkolben mit 100 ml der folgende Nährlösung Malzextrakt 2,0 %, Hefeextrakt 0,2 %, Glucose 1 ,0 % (NH4)2 HP04 0,05 %, pH 6 wird mit einer auf einem Schrägröhrchen (gleiche Nährlösung, jedoch mit 2 % Agar) gewachsenen Kultur oder mit 2 ml einer Vorkultur (s. Beispiel 2) beimpft und auf einer Schüttelmaschine bei 5 140 UpM und 25° C inkubiert. Die maximale Produktion einer oder mehrerer Verbindungen der erfindungsgemäßen Penilenons ist nach ca. 144 Stunden erreicht. Zum Animpfen von 10 bis 200 I Fermentern genügt eine 96 bis 144 Std. alte Submerskultur (Animpfmenge ca. 10 %) aus der gleichen Nährlösung. Die Bedingungen für diese Fermenter sind: 0 Temperatur 25° C
Rührergeschwindigkeit: 200 UpM
Belüftung 15 1 Min-1
Durch wiederholte Zugabe von ethanolischer Polyollösung kann die Schaumbildung unterdrückt werden. Das Produktionsmaximum wird nach ca. 96 bis 144 Stunden 5 erreicht.
Beispiel 4: Isolierung der Verbindungen (II) und (III)
5 Liter Kulturlösung, gewonnen nach Beispiel 3, wurden zentrifugiert und die 0 Zellmasse (0.5 Liter) mit 2 Liter Methanol, dem 0.1% Ascorbinsäure hinzugefügt worden ist, extrahiert. Die klare filtrierte methanolische Phase wurde im Vakuum auf 1 L eingeengt und auf eine 1 Liter fassende, mit Adsorptionsharz MCI Gel® CHP20P gefüllte Säule aufgetragen. Säulenmaße: Breite x Höhe: 7 cm x 27 cm. Eluiert wurde mit einem Lösungsmittel-Gradienten von 10 % Propanol-2 bis 90 % Propanol-2 in 5 0.1% wässriger Ascorbinsäure-Lösung. Der Säulenausfluß (140 mL/Minute) ist in Fraktionen je 250 mL aufgefangen worden. Die Penilenon-haltigen Fraktionen 23 bis 26 (Gemisch der Verbindungen der Formeln (ll-A) und (ll-B), zusammenfassend Verbindungen der Formeln (II) genannt) und die Atrovenetin beinhaltenten Fraktionen 43 bis 51 (Gemisch der Verbindungen der Formeln (lll-A) und (lll-B), 0 zusammenfassend Verbindungen der Formeln (III) genannt), die durch HPLC-
Analysen überprüft wurden, sind gesammelt und im Vakuum konzentriert worden. Die zusammengefassten Fraktionen wurden jeweils im Vakuum eingeengt und kalt gelagert. Aus den Fraktionen 23 bis 26 kristallisierte das Penilenon (260 mg Verbindung der Formel (II)), die Fraktionen 43 bis 51 ergaben 1.2 g Atrovenetin (Verbindung der Formel (III)). Unter Argon-Schutzgasatmosphäre wurden die Kristallisate abfiltriert und unter Sauerstoff-Ausschluß in der Kälte gelagert.
Beispiel 5: Isolierung bzw. Reinigung durch HPLC.
Säule: Superspher 100 RP-18e®, 250-4, mit Vorsäule, '
Mobile Phase: 2 Minuten: 5 % Acetonitril in 0.1% Phosphorsäure, 18 Minuten: Gradient von 5% bis 100% Acetonitril in 0.1%
Phosphorsäure, anschließend 100% Acetonitril gleichbleibend.
Flußgeschwindigkeit: 1 mL pro Minute,
Detektion durch UV-Absorption bei 210 nm.
Es werden für die Verbindung der Formel (II) die Retentionszeit von 13.5 Minuten, und für die Verbindung der Formel (III) 20.5 Minuten gefunden.
Beispiel 6: Charakterisierung der Verbindung der Formel (II).
Die physikalisch-chemischen sowie spektroskopischen Eigenschaften von Penilenon lassen sich wie folgt zusammenfassen:
Aussehen: Gelbe, in mittelpolaren und polaren organischen Lösungsmitteln lösliche, in Wasser wenig lösliche kristalline Substanz. Der Schmelzpunkt ist wegen der Zersetzung nicht bestimmbar. Stabil in mild saurem Milieu unter reduzierenden Bedingungen. Unter Einfluß von Sauerstoff, in neutralem Milieu oder in Gegenwart von Aminen verfärbt sich Penilenon grün.
Summenformel: Cι4Hιo06
Molekulargewicht: 274.23 Durch ESI+ Massenspektrometrie wurde ein Molekül-Ion 275.2 [M + H]+ gefunden, unter ESI (negativ)-Bedingungen 273 [M - H]~ bzw. 271 [M - 3H]~ gemessen.
