CN110494159A - 在接受抗逆转录病毒治疗的对象中诱导针对人类免疫缺陷病毒感染的免疫应答的方法 - Google Patents

在接受抗逆转录病毒治疗的对象中诱导针对人类免疫缺陷病毒感染的免疫应答的方法 Download PDF

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Abstract

描述了在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的对象中诱导针对HIV的免疫应答的方法。该方法包括施用编码镶嵌HIV抗原的腺病毒载体初免疫苗和修饰的痘苗病毒(MVA)载体加强疫苗。

Description

在接受抗逆转录病毒治疗的对象中诱导针对人类免疫缺陷病 毒感染的免疫应答的方法
相关申请的交叉引用
根据35 U.S.C.§119(e)，本申请有权享有于2016年9月2日提交的美国临时专利申请No.62/383,140的优先权，其公开内容通过引用整体并入本文。
参考电子提交的序列表
该申请包含序列表，该序列表通过EFS-Web电子提交ASCII格式的序列表，文件名为“688097-149Sequence Listing”，创建日期为2016年9月1日，大小为52.4kB。通过EFS-Web提交的序列表是说明书的一部分，并且其全部内容通过引用并入本文
背景技术
在全球范围内，2012年估计有3530万人携带人类免疫缺陷病毒(HIV)，与前几年相比，该增加是由于更广泛的挽救生命的抗逆转录病毒疗法(ART)的可用性。全球共有230万新的HIV感染，表明新感染的数量从2001年的340万人下降了33％。与此同时，获得性免疫缺陷综合征(AIDS)死亡人数也在下降，2012年AIDS死亡人数为160万，低于2005年的230万人。从1996年到2012年，ART在全球范围内避免了660万与AIDS相关的死亡，包括在低收入和中等收入国家的550万人死亡(UNAIDS Report on the Global AIDS Epidemic 2013)。2012年，在低收入和中等收入国家，970万人接受了ART，占所有符合2010年世界卫生组织(WHO)HIV治疗指南的人数的61％。然而，根据2013年WHO指南，低收入和中等收入国家的HIV治疗覆盖率仅占2013年符合条件的2830万人的34％。
尽管在挽救生命方面证明了成功，但对于世界上那些所有需要ART的HIV感染的患者来说，开始和维持ART仍存在重大挑战。为了有效，ART必须以接近完美的依从性终身进行。这对国际捐助者和HIV流行率最高的发展中国家的过度征税的卫生系统造成了极大的压力和成本。此外，ART对使用者具有短期和长期的副作用，并且随着越来越多的人更长期的治疗，耐药率上升。因此，替代或补充治疗，包括治疗性疫苗(其可以诱导HIV感染的真正或“功能性”治愈并减少或消除对HIV感染个体的终身ART的需要)将因此是非常有益的。
对未感染HIV和感染HIV的对象的HIV疫苗的研究表明，成功的HIV疫苗计划将需要针对目标人群中占主导地位的多种毒株和亚型诱导免疫。提高表位覆盖的幅度、广度和深度被认为是开发成功的基于T细胞的预防性HIV疫苗的关键。已公布的灵长类动物数据表明，疫苗诱导的表位特异性应答的数量可能是猿猴免疫缺陷病毒(SIV)攻击系统中病毒载量控制的重要免疫相关因素(Chen et al.Nat Med.(2001)7(11),1225-31)。实现此目的的策略包括使用含有来自许多流行亚型的免疫原的多价疫苗或使用镶嵌序列(通过计算机重组从天然序列组装的蛋白质，其针对潜在的T细胞表位进行了优化)。
宿主介导的残留病毒清除的增强代表了一种新的另外的HIV功能性治愈方法(Carcelain et al.Immunol Rev.(2013)254(1),355-71)。一些研究的结果表明细胞免疫在控制HIV储库(reservoir)大小方面的重要性。从优秀(elite)控制者但不是从给予ART的患者分离的HIV-1Gag特异性CD8+T细胞显示杀死自体静息CD4+T细胞，其中病毒用伏立诺他(vorinostat)重新活化。此外，功能性抗病毒CD8T细胞与不用ART控制其病毒的患者的中枢记忆CD4T细胞储库的大小减小有关。靶向Gag中易受攻击区域的高亲和力多功能CD8细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对于限制具有保护性人白细胞抗原(HLA)I类等位基因的HIV感染个体的病毒多样性和储库特别重要。治疗性疫苗可以重新刺激CD8+CTL以预防或控制病毒复发并在治疗中断后重建CD4+T细胞中的潜伏感染。一些治疗性疫苗研究，例如Ad5HIV-1gag疫苗(ACTG A5197NCT00080106)，以及输注用灭活的HIV颗粒脉冲的树突细胞已显示在治疗中断后短暂的病毒抑制。Eramune-02正在测试脱氧核糖核酸(DNA)初免、复制缺陷型、重组腺病毒血清型-5加强策略，以及Vaccine Research Center的多价HIV-Gag、Pol、Nef和Env疫苗是否可以减少接受ARV-强化方案的患者的病毒储库(Katlama Lancet.(2013)381(9883),2109-17)。
与在慢性HIV感染过程中开始ART的患者相比，许多在急性HIV感染时开始ART的患者在分析治疗中断(ATI)后表现出迟钝或延迟的反弹病毒血症(Gianella etal.Antiviral therapy.(2011)16(4),535-45；Goujard et al.(2012)Antiviraltherapy.17(6),1001-9；Hamlyn et al.(2012)PloS one.7(8),e43754；Lodi et al.(2012)Archives of internal medicine.172(16),1252-5；Saez-Cirion et al.(2013)PLoS pathogens 9(3),e1003211)。一些研究显示，5％-16％在急性感染时开始ART的患者在治疗中断后显示持续的病毒血控制(Gianella 2011,同上；Goujard 2012,同上；Grijsen2012,同上；Lodi 2012,同上；Saez-Cirion 2013,同上)。在这些研究中，与成功的病毒血控制相关的因素包括从HIV发病到ART开始的持续时间较短、ART持续时间较长以及与PBMC相关的HIV DNA低(Williams et al.(2014)Elife 3,e03821)。
但是，ATI不是HIV感染的标准治疗方法。最近于2014年修订的Thai National HIVTreatment Guidelines现在建议所有携带HIV的人(PLHIV)接受终身ART。然而，安全停止或中断ART的可能性对患者(他们不方便的不得不服用需要严格依从性并且有许多经证实有短期和长期毒性的药物)以及国家健康计划(致力于在未来几十年内为成千上万甚至数百万患者提供药物)来说都是非常有益的。
因此，本领域需要改善的治疗HIV感染的对象的方法，特别是接受抗逆转录病毒疗法(ART)的HIV感染的对象，例如治疗性疫苗。这种治疗性疫苗优选地提高对HIV的免疫应答，并允许治疗的对象在维持病毒血控制的同时中止ART。
发明内容
本发明涉及用编码镶嵌HIV抗原的腺病毒26(Ad26)载体的初免疫苗和编码镶嵌HIV抗原的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体的加强疫苗在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的对象中诱导针对HIV的免疫应答的方法。在完全抑制HIV的个体中使用根据本发明实施方案的腺病毒初免疫苗和MVA加强疫苗的疫苗疗法可以导致可测量的免疫应答并在ART中断后维持病毒血控制。
因此，本发明的一个一般方面涉及在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的人类对象中诱导针对HIV的免疫应答的方法，该方法包括：
(i)向人类对象施用初免疫苗，所述初免疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的腺病毒26(Ad26)载体和药学上可接受的载剂；和
(ii)向人类对象施用加强疫苗，所述加强疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体和药学上可接受的载剂。
在某些实施方案中，在最初施用初免疫苗后约12-52周首次施用加强疫苗。在某些实施方案中，在最初施用初免疫苗后约22-26周，例如约24周，首次施用加强疫苗。
在本发明的一个实施方案中，初免疫苗包含编码一种或多种包含选自SEQ ID NO：1、3和4的氨基酸序列的镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的Ad26载体；并且加强疫苗包含编码一种或多种包含选自SEQ ID NO：1-4的氨基酸序列的镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的MVA载体。
在本发明的一个实施方案中，初免疫苗包含编码三种具有SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的Ad26载体；并且加强疫苗包含编码四种具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的MVA载体。
在本发明的一个实施方案中，在最初施用初免疫苗后约10-14周再次施用初免疫苗；并且在最初施用初免疫苗后约46至50周再次施用加强疫苗。
在一些实施方案中，人类对象在急性HIV感染期间开始ART。
在本发明的优选实施方案中，在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的人类对象中诱导针对HIV的免疫应答的方法，其中所述人类对象在急性HIV感染期间开始ART，包括：
(i)向人类对象施用初免疫苗，所述初免疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种包含选自SEQ ID NO：1、3和4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的腺病毒26(Ad26)载体和药学上可接受的载剂；和
(ii)向人类对象施用加强组合物，所述加强组合物包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种包含选自SEQ ID NO：1-4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的MVA载体和药学上可接受的载剂，
其中在最初施用初免疫苗后约10-14周再次施用初免疫苗；在最初施用初免疫苗后约22-26周首次施用加强疫苗；在最初施用初免疫苗后约46-50周再次施用加强疫苗。
在本发明的具体实施方案中，免疫原性有效量的编码SEQ ID NO：1、3和4的镶嵌HIV抗原的Ad26载体由三种Ad26载体组成，其中第一Ad26载体编码SEQ ID NO：1的镶嵌HIV抗原，第二Ad26载体编码SEQ ID NO：3的镶嵌HIV抗原，且第三Ad26载体编码SEQ ID NO：4的镶嵌HIV抗原。在某些实施方案中，第一、第二和第三Ad26载体以约5×1010个病毒颗粒(vp)的总剂量施用。
在本发明的其他具体实施方案中，免疫原性有效量的编码SEQ ID NO：1、2、3和4的镶嵌HIV抗原的MVA载体由两种MVA载体组成，其中第一MVA载体编码SEQ ID NO：1和3的镶嵌HIV抗原，且第二MVA载体编码SEQ ID NO：2和4的镶嵌HIV抗原。在某些实施方案中，第一和第二MVA载体以约1×108噬斑形成单位(pfu)的总剂量施用。
在其它优选的实施方案中，在最初施用初免疫苗后约12周再次施用初免疫苗，在最初施用初免疫苗后约24周首次施用加强疫苗，并且在最初施用初免疫苗后约48周再次施用加强疫苗。
在一些实施方案中，在施用最后加强疫苗后约10-14周中止ART。
在优选的实施方案中，已根据本发明施用初免疫苗和加强疫苗的人类对象在中止ART后维持病毒抑制至少24周。
本发明还涉及用于在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的对象中诱导针对HIV的免疫应答的疫苗组合，其中所述疫苗组合包含：(i)初免疫苗，其包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的腺病毒26(Ad26)载体和药学上可接受的载剂；(ii)加强疫苗，其包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体和药学上可接受的载剂。
本发明还涉及疫苗组合在制备用于在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的对象中诱导针对HIV的免疫应答的药物中的用途，其中所述疫苗组合包含：(i)初免疫苗，其包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的腺病毒26(Ad26)载体和药学上可接受的载剂；(ii)加强疫苗，其包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体和药学上可接受的载剂。
具体实施方式
在背景技术和整个说明书中引用或描述了各种出版物、文章和专利；这些参考文献中的每一篇均通过引用整体并入本文。对包含在本说明书中的文献、法案、材料、装置、物品等的讨论是为了提供本发明的背景。这种讨论并不是承认任何或所有这些事项构成关于所公开或要求保护的任何发明的现有技术的一部分。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。否则，本文使用的某些术语具有说明书中阐述的含义。本文引用的所有专利、公开的专利申请和公开通过引用并入本文，如同其在本文充分阐述。
必须注意的是，如本文和所附权利要求中所使用的，单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数指代，除非上下文另有明确说明。
除非另有说明，否则在一系列元素之前的术语“至少”应理解为指代系列中的每个元素。本领域技术人员将认识到或能够使用不超过常规的实验确定本文所述的本发明具体实施方案的许多等价物。这些等价物旨在包含在本发明中。
在整个说明书和随后的权利要求中，除非上下文另有要求，否则词语“包含”和变体例如“包括”和“包含”将被理解为指示包括所述整数或步骤或整数或步骤组，但不排除任何其他整数或步骤或整数或步骤组。当在本文中使用时，术语“包含”可以用术语“含有”或“包括”代替，或者有时在本文中使用时用术语“具有”代替。
当在本文中使用时，“由......组成”不包括权利要求元素中未指定的任何元素、步骤或成分。当在本文中使用时，“基本上由......组成”不排除不会实质上影响权利要求的基本和新颖特征的材料或步骤。无论何时在本发明的一个方面或实施方案的上下文中使用时，任何上述术语“包含”、“含有”、“包括”和“具有”可以用术语“由......组成”或“基本上由......组成”代替，以改变本公开的范围。
如本文所使用的，多个列举的元素之间的连接词术语“和/或”被理解为包含单个选项和组合选项。例如，在两个元素由“和/或”连接的情况下，第一选项指的是应用第一元素而没有第二元素。第二选项是指应用第二元素而没有第一元素。第三选项是指一起应用第一和第二元素。这些选项中的任何一个都被理解为落在该含义内，并因此满足本文所用术语“和/或”的要求。同时应用多于一个选项也被理解为落在该含义内，并因此满足术语“和/或”的要求。
如本文所用，“对象”意指将通过根据本发明的实施方案的方法治疗或已经治疗的人。
本发明涉及在接受抗逆转录病毒治疗(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的人类对象中初免和加强针对HIV的免疫应答的方法。根据本发明的实施方案，向HIV感染的人类对象施用初免疫苗和加强疫苗，其中所述初免疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的腺病毒26(Ad26)载体；并且所述加强疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体。
人类免疫缺陷病毒(HIV)
人类免疫缺陷病毒(HIV)是慢病毒属(Lentivirinae)的成员，所述慢病毒属是逆转录病毒科(Retroviridae)的一部分。两个HIV物种感染人类：HIV-1和HIV-2。HIV-1是最常见的HIV病毒株，已知其比HIV-2更具致病性。如本文所用，术语“人类免疫缺陷病毒”和“HIV”是指但不限于HIV-1和HIV-2。在某些示例性实施方案中，本文所述的包膜蛋白是指存在于HIV-1或HIV-2上，优选存在于HIV-1上的那些。
HIV被归类为多个进化枝，具有高度的遗传差异。如本文所用，术语“HIV进化枝”或“HIV亚型”是指根据其遗传相似性程度分类的相关人类免疫缺陷病毒。目前有三组HIV-1分离株：M、N和O。M组(主要毒株)由至少十个进化枝组成，A至J。O组(外部毒株)可由相似数量的进化枝组成。N组是新的HIV-1分离株，其未分类进M组或O组。
根据本发明的实施方案，本文描述的方法可用于诱导针对一个或多个HIV进化枝的免疫应答。
HIV抗原
如本文所用，术语“HIV抗原”、“HIV的抗原多肽”、“HIV抗原多肽”、“HIV抗原蛋白”、“HIV免疫原性多肽”和“HIV免疫原”均指能够在对象中诱导针对HIV的免疫应答(例如体液和/或细胞介导的应答)的多肽。HIV抗原可以是HIV的蛋白质、其片段或表位、或多个HIV蛋白质或其部分的组合，其能够在对象中诱导针对HIV的免疫应答。HIV抗原能够在宿主提高保护性免疫应答，例如，诱导针对病毒疾病或感染的免疫应答，和/或在对象中产生针对病毒疾病或感染的免疫(即，接种疫苗)，其保护对象免受病毒疾病或感染。例如，HIV抗原可包含来自HIV的蛋白质或其(一个或多个)片段，例如HIV gag、pol和env基因产物。
根据本发明的实施方案，HIV抗原可以是HIV-1或HIV-2抗原或其(一个或多个)片段。HIV抗原的实例包括但不限于gag、pol和env基因产物，其编码结构蛋白和必需酶。Gag、pol和env基因产物被合成为多蛋白，其进一步加工成多种其他蛋白质产物。gag基因的主要蛋白质产物是病毒结构蛋白gag多蛋白，其进一步加工成MA、CA、SP1、NC、SP2和P6蛋白质产物。pol基因编码病毒酶(Pol，聚合酶)，并且初级蛋白质产物进一步加工成RT、RNAase H、IN和PR蛋白质产物。env基因编码结构蛋白，特别是病毒体包膜糖蛋白。env基因的主要蛋白质产物是gp160，其进一步加工成gp120和gp41。根据本发明的异源核酸序列优选编码gag、env和/或pol基因产物或其部分。
根据本发明的实施方案，HIV抗原是镶嵌HIV抗原。如本文所用，“镶嵌抗原”是指由天然序列的片段组装的重组蛋白。“镶嵌抗原”可以用计算机产生，并使用遗传算法进行优化。镶嵌抗原类似于天然抗原，但经过优化以最大化天然序列中发现的潜在T细胞表位的覆盖，从而提高免疫应答的广度和覆盖。
根据本发明的“镶嵌HIV抗原”是镶嵌HIV gag、env或pol抗原，或其任何部分或组合，更优选镶嵌HIV-1gag、env或pol抗原，或其任何部分或组合。镶嵌HIV gag、env和/或pol抗原是镶嵌抗原，其包含一种或多种衍生自HIV的gag、pol和env多蛋白序列的多个表位。根据本发明的镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的表位序列类似于天然HIV抗原的序列，但是被优化以呈现更广泛的可能的T细胞表位阵列以提高在循环HIV序列中发现的表位的覆盖。
例如，为了提供潜在T细胞表位的最大覆盖，设计镶嵌gag、pol和env抗原以提供一种或多种HIV进化枝的最佳覆盖。选择9个连续氨基酸(9-mer)片段的计算机重组序列序列数据库，其类似于真实蛋白质，并且最大化疫苗候选物和全局数据库之间9-mer序列匹配的数量。镶嵌HIV gag、pol和env抗原具有与天然抗原相似的结构域结构，并且完全由天然序列组成，没有人工连接。该pol抗原可以含有突变，以消除催化活性。单体env gp140镶嵌抗原可含有点突变以消除切割和融合活性。
在一个实施方案中，镶嵌HIV抗原是镶嵌HIV gag抗原，其包含衍生自gag基因产物序列的表位；镶嵌HIV抗原是镶嵌HIV pol抗原，其包含衍生自pol基因产物序列的表位；或镶嵌HIV抗原是镶嵌HIV env抗原，其包含衍生自env基因产物序列的表位。
在其他实施方案中，根据本发明的镶嵌HIV抗原包含衍生自gag、pol和/或env基因产物序列的表位的组合。示例性和非限制性实例包括具有衍生自env和pol基因产物序列的表位的镶嵌env-pol抗原；具有衍生自env和gag基因产物序列的表位的镶嵌env-gag抗原；具有衍生自gag和pol基因产物序列的表位的镶嵌gag-pol抗原；和具有衍生自gag和env基因产物序列的表位的镶嵌gag-env抗原。
根据本发明的实施方案，镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原可包含衍生自来自一个或多个进化枝的gag、pol和env基因产物序列的表位的组合。
镶嵌HIV Gag-Pol-Env抗原的实例包括在例如US20120076812,Barouch et al.,Nat Med 2010,16:319-323；Barouch et al.,Cell 155:1-9,2013中描述的那些，所有这些文献都通过引用整体并入本文。在本发明的某些实施方案中，由载体编码的镶嵌HIV抗原包含选自SEQ ID NO：1-4的氨基酸序列。在某些实施方案中，可以由本发明的初免疫苗和/或加强疫苗编码替代的和/或另外的HIV抗原，例如以进一步拓宽免疫应答。
根据本公开内容，可以使用本领域已知的方法产生镶嵌HIV抗原。参见，例如，US20120076812,Fischer et al,Nat Med,2007.13(1):p.100-6；Barouch et al.,Nat Med2010,16:319-323，所有这些文献都通过引用整体并入本文。
腺病毒载体
用于本发明方法的初免疫苗包含一种或多种腺病毒载体，特别是编码多于一种HIV抗原(例如镶嵌HIV抗原，如镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原)的人腺病毒26载体。如本文所用，符号“rAd”表示重组腺病毒，例如“rAd26”表示重组人腺病毒26。
人腺病毒血清型26的优点是人群中血清阳性率低和/或预先存在的中和抗体滴度低。在一些实施方案中，腺病毒载体是复制缺陷型重组病毒载体，例如复制缺陷型重组腺病毒26载体。
“腺病毒衣壳蛋白”是指腺病毒(例如，Ad26载体)衣壳上的蛋白质，其参与确定特定腺病毒的血清型和/或向性。腺病毒衣壳蛋白通常包括纤维、五邻体和/或六邻体蛋白。rAd26载体至少包含Ad26的六邻体，优选至少包含Ad26的六邻体和纤维。在优选的实施方案中，是Ad26的六邻体、五邻体和纤维。优选地，非衣壳蛋白也来自Ad26。
在某些实施方案中，用于本发明的重组腺病毒载体，主要或完全衍生自Ad26(即，该载体是rAd26)。在一些实施方案中，腺病毒是复制缺陷型的，例如，因为它在基因组的E1区中含有缺失。对于衍生自本发明中使用的Ad26的腺病毒，通常将腺病毒的E4-orf6编码序列与人亚组C的腺病毒(如Ad5)的E4-orf6进行交换。这允许这种腺病毒在表达Ad5的E1基因的熟知的互补细胞系(例如293细胞、PER.C6细胞等)中繁殖(参见例如Havenga,et al.,2006,J Gen Virol 87:2135-43；WO 03/104467)。然而，这种腺病毒不能在不表达Ad5的E1基因的非互补细胞中复制。因此，在某些实施方案中，腺病毒是血清型26的人腺病毒，其在已经克隆了编码一种或多种镶嵌HIV抗原的核酸的E1区中具有缺失，并且具有Ad5的E4orf6区。
重组腺病毒载体的制备是本领域熟知的。rAd26载体的制备描述于例如WO 2007/104792和Abbink et al.,(2007)Virol 81(9):4654-63中，两者均通过引用整体并入本文。Ad26的示例性基因组序列见于GenBank登录号EF153474和WO 2007/104792的SEQ ID NO：1。
通常，使用包含整个重组腺病毒基因组的核酸(例如，质粒、粘粒或杆状病毒载体)产生可用于本发明的腺病毒载体。
用于本发明的腺病毒载体通常是复制缺陷型。在这些实施方案中，通过缺失或失活对病毒复制至关重要的区域(例如E1区)使病毒是复制缺陷型。例如，通过在该区域内插入感兴趣的基因，例如编码HIV抗原的基因(通常与启动子连接)，可以基本上缺失或失活该区域。在一些实施方案中，本发明的载体可以在其他区域(例如E3区)中含有缺失，或在这些区域中含有与启动子连接的异源基因的插入。腺病毒的E3区中的突变不需要由细胞系互补，因为复制不需要E3。
包装细胞系通常用于产生足够量的用于本发明的腺病毒载体。包装细胞是包含在复制缺陷型载体中已经缺失或失活的那些基因的细胞，从而允许病毒在细胞中复制。合适的包装细胞系包括例如PER.C6、911和HEK293。
根据本发明的实施方案，任何镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原可以在本文所述的腺病毒26载体中表达。任选地，编码所述镶嵌HIV抗原的异源基因可进行密码子优化，以确保在处理的宿主(例如，人)中适当表达。密码子优化是本领域广泛应用的技术。通常，将编码镶嵌HIV抗原的异源基因克隆到腺病毒基因组的E1和/或E3区。分别编码具有SEQ ID NO：1-4的HIV抗原的密码子优化的核苷酸序列的非限制性实施方案在本文中分别以SEQ IDNO：5-8提供。
在本发明的优选实施方案中，一种或多种腺病毒26(Ad26)载体包含编码一种或多种镶嵌HIV env、gag和/或pol抗原的核酸。在其他优选的实施方案中，一种或多种Ad26载体编码一种或多种包含选自SEQ ID NO：1-4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原，并更优选编码三种具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原。
编码镶嵌HIV抗原的异源基因可以在腺病毒衍生的启动子(例如，主要晚期启动子)的控制下(即，可操作地连接)，或者可以在异源启动子的控制下。合适的异源启动子的实例包括巨细胞病毒(CMV)启动子和劳氏肉瘤病毒(RSV)启动子。优选地，启动子位于表达盒内编码镶嵌HIV抗原的异源基因的上游。在优选的实施方案中，异源启动子是CMV启动子。
MVA载体
用于本发明方法的加强疫苗包含一种或多种编码多于一种HIV抗原(例如镶嵌HIV抗原，如镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原)的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体。用于本发明的MVA载体利用衍生自MVA病毒的减毒病毒，其特征在于丧失其在人细胞系中繁殖复制的能力。MVA载体可以表达本领域技术人员已知的任何镶嵌HIV抗原，包括但不限于本文讨论的镶嵌HIV抗原，例如镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原。
MVA是通过真皮痘苗毒株安卡拉(绒毛膜尿囊痘苗病毒安卡拉病毒，CVA；综述参见Mayr et al.(1975)Infection 3,6-14)在鸡胚成纤维细胞上超过570次连续传代产生的，所述真皮痘苗病毒株安卡拉在Vaccination Institute,Ankara,Turkey维持多年，并用作人类疫苗接种的基础。然而，由于与痘苗病毒相关的通常严重的疫苗接种后并发症，有几次尝试产生更加减毒、更安全的天花疫苗。
在1960年至1974年期间，Prof.Anton Mayr成功地通过在CEF细胞中的超过570次连续传代来使CVA减毒(Mayr et al.(1975),Infection 3,6-14)。在各种动物模型中显示，所得到的MVA是无毒的(Mayr,A.&Danner,K.(1978),Dev.Biol.Stand.41:225-234)。作为早期开发MVA作为前天花疫苗的一部分，在有痘苗不良反应风险的对象中进行使用MVA-517联合Lister Elstree的临床试验(Stickl(1974),Prev.Med.3:97-101；Stickl andHochstein-Mintzel(1971),Munch.Med.Wochenschr.113:1149-1153)。1976年，从MVA-571种子原液(对应于第571次传代)衍生的MVA在德国被注册为两阶段肠胃外天花疫苗接种计划的初免疫苗。随后，在大约120,000名白种人个体，大多数是1至3岁的儿童中使用MVA-572，没有报告严重的副作用，即使许多对象是与痘苗相关的并发症的高风险人群(Mayr etal.(1978),Zentralbl.Bacteriol.(B)167:375-390)。MVA-572以ECACC V94012707保藏在European Collection of Animal Cell Cultures。
作为用于使MVA减毒的传代的结果，存在许多不同的毒株或分离株，这取决于在CEF细胞中进行的传代的数量。例如，在天花根除计划期间，MVA-572以小剂量在德国用作前疫苗，并且MVA-575被广泛用作兽医疫苗。与祖先CVA病毒相比，MVA以及MVA-BN缺乏约15％(来自六个区域的31kb)的基因组。缺失影响许多毒力和宿主范围基因，以及A型包涵体的基因。MVA-575于2000年12月7日保藏于European Collection of Animal Cell Cultures(ECACC)，保藏号为V00120707。通过在原代鸡胚成纤维细胞上连续繁殖(超过570代)CVA获得减毒的CVA病毒MVA(修饰的痘苗病毒安卡拉)。
尽管Mayr等人在20世纪70年代证明MVA在人类和哺乳动物中高度减毒和无毒，某些研究者报道MVA在哺乳动物和人类细胞系中没有完全减毒，因为在这些细胞中可能发生残留的复制(Blanchard et al.(1998),J.Gen.Virol.79:1159-116779；Carroll&Moss(1997),Virology 238:198-211；U.S.Patent No.5,185,146；81)。假定这些出版物中报道的结果是用各种已知的MVA毒株获得的，因为所用的病毒的性质基本上不同，特别是它们在各种细胞系中的生长行为。由于各种原因，包括与人类使用相关的安全性问题，这种残留复制是不希望的。
例如由Bavarian Nordic已经开发了具有增强的安全谱的MVA毒株，用于开发更安全的产品，例如疫苗或药物。MVA由Bavarian Nordic进一步传代，并被指定为MVA-BNA。MVA-BN的代表性样品于2000年8月30日保藏在European Collection of Animal CellCultures(ECACC)，保藏号为V00083008。MVA-BN进一步描述于WO 02/42480(US2003/0206926)和WO 03/048184(US2006/0159699)中，两者均通过引用整体并入本文。
MVA的“衍生物”或“变体”是指与本文所述的MVA表现出基本相同的复制特征的病毒，但在其基因组的一个或多个部分中表现出差异。例如，MVA-BN以及MVA-BN的衍生物或变体未能在人和小鼠体内进行繁殖复制，即使在严重免疫抑制的小鼠中也是如此。更具体地，MVA-BN或MVA-BN的衍生物或变体优选还在鸡胚成纤维细胞(CEF)中具有繁殖复制的能力，但在以下中没有繁殖复制能力：人角质形成细胞系HaCat(Boukamp et al(1988),J.CellBiol.106:761-771)、人骨肉瘤细胞系143B(ECACC保藏号91112502)、人胚肾细胞系293(ECACC保藏号85120602)和人子宫颈腺癌细胞系HeLa(ATCC保藏号CCL-2)。另外，MVA-BN的衍生物或变体具有比Hela细胞和HaCaT细胞系中的MVA-575低至少两倍，更优选低三倍的病毒扩增比率。MVA变体的这些性质的测试和测定描述于WO 02/42480(US 2003/0206926)和WO 03/048184(US 2006/0159699)中。
术语“不能繁殖复制”或“不具有繁殖复制能力”例如描述于WO 02/42480中，其也教导了如何获得具有上述所需特性的MVA。该术语适用于使用WO 02/42480或美国专利No.6,761,893(两者均通过引用整体并入本文)中描述的测定在感染后4天具有小于1的病毒扩增比率的病毒。
术语“未能繁殖复制”是指在感染后4天具有小于1的病毒扩增比率的病毒。WO 02/42480或美国专利No.6,761,893中描述的测定可用于测定病毒扩增比率。
病毒的扩增或复制通常表示为从感染细胞产生的病毒(输出)与最初用于感染细胞的原始量(输入)的比率，并且被称为“扩增比率”。扩增比率“1”定义了从感染细胞产生的病毒量与最初用于感染细胞的量相同的扩增状态，这意味着感染的细胞允许病毒感染和繁殖。相反，扩增比率小于1，即与输入水平相比输出降低，表明缺乏繁殖复制并因此使病毒减毒。
基于MVA的疫苗的优点包括其安全谱以及大规模疫苗生产的可用性。此外，除了其功效之外，工业规模制造的可行性也是有益的。另外，基于MVA的疫苗可以递送多种异源抗原并允许同时诱导体液和细胞免疫。
可用本领域已知的方法制备用于本发明的MVA载体，例如WO/2002/042480、WO/2002/24224、US20110159036、US 8197825等中所述的那些，其相关公开内容通过引用并入本文。
在另一方面，复制缺陷型MVA病毒株也可适用于本发明，例如毒株MVA-572和MVA-575，或任何其他类似减毒的MVA毒株。同样合适的可以是突变型MVA，例如缺失的绒毛膜尿囊痘苗病毒安卡拉(dCVA)。dCVA包含MVA基因组的delI、delII、delIII、delIV、delV和delVI缺失位点。这些位点对于插入多个异源序列特别有用。dCVA可以在人细胞系(例如人293、143B和MRC-5细胞系)中繁殖复制(扩增比率大于10)，然后能够通过对基于病毒的疫苗接种策略有用的进一步突变进行优化(参见例如WO 2011/092029)。
在本发明的优选实施方案中，一种或多种MVA载体包含编码一种或多种镶嵌HIVenv、gag和/或pol抗原的核酸。在其他优选的实施方案中，一种或多种MVA载体编码一种或多种包含选自SEQ ID NO：1-4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原，更优选编码四种具有SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原。
编码镶嵌HIV抗原的核酸序列可以插入MVA的一个或多个基因间区域(IGR)。在某些实施方案中，IGR选自IGR 07/08、IGR44/45、IGR 64/65、IGR 88/89、IGR 136/137和IGR148/149。在某些实施方案中，少于5个、4个、3个或2个重组MVA的IGR包含编码HIV抗原(例如镶嵌HIV抗原)的异源核苷酸序列。另外或可替代地，异源核苷酸序列可以插入一个或多个天然存在的缺失位点，特别是插入MVA基因组的主要缺失位点I、II、III、IV、V或VI中。在某些实施方案中，少于5个、4个、3个或2个重组MVA的天然存在的缺失位点包含编码镶嵌HIV抗原的异源核苷酸序列。
包含编码HIV抗原的异源核苷酸序列的MVA的插入位点的数目可以是1、2、3、4、5或更多。在某些实施方案中，将异源核苷酸序列插入4、3、2或更少的插入位点。优选地，使用两个插入位点。在某些实施方案中，使用三个插入位点。优选地，重组MVA包含插入2或3个插入位点的至少2个、3个、4个、5个、6个或7个基因。
本文提供的重组MVA病毒可以通过本领域已知的常规方法产生。获得重组痘病毒或将外源编码序列插入痘病毒基因组的方法是本领域技术人员熟知的。例如，标准分子生物学技术的方法，例如克隆DNA、DNA和RNA分离、Western印迹分析、RT-PCR和PCR扩增技术描述于Molecular Cloning,A laboratory Manual(2nd Ed.)(J.Sambrook et al.,ColdSpring Harbor Laboratory Press(1989))，以及病毒处理和操纵技术描述于VirologyMethods Manual(B.W.J.Mahy et al.(eds.),Academic Press(1996))。类似地，MVA的处理、操纵和基因工程的技术和技术秘密描述于Molecular Virology:A PracticalApproach(A.J.Davison&R.M.Elliott(Eds.),The Practical Approach Series,IRLPress at Oxford University Press,Oxford,UK(1993)(参见例如Chapter 9:Expressionof genes by Vaccinia virus vectors))和Current Protocols in Molecular Biology(John Wiley&Son,Inc.(1998)(参见例如Chapter 16,Section IV:Expression ofproteins in mammalian cells using vaccinia viral vector))。
为了产生本文公开的各种重组MVA，可以应用不同的方法。可将待插入病毒的DNA序列置于大肠杆菌质粒构建体中，其中已插入与MVA的DNA段同源的DNA。分别地，待插入的DNA序列可以与启动子连接。启动子-基因连接物(linkage)可位于质粒构建体中，使得启动子-基因连接物的两端侧翼为与含有非必需基因座的MVA DNA区域侧翼的DNA序列同源的DNA。得到的质粒构建体可以通过在大肠杆菌细菌内繁殖而扩增并分离。含有待插入的DNA基因序列的分离的质粒可以转染到例如鸡胚成纤维细胞(CEF)的细胞培养物中，同时培养物用MVA感染。分别在质粒和病毒基因组中的同源MVA DNA之间的重组可以产生通过外源DNA序列的存在而修饰的MVA。
根据优选的实施方案，可以用痘病毒感染合适细胞培养物的细胞，例如CEF细胞。随后，用包含一个或多个外源或异源基因的第一质粒载体转染感染的细胞，优选在痘病毒表达控制元素的转录控制下。如上所述，质粒载体还包含能够指导外源序列插入痘病毒基因组的选定部分的序列。任选地，质粒载体还含有包含与痘病毒启动子可操作连接的标记和/或选择基因的盒。
合适的标记或选择基因是例如编码绿色荧光蛋白、β-半乳糖苷酶、新霉素-磷酸核糖基转移酶或其他标记的基因。选择或标记盒的使用简化了所产生的重组痘病毒的鉴定和分离。然而，也可以通过PCR技术鉴定重组痘病毒。随后，可以用如上所述获得的重组痘病毒感染另外的细胞，并用包含一个或多个第二外源或异源基因的第二载体转染。在该情况下，该基因将被引入痘病毒基因组的不同插入位点，第二载体的不同也在于指导一个或多个第二外源基因整合到痘病毒的基因组中的痘病毒同源序列。在发生同源重组后，可以分离包含两个或更多个外源或异源基因的重组病毒。为了将额外的外源基因引入重组病毒中，可以重复通过使用先前步骤中分离的重组病毒进行感染并通过使用包含另外的一个或多个外源基因的另外的载体进行转染来进行感染和转染步骤。
或者，如上所述的感染和转染步骤是可互换的，即，首先可以通过包含外源基因的质粒载体转染合适的细胞，然后用痘病毒感染。作为进一步的替代，也可以将每个外源基因引入不同的病毒，用所有得到的重组病毒共-感染细胞并筛选包括所有的外源基因的重组体。第三种替代是体外连接DNA基因组和外源序列，并使用辅助病毒重建重组痘苗病毒DNA基因组。第四种替代是在大肠杆菌或另外的细菌物种中，在作为细菌人工染色体(BAC)克隆的痘苗病毒基因组和线性外源序列之间进行同源重组，所述线性外源序列侧翼是与痘苗病毒基因组中所需的整合位点侧翼的序列同源的DNA序列。
编码一种或多种镶嵌HIV抗原的异源核酸可以在一种或多种痘病毒启动子的控制下(即，可操作地连接)。在某些实施方案中，痘病毒启动子是Pr7.5启动子、杂合早/晚启动子、或PrS启动子、PrS5E启动子、合成或天然早或晚启动子、或牛痘病毒ATI启动子。
在某些实施方案中，第一MVA载体表达具有SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3的抗原，且第二MVA载体表达具有SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4的抗原。
免疫原性组合物
免疫原性组合物是用于本发明的包含免疫原性有效量的纯化或部分纯化的腺病毒26或MVA载体的组合物。载体可编码一种镶嵌HIV抗原或多种镶嵌HIV抗原，例如镶嵌HIVgag、pol和/或env抗原。根据本公开，腺病毒26和MVA载体可以编码任何镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原。由腺病毒26载体编码的一种或多种镶嵌HIV抗原可以与由MVA载体编码的一种或多种镶嵌HIV抗原相同或不同。根据本领域熟知的方法，所述组合物可以配制成疫苗(也称为“免疫原性组合物”)，例如初免疫苗或加强疫苗。此类组合物可包含佐剂以增强免疫应答。制剂中每种组分的最佳比率可以通过本领域技术人员熟知的技术根据本公开内容确定。
如本文所用，“免疫原性有效量”或“免疫有效量”是指足以在有此需要的对象中诱导所需免疫效果或免疫应答的组合物或载体的量。在一个实施方案中，免疫原性有效量是指足以在有此需要的对象中诱导免疫应答的量。在另一个实施方案中，免疫原性有效量是指足以在有此需要的对象中产生免疫的量，例如，提供针对疾病例如HIV感染的治疗效果。免疫原性有效量可以根据多种因素，例如身体状况如对象、年龄、体重、健康状况等而变化。根据本公开内容，本领域普通技术人员可以容易地确定免疫原性有效量。
作为一般指导，当涉及重组病毒载体使用时，免疫原性有效量的范围可以是约106个病毒颗粒(vp)或噬斑形成单位(pfu)至约1012个病毒颗粒或噬斑形成单位，例如106、107、108、109、1010、1011或1012个病毒颗粒或噬斑形成单位。免疫原性有效量可以以单一组合物施用，或以多种组合物施用，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种组合物(例如，片剂、胶囊或可注射的)，其中施用多个片剂、胶囊或注射剂共同为对象提供免疫原性有效量。在所谓的初免-加强方案中，还可以向对象施用免疫原性有效量，随后向同一对象施用另一剂的免疫原性有效量。初免-加强方案的一般概念是疫苗领域技术人员所熟知的。根据需要，可以任选地将进一步的加强施用添加到该方案中。
在一个实施方案中，免疫原性组合物是用于初免免疫应答的初免疫苗。根据本发明的实施方案，初免疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的腺病毒26(Ad26)载体和药学上可接受的载剂。在一些实施方案中，Ad26载体编码一种或多种包含选自SEQ ID NO：1、3和4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原。在一些实施方案中，Ad26载体编码三种具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原。镶嵌HIV抗原可以由相同的Ad26载体或不同的Ad26载体进行编码，例如一种、两种、三种、四种或更多种Ad26载体。
免疫原性有效量的一种或多种Ad26载体可以是约108、109、1010、1011或1012个病毒颗粒(vp)，优选约109-1011个病毒颗粒，更优选约1010个病毒颗粒，例如约0.5×1010、1×1010、2×1010、3×1010、4×1010、5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010或10×1010个病毒颗粒。在某些实施方案中，免疫原性有效量是约5×1010个病毒颗粒，使得一种或多种Ad26载体以约5×1010个病毒颗粒的总剂量施用。
用于本发明的初免疫苗可包含一种Ad26载体，或多种Ad26载体，例如2、3、4或更多种Ad26载体，其编码相同或不同的镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原。因此，免疫原性有效量可以来自一种Ad26载体或多种Ad26载体。例如，初免疫苗中约108至1012个病毒颗粒(例如约5×1010个病毒颗粒)的总施用剂量可以来自三种Ad26载体，每种载体编码不同的镶嵌HIV抗原，例如SEQ ID NO：1、3和4所示的那些。
在具体实施方案中，免疫原性有效量的编码SEQ ID NO：1、3和4的Ad26载体由三种Ad26载体组成，其中第一Ad26载体编码SEQ ID NO：1的镶嵌HIV抗原，第二Ad26载体编码SEQID NO：3的镶嵌HIV抗原和第三Ad26载体编码SEQ ID NO：4的镶嵌HIV抗原序列。优选地，第一、第二和第三Ad26载体以约1010-1011个病毒颗粒(例如约5×1010个病毒颗粒)的总剂量施用。
根据本发明的实施方案，当初免疫苗包含多于一种Ad26载体时，组合物中可以包含任何比率的Ad26载体以获得所需的免疫原性有效量。作为说明性和非限制性实例，可以以约1：2、1：1或2：1的比率包括两种Ad26载体；并且在非限制性示例性实施方案中，可以分别以约1：1：1、1：1：2、1：2：1或2：1：1的比率包括由第一、第二和第三Ad26载体组成的三种Ad26载体。在具体实施方案中，初免疫苗包含三种Ad26载体，其由分别编码SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的镶嵌HIV抗原的第一、第二和第三Ad26载体以约2：1：1的比率组成。
在另一实施方案中，免疫原性组合物是加强疫苗。根据本发明的实施方案，加强疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的MVA载体和药学上可接受的载剂。在一些实施方案中，MVA载体编码一种或多种包含选自SEQID NO：1-4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原。在其他实施方案中，MVA载体编码四种具有SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原。镶嵌HIV抗原可以由相同的MVA载体或不同的MVA载体编码，例如一种、两种、三种、四种或更多种MVA载体。
加强疫苗中免疫原性有效量的一种或多种MVA载体可以是约106、107、108、109或1010噬斑形成单位(pfu)，优选约107-109pfu，更优选约108pfu，例如约0.5×108、1×108、2×108、3×108、4×108或5×108pfu。在某些实施方案中，免疫原性有效量为约1×108pfu，使得一种或多种MVA载体以约1×108pfu的总剂量施用。
用于本发明的加强疫苗可包含一种MVA载体或多种MVA载体，例如2、3、4或更多种MVA载体，其编码相同或不同的镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原。因此，免疫原性有效量可以来自一种MVA载体或多种MVA载体。例如，加强疫苗中约106至1010pfu(例如约1×108pfu)的总施用剂量，可以来自两种MVA载体，每种载体编码不同的镶嵌HIV抗原，例如SEQ ID NO：1、2、3和4中所示的那些。
在具体实施方案中，免疫原性有效量的编码SEQ ID NO：1、2、3和4的MVA载体由两种MVA载体组成，其中第一MVA载体编码SEQ ID NO：1和3的镶嵌HIV抗原，且第二MVA载体编码SEQ ID NO：2和4的镶嵌HIV抗原。优选地，第一和第二MVA载体以约108pfu(例如约1×108pfu)的总剂量施用。
根据本发明的实施方案，当加强疫苗包含多于一种MVA载体时，组合物中可以包括任何比率的MVA载体以获得所需的免疫原性有效量。作为说明性和非限制性实例，可以以约1：2、1：1或2：1的比率包括两种MVA载体。在具体实施方案中，初免疫苗包含两种MVA载体，其由编码SEQ ID NO：1和3的镶嵌HIV抗原的第一MVA载体和编码SEQ ID NO：2和4的镶嵌HIV抗原的第二MVA载体以约1：1的比率组成。
免疫原性组合物的制备和用途是本领域普通技术人员所熟知的。液体药物组合物通常包括液体载剂，例如水、石油、动物或植物油、矿物油或合成油。还可以包括生理盐水溶液、右旋糖或其他糖溶液或二醇如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。本发明中使用的免疫原性组合物，例如初免疫苗和加强疫苗，可以根据本公开内容根据本领域已知的任何方法配制用于施用，并且优选配制用于肌内施用。
除了编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的腺病毒26或MVA载体外，初免和/或加强免疫可包含其他抗原。与腺病毒26和/或MVA载体组合使用的其他抗原对本发明不是关键的，并且可以是，例如，其他HIV抗原和表达它们的核酸。
用于本发明的免疫原性组合物任选地可进一步包含佐剂。适合于根据本发明的共同施用的佐剂应该是对人潜在安全、良好耐受和有效的佐剂。非限制性实例包括QS-21、Detox-PC、MPL-SE、MoGM-CSF、TiterMax-G、CRL-1005、GERBU、TERamide、PSC97B、Adjumer、PG-026、GSK-1、GcMAF、B-alethine、MPC-026、Adjuvax、CpG ODN、Betafectin、铝盐如磷酸铝(例如AdjuPhos)或氢氧化铝、和MF59。
根据本发明的实施方案，用于初免和加强免疫应答的免疫原性组合物包含药学上可接受的载剂，例如药学上可接受的赋形剂、载剂、缓冲剂、稳定剂或本领域技术人员熟知的其他材料。这些材料应无毒，并且不应干扰活性成分的功效。载剂或其他材料的确切性质可取决于施用途径，例如肌内、皮下、口腔、皮内、皮肤、粘膜内(例如肠)、鼻内或腹膜内途径。优选地，包含在初免和加强疫苗中的药学上可接受的载剂适合于肌内施用。
诱导免疫应答的方法
本发明提供了一种使用腺病毒初免疫苗与MVA加强疫苗组合在接受抗逆转录病毒疗法的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的对象中初免和加强针对HIV的免疫应答的方法。根据本发明实施方案的初免和加强免疫应答的方法有效诱导针对一个或多个HIV进化枝的免疫应答。
在一个一般方面，在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的人类对象中诱导针对HIV的免疫应答的方法，包括：
(i)向人类对象施用初免疫苗，所述初免疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的Ad26载体和药学上可接受的载剂；和
(ii)向人类对象施用加强疫苗，所述加强疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的MVA载体和药学上可接受的载剂。
在某些实施方案中，在最初施用初免疫苗后约12-52周，例如约16-32，例如约22-26，例如约24周首次施用加强疫苗。基于本文的教导和临床经验，本领域普通技术人员将能够改变初免和加强疫苗的确切时间、其施用频率、剂量等。
本文所述的任何初免和加强疫苗组合物均可用于根据本发明诱导针对HIV的免疫应答的方法中。在上文和以下说明性实施例中详细讨论了可用于本发明方法的初免疫苗；加强疫苗；Ad26载体；MVA载体；由Ad26和MVA载体编码的HIV gag、pol和/或env抗原等的实施方案。
根据本发明的实施方案，当参考本文所述的方法使用时，“诱导免疫应答”包括在有此需要的对象中引起所需的免疫应答或效果以抵抗感染，例如HIV感染，优选用于治疗目的。“诱导免疫应答”还包括提供用于治疗病原体即HIV的治疗性免疫。如本文所用，术语“治疗性免疫”或“治疗性免疫应答”是指HIV感染的疫苗接种对象能够控制接种疫苗所针对的病原体(即HIV)的感染。在一个实施方案中，“诱导免疫应答”是指引起或提高针对HIV感染的细胞免疫，例如T细胞应答。通常，根据本发明实施方案的初免和加强疫苗组合物的施用将具有治疗目的，以在HIV感染或发展出HIV感染特征性症状后产生针对HIV的免疫应答。
根据本文所述的本发明方法治疗的患者群体是HIV感染的人类对象，特别是接受抗逆转录病毒疗法(ART)的HIV感染的人类对象。本文所用的术语“HIV感染”和“HIV感染的”是指HIV侵入人类宿主。如本文所用，“HIV感染的人类对象”是指HIV侵入并随后在人类宿主内复制和繁殖的人类对象，从而导致人类宿主感染HIV或具有HIV感染或其症状。
如本文所用，“接受抗逆转录病毒疗法”是指正在施用或已经开始用抗逆转录病毒药物治疗的人类对象，特别是HIV感染的人类对象。根据本发明的实施方案，抗逆转录病毒疗法(ART)开始于首次施用初免疫苗之前，例如，在之前约2至6周，例如在之前约2、3、4、5或6周，或者在之前2-24个月，例如在之前约2、3、5、6、8、12、16、20或24个月或更长时间。在某些实施方案中，ART开始于首次施用初免疫苗之前约4周。在接受抗逆转录病毒疗法的对象中，在施用本发明的初免/加强免疫方案期间继续进行抗逆转录病毒疗法。
在某些实施方案中，接受抗逆转录病毒疗法的人类对象处于当前稳定的ART至少四周，并且在开始根据本发明的初免/加强疫苗方案前至少24周至至少52周，并且优选地至少48周具有小于50拷贝/mL的血浆HIV核糖核酸(RNA)水平。然而，在此期间(例如在开始初免/加强疫苗方案之前的48周内)，人类对象可以具有一个或多个血浆HIV RNA大于50拷贝/ml至小于200拷贝/ml的短暂偏差(blip)(即，情况)，条件是在开始初免/加强疫苗方案之前最近的筛查小于50拷贝/ml。
在优选的实施方案中，对象在急性HIV感染期间开始ART。术语“急性HIV感染”是指HIV感染的初始阶段。一般来说，HIV感染有三个阶段：(1)急性HIV感染，(2)临床潜伏，(3)获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。在急性HIV感染期间，由于身体对HIV感染的天然应答，宿主通常会出现症状例如发烧、腺体肿胀、喉咙痛、皮疹、肌肉和关节疼和痛、头痛等。在感染的急性期，在宿主中产生大量的HIV病毒，并且CD4水平可以迅速降低，因为HIV使用CD4复制然后随后破坏CD4。一旦宿主的天然免疫应答使宿主中的HIV水平达到稳定水平(也称为病毒设定点)，CD4计数开始增加，但可能不会达到感染前的水平。急性HIV感染的特征还在于Fiebig I、II、III和IV期。
急性HIV感染通常在宿主暴露于HIV并感染HIV后的两到四周内，并持续另外两到四周。急性HIV感染阶段持续到宿主产生其自身针对HIV的抗体，此时临床潜伏阶段开始。在临床潜伏阶段期间，HIV在宿主中生存或发展而不引起任何症状，或仅引起轻微症状。HIV在临床潜伏阶段期间以非常低的水平繁殖，尽管HIV仍处于活跃状态。临床潜伏阶段有时也称为“慢性HIV感染”或“无症状HIV感染”。在本发明的某些实施方案中，对象在初次HIV感染诊断的4周内，优选3周内，更优选2周内开始ART。
根据本发明的实施方案，在急性HIV感染期间开始ART的对象在暴露于HIV并感染HIV后约2周至约8周(例如在暴露和感染后约2、3、4、5、6、7或8周)开始用抗逆转录病毒药物治疗。在急性HIV感染期间开始ART并且血浆HIV RNA水平小于50拷贝/mol至少24周，优选至少48周的对象具有低HIV病毒储库，因此在缺少ART的情况下具有维持病毒抑制的高机会，即HIV缓解。
根据本公开，接受ART的对象可以施用本领域已知的任何抗逆转录病毒药物或用本领域已知的任何抗逆转录病毒药物治疗。ART是治疗HIV的药物，尽管药物不会杀死或治愈病毒。但是，当组合服用时，它们可以防止病毒的生长。当病毒减慢时，HIV疾病也会减慢。抗逆转录病毒药物被称为ARV。组合ARV疗法(cART)被称为高活性ART(HAART)。本领域普通技术人员将能够确定适当的抗逆转录病毒治疗、施用频率、ART剂量等，以便与同时施用的本发明的Ad26初免/MVA加强疫苗方案相容。用于ART的抗逆转录病毒药物的实例包括但不限于核苷逆转录酶抑制剂(NRTI，其非限制性实例包括齐多夫定、去羟肌苷、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、替诺福韦、combivir[齐多夫定和拉米夫定的组合]、trizivir[齐多夫定、拉米夫定和阿巴卡韦的组合]、恩曲他滨、truvada[恩曲他滨和替诺福韦的组合]和epzicom[阿巴卡韦和拉米夫定的组合])，非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI，其非限制性实例包括奈韦拉平、delavirdine、efavirenz、etravirine和利匹韦林)，蛋白酶抑制剂(PI，其非限制性实例包括沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、奈非那韦、氨普那韦、洛匹那韦/利托那韦、阿扎那韦、呋山那韦、替拉那韦、达芦那韦)，整合酶抑制剂(INSTI，非限制性实例包括拉替拉韦、艾维雷韦和dolutegravir)，以及融合抑制剂，进入抑制剂和/或趋化因子受体拮抗剂(FI、CCR5拮抗剂；非限制性实例包括恩夫韦肽、阿拉韦罗、马拉韦罗、维立韦罗和cnicriviroc)。
在根据本发明的诱导针对HIV的免疫应答的方法中，对接受ART的HIV感染的人类对象施用至少一次的初免疫苗和至少一次的加强疫苗。根据本发明的实施方案，在最初施用初免疫苗后约22-26周，例如22、23、24、25或26周首次施用加强疫苗。在某些实施方案中，在最初施用初免疫苗后约24周首次施用加强疫苗。
在一些实施方案中，在最初施用初免疫苗后再次施用初免疫苗，并且优选在首次施用加强疫苗之前再次施用。例如，可以在最初施用初免疫苗后约10-14周，例如在最初施用初免疫苗后约10、11、12、13或14周，优选在最初施用初免疫苗后约12周再次施用初免疫苗。
在其他实施方案中，在首次施用加强疫苗后再次施用加强疫苗。可以在最初施用初免疫苗后约46至50周，例如46、47、48、49或50周施用加强疫苗。在某些优选的实施方案中，在最初施用初免疫苗后约48周再次施用加强疫苗。
在本发明的具体实施方案中，将初免疫苗和加强疫苗均再次施用于对象。可以在最初施用初免疫苗后约10-14周，例如约12周再次施用初免疫苗；并且可以在最初施用初免疫苗后约46至50周，例如约48周再次施用加强疫苗。
进一步的加强施用是可能的，并且所公开方法的实施方案还考虑用含有Ad26载体和/或MVA载体的免疫原性组合物施用这种额外的加强免疫。本文描述的任何Ad26载体和MVA载体均可用于额外的加强免疫。优选地，用包含编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和env抗原(例如包含SEQ ID NO：1-4的氨基酸序列的那些)的MVA载体的免疫原性组合物进行任何额外的加强免疫。
初免和加强疫苗组合物可以根据本公开内容通过本领域已知的任何方法施用，并且通常通过肌内、皮内或皮下施用，优选肌内施用来施用。通过使用针注射腺病毒和/或MVA载体的悬浮液可以实现肌内施用。一种替代是使用无针注射装置来施用组合物(例如使用BiojectorTM)或含有疫苗的冷冻干燥粉末。
还设想了其他施用方式，例如静脉内、皮肤、皮内或鼻腔。对于静脉内、皮肤或皮下注射，载体将是肠胃外可接受的水溶液形式，其不含热原并具有合适的pH、等渗性和稳定性。本领域普通技术人员能够使用例如等渗媒介物如氯化钠注射液、林格氏注射液和乳酸林格氏注射液制备合适的溶液。根据需要，可以包括防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其他添加剂。也可以使用缓释制剂。
在一个示例性方案中，包含一种或多种腺病毒26载体的初免疫苗以约100μl至约2ml，优选约0.5ml的含有约108至1012个病毒颗粒/ml的浓度的盐水溶液的量施用(例如，肌内施用)。最初初免疫苗接种后如上所述后接加强。包含一种或多种MVA载体的加强疫苗以约100μl至约2ml，优选约0.5ml的含有约106至109个颗粒形成单位/ml的浓度的盐水溶液的量施用(例如，肌内施用)。技术人员将理解，某些因素可能影响有效治疗对象所需的剂量，包括但不限于疾病或病症的严重程度、先前的治疗、对象的整体健康和/或年龄以及存在的其他疾病。
在优选的实施方案中，在完成根据本发明的实施方案的疫苗方案后，对象接受ART的中断(也称为中止，在本文中可互换使用)。在一些实施方案中，在完成根据本发明的实施方案的疫苗方案后，对象可以接受抗逆转录病毒分析治疗中断(ARV ATI)。本发明中使用的“抗逆转录病毒分析治疗中断”和“ARV ATI”是指中止用抗逆转录病毒药物治疗，以便在没有持续ART的情况下评估病毒抑制和病毒血控制。通常，当对象具有血浆HIV RNA水平小于50拷贝/mL至少约52周时，对象可以接受ARV ATI，即，可以中止ART，但是即使对象在此期间具有一个或多个血浆HIV RNA大于50拷贝/ml至小于200拷贝/ml的短暂偏差(blip)(即，情况)，对象仍然可以接受ARV ATI，条件是在开始初免/加强疫苗方案之前最近的筛查小于50拷贝/ml
根据本发明的实施方案，ART可在施用最后加强疫苗后约10-14周后停止，例如10、11、12、13或14周。在某些实施方案中，在最初施用初免疫苗后约46-50周施用最后加强疫苗。在这些实施方案中，可以在最初施用初免疫苗后约58至62周，例如58、59、60、61或62周，并且优选在最初施用初免疫苗后约60周，停止ART。在其他实施方案中，对于进行基于非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)的ART的对象，可以在停止ART之前施用加强的蛋白酶抑制剂代替NNRTI约1-2周以降低发展NNRTI耐药的风险。还可以在ATI阶段期间施用活化剂(例如组蛋白脱乙酰酶抑制剂)以活化任何(例如潜伏的)HIV储库，从而提高免疫应答。
可以监测接受ARV ATI的对象，例如通过测量血浆HIV RNA水平。例如，ARV ATI开始后的监测可以在最有可能发生反弹病毒血症的前六周内每周最多进行两次。“反弹病毒血症”定义为ARV ATI后血浆HIV RNA水平大于1,000拷贝/ml。可以在具有反弹病毒血症的对象中再次开始ART。优选地，根据本发明的方法治疗的对象将在ART中断后维持病毒血控制。如本文所用，“维持病毒血控制”定义为ARV ATI后血浆HIV RNA小于50拷贝/mL至少24周。如果有一个或多个血浆HIV RNA大于50拷贝/ml至小于1000拷贝/ml的情况，只要对象血浆HIV RNA水平没有在间隔至少一周的连续两次测定中超过1000拷贝/ml，仍然认为符合“维持的病毒控制”标准。
通常(不使用本发明的方法)人类HIV感染的对象在ART中断后2-3周后返回病毒血症。不希望受任何理论的束缚，据信在完全抑制HIV的个体中使用根据本发明实施方案的腺病毒初免疫苗和MVA加强疫苗的疫苗疗法将导致可测量的免疫应答并在ARV ATI后维持病毒血控制。在一些实施方案中，对象可在根据本发明的方法治疗后中止ART。ART的中止可以是长时间的(例如，至少24周，优选更长，例如至少约28、32、36、40、44、48、52周，16个月，18、20、22、24个月，甚至更长)。ART停止或中止的这段时间被称为“假期”或“ART假期”或“治疗假期”。在其他实施方案中，根据本发明方法的疫苗疗法可以提供HIV缓解，这意味着在没有ART的情况下维持病毒抑制。在本发明的某些实施方案中，接受本发明的初免和加强疫苗的人类对象中止ART，并在中止ART后维持病毒抑制至少24周。
本发明还涉及用于在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的人类对象中诱导针对HIV的免疫应答的疫苗组合，其中所述疫苗组合包含根据本发明的实施方案的初免疫苗和加强疫苗。本发明还涉及疫苗组合在制备用于在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的人类对象中诱导针对HIV的免疫应答的药物中的用途，其中所述疫苗组合包含根据本发明实施方案的初免疫苗和加强疫苗。本文中关于在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的人类对象中诱导针对HIV的免疫应答的方法中所述的本发明的所有方面和实施方案可以应用于疫苗组合，以用于疫苗组合在制备用于在接受ART的HIV感染的对象中诱导针对HIV的免疫应答的药物中的一种和/或多种用途。
实施方案
实施方案1是在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的人类对象中诱导针对HIV的免疫应答的方法，该方法包括：
(i)向人类对象施用初免疫苗，所述初免疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的腺病毒26(Ad26)载体和药学上可接受的载剂；和
(ii)向人类对象施用加强疫苗，所述加强疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体和药学上可接受的载剂。
实施方案2是根据实施方案1的方法，其中在最初施用初免疫苗后约12-52周首次施用加强疫苗，优选其中在最初施用初免疫苗后约22-26周首次施用加强疫苗。
实施方案3是根据实施方案1或实施方案2的方法，其中所述初免疫苗包含编码一种或多种包含选自SEQ ID NO：1、3和4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的Ad26载体；并且所述加强疫苗包含一种或多种编码一种或多种包含选自SEQ ID NO：1-4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的MVA载体。
实施方案4是根据实施方案3的方法，其中所述初免疫苗包含编码三种具有SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的Ad26载体；并且所述加强疫苗包含编码四种具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的MVA载体。
实施方案5是根据实施方案4的方法，其中免疫原性有效量的编码SEQ ID NO：1、3和4的镶嵌HIV抗原的Ad26载体由三种Ad26载体组成，其中第一Ad26载体编码SEQ ID NO：1的镶嵌HIV抗原，第二Ad26载体编码SEQ ID NO：3的镶嵌HIV抗原，且第三Ad26载体编码SEQID NO：4的镶嵌HIV抗原。
实施方案6是根据实施方案1至5中任一项的方法，其中所述初免疫苗和加强疫苗通过肌内注射施用。
实施方案7是根据实施方案5的方法，其中所述第一、第二和第三Ad26载体以约5×1010个病毒颗粒(vp)的总剂量施用。
实施方案8是根据实施方案7的方法，其中约5×1010vp的总剂量以0.5ml的体积肌内施用。
实施方案9是根据实施方案7或实施方案8的方法，其中所述第一、第二和第三Ad26载体的比率分别为约2：1：1。
实施方案10是根据实施方案3-5中任一项的方法，其中免疫原性有效量的编码SEQID NO：1、2、3和4的镶嵌HIV抗原的MVA载体由两种MVA载体组成，其中第一MVA载体编码SEQID NO：1和3的镶嵌HIV抗原，且第二MVA载体编码SEQ ID NO：2和4的镶嵌HIV抗原。
实施方案11是根据实施方案10的方法，其中第一和第二MVA载体以约1×108噬斑形成单位(pfu)的总剂量施用。
实施方案12是根据实施方案11的方法，其中约1×108pfu的总剂量以0.5ml的体积肌内施用。
实施例13是根据实施例11或实施例12的方法，其中第一和第二MVA载体的比率为约1：1。
实施方案14是根据权利要求1-13中任一项的方法，还包括在最初施用初免疫苗后约10-14周再次施用初免疫苗；并在最初施用初免疫苗后约46至50周再次施用加强疫苗。
实施方案15是根据实施方案14的方法，其中在最初施用初免疫苗后约12周再次施用初免疫苗；在最初施用初免疫苗后约24周首次施用加强疫苗；并且在最初施用初免疫苗后约48周再次施用加强疫苗。
实施方案16是根据实施方案1至15中任一项的方法，其中所述人类对象在急性HIV感染期间开始ART。
实施方案17是根据实施方案1至16中任一项的方法，其中施用另外的加强疫苗，并且所述另外的加强疫苗是包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIVgag、pol和/或env抗原的Ad26载体和药学上可接受的载剂的组合物；或包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的MVA载体和药学上可接受的载剂的组合物。
实施方案18是根据实施方案17的方法，其中所述另外的加强疫苗是包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的MVA载体和药学上可接受的载剂的组合物。
实施方案19是根据实施方案18的方法，其中所述MVA载体编码四种具有SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原；优选地，其中免疫原性有效量的编码SEQ ID NO：1、2、3和4的镶嵌HIV抗原的MVA载体由两种MVA载体组成，其中第一MVA载体编码SEQ ID NO：1和3的镶嵌HIV抗原，且第二MVA载体编码SEQ ID NO：2和4的镶嵌HIV抗原。
实施方案20是根据实施方案1-19中任一项的方法，其中所述对象在最初施用初免疫苗之前处于当前稳定的ART至少四周。
实施方案21是根据实施方案1至20中任一项的方法，其中所述对象具有持续的病毒血控制，其定义为在最初施用所述初免疫苗之前至少48周的血浆HIV RNA小于50拷贝/ml，任选地有一次或多次血浆HIV RNA大于50拷贝/ml至小于200拷贝/ml的短暂偏差，条件是在最初施用初免疫苗之前最近的筛查小于50拷贝/ml。
实施方案22是实施方案1-21中任一项的方法，其中在施用最后加强疫苗后约10-14周中止ART。
实施方案23是根据实施方案22的方法，其中在施用最后加强疫苗后约12周中止ART。
实施方案24是根据实施方案22或实施方案23的方法，其中对象在中止ART后具有持续的病毒血控制。
实施方案25是一种在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的人类对象中诱导针对HIV的免疫应答的方法，该方法包括：
(i)向人类对象施用初免疫苗，所述初免疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种包含选自SEQ ID NO：1、3和4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的腺病毒26(Ad26)载体和药学上可接受的载剂；和
(ii)向人类对象施用加强疫苗，所述加强疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种包含选自SEQ ID NO：1-4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的MVA载体和药学上可接受的载剂，
其中在最初施用初免疫苗后约10-14周再次施用初免疫苗；在最初施用初免疫苗后约22-26周首次施用加强疫苗；并在最初施用初免疫苗后约46-50周再次施用加强疫苗；以及
其中所述人类对象在急性HIV感染期间开始ART。
实施方案26是根据实施方案25的方法，其中免疫原性有效量的编码一种或多种SEQ ID NO：1、3和4的镶嵌HIV抗原的Ad26载体由三种Ad26载体组成，其中第一Ad26载体编码SEQ ID NO：1的镶嵌HIV抗原，第二Ad26载体编码SEQ ID NO：3的镶嵌HIV抗原，且第三Ad26载体编码SEQ ID NO：4的镶嵌HIV抗原；并且其中免疫原性有效量的编码一种或多种SEQ ID NO：1-4的镶嵌HIV抗原的MVA载体由两种MVA载体组成，其中第一MVA载体编码SEQID NO：1和3的镶嵌HIV抗原，且第二MVA载体编码SEQ ID NO：2和4的镶嵌HIV抗原。
实施方案27是根据实施方案26的方法，其中所述第一、第二和第三Ad26载体以约5×1010vp的总剂量施用；且所述第一和第二MVA载体以约1×108pfu的总剂量施用。
实施方案28是根据实施方案26或实施方案27的方法，其中所述第一、第二和第三Ad26载体的比率分别为约2：1：1；且所述第一和第二MVA载体的比率分别约为1：1。
实施方案29是根据实施方案25-28中任一项的方法，其中在最初施用初免疫苗后约12周再次施用初免疫苗，在最初施用初免疫苗后约24周首次施用加强疫苗，并且在最初施用初免疫苗后约48周再次施用加强疫苗。
实施方案30是根据实施方案25-29中任一项的方法，其中施用另外的加强疫苗，并且所述另外的加强疫苗是包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种包含选自SEQID NO：1-4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的MVA载体的组合物和药学上可接受的载剂，优选编码四种具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原。
实施方案31是实施方案25-30中任一项的方法，其中肌内施用所述初免疫苗和加强疫苗。
实施方案32是根据实施方案25-31中任一项的方法，其中所述对象在最初施用初免疫苗之前处于当前稳定的ART至少四周。
实施方案33是根据实施方案25-32中任一项的方法，其中所述对象具有持续的病毒血控制，其定义为在最初施用所述初免疫苗之前至少48周的血浆HIV RNA小于50拷贝/ml，任选地有一次或多次血浆HIV RNA大于50拷贝/ml至小于200拷贝/ml的短暂偏差，条件是在最初施用初免疫苗之前最近的筛查小于50拷贝/ml。
实施方案34是根据实施方案25-33中任一项的方法，其中在施用最后加强疫苗后约10-14周中止ART。
实施方案35是根据实施方案34的方法，其中在施用最后加强疫苗后约12周中止ART。
实施例36是根据实施例34或35的方法，其中所述对象在中止ART后具有持续的病毒血控制。
实施方案37是根据实施方案1-36中任一项的方法，其中所述初免疫苗和加强疫苗的施用在对象中诱导针对多个HIV进化枝的免疫应答。
实施方案38是根据实施方案1-37中任一项的方法，其中已施用初免疫苗和加强疫苗的人类对象中止ART，并在中止ART后维持病毒抑制至少24周。
实施方案39是用于在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的对象中诱导针对HIV的免疫应答的疫苗组合，其中所述疫苗组合包含：(i)初免疫苗，其包含免疫原性有效的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的腺病毒26(Ad26)载体和药学上可接受的载剂；(ii)加强疫苗，其包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体和药学上可接受的载剂。
实施方案40是疫苗组合在制备或制造用于在接受抗逆转录病毒疗法(HIV)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的对象中诱导针对HIV的免疫应答的药物中的用途，其中所述疫苗组合包含：(i)初免疫苗，其包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIVgag、pol和/或env抗原的腺病毒26(Ad26)载体和药学上可接受的载剂；(ii)加强疫苗，其包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体和药学上可接受的载剂。
本发明的实施例是为了进一步说明本发明的性质。应当理解，以下实施例不限制本发明，本发明的范围由所附权利要求确定。
实施例
实施例1：在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的HIV感染的人中的HIV疫苗方案的研究
进行人体临床研究以研究抗逆转录病毒分析治疗中断(ARV ATI)后HIV感染的人中Ad26载体初免免疫和MVA载体加强免疫的效果。
目标
该研究的主要目标包括：(1)确定在急性HIV感染期间开始抑制性ART的对象中Ad26初免/MVA加强疫苗方案与安慰剂相比的安全性和耐受性；(2)在接受Ad26初免/MVA加强或安慰剂后测量持续的病毒血控制的频率和持续时间，定义为在抗逆转录病毒分析治疗中断(ARV ATI)后血浆HIV RNA小于50拷贝/ml大于24周。该研究的次要目标包括：(1)确定在急性HIV感染期间开始抑制性ART的对象中Ad26初免/MVA加强疫苗方案的免疫原性；(2)在基线、ARV ATI之前疫苗疗法之后(研究的第48-60周)和ARV ATI之后(研究的第60-96周)时表征HIV储库的生物标记；(3)比较ARV ATI后第24周未能实现持续的病毒血控制的疫苗和安慰剂接受者之间的病毒血控制(血浆HIV RNA小于50拷贝/ml)持续时间；(4)描述对疫苗的体液和细胞免疫应答的频率、幅度、特异性和功能能力。
疫苗接种和实验设计
在18至50岁的HIV感染成人中进行单中心、随机、平行组、安慰剂对照、双盲联合1/2a期临床研究。36名目标人类对象参与了这项研究。该研究的对象在急性HIV感染期间开始接受抗逆转录病毒疗法(ART)，并且在开始疫苗/安慰剂之前处于目前稳定ART至少4周，并且在开始疫苗/安慰剂之前至少48周已经达到没有病毒血症(血浆HIV RNA小于50拷贝/ml)。对象分为两组：测试组(24名对象)和对照组(12名对象)。测试组中的对象接受研究疫苗，对照组中的对象接受安慰剂。
该研究持续96周，将分两个阶段进行，包括48周的疫苗接种期(第1阶段)，最终疫苗接种与抗逆转录病毒分析治疗中断(ARV ATI)之间的12周时间(第1阶段)，以及所有抗逆转录病毒药物中止(即ARV ATI)的36周随访期(第2阶段)。
剂量和施用
对象接受四剂研究疫苗：在第0周和第12周施用编码镶嵌HIV抗原的腺病毒26载体(Ad26mos)或安慰剂；在第24周和第48周施用编码镶嵌HIV抗原的MVA载体(MVAmos)或安慰剂。研究疫苗(Ad26mos和MVAmos)和安慰剂的施用剂量如下：
(i)Ad26mos由在同一小瓶中提供的以下三种疫苗产品组成，并以2：1：1的比率施用：分别为表达HIV镶嵌Env1(SEQ ID NO:1)、镶嵌GagPol1(SEQ ID:NO 3)和镶嵌GagPol2(SEQ ID NO:4)基因的Ad26.Mos1Env、Ad26.Mos1Gag-Pol和Ad26.Mos2Gag-Po；总剂量为每0.5ml注射液约5×1010个病毒颗粒(vp)；
(ii)MVAmos由分开的小瓶中提供的以下两种疫苗产品组成，并以1：1的比率施用：MVA-镶嵌1(表达具有SEQ ID NO：1和3的镶嵌1HIV-1Gag、pol和env蛋白的MVA病毒)和MVA-镶嵌2(表达具有SEQ ID NO：2和4的镶嵌2HIV-1Gag、pol和env蛋白的MVA病毒)；总剂量为每0.5ml注射液约1×108噬斑形成单位(pfu)；和
(iii)安慰剂为0.9％氯化钠(0.5ml注射液)。
对象根据下表1中的安排接受研究疫苗或安慰剂，通过肌内注射施用四剂。在ARVATI之前的试验的前60周期间，测试组和对照组中的对象均接受用于HIV治疗的标准ART。在特定的临床访问中采集血液和生殖器分泌物以评估整个研究中的免疫应答(细胞和体液免疫应答)和病毒血控制。
表1：研究疫苗的施用时间表
组 N 第0周 第12周 第24周 第48周
测试 24 Ad26<sub>mos</sub> Ad26<sub>mos</sub> MVA<sub>mos</sub> MVA<sub>mos</sub>
对比 12 安慰剂 安慰剂 安慰剂 安慰剂
在第60周，停止所有用抗逆转录病毒药物的治疗以开始ARV ATI(第2阶段)。用基于非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)的抗逆转录病毒药物的对象在第58周至第60周期间施用加强的蛋白酶抑制剂(洛匹那韦/利托那韦；阿扎那韦/利托那韦；或达芦那韦/利托那韦)代替NNRTI以降低NNRTI耐药的风险。在ARV ATI之后的病毒监测在最有可能发生反弹病毒血症的前六周内每周最多进行两次。ARV ATI是在过去52周内血浆HIV RNA小于50拷贝/ml的对象中开始的。如果最近的结果小于50拷贝/ml，则具有血浆HIV RNA大于50拷贝/ml但小于200拷贝/ml的短暂偏差的对象开始ARV ATI。在ARV ATI期间，确定病毒控制的持续时间并且对恢复治疗的对象(即，未能维持病毒血控制)进行随访。
在第96周的试验结束时，并且如果对象在ARV ATI期间(第60至96周)未能维持病毒血控制，在对象中再次开始ART。在具有反弹病毒血症(对象血浆HIV RNA水平在间隔至少一周的连续两次测定中具有超过1000拷贝/ml)的ARV ATI期间，在对象中再次开始ART。效力的主要终点是在ARV ATI开始后24周时血浆HIV RNA小于50拷贝/ml的对象的比例。
应当理解，本文描述的实施例和实施方案仅用于说明目的，并且可以在不脱离其广泛的发明构思的情况下对上述实施方案进行改变。因此，应理解，本发明不限于所公开的特定实施方案，而是旨在覆盖由所附权利要求限定的本发明的精神和范围内的修改。
序列表
SEQ ID NO:1(Mos1.Env)685aa:
MRVTGIRKNYQHLWRWGTMLLGILMICSAAGKLWVTVYYGVPVWKEATTTLFCASDAKAYDTEVHNVWATHACVPTDPNPQEVVLENVTENFNMWKNNMVEQMHEDIISLWDQSLKPCVKLTPLCVTLNCTDDVRNVTNNATNTNSSWGEPMEKGEIKNCSFNITTSIRNKVQKQYALFYKLDVVPIDNDSNNTNYRLISCNTSVITQACPKVSFEPIPIHYCAPAGFAILKCNDKKFNGTGPCTNVSTVQCTHGIRPVVSTQLLLNGSLAEEEVVIRSENFTNNAKTIMVQLNVSVEINCTRPNNNTRKSIHIGPGRAFYTAGDIIGDIRQAHCNISRANWNNTLRQIV
EKLGKQFGNNKTIVFNHSSGGDPEIVMHSFNCGGEFFYCNSTKLFNSTWTWNNSTWNNTKRSNDTEEHITLPCRIKQIINMWQEVGKAMYAPPIRGQIRCSSNITGLLLTRDGGNDTSGTEIFRPGGGDMRDNWRSELYKYKVVKIEPLGVAPTKAKRRVVQSEKSAVGIGAVFLGFLGAAGSTMGAASMTLTVQARLLLSGIVQQQNNLLRAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARVLAVERYLKDQQLLGIWGCSGKLICTTTVPWNASWSNKSLDKIWNNMTWMEWEREINNYTSLIYTLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWFDISNWLW
SEQ ID NO:2(Mos2.Env)684aa:
MRVRGIQRNWPQWWIWGILGFWMIIICRVMGNLWVTVYYGVPVWKEAKTTLFCASDAKAYEKEVHNVWATHACVPTDPNPQEMVLENVTENFNMWKNDMVDQMHEDIIRLWDQSLKPCVKLTPLCVTLECRNVRNVSSNGTYNIIHNETYKEMKNCSFNATTVVEDRKQKVHALFYRLDIVPLDENNSSEKSSENSSEYYRLINCNTSAITQACPKVSFDPIPIHYCAPAGYAILKCNNKTFNGTGPCNNVSTVQCTHGIKPVVSTQLLLNGSLAEEEIIIRSENLTNNAKTIIVHLNETVNITCTRPNNNTRKSIRIGPGQTFYATGDIIGDIRQAHCNLSRDGWNKTLQGVKKKLAEHFPNKTINFTSSSGGDLEITTHSFNCRGEFFYCNTSGLFNGTYMPNGTNSNSSSNITLPCRIKQIINMWQEVGRAMYAPPIAGNITCRSNITGLLLTRDGGSNNGVPNDTETFRPGGGDMRNNWRSELYKYKVVEVKPLGVAPTEAKRRVVESEKSAVGIGAVFLGILGAAGSTMGAASITLTVQARQLLSGIVQQQSNLLRAIEAQQHMLQLTVWGIKQLQTRVLAIERYLQDQQLLGLWGCSGKLICTTAVPWNTSWSNKSQTDIWDNMTWMQWDKEIGNYTGEIYRLLEESQNQQEKNEKDLLALDSWKNLWNWFDITNWLW
SEQ ID NO:3(Mos1.Gag-Pol)1350aa:
MGARASVLSGGELDRWEKIRLRPGGKKKYRLKHIVWASRELERFAVNPGLLETSEGCRQILGQLQPSLQTGSEELRSLYNTVATLYCVHQRIEIKDTKEALEKIEEEQNKSKKKAQQAAADTGNSSQVSQNYPIVQNIQGQMVHQAISPRTLNAWVKVVEEKAFSPEVIPMFSALSEGATPQDLNTMLNTVGGHQAAMQMLKETINEEAAEWDRVHPVHAGPIAPGQMREPRGSDIAGTTSTLQEQIGWMTNNPPIPVGEIYKRWIILGLNKIVRMYSPVSILDIRQGPKEPFRDYVDRFYKTLRAEQASQDVKNWMTETLLVQNANPDCKTILKALGPAATLEEMMTACQGVGGPGHKARVLAEAMSQVTNSATIMMQRGNFRNQRKTVKCFNCGKEGHIAKNCRAPRKKGCWKCGKEGHQMKDCTERQANFLGKIWPSNKGRPGNFLQNRPEPTAPPEESFRFGEETTTPSQKQEPIDKEMYPLASLKSLFGNDPSSQMAPISPIETVPVKLKPGMDGPRVKQWPLTEEKIKALTAICEEMEKEGKITKIGPENPYNTPVFAIKKKDSTKWRKLVDFRELNKRTQDFWEVQLGIPHPAGLKKKKSVTVLAVGDAYFSVPLDEGFRKYTAFTIPSTNNETPGIRYQYNVLPQGWKGSPAIFQCSMTRILEPFRAKNPEIVIYQYMAALYVGSDLEIGQHRAKIEELREHLLKWGFTTPDKKHQKEPPFLWMGYELHPDKWTVQPIQLPEKDSWTVNDIQKLVGKLNWASQIYPGIKVRQLCKLLRGAKALTDIVPLTEEAELELAENREILKEPVHGVYYDPSKDLIAEIQKQGHDQWTYQIYQEPFKNLKTGKYAKMRTAHTNDVKQLTEAVQKIAMESIVIWGKTPKFRLPIQKETWETWWTDYWQATWIPEWEFVNTPPLVKLWYQLEKDPIAGVETFYVAGAANRETKLGKAGYVTDRGRQKIVSLTETTNQKTALQAIYLALQDSGSEVNIVTASQYALGIIQAQPDKSESELVNQIIEQLIKKERVYLSWVPAHKGIGGNEQVDKLVSSGIRKVLFLDGIDKAQEEHEKYHSNWRAMASDFNLPPVVAKEIVASCDQCQLKGEAMHGQVDCSPGIWQLACTHLEGKIILVAVHVASGYIEAEVIPAETGQETAYFILKLAGRWPVKVIHTANGSNFTSAAVKAACWWAGIQQEFGIPYNPQSQGVVASMNKELKKIIGQVRDQAEHLKTAVQMAVFIHNFKRKGGIGGYSAGERIIDIIATDIQTKELQKQIIKIQNFRVYYRDSRDPIWKGPAKLLWKGEGAVVIQDNSDIKVVPRRKVKIIKDYGKQMAGADCVAGRQDED
SEQ ID NO:4(Mos2.Gag-Pol)1341aa:
MGARASILRGGKLDKWEKIRLRPGGKKHYMLKHLVWASRELERFALNPGLLETSEGCKQIIKQLQPALQTGTEELRSLFNTVATLYCVHAEIEVRDTKEALDKIEEEQNKSQQKTQQAKEADGKVSQNYPIVQNLQGQMVHQPISPRTLNAWVKVIEEKAFSPEVIPMFTALSEGATPQDLNTMLNTVGGHQAAMQMLKDTINEEAAEWDRLHPVHAGPVAPGQMREPRGSDIAGTTSNLQEQIAWMTSNPPIPVGDIYKRWIILGLNKIVRMYSPTSILDIKQGPKEPFRDYVDRFFKTLRAEQATQDVKNWMTDTLLVQNANPDCKTILRALGPGATLEEMMTACQGVGGPSHKARVLAEAMSQTNSTILMQRSNFKGSKRIVKCFNCGKEGHIARNCRAPRKKGCWKCGKEGHQMKDCTERQANFLGKIWPSHKGRPGNFLQSRPEPTAPPAESFRFEETTPAPKQEPKDREPLTSLRSLFGSDPLSQMAPISPIETVPVKLKPGMDGPKVKQWPLTEEKIKALVEICTEMEKEGKISKIGPENPYNTPIFAIKKKDSTKWRKLVDFRELNKRTQDFWEVQLGIPHPAGLKKKKSVTVLAVGDAYFSVPLDEDFRKYTAFTIPSINNETPGIRYQYNVLPQGWKGSPAIFQSSMTKILEPFRKQNPDIVIYQYMAALYVGSDLEIGQHRTKIEELRQHLLRWGFTTPDKKHQKEPPFLWMGYELHPDKWTVQPIVLPEKDSWTVNDIQKLVGKLNWASQIYAGIKVKQLCKLLRGTKALTEVVPLTEEAELELAENREILKEPVHGVYYDPSKDLIAEIQKQGQGQWTYQIYQEPFKNLKTGKYARMRGAHTNDVKQLTEAVQKIATESIVIWGKTPKFKLPIQKETWEAWWTEYWQATWIPEWEFVNTPPLVKLWYQLEKEPIVGAETFYVAGAANRETKLGKAGYVTDRGRQKVVSLTDTTNQKTALQAIHLALQDSGLEVNIVTASQYALGIIQAQPDKSESELVSQIIEQLIKKEKVYLAWVPAHKGIGGNEQVDKLVSRGIRKVLFLDGIDKAQEEHEKYHSNWRAMASEFNLPPIVAKEIVASCDKCQLKGEAIHGQVDCSPGIWQLACTHLEGKVILVAVHVASGYIEAEVIPAETGQETAYFLLKLAGRWPVKTIHTANGSNFTSATVKAACWWAGIKQEFGIPYNPQSQGVVASINKELKKIIGQVRDQAEHLKTAVQMAVFIHNFKRKGGIGEYSAGERIVDIIASDIQTKELQKQITKIQNFRVYYRDSRDPLWKGPAKLLWKGEGAVVIQDNSDIKVVPRRKAKIIRDYGKQMAGDDCVASRQDED
SEQ ID NO:5(Mos1.EnvDNA)
ATGCGGGTGACCGGCATCCGGAAGAACTACCAGCACCTGTGGCGGTGGGGCACCATGCTGCTGGGCATCCTGATGATTTGCTCTGCCGCCGGAAAGCTGTGGGTGACCGTGTACTACGGCGTGCCCGTGTGGAAAGAGGCCACCACCACCCTGTTCTGCGCCAGCGACGCCAAGGCCTACGACACCGAGGTGCACAACGTGTGGGCCACCCACGCCTGCGTGCCCACCGACCCCAACCCCCAGGAAGTGGTCCTGGAAAACGTGACCGAGAACTTCAACATGTGGAAGAACAACATGGTGGAGCAGATGCACGAGGACATCATCAGCCTGTGGGACCAGAGCCTGAAGCCCTGCGTGAAGCTGACCCCCCTGTGCGTGACCCTGAACTGCACCGACGACGTGCGGAACGTGACCAACAACGCCACCAACACCAACAGCAGCTGGGGCGAGCCTATGGAAAAGGGCGAGATCAAGAACTGCAGCTTCAACATCACCACCTCCATCCGGAACAAGGTGCAGAAGCAGTACGCCCTGTTCTACAAGCTGGACGTGGTGCCCATCGACAACGACAGCAACAACACCAACTACCGGCTGATCAGCTGCAACACCAGCGTGATCACCCAGGCCTGCCCCAAGGTGTCCTTCGAGCCCATCCCCATCCACTACTGCGCCCCTGCCGGCTTCGCCATCCTGAAGTGCAACGACAAGAAGTTCAACGGCACCGGCCCCTGCACCAACGTGAGCACCGTGCAGTGCACCCACGGCATCCGGCCCGTGGTGTCCACCCAGCTGCTGCTGAACGGCAGCCTGGCCGAGGAAGAGGTGGTGATCAGAAGCGAGAATTTCACCAACAATGCCAAGACCATCATGGTGCAGCTGAACGTGAGCGTGGAGATCAACTGCACCCGGCCCAACAACAACACCCGGAAGAGCATCCACATCGGCCCTGGCAGGGCCTTCTACACAGCCGGCGACATCATCGGCGACATCCGGCAGGCCCACTGCAACATCAGCCGGGCCAACTGGAACAACACCCTGCGGCAGATCGTGGAGAAGCTGGGCAAGCAGTTCGGCAACAACAAGACCATCGTGTTCAACCACAGCAGCGGCGGAGACCCCGAGATCGTGATGCACAGCTTCAACTGTGGCGGCGAGTTCTTCTACTGCAACAGCACCAAGCTGTTCAACAGCACCTGGACCTGGAACAACTCCACCTGGAATAACACCAAGCGGAGCAACGACACCGAAGAGCACATCACCCTGCCCTGCCGGATCAAGCAGATTATCAATATGTGGCAGGAGGTCGGCAAGGCCATGTACGCCCCTCCCATCCGGGGCCAGATCCGGTGCAGCAGCAACATCACCGGCCTGCTGCTGACCCGGGACGGCGGCAACGATACCAGCGGCACCGAGATCTTCCGGCCTGGCGGCGGAGATATGCGGGACAACTGGCGGAGCGAGCTGTACAAGTACAAGGTGGTGAAGATCGAGCCCCTGGGCGTGGCTCCCACCAAGGCCAAGCGGCGGGTGGTGCAGAGCGAGAAGAGCGCCGTGGGCATCGGCGCCGTGTTTCTGGGCTTCCTGGGAGCCGCCGGAAGCACCATGGGAGCCGCCAGCATGACCCTGACCGTGCAGGCCCGGCTGCTGCTGTCCGGCATCGTGCAGCAGCAGAACAACCTGCTCCGGGCCATCGAGGCCCAGCAGCACCTGCTGCAGCTGACCGTGTGGGGCATCAAGCAGCTGCAGGCCAGGGTGCTGGCCGTGGAGAGATACCTGAAGGATCAGCAGCTCCTGGGGATCTGGGGCTGCAGCGGCAAGCTGATCTGCACCACCACCGTGCCCTGGAACGCCAGCTGGTCCAACAAGAGCCTGGACAAGATCTGGAACAATATGACCTGGATGGAATGGGAGCGCGAGATCAACAATTACACCAGCCTGATCTACACCCTGATCGAGGAAAGCCAGAACCAGCAGGAAAAGAACGAGCAGGAACTGCTGGAACTGGACAAGTGGGCCAGCCTGTGGAACTGGTTCGACATCAGCAACTGGCTGTGG
SEQ ID NO:6(Mos2.EnvDNA)
ATGAGAGTGCGGGGCATCCAGCGGAACTGGCCCCAGTGGTGGATCTGGGGCATCCTGGGCTTTTGGATGATCATCATCTGCCGGGTGATGGGCAACCTGTGGGTGACCGTGTACTACGGCGTGCCCGTGTGGAAAGAGGCCAAGACCACCCTGTTCTGCGCCAGCGACGCCAAGGCCTACGAGAAAGAGGTGCACAACGTGTGGGCCACCCACGCCTGCGTGCCCACCGACCCCAACCCCCAGGAAATGGTCCTGGAAAACGTGACCGAGAACTTCAACATGTGGAAGAACGACATGGTGGACCAGATGCACGAGGACATCATCCGGCTGTGGGACCAGAGCCTGAAGCCCTGCGTGAAGCTGACCCCCCTGTGCGTGACCCTGGAATGCCGGAACGTGAGAAACGTGAGCAGCAACGGCACCTACAACATCATCCACAACGAGACCTACAAAGAGATGAAGAACTGCAGCTTCAACGCCACCACCGTGGTGGAGGACCGGAAGCAGAAGGTGCACGCCCTGTTCTACCGGCTGGACATCGTGCCCCTGGACGAGAACAACAGCAGCGAGAAGTCCAGCGAGAACAGCTCCGAGTACTACCGGCTGATCAACTGCAACACCAGCGCCATCACCCAGGCCTGCCCCAAGGTGTCCTTCGACCCCATCCCCATCCACTACTGCGCCCCTGCCGGCTACGCCATCCTGAAGTGCAACAACAAGACCTTCAACGGCACCGGCCCCTGCAACAACGTGAGCACCGTGCAGTGCACCCACGGCATCAAGCCCGTGGTGTCCACCCAGCTGCTGCTGAACGGCAGCCTGGCCGAGGAAGAGATCATCATCCGGTCCGAGAACCTGACCAACAACGCCAAGACCATCATCGTGCACCTGAATGAGACCGTGAACATCACCTGCACCCGGCCCAACAACAACACCCGGAAGAGCATCCGGATCGGCCCTGGCCAGACCTTTTACGCCACCGGCGACATCATCGGCGACATCCGGCAGGCCCACTGCAACCTGAGCCGGGACGGCTGGAACAAGACCCTGCAGGGCGTGAAGAAGAAGCTGGCCGAGCACTTCCCCAATAAGACCATCAACTTCACCAGCAGCAGCGGCGGAGACCTGGAAATCACCACCCACAGCTTCAACTGCAGGGGCGAGTTCTTCTACTGCAATACCTCCGGCCTGTTCAATGGCACCTACATGCCCAACGGCACCAACAGCAACAGCAGCAGCAACATCACCCTGCCCTGCCGGATCAAGCAGATCATCAATATGTGGCAGGAGGTCGGCAGGGCCATGTACGCCCCTCCCATCGCCGGCAATATCACCTGCCGGTCCAACATCACCGGCCTGCTGCTGACCAGGGACGGCGGCAGCAACAACGGCGTGCCTAACGACACCGAGACCTTCCGGCCTGGCGGCGGAGATATGCGGAACAACTGGCGGAGCGAGCTGTACAAGTACAAGGTGGTGGAGGTGAAGCCCCTGGGCGTGGCTCCTACCGAGGCCAAGCGGCGGGTGGTGGAGAGCGAGAAGAGCGCCGTGGGCATCGGCGCCGTGTTTCTGGGCATTCTGGGAGCCGCCGGAAGCACCATGGGAGCCGCCAGCATCACCCTGACCGTGCAGGCCCGGCAGCTGCTGTCCGGCATCGTGCAGCAGCAGAGCAACCTGCTGAGAGCCATCGAGGCCCAGCAGCACATGCTGCAGCTGACCGTGTGGGGCATCAAGCAGCTGCAGACCCGGGTGCTGGCCATCGAGAGATACCTGCAGGATCAGCAGCTCCTGGGCCTGTGGGGCTGCAGCGGCAAGCTGATCTGCACCACCGCCGTGCCCTGGAACACCAGCTGGTCCAACAAGAGCCAGACCGACATCTGGGACAACATGACCTGGATGCAGTGGGACAAAGAGATCGGCAACTACACCGGCGAGATCTACAGGCTGCTGGAAGAGAGCCAGAACCAGCAGGAAAAGAACGAGAAGGACCTGCTGGCCCTGGACAGCTGGAAGAACCTGTGGAACTGGTTCGACATCACCAACTGGCTGTGG
SEQ ID NO:7(Mos1.Gag-PolDNA)
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SEQ ID NO:8(Mos2.Gag-PolDNA)
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<210> 1
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<212> PRT
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<220>
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<213> Artificial Sequence
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<223> Mos1.Gag-Pol protein sequence
<400> 3
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Glu Lys Ile Arg Leu Arg Pro Gly Gly Lys Lys Lys Tyr Arg Leu Lys
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<220>
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aactggctgt gg 2052
<210> 7
<211> 4050
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mos1.Gag-Pol DNA
<400> 7
atgggagcca gagccagcgt gctgtccgga ggggagctgg accgctggga gaagatcagg 60
ctgaggcctg gagggaagaa gaagtacagg ctgaagcaca tcgtgtgggc cagcagagag 120
ctggaacggt ttgccgtgaa ccctggcctg ctggaaacca gcgagggctg taggcagatt 180
ctgggacagc tgcagcccag cctgcagaca ggcagcgagg aactgcggag cctgtacaac 240
accgtggcca ccctgtactg cgtgcaccag cggatcgaga tcaaggacac caaagaagcc 300
ctggaaaaga tcgaggaaga gcagaacaag agcaagaaga aagcccagca ggctgccgct 360
gacacaggca acagcagcca ggtgtcccag aactacccca tcgtgcagaa catccaggga 420
cagatggtgc accaggccat cagccctcgg accctgaacg cctgggtgaa ggtggtggag 480
gaaaaggcct tcagccctga ggtgatcccc atgttctctg ccctgagcga gggagccaca 540
ccccaggacc tgaacaccat gctgaacacc gtgggagggc accaggctgc catgcagatg 600
ctgaaagaga caatcaacga ggaagctgcc gagtgggaca gggtccaccc agtgcacgct 660
ggacctatcg ctcctggcca gatgagagag cccagaggca gcgatattgc tggcaccacc 720
tccacactgc aggaacagat cggctggatg accaacaacc ctcccatccc tgtgggagag 780
atctacaagc ggtggatcat tctgggactg aacaagatcg tgcggatgta cagccctgtg 840
agcatcctgg acatcaggca gggacccaaa gagcccttca gggactacgt ggaccggttc 900
tacaagaccc tgagagccga gcaggccagc caggacgtga agaactggat gaccgagaca 960
ctgctggtgc agaacgccaa ccctgactgc aagaccatcc tgaaagccct gggacctgct 1020
gccaccctgg aagagatgat gacagcctgc cagggagtgg gaggacctgg ccacaaggcc 1080
agggtgctgg ccgaggccat gagccaggtg accaactctg ccaccatcat gatgcagaga 1140
ggcaacttcc ggaaccagag aaagaccgtg aagtgcttca actgtggcaa agagggacac 1200
attgccaaga actgcagggc tcccaggaag aaaggctgct ggaagtgcgg aaaagaaggc 1260
caccagatga aggactgcac cgagaggcag gccaacttcc tgggcaagat ctggcctagc 1320
aacaagggca ggcctggcaa cttcctgcag aacagacccg agcccaccgc tcctcccgag 1380
gaaagcttcc ggtttggcga ggaaaccacc acccctagcc agaagcagga acccatcgac 1440
aaagagatgt accctctggc cagcctgaag agcctgttcg gcaacgaccc cagcagccag 1500
atggctccca tcagcccaat cgagacagtg cctgtgaagc tgaagcctgg catggacgga 1560
cccagggtga agcagtggcc tctgaccgag gaaaagatca aagccctgac agccatctgc 1620
gaggaaatgg aaaaagaggg caagatcacc aagatcggac ccgagaaccc ctacaacacc 1680
cctgtgttcg ccatcaagaa gaaagacagc accaagtgga ggaaactggt ggacttcaga 1740
gagctgaaca agcggaccca ggacttctgg gaggtgcagc tgggcatccc tcaccctgct 1800
ggcctgaaga aaaagaaaag cgtgaccgtg ctggctgtgg gagatgccta cttcagcgtg 1860
cctctggacg agggcttccg gaagtacaca gccttcacca tccccagcac caacaacgag 1920
acacctggca tcagatacca gtacaacgtg ctgcctcagg gctggaaagg cagccctgcc 1980
atcttccagt gcagcatgac cagaatcctg gaacccttca gagccaagaa ccctgagatc 2040
gtgatctacc agtatatggc tgccctctac gtgggcagcg acctggaaat cggacagcac 2100
agagccaaaa tcgaagaact ccgcgagcac ctgctgaagt ggggattcac cacccctgac 2160
aagaagcacc agaaagagcc tcccttcctg tggatgggct acgagctgca ccctgacaag 2220
tggaccgtgc agcccatcca gctgccagag aaggactcct ggaccgtgaa cgacatccag 2280
aaactggtcg gcaagctgaa ctgggccagc cagatctacc ctggcatcaa agtcagacag 2340
ctgtgtaagc tgctgagggg agccaaagca ctgaccgaca tcgtgcctct gacagaagaa 2400
gccgagctgg aactggccga gaacagagag atcctgaaag aacccgtgca cggagtgtac 2460
tacgacccct ccaaggacct gattgccgag atccagaaac agggacacga ccagtggacc 2520
taccagatct atcaggaacc tttcaagaac ctgaaaacag gcaagtacgc caagatgcgg 2580
acagcccaca ccaacgacgt gaagcagctg accgaagccg tgcagaaaat cgccatggaa 2640
agcatcgtga tctggggaaa gacacccaag ttcaggctgc ccatccagaa agagacatgg 2700
gaaacctggt ggaccgacta ctggcaggcc acctggattc ccgagtggga gttcgtgaac 2760
accccacccc tggtgaagct gtggtatcag ctggaaaagg accctatcgc tggcgtggag 2820
acattctacg tggctggagc tgccaacaga gagacaaagc tgggcaaggc tggctacgtg 2880
accgacagag gcagacagaa aatcgtgagc ctgaccgaaa ccaccaacca gaaaacagcc 2940
ctgcaggcca tctatctggc actgcaggac agcggaagcg aggtgaacat cgtgacagcc 3000
agccagtatg ccctgggcat catccaggcc cagcctgaca agagcgagag cgagctggtg 3060
aaccagatca tcgagcagct gatcaagaaa gaacgggtgt acctgagctg ggtgccagcc 3120
cacaagggca tcggagggaa cgagcaggtg gacaagctgg tgtccagcgg aatccggaag 3180
gtgctgttcc tggacggcat cgataaagcc caggaagagc acgagaagta ccacagcaat 3240
tggagagcca tggccagcga cttcaacctg cctcccgtgg tggccaaaga aatcgtggcc 3300
agctgcgacc agtgccagct gaaaggcgag gccatgcacg gacaggtgga ctgctcccct 3360
ggcatctggc agctggcatg cacccacctg gaaggcaaga tcattctggt ggccgtgcac 3420
gtggccagcg gatacatcga agccgaagtg atccctgccg agacagggca ggaaacagcc 3480
tacttcatcc tgaagctggc tggcagatgg cctgtgaagg tgatccacac agccaacggc 3540
agcaacttca cctctgctgc cgtgaaggct gcctgttggt gggctggcat tcagcaggaa 3600
tttggcatcc cctacaatcc ccagtctcag ggagtggtgg ccagcatgaa caaagagctg 3660
aagaagatca tcggacaggt cagggatcag gccgagcacc tgaaaactgc cgtccagatg 3720
gccgtgttca tccacaactt caagcggaag ggagggatcg gagggtactc tgctggcgag 3780
cggatcatcg acatcattgc caccgatatc cagaccaaag agctgcagaa acagatcatc 3840
aagatccaga acttcagggt gtactacagg gacagcaggg accccatctg gaagggacct 3900
gccaagctgc tgtggaaagg cgaaggagcc gtcgtcatcc aggacaacag cgacatcaag 3960
gtggtgccca gacggaaggt gaaaatcatc aaggactacg gcaaacagat ggctggagcc 4020
gactgtgtcg ctggcaggca ggacgaggac 4050
<210> 8
<211> 4023
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Mos2.Gag-Pol DNA
<400> 8
atgggagcca gagccagcat cctgcgagga gggaagctgg acaagtggga gaagatcagg 60
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ctggaacggt ttgccctcaa tcctggcctg ctggaaacca gcgagggctg caagcagatc 180
atcaagcagc tgcagcctgc cctgcagaca ggcaccgagg aactgcggag cctgttcaac 240
accgtggcca ccctgtactg cgtgcatgcc gagatcgaag tgagggacac caaagaagcc 300
ctggacaaga tcgaggaaga gcagaacaag agccagcaga aaacccagca ggccaaagaa 360
gccgacggca aggtctccca gaactacccc atcgtgcaga acctgcaggg acagatggtg 420
caccagccca tcagccctcg gacactgaat gcctgggtga aggtgatcga ggaaaaggcc 480
ttcagccctg aggtgatccc catgttcaca gccctgagcg agggagccac accccaggac 540
ctgaacacca tgctgaacac cgtgggaggg caccaggctg ccatgcagat gctgaaggac 600
accatcaacg aggaagctgc cgagtgggac aggctgcacc ctgtgcacgc tggacctgtg 660
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caggaacaga tcgcctggat gaccagcaac cctcccatcc ctgtgggaga catctacaag 780
cggtggatca tcctgggact gaacaagatc gtgcggatgt acagccctac ctccatcctg 840
gacatcaagc agggacccaa agagcctttc agggactacg tggaccggtt cttcaagacc 900
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gccgaggcca tgagccagac caacagcacc atcctgatgc agcggagcaa cttcaagggc 1140
agcaagcgga tcgtgaagtg cttcaactgt ggcaaagagg gacacattgc cagaaactgt 1200
agggcaccca ggaagaaagg ctgctggaag tgcggaaaag aaggccacca gatgaaggac 1260
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tggcctgtga aaaccatcca cacagccaac ggcagcaact tcacctctgc caccgtgaag 3540
gctgcctgtt ggtgggctgg cattaagcag gaatttggca tcccctacaa ccctcagtct 3600
cagggagtgg tggcctccat caacaaagag ctgaagaaga tcatcggaca ggtcagggat 3660
caggccgagc atctgaaaac agccgtccag atggccgtgt tcatccacaa cttcaagcgg 3720
aagggaggga tcggagagta ctctgctggc gagaggatcg tggacattat cgccagcgat 3780
atccagacca aagaactgca gaagcagatc acaaagatcc agaacttcag ggtgtactac 3840
agggacagca gagatcccct gtggaaggga cctgccaagc tgctgtggaa aggcgaagga 3900
gccgtcgtca tccaggacaa cagcgacatc aaggtggtgc ccagacggaa ggccaagatc 3960
atcagagact acggcaaaca gatggctggc gacgactgcg tcgcctctag gcaggacgag 4020
gac 4023

Claims (17)

1.一种在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的人类对象中诱导针对HIV的免疫应答的方法，该方法包括：
(i)向人类对象施用初免疫苗，所述初免疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的腺病毒26(Ad26)载体和药学上可接受的载剂；和
(ii)向人类对象施用加强疫苗，所述加强疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种镶嵌HIV gag、pol和/或env抗原的修饰的痘苗安卡拉(MVA)载体和药学上可接受的载剂。
2.权利要求1的方法，其中在最初施用所述初免疫苗后约22-26周施用所述加强疫苗。
3.权利要求1或2中任一项的方法，其中所述初免疫苗包含编码三种具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的Ad26载体；并且所述加强疫苗包含编码四种具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的MVA载体。
4.权利要求3的方法，其中所述免疫原性有效量的编码SEQ ID NO：1、3和4的镶嵌HIV抗原的Ad26载体由三种Ad26载体组成，其中第一Ad26载体编码SEQ ID NO：1的镶嵌HIV抗原，第二Ad26载体编码SEQ ID NO：3的镶嵌HIV抗原，且第三Ad26载体编码SEQ ID NO：4的镶嵌HIV抗原。
5.权利要求4的方法，其中所述第一、第二和第三Ad26载体以约5×1010个病毒颗粒(vp)的总剂量施用。
6.权利要求3-5中任一项的方法，其中所述免疫原性有效量的编码SEQ ID NO：1、2、3和4的镶嵌HIV抗原的MVA载体由两种MVA载体组成，其中第一MVA载体编码SEQ ID NO：1和3的镶嵌HIV抗原，且第二MVA载体编码SEQ ID NO：2和4的镶嵌HIV抗原。
7.权利要求6的方法，其中所述第一和第二MVA载体以约1×108噬斑形成单位(pfu)的总剂量施用。
8.权利要求1至7中任一项的方法，还包括在最初施用初免疫苗后约10-14周再次施用初免疫苗；并在最初施用初免疫苗后约46至50周再次施用加强疫苗。
9.权利要求8的方法，其中在最初施用初免疫苗后约12周再次施用初免疫苗；在最初施用初免疫苗后约24周首次施用加强疫苗；并且在最初施用初免疫苗后约48周再次施用加强疫苗。
10.权利要求1至9中任一项的方法，其中所述人类对象在急性HIV感染期间开始ART。
11.权利要求1-10中任一项的方法，其中在施用最后加强疫苗后约10-14周中止ART。
12.一种在接受抗逆转录病毒疗法(ART)的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的人类对象中诱导针对HIV的免疫应答的方法，该方法包括：
(i)向人类对象施用初免疫苗，所述初免疫苗包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种包含选自SEQ ID NO：1、3和4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的腺病毒26(Ad26)载体和药学上可接受的载剂；和
(ii)向人类对象施用加强组合物，所述加强组合物包含免疫原性有效量的一种或多种编码一种或多种包含选自SEQ ID NO：1-4的氨基酸序列的镶嵌HIV抗原的MVA载体和药学上可接受的载剂，
其中在最初施用初免疫苗后约10-14周再次施用初免疫苗；在最初施用初免疫苗后约22-26周首次施用加强疫苗；并在最初施用初免疫苗后约46-50周再次施用加强疫苗；以及
其中所述人类对象在急性HIV感染期间开始ART。
13.权利要求12的方法，其中所述免疫原性有效量的编码一种或多种SEQ ID NO：1、3和4的镶嵌HIV抗原的Ad26载体由三种Ad26载体组成，其中第一Ad26载体编码SEQ ID NO：1的镶嵌HIV抗原，第二Ad26载体编码SEQ ID NO：3的镶嵌HIV抗原，且第三Ad26载体编码SEQ IDNO：4的镶嵌HIV抗原；并且其中所述免疫原性有效量的编码一种或多种SEQ ID NO：1-4的镶嵌HIV抗原的MVA载体由两种MVA载体组成，其中第一MVA载体编码SEQ ID NO：1和3的镶嵌HIV抗原，且第二MVA载体编码SEQ ID NO：2和4的镶嵌HIV抗原。
14.权利要求13所述的方法，其中所述第一、第二和第三Ad26载体以约5×1010vp的总剂量施用；且所述第一和第二MVA载体以约1×108pfu的总剂量施用。
15.权利要求12-14中任一项的方法，其中在最初施用初免疫苗后约12周再次施用初免疫苗，在最初施用初免疫苗后约24周首次施用加强疫苗，并且在最初施用初免疫苗后约48周再次施用加强疫苗。
16.权利要求12-15中任一项的方法，其中在施用最后加强疫苗后约10-14周中止ART。
17.前述权利要求中任一项的方法，其中已施用初免疫苗和加强疫苗的人类对象中止ART，并在中止ART后维持病毒抑制至少24周。
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