EA038974B1 - Антигены вируса иммунодефицита человека, векторы, композиции и способы их применения - Google Patents
Антигены вируса иммунодефицита человека, векторы, композиции и способы их применения Download PDFInfo
- Publication number
- EA038974B1 EA038974B1 EA201891415A EA201891415A EA038974B1 EA 038974 B1 EA038974 B1 EA 038974B1 EA 201891415 A EA201891415 A EA 201891415A EA 201891415 A EA201891415 A EA 201891415A EA 038974 B1 EA038974 B1 EA 038974B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- seq
- hiv
- amino acid
- vector
- acid sequence
- Prior art date
Links
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 title claims abstract description 394
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 284
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 141
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 48
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title description 87
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title description 87
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title description 87
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 claims abstract description 180
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 claims abstract description 180
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 71
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 46
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 claims abstract 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 155
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 118
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 118
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 118
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 113
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 74
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 73
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 57
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 52
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 52
- 238000005829 trimerization reaction Methods 0.000 claims description 35
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 32
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 claims description 30
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 23
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 21
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 20
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 16
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 claims description 11
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 22
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 18
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract description 18
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 12
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 169
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 68
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 60
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 60
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 34
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 32
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 32
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 30
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 27
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 20
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 20
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 20
- 241000205701 Human adenovirus 26 Species 0.000 description 20
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 20
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 20
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 20
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 17
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 16
- 101710090322 Truncated surface protein Proteins 0.000 description 16
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 15
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 15
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 12
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 12
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 12
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 12
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 12
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 11
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 11
- 102100034353 Integrase Human genes 0.000 description 11
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 10
- 101100107610 Arabidopsis thaliana ABCF4 gene Proteins 0.000 description 9
- 101100068078 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) GCN4 gene Proteins 0.000 description 9
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 8
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 8
- 102000004961 Furin Human genes 0.000 description 7
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 7
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 6
- 241001112090 Pseudovirus Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 6
- -1 gp140 Proteins 0.000 description 6
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 241000713311 Simian immunodeficiency virus Species 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 108010089520 pol Gene Products Proteins 0.000 description 5
- 108700004029 pol Genes Proteins 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 5
- 229940031418 trivalent vaccine Drugs 0.000 description 5
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 241001217856 Chimpanzee adenovirus Species 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710189104 Fibritin Proteins 0.000 description 3
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 3
- 101710114816 Gene 41 protein Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 3
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 description 3
- 108010027225 gag-pol Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- 229940031351 tetravalent vaccine Drugs 0.000 description 3
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 108010041397 CD4 Antigens Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000282575 Gorilla Species 0.000 description 2
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 229940021704 adenovirus vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000001426 native polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 101150088264 pol gene Proteins 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-N sodium;5-ethyl-5-pentan-2-yl-1,3-diazinane-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- DEIGXXQKDWULML-UHFFFAOYSA-N 1,2,5,6,9,10-hexabromocyclododecane Chemical compound BrC1CCC(Br)C(Br)CCC(Br)C(Br)CCC1Br DEIGXXQKDWULML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 241000701242 Adenoviridae Species 0.000 description 1
- 241000701106 Bovine adenovirus 3 Species 0.000 description 1
- 241000701157 Canine mastadenovirus A Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 101710170658 Endogenous retrovirus group K member 10 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 101710186314 Endogenous retrovirus group K member 21 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 101710162093 Endogenous retrovirus group K member 24 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 102100039715 Endogenous retrovirus group K member 6 Gag polyprotein Human genes 0.000 description 1
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 1
- 101710094596 Endogenous retrovirus group K member 8 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 101710177443 Endogenous retrovirus group K member 9 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 102100030393 G-patch domain and KOW motifs-containing protein Human genes 0.000 description 1
- BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N Glu-Lys Chemical group NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000560067 HIV-1 group M Species 0.000 description 1
- 101710094396 Hexon protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282418 Hominidae Species 0.000 description 1
- 108010048209 Human Immunodeficiency Virus Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000701149 Human adenovirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 241000701244 Mastadenovirus Species 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001205569 OMG group Species 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 1
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000188845 Porcine adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101710150344 Protein Rev Proteins 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 1
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 101000874347 Streptococcus agalactiae IgA FC receptor Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 241000723873 Tobacco mosaic virus Species 0.000 description 1
- 102100022563 Tubulin polymerization-promoting protein Human genes 0.000 description 1
- 241000710959 Venezuelan equine encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100038611 Vitamin D-binding protein Human genes 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229940027570 adenoviral vector vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108700010877 adenoviridae proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 230000002155 anti-virotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000011225 antiretroviral therapy Methods 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000010364 biochemical engineering Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I calcium;potassium;disodium;hydrogen carbonate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].OC([O-])=O BMLSTPRTEKLIPM-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J calcium;potassium;sodium;2-hydroxypropanoic acid;sodium;tetrachloride Chemical compound [Na].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].CC(O)C(O)=O ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003974 emollient agent Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 239000003979 granulating agent Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000002064 post-exposure prophylaxis Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 239000013639 protein trimer Substances 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 108010043277 recombinant soluble CD4 Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N trappsol cyclo Chemical compound CC(O)COC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)COCC(O)C)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1COCC(C)O ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 108010063191 vitamin D-binding protein-macrophage activating factor Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/08—RNA viruses
- C07K14/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus human T-cell leukaemia-lymphoma virus
- C07K14/155—Lentiviridae, e.g. human immunodeficiency virus [HIV], visna-maedi virus or equine infectious anaemia virus
- C07K14/16—HIV-1 ; HIV-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/08—RNA viruses
- C07K14/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus human T-cell leukaemia-lymphoma virus
- C07K14/155—Lentiviridae, e.g. human immunodeficiency virus [HIV], visna-maedi virus or equine infectious anaemia virus
- C07K14/16—HIV-1 ; HIV-2
- C07K14/162—HIV-1 ; HIV-2 env, e.g. gp160, gp110/120, gp41, V3, peptid T, CD4-Binding site
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/861—Adenoviral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16171—Demonstrated in vivo effect
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Описаны синтетические белки оболочки HIV, векторы и композиции на их основе, а также способы индукции защитного иммунитета к инфекции, вызываемой вирусом иммунодефицита человека (HIV). Вирусные векторы экспрессии, кодирующие синтетические белки оболочки HIV, можно применять в вакцинах для обеспечения улучшенного защитного иммунитета к HIV.
Description
Предпосылки изобретения
Вирус иммунодефицита человека (HIV) поражает миллионы людей во всем мире, и предупреждение HIV с помощью эффективной вакцины по-прежнему имеет первостепенное значение даже в эпоху широкого распространения антиретровирусной терапии. HIV-1 представляет собой наиболее распространенный и патогенный штамм вируса, при этом более 90% случаев HIV/AIDS обусловлены инфицированием HIV-1 группы M. Группа M дополнительно подразделяется на клады или подтипы. В идеале эффективная вакцина будет способна вызывать как сильные клеточные ответы, так и выработку нейтрализующих антител широкого спектра действия, способных нейтрализовать штаммы HIV-1 различных клад.
Высокая генетическая изменчивость HIV-1 делает разработку вакцины против HIV-1 беспрецедентной задачей. С целью улучшения охвата потенциальных T-клеточных эпитопов и улучшения клеточных ответов мозаичные антигены Gag, Pol и Env HIV-1, полученные из белков группового антигена (Gag), полимеразных белков (Pol) и белков оболочки (Env) HIV, были описаны другими авторами и разработаны в попытке обеспечить максимальный охват потенциальных T-клеточных эпитопов (например, Barouch et al., Nat. Med. 2010, 16: 319-323). Мозаичные антигены схожи по длине и доменной структуре со встречающимися в природе антигенами HIV-1 дикого типа.
Например, описанные и применяемые в вакцинах мозаичные антигены HIV включают в себя антигены, описанные в Barouch et al. выше, и WO 2010/059732, как, например, (a) мозаичные антигены Gag, содержащие:
(a)(i) первую последовательность мозаичного Gag (mos1Gag), имеющую аминокислотную последовательность, приведенную в данном документе под SEQ ID NO: 1, и (a)(ii) вторую последовательность мозаичного Gag (mos2Gag), имеющую аминокислотную последовательность, приведенную в данном документе под SEQ ID NO: 2;
(b) мозаичные антигены Pol, содержащие:
(b)(i) первую последовательность мозаичного Pol (mos1Pol), имеющую аминокислотную последовательность, приведенную в данном документе под SEQ ID NO: 3, и (b)(ii) вторую последовательность мозаичного Pol (mos2Pol), имеющую аминокислотную последовательность, приведенную в данном документе под SEQ ID NO: 4; и (c) мозаичные антигены Env, содержащие:
(c)(i) первую последовательность мозаичного Env (mos1Env), имеющую аминокислотную последовательность, приведенную в данном документе под SEQ ID NO: 5, и (c)(ii) вторую последовательность мозаичного Env (mos2Env), имеющую аминокислотную последовательность, приведенную в данном документе под SEQ ID NO: 6.
Последовательности, кодирующие эти антигены, клонировали в векторы, например, такие как рекомбинантные аденовирусные векторы, например, на основе рекомбинантного аденовируса серотипа 26 (rAd26), и эти рекомбинантные векторы ранее применяли в качестве вакцин для формирования иммунных ответов на антигены (см., например, Barouch et al. выше и WO 2010/059732). Например, последовательности мозаичных антигенов mos1Gag и mos1Pol, как правило, объединяют в слитый белок из Gag и Pol (mos1GagPol), и при этом его кодирующую последовательность клонируют в первый вектор на основе Ad26 (rAd26.mos1GagPol); а последовательности антигенов mos2Gag и mos2Pol объединяют в другой слитый белок из Gag и Pol (mos2GagPol), и при этом его кодирующую последовательность клонируют во второй вектор на основе Ad26 (rAd26.mos2GagPol). Конструкции, кодирующие mos1Env и mos2Env, как правило, клонируют в отдельные векторы на основе Ad26 (соответственно, rAd26.mos1Env и rAd26.mos2Env).
Совокупность таких мозаичных антигенов, описанных выше, дает хороший глобальный охват изолятов HIV-1 группы M, где векторы на основе rAd26, кодирующие последовательности 1 мозаичных антигенов (например, rAd26.mos1GagPol и rAd26.mos1Env), предпочтительны для клады B и подтипов CRF01 HIV-1, а векторы на основе rAd26, кодирующие последовательности 2 мозаичных антигенов (например, rAd26.mos2GagPol и rAd26.mos2Env), предпочтительны для штаммов клады C. Мозаичные антигены Gag, Pol и Env HIV-1, экспрессируемые векторами на основе rAd26, можно применять для улучшения как спектра, так и интенсивности антигенспецифических T-лимфоцитарных ответов у макаковрезусов без снижения величины как клеточных, так и гуморальных ответов по сравнению с антигенами HIV-1 с консенсусной или природной последовательностью (Barouch et al. выше и WO 2010/059732).
Однако при дополнительных попытках разработки компонентов вакцины, описанных выше, было обнаружено, что rAd26.mos2Env демонстрирует неоптимальные экспрессию на поверхности клеток и иммунный ответ у отличных от человека приматов и, кроме того, проявляет неожиданную и непредсказуемую неоптимальную генетическую стабильность в ходе процесса изготовления, о которой не сообщалось до настоящего времени, по сравнению с другими векторами на основе rAd26, как, например, rAd26.mos1Env. Таким образом, вакцины, содержащие rAd26.mos2Env, могут обуславливать неоптимальные иммунные ответы на подтипы HIV-1 клады C, поскольку мозаичный антиген mos2Env предпочтителен для штаммов HIV-1 клады C. Соответственно, существует необходимость в альтернативе анти- 1 038974 гену mos2Env в вакцинах против HIV, которую можно применять для индукции улучшенных иммунных ответов на HIV-1 клады C.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится к новым синтетическим белкам оболочки вируса иммунодефицита человека (HIV), которые характеризуются улучшенной экспрессией на поверхности клеток и генетической стабильностью по сравнению с ранее описанным антигеном mos2Env. Настоящее изобретение также относится к композициям и способам применения таких новых синтетических белков оболочки HIV и/или последовательностей, кодирующих их, для индукции иммунных ответов увеличенной интенсивности на HIV-1, в частности HIV-1 клады C, предпочтительно при применении в комбинации с другими антигенами HIV.
В одном общем аспекте настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 8, имеющую одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из (i) I529P (т.е. замены Ile на Pro в положении 529 SEQ ID NO: 8), (ii) K480E (т.е. замены Lys на Glu в положении 480 SEQ ID NO: 8) и (iii) комбинации EK479-480RRRR (т.е. замещения Glu-Lys в положениях 479480 SEQ ID NO: 8 четырьмя последовательными остатками Arg), I529P, A471C (т.е. замены Ala на Cys в положении 471 SEQ ID NO: 8) и T575C (т.е. замены Thr на Cys в положении 575 SEQ ID NO: 8). В одном варианте осуществления синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит сигнальную последовательность, например сигнальную последовательность, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 9-12. В одном варианте осуществления сигнальная последовательность имеет аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 9.
В определенных вариантах осуществления синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит трансмембранный домен, предпочтительно трансмембранный домен, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 13.
В определенных вариантах осуществления синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит фрагмент цитоплазматического домена, предпочтительно фрагмент цитоплазматического домена, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 14 или ее аминокислоты 1-4 (т.е. NRVR). В вариантах осуществления, где синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит трансмембранный домен и фрагмент цитоплазматического домена, предпочтительно, чтобы белок также содержал аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 37, слитую с карбоксильным концом (Cконцом) SEQ ID NO: 8 и аминоконцом (N-концом) трансмембранной области.
В другом варианте осуществления синтетический белок оболочки HIV содержит тримеризационный домен, например тримеризационный домен, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 15 (GCN4) или SEQ ID NO: 16 (домен фолдон). В одном предпочтительном варианте осуществления тримеризационный домен содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 15. Такие варианты осуществления с тримеризационными доменами применимы для растворимых (т.е. не мембраносвязанных) синтетических белков оболочки HIV, в основе которых лежат последовательности эктодоменов, представленные в данном документе, как, например, белков, содержащих аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8, где тримеризационный домен расположен на C-конце синтетического белка оболочки HIV.
В еще нескольких вариантах осуществления синтетический белок оболочки HIV содержит SEQ ID NO: 8 со следующими мутациями: EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C. Введение 6 последовательных аргининовых остатков (в положениях 478 и 481 в нативной последовательности SEQ ID NO: 8 уже находятся остатки Arg) приводит к дополнительной оптимизации участка расщепления фурином, вследствие чего получают улучшенный процессированный (т.е. расщепленный) эктодомен. Три мутации I529P, A471C и T575C известны как мутации SOSIP, из которых две последние мутации приводят к введению возможного дисульфидного мостика между новосозданными цистеиновыми остатками. В целом, эти мутации приводят к образованию растворимого тримеризованного синтетического белка оболочки HIV без необходимости в тримеризационном домене.
В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 или аминокислоты 1-686 SEQ ID NO: 19. Синтетический белок оболочки HIV, кодируемый нуклеиновой кислотой, наиболее предпочтительно содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18 или состоит из нее.
В другом общем аспекте настоящее изобретение относится к вектору, содержащему нуклеиновую кислоту, кодирующую синтетический белок оболочки HIV согласно варианту осуществления настоящего изобретения. В одном варианте осуществления вектор представляет собой вирусный вектор. В предпочтительном варианте осуществления вирусный вектор представляет собой аденовирусный вектор. В одном предпочтительном варианте осуществления аденовирусный вектор представляет собой вектор на основе аденовируса серотипа 26.
Другой общий аспект настоящего изобретения относится к композиции, предпочтительно вакцинной композиции, содержащей иммуногенно эффективное количество вектора согласно варианту осуще- 2 038974 ствления настоящего изобретения и носитель, где нуклеиновая кислота, кодирующая синтетический белок оболочки HIV, функционально связана с последовательностью промотора. В одном варианте осуществления композиция содержит аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18.
В другом общем аспекте настоящее изобретение относится к вакцинной комбинации для индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у субъекта, нуждающегося в этом. Вакцинная комбинация содержит первую композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество вектора, предпочтительно аденовирусного вектора, более предпочтительно вектора на основе аденовируса серотипа 26, кодирующего синтетический белок оболочки HIV, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18, вторую композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество второго вектора, предпочтительно второго аденовирусного вектора, более предпочтительно второго вектора на основе аденовируса серотипа 26, кодирующего антигенный полипептид HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5, и необязательно по меньшей мере одну дополнительную композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество по меньшей мере одного, выбранного из группы, состоящей из вектора, кодирующего антигенный полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-4, 28 и 29, и полипептида, содержащего иммуногенно эффективное количество выделенного антигенного полипептида HIV, в том числе без ограничения полипептида, имеющего остатки 30-708 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 7, или полипептида, имеющего остатки 30-724 SEQ ID NO: 36, где первая композиция, вторая композиция и необязательная дополнительная композиция присутствуют в одной и той же композиции или в одной или нескольких разных композициях.
Еще один общий аспект настоящего изобретения относится к способам индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у субъекта, нуждающегося в этом, включающим введение субъекту композиции или вакцинной комбинации согласно варианту осуществления настоящего изобретения. Настоящее изобретение также относится к способам индукции иммунного ответа на HIV, включающим примирование и усиление иммунного ответа с помощью композиции или вакцинной комбинации согласно варианту осуществления настоящего изобретения.
Еще один дополнительный аспект настоящего изобретения относится к синтетическому белку оболочки HIV, содержащему аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 8, имеющую одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из (i) I529P, (ii) K480E, (iii) комбинации EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C. В одном варианте осуществления синтетический белок оболочки HIV содержит SEQ ID NO: 8 с мутациями EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C. В другом варианте осуществления синтетический белок оболочки HIV содержит остатки 30-704 или 30-711 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 18. В еще одном варианте осуществления синтетический белок оболочки HIV содержит остатки 30-686 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 19.
Другой аспект настоящего изобретения относится к клетке, предпочтительно выделенной клетке, содержащей вектор согласно варианту осуществления настоящего изобретения.
Краткое описание некоторых представлений графических материалов
Вышеизложенное краткое описание, а также нижеследующее подробное описание настоящего изобретения будут более понятны при их рассмотрении в сочетании с прилагаемыми графическими материалами. Следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными вариантами осуществления, показанными на графических материалах.
На графических материалах изображено следующее:
фиг. 1A-1C представляют собой схематические представления структуры белков оболочки HIV; на фиг. 1A показан полноразмерный белок оболочки HIV; на фиг. 1B показана структура растворимого одноцепочечного белка оболочки HIV согласно варианту осуществления настоящего изобретения, в котором трансмембранный домен (TM) замещен тримеризационным доменом GCN4, а участок расщепления фурином подвергнут мутации (sC4); на фиг. 1C показана структура мембраносвязанного белка оболочки HIV согласно варианту осуществления настоящего изобретения, содержащего трансмембранный домен и фрагмент цитоплазматического домена (C4D7);
на фиг. 2 показаны уровни экспрессии растворимого белка оболочки sC1, в основе которого лежит последовательность мозаичного антигена mos2Env с дополнительным C-концевым тримеризационным доменом, и растворимого синтетического белка оболочки HIV (sC4) согласно варианту осуществления настоящего изобретения; экспрессию измеряли с помощью количественного вестерн-блоттинга с применением поликлонального антитела к gp120; плазмиды, кодирующие sC1 или sC4, дважды подвергали транзиентной экспрессии, и каждую трансфекцию дважды количественно оценивали с помощью денситометрии; белок sC1 демонстрировал очень низкие уровни экспрессии по сравнению с синтетическим белком оболочки HIV sC4, который демонстрировал относительно высокие уровни экспрессии;
на фиг. 3A и 3B показано связывание синтетических белков оболочки HIV с моноклональным антителом 17b (mAb17b) в присутствии (светло-серым цветом) и в отсутствие (темно-серым цветом) раство- 3 038974 римого CD4, которое определяли с помощью ELISA-анализа; на фиг. 3A показано связывание sC1; на фиг. 3B показано связывание sC4;
на фиг. 4 показана картина вестерн-блоттинга после нативного электрофореза в полиакриламидном геле белка sC1 и синтетического белка оболочки HIV sC4;
на фиг. 5 показаны относительные уровни экспрессии на поверхности клеток для мембраносвязанных синтетических белков оболочки HIV C1, C1D7, C4 и C4D7, определенные с помощью FACS-анализа клеток, экспрессирующих эти белки, с применением поликлонального антитела к gp120 (GP120) и с помощью связывания с нейтрализующими антителами широкого спектра действия PG9 (PG9) и PG16 (PG16), связывание с которыми зависит от четвертичной структуры и которые преимущественно связываются с правильно свернутым тримером Env;
фиг. 6 представляет собой графическое представление стабильности аденовирусных векторов, содержащих последовательности, кодирующие синтетические белки оболочки HIV по настоящему изобретению, в том числе полноразмерный C4 (FLC4), C4D7 и sC4, после нескольких пассажей вируса; рекомбинантные векторы на основе аденовируса серотипа 26 получали в клетках PER.C6; после первоначальных 3 пассажей для трансфекции и очистки методом бляшкообразования 5 бляшек отбирали и разращивали в течение 10 пассажей в формате T25, в результате чего общее число пассажей вируса (vpn) составляло 13; при этом показана стабильность после vpn 3, 5, 10 и 13, которую определяли с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) кассеты экспрессии трансгена в E1; например, 3/5 означает, что из 5 тестируемых бляшек 3 бляшки были стабильными, и 5/5 означает, что из 5 тестируемых бляшек 5 бляшек были стабильными; и на фиг. 7A и 7B показаны титры вируснейтрализующих антител к псевдотипированным оболочечным вирусным частицам (EVP) HIV-1 в анализе нейтрализации с использованием клеток TZM-b1 у кроликов; в группах, получавших высокую дозу аденовирусного вектора, измеряли log10-преобразованные значения IC50 антител к EVP VSV-G (отрицательный контроль) и MW965.26 (категория 1A, клада C) в недели 1, 8, 14 и 20; каждая точка обозначает log10-преобразованное значение IC50 у отдельного кролика, при этом среднее групповое значение указано горизонтальной линией; HD: наиболее сильное тестируемое разведение (верхняя сплошная линия); LD: наиболее слабое тестируемое разведение (нижняя сплошная линия); LOB: предел фонового уровня, значение 95 процентиля для собранных отрицательных образцов (пунктирная линия); log10-преобразованные значения IC50, превышающие пороговые значения LD или HD, были обозначены на соответствующей линии; для каждого момента времени проводили одностороннее непараметрическое сравнение с контролем с помощью метода Данна для совместного ранжирования; статистически значимые различия указаны на графиках: * = P <0,05, ** = P <0,01 и *** = P <0,001; на фиг. 7A показаны результаты с VSV-G (отрицательный контроль); а на фиг. 7B показаны результаты с MW965.26 (категория 1A, клада C).
Подробное описание изобретения
Различные публикации, статьи и патенты цитируются или описываются в разделе Предпосылки изобретения и во всем описании; при этом каждый из этих литературных источников включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Обсуждение документов, актов, материалов, устройств, изделий и т.п., которое было включено в настоящее описание, предназначено для обеспечения контекста настоящего изобретения. Такое обсуждение не является признанием того, что любые или все из этих материалов являются частью предшествующего уровня техники относительно любых раскрытых или заявленных изобретений.
Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимает средний специалист в области техники, к которой относится настоящее изобретение. В иных случаях определенные термины, используемые в данном документе, имеют значения, изложенные в описании. Все патенты, опубликованные заявки на патент и публикации, цитируемые в данном документе, включены посредством ссылки, как если бы они были полностью изложены в данном документе. Следует отметить, что используемые в данном документе и в прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают ссылку на множественное число, если в контексте явно не указано иное.
Как используется в данном документе, субъект означает любое животное, предпочтительно млекопитающее, наиболее предпочтительно человека, которым будут вводить или вводили вектор, композицию или комбинированную вакцину согласно вариантам осуществления настоящего изобретения. Используемый в данном документе термин млекопитающее охватывает любое млекопитающее. Примеры млекопитающих включают без ограничения коров, лошадей, овец, свиней, кошек, собак, мышей, крыс, кроликов, морских свинок, обезьян, людей и т.д., более предпочтительно человека.
Настоящее изобретение в целом относится к синтетическим белкам оболочки HIV, нуклеиновой кислоте и векторам, кодирующим синтетические белки оболочки HIV, и способам индукции иммунного ответа на HIV с помощью векторов, кодирующих синтетические белки оболочки HIV, или синтетических белков оболочки HIV в отдельности или в комбинации с одним или несколькими дополнительными векторами, кодирующими один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, и/или в комбинации с одним или несколькими дополнительными выделенными антигенными полипептидами
- 4 038974
HIV.
Вирус иммунодефицита человека (HIV) является представителем рода Lentivirinae, который является частью семейства Retroviridae. Две разновидности HIV инфицируют людей HIV-1 и HIV-2. HIV-1 представляет собой наиболее распространенный штамм вируса HIV и, как известно, является более патогенным, чем HIV-2. Используемые в данном документе термины вирус иммунодефицита человека и HIV относятся без ограничения к HIV-1 и HIV-2.
HIV подразделяется на несколько клад с высокой степенью генетической дивергенции. Используемый в данном документе термин клада HIV или подтип HIV относится к родственным вирусам иммунодефицита человека, классифицированным согласно их степени генетического сходства. В настоящее время насчитывается три группы изолятов HIV-1: M, N и O. Группа M (главные штаммы) состоит из по меньшей мере десяти клад от A до J. Группа O (отдаленные штаммы) может состоять из аналогичного числа клад. Группу N представляет новый изолят HIV-1, который не был отнесен ни к одной из групп M или O.
Используемые в данном документе термины антигенный полипептид HIV, антигенный белок HIV и иммуноген HIV относятся к полипептиду, способному индуцировать иммунный ответ, например гуморальный и/или клеточноопосредованный ответ, на HIV у субъекта. Антигенный полипептид может представлять собой белок HIV, его фрагмент или эпитоп или комбинацию нескольких белков HIV или их частей, которые могут индуцировать иммунный ответ или обеспечивать выработку иммунитета, например защитного иммунитета, к HIV у субъекта.
Антигенный полипептид предпочтительно способен порождать в организме хозяина защитный иммунный ответ, например индуцировать иммунный ответ на вирусное заболевание или инфекцию, и/или обеспечивать выработку у субъекта иммунитета к вирусному заболеванию или инфекции (т.е. вакцинировать его), который защищает субъекта от вирусного заболевания или инфекции. Например, антигенный полипептид может содержать белок или его фрагменты из вируса иммунодефицита обезьян (SIV) или HIV, такой как белок gp160 оболочки HIV или SIV, белки матрикса/капсидные белки HIV или SIV и продукты генов gag, pol и env HIV или SIV.
Антигенный полипептид HIV может представлять собой любой антиген HIV-1 или HIV-2 или его фрагмент. Примеры антигенов HIV включают в себя без ограничения продукты генов gag, pol и env, которые кодируют структурные белки и существенно важные ферменты. Продукты генов gag, pol и env синтезируются в виде полипротеинов, которые дополнительно процессируются до нескольких других белковых продуктов. Основной белковый продукт гена gag представляет собой полипротеин gag, являющийся вирусным структурным белком, который дополнительно процессируется до белковых продуктов MA, CA, SP1, NC, SP2 и P6. Ген pol кодирует вирусные ферменты (Pol, полимеразу), и основной белковый продукт дополнительно процессируется до белковых продуктов RT, РНКазы H, IN и PR. Ген env кодирует структурные белки, в частности гликопротеины оболочки вириона. Основной белковый продукт гена env представляет собой gp160, который дополнительно процессируется до gp120 и gp41. Другие примеры антигенов HIV включают в себя белки Tat и Rev, регулирующие экспрессию генов; акцессорные белки Nef, Vpr, Vif и Vpu; капсидные белки, нуклеокапсидные белки и вирусный белок p24.
В определенных вариантах осуществления антигенный полипептид HIV содержит антиген Gag, Env или Pol HIV или любую их антигенную часть или эпитоп или их комбинацию, предпочтительно антиген Gag, Env или Pol HIV-1 или любую их антигенную часть или эпитоп или их комбинацию.
Антигенные полипептиды HIV также могут представлять собой мозаичные антигены HIV. Как используется в данном документе, мозаичный антиген относится к рекомбинантному белку, собранному из фрагментов природных последовательностей. Мозаичные антигены имеют сходство с природными антигенами, но являются оптимизированными с целью максимального увеличения охвата потенциальных T-клеточных эпитопов, обнаруживаемых в природных последовательностях, что улучшает спектр и охват иммунного ответа. Мозаичные антигены HIV для применения в настоящем изобретении предпочтительно представляют собой мозаичные антигены Gag, Pol, и/или Env и более предпочтительно мозаичные антигены Gag, Pol, и/или Env HIV-1. Как используется в данном документе, мозаичный антиген Gag, Pol и/или Env HIV относится, в частности, к мозаичному антигену, содержащему несколько эпитопов, полученных из одной или нескольких последовательностей полипротеинов Gag, Pol и/или Env HIV.
В одном варианте осуществления мозаичный антиген HIV для применения в настоящем изобретении представляет собой мозаичный антиген Gag HIV с эпитопами, полученными из последовательностей продуктов гена gag (примеры представлены под SEQ ID NO: 1, 2); мозаичный антиген Pol HIV с эпитопами, полученными из последовательностей продуктов гена pol (примеры представлены под SEQ ID NO: 3, 4); или мозаичный антиген Env HIV с эпитопами, полученными из последовательностей продуктов гена env (примеры представлены под SEQ ID NO: 5, 6; новые антигены по настоящему изобретению, например, под SEQ ID NO: 8, 17, 18, 19, также могут считаться мозаичными антигенами Env HIV). В определенных вариантах осуществления мозаичный антиген HIV для применения в настоящем изобретении может содержать комбинацию эпитопов, полученных из последовательностей продуктов генов gag, pol и/или env. Иллюстративные и неограничивающие примеры включают в себя мозаичные антигены EnvPol с эпитопами, полученными из последовательностей продуктов генов env и pol; мозаичные антигены
- 5 038974
Gag-Pol с эпитопами, полученными из последовательностей продуктов генов gag и pol; и мозаичные антигены Gag-Env с эпитопами, полученными из последовательностей продуктов генов gag и env. Последовательности продуктов генов gag, pol и env можно получить из одной или нескольких клад.
Примеры мозаичных антигенов Gag, Pol и/или Env HIV, которые можно применять в настоящем изобретении, включают антигены, описанные, например, в US 20120076812; Barouch et al., Nat. Med. 2010, 16:319-323; и Barouch et al., Cell. 155:1-9, 2013, все из которых включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Мозаичные антигены Gag, Pol и/или Env HIV для применения в настоящем изобретении предпочтительно включают в себя без ограничения mos1Gag (SEQ ID NO: 1), mos2Gag (SEQ ID NO: 2), mos1Pol (SEQ ID NO: 3), mos2Pol (SEQ ID NO: 4), mos1Env (SEQ ID NO: 5), mos2Env (SEQ ID NO: 6), mos1GagPol (SEQ ID NO: 28), mos2GagPol (SEQ ID NO: 29) и их комбинации.
Каждый из используемых в данном документе терминов белок оболочки HIV, белок env и Env относится к белку, который экспрессируется в оболочке вириона HIV и обеспечивает нацеливание HIV на плазматическую мембрану клеток, инфицированных HIV, и его прикрепление к ней или его фрагменту или производному, которые могут индуцировать иммунный ответ на HIV или обеспечивать выработку иммунитета к нему у субъекта, нуждающегося в этом. Ген env HIV кодирует белок-предшественник gp160, который подвергается протеолитическому расщеплению на два зрелых гликопротеина оболочки gp120 и gp41. Реакцию расщепления в последовательности, высококонсервативной среди предшественников гликопротеинов оболочки ретровирусов, опосредует протеаза клетки-хозяина фурин. Более конкретно, gp160 тримеризируется до (gp160)3, а затем подвергается расщеплению на два нековалентно связанных gp120 и gp41. Проникновение вируса в клетку затем опосредует тример гетеродимеров gp120/gp41. Gp120 представляет собой рецепторсвязывающий фрагмент и связывается с CD4рецептором на клетке-мишени, которая имеет рецептор, такой как, например, T-хелперная клетка. Gp41, который нековалентно связан с gp120, представляет собой слитый фрагмент и обеспечивает прохождение второй стадии, посредством которой HIV проникает в клетку. Gp41 изначально погружен в оболочку вируса, но когда gp120 связывается с CD4-рецептором, gp120 меняет свою конформацию, что приводит к тому, что gp41 становится доступным и в этом случае может способствовать слиянию с клеткойхозяином. Gp140 представляет собой нерасщепленный эктодомен тримерного gp160, т.е. (gp160)3, который применяли в качестве идентификатора нативного состояния расщепленного шипа вируса.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения белок оболочки HIV может представлять собой белок gp160, gp140, gp120, gp41, их комбинации, продукты слияния, усеченные формы или производные. Например, белок оболочки HIV может содержать белок gp120, нековалентно связанный с белком gp41. Он также может содержать стабилизированный тримерный белок gp140, который может иметь тримеризационный домен, стабилизирующий тримеры gp140, или может быть модифицирован таким образом, чтобы содержать его. Примеры тримеризационных доменов включают без ограничения тримеризационный домен фолдон фибритина T4; суперспиральный тримеризационный домен, полученный из GCN4; и каталитическую субъединицу аспартаттранскарбамоилазы Е. coli в качестве метки тримеризации. Белок оболочки HIV также может представлять собой усеченный белок оболочки HIV, в том числе без ограничения белки оболочки, содержащие C-концевое усечение в эктодомене (т.е. домене, который выступает во внеклеточное пространство), усечение в gp41, такое как усечение в трансмембранном домене gp41 или усечение в цитоплазматическом домене gp41. Белок оболочки HIV может дополнительно представлять собой производное встречающегося в природе белка оболочки HIV, имеющее мутации в последовательности, например, в участках расщепления фурином, и/или так называемые мутации SOSIP.
Белок оболочки HIV предпочтительно представляет собой синтетический белок оболочки HIV. Используемый в данном документе термин синтетический белок оболочки HIV относится к не встречающемуся в природе белку оболочки HIV, который оптимизирован для индукции иммунного ответа на один или несколько встречающихся в природе штаммов HIV или обеспечения выработки иммунитета к ним у субъекта, нуждающегося в этом. Мозаичные белки Env HIV являются примерами синтетических белков Env HIV, и в настоящем изобретении представлены новые синтетические антигены Env HIV, например, содержащие SEQ ID NO: 8, 17, 18 или 19.
Синтетические белки оболочки HIV и последовательности, кодирующие их.
Варианты осуществления настоящего изобретения относятся к новым синтетическим белкам оболочки HIV и молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим их.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к синтетическому белку оболочки HIV, содержащему аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 8, имеющую одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из (i) I529P, (ii) K480E и (iii) комбинации EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C. SEQ ID NO: 8 содержит синтетический зрелый gp120 и синтетический усеченный gp41 без трансмембранной области, а также без цитоплазматического домена. SEQ ID NO: 8 представляет собой не встречающуюся в природе последовательность, состоящую из химерного продукта сочетания последовательностей мозаичного антигена mos2Env (SEQ ID NO: 6) и последовательностей другого белка оболочки HIV.
Последовательность нового синтетического антигена Env, содержащая SEQ ID NO: 8, оптимизиро- 6 038974 вана для обеспечения широкого охвата и усиления T-клеточного ответа на HIV клады C (по сравнению с антигеном mos2Env (SEQ ID NO: 6)). В определенных вариантах осуществления дополнительные аминокислоты могут быть добавлены в SEQ ID NO: 8 или один из ее вариантов, определенных в данном документе.
В определенных вариантах осуществления синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит сигнальную последовательность. Синтетический белок оболочки HIV синтезируется с сигнальной последовательностью, которая отщепляется от растущей полипептидной цепи в ходе ее транспорта в просвет эндоплазматического ретикулума (ER). В принципе можно применять любую известную сигнальную последовательность. Предпочтительно применяют сигнальную последовательность Env HIV или ее вариант. Из уровня техники известно применение различных сигнальных последовательностей для белков Env HIV (см., например, WO 2014/107744). В определенных вариантах осуществления сигнальная последовательность содержит SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 12. В одном предпочтительном варианте осуществления сигнальная последовательность содержит SEQ ID NO: 9.
В определенных вариантах осуществления синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит трансмембранный домен. Трансмембранный домен заякоривает синтетический белок оболочки HIV на мембране ER и способствует мембранной сборке и функционированию оболочки HIV. Трансмембранный домен предпочтительно содержит SEQ ID NO: 13.
В другом варианте осуществления синтетический белок оболочки HIV содержит gp41, имеющий усеченный цитоплазматический домен. Gp41 имеет весьма длинный цитоплазматический домен на своем карбоксильном конце, как правило, из приблизительно 150 аминокислот (Edwards et al., J. Virology, 2002, 76:2683-2691). Сообщалось, что усечение цитоплазматического домена индуцирует переход консервативных областей в эктодомене белка Env HIV-1 в состояние доступности (там же). Размер усеченного цитоплазматического домена в синтетическом белке оболочки HIV по настоящему изобретению может находиться в диапазоне от одной до приблизительно 140 аминокислот, как, например, составлять 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130 или 140 аминокислот полноразмерного цитоплазматического домена. В определенных вариантах осуществления усеченный цитоплазматический домен получают из аминокислот 704-862 SEQ ID NO: 17 (т.е. из цитоплазматического домена молекулы C4 по настоящему изобретению) путем ее усечения после указанной аминокислоты вплоть до Cконца. В предпочтительном варианте осуществления синтетический белок оболочки HIV содержит усеченный цитоплазматический домен, имеющий 1-10 аминокислотных остатков, более предпочтительно 48 аминокислотных остатков и наиболее предпочтительно 7 аминокислотных остатков цитоплазматического домена gp41 HIV. Цитоплазматический домен или его фрагмент в синтетическом белке оболочки HIV расположен в направлении C-конца от внеклеточного домена (эктодомена), и в случае, если синтетический белок оболочки HIV также содержит трансмембранный домен, то цитоплазматический домен или его фрагмент расположен в направлении C-конца от трансмембранного домена. См., например, фиг. 1A и 1C. В конкретном варианте осуществления синтетический белок оболочки HIV содержит gp41 с усеченным цитоплазматическим доменом, имеющим аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 14 или ее фрагмент, как, например, ее остатки 1-4 (т.е. NRVR). Были описаны и могут применяться другие усеченные цитоплазматические домены (например, Schiernle et al., PNAS 1997; Abrahamyan et al., J. Virol. 2005).
В вариантах осуществления, где синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит трансмембранный домен и фрагмент цитоплазматического домена, предпочтительно, чтобы белок также содержал аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 37, которая содержит остатки 655-682 SEQ ID NO: 18, где аминокислотная последовательность под SEQ ID NO: 37 слита с C-концом SEQ ID NO: 8 и N-концом трансмембранного домена.
В особенно предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит трансмембранный домен, как, например, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 13, и усеченный цитоплазматический домен или фрагмент цитоплазматического домена, как, например, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 14 или остатки 1-4 SEQ ID NO: 14 (т.е. NRVR). Синтетический белок оболочки HIV наиболее предпочтительно содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18 с сигнальной последовательностью (т.е. аминокислотными остатками 1-29 SEQ ID NO: 18) или без нее или состоит из нее.
В другом варианте осуществления синтетический белок оболочки HIV содержит тримеризационный домен, который замещает трансмембранную область Env. Тримеризационный домен увеличивает стабильность тримерной структуры Env. Синтетический белок оболочки HIV предпочтительно содержит полипептид gp140, который модифицирован таким образом, чтобы содержать тримеризационный домен, стабилизирующий тримеры gp140. Примеры тримеризационных доменов включают без ограничения тримеризационный домен фолдон фибритина T4, как, например, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 16; суперспиральный тримеризационный домен, полученный из GCN4, как, например, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 15; каталитическую
- 7 038974 субъединицу аспартаттранскарбамоилазы Е. coli в качестве метки тримеризации или тримеризационные мотивы матрилина. В случае присутствия тримеризационный домен, как правило, расположен в направлении C-конца от внеклеточного домена (см. фиг. 1B). В определенных предпочтительных вариантах осуществления, где синтетический белок оболочки HIV содержит тримеризационный домен, синтетический белок оболочки HIV содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19 с сигнальной последовательностью (т.е. аминокислотными остатками 1-29 SEQ ID NO: 19) или без нее. Эти варианты осуществления с тримеризационными доменами применимы главным образом для растворимых вариантов эктодоменов синтетического белка оболочки HIV. В определенных вариантах осуществления таких растворимых вариантов по настоящему изобретению участок расщепления фурином можно подвергать мутации (например, мутации по типу замены Lys на Glu в положении 480 в SEQ ID NO: 8) для инактивации этого участка расщепления, вследствие чего белок становится одноцепочечным; что обеспечивает хорошее объединение с тримеризационным доменом, в особенности с тримеризационным доменом GCN4 под SEQ ID NO: 19.
Альтернативные версии таких растворимых вариантов эктодоменов синтетического белка оболочки HIV без применения тримеризационных доменов также являются вариантами осуществления настоящего изобретения, и их можно получить из SEQ ID NO: 8 путем комбинирования мутаций, которые оптимизируют участок расщепления фурином (путем замещения дипептида Gly-Lys в положениях 479-480 четырьмя остатками Arg), а также так называемых мутаций SOSIP (мутации 1>Р в положении 529 и введения дисульфидного мостика между положениями 471 и 575 путем замещения каждого из соответствующих Ala и Thr в этих положениях в SEQ ID NO: 8 остатком Cys). С помощью этого получают белок, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 со следующей комбинацией мутаций: EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C.
Одна возможная модификация для дополнительного увеличения содержания тримеров в синтетическом белке оболочки HIV по настоящему изобретению (содержащем SEQ ID NO: 8) представляет собой модификацию по типу замены Ile на Pro в положении 529. Это может быть эффективным как для растворимых, так и для мембраносвязанных вариантов.
Векторы.
Другой общий аспект настоящего изобретения относится к векторам, содержащим нуклеиновую кислоту, кодирующую синтетический белок оболочки HIV. Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения векторы могут содержать любой из синтетических белков оболочки HIV, описанных в данном документе. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения вектор содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 19 и более предпочтительно SEQ ID NO: 18.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения нуклеиновая кислота, кодирующая синтетический белок оболочки HIV, функционально связана с промотором, что означает, что нуклеиновая кислота находится под контролем промотора. Промотор может представлять собой гомологичный промотор (т.е. полученный из того же генетического источника, что и вектор) или гетерологичный промотор (т.е. полученный из другого вектора или генетического источника). Примеры подходящих промоторов включают промотор цитомегаловируса (CMV) и промотор вируса саркомы Рауса (RSV). Промотор предпочтительно расположен выше нуклеиновой кислоты в кассете экспрессии. Иллюстративная последовательность промотора CMV, которая может быть функционально связана с нуклеиновой кислотой, кодирующей синтетический белок оболочки HIV, показана под SEQ ID NO: 24.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения вектор может представлять собой вектор экспрессии. Векторы экспрессии включают в себя без ограничения векторы для экспрессии рекомбинантного белка и вектор для доставки нуклеиновой кислоты в организм субъекта для экспрессии в ткани субъекта, как, например, вирусный вектор. Примеры вирусных векторов, подходящих для применения в настоящем изобретении, включают без ограничения аденовирусные векторы, векторы на основе аденоассоциированного вируса, поксвирусные векторы, векторы на основе MVA, энтеровирусные векторы, векторы на основе вируса венесуэльского энцефалита лошадей, векторы на основе вируса леса Семлики, векторы на основе вируса табачной мозаики, лентивирусные векторы и т.д. Вектор также может представлять собой невирусный вектор. Примеры невирусных векторов включают без ограничения плазмиды, искусственные бактериальные хромосомы, искусственные хромосомы дрожжей, бактериофаги и т.д.
В определенных вариантах осуществления настоящего изобретения вектор представляет собой аденовирусный вектор. Аденовирус согласно настоящему изобретению принадлежит к семейству Adenoviridae и предпочтительно представляет собой аденовирус, принадлежащий к роду Mastadenovirus. Он может представлять собой аденовирус человека, а также аденовирус, который инфицирует другие виды, в том числе без ограничения аденовирус крупного рогатого скота (например, аденовирус крупного рогатого скота 3, BAdV3), аденовирус собак (например, CAdV2), аденовирус свиней (например, PAdV3 или 5) или аденовирус обезьян (который включает аденовирус нечеловекообразных обезьян и аденовирус человекообразных обезьян, как, например, аденовирус шимпанзе или аденовирус горилл). Аденовирус предпочтительно представляет собой аденовирус человека (HAdV или AdHu) или аденовирус обезьян, как,
- 8 038974 например, аденовирус шимпанзе или горилл (ChAd, AdCh или SAdV). В настоящем изобретении подразумевается аденовирус человека, если упоминается Ad без указания вида, например, краткое обозначение
Ad26 означает то же, что и HadV26, а именно аденовирус человека серотипа 26. Также используемое в данном документе обозначение rAd означает рекомбинантный аденовирус, например, rAd26 относится к рекомбинантному аденовирусу человека серотипа 26.
Наиболее углубленные исследования были проведены с применением аденовирусов человека, и аденовирусы человека являются предпочтительными согласно определенным аспектам настоящего изобретения. В определенных предпочтительных вариантах осуществления в основе рекомбинантного аденовируса согласно настоящему изобретению лежит аденовирус человека. В предпочтительных вариантах осуществления в основе рекомбинантного аденовируса лежит аденовирус человека серотипа 5, 11, 26, 34, 35, 48, 49, 50, 52 и т.д. Согласно особенно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения аденовирус представляет собой аденовирус человека серотипа 26. Преимуществом данных серотипов является низкое доминирование серотипа и/или низкие титры предсуществующих нейтрализующих антител в популяции человека и опыт применения у субъектов-людей в клинических испытаниях.
Обычно аденовирусы обезьян также характеризуются низким доминированием серотипа и/или низкими титрами предсуществующих нейтрализующих антител в популяции человека, при этом было опубликовано значительное количество работ по применению векторов на основе аденовируса шимпанзе (например, US 6083716; WO 2005/071093; WO 2010/08 6189; WO 2010085984; Farina et al., 2001, J. Virol. 75: 11603-13 [13]; Cohen et al., 2002, J. Gen. Virol. 83: 151-55 [69]; Kobinger et al., 2006, Virology 346: 394-401 [70]; Tatsis et al., 2007, Molecular Therapy 15: 608-17 [71]; см. также обзорную публикацию Bangari and Mittal, 2006, Vaccine 24: 849-62 [72]; и обзорную публикацию Lasaro and Ertl, 2009, Mol Ther 17: 1333-39 [73]). Следовательно, в других вариантах осуществления в основе рекомбинантного аденовируса согласно настоящему изобретению лежит аденовирус обезьян, например, аденовирус шимпанзе. В определенных вариантах осуществления в основе рекомбинантного аденовируса лежит аденовирус обезьян типа 1, 7, 8, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27.1, 28.1, 29, 30, 31.1, 32, 33, 34, 35.1, 36, 37.2, 39, 40.1, 41.1, 42.1, 43, 44, 45, 46, 48, 49, 50 или SA7P.
Аденовирусный вектор предпочтительно представляет собой дефектный по репликации рекомбинантный вирусный вектор, такой как rAd26, rAd35, rAd48, rAd5HVR48 и т.д.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения аденовирусные векторы содержат капсидные белки из редких серотипов, в том числе Ad26. В типичном варианте осуществления вектор представляет собой вирус rAd26. Капсидный белок аденовируса относится к белку в капсиде аденовируса (например, векторы Ad26, Ad35, rAd48, rAd5HVR48), который участвует в определении серотипа и/или тропизма конкретного аденовируса. Капсидные белки аденовирусов, как правило, включают в себя белки файбер, пентон и/или гексон. Как используется в данном документе, капсидный белок конкретного аденовируса, как, например, капсидный белок Ad26, может представлять собой, например, химерный капсидный белок, который содержит по меньшей мере часть капсидного белка Ad26. В определенных вариантах осуществления капсидный белок представляет собой целый капсидный белок Ad26. В определенных вариантах осуществления гексон, пентон и файбер относятся к Ad26.
Среднему специалисту в данной области будет понятно, что элементы, полученные из нескольких серотипов, можно объединять в одном рекомбинантном аденовирусном векторе. Таким образом можно получить химерный аденовирус, в котором сочетаются требуемые свойства от различных серотипов. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления в химерном аденовирусе по настоящему изобретению может сочетаться отсутствие предсуществующего иммунитета от первого серотипа с такими характеристиками, как термостабильность, сборка, заякоривание, выход при получении, перенаправленная или улучшенная инфекционность, стабильность ДНК в клетке-мишени и т.п.
В определенных вариантах осуществления рекомбинантный аденовирусный вектор, применимый в настоящем изобретении, получен главным образом или полностью из Ad26 (т.е. вектор представляет собой rAd26). В некоторых вариантах осуществления аденовирус является дефектным по репликации, например, ввиду того, что он содержит делецию в области E1 генома. Для аденовирусов, получаемых из аденовируса, не принадлежащего к группе C, такого как Ad26 или Ad35, обычной практикой является замена кодирующей последовательности E4-orf6 аденовируса на E4-orf6 аденовируса характерной для человека подгруппы C, такого как Ad5. Это обеспечивает возможность размножения таких аденовирусов в хорошо известных дополняющих линиях клеток, которые экспрессируют гены E1 Ad5, таких как, например, клетки 293, клетки PER.C6 и т.п. (см., например, Havenga, et al., 2006, J. Gen. Virol. 87: 2135-43; WO 03/104467). Однако такие аденовирусы не смогут реплицироваться в недополняющих клетках, которые не экспрессируют гены E1 Ad5.
Получение рекомбинантных аденовирусных векторов хорошо известно из уровня техники. Получение векторов на основе rAd26 описано, например, в WO 2007/104792 и в Abbink et al., (2007) Virol. 81(9): 4654-63. Иллюстративные последовательности генома Ad26 находятся в GenBank под номером доступа EF 153474 и под SEQ ID NO: 1 в WO 2007/104792. Примеры векторов, применимых в настоящем изобретении, включают, например, векторы, описанные в WO 2012/082918, раскрытие которого включено в
- 9 038974 данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Как правило, вектор, применимый в настоящем изобретении, получают с применением нуклеиновой кислоты, содержащей целый геном рекомбинантного аденовируса (например, плазмиды, космиды или бакуловирусного вектора). Таким образом, в настоящем изобретении также представлены выделенные молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют аденовирусные векторы по настоящему изобретению. Молекулы нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению могут быть в форме РНК или в форме ДНК, полученной путем клонирования или полученной синтетическим путем. ДНК может быть двухнитевой или однонитевой.
Аденовирусные векторы, применимые в настоящем изобретении, как правило, являются дефектными по репликации. В этих вариантах осуществления вирус делают дефектным по репликации путем делеции или инактивации областей, критически важных для репликации вируса, таких как область E1. Области могут быть в значительной степени подвергнуты делеции или инактивации, например, посредством вставки гена, представляющего интерес, такого как ген, кодирующий синтетический белок оболочки HIV (обычно связанный с промотором), или ген, кодирующий антигенный полипептид HIV (обычно связанный с промотором), в данную область. В некоторых вариантах осуществления векторы по настоящему изобретению могут содержать делеции в других областях, таких как области E2, E3 или E4, или вставки гетерологичных генов, связанных с промотором, в одной или нескольких из этих областей. В случае аденовирусов с мутацией в E2 или E4 для получения рекомбинантных аденовирусов обычно применяют линии клеток, дополняющие E2 и/или E4. Мутации в области E3 аденовируса не обязательно должны дополняться линией клеток, поскольку E3 не требуется для репликации.
Пакующую линию клеток, как правило, применяют для получения достаточных количеств аденовирусных векторов для применения в настоящем изобретении. Пакующая клетка представляет собой клетку, которая содержит те гены, которые были подвергнуты делеции или инактивации в дефектном по репликации векторе, что, тем самым, позволяет вирусу реплицироваться в клетке. Подходящие пакующие линии клеток для аденовирусов с делецией в области E1 включают в себя, например, PER.C6, 911, 293 и A549-E1.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения и как отмечалось выше, любой из синтетических белков оболочки HIV, описанных в данном документе, может экспрессироваться в векторах по настоящему изобретению. Ввиду вырожденности генетического кода специалисту в данной области хорошо известно, что можно сконструировать несколько последовательностей нуклеиновой кислоты, которые кодируют один и тот же белок, согласно способам, полностью соответствующим установленной практике в данной области. Нуклеиновую кислоту, кодирующую синтетический белок оболочки HIV, можно необязательно подвергнуть оптимизации кодонов для обеспечения надлежащей экспрессии в организме обрабатываемого хозяина (например, человека). Оптимизация кодонов представляет собой технологию, широко применяемую в данной области техники. Некоторые неограничивающие примеры последовательностей, кодирующих синтетический белок оболочки HIV по настоящему изобретению, представлены под SEQ ID NO: 25, 26 и 27. Как правило, нуклеиновую кислоту, кодирующую синтетический белок оболочки HIV, клонируют в область E1 и/или E3 генома аденовируса.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения вектор представляет собой аденовирусный вектор и более предпочтительно вектор на основе rAd26, наиболее предпочтительно вектор на основе rAd26, по меньшей мере, с делецией в области E1 генома аденовируса, например, такой как описанный в Abbink, J. Virol., 2007. 81(9): p. 4654-63, которая включена в данный документ посредством ссылки.
В настоящем изобретении также представлены клетки, предпочтительно выделенные клетки, содержащие любой из векторов, описанных в данном документе. Клетки можно применять для получения рекомбинантного белка или для получения вирусных частиц.
Таким образом, варианты осуществления настоящего изобретения также относятся к способу получения синтетического антигенного полипептида HIV. Способ включает осуществление трансфекции клетки-хозяина вектором экспрессии, содержащим нуклеиновую кислоту, которая кодирует синтетический антигенный полипептид HIV, функционально связанную с промотором, выращивание трансфицированной клетки в условиях, подходящих для экспрессии синтетического антигенного полипептида HIV, и выделение синтетического антигенного полипептида HIV из клетки.
Синтетический антигенный полипептид HIV можно выделять или собирать из клетки с помощью любого известного из уровня техники способа, в том числе аффинной хроматографии и т.д. Методики, применяемые для экспрессии рекомбинантного белка, будут хорошо известны среднему специалисту в данной области в свете настоящего раскрытия.
Настоящее изобретение также включает способ получения вектора, кодирующего синтетический антигенный полипептид HIV по настоящему изобретению, при этом способ включает культивирование клетки, содержащей вектор, с размножением и увеличением числа копий вектора в ходе указанного культивирования, и выделение вектора, кодирующего синтетический антигенный полипептид HIV по настоящему изобретению, из культуры клеток, например из клеток, из культуральной среды или их обоих. Вектор можно дополнительно очищать согласно способам, известным из уровня техники.
- 10 038974
В определенных вариантах осуществления в настоящем изобретении представлен вектор согласно варианту осуществления настоящего изобретения, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую синтетический антигенный полипептид HIV, и в определенных иллюстративных вариантах осуществления нуклеиновая кислота имеет нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
SEQ ID NO: 25, 26 и 27.
Композиции.
В другом общем аспекте настоящее изобретение относится к композиции, содержащей вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую синтетический белок оболочки HIV, и носитель. Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения любой из векторов, описанных в данном документе, может быть включен в композицию. Вектор предпочтительно представляет собой вирусный вектор, более предпочтительно аденовирусный вектор и еще более предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26. В предпочтительном варианте осуществления композиция содержит аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 19 и более предпочтительно аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18.
В одном аспекте в настоящем изобретении представлена комбинированная вакцина, содержащая один или несколько векторов вместе, содержащих последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие (i) синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 (например, SEQ ID NO: 18 или 19), и (ii) второй белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5. Каждый из векторов может находиться в отдельной композиции, или они могут быть объединены в одну композицию. Предполагается, что обе нуклеиновые кислоты в векторе(векторах) будут вводить одному субъекту, что будет приводить в результате к иммунному ответу на HIV более широкого спектра, чем иммунный ответ, который получили бы при введении любого вектора в отдельности. Обе последовательности нуклеиновой кислоты также могут находиться в одном отдельном векторе.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения композиция содержит иммуногенно эффективное количество вектора, такого как вирусный вектор. Как используется в данном документе, иммуногенно эффективное количество или иммунологически эффективное количество означает количество композиции, достаточное для индукции требуемого иммунного эффекта или иммунного ответа у субъекта, нуждающегося в этом. В одном варианте осуществления иммуногенно эффективное количество означает количество, достаточное для индукции иммунного ответа у субъекта, нуждающегося в этом. В другом варианте осуществления иммуногенно эффективное количество означает количество, достаточное для обеспечения выработки иммунитета у субъекта, нуждающегося в этом, например обеспечения защитного эффекта против заболевания, такого как вирусная инфекция. Иммуногенно эффективное количество может варьироваться в зависимости от ряда факторов, таких как физическое состояние субъекта, возраст, вес, состояние здоровья и т.д.; конкретное применение, будь-то индукция иммунного ответа или обеспечение защитного иммунитета; конкретный вводимый рекомбинантный вектор; иммуноген или антигенный полипептид, кодируемый вводимым рекомбинантным вектором; конкретный вводимый антигенный полипептид и конкретное заболевание, например вирусная инфекция, против которой требуется выработка иммунитета. Средний специалист в данной области может с легкостью определить иммуногенно эффективное количество в свете настоящего раскрытия.
В качестве общего указания иммуногенно эффективное количество при использовании в отношении рекомбинантного вирусного вектора, такого как аденовирусный вектор, может находиться в диапазоне от приблизительно 108 вирусных частиц до приблизительно 1012 вирусных частиц, например составлять 108, 109, 1010, 1011 или 1012 вирусных частиц. Иммуногенно эффективное количество можно вводить в одной композиции или в нескольких композициях, как, например, в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 композициях (например, таблетках, капсулах или инъекционных препаратах), при этом введение нескольких капсул или инъекций в совокупности обеспечивает для субъекта иммуногенно эффективное количество. В большинстве случаев при использовании в отношении полипептида, такого как выделенный антигенный полипептид, иммуногенно эффективное количество может находиться в диапазоне, например, от приблизительно 0,3 до приблизительно 3000 мкг, например 1-1000 мкг, например 10-500 мкг, например, составлять приблизительно 10, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450 или 500 мкг. В качестве неограничивающего примера можно комбинировать введение вектора, кодирующего синтетический антиген Env HIV по настоящему изобретению (имеющий SEQ ID NO: 8), с введением полипептида Env, например, 250 мкг тримерного белка Env HIV клады C, имеющего аминокислоты 30-708 SEQ ID NO: 7. Также возможно вводить субъекту иммуногенно эффективное количество с последующим введением тому же субъекту другой дозы в иммуногенно эффективном количестве по так называемой схеме праймбуст. Данная общая концепция схемы прайм-буст хорошо известна специалисту в области вакцинологии. При необходимости в схему можно необязательно добавлять дополнительные введения бустерных доз.
Композиции по настоящему изобретению дополнительно содержат носитель. Носитель может включать в себя один или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, таких как связывающие вещества, разрыхлители, вещества, способствующие набуханию, суспендирующие средст- 11 038974 ва, эмульгирующие средства, смачивающие средства, смазывающие вещества, ароматизаторы, подсластители, консерванты, красители, солюбилизаторы и покрытия. Конкретная природа носителя или другого материала может зависеть от пути введения, например, внутримышечного, подкожного, перорального, внутривенного, чрескожного, чресслизистого (например, в кишечнике), интраназального или внутрибрюшинного путей. В случае жидких инъекционных препаратов, например суспензий и растворов, подходящие носители и добавки включают в себя воду, гликоли, масла, спирты, консерванты, красящие средства и т.п. В случае твердых препаратов для перорального введения, например порошков, капсул, капсуловидных таблеток, желатиновых капсул и таблеток, подходящие носители и добавки включают в себя разновидности крахмала, сахара, разбавители, гранулирующие средства, смазывающие вещества, связывающие вещества, разрыхлители и т.п. В случае назальных спреев/смесей для ингаляции водный раствор/суспензия может содержать воду, гликоли, масла, смягчающие вещества, стабилизаторы, смачивающие средства, консерванты, душистые вещества, вкусоароматические добавки и т.п. в качестве подходящих носителей и добавок.
Композиции по настоящему изобретению можно составлять в любой форме, подходящей для введения субъекту, для облегчения введения и улучшения эффективности, в том числе без ограничения в форме для перорального (энтерального) введения и парентеральных инъекций. Парентеральные инъекции включают внутривенную инъекцию или инфузию, внутриартериальную инъекцию, подкожную инъекцию, внутримышечную инъекцию и внутрисуставную инъекцию. Композиции по настоящему изобретению также можно составлять для других путей введения, в том числе для чресслизистого, глазного, ректального введения, введения посредством имплантата длительного действия, сублингвального введения, подъязычного введения, введения через слизистую оболочку полости рта в обход портального кровообращения, ингаляционного или интраназального введения.
Согласно определенным вариантам осуществления настоящего изобретения композиция содержит иммуногенно эффективное количество очищенного или частично очищенного аденовирусного вектора, такого как вектор на основе аденовируса серотипа 26, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую синтетический белок оболочки HIV по настоящему изобретению. Указанные композиции можно составлять в виде вакцины (также называемой в данном документе иммуногенной композицией) согласно способам, хорошо известным из уровня техники.
Композиции по настоящему изобретению могут необязательно дополнительно содержать адъювант для усиления иммунных ответов. Термины адъювант и иммуностимулятор используются в данном документе взаимозаменяемо и их определяют как одно или несколько веществ, вызывающих стимуляцию иммунной системы. В данном контексте адъювант применяют для усиления иммунного ответа на векторы, кодирующие синтетические белки оболочки HIV по настоящему изобретению и/или антигенные полипептиды HIV, применяемые в комбинации с векторами, кодирующими синтетические белки оболочки HIV по настоящему изобретению.
Адъюванты, подходящие для применения в настоящем изобретении, должны быть потенциально безопасными, хорошо переносимыми и эффективными у людей, такими как, например, QS-21, Detox-PC, MPL-SE, MoGM-CSF, TiterMax-G, CRL-1005, GERBU, TERamide, PSC97B, Adjumer, PG-026, GSK-I, GcMAF, B-алетин, MPC-026, Adjuvax, CpG ODN, бетафектин, соли алюминия (например, AdjuPhos), Adjuplex и MF59. Оптимальные доли каждого компонента в составе можно определить с помощью методик, хорошо известных специалистам в данной области в свете настоящего раскрытия.
В предпочтительном варианте осуществления адъювант представляет собой соль алюминия, такую как AdjuPhos.
Получение и применение иммуногенных композиций хорошо известно средним специалистам в данной области. Жидкие фармацевтические композиции обычно содержат жидкий носитель, такой как вода, вазелин, масла животного или растительного происхождения, минеральное масло или синтетическое масло. Также могут быть включены физиологический солевой раствор, раствор декстрозы или другого сахарида или гликоли, такие как этиленгликоль, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль.
Например, рекомбинантный аденовирусный вектор можно хранить в буфере, который также применяют для международного стандарта аденовируса (Hoganson et al., 2002, Bioprocessing J. 1: 43-8): 20 мМ Tris с pH 8, 25 мМ NaCl, 2,5% глицерин. Другой применимый буфер для составления аденовируса, подходящий для введения людям, представляет собой 20 мМ Tris, 2 мМ MgCl2, 25 мМ NaCl, 10% вес./об., сахарозы, 0,02% вес./об., полисорбата-80. Другой буфер для составления, который подходит для рекомбинантного аденовируса, содержит 10-25 мМ цитратного буфера с pH 5,9-6,2, 4-6% (вес./вес.) гидроксипропил- β-циклодекстрина (HBCD), 70-100 мМ NaCl, 0,018-0,035% (вес./вес.) полисорбата-80 и необязательно 0,3-0,45% (вес./вес.) этанола. Безусловно, можно применять множество других буферов, при этом известны некоторые примеры подходящих составов для хранения и для фармацевтического введения очищенных векторов.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения композицию по настоящему изобретению можно применять вместе с одним или несколькими дополнительными векторами, кодирующими один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, и/или одним или несколькими выделенными антигенными полипептидами HIV. Дополнительные векторы и/или антигенные полипептиды
- 12 038974
HIV могут находиться в той же композиции, содержащей синтетический белок Env HIV по настоящему изобретению. Они также могут находиться в одной или нескольких других композициях, которые можно применять вместе с композицией, содержащей синтетический белок Env HIV no настоящему изобретению, в виде вакцинной комбинации. Один или несколько дополнительных векторов предпочтительно представляют собой вирусные векторы, такие как аденовирусные векторы, и наиболее предпочтительно представляют собой векторы на основе аденовируса серотипа 26. Один или несколько дополнительных векторов могут кодировать любой антигенный полипептид HIV, известный специалистам в данной области в свете настоящего раскрытия.
В одном варианте осуществления композиция или вакцинная комбинация дополнительно содержит второй аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий антигенный полипептид HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5. Преимуществом таких вариантов осуществления является увеличенный спектр иммунного ответа (охватывающий штаммы из клад B и C).
В другом варианте осуществления композиция или вакцинная комбинация по настоящему изобретению дополнительно содержит аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий антигенный полипептид HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28 (mos1GagPol).
В другом варианте осуществления композиция или вакцинная комбинация по настоящему изобретению дополнительно содержит аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий антигенный полипептид HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29 (mos2GagPol).
В конкретном варианте осуществления композиция или вакцинная комбинация по настоящему изобретению дополнительно содержит второй аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий антигенный полипептид HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5, и один или несколько дополнительных аденовирусных векторов, предпочтительно векторов на основе аденовируса серотипа 26, кодирующих один или несколько антигенных полипептидов HIV, содержащих аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 28 или SEQ ID NO: 29. Например, композиция или вакцинная комбинация согласно варианту осуществления настоящего изобретения может содержать четыре аденовирусных вектора, предпочтительно векторы на основе аденовируса серотипа 26, при этом первый вектор кодирует синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 (например, SEQ ID NO: 18); второй вектор кодирует антигенный полипептид HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5; третий вектор кодирует синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28; и четвертый вектор кодирует синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29.
В некоторых вариантах осуществления композиция или вакцинная комбинация дополнительно содержит один или несколько выделенных антигенных полипептидов HIV. В композицию или вакцинную комбинацию по настоящему изобретению можно дополнительно включать любой антигенный полипептид HIV, известный специалистам в данной области в свете настоящего раскрытия, в том числе без ограничения белок оболочки HIV (например, gp160, gp140, gp120 или gp41), предпочтительно стабилизированный тримерный белок gp140, такой как стабилизированный белок gp140 из клады C или клады A. В предпочтительном варианте осуществления выделенный антигенный полипептид HIV представляет собой стабилизированный тримерный белок gp140 HIV клады C, как, например, содержащий остатки 30708 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 7 (остатки 1-29 SEQ ID NO: 7 находятся в сигнальной последовательности). Альтернативный или дополнительный полипептид Env HIV, который можно применять в дополнение к белку gp140 из клады C или в отдельности, представляет собой мозаичный тримерный белок Env, например, имеющий аминокислотную последовательность, раскрытую аминокислотами 30-724 под SEQ ID NO: 36 (соответствующую SEQ ID NO: 2 из WO 2014/107744, остатки 1-29 SEQ ID NO: 36 находятся в сигнальной последовательности).
Согласно конкретному варианту осуществления настоящего изобретения антигенный белок HIV может представлять собой синтетический белок оболочки HIV по настоящему изобретению. Таким образом, синтетический белок оболочки по настоящему изобретению можно применять в выделенной и/или очищенной форме для индукции иммунного ответа или обеспечения защитного иммунитета и т.д. против HIV у субъекта, нуждающегося в этом. Любой из описанных в данном документе синтетических белков оболочки, содержащих аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8, можно применять в качестве антигенного белка HIV в выделенной и/или очищенной форме. В предпочтительном варианте осуществления в случае применения в выделенной форме в качестве антигенного белка HIV синтетический белок оболочки содержит остатки 30-711 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 18 или остатки 30-686 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 19 и более предпочтительно остатки 30-704 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 18. Выделенный антигенный полипептид HIV также может содержать SEQ ID NO: 8 со следующими мутациями: EK479-480RRRR, I529P,
- 13 038974
A471C и T575C.
Варианты осуществления настоящего изобретения также относятся к композициям или вакцинным комбинациям, содержащим выделенный синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8. Можно применять любой из синтетических белков оболочки HIV, описанных в данном документе. В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения выделенный синтетический белок оболочки HIV содержит остатки 30-704 или 30-711 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 18, остатки 30-686 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 19 или аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 со следующими мутациями: EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C. Такие композиции или вакцинные комбинации могут дополнительно содержать один или несколько векторов экспрессии, например аденовирусных векторов, таких как векторы на основе аденовируса серотипа 26, кодирующих один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, таких как синтетические белки оболочки HIV по настоящему изобретению, или другие антигенные белки HIV, как, например, приведенные под SEQ ID NO: 4, 5, 7, 28 или 29, или их фрагменты.
Настоящее изобретение также относится к способу получения композиции или вакцинной комбинации по настоящему изобретению. Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения способ получения композиции или комбинации включает объединение вектора, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую синтетический белок оболочки HIV по настоящему изобретению, с носителем и необязательно одним или несколькими дополнительными векторами, кодирующими один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, и/или одним или несколькими выделенными антигенными полипептидами HIV. Среднему специалисту в данной области будут хорошо известны традиционные методики, применяемые для получения таких композиций.
Вакцина и вакцинные комбинации.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения композиция может представлять собой вакцину. Используемый в данном документе термин вакцина относится к композиции, содержащей вектор экспрессии, предпочтительно вирусный вектор, кодирующий синтетический белок оболочки HIV по настоящему изобретению, которая может обеспечивать защитный иммунитет или защитный иммунный ответ у субъекта или применяться для вакцинации субъекта. Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения после введения композиции субъекту вектор экспрессии экспрессирует кодируемый синтетический белок оболочки HIV, и экспрессируемый синтетический белок оболочки HIV презентируется иммунной системе субъекта, индуцируя тем самым требуемый ответ с выработкой иммунитета или индукцией иммунного ответа.
Таким образом, в другом общем аспекте в настоящем изобретении представлена вакцина для индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у субъекта. Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения вакцина содержит композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество вектора экспрессии, кодирующего синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 и предпочтительно аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18. Вектор экспрессии предпочтительно представляет собой вирусный вектор, более предпочтительно аденовирусный вектор и наиболее предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения индукция иммунного ответа при использовании в отношении способов и композиций, описанных в данном документе, охватывает обеспечение защитного иммунитета и/или вакцинацию субъекта от инфекции, такой как инфекция, вызываемая HIV, в профилактических целях, а также вызывание у субъекта, нуждающегося в этом, требуемого иммунного ответа или эффекта против инфекции, такой как инфекция, вызываемая HIV, в терапевтических целях. Способы по настоящему изобретению предпочтительно предназначены для профилактических целей, как, например, для обеспечения защитного иммунитета. Иммунный ответ может представлять собой клеточный иммунный ответ и/или гуморальный иммунный ответ.
Используемый в данном документе термин защитный иммунитет или защитный иммунный ответ означает, что вакцинированный субъект в состоянии контролировать инфекцию, вызываемую патогенным возбудителем, от которой была проведена вакцинация. Обычно у субъекта, у которого выработался защитный иммунный ответ, развиваются клинические симптомы только от легкой до умеренной степени тяжести или симптомы вовсе не развиваются. Обычно субъект, имеющий защитный иммунный ответ на определенного возбудителя или защитный иммунитет к нему, не умирает в результате инфицирования указанным возбудителем.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения вакцинные композиции могут дополнительно содержать один или несколько дополнительных векторов, например вирусных векторов, таких как аденовирусные векторы, предпочтительно векторы на основе аденовируса серотипа 26, кодирующих один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, и/или один или несколько выделенных антигенных полипептидов HIV. Синтетический белок оболочки HIV, дополнительные векторы и/или один или несколько выделенных антигенных полипептидов HIV можно составлять в одной и той же композиции или в одной или нескольких разных композициях в вакцине.
- 14 038974
Настоящее изобретение также относится к вакцинным комбинациям для примирования и усиления иммунного ответа на HIV из одной или нескольких клад у субъекта, нуждающегося в этом, с помощью одного или нескольких векторов в комбинации с выделенным антигенным полипептидом. Таким образом, в другом общем аспекте в настоящем изобретении представлена вакцинная комбинация для индукции иммунного ответа на HIV у субъекта. Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения вакцинная комбинация содержит:
(i) первую композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество вектора экспрессии, кодирующего синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 8, имеющую одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из (a) I529P, (b) K480E и (c) комбинации EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C, и носитель; и (ii) вторую композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество выделенного антигенного полипептида HIV и носитель, где одна из первой и второй композиций предназначена для примирующей иммунизации, а другая композиция предназначена для бустерной иммунизации.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения вакцинная комбинация необязательно дополнительно содержит иммуногенно эффективное количество одного или нескольких дополнительных векторов экспрессии, кодирующих один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV. Один или несколько дополнительных векторов экспрессии могут быть включены в первую композицию или вторую композицию, или один или несколько дополнительных векторов экспрессии могут быть включены в одну или несколько дополнительных композиций, подлежащих введению вместе с первой и/или второй композицией.
Используемые в данном документе термины совместная доставка, совместное введение или введение вместе друг с другом относятся к одновременному введению двух или более компонентов, как, например, вирусного вектора экспрессии и выделенного антигенного полипептида или нескольких вирусных векторов экспрессии. Одновременное введение может представлять собой введение двух или более компонентов по меньшей мере в один и тот же день. Если два компонента вводят вместе друг с другом, то их можно вводить в отдельных композициях последовательно в пределах короткого промежутка времени, такого как 24, 20, 16, 12, 8 или 4 ч, или в пределах 1 ч или меньше, или их можно вводить в одной композиции в одно и то же время.
В конкретных вариантах осуществления вакцинной комбинации по настоящему изобретению первая композиция содержит аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18; и при этом выделенный антигенный полипептид HIV содержит остатки 30-708 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 7 или остатки 30-724 SEQ ID NO: 36. В одном конкретном варианте осуществления первая композиция дополнительно содержит аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий антигенный полипептид HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5. В другом конкретном варианте осуществления первая композиция дополнительно содержит один или несколько дополнительных аденовирусных векторов, предпочтительно векторов на основе аденовируса серотипа 26, кодирующих один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, содержащих аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 28 и 29.
Другой общий аспект настоящего изобретения относится к набору, содержащему вакцинную комбинацию согласно варианту осуществления настоящего изобретения.
Другие варианты осуществления синтетического белка оболочки HIV, векторов экспрессии, дополнительных векторов экспрессии, антигенных полипептидов HIV, кодируемых векторами экспрессии, и выделенного антигенного полипептида HIV и т.д., которые можно применять в вакцинных комбинациях по настоящему изобретению, подробно обсуждаются выше и в иллюстративных примерах ниже.
Способ индукции защитного иммунитета к инфекции, вызываемой HIV.
Настоящее изобретение также относится к способу индукции иммунного ответа на HIV из одной или нескольких клад у субъекта, нуждающегося в этом. Способы, описанные в данном документе, включают способы примирования и усиления иммунного ответа с помощью одного или нескольких векторов экспрессии в комбинации с одним или несколькими выделенными антигенными полипептидами.
В одном общем аспекте способ индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у субъекта включает введение субъекту композиции, содержащей иммуногенно эффективное количество вектора экспрессии, содержащего нуклеиновую кислоту, кодирующую синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8. Любую из композиций, описанных в данном документе, можно применять в способе индукции иммунного ответа на HIV у субъекта. Композиция предпочтительно содержит аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, содержащий нуклеиновую кислоту, кодирующую синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18. Композиция может дополнительно содержать один или несколько дополнительных векторов, кодирующих один или
- 15 038974 несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, и/или один или несколько дополнительных выделенных антигенных полипептидов HIV.
В другом общем аспекте способ индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у субъекта включает:
(i) введение субъекту первой композиции, содержащей иммуногенно эффективное количество вектора экспрессии, кодирующего мозаичный белок оболочки HIV, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 8, имеющую одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из (a) I529P, (b) K480E и (c) комбинации EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C, и носитель;
(ii) введение субъекту второй композиции, содержащей иммуногенно эффективное количество выделенного антигенного полипептида HIV и носитель; и (iii) необязательно введение субъекту иммуногенно эффективного количества одного или нескольких дополнительных векторов экспрессии, кодирующих один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, где стадии (i) и (ii) выполняют в любом порядке, при этом одна из стадий предназначена для примирующей иммунизации, а другая стадия для бустерной иммунизации. Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения необязательное эффективное количество одного или нескольких дополнительных векторов экспрессии вводят вместе с первой композицией или второй композицией. В предпочтительном варианте осуществления необязательное эффективное количество одного или нескольких дополнительных векторов экспрессии вводят вместе с первой композицией.
В конкретном варианте осуществления способа индукции иммунного ответа первая композиция содержит аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8, и второй аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий антигенный полипептид HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5; вторая композиция содержит выделенный антигенный полипептид HIV, имеющий остатки 30-708 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 7 или остатки 30-724 SEQ ID NO: 36; и один или несколько дополнительных векторов экспрессии представляют собой аденовирусные векторы, предпочтительно векторы на основе аденовируса серотипа 26, кодирующие один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, содержащих аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 28 и 29; где первую композицию вводят субъекту вместе с одним или несколькими дополнительными векторами экспрессии один или несколько раз в целях примирующей иммунизации, а вторую композицию вводят субъекту один или несколько раз в целях бустерной иммунизации.
Введение иммуногенных композиций, содержащих векторы экспрессии и/или антигенные полипептиды, как правило, является внутримышечным, внутрикожным или подкожным. Однако также могут предусматриваться другие способы введения, такие как внутривенный, ректальный, чрескожный, пероральный, назальный и т.д. Внутримышечное введение иммуногенных композиций можно осуществлять с помощью иглы для инъекции суспензии векторов экспрессии, например аденовирусных векторов, и/или антигенных полипептидов. Альтернативой является применение безыгольного инъекционного устройства для введения композиции (с помощью, например, BiojectorTM) или лиофилизированного порошка, содержащего вакцину.
В случае внутримышечной, внутривенной, чрескожной или подкожной инъекции или инъекции в участок поражения вектор будет находиться в форме парентерально приемлемого водного раствора, который является апирогенным и имеет подходящие значение pH, изотоничность и стабильность. Аналогично, выделенный антигенный полипептид будет находиться в форме парентерально приемлемого раствора, имеющего подходящие значение pH, изотоничность и стабильность. Средние специалисты в данной области вполне способны получить подходящие растворы с применением, например, изотонических основ, таких как раствор хлорида натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, раствор Рингера с лактатом для инъекций. При необходимости можно включать консерванты, стабилизаторы, буферы, антиоксиданты и/или другие добавки. Также можно использовать состав с замедленным высвобождением.
Как правило, введение вакцинных композиций согласно вариантам осуществления настоящего изобретения будет иметь профилактическую цель, заключающуюся в формировании иммунного ответа на антиген HIV до инфицирования или развития симптомов. В других вариантах осуществления векторы экспрессии, например аденовирусные векторы и/или антигенные полипептиды HIV можно вводить для постконтактной профилактики.
Иммуногенные композиции, содержащие векторы экспрессии, например аденовирусные векторы, и/или антигенные полипептиды, вводят субъекту, порождая у субъекта иммунный ответ на HIV. Количество композиции, достаточное для индукции выявляемого иммунного ответа, определяется как иммуногенно эффективная доза или иммуногенно эффективное количество. В типичном варианте осуществления настоящего изобретения иммунный ответ представляет собой защитный иммунный ответ.
Фактическое вводимое количество, а также частота и продолжительность введения будут зависеть
- 16 038974 от природы и тяжести явления, подлежащего лечению. Назначение лечения, например принятие решений относительно дозировки и т.д., находится в пределах сферы ответственности врачей общей практики и других врачей или ветеринара в случае ветеринарной практики, и при этом, как правило, учитываются подлежащее лечению нарушение, состояние отдельного пациента, участок доставки, способ введения и другие факторы, известные практикующим врачам. Примеры методик и протоколов, упоминаемых выше, можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. ed., 1980.
После получения аденовирусных векторов и необязательного составления таких частиц в виде композиций векторы можно вводить индивидууму, в частности человеку или другому примату. Доставка отличному от человека млекопитающему не обязательно может предназначаться для терапевтической цели, а может предназначаться для применения в рамках эксперимента, например, при изучении механизмов иммунных ответов на синтетический белок оболочки HIV, экспрессируемый аденовирусными векторами по настоящему изобретению.
В одном варианте осуществления раскрытых способов один или несколько аденовирусных векторов, кодирующих один или несколько антигенных полипептидов HIV, применяют для примирования иммунного ответа. Один или несколько выделенных антигенных полипептидов HIV можно применять вместе с одним или несколькими аденовирусными векторами для примирующей иммунизации. Примирующую иммунизацию можно осуществлять только один раз, но также можно необязательно осуществлять несколько раз, например, с начальным примирующим введением в момент времени 0 и последующим другим примирующим введением через приблизительно 4-14 недель, например через 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 недель или в любое время в данном диапазоне, после начального примирующего введения. Один или несколько выделенных антигенных полипептидов HIV необязательно вместе с одним или несколькими дополнительными аденовирусами или другими векторами, кодирующими один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, можно применять для усиления иммунного ответа. Бустерную иммунизацию также можно осуществлять один раз или несколько раз, например, в первый раз через приблизительно 18-36 недель, например через 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35 или 36 недель или в любое время в данном диапазоне, после начального примирующего введения с последующим другим бустерным введением через приблизительно 36-52 недели, например через 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 или 60 недель или в любое время в данном диапазоне, после начального примирующего введения. Иммунный ответ, индуцируемый с помощью иммунизации, отслеживают.
Варианты осуществления раскрытых способов также предусматривают более короткие схемы прайм-буст, что означает, что заключительную бустерную иммунизацию осуществляют через приблизительно 22-26 недель после начального примирующего введения. Примирующую иммунизацию можно осуществлять в неделю 0. Бустерную иммунизацию можно осуществлять несколько раз, например, в первый раз через приблизительно 7-9 недель или 11-13 недель или через приблизительно 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 недель или в любое время в данном диапазоне после начального примирующего введения с последующим другим бустерным введением через приблизительно 22-26 недель или через приблизительно 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 или 28 недель или в любое время в данном диапазоне после начального примирующего введения. В определенных вариантах осуществления один или несколько выделенных антигенных полипептидов HIV вводят вместе с одним или несколькими аденовирусными векторами для примирующей и/или бустерной иммунизации.
Специалистам в данной области легко понятно, что схему примирующих и бустерных введений можно корректировать на основании измеренных иммунных ответов после введений. Например, бустерные композиции обычно вводят через несколько недель или месяцев после введения примирующей композиции, например через приблизительно 2-3 недели, или 4 недели, или 8 недель, или 16 недель, или 20 недель, или 24 недели, или 28 недель, или 30 недель, или 32 недели, или один-два года после введения примирующей композиции.
Согласно вариантам осуществления настоящего изобретения адъювант можно вводить вместе с выделенным антигенным полипептидом HIV в качестве части примирующей и/или бустерной иммунизации. Любой адъювант можно применять в свете настоящего раскрытия, и в определенных вариантах осуществления адъювант представляет собой соль алюминия, такую как AdjuPhos.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения аденовирусные векторы, применяемые в способах, раскрытых в данном документе, включают в себя вектор на основе rAd26. Предпочтительно вектор на основе rAd26, кодирующий синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 19, наиболее предпочтительно SEQ ID NO: 18, применяют для примирования иммунного ответа в отдельности или в комбинации с одним или несколькими дополнительными векторами на основе rAd26, кодирующими один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, как, например, mos1Env, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5, а выделенный антигенный полипептид HIV, как, например, содержащий остатки 30-708 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 7 или остатки 30724 SEQ ID NO: 36, применяют для усиления иммунного ответа, или наоборот.
В одном иллюстративном варианте осуществления вектор на основе rAd26, кодирующий синтети
- 17 038974 ческий белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18, применяют для примирования иммунного ответа в комбинации с вектором на основе rAd26, кодирующим антигенный полипептид HIV, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5. Один или несколько дополнительных векторов на основе rAd26, кодирующих один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, имеющих аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-4, 28 и 29, также можно вводить вместе с другими векторами на основе rAd26 для примирования иммунного ответа. Примирующее введение в определенных вариантах осуществления осуществляют два раза перед осуществлением какой-либо бустерной иммунизации. Выделенный антигенный полипептид HIV, как, например, содержащий остатки 30-708 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 7 (предпочтительно) или содержащий остатки 30-724 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 36, или комбинацию по меньшей мере двух таких выделенных антигенных полипептидов HIV затем вводят для усиления иммунного ответа, и их предпочтительно вводят более одного раза. При бустерной иммунизации вместе с выделенным антигенным полипептидом HIV предпочтительно дополнительно вводят адъювант.
В конкретном варианте осуществления иммунный ответ примируют путем введения четырех антигенов HIV, кодируемых аденовирусными векторами, предпочтительно векторами на основе rAd26, при этом четыре кодируемых антигена представляют собой:
(i) синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18, (ii) полипептид, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5, (iii) полипептид, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28, и (iv) полипептид, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29.
Каждый из этих четырех антигенов может кодироваться отдельным аденовирусным вектором, предпочтительно вектором на основе rAd26, который вводят в общей дозе, составляющей приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10x1010 вирусных частиц (vp), например приблизительно 5x1010 vp (для всех векторов вместе). Векторы можно предварительно смешивать, например, в соотношении 1:1:1:1. Примирующее введение можно повторять после начального примирующего введения, например, через 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 недель после начального примирующего введения. В данном варианте осуществления иммунный ответ усиливают путем введения той же вакцины на основе аденовирусного вектора, применяемой для примирующего введения, вместе с выделенным белком gp140 Env HIV, например, белком gp140 из клады C (содержащим остатки 30-708 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 7), или мозаичным белком gp140 (содержащим остатки 30-724 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 36), или белком gp140 из клады С и мозаичным белком gp140 в общей дозе, составляющей приблизительно 50-300 мкг белка, например 50, 100, 150, 200, 250 или 300 мкг или любое количество в данном диапазоне, для белка gp140 из клады C, или, например, 50, 100, 150, 200, 250 или 300 мкг или любое количество в данном диапазоне для мозаичного белка gp140, или, например, 50, 100, 150, 200, 250 или 300 мкг или любое количество в данном диапазоне для комбинации белка gp140 из клады C и мозаичного белка gp140 (например, в соотношении 1:1 при смешивании друг с другом либо введении по отдельности). Белок gp140 предпочтительно вводят вместе с адъювантом, например фосфатом алюминия. Введение аденовируса вместе с белком gp140 для усиления иммунного ответа можно осуществлять через приблизительно 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 недель или в любое время в данном диапазоне после начального примирующего введения. Бустерное введение можно повторять, например, через приблизительно 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53 или 54 недели или в любое время в данном диапазоне после начального примирующего введения. Все введения согласно данному варианту осуществления предпочтительно осуществляют посредством внутримышечного пути.
Варианты осуществления
Вариант осуществления 1 представляет собой нуклеиновую кислоту, кодирующую синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 8, имеющую одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из (i) I529P, (ii) K480E и (iii) комбинации EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C.
Вариант осуществления 2 представляет собой нуклеиновую кислоту согласно варианту осуществления 1, где синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит сигнальную последовательность, например сигнальную последовательность, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 9-12, предпочтительно SEQ ID NO: 9.
Вариант осуществления 3 представляет собой нуклеиновую кислоту согласно варианту осуществления 1 или 2, где синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит трансмембранный домен, например трансмембранный домен, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 13, и синтетический белок оболочки HIV предпочтительно дополнительно содержит SEQ ID NO: 37, слитую с C-концом SEQ ID NO: 8 и N-концом трансмембранного домена.
Вариант осуществления 4 представляет собой нуклеиновую кислоту согласно варианту осуществления 3, где синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит фрагмент цитоплазматического домена, предпочтительно фрагмент цитоплазматического домена, содержащий аминокислотную по- 18 038974 следовательность под SEQ ID NO: 14 или ее аминокислотные остатки 1-4 (т.е. NRVR).
Вариант осуществления 5 представляет собой нуклеиновую кислоту по любому из предыдущих вариантов осуществления 1-4, где синтетический белок оболочки HIV содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18.
Вариант осуществления 6 представляет собой нуклеиновую кислоту согласно варианту осуществления 1 или 2, где синтетический белок оболочки HIV (a) дополнительно содержит тримеризационный домен, выбранный из группы, состоящей из GCN4, фибритина (домена фолдон), например тримеризационный домен, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 15 или SEQ ID NO: 16, предпочтительно SEQ ID NO: 15, либо (b) содержит SEQ ID NO: 8 с комбинацией следующих мутаций: EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C.
Вариант осуществления 7 представляет собой нуклеиновую кислоту согласно варианту осуществления 6, где синтетический белок оболочки HIV содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 19.
Вариант осуществления 8 представляет собой нуклеиновую кислоту согласно варианту осуществления 5, где синтетический белок оболочки HIV состоит из аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 18.
Вариант осуществления 9 представляет собой нуклеиновую кислоту согласно варианту осуществления 7, где синтетический белок оболочки HIV состоит из аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 19.
Вариант осуществления 10 представляет собой вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по любому из вариантов осуществления 1-9, где нуклеиновая кислота функционально связана с последовательностью промотора.
Вариант осуществления 11 представляет собой вектор согласно варианту осуществления 10, представляющий собой вирусный вектор, предпочтительно аденовирусный вектор и более предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26.
Вариант осуществления 12 представляет собой выделенную клетку, содержащую вектор согласно варианту осуществления 10 или варианту осуществления 11.
Вариант осуществления 13 представляет собой композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество вектора согласно варианту осуществления 10 или п.11 и носитель.
Вариант осуществления 14 представляет собой вакцинную комбинацию, содержащую первую композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество аденовирусного вектора, предпочтительно вектора на основе аденовируса серотипа 26, кодирующего синтетический белок оболочки HIV, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18, вторую композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество второго аденовирусного вектора, предпочтительно второго вектора на основе аденовируса серотипа 26, кодирующего антигенный полипептид HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5, и необязательно по меньшей мере одну дополнительную композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество по меньшей мере одного, выбранного из группы, состоящей из вектора, кодирующего антигенный полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-4, 28 и 29, и выделенного антигенного полипептида HIV, имеющего остатки 30-708 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 7 или остатки 30-724 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 36, где первая композиция, вторая композиция и дополнительная композиция находятся в одной и той же композиции или в одной или нескольких разных композициях.
Вариант осуществления 15 представляет собой способ индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у субъекта, нуждающегося в этом, при этом способ включает введение субъекту композиции согласно варианту осуществления 13 или вакцинной комбинации согласно варианту осуществления 14.
Вариант осуществления 16 представляет собой композицию согласно варианту осуществления 13 или вакцинную комбинацию согласно варианту осуществления 14, содержащую аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18, второй аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий антигенный полипептид HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5, один или несколько дополнительных аденовирусных векторов, кодирующих один или несколько дополнительных антигенных полипептидов, содержащих аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-4, 28 и 29, и выделенный антигенный полипептид HIV, содержащий остатки 30-708 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 7 или остатки 30-724 SEQ ID NO: 36, для применения в индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV).
Вариант осуществления 17 представляет собой синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 8, имеющую одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из (i) I529P, (ii) K480E и (iii) комбинации EK479480RRRR, I529P, A471C и T575C.
- 19 038974
Вариант осуществления 18 представляет собой синтетический белок оболочки HIV согласно варианту осуществления 17, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 с комбинацией мутаций EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C, или остатки 30-704 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18, или остатки 30-686 SEQ ID NO: 19.
Вариант осуществления 19 представляет собой композицию согласно варианту осуществления 13, дополнительно содержащую один или несколько дополнительных векторов экспрессии, кодирующих один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, и/или один или несколько выделенных антигенных полипептидов HIV.
Вариант осуществления 20 представляет собой композицию согласно варианту осуществления 13, содержащую аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий синтетический белок оболочки HIV, состоящий из аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 18.
Вариант осуществления 21 представляет собой композицию согласно варианту осуществления 20, дополнительно содержащую второй аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий антигенный полипептид HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5, и необязательно один или несколько дополнительных аденовирусных векторов, предпочтительно векторов на основе аденовируса серотипа 26, кодирующих один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, содержащих аминокислотные последовательности под SEQ ID NO: 1-4, 28 и 29.
Вариант осуществления 22 представляет собой способ получения иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у субъекта, нуждающегося в этом, при этом способ включает введение субъекту композиции согласно любому из вариантов осуществления 19, 20 или 21.
Вариант осуществления 23 представляет собой способ получения композиции или вакцинной комбинации, включающий объединение вектора согласно варианту осуществления 10 или варианту осуществления 11 с носителем и необязательно одним или несколькими дополнительными векторами, кодирующими один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, и/или одним или несколькими выделенными антигенными полипептидами HIV в одну или несколько композиций вместе с носителем.
Вариант осуществления 24 представляет собой вакцинную комбинацию для индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у субъекта, содержащую:
(i) первую композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество вектора экспрессии, кодирующего синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 8, имеющую одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из (i) I529P, (ii) K480E и (iii) комбинации EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C, и носитель; и (ii) вторую композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество выделенного антигенного полипептида HIV и носитель, где одна из первой и второй композиций предназначена для примирующей иммунизации, а другая композиция предназначена для бустерной иммунизации, и где вакцинная комбинация необязательно дополнительно содержит иммуногенно эффективное количество одного или нескольких дополнительных векторов экспрессии, кодирующих один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, и при этом один или несколько дополнительных векторов экспрессии включены в первую или вторую композицию или одну или несколько дополнительных композиций, подлежащих применению вместе с первой или второй композицией.
Вариант осуществления 25 представляет собой вакцинную комбинацию согласно варианту осуществления 24, где первая композиция содержит аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18; выделенный антигенный полипептид HIV содержит остатки 30-708 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 7 или остатки 30-724 SEQ ID NO: 36; и один или несколько дополнительных векторов экспрессии представляют собой аденовирусные векторы, предпочтительно векторы на основе аденовируса серотипа 26, кодирующие один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, содержащих аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-5, 28 и 29.
Вариант осуществления 26 представляет собой способ индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у субъекта, нуждающегося в этом, при этом способ включает:
(i) введение субъекту первой композиции, содержащей иммуногенно эффективное количество вектора экспрессии, кодирующего синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 8, имеющую одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из (i) I529P, (ii) K480E и (iii) комбинации EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C, и носитель;
(ii) введение субъекту второй композиции, содержащей иммуногенно эффективное количество выделенного антигенного полипептида HIV и носитель; и
- 20 038974 (iii) необязательно введение субъекту иммуногенно эффективного количества одного или нескольких дополнительных векторов экспрессии, кодирующих один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, где стадии (i) и (ii) выполняют в любом порядке, при этом одна из стадий предназначена для примирующей иммунизации, а другая стадия для бустерной иммунизации, и необязательное эффективное количество одного или нескольких дополнительных векторов экспрессии предпочтительно вводят вместе с первой композицией.
Вариант осуществления 27 представляет собой способ согласно варианту осуществления 26, где первая композиция содержит аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий синтетический белок оболочки HIV, имеющий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18, и второй аденовирусный вектор, предпочтительно вектор на основе аденовируса серотипа 26, кодирующий антигенный полипептид HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5; вторая композиция содержит выделенный антигенный полипептид HIV, содержащий остатки 30-708 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 7 или остатки 30-724 SEQ ID NO: 36; и необязательные один или несколько дополнительных векторов экспрессии представляют собой аденовирусные векторы, предпочтительно векторы на основе аденовируса серотипа 26, кодирующие один или несколько дополнительных антигенных полипептидов HIV, содержащих аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 28 и 29; где первую композицию вводят субъекту необязательно вместе с одним или несколькими дополнительными векторами экспрессии один или несколько раз в целях примирующей иммунизации, а вторую композицию вводят субъекту один или несколько раз в целях бустерной иммунизации.
Вариант осуществления 28 представляет собой синтетический белок оболочки HIV, состоящий из аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 18 или SEQ ID NO: 19 с сигнальной последовательностью или без нее.
Вариант осуществления 29 представляет собой вакцинную комбинацию, содержащую один или несколько векторов вместе, содержащих последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие (i) первый синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 8, и (ii) второй белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5.
Вариант осуществления 30 представляет собой вакцинную комбинацию согласно варианту осуществления 29, где первый синтетический белок оболочки HIV содержит аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18.
Вариант осуществления 31 представляет собой вакцинную комбинацию, содержащую следующие компоненты:
(i) вектор на основе Ad26, кодирующий синтетический белок оболочки HIV, состоящий из аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 18; и (ii) вектор на основе Ad26, кодирующий белок оболочки HIV, состоящий из аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 5.
Вариант осуществления 32 представляет собой вакцинную комбинацию согласно варианту осуществления 31, дополнительно содержащую следующий компонент:
(iii) вектор на основе Ad26, кодирующий антигены HIV, состоящие из аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 28.
Вариант осуществления 33 представляет собой вакцинную комбинацию согласно варианту осуществления 31 или 32, дополнительно содержащую следующий компонент:
(iv) вектор на основе Ad26, кодирующий антигены HIV, состоящие из аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 29.
Вариант осуществления 34 представляет собой вакцинную комбинацию согласно любому из вариантов осуществления 31-33, дополнительно содержащую следующий компонент:
(v) выделенный антигенный полипептид HIV, содержащий остатки 30-708 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 7 или остатки 30-724 аминокислотной последовательности под SEQ ID NO: 36, необязательно дополнительно содержащую адъювант.
Вариант осуществления 35 представляет собой способ индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у субъекта-человека, нуждающегося в этом, при этом способ включает:
(a) введение субъекту (i) вектора на основе rAd26, кодирующего синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18; (ii) вектора на основе rAd26, кодирующего антиген, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5; (iii) вектора на основе rAd26, кодирующего антиген, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28; и (iv) вектора на основе rAd26, кодирующего антиген, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29; где векторы на основе rAd26 предпочтительно вводят в соотношении, составляющем приблизительно 1:1:1:1, в общей дозе, составляющей приблизительно 1-10x1010 вирусных частиц (vp), например 5x1010 vp;
- 21 038974 (b) повторение стадии (a) через приблизительно 10-14 недель, например через 12 недель, после стадии (a);
(c) введение субъекту (i) вектора на основе rAd26, кодирующего синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18; (ii) вектора на основе rAd26, кодирующего антиген, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5; (iii) вектора на основе rAd26, кодирующего антиген, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28; (iv) вектора на основе rAd26, кодирующего антиген, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29; (v) выделенного белка gp140 HIV, имеющего последовательность из аминокислот 30-708 SEQ ID NO: 7; и (vi) адъюванта, представляющего собой фосфат алюминия; где векторы на основе rAd26 предпочтительно вводят в соотношении, составляющем приблизительно 1:1:1:1, в общей дозе, составляющей приблизительно 1-10x1010 вирусных частиц (vp), например 5x1010 vp, и где выделенный белок gp140 HIV вводят в дозе, составляющей приблизительно 50-300 мкг, например 250 мкг; через приблизительно 20-28 недель, например через 24 недели, после стадии (a); и (d) повторение стадии (c) через приблизительно 42-54 недели, например через 48 недель, после стадии (a).
Вариант осуществления 36 представляет собой способ индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у субъекта-человека, нуждающегося в этом, при этом способ включает:
(a) введение субъекту (i) вектора на основе rAd26, кодирующего синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18; (ii) вектора на основе rAd26, кодирующего антиген, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5; (iii) вектора на основе rAd26, кодирующего антиген, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28; и (iv) вектора на основе rAd26, кодирующего антиген, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29; где векторы на основе rAd26 предпочтительно вводят в соотношении, составляющем приблизительно 1:1:1:1, в общей дозе, составляющей приблизительно 1-10x1010 вирусных частиц (vp), например 5x1010 vp;
(b) повторение стадии (a) через приблизительно 10-14 недель, например через 12 недель, после стадии (a);
(c) введение субъекту (i) вектора на основе rAd26, кодирующего синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 18; (ii) вектора на основе rAd26, кодирующего антиген, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 5; (iii) вектора на основе rAd26, кодирующего антиген, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 28; (iv) вектора на основе rAd26, кодирующего антиген, содержащий аминокислотную последовательность под SEQ ID NO: 29; (v) выделенного белка gp140 HIV, имеющего последовательность из аминокислот 30-708 SEQ ID NO: 7; (vi) выделенного белка gp140 HIV, имеющего последовательность из аминокислот 30-724 SEQ ID NO: 36; и (vi) адъюванта, представляющего собой фосфат алюминия; где векторы на основе rAd26 предпочтительно вводят в соотношении, составляющем приблизительно 1:1:1:1, в общей дозе, составляющей приблизительно 1-10x1010 вирусных частиц (vp), например 5x1010 vp, и где выделенные белки gp140 HIV вводят в соотношении, составляющем приблизительно 1:1, в общей дозе, составляющей приблизительно 50-300 мкг, например 250 мкг; через приблизительно 20-28 недель, например через 24 недели, после стадии (a); и (d) повторение стадии (c) через приблизительно 42-54 недели, например через 48 недель, после стадии (a).
Примеры
Пример 1. Конструирование последовательностей антигенов оболочки HIV.
Конструировали несколько последовательностей антигенов оболочки HIV, обладающих сходством с последовательностью мозаичного антигена mos2Env HIV (SEQ ID NO: 6; ранее также описан в WO 2010/059732). В основе новосконструированных мембраносвязанных последовательностей лежали полностью природные последовательности дикого типа (их комбинация) из белков оболочки HIV или химерный продукт сочетания последовательности mos2Env и последовательностей белков оболочки HIV дикого типа. В дополнение к полноразмерным последовательностям белков оболочки (см. фиг. 1A) также конструировали последовательности, имеющие C-концевое усечение цитоплазматического домена (см., например, фиг. 1C). См. также, например, Schiemle et al., PNAS 1997; Abrahamyan et al., J. Virol. 2005; Edwards et al., J. Virology, 2002, 76:2683-2691. Растворимые варианты также получали путем C-концевого усечения перед трансмембранной (TM) областью, которую замещали тримеризационным доменом, таким как тримеризационный домен GCN4 (см., например, фиг. 1B). Эти растворимые варианты дополнительно превращали в одноцепочечный вариант посредством мутации участка расщепления фурином, ингибируя, таким образом, процессинг внеклеточного домена белка оболочки до субъединиц gp120 и gp41.
Из всех полученных и тестированных конструкций конструкции на основе C4 обладали наиболее оптимальными свойствами, например хорошими технологичностью, сворачиванием, иммуногенностью и т.д., и их отбирали для дополнительных исследований. В дополнительных исследованиях также получа- 22 038974 ли и тестировали растворимый вариант конструкции C4, имеющий тримеризационный домен GCN4 вместо трансмембранного домена (sC4, фиг. 1B), и вариант, содержащий 7-аминокислотный фрагмент цитоплазматического домена из (C4D7, фиг. 1C). Аминокислотные последовательности C4, sC4 и C4D7 показаны под SEQ ID NO: 17, 19 и 18 соответственно. Последовательности, кодирующие их, показаны под SEQ ID NO: 25, 27 и 26 соответственно. Конструкция С1 имела последовательность внеклеточного домена на основе последовательности mos2Env (SEQ ID NO: 6). Также получали растворимый вариант конструкции С1, имеющий тримеризационный домен GCN4 вместо трансмембранного домена (sC1), и вариант, содержащий 7-аминокислотный фрагмент цитоплазматического домена (C1D7), аналогичный sC4 и C4D7, показанным на фиг. 1B и 1C соответственно. Конструкцию С1 и ее варианты применяли в дополнительных исследованиях в целях сравнения, поскольку в их основе, по существу, лежала последовательность mos2Env из предшествующего уровня техники. Аминокислотные последовательности C1, sC1 и C1D7 показаны под SEQ ID NO: 31, 30 и 32 соответственно. Последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие их, показаны под SEQ ID NO: 34, 33 и 35 соответственно. Другие тестированные конструкции были менее оптимальными, чем конструкции на основе конструкции C4, и их не отбирали для дальнейшей разработки.
Пример 2. Экспрессия и сворачивание синтетических белков оболочки HIV.
У синтетических белков оболочки HIV измеряли уровень экспрессии, сворачивание и экспрессию на поверхности клеток.
Уровни экспрессии.
Клетки HEK293F транзиентно трансфицировали плазмидой, кодирующей растворимые синтетические белки оболочки HIV sC1 и sC4, описанные в примере 1. Уровни экспрессии растворимого белка измеряли в надосадочной жидкости с помощью количественного вестерн-блоттинга (QWB). Результаты показаны на фиг. 2. Низкие уровни экспрессии sC1 (который, по существу, соответствует mos2Env с добавленным трансмембранным доменом) согласуются с недавними наблюдениями авторов настоящего изобретения в отношении mos2Env. Как показывают результаты, вариант sC4 по настоящему изобретению показывал значительно более высокие уровни экспрессии, чем вариант sC1 (контроль).
Сворачивание белка.
Сворачивание белка тестировали путем измерения связывания растворимых синтетических белков оболочки HIV с антителом (Mab 17b), о котором известно, что оно связывается с корецепторсвязывающим участком белка оболочки HIV, который становится доступным только после связывания с CD4, с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). В частности, связывание очищенного sC4 тестировали в отношении связывания с Mab 17b с предварительным связыванием sC4 с CD4 и без предварительного связывания sC4 с CD4. Очищенный sC1 применяли в качестве контроля. Связывание Mab 17b с sC4 без предварительного связывания CD4 с белком оболочки указывает на частично развернутый или предварительно активированный белок оболочки (т.е. нестабильный Env, который принимает открытую конформацию в отсутствие связывания с CD4). Результаты ELISA-анализа показаны на фиг. 3A и 3B.
Как показано на фиг. 3B, sC4 демонстрирует сильное связывание с Mab 17b при наличии предварительного связывания с CD4, но в то же время не демонстрирует выявляемое связывание с Mab 17b в отсутствие предварительного связывания с CD4. В отличие от этого, как показано на фиг. 3A, sC1 демонстрировал намного более низкое связывание с Mab 17 как при наличии предварительного связывания с CD4, так и в его отсутствие. Результаты позволяют предположить, что sC4 имеет правильный профиль сворачивания без перехода корецепторсвязывающего участка в состояние доступности до связывания с CD4.
Сворачивание белка также анализировали с помощью нативного электрофореза в полиакриламидном геле (PAGE) sC1 и sC4, чтобы оценить четвертичную структуру растворимых вариантов белка и возможное неправильное образование дисульфидных мостиков между протомерами. После электрофореза в нативном геле белок в геле выявляли с помощью вестерн-блот-анализа. Как показывают результаты на фиг. 4, большая часть sC4 находится в тримерном состоянии, которое представляет собой правильную четвертичную структуру.
В совокупности результаты экспериментов в отношении сворачивания белка демонстрируют, что растворимый синтетический белок оболочки HIV sC4 имеет требуемый профиль сворачивания, который является улучшенным по сравнению с профилем сворачивания существующего антигена mos2Env (представленного sC1).
Экспрессия на поверхности клеток.
Также исследовали экспрессию мембраносвязанных вариантов белков оболочки HIV С1 (полноразмерного), C4 (полноразмерного, см. фиг. 1А), C1D7 и C4D7 на поверхности клеток. Клетки HEK293T транзиентно трансфицировали только плазмидой, кодирующей eGFP (отрицательный контроль, NC), или плазмидой, кодирующей eGFP, вместе с экспрессионной конструкцией, кодирующей вариант белка оболочки HIV. Через два дня после трансфекции клетки подвергали анализу по методу сортировки клеток с активированной флуоресценцией (FACS) при воздействии нескольких поли- и моноклональных антител, направленных на gp120, и вторичных антител, а затем изучали уровни экспрессии белка оболочки на по- 23 038974 верхности клеток. Качество вариантов белков оболочки оценивали путем определения общих уровней экспрессии с помощью поликлонального антитела к gp120 и путем оценки относительного связывания с нейтрализующими антителами широкого спектра действия PG9 и PG16, связывание с которыми зависит от четвертичной структуры и которые преимущественно связываются с правильно свернутым тримером белка оболочки.
Результаты экспериментов в отношении экспрессии на поверхности клеток показаны на фиг. 5. Уровни поверхностной экспрессии усеченных вариантов C1D7 и C4D7, измеренные с помощью антитела к gp120, намного превышают уровни поверхностной экспрессии их полноразмерных эквивалентов, С1 и C4 соответственно. Это подтверждает, что при делеции 144 остатков с карбоксильного конца Env увеличиваются уровни поверхностной экспрессии белка оболочки. Полноразмерная конструкция C4 по настоящему изобретению также демонстрировала улучшенное связывание с PG9 и PG16 по сравнению с полноразмерным С1, что позволяет предположить, что последовательность белка оболочки C4 свернута надлежащим образом (т.е. в виде тримера) на поверхности клеток.
Результаты также показывают, что вариант C1D7, который, по существу, представляет собой Mos2Env с добавленным трансмембранным доменом и 7 аминокислотами цитоплазматического домена, может экспрессироваться на поверхности клеток HEK293T. Этим он отличается от растворимой конструкции Ad26.mos2Env, которая при введении в клетки A549 путем трансфекции не может экспрессироваться на поверхности на выявляемых уровнях. Однако относительное связывание с PG9 и PG16 с трудом можно выявить на уровне выше фонового, что позволяет предположить, что последовательность белка оболочки C1D7 свернута ненадлежащим образом и, вероятно, находится не в форме инактного тримера на поверхности клеток.
В целом, вариант C4D7 белка оболочки обладает наиболее оптимальным профилем связывания с антителами, характеризуясь более высоким уровнем экспрессии gp120, чем у его полноразмерного эквивалента C4, и более чем в 15 раз увеличенным связыванием с PG9 и PG16 по сравнению с С1 и C1D7 (фиг. 5).
Пример 3. Стабильность векторов, кодирующих последовательности белков оболочки HIV.
Проведенная ранее исследовательская работа в лабораториях авторов настоящего изобретения (неопубликованная) указывала на то, что векторы на основе аденовируса серотипа 26 (Ad26), кодирующие последовательность антигена mos2Env, как было показано, характеризовались относительно высокими соотношениями VP/IU (что указывает на более низкое качество партий продукта аденовируса), и, кроме того, что у таких векторов проявлялись проблемы со стабильностью. Соответственно, было важно протестировать стабильность конструкций синтетических белков оболочки HIV по настоящему изобретению в аденовирусном окружении.
Векторы на основе рекомбинантного Ad26 (rAd26), кодирующие последовательности антигенов HIV C4, C4D7 и sC4 по настоящему изобретению, описанные выше в примере 1, получали в клетках PER.C6 (они называются соответственно rAd26.C4, rAd26.C4D7 и rAd26.sC4). Клоны векторов (бляшки) отбирали и разращивали для получения исследуемых партий. Не более 5 клонов вируса (бляшек) разращивали до формата T25 и подвергали серийному пассажу в течение 10 пассажей в формате T25 (при этом пассажи 1-3 представляли собой стадии трансфекции и очистки методом бляшкообразования, и за ними следовали 10 пассажей в формате T25, в результате чего общее число пассажей составляло 13). Генетическую стабильность оценивали на 3, 5, 10 и 13 пассаже вируса (vpn) с помощью ПЦРанализа кассеты экспрессии трансгена в E1 с последующим секвенированием на 13 vpn. Результаты показаны на фиг. 6.
Векторы на основе rAd26, кодирующие полноразмерный C4 (rAd26.C4), демонстрировали неудовлетворительные характеристики роста, которые определяли по отсутствию полного цитопатогенного эффекта (CPE) через 2-3 дня; генетическую нестабильность, которую определяли по делециям в области E1 с кассетой экспрессии трансгена; или их комбинацию (фиг. 6). Из-за неудовлетворительных характеристик роста и наблюдаемой генетической нестабильности этот вектор, кодирующий полноразмерный C4, в дальнейшем не рассматривали.
В отличие от этого в случае векторов на основе rAd26, кодирующих C4D7 (rAd26.C4D7) и sC4 (rAd26.sC4), весь размноженный материал из бляшек оставался генетически стабильным на протяжении эксперимента (фиг. 6). Таким образом, новые конструкции sC4 и C4D7 превосходят исходную конструкцию mos2Env в отношении стабильности в окружении аденовирусного вектора. Тестирование генетической стабильности вплоть до vpn 13 представлено размножением, на несколько пассажей более длительным, чем при применении в получении векторов в промышленном масштабе.
Пример 4. Экспрессия и антигенность in vivo последовательностей белков оболочки HIV в аденовирусных векторах.
Экспрессию и антигенность rAd26.C4D7 и rAd26.sC4 оценивали по отдельности или в комбинации с вектором на основе рекомбинантного Ad26, кодирующим mos1Env (SEQ ID NO: 5) (далее в данном документе rAd26.mos1Env), в трансдуцированных вектором клетках A549 (линия клеток человека) in vitro (данные не показаны). Анализ по методу проточной цитометрии показал, что все антигены экспрессировались в культурах клеток, трансдуцированных 2x104 вирусных частиц (vp) с одним антигеном обо
- 24 038974 лочки в качестве контролей либо 1x104 vp с комбинацией из 2 антигенов Env путем аденовирусной трансдукции. Все материалы для трансдукции содержали однократные дозы (1x104 vp) аденовирусных векторов, кодирующих mos1GagPol (rAd26.mos1GagPol) и mos2GagPol (rAd26.mos2GagPol) (Barouch et al., Nat. Med. 2010, 16:319-323), так что оцениваемые комбинации векторов демонстрировали такие же относительные количества различных аденовирусных векторов, какие предполагались для доклинического и клинического применения. Для клинического применения векторы, кодирующие синтетические белки оболочки HIV по настоящему изобретению, предпочтительно комбинируют с векторами, кодирующими антигены mos1GagPol и mos2GagPol.
Комбинация rAd26.mos1Env и rAd26.C4D7 давала максимальный охват оцениваемых эпитопов, что определяли путем связывания с моноклональными антителами. В частности, доступность эпитопа для PG16, которая обеспечивалась трансформацией с помощью Ad26.C4D7, является перспективной для применения в вакцинах, поскольку PG16 представляет собой нейтрализующее моноклональное антитело широкого спектра действия, которое распознает петлевую область V1/V2 Env HIV-1 (Walker et al., Science. 2009). Следовательно, синтетический белок оболочки HIV по настоящему изобретению, полученный из последовательности C4, увеличивает спектр иммунного ответа на белок оболочки HIV по сравнению с иммунным ответом, формируемым только mos1Env. Было показано, что индуцируемые вакциной иммунные ответы с образованием антител, направленные на данную область белка оболочки, коррелируют с защитой от инфекции, вызываемой HIV-1, в исследовании RV144 (Haynes et al., N. Engl. J. Med. 2012), и поэтому синтетический белок оболочки HIV по настоящему изобретению является перспективным кандидатом для включения в схемы вакцинации от HIV.
Пример 5. Иммуногенность векторов, кодирующих синтетические белки оболочки HIV.
Последовательности синтетических белков оболочки HIV по настоящему изобретению в окружении вектора на основе Ad26 тестировали на кроликах для определения того, являются ли эти конструкции иммуногенной альтернативой конструкции rAd26.mos2Env.
Иммуногенность аденовирусного вектора, кодирующего mos1Env (rAd26.mos1Env; SEQ ID NO: 5), тестировали в отдельности и в комбинации с аденовирусными векторами, кодирующими синтетические белки оболочки HIV по настоящему изобретению (rAd26.C4D7 и rAd26.sC4; содержащие SEQ ID NO: 8, в частности SEQ ID NO: 18 и 19 соответственно). Во всех случаях также вводили векторы на основе аденовируса серотипа 26, кодирующие антигены mos1GagPol и mos2GagPol (rAd26.mos1GagPol [SEQ ID NO: 28] и rAd26.mos2GagPol [SEQ ID NO: 29] соответственно). Более конкретно, иммуногенность rAd26.mos1Env в отдельности (трехвалентная вакцина: rAd26.mos1GagPol, rAd26.mos2GagPol и rAd26.mos1Env) сравнивали с иммуногенностью rAd26.mos1Env в комбинации с одним из rAd26.C4D7 или rAd26.sC4 (четырехвалентная вакцина: введение rAd26.mos1GagPol, rAd26.mos2GagPol, rAd26.mos1Env и rAd26.C4D7 либо введение rAd26.mos1GagPol, rAd26.mos2GagPol, rAd26.mos1Env и rAd26.sC4). Данное сравнение трехвалентной вакцины, которая не содержит каких-либо векторов, кодирующих синтетические белки оболочки HIV по настоящему изобретению, с четырехвалентной вакциной, которая содержит векторы, кодирующие синтетические белки оболочки HIV по настоящему изобретению, позволяет определить то, вносят ли белки оболочки HIV по настоящему изобретению вклад в спектр защиты.
Введение проводили согласно схемам вакцинации, в которых данные векторы на основе Ad26 вводили в недели 0 и 6 в качестве двукратной примирующей иммунизации, а белок gp140 из клады C (трехвалентный белок gp140 Env, имеющий SEQ ID NO: 7 без сигнальной пептидной последовательности из остатков 1-29, см. также WO 2010/042942) в недели 12 и 18 в качестве двукратной бустерной иммунизации (см., например, Barouch et al., 2015, Science 349: 320-324). В таблице описаны схемы вакцинации, применяемые в данном исследовании. Пустой rAd26 относится к контрольному вектору, не содержащему какой-либо ген, кодирующий последовательность антигенного белка HIV. Каждая группа включала шесть кроликов.
- 25 038974
Схемы вакцинации, тестируемые в исследовании иммуногенности у кроликов
| Группа | Первая и вторая иммунизации | Третья и четвертая иммунизации | N= | ||||
| Аденовирус ные векторы | Доза (vp) | Общая доза (vp) | Бустерный белок | Доза (мкг) | Адъювант | ||
| 1 | rAd2 6.Мо s ΙΕην | 2,5x1010 | 5x1010 | GP140 (клада С) | 10 | 250 мкг Adj uPhos | 6 |
| rAd2 6. Mo sIGagPol | 1,25x1010 | ||||||
| rAd2 6. Mo s2Gagpol | 1,25x1010 | ||||||
| 2 | rAd2 6. Mo s lEnv | 1,25x1010 | 5x1010 | GP140 (клада С) | 10 | 250 мкг Adj uPhos | 6 |
| rAd26.C4 D7 | 1,25x1010 | ||||||
| rAd2 6. Mo sIGagPol | 1,25x1010 | ||||||
| rAd2 6. Mo s2Gagpol | 1,25x1010 | ||||||
| 3 | rAd2 6. Mo slEnv | 1,25x1010 | 5x1010 | GP140 (клада С) | 10 | 250 мкг Adj uPhos | 6 |
| rAd2 6 . sC4 | 1,25x1010 | ||||||
| rAd2 6. Mos 1 GagPol | 1,25x1010 | ||||||
| rAd2 6. Mos2 Gagpol | 1,25x1010 | ||||||
| <онтрольн ая | Пустой rAd2 6 | 5x1010 | 5x1010 | Нет данных | 0 | 250 мкг Adj uPhos | 6 |
Сравнение трехвалентной вакцины на основе Ad26 (не содержащей новых антигенов Env по настоящему изобретению) с четырехвалентной вакциной на основе Ad26 (которая содержит новые антигены sC4 или C4D7 Env) позволяет тестировать то, вносят ли новые антигены вклад в спектр защиты. Хорошо известный анализ нейтрализации с использованием клеток TZM-b1 [Montefiori D.C. Methods Mol. Biol. 2009, 485:395-405; Sarzotti-Kelsoe M. et al., J. Immunol. Methods 2014, 409:131-146] применяли для измерения нейтрализующей активности вакцин-кандидатов.
Результаты показаны на фиг. 7, и их статистический анализ осуществляли путем использования трехвалентной вакцины (группа 1 в таблице) в качестве контрольной группы и сравнения с ней каждой из новых четырехвалентных вакцин (группы 2 и 3 в таблице).
В целом, новые аденовирусные конструкции, полученные из C4 (т.е. кодирующие белки Env, содержащие SEQ ID NO: 8, которые являются альтернативой mos2Env), были иммуногенными после осуществления двух внутримышечных гомологичных иммунизации у кроликов.
Нейтрализующая способность у кроличьей антисыворотки к псевдовирусам категории 1B отсутствовала (данные не показаны), что не было неожиданным, так как известно, что такие вирусы более трудно нейтрализовать.
На способность кроличьей антисыворотки к вирусу категории 1A клады B к нейтрализации псевдовирусов не влияло добавление новых компонентов (данные не показаны). Это демонстрирует то, что новый антиген не оказывал отрицательное влияние на иммуногенность существующего антигена клады B, присутствующего в вакцине (несмотря на то, что новые компоненты были направлены на вирусы клады C, такое неблагоприятное влияние нельзя было исключить заведомо до проведения их тестирования).
Способность кроличьей антисыворотки к вирусу категории 1A клады C к нейтрализации псевдовирусов была значительно повышена в случае иммунизации новой четырехвалентной аденовирусной вакциной, содержащей C4D7 (четырехвалентная, группа 2), по сравнению с трехвалентной вакциной (имеющей только mos1Env) в отдельности (группа 1) (фиг. 7, панель B). Кроме того, способность кроличьей
- 26 038974 антисыворотки к вирусу категории 1A клады C к нейтрализации псевдовирусов в неделю 8 была значительно повышена в случае иммунизации новой четырехвалентной аденовирусной вакциной, содержащей sC4 (четырехвалентная, группа 3), по сравнению с трехвалентной вакциной (имеющей только mos1Env) в отдельности (группа 1) (фиг. 7, панель B).
В заключение, необходимо отметить, что конструкции C4D7 и sC4, кодируемые Ad26, были иммунногенными, и их добавление расширяло связывающую и нейтрализующую способность вакцины, которая имела mos1Env (главным образом, клады B) в качестве единственного кодируемого Ad26 компонента Env, в отношении штаммов клады C (фиг. 7B).
Пример 6. Иммуногенность схем вакцинации, включающих введение векторов, кодирующих синтетические белки оболочки HIV по настоящему изобретению.
В одном дополнительном исследовании на кроликах оценивали четырехвалентную комбинацию векторов Ad26.Mos4.HIV (состоящую из четырех аденовирусных векторов: Ad26.Mos1GagPol [кодирующего SEQ ID NO: 28], Ad26.Mos2GagPol [кодирующего SEQ ID NO: 29], Ad26.Mos1Env [кодирующего SEQ ID NO: 5] и Ad26.Mos2SEnv [название C4D7, используемое выше, также относится к Mos2S; этот вектор кодирует новую SEQ ID NO: 18 согласно настоящему изобретению] в смеси 1:1:1:1 в общей дозе, составляющей 5x109 vp), которую применяли внутримышечно в качестве двукратных примирующих иммунизации в недели 0 и 6 в комбинации с рекомбинантными бустерными белками Env HIV-1 при применении gp140 из клады С [имеющего последовательность из аминокислотных остатков 30-708 SEQ ID NO: 7], мозаичного gp140 [имеющего последовательность из аминокислотных остатков 30-724 SEQ ID NO: 36] или комбинации gp140 из клады C и мозаичного gp140 в недели 13 и 19. Эти бустерные белки применяли внутримышечно в общей дозе, составляющей 10 или 50 мкг белка, в комбинации с 250 мкг адъюванта, представляющего собой фосфат алюминия, составленного в день иммунизации.
Результаты указывают на то, что все тестируемые схемы были иммуногенными у всех животных, индуцируя высокие титры антител и умеренную нейтрализующую активность в отношении Envпсевдотипированных вирусов категории 1. При применении мозаичного gp140 в качестве вакцинного антигена в отдельности либо в комбинации с gp140 из клады C титры антител, специфичных к мозаичному gp140, в ELISA и распознавание псевдовирусов клады B были значительно увеличенными на неделе 15 по сравнению с эталонной группой, получавшей бустерную иммунизацию gp140 из клады C в отдельности. Общая величина эффекта улучшения была умеренной и при этом большей для группы, получавшей бустерную иммунизацию бивалентной комбинацией gp140 из клады C - мозаичный gp140 по сравнению с мозаичным gp140 в отдельности. В неделю 21 исследования эти различия утрачивались, и иммунные ответы, измеренные для когорт, получавших бустерные дозы бивалентной комбинации gp140 из клады C - мозаичный gp140 или бустерные дозы моновалентного gp140 из клады C, были статистически неразличимыми.
Схема с применением бивалентного белка демонстрировала индукцию титров антител к вирусам клады C в ELISA и распознавание псевдовирусов, сравнимые с таковыми для схемы бустерной иммунизации gp140 из клады C в отдельности, что указывает на то, что включение мозаичного иммуногена gp140, относящегося к кладе B, не оказывало отрицательного эффекта на охват антигенов из клады C и в то же время значительно повышало охват антигенов из клады B в неделю 15 исследования.
Данные подтверждают, что вектор Ad26.Mos2SEnv, кодирующий синтетический антиген Env согласно настоящему изобретению, можно успешно применять в схемах вакцинации.
- 27 038974
Литературные источники
1. Barouch et al, Nat Med 2010, 16: 319-323.
2. WO 2010/059732.
3. Schiernle et al., PNAS 94: 8640-8645, 1997.
4. Abrahamyan et al., J Virol 79: 106-115, 2005.
5. US20120076812 .
6. Barouch et al., Cell 155:1-9, 2013.
7. Havenga, et al., 2006, J Gen Virol 87: 2135-43.
8. WO 03/104467.
9. WO 2004/001032.
10. WO 2007/104792.
11. Abbink et al., (2007) Virol 81(9): 4654-63.
12. Патент США № 7270811.
13. Vogels et al., (2003) J Virol 77(15): 8263-71.
14. WO 00/70071.
15. WO2012/082918.
16. Walker LM, Phogat SK, Chan-Hui PY, Wagner D, Phung P, Goss JL, et al. Broad and potent neutralizing antibodies from an African donor reveal a new HIV-1 vaccine target. Science 2009,326:285-289.
17. Haynes BF, Gilbert PB, McElrath MJ, Zolla-Pazner S, Tomaras GD, Alam SM, et al. Immune-correlates analysis of an HIV-1 vaccine efficacy trial. N Engl J Med 2012,366:1275-1286.
18. Barouch et al. (2015) Science 349: 320-324.
19. Montefiori DC. Measuring HIV neutralization in a luciferase reporter gene assay. Methods Mol Biol 2009,485:395405.
20. Sarzotti-Kelsoe M, Bailer RT, Turk E, Lin CL, Bilska M, Greene KM, et al. Optimization and validation of the TZM-bl assay for standardized assessments of neutralizing antibodies against HIV-1. J Immunol Methods 2014,409:131-146.
21. Edwards et al., J. Virology, 2002, 76:2683-2691.
Claims (23)
1. Нуклеиновая кислота, кодирующая синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 8, имеющую одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из (i) I529P, (ii) K480E и (iii) комбинации EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C.
2. Нуклеиновая кислота по п.1, где синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит сигнальную последовательность, например сигнальную последовательность, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 9 - SEQ ID NO: 12.
3. Нуклеиновая кислота по п.1 или 2, где синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит трансмембранный домен, например трансмембранный домен, содержащий SEQ ID NO: 13.
4. Нуклеиновая кислота по п.3, где синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит SEQ ID NO: 37, слитую с C-концом SEQ ID NO: 8 и N-концом трансмембранного домена.
5. Нуклеиновая кислота по п.3, где синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит фрагмент цитоплазматического домена.
6. Нуклеиновая кислота по п.5, где фрагмент цитоплазматического домена содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14 или ее остатки 1-4.
7. Нуклеиновая кислота по любому из пп.1-6, где синтетический белок оболочки HIV содержит
- 28 038974 аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18.
8. Нуклеиновая кислота по п.1 или 2, где синтетический белок оболочки HIV дополнительно содержит тримеризационный домен.
9. Нуклеиновая кислота по п.8, где тримеризационный домен имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 или SEQ ID NO: 16.
10. Нуклеиновая кислота по п.1 или 2, где синтетический белок оболочки HIV содержит SEQ ID NO: 8, имеющую комбинацию мутаций EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C.
11. Нуклеиновая кислота по любому из пп.8 или 9, где синтетический белок оболочки HIV содержит аминокислотную последовательность из остатков 1-686 SEQ ID NO: 19.
12. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по любому из пп.1-11, где нуклеиновая кислота функционально связана с последовательностью промотора.
13. Вектор экспрессии по п.12, представляющий собой вирусный вектор, предпочтительно аденовирусный вектор.
14. Вектор экспрессии по п.13, где аденовирусный вектор представляет собой вектор на основе аденовируса человека серотипа 26 (Ad26).
15. Выделенная клетка для размножения вектора экспрессии по любому из пп.12-14, содержащая вектор экспрессии по любому из пп.12-14.
16. Композиция для индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у пациента, содержащая иммуногенно эффективное количество вектора экспрессии по любому из пп.12-14 и носитель.
17. Вакцинная комбинация для индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у пациента, содержащая:
(i) первую композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество первого аденовирусного вектора, кодирующего синтетический белок оболочки HIV, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8;
(ii) вторую композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество второго аденовирусного вектора, кодирующего антигенный полипептид HIV, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5.
18. Вакцинная комбинация по п.17, в которой первый аденовирусный вектор представляет собой вектор на основе аденовируса серотипа 26, и второй аденовирусный вектор представляет собой вектор на основе аденовируса серотипа 26.
19. Вакцинная комбинация по п.17 или 18, в которой синтетический белок оболочки HIV имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18.
20. Вакцинная комбинация по любому из пп.17-19, дополнительно включающая:
(iii) по меньшей мере одну дополнительную композицию, содержащую иммуногенно эффективное количество по меньшей мере одного, выбранного из группы, состоящей из (iiia) вектора, кодирующего по меньшей мере один антигенный полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-4, 28 и 29, и (iiib) полипептида, содержащего иммуногенно эффективное количество выделенного антигенного полипептида HIV, содержащего остатки 30-708 аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7 или остатки 30-724 SEQ ID NO: 36, где первая композиция, вторая композиция и дополнительная композиция находятся в одной и той же композиции или в одной или нескольких разных композициях.
21. Способ индукции иммунного ответа на вирус иммунодефицита человека (HIV) у пациента, включающий введение пациенту композиции по п.16 или вакцинной комбинации по любому из пп.17-20.
22. Синтетический белок оболочки HIV, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 или SEQ ID NO: 8, имеющую одну или несколько мутаций, выбранных из группы, состоящей из (i) I529P, (ii) K480E и (iii) комбинации EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C.
23. Синтетический белок оболочки HIV по п.22, содержащий (i) SEQ ID NO: 8, имеющую комбинацию мутаций EK479-480RRRR, I529P, A471C и T575C; (ii) аминокислотные остатки 30-704 SEQ ID NO: 18 или (iii) аминокислотные остатки 30-686 SEQ ID NO: 19.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP15200138 | 2015-12-15 | ||
| EP16194124 | 2016-10-17 | ||
| PCT/EP2016/081159 WO2017102929A1 (en) | 2015-12-15 | 2016-12-15 | Human immunodeficiency virus antigens, vectors, compositions, and methods of use thereof |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201891415A1 EA201891415A1 (ru) | 2018-11-30 |
| EA201891415A8 EA201891415A8 (ru) | 2019-10-31 |
| EA038974B1 true EA038974B1 (ru) | 2021-11-17 |
Family
ID=57737697
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201891415A EA038974B1 (ru) | 2015-12-15 | 2016-12-15 | Антигены вируса иммунодефицита человека, векторы, композиции и способы их применения |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US10369214B2 (ru) |
| EP (3) | EP3964569A1 (ru) |
| JP (2) | JP6510149B2 (ru) |
| KR (1) | KR20180086207A (ru) |
| CN (2) | CN108368157B (ru) |
| AU (2) | AU2016369326B2 (ru) |
| BR (1) | BR112018011122A2 (ru) |
| CA (1) | CA3008542C (ru) |
| CY (2) | CY1122705T1 (ru) |
| DK (2) | DK3390430T3 (ru) |
| EA (1) | EA038974B1 (ru) |
| ES (2) | ES2898271T3 (ru) |
| HR (2) | HRP20211566T1 (ru) |
| HU (2) | HUE045993T2 (ru) |
| IL (1) | IL259942B2 (ru) |
| LT (2) | LT3584252T (ru) |
| MA (3) | MA44059B1 (ru) |
| MD (2) | MD3390430T2 (ru) |
| ME (1) | ME03545B (ru) |
| MX (2) | MX2018007198A (ru) |
| PH (1) | PH12018501047A1 (ru) |
| PL (2) | PL3390430T3 (ru) |
| PT (1) | PT3390430T (ru) |
| RS (2) | RS62360B1 (ru) |
| SG (2) | SG10202109457RA (ru) |
| SI (2) | SI3584252T1 (ru) |
| TW (2) | TWI792091B (ru) |
| WO (1) | WO2017102929A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201803978B (ru) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AP2017009846A0 (en) | 2014-09-26 | 2017-03-31 | Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc | Methods and compositions for inducing protective immunity against human immunodeficiency virus infection |
| MA40783A (fr) | 2014-10-03 | 2017-08-08 | Los Alamos Nat Security Llc | Vaccins contre le vih comprenant un ou plusieurs antigènes episensus de population |
| EP3031923A1 (en) * | 2014-12-11 | 2016-06-15 | Institut Pasteur | Lentiviral vector-based japanese encephalitis immunogenic composition |
| MD3390430T2 (ro) | 2015-12-15 | 2019-12-31 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Antigenele virusului imunodeficienței umane, vectori, compoziții și metode de utilizare ale acestora |
| MA45381A (fr) | 2016-06-16 | 2021-04-21 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Formulation de vaccin contre le vih |
| CN110494159A (zh) | 2016-09-02 | 2019-11-22 | 扬森疫苗与预防公司 | 在接受抗逆转录病毒治疗的对象中诱导针对人类免疫缺陷病毒感染的免疫应答的方法 |
| EA201990715A1 (ru) | 2016-09-15 | 2019-08-30 | Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В. | Стабилизирующие тример мутации белка оболочки hiv |
| JP7272965B2 (ja) | 2017-06-15 | 2023-05-12 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェー | Ｈｉｖ抗原をコードするポックスウイルスベクターおよびその使用方法 |
| BR112020000867A2 (pt) * | 2017-07-19 | 2020-07-21 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | mutações da proteína do envelope do hiv estabilizando o trímero |
| US20190083620A1 (en) | 2017-09-18 | 2019-03-21 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment |
| EP3504225B1 (en) * | 2017-11-17 | 2024-04-24 | Grifols Diagnostic Solutions Inc. | Novel mammalian expressed human immunodeficiency virus envelope protein antigens |
| US20220211835A1 (en) * | 2019-04-17 | 2022-07-07 | The Wistar Institute | Replication Deficient Adenoviral Vectors for HIV Vaccine Applications |
| WO2020237052A1 (en) | 2019-05-22 | 2020-11-26 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment |
| AU2020381082B2 (en) | 2019-11-07 | 2022-09-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Protein purification |
| CA3182703A1 (en) | 2020-05-12 | 2021-11-18 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Administration of homologous adenoviral vectors |
| WO2022006095A2 (en) * | 2020-06-29 | 2022-01-06 | Duke University | Mosaic hiv-1 envelopes to induce adcc responses |
| US20220118081A1 (en) | 2020-10-20 | 2022-04-21 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | HIV vaccine regimens |
| JP2024509769A (ja) | 2021-02-23 | 2024-03-05 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェー | 三量体安定化ｈｉｖエンベロープタンパク質変異 |
| WO2023242155A1 (en) | 2022-06-14 | 2023-12-21 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Compositions and methods for the diagnosis of hiv infection |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010059732A1 (en) * | 2008-11-18 | 2010-05-27 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Antiviral vaccines with improved cellular immunogenicity |
Family Cites Families (68)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4603112A (en) | 1981-12-24 | 1986-07-29 | Health Research, Incorporated | Modified vaccinia virus |
| CA1341245C (en) | 1988-01-12 | 2001-06-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Recombinant vaccinia virus mva |
| US5298416A (en) | 1989-01-18 | 1994-03-29 | British Technology Group Ltd. | Attenuated polioviruses |
| US5505947A (en) | 1994-05-27 | 1996-04-09 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Attenuating mutations in Venezuelan Equine Encephalitis virus |
| UA68327C2 (en) | 1995-07-04 | 2004-08-16 | Gsf Forschungszentrum Fur Unwe | A recombinant mva virus, an isolated eukaryotic cell, infected with recombinant mva virus, a method for production in vitro of polypeptides with use of said cell, a method for production in vitro of virus parts (variants), vaccine containing the recombinant mva virus, a method for immunization of animals |
| US6479258B1 (en) | 1995-12-07 | 2002-11-12 | Diversa Corporation | Non-stochastic generation of genetic vaccines |
| US5741492A (en) * | 1996-01-23 | 1998-04-21 | St. Jude Children's Research Hospital | Preparation and use of viral vectors for mixed envelope protein vaccines against human immunodeficiency viruses |
| US6083716A (en) | 1996-09-06 | 2000-07-04 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Chimpanzee adenovirus vectors |
| US5761893A (en) | 1996-10-22 | 1998-06-09 | Lofquist Welding, Inc. | Crop saving attachment for the snouts of combines |
| PT1550722E (pt) | 1999-05-17 | 2007-09-25 | Crucell Holland Bv | ''adenovírus humano recombinante do serótipo 35'' |
| US6913922B1 (en) | 1999-05-18 | 2005-07-05 | Crucell Holland B.V. | Serotype of adenovirus and uses thereof |
| US6710173B1 (en) | 1999-06-25 | 2004-03-23 | Progenics Pharmaceuticals, Inc. | Stabilized viral envelope proteins and uses thereof |
| CA2384271A1 (en) | 1999-09-17 | 2001-03-22 | Joseph G. Sodroski | Stabilized soluble glycoprotein trimers |
| ES2256323T5 (es) | 2000-11-23 | 2016-11-21 | Bavarian Nordic A/S | Variante del virus Vaccinia Ankara Modificado |
| CA2785699A1 (en) * | 2001-07-05 | 2003-01-16 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Polynucleotides encoding antigenic hiv type c polypeptides, polypeptides and uses thereof |
| CA2452119C (en) * | 2001-07-05 | 2013-10-15 | Chiron Corporation | Polynucleotides encoding antigenic hiv type b and/or type c polypeptides, polypeptides and uses thereof |
| CN102409063A (zh) | 2001-12-04 | 2012-04-11 | 巴法里安诺迪克有限公司 | 黄病毒ns1亚单位疫苗 |
| CA2478508C (en) | 2002-04-25 | 2013-07-02 | Crucell Holland B.V. | Stable adenoviral vectors and methods for propagation thereof |
| EP1497438B1 (en) | 2002-04-25 | 2009-10-28 | Crucell Holland B.V. | Means and methods for the production of adenovirus vectors |
| AU2003291402A1 (en) | 2002-11-07 | 2004-06-03 | Beth Israel Deaconess Medical Center | MIP-1Alpha AND GM-CSF AS ADJUVANTS OF IMMUNE RESPONSE |
| ES2416629T3 (es) | 2002-12-03 | 2013-08-02 | University Of Massachusetts | Vacunas polivalentes de ADN de glicoproteína de VIH-1 primaria y procedimientos de vacunación |
| EP2371380A1 (en) | 2003-03-28 | 2011-10-05 | The Government of the United States of America, represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | MVA expressing modified hiv envelope, gag, and pol genes |
| WO2005027840A2 (en) | 2003-09-15 | 2005-03-31 | Chiron Corporation | Combination approaches for generating immune responses |
| WO2005052119A2 (en) | 2003-11-19 | 2005-06-09 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Adjuvants of immune response |
| ATE449105T1 (de) | 2004-01-23 | 2009-12-15 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Impfstoffträger für schimpansen-adenovirus |
| US20070207166A1 (en) * | 2004-04-12 | 2007-09-06 | Genvec, Inc. | Method of Using Adenoviral Vectors to Induce an Immune Response |
| EP1766097A4 (en) | 2004-06-15 | 2008-03-19 | Progenics Pharm Inc | HIV-1 NEUTRALIZATION ANTIBODIES ELICITED BY A TRIMERIC COMPLEX OF HIV-1 ENVELOPE GLYCOPROTEINS |
| JP4772045B2 (ja) * | 2004-07-16 | 2011-09-14 | アメリカ合衆国 | Ｃｍｖ／ｒ核酸コンストラクトを含むａｉｄｓに対するワクチン |
| DK1789438T3 (en) * | 2004-08-27 | 2015-07-20 | Us Government | Recombinant MVA viruses expressing MODIFIED env, gag and pol genes of HIV CLADE A / G, CLADE CLADE B AND C |
| US7741099B2 (en) | 2004-10-13 | 2010-06-22 | Beth Israel Deaconess Medical Center Inc. | Adenoviral vectors and uses thereof |
| CN101588813A (zh) * | 2005-04-12 | 2009-11-25 | 杜克大学 | 诱导人类免疫缺陷病毒的中和抗体的方法 |
| US20100221241A1 (en) | 2005-07-06 | 2010-09-02 | University Of Maryland Biotechnology Institute | Constrained hiv envelope-based immunogen that simultaneously presents receptor and coreceptor binding sites |
| EP1917040A4 (en) | 2005-08-23 | 2012-12-12 | Univ California | POLYVALENT VACCINE |
| US20100143302A1 (en) | 2006-03-16 | 2010-06-10 | Crucell Holland B.V. | Recombinant Adenoviruses Based on Serotype 26 and 48, and Use Thereof |
| EP2040747A4 (en) | 2006-06-19 | 2010-08-25 | Progenics Pharm Inc | SOLUBLE STABILIZED TRIMERIC HIV ENV PROTEINS AND USES THEREOF |
| EP2073840A4 (en) | 2006-10-23 | 2010-10-27 | Progenics Pharm Inc | MODIFIED GP140 ENVELOPE POLYPEPTIDES FROM HIV-1 ISOLATES, COMPOSITIONS, TRIMERIC COMPLEXES AND USES THEREOF |
| WO2008140579A2 (en) | 2006-11-17 | 2008-11-20 | New York University | Induction of broadly reactive neutralizing antibodies by focusing the immune response on v3 epitopes of the hiv-1 gp120 envelope |
| EA021391B1 (ru) | 2007-03-02 | 2015-06-30 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Способ индукции иммунного ответа, вакцинная композиция, ее применение и набор |
| WO2010042942A2 (en) | 2008-10-10 | 2010-04-15 | Children's Medical Center Corporation | Biochemically stabilized hiv-1 env trimer vaccine |
| WO2010085984A1 (en) | 2009-02-02 | 2010-08-05 | Okairos Ag | Simian adenovirus nucleic acid- and amino acid-sequences, vectors containing same, and uses thereof |
| SG172935A1 (en) | 2009-02-02 | 2011-08-29 | Okairos Ag | Simian adenovirus nucleic acid- and amino acid-sequences, vectors containing same, and uses thereof |
| WO2010096561A1 (en) | 2009-02-18 | 2010-08-26 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Synthetic hiv/siv gag proteins and uses thereof |
| CN102711794B (zh) | 2010-01-04 | 2015-11-25 | Kj生物科学有限公司 | 用于疫苗和诊断学的Dps融合蛋白 |
| WO2011092029A1 (en) | 2010-01-28 | 2011-08-04 | Bavarian Nordic A/S | Vaccinia virus mutants containing the major genomic deletions of mva |
| EP4226935A3 (en) | 2010-08-31 | 2023-09-06 | Theraclone Sciences, Inc. | Human immunodeficiency virus (hiv)-neutralizing antibodies |
| BR112013014712B1 (pt) | 2010-12-14 | 2021-03-02 | The Goverment Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | primeiro e segundo vetores de adenovírus recombinantes |
| WO2012149038A1 (en) * | 2011-04-25 | 2012-11-01 | Advanced Bioscience Laboratories, Inc. | Truncated hiv envelope proteins (env), methods and compositions related thereto |
| US20140348791A1 (en) | 2011-09-09 | 2014-11-27 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Modified adenoviral vectors and methods of treatment using same |
| EP2568289A3 (en) | 2011-09-12 | 2013-04-03 | International AIDS Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| WO2013040766A1 (zh) * | 2011-09-21 | 2013-03-28 | 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心 | 可诱导针对hiv的广谱免疫应答的方法和疫苗 |
| WO2013055908A1 (en) | 2011-10-12 | 2013-04-18 | The Scripps Research Institute | An hiv-1 gp120 mini v3 loop and uses thereof |
| US9683268B2 (en) | 2012-09-19 | 2017-06-20 | Beth Israel Deaconess | Viruses associated with immunodeficiency and enteropathy and methods using same |
| CN105051198A (zh) | 2012-11-16 | 2015-11-11 | 貝丝以色列女执事医疗中心 | 重组腺病毒及其用途 |
| MX2015008815A (es) | 2013-01-07 | 2016-10-26 | Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc | Vacunas de trimero del envolvente (env) del virus de la inmunodeficiencia humana (vih) estabilizadas y metodos de usarlas. |
| WO2014124301A1 (en) | 2013-02-07 | 2014-08-14 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Self-assembling protein nanostructures |
| US9624510B2 (en) * | 2013-03-01 | 2017-04-18 | The Wistar Institute | Adenoviral vectors comprising partial deletions of E3 |
| WO2015048770A2 (en) | 2013-09-30 | 2015-04-02 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Antibody therapies for human immunodeficiency virus (hiv) |
| EP3666790A1 (en) * | 2013-10-04 | 2020-06-17 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Stabilized human immunodeficiency virus (hiv) clade c envelope (env) trimer vaccines and methods of using same |
| US9750801B2 (en) * | 2014-02-28 | 2017-09-05 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Replicating recombinant adenovirus vectors, compositions, and methods of use thereof |
| EP3189067B1 (en) | 2014-09-04 | 2021-05-19 | The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Recombinant hiv-1 envelope proteins and their use |
| AP2017009846A0 (en) | 2014-09-26 | 2017-03-31 | Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc | Methods and compositions for inducing protective immunity against human immunodeficiency virus infection |
| US9630994B2 (en) | 2014-11-03 | 2017-04-25 | University Of Washington | Polypeptides for use in self-assembling protein nanostructures |
| WO2016146844A1 (en) * | 2015-03-18 | 2016-09-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Assays for recombinant expression systems |
| MD3390430T2 (ro) | 2015-12-15 | 2019-12-31 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Antigenele virusului imunodeficienței umane, vectori, compoziții și metode de utilizare ale acestora |
| MA45381A (fr) | 2016-06-16 | 2021-04-21 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Formulation de vaccin contre le vih |
| CN110494159A (zh) | 2016-09-02 | 2019-11-22 | 扬森疫苗与预防公司 | 在接受抗逆转录病毒治疗的对象中诱导针对人类免疫缺陷病毒感染的免疫应答的方法 |
| EA201990715A1 (ru) | 2016-09-15 | 2019-08-30 | Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В. | Стабилизирующие тример мутации белка оболочки hiv |
| DE102018124348A1 (de) | 2018-10-02 | 2020-04-02 | Haver & Boecker Ohg | Füllkasten und Verfahren zum Füllen von Gebinden |
-
2016
- 2016-12-15 MD MDE20181009T patent/MD3390430T2/ro unknown
- 2016-12-15 HU HUE16822410A patent/HUE045993T2/hu unknown
- 2016-12-15 PL PL16822410T patent/PL3390430T3/pl unknown
- 2016-12-15 MD MDE20200025T patent/MD3584252T2/ro unknown
- 2016-12-15 AU AU2016369326A patent/AU2016369326B2/en active Active
- 2016-12-15 CN CN201680073839.5A patent/CN108368157B/zh active Active
- 2016-12-15 US US15/380,123 patent/US10369214B2/en active Active
- 2016-12-15 EP EP21185351.0A patent/EP3964569A1/en not_active Withdrawn
- 2016-12-15 RS RS20211171A patent/RS62360B1/sr unknown
- 2016-12-15 IL IL259942A patent/IL259942B2/en unknown
- 2016-12-15 MX MX2018007198A patent/MX2018007198A/es unknown
- 2016-12-15 TW TW109138473A patent/TWI792091B/zh active
- 2016-12-15 ME MEP-2019-304A patent/ME03545B/me unknown
- 2016-12-15 HU HUE19186284A patent/HUE055916T2/hu unknown
- 2016-12-15 EA EA201891415A patent/EA038974B1/ru unknown
- 2016-12-15 KR KR1020187016460A patent/KR20180086207A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-12-15 MA MA44059A patent/MA44059B1/fr unknown
- 2016-12-15 PT PT168224103T patent/PT3390430T/pt unknown
- 2016-12-15 DK DK16822410T patent/DK3390430T3/da active
- 2016-12-15 LT LTEP19186284.6T patent/LT3584252T/lt unknown
- 2016-12-15 TW TW105141650A patent/TWI707039B/zh active
- 2016-12-15 RS RSP20191399 patent/RS59447B1/sr unknown
- 2016-12-15 HR HRP20211566TT patent/HRP20211566T1/hr unknown
- 2016-12-15 SI SI201631333T patent/SI3584252T1/sl unknown
- 2016-12-15 LT LT16822410T patent/LT3390430T/lt unknown
- 2016-12-15 BR BR112018011122-8A patent/BR112018011122A2/pt active Search and Examination
- 2016-12-15 WO PCT/EP2016/081159 patent/WO2017102929A1/en active Application Filing
- 2016-12-15 SG SG10202109457R patent/SG10202109457RA/en unknown
- 2016-12-15 ES ES19186284T patent/ES2898271T3/es active Active
- 2016-12-15 PL PL19186284T patent/PL3584252T3/pl unknown
- 2016-12-15 CN CN202210312432.0A patent/CN114686495A/zh active Pending
- 2016-12-15 JP JP2018531537A patent/JP6510149B2/ja active Active
- 2016-12-15 EP EP16822410.3A patent/EP3390430B1/en active Active
- 2016-12-15 ES ES16822410T patent/ES2753854T3/es active Active
- 2016-12-15 CA CA3008542A patent/CA3008542C/en active Active
- 2016-12-15 MA MA47522A patent/MA47522B1/fr unknown
- 2016-12-15 EP EP19186284.6A patent/EP3584252B1/en active Active
- 2016-12-15 SI SI201630480T patent/SI3390430T1/sl unknown
- 2016-12-15 DK DK19186284.6T patent/DK3584252T3/da active
- 2016-12-15 MA MA055825A patent/MA55825A/fr unknown
- 2016-12-15 SG SG11201804411TA patent/SG11201804411TA/en unknown
-
2018
- 2018-05-16 PH PH12018501047A patent/PH12018501047A1/en unknown
- 2018-06-13 MX MX2021006931A patent/MX2021006931A/es unknown
- 2018-06-14 ZA ZA2018/03978A patent/ZA201803978B/en unknown
-
2019
- 2019-04-03 JP JP2019071336A patent/JP6959289B2/ja active Active
- 2019-05-17 AU AU2019203468A patent/AU2019203468B2/en not_active Ceased
- 2019-06-13 US US16/440,463 patent/US10973907B2/en active Active
- 2019-10-21 HR HRP20191902TT patent/HRP20191902T1/hr unknown
- 2019-11-13 CY CY20191101197T patent/CY1122705T1/el unknown
-
2021
- 2021-03-03 US US17/190,569 patent/US11896663B2/en active Active
- 2021-10-19 CY CY20211100901T patent/CY1125387T1/el unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010059732A1 (en) * | 2008-11-18 | 2010-05-27 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Antiviral vaccines with improved cellular immunogenicity |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| DATABASE Geneseq [online] 11 January 2007 (2007-01-11), "GCN4 fusion linker peptide, SEQ ID NO 3.", XP002757480, retrieved from EBI * |
| DATABASE Geneseq [online] 15 January 2009 (2009-01-15), COMPANS R W, WANG B, HAHN B M D, LIU W, SMITH G, PUSHKO P: "Recombinant protein gp41 heterologous transmembrane region, SEQ ID 1.", XP002757478, retrieved from EBI * |
| DATABASE Geneseq [online] 26 January 2006 (2006-01-26), MARASCO W A: "Transmembrane domain peptide, SEQ ID 14.", XP002757479, retrieved from EBI * |
| DATABASE UniProt [online] "RecName: Full=Endogenous retrovirus group K member 9 Env polyprotein {ECO:0000256|SAAS:SAAS00159347}; AltName: Full=Endogenous retrovirus group K member 113 Env polyprotein {ECO:0000256|SAAS:SAAS00159454}; AltName: Full=Endogenous retrovirus group K member 13-1 Env polyprotein {ECO:0000256|SAAS:SAA", XP002757477, retrieved from EBI * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11896663B2 (en) | Immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) mutant envelope proteins | |
| US11723970B2 (en) | Poxvirus vectors encoding HIV antigens, and methods of use thereof | |
| OA20252A (en) | Human immunodeficiency virus antigens, vectors, compositions, and methods of use thereof. | |
| EA042265B1 (ru) | Поксвирусные векторы, кодирующие антигены вич, и способы их применения |