UV-Maxima: 215 nm, 248 (Sh) nm, 275 (Sh), 389nm.
Tabelle 1 : NMR-Daten - 1H- und 13C-chemische Verschiebungen von Penilenon der Formel (II) in DMSO-d6 bei 300K (in ppm; Nummerierung zum Zwecke der NMR- Auswertung entspricht nicht der lUPAC-Nomenklatur).
a) Für C3 und C5 wird im 13. C-Spektrum kein Signal beobachtet.
Beispiel 7: Gewinnung der Penilenon-monomethylether-Derivate der Formeln (IV-A) 5 und (IV-B).
40 mg Verbindung der Formel (II) (Penilenon, isoliert entsprechend Beispiel 4) wurden in 30 mL Tetrahydrofuran gelöst und mit 0.5 mL 2.0 M (Trimethylsilyl)-diazomethan, gelöst in Hexan [Aldrich, Kat.-Nr. 36,283-2], versetzt. Nach einer Stunde wurde die
10 Reaktion durch Wasserzugabe beendet und das Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert. Das Reaktionsprodukt ist dann auf einer Nucleosil HD®-Säule (21 mm x 250 mm) aufgetrennt. Als Elutionsmittel diente ein Gradient von 10% bis 99% Acetonitril in 0.1 % Essigsäure. Der Säulendurchfluß, 20 mL pro Minute, wurde fraktioniert aufgefangen. Die Fraktionen, die das Methylierungsprodukt enthielten,
15 wurden jeweils zusammengefaßt, im Vakuum eingeengt und kristallisiert.
Gewonnen wurden 6 mg des Penilenon-dimethylethers der Formel (IV-A), Summenformel: C-ι6Hι 06, Molekulargewicht: 302.29, und 1 mg des Penilenon- dimethylethers der Formel (IV-B), Summenformel: Molekulargewicht: 20 302.29.
Penilenon-dimethylether der Formel (IV-A):
UV-Maxima: 216 nm, 242 nm, 280 nm (Sh), 387 nm.
25 Tabelle 2: NMR-Daten - 1H- und 13C-chemische Verschiebungen δ des Penilenon- dimethylethers der Formel (IV-A) in DMSO-d6 bei 300K (in ppm; Nummerierung zum Zwecke der NMR-Auswertung entspricht nicht der lUPAC-Nomenklatur).
a) C3 und C5 können nicht eindeutig unterschieden werden.
Penilenon-dimethylethers der Formel (IV-B):
UV-Maxima: 213 nm, 241 nm und 390 nm.
Tabelle 2: NMR:Daten - 1H- und 13C-chemische Verschiebungen δ des Penilenon- dimethylethers der Formel (IV-B) in DMSO-d6 bei 300K (in ppm; Nummerierung zum Zwecke der NMR-Auswertung entspricht nicht der lUPAC-Nomenklatur).
Beispiel 8: Gewinnung der Atrovenetin-Derivate (V-A) und (V-B).
100 mg Verbindung der Formel (III) (Atrovenetin, hergestellt gemäß Beispiel 4) wurden 5 in 5 mL Tetrahydrofuran gelöst und mit 1 mL 2.0 M (Trimethylsilyl)-diazomethan, gelöst in Hexan [Aldrich, Kat.-Nr. 36,283-2], versetzt. Nach' 15 Minuten wurde die Reaktion durch Wasserzugabe beendet und das Lösungsmittel im Vakuum abdestilliert. Das Reaktionsprodukt ist dann auf einer Nucleosil AB®-Säule (21 mm x 250 mm) aufgetrennt. Als Elutionsmittel diente ein Gradient von 10% bis 99% Acetonitril in 10 0.02% Trifluoressigsäure, welche mit Ammoniumhydroxyd auf pH 4.5 gestellt worden ist. Der Säulendurchfluß, 15 mL pro Minute, wurde fraktioniert aufgefangen. Die Fraktionen, die die Methylierungsprodukte enthielten, wurden jeweils zusammengefaßt, im Vakuum eingeengt und kristallisiert.
15 Gewonnen wurden 24 mg Atrovenetin-monomethylether (V-A), Summenformel: C20H20O6, Molekulargewicht: 356.38, und 10 mg Atrovenetin-monomethylether (V-B), Summenformel C20H20O6, Molekulargewicht: 356.38.
Atrovenetin-monomethylether (V-A):
20.
UV-Maxima: 218 nm, 260 nm (Sh), 394 nm.
Tabelle 3: NMR-Daten - 1H- und 13C-chemische Verschiebungen δ des Atrovenetin- monomethylethers (V-A) in DMSO-d6 bei 300K (in ppm; Nummerierung zum Zwecke 25 der NMR-Auswertung entspricht nicht der lUPAC-Nomenklatur).
Atrovenetin-monomethylether (V-B):
UV-Maxima: 222 nm, 282 nm, 385 nm.
Tabelle 4: NMR-Daten - 1H- und 13C-chemische Verschiebungen δ des Atrovenetin- monomethylethers (V-B) in DMSO-d6 bei 300K (in ppm; Nummerierung zum Zwecke der NMR-Auswertung entspricht nicht der lUPAC-Nomenklatur).

Claims

Patentansprüche:
1. Verbindung der Formel (l-A)
oder eine Verbindung der Formel (l-B)
wobei X entweder eine Gruppe der Formel (l-C)
oder der Formel (l-D) bedeutet,
und R-! und falls vorhanden R2 gleichzeitig 1. OH, oder
2.0 C-i-Ce-Alkyl, C2-C6-Alkenyl oder C2-C6-Alkinyl bedeuten, worin Alkyl, Alkenyl und Alkinyl gerade oder verzweigt sind und gegebenenfalls ein- oder zweifach substituiert 5. sind durch:
2.1 -OH,
2.2 =0,
2.3 -O-Cι-C6-Alkyl, worin Alkyl gerade oder verzweigt ist,
2.4 -O-C2-C6-Alkenyl, worin Alkenyl gerade oder verzweigt ist, 0 2.5 -Aryl,
2.6 -NH-C Cό- Alkyl, worin Alkyl gerade oder verzweigt ist,
2.7 - H-C2-C6- Alkenyl, worin Alkenyl gerade oder verzweigt ist,
2.8 -NH2 oder
2.9 Halogen, 5 worin die Substituenten 2.1 bis 2.9 auch noch weiter substituiert sein können durch -
CN, -Amid oder -Oxim-Funktionen,
und/oder eine stereoisomere Form der Verbindung der Formel (l-A) oder der Formel (I- B) und/oder Gemische diese Form in jedem Verhältnis, und/oder ein physiologisch 0 verträgliches Salz der Verbindung der Formel (l-A) oder (l-B).
2. Verbindung der Formel (l-A) oder (l-B) gemäß Anspruch 1, wobei Rl und R2 H oder .CrC-β-Aikyl sind.
5 3. Verbindung der Formel (l-A) oder (l-B) gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie die Formel (ll-A)
oder die Formel (ll-B)
hat, sowie deren physiologisch verträglichen Salze.
4. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (l-A) oder (l-B) gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß 1. der Mikroorganismus Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, bzw. einer ihrer Varianten oder Mutanten in einem wäßrigen Nährmedium kultiviert wird, 2. a) eine Verbindung der Formel (ll-A)
oder der Formel (ll-B)
isoliert und gereinigt wird, oder b) eine Verbindung der Formel (lll-A)
oder der Formel (lll-B)
isoliert und gereinigt wird, 3. a) die Verbindung der Formel (ll-A) oder (ll-B) zu einer Verbindung der Formel (l-A) oder (l-B) derivatisiert wird, oder b) die Verbindung der Formel (lll-A) oder (lll-B) zu einer Verbindung der Formel (l-A) oder (l-B) derivatisiert wird, und 4. die Verbindung der Formel (l-A) oder (l-B) gegebenenfalls in ein pharmakologisch verträgliches Salz überführt wird.
5. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (ll-A) oder (ll-B) gemäß Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß
1. der Mikroorganismus Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142, bzw. einer seiner Varianten oder Mutanten in einem wäßrigen Nährmedium kultiviert wird,
2. eine Verbindung der Formel (ll-A) oder (ll-B) isoliert und gereinigt wird, und
3. die Verbindung der Formel (ll-A) oder (ll-B) gegebenenfalls in ein pharmakologisch verträgliches Salz überführt wird.
6. Verfahren gemäß Anspruch 4, wobei die Derivatisierung mittels eines alkylierenden Agenz erfolgt.
7. Verfahren gemäß Anspruch 6, wobei das alkylierende Agenz ein Diazomethän-r Derivat ist.
8. Verwendung einer Verbindung gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3 zur Herstellung eines Arzneimittels.
9. Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 8 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und Prophylaxe von Tumorerkrankungen.
10. Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 8 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und Prophylaxe von bakteriellen Infektionskrankheiten und/oder Mykosen
11. Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 8 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und Prophylaxe von rheumatoiden Erkrankungen.
12. Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 8 zur Herstellung eines Arzneimittels gegen Erkrankungen, die sich durch Hemmung von Matrix-Metallo- Proteinasen behandeln lassen.
13. Verwendung einer Verbindung gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3 als Antioxidanz.
14. Arzneimittel mit einem Gehalt an mindestens einer Verbindung gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3 und einem oder mehrere physiologisch an- nehmbaren Hilfsstoffe.
15. Stamm Penicillium herquei Bainer & Sartory, DSM 14142.
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