EA038966B1 - Лентивирусный вектор для генной терапии, способ его получения и его применение - Google Patents

Лентивирусный вектор для генной терапии, способ его получения и его применение Download PDF

Info

Publication number
EA038966B1
EA038966B1 EA201692361A EA201692361A EA038966B1 EA 038966 B1 EA038966 B1 EA 038966B1 EA 201692361 A EA201692361 A EA 201692361A EA 201692361 A EA201692361 A EA 201692361A EA 038966 B1 EA038966 B1 EA 038966B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
expression
siv
vector
cells
a1at
Prior art date
Application number
EA201692361A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201692361A1 (ru
Inventor
Эрик Уолтер Фредерик Вольфганг Элтон
Юта Гризенбах
Камила Мальгожата Питель
Майкл Кристиан Пол-Смит
Ян Эндрю Прингл
Стефен Чарльз Хайд
Дебора Ребекка Джилл
Ли Адриан Дэвис
Алан Кристофер Бойд
Джерард Маклэчлэн
Макото Иноуе
Original Assignee
АйПи2АйПиО Инновейшнз Лимитед
АйДи ФАРМА КО., ЛТД.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by АйПи2АйПиО Инновейшнз Лимитед, АйДи ФАРМА КО., ЛТД. filed Critical АйПи2АйПиО Инновейшнз Лимитед
Publication of EA201692361A1 publication Critical patent/EA201692361A1/ru
Publication of EA038966B1 publication Critical patent/EA038966B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A61K38/37—Factors VIII
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A61K48/0066—Manipulation of the nucleic acid to modify its expression pattern, e.g. enhance its duration of expression, achieved by the presence of particular introns in the delivered nucleic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4712—Cystic fibrosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/02—Recovery or purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15032—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/15043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/15045—Special targeting system for viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15051—Methods of production or purification of viral material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18811—Sendai virus
    • C12N2760/18841—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2760/18845—Special targeting system for viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2810/00—Vectors comprising a targeting moiety
    • C12N2810/50—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein
    • C12N2810/60—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from viruses
    • C12N2810/6072—Vectors comprising as targeting moiety peptide derived from defined protein from viruses negative strand RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/15—Vector systems having a special element relevant for transcription chimeric enhancer/promoter combination

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Mushroom Cultivation (AREA)

Abstract

Изобретение относится к лентивирусным векторам для генной терапии, псевдотипированным гемагглютинин-нейраминидазой (HN) и гибридными (F) белками из респираторного парамиксовируса, содержащим промотор и трансген; и способам их получения. Настоящее изобретение также относится к применению указанных векторов в генной терапии, в частности для лечения заболеваний дыхательных путей, таких как муковисцидоз (КФ), способу лечения таких заболеваний, клетке-хозяину и композиции для применения в генной терапии.

Description

Настоящее изобретение относится к лентивирусным векторам для переноса генов, псевдотипированным гемагглютинин-нейраминидазой (HN) и гибридными (F) белками из респираторного парамиксовируса, содержащим промотор и трансген; и способам их получения. Настоящее изобретение также относится к применению указанных векторов в генной терапии, в частности для лечения заболеваний дыхательных путей, таких как муковисцидоз (MB).
Предшествующий уровень техники
Лентивирусы принадлежат к роду вирусов семейства Retroviridae и характеризуются длительным периодом инкубации. Лентивирусы могут доставлять значительное количество вирусной РНК в ДНК клетки-хозяина и имеют уникальную способность среди ретровирусов, обладая свойством инфицировать неделящиеся клетки, таким образом, они являются одним из наиболее эффективных методов создания вектора доставки гена.
Лентивирусные векторы, в особенности те, что получены из ВИЧ-1, являются широкоисследуемыми и часто применяемыми векторами. Эволюция остова лентивирусных векторов и способность вирусов доставлять молекулы рекомбинантных ДНК (трансгены) в клетки-мишени привели к их применению во многих направлениях практического использования. Два возможных направления использования вирусных векторов включают восстановление функциональных генов в генетической терапии и получение рекомбинантных белков in vitro.
Псевдотипирование представляет собой процесс получения вирусов или вирусных векторов в комбинации с чужеродными белками вирусной оболочки. Сами по себе чужеродные белки вирусной оболочки могут использоваться для изменения тропизма хозяина или увеличенной/уменьшенной стабильности вирусных частиц. Например, псевдотипирование позволяет устанавливать характер белков оболочки. Часто используемым белком является гликопротеин G вируса везикулярного стоматита (VSV), сокращенно VSV-G.
Понятно, что для эффективной и контролируемой ретровирусной экспрессии трансгена требуется присутствие интронных последовательностей. Однако введение таких интронов в ретровирусные векторы включает усложненные и требующие больших затрат времени способы вследствие используемых многостадийных процессов.
До настоящего времени вирусные агенты переноса генов были неприменимыми для лечения заболеваний, без трансдукции популяций стволовых клеток, вследствие адаптивного иммунного ответа хозяина, который препятствует успешному повторному введению.
Более того, перенос гена к эпителию дыхательных путей оказался более трудным, чем первоначально предполагали. Например, применение лентивирусных псевдотипов, для которого требуется разрушение эпителиальной целостности, чтобы осуществить трансдукцию в дыхательные пути, например, посредством использования детергентов, таких как лизофосфатидилхолин или этиленгликоль-бис(2аминоэтиловый эфир)-N,N,N'N'-тетрауксуснαя кислота, было связано с повышенным риском сепсиса.
Одним примером клинической ситуации, которая могла бы получить благоприятный эффект от переноса генов в эпителий дыхательных путей является лечение муковисцидоза (MB). MB является летальным генетическим расстройством, вызываемым мутациями в гене регулятора трансмембранной проводимости при MB (CFTR), который действует в качестве хлоридного канала в эпителиальных клетках дыхательных путей. MB характеризуется рецидивирующими инфекциями дыхательных путей, увеличенными секрециями дыхательных путей и, в конечном итоге, дыхательной недостаточностью. В Великобритании в настоящее время средний возраст умерших составляет ~25 лет. Для большинства генотипов не существует терапий, нацеленных на базовый дефект; применяемые в настоящее время терапии для облегчения симптомов требуют часов самостоятельно вводимого лечения ежедневно. Генная терапия в отличие от низкомолекулярных лекарственных средств является независимой от мутационного класса CFTR и является, таким образом, применимой ко всем пораженным MB индивидуумам. Однако до настоящего времени ни один вирусный вектор не соответствовал требованиям для клинического применения, то же самое относится к другим заболеваниям, конкретно многим другим заболеваниям дыхательных путей.
В этой связи сталкиваются по меньшей мере с тремя основными проблемами. Эффективность переноса генов обычно является низкой, по меньшей мере отчасти, поскольку соответствующие рецепторы для многих вирусных векторов, по всей видимости, преобладающим образом локализованы на базолатеральной поверхности эпителия дыхательных путей. Во-вторых, проницаемость слизистого слоя дыхательных путей обычно является низкой. В конечном счете, способность к повторному введению вирусных векторов, обязательная для долговременной обработки самообновляющегося эпителия, является ограниченной.
Введение векторов для клинического применения является еще одним актуальным фактором. Следовательно, для эффективности лечения должна поддерживаться вирусная стабильность при использовании клинически значимых устройств (например, бронхоскопа и небулайзера).
Еще одним примером потенциальной мишени для генной терапии является недостаточность α1антитрипсина (А1АТ).
Недостаточность А1АТ представляет собой наследственное нарушение, которое может вызывать
- 1 038966 заболевание легких и заболевание печени. Симптомы включают одышку/свистящее дыхание, пониженную способность к физической нагрузке, потерю массы тела, рецидивирующие респираторные инфекции, утомляемость и учащенное сердцебиение при стоянии. У страдающих индивидуумов часто развивается эмфизема. Приблизительно у 10-15% пациентов с недостаточностью А1АТ развивается заболевание печени. Индивидуумы с недостаточностью А1АТ также имеют риск развития гепатоклеточной карциномы.
А1АТ представляет собой секретируемый белок, вырабатываемый, в основном, в печени и затем переносимый в легкие, причем более мелкие количества также продуцируются в самих легких. Основной функцией А1АТ является связывать и нейтрализовать нейтрофил-эластазу. Генная терапия А1АТ, вероятно, будет иметь терапевтическое значение у пациентов с недостаточностью А1АТ, MB и хроническим обструктивным заболеванием легких (ХОБЛ), где повышение или введение А1АТ может улучшить функцию легких.
Терапия А1АТ также является потенциально ценной для лечения нереспираторных/нелегочных заболеваний, таких как диабет типа 1 и типа 2, острый инфаркт миокарда, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, отторжение трансплантата, реакция трансплантат против хозяина (GvH), рассеянный склероз и инфекции, особенно вирусные инфекции, вследствие воздействия недостаточности А1АТ на другие ткани/органы, такие как печень и поджелудочная железа (см., например, Lewis Mol. Med. 2012; 18:957-970, которая включена в данное описание посредством ссылки).
Недостаточность А1АТ является привлекательным целевым заболеванием для генной терапии, поскольку терапевтические пороговые уровни являются хорошо определенными. Сравнение уровней А1АТ у субъектов с риском развития эмфиземы/ХОБЛ позволило определить защитный пороговый уровень, равный 11 мкМ в сыворотке, причем уровни ниже 11 мкМ используют в качестве пороговых значений для инициации стимулирующей белковой терапии, где это является доступным. Уровни А1АТ в лаважной жидкости дыхательных путей составляют только ~10% от сывороточного уровня, поскольку эпителий легких создает барьер, и терапевтическое пороговое значение в лаважной жидкости поверхности дыхательных путей, следовательно, считают равным 1,1 мкМ (см. Ferraroti et al. Thorax. 2012 Aug; 67(8):669-74 и Abusriwil & Stockley 2006 Current Opinion in Pulmonary Medicine 12:125-131, каждая из которых включена в настоящее описание посредством ссылки).
Шесть разрешенных FDA к применению промышленно выпускаемых лекарственных форм белка А1АТ, выделенного из объединенной крови человека, находят клиническое применение в США для лечения пациентов с тяжелой недостаточностью А1АТ (посредством еженедельных внутривенных инъекций). Ферментозаместительная терапия (ERT) является дорогостоящей (~100000 долларов/год), и несмотря на то, что биохимическая эффективность действия для стимулирующей белковой терапии ERT была доказана, доказательство эффективности в клинической практике является значительно более трудным. ERT A1AT в настоящее время недоступна во всех странах и в настоящее время является недоступной в Великобритании. Кроме того, используя принятые в настоящее время терапии, трудно достигнуть достаточных перманентных тканевых уровней, что может отчасти являться причиной ограниченной эффективности в клинической практике, наблюдаемой до настоящего времени.
Другие привлекательные мишени для генной терапии включают сердечно-сосудистые заболевания и заболевания крови, в частности нарушения, связанные с недостаточной свертываемостью крови, такие как гемофилия (А и В), болезнь фон Виллебранда и недостаточность фактора VII.
Гемофилия, в частности гемофилия А, является привлекательной мишенью для генной терапии. Гемофилия А представляет собой наследственное нарушение гемостаза, вызванное недостаточностью или мутацией фактора VIII (FVIII). Его наследование связано с полом, причем почти все пациенты являются мужчинами. Кровотечение обычно происходит в суставы. Кровотечение в мышцы, слизистую ткань и центральную нервную систему (ЦНС) является нетипичным, но может происходить. Тяжесть заболевания является обратно пропорциональной уровню FVIII: менее чем 1% (<0,01 МЕ/мл) приводит к тяжелому заболеванию, с кровотечением после минимального повреждения; между 1-5% (0,01-0,05 МЕ/мл) вызывает умеренное заболевание, с кровотечением после легкого повреждения; и более чем 5% (>0,05 МЕ/мл) вызывает легкое заболевание, с кровотечением только после значительной травмы или хирургического вмешательства.
Соответственно, существует потребность в векторе для генной терапии, который сделает возможным избежать одну или несколько проблем, описанных выше.
Краткое описание сущности изобретения
Авторы настоящего изобретения разработали лентивирусный вектор, который был псевдотипирован гемагглютинин-нейраминидазой (HN) и гибридными (F) белками из респираторного парамиксовируса, содержащий промотор и трансген. Обычно остов вектора состоит из вируса иммунодефицита обезьян (SIV), такого как SIV1 или вируса SIV иммунодефицита африканской зеленой мартышки (SIV-AGM). Предпочтительно остов вирусного вектора по изобретению берется из SIV-AGM. HN и F-белки функционируют, соответственно, чтобы присоединиться к сиаловым кислотам, и опосредуют слияние клеток для вхождения вектора в клетки-мишени. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что этот специфически F/HN-псевдотипированный лентивирусный вектор может эффективно трансдуцироваться в эпи
- 2 038966 телий дыхательных путей, приводя в результате к экспрессии трансгена, перманентной в течение периодов, находящихся за пределами предполагаемой продолжительности жизни эпителиальных клеток дыхательных путей. Важно отметить, что авторы настоящего изобретения также обнаружили, что повторное введение не приводит к потере эффективности действия. Эти признаки делают векторы согласно настоящему изобретению привлекательными кандидатами для лечения заболеваний посредством их применения в экспрессии терапевтических белков: (i) внутри клеток дыхательных путей; (ii) секретируемых в просвет дыхательных путей и (iii) секретируемых в систему кровообращения.
Настоящее изобретение направлено на удовлетворение одной или нескольких из указанных выше потребностей и относится к лентивирусным векторам, псевдотипированным с использованием гемагглютинин-нейраминидазы (HN) и гибридных (F) белков из респираторного парамиксовируса, содержащие промотор и трансген. В одном варианте осуществления промотор предпочтительно представляет собой гибридный энхансер человеческого CMV/промотор EF1a (hCEF). Настоящее изобретение также относится к способам получения указанных векторов, композициям, содержащим указанные векторы, и их применению в терапии.
Векторы согласно настоящему изобретению обеспечивают более высокую и перманентную экспрессию гена посредством эффективного переноса генов. Идентифицированные выше проблемы решаются настоящим изобретением, которое предоставляет F/HN-псевдотипированные лентивирусные векторы, которые обладают способностью к (i) трансдукции в воздухоносные пути без разрушения эпителиальной целостности; (ii) персистирующей экспрессии гена; (iii) отсутствию хронической токсичности и (iv) эффективному повторному введению.
Долговременная/персистирующая стабильная экспрессия гена, предпочтительно на терапевтически эффективном уровне, может достигаться с использованием повторных доз вектора настоящего изобретения. Альтернативно, чтобы достичь желательной долговременной экспрессии, может применяться однократная доза.
В отличие от известных лентивирусных векторов, лентивирусные векторы по изобретению проявляют эффективное включение в клетки дыхательных путей, увеличенную экспрессию трансгена и не страдают потерей эффективности при повторном введении.
Таким образом, преимущественно, лентивирусные векторы согласно настоящему изобретению могут использоваться в генной терапии. Как пример, свойства эффективного включения векторов по изобретению в клетки дыхательных путей делают их в высокой степени подходящими для лечения заболеваний дыхательных путей. Лентивирусные векторы по изобретению могут также использоваться в методах генной терапии, чтобы стимулировать секрецию терапевтических белков. Как дополнительный пример, изобретение относится к секреции терапевтических белков в просвет дыхательных путей или системы кровообращения. Таким образом, введение вектора по изобретению и его включение в клетки дыхательных путей могут обеспечить использование легких (или носа или дыхательных путей) в качестве фабрики для производства терапевтического белка, который затем секретируется и попадает в общее кровообращение при терапевтических уровнях, где он может перемещаться к клеткам/тканям, представляющим интерес, чтобы оказать терапевтическое воздействие. В отличие от внутриклеточных или мембранных белков, выработка таких секретируемых белков не основывается на специфичных для заболевания клетках-мишенях, являющихся трансдуцированными, что является значительным преимуществом, и достигает высоких уровней экспрессии белка. Таким образом, другие заболевания, которые не являются заболеваниями дыхательных путей, такие как сердечно-сосудистые заболевания и заболевания крови, в особенности нарушения, связанные с недостаточной свертываемостью крови, могут также подвергаться лечению векторами настоящего изобретения.
В качестве примера α-1 антитрипсин (А1АТ) представляет собой секретируемую антипротеазу, которая продуцируется в основном в печени и затем перемещается в легкие, причем более мелкие количества также продуцируются в самом легком. Основной функцией А1АТ является связывать и нейтрализовать/ингибировать нейтрофил-эластазу. Генная терапия с использованием А1АТ, согласно настоящему изобретению, имеет отношение к пациенту с недостаточностью А1АТ, а также пациенту с другими заболеваниями легких, таким как муковисцидоз или хроническое обструктивное заболевание легких (ХОБЛ), и дает возможность преодолеть некоторые проблемы, с которыми сталкивается ферментозаместительная терапия.
Авторы настоящего изобретения ранее продемонстрировали, что существует значительная корреляция между нейтрофил-эластазой (NE) и А1АТ в образцах мокроты от пациентов с муковисцидозом, показывающая, что организм вырабатывает А1АТ в ответ на стимуляцию NE. Авторы настоящего изобретения также показали, что существует статистически значимая корреляция между NE и показателем легочного очищения, маркером заболевания мелких дыхательных путей, означая, что увеличенная NE имеет отрицательное воздействие на функцию легких. Как показано в настоящем описании, авторы изобретения в настоящее время неожиданно продемонстрировали, что лентивирусные векторы по изобретению могут достигать высоких концентраций А1АТ и долговременной (по меньшей мере 90 дней) экспрессии А1АТ in vivo. Таким образом, генная терапия с использованием А1АТ может нейтрализовать NE, улучшая функцию легких пациентов с муковисцидозом и/или ХОБЛ (и обладая терапевтическим
- 3 038966 эффектом для других показаний, как описано в настоящем документе). Соответственно, настоящее изобретение относится к применению лентивирусного вектора, описанного в настоящем описании, для введения трансгена А1АТ и генной терапии состояний, включающих, но не ограниченных перечисленными, недостаточность А1АТ, муковисцидоз и/или ХОБЛ. Введение лентивирусного А1АТ непосредственно в назальный эпителий и/или легкое может преодолеть несколько ограничений, с которыми в настоящее время сталкивается ферментозаместительная терапия (А1АТ, выделенный из человеческой крови и вводимый внутривенно каждую неделю), обеспечивая стабильную, продолжительную экспрессию в тканимишени (легкое/назальный эпителий), простоту введения и неограниченную доступность.
В нескольких вариантах осуществления трансдукция с использованием лентивирусного вектора по изобретению приводит к секреции рекомбинантного белка в просвет легкого, а также в кровообращение. Одним благоприятным эффектом этого является то, что терапевтический белок достигает интерстициальной ткани. В случае недостаточности А1АТ этот эффект является преимущественным, поскольку ингибирование NE также требуется на данном участке. Генная терапия А1АТ может, следовательно, также быть благоприятной при показаниях для других заболеваний, неограничивающие примеры которых включают диабет типа 1 и типа 2, острый инфаркт миокарда, ишемическую болезнь сердца, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, отторжение трансплантата, реакцию трансплантат против хозяина (GvH), рассеянный склероз, заболевание печени, цирроз, васкулиты и инфекции, такие как бактериальные и/или вирусные инфекции.
А1АТ имеет многочисленные другие противовоспалительные и тканезащитные эффекты, например, на доклинических моделях диабета, реакции трансплантат против хозяина и воспалительного заболевания кишечника. Выработка А1АТ в легких и/или носу после трансдукции согласно настоящему изобретению может, следовательно, быть более широко применимой, с включением этих показаний.
Другие примеры заболеваний, которые могут подвергаться лечению с использованием генной терапии секретируемым белком, согласно настоящему изобретению влючают сердечно-сосудистые заболевания и заболевания крови, в особенности нарушения, связанные с недостаточной свертываемостью крови, такие как гемофилия (A и В), болезнь фон Виллебранда и недостаточность фактора VII.
В нескольких вариантах осуществления гемофилия А может подвергаться лечению согласно настоящему изобретению. Тяжесть заболевания является обратно пропорциональной уровню FVIII, и увеличение FVIII, равное 2-5% (0,02-0,05 МЕ/мл), является достаточным, чтобы быть терапевтически эффективным.
В нескольких вариантах осуществления нос является предпочтительным участком продуцирования для терапевтического белка с использованием вектора по изобретению для генной терапии вследствие по меньшей мере одной из следующих причин: (i) внеклеточные барьеры, такие как воспалительные клетки и мокрота, являются наименее выраженными в носу; (ii) простота введения вектора; (iii) более мелкие количества требуемого вектора и (iv) этические соображения. Таким образом, трансдукция назальных эпителиальных клеток с использованием лентивирусного вектора по изобретению может приводить к эффективной (на высоком уровне) и продолжительной экспрессии терапевтического трансгена, представляющего интерес.
Векторы согласно настоящему изобретению обеспечивают долговременную экспрессию гена, приводящую к долговременной экспрессии терапевтического белка. Как описано в настоящем описании, фразы долговременная экспрессия, перманентная экспрессия и персистирующая экспрессия используют взаимозаменяемо. Долговременная экспрессия согласно настоящему изобретению означает экспрессию терапевтического гена и/или белка, предпочтительно на терапевтических уровнях, в течение по меньшей мере 45 дней, по меньшей мере 60 дней, по меньшей мере 90 дней, по меньшей мере 120 дней, по меньшей мере 180 дней, по меньшей мере 250 дней, по меньшей мере 360 дней, по меньшей мере 450 дней, по меньшей мере 730 дней или более. Предпочтительно долговременная экспрессия означает экспрессию в течение по меньшей мере 90 дней, по меньшей мере 120 дней, по меньшей мере 180 дней, по меньшей мере 250 дней, по меньшей мере 360 дней, по меньшей мере 450 дней, по меньшей мере 720 дней или более, более предпочтительно по меньшей мере 360 дней, по меньшей мере 450 дней, по меньшей мере 720 дней или более. Эта долговременная экспрессия может быть достигнута посредством повторных доз или однократной дозы.
Повторяющиеся дозы могут вводиться дважды в день, ежедневно, дважды в неделю, еженедельно, ежемесячно, каждые два месяца, каждые три месяца, каждые четыре месяца, каждые шесть месяцев, ежегодно, каждые два года или более. Дозирование может продолжаться настолько долго, насколько требуется, например в течение по меньшей мере шести месяцев, по меньшей мере одного года, двух лет, трех лет, четырех лет, пяти лет, десяти лет, пятнадцати лет, двадцати лет или более, вплоть до всего времени жизни пациента, подлежащего лечению.
Лентивирусные векторы, такие как векторы по изобретению, могут интегрироваться в геном трансдуцируемых клеток и приводить к долговременной экспрессии, что делает их подходящими для трансдукции стволовых клеток/клеток-предшественников. В легких некоторые типы клеток с регенеративной способностью были идентифицированы как ответственные за поддержание специфичных последовательностей клеточных поколений в дыхательных путях и альвеолах. Такие типы включают базальные
- 4 038966 клетки и подслизистые клетки протока железы в верхних дыхательных путях, клетки Клара и нейроэндокринные клетки в бронхиолярных воздухоносных путях, бронхоальвеолярные стволовые клетки в терминальных бронхиолах и пневмоциты типа II в альвеолах. Следовательно и без ограничения теорией, полагают, что векторы согласно настоящему изобретению вызывают долговременную генную экспрессию трансгена, представляющего интерес, посредством введения трансгена в одну или несколько долгоживущих эпителиальных клеток или один или несколько типов клеток дыхательных путей, таких как базальные клетки и подслизистые клетки протока железы верхних дыхательных путей, клетки Клара и нейроэндокринные клетки в бронхиолярных воздухоносных путях, бронхоальвеолярные стволовые клетки в терминальных бронхиолах и пневмоциты типа II в альвеолах.
Соответственно, лентивирусные векторы по изобретению могут трансдуцировать одну или несколько клеток или линий клеток с регенеративным потенциалом внутри легкого (включая дыхательные пути) для достижения долговременной экспрессии гена. В предпочтительном варианте осуществления лентивирусный вектор изобретения трансдуцирует базальные клетки, такие как клетки верхних дыхательных путей/дыхательных путей. Базальные клетки играют главную роль в процессах эпителиального поддержания и восстановления после повреждения. Кроме того, базальные клетки являются широко распределенными вдоль человеческого респираторного эпителя, с относительным распределением от 30% (крупные воздухоносные пути) до 6% (мелкие воздухоносные пути).
Лентивирусные векторы по изобретению могут использоваться для трансдукции изолированных и размноженных стволовых клеток/клеток-предшественников ex vivo до введения пациенту. Предпочтительно лентивирусные векторы по изобретению используют для трансдукции клеток в легких (или дыхательных путях) in vivo.
Векторы согласно настоящему изобретению обеспечивают высокие уровни экспрессии гена, приводящие в результате к высоким уровням (предпочтительно терапевтическим уровням) экспрессии терапевтического белка. Экспрессию можно измерить любым подходящим методом (качественным или количественным, предпочтительно количественным), и концентрации могут быть приведены в любых соответствующих единицах измерения, например нг/мл. Высокий уровень экспрессии согласно настоящему изобретению может означать экспрессию терапевтического гена и/или белка при концентрации, равной по меньшей мере 10 нг/мл, по меньшей мере 20 нг/мл, по меньшей мере 30 нг/мл, по меньшей мере 40 нг/мл, по меньшей мере 50 нг/мл, по меньшей мере 60 нг/мл, по меньшей мере 70 нг/мл, по меньшей мере 80 нг/мл, по меньшей мере 90 нг/мл, по меньшей мере 100 нг/мл, по меньшей мере 200 нг/мл, по меньшей мере 300 нг/мл, по меньшей мере 400 нг/мл, по меньшей мере 500 нг/мл, по меньшей мере 600 нг/мл, по меньшей мере 700 нг/мл, по меньшей мере 800 нг/мл, по меньшей мере 900 нг/мл, по меньшей мере 1000 нг/мл, по меньшей мере 2000 нг/мл, по меньшей мере 3000 нг/мл, по меньшей мере 4000 нг/мл, по меньшей мере 5000 нг/мл, по меньшей мере 10000, по меньшей мере 15000 нг/мл, по меньшей мере 20000 нг/мл или более. Терапевтическая экспрессия может быть задана с использованием таких же значений.
Лентивирусные векторы согласно настоящему изобретению обычно обеспечивают высокие уровни экспрессии трансгена при введении пациенту. Термины высокая экспрессия и терапевтическая экспрессия в настоящем описании используют взаимозаменяемо.
Высокий уровень экспрессии согласно настоящему изобретению может означать экспрессию терапевтического гена и/или белка при концентрации, равной по меньшей мере приблизительно 100 нМ, по меньшей мере приблизительно 200 нМ, по меньшей мере приблизительно 300 нМ, по меньшей мере приблизительно 400 нМ, по меньшей мере приблизительно 500 нМ, по меньшей мере приблизительно 600 нМ, по меньшей мере приблизительно 700 нМ, по меньшей мере приблизительно 800 нМ, по меньшей мере приблизительно 900 нМ, по меньшей мере приблизительно 1 мкМ, по меньшей мере приблизительно 1,1 мкМ, по меньшей мере приблизительно 1,2 мкМ, по меньшей мере приблизительно 1,3 мкМ, по меньшей мере приблизительно 1,4 мкМ, по меньшей мере приблизительно 1,5 мкМ, по меньшей мере приблизительно 2 мкМ, по меньшей мере приблизительно 3 мкМ, по меньшей мере приблизительно 4 мкМ, по меньшей мере приблизительно 5 мкМ, по меньшей мере приблизительно 6 мкМ, по меньшей мере приблизительно 7 мкМ, по меньшей мере приблизительно 8 мкМ, по меньшей мере приблизительно 9 мкМ, по меньшей мере приблизительною мкМ, по меньшей мере приблизительно 11 мкМ, по меньшей мере приблизительно 12 мкМ, по меньшей мере приблизительно 13 мкМ, по меньшей мере приблизительно 14 мкМ, по меньшей мере приблизительно 15 мкМ, по меньшей мере приблизительно 20 мкМ, по меньшей мере приблизительно 25 мкМ, по меньшей мере приблизительно 30 мкМ, по меньшей мере приблизительно 40 мкМ, по меньшей мере приблизительно 50 мкМ, по меньшей мере приблизительно 75 мкМ или по меньшей мере приблизительно 100 мкМ или более. Терапевтическая экспрессия может быть задана с использованием этих же самых значений.
Высокий уровень экспрессии согласно настоящему изобретению может означать экспрессию терапевтического гена (обычно измеряемую по экспрессии мРНК), равную по меньшей мере приблизительно 1%, по меньшей мере приблизительно 2%, по меньшей мере приблизительно 3%, по меньшей мере приблизительно 4%, по меньшей мере приблизительно 5%, по меньшей мере приблизительно б%, по меньшей мере приблизительно 7%, по меньшей мере приблизительно 8%, по меньшей мере приблизительно
- 5 038966
9%, по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 20% или более в сравнении с уровнем экспрессии соответствующей эндогенной (дефектной) мРНК. Терапевтическая экспрессия может быть задана с использованием тех же самых значений. Например, типичный уровень экспрессии мРНК эндогенного CFTR может быть количественно оценен с позиций числа копий мРНК на клетку легкого, например одна копия мРНК эндогенного CFTR на клетку легкого, две копии мРНК эндогенного CFTR на клетку легкого, три копии мРНК эндогенного CFTR на клетку легкого, четыре копии мРНК эндогенного CFTR на клетку легкого, пять копий мРНК эндогенного CFTR на клетку легкого или более, предпочтительно две копии мРНК эндогенного CFTR на клетку легкого. Экспрессия терапевтического гена изобретения, такого как функциональный ген CFTR, может быть количественно определена относительно эндогенного гена, такого как эндогенные (дисфункциональные) гены CFTR с позиций числа копий мРНК на клетку или любой другой соответствующей единицы измерения.
Высокий уровень экспрессии согласно настоящему изобретению может означать экспрессию терапевтического гена и/или белка при концентрации, равной по меньшей мере приблизительно 0,5%, по меньшей мере приблизительно 1%, по меньшей мере приблизительно 2%, по меньшей мере приблизительно 3%, по меньшей мере приблизительно 4%, по меньшей мере приблизительно 5%, по меньшей мере приблизительно 6%, по меньшей мере приблизительно 7%, по меньшей мере приблизительно 8%, по меньшей мере приблизительно 9%, по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% или более в сравнении с уровнем терапевтического гена и/или белка дикого типа, где уровень дикого типа представлет собой уровень у нормального индивидуума без заболевания. В нескольких вариантах осуществления экспрессию дикого типа принимают за 100%, причем любое улучшение экспрессии гена измеряют относительно этого значения. Как неограничивающий пример, если у нормального индивидуума без заболевания экспрессию функционального гена принимают за 100%, и у индивидуума с заболеванием, экспрессия функционального гена равна 0%, терапевтический уровень экспрессии гена или белка может составлять по меньшей мере приблизительно 0,5%, по меньшей мере приблизительно 1%, по меньшей мере приблизительно 2%, по меньшей мере приблизительно 3%, по меньшей мере приблизительно 4%, по меньшей мере приблизительно 5%, по меньшей мере приблизительно 6%, по меньшей мере приблизительно 7%, по меньшей мере приблизительно 8%, по меньшей мере приблизительно 9%, по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 15%, по меньшей мере приблизительно 20%, по меньшей мере приблизительно 25%, по меньшей мере приблизительно 30%, по меньшей мере приблизительно 40%, по меньшей мере приблизительно 50% или более в сравнении с уровнем для терапевтического гена и/или белка дикого типа. Как еще один неограничивающий пример, если у нормального индивидуума без заболевания экспрессию функционального гена принимают за 100%, и у индивидуума с заболеванием экспрессия функционального гена составляет 50%, терапевтический уровень экспрессии гена или белка может составлять по меньшей мере приблизительно 55%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере приблизительно 96%, по меньшей мере приблизительно 97%, по меньшей мере приблизительно 98%, по меньшей мере приблизительно 99% или более в сравнении с уровнем для терапевтического гена и/или белка дикого типа.
Для секретируемых белков, таких как А1АТ, обычно концентрация в легком или бронхоальвеолярной лаважной жидкости (измеренная с использованием BAL) является приблизительно десятикратной по отношению к концентрации в сыворотке. Как неограничивающий пример, если концентрация секретируемого белка в легком или бронхоальвеолярной лаважной жидкости находится в области 750 нг/мл, сывороточная концентрация белка находится в области 75 нг/мл.
Уровни экспрессии терапевтического гена и/или белка изобретения могут быть измерены в ткани легкого, бронхоальвеолярной лаважной жидкости и/или сыворотке/плазме соответствующим образом. Высокий и/или терапевтический уровень экспрессии может, следовательно, относиться к концентраци в легком, бронхоальвеолярной лаважной жидкости и/или сыворотке/плазме.
Как неограничивающий пример терапевтический уровень экспрессии CFTR обычно составляет 15% от терапевтического уровня мРНК CFTR в сравнении с уровнем экспрессии эндогенной (дефектной) мРНК CFTR.
Как еще один неограничивающий пример терапевтический уровень экспрессии А1АТ обычно равен по меньшей мере приблизительно 1 мкМ в бронхоальвеолярной лаважной жидкости и/или по меньшей мере приблизительно 0,1 мкМ в сыворотке. В предпочтительном варианте осуществления терапевтический уровень экспрессии А1АТ в бронхоальвеолярной лаважной жидкости равен по меньшей мере приблизительно 1,1 мкМ и/или терапевтический сывороточный уровень экспрессии А1АТ согласно настоя- 6 038966 щему изобретению составляет, по меньшей мере приблизительно 11 мкМ. Как еще один неограничивающий пример терапевтический уровень экспрессии А1АТ в бронхоальвеолярной лаважной жидкости (ELF, т.е. промывной жидкости воздухоносных путей и воздушного пространства в легких) равен 70 мкг/мл (в сравнении с нормальным целевым уровнем ATT (A1AT) в ELF, равным 200 мкг/мл).
Как еще один неограничивающий пример терапевтический уровень экспрессии белка FVIII обычно составляет по меньшей мере приблизительно 1-3% или по меньшей мере приблизительно 1-6% от уровня экспрессии у нормального индивидуума, не страдающего от гемофилии.
Терапевтический ген, включенный в вектор изобретения, может быть модифицирован, чтобы способствовать экспрессии. Например, последовательность гена может находиться в CpG-обедненной и/или кодон-оптимизированной форме, чтобы способствовать экспрессии гена. Стандартные методы для модификации генной последовательности, таким образом, являются известными в данной области.
Промотор, включенный в вектор по изобретению, может быть специфически выбран и/или модифицирован, чтобы в дальнейшем оптимизировать регуляцию экспрессии терапевтического гена. Также походящие промоторы и стандартные методы для их модификации являются известными в данной области. Как неограничивающий пример, ряд подходящих (не содержащих CpG) промоторов, пригодных для применения в настоящем изобретении, описаны в Pringle et al. (J. Mol. Med. Berl. 2012, 90(12): 148796), которая полностью включена в данное описание посредством ссылки.
Вектор по изобретению может быть модифицирован для обеспечения прекращения экспрессии гена. Стандартные методы модификации вектора таким образом являются известными в данной области. Как неограничивающий пример широко используют Тет-чувствительные промоторы.
Векторы согласно настоящему изобретению также демонстрируют замечательную устойчивость к усилиям сдвига лишь с умеренным снижением способности к трансдукции при прохождении через клинически значимые устройства для доставки, такие как бронхоскопы, аэрозольные баллончики и ингаляторы.
В одном варианте осуществления, изобретение относится к лентивирусным векторам F/HN, содержащим промотор и трансген, не имеющий интрона расположенного между промотором и трансгеном. В одном варианте осуществления вектор согласно настоящему изобретению доставляют в клетки дыхательных путей. В варианте осуществления лентивирус представляет собой SIV. В одном варианте осуществления промотор является гибридом энхансера человеческого CMV/промотора EF1a (hCEF). Обычно в указанном промоторе изобретения отсутствует интрон, соответствующий нуклеотидам 570-709, и экзон, соответствующий нуклеотидам 728-733 промотора hCEF. Предпочтительный пример последовательности промотора hCEF изобретения представлен SEQ ID NO: 6. Промотор может являться промотором CMV. Пример последовательности промотора CMV представлен SEQ ID NO: 17. Другие промоторы для экспрессии трансгена являются известными в данной области, и их пригодность для лентивирусных векторов по изобретению определяют с использованием установленных методов, известных в данной области. Неограничивающие примеры других промоторов включают UbC и UCOE. Как описано в настоящем документе, промотор может быть модифицирован, чтобы в дальнейшем регулировать экспрессию трансгена изобретения.
В одном варианте осуществления трансген кодирует CFTR. Пример кДНК CFTR представлен SEQ ID NO: 7.
В одном варианте осуществления трансген кодирует А1АТ. Пример трансгена А1АТ представлен SEQ ID NO: 15 или последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 26. SEQ ID NO: 15 является кодон-оптимизированным обедненным по CpG трансгеном А1АТ, сконструированным авторами настоящего изобретения для усиления трансляции в человеческих клетках. Было показано, что такая оптимизация усиливает экспрессию гена вплоть до 15-кратного усиления. Таким образом, в одном варианте осуществления изобретение относится к полинуклеотиду, содержащему нуклеотидную последовательность или состоящему из нуклеотидной последовательности с SEQ ID NO: 15. Варианты такой же самой последовательности (определенной в настоящем описании), которые обладают таким же техническим эффектом усиления трансляции в сравнении с немодифицированной (дикого типа) последовательностью гена А1АТ, также являются охваченными настоящим изобретением. Изобретение дополнительно относится к полипептиду, кодируемому указанным трансгеном А1АТ, иллюстрированному полипептидом с SEQ ID NO: 27, плазмидам (в частности, плазмидам с геномом вектора, определенного в настоящем описании) и лентивирусным векторам, содержащим указанный трансген А1АТ. В предпочтительном варианте осуществления в аспектах изобретения, относящихся к генной терапии А1АТ, согласно настоящему изобретению, используют последовательность трансгена А1АТ с SEQ ID NO: 15.
В одном варианте осуществления трансген кодирует FVIII. Примеры трансгена FVIII представлены посредством SEQ ID NO: 16 и 30 или посредством соответствующих последовательностей, комплементарных SEQ ID NO: 28 и 31.
Лентивирусные векторы, подходящие для использования в настоящем изобретении, включают вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирус иммунодефицита обезьян (SIV), вирус иммунодефицита кошачьих (FIV), вирус инфекционной анемии лошадей (EIAV) и вирус висна/маэди. В одном варианте осуществления изобретения используют вектор SIV, предпочтительно SIV-AGM. В еще одном варианте
- 7 038966 осуществления используют вектор ВИЧ.
Лентивирусные векторы согласно настоящему изобретению являются псевдотипированными гемагглютинин-нейраминидазой (HN) и гибридными (F) белками из респираторного парамиксовируса. В одном варианте осуществления респираторный парамиксовирус представляет собой вирус Сендай (вирус мышиного парагриппа типа 1).
В одном варианте осуществления изобретения лентивирусный вектор является интегразакомпетентным (IC). В альтернативном варианте осуществления лентивирусный вектор является интеграза-дефицитным (ID).
В еще одном другом варианте осуществления изобретения трансген по изобретению представляет собой любой один или несколько из DNAH5, DNAH11, DNAI1 и DNAI2 или другой известный родственный ген.
В одном варианте осуществления изобретения мишенью для доставки вектора является эпителий дыхательных путей. В этом варианте осуществления трансген кодирует α-1 антитрипсин (А1АТ), поверхностно-активный белок В (SFTPB) или гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF). В еще одном другом варианте осуществления трансген кодирует моноклональное антитело (mAb) к возбудителю инфекции. В одном варианте осуществления трансген кодирует антитело к ФНО-α. В дополнительном варианте осуществления трансген кодирует терапевтический белок, участвующий в воспалительном, иммунном или метаболическом состоянии.
В одном варианте осуществления изобретения вектор доставляют в клетки дыхательных путей, чтобы обеспечить выработку белков, подлежащих секреции в систему кровообращения. В этом варианте осуществления трансген кодирует фактор VII, фактор VIII, фактор IX, фактор X, фактор XI и/или фактор фон Виллебранда. Такой вектор может использоваться в лечении заболеваний, в особенности сердечнососудистых заболеваний и заболеваний крови, предпочтительно расстройств, связанных с недостаточной свертываемостью крови, таких как гемофилия. В еще одном варианте осуществления трансген кодирует моноклональное антитело (mAb) против возбудителя инфекции. В одном варианте осуществления трансген кодирует белок, участвующий в воспалительном, иммунном или метаболическом состоянии, таком как болезнь лизосомального накопления.
Согласно изобретению оно относится к лентивирусному вектору F/HN-SIV, содержащему промотор hCEF и трансген CFTR, не имеющий интрона, расположенного между промотором и трансгеном. Аналогично, отсутствует интрон между промотором и трансгеном в геноме вектора (пДНК1) плазмиды (например, pGM326, описанной в настоящем документе, иллюстрированной на фиг. 1А и с последовательностью SEQ ID NO: 1).
Изобретение также относится к лентивирусному вектору F/HN-SIV, содержащему промотор hCEF и трансген A1AT, не имеющий интрона, расположенного между промотором и трансгеном. Такой лентивирусный вектор может быть получен посредством способа, описанного в настоящем описании, с использованием плазмиды, несущей трансген А1АТ и промотор. Аналогично, отсутствует интрон между промотором и трансгеном А1АТ в геноме вектора (пДНК1) плазмиды. Иллюстративная последовательность такой плазмиды приведена в SEQ ID NO: 9 (F/HN-SIV-hCEF-soA1AT, иллюстрированной на фиг. 15А).
Изобретение также относится к лентивирусному вектору F/HN-SIV, содержащему (i) промотор hCEF или промотор CMV и (ii) трансген FVIII; где отсутствует интрон между промотором и трансгеном. Такой лентивирусный вектор может быть получен посредством способа, описанного в настоящем описании, с использованием плазмиды, несущей трансген FVIII и промотор. Аналогично, отсутствует интрон между промотором и трансгеном FVIII в геноме вектора (пДНК1) плазмиды. Иллюстративные последовательности таких плазмид приведены в SEQ ID NO: 11-14 (иллюстрированных на фиг. 22А-Е).
Лентивирусный вектор, описанный выше, содержит трансген. Трансген содержит последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую генный продукт, например белок.
Например, в одном варианте осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая CFTR, A1AT или FVIII, содержит последовательность нуклеиновой кислоты (или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты), которая имеет по меньшей мере 90% (таким образом, как по меньшей мере 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%) идентичности последовательности с последовательностью нуклеиновой кислоты CFTR, A1AT или FVIII соответственно. В дополнительном варианте осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая CFTR, А1АТ или FVIII, содержит последовательность нуклеиновой кислоты (или состоит из последовательности нуклеиновой кислоты), которая имеет по меньшей мере 95% (таким образом, как по меньшей мере 95, 96, 97, 98, 99 или 100%) идентичности последовательности с последовательностью нуклеиновой кислоты CFTR, A1AT или FVIII соответственно. В одном варианте осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая CFTR, представлена SEQ ID NO: 7, последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая А1АТ, представлена SEQ ID NO: 15 или последовательностью, комплементарной SEQ ID NO: 26, и/или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая FVIII, представлена SEQ ID NO: 16 и 30 или посредством соответствующих последовательностей, комплементарных SEQ ID NO: 28 и 31 или их вариантов.
- 8 038966
Термин полипептид, используемый в настоящем описании, также охватывает вариантные последовательности. Таким образом, полипептид, кодируемый трансгеном изобретения, может иметь по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%) идентичности последовательности с функциональной полипептидной последовательностью CFTR, A1AT или FVIII соответственно. В дополнительном варианте осуществления аминокислотная последовательность CFTR, A1AT или трансгена FVIII содержит аминокислотную последовательность (или состоит из аминокислотной последовательности), которая имеет по меньшей мере 95% (например, по меньшей мере 95, 96, 97, 98, 99 или 100%) идентичности последовательности с функциональной полипептидной последовательностью CFTR, A1AT или FVIII соответственно. В одном варианте осуществления аминокислотная последовательность белка А1АТ, кодируемого трансгеном изобретения, содержит аминокислотную последовательность (или состоит из аминокислотной последовательности) из SEQ ID NO: 27 или ее варианты. Предпочтительно указанный вариант белков А1АТ по изобретению имеет по меньшей мере 90% (например, по меньшей мере 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100%), более предпочтительно по меньшей мере 95% или более идентичности последовательности с SEQ ID NO: 27.
В одном варианте осуществления последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей CFTR, A1AT или FVIII, содержит последовательность ДНК (или состоит из последовательности ДНК), которая является комплементарной последовательности ДНК CFTR, А1АТ или FVII соответственно. В одном варианте осуществления CFTR, A1AT или трансген FVIII представляет CFTR, A1AT или FVIII с оптимизированной последовательностью (soCFTR2, soA1AT или FVIII). Пример представлен SEQ ID NO: 7, 15 и 16 соответственно. Иллюстративная последовательность, комплементарная последовательности A1AT с оптимизированной последовательностью, приведена в SEQ ID NO: 26. Иллюстративные последовательности, комплементарные оптимизированным последовательностям FVIII, приведены в SEQ ID NO: 28 и 31.
В одном варианте осуществления изобретения вектор F/HN экспрессии трансгена направляется промотором цитомегаловируса (CMV). В еще одном варианте осуществления вектор экспрессии трансгена направляется промотором фактора элонгации 1a (EF1a). В предпочтительном варианте осуществления вектор экспрессии трансгена направляется гибридом энхансера человеческого CMV/промотора EF1a (hCEF). В одном варианте осуществления промотор hCEF имеет замену всех динуклеотидов CG, на любой один из AG, TG или GT. Таким образом, в одном варианте осуществления промотор hCEF является не содержащим CpG.
В одном варианте осуществления лентивирусный вектор может быть получен с использованием плазмиды F/HN-SIV-hCEF-soCFTR2-IC. В этом варианте осуществления CFTR экспрессируется под управлением промотора hCEF. Этот лентивирусный вектор может быть описан, как содержащий F/HNSIV-hCEF-soCFTR2-IC, так как он содержит F/HN элементы SIV, а также компетентную по интегразе кассету экспрессии, содержащую CFTR под управлением промотора hCEF. Этот лентивирусный вектор по изобретению способен производить долговременный, повторяемый, высокий уровень экспрессии в клетках дыхательных путей, без индуцирования чрезмерного иммунного ответа. Следовательно, изобретение относится к эффективному средству для генной терапии in vivo, например для переноса гена CFTR в легкое, пораженное муковисцидозом, для лечения муковисцидоза легких.
В предпочтительном варианте осуществления лентивирусный вектор может быть получен с использованием плазмиды F/HN-SIV-hCEF-soA1AT. В этом варианте осуществления A1AT экспрессируется под управлением промотора hCEF. Данный лентивирусный вектор может быть описан, как содержащий F/HN-SIV-hCEF-soA1AT, так как он содержит F/HN элементы SIV, а также кассету экспрессии, содержащую A1AT под управлением промотора hCEF. Этот лентивирусный вектор по изобретению способен производить долговременный, повторяемый, высокий уровень экспрессии в клетках дыхательных путей, без индуцирования чрезмерного иммунного ответа. Следовательно, изобретение относится к эффективному средству для генной терапии in vivo, например для переноса гена А1АТ в легкое или нос пациента для выработки А1АТ, который затем секретируется в систему кровообращения (как описано в настоящем документе). Таким образом, этот вектор и другие векторы по изобретению, содержащие трансген А1АТ, могут использоваться в лечении недостаточности А1АТ или при других показаниях, как описано в настоящем описании.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления лентивирусные векторы могут быть получены с использованием F/HN-SIV-CMV-HFVIII-V3, F/HN-SIV-hCEF-HFVIII-V3, F/HN-SIV-CMV-HFVIIIN6-ko и/или F/HN-SIV-hCEF-HFVШ-N6-коплазмид. HFVIII относится к человеческому FVIII. В данном варианте осуществления FVIII экспрессируется под управлением промотора hCEF или промотора CMV. Эти лентивирусные векторы могут быть описаны как содержащие F/HN-SIV-CMV-HFVIII-V3, F/HNSIV-hCEF-HFVIII-V3, F/HN-SIV-CMV-HFVIII-N6-ko и F/HN-SIV-hCEF-HFVIII-N6-Ko соответственно, так как они включают F/HN элементы SIV, a также кассету экспрессии, содержащую FVIII под управлением промотора hCEF/промотора CMV. Вирусные векторные продукты, получаемые с использованием F/HN-SIV-CMV-HFVIII-V3, F/HN-SIV-hCEF-HFVIII-V3, F/HN-SIV-CMV-HFVIII-N6-co и/или F/HN-SIVhCEF-HFVШ-N6-коплазмиды, являются также известными, как VGM126, VGM127, VGM142 и VGM129 (см. фиг. 22). Эти лентивирусные векторы по изобретению способны производить долговременный, по
- 9 038966 вторяемый, высокий уровень экспрессии в клетках дыхательных путей, без индуцирования чрезмерного иммунного ответа. Следовательно, изобретение предоставляет эффективное средство генной терапии in vivo, например, для переноса гена FVIII в легкое или нос пациента для выработки FVIII, который затем секретируется в систему кровообращения (как описано в настоящем описании). Таким образом, эти векторы и другие векторы по изобретению, содержащие трансген FVIII, могут использоваться в лечении гемофилии или при других показаниях, как описано в настоящем описании.
Лентивирусные векторы по изобретению не содержат интрон между промотором и трансгеном. Аналогично, геном вектора плазмид по изобретению (используемый для генерации, указанных лентивирусных векторов, описанных в настоящем описании) также не содержит интрон между промотором и трансгеном. Изобретение, следовательно, относится в одном варианте осуществления к отсутствию интрона между промотором hCEF и кодирующими последовательностями, подлежащими экспрессии. В одном предпочтительном варианте осуществления кодирующая последовательность, подлежащая экспрессии, представляет собой последовательность нуклеиновой кислоты CFTR, A1AT и/или FVIII.
В одном варианте осуществления векторы по изобретению содержат центральный полипуриновый путь (сРРТ) и посттранскрипционные регуляторные элементы вируса гепатита сурков (WPRE). В одном варианте осуществления последовательность WPRE представлена SEQ ID NO: 8.
В одном варианте осуществления вектор по изобретению используют для генной терапии. В одном варианте осуществления заболевание, подлежащее лечению, представляет собой MB. В еще одном другом варианте осуществления изобретения заболевание, подлежащее лечению, представляет собой первичную цилиарную дискинезию (PCD). В одном варианте осуществления вектор применяют для лечения острого повреждения легких. В одном варианте осуществления изобретения заболевание, подлежащее лечению, представляет собой недостаточность поверхностно-активного белка В (ПАБ-В), недостаточность α-1-антитрипсина (A1AD), легочный альвеолярный протеиноз (РАР), хроническое обструктивное заболевание легких (ХОБЛ). В еще одном другом варианте осуществления заболевание представляет собой воспалительное, иммунное или метаболическое состояние.
Заболевание, подлежащее лечению, может являться сердечно-сосудистым заболеванием или болезнью крови, в особенности недостаточной свертываемостью крови. Таким образом, в нескольких вариантах осуществления заболевание, подлежащее лечению, представляет собой гемофилию А, гемофилию В или гемофилию С, недостаточность фактора VII и/или болезнь фон Виллебранда. В еще одном другом варианте осуществления заболевание, подлежащее лечению, представляет собой воспалительное заболевание, инфекционное заболевание или метаболическое состояние, такое как болезнь лизосомального накопления.
Неограничивающие примеры заболеваний, которые могут подвергаться лечению с использованием генной терапии А1АТ согласно настоящему изобретению, включают диабет типа 1 и типа 2, острый инфаркт миокарда, ишемическую болезнь сердца, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, отторжение трансплантата, реакцию трансплантат против хозяина (GvH), рассеянный склероз, заболевание печени, цирроз, васкулиты и инфекции, такие как бактериальные и/или вирусные инфекции.
В одном аспекте изобретения с помощью вектора можно эффективно лечить заболевание посредством получения трансгена для коррекции заболевания. Например, посредством ввода функциональной копии гена CFTR для облегчения протекания или предотвращения заболевания легких у пациентов с муковисцидозом, независимо от лежащей в основе мутации.
В еще одном другом варианте осуществления изобретение относится к способу получения лентивируса. В этом варианте осуществления способ по изобретению представляет собой масштабируемый, соответствующий требованиям GMP способ. Таким образом, способ по изобретению обеспечивает генерацию очищенных F/HN векторов с высоким титром.
Способ по изобретению включает следующие стадии:
(a) выращивание клеток в суспензии;
(b) трансфекция клеток с использованием одной или нескольких плазмид;
(c) добавление нуклеазы;
(d) сбор лентивируса;
(e) добавление трипсина и (f) очистка.
В одном варианте осуществления способа по изобретению одна или несколько плазмид предоставляют геном вектора, Gag-Pol, Rev, F и HN. Таким образом, могут использоваться пять плазмид для каждого из генома векторв, Gag-Pol, Rev, F и HN соответственно. В предпочтительном способе по изобретению с использованием 5 плазмид, плазмида с геномом вектора кодирует весь генетический материал, который упакован в конечный лентивирусный вектор, включающий трансген. Обычно только часть генетического материала, обнаруженного в плазмиде с геномом вектора, заканчивается в вирусе. Плазмида с геномом вектора может обозначаться в настоящем описании как пДНК1. Другие четыре плазмиды являются производящими плазмидами, кодирующими белки Gag-Pol, Rev, F и HN. Эти плазмиды могут обозначаться как пДНК2а, пДНК2Ь, пДНК3а и пДНКЗЬ соответственно.
В одном варианте осуществления изобретения лентивирус представляют собой SIV, такой как SIV1,
- 10 038966 предпочтительно SIV-AGM. В одном варианте осуществления белки F и HN являются производными парамиксовируса, такого как вирус Сендай. В одном варианте осуществления плазмида с геномом вектора (пДНК1) содержит трансген и промотор трансгена.
В конкретном варианте осуществления, относящемся к CFTR, пять плазмид характеризуются фиг. Ία-IE, таким образом, пДНК1 является плазмидой pGM326 фиг. 1А, пДНК2а является плазмидой pGM299 фиг. 1B, пДНК2Ь является плазмидой pGM299 фиг. 1С, пДНКЗа является плазмидой pGM301 фиг. 1D и пДНКЗЬ является плазмидой pGM303 фиг. 1E. В данном варианте осуществления окончательный CFTR-содержащий лентивирусный вектор может обозначаться как VGM058 (см. примеры). Вектор VGM058 представляет собой предпочтительный вариант осуществления изобретения.
В варианте осуществления относящемся к А1АТ, пять плазмид могут характеризоваться фиг. 15А (таким образом, плазмида пДНК1 может являться pGM407) и 1В-Е (как указано выше для конкретного варианта осуществления с CFTR).
В варианте осуществления, относящемся к FVIII, пять плазмид могут характеризоваться фиг. 22C-F (таким образом, плазмида пДНК1 может представлять собой pGM411, pGM412, pGM413 или pGM414) и 1В-Е.
В этих вариантах осуществления изобретения плазмида, определенная на фиг. 1А, представлена посредством SEQ ID NO: 1; плазмида, определенная на фиг. 1В, представлена посредством SEQ ID NO: 2; плазмида, определенная на фиг. 1С, представлена посредством SEQ ID NO: 3; плазмида, определенная на фиг. 1D, представлена посредством SEQ ID NO: 4; плазмида, определенная на фиг. 1E, представлена посредством SEQ ID NO: 5; плазмида, определенная на фиг. 15А, представлена посредством SEQ ID NO: 9 и F/HN-SIV-CMV-HFVIII-V3, F/HN-SIV-hCEF-HFVIII-V3, F/HN-SIV-CMV-HFVШ-N6-со и/или F/HNSΓV-hCEF-HFVШ-N6-коплазмиды, определенные на фиг. 22В, представлены посредством SEQ ID NO: 11-14 соответственно.
В 5-плазмидном способе по изобретению все пять плазмид способствуют образованию окончательного лентивирусного вектора. Во время получения лентивирусного вектора плазмида с геномом вектора (пДНК1) обеспечивает энхансер/промотор, Psi, RRE, сРРТ, mWPRE, SIN LTR, SV40 полиА (см. фиг. 1А), которые являются важными для производства вируса. При использовании pGM326 в качестве неограничивающего примера пДНК1 CMV энхансер/промотор, SV40 polyA, colEl Ori и KanR участвуют в продуцировании лентивирусного вектора по изобретению (например, vGM058), но не обнаруживаются в окончательном вирусном векторе. RRE, сРРТ (центральный полипуриновый путь), hCEF, soCFTR2 (трансген) и mWPRE из pGM326 обнаруживаются в окончательном вирусном векторе. SIN LTR (длинные концевые повторы, самоинактивирующийся SIN/IN) и Psi (сигнал упаковки) могут обнаруживаться в окончательном вирусном векторе.
Для других лентивирусных векторов по изобретению, соответствующие элементы из других плазмид с геномом вектора (пДНК1) требуются для получения (но не обнаруживаются в окончательном векторе), или присутствуют в окончательном вирусном векторе.
Белки F и HN из пДНКЗа и пДНКЗЬ (предпочтительно белки Sendai F и HN) являются важными для инфицирования целевых клеток конечным лентивирусным вектором, т.е. для входа в эпителиальные клетки пациентов (обычно клетки легких или назальные клетки, описанные в настоящем описании). Продукты плазмид пДНК2а и пДНК2Ь являются важными для трансдукции вируса, т.е. для введения лентивирусной ДНК в геном хозяина. Промотор, регуляторные элементы (такие как WPRE) и трансген являются важными для экспрессии трансгена клетке (клетках) мишенях.
В одном варианте осуществления стадии (a)-(f) выполняют последовательно. В одном варианте осуществления клетки представляют собой клетки HEK293 или клетки 293T/17. В одном варианте осуществления клетки выращивают в несодержащих компонентов из животных (безсывороточных) средах. В одном варианте осуществления трансфекцию выполняют посредством применения PEIPro™. В одном варианте осуществления нуклеаза представляет собой эндонуклеазу, например Бензоназу®. В одном варианте осуществления активность трипсина представлена не имеющим животного происхождения рекомбинантным ферментом, таким как TrypLE Select™.
В одном варианте осуществления изобретения добавление нуклеазы происходит на стадии до сбора. В альтернативном варианте осуществления добавление нуклеазы происходит на стадии после сбора. В еще одном другом варианте осуществления добавление трипсина происходит на стадии до сбора. В еще одном другом варианте осуществления добавление трипсина присходит на стадии после сбора.
В одном варианте осуществления стадия очистки включает стадию хроматографии. В этом варианте осуществления используют гель-проникающую хроматографию (SEC) с комбинированным режимом. В одном варианте осуществления используют анионообменную хроматографию. В этом варианте осуществления для стадии элюирования не используют никакого градиента соли.
В одном варианте осуществления этот метод используют для получения лентивирусных векторов по изобретению. В этом варианте осуществления вектор по изобретению содержит ген CFTR, A1AT и/или FVIII. В альтернативном варианте осуществления вектор по изобретению содержит любой из указанных выше генов или генов, кодирующих указанные выше белки.
- 11 038966
В одном варианте осуществления способа по изобретению любую комбинацию из одной или нескольких специфичных конструкций плазмид, представленных на фиг. 1А-1Е, 15А и/или 22C-22F, используют для получения вектора по изобретению.
Изобретение дополнительно относится к способу лечения заболевания, включающему введение лентивирусного вектора по изобретению пациенту. В этом варианте осуществления изобретение относится к лентивирусному вектору по изобретению для применения в лечении заболевания легких. В одном варианте осуществления заболевание является хроническим заболеванием. В конкретном варианте осуществления изобретение относится к способу лечения MB. В других вариантах осуществления изобретение относится к способу лечения первичной цилиарной дискинезии (PCD), недостаточности поверхностно-активного белка В (ПАБ-В), недостаточности α-1-антитрипсина (A1AD), легочного альвеолярного протеиноза (РАР), хронического обструктивного заболевания легких (ХОБЛ). В еще одном другом варианте осуществления заболевание представляет собой воспалительное, иммунное или метаболическое состояние.
В еще одном другом варианте осуществления заболевание может являться сердечно-сосудистым заболеванием или болезнью крови, в особенности недостаточной свертываемостью крови, таким как гемофилия А, гемофилия В, гемофилия С, недостаточность фактора VII и/или болезнь фон Виллебранда, воспалительное заболевание, инфекционное заболевание или метаболическое состояние, такое как болезнь лизосомального накопления.
Заболевание может представлять собой диабет типа 1 и типа 2, острый инфаркт миокарда, ишемическую болезнь сердца, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, отторжение трансплантата, реакцию трансплантат против хозяина (GvH), рассеянный склероз, заболевание печени, цирроз, васкулиты и инфекции, такие как бактериальные и/или вирусные инфекции.
Лентивирусные векторы по изобретению могут вводиться в любой дозировке, подходящей для достижения желаемого терапевтического эффекта. Соответствующие дозировки могут определяться клиницистом или другим практикующим врачом с использованием стандартных методов и в ходе их обычной работы. Неограничивающие примеры подходящих дозировок включают 1х108 единиц трансдукции (ЕТ), 1х109 ET, 1x101° ET, 1x1011 ET или более.
Изобретение также относится к композициям, содержащим лентивирусные векторы, описанные выше, и фармацевтически приемлемый носитель. Неограничивающие примеры фармацевтически приемлемых носителей включают воду, физраствор и забуференный фосфатом физраствор. В нескольких вариантах осуществления однако композиция находится в лиофилизированной форме, и в этом случае она может включать стабилизатор, такой как альбумин бычьей сыворотки (BSA). В нескольких вариантах осуществления может быть желательно составлять композицию вместе с консервантом, таким как тимеросал или азид натрия, чтобы способствовать долговременному хранению.
Векторы по изобретению могут вводиться посредством любого соответствующего пути. Может быть желательным направлять композиции согласно настоящему изобретению (описанные выше) в дыхательную систему пациента. Эффективная передача терапевтической/профилактической композиции или лекарственного средства к участку инфекции в дыхательном пути может достигаться посредством перорального или интраназального введениия, например, в виде аэрозолей (например, назальных спреев) или посредством катетеров. Обычно лентивирусные векторы по изобретению являются стабильными в клинически значимых ингаляторах, катетерах и аэрозолях и т.д.
Лекарственные формы для интраназального введения могут находиться в форме назальных капель или назального спрея. Интраназальная лекарственная форма может содержать капли, имеющие приблизительные диаметры в интервале 100-5000 мкм, такие как 500-4000 мкм, 1000-3000 мкм или 100-1000 мкм. Альтернативно, с учетом объема капли могут находиться в интервале приблизительно 0,001-100 мкл, таком как 0,1-50 мкл или 1,0-25 мкл или таком как 0,001-1 мкл.
Аэрозольная лекарственная форма может принимать форму порошка, суспензии или раствора. Размер частиц аэрозоля имеет отношение к способности аэрозоля к доставке. Более мелкие частицы могут перемещаться дальше вниз по дыхательным путям в направлении альвеол, чем могли бы более крупные частицы. В одном варианте осуществления аэрозольные частицы имеют такое распределение по диаметру, чтобы способствовать доставке на протяжении полной длины бронхов, бронхиол и альвеол. Альтернативно, распределение частиц по размерам может быть выбрано, чтобы целенаправленно действовать на конкретную часть дыхательного воздухоносного пути, например альвеолы. В случае аэрозольной доставки лекарственного средства частицы могут иметь диаметры в приблизительном интервале 0,1-50 мкм, предпочтительно 1-25 мкм, более предпочтительно 1-5 мкм.
Аэрозольные частицы могут использоваться для доставки с использованием ингалятора (например, через рот) или назального спрея. Аэрозольная лекарственная форма может необязательно содержать пропеллент и/или поверхностно-активное вещество.
Используемые в настоящем описании термины последовательность нуклеиновой кислоты и полинуклеотид используются взаимозаменяемо и не подразумевают какого-либо ограничения длины. Используемые в настоящем описании термины нуклеиновая кислота и нуклеотид используют взаимо- 12 038966 заменяемо. Термины последовательность нуклеиновой кислоты и полинуклеотид охватывают последовательности ДНК (включая кДНК) и РНК. Термины трансген и ген также используют взаимозаменяемо, и оба термина охватывают их фрагменты или варианты, кодирующие целевой белок.
Трансгены согласно настоящему изобретению включают последовательности нуклеиновой кислоты, которые были удалены из их природного окружения, изоляты рекомбинантной или клонируемой ДНК и химически синтезированные аналоги или аналоги, биологически синтезируемые гетерологичными системами.
Полинуклеотиды согласно настоящему изобретению могут быть получены посредством любых средств, известных в данной области. Например, крупные количества полинуклеотидов могут быть получены посредством репликации в подходящей клетке-хозяине. Фрагменты природных или синтетических ДНК, кодирующие желательный фрагмент, будут включаться в конструкции рекомбинантных нуклеиновых кислот, обычно конструкции ДНК, способные к введению в прокариотическую или эукариотическую клетку и репликации в ней. Обычно конструкции ДНК будут подходящими для автономной репликации в одноклеточном хозяине, таком как дрожжи или бактерии, но также могут быть предназначены для введения в геном культивируемых клеточных линий насекомых, млекопитающих, растений или других эукариотических клеточных линий и интеграции в их геноме.
Полинуклеотиды согласно настоящему изобретению также могут быть получены химическим синтезом, например посредством фосфорамидитного метода или триэфирного метода, которые могут выполняться на промышленно выпускаемых автоматизированных олигонуклеотидных синтезаторах. Двухцепочечный фрагмент может быть получен из одноцепочечного продукта химического синтеза либо посредством синтезирования комплементарной цепи и совместного отжига цепи при соответствующих условиях или посредством добавления комплементарной цепи с использованием ДНК-полимеразы с последовательностью соответствующего праймера.
Применительно к последовательности нуклеиновой кислоты термин изолированная в контексте настоящего изобретения означает, что полинуклеотидная последовательность была удалена из ее природного генетического окружения и, таким образом, не содержит других чужеродных или нежелательных кодирующих последовательностей (но может включать природные 5'- и 3'-нетранслируемые области, такие как промоторы и терминаторы) и находится в форме подходящих для применения в генетически сконструированных системах продуцирования белка. Такие изолированные молекулы являются молекулами, которые отделяют от их природного окружения.
С учетом вырожденности генетического кода среди полинуклеотидов согласно настоящему изобретению возможна значительная вариабельность последовательностей. Вырожденные кодоны, охватывающие все возможные кодоны для данной аминокислоты, приведены ниже.
Аминокислота Кодоны Вырожденный кодон
Cys TGC TGT TGY
Ser AGC AGT TCA TGC TCG TGT WSN
Thr AGA ACC ACG ACT ACN
Pro CCA GCC CCG CCT CCN
Ala GCA GCC GCG GCT GCN
Gly GGA GGC GGG GGT GGN
Asn AAC AAT AAY
Asp GAG GAT GAY
Glu GAA GAG GAR
Gin CAA GAG CAR
His GAG CAT CAY
Arg AGA AGG GGA GGC GGG GGT MGN
Lys AAA AAG AAR
- 13 038966
Met ATG ATG
Не ATA АТС ATT ATH
Leu СТА СТС CTG CTT TTA TTG YTN
Vai GTA GTC GTG GTT GTN
Phe TTC TTT TTY
Туг TAG TAT TAY
Trp TGG TGG
Ter TAA TAG TGA TRR
Asn/Asp RAY
Glu/Gln SAR
Любая NNN
Рядовой специалист в области сможет понять, что при определении вырожденного кодона, представительного для всех возможных кодонов, кодирующих каждую аминокислоту, существует пластичность. Например, несколько полинуклеотидов, охватываемых вырожденной последовательностью, могут кодировать вариантные аминокислотные последовательности, но рядовой специалист в данной области сможет легко идентифицировать такие вариантные последовательности при сравнении с аминокислотными последовательностями настоящего изобретения.
Вариантная последовательность нуклеиновой кислоты имеет существенную гомологию или существенное сходство с эталонной последовательностью нуклеиновой кислоты (или ее фрагментом). Последовательность нуклеиновой кислоты или ее фрагмент являются гомологичными по существу (или существенно идентичными) с эталонной последовательностью, если при оптимальном выравнивании (с соответствующими нуклеотидными вставками или делециями) с другой нуклеиновой кислотой (или ее комплементарной цепью) идентичность нуклеотидной последовательности составляет по меньшей мере приблизительно 70, 75, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98 или 99% нуклеотидных оснований. Методы определения гомологии последовательностей нуклеиновых кислот являются известными в данной области.
Альтернативно, вариантная последовательность нуклеиновой кислоты является, по существу, гомологичной (или, по существу, идентичной) эталонной последовательности (или ее фрагменту), если вариантная и эталонная последовательности способны к гибридизации при жестких (например, очень жестких) условиях гибридизации. На гибридизацию последовательности нуклеиновой кислоты будут воздействовать такие условия, как концентрация соли (например, NaCl), температура или органические растворители, в дополнение к составу оснований, длине комплементарных цепей и числу несовпадений нуклеотидных оснований между гибридизирующимися нуклеиновыми кислотами, что специалисты в данной области смогут легко понять. Предпочтительно используются жесткие температурные условия, и они включают температуры, как правило, превышающие 30°С, обычно превышающие 37°С и предпочтительно превышающие 45°С. Жесткие солевые условия будут, как правило, составлять меньше чем 1000 мМ, обычно меньше чем 500 мМ и предпочтительно меньше чем 200 мМ. рН обычно находится между 7,0 и 8,3. Комбинация параметров является гораздо более важной, чем любой одиночный параметр.
Методы определения процента идентичности последовательности нуклеиновой кислоты являются известными в данной области. Посредством примера при оценке идентичности последовательности нуклеиновой кислоты последовательность, имеющая заданное число смежных нуклеотидов, может быть выравнена с последовательностью нуклеиновой кислоты (имеющей такое же самое число смежных нуклеотидов) из соответствующей части последовательности нуклеиновой кислоты согласно настоящему изобретению. Программные средства, известные в данной области для определения процента идентичности последовательности нуклеиновой кислоты, включают Nucleotide BLAST.
Рядовой специалист в данной области поймет, что различные виды проявляют преимущественную частоту использования кодона. Используемый в настоящем описании термин преимущественная частота использования кодона относится к кодонам, которые наиболее часто используются в клетках некоторых видов, таким образом, благоприятствуя одному или нескольким представителям возможных кодонов, кодирующих каждую аминокислоту. Например, аминокислота треонин (Thr) может кодироваться АСА, АСС, ACG или ACT, но в клетках-хозяевах млекопитающих АСС является наиболее часто используемым кодоном; у других видов, преимущественными могут быть другие кодоны. Преимущественные кодоны для конкретного вида клеток-хозяев могут вводиться в полинуклеотиды согласно настоящему изобретению посредством различных методов, известных в данной области. Введение последовательно- 14 038966 стей преимущественного кодона в рекомбинантную ДНК может, например, увеличить выработку белка, делая трансляцию белка более эффективной в конкретном типе или виде клеток.
Таким образом, в одном варианте осуществления изобретения последовательность нуклеиновой кислоты является кодон-оптимизированной для экспрессии в клетке-хозяине.
Фрагмент полинуклеотида, представляющий интерес, содержит ряд последовательных нуклеотидов из последовательности указанного непроцессированного полинуклеотида. Посредством примера фрагмент полинуклеотида, представляющий интерес, может иметь (или состоять из) по меньшей мере 30 последовательных нуклеотидов из последовательности указанного полинуклеотида (например, по меньшей мере 35, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800 850, 900, 950 или 1000 последовательных остатков нуклеиновой кислоты указанного полинуклеотида). Фрагмент может включать по меньшей мере одну антигенную детерминанту и/или может кодировать по меньшей мере один антигенный эпитоп, соответствующий полипептиду, представляющему интерес. Обычно фрагмент, определенный в данном описании, сохраняет такую же функцию, как и непроцессированные полинуклеотид или полипептид.
Описание чертежей
Настоящее изобретение теперь будет описано посредством примера только со ссылкой на сопроводительные чертежи, на которых фиг. 1 показывает иллюстративные плазмиды, используемые в изобретении. Фиг. 1А-1Е показывают схематические чертежи плазмид, используемых для получения векторов по изобретению. В одном варианте осуществления изобретения фиг. 1А предоставляет инстумент изобретения;
фиг. 2 показывает продолжительность экспрессии трансгена F/HN-SIV в мышиной назальной ткани, перфузию которой проводили 4x108 ET F/HN-SIV-CMV-EGFP, и экспрессию EGFP, определенную через указанное число дней после лечения. Показан отрицательный контроль, где перфузию назальной ткани проводили разбавителем вектора (PBS);
фиг. 3 демонстрирует продолжительность экспрессии трансгена F/HN-SIV, показывая ее через 1 год после обработки. Экспрессию EGFP определяли у 10 независимых мышей через 360 дней после обработки;
фиг. 4 показывает клеточное распределение экспрессии трансгена F/HN-SIV. Экспрессию EGFP определяли в гистологических срезах носовой полости мышей (2 мм от кончика носа) через 30 дней после обработки. EGFP-положительные клетки производили белый точечный сигнал;
фиг. 5 показывает типы клеток, трансдуцированные с использованием обработки мышиного носа F/HN-SIV. 69% клеток, трансдуцированных в носовую полость мышей, прдставляли собой реснитчатые респираторные эпителиальные клетки. Другие трансдуцированные клеточные типы включали нейрональные клетки в обонятельном эпителии (21%) и сквамозные клетки (7%);
фиг. 6 показывает повторное введение F/HN-SIV в нос мышей. Мышиная назальная ткань была трансдуцирована (как на фиг. 1) с использованием одной дозы F/HN-SIV-CMV-Lux или двух доз F/HNSIV-CMV-EGFP, с последующим введением одной дозы F/HN-SIV-CMV-Lux при 28-дневных интервалах. Таким образом, повторное введение F/HN-SIV в нос мыши не изменяет уровней экспрессии гена. Экспрессию трансгена сравнивают с ведущей невирусной лекарственной формой для переноса генов (плазмида CMV-Lux в комплексе с GL67A);
фиг. 7 отображает трансдукцию человеческих респираторных клеточных культур поверхности раздела воздух-жидкость (ALI). Человеческие культуры ALI трансдуцировали с использованием F/HN-SIVLux при указанной множественности заражения (MOI) и визуализировали по экспрессии Lux через 5 дней после обработки;
фиг. 8 демонстрирует что F/HN-SIV может направлять функциональную экспрессию CFTR. Клетки HEK293T трансдуцировали с использованием F/HN-SIV-CMV-EGFP-CFTR при 500 MOI и функциональную активность CFTR определяли по эффлюксу йодида. F/HN-SIV-CMV-EGFP служила в качестве отрицательного контроля;
фиг. 9 показывает, что F/HN-SIV эффективно трансдуцирует овечьи и человеческие первичные клетки легкого и легкое мыши. Фиг. 9А показывает, что трансдукция человеческих клеток соскоба слизистой носа (MOI 250) и срезов человеческого и овечьего легкого, культивированных ex vivo (1E7 ЕТ/срез) вместе с F/HN-SIV-CMV-Lux, приводит к значительной экспрессии трансгена люциферазы через 24-48 ч после трансдукции. Фиг. 9В и 9С отражают трансдукцию (~1x105) первичных человеческих клеток легкого, пораженного MB, культивированных на поверхности раздела воздух-жидкость (CF hALIs) с использованием векторов (3Е7 ЕТ) F/HN-SIV-SOCFTR2, содержащих CMV- и hCEF промоторы трансгена. (В) Число копий вектора (копий провирусной ДНК на копию эндогенной ДНК CFTR) через 68 дней после трансдукции. (С) Уровень экспрессии мРНК CFTR (%VE: копии мРНК CFTR на копию эндогенной мРНК CFTRx100) через 6-8 дней после трансдукции. Горизонтальная линия на (С) представляет целевой уровень экспрессии, равный 5% VE, как полагают, представляющий терапевтический порог. После in vivo доставки векторов F/HN-SIV-EGFPLux, содержащих CMV-, EF1aS и промотор hCEFs в дефектной по интегразе (ID) или компетентной по интегразе форме (IC или без метки), экспрессию
- 15 038966 трансгена в клетках дыхательных путей определяли в назальном эпителии (D) и эпителии легких (Е) мышей (п=6-10/группу). Временную динамику экспрессии трансгена люциферазы регистрировали посредством визуализации биолюминесценции in vivo и нормализовали по доставляемой дозе. Фиг. 9F показывает представительные изображения биолюминесценции после трансдукции мышам in vivo на день 14 после трансдукции. Фиг. 9G отбражает представительные изображения биолюминесценции после трансдукции in vitro не-МВ hALI на день 5-6 после трансдукции. Фиг. 9Н представляет экспрессию EGFP через 14 дней после трансдукции в мышиный назальный эпителий после доставки 1,6Е8 ЕТ F/HN-SIVhCEF-EGFPLux (vGM020). EGFP визуализировали посредством иммуногистохимии, ядра визуализировали посредством DAPI. Фиг. 9I показывает временную динамику экспрессии трансгена люциферазы у не-МВ ALI, которую регистрировали посредством повторной визуализации биолюминесценции и нормализовали по доставляемой дозе;
фиг. 10 показывает, что F/HN-SIV эффективно трансдуцирует легкое овцы in vivo. Фиг. 10А показывает, что для моделирования вирусной доставки в легкое овцы авторы изобретения инстиллировали (аликвоты 3x100 мкл в течение ~5 мин) акрифлавин в проксимальные дыхательные пути при прямой бронхоскопической визуализации. Распределение акрифлавина можно оценить по оранжевому окрашиванию иссеченных дыхательных путей после смерти. Следует отметить, что акрифлавин в значительной степени ограничен проводящими воздухоносными путями и отсутствует в альвеолярных областях. Стрелка указывает приблизительный участок инстилляции. Числа на линейке представляют собой см. Фиг. 10В является представлением в виде диаграммы легкого овцы (центр/верхняя часть трахеи). Зеленый круг представляет область на (А). На (В) линия указывает прохождение бронхоскопа для доставки аликвот 3x100 мкл 2,2Е9 ЕТ/мл (всего 6,6Е8 ЕТ) F/HN SIV CMV-EGFPLux n=3 индивидуальным оацам (коды животных Т121, Т156 и Т251). Через семь дней после доставки 5-6 блоков образцов ткани были взяты при вскрытии с интервалами ~1 см от участка инстилляции. Блоки были разделены на 2-3 приблизительно эквивалентных образца и проанализированы на предмет экспрессии трансгена посредством анализа люциферазы (С), нормализованного по содержанию белка; и (D) количественная РВ-ПЦР, нормализованная по уровням эндогенной мРНК CFTR. Горизонтальная линия на (С) представляет наивысшую активность люциферазы, отмеченную в каком-либо образце, обработанном с использованием невирусного вектора переноса генов, и (D) целевой уровень экспрессии, равный 5% VE, как полагают, представляющий терапевтический порог;
фиг. 11 изображает получение и очистку F/HN векторов SIV. F/HN векторы SIV получали посредством 5-плазмидной (пДНК) PEI-опосредованной временной трансфекции клеток 293Т, выращенных в суспензии в масштабе 1 л в биореакторах WAVE с контролируемым рН (GE), с применением масштабируемых способов изобретения. Векторы осветляли посредством глубинной/конечной фильтрации (GE/Pall), загрязняющие нуклеиновые кислоты удаляли с использованием Бензоназы® (Merck), векторы активировали с использованием TrypLE Select™ (Life Technology), очищали и концентрировали посредством анионообменной мембранной хроматографии (Pall) и тангенциальной поточной фильтрации (Spectrum). Все емкости, контейнеры и колонки для процесса представляли собой одноразовые изделия в соответствии с требованиями cGMP. Все реагенты, за исключением плазмидной ДНК, не имели животного происхождения в соответствии с требованиями cGMP. Показаны данные для различных конфигураций вектора (промотор трансгена, трансген, статус интегразы). Физические и функциональные титры определяли, используя К-ПЦР. (А) Физический титр от первоначального осветленного сбора и конечный очищеннный продукт. Средний выход процесса составляет ~44%. (В) Функциональный титр конечного продукта. Средний функциональный титр составляет ~2x109 ЕТ/мл продукта и ~3x109 ЕТ/л объема биореактора. Целевая производительность и выходы были превышены. В нижних выходящих векторах CFTR используют промотор CMV трансгена. В верхних выходящих векторах CFTR используют промоторы EF1aS и hCEF трансгена. (С) Частицы конечного продукта: соотношение инфекционности является плотно кластеризованным и аналогичным значениям от других производителей векторов с высоким качеством (Oxford BioMedica, BlueBirdBio). Медианная частица: соотношение инфекционности составляет ~300. Консистенции продукта достигали с использованием методов Дизайна экспериментов, подтверждающего окончательный переход к процессу производства на основании разрешения контролирующего ведомства на основе QbD. (D) Функциональный титр окончательного продукта строго коррелирует с первоначальным физическим титром, указывающим на ненасыщающие условия с использованием концентрации вектора, не ограничивающей стадии процесса - предполагают, что масштабирование очистки будет эффективным;
фиг. 12 отображает профилирование участка ввода (IS) и выживаемость трансдуцированных мышей. Фиг. 12A-F представляет сравнение профилей IS от F/HN-SIV-трансдуцированного мышиного легкого и трансдуцированной вектором VSV-G-HIV мышиной сетчатки (Bartholomae et al., Mol. Ther (2011) 19:703-710). Профили IS для (A, C, E) были получены, исходя из результатов глубокого секвенирования ДНК легкого от двух мышей, трансдуцированных F/HN-SIV, и для (B, D, F) по результатам для последовательностей IS сетчатки с VSV-G-HIV (Schmidt laboratory). (А, В) Агрегированные участки IS (легкое, 2862; сетчатка, 262), нанесенные на кариограммы, генерируемые посредством геномного браузера En
- 16 038966 sembl. (C, D) Расстояния от IS до сайтов начала транскрипции (TSS). Число IS в каждом бине расстояний показаны полосками выше. Сумма превышает общее число проанализированных IS, поскольку типичный IS расположен рядом с несколькими TSS. Графики генерировали посредством применения геномного браузера UCSC и геномного анализатора GREAT (great.stanford.edu). (E, F) QuickMap (www.gtsg.org) и сравнения между случайными (ромб) и наблюдаемыми (квадрат) частотами введения на хромосому. (G) Выживаемость мышей, обработанных предшественником F/HN-вектор SIV (вирусный вектор, изготовленный согласно известному способу с использованием прилипающих клеток: черная линия, 24 месяца от данных) и вектор текущей генерации (GTC: темно-серая линия, данные для 8 месяцев) в сравнении с мышами, обработанными буфером (светло-серая линия, данные для 24 месяцев). Были объединены данные от различных экспериментов, включающих мышей, обработанных буфером или ~1Е7 ЕТ вируса посредством назального нюханья;
фиг. 13 показывает hCEF-опосредованную респираторную экспрессию трансгена - с использованием лентивирусного переноса гена с использованием обогащенного CpG трансгена - экспрессию трансгена (среднее свечение п/с/см2/ср) в зависимости от дней после дозирования. Высокие уровни экспрессии репортерного гена люциферазы Gaussia в сравнении с контролем (интактное легкое) наблюдали как в легком (квадрат), так и носу (круг) в течение по меньшей мере 168 дней после дозирования;
фиг. 14 показывает эффект трансдукции человеческих кишечных органоидов с использованием лентивирусного вектора CFTR (vGM058) изобретения. Левосторонняя панель показывает, что индуцированное форсколином набухание значительно (р<0,001) снижалось в трансдуцированных VGM058 органоидах. На правосторонней панели клетки А549 трансдуцировали VGM058 или контрольным вирусом, и функцию CFTR количественно оценивали с использованием анализа эффлюкса радиоактивного йодида. Значительные (р<0,05) уровни CFTR-опосредованного эффлюкса йодида обнаруживали в трансдуцированных VGM058 клетках;
фиг. 15А показывает схематические изображения плазмиды, применяемой для получения векторов А1АТ изобретения. В одном варианте осуществления изобретения фиг. 15А представляет инструмент изобретения. Фиг. 15В показывает контрольную плазмиду, кодирующую ген-репортер люциферазы Gaussia;
фиг. 16 показывает, что F/HN-SIV эффективно трансдуцирует первичные клетки легкого человека в культуре ALI. В частности, трансдукция человеческих культур ALI приводит к значительной экспрессии трансгена люциферазы в течение по меньшей мере 80 дней после трансдукции. Каждая точка представляет среднее значение ОСЕ/мкл в среде для n=6 ALI в показанной временной отметке. Вертикальные черточки представляют стандартную ошибку среднего;
фиг. 17 показывает экспрессию гена после трансдукции срезов человеческого легкого (n=6 на группу) с использованием SIV1 hCEF-sogLux (фиг. 17А) и SIV1 hCEF-sohAAT (фиг. 17В). Наблюдали высокие уровни экспрессии. Каждая точка представляет среднее значение ОСЕ/мкл в среде для n=6 срезов легкого в показанной временной отметке. Вертикальные черточки представляют стандартную ошибку среднего;
фиг. 18 показывает долговременную экспрессию (>12 месяцев) люциферазы Gaussia после опосредованного лентивирусом переноса генов (SIV1 hCEF-soGLux) in vivo. А: гомогенат ткани легкого; В: жидкость бронхоальвеолярного лаважа (BAL); С: сыворотка. Каждая точка представляет среднее значение ОСЕ/мкл в одной группе животных (n=5 или 6 на группу) при сборе в указанной временной отметке. Вертикальные черточки представляют стандартную ошибку среднего;
фиг. 19 показывает высокие уровни экспрессии А1АТ после опосредованного лентивирусом переноса гена (SIV1 hCEF-sohAAT) in vivo. Каждая точка представляет одно животное. Горизонтальные черточки представляют медиану для каждой группы;
фиг. 20 показывает долговременную экспрессию А1АТ после опосредованного лентивирусом переноса гена ААТ (А1АТ) in vivo. А: гомогенат легкого; В: BAL и С: сыворотка;
фиг. 21 показывает уровень А1А1 в бронхоальвеолярной лаважной жидкости после опосредованного лентивирусом переноса гена (SIV1 hCEF-sohAAT) in vivo. Опосредованный лентивирусом перенос гена (SIV1 hCEF-sohAAT) in vivo;
фиг. 22А показывает схематические изображения конструкций кДНК FVIII, используемых для получения векторов FVIII изобретения. Фиг. 22В показывает вирусные векторы по изобретению. В одном варианте осуществления изобретения фиг. 22В представляет инструмент изобретения. Фиг. 22C-F показывают схематические изображения плазмид пДНК1, используемых для получения векторов FVIII изобретения. В одном варианте осуществления изобретения фиг. 22C-F представляют инструменты по изобретению;
фиг. 23 показывает эффективность трансдукции HEK293T с использованием vGM142 (SIV-F/HNFVTII-N6-co) для загрузки 1 (А) и загрузки 2 (В). Графики показывают активность FVIII для каждого MOI через 48 и 72 ч после трансдукции. Каждый символ представляет независимый эксперимент (n=5-6 экспериментов). Горизонтальная черта указывает на среднее для группы ± SD. Анализ выполняли с использованием однофакторного дисперсионного анализа Anova (GraphPad Prism) с множеством сравнений с необработанным контролем ** р<0,01; *** р<0,001; **** р<0,0001;
- 17 038966 фиг. 24 показывает оценку VGM142 в системе in vivo (мышиная модель). А: легкое; В: жидкость BAL; С: плазма. Графики показывают уровень hFVTII (в виде процентной доли от нормального уровня) в сравнении с различными обработками для групп 1-3 (группы 1 и 2 - 10 дней обработки, 3 дозы/в неделю, по 100 мкл вектора на мышь (общее количество доз было равно 3 на животное); группа 3 - 28 дней обработки, 3 дозы/в неделю, по 100 мкл вектора на мышь (общее количество доз было равно 12 на животное)). Каждый символ представляет индивидуальную мышь (группа 1 (n=4), обработанная общей дозой вектора, равной 1,4х106 ЕТТ/мышь; группа 2 (n=3), обработанная общей дозой вектора, равной 1,57х108 ЕТТ/мышь; и группа 3 (n=4), обработанная общей дозой вектора, равной 3,36х108 ЕТТ/мышь). Горизонтальная черта показывает среднее значение FVIII: уровни Ag ± SD. Анализ выполняли с использованием однофакторного дисперсионного анализа Anova (GraphPad Prism) с множественными сравнениями между группами обработки **** р<0,0001.
Примеры
Изобретение теперь будет описано со ссылкой на примеры, приведенные ниже. Эти примеры не являются ограничивающими объем изобретения, и специалист в данной области смог бы понять, что могли бы использоваться подходящие эквиваленты в пределах объема настоящего изобретения. Таким образом, примеры могут рассматриваться как компонент частей изобретения, и индивидуальные аспекты, описанные в них, могут рассматриваться как раскрытые независимо или в любой комбинации.
Пример 1. Культура клеток.
Клетки HEK293T, Freestyle 293F (Life Technologies, Paisley, UK) и 293Т/17 (CRL-11268; ATCC, Manassas, VA) поддерживали в минимальной питательной среде Игла в модификации Дульбекко (Invitrogen, Carlsbad, CA), содержащей 10% сыворотки крови эмбрионов коров и дополненной пенициллином (100 Ед/мл) и стрептомицином (100 мкг/мл) или среде для экспрессии Freestyle™ 293 (Life Technologies).
Пример 2. Построение плазмид.
pCAGGS-Fct4 и pCAGGS-SIVct+HN были построены следующим образом.
(i) Плазмида SIVct/HN содержит ген, кодирующий цитоплазматический концевой сегмент SIVagm TMP (обратный), гибридизированный с внеклеточной частью вируса и трансмембранными областями белка SeV HN. Были синтезированы три олигонуклеотидные пары:
пара 1,5'TCGAGATGTGGTCTGAGTTAAAAATCAGGAGCAACGACGGAGGTGAAGGACCAGACGCCAACG
АССС-3' (SEQ ID NO: 18) и5'CCGGGGGTCGTTGGCGTCTGGTCCTTCACCTCCGTCGTTGCTCCTGATTTTTAACTCAGACCA
САТС-3' (SEQ ID NO: 19); пара 2,5'CCGGGGAAAGGGGGTGCAACACATCCATATCCAGCCATCTCTACCTGTTTATGGACAGA-3' (SEQ ID NO: 20) и5'ACCCTCTGTCCATAAACAGGTAGAGATGGCTGGATATGGATGTGTTGCACCCCTTTCC-3' (SEQ ID NO: 21); и пара 3,5'GGGTTAGGTGGTTGCTGATTCTCTCATTCACCCAGTGGG-3' (SEQ ID NO: 22) и
5'-GATCCCCACTGGGTGAATGAGAGAATCAGCAACCACCTA-3' (SEQ ID NO: 23).
Эти олигонуклеотидные пары подвергали отжигу и клонировали в сайты XhoI и BamHI pBluescript KS+ (Stratagene) с получением pKS+SIVct. pCAGGS-SIVct/HN была построена посредством клонирования фрагмента XhoI-DraIII с 160 по из pKS+SIVct и фрагмента DraIII-Bsu36I с 1500 по из pCAGGS-HN, который несет ген HN дикого типа (HNwt) в сайте XhoI вектора pCAGGS, в сайты XhoI и Bsu36I pCAGGS. Эта плазмида была построена таким образом, что цитоплазматический концевой сегмент белка HN был заменен на цитоплазматический концевой сегмент SIVagm TMP.
Для построения pCAGGS-SIVct+HN, гены, кодирующие цитоплазматический концевой сегмент SIVagm TMP и N-конец белка HN, сначала амплифицировали посредством ПЦР из pCAGGS-SIVct/HN с использованием пары праймеров
5'-GAGACTCGAGATGTGGTCTGAGTTAAAAATCAGG-3' (SEQ ID NO: 24) и
5'-AGAGGTAGACCAGTACGAGTCACGTTTGCCCCTATCACCATCCCTAACCCTCTGTCATAAAC-3' (SEQ ID NO: 25). Полученный в результате ПЦР фрагмент клонировали в сайты XhoI и AccI pKS+SIVct для генерации pKS+SIVct-H. Затем фрагмент XhoI-DraIII из pKS+SIVct-H и фрагмент DraIII-Bsu36I из pCAGGS-HN клонировали в сайты XhoI и Bsu36I pCAGGS с получением pCAGGS-SIVct+HN.
Последовательности сРРТ и WPRE вводили в производную от SIV плазмиду для переноса генов. Пример использованной последовательности WPRE представлен в SEQ ID NO: 8.
Плазмида pGM101 содержит точку начала репликации colE1, канамицин-устойчивый ген и промотор и была создана посредством синтеза синтетического гена (GeneArt, Regensburg, Germany; теперь Life
- 18 038966
Technologies Ltd).
Гибрид CMV/SIV R U5 LTR, частичные последовательности Gag, RRE, cPPT, SIN U3 и R из pBS/CG2-Rc/s-CMV-D U (Nakajima et al. 2000 Human Gene Therapy 11:1863) амплифицировали посредством ПЦР и вводили наряду с последовательностью энхансер hCEF/промотор, амплифицированной посредством ПЦР из pGM169 (Hyde et al. Nature Biotechnology 26:549), и кДНК soCFTR2, выделенной из pGM169 на фрагмент фермента рестрикции NheI-ApaI в pGM101, для создания pGM326.
Энхансер CMV/промотор куриного β-актина наряду с ассоциированными последовательностями экзон/интрон, последовательностями SIV GagPol и RRE и поли A SV40/точка начала репликации амплифицировали посредством ПЦР из pCAGGS/Sagm-gtr (Nakajima et al. 2000 Human Gene Therapy 11:1863) для создания pGM297. Энхансер CMV/промотор наряду с ассоциированными последовательностями экзон/интрон и последовательностью полиА SV40 из pCI (Promega, Madison, WI, USA) изолировали на фрагмент фермента рестрикции BgIII-BamHI и последовательность SIV Rev, полученную из pCAGGS/Sagm-gtr, амплифицированную посредством ПЦР, вводили в pGM101 для создания pGM299.
Энхансер CMV/промотор куриного β-актина наряду с ассоциированными последовательностями экзон/интрон, кДНК Fct4 и полиА SV40/точка начала репликации из pCAGGS-Fct4 изолировали на фрагмент фермента рестрикции SalI-HindIII посредством комбинации генного синтеза, ПЦР и рекомбинации фрагмента фермента рестрикции и вводили в pGM101 для создания pGM301.
Энхансер CMV/промотор куриного β-актина наряду с ассоциированными последовательностями экзон/интрон, кДНК SIVct+HN и полиА SV40/точка начала репликации из pCAGGS-SIVct+HN изолировали на фрагмент фермента рестрикции SalI-HindIII посредством комбинации и вводили в pGM101 для создания PGM303.
Другие pGM-плазмиды изобретения получали, используя стандартные методы и согласно приведенному выше раскрытию.
На всем протяжении этих вариантов выполнения сборки плазмидных ДНК, ферменты рестрикции и ПЦР-полимеразы поставлялись New England Biolabs (Ipswich, MA, USA), а реагенты для очистки ДНК поставлялись Qiagen (Limburg, Netherlands).
Пример 3. Получение вектора SIV.
Система из четырех плазмид.
Дефектный по репликации самоактивирующийся вектор SIV был построен с минорными модификациями. Вкратце, SeV-F/HN-псевдотипированный вектор SIV получали посредством трансфекции клеток 293Т/17 (чашки для культивирования с диаметром 15 см) с использованием четырех плазмид, в комплексе с реагентами Липофектамин/Плюс (Invitrogen) в соответствии с рекомендациями изготовителя [плазмида-1: 10 мкг полученной из SIV плазмиды переноса, несущей GFP, ген-репортер люциферазы (lux), или гибридная конструкция GFP-CFTR, плазмида-2: 3 мкг пакующей плазмиды, плазмида-3: 2 мкг pCAGGS-Fct4, плазмида 4: 2 мкг pCAGGS-SIVct+HN; фиг. 1А-Е показывают схематические чертежи плазмид, используемых для получения векторов по изобретению]. Псевдотипированный VSV-G вектор SIV получали, используя аналогичный протокол, но плазмиду pVSV-G (2 мкг; Clontech, Mountain View, CA) использовали вместо pCAGGS-Fct4 и pCAGGS-SIVct+HN. Через 12 ч после трансфекции культуральную среду заменяли на 30 мл безсывороточной модифицированной Дульбекко среды Игла, содержащей 5 ммоль/л бутирата натрия. Бутират натрия стимулирует получение вектора, чтобы ингибировать деацетилазу гистона. Супернатант культуры, содержащий вектор SIV, собирали через 48 ч после трансфекции, фильтровали через фильтровальную мембрану 0,45 мкМ, и дополнительно концентрировали посредством высокоскоростного центрифугирования (20000 g в течение 4 ч при 4°С, ротор Avanti JA18; Beckman Coulter, Brea, CA). Сгустки вектора суспендировали в PBS (Invitrogen) до 100-200-кратной концентрации и хранили при -80°С.
Система из пяти плазмид (предпочтительная):
SeV-F/HN-псевдотипированный вектор SIV получали посредством трансфекции клеток HEK293T или 293Т/17, культивируемых в среде для экспрессии Freestyle™ 293 с использованием смеси из пяти плазмид, имеющих следующие характеристики: пДНК1 (например, pGM326; фиг. 1А) кодирует мРНК лентивирусного вектора; пДНК2а (например, pGM297; фиг. 1В) кодирует белки SIV Gag и Pol; пДНК2Ь (например, pGM299; фиг. 1С) кодирует белки SIV Rev; пДНК3а (например, pGM301; фиг. 1D) кодирует белок Fct4 из вируса Сендай [Kobayashi et al., 2003 J. Virol. 77:2607]; и пДНКЗЬ (например, pGM303; фиг. 1E) кодирует SIVct+HN из вируса Сендай [Kobayashi et al., 2003 J. Virol. 77:2607] в комплексе с PEIpro (Polyplus, Illkirch, France).
Среду для культуры клеток дополняли через 12-24 ч после трансфекции бутиратом натрия. Бутират натрия стимулирует получение вектора посредством ингибирования деацетилазы гистона, что приводит к увеличению экспрессии компонентов гибридных белков SIV и вируса Сендай, кодируемых пятью плазмидами. Среду для культуры клеток дополняли через 44-52 ч и/или 68-76 ч после трансфекции с использованием 5 единиц/мл нуклеазы бензоазы (Merck Millipore, Nottingham, UK). Супернатант культуры, содержащий вектор SIV, собирали через 68-76,5 ч после трансфекции и осветляли посредством фильтрации через мембрану 0,45 мкм. Вектор SIV обрабатывали посредством обработки протеазой, содержащей
- 19 038966 трипсиновую активность, например, не имеющим животного происхождения, рекомбинантным ферментом, таким как TrypLE Select™. Впоследствии, вектор SIV обычно дополнительно очищают и концентрируют посредством анионообменной хроматографии и/или ультрафильтрации/диафильтрации с фильтрацией тангенциальным потоком.
Такой же метод применяли для генерации лентивирусных векторов, содержащих трансгены А1АТ и FVIII, с использованием плазмид фиг. 15А и 22В, при замене плазмид фиг. 1А для обеспечения соответствующего трансгена (см. примеры 15 и 20).
Пример 4. Титрование вектора.
Метод 1.
Титр частиц определяли, используя ПЦР с обратной транскриптазой в режиме реального времени. Вирусную РНК очищали, применяя мини-набор для вирусных РНК, QIAamp (QIAGEN, Strasse, Germany), и обратно транскрибировали, используя Superscript II (Invitrogen). Систему ПЦР с зондом QuantiTest (QIAGEN) и праймеры для амплификации 131 нуклеотидов (по) перекрывающих последовательности WPRE (прямой праймер: 5'-ggatacgctgctttaatgcc-3', обратный праймер: 5'-acgccacgttgcctgacaac3') применяли в соответствии с протоколом изготовителя на детекторной системе для последовательностей ABI PRISM 7700 (РЕ Applied Biosystems, Foster City, CA). ДНК плазмиды для переноса генов SIV (3х104’2х106 молекул) применяли в качестве стандарта.
Единицы трансдукции (ЕТ/мл) определяли посредством трансдуцирования клеток 293Т серийными разведениями исходного раствора вектора и количественной оценки трансдуцированных клеток посредством флуоресценции GFP (для F/HN-SIV-GFP и VSV-G-SIV-GFP) или окрашивания с использованием антител против люциферазы (для F/HN-SIV-lux).
Метод 2 (предпочтительный).
Титр частиц (ВЧ/мл) обычно определяли, используя ПЦР с обратной транскриптазой в режиме реального времени. Вирусную РНК очищали, используя мини-набор для вирусных РНК, QIAamp (QIAGEN, Strasse, Germany), и обратно транскрибировали, используя обратную транскритазу (Life Technologies). Систему для количественной ПЦР, TaqMan (Life Technologies), с использованием праймеров, амплифицируя часть последовательности WPRE, применяли на детекторной системе для последовательностей ABI PRISM 7700 (Life Technologies). Транскрибированные in vitro молекулы РНК WPRE применяли в качестве количественных стандартов.
Единицы трансдукции (ЕТ/мл) определяли посредством трансдуцирования клеток 293Т/17 или Freestyle 293F серийными разведениями вектора SIV и количественной оценки WPRE, содержащей провирусную ДНК, с использованием системы для количественной ПЦР, TaqMan (Life Technologies), используя праймеры, амплифицируя часть последовательности WPRE на детекторной системе для последовательностей ABI PRISM 7700 (Life Technologies). Молекулы ДНК плазмид, содержащих последовательности WPRE, применяли в качестве количественных стандартов.
Пример 5. Генерация культур tEC, обогащенных базальными клетками.
Мышиные трахеальные эпителиальные клетки (tEC) выделяли следующим образом.
Мышей C57BL/6N умерщвляли и трахеи иссекали от гортани до основных бронхиальных ветвей, используя стерильные хирургические инструменты. Ткани помещали в пробирку, содержащую холодную среду Хэма F-12 с 100 Ед/мл пенициллина (Р), 100 мкг/мл стрептомицина (S) и 2,5 мг/мл амфотерицина В (А) (среда Хэма F12/PSA) и выдерживали на льду. В стерильном вытяжном шкафу с ламинарным потоком воздуха трахеи очищали от прилегающих мышц и соединительной ткани, разрезали в продольном направлении, чтобы экспонировать внутренний респираторный эпителий, и помещали в 0,15% раствор проназы в среде F-12 (~5 мл в пробирке 15 мл). Расщепление ткани проводили в течение ночи (1518 ч) при 4°С. Чтобы блокировать ферментативную реакцию, 10% сыворотку крови эмбрионов коров (FBS) добавляли к образцу обработанной ткани. После плавного переворачивания пробирки для большего отсоединения клеток трахеи помещали в новую пробирку, содержащую раствор 10% FBS/Хэма F12/PS, и переворачивали, как прежде. Эту стадию повторяли еще два раза. Содержимое четырех пробирок объединяли вместе и центрифугровали при 500 g в течение 10 мин при 4°С. Сгусток ресуспендировали в растворе ДНКазы (0,5 мг/мл неочищенной панкреатической ДНКазы плюс 10 мг/мл BSA в растворе FBS/Хэма F-12/PS, приблизительно 200 мкл/трахею), инкубировали на льду в течение 5 минт и центрифугировали, как прежде.
После удаления супернатанта tEC ресуспендировали в целевой среде для клеток-предшествеников (РСТ), (CnT-17, CELLnTEC, Bern, Switzerland), в не содержащем антибиотиков и противогрибковых средств составе, конкретно разработанных для выделения и пролиферации клеток-предшественников человеческих и мышиных воздухоносных путей. tEC затем переносили в чашки для культур тканей Primaria (Becton Dickinson Labwere, Franklin Lakes, NJ, USA) и инкубировали в течение 3-4 ч в 5% СО2 при 37°С. Неприлипшие клетки собирали и центрифугировали при 500 g в течение 5 мин при 4°С и подсчитывали на гемоцитометре. Для генерации культур, обогащенных базальными клетками, tEC суспендировали в среде РСТ и высевали на чашку Nunclon™A (Nunc A/S, Roskilde, Denmark), покрытую 50 мкг/мл коллагена типа 1 из сухожилий крысиного хвоста при рекомендуемой плотности высевания, равной
- 20 038966
4х103 клеток/см2. tEC также культивировали в контрольной основной среде, содержащей DMEM/Хэма
F12, дополненной L-глутамином (4 мМ), HEPES (15 мМ) и NaHCO3 (3,4 мМ). Чашки инкубировали при
37°С с 5% СО2. Чтобы определить долю базальных клеток в популяции tEC до и после размножения в среде РСТ, цитоспиновые препараты окрашивали антителом против KRT5 и соответствующим вторичным антителом.
Пул продуцированных tEC содержал как полностью дифференцированные клетки (клетки Клара и реснитчатые клетки), так и базальные клетки. Как только их высевали на проницаемые мембраны, tEC были способны генерировать систему культивирования на границе раздела воздух/жидкость (ALI) в результате пролиферации базальных клеток и редифференциации в секреторные и реснитчатые клетки. Для установления альтернативного и быстрого протокола для размножения базальных клеток, двухмерные (2D) культуры tEC с использованием доступной для приобретения патентованной целевой среды для клеток-предшественников (РСТ), специфически составленные для поддержания пролиферации клеток предшественников дыхательных путей при поддержании их в недифференцированном статусе, подвергали оценке. В качестве отрицательного контроля tEC подвергали воздействию состава основной среды без добавления специфических факторов роста. tEC, высеянные на покрытые коллагеном пластиковые поверхности (4х103 клеток/см2) и подвегнутые воздействию среды РСТ, были способны быстро расти и становились конфлюентными в пределах 5-8 дней, в то время как tEC, подвегнутые воздействию контрольной среды без факторов роста, были неспособны прорастать и размножаться. Чтобы установить, приводит ли применение среды РСТ к значительному обогащению популяции базальных клеток, tEC собирали при приблизительно 80% слиянии (n=6 лунок), фиксировали и обрабатывали антителами против кератина 5 (Krt5) специфичным маркером базальных клеток. Свежевыделенные tEC применяли в качестве контролей (n=3 уникальных препаратов). Доля Krt5-положительных базальных клеток после размножения в среде РСТ была выше (78±1,4%), чем в свежевыделенных пулах tEC (33±0,6%), демонстрируя, что базальные клетки мышиных дыхательных путей могут селективно и быстро размножаться из смешанного пула tEC с использованием промышленной среды.
Пример 6. Трансдукция культур tEC, обогащенных базальными клетками ex vivo с использованием F/HN-SIV-GFP.
Чтобы определить, может ли F/HN-вектор SIV эффективно трансдуцировать базальные клетки ex vivo, tEC, полученные в примере 5, выращивали до приблизительно 70% слияния в течение 7 дней в среде РСТ и трансдуцировали с использованием F/HN-SIV, несущего ген-репортер зеленого флуоресцентного белка (F/HN-SiV-GFP) при MOI 100 и инкубировали при 37°С с 5% СО2 в течение 3 дней. tEC, полученные из животных дикого типа, и GFP-трансгенных животных культивировали в тех же самых условиях и использовали в качестве отрицательной (вирусная трансдукция отсутствует) и положительной контрольных групп соответственно (n=3-6 лунок/группу).
Чтобы количественно оценить долю GFP-положительных клеток, культуры tEC, обогащенные базальными клетками, отделяли с помощью фермента аккутазы (CELLnTEC), ресуспендировали в PBS/1% BSA и подвергали анализу методом FACS, с подсчетом в среднем 20,277±2,478 клеток/группу. F/HNвектор SIV трансдуцировал 26±0,9% tEC, обогащенных базальных клетками (р<0,0001 при сравнении с нетрансдуцированными контролями).
Для оценки того, являются ли трансдуцированные GFP-экспрессирующие клетки базальными клетками, через три дня после инфицирования клетки дважды окрашивали антителами против Krt5 и GFP. Иммунофлуоресцентное окрашивание культивируемых клеток показало, что приблизительно 40% Krt5экспрессирующих клеток также экспрессировали GFP ген-репортер, показывая, что F/HN-вектор SIV может трансдуцировать предшественники базальных клеток ex vivo.
Пример 7. Введение в нос мыши in vivo.
Использовали мышей C57BL/6N (самки, 6-8 недель). Мышей анестезировали, помещали горизонтально на спину на нагретой доске и тонкий катетер (наружный диаметр <0,5 мм) вводили на глубину ~2,5 мм от кончика носа в левую ноздрю. Используя шприцевой насос (Cole-Parmer, Vernon Hills, IL), вектор (100 мкл) затем медленно перфузировали на поверхность назального эпителия (1,3 мкл/мин) в течение 75 мин. Несмотря на перфузию вируса в левую ноздрю, авторы изобретения обычно наблюдали трансфекцию как в левой, так и правой ноздрях, что было обусловлено дисперсией растворов через целую носовую полость. Мышей, трансдуцированных PBS и VSV-G-SIV, прекондиционированных с использованием 1% лизофосфатидилхолина, как описано Limberis et al., 2002, применяли в качестве контролей. В указанные отметки времени (3-360 дней после трансдукции), мышей умерщвляли для визуализации экспрессии GFP. Как показано на фиг. 2, экспрессию GFP наблюдали в течение по меньшей мере 449 дней после трансдукции, в то время как отрицательный контроль не показывал экспрессии GFP. Как показано на фиг. 3, экспрессия трансгена с F/NH-вектором SIV была устойчивой, с наблюдаемой экспрессией GFP, в течение по меньшей мере 360 дней после трансдукции у 10 независимо тестированных мышей.
Аналогично, как показано на фиг. 13, трансдукция F/HN-вектором SIV изобретения, содержащим промотор hCEF, приводила к долговременной экспрессии CpG-обогащенного гена-репортера (люцифера- 21 038966 зы). Высокие уровни экспрессии относительно контроля наблюдали как в легких, так и носу, в течение по меньшей мере 169 дней после трансдукции.
В экспериментах с повторным введением группы мышей трансдуцировали с использованием либо одной дозы F/HN-SIV-lux (группа с одной дозой) или двух доз of F/HN-SIV-GFP (день 0, день 28), с последующей обработкой F/HN-SIV-lux в день 56 (группа с повторной дозой). Важно отметить, что мыши, получавшие F/HN-SIV-lux (группа с одной дозой), и F/HN-SIV-lux в день 56 (группа с повторной дозой), имели сходный возраст и были трансдуцированы в одно и то же время. Экспрессию гена анализировали через 30 дней после введения F/HN-SIV-lux. Для сравнения мышей трансфицировали катионным липидом GL67A в комплексе с геном-репортером люциферазы, как описано ранее (Griesenbach, U. et al., Methods Mol. Biol. 2008; 433:229-42) и экспрессию люциферазы измеряли через 2 дня после трансфекции.
Как показано на фиг. 6, повторное введение F/HN-SIV в нос мыши не изменяло уровней экспрессии гена. Экспрессию трансгена сравнивают с лидирующей невирусной лекарственной формой для переноса генов (плазмида CMV-Lux в комплексе с GL67A).
Профилирование участка ввода проводили на трансдуцированных мышах и исследовали время выживаемости, как изложено при описании фиг. 12 выше. Наблюдали, что трансдукция с использованием F/HN-вектора SIV изобретения не оказывает каких-либо неблагоприятных воздействий на выживаемость мышей в сравнении с существующим F/HN-вектором SIV или отрицательным контролем (только буфер) (см. фиг. 12G).
Пример 8. Индуцированная регенерация назальных эпителиальных клеток при обработке полидоканолом.
Назальные эпителиальные клетки очищали посредством обработки полидоканолом согласно описанному методу (Borthwick et al., Am. J. Respir Cell. Mol. Biol. 2001 Jun; 24 (6):662-70), с некоторой модификацией. Вкратце, мышей анестезировали и 10 мкл полидоканола (2%) вводили в нос в виде болюса посредством назального нюханья. Для подтверждения очищения и регенерации назальных эпителиальных клеток назальную ткань перфузировали 10 мкл 2% (об./об. в PBS) полидоканола (монододецилового эфира нонаэтиленгликоля; SIGMA, St Louis, МО), и проводили гистологический анализ через 24 ч и 7 дней после обработки (n=3/груnпа). Для анализа трансдукции возможных клеток-предшественников или стволовых клеток авторы изобретения сначала вводили вектор F/HN-SIV-GFP (4х108 ЕТ/мышь) в назальный эпителий мыши. Через семь дней после трансдукции назальную ткань перфузировали 10 мкл 2% (об./об. в PBS) полидоканола, и данную обработку повторяли снова через 3 недели. Гистологические срезы анализировали через 58 дней после введения вектора (30 дней после последней обработки полидоканолом).
Пример 9. Биолюминесцентная визуализация.
Мышам посредством внутрибрюшинной инъекции вводили 150 мг/кг D-люциферина (Xenogen, Alameda, CA) за 10 мин до визуализации и анестезировали изофлураном. Биолюминесценцию (фотоны/с/см2/ср) от живых мышей измеряли, используя систему IVIS50 (Xenogen), при группировании по 4 в течение 10 мин, применяя программу из программного обеспечения Living Image (Xenogen). Для анатомической локализации генерировали псевдоцветное изображение, представляющее интенсивность света (синий: наименее интенсивный, красный: наиболее интенсивный), используя программное обеспечение Living Image, и наложенное на полутоновое стандартное изображение. Для количественного измерения биолюминесценции в носу эмиссию фотонов в заданной области (красная коробочка) измеряли посредством маркировки стандартизованной области для количественной оценки. Размер красной коробочки сохраняли постоянным, и ее помещали над головами животных, как указано на фигуре. Важно отметить, что области маркировали, используя полутоновое стандартное изображение, чтобы избежать смещения.
Пример 10. Препарат ткани для гистологической оценки экспрессии GFP и/или обнаружения базальных клеток.
Мышей умерщвляли и кожу удаляли. Головы отрезали на уровне глаз и кожу, челюсти, язык и мягкий кончик носа осторожно удаляли. Для визуализации in situ экспрессии GFP в носовой полости, флуоресценцию GFP обнаруживали, используя флуоресцентную стереоскопическую микроскопию (Leica, Ernst Leitz Optische Werke, Germany). Впоследствии, ткань фиксировали в 4% параформальдегиде (рН 7,4) в течение ночи при комнатной температуре и затем погружали в 20% ЭДТА (рН 7,5 в течение 5 дней) для декальцификации. Раствор ЭДТА заменяли по меньшей мере через два дня. После декальцификации ткань инкубировали в 15% сахарозе в течение ночи при комнатной температуре и затем погружали в Tissue Mount (Chiba Medical, Soka, Japan). Срезы толщиной десять микрометров были нарезаны в шести различных положениях в каждой мышиной голове (~0-6 мм от конца носовой кости). Экспрессию GFP наблюдали, применяя флуоресцентный микроскоп (Leica). Количественную оценку и идентификацию клеточных типов проводили на шести уровнях на мышь, используя объектив х40 или х63. Пролонгированная экспозиция изображения была необходимой, чтобы зафиксировать структуру назального эпителия с использованием флуоресцентной микроскопии. Это привело к пиксельному насыщению GFPположительных клеток и вызвало то, что GFP-положительные клетки кажутся почти белыми в большей степени, чем имеют обычный зеленый внешний вид, который авторы изобретения и другие, наблюдают
- 22 038966 при более высоком увеличении.
Клеточное распределение экспрессии трансгена F/NH-SIV исследовали в гистологических срезах.
Конкретно, экспрессию EGFP определяли в гистологических срезах полости носа мыши (2 мм от кончика носа) через 30 дней после обработки. Фиг. 4 показывает расположение экспрессии EGFP (фиг. 4, белый точечный сигнал).
Фиг. 5 показывает клеточные типы, трансдуцированные посредством обработки трансгеном/ NH-SIV носа мыши. 69% клеток, трансдуцированных в полости носа мыши, представляли собой реснитчатые респираторные эпителиальные клетки. Другие трансдуцированные клеточные типы включали нейрональные клетки в обонятельном эпителии (21%) и сквамозные клетки (7%).
Чтобы обнаружить базальные клетки после обработки полидоканолом, проводили иммуноокрашивание на основе пероксидазы хрена (HRP), используя набор Envision (Dako, Glostrup, Denmark). Вкратце, предметные стекла обрабатывали 0,6% пероксидом водорода в метаноле в течение 15 мин, промывали в водопроводной воде и инкубировали с 1,5% нормальной козьей сывороткой (Abcam) в течение 30 мин. Предметные стекла затем инкубировали с кроличьими поликлональными антителами против цитокератина 5 (1:500) (Abcam) в течение 1 ч с последующей инкубацией с козьими антителами против кроличьих IgG, конъюгированными с HRP (предоставленными вместе с набором) в течение 30 мин. Предметные стекла затем промывали в PBS и инкубировали с субстратом пероксидазы, 3-амино-9-этилкарбазолом (АЕС) (предоставленным вместе с набором) в течение 5 мин. Окончательно предметные стекла промывали в дистиллированной Н2О, докрашивали водным гематоксилином Харриса (BDH) в течение 15 с, промывали в водопроводной воде и затем в дистиллированной Н2О.
Иммунофлуоресцентное обнаружение GFP-положительных трансдуцированных назальных эпителиальных клеток и Krt5 положительных базальных клеток проводили, используя следующие первичные и вторичные антитела: козьи поликлональные антитела против GFP (1:250) (Abcam), кроличьи моноклональные антитела против KRT5 (1:500) (Abcam), ослиные антитела Alexa Fluor 488 против козьих IgG (1:200) (Invitrogen, Paisley, UK) и козьи антитела Alexa Fluor 594 против кроличьих IgG (1:200) (Invitrogen). Чтобы улучшить характеристики антител, срезы подвергали опосредованной нагревом демаскировке антигена в цитратном буфере (10 мМ лимонной кислоты, 0,05% Твин 20, рН 6,0) в течение 20 мин на водяной бане при 100°С. Окрашенные срезы устанавливали в реагенте, препятствующем выгоранию флуоресценции ProLong® Gold Antifade, вместе с DAPI (Invitrogen) и анализировали с использованием конфокального микроскопа, как прежде (все на Zeiss). GFP-положительные базальные клетки (идентификация основана на морфологии и расположении в эпителиальном слое) количественно оценивали всего на 13 срезах/мышь. Срезы, которые проявляли предполагаемые GFP-положительные базальные клетки, были отобраны для двойного окрашивания с использованием антител против KRT5 и против GFP, чтобы подтвердить фенотип базальных клеток.
Пример 11. Трансдукция культур ALI.
Полностью дифференцированные эпителиальные клетки дыхательных путей, выращенные как культуры ALI, приобретали от Epithelix (Geneva, Switzerland). ALI трансфицировали с использованием F/HN-SIV-lux при множественности заражения в интервале от ~25 до ~300 ЕТ/клетку. Через 6 ч вирус удаляли и ALI инкубировали в течение 10-26 дней. Базолатеральную среду заменяли каждые 48 ч во время этого периода инкубации. В установленные отметки времени ALI лизировали в 100 мкл буфера для лизиса репортера и экспрессию люциферазы количественно оценивали, используя систему для анализа люциферазы (Promega, Southampton, UK) в соответствии с инструкциями производителя. Содержание общего белка в культурах количественно оценивали, используя набор для анализа белка BioRad (BioRad, Hemel Hempstead, UK). Каждый образец анализировали в двух повторностях. Экспрессию люциферазы затем представляли в виде относительных световых единиц/мг общего белка. Для биолюминесцентной визуализации 100 мкг люциферина в PBS добавляли к апикальной мембране.
Как показано на фиг. 7, клетки в культурах ALI, были успешно трансдуцированы с использованием F/HN-SIV-Lux, о чем свидетельствует экспрессия люциферазы. Экспрессия люциферазы была выше при MOI 250 в сравнении с MOI 25.
Пример 12. Анализ эффлюкса йодида.
Клетки HEK293T трансфицировали с использованием F/HN-SIV-GFP-CFTR или контрольного вируса F/HN-SIV-GFP при множественности заражения, равной 500 ЕТ/клетку, и культивировали в течение 2 дней. Активность хлоридного канала CFTR анализировали посредством измерения степени эффлюкса 125йодида, как описано ранее (Derand, R., et al., 2003). Скорости эффлюкса 125йодида нормализовали по времени добавления смеси форсколин/IBMX (время 0). Кривые были построены посредством нанесения на график зависимости скорости эффлюкса 125йодида от времени. Чтобы отразить кумулятивные уровни эффлюкса 125йодида после стимуляции агонистом, все сравнения основаны на площадях под кривой зависимости время-эффлюкс 125йодида. Площадь под кривой рассчитывали по правилу трапеции. Эксперименты выполняли в двух повторностях (n=6 лунок/группу/эксперимент).
Как показано на фиг. 8, F/HN-SIV может направлять функциональную экспрессию CFTR с относительным эффлюксом 125йодида, равным 0,65. Напротив, плазмидный вектор GL67A позволял достичь более низкого значения эффлюкса 125йодида, равного 0,33.
- 23 038966
Пример 13. Трансдукция овечьих и человеческих первичных клеток легкого и легкого мыши.
F/HN-SIV эффективно трансдуцирует овечьи и человеческие первичные клетки легких и легкое мыши.
F/HN-SIV-CMV-Lux применяли, чтобы трансдуцировать человеческие клетки назальных соскобов (MOI 250) и клетки срезов человеческого и овечьего легкого, культивированные ех vivo (1 х 107 ET/slice). Как показано на фиг. 9А, трансдукция как человеческих клеток назальных соскобов, так и клеток срезов человеческого и овечьего легкого приводила к существенной экспрессии трансгена люциферазы (средние значения в области 2х102 ОСЕ/мг белка для человеческих назальных соскобов, 1х107 ОСЕ/мг белка для срезов человеческого легкого и 2х107 ОСЕ/мг белка для срезов овечьего легкого) 24-48 ч после трансдукции.
Первичные клетки легкого человека с MB, культивированные на границе раздела фаз воздухжидкость (CF hALI, ~1х105), трансдуцировали с использованием (3х107 ET) векторов F/HN-SIVSOCFTR2, содержащих промоторы CMV- и hCEF-трансгена. Число копий вектора (копий провирусной ДНК на копию эндогенной ДНК CFTR) измеряли через 6-8 дней после трансдукции. Промоторы как CMW, так и hCEF были способны достигать числа копий вектора, равного по меньшей мере 1х 101 (фиг. 9В).
Также измеряли уровень экспрессии мРНК CFTR (%VE: копий мРНК CFTR на копию эндогенной мРНК CFTR х100) через 6-8 дней после трансдукции. Горизонтальная пунктирная линия на фиг. 9С представляет целевой уровень экспрессии, равный 5% VE, который, как полагают, представляет терапевтический порог. Как F/HN-SIV-soCFTR-CMV, так и F/HN-SIV-soCFTR2-hCEF индуцировали экспрессию, которая была существенно выше этой целевой отметки (в области 40583±10687 и 18509±13588 соответственно, среднее ± SD, n=4).
После доставки in vivo векторов F/HN-SIV-EGFPLux, содержащих CMV, EF1a и промоторы hCEF в дефицитной по интегразе (ID) или компетентной по интегразе форме (IC или без метки), в клетки дыхательных путей экспрессию трансгена определяли в назальном эпителии (фиг. 9D) и эпителии легких (фиг. 9Е) мышей (n=6-10/группа). Временную динамику экспрессии трансгена люциферазы регистрировали посредством повторной биолюминесцентной визуализации in vivo и нормализовали по доставляемой дозе. Четыре из пяти тестируемых векторов (vGM012 CMW, VGM014 EF1a, VGM020 hCEF и VGM076 hCEF ID) позволяли достичь экспрессии в носу выше целевого уровня в течение всего времени протекания эксперимента. Пятый вектор, vGM074 CMV ID, позволял достичь экспрессии в носу выше принятого уровня экспрессии в течение всего времени протекания эксперимента.
Два из пяти тестируемых векторов (vGM014 EF1a и VGM020 hCEF) позволяли достичь экспрессии в легких выше целевого уровня в течение всего времени протекания эксперимента. Один вектор, vGM012 CMW, позволял достчь экспрессии в легких выше принятого уровня экспрессии в течение всего времени протекания эксперимента.
Биолюминесценцию обнаруживали после трансдукции мышам in vivo на день 14 после трансдукции. Представительные изображения показаны на фиг. 9F. Из пяти тестируемых векторов вектор VGM020 hCEF позволял достичь наивысшего уровня экспрессии in vivo.
Биолюминесценцию также обнаруживали после трансдукции in vitro не-МВ hALI на день 5-6 после трансдукции. Представительные изображения показаны на фиг. 9G. Из пяти тестируемых векторов снова vGM020 hCEF позволял достичь наивысшего уровня экспрессии.
Фиг. 9Н показывает экспрессию EGFP через 14 дней после трансдукции в мышином назальном эпителии после доставки 1,6х08 ET F/HN-SIV-hCEF-EGFPLux (vGM020), как визуализировано посредством иммуногистохимии (ядра, окрашенные DAPI).
Временную динамику экспрессии трансгена люциферазы в не-МВ ALI регистрировали посредством повторной биолюминесцентной визуализации и нормализовали по доставляемой дозе. Как показано на фиг. 9I, векторы vGM014 EF1a и vGM020 hCEF позволяли достичь наивысшего уровня экспрессии.
F/HN-SIV также эффективно трансдуцирует овечье легкое in vivo. Акрифлавин инстиллировали (аликвоты 3х100 мкл в течение ~5 мин) в проксимальные дыхательные пути при прямой бронхоскопической визуализации. Распределение акрифлавина можно было оценить по оранжевому окрашиванию иссеченных дыхательных путей после вскрытия (фиг. 10А).
Акрифлавин был в значительной степени ограничен проводящими воздухоносными путями и отсутствовал в альвеолярных областях. Стрелка на фиг. 10А указывает приблизительный участок инстилляции. Числа на линейке приведены в см.
Фиг. 10В является представлением в виде диаграммы овечьего легкого (центр/верхушка трахеи). Круг представляет область на фиг. 10А. На фиг. 10В стрелка указывает прохождение бронхоскопа для доставки аликвот 3х100 мкл 2,2Е9 ЕТ/мл (6,6Е8 ЕТ всего) F/HN SIV CMV- EGFPLux n=3 отдельным овцам (коды животных Т121, Т156 и Т251). Через семь дней после доставки 5-6 блоков образцов тканей были взяты после вскрытия при ~1 см интервалах от участка инстилляции.
Блоки образцов были разделены на 2-3 приблизительно эквивалентных образца и подвергнуты анализам на предмет экспрессии трансгена, результаты которых показаны на фиг. 10С в виде анализов лю- 24 038966 циферазы, нормализованных по содержанию белка; и на фиг. 10D в виде количественной РВ-ПЦР, нормализованной по уровням эндогенной мРНК CFTR. Горизонтальная линия на фиг. 10С представляет наивысшую активность люциферазы, отмеченную у какого-либо образца, обработанного невирусным вектором переноса генов, и на фиг. 10D целевой уровень экспрессии, равный 5% VE (как полагают, представляет терапевтический порог, см. выше). Для каждой группы обработки среднее значение было выше, чем сравнительное значение для невирусного вектора (фиг. 10С), и также достигало экспрессии выше целевого 5% порога VE.
Пример 14. Экспрессия и функция CFTR, измеренные с использованием человеческих кишечных органоидов при CF.
Кишечные органоиды человека с MB генерировали, как описано Dekkers J.F. et al. (Nature Medicine 2013, 19(7): 939-945). Вкратце, кишечные биопсии промывали в растворах, содержащих ЭДТА, для диссоциации клеток крипты. Клетки крипты затем трансдуцировали с использованием VGM058 (приблизительно 1x107 единиц трансдукции) или контрольного вируса (n=3 лунок/состояние), заливали в Matrigel и давали возможность образовать органоиды в течение 3-4 дней. Функцию CFTR оценивали посредством подвергания органоидов воздействию форсколина (приблизительно 5 мкМ форсколина), который увеличивает внутриклеточные уровни цАМФ и таким образом активирует CFTR. В ответ на активацию CFTR органоиды увеличивают транспорт хлорида, что приводит к поглощению воды и набуханию. Органоиды (минимально 10/лунку) непосредственно анализировали посредством конфокальной микроскопии живых клеток (LSM710, Zeiss, x5 объектив). Стимулированное форсколином набухание органоидов автоматически количественно определяли с использованием программного обеспечения Volocity для визуализации (Improvision). Увеличение общей площади органоидов (плоскость ху) относительно площади при t=0 обработки форсколином рассчитывали и усредняли. Индуцированное форсколином набухание значительно (р<0,001) увеличивалось в трансдуцированных VGM058 органоидах в сравнении с контролями (см. фиг. 14А). Значительные уровни CFTR-опосредованного эффлюкса йодида (р<0,05) были также обнаружены в трансдуцированных VGM058 клетках (фиг. 14В) с использованием анализа эффлюкса йодида, раскрытого в данном описании (см. пример 12).
Пример 15. Генерация лентивирусных векторов для А1АТ.
Лентивирусные векторы получали, используя остов SIV и 5-плазмидный метод, описанный выше в примерах 2 и 3 (для лентивируса CFTR), и с использованием промотора hCEF, как описано в настоящем описании. Генерировали две отдельных лентивирусных конструкции: одну с трансгеном человеческого α-1-антитрипсина (hAAT); одну с трансгеном Gaussia luciferase (Glux) (см. фиг. 15А и В, SEQ ID NO: 9 и 10 соответственно). кДНК, содержащиеся в этих векторах, были кодон-оптимизированными и CpGобедненными.
Пример 16. Культивирование на границе раздела фаз (ALI) с использованием лентивирусного вектора гена-репортера lux.
Полностью дифференцированные дикого типа человеческие ALI культуры (MucilAir) приобретали от Epithelix SARL (Geneva, CH). ALI культивировали при 37°С и 5% CO2, и базолатеральную культуральную среду заменяли каждые 2-3 дня. Культуральную среду хранили при -20°С до дополнительного анализа.
ALI трансдуцировали (в день 0) посредством пипетирования 100 мкл вируса (1x107 единиц трансфекции Tagman (ETT) на апикальную поверхность. Вирус удаляли через 4 ч инкубации при 37°С и базолатеральную среду заменяли.
В указанные отметки времени после трансдукции апикальную поверхность ALI промывали посредством инкубации со стерильным PBS в течение 1 ч. Промывки удаляли и хранили при -20°С до дальнейшего анализа.
Анализ люциферазы Gaussia (New England Biolabs, Ipswich, USA) проводили в соответствии с рекомендациями изготовителя. 15 мкл образца анализировали в двух повторностях и люминесценцию определяли на считывающем устройстве для планшетов Appliskan. Экспрессию Glux выражали в виде ОСЕ/мкл жидкости (ОСЕ=относительные световые единицы).
Фиг. 16 представляет результаты, причем каждая точка представляет среднее значение ОСЕ/мкл в среде для n=6 ALI при показанной временной отметке (стандартная ошибка указана посредством планок погрешностей). Опосредованный лентивирусом перенос генов на поверхностях раздела фаз воздухжидкость у человека приводил к продолжительной экспрессии секретируемого репортерного белка люциферазы Gaussia.
Пример 17. Экспрессия трансгена в культурах срезов легкого с использованием А1АТ и лентивирусных векторов гена-репортера и lux.
Нарезанные с высокой точностью срезы легкого человека получали, как описано у Moreno L. et al., Respir Res 2006 Aug 21; 7:111. Срезы легкого помещали в 12-луночные планшеты для культур тканей (1 срез на лунку) в 1 мл среды и инкубировали при 37°С и 5% СО2. Среду меняли ежедневно и хранили при -20°С до дальнейшего анализа.
В день 0 срезы легкого (n=6 на группу) трансдуцировали с использованием вируса SIV hCEF- 25 038966 sogLux (1χ106 ETT) или вируса SIV1 hCEF-sohAAT (2х106 ETT), разбавленного в среде до конечного объема, равного 1000 мкл, и инкубировали в течение 4 ч. После инкубации среду заменяли и хранили при -20°С до дальнейшего анализа.
Экспрессию люциферазы Gaussia определяли, как описано выше (пример 16). Как показано на фиг. 17А, высокие уровни экспрессии секретируемого репортерного белка люциферазы Gaussia сопровождали опосредованный лентивирусом перенос генов в срезы легкого человека. Экспрессию ААТ (также именуемого в данном описании как А1АТ) определяли, используя сэндвич-ELISA (Abcam, Cambridge, UK), выполняемый в соответствии с рекомендациями изготовителя. 50 мкл образца анализировали в двух повторностях и измеряли на считывающем устройстве для микропланшетов при 450 нм. Как показано на фиг. 17В, высокие уровни экспрессии α-1-антитрипсина (ААТ/А1АТ) сопровождали опосредованный лентивирусом перенос генов в срезы легкого человека.
Пример 18. In vivo введение А1АТ и лентивирусных векторов гена-репортера lux в нос мыши.
Трансдукция мышиного легкого.
Самок мышей C57BL/6 (Charles River, UK) анестезировали изофлураном и им давали 100 мкл вируса посредством назальной инстилляции, как описано у Xenariou S. et al., Gene Ther 2007 May;14(9): 76875. Животным давали между 1 и 5 доз и наблюдали ежедневно на предмет признаков токсичности.
В случае люциферазы Gaussia самок мышей C57BL/6 анастезировали в день 0, используя изофлуран, и им давали однократную дозу 100 мкл вируса SIV1 hCEF-soGLux (1х106 ETT) посредством назальной инстилляции. Контрольных животных обрабатывали DMEM (среда для культур тканей), основным компонентом препарата вируса, используемого в исследовании.
В случае А1АТ самок мышей С57Ы/6 (n=5 на группу) обрабатывали 3 дозами SIV1 hCEF-sohAAT при 10-дневных интервалах (100 мкл на дозу, 6,8х107 ЕТТ; общая доза 2,4х108 ЕТТ). Контрольных животных инсталлировали с использованием 100 мкл стерилизованного PBS (основного компонента загрузки полученного лентивируса, используемого в исследовании) в каждой отметке дозирования.
Через 10 дней после третьей дозы животных умерщвляли и гомогенат ткани легкого, жидкость бронхоальвеолярного лаважа и сыворотку анализировали на предмет экспрессии ААТ.
Дополнительно исследовали долговременную экспрессию А1АТ. В дни 1-5 эксперимента, мышей С57Ы/6 обрабатывали 100 мкл SIV1 hCEF-sohAAT посредством назальной инстилляции (5 доз по 4х105 ЕТТ, т.е. всего 2х10е6 ЕТТ на животное). Контрольных животных инстиллировали 100 мкл DMEM (среда для культуры ткани), основного компонента загрузки полученного лентивируса, используемого в исследовании. Животных умерщвляли при различных отметках времени после трансдукции и гомогенат ткани легкого, жидкость бронхоальвеолярного лаважа, жидкость и сыворотку анализировали на предмет экспрессии ААТ.
Сбор мышиной ткани.
Мышей умерщвляли при указанных временных отметках после трансдукции. Кровь собирали посредством пункции левого желудочка и центрифугировали при 760 g в течение 10 мин для получения сыворотки. Сыворотку последовательно замораживали при -80°С.
Бронхоальвеолярный лаваж (BAL) проводили иссечением шеи, вводом канюли в трахею и закреплением ее на месте с помощью проводника шовной нити. 500 мкл PBS инстиллировали в легкое и аспирировали три раза для получения тщательной промывки эпителиальной выстилки. Образец немедленно быстро замороживали в жидком азоте и хранили при -80°С для дальнейшего анализа.
Легкие затем иссекали и быстро замороживали в жидком азоте и последовательно гомогенизировали в пробирках с лизирующим матриксом D (MP Biomedicals), центрифугировали в машине FastPrep (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA) при 4 м/с в течение 45 с и хранили при -80°С для дальнейшего анализа.
Экспрессию ААТ (А1АТ) и люциферазы Gaussia (Glux) определяли, как описано в примерах 16 и 17 выше. In vivo трансдукция клеток мышиных дыхательных путей с использованием однократной дозы лентивирусного вектора гена-репортера lux примера 15 приводила к долговременной экспрессии (по меньшей мере 12 месяцев) секретируемого репортерного белка люциферазы Gaussia, в гомогенате легких (фиг. 18А), жидкости бронхоальвеолярного лаважа (BAL, фиг. 18В) и сыворотке (фиг. 18С).
Высокие уровни экспрессии А1АТ наблюдали в гомогенате легкого, BAL и сыворотке после опосредованного лентивирусом переноса гена ААТ (А1АТ) in vivo (фиг. 19) с наблюдаемым более чем 100кратным увеличением экспрессии ATT(A1AT) в гомогенате легкого и BAL в сравнении с соответствующими отрицательными (PBS) контролями. Значительное увеличение (по меньшей мере на один порядок величины) экспрессии ATT (A1AT) также наблюдали в сыворотке.
Дополнительно длительную экспрессию (по меньшей мере в течение 90 дней) α-1-антитрипсина наблюдали в гомогенате легкого (фиг. 20А), BAL (фиг. 20В) и сыворотке (фиг. 20С) после опосредованного лентивирусом переноса гена ААТ (А1АТ) in vivo.
Пример 19. Анализ мочи.
Мышей С57Ы/6 (n=5 на группу) обрабатывали 3 дозами SIV1 hCEF-sohAAT при 10-дневных интервалах (100 мкл на дозу, 6,8х107 ЕТТ; суммарная доза 2,4х108 ЕТТ). Контрольных животных инстиллиро- 26 038966 вали с использованием 100 мкл стерилизованного PBS (основного компонента полученной загрузки лентивируса, используемой в исследовании) при каждой отметке дозирования.
Через 10 дней после третьей дозы животных умерщвляли и гомогенат ткани легкого, жидкость бронхоальвеолярного лаважа и сыворотку анализировали на предмет экспрессии А1АТ.
Анализ мочи (Abcam, Cambridge, UK) проводили в соответствии с инструкциями изготовителя.
Во-первых, получали серийные разведения образцов мышиной сыворотки и жидкости BAL и анализировали их, чтобы определить соответствующие разведения для применения в дальнейших экспериментах.
Во-вторых, анализировали соответствующие образцы сыворотки и жидкости BAL от отдельных мышей (n=14), чтобы рассчитать кратность различия между концентрацией мочи в сыворотке и жидкости BAL, эквивалентную эффекту разведения BAL на бронхоальвеолярную лаважную жидкость (по Rennard S.I. et al., J. Appl. Physiol. (1985), 1986 Feb; 60(2):532-8). Среднее разведение BAL было 41-кратным (интервал 24-88).
Принимая во внимание этот эффект разведения, рассчитывали концентрацию ATT (A1AT) в бронхоальвеолярной лаважной жидкости. Конкретно, концентрацию ААТ в жидкости бронхоальвеолярного лаважа умножали на фактор разведения, чтобы получить оценку истинной концентрации ААТ в бронхоальвеолярной лаважной жидкости.
Защитный целевой уровень ATT (A1AT) в бронхоальвеолярной лаважной жидкости (ELF, т.е. жидкости выстилающей воздухоносные пути и воздушное пространство в легких) составлял 70 мкг/мл (в сравнении с нормальным целевым уровнем ATT (A1AT) в ELF, равным 200 мкг/мл). Как показано на фиг. 21, терапевтические уровни α-1-антитрипсина в бронхоальвеолярной лаважной жидкости после опосредованного лентивирусом переноса генов АТТ (А1АТ) in vivo.
Пример 20. Генерация лентивирусных векторов для FVIII.
Четыре различных лентивирусных вектора FVIII получали, используя остов SIV и 5-плазмидный метод, описанный выше в примерах 2 и 3 (для лентивируса CFTR) и 15 (для лентивируса А1АТ). Промотор-трансгенные плазмиды имели SEQ ID NO: 11-14 соответственно.
Последовательность SIV была идентичной последовательностям конструкций CFTR (примеры 2 и 3) за исключением промотора и кДНК. Промотор человеческого цитомегаловируса (CMV) или тканеспецифический промотор/энхансер hCEFI применяли, как указано (фиг. 22), для направления экспрессии трансгенов FVIII.
SIV-F/HN-FVIII-N6-co содержал человеческую кДНК FVIII дикого типа, из которой домен BDD был удален посредством делеции и заменен на кодон-оптимизированный 226-аминокислотный фрагмент 6N-гликозилирования.
SIV-FVIII-V3 содержит человеческую кДНК FVIII дикого типа, из которой 226-аминокислотный сайт гликозилирования был удален посредством делеции и заменен на 17-аминокислотный пептид, который экспрессирует триады 6N-гликозилирования внутри В-домена (McIntosh et al., Blood 2013 121(17); 3335-3344).
Пример 21. Количественная оценка антигена hFVIII и уровней активности на моделях in vivo и in vitro.
Уровни человеческого антигена FVIII у мышиной модели количественно определяли посредством фермент-связанного иммуносорбентного анализа (ELISA) в соответствии с протоколом изготовителя. Вкратце, плазму, BAL и легкое анализировали на предмет присутствия антигена FVIII, используя Asserachrom (FVIII:Ag) Elisa (Stago Diagnostics, France).
Образцы разбавляли 1:2 и инкубировали в 96-луночном планшете, покрытом мышиными моноклональными антителами против фрагмента фактора VIII, в течение 2 ч при комнатной температуре. После промывки в планшет добавляли вторичные против мышиных антитела, связанные с пероксидазой, и инкубацию проводили в течение 2 ч при КТ. hFVIII:уровни Ag определяли спектрофотометрически при 450 нм, используя субстрат ТМВ (данные не показаны).
Еще один анализ ELISA применяли для оценки активности FVIII на модели HEK293T in vitro (FVIII:C, Affinity Biological, Canada). Супернатанты собирали через 48 и 72 ч после трансдукции HEK293T с использованием SIV-F/HN-FVIII-N6 или SIV-F/HN-FVIII-N3. Активность FVIII оценивали в соответствии со следующими инструкциями изготовителя, используя 50 мкл супернатантов, анализируемые в двух повторностях. В качестве отрицательного контроля тестировали супернатант от необработанных клеток HEK293T. Активность hFVIII рассчитывали по стандартной кривой, генерируемый с использованием ряда разведений нормальной человеческой объединенной плазмы (13-й Британский Стандарт для концентрата фактора VIII коагуляции крови, человеческий; NIBSC).
Клетки HEK293T трансдуцировали с использованием двух различных загрузок VGM142 (загрузка 1-5,9x108 ЕТТ/мл и загрузка 2-2,8x108 ЕТТ/мл). Клетки HEK293T трансдуцировали с использованием загрузки 1 вектора VGM142 (фиг. 23А) и загрузки 2 вектора VGM142 (фиг. 23В) при 3 различных MOI (MOI1; 10; 100) и собирали через 48 и 72 ч после трансдукции.
Как ясно видно на фиг. 23, увеличение активности FVIII наблюдали с увеличением MOI как для за- 27 038966 грузки 1, так и загрузки 2 VGM142 как через 48 ч, так и через 72 ч после трансдукции. Кроме того, активность FVTII увеличивалась в интервале от 48 до 72 ч для каждого тестируемого MOI.
Пример 22. Введение лентивирусных векторов FVIII и гена-репортера lux in vivo в нос мыши.
Трансдукция в мышиное легкое.
Все методики с участием животных выполняли согласно условиям и ограничению UK Home Office Project и персональных лицензируемых правил в соответствии с Animal Scientific Procedure Act (1986).
Самок мышей C57BL/6 дикого типа в возрасте 6-8 недель (Charles River, UK) анестезировали, используя изофлюоран, и им давали 100 мкл вируса в забуференном фосфатом физрастворе по Дульбекко (D-PBS), как описано прежде (Griesenbach et al., 2012), и оценивали присутствие антигена FVIII.
В двух экспериментах (группа 1 и 2) мыши получали 3 дозы (через день) SIV-F/HN-FVIII-N6 (vGM142) и их умерщвляли через 10 дней после первой дозы. Группа 1 (n=4) была обработана общей дозой вектора, равной 1,4x106 ЕТТ/мышь. Группу 2 (n=3) обрабатывали общей дозой вектора, равной 1,57x108 ЕТТ/мышь.
В одном эксперименте (группа 3) мышей обрабатывали 12 дозами (через день) SIV-F/HN-FVIII-N6 (vGM142) и умерщвляли через 28 дней после первой дозы. Группу 3 (n=4) обрабатывали общей дозой вектора, равной 3,36x108 ЕТТ/мышь).
Плазму, жидкость BAL и легкие собирали (как описано в примере 14). Вкратце, мышей умерщвляли в указанные временные отметки после трансдукции. Кровь затем собирали из сердца в пробирки для сбора с антикоагулянтом, 3,2 цитрата натрия, перед центрифугированием при 2000-2500 xg для получения плазмы. Жидкость BAL собирали, применяя 3 последовательных инстилляции PBS (500 мл) в мышиные легкие при комнатной температуре. Супернатанты хранили при - 80°С. Легкие собирали и хранили при - 80°С перед гомогенизацией ткани.
Затем оценивали наличие экспрессии FVIII. Уровни FVIII оценивали в гомогенатах тканей легких (фиг. 24А). Жидкость BAL (фиг. 24В) и плазму (фиг. 24С) собирали раздельно в 3 независимых экспериментах через 10 и/или 28 дней после обработки SIV-F/HN-FVIII-N6. Анализ выполняли с использованием однофакторного дисперсионного анализа Anova (GraphPad Prism) с множеством сравнений между группами обработки (**** р<0,0001).
Как ясно видно на фиг. 24А, все три группы обработки производили наблюдаемое увеличение уровней hFVIII в ткани легкого в сравнении с соответствующим контролем (D-PBS). 28-Дневная обработка группы 3 приводила к значительному увеличению экспрессии hFVIII в сравнении с 10-дневными обработками групп 1 и 2. Аналогичные результаты наблюдали для образцов BAL жидкости (фиг. 24В), несмотря на то, что в этих образцах также имелось значительное увеличение уровней hFVIII у группы 2 в сравнении с группой 1. Обработка группы 3 приводила к значительному увеличению уровней hFVIII в плазме (фиг. 24C).
Пример 23. Способ производства лентивирусных векторов согласно изобретению.
Клетки HEK293 выращивают в суспензии, в среде для экспрессии Freestyle (химически определенной, не содержащей компонентов животного происхождения и белков) и проводят подсчет клеток. Определяют концентрацию глюкозы и проводят титрование до ~35 мМ. Готовят смесь для трансфекции пДНК/PEIPro™ и клетки трансфицируют при 0,33 мг пДНК/1Е9 клеток.
Подсчет клеток проводят снова и добавляют дополнительную среду для экспрессии Freestyle. Повторно определяют концентрацию глюкозы и проводят титрование до ~35 мМ. Можно добавить 5 мкл/мл Бензоназы® и проводят трехстадийную линейную очистку вируса. Добавляют Бензоназу® с последующим добавлением TrypLE Select™. Вирус охлаждают до 0°С и хранят на влажном льду для всех последующих стадий. После отфильтровывания какого-либо невирусного вещества в форме частиц (фильтр mPES 0,45 мкм), вирус загружают на Mustang® Q XT (3 мл мембраны/л очищенного вируса) с последующей промывкой 0,15М NaCl Трис рН 7,5 и элюированием 1,0М NaCl Трис рН 7,5. Фракцию вируса собирают и разбавляют до 0,1-0,2 от первоначального объема средой Freestyle. TrypLE Select™ может быть добавлен теперь, если его не добавляли ранее, и Бензоназа® также может быть добавлена на этой стадии в дополнение к или вместо добавленной ранее.
Проводят круговую фильтрацию с тангенциальным потоком (TFF) (УФ до ~0,1-0,05 первоначального объема=HV; ДФ ультраконцентрата x5 HV против буфера для лекарственной формы; УФ до ~0,0010,002 от первоначального объема) и ультраконцентрат собирают. Вторая стадия TFF может выполняться, и может применяться более мелкий по размеру блок TFF для ДФ и/или конечной УФ. Дополнительные стадии могут включать смешанный режим/SEC и стерильную фильтрацию через 0,45 мкм или 0,2 мкм.
Фиг. 11 изображает получение и очистку F/HN-векторов SIV. F/HN-векторы SIV получали посредством 5-плазмидной (пДНК) PEI-опосредованной транзиентной трансфекции клеток 293Т, выращенных в суспензии в масштабе 1 л в биореакторах WAVE с контролируемым рН (GE), применяя масштабируемые способы изобретения. Векторы очищали посредством глубинной/окончательной фильтрации (GE/Pall), загрязняющие нуклеиновые кислоты удаляли с использованием Бензоназы® (Merck), векторы активировали с помощью TrypLE Select™ (Life Technology), очищали и концентрировали посредством анионообменной мембранной хроматографии (Pall) и тангенциальной поточной фильтрации (Spectrum).
- 28 038966
Все емкости, контейнеры и колонки для процессов соответствовали требованиям cGMP для одноразового применения. Все реагенты, за исключением плазмидной ДНК, соответствовали требованиям cGMP к продуктам, не содержащим компонентов животного происхождения. Показаны данные для различных конфигураций вектора (промотор трансгена, трансген, статус интегразы). Физические и функциональные титры определяли, используя К-ПЦР.
См. результаты данного иллюстративного способа по изобретению, обсуждаемые при описании фиг. 11, приведенном выше.
Ключ к SEQ ID NO.
SEQ ID NO: 1. Плазмида, определенная на фиг. 1А (пДНК1 PGM326).
SEQ ID NO: 2. Плазмида, определенная на фиг. 1В (пДНК2а PGM297).
SEQ ID NO: 3. Плазмида, определенная на фиг. 1С (пДНК2Ь PGM299).
SEQ ID NO: 4. Плазмида, определенная на фиг. 1D (пДНК3а PGM301).
SEQ ID NO: 5. Плазмида, определенная на фиг. 1E (пДНКЗЬ PGM303).
SEQ ID NO: 6. Иллюстрированный промотор hCEF.
SEQ ID NO: 7. Иллюстрированный трансген CFTR [soCFTR2).
SEQ ID NO: 8. Иллюстрированный компонент WPRE (mWPRE).
SEQ ID NO: 9. Плазмида F/HN-SIV-hCEF-soA1AT, определенная на фиг. 15 (пДНК1 pGM407).
SEQ ID NO: 10. Плазмида F/HN-SIV-hCEF-sogLux, определенная на фиг. 15 (пДНК1 pGM358).
SEQ ID NO: 11. Плазмида F/HN-SIV-CMV-HFVIII-V3, определенная на фиг. 22С (пДНК1 pGM411).
SEQ ID NO: 12. Плазмида F/HN-SIV-hCEF-HFVIII-V3, определенная на фиг. 22D (пДНК1 pGM413).
SEQ ID NO: 13. F/HN-SIV-CMV-HFVIII-N6-коплазмида, определенная на фиг. 22Е (пДНК1 pGM412).
SEQ ID NO: 14. F/HN-SIV-hCEF-HFVIII-N6-коплазмида, определенная на фиг. 22F (пДНК1 pGM414).
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
SEQ ID NO
15. Иллюстрированный трансген А1АТ.
16. Иллюстрированный трансген FVIII (N6).
17. Иллюстрированный промотор CMV.
18. Праймер для построения pCAGGS-Fct4.
19. Праймер для построения pCAGGS-Fct4.
20. Праймер для построения pCAGGS-Fct4.
21. Праймер для построения pCAGGS-Fct4.
22. Праймер для построения pCAGGS-Fct4.
23. Праймер для построения pCAGGS-Fct4.
24. Праймер для построения pCAGGS-SIVct+HN.
25. Праймер для построения pCAGGS-SIVct+HN.
26. Цепь, комплементарная к иллюстрированному трансгену А1АТ.
27. Иллюстрированный пептид А1А1.
28. Цепь, комплементарная к иллюстрированному трансгену FVIII (N6).
29. Иллюстрированный пептид FVIII (N6).
30. Иллюстрированный трансген FVIII (V3).
31. Цепь, комплементарная к иллюстрированному трансгену FVIII (V3).
32. Иллюстрированный пептид FVIII (V3).
33. Цепь, комплементарная к иллюстрированному промотору CMV.
- 29 038966
Последовательности
SEQ ID NO: 1
GGTACCTCAA TATTGGCCAT TAGCCATATT ATTCATTGGT TATATAGCAT AAATCAATAT
TGGCTATTGG CCATTGCATA CGTTGTATCT ATATCATAAT ATGTACATTT ATATTGGCTC
121 ATGTCCAATA TGACCGCCAT GTTGGCATTG ATTATTGACT AGTTATTAAT AGTAATCAAT
181 TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC GTTACATAAC TTACGGTAAA
241 TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC CCGCCCATTG ACGTCAATAA TGACGTATGT
301 TCCCATAGTA ACGCCAATAG GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGAGT ATTTACGGTA
361 AACTGCCCAC TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTCCGCCCC CTATTGACGT
421 CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAC GGGACTTTCC
481 TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC ATGGTGATGC GGTTTTGGCA
541 GTACACCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT
601 TGACGTCAAT GGGAGTTTGT TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA
661 CAACTGCGAT CGCCCGCCCC GTTGACGCAA ATGGGCGGTA GGCGTGTACG GTGGGAGGTC
721 TATATAAGCA GAGCTCGCTG GCTTGTAACT CAGTCTCTTA CTAGGAGACC AGCTTGAGCC
781 TGGGTGTTCG CTGGTTAGCC TAACCTGGTT GGCCACCAGG GGTAAGGACT CCTTGGCTTA
841 GAAAGCTAAT AAACTTGCCT GCATTAGAGC TTATCTGAGT CAAGTGTCCT CATTGACGCC
901 TCACTCTCTT GAACGGGAAT CTTCCTTACT GGGTTCTCTC TCTGACCCAG GCGAGAGAAA
961 CTCCAGCAGT GGCGCCCGAA CAGGGACTTG AGTGAGAGTG TAGGCACGTA
CAGCTGAGAA
1021 GGCGTCGGAC GCGAAGGAAG CGCGGGGTGC GACGCGACCA
AGAAGGAGAC TTGGTGAGTA
1081 GGCTTCTCGA GTGCCGGGAA AAAGCTCGAG CCTAGTTAGA
GGACTAGGAG AGGCCGTAGC
1141 CGTAACTACT CTTGGGCAAG TAGGGCAGGC GGTGGGTACG
CAATGGGGGC GGCTACCTCA
1201 GCACTAAATA GGAGACAATT AGACCAATTT GAGAAAATAC
GACTTCGCCC GAACGGAAAG
1261 AAAAAGTACC aaattaaaca TTTAATATGG GCAGGCAAGG
AGATGGAGCG CTTCGGCCTC
1321 CATGAGAGGT TGTTGGAGAC AGAGGAGGGG TGTAAAAGAA
TCATAGAAGT CCTCTACCCC
1381 CTAGAACCAA CAGGATCGGA GGGCTTAAAA AGTCTGTTCA
ATCTTGTGTG CGTGCTATAT
1441 TGCTTGCACA AGGAACAGAA AGTGAAAGAC ACAGAGGAAG
CAGTAGCAAC AGTAAGACAA
1501 CACTGCCATC TAGTGGAAAA AGAAAAAAGT GCAACAGAGA
CATCTAGTGG ACAAAAGAAA
1561 AATGACAAGG GAATAGCAGC GCCACCTGGT GGCAGTCAGA
ATTTTCCAGC GCAACAACAA
- 30 038966
1621 GGAAATGCCT GGGTACATGT ACCCTTGTCA CCGCGCACCT
TAAATGCGTG GGTAAAAGCA
1681 GTAGAGGAGA AAAAATTTGG AGCAGAAATA GTACCCATTT
TTTTGTTTCA AGCCCTATCG
1741 AATTCCCGTT TGTGCTAGGG TTCTTAGGCT TCTTGGGGGC
TGCTGGAACT GCAATGGGAG
1801 CAGCGGCGAC AGCCCTGACG GTCCAGTCTC AGCATTTGCT
TGCTGGGATA CTGCAGCAGC
1861 AGAAGAATCT GCTGGCGGCT GTGGAGGCTC AACAGCAGAT
GTTGAAGCTG ACCATTTGGG
1921 GTGTTAAAAA CCTCAATGCC CGCGTCACAG CCCTTGAGAA
GTACCTAGAG GATCAGGCAC
1981 GACTAAACTC CTGGGGGTGC GCATGGAAAC AAGTATGTCA
TACCACAGTG GAGTGGCCCT
2041 GGACAAATCG GACTCCGGAT TGGCAAAATA TGACTTGGTT
GGAGTGGGAA AGACAAATAG
2101 CTGATTTGGA AAGCAACATT ACGAGACAAT TAGTGAAGGC
TAGAGAACAA GAGGAAAAGA
2161 ATCTAGATGC CTATCAGAAG TTAACTAGTT GGTCAGATTT
CTGGTCTTGG TTCGATTTCT
2221 CAAAATGGCT TAACATTTTA AAAATGGGAT TTTTAGTAAT
AGTAGGAATA ATAGGGTTAA
2281 GATТАСTTTA GAGAGTATAT GGATGTATAG TGAGGGTTAG
GCAGGGATAT GTTCCTCTAT
2341 CTCCACAGAT CCATATCCGC GGCAATTTTA AAAGAAAGGG
AGGAATAGGG GGACAGACTT
2401 CAGCAGAGAG ACTAATTAAT ATAATAACAA CACAATTAGA
AATACAACAT TTACAAACCA
2461 AAATTCAAAA AATTTTAAAT TTTAGAGCCG CGGAGATCTG
TTACATAACT TATGGTAAAT
2521 GGCCTGCCTG GCTGACTGCC CAATGACCCC TGCCCAATGA
TGTCAATAAT GATGTATGTT
2581 CCCATGTAAT GCCAATAGGG ACTTTCCATT GATGTCAATG
GGTGGAGTAT TTATGGTAAC
2641 TGCCCACTTG GCAGTACATC AAGTGTATCA TATGCCAAGT
ATGCCCCCTA TTGATGTCAA
- 31 038966
2701 TGATGGTAAA TGGCCTGCCT GGCATTATGC CCAGTACATG
ACCTTATGGG ACTTTCCTAC
2761 TTGGCAGTAC ATCTATGTAT TAGTCATTGC TATTAGCATG
GGAATTCACT AGTGGAGAAG
2821 AGCATGCTTG AGGGCTGAGT GCCCCTCAGT GGGCAGAGAG
CACATGGCCC ACAGTCCCTG
2881 AGAAGTTGGG GGGAGGGGTG GGCAATTGAA CTGGTGCCTA
GAGAAGGTGG GGCTTGGGTA
2941 2ACTGGG7AA GTGATGTGGT GTACTGGCTC CACCTTTTTC
CCCAGGGTGG GGGAGAACCA
3001 TATATAAGTG CAGTAGTCTC TGTGAACATT CAAGCTTCTG
CCTTCTCCCT CCTGTGAGTT
3061 TGCTAGCCAC CATGCAGAGA AGCCCTCTGG AGAAGGCCTC
TGTGGTGAGC AAGCTGTTCT
3121 TCAGCTGGAC CAGGCCCATC CTGAGGAAGG GCTACAGGCA
GAGACTGGAG CTGTCTGACA
3181 TCTACCAGAT CCCCTCTGTG GACTCTGCTG ACAACCTGTC
TGAGAAGCTG GAGAGGGAGT
3241 GGGATAGAGA GCTGGCCAGC AAGAAGAACC CCAAGCTGAT
CAATGCCCTG AGGAGATGCT
3301 TCTTCTGGAG ATTCATGTTC TATGGCATCT TCCTGTACCT
GGGGGAAGTG ACCAAGGCTG
3361 TGCAGCCTCT GCTGCTGGGC AGAATCATTG CCAGCTATGA
CCCTGACAAC AAGGAGGAGA
3421 GGAGCATTGC CATCTACCTG GGCATTGGCC TGTGCCTGCT
GTTCATTGTG AGGACCCTGC
3481 TGCTGCACCC TGCCATCTTT GGCCTGCACC ACATTGGCAT
GCAGATGAGG ATTGCCATGT
3541 TCAGCCTGAT CTACAAGAAA ACCCTGAAGC TGTCCAGCAG
AGTGCTGGAC AAGATCAGCA
3601 TTGGCCAGCT GGTGAGCCTG CTGAGCAACA ACCTGAACAA
GTTTGATGAG GGCCTGGCCC
3661 TGGCCCACTT TGTGTGGATT GCCCCTCTGC AGGTGGCCCT
GCTGATGGGC CTGATTTGGG
3721 AGCTGCTGCA GGCCTCTGCC TTTTGTGGCC TGGGCTTCCT
GATTGTGCTG GCCCTGTTTC
- 32 038966
3781 AGGCTGGCCT GGGCAGGATG ATGATGAAGT ACAGGGACCA
GAGGGCAGGC AAGATCAGTG
3841 AGAGGCTGGT GATCACCTCT GAGATGATTG AGAACATCCA
GTCTGTGAAG GCCTACTGTT
3901 GGGAGGAAGC TATGGAGAAG ATGATTGAAA ACCTGAGGCA
GACAGAGCTG AAGCTGACCA
3961 GGAAGGCTGC СТАТGTGAGA TACTTCAACA GCTCTGCCTT
CTTCTTCTCT GGCTTCTTTG
4021 TGGTGTTCCT GTCTGTGCTG CCCTATGCCC TGATCAAGGG
GATCATCCTG AGAAAGATTT
4081 TGAGGAGCAT CAGCTTCTGC ATTGTGCTGA GGATGGCTGT
GACCAGACAG TTCCCCTGGG
4141 CTGTGCAGAC CTGGTATGAC AGCCTGGGGG CCATCAACAA
GATCCAGGAC TTCCTGCAGA
4201 AGCAGGAGTA CAAGACCCTG GAGTACAACC TGACCACCAC
AGAAGTGGTG ATGGAGAATG
4261 TGACAGCCTT CTGGGAGGAG GGCTTTGGGG AGCTGTTTGA
GAAGGCCAAG CAGAACAACA
4321 ACAACAGAAA GACCAGCAAT GGGGATGACT CCCTGTTCTT
CTCCAACTTC TCCCTGCTGG
4381 GCACACCTGT GCTGAAGGAC ATCAACTTCA AGATTGAGAG
GGGGCAGCTG CTGGCTGTGG
4441 CTGGATCTAC AGGGGCTGGC AAGACCAGCC TGCTGATGAT
GATCATGGGG GAGCTGGAGC
4501 CTTCTGAGGG CAAGATCAAG CACTCTGGCA GGATCAGCTT
TTGCAGCCAG TTCAGCTGGA
4561 TCATGCCTGG CACCATCAAG GAGAACATCA TCTTTGGAGT
GAGCTATGAT GAGTACAGAT
4621 ACAGGAGTGT GATCAAGGCC TGCCAGCTGG AGGAGGACAT
CAGCAAGTTT GCTGAGAAGG
4681 ACAACATTGT GCTGGGGGAG GGAGGCATTA CACTGTCTGG
GGGCCAGAGA GCCAGAATCA
4741 GCCTGGCCAG GGCTGTGTAC AAGGATGCTG ACCTGTACCT
GCTGGACTCC CCCTTTGGCT
4801 ACCTGGATGT GCTGACAGAG AAGGAGATTT TTGAGAGCTG
TGTGTGCAAG CTGATGGCCA
- 33 038966
4861 ACAAGACCAG AATCCTGGTG ACCAGCAAGA TGGAGCACCT
GAAGAAGGCT GACAAGATCC
4921 TGATCCTGCA TGAGGGCAGC AGCTACTTCT ATGGGACCTT
CTCTGAGCTG CAGAACCTGC
4981 AGCCTGACTT CAGCTCTAAG CTGATGGGCT GTGACAGCTT
TGACCAGTTC TCTGCTGAGA
5041 GGAGGAACAG CATCCTGAGA GAGACCCTGC ACAGATTCAG
CCTGGAGGGA GATGCCCCTG
5101 TGAGCTGGAC AGAGACCAAG AAGCAGAGCT TCAAGCAGAC
AGGGGAGTTT GGGGAGAAGA
5161 GGAAGAACTC CATCCTGAAC CCCATCAACA GCATCAGGAA
GTTCAGCATT GTGCAGAAAA
5221 CCCCCCTGCA GATGAATGGC ATTGAGGAAG ATTCTGATGA
GCCCCTGGAG AGGAGACTGA
5281 GCCTGGTGCC TGATTCTGAG CAGGGAGAGG CCATCCTGCC
TAGGATCTCT GTGATCAGCA
5341 CAGGCCCTAC ACTGCAGGCC AGAAGGAGGC AGTCTGTGCT
GAACCTGATG ACCCACTCTG
5401 TGAACCAGGG CCAGAACATC CACAGGAAAA CCACAGCCTC
CACCAGGAAA GTGAGCCTGG
5461 CCCCTCAGGC CAATCTGACA GAGCTGGACA TCTACAGCAG
GAGGCTGTCT CAGGAGACAG
5521 GCCTGGAGAT TTCTGAGGAG ATCAATGAGG AGGACCTGAA
AGAGTGCTTC TTTGATGACA
5581 TGGAGAGCAT CCCTGCTGTG ACCACCTGGA ACACCTACCT
GAGATACATC ACAGTGCACA
5641 AGAGCCTGAT CTTTGTGCTG ATCTGGTGCC TGGTGATCTT
CCTGGCTGAA GTGGCTGCCT
5701 CTCTGGTGGT GCTGTGGCTG CTGGGAAACA CCCCACTGCA
GGACAAGGGC AACAGCACCC
5761 ACAGCAGGAA CAACAGCTAT GCTGTGATCA TCACCTCCAC
CTCCAGCTAC TATGTGTTCT
5821 ACATCTATGT GGGAGTGGCT GATACCCTGC TGGCTATGGG
CTTCTTTAGA GGCCTGCCCC
5881 TGGTGCACAC ACTGATCACA GTGAGCAAGA TCCTCCACCA
CAAGATGCTG CACTCTGTGC
- 34 038966
5941 TGCAGGCTCC TATGAGCACC CTGAATACCC TGAAGGCTGG
GGGCATCCTG AACAGATTCT
6001 CCAAGGATAT TGCCATCCTG GATGACCTGC TGCCTCTCAC
CATCTTTGAC TTCATCCAGC
6061 TGCTGCTGAT TGTGATTGGG GCCATTGCTG TGGTGGCAGT
GCTGCAGCCC TACATCTTTG
6121 TGGCCACAGT GCCTGTGATT GTGGCCTTCA TCATGCTGAG
GGCCTACTTT CTGCAGACCT
6181 CCCAGCAGCT GAAGCAGCTG GAGTCTGAGG GCAGAAGCCC
CATCTTCACC CACCTGGTGA
6241 CAAGCCTGAA GGGCCTGTGG ACCCTGAGAG CCTTTGGCAG
GCAGCCCTAC TTTGAGACCC
6301 TGTTCCACAA GGCCCTGAAC CTGCACACAG CCAACTGGTT
CCTCTACCTG TCCACCCTGA
6361 GATGGTTCCA GATGAGAATT GAGATGATCT TTGTCATCTT
CTTCATTGCT GTGACCTTCA
6421 TCAGCATTCT GACCACAGGA GAGGGAGAGG GCAGAGTGGG
CATTATCCTG ACCCTGGCCA
6481 TGAACATCAT GAGCACACTG CAGTGGGCAG TGAACAGCAG
CATTGATGTG GACAGCCTGA
6541 TGAGGAGTGT GAGCAGAGTG TTCAAGTTCA TTGATATGCC
CACAGAGGGC AAGCCTACCA
6601 AGAGCACCAA GCCCTACAAG AATGGCCAGC TGAGCAAAGT
GATGATCATT GAGAACAGCC
6661 ATGTGAAGAA GGATGATATC TGGCCCAGTG GAGGCCAGAT
GACAGTGAAG GACCTGACAG
6721 CCAAGTACAC AGAGGGGGGC AATGCTATCC TGGAGAACAT
CTCCTTCAGC ATCTCCCCTG
6781 GCCAGAGAGT GGGACTGCTG GGAAGAACAG GCTCTGGCAA
GTCTACCCTG CTGTCTGCCT
6841 TCCTGAGGCT GCTGAACACA GAGGGAGAGA TCCAGATTGA
TGGAGTGTCC TGGGACAGCA
6901 TCACACTGCA GCAGTGGAGG AAGGCCTTTG GTGTGATCCC
CCAGAAAGTG TTCATCTTCA
6961 GTGGCACCTT CAGGAAGAAC CTGGACCCCT ATGAGCAGTG
GTCTGACCAG GAGATTTGGA
- 35 038966
7021 AAGTGGCTGA TGAAGTGGGC CTGAGAAGTG TGATTGAGCA
GTTCCCTGGC AAGCTGGACT
7081 TTGTCCTGGT GGATGGGGGC TGTGTGCTGA GCCATGGCCA
CAAGCAGCTG ATGTGCCTGG
7141 CCAGATCAGT GCTGAGCAAG GCCAAGATCC TGCTGCTGGA
TGAGCCTTCT GCCCACCTGG
7201 ATCCTGTGAC CTACCAGATC ATCAGGAGGA CCCTCAAGCA
GGCCTTTGCT GACTGCACAG
7261 TCATCCTGTG TGAGCACAGG ATTGAGGCCA TGCTGGAGTG
CCAGCAGTTC CTGGTGATTG
7321 AGGAGAACAA AGTGAGGCAG TATGACAGCA TCCAGAAGCT
GCTGAATGAG AGGAGCCTGT
7381 TCAGGCAGGC CATCAGCCCC TCTGATAGAG TGAAGCTGTT
CCCCCACAGG AACAGCTCCA
7441 AGTGCAAGAG CAAGCCCCAG ATTGCTGCCC TGAAGGAGGA
GACAGAGGAG GAAGTGCAGG
7501 ACACCAGGCT GTGAGGGCCC AATCAACCTC TGGATTACAA
AATTTGTGAA AGATTGACTG
7561 GTATTCTTAA CTATGTTGCT CCTTTTACGC TATGTGGATA
CGCTGCTTTA ATGCCTTTGT
7621 ATCATGCTAT TGCTTCCCGT ATGGCTTTCA TTTTCTCCTC
CTTGTATAAA TCCTGGTTGC
7681 TGTCTCTTTA TGAGGAGTTG TGGCCCGTTG TCAGGCAACG
TGGCGTGGTG TGCACTGTGT
7741 TTGCTGACGC AACCCCCACT GGTTGGGGCA TTGCCACCAC
CTGTCAGCTC CTTTCCGGGA
7801 CTTTCGCTTT CCCCCTCCCT ATTGCCACGG CGGAACTCAT
CGCCGCCTGC CTTGCCCGCT
7861 GCTGGACAGG GGCTCGGCTG TTGGGCACTG ACAATTCCGT
GGTGTTGTCG GGGAAATCAT
7921 CGTCCTTTCC TTGGCTGCTC GCCTGTGTTG CCACCTGGAT
TCTGCGCGGG ACGTCCTTCT
7981 GCTACGTCCC TTCGGCCCTC AATCCAGCGG ACCTTCCTTC
CCGCGGCCTG CTGCCGGCTC
8041 TGCGGCCTCT TCCGCGTCTT CGCCTTCGCC CTCAGACGAG
TCGGATCTCC CTTTGGGCCG
- 36 038966
8101 CCTCCCCGCA AGCTTCGCAC TTTTTAAAAG AAAAGGGAGG
ACTGGATGGG ATTTATTACT
8161 CCGATAGGAC GCTGGCTTGT AACTCAGTCT CTTACTAGGA
GACCAGCTTG AGCCTGGGTG
8221 TTCGCTGGTT AGCCTAACCT GGTTGGCCAC CAGGGGTAAG
GACTCCTTGG CTTAGAAAGC
8281 TAATAAACTT GCCTGCATTA GAGCTCTTAC GCGTCCCGGG
CTCGAGATCC GCATCTCAAT
8341 TAGTCAGCAA CCATAGTCCC GCCCCTAACT CCGCCCATCC
CGCCCCTAAC TCCGCCCAGT
8401 TCCGCCCATT CTCCGCCCCA TGGCTGACTA ATTTTTTTTA
TTTATGCAGA GGCCGAGGCC
8461 GCCTCGGCCT CTGAGCTATT CCAGAAGTAG TGAGGAGGCT
TTTTTGGAGG CCTAGGCTTT
8521 TGCAAAAAGC TAACTTGTTT ATTGCAGCTT ATAATGGTTA
CAAATAAAGC AATAGCATCA
8581 CAAATTTCAC AAATAAAGCA TTTTTTTCAC TGCATTCTAG
TTGTGGTTTG TCCAAACTCA
8641 TCAATGTATC TTATCATGTC TGTCCGCTTC CTCGCTCACT
GACTCGCTGC GCTCGGTCGT
8701 TCGGCTGCGG CGAGCGGTAT CAGCTCACTC AAAGGCGGTA
ATACGGTTAT CCACAGAATC
8761 AGGGGATAAC GCAGGAAAGA ACATGTGAGC AAAAGGCCAG
CAAAAGGCCA GGAACCGTAA
8821 AAAGGCCGCG TTGCTGGCGT TTTTCCATAG GCTCCGCCCC
CCTGACGAGC ATCACAAAAA
8881 TCGACGCTCA AGTCAGAGGT GGCGAAACCC GACAGGACTA
TAAAGATACC AGGCGTTTCC
8941 CCCTGGAAGC TCCCTCGTGC GCTCTCCTGT TCCGACCCTG
CCGCTTACCG GATACCTGTC
9001 CGCCTTTCTC CCTTCGGGAA GCGTGGCGCT TTCTCATAGC
TCACGCTGTA GGTATCTCAG
9061 TTCGGTGTAG GTCGTTCGCT CCAAGCTGGG CTGTGTGCAC
GAACCCCCCG TTCAGCCCGA
9121 CCGCTGCGCC TTATCCGGTA ACTATCGTCT TGAGTCCAAC
CCGGTAAGAC ACGAGTTATC
- 37 038966
9181 GCCACTGGCA GCAGCCACTG GTAACAGGAT TAGCAGAGCG
AGGTATGTAG GCGGTGCTAC
9241 AGAGTTCTTG AAGTGGTGGC CTAACTACGG CTACACTAGA
AGAACAGTAT TTGGTATCTG
9301 CGCTCTGCTG AAGCCAGTTA CCTTCGGAAA AAGAGTTGGT
AGCTCTTGAT CCGGCAAACA
9361 AACCACCGCT GGTAGCGGTG GTTTTTTTGT TTGCAAGCAG
CAGATTACGC GCAGAAAAAA
9421 AGGATCTCAA GAAGATCCTT TGATCTTTTC TACGGGGTCT
GACGCTCAGT GGAACGAAAA
9481 CTCACGTTAA GGGATTTTGG TCATGAGATT ATCAAAAAGG
ATCTTCACCT AGATCCTTTT
9541 AAATTAAAAA TGAAGTTTTA AATCAATCTA AAGTATATAT
GAGTAAACTT GGTCTGACAG
9601 TTAGAAAAAC TCATCGAGCA TCAAATGAAA CTGCAATTTA
TTCATATGAG GATTATCAAT
9661 ACCATATTTT TGAAAAAGCC GTTTCTGTAA TGAAGGAGAA
AACTCACCGA GGCAGTTCCA
9721 TAGGATGGCA AGATCCTGGT ATCGGTCTGC GATTCCGACT
CGTCCAACAT CAATACAACC
9781 TATTAATTTC CCCTCGTCAA AAATAAGGTT ATCAAGTGAG
AAATCACCAT GAGTGAGGAG
9841 TGAATCCGGT GAGAATGGCA ACAGCTTATG CATTTCTTTC
CAGACTTGTT CAACAGGCCA
9901 GCCATTACGC TCGTCATCAA AATCACTCGC ATCAACCAAA
CCGTTATTCA TTCGTGATTG
9961 CGCCTGAGCG AGACGAAATA CGCGATCGCT GTTAAAAGGA
CAATTACAAA CAGGAATCGA
10021 ATGCAACCGG CGCAGGAACA CTGCCAGCGC ATCAACAATA
TTTTCACCTG AATCAGGATA
10081 TTCTTCTAAT ACCTGGAATG CTGTTTTTCC GGGGATCGCA
GTGGTGAGTA ACCATGCATC
10141 ATCAGGAGTA CGGATAAAAT GCTTGATGGT CGGAAGAGGC
ATAAATTCCG TCAGCCAGTT
10201 TAGTCTGACC ATCTCATCTG TAACATCATT GGCAACGCTA
CCTTTGCCAT GTTTCAGAAA
- 38 038966
10261 CAACTCTGGC GCATCGGGCT TCCCATACAA TCGATAGATT
GTCGCACCTG ATTGCCCGAC
10321 ATTATCGCGA GCCCATTTAT ACCCATATAA ATCAGCATCC
ATGTTGGAAT TTAATCGCGG
10381 CCTAGAGCAA GACGTTTCCC GTTGAATATG GCTCATAACA
CCCCTTGTAT TACTGTTTAT
10441 GTAAGCAGAC AGTTTTATTG TTCATGATGA TATATTTTTA
TCTTGTGCAA TGTAACATCA
10501 GAGATTTTGA GACACAACAA TTGGTCGACG GATCC
SEQ ID NO :2
GCTCGAGACT AGTGACTTGG TGAGTAGGCT TCGAGCCTAG TTAGAGGACT AGGAGAGGCC
GTAGCCGTAA CTACTCTGGG CAAGTAGGGC AGGCGGTGGG TACGCAATGG GGGCGGCTAC
121 CTCAGCACTA AATAGGAGAC AATTAGACCA ATTTGAGAAA ATACGACTTC GCCCGAACGG
181 AAAGAAAAAG TACCAAATTA AACATTTAAT ATGGGCAGGC AAGGAGATGG AGCGCTTCGG
241 CCTCCATGAG AGGTTGTTGG AGACAGAGGA GGGGTGTAAA AGAATCATAG AAGTCCTCTA
301 CCCCCTAGAA CCAACAGGAT CGGAGGGCTT AAAAAGTCTG TTCAATCTTG TGTGCGTACT
361 ATATTGCTTG CACAAGGAAC AGAAAGTGAA AGACACAGAG GAAGCAGTAG CAACAGTAAG
421 ACAACACTGC CATCTAGTGG AAAAAGAAAA AAGTGCAACA GAGACATCTA GTGGACAAAA
481 GAAAAATGAC AAGGGAATAG CAGCGCCACC TGGTGGCAGT CAGAATTTTC CAGCGCAACA
541 ACAAGGAAAT GCCTGGGTAC ATGTACCCTT GTCACCGCGC ACCTTAAATG CGTGGGTAAA
601 AGCAGTAGAG GAGAAAAAAT TTGGAGCAGA AATAGTACCC ATGTTTCAAG CCCTATGAGA
661 AGGCTGCACA CCCTATGACA TTAATCAGAT GCTTAATGTG CTAGGAGATC ATCAAGGGGC
721 ATTACAAATA GTGAAAGAGA TCATTAATGA AGAAGCAGCC CAGTGGGATG TAACACACCC
- 39 038966
781 ACTACCCGCA GGACCCCTAC CAGCAGGACA GCTCAGGGAC CCTCGCGGCT CAGATATAGC
841 AGGGACCACC AGCTCAGTAC AAGAACAGTT AGAATGGATC TATACTGCTA ACCCCCGGGT
901 AGATGTAGGT GCCATCTACC GGAGATGGAT TATTCTAGGA CTTCAAAAGT GTGTCAAAAT
961 GTACAACCCA GTATCAGTCC TAGACATTAG GCAGGGACCT AAAGAGCCCT TCAAGGATTA
1021 TGTGGACAGA TTTTACAAGG CAATTAGAGC AGAACAAGCC
TCAGGGGAAG TGAAACAATG
1081 GATGACAGAA TCATTACTCA TTCAAAATGC TAATCCAGAT
TGTAAGGTCA TCCTGAAGGG
1141 CCTAGGAATG CACCCCACCC TTGAAGAAAT GTTAACGGCT
TGTCAGGGGG TAGGAGGCCC
1201 AAGCTACAAA GCAAAAGTAA TGGCAGAAAT GATGCAGACC
ATGCAAAATC AAAACATGGT
1261 GCAGCAGGGA GGTCCAAAAA GACAAAGACC CCCACTAAGA
TGTTATAATT GTGGAAAATT
1321 TGGCCATATG CAAAGACAAT GTCCGGAACC AAGGAAAACA
AAATGTCTAA AGTGTGGAAA
1381 ATTGGGACAC CTAGCAAAAG ACTGCAGGGG ACAGGTGAAT
TTTTTAGGGT ATGGACGGTG
1441 GATGGGGGCA AAACCGAGAA ATTTTCCCGC CGCTACTCTT
GGAGCGGAAC CGAGTGCGCC
1501 TCCTCCACCG AGCGGCACCA CCCCATACGA CCCAGCAAAG
AAGCTCCTGC AGCAATATGC
1561 AGAGAAAGGG AAACAACTGA GGGAGCAAAA GAGGAATCCA
CCGGCAATGA ATCCGGATTG
1621 GACCGAGGGA TATTCTTTGA ACTCCCTCTT TGGAGAAGAC
CAATAAAGAC AGTGTATATA
1681 GAAGGGGTCC CCATTAAGGC ACTGCTAGAC ACAGGGGCAG
ATGAGACCAT AATTAAAGAA
1741 AATGATTTAG AATTATCAGG TCCATGGAGA CCCAAAATTA
TAGGGGGCAT AGGAGGAGGC
1801 CTTAATGTAA AAGAATATAA CGACAGGGAA GTAAAAATAG
AAGATAAAAT TTTGAGAGGA
- 40 038966
1861 ACAATATTGT TAGGAGCAAC TCCCATTAAT ATAATAGGTA
GAAATTTGCT GGCCCCGGCA
1921 GGTGCCCGGT TAGTAATGGG ACAATTATCA GAAAAAATTC
CTGTCACACC TGTCAAATTG
1981 AAGGAAGGGG CTCGGGGACC CTGTGTAAGA CAATGGCCTC
TCTCTAAAGA GAAGATTGAA
2041 GCTTTACAGG AAATATGTTC CCAATTAGAG CAGGAAGGAA
AAATCAGTAG AGTAGGAGGA
2101 GAAAATGCAT ACAATACCCC AATATTTTGC ATAAAGAAGA
AGGACAAATC CCAGTGGAGG
2161 ATGCTAGTAG ACTTTAGAGA GTTAAATAAG GCAACCCAAG
ATTTCTTTGA AGTGCAATTA
2221 GGGATACCCC ACCCAGCAGG ATTAAGAAAG ATGAGACAGA
TAACAGTTTT AGATGTAGGA
2281 GACGCCTATT ATTCCATACC ATTGGATCCA AATTTTAGGA
AATATACTGC TTTTACTATT
2341 CCCACAGTGA ATAATCAGGG ACCCGGGATT AGGTATCAAT
TCAACTGTCT CCCGCAAGGG
2401 TGGAAAGGAT CTCCTACAAT CTTCCAAAAT ACAGCAGCAT
CCATTTTGGA GGAGATAAAA
2461 AGAAACTTGC CAGCACTAAC CATTGTACAA TACATGGATG
ATTTATGGGT AGGTTCTCAA
2521 GAAAATGAAC ACACCCATGA CAAATTAGTA GAACAGTTAA
GAACAAAATT ACAAGCCTGG
2581 GGCTTAGAAA CCCCAGAAAA GAAGGTGCAA AAAGAACCAC
CTTATGAGTG GATGGGATAC
2641 AAACTTTGGC CTCACAAATG GGAACTAAGC AGAATACAAC
TGGAGGAAAA AGATGAATGG
2701 ACTGTCAATG ACATCCAGAA GTTAGTTGGG AAACTAAATT
GGGCAGCACA ATTGTATCCA
2761 GGTCTTAGGA CCAAGAATAT ATGCAAGTTA ATTAGAGGAA
AGAAAAATCT GTTAGAGCTA
2821 GTGACTTGGA CACCTGAGGC AGAAGCTGAA TATGCAGAAA
ATGCAGAGAT TCTTAAAACA
2881 GAACAGGAAG GAACCTATTA CAAACCAGGA ATACCTATTA
GGGCAGCAGT ACAGAAATTG
- 41 038966
2941 GAAGGAGGAC AGTGGAGTTA CCAATTCAAA CAAGAAGGAC
AAGTCTTGAA AGTAGGAAAA
3001 TACACCAAGC AAAAGAACAC CCATACAAAT GAACTTCGCA
CATTAGCTGG TTTAGTGCAG
3061 AAGATTTGCA AAGAAGCTCT AGTTATTTGG GGGATATTAC
CAGTTCTAGA ACTCCCGATA
3121 GAAAGAGAGG TATGGGAACA ATGGTGGGCG GATTACTGGC
AGGTAAGCTG GATTCCCGAA
3181 TGGGATTTTG TCAGCACCCC ACCTTTGCTC AAACTATGGT
ACACATTAAC AAAAGAACCC
3241 ATACCCAAGG AGGACGTTTA CTATGTAGAT GGAGCATGCA
ACAGAAATTC AAAAGAAGGA
3301 AAAGCAGGAT ACATCTCACA ATACGGAAAA CAGAGAGTAG
AAACATTAGA AAACACTACC
3361 AATCAGCAAG CAGAATTAAC AGCTATAAAA ATGGCTTTGG
AAGACAGTGG GCCTAATGTG
3421 AACATAGTAA CAGACTCTCA ATATGCAATG GGAATTTTGA
CAGCACAACC CACACAAAGT
3481 GATTGAGCAT TAGTAGAGCA AATTATAGCC TTAATGATAC
AAAAGCAACA AATATATTTG
3541 CAGTGGGTAC CAGCACATAA AGGAATAGGA GGAAATGAGG
AGATAGATAA ATTAGTGAGT
3601 AAAGGCATTA GAAGAGTTTT ATTCTTAGAA AAAATAGAAG
AAGCTCAAGA AGAGCATGAA
3661 AGATATCATA ATAATTGGAA AAACCTAGCA GATACATATG
GGCTTCCACA AATAGTAGCA
3721 AAAGAGATAG TGGCCATGTG TCCAAAATGT CAGATAAAGG
GAGAACCAGT GCATGGACAA
3781 GTGGATGCCT CACCTGGAAC ATGGCAGATG GATTGTACTC
ATCTAGAAGG AAAAGTAGTC
3841 ATAGTTGCGG TCCATGTAGC CAGTGGATTC ATAGAAGCAG
AAGTCATACC TAGGGAAACA
3901 GGAAAAGAAA CGGCAAAGTT TCTATTAAAA ATACTGAGTA
GATGGCCTAT AACACAGTTA
3961 CACACAGACA ATGGGCCTAA CTTTACCTCC CAAGAAGTGG
CAGCAATATG TTGGTGGGGA
- 42 038966
4021 AAAATTGAAC ATACAACAGG TATACCATAT AACCCCCAAT
CTCAAGGATC AATAGAAAGC
4081 ATGAACAAAC AATTAAAAGA GATAATTGGG AAAATAAGAG
ATGATTGCCA ATATACAGAG
4141 ACAGCAGTAC TGATGGCTTG CCATATTCAC AATTTTAAAA
GAAAGGGAGG AATAGGGGGA
4201 CAGACTTCAG CAGAGAGACT AATTAATATA ATAACAACAC
AATTAGAAAT ACAACATTTA
4261 CAAACCAAAA TTCAAAAAAT ΤΤΤΑΆΑΤΤΤΤ AGAGTCTACT
ACAGAGAAGG GAGAGACCCT
4321 GTGTGGAAAG GACCAGCACA ATTAATCTGG AAAGGGGAAG
GAGCAGTGGT CCTCAAGGAC
4381 GGAAGTGACC TAAAGGTTGT ACCAAGAAGG AAAGCTAAAA
TTATTAAGGA TTATGAACCC
4441 AAACAAAGAG TGGGTAATGA GGGTGACGTG GAAGGTACCA
GGGGATCTGA TAACTAAATG
4501 GCAGGGAATA GTCAGATATT GGATGAGACA AAGAAATTTG
AAATGGAACT ATTATATGCA
4561 TCAGCTGGCG GCCGCGAATT GAG TAG T GAT TCCCGTTTGT
GCTAGGGTTC TTAGGCTTCT
4621 TGGGGGCTGC TGGAACTGCA ATGGGAGCAG CGGCGACAGC
CCTGACGGTC CAGTCTCAGC
4681 ATTTGCTTGC TGGGATACTG CAGCAGCAGA AGAATCTGCT
GGCGGCTGTG GAGGCTCAAC
4741 AGCAGATGTT GAAGCTGACC ATTTGGGGTG TTAAAAACCT
CAATGCCCGC GTCACAGCCC
4801 TTGAGAAGTA CCTAGAGGAT CAGGCACGAC TAAACTCCTG
GGGGTGCGCA TGGAAACAAG
4861 TAT GT CAT AC CACAGTGGAG TGGCCCTGGA CAAATCGGAC
TCCGGATTGG C7AAATATGA
4921 CTTGGTTGGA GTGGGAAAGA CAAATAGCTG ATTTGGAAAG
CAACATTACG AGACAATTAG
4981 TGAAGGCTAG AGAACAAGAG GAAAAGAATC TAGATGCCTA
TCAGAAGTTA ACTAGTTGGT
5041 CAGATTTCTG GTCTTGGTTC GATTTCTCAA AATGGCTTAA
CATTTTAAAA ATGGGATTTT
- 43 038966
5101 TAGTAATAGT AGGAATAATA GGGTTAAGAT TACTTTACAC
AGTATATGGA TGTATAGTGA
5161 GGGTTAGGCA GGGATATGTT CCTCTATCTC CACAGATCCA
TATCCAATCG AATTCCCGCG
5221 GCCGCAATTC ACTCCTCAGG TGCAGGCTGC CTATCAGAAG
GTGGTGGCTG GTGTGGCCAA
5281 TGCCCTGGCT CACAAATACC ACTGAGATCT TTTTCCCTCT
GCCAAAAATT ATGGGGACAT
5341 CATGAAGCCC CTTGAGCATC TGACTTCTGG CTAATAAAGG
AAATTTATTT TCATTGCAAT
5401 AGTGTGTTGG AATTTTTTGT GTCTCTCACT CGGAAGGACA
TATGGGAGGG CAAATCATTT
5461 AAAACATCAG AATGAGTATT TGGTTTAGAG TTTGGCAACA
TATGCCCATA TGCTGGCTGC
5521 CATGAACAAA GGTTGGCTAT AAAGAGGTCA TCAGTATATG
AAACAGCCCC CTGCTGTCCA
5581 TTCCTTATTC CATAGAAAAG CCTTGACTTG AGGTTAGATT
TTTTTTATAT TTTGTTTTGT
5641 GTTATTTTTT TCTTTAACAT CCCTAAAATT TTCCTTACAT
GTTTTACTAG CCAGATTTTT
5701 CCTCCTCTCC TGACTACTCC CAGTCATAGC TGTCCCTCTT
CTCTTATGGA GATCCCTCGA
5761 CCTGCAGCCC AAGCTTGGCG TAATCATGGT CATAGCTGTT
TCCTGTGTGA AATTGTTATC
5821 CGCTCACAAT TCCACACAAC ATACGAGCCG GAAGCATAAA
GTGTAAAGCC TGGGGTGCCT
5881 AATGAGTGAG CTAACTCACA TTAATTGCGT TGCGCTCACT
GCCCGCTTTC CAGTCGGGAA
5941 ACCTGTCGTG CCAGCGGATC CGCATCTCAA TTAGTCAGCA
ACCATAGTCC CGCCCCTAAC
6001 TCCGCCCATC CCGCCCCTAA CTCCGCCCAG TTCCGCCCAT
TCTCCGCCCC ATGGCTGACT
6061 AATTTTTTTT ATTTATGCAG AGGCCGAGGC CGCCTCGGCC
TCTGAGCTAT TCCAGAAGTA
6121 GTGAGGAGGC TTTTTTGGAG GCCTAGGCTT TTGCAAAAAG
CTAACTTGTT TATTGCAGCT
- 44 038966
6181 TATAATGGTT ACAAATAAAG CAATAGCATC ACAAATTTCA
CAAATAAAGC ATTTTTTTCA
6241 CTGCATTCTA GTTGTGGTTT GTCCAAACTC ATCAATGTAT
CTTATCATGT CTGTCCGCTT
6301 CCTCGCTCAC TGACTCGCTG CGCTCGGTCG TTCGGCTGCG
GCGAGCGGTA TCAGCTCACT
6361 CAAAGGCGGT AATACGGTTA TCCACAGAAT CAGGGGATAA
CGCAGGAAAG AACATGTGAG
6421 CAAAAGGCCA GCAAAAGGCC AGGAACCGTA AAAAGGCCGC
GTTGCTGGCG TTTTTCCATA
6481 GGCTCCGCCC CCCTGACGAG CATCACAAAA ATCGACGCTC
AAGTCAGAGG TGGCGAAACC
6541 CGACAGGACT ATAAAGATAC CAGGCGTTTC CCCCTGGAAG
CTCCCTCGTG CGCTCTCCTG
6601 TTCCGACCCT GCCGCTTACC GGATACCTGT CCGCCTTTCT
CCCTTCGGGA AGCGTGGCGC
6661 TTTCTCATAG CTCACGCTGT AGGTATCTCA GTTCGGTGTA
GGTCGTTCGC TCCAAGCTGG
6721 GCTGTGTGCA CGAACCCCCC GTTCAGCCCG ACCGCTGCGC
CTTATCCGGT AACTATCGTC
6781 TTGAGTCCAA CCCGGTAAGA GAG GAG T TAT CGCCACTGGC
AGCAGCCACT GGTAACAGGA
6841 TTAGCAGAGC GAGGTATGTA GGCGGTGCTA CAGAGTTCTT
GAAGTGGTGG CCTAACTACG
6901 GCTACACTAG AAGAACAGTA TTTGGTATCT GCGCTCTGCT
GAAGCCAGTT ACCTTCGGAA
6961 AAAGAGTTGG TAGCTCTTGA TCCGGCAAAC AAACCACCGC
TGGTAGCGGT GGTTTTTTTG
7021 TTTGCAAGCA GCAGATTACG CGCAGAAAAA AAGGATCTCA
AGAAGATCCT TTGATCTTTT
7081 CTACGGGGTC TGACGCTCAG TGGAACGAAA ACTCACGTTA
AGGGATTTTG GTCATGAGAT
7141 TATCAAAAAG GATCTTCACC TAGATCCTTT TAAATTAAAA
ATGAAGTTTT AAATCAATCT
7201 AAAGTATATA TGAGTAAACT TGGTCTGACA GTTAGAAAAA
CTCATCGAGC ATCAAATGAA
- 45 038966
7261 ACTGCAATTT ATTCATATGA GGATTATCAA TACCATATTT
TTGAAAAAGC CGTTTCTGTA
7321 ATGAAGGAGA AAACTCACCG AGGCAGTTCC ATAGGATGGC
AAGATCCTGG TATCGGTCTG
7381 CGATTCCGAC TCGTCCAACA TCAATACAAC CTATTAATTT
CCCCTCGTCA AAAATAAGGT
7441 TATCAAGTGA GAAATCACCA TGAGTGAGGA CTGAATCCGG
TGAGAATGGC AACAGCTTAT
7501 GCATTTCTTT CCAGACTTGT TCAACAGGCC AGCCATTACG
CTCGTCATCA AAATCACTCG
7561 CATCAACCAA ACCGTTATTC ATTCGTGATT GCGCCTGAGC
GAGACGAAAT ACGCGATCGC
7621 TGTTAAAAGG ACAATTACAA ACAGGAATCG AATGCAACCG
GCGCAGGAAC ACTGCCAGCG
7681 CATCAACAAT ATTTTCACCT GAATCAGGAT ATTCTTCTAA
TACCTGGAAT GCTGTTTTTC
7741 CGGGGATCGC AGTGGTGAGT AACCATGCAT CATCAGGAGT
ACGGATAAAA TGCTTGATGG
7801 TCGGAAGAGG CATAAATTCC GTCAGCCAGT TTAGTCTGAC
CATCTCATCT GTAACATCAT
7861 TGGCAACGCT ACCTTTGCCA TGTTTCAGAA ACAACTCTGG
CGCATCGGGC TTCCCATACA
7921 ATCGATAGAT TGTCGCACCT GATTGCCCGA CATTATCGCG
AGCCCATTTA ТАСCCATATA
7981 AATCAGCATC CATGTTGGAA TTTAATCGCG GCCTAGAGCA
AGACGTTTCC CGTTGAATAT
8041 GGCTCATAAC ACCCCTTGTA TTACTGTTTA TGTAAGCAGA
CAGTTTTATT GTTCATGATG
8101 ATATATTTTT ATCTTGTGCA ATGTAACATC AGAGATTTTG
AGACACAACA ATTGTCGACA
8161 TTGATTATTG ACTAGTTATT AATAGTAATC AATTACGGGG
TCATTAGTTC ATAGCCCATA
8221 TATGGAGTTC CGCGTTACAT AACTTACGGT AAATGGCCCG
CCTGGCTGAC CGCCCAACGA
8281 CCCCCGCCCA TTGACGTCAA TAATGACGTA TGTTCCCATA
GTAACGCCAA TAGGGACTTT
- 46 038966
8341 CCATTGACGT CAATGGGTGG AGTATTTAGG GTAAACTGCC
CACTTGGCAG TACATCAAGT
8401 GTATCATATG CCAAGTACGC CCCCTATTGA CGTCAATGAC
GGTAAATGGC CCGCCTGGCA
8461 TTATGCCCAG TACATGACCT TATGGGACTT TCCTACTTGG
CAGТАСATCT ACGTATTAGT
8521 CATCGCTATT ACCATGGTCG AGGTGAGCCC CACGTTCTGC
TTCACTCTCC CCATCTCCCC
8581 CCCCTCCCCA CCCCCAATTT TGTATTTATT TATTTTTTAA
TTATTTTGTG CAGCGATGGG
8641 GGCGGGGGGG GGGGGGGGGC GCGCGCCAGG CGGGGCGGGG
CGGGGCGAGG GGCGGGGCGG
8701 GGCGAGGCGG AGAGGTGCGG CGGCAGCCAA TCAGAGCGGC
GCGCTCCGAA AGTTTCCTTT
8761 TATGGCGAGG CGGCGGCGGC GGCGGCCCTA TAAAAAGCGA
AGCGCGCGGC GGGCGGGAGT
8821 CGCTGCGCGC TGCCTTCGCC CCGTGCCCCG CTCCGCCGCC
GCCTCGCGCC GCCCGCCCCG
8881 GCTCTGACTG ACCGCGTTAC TCCCACAGGT GAGCGGGCGG
GACGGCCCTT CTCCTCCGGG
8941 CTGTAATTAG CGCTTGGTTT AATGACGGCT TGTTTCTTTT
CTGTGGCTGC GTGAAAGCCT
9001 TGAGGGGCTC CGGGAGGGCC CTTTGTGCGG GGGGAGCGGC
TCGGGGGGTG CGTGCGTGTG
9061 TGTGTGCGTG GGGAGCGCGG CGTGCGGCTC CGCGCTGCCC
GGCGGCTGTG AGCGCTGCGG
9121 GCGCGGCGCG GGGCTTTGTG CGCTCCGCAG TGTGCGCGAG
GGGAGCGCGG CCGGGGGCGG
9181 TGCCCCGCGG TGCGGGGGGG GCTGCGAGGG GAACAAAGGC
TGCGTGCGGG GTGTGTGCGT
9241 GGGGGGGTGA GCAGGGGGTG TGGGCGCGTC GGTCGGGCTG
CAACCCCCCC TGCACCCCCC
9301 TCCCCGAGTT GCTGAGCACG GCCCGGCTTC GGGTGCGGGG
CTCCGTACGG GGCGTGGCGC
9361 GGGGCTCGCC GTGCCGGGCG GGGGGTGGCG GCAGGTGGGG
GTGCCGGGCG GGGCGGGGCC
- 47 038966
9421 GCCTCGGGCC GGGGAGGGCT CGGGGGAGGG GCGCGGCGGC
CCCCGGAGCG CCGGCGGCTG
9481 TCGAGGCGCG GCGAGCCGCA GCCATTGCCT TTTATGGTAA
TCGTGCGAGA GGGCGCAGGG
9541 ACTTCCTTTG TCCCAAATCT GTGCGGAGCC GAAATCTGGG
AGGCGCCGCC GCACCCCCTC
9601 TAGCGGGCGC GGGGCGAAGC GGTGCGGCGC CGGCAGGAAG
GAAATGGGCG GGGAGGGCCT
9661 TCGTGCGTCG CCGCGCCGCC GTCCCCTTCT CCCTCTCCAG
CCTCGGGGCT GTCCGCGGGG
9721 GGACGGCTGC CTTCGGGGGG GACGGGGCAG GGCGGGGTTC
GGCTTCTGGC GTGTGACCGG
9781 CGGCTCTAGA GCCTCTGCTA ACCATGTTCA TGCCTTCTTC
TTTTTCCTAC AGCTCCTGGG
9841 CAACGTGCTG GTTATTGTGC TGTCTCATCA TTTTGGCAAA GAATT
SEQ ID NO :3
TCAATATTGG CCATTAGCCA TATTATTCAT TGGTTATATA GCATAAATCA ATATTGGCTA
TTGGCCATTG CATACGTTGT ATCTATATCA TAATATGTAC ATTTATATTG GCTCATGTCC
121 AATATGACCG CCATGTTGGC ATTGATTATT GACTAGTTAT TAATAGTAAT CAATTACGGG
181 GTCATTAGTT CATAGCCCAT ATATGGAGTT CCGCGTTACA TAACTTACGG TAAATGGCCC
241 GCCTGGCTGA CCGCCCAACG ACCCCCGCCC ATTGACGTCA ATAATGACGT ATGTTCCCAT
301 AGTAACGCCA ATAGGGACTT TCCATTGACG TCAATGGGTG GAGTATTTAC GGTAAACTGC
361 CCACTTGGCA GTACATCAAG TGTATCATAT GCCAAGTCCG CCCCCTATTG ACGTCAATGA
421 CGGTAAATGG CCCGCCTGGC ATTATGCCCA GTACATGACC TTACGGGACT TTCCTACTTG
481 GCAGTACATC TACGTATTAG TCATCGCTAT TACCATGGTG ATGCGGTTTT GGCAGTACAC
541 CAATGGGCGT GGATAGCGGT TTGACTCACG GGGATTTCCA AGTCTCCACC CCATTGACGT
- 48 038966
601 CAATGGGAGT TTGTTTTGGC ACCAAAATCA ACGGGACTTT CCAAAATGTC GTAATAACCC
661 CGCCCCGTTG ACGCAAATGG GCGGTAGGCG TGTACGGTGG GAGGTCTATA TAAGCAGAGC
721 TCGTTTAGTG AACCGTCAGA TCACTAGAAG CTTTATTGCG GTAGTTTATC ACAGTTAAAT
781 TGCTAACGCA GTCAGTGCTT CTGACACAAC AGTCTCGAAC TTAAGCTGCA GAAGTTGGTC
841 GTGAGGCACT GGGCAGGTAA GTATCAAGGT TACAAGACAG GTTTAAGGAG ACCAATAGAA
901 ACTGGGCTTG TCGAGACAGA GAAGACTCTT GCGTTTCTGA TAGGCACCTA TTGGTCTTAC
961 TGACATCCAC TTTGCCTTTC TCTCCACAGG TGTCCACTCC CAGTTCAATT ACAGCTCTTA
1021 AGGCTAGAGT ACTTAATACG ACTGAGTATA GGCTAGCCTC
GAGAATTCGA TTATGCCCCT
1081 AGGACCAGAA GAAAGAAGAT TGCTTCGCTT GATTTGGCTC
CTTTACAGCA CCAATCCATA
1141 TCCACCAAGT GGGGAAGGGA CGGCCAGACA ACGCCGACGA
GCCAGGAGAA GGTGGAGACA
1201 ACAGCAGGAT CAAATTAGAG TCTTGGTAGA AAGACTCCAA
GAGCAGGTGT ATGCAGTTGA
1261 CCGCCTGGCT GACGAGGCTC AACACTTGGC TATACAACAG
TTGCCTGACC CTCCTCATTC
1321 AGCTTAGAAT CACTAGTGAA TTCACGCGTG GTACCTCTAG
AGTCGACCCG GGCGGCCGCT
1381 TCGAGCAGAC ATGATAAGAT ACATTGATGA GTTTGGACAA
ACCACAACTA GAATGCAGTG
1441 AAAAAAATGC TTTATTTGTG AAATTTGTGA TGCTATTGCT
TTATTTGTAA CCATTATAAG
1501 CTGCAATAAA CAAGTTAACA ACAACAATTG CATTCATTTT
ATGTTTCAGG TTCAGGGGGA
1561 GATGTGGGAG GTTTTTTAAA GCAAGTAAAA CCTCTACAAA
TGTGGTAAAA TCGATAAGGA
1621 TCCGTCGACC AATTGTTGTG TCTCAAAATC TCTGATGTTA
CATTGCACAA GATAAAAATA
- 49 038966
1681 TAT CAT CAT G AACAATAAAA CTGTCTGCTT ACATAAACAG
TAATACAAGG GGTGTTATGA
1741 GCCATATTCA ACGGGAAACG TCTTGCTCTA GGCCGCGATT
АААТТССААС ATGGATGCTG
1801 ATTTATATGG GTATAAATGG GCTCGCGATA ATGTCGGGCA
ATCAGGTGCG ACAATCTATC
1861 GATTGTATGG GAAGCCCGAT GCGCCAGAGT TGTTTCTGAA
ACATGGCAAA GGTAGCGTTG
1921 CCAATGATGT TACAGATGAG ATGGTCAGAC TAAACTGGCT
GACGGAATTT ATGCCTCTTC
1981 CGACCATCAA GCATTTTATC CGTACTCCTG ATGATGCATG
GTTACTCACC ACTGCGATCC
2041 CCGGAAAAAC AGCATTCCAG GTATTAGAAG AATATCCTGA
TTCAGGTGAA AATATTGTTG
2101 ATGCGCTGGC AGTGTTCCTG CGCCGGTTGC ATTCGATTCC
TGTTTGTAAT TGTCCTTTTA
2161 ACAGCGATCG CGTATTTCGT CTCGCTCAGG CGCAATCACG
AATGAATAAC GGTTTGGTTG
2221 ATGCGAGTGA TTTTGATGAC GAGCGTAATG GCTGGCCTGT
TGAACAAGTC TGGAAAGAAA
2281 TGCATAAGCT GTTGCCATTC TCACCGGATT CAGTCGTCAC
TCATGGTGAT TTCTCACTTG
2341 ATAACCTTAT TTTTGACGAG GGGAAATTAA TAGGTTGTAT
TGATGTTGGA CGAGTCGGAA
2401 TCGCAGACCG ATACCAGGAT CTTGCCATCC TATGGAACTG
CCTCGGTGAG TTTTCTCCTT
2461 CATTACAGAA ACGGCTTTTT CAAAAATATG GTATTGATAA
TCCTGATATG AATAAATTGC
2521 AGTTTCATTT GATGCTCGAT GAGTTTTTCT AACTGTCAGA
CCAAGTTTAC TCATATATAC
2581 TTTAGATTGA TTTAAAACTT CATTTTTAAT TTAAAAGGAT
CTAGGTGAAG ATCCTTTTTG
2641 ATAATCTCAT GACCAAAATC CCTTAACGTG AGTTTTCGTT
CCACTGAGCG TCAGACCCCG
2701 TAGAAAAGAT CAAAGGATCT TCTTGAGATC CTTTTTTTCT
GCGCGTAATC TGCTGCTTGC
- 50 038966
2761 AAACAAAAAA ACCACCGCTA CCAGCGGTGG TTTGTTTGCC GGATCAAGAG CTACCAACTC
2821 TTTTTCCGAA GGTAACTGGC TTCAGCAGAG CGCAGATACC
AAATACTGTT CTTCTAGTGT
2881 AGCCGTAGTT AGGCCACCAC TTCAAGAACT CTGTAGCACC
GCCTACATAC CTCGCTCTGC
2941 TAATCCTGTT ACCAGTGGCT GCTGCCAGTG GCGATAAGTC
GTGTCTTACC GGGTTGGACT
3001 CAAGACGATA GTTACCGGAT AAGGCGCAGC GGTCGGGCTG
AACGGGGGGT TCGTGCACAC
3061 AGCCCAGCTT GGAGCGAACG ACCTACACCG AACTGAGATA
CCTACAGCGT GAGCTATGAG
3121 AAAGCGCCAC GCTTCCCGAA GGGAGAAAGG CGGACAGGTA
TCCGGTAAGC GGCAGGGTCG
3181 GAACAGGAGA GCGCACGAGG GAGCTTCCAG GGGGAAACGC
CTGGTATCTT TATAGTCCTG
3241 TCGGGTTTCG CCACCTCTGA CTTGAGCGTC GATTTTTGTG
ATGCTCGTCA GGGGGGCGGA
3301 GCCTATGGAA AAACGCCAGC AACGCGGCCT TTTTACGGTT
CCTGGCCTTT TGCTGGCCTT
3361 TTGCTCACAT GGCTCGACAG ATCT
SEQ ID NO :4
ATTGATTATT GACTAGTTAT TAATAGTAAT CAATTACGGG GTCATTAGTT CATAGCCCAT
ATATGGAGTT CCGCGTTACA TAACTTACGG TAAATGGCCC GCCTGGCTGA CCGCCCAACG
121 ACCCCCGCCC ATTGACGTCA ATAATGACGT ATGTTCCCAT AGTAACGCCA ATAGGGACTT
181 TCCATTGACG TCAATGGGTG GAGTATTTAC GGTAAACTGC CCACTTGGCA GTACATCAAG
241 TGTATCATAT GCCAAGTACG CCCCCTATTG ACGTCAATGA CGGTAAATGG CCCGCCTGGC
301 ATTATGCCCA GTACATGACC TTATGGGACT TTCCTACTTG GCAGTACATC TAGGTATTAG
361 TCATCGCTAT TACCATGGTC GAGGTGAGCC CCACGTTCTG CTTCACTCTC CCCATCTCCC
- 51 038966
421 СССССТСССС АСССССААТТ TTGTATTTAT ТТАТТТТТТА ATTATTTTGT GCAGCGATGG
481 GGGCGGGGGG GGGGGGGGGG CGCGCGCCAG GCGGGGCGGG GCGGGGCAAG GGGCGGGGCG
541 GGGCGAGGCG GAAAGGTGCG GCGGCAGCCA ATCAAAGCGG CGCGCTCCGA AAGTTTCCTT
601 TTATGGCGAG GCGGCGGCGG CGGCGGCCCT ATAAAAAGCG AAGCGCGCGG CGGGCGGGAG
661 TCGCTGCGCG CTGCCTTCGC CCCGTGCCCC GCTCCGCCGC CGCCTCGCGC CGCCCGCCCC
721 GGCTCTGACT GACCGCGTTA CTCCCACAGG TGAGCGGGCG GGACGGCCCT TCTCCTCCGG
781 GCTGTAATTA GCGCTTGGTT TAATGACGGC TTGTTTCTTT TCTGTGGCTG CGTGAAAGCC
841 TTGAGGGGCT CCGGGAGGGC CCTTTGTGCG GGGGGAGCGG CTCGGGGGGT GCGTGCGTGT
901 GTGTGTGCGT GGGGAGCGCC GCGTGCGGCT CCGCGCTGCC CGGCGGCTGT GAGCGCTGCG
961 GGCGCGGCGC GGGGCTTTGT GCGCTCCGCA GTGTGCGCGA GGGGAGCGCG GGGGGGGGGG
1021 GTGCCCCGCG GTGCGGGGGG GGCTGCGAGG GGAACAAAGG
CTGCGTGCGG GGTGTGTGCG
1081 TGGGGGGGTG AGCAGGGGGT GTGGGCGCGT CGGTCGGGCT
GCAACCCCCC CTGCACCCCC
1141 CTCCCCGAGT TGCTGAGCAC GGCCCGGCTT CGGGTGCGGG
GCTCCGTACG GGGCGTGGCG
1201 CGGGGCTCGC GGTGCCGGGC GGGGGGTGGC GGCAGGTGGG
GGTGCCGGGC GGGGGGGGGG
1261 CGCCTCGGGC CGGGGAGGGC TCGGGGGAGG GGCGCGGCGG
CCCCCGGAGC GCCGGCGGCT
1321 GTCGAGGCGC GGCGAGCCGC AGCCATTGCC TTTTATGGTA
ATCGTGCGAG AGGGCGCAGG
1381 GACTTCCTTT GTCCCAAATC TGTGCGGAGC CGAAATCTGG
GAGGCGCCGC CGCACCCCCT
1441 CTAGCGGGCG CGGGGCGAAG CGGTGCGGCG CCGGCAGGAA
GGAAATGGGC GGGGAGGGCC
- 52 038966
1501 TTCGTGCGTC GCCGCGCCGC CGTCCCCTTC TCCCTCTCCA
GCCTCGGGGC TGTCCGCGGG
1561 GGGACGGCTG CCTTCGGGGG GGACGGGGCA GGGCGGGGTT
CGGCTTCTGG CGTGTGACCG
1621 GCGGCTCTAG AGCCTCTGCT AACCATGTTC ATGCCTTCTT
CTTTTTCCTA CAGCTCCTGG
1681 GCAACGTGCT GGTTATTGTG CTGTCTCATC ATTTTGGCAA
AGAATTCGAT TGCCATGGCA
1741 ACATATATCC AGAGAGTACA GTGCATCTCA ACATCACTAC
TGGTTGTTCT CACCACATTG
1801 GTCTCGTGTC AGATTCCCAG GGATAGGCTC TCTAACATAG
GGGTCATAGT CGATGAAGGG
1861 AAATCACTGA AGATAGCTGG ATCCGAGGAA TCGAGGTACA
TAG TACT GAG TCTAGTTCCG
1921 GGGGTAGACT TTGAGAATGG GTGCGGAACA GCCCAGGTTA
TCCAGTACAA GAGCCTACTG
1981 AACAGGCTGT TAATCCCATT GAGGGATGCC TTAGATCTTC
AGGAGGCTCT GATAACTGTC
2041 ACCAATGATA CGACACAAAA TGCCGGTGCT CCCCAGTCGA
GATTCTTCGG TGCTGTGATT
2101 GGTACTATCG CACTTGGAGT GGCGACATCA GCACAAATCA
CCGCAGGGAT TGCACTAGCC
2161 GAAGCGAGGG AGGCCAAAAG AGACATAGCG CTCATCAAAG
AATCGATGAC AAAAACACAC
2221 AAGTCTATAG AACTGCTGCA AAACGCTGTG GGGGAACAAA
TTCTTGCTCT AAAGACACTC
2281 CAGGATTTCG TGAATGATGA GATCAAACCC GCAATAAGCG
AATTAGGCTG TGAGACTGCT
2341 GCCTTAAGAC TGGGTATAAA ATTGACACAG CATTACTCCG
AGCTGTTAAC TGCGTTCGGC
2401 TCGAATTTCG GAACCATCGG AGAGAAGAGC CTCACGCTGC
AGGCGCTGTC TTCACTTTAC
2461 TCTGCTAACA TTACTGAGAT TATGAGGAGA ATCAGGACAG
GGCAGTCTAA CATСТАТGAT
2521 GTCATTTATA CAGAACAGAT CAAAGGAACG GTGATAGATG
TGGATCTAGA GAGATACATG
- 53 038966
2581 GTCACCCTGT CTGTGAAGAT CCCTATTCTT TCTGAAGTCC
CAGGTGTGCT CATACACAAG
2641 GCATCATCTA TTTCTTACAA CATAGACGGG GAGGAATGGT
ATGTGACTGT CCCCAGCCAT
2701 ATACTCAGTC GTGCTTCTTT CTTAGGGGGT GCAGACATAA
CCGATTGTGT TGAGTCCAGA
2761 TTGACCTATA TATGCCCCAG GGATCCCGCA CAACTGATAC
CTGACAGCCA GCAAAAGTGT
2821 ATCCTGGGGG ACACAACAAG GTGTCCTGTC ACAAAAGTTG
TGGACAGCCT TATCCCCAAG
2881 TTTGCTTTTG TGAATGGGGG CGTTGTTGCT AACTGCATAG
CATCGAGATG TACCTGCGGG
2941 ACAGGCCGAA GACCAATCAG TCAGGATCGC TCTAAAGGTG
TAGTATTCCT AACCCATGAC
3001 AACTGTGGTC TTATAGGTGT CAATGGGGTA GAATTGTATG
CTAACCGGAG AGGGCACGAT
3061 GCCACTTGGG GGGTCCAGAA CTTGACAGTC GGTCCTGCAA
T TGC TAT CAG ACCCGTTGAT
3121 ATTTCTCTCA ACCTTGCTGA TGCTACGAAT TTCTTGCAAG
ACTCTAAGGC TGAGCTTGAG
3181 AAAGCACGGA AAATCCTCTC GGAGGTAGGT AGATGGTACA
ACTCAAGAGA GACTGTGATT
3241 AC GAT CAT AG TAGTTATGGT CGTAATATTG GTGGTCATTA
TAG T GAT CAT CATCGTGCTT
3301 TATAGACTCA GAAGGTGAAA TCACTAGTGA ATTCACTCCT
CAGGTGCAGG CTGCCTATCA
3361 GAAGGTGGTG GCTGGTGTGG CCAATGCCCT GGCTCACAAA
TACCACTGAG ATCTTTTTCC
3421 CTCTGCCAAA AATTATGGGG ACATCATGAA GCCCCTTGAG
CATCTGACTT CTGGCTAATA
3481 AAGGAAATTT ATTTTCATTG CAATAGTGTG TTGGAATTTT
TTGTGTCTCT CACTCGGAAG
3541 GACATATGGG AGGGCAAATC ATTTAAAACA TCAGAATGAG
TATTTGGTTT AGAGTTTGGC
3601 AACATATGCC CATATGCTGG CTGCCATGAA CAAAGGTTGG
CTATAAAGAG GTCATCAGTA
- 54 038966
3661 TATGAAACAG CCCCCTGCTG TCCATTCCTT ATTCCATAGA
AAAGCCTTGA CTTGAGGTTA
3721 GATTTTTTTT ATATTTTGTT TTGTGTTATT TTTTTCTTTA
АСАТСССТАА AATTTTCCTT
3781 ACATGTTTTA CTAGCCAGAT TTTTCCTCCT CTCCTGACTA
CTCCCAGTCA TAGCTGTCCC
3841 TCTTCTCTTA TGGAGATCCC TCGACCTGCA GCCCAAGCTT
GGCGTAATCA TGGTCATAGC
3901 TGTTTCCTGT GTGAAATTGT TATCCGCTCA CAATTCCACA
CAACATACGA GCCGGAAGCA
3961 TAAAGTGTAA AGCCTGGGGT GCCTAATGAG TGAGCTAACT
CACATTAATT GCGTTGCGCT
4021 CACTGCCCGC TTTCCAGTCG GGAAACCTGT CGTGCCAGCG
GATCCGCATC TCAATTAGTC
4081 AGCAACCATA GTCCCGCCCC TAACTCCGCC CATCCCGCCC
CTAACTCCGC CCAGTTCCGC
4141 CCATTCTCCG CCCCATGGCT GACTAATTTT TTTTATTTAT
GCAGAGGCCG AGGCCGCCTC
4201 GGCCTCTGAG СТАТТСGAGA AGTAGTGAGG AGGCTTTTTT
GGAGGCCTAG GCTTTTGCAA
4261 AAAGCTAACT TGTTTATTGC AGCTTATAAT GGTTACAAAT
AAAGCAATAG CATCACAAAT
4321 TTCACAAATA AAGCATTTTT TTCACTGCAT TCTAGTTGTG
GTTTGTCCAA ACTCATCAAT
4381 GTATCTTATC ATGTCTGTCC GCTTCCTCGC TCACTGACTC
GCTGCGCTCG GTCGTTCGGC
4441 TGCGGCGAGC GGTATCAGCT CACTCAAAGG CGGTAATACG
GTTATCCACA GAATCAGGGG
4501 ATAACGCAGG AAAGAACATG TGAGCAAAAG GCCAGCAAAA
GGCCAGGAAC CGTAAAAAGG
4561 CCGCGTTGCT GGCGTTTTTC CATAGGCTCC GCCCCCCTGA
CGAGCATCAC AAAAATCGAC
4621 GCTCAAGTCA GAGGTGGCGA AACCCGACAG GACTATAAAG
ATACCAGGCG TTTCCCCCTG
4681 GAAGCTCCCT CGTGCGCTCT CCTGTTCCGA CCCTGCCGCT
TACCGGATAC CTGTCCGCCT
- 55 038966
4741 TTCTCCCTTC GGGAAGCGTG GCGCTTTCTC ATAGCTCACG
CTGTAGGTAT CTCAGTTCGG
4801 TGTAGGTCGT TCGCTCCAAG CTGGGCTGTG TGCACGAACC
CCCCGTTCAG CCCGACCGCT
4861 GCGCCTTATC CGGTAACTAT CGTCTTGAGT CCAACCCGGT
AAGACACGAC TTATCGCCAC
4921 TGGCAGCAGC CACTGGTAAC AGGATTAGCA GAGCGAGGTA
TGTAGGCGGT GCTACAGAGT
4981 TCTTGAAGTG GTGGCCTAAC TACGGCTACA CTAGAAGAAC
AGTATTTGGT ATCTGCGCTC
5041 TGCTGAAGCC AGTTACCTTC GGAAAAAGAG TTGGTAGCTC
TTGATCCGGC AAACAAACCA
5101 CCGCTGGTAG CGGTGGTTTT TTTGTTTGCA AGCAGCAGAT
TACGCGCAGA AAAAAAGGAT
5161 CTCAAGAAGA TCCTTTGATC TTTTCTACGG GGTCTGACGC
TCAGTGGAAC GAAAACTCAC
5221 GTTAAGGGAT TTTGGTCATG AGATTATCAA AAAGGATCTT
CACCTAGATC CTTTTAAATT
5281 AAAAATGAAG TTTTAAATCA ATCTAAAGTA TATATGAGTA
AACTTGGTCT GACAGTTAGA
5341 AAAACTCATC GAGCAT CAAA TGAAACTGCA ATTTATTCAT
ATCAGGATTA TCAATACCAT
5401 ATTTTTGAAA AAGCCGTTTC TGTAATGAAG GAGAAAACTC
ACCGAGGCAG TTCCATAGGA
5461 TGGCAAGATC CTGGTATCGG TCTGCGATTC CGACTCGTCC
AACATCAATA CIVIC СТАТ TA
5521 ATTTCCCCTC GTCAAAAATA AGGTTATCAA GTGAGAAATC
ACCATGAGTG ACGACTGAAT
5581 CCGGTGAGAA TGGCAACAGC TTATGCATTT CTTTCCAGAC
TTGTTCAACA GGCCAGCCAT
5641 TACGCTCGTC ATCAAAATCA CTCGCATCAA CCAAACCGTT
ATTCATTCGT GATTGCGCCT
5701 GAGCGAGACG AAATACGCGA TCGCTGTTAA AAGGACAATT
ACAAACAGGA ATCGAATGCA
5761 ACCGGCGCAG GAACACTGCC AGCGCATCAA CAATATTTTC
ACCTGAATCA GGATATTCTT
- 56 038966
5821 CTAATACCTG GAATGCTGTT TTTCCGGGGA TCGCAGTGGT GAGTAACCAT GCATCATCAG
5881 GAGTACGGAT AAAATGCTTG ATGGTCGGAA GAGGCATAAA
TTCCGTCAGC CAGTTTAGTC
5941 TGACCATCTC ATCTGTAACA TCATTGGCAA CGCTACCTTT
GCCATGTTTC AGAAACAACT
6001 CTGGCGCATC GGGCTTCCCA TACAATCGAT AGATTGTCGC
ACCTGATTGC CCGACATTAT
6061 CGCGAGCCCA TTTATACCCA TATAAATCAG CATCCATGTT
GGAATTTAAT CGCGGCCTAG
6121 AGCAAGACGT TTCCCGTTGA ATATGGCTCA TAACACCCCT
TGTATTACTG TTTATGTAAG
6181 CAGACAGTTT TATTGTTCAT GATGATATAT TTTTATCTTG
TGCAATGTAA CATCAGAGAT
6241 TTTGAGACAC AACAATTGGT CGAC
SEQ ID NO :5
ATTGATTATT GACTAGTTAT TAATAGTAAT CAATTACGGG GTCATTAGTT CATAGCCCAT
ATATGGAGTT CCGCGTTACA TAACTTACGG TAAATGGCCC GCCTGGCTGA CCGCCCAACG
121 ACCCCCGCCC ATTGACGTCA ATAATGACGT ATGTTCCCAT AGTAACGCCA ATAGGGACTT
181 TCCATTGACG TCAATGGGTG GAGTATTTAC GGTAAACTGC CCACTTGGCA GTACATCAAG
241 TGTATCATAT GCCAAGTACG CCCCCTATTG ACGTCAATGA CGGTAAATGG CCCGCCTGGC
301 ATTATGCCCA GTACATGACC TTATGGGACT TTCCTACTTG GCAGTACATC TACGTATTAG
361 TCATCGCTAT TACCATGGTG GAGGTGAGCC CCACGTTCTG CTTCACTCTC CCCATCTCCC
421 CCCCCTCCCC ACCCCCAATT TTGTATTTAT TTATTTTTTA ATTATTTTGT GCAGCGATGG
481 GGGCGGGGGG GGGGGGGGGG CGCGCGCCAG GCGGGGCGGG GCGGGGCGAG GGGCGGGGCG
541 GGGCGAGGCG GAAAGGTGCG GCGGCAGCCA ATCAAAGCGG CGCGCTCCGA AAGTTTCCTT
- 57 038966
601 TTATGGCGAG GCGGCGGCGG CGGCGGCCCT ATAAAAAGCG AAGCGCGCGG CGGGCGGGAG
661 TCGCTGCGCG CTGCCTTCGC CCCGTGCCCC GCTCCGCCGC CGCCTCGCGC CGCCCGCCCC
721 GGCTCTGACT GACCGCGTTA CTCCCACAGG TGAGCGGGCG GGACGGCCCT TCTCCTCCGG
781 GCTGTAATTA GCGCTTGGTT TAATGACGGC TTGTTTCTTT TCTGTGGCTG CGTGAAAGCC
841 TTGAGGGGCT CCGGGAGGGC CCTTTGTGCG GGGGGAGCGG CTCGGGGGGT GCGTGCGTGT
901 GTGTGTGCGT GGGGAGCGCC GCGTGCGGCT CCGCGCTGCC CGGCGGCTGT GAGCGCTGCG
961 GGCGCGGCGC GGGGCTTTGT GCGCTCCGCA GTGTGCGCGA GGGGAGCGCG GCCGGGGGCG
1021 GTGCCCCGCG GTGCGGGGGG GGCTGCGAGG GGAACAAAGG
CTGCGTGCGG GGTGTGTGCG
1081 TGGGGGGGTG AGCAGGGGGT GTGGGCGCGT CGGTCGGGCT
GCAACCCCCC CTGCACCCCC
1141 CTCCCCGAGT TGCTGAGCAC GGCCCGGCTT CGGGTGCGGG
GCTCCGTACG GGGCGTGGCG
1201 CGGGGCTCGC GGTGCCGGGC GGGGGGTGGC GGCAGGTGGG
GGTGCCGGGC GGGGCGGGGC
1261 CGCCTCGGGC CGGGGAGGGC TCGGGGGAGG GGCGCGGCGG
CCCCCGGAGC GCCGGCGGCT
1321 GTCGAGGCGC GGCGAGCCGC AGCCATTGCC TTTTATGGTA
ATCGTGCGAG AGGGCGCAGG
1381 GACTTCCTTT GTCCCAAATC TGTGCGGAGC CGAAATCTGG
GAGGCGCCGC CGCACCCCCT
1441 CTAGCGGGCG CGGGGCGAAG CGGTGCGGCG CCGGCAGGAA
GGAAATGGGC GGGGAGGGCC
1501 TTCGTGCGTC GCCGCGCCGC CGTCCCCTTC TCCCTCTCCA
GCCTCGGGGC TGTCCGCGGG
1561 GGGACGGGGC AGGGCGGGGT TCGGCTTCTG GCGTGTGACC
GGCGGCTCTA GAGCCTCTGC
1621 TAACCATGTT CATGCCTTCT TCTTTTTCCT ACAGCTCCTG
GGCAACGTGC TGGTTATTGT
- 58 038966
1681 GCTGTCTCAT CATTTTGGCA AAGAATTCCT CGAGCATGTG
GTCTGAGTTA AAAATCAGGA
1741 GCAACGACGG AGGTGAAGGA CCAGAGGACG CCAACGACCC
CCGGGGAAAG GGGGTGCAAC
1801 ACATCCATAT CCAGCCATCT CTACCTGTTT ATGGACAGAG
GGTTAGGGAT GGTGATAGGG
1861 GCAAACGTGA CTCGTACTGG TCTACTTCTC CTAGTGGTAG
CACCACAAAA CCAGCATCAG
1921 GTTGGGAGAG GTCAAGTAAA GCCGACACAT GGTTGCTGAT
TCTCTCATTC ACCCAGTGGG
1981 CTTTGTCAAT TGCCACAGTG ATCATCTGTA TCATAATTTC
TGCTAGACAA GGGTATAGTA
2041 TGAAAGAGTA CTCAATGACT GTAGAGGCAT TGAACATGAG
CAGCAGGGAG GTGAAAGAGT
2101 САСTTAGGAG TCTAATAAGG CAAGAGGTTA TAGCAAGGGC
TGTCAACATT CAGAGCTCTG
2161 TGCAAACCGG AATCCCAGTC TTGTTGAACA AAAACAGCAG
GGATGTCATC CAGATGATTG
2221 ATAAGTCGTG CAGCAGACAA GAGCTCACTC AGCACTGTGA
GAGTAGGATC GCAGTCCACC
2281 ATGCCGATGG AATTGCCCCA CTTGAGCCAC ATAGTTTCTG
GAGATGCCCT GTCGGAGAAC
2341 CGTATCTTAG CTCAGATCCT GAAATCTCAT TGCTGCCTGG
TCCGAGCTTG TTATCTGGTT
2401 CTACAACGAT CTCTGGATGT GTTAGGCTCC CTTCACTCTC
AATTGGCGAG GCAATCTATG
2461 CCTATTCATC AAATCTCATT ACACAAGGTT GTGCTGACAT
AGGGAAATCA TATCAGGTCC
2521 TGCAGCTAGG GTACATATGA CTCAATTCAG ATATGTTCCC
TGATCTTAAC CCCGTAGTGT
2581 CCCACACTTA TGACATCAAC GACAATCGGA AATCATGCTC
TGTGGTGGCA ACCGGGACTA
2641 GGGGTTATCA GCTTTGCTCC ATGCCGACTG TAGACGAAAG
AACCGACTAC TCTAGTGATG
2701 GTATTGAGGA TCTGGTCCTT GATGTCCTGG ATCTCAAAGG
GAGAACTAAG TCTCACCGGT
- 59 038966
2761 ATCGCAACAG CGAGGTAGAT CTTGATCACC CGTTCTCTGC
ACTATACCCC AGTGTAGGCA
2821 ACGGCATTGC AACAGAAGGC TCATTGATAT TTCTTGGGTA
TGGTGGACTA ACCACCCCTC
2881 TGCAGGGTGA TACAAAATGT AGGACCCAAG GATGCCAACA
GGTGTCGCAA GACACATGCA
2941 ATGAGGCTCT GAAAATTACA TGGCTAGGAG GGAAACAGGT
GGTCAGCGTG ATCATCCAGG
3001 TCAATGACTA TCTCTCAGAG AGGCCAAAGA TAAGAGTCAC
AACCATTCCA ATCACTCAAA
3061 ACTATCTCGG GGCGGAAGGT AGATTATTAA AATTGGGTGA
TCGGGTGTAC ATCTATACAA
3121 GATCATCAGG CTGGCACTCT CAACTGCAGA TAGGAGTACT
TGATGTCAGC CACCCTTTGA
3181 CTATCAACTG GACACCTCAT GAAGCCTTGT CTAGACCAGG
AAATAAAGAG TGCAATTGGT
3241 ACAATAAGTG TCCGAAGGAA TGCATATCAG GCGTATACAC
TGATGCTTAT CCATTGTCCC
3301 CTGATGCAGC TAACGTCGCT ACCGTCACGC TATATGCCAA
TACATCGCGT GTCAACCCAA
3361 CAATCATGTA TTCTAACACT ACTAACATTA TAAATATGTT
AAGGATAAAG GATGTTCAAT
3421 TAGAGGCTGC ATATACCACG ACATCGTGTA TCACGCATTT
TGGTAAAGGC TACTGCTTTC
3481 ACATCATCGA GATCAATCAG AAGAGCCTGA ATACCTTACA
GCCGATGCTC TTTAAGACTA
3541 GCATCCCTAA ATTATGCAAG GCCGAGTCTT AAGCGGCCGC
GCATGCGAAT TCACTCCTCA
3601 GGTGCAGGCT GCCTATCAGA AGGTGGTGGC TGGTGTGGCC
AATGCCCTGG CTCACAAATA
3661 CCACTGAGAT CTTTTTCCCT CTGCCAAAAA TTATGGGGAC
ATCATGAAGC CCCTTGAGCA
3721 TCTGACTTCT GGCTAATAAA GGAAATTTAT TTTCATTGCA
ATAGTGTGTT GGAATTTTTT
3781 GTGTCTCTCA CTCGGAAGGA CATATGGGAG GGCAAATCAT
TTAAAACATC AGAATGAGTA
- 60 038966
3841 TTTGGTTTAG AGTTTGGCAA CATATGCCCA TATGCTGGCT
GCCATGAACA AAGGTTGGCT
3901 ATAAAGAGGT CATGAGTATA TGAAACAGCC CCCTGCTGTC
ТАТТССТТАТ TCCATAGAAA
3961 AGCCTTGACT TGAGGTTAGA TTTTTTTTAT ATTTTGTTTT
GTGTTATTTT TTTCTTTAAC
4021 ATCCCTAAAA TTTTCCTTAC ATGTTTTACT AGCCAGATTT
TTCCTCCTCT CCTGACTACT
4081 CCCAGTCATA GCTGTCCCTC TTCTCTTATG GAGATCCCTC
GACCTGCAGC CCAAGCTTGG
4141 CGTAATCATG GTCATAGCTG TTTCCTGTGT GAAATTGTTA
TCCGCTCACA ATTCCACACA
4201 ACATACGAGC CGGAAGCATA AAGTGTAAAG CCTGGGGTGC
CTAATGAGTG AGCTAACTCA
4261 CATTAATTGC GTTGCGCTCA CTGCCCGCTT TCCAGTCGGG
AAACCTGTCG TGCCAGCGGA
4321 TCCGCATCTC AATTAGTCAG CAACCATAGT CCCGCCCCTA
ACTCCGCCCA TCCCGCCCCT
4381 AACTCCGCCC AGTTCCGCCC ATTCTCCGCC CCATGGCTGA
CTAATTTTTT TTATTTATGC
4441 AGAGGCCGAG GCCGCCTCGG CCTCTGAGCT ATTCCAGAAG
TAGTGAGGAG GCTTTTTTGG
4501 AGGCCTAGGC TTTTGCAAAA AGCTAACTTG TTTATTGCAG
CTTATAATGG TTACAAATAA
4561 AGCAATAGCA TCACAAATTT CACAAATAAA GCATTTTTTT
CACTGCATTC TAGTTGTGGT
4621 TTGTCCAAAC TCATCAATGT AT CT TAT CAT GTCTGTCCGC
TTCCTCGCTC ACTGACTCGC
4681 TGCGCTCGGT CGTTCGGCTG CGGCGAGCGG TATCAGCTCA
CTCAAAGGCG GTAATACGGT
4741 TATCGAGAGA ATCAGGGGAT AACGCAGGAA AGAACATGTG
AGCAAAAGGC CAGCAAAAGG
4801 CCAGGAACCG TAAAAAGGCC GCGTTGCTGG CGTTTTTCCA
TAGGCTCCGC CCCCCTGACG
4861 AGCATCACAA AAATCGACGC TCAAGTCAGA GGTGGCGAAA
CCCGACAGGA CTATAAAGAT
- 61 038966
4921 ACCAGGCGTT TCCCCCTGGA AGCTCCCTCG TGCGCTCTCC
TGTTCCGACC CTGCCGCTTA
4981 CCGGATACCT GTCCGCCTTT CTCCCTTCGG GAAGCGTGGC
GCTTTCTCAT AGCTCACGCT
5041 GTAGGTATCT CAGTTCGGTG TAGGTCGTTC GCTCCAAGCT
GGGCTGTGTG CACGAACCCC
5101 CCGTTCAGCC CGACCGCTGC GCCTTATCCG GTAACTATCG
TCTTGAGTCC AACCCGGTAA
5161 GACACGACTT ATCGCCACTG GCAGCAGCCA CTGGTAACAG
GATTAGCAGA GCGAGGTATG
5221 TAGGCGGTGC TACAGAGTTC TTGAAGTGGT GGCCTAACTA
CGGCTACACT AGAAGAACAG
5281 TATTTGGTAT CTGCGCTCTG CTGAAGCCAG TTACCTTCGG
AAAAAGAGTT GGTAGCTCTT
5341 GATCCGGCAA ACAAACCACC GCTGGTAGCG GTGGTTTTTT
TGTTTGCAAG CAGCAGATTA
5401 CGCGCAGAAA AAAAGGATCT CAAGAAGATC CTTTGATCTT
TTCTACGGGG TCTGACGCTC
5461 AGTGGAACGA AAACTCACGT TAAGGGATTT TGGTCATGAG
ATTATCAAAA AGGATCTTCA
5521 CCTAGATCCT TTTAAATTAA AAATGAAGTT TTAAATCAAT
CTAAAGTATA TATGAGTAAA
5581 CTTGGTCTGA CAGTTAGAAA AACTCATCGA GCATCAAATG
AAACTGCAAT TTATTCATAT
5641 CAGGATTATC AATACCATAT TTTTGAAAAA GCCGTTTCTG
TAATGAAGGA GAAAACTCAC
5701 CGAGGCAGTT CCATAGGATG GCAAGATCCT GGTATCGGTC
TGCGATTCCG ACTCGTCCAA
5761 CATCAATACA ACCTATTAAT TTCCCCTCGT CAAAAATAAG
GTTATCAAGT GAGAAATCAC
5821 CATGAGTGAC GACTGAATCC GGTGAGAATG GCAACAGCTT
ATGCATTTCT TTCCAGACTT
5881 GTTCAACAGG CCAGCCATTA CGCTCGTCAT CAAAATCACT
CGCATCAACC AAACCGTTAT
5941 TCATTCGTGA TTGCGCCTGA GCGAGACGAA ATACGCGATC
GCTGTTAAAA GGACAATTAC
- 62 038966
6001 AAACAGGAAT CGAATGCAAC CGGCGCAGGA ACACTGCCAG
CGCATCAACA ATATTTTCAC
6061 CTGAATCAGG ATATTCTTCT AATACCTGGA ATGCTGTTTT
TCCGGGGATC GCAGTGGTGA
6121 GTAACCATGC ATCATCAGGA GTACGGATAA AATGCTTGAT
GGTCGGAAGA GGCATAAATT
6181 CCGTCAGCCA GTTTAGTCTG ACCATCTCAT CTGTAACATC
ATTGGCAACG CTACCTTTGC
6241 CATGTTTCAG AAACAACTCT GGCGCATCGG GCTTCCCATA
CAATCGATAG ATTGTCGCAC
6301 CTGATTGCCC GACATTATCG CGAGCCCATT TATACCCATA
TAAATCAGCA TCCATGTTGG
6361 AATTTAATCG CGGCCTAGAG CAAGACGTTT CCCGTTGAAT
ATGGCTCATA ACACCCCTTG
6421 TATTACTGTT TATGTAAGCA GACAGTTTTA TTGTTCATGA
TGATATATTT TTATCTTGTG
6481 CAATGTAACA TCAGAGATTT TGAGACACAA CAATTGGTCG AC
SEQ ID NO :6
AGATCTGTTA CATAACTTAT GGTAAATGGC CTGCCTGGCT GACTGCCCAA TGACCCCTGC
CCAATGATGT CAATAATGAT GTATGTTCCC ATGTAATGCC AATAGGGACT TTCCATTGAT
121 GTCAATGGGT GGAGTATTTA TGGTAACTGC CCACTTGGCA GTACATCAAG TGTATCATAT
181 GCCAAGTATG CCCCCTATTG ATGTCAATGA TGGTAAATGG CCTGCCTGGC ATTATGCCCA
241 GTACATGACC TTATGGGACT TTCCTACTTG GCAGTACATC TATGTATTAG TCATTGCTAT
301 TACCATGGGA ATTCACTAGT GGAGAAGAGC ATGCTTGAGG GCTGAGTGCC CCTCAGTGGG
361 CAGAGAGCAC ATGGCCCACA GTCCCTGAGA AGTTGGGGGG AGGGGTGGGC AATTGAACTG
421 GTGCCTAGAG AAGGTGGGGC TTGGGTAAAC TGGGAAAGTG ATGTGGTGTA CTGGCTCCAC
481 CTTTTTCCCC AGGGTGGGGG AGAACCATAT ATAAGTGCAG TAGTCTCTGT GAACATTCAA
- 63 038966
541 GCTTCTGCCT TCTCCCTCCT GTGAGTTTGC TAGC
SEQ ID NO :7
GCTAGCCACC ATGCAGAGAA GCCCTCTGGA GAAGGCCTCT GTGGTGAGCA AGCTGTTCTT
CAGCTGGACC AGGCCCATCC TGAGGAAGGG CTACAGGCAG AGACTGGAGC TGTCTGACAT
121 CTACCAGATC CCCTCTGTGG ACTCTGCTGA CAACCTGTCT GAGAAGCTGG AGAGGGAGTG
181 GGATAGAGAG CTGGCCAGCA AGAAGAACCC CAAGCTGATC AATGCCCTGA GGAGATGCTT
241 CTTCTGGAGA TTCATGTTCT ATGGCATCTT CCTGTACCTG GGGGAAGTGA CCAAGGCTGT
301 GCAGCCTCTG CTGCTGGGCA GAATCATTGC CAGCTATGAC CCTGACAACA AGGAGGAGAG
361 GAGCATTGCC ATCTACCTGG GCATTGGCCT GTGCCTGCTG TTCATTGTGA GGACCCTGCT
421 GCTGCACCCT GCCATCTTTG GCCTGCACCA CATTGGCATG CAGATGAGGA TTGCCATGTT
481 CAGCCTGATC TACAAGAAAA CCCTGAAGCT GTCCAGCAGA GTGCTGGACA AGATCAGCAT
541 TGGCCAGCTG GTGAGCCTGC TGAGCAACAA CCTGAACAAG TTTGATGAGG GCCTGGCCCT
601 GGCCCACTTT GTGTGGATTG CCCCTCTGCA GGTGGCCCTG CTGATGGGCC TGATTTGGGA
661 GCTGCTGCAG GCCTCTGCCT TTTGTGGCCT GGGCTTCCTG ATTGTGCTGG CCCTGTTTCA
721 GGCTGGCCTG GGCAGGATGA TGATGAAGTA CAGGGACCAG AGGGCAGGCA AGATCAGTGA
781 GAGGCTGGTG ATCACCTCTG AGATGATTGA GAACATCCAG TCTGTGAAGG CCTACTGTTG
841 GGAGGAAGCT ATGGAGAAGA TGATTGAAAA CCTGAGGCAG ACAGAGCTGA AGCTGACCAG
901 GAAGGCTGCC TATGTGAGAT ACTTCAACAG CTCTGCCTTC TTCTTCTCTG GCTTCTTTGT
961 GGTGTTCCTG TCTGTGCTGC CCTATGCCCT GATCAAGGGG ATCATCCTGA GAAAGATTTT
- 64 038966
1021 GAGGAGCATC AGCTTCTGCA TTGTGCTGAG GATGGCTGTG
ACCAGACAGT TCCCCTGGGC
1081 TGTGCAGACC TGGTATGACA GCCTGGGGGC CATCAACAAG
ATCCAGGACT TCCTGCAGAA
1141 GCAGGAGTAC AAGACCCTGG AGTACAACCT GAGGAGGAGA
GAAGTGGTGA TGGAGAATGT
1201 GACAGCCTTC TGGGAGGAGG GCTTTGGGGA GCTGTTTGAG
AAGGCCAAGC AGAACAACAA
1261 CAACAGAAAG ACCAGCAATG GGGATGACTC CCTGTTCTTC
TCCAACTTCT CCCTGCTGGG
1321 CACACCTGTG CTGAAGGACA TCAACTTCAA GATTGAGAGG
GGGCAGCTGC TGGCTGTGGC
1381 TGGATСТАСА GGGGCTGGCA AGACCAGCCT GGTGATGATG
ATCATGGGGG AGCTGGAGCC
1441 TTCTGAGGGC AAGATCAAGC ACTCTGGCAG GATCAGCTTT
TGCAGCCAGT TCAGC TGGAT
1501 CATGCCTGGC ACCATCAAGG AGAACATCAT CTTTGGAGTG
AGCTATGATG AG TAGAGATA
1561 CAGGAGTGTG ATCAAGGCCT GCCAGCTGGA GGAGGACATC
AGCAAGTTTG CTGAGAAGGA
1621 CAACATTGTG CTGGGGGAGG GAGGCATTAC ACTGTCTGGG
GGCCAGAGAG CCAGAATCAG
1681 CCTGGCCAGG GCTGTGTACA AGGATGCTGA CCTGTACCTG
CTGGACTCCC CCTTTGGCTA
1741 CCTGGATGTG CTGACAGAGA AGGAGATTTT TGAGAGCTGT
GTGTGCAAGC TGATGGCCAA
1801 CAAGACCAGA ATCCTGGTGA CCAGCAAGAT GGAGCACCTG
AAGAAGGCTG ACAAGATCCT
1861 GATCCTGCAT GAGGGCAGCA GCTACTTCTA TGGGACCTTC
TCTGAGCTGC AGAACCTGCA
1921 GCCTGACTTC AGCTCTAAGC TGATGGGCTG TGACAGCTTT
GACCAGTTCT CTGCTGAGAG
1981 GAGGAACAGC ATGGTGAGAG AGACCCTGCA CAGATTCAGC
CTGGAGGGAG ATGCCCCTGT
2041 GAGCTGGACA GAGACCAAGA AGCAGAGCTT CAAGCAGACA
GGGGAGTTTG GGGAGAAGAG
- 65 038966
2101 GAAGAACTCC ATCCTGAACC CCATCAACAG CATCAGGAAG
TTCAGCATTG TGCAGAAAAC
2161 CCCCCTGCAG ATGAATGGCA TTGAGGAAGA TTCTGATGAG
CCCCTGGAGA GGAGACTGAG
2221 CCTGGTGCCT GATTCTGAGC AGGGAGAGGC CATCCTGCCT
AGGATCTCTG TGATCAGCAC
2281 AGGCCCTACA CTGCAGGCCA GAAGGAGGCA GTCTGTGCTG
AACCTGATGA CCCACTCTGT
2341 GAACCAGGGC CAGAACATCC ACAGGAAAAC CACAGCCTCC
ACCAGGAAAG TGAGCCTGGC
2401 CCCTCAGGCC AATCTGACAG AGCTGGACAT CTACAGCAGG
AGGCTGTCTC AGGAGACAGG
2461 CCTGGAGATT TCTGAGGAGA TCAATGAGGA GGACCTGAAA
GAGTGCTTCT TTGATGACAT
2521 GGAGAGCATC CCTGCTGTGA CCACCTGGAA CACCTACCTG
AGATACATCA CAGTGCACAA
2581 GAGCCTGATC TTTGTGCTGA TCTGGTGCCT GGTGATCTTC
CTGGCTGAAG TGGCTGCCTC
2641 TCTGGTGGTG CTGTGGCTGC TGGGAAACAC CCCACTGCAG
GACAAGGGCA ACAGCACCCA
2701 CAGCAGGAAC AACAGCTATG CTGTGATCAT CACCTCCACC
TCCAGCTACT ATGTGTTCTA
2761 CATCTATGTG GGAGTGGCTG ATACCCTGCT GGCTATGGGC
TTCTTTAGAG GCCTGCCCCT
2821 GGTGCACACA CTGATCACAG TGAGCAAGAT CCTCCACCAC
AAGATGCTGC ACTCTGTGCT
2881 GCAGGCTCCT ATGAGCACCC TGAATACCCT GAAGGCTGGG
GGCATCCTGA ACAGATTCTC
2941 CAAGGATATT GCCATCCTGG ATGACCTGCT GCCTCTCACC
ATCTTTGACT TCATCCAGCT
3001 GCTGCTGATT GTGATTGGGG CCATTGCTGT GGTGGCAGTG
CTGCAGCCCT ACATCTTTGT
3061 GGCCACAGTG CCTGTGATTG TGGCCTTCAT CATGCTGAGG
GCCTACTTTC TGCAGACCTC
3121 CCAGCAGCTG AAGCAGCTGG AGTCTGAGGG CAGAAGCCCC
ATCTTCACCC ACCTGGTGAC
- 66 038966
3181 AAGCCTGAAG GGCCTGTGGA CCCTGAGAGC CTTTGGCAGG
CAGCCCTACT TTGAGACCCT
3241 GTTCCACAAG GCCCTGAACC TGCACACAGC CAACTGGTTC
CTCTACCTGT CCACCCTGAG
3301 ATGGTTCCAG ATGAGAATTG AGATGATCTT TGTCATCTTC
TTCATTGCTG TGACCTTCAT
3361 CAGCATTCTG ACCACAGGAG AGGGAGAGGG CAGAGTGGGC
ATTATCCTGA CCCTGGCCAT
3421 GAACATCATG AGCACACTGC AGTGGGCAGT GAACAGCAGC
ATTGATGTGG ACAGCCTGAT
3481 GAGGAGTGTG AGCAGAGTGT TCAAGTTCAT TGATATGCCC
ACAGAGGGCA AGCCTACCAA
3541 GAGCACCAAG CCCTACAAGA ATGGCCAGCT GAGCAAAGTG
ATGATCATTG AGAACAGCCA
3601 TGTGAAGAAG GATGATATCT GGCCCAGTGG AGGCCAGATG
ACAGTGAAGG ACCTGACAGC
3661 CAAGTACACA GAGGGGGGCA ATGCTATCCT GGAGAACATC
TCCTTCAGCA TCTCCCCTGG
3721 CCAGAGAGTG GGACTGCTGG GAAGAACAGG CTCTGGCAAG
TCTACCCTGC TGTCTGCCTT
3781 CCTGAGGCTG CTGAACACAG AGGGAGAGAT CCAGATTGAT
GGAGTGTCCT GGGACAGCAT
3841 CACACTGCAG CAGTGGAGGA AGGCCTTTGG TGTGATCCCC
CAGAAAGTGT TCATCTTCAG
3901 TGGCACCTTC AGGAAGAACC TGGACCCCTA TGAGCAGTGG
TCTGACCAGG AGATTTGGAA
3961 AGTGGCTGAT GAAGTGGGCC TGAGAAGTGT GATTGAGCAG
TTCCCTGGCA AGCTGGACTT
4021 TGTCCTGGTG GATGGGGGCT GTGTGCTGAG CCATGGCCAC
AAGCAGCTGA TGTGCCTGGC
4081 CAGATCAGTG CTGAGCAAGG CCAAGATCCT GCTGCTGGAT
GAGCCTTCTG CCCACCTGGA
4141 TCCTGTGACC TACCAGATCA TCAGGAGGAC CCTCAAGCAG
GCCTTTGCTG ACTGCACAGT
4201 CATCCTGTGT GAGCACAGGA TTGAGGCCAT GCTGGAGTGC
CAGCAGTTCC TGGTGATTGA
- 67 038966
61 GGAGAACAAA GTGAGGCAGT ATGACAGCAT CCAGAAGCTG CTGAATGAGA GGAGCCTGTT
4321 CAGGCAGGCC ATCAGCCCCT CTGATAGAGT GAAGCTGTTC
CCCCACAGGA ACAGCTCCAA
4381 GTGCAAGAGC AAGCCCCAGA TTGCTGCCCT GAAGGAGGAG
ACAGAGGAGG AAGTGCAGGA
4441 CACCAGGCTG TGAGGGCCC
SEQ ID NO :8
GGGCCCAATC AACCTCTGGA TTACAAAATT TGTGAAAGAT TGACTGGTAT TCTTAACTAT
GTTGCTCCTT TTACGCTATG TGGATACGCT GCTTTAATGC CTTTGTATCA TGCTATTGCT
121 TCCCGTATGG CTTTCATTTT CTCCTCCTTG TATAAATCCT GGTTGCTGTC TCTTTATGAG
181 GAGTTGTGGC CCGTTGTCAG GCAACGTGGC GTGGTGTGCA CTGTGTTTGC TGACGCAACC
241 CCCACTGGTT GGGGCATTGC CACCACCTGT CAGCTCCTTT CCGGGACTTT CGCTTTCCCC
301 CTCCCTATTG CCACGGCGGA ACTCATCGCC GCCTGCCTTG CCCGCTGCTG GACAGGGGCT
361 CGGCTGTTGG GCACTGACAA TTCCGTGGTG TTGTCGGGGA AATCATCGTC CTTTCCTTGG
421 CTGCTCGCCT GTGTTGCCAC CTGGATTCTG CGCGGGACGT CCTTCTGCTA CGTCCCTTCG
481 GCCCTCAATC CAGCGGACCT TCCTTCCCGC GGCCTGCTGC CGGCTCTGCG GCCTCTTCCG
541 CGTCTTCGCC TTCGCCCTCA GACGAGTCGG ATCTCCCTTT GGGCCGCCTC CCCGCAAGCT
SEQ ID NO :9
GGTACCTCAA TATTGGCCAT TAGCCATATT ATTCATTGGT TATATAGCAT AAATCAATAT
TGGCTATTGG CCATTGCATA CGTTGTATCT ATATCATAAT ATGTACATTT ATATTGGCTC
121 ATGTCCAATA TGACCGCCAT GTTGGCATTG ATTATTGACT AGTTATTAAT AGTAATCAAT
181 TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC GTTACATAAC
- 68 038966
TTACGGTAAA
241 TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC CCGCCCATTG ACGTCAATAA TGACGTATGT
301 TCCCATAGTA ACGCCAATAG GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGAGT ATTTACGGTA
361 AACTGCCCAC TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTCCGCCCC CTATTGACGT
421 CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAC GGGACTTTCC
481 TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC ATGGTGATGC GGTTTTGGCA
541 GTACACCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT
601 TGACGTCAAT GGGAGTTTGT TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA
661 CAACTGCGAT CGCCCGCCCC GTTGACGCAA ATGGGCGGTA GGCGTGTACG GTGGGAGGTC
721 TATATAAGCA GAGCTCGCTG GCTTGTAACT CAGTCTCTTA CTAGGAGACC AGCTTGAGCC
781 TGGGTGTTCG CTGGTTAGCC TAACCTGGTT GGCCACCAGG GGTAAGGACT CCTTGGCTTA
841 GAAAGCTAAT AAACTTGCCT GCATTAGAGC TTATCTGAGT CAAGTGTCCT CATTGACGCC
901 TCACTCTCTT GAACGGGAAT CTTCCTTACT GGGTTCTCTC TCTGACCCAG GCGAGAGAAA
961 CTCCAGCAGT GGCGCCCGAA CAGGGACTTG AGTGAGAGTG TAGGCACGTA CAGCTGAGAA
1021 GGCGTCGGAC GCGAAGGAAG CGCGGGGTGC GACGCGACCA
AGAAGGAGAC TTGGTGAGTA
1081 GGCTTCTCGA GTGCCGGGAA AAAGCTCGAG CCTAGTTAGA
GGACTAGGAG AGGCCGTAGC
1141 CGTAACTACT CTTGGGCAAG TAGGGCAGGC GGTGGGTACG
CAATGGGGGC GGCTACCTCA
1201 GCACTAAATA GGAGACAATT AGACCAATTT GAGAAAATAC
GACTTCGCCC GAACGGAAAG
1261 AAAAAGTACC AAATTAAACA TTTAATATGG GCAGGCAAGG
- 69 038966
AGATGGAGCG 1321 CTTCGGCCTC
CATGAGAGGT TGTTGGAGAC AGAGGAGGGG TGTAAAAGAA
TCATAGAAGT CCTCTACCCC
1381 CTAGAACCAA CAGGATCGGA GGGCTTAAAA AGTCTGTTCA
ATCTTGTGTG CGTGCTATAT
1441 TGCTTGCACA AGGAACAGAA AGTGAAAGAC ACAGAGGAAG
CAGTAGCAAC AGTAAGACAA
1501 CACTGCCATC TAGTGGAAAA AGAAAAAAGT GCAACAGAGA
CATCTAGTGG ACAAAAGAAA
1561 AATGACAAGG GAATAGCAGC GCCACCTGGT GGCAGTCAGA
ATTTTCCAGC GCLACLACLA
1621 GGAAATGCCT GGGTACATGT ACCCTTGTCA CCGCGCACCT
TAAATGCGTG GGTAAAAGCA
1681 GTAGAGGAGA AAAAATTTGG AGCAGAAATA GTACCCATTT
TTTTGTTTCA AGCCCTATCG
1741 AATTCCCGTT TGTGCTAGGG TTCTTAGGCT TCTTGGGGGC
TGCTGGAACT GCAATGGGAG
1801 CAGCGGCGAC AGCCCTGACG GTCCAGTCTC AGCATTTGCT
TGCTGGGATA CTGCAGCAGC
1861 AGAAGAATCT GCTGGCGGCT GTGGAGGCTC AACAGCAGAT
GTTGAAGCTG ACCATTTGGG
1921 GTGTTAAAAA CCTCAATGCC CGCGTCACAG CCCTTGAGAA
GTACCTAGAG GATCAGGCAC
1981 GACTAAACTC CTGGGGGTGC GCATGGAAAC AAGTATGTCA
TACCACAGTG GAGTGGCCCT
2041 GGACAAATCG GACTCCGGAT TGGCAAAATA TGACTTGGTT
GGAGTGGGAA AGACAAATAG
2101 CTGATTTGGA AAGCAACATT ACGAGACAAT TAGTGAAGGC
TAGAGAACAA GAGGAAAAGA
2161 ATCTAGATGC CTATCAGAAG TTAACTAGTT GGTCAGATTT
CTGGTCTTGG TTCGATTTCT
2221 CAAAATGGCT TAACATTTTA AAAATGGGAT TTTTAGTAAT
AGTAGGAATA ATAGGGTTAA
2281 GATТАСTTTA CACAGTATAT GGATGTATAG TGAGGGTTAG
GCAGGGATAT GTTCCTCTAT
2341 CTCCACAGAT CCATATCCGC GGCAATTTTA AAAGAAAGGG
- 70 038966
AGGAATAGGG 2401 GGACAGACTT
CAGCAGAGAG ACTAATTAAT ATAATAACAA CACAATTAGA
AATACAACAT TTACAAACCA
2461 AAATTCAAAA AATTTTAAAT TTTAGAGCCG CGGAGATCTG
TTACATAACT TATGGTAAAT
2521 GGCCTGCCTG GCTGACTGCC CAATGACCCC TGCCCAATGA
TGTCAATAAT GATGTATGTT
2581 CCCATGTAAT GCCAATAGGG ACTTTCCATT GATGTCAATG
GGTGGAGTAT TTATGGTAAC
2641 TGCCCACTTG GCAGTACATC AAGTGTATCA TATGCCAAGT
ATGCCCCCTA TTGATGTCAA
2701 TGATGGTAAA TGGCCTGCCT GGCATTATGC CCAGTACATG
ACCTTATGGG ACTTTCCTAC
2761 TTGGCAGTAC ATCTATGTAT TAGTCATTGC TATTAGCATG
GGAATTCACT AGTGGAGAAG
2821 AGCATGCTTG AGGGCTGAGT GCCCCTCAGT GGGCAGAGAG
CACATGGCCC ACAGTCCCTG
2881 AGAAGTTGGG GGGAGGGGTG GGCAATTGAA CTGGTGCCTA
GAGAAGGTGG GGCTTGGGTA
2941 AACTGGGAAA GTGATGTGGT GTACTGGCTC CACCTTTTTC
CCCAGGGTGG GGGAGAACCA
3001 TATATAAGTG CAGTAGTCTC TGTGAACATT CAAGCTTCTG
CCTTCTCCCT CCTGTGAGTT
3061 TGCTAGCCAC CATGCCCAGC TCTGTGTCCT GGGGCATTCT
GCTGCTGGCT GGCCTGTGCT
3121 GTCTGGTGCC TGTGTCCCTG GCTGAGGACC CTCAGGGGGA
TGCTGCCCAG AAAACAGACA
3181 CCTCCCACCA TGACCAGGAC CACCCCACCT TCAACAAGAT
CACCCCCAAC CTGGCAGAGT
3241 TTGCCTTCAG CCTGTACAGA CAGCTGGCCC ACCAGAGCAA
CAGCACCAAC ATCTTTTTCA
3301 GCCCTGTGTC CATTGCCACA GCCTTTGCCA TGCTGAGCCT
GGGCACCAAG GCTGACACCC
3361 ATGATGAGAT CCTGGAAGGC CTGAACTTCA ACCTGACAGA
GATCCCTGAG GCCCAGATCC
3421 ATGAGGGCTT CCAGGAACTG CTGAGAACCC TGAACCAGCC
- 71 038966
AGACAGCCAG 3481 CTGCAGCTGA
CAACAGGCAA TGGGCTGTTC CTGTCTGAGG GCCTGAAGCT
GGTGGACAAG TTTCTGGAAG
3541 ATGTGAAGAA GCTGTACCAC TCTGAGGCCT TCACAGTGAA
CTTTGGGGAC ACAGAAGAGG
3601 CCAAGAAACA GATCAATGAC TATGTGGAAA AGGGCACCCA
GGGCAAGATT GTGGACCTTG
3661 TGAAAGAGCT GGACAGGGAC ACTGTGTTTG CCCTTGTGAA
CTACATCTTC TTCAAGGGCA
3721 AGTGGGAGAG GCCCTTTGAA GTGAAGGACA CTGAGGAAGA
GGACTTCCAT GTGGACCAAG
3781 T GAC GAG AGT GAAGGTGCCA ATGATGAAGA GACTGGGGAT
GTTCAATATC CAGCACTGCA
3841 AGAAACTGAG CAGCTGGGTG CTGCTGATGA AGTACCTGGG
CAATGCTACA GCCATATTCT
3901 TTCTGCCTGA TGAGGGCAAG CTGCAGCACC TGGAAAATGA
GCTGACCCAT GACATCATCA
3961 CCAAATTTCT GGAAAATGAG GACAGAAGAT CTGCCAGCCT
GCATCTGCCC AAGCTGAGCA
4021 TCACAGGCAC ATATGACCTG AAGTCTGTGC TGGGACAGCT
GGGAATCACC AAGGTGTTCA
4081 GCAATGGGGC AGACCTGAGT GGAGTGACAG AGGAAGCCCC
TCTGAAGCTG TCCAAGGCTG
4141 TGCACAAGGC AGTGCTGACC ATTGATGAGA AGGGCACAGA
GGCTGCTGGG GCCATGTTTC
4201 TGGAAGCCAT CCCCATGTCC ATCCCCCCAG AAGTGAAGTT
CAACAAGCCC TTTGTGTTCC
4261 TGATGATTGA GCAGAACACC AAGAGCCCCC TGTTCATGGG
CAAGGTTGTG AACCCCACCC
4321 AGAAATGAGG GCCCAATCAA CCTCTGGATT ACAAAATTTG
TGAAAGATTG ACTGGTATTC
4381 TTAACTATGT TGCTCCTTTT ACGCTATGTG GATACGCTGC
TTTAATGCCT TTGTATCATG
4441 CTATTGCTTC CCGTATGGCT TTCATTTTCT CCTCCTTGTA
TAAATCCTGG TTGCTGTCTC
4501 TTTATGAGGA GTTGTGGCCC GTTGTCAGGC AACGTGGCGT
- 72 038966
GGTGTGCACT 4561 GTGTTTGCTG
ACGCAACCCC CACTGGTTGG GGCATTGCCA CCACCTGTCA
GCTCCTTTCC GGGACTTTCG
4621 CTTTCCCCCT CCCTATTGCC ACGGCGGAAC TCATCGCCGC
CTGCCTTGCC CGCTGCTGGA
4681 CAGGGGCTCG GCTGTTGGGC ACTGACAATT CCGTGGTGTT
GTCGGGGAAA TCATCGTCCT
4741 TTCCTTGGCT GCTCGCCTGT GTTGCCACCT GGATTCTGCG
CGGGACGTCC TTCTGCTACG
4801 TCCCTTCGGC CCTCAATCCA GCGGACCTTC CTTCCCGCGG
CCTGCTGCCG GCTCTGCGGC
4861 CTCTTCCGCG TCTTCGCCTT CGCCCTCAGA CGAGTCGGAT
CTCCCTTTGG GCCGCCTCCC
4921 CGCAAGCTTC GCACTTTTTA AAAGAAAAGG GAGGACTGGA
TGGGATTTAT TACTCCGATA
4981 GGACGCTGGC TTGTAACTCA GTCTCTTACT AGGAGACCAG
CTTGAGCCTG GGTGTTCGCT
5041 GGTTAGCCTA ACCTGGTTGG CCACCAGGGG TAAGGACTCC
TTGGCTTAGA AAGCTAATAA
5101 ACTTGCCTGC ATTAGAGCTC TTACGCGTCC CGGGCTCGAG
ATCCGCATCT CAATTAGTCA
5161 GCAACCATAG TCCCGCCCCT AACTCCGCCC ATCCCGCCCC
TAACTCCGCC CAGTTCCGCC
5221 CATTCTCCGC CCCATGGCTG ACTAATTTTT TTTATTTATG
CAGAGGCCGA GGCCGCCTCG
5281 GCCTCTGAGC TATTCCAGAA GTAGTGAGGA GGCTTTTTTG
GAGGCCTAGG CTTTTGCAAA
5341 AAGCTAACTT GTTTATTGCA GCTTATAATG GTTACAAATA
AAGCAATAGC ATCACAAATT
5401 TCACAAATAA AGCATTTTTT TCACTGCATT CTAGTTGTGG
TTTGTCCAAA CTCATCAATG
5461 TATCTTATGA TGTCTGTCCG CTTCCTCGCT CACTGACTCG
CTGCGCTCGG TCGTTCGGCT
5521 GCGGCGAGCG GTATCAGCTC ACTCAAAGGC GGTAATACGG
TTATCGAGAG AATCAGGGGA
5581 TAACGCAGGA AAGAACATGT GAGCAAAAGG CCAGCAAAAG
- 73 038966
GCCAGGAACC 5641 GTAAAAAGGC
CGCGTTGCTG GCGTTTTTCC ATAGGCTCCG CCCCCCTGAC
GAGCATСАСА AAAATCGACG
5701 CTCAAGTCAG AGGTGGCGAA ACCCGACAGG ACTATAAAGA
TACCAGGCGT TTCCCCCTGG
5761 AAGCTCCCTC GTGCGCTCTC CTGTTCCGAC CCTGCCGCTT
ACCGGATACC TGTCCGCCTT
5821 TCTCCCTTCG GGAAGCGTGG CGCTTTCTCA TAGCTCACGC
TGTAGGTATC TCAGTTCGGT
5881 GTAGGTCGTT CGCTCCAAGC TGGGCTGTGT GCACGAACCC
CCCGTTCAGC CCGACCGCTG
5941 CGCCTTATCC GGTAACTATC GTCTTGAGTC CAACCCGGTA
AGACACGACT TATCGCCACT
6001 GGCAGCAGCC ACTGGTAACA GGATTAGCAG AGCGAGGTAT
GTAGGCGGTG CTACAGAGTT
6061 CTTGAAGTGG TGGCCTAACT ACGGCTACAC TAGAAGAACA
GTATTTGGTA TCTGCGCTCT
6121 GCTGAAGCCA GTTACCTTCG GAAAAAGAGT TGGTAGCTCT
TGATCCGGCA AACAAACCAC
6181 CGCTGGTAGC GGTGGTTTTT TTGTTTGCAA GCAGCAGATT
ACGCGCAGAA AAAAAGGATC
6241 TCAAGAAGAT CCTTTGATCT TTTCTACGGG GTCTGACGCT
CAGTGGAACG AAAACTCACG
6301 TTAAGGGATT TTGGTCATGA GATTATCAAA AAGGATCTTC
ACCTAGATCC TTTTAAATTA
6361 AAAATGAAGT TTTAAATCAA TCTAAAGTAT ATATGAGTAA
ACTTGGTCTG ACAGTTAGAA
6421 AAACTCATCG AGCATCAAAT GAAACTGCAA TTTATTCATA
TCAGGATTAT CAATACCATA
6481 TTTTTGAAAA AGCCGTTTCT GTAATGAAGG AGAAAACTCA
CCGAGGCAGT TCCATAGGAT
6541 GGCAAGATCC TGGTATCGGT CTGCGATTCC GACTCGTCCA
ACATCAATAC AACCTATTAA
6601 TTTCCCCTCG TCAAAAATAA GGTTATCAAG TGAGAAATCA
CCATGAGTGA CGACTGAATC
6661 CGGTGAGAAT GGCAACAGCT TATGCATTTC TTTCCAGACT
- 74 038966
TGTTCAACAG
GCCAGCCATT
6721
ACGCTCGTCA
TCAAAATCAC
TCGCATCAAC
CAAACCGTTA
TTCATTCGTG
ATTGCGCCTG
6781
AGCGAGACGA
AATACGCGAT
CGCTGTTAAA
AGGACAATTA
CAAACAGGAA
TCGAATGCAA
6841
CCGGCGCAGG
AACACTGCCA
GCGCATCAAC
AATATTTTCA
CCTGAATCAG
GATATTCTTC
6901
TAATACCTGG
AATGCTGTTT
TTCCGGGGAT
CGCAGTGGTG
AGTAACCATG
CATCATCAGG
6961
AGTACGGATA
AAATGCTTGA
TGGTCGGAAG
AGGCATAAAT
TCCGTCAGCC
AGTTTAGTCT
7021
GAGCATCTGA
TCTGTAACAT
CATTGGCAAC
GCTACCTTTG
CCATGTTTCA
GAAACAACTC
7081
TGGCGCATCG
GGCTTCCCAT
ACAATCGATA
GATTGTCGCA
CCTGATTGCC
CGACATTATC
7141
GCGAGCCCAT
TTATACCCAT
ATAAATCAGC
ATCCATGTTG
GAATTTAATC
GCGGCCTAGA
7201
GCAAGACGTT
TCCCGTTGAA
TATGGCTCAT
AACACCCCTT
GTATTACTGT
TTATGTAAGC
7261
AGACAGTTTT
ATTGTTCATG
ATGATATATT
TTTATCTTGT
GCAATGTAAC
ATCAGAGATT
7321 TTGAGACACA ACAATTGGTC GACGGATCC
SEQ ID NO:10
GGTACCTCAA TATTGGCCAT TAGCCATATT
ATTCATTGGT
TATATAGCAT
AAATCAATAT
TGGCTATTGG CCATTGCATA
CGTTGTATCT
ATATCATAAT
ATGTACATTT
ATATTGGCTC
121 ATGTCCAATA
TGACCGCCAT
GTTGGCATTG
ATTATTGACT
AGTTATTAAT
AGTAATCAAT
181 TACGGGGTCA
TTAGTTCATA
GCCCATATAT
GGAGTTCCGC
GTTACATAAC
TTACGGTAAA
241 TGGCCCGCCT
GGCTGACCGC
CCAACGACCC
CCGCCCATTG
ACGTCAATAA
TGACGTATGT
301 TCCCATAGTA
ACGCCAATAG
GGACTTTCCA
TTGACGTCAA
TGGGTGGAGT
ATTTACGGTA
361 AACTGCCCAC
TTGGCAGTAC
ATCAAGTGTA
TCATATGCCA
AGTCCGCCCC
- 75 038966
CTATTGACGT
421 CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAC GGGACTTTCC
481 TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC ATGGTGATGC GGTTTTGGCA
541 GTACACCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT
601 TGACGTCAAT GGGAGTTTGT TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA
661 CAACTGCGAT CGCCCGCCCC GTTGACGCAA ATGGGCGGTA GGCGTGTACG GTGGGAGGTC
721 TATATAAGCA GAGCTCGCTG GCTTGTAACT CAGTCTCTTA CTAGGAGACC AGCTTGAGCC
781 TGGGTGTTCG CTGGTTAGCC TAACCTGGTT GGCCACCAGG GGTAAGGACT CCTTGGCTTA
841 GAAAGCTAAT AAACTTGCCT GCATTAGAGC TTATCTGAGT CAAGTGTCCT CATTGACGCC
901 TCACTCTCTT GAACGGGAAT CTTCCTTACT GGGTTCTCTC TCTGACCCAG GCGAGAGAAA
961 CTCCAGCAGT GGCGCCCGAA CAGGGACTTG AGTGAGAGTG TAGGCACGTA CAGCTGAGAA
1021 GGCGTCGGAC GCGAAGGAAG CGCGGGGTGC GACGCGACCA
AGAAGGAGAC TTGGTGAGTA
1081 GGCTTCTCGA GTGCCGGGAA AAAGCTCGAG CCTAGTTAGA
GGAGTAGGAG AGGCCGTAGC
1141 CGTAACTACT CTTGGGCAAG TAGGGCAGGC GGTGGGTACG
CAATGGGGGC GGCTACCTCA
1201 GCACTAAATA GGAGACAATT AGACCAATTT GAGAAAATAC
GACTTCGCCC GAACGGAAAG
1261 AAAAAGTACC AAATTAAACA TTTAATATGG GCAGGCAAGG
AGATGGAGCG CTTCGGCCTC
1321 CATGAGAGGT TGTTGGAGAC AGAGGAGGGG TGTAAAAGAA
TCATAGAAGT CCTCTACCCC
1381 CTAGAACCAA CAGGATCGGA GGGCTTAAAA AGTCTGTTCA
ATCTTGTGTG CGTGCTATAT
1441 TGCTTGCACA AGGAACAGAA AGTGAAAGAC ACAGAGGAAG
- 76 038966
CAGTAGCAAC 1501 AGTAAGACAA CACTGCCATC TAGTGGAAAA AGAAAAAAGT GCAACAGAGA
CATCTAGTGG 1561 ACAAAAGAAA AATGACAAGG GAATAGCAGC GCCACCTGGT GGCAGTCAGA
ATTTTCCAGC 1621 GCAACAACAA GGAAATGCCT GGGTACATGT ACCCTTGTCA CCGCGCACCT
TAAATGCGTG 1681 GGTAAAAGCA GTAGAGGAGA AAAAATTTGG AGCAGAAATA GTACCCATTT
TTTTGTTTCA 1741 AGCCCTATCG AATTCCCGTT TGTGCTAGGG TTCTTAGGCT TCTTGGGGGC
TGCTGGAACT 1801 GCAATGGGAG CAGCGGCGAC AGCCCTGACG GTCCAGTCTC AGCATTTGCT
TGCTGGGATA 1861 CTGCAGCAGC AGAAGAATCT GCTGGCGGCT GTGGAGGCTC AACAGCAGAT
GTTGAAGCTG 1921 ACCATTTGGG GTGTTAAAAA CCTCAATGCC CGCGTCACAG CCCTTGAGAA
GTACCTAGAG 1981 GATCAGGCAC GACTAAACTC CTGGGGGTGC GCATGGAAAC AAGTATGTCA
TACCACAGTG 2041 GAGTGGCCCT GGACAAATCG GACTCCGGAT TGGCAAAATA TGACTTGGTT
GGAGTGGGAA 2101 AGACAAATAG CTGATTTGGA AAGCAACATT ACGAGACAAT TAGTGAAGGC
TAGAGAACAA 2161 GAGGAAAAGA ATCTAGATGC CTATCAGAAG TTAACTAGTT GGTCAGATTT
CTGGTCTTGG 2221 TTCGATTTCT CAAAATGGCT TAACATTTTA AAAATGGGAT TTTTAGTAAT
AGTAGGAATA 2281 ATAGGGTTAA GATTACTTTA CACAGTATAT GGATGTATAG TGAGGGTTAG
GCAGGGATAT 2341 GTTCCTCTAT CTCCACAGAT CCATATCCGC GGCAATTTTA AAAGAAAGGG
AGGAATAGGG 2401 GGACAGACTT CAGCAGAGAG ACTAATTAAT ATAATAACAA CACAATTAGA
AATACAACAT 2461 TTACAAACCA AAATTCAAAA AATTTTAAAT TTTAGAGCCG CGGAGATCTG
TTACATAACT 2521 TATGGTAAAT GGCCTGCCTG GCTGACTGCC CAATGACCCC TGCCCAATGA
- 77 038966
TGTCAATAAT 2581 GATGTATGTT
CCCATGTAAT GCCAATAGGG ACTTTCCATT GATGTCAATG
GGTGGAGTAT TTATGGTAAC
2641 TGCCCACTTG GCAGTACATC AAGTGTATCA TATGCCAAGT
ATGCCCCCTA TTGATGTCAA
2701 TGATGGTAAA TGGCCTGCCT GGCATTATGC CCAGTACATG
ACCTTATGGG ACTTTCCTAC
2761 TTGGCAGTAC ATCTATGTAT TAGTCATTGC TATTAGCATG
GGAATTCACT AGTGGAGAAG
2821 AGCATGCTTG AGGGCTGAGT GCCCCTCAGT GGGCAGAGAG
CACATGGCCC ACAGTCCCTG
2881 AGAAGTTGGG GGGAGGGGTG GGCAATTGAA CTGGTGCCTA
GAGAAGGTGG GGCTTGGGTA
2941 AACTGGGAAA GTGATGTGGT GTACTGGCTC CACCTTTTTC
CCCAGGGTGG GGGAGAACCA
3001 TATATAAGTG CAGTAGTCTC TGTGAACATT CAAGCTTCTG
CCTTCTCCCT CCTGTGAGTT
3061 TGCTAGCCAC CATGGGAGTG AAGGTGCTGT TTGCCCTGAT
CTGCATTGCT GTGGCTGAGG
3121 CCAAGCCCAC AGAGAACAAT GAGGACTTCA ACATTGTGGC
TGTGGCCAGC AACTTTGCCA
3181 CCACAGACCT GGATGCTGAC AGGGGCAAGC TGCCTGGCAA
GAAGCTGCCC CTGGAAGTCC
3241 TGAAAGAGAT GGAAGCCAAT GCCAGGAAGG CTGGCTGCAC
AAGAGGCTGT CTGATCTGCC
3301 TGAGCCACAT CAAGTGCACC CCCAAGATGA AGAAGTTCAT
CCCTGGCAGG TGCCACACCT
3361 ATGAAGGGGA CAAAGAGTCT GCCCAGGGGG GAATTGGAGA
GGCCATTGTG GACATCCCTG
3421 AGATCCCTGG CTTCAAGGAC CTGGAACCCA TGGAACAGTT
CATTGCCCAG GTGGACCTGT
3481 GTGTGGACTG CACTACAGGC TGTCTCAAGG GCCTGGCCAA
TGTGCAGTGC TCTGACCTGC
3541 TGAAGAAGTG GCTGCCCCAG AGATGTGCCA CCTTTGCCAG
CAAGATCCAG GGCCAGGTGG
3601 ACAAGATCAA GGGAGCTGGG GGAGATTGAT GAGGGCCCAA
- 78 038966
TCAACCTCTG 3661 GATTACAAAA
TTTGTGAAAG ATTGACTGGT ATTCTTAACT ATGTTGCTCC
TTTTACGCTA TGTGGATACG
3721 CTGCTTTAAT GCCTTTGTAT CATGCTATTG CTTCCCGTAT
GGCTTTCATT TTCTCCTCCT
3781 TGTATAAATC CTGGTTGCTG TCTCTTTATG AGGAGTTGTG
GCCCGTTGTC AGGCAACGTG
3841 GCGTGGTGTG CACTGTGTTT GCTGACGCAA CCCCCACTGG
TTGGGGCATT GCCACCACCT
3901 GTCAGCTCCT TTCCGGGACT TTCGCTTTCC CCCTCCCTAT
TGCCACGGCG GAACTCATCG
3961 CCGCCTGCCT TGCCCGCTGC TGGACAGGGG CTCGGCTGTT
GGGCACTGAC TATTCCGTGG
4021 TGTTGTCGGG GAAATCATCG TCCTTTCCTT GGCTGCTCGC
CTGTGTTGCC ACCTGGATTC
4081 TGCGCGGGAC GTCCTTCTGC TACGTCCCTT CGGCCCTCAA
TCCAGCGGAC CTTCCTTCCC
4141 GCGGCCTGCT GCCGGCTCTG CGGCCTCTTC CGCGTCTTCG
CCTTCGCCCT CAGACGAGTC
4201 GGATCTCCCT TTGGGCCGCC TCCCCGCAAG CTTCGCACTT
TTTAAAAGAA AAGGGAGGAC
4261 TGGATGGGAT TTATTACTCC GATAGGACGC TGGCTTGTAA
CTCAGTCTCT TAGTAGGAGA
4321 CCAGCTTGAG CCTGGGTGTT CGCTGGTTAG CCTTACCTGG
TTGGCCACCA GGGGTAAGGA
4381 CTCCTTGGCT TAGAAAGCTA ATAAACTTGC CTGGATTAGA
GCTCTTACGC GTCCCGGGCT
4441 CGAGATCCGC ATCTCAATTA GTCAGCAACC ATAGTCCCGC
CCCTTACTCC GCCCATCCCG
4501 CCCCTAACTC CGCCCAGTTC CGCCCATTCT CCGCCCCATG
GCTGACT2AT TTTTTTTATT
4561 TATGCAGAGG CCGAGGCCGC CTCGGCCTCT GAGCTATTCC
AGAAGTAGTG AGGAGGCTTT
4621 TTTGGAGGCC TAGGCTTTTG CAAAAAGCTA ACTTGTTTAT
TGCAGCTTAT AATGGTTACA
4681 AATAAAGCAA TAGCATGAGA AATTTCACAA ATAAAGCATT
- 79 038966
TTTTTCACTG 4741 CATTCTAGTT
GTGGTTTGTC САЛАС T CATC AATGTATCTT ATCATGTCTG
TCCGCTTCCT CGCTCACTGA
4801 CTCGCTGCGC TCGGTCGTTC GGCTGCGGCG AGCGGTATCA
GCTCACTCAA AGGCGGTAAT
4861 ACGGTTATCC ACAGAATCAG GGGATAACGC AGGAAAGAAC
ATGTGAGCAA AAGGCCAGCA
4921 AAAGGCCAGG AACCGTAAAA AGGCCGCGTT GCTGGCGTTT
TTCCATAGGC TCCGCCCCCC
4981 TGACGAGCAT CACAAAAATC GACGCTCAAG TCAGAGGTGG
CGAAACCCGA CAGGACTATA
5041 AAGATACCAG GCGTTTCCCC CTGGAAGCTC CCTCGTGCGC
TCTCCTGTTC CGACCCTGCC
5101 GCTTACCGGA TACCTGTCCG CCTTTCTCCC TTCGGGAAGC
GTGGCGCTTT CTCATAGCTC
5161 ACGCTGTAGG TATCTCAGTT CGGTGTAGGT CGTTCGCTCC
AAGCTGGGCT GTGTGCACGA
5221 ACCCCCCGTT CAGCCCGACC GCTGCGCCTT ATCCGGTAAC
TATCGTCTTG AGTCCAACCC
5281 GGTAAGACAC GACTTATCGC CACTGGCAGC AGCCACTGGT
AACAGGATTA GCAGAGCGAG
5341 GTATGTAGGC GGTGCTACAG agttcttgaa GTGGTGGCCT
AACTACGGCT ACACTAGAAG
5401 AACAGTATTT GGTATCTGCG CTCTGCTGAA GCCAGTTACC
TTCGGAAAAA GAGTTGGTAG
5461 CTCTTGATCC GGCAAACAAA CCACCGCTGG TAGCGGTGGT
TTTTTTGTTT GCAAGCAGCA
5521 GATTACGCGC AGAAAAAAAG GATCTCAAGA AGATCCTTTG
ATCTTTTCTA CGGGGTCTGA
5581 CGCTCAGTGG AACGAAAACT CACGTTAAGG GATTTTGGTC
ATGAGATTAT CAAAAAGGAT
5641 CTTCACCTAG ЛТССТТТТЛЛ ATTAAAAATG AAGTTTTAAA
TCAATСТАЛА GT AT AT AT GA
5701 GTAAACTTGG TCTGACAGTT AGAAAAACTC ATCGAGCATC
AAATGAAACT GCAATTTATT
5761 CATATCAGGA TTATCAATAC CATATTTTTG AAAAAGCCGT
- 80 038966
TTCTGTAATG 5821 AAGGAGAAAA CTCACCGAGG CAGTTCCATA GGATGGCAAG ATCCTGGTAT
CGGTCTGCGA 5881 TTCCGACTCG TCCAACATCA ATACAACCTA TTAATTTCCC CTCGTCAAAA
ATAAGGTTAT 5941 CAAGTGAGAA ATCACCATGA GTGACGACTG AATCCGGTGA GAATGGCAAC
AGCTTATGCA 6001 TTTCTTTCCA GACTTGTTCA ACAGGCCAGC CATTACGCTC GTCATCAAAA
TCACTCGCAT 6061 CAACCAAACC GTTATTCATT CGTGATTGCG CCTGAGCGAG ACGAAATACG
CGATCGCTGT 6121 TAAAAGGACA ATTACAAACA GGAATCGAAT GCAACCGGCG CAGGAACACT
GCCAGCGCAT 6181 CAACAATATT TTCACCTGAA TCAGGATATT CTTCTAATAC CTGGAATGCT
GTTTTTCCGG 6241 GGATCGCAGT GGTGAGTAAC CATGCATCAT CAGGAGTACG GATAAAATGC
TTGATGGTCG 6301 GAAGAGGCAT AAATTCCGTC AGCCAGTTTA GTCTGACCAT CTCATCTGTA
ACATCATTGG 6361 CAACGCTACC TTTGCCATGT TTCAGAAACA ACTCTGGCGC ATCGGGCTTC
CCATACAATC 6421 GATAGATTGT CGCACCTGAT TGCCCGACAT TATCGCGAGC CCATTTATAC
CCATATAAAT 6481 CAGCATCCAT GTTGGAATTT AATCGCGGCC TAGAGCAAGA CGTTTCCCGT
TGAATATGGC 6541 TCATAACACC CCTTGTATTA CTGTTTATGT AAGCAGACAG TTTTATTGTT
CATGATGATA 6601 TATTTTTATC TTGTGCAATG TAACATCAGA GATTTTGAGA CACAACAATT
GGTCGACGGA ТСС
SEQ ID NO:11
GGTACCTCAA TATTGGCCAT TAGCCATATT ATTCATTGGT TATATAGCAT AAATCAATAT
TGGCTATTGG CCATTGCATA CGTTGTATCT ATATCATAAT ATGTACATTT ATATTGGCTC
121 ATGTCCAATA TGACCGCCAT GTTGGCATTG ATTATTGACT AGTTATTAAT AGTAATCAAT
- 81 038966
181 TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC GTTACATAAC TTACGGTAAA
241 TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC CCGCCCATTG ACGTCAATAA TGACGTATGT
301 TCCCATAGTA ACGCCAATAG GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGAGT ATTTACGGTA
361 AACTGCCCAC TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTCCGCCCC CTATTGACGT
421 CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAC GGGACTTTCC
481 TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC ATGGTGATGC GGTTTTGGCA
541 GTACACCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT
601 TGACGTCAAT GGGAGTTTGT TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA
661 CAACTGCGAT CGCCCGCCCC GTTGACGCAA ATGGGCGGTA GGCGTGTACG GTGGGAGGTC
721 TATATAAGCA GAGCTCGCTG GCTTGTAACT CAGTCTCTTA CTAGGAGACC AGCTTGAGCC
781 TGGGTGTTCG CTGGTTAGCC TAACCTGGTT GGCCACCAGG GGTAAGGACT CCTTGGCTTA
841 GAAAGCTAAT AAACTTGCCT GCATTAGAGC TTATCTGAGT CAAGTGTCCT CATTGACGCC
901 TCACTCTCTT GAACGGGAAT CTTCCTTACT GGGTTCTCTC TCTGACCCAG GCGAGAGAAA
961 CTCCAGCAGT GGCGCCCGAA CAGGGACTTG AGTGAGAGTG TAGGCACGTA CAGCTGAGAA
1021 GGCGTCGGAC GCGAAGGAAG CGCGGGGTGC GACGCGACCA
AGAAGGAGAC TTGGTGAGTA
1081 GGCTTCTCGA GTGCCGGGAA AAAGCTCGAG CCTAGTTAGA
GGAC TAGGAG AGGCCGTAGC
1141 CGTAACTACT CTGGGCAAGT AGGGCAGGCG GTGGGTACGC
AATGGGGGCG GCTACCTCAG
1201 CACTAAATAG GAGACAATTA GACCAATTTG AGAAAATACG
ACTTCGCCCG AACGGAAAGA
- 82 038966
1261 AAAAGTACCA AATTAAACAT TTAATATGGG CAGGCAAGGA
GATGGAGCGC TTCGGCCTCC
1321 ATGAGAGGTT GTTGGAGACA GAGGAGGGGT GTAAAAGAAT
CATAGAAGTC CTCTACCCCC
1381 TAGAACCAAC AGGATCGGAG GGCTTAAAAA GTCTGTTCAA
TCTTGTGTGC GTGCTATATT
1441 GCTTGCACAA GGAACAGAAA GTGAAAGACA CAGAGGAAGC
AGTAGCAACA GTAAGACAAC
1501 ACTGCCATCT AGTGGAAAAA GAAAAAAGTG CAACAGAGAC
ATCTAGTGGA CAAAAGAAAA
1561 ATGACAAGGG AATAGCAGCG CCACCTGGTG GCAGTCAGAA
TTTTCCAGCG CAACAACAAG
1621 GAAATGCCTG GGTACATGTA CCCTTGTCAC CGCGCACCTT
AAATGCGTGG GTAAAAGCAG
1681 TAGAGGAGAA AAAATTTGGA GCAGAAATAG TACCCATGTT
TCAAGCCCTA TCGAATTCCC
1741 GTTTGTGCTA GGGTTCTTAG GCTTCTTGGG GGCTGCTGGA
ACTGCAATGG GAGCAGCGGC
1801 GACAGCCCTG ACGGTCCAGT CTCAGCATTT GCTTGCTGGG
ATACTGCAGC AGCAGAAGAA
1861 TCTGCTGGCG GCTGTGGAGG CTCAACAGCA GATGTTGAAG
CTGACCATTT GGGGTGTTAA
1921 AAACCTCAAT GCCCGCGTCA CAGCCCTTGA GAAGTACCTA
GAGGATCAGG GAGGAGTAAA
1981 CTCCTGGGGG TGCGCATGGA AACAAGTATG TCATACCACA
GTGGAGTGGC CCTGGACAAA
2041 TCGGACTCCG GATTGGCAAA ATATGACTTG GTTGGAGTGG
GAAAGACAAA TAGCTGATTT
2101 GGAAAGCAAC ATTACGAGAC AATTAGTGAA GGCTAGAGAA
CAAGAGGAAA AGAATCTAGA
2161 TGCCTATCAG AAGTTAACTA GTTGGTCAGA TTTCTGGTCT
TGGTTCGATT TCTCAAAATG
2221 GCTTAACATT TTAAAAATGG GATTTTTAGT AATAGTAGGA
ATAATAGGGT TAAGATTACT
2281 TTAGACAGTA TATGGATGTA TAGTGAGGGT TAGGCAGGGA
TATGTTCCTC TATCTCCACA
- 83 038966
2341 GAT C CAT АТС CGCGGCAATT TTAAAAGAAA GGGAGGAATA
GGGGGACAGA CTTCAGCAGA
2401 GAGACTAATT AATATAATAA CAACACAATT AGAAATACAA
САТТТАСААА CCAAAATTCA
2461 AAAAATTTTA AATTTTAGAG CCGCGGAGAT CTCAATATTG
GCCATTAGCC ATATTATTCA
2521 TTGGTTATAT AGCATAAATC AATATTGGCT ATTGGCCATT
GCATACGTTG TATCTATАТС
2581 ATAATATGTA CATTTATATT GGCTCATGTC CAATATGACC
GCCATGTTGG CATTGATTAT
2641 TGACTAGTTA TTAATAGTAA TCAATTACGG GGTCATTAGT
TCATAGCCCA TATATGGAGT
2701 TCCGCGTTAC ATAACTTACG GTAAATGGCC CGCCTGGCTG
ACCGCCCAAC GACCCCCGCC
2761 CATTGACGTC AATAATGACG TATGTTCCCA TAGTAACGCC
AATAGGGACT TTCCATTGAC
2821 GTCAATGGGT GGAGTATTTA CGGTAAACTG CCCACTTGGC
AGTACATCAA GTGTATCATA
2881 TGCCAAGTCC GCCCCCTATT GACGTCAATG ACGGTAAATG
GCCCGCCTGG CATTATGCCC
2941 AGTAGATGAG CTTACGGGAC TTTCCTACTT GGCAGTACAT
CTAGGTATTA GTCATCGCTA
3001 TTACCATGGT GATGCGGTTT TGGCAGTACA CCAATGGGCG
TGGATAGCGG TTTGACTCAC
3061 GGGGATTTCC AAGTCTCCAC CCCATTGACG TCAATGGGAG
TTTGTTTTGG CACCAAAATC
3121 AACGGGACTT TCCAAAATGT CGTAATAACC CCGCCCCGTT
GACGCAAATG GGCGGTAGGC
3181 GTGTACGGTG GGAGGTCTAT ATAAGCAGAG CTCGTTTAGT
GAACCGTCAG ATCACTAGAA
3241 GCTTTATTGC GGTAGTTTAT CACAGTTAAA TTGCTAACGC
AGTCAGTGCT TCTGACACAA
3301 CAGTCTCGAA CTTAAGCTGC AGAAGTTGGT CGTGAGGCAC
TGGGCAGGCT AGCCACCAAT
3361 GCAGATTGAG CTGAGCACCT GCTTCTTCCT GTGCCTGCTG
AGGTTCTGCT TCTCTGCCAC
- 84 038966
3421 CAGGAGATAC TACCTGGGGG CTGTGGAGCT GAGCTGGGAC
TACATGCAGT CTGACCTGGG
3481 GGAGCTGCCT GTGGATGCCA GGTTCCCCCC CAGAGTGCCC
AAGAGCTTCC CCTTCAACAC
3541 CTCTGTGGTG TACAAGAAGA CCCTGTTTGT GGAGTTCACT
GACCACCTGT TCAACATTGC
3601 CAAGCCCAGG CCCCCCTGGA TGGGCCTGCT GGGCCCCACC
ATCCAGGCTG AGGTGTATGA
3661 CACTGTGGTG ATCACCCTGA AGAACATGGC CAGCCACCCT
GTGAGCCTGC ATGCTGTGGG
3721 GGTGAGCTAC TGGAAGGCCT CTGAGGGGGC T GAG TAT GAT
GACCAGACCA GCCAGAGGGA
3781 GAAGGAGGAT GACAAGGTGT TCCCTGGGGG CAGCCACACC
TATGTGTGGC AGGTGCTGAA
3841 GGAGAATGGC CCCATGGCCT CTGACCCCCT GTGCCTGACC
TACAGCTACC TGAGCCATGT
3901 GGACCTGGTG AAGGACCTGA ACTCTGGCCT GATTGGGGCC
CTGCTGGTGT GCAGGGAGGG
3961 CAGCCTGGCC AAGGAGAAGA CCCAGACCCT GCACAAGTTC
ATCCTGCTGT TTGCTGTGTT
4021 TGATGAGGGC AAGAGCTGGC ACTCTGAAAC CAAGAACAGC
CTGATGCAGG ACAGGGATGC
4081 TGCCTCTGCC AGGGCCTGGC CCAAGATGCA CACTGTGAAT
GGCTATGTGA ACAGGAGCCT
4141 GCCTGGCCTG ATTGGCTGCC ACAGGAAGTC TGTGTACTGG
CATGTGATTG GCATGGGCAC
4201 CACCCCTGAG GTGCACAGCA TCTTCCTGGA GGGCCACACC
TTCCTGGTCA GGAACCACAG
4261 GCAGGCCAGC CTGGAGATCA GCCCCATCAC CTTCCTGACT
GCCCAGACCC TGCTGATGGA
4321 CCTGGGCCAG TTCCTGCTGT TCTGCCACAT CAGCAGCCAC
CAGCATGATG GCATGGAGGC
4381 CTATGTGAAG GTGGACAGCT GCCCTGAGGA GCCCCAGCTG
AGGATGAAGA ACAATGAGGA
4441 GGCTGAGGAC TATGATGATG ACCTGACTGA CTCTGAGATG
GATGTGGTGA GGTTTGATGA
- 85 038966
4501 TGACAACAGC CCCAGCTTCA TCCAGATCAG GTCTGTGGCC
AAGAAGCACC CCAAGACCTG
4561 GGTGCACTAC ATTGCTGCTG AGGAGGAGGA CTGGGACTAT
GCCCCCCTGG TGCTGGCCCC
4621 TGATGACAGG AGCTACAAGA GCCAGTACCT GAACAATGGC
CCCCAGAGGA TTGGCAGGAA
4681 GTACAAGAAG GTCAGGTTCA TGGCCTACAC TGATGAAACC
TTCAAGACCA GGGAGGCCAT
4741 CCAGCATGAG TCTGGCATCC TGGGCCCCCT GCTGTATGGG
GAGGTGGGGG ACACCCTGCT
4801 GATCATCTTC AAGAACCAGG CCAGCAGGCC CTACAACATC
TACCCCCATG GCATCACTGA
4861 TGTGAGGCCC CTGTACAGCA GGAGGCTGCC CAAGGGGGTG
AAGCACCTGA AGGACTTCCC
4921 CATCCTGCCT GGGGAGATCT TCAAGTACAA GTGGACTGTG
ACTGTGGAGG ATGGCCCCAC
4981 CAAGTCTGAC CCCAGGTGCC TGACCAGATA CTACAGCAGC
TTTGTGAACA TGGAGAGGGA
5041 CCTGGCCTCT GGCCTGATTG GCCCCCTGCT GAT C TGC TAG
AAGGAGTCTG TGGACCAGAG
5101 GGGCAACCAG ATCATGTCTG ACAAGAGGAA TGTGATCCTG
TTCTCTGTGT TTGATGAGAA
5161 CAGGAGCTGG TACCTGACTG AGAACATCCA GAGGTTCCTG
CCCAACCCTG CTGGGGTGCA
5221 GCTGGAGGAC CCTGAGTTCC AGGCCAGCAA CATCATGCAC
AGCATCAATG GCTATGTGTT
5281 TGACAGCCTG CAGCTGTCTG TGTGCCTGCA TGAGGTGGCC
TACTGGTACA TCCTGAGCAT
5341 TGGGGCCCAG ACTGACTTCC TGTCTGTGTT CTTCTCTGGC
TACACCTTCA AGCACAAGAT
5401 GGTGTATGAG GACACCCTGA CCCTGTTCCC CTTCTCTGGG
GAGACTGTGT TCATGAGCAT
5461 GGAGAACCCT GGCCTGTGGA TTCTGGGCTG CCACAACTCT
GACTTCAGGA ACAGGGGCAT
5521 GACTGCCCTG CTGAAAGTCT CCAGCTGTGA CAAGAACACT
GGGGACTACT ATGAGGACAG
- 86 038966
5581 CTATGAGGAC ATCTCTGCCT ACCTGCTGAG CAAGAACAAT
GCCATTGAGC CCAGGAGCTT
5641 CAGCCAGAAT GCCACTAATG TGTCTAACAA CAGCAACACC
AGCAATGACA GCAATGTGTC
5701 TCCCCCAGTG CTGAAGAGGC ACCAGAGGGA GAT CAC GAG G
ACCACCCTGC AGTCTGACCA
5761 GGAGGAGATT GAG TAT GAT G ACACCATCTC TGTGGAGATG
AAGAAGGAGG ACTTTGACAT
5821 C TAG GAG GAG GACGAGAACC AGAGCCCCAG GAGCTTCCAG
AAGAAGACCA GGCACTACTT
5881 CATTGCTGCT GTGGAGAGGC TGTGGGACTA TGGCATGAGC
AGCAGCCCCC ATGTGCTGAG
5941 GAACAGGGCC CAGTCTGGCT CTGTGCCCCA GTTCAAGAAG
GTGGTGTTCC AGGAGTTCAC
6001 TGATGGCAGC TTCACCCAGC CCCTGTACAG AGGGGAGCTG
AATGAGCACC TGGGCCTGCT
6061 GGGCCCCTAC ATCAGGGCTG AGGTGGAGGA CAACATCATG
GTGACCTTCA GGAACCAGGC
6121 CAGCAGGCCC TACAGCTTCT ACAGCAGCCT GATCAGCTAT
GAGGAGGACC AGAGGCAGGG
6181 GGCTGAGCCC AGGAAGAACT TTGTGAAGCC CAATGAAACC
AAGACCTACT TCTGGAAGGT
6241 GCAGCACCAC ATGGCCCCCA CCAAGGATGA GTTTGACTGC
AAGGCCTGGG CCTACTTCTC
6301 TGATGTGGAC CTGGAGAAGG ATGTGCACTC TGGCCTGATT
GGCCCCCTGC TGGTGTGCCA
6361 CACCAACACC CTGAACCCTG CCCATGGCAG GCAGGTGACT
GTGCAGGAGT TTGCCCTGTT
6421 CTTCACCATC TTTGATGAAA CCAAGAGCTG GTACTTCACT
GAGAACATGG AGAGGAACTG
6481 CAGGGCCCCC TGCAACATCC AGATGGAGGA CCCCACCTTC
AAGGAGAACT ACAGGTTCCA
6541 TGCCATCAAT GGCTACATCA TGGACACCCT GCCTGGCCTG
GTGATGGCCC AGGACCAGAG
6601 GATCAGGTGG TACCTGCTGA GCATGGGCAG CAATGAGAAC
ATCCACAGCA TCCACTTCTC
- 87 038966
6661 TGGCCATGTG TTCACTGTGA GGAAGAAGGA GGAGTACAAG
ATGGCCCTGT ACAACCTGTA
6721 CCCTGGGGTG TTTGAGACTG TGGAGATGCT GCCCAGCAAG
GCTGGCATCT GGAGGGTGGA
6781 GTGCCTGATT GGGGAGCACC TGCATGCTGG CATGAGCACC
CTGTTCCTGG TGTACAGCAA
6841 CAAGTGCCAG ACCCCCCTGG GCATGGCCTC TGGCCACATC
AGGGACTTCC AGATCACTGC
6901 CTCTGGCCAG TATGGCCAGT GGGCCCCCAA GCTGGCCAGG
CTGCACTACT CTGGCAGCAT
6961 CAATGCCTGG AGCACCAAGG AGCCCTTCAG CTGGATCAAG
GTGGACCTGC TGGCCCCCAT
7021 GATCATCCAT GGCATCAAGA CCCAGGGGGC CAGGCAGAAG
TTCAGCAGCC TGTACATCAG
7081 CCAGTTCATC ATCATGTACA GCCTGGATGG CAAGAAGTGG
CAGACСТАСА GGGGCAACAG
7141 CACTGGCACC CTGATGGTGT TCTTTGGCAA TGTGGACAGC
TCTGGCATCA AGCACAACAT
7201 CTTCAACCCC CCCATCATTG CCAGATACAT CAGGCTGCAC
CCCACCCACT ACAGCATCAG
7261 GAGCACCCTG AGGATGGAGC TGATGGGCTG TGACCTGAAC
AGCTGCAGCA TGCCCCTGGG
7321 CATGGAGAGC AAGGCCATCT CTGATGCCCA GATCACTGCC
AGCAGCTACT TCACCAACAT
7381 GTTTGCCACC TGGAGCCCCA GCAAGGCCAG GCTGCACCTG
CAGGGCAGGA GCAATGCCTG
7441 GAGGCCCCAG GTCAACAACC CCAAGGAGTG GCTGCAGGTG
GACTTCCAGA AGACCATGAA
7501 GGTGACTGGG GTGACCACCC AGGGGGTGAA GAGCCTGCTG
ACCAGCATGT ATGTGAAGGA
7561 GTTCCTGATC AGCAGCAGCC AGGATGGCCA CCAGTGGACC
CTGTTCTTCC AGAATGGCAA
7621 GGTGAAGGTG TTCCAGGGCA ACCAGGACAG CTTCACCCCT
GTGGTGAACA GCCTGGACCC
7681 CCCCCTGCTG ACCAGATACC TGAGGATTCA CCCCCAGAGC
TGGGTGCACC AGATTGCCCT
- 88 038966
7741 GAGGATGGAG GTGCTGGGCT GTGAGGCCCA GGACCTGTAC
TGAGCGGCCG CGGGCCCAAT
7801 CAACCTCTGG ATTACAAAAT TTGTGAAAGA TTGACTGGTA
ТТСТТААСТА TGTTGCTCCT
7861 TTTACGCTAT GTGGATACGC TGCTTTAATG CCTTTGTATC
ATGCTATTGC TTCCCGTATG
7921 GCTTTCATTT TCTCCTCCTT GTATAAATCC TGGTTGCTGT
CTCTTTATGA GGAGTTGTGG
7981 CCCGTTGTCA GGCAACGTGG CGTGGTGTGC ACTGTGTTTG
CTGACGCAAC CCCCACTGGT
8041 TGGGGCATTG CCACCACCTG TCAGCTCCTT TCCGGGACTT
TCGCTTTCCC CCTCCCTATT
8101 GCCACGGCGG AACTCATCGC CGCCTGCCTT GCCCGCTGCT
GGACAGGGGC TCGGCTGTTG
8161 GGCACTGACA ATTCCGTGGT GTTGTCGGGG AAATCATCGT
CCTTTCCTTG GCTGCTCGCC
8221 TGTGTTGCCA CCTGGATTCT GCGCGGGACG TCCTTCTGCT
ACGTCCCTTC GGCCCTCAAT
8281 CCAGCGGACC TTCCTTCCCG CGGCCTGCTG CCGGCTCTGC
GGCCTCTTCC GCGTCTTCGC
8341 CTTCGCCCTC AGACGAGTCG GATCTCCCTT TGGGCCGCCT
CCCCGCAAGC TTCGCACTTT
8401 TTAAAAGAAA AGGGAGGACT GGATGGGATT TATTACTCCG
ATAGGACGCT GGCTTGTAAC
8461 TCAGTCTCTT ACTAGGAGAC CAGCTTGAGC CTGGGTGTTC
GCTGGTTAGC CTAACCTGGT
8521 TGGCCACCAG GGGTAAGGAC TCCTTGGCTT AGAAAGCTAA
TAAACTTGCC TGCATTAGAG
8581 CTCTTACGCG TCCCGGGCTC GAGATCCGCA TCTCAATTAG
TCAGCAACCA TAGTCCCGCC
8641 CCTAACTCCG CCCATCCCGC CCCTAACTCC GCCCAGTTCC
GCCCATTCTC CGCCCCATGG
8701 CTGACTAATT TTTTTTATTT ATGCAGAGGC CGAGGCCGCC
TCGGCCTCTG AGCTATTCCA
8761 GAAGTAGTGA GGAGGCTTTT TTGGAGGCCT AGGCTTTTGC
AAAAAGCTAA CTTGTTTATT
- 89 038966
8821 GCAGCTTATA ATGGTTACAA ATAAAGCAAT AGCATCACAA
АТТТСАСААА TAAAGCATTT
8881 TTTTCACTGC ATTCTAGTTG TGGTTTGTCC AAACTCATCA
ATGTATCTTA TCATGTCTGT
8941 CCGCTTCCTC GCTCACTGAC TCGCTGCGCT CGGTCGTTCG
GCTGCGGCGA GCGGTATCAG
9001 CTCACTCAAA GGCGGTAATA CGGTTATCCA CAGAATCAGG
GGATAACGCA GGAAAGAACA
9061 TGTGAGCAAA AGGCCAGCAA AAGGCCAGGA ACCGTAAAAA
GGCCGCGTTG CTGGCGTTTT
9121 TCCATAGGCT CCGCCCCCCT GACGAGCATC ACAAAAATCG
ACGCTCAAGT CAGAGGTGGC
9181 GAAACCCGAC AGGACTATAA AGATACCAGG CGTTTCCCCC
TGGAAGCTCC CTCGTGCGCT
9241 CTCCTGTTCC GACCCTGCCG CTTACCGGAT ACCTGTCCGC
CTTTCTCCCT TCGGGAAGCG
9301 TGGCGCTTTC TCATAGCTCA CGCTGTAGGT ATCTCAGTTC
GGTGTAGGTC GTTCGCTCCA
9361 AGCTGGGCTG TGTGCACGAA CCCCCCGTTC AGCCCGACCG
CTGCGCCTTA TCCGGTAACT
9421 ATCGTCTTGA GTCCAACCCG GTAAGACACG ACTTATCGCC
ACTGGCAGCA GCCACTGGTA
9481 ACAGGATTAG CAGAGCGAGG TATGTAGGCG GTGCTACAGA
GTTCTTGAAG TGGTGGCCTA
9541 ACTACGGCTA CACTAGAAGA ACAGTATTTG GTATCTGCGC
TCTGCTGAAG CCAGTTACCT
9601 TCGGAAAAAG AGTTGGTAGC TCTTGATCCG GCAAACAAAC
CACCGCTGGT AGCGGTGGTT
9661 TTTTTGTTTG CAAGCAGCAG ATTACGCGCA GAAAAAAAGG
ATCTCAAGAA GATCCTTTGA
9721 TCTTTTCTAC GGGGTCTGAC GCTCAGTGGA ACGAAAACTC
ACGTTAAGGG ATTTTGGTCA
9781 TGAGATTATC AAAAAGGATC TTCACCTAGA TCCTTTTAAA
TTAAAAATGA AGTTTTAAAT
9841 CAATCTAAAG TAT AT AT GAG TAAACTTGGT CTGACAGTTA
GAAAAACTCA TCGAGCATCA
- 90 038966
9901 AATGAAACTG CAATTTATTC ATATCAGGAT ТАТСААТАСС
ATATTTTTGA AAAAGCCGTT 9961 TCTGTAATGA AGGAGAAAAC TCACCGAGGC AGTTCCATAG
GATGGCAAGA TCCTGGTATC 10021 GGTCTGCGAT TCCGACTCGT CCAACATCAA TACAACCTAT
TAATTTCCCC TCGTCAAAAA 10081 TAAGGTTATC AAGTGAGAAA TCACCATGAG TGACGACTGA
ATCCGGTGAG AATGGCAACA 10141 GCTTATGCAT TTCTTTCCAG ACTTGTTCAA CAGGCCAGCC
ATTACGCTCG TCATCAAAAT 10201 CACTCGCATC AACCAAACCG TTATTCATTC GTGATTGCGC
CTGAGCGAGA CGAAATACGC 10261 GATCGCTGTT AAAAGGACAA TTACAAACAG GAATCGAATG
CAACCGGCGC AGGAACACTG 10321 CCAGCGCATC AACAATATTT TCACCTGAAT CAGGATATTC
TTCTAATACC TGGAATGCTG 10381 TTTTTCCGGG GATCGCAGTG GTGAGTAACC ATGCATCATC
AGGAGTACGG ATAAAATGCT 10441 TGATGGTCGG AAGAGGCATA AATTCCGTCA GCCAGTTTAG
TCTGACCATC TCATCTGTAA 10501 CATCATTGGC AACGCTACCT TTGCCATGTT TCAGAAACAA
CTCTGGCGCA TCGGGCTTCC 10561 CATACAATCG ATAGATTGTC GCACCTGATT GCCCGACATT
ATCGCGAGCC CATTTATACC 10621 CATATAAATC AGCATCCATG TTGGAATTTA ATCGCGGCCT
AGAGCAAGAC GTTTCCCGTT 10681 GAATATGGCT CATAACACCC CTTGTATTAC TGTTTATGTA
AGCAGACAGT TTTATTGTTC 10741 ATGATGATAT ATTTTTATCT TGTGCAATGT AACATCAGAG
ATTTTGAGAC ACAACAATTG 10801 GTCGACGGAT CC SEQ ID NO :12 1 GGTACCTCAA TATTGGCCAT TAGCCATATT ATTCATTGGT TATATAGCAT AAATCAATAT
TGGCTATTGG CCATTGCATA CGTTGTATCT ATATCATAAT ATGTACATTT ATATTGGCTC
- 91 038966
121 ATGTCCAATA TGACCGCCAT
AGTAATCAAT
181 TACGGGGTCA TTAGTTCATA
TTACGGTAAA
241 TGGCCCGCCT GGCTGACCGC
TGACGTATGT
301 TCCCATAGTA ACGCCAATAG
ATTTACGGTA
361 TACTGCCCAC TTGGCAGTAC
CTATTGACGT
421 CAATGACGGT AAATGGCCCG
GGGACTTTCC
481 TACTTGGCAG TACATCTACG
GGTTTTGGCA
541 GTACACCAAT GGGCGTGGAT
TCCACCCCAT
601 TGACGTCAAT GGGAGTTTGT
AATGTCGTAA
661 CAACTGCGAT CGCCCGCCCC
GTGGGAGGTC
721 TATATAAGCA GAGCTCGCTG
AGCTTGAGCC
781 TGGGTGTTCG CTGGTTAGCC
CCTTGGCTTA
841 GAAAGCTAAT AAACTTGCCT
CATTGACGCC
901 TCACTCTCTT G7A.CGGG7A.T
GCGAGAGAAA
961 CTCCAGCAGT GGCGCCCGAA
GTTGGCATTG ATTATTGACT AGTTATT2AT
GCCCATATAT GGAGTTCCGC GTTACAT2AC CCAACGACCC CCGCCCATTG ACGTCAATAA GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGAGT ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTCCGCCCC CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAC TATTAGTCAT CGCTATTACC ATGGTGATGC AGCGGTTTGA CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA GTTGACGCAA ATGGGCGGTA GGCGTGTACG GCTTGT2ACT CAGTCTCTTA CTAGGAGACC T2ACCTGGTT GGCCACCAGG GGTAAGGACT GCATTAGAGC TTATCTGAGT CAAGTGTCCT CTTCCTTACT GGGTTCTCTC TCTGACCCAG CAGGGACTTG AGTGAGAGTG TAGGCACGTA
CAGCTGAGAA
1021 GGCGTCGGAC GCGAAGGAAG CGCGGGGTGC GACGCGACCA
AGAAGGAGAC TTGGTGAGTA
1081 GGCTTCTCGA GTGCCGGGAA AAAGCTCGAG CCTAGTTAGA
GGAC TAGGAG AGGCCGTAGC
1141 CGTAACTACT CTGGGCAAGT AGGGCAGGCG GTGGGTACGC
AATGGGGGCG GCTACCTCAG
- 92 038966
1201 CACTAAATAG GAGACAATTA GACCAATTTG AGAAAATACG
ACTTCGCCCG AACGGAAAGA
1261 AAAAGTACCA AATTAAACAT TTAATATGGG CAGGCAAGGA
GATGGAGCGC TTCGGCCTCC
1321 ATGAGAGGTT GTTGGAGACA GAGGAGGGGT GTAAAAGAAT
CATAGAAGTC CTCTACCCCC
1381 TAGAACCAAC AGGATCGGAG GGCTTAAAAA GTCTGTTCAA
TCTTGTGTGC GTGCTATATT
1441 GCTTGCACAA GGAACAGAAA GTGAAAGACA CAGAGGAAGC
AGTAGCAACA GTAAGACAAC
1501 ACTGCCATCT AGTGGAAAAA GAAAAAAGTG CAACAGAGAC
ATCTAGTGGA CAAAAGAAAA
1561 ATGACAAGGG AATAGCAGCG CCACCTGGTG GCAGTCAGAA
TTTTCCAGCG CAACAACAAG
1621 GAAATGCCTG GGTACATGTA CCCTTGTCAC CGCGCACCTT
AAATGCGTGG GTAAAAGCAG
1681 TAGAGGAGAA AAAATTTGGA GCAGAAATAG TACCCATGTT
TCAAGCCCTA TCGAATTCCC
1741 GTTTGTGCTA GGGTTCTTAG GCTTCTTGGG GGCTGCTGGA
ACTGCAATGG GAGCAGCGGC
1801 GACAGCCCTG ACGGTCCAGT CTCAGCATTT GCTTGCTGGG
ATACTGCAGC AGCAGAAGAA
1861 TCTGCTGGCG GCTGTGGAGG CTCAACAGCA GATGTTGAAG
CTGACCATTT GGGGTGTTAA
1921 AAACCTCAAT GCCCGCGTCA CAGCCCTTGA GAAGTACCTA
GAGGATCAGG CACGACTAAA
1981 CTCCTGGGGG TGCGCATGGA AACAAGTATG TCATACCACA
GTGGAGTGGC CCTGGACAAA
2041 TCGGACTCCG GATTGGCAAA ATATGACTTG GTTGGAGTGG
GAAAGACAAA TAGCTGATTT
2101 GGAAAGCAAC ATTACGAGAC AATTAGTGAA GGCTAGAGAA
CAAGAGGAAA AGAATCTAGA
2161 TGCCTATCAG AAGTTAACTA GTTGGTCAGA TTTCTGGTCT
TGGTTCGATT TCTCAAAATG
2221 GCTTAACATT TTAAAAATGG GATTTTTAGT AATAGTAGGA
ATAATAGGGT TAAGATTACT
- 93 038966
2281 TTAGACAGTA TATGGATGTA TAGTGAGGGT TAGGCAGGGA
TATGTTCCTC TATCTCCACA
2341 GAT C CAT АТС CGCGGCAATT TTAAAAGAAA GGGAGGAATA
GGGGGACAGA CTTCAGCAGA
2401 GAGACTAATT AATATAATAA CAACACAATT AGAAATACAA
CATTTACAAA CCAAAATTCA
2461 AAAAATTTTA AATTTTAGAG CCGCGGAGAT CTGTTACATA
ACTTATGGTA AATGGCCTGC
2521 CTGGCTGACT GCCCAATGAC CCCTGCCCAA TGATGTCAAT
AATGATGTAT GTTCCCATGT
2581 AATGCCAATA GGGACTTTCC ATTGATGTCA ATGGGTGGAG
TATTTATGGT AACTGCCCAC
2641 TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTATGCCCC
CTATTGATGT CAATGATGGT
2701 AAATGGCCTG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAT
GGGACTTTCC TACTTGGCAG
2761 TACATCTATG TAT TAG T CAT TGCTATTACC ATGGGAATTC
ACTAGTGGAG AAGAGCATGC
2821 TTGAGGGCTG AGTGCCCCTC AGTGGGCAGA GAGCACATGG
CCCACAGTCC CTGAGAAGTT
2881 GGGGGGAGGG GTGGGCAATT GAACTGGTGC CTAGAGAAGG
TGGGGCTTGG GTAAACTGGG
2941 AAAGTGATGT GGTGTACTGG CTCCACCTTT TTCCCCAGGG
TGGGGGAGAA CCATATATAA
3001 GTGCAGTAGT CTCTGTGAAC ATTCAAGCTT CTGCCTTCTC
CCTCCTGTGA GTTTGCTAGC
3061 CACCAATGCA GATTGAGCTG AGCACCTGCT TCTTCCTGTG
CCTGCTGAGG TTCTGCTTCT
3121 CTGCCACCAG GAGATACTAC CTGGGGGCTG TGGAGCTGAG
CTGGGACTAC ATGCAGTCTG
3181 ACCTGGGGGA GCTGCCTGTG GATGCCAGGT TCCCCCCCAG
AGTGCCCAAG AGCTTCCCCT
3241 TCAACACCTC TGTGGTGTAC AAGAAGACCC TGTTTGTGGA
GTTCACTGAC CACCTGTTCA
3301 ACATTGCCAA GCCCAGGCCC CCCTGGATGG GCCTGCTGGG
CCCCACCATC CAGGCTGAGG
- 94 038966
3361 TGTATGACAC TGTGGTGATC ACCCTGAAGA ACATGGCCAG
CCACCCTGTG AGCCTGCATG
3421 CTGTGGGGGT GAGCTACTGG AAGGCCTCTG AGGGGGCTGA
G TAT GAT GAG CAGACCAGCC
3481 AGAGGGAGAA GGAGGATGAC AAGGTGTTCC CTGGGGGCAG
CCACACCTAT GTGTGGCAGG
3541 TGCTGAAGGA GAATGGCCCC ATGGCCTCTG ACCCCCTGTG
GGTGAGCTAC AGCTACCTGA
3601 GCCATGTGGA CCTGGTGAAG GACCTGAACT CTGGCCTGAT
TGGGGCCCTG CTGGTGTGCA
3661 GGGAGGGCAG CCTGGCCAAG GAGAAGACCC AGACCCTGCA
CAAGTTCATC CTGCTGTTTG
3721 CTGTGTTTGA TGAGGGCAAG AGCTGGCACT CTGAAACCAA
GAACAGCCTG ATGCAGGACA
3781 GGGATGCTGC CTCTGCCAGG GCCTGGCCCA AGATGCACAC
TGTGAATGGC TATGTGAACA
3841 GGAGCCTGCC TGGCCTGATT GGCTGCCACA GGAAGTCTGT
GTACTGGCAT GTGATTGGCA
3901 TGGGCACCAC CCCTGAGGTG CACAGCATCT TCCTGGAGGG
CCACACCTTC CTGGTCAGGA
3961 ACCACAