EA043501B1 - ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ЭФФЕКТОМ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ЗАРАЖЕНИЯ SARS-CoV-2 - Google Patents
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ЭФФЕКТОМ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ЗАРАЖЕНИЯ SARS-CoV-2 Download PDFInfo
- Publication number
- EA043501B1 EA043501B1 EA202293069 EA043501B1 EA 043501 B1 EA043501 B1 EA 043501B1 EA 202293069 EA202293069 EA 202293069 EA 043501 B1 EA043501 B1 EA 043501B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- cov
- sars
- rnase
- liposomes
- composition
- Prior art date
Links
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 title claims description 6
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 title description 3
- 208000037847 SARS-CoV-2-infection Diseases 0.000 title 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 74
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 claims description 38
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 14
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 8
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 claims description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 6
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 2
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 2
- 229940022962 COVID-19 vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 claims 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 claims 1
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 claims 1
- 240000001307 Myosotis scorpioides Species 0.000 claims 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 108091006197 SARS-CoV-2 Nucleocapsid Protein Proteins 0.000 claims 1
- 101001024637 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 claims 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 claims 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000036541 health Effects 0.000 claims 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 claims 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 claims 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 52
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 52
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 49
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 21
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 20
- RJMUSRYZPJIFPJ-UHFFFAOYSA-N niclosamide Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1Cl RJMUSRYZPJIFPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 229960001920 niclosamide Drugs 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 16
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 12
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 10
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 4
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 208000025370 Middle East respiratory syndrome Diseases 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 210000002159 anterior chamber Anatomy 0.000 description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 2
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N dichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)Cl JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 210000000554 iris Anatomy 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000003786 sclera Anatomy 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035742 Air-borne transmission Diseases 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 241000127282 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 description 1
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 230000007022 RNA scission Effects 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005557 airborne transmission Effects 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940000425 combination drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005215 dichloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000001747 pupil Anatomy 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Description
Область техники
Изобретение относится к медицине, фармацевтике и биотехнологии. Представлено применение нового лекарственного средства (фармацевтической композиции), обладающего противовирусным эффектом в отношении коронавируса SARS-CoV-2 и родственных вирусов, таких как SARS-CoV, MERS и др., геном которых представлен РНК, а вирионы снабжены липидной оболочкой, композиция за счет разрушения генома короновируса ферментом РНКазой А. Предложенная композиция может применяться амбулаторно для подавления репликации вируса SARS-CoV-2, снижения вирусной нагрузки, снижения риска передачи инфекции воздушно-капельным путем.
Уровень техники
В мире разработан целый ряд профилактических вакцин, а также средств терапии для лечения коронавирусной инфекции. Имеется патент RU 2746362 (заявка 2021/106335 от 11.03.2021) - Комбинированное лекарственное средство, обладающее противовирусным эффектом в отношении нового коронавируса SARS-CoV-2 [1], в котором описано блокирование передачи инфекции и уменьшение риска развития клинических осложнений за счет применения малых интерферирующих РНК (миРНК). Основой вышеуказанного патента является получение комбинированного лекарственного средства с созданными молекулами РНК, способными опосредовать мишень-специфические подавления репликации вируса SARS-CoV-2.
Однако не предложено препаратов, способных уничтожать коронавирусы путем прямого разрушения их генома - одноцепочечную (+)РНК. Очевидно, что прямое разрушения генома вируса может быть осуществлено путем воздействия фермента рибонуклеазы (РНКазы) [2], способного расщеплять РНК коронавирусов.
Раскрытие изобретения
Лекарственное средство предназначено для ингаляционного или интраназального введения.
Внедрение в практику препаратов на основе РНКазы (РНКазы А) ограничивается рядом факторов, к которым относятся недостаточная эффективность и безопасность доставки РНКазы А в вирусные частица-мишени. Применение липосом [3] для доставки вышеуказанного препарата (РНКазы А) решает эту проблему, так как SARS-CoV-2, а также родственные ему вирусы MERS, SARS-CoV имеют липидную оболочку, позволяющую трансфицировать (проникать) липосомам и внедрять РНКазу А непосредственно внутрь вируса.
Таким образом, в настоящее время существует необходимость в разработке нового противовирусного средства, способного разрушать РНК коронавируса.
В состав лекарственного средства по настоящему изобретению входит композиция - липосомы, осуществляющие доставку эффективного количество РНКазы А. Эта фармацевтическая композиция обеспечивает расщепление РНК SARS-CoV-2.
Лекарственное средство можно применять (употреблять) в виде назальных капель или спрея, а также в виде ингаляции.
Технический результат заключается в применении эффективного и безопасного противовирусного средства, обеспечивающего разрушение РНК SARS-CoV-2. Указанный технический результат поясняется следующими примерами.
Для достижения вышеуказанного технического результата предложено применение лекарственного средства, содержащего эффективное количество молекул РНКазы А в липосомах на основе фосфолипидов из соевого лецитина или фосфолипидов животного происхождения, для профилактики или лечения коронавирусной инфекции, вызываемой SARS-CoV-2.
Согласно настоящему изобретению вышеуказанное лекарственное средство может быть предназначено для интраназального или ингаляционного введения.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 приведены результаты эксперимента по примеру 4.
На фиг. 2 приведены результаты эксперимента по примеру 5 (метод гель-электрофореза).
Осуществление изобретения
Указанный выше технический результат поясняется следующими примерами.
Пример 1. Получение липосом с РНКазой.
Для получения липосом использовали фосфолипиды как растительного (соевый лецитин), так и животного происхождения (из мозга крупного рогатого скота). В качестве рибонуклеазы использовали коммерческий препарат-фермент РНКаза А с ММ-13.7 кД, pH оптимум - 5,0-6,0; 50U/мг фирмы Mol BIO HIMEDIA, полученный из поджелудочной железы крупного рогатого скота, или рибонуклеазу из поджелудочной железы крупного рогатого скота (РНКаза А) фирмы СамсонМед (Россия).
В качестве фосфолипидов использовали экстракт из соевого лецитина, применяемого в пищевой промышленности или фосфолипиды животного происхождения (из мозга крупного рогатого скота).
Для получения липосом 1 г коммерческого (VEROLEC FLS, China) соевого лецитина растворяли в 20 мл хлороформ-метанольной смеси при соотношении 2:1. Смесь выдерживали в течение 10 ч при температуре 2-4°C. Затем смесь центрифугировали при 4500 об/мин в течение 5 мин. Отбирали 1 мл надосадочной жидкости и растворяли в 6 мл хлороформа. Далее растворитель отгоняли в вакууме
- 1 043501 (4±2 мм рт. Ст.) при температуре 40°C. После полного удаления растворителя добавляли 50 мкл рибонуклеазы А (IU/мкл) и 5 мл физиологического раствора. Полученную смесь замораживали при
-20°C в течение 20 мин, затем смесь размораживали при перемешивании при 23°C в течение 30 мин.
(процесс замораживания и оттаивания повторяли четырежды). Затем полученную смесь обрабатывали ультразвуком при 22 кГц, 30 с в 4 повторах.
Аналогичным образом получали липосомы на основе фосфолипидов из мозга крупного рогатого скота, которые были выделены по методу [8].
Лекарственные формы фармацевтической композиции, приведенные в настоящем документе, могут быть получены любым известным способом и содержать другие вспомогательные вещества, способные увеличивать стабильность композиций (i) и (ii), и трансфекцию РНКазы.
Пример 2. Получение липосом с никлозамидом и РНКазой.
Использовали никлозамид (кристаллическое вещество, температура плавления 227-232°C). ИК-спектр тестируемого образца соответствовал ИК-спектру безводного никлозамида - стандарта.
Для получения липосом, содержащих РНКазу (композиция i), и липосом, содержащих РНКазу А и никлозамид (композиция ii), 1 мл раствора лецитина (1,075 мМ) смешивали с 6 мл хлороформа. Далее растворитель отгоняли в вакууме (4±2 мм рт. ст.) при температуре 40°C. После удаления хлороформа в колбу добавляли 50 мкл рибонуклеазы А, 30 мкл раствора никлозамида (10% раствор в ДМСО) и 5 мл физиологического раствора. Полученную смесь замораживали при -20°C в течение 20 мин, затем смесь размораживали при 23°C в течение 30 мин при перемешивании (процесс замораживания и оттаивания повторяли четырежды). Затем полученную смесь обрабатывали ультразвуком при 22 кГц, 30 с.
Аналогичным образом получали липосомы на основе фосфолипидов из мозга крупного рогатого скота, которые были выделены по методу [4].
Лекарственные формы фармацевтических композиций, приведенных в настоящем документе, могут быть получены любым известным способом и содержать другие вспомогательные вещества, способные увеличивать стабильность композиций (i) и (ii) и трансфекцию РНКазы и никлозамида.
Пример 3. Синтез праймеров на N ген SARS-CoV-2.
Для определения возможности расщепления РНК SARS-CoV-2 использовали ПЦР метод. В качестве мишени для определения возможности расщепления РНКазой генома коронавируса SARS-CoV-2 был выбран N ген как наиболее стабильный для таких типов коронавирусов, как SARS и MERS, кодирующий нуклеокапсид [5-7]. На N ген были синтезированы праймеры и флуоресцентный зонд, используя открытые международные данные CDC (Центр по контролю и профилактике заболеваний США) [8].
Синтез праймеров проводили на приборе ДНК-синтезаторе ASM-2000 фосфорамидитным твердофазным методом [9]. После синтеза олигонуклеотиды снимали с твёрдой фазы концентрированным 30% водным аммиаком в течение 2 ч при температуре 60°С. Раствор олигонуклеотидов выпаривали для удаления аммиака и осаждали в 70% этаноле в присутствии 0,3 М ацетата натрия и 50 мМ хлорида магния. Для осаждения олигонуклеотидов центрифугировали при 14000 об/мин в течение 20 мин. Осадок промывали дважды 70% этанолом и высушивали при комнатной температуре в течение 30 мин.
После синтеза олигонуклеотиды очищали от коротких неполностью синтезированных молекул. Для этого в конце синтеза не проводили последний этап снятия ДМТ группы, в результате только полностью синтезированные олигонуклеотиды на 5'-конце содержат ДМТ группу для очистки на картриджах методом обратно-фазовой хроматографии. Обратно-фазовую хроматографию проводили в следующих условиях: промывку олигонуклеотидов проводили с помощью 5% ацетонитрила с хлоридом натрия в концентрации 100 мг/мл. Для удаления ДМТ группы с олигонуклеотидов использовали 3% раствор дихлоруксусной кислоты. После удаления ДМТ группы для элюирования очищенных олигонуклеотидов с картриджа использовали 50% ацетонитрил в 100 мМ трис-буфере pH 8,5. Очищенные олигонуклеотиды осаждали 70% этанолом в присутствии 50 мМ хлорид магния, центрифугированием при 14000 об/мин в течение 20 мин. Полученный осадок олигонуклеотидов растворяли в ТЕ буфере pH 8,0 до концентрации 20 мкМ. Полученный раствор праймеров использовали для проведения ПЦР реакции.
Таблица 1
Последовательность праймеров и флуоресцентного зонда на N ген SARS-CoV-2
| Наименование | Последовательность нуклеотидов 5’ - 3’ | Размер фрагмента амплификации |
| N1-F | GACCCCAAAATCAGCGAAAT | 466 и.и |
| N3-R | TGTAGCACGATTGCAGCATTG | |
| N1-P | FAM-ACCCCGCATTACGTTTGGTGGACC-BHQ1 |
С помощью данных праймеров и зонда, специфичных к участку N гена РНК SARS-CoV-2, методом ПЦР определяли содержание вируса в биологических образцах и проводили гель-электрофорез образцов, как описано в примерах 4 и 5.
Пример 4. Изучение действия липосом с РНКазой на SARS-CoV-2 методом RT-ПЦР in vitro.
Выделение РНК и выявление вируса SARS-CoV-2 проводили по стандартному методу с помощью
- 2 043501 сертифицированных наборов реагентов ДНК-Технология [10, 11], а также с помощью синтезированных праймеров и зонда. Эффективность действия липосом определяли по смещению порогового цикла (AACt) в ПЦР анализе. Пороговый цикл показывает, какое количество РНК содержится в пробах, и он обратно пропорционален логарифму начального количества копий.
Для выделения РНК использовали как набор реагентов ДНК-Технология, так и разработанный заявителями сертифицированный набор ЭНКОР. Детекцию РНК в образцах проводили с синтезированными праймерами и зондом, описанными в примере 3. Для проведения ПЦР анализа использовали как набор реагентов ДНК-Технология SARS-CoV-2/SARS-CoV, так и разработанный ПЦР набор в следующих условиях: объём смеси 25 мкл, 1х ПЦР буфер (20 мМ трис-HCl pH 8,5, 20 мМ сульфат аммония, 20 мМ хлорид калия, 0,1 мкг/мл БСА), 3 мМ хлорид магния, 0,8 мМ дНТФ, 400 нм каждого праймера, 200 нМ зонда, 1 ед. полимеразы, 25 ед. ревертазы. Программа ПЦР: 50°С - 15 мин; 95°С - 15 мин; 40 циклов (95°С - 10 с; 60°С - 40 с, считывание сигнала по каналу FAM). Для ПЦР анализа использовали по 5 мкл РНК образца.
Образцы биологического материала человека (по 80 мкл мазка из носоглотки), содержащие коронавирус SARS-CoV-2, инкубировали с 20 мкл композиции (i) и (ii) (полученных, как описано в примерах 1 и 2), в течение 1 ч при 36°С. Параллельно проводили инкубирование тех же образцов с 20 мкл свободной РНКазы (1 ед./мкл), а также с пустыми липосомами, не содержащими РНКазу. Результаты экспериментов представлены в табл. 2.
Как видно из приведенных данных (табл. 2), под действием пустых липосом пороговый цикл (Ct.) реакции RT-ПЦР практически не меняется, что свидетельствует о том, что липосомы сами по себе не могут разрушать РНК SARS-CoV-2. В то же время наибольшее воздействие и сдвиг Ct происходит под действием липосом, содержащих РНКазу - на 9 циклов, и липосом, содержащих РНКазу и никлозамид на 10 циклов, что свидетельствует о том, что липосомы, содержащие РНКазу, расщепляют РНК коронавируса и снижают концентрацию РНК примерно в 10 раз. При этом сама РНКаза в проводимых экспериментах сдвигает Ct на 3 цикла, по-видимому, за счет расщепления свободных РНК COVID-19. Следует отметить, что липосомы, содержащие РНКазу с никлозамидом, проявляли практически такое же действие, что и липосомы, содержащие только РНКазу, что и следовало ожидать из биологической активности никлозамида.
Действие композиции (i) и (ii) исследовалось также методом гель-электрофореза [12], используя синтезированные праймеры на N ген (466 п.н.).
Результаты эксперимента приведены на фиг. 1.
Фиг. 1. Гель-электрофорез в 3% агарозном геле [12].
Образцы - амплификатов N гена:
А - исходный образец, положительный по COVID-19;
В - образец после инкубации с пустыми липосомами;
С - образец после инкубации с РНКазой;
D - образец после инкубации с липосомами, содержащими РНКазу (композиция i);
F - образец после инкубации с липосомами, содержащими РНКазу и никлозамид (композиция ii);
K - отрицательный контроль - образец, не содержащий вирус SARS-CoV-2.
Гель-электрофорез (фиг. 1) ПЦР анализа выявил, что после инкубации позитивных SARS-CoV-2 образцов с композициями (i) и (ii) приводит к разложению N гена, так как продукт амплификации на гель-электрофорезе отсутствует, это свидетельствует о том, что произошло расщепление N гена SARS-CoV-2.
Пример 5. Изучение действия липосом с РНКазой на SARS-CoV-2 in vivo.
Исследования проводили на 5 группах кроликов породы Великан, весом 1,6-1,8 кг, возраста
- 3 043501
3-4 месяца, по 5 животных в каждой группе:
группа 1 - отрицательный контроль (физиологический раствор);
группа 2 - положительный контроль, образец мазка содержащий SARS-CoV-2;
группа 3 - композиция (i);
группа 4 - композиция (ii);
группа 5 - РНКаза (1ед./мкл).
В носовую полость животным в группе 1 закапывали 20 мкл физиологического раствора, животным группы 3 и 4 вводили по 20 мкл композиций (i) и (ii), соответственно животным группы 5 вводили по 20 мкл РНКазы (1 ед./мкл). Через 1 ч всем животным (кроме группы 1) вводили по 20 мкл биологического материала, позитивного по SARS-CoV-2 с вирусной нагрузкой - Ct 20. Далее через 1 ч у всех животных был сделан забор образцов из носовой полости, как описано в [10]. Все полученные образцы анализировали методом ПЦР с набором реагентов ДНК-Технология SARS-CoV-2/SARS-CoV [11]. Результаты экспериментов представлены в табл. 3.
Таблица 3
Изучение действия in vivo композиции (i) и (ii) на ингибирование РНК SARS-CoV-2 количественным ПЦР методом с помощью гибридизационно-флуоресцентной детекции
| Группа 1 отрицательн ый контроль | Группа 2 положительный контроль | Группа 3 композиция б) | Группа 4 композиц ия (и) | Группа 5 РНКаза | ||
| Пороговы й цикл | Кролик 1 | — | 25 | — | — | 26 |
| Кролик 2 | — | 27 | — | — | 26 | |
| (Ct) | Кролик 3 | — | 24 | — | — | 24 |
| Кролик 4 | — | 28 | — | — | 28 | |
| Кролик 5 | — | 27 | — | — | 30 | |
| Среднее значение Ct. | - | 26 | - | - | 27 |
Как видно из табл. 3, при введении животным композиций (i) - группа 3 и композиций (ii) группа 4 РНК SARS-CoV-2 не обнаруживается. В то же время в группе 2 и группе 5 среднее значение Ct 26-27 практически не меняется.
Результаты свидетельствуют о том, что под действием композиций (i) и (ii) происходит расщепление РНК вируса SARS-CoV-2, тогда как свободная РНКаза практически не действует в условиях in vivo.
Действие композиций (i) и (ii) in vivo исследовалось также методом гель-электрофореза (фиг. 2) [12].
Фиг. 2. Гель-электрофорез в 3% агарозном геле [12].
Группа 1 - отрицательный контроль (физиологический раствор).
Группа 2- положительный контроль, образец мазка, содержащий SARS-CoV-2.
Группа 3 - композиция (i).
Группа 4 - композиция (ii).
Группа 5 - РНКаза (1 ед./мкл).
Как видно из фиг. 2, в контрольных образцах (исходный K+ - группа 2) имеется фрагмент N гена COVID-19, тогда как под действием композиций (i) и (ii) (группа 3 и группа 4) происходит разрушение N ген вируса SARS-CoV-2.
Свободная РНКаза (группа 5) не расщепляет РНК коронавируса in vivo (табл. 3 и группа 5).
Пример 6. Стабильность липосом с РНКазой (композиция (i)).
Для определения стабильности композицию (i) инкубировали при 36°С в течение различных интервалов времени от 1 до 6 ч (табл. 4). Затем к каждому образцу композиции (i) добавляли биологический материл с коронавирусной инфекцией SARS-CoV-2 и вновь инкубировали при 36°С в течение 1 ч. Эксперимент проводили, как описано в примере 4. Выделение РНК и выявление вируса SARS-CoV-2 проводили по стандартному методу с помощью сертифицированных наборов реагентов ДНК-Технология [11]. Эксперимент проводили в пяти повторах.
В табл. 4, приведены данные по изучению стабильности липосом с РНКазой - композиция (i) методом RT-ПЦР.
- 4 043501
Таблица 4
Исследование стабильности липосом с РНКазой - композиция (i) __________________методом RT-ПЦР_______________________
| Положительный контроль(+) COVID-19 | Композиция (i) | ||||
| 1 ч | 2 ч | 3 ч | 6 ч | ||
| Пороговый цикл (Ct) | 20 | 30 | 25 | 27 | 25 |
| 20 | 30 | 28 | 27 | 28 | |
| 18 | 23 | 31 | 28 | 26 | |
| 19 | 24 | 22 | 27 | 27 | |
| Среднее значение Ct. | 19 | 27 | 26.5 | 27 | 26.5 |
Из приведённой таблицы видно, что под действием композиции (i) пороговый цикл (Ct) смещается на 8 циклов, это свидетельствует о том, что вирусная нагрузка уменьшается примерно в 103 раз. При этом установлено, что среднее значение порогового цикла (Ct) при ПЦР с липосомами, содержащими РНКазу (композиция (i)), практически не меняется в интервале времени от 1 до 6 ч, что свидетельствует о стабильности липосом, содержащих РНКазу (композиция (i)) в течение 6 ч.
Пример 7. Стабильность липосом с РНКазой и никлозамидом (композиция (ii)).
Для определения стабильности композицию (ii) инкубировали при 36°С в течение различных интервалов времени от 1 до 6 ч (табл. 5). Затем к каждому образцу композиции (ii) добавляли биологический материл с коронавирусной инфекцией SARS-CoV-2 и вновь инкубировали при 36°С в течение 1 ч. Эксперимент проводили, как описано в примере 4. Выделение РНК и выявление вируса SARS-CoV-2 проводили по стандартному методу с помощью сертифицированных наборов реагентов ДНК-Технология [11].
Таблица 5
Исследование стабильности липосом с РНКазой и никлозамидом __________ (композиция (ii)) методом RT-ПЦР_____________
| Положительный контроль (+) | Композиция (й) | ||||
| 1 ч | 2 ч | 3 ч | 6 ч | ||
| Пороговый цикл (Ct) | 21 | 26 | 25 | 27 | 25 |
| 18 | 27 | 26 | 25 | 30 | |
| 18 | 30 | 30 | 26 | 27 | |
| 19 | 25 | 24 | 27 | 27 | |
| Средний Ct. | 19 | 27 | 26 | 26 | 26.5 |
Как видно из табл. 5, под действием композиции (ii) пороговый цикл (Ct) смещается на 8 циклов, это свидетельствует о том, что вирусная нагрузка уменьшается примерно в 10 раз. При этом установлено, что среднее значение порогового цикла (Ct) при ПЦР практически не меняется в интервале времени от 1 до 6 ч, что свидетельствует о стабильности липосом, содержащих РНКазу и никлозамид (композиция (ii)), в течение 6 ч.
Пример 8. Исследование безопасности и токсичности композиций (i) и (ii) на животных in vivo (кролики и мыши), а также на культурах клеток (фибробласты и гепатоциты) in vitro.
Клетки фибробластов были получены по методу [13]. Гепатоциты печени крысы получены по методу [14].
Цитотоксические свойства композиций (i) и (ii) определяли методом МТТ in vitro [15]. Данные, представлены в виде среднего значения (из трех экспериментов). Цитотоксический эффект каждого из исследуемых образцов композиций сравнивали с контролем цитостатиком Цисплатин (Teva Pharmaceutical Industries, Ltd., Израиль).
- 5 043501
Таблица 6
Цитотоксичность композиций на клеточной культуре фибробластов
| Образцы | Концентрация, Подавление роста клеток (%) | |||
| 10 мкг/мл | 100 мкг/мл | 1 мг/мл | 10 мг/мл | |
| Липосомы с РНКазой (композиция (i)) | 0,0±0,0 | 0,0±0,0 | 2,3±0,4 | 5,4±0,6 |
| Липосомы с РНКаза с никлозамидом (композиция (»)) | 0,0±0,0 | 0,0±0,0 | 3,2±0,5 | 8,6±0,3 |
| РНКаза в физиологическим растворе | 0,0±0,0 | 0,0±0,0 | 0,5±0,1 | 1,2±0,1 |
| Цисплатин | 10+2,1 | 51,2+1,5 | 100.0+0,0 | 100,0+0,0 |
Таблица 7
Цитотоксичность композиций на гепатоцитах
| Образцы | Концентрация, Подавление роста клеток (%) | |||
| 10 мкг/мл | 100 мкг/мл | 1 мг/мл | 10 мг/мл | |
| Липосомы с РНКазой (композиция i) | 0,0±0,0 | 0,0±0,0 | 1,3±0,3 | 3,4±0,6 |
| Липосомы с РНКаза с никлозамидом (композиция ii) | 0,0±0,0 | 0,0±0,0 | 1,7±0,4 | 4,2±0,3 |
| РНКаза в физиологическим растворе | 0,0±0,0 | 0,0±0,0 | 0,3±0,1 | 0,8±0,2 |
| Цисплатин | 14,1+0,7 | 18,3+1,6 | 33,3+0,6 | 37,8+0,3 |
Как видно из полученных данных (табл. 6 и 7), в диапазоне концентраций 10-100 мкг/мл образцы не подавляли рост нормальных клеток по сравнению с препаратом сравнения (цисплатин). Таким образом, композиции (i) и (ii) не обладают цитотоксическим эффектом для нормальных клеток.
Пример 9. Изучение общей токсичности композиций на кроликах и мышах in vivo
Исследования проводили in vivo на 4 группах животных по 5 кроликов (породы Великан, массой 1,6-1,8 кг) и беспородных мышей (массой 18-20 г) по 10 мышей в группе. Исследуемые композиции закапывали в глаза животных 2 раза в день (утром и вечером) по 50 мкл физиологического раствора в правый глаз - контроль, а в левый глаз 50 мкл - композиции (i) и (ii) в течение 5 дней.
Первая группа - контроль (физиологический раствор).
Вторая группа - липосомы из соевого лецитина.
Третья группа - липосомы из соевого лецитина с РНКазой (композиция (i)).
Четвертая группа - липосомы из соевого лецитина с РНКазой и с никлозамидом (композиция (ii)).
Параллельно в каждой группе кроликам вводили интраназально по 20 мкл испытуемых образцов в каждую ноздрю.
Через 5 дней введения вышеперечисленных растворов определяли визуальные изменения, происходящие в глазах кроликов, и общее состояние животных, а также снимали биохимические показатели крови животных (мышей и кроликов) по методу [16]. Визуальное наблюдение показало, что самочувствие экспериментальных и контрольной групп животных было одинаковым.
В табл. 8 и 9 приведены биохимические показатели исследованных животных.
Таблица 8
Биохимические показатели крови экспериментальных животных (кролики)
| Образцы | Bil | LDG | ALT | T-Prot | AST | Choi | TG | Glu | СК |
| мг/дл | МЕ/л | МЕ/л | г/л | МЕ/л | мг/дл | мг/дл | мг/дл | МЕ/л | |
| Липосома из соевого лецитина | 0,42 ± 0,09 | 156,8 ± 1,2 | 28,2 ±2,4 | 58,0 ±3,1 | 15,0 ±0,4 | 37,5 ± 0,2 | 125,7 ± 1,6 | 115,7 ± 6,6 | 152,5 ±5,3 |
| Липосомы с РНКазой (композиция (i)) | 0,34 ±0,05 | 143,7 ±4,0 | 40,3 ±3,0 | 58,6 ± 1,9 | 16,7 ±0,9 | 36,2 ± 0,8 | 132,6 ±2,9 | 127,9 ±8,1 | 165,3 ± 1,7 |
| Липосомы с РНКаза с никлозамидом (композиция (ii)) | 0,41 ± 0,03 | 148,9 ±2,5 | 37,8 ±3,6 | 60,5 ± 1,8 | 15,7 ±0,6 | 41,7 ±0,6 | 128,2 ±5,4 | 202,2 ± 0,4 | 180,7 ±3,4 |
| РНКаза в физиологическом растворе | 0,37± 0,02 | 154,1 ± 1,5 | 39,9 ±7,2 | 62,0 ± 0,9 | 18,2 ± 1,1 | 41,6 ± 1,4 | 124,4 ± 7,8 | 118,3 ±0,8 | 186,5 ±4,1 |
| Контроль | 0,40 ± 0,00 | 155,7 ±3,6 | 30,5 ± 1,4 | 60,3 ±4,1 | 20,1 ± 1,7 | 37,2 ± 0,6 | 128,8 ±7,9 | 160±3,3 | 151,6± 1,5 |
- 6 043501
Таблица 9
Биохимические показатели крови экспериментальных животных (мыши)
| Образцы | Tbil | Dbil | ALT | ALP | AST | Choi | ТР | Glu | Urea |
| мкМ/л | ед/л | — | мг/дл | г/дл | мМ/л | ||||
| Липосома из соевого лецитина Липосомы с РНКазой | 28,6±0,5 | 14,6±0,2 | 58,2±0,4 | 440,0±0,1 | 295,0±0,4 | 62,5±0,2 | 117,7±0,6 | 4,1±0,6 | 38,5±0,3 |
| (композиция (i)) Липосомы с РНКаза | 30,0±0,4 | 13,0±0,4 | 61,7±0,6 | 438,7±0,4 | 298,0±0,1 | 60,5±0,1 | 106,7±0,4 | 4,5± 0,3 | 38,5±0,2 |
| с никлозамидом (композиция (и)) РНКаза в | 31,2±0,1 | 14,1=1=0,1 | 59,3±0,1 | 427,6±0,3 | 300,7±0,2 | 66,2±0,0 | 109,6±0,2 | 4,3±0,4 | 39,8±0,3 |
| физиологическом растворе | 29,9±0,2 | 14,1±0,5 | 62,9±0,2 | 442,0±0,2 | 299,2±0,3 | 63,6±0,4 | 114,8=1=0,1 | 3,9±0,3 | 36,5±0,1 |
| Контроль | 31,8±0,1 | 15,7±0,3 | 62,5±0,4 | 443,3±0,1 | 301.7±0,1 | 65,3±0,1 | 118,8±0,2 | 4,5±0,3 | 39,6±0,1 |
Как видно из полученных данных (табл. 8 и 9), значения основных показателей крови практически не отличаются от контрольных, что свидетельствует о нетоксичности композиций (i) и (ii) на животных.
Пример 10. Биомикроскопическое исследование слизистых глаз экспериментальных животных (кролики).
Действие липосом, содержащих композиции (i) и (ii) на слизистые было изучено путем исследования динамического контроля глаз кроликов.
В ходе эксперимента проводился динамический контроль состояния глаз (офтальмологический статус) кроликов методом биомикроскопии. Биомикроскопическое исследование осуществляли при помощи офтальмологического биомикроскопа - щелевой лампы SL 115 фирмы Carl Zeiss (Германия) при увеличении в 10 и 16 раз ежедневно в течение всего срока наблюдения. Оценивали состояние конъюнктивы, склеры, роговицы, передней камеры, радужки и рефлекс с глазного дна. Различные степени увеличения (х 10, х 16) при биомикроскопии позволяли более детально изучить состояние структур переднего сегмента глаза.
Перед проведением биомикроскопических исследований всех кроликов туго пеленали, голову плотно фиксировали за щелевой лампой.
В ходе проведения биомикроскопических исследований парные глаза кроликов были приняты за норму и использовались в качестве контроля в ходе экспериментов.
Первая проверка проводилась через сутки после закапывания композиций (i) и (ii) и липосом из соевого лецитина.
При осмотре методом биомикроскопии отмечалось, что глаза были спокойны без отделяемого, роговица прозрачная и гладкая, конъюнктива век бледно-розовая и блестящая, склера белая без инъекции сосудов. Влага передней камеры также была прозрачной без примеси каких-либо элементов. Радужка рельефна, зрачок круглый, реакция на свет живая. Оптические среды на всех глазах оставались прозрачными, рефлекс с глазного дна был розовый. Признаков воспаления и токсико-аллергической реакции выявлено не было.
За весь период наблюдения у всех кроликов офтальмологический статус обоих глаз был идентичным без клинических признаков воспалительных и аллергических реакций.
Эти данные свидетельствуют о том, что композиции (i) и (ii) не токсичны для глаз кроликов.
-
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021119487 | 2021-07-02 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA043501B1 true EA043501B1 (ru) | 2023-05-29 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10195145B2 (en) | Method for treating fibrosis using siRNA and a retinoid-lipid drug carrier | |
| AU2019255370B2 (en) | Synthetic RIG-I-like receptor agonists | |
| JP7001599B2 (ja) | 急性骨髄性白血病の処置のためのダクチノマイシン組成物および方法 | |
| KR20060063788A (ko) | 올리고 핵산 담지 복합체, 이 복합체를 함유하는 의약조성물 | |
| US20060241066A1 (en) | Decoy composition for treating and preventing inflammatory disease | |
| WO2021188915A1 (en) | Methods and compositions for treatment of coronavirus infection | |
| CN110564842B (zh) | 细胞色素酶cyp26a1在制备治疗神经病理性疼痛的药物中的应用 | |
| CN102625707A (zh) | Hip/pap或其衍生物的新应用 | |
| EA043501B1 (ru) | ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВИРУСНЫМ ЭФФЕКТОМ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ЗАРАЖЕНИЯ SARS-CoV-2 | |
| EA042253B1 (ru) | Комбинированное лекарственное средство, обладающее противовирусным эффектом для профилактики заражения sars-cov-2 | |
| WO2023277730A1 (ru) | Лекарственное средство для профилактики заражения sars-cov-2 | |
| US8173616B2 (en) | RNA-induced translational silencing and cellular apoptosis | |
| US20070219150A1 (en) | Nerve Cell Differentiation Inducer | |
| CN112569338B (zh) | Tdfa在制备预防和/或治疗眼表炎症疾病的药物中的应用 | |
| WO2018027149A1 (en) | Methods of treating alport syndrome | |
| RU2001917C1 (ru) | Способ лечени патологических состо ний, сопровождающихс нехваткой GT РНК | |
| RU2245137C1 (ru) | Фармацевтическая композиция для лечения воспалительных процессов вирусной этиологии в глазном яблоке | |
| CN115869302A (zh) | 包含gsdme激动剂和gsdmd激动剂的组合物在制备胰腺肿瘤细胞焦亡药物中的应用 | |
| JP2023538109A (ja) | 骨髄由来間葉系幹細胞からの微小胞を使用する処置の組成物及び方法 | |
| CN116763921A (zh) | 电压门控钾离子通道Kv1.3的选择性抑制剂及其应用 | |
| CN116212029A (zh) | 降低rcan1含量或活性的物质在预防和治疗衰老以及骨关节炎中的应用 | |
| CN116459270A (zh) | 一种药物组合物及其在制备防治眼部新生血管性疾病药物中的应用 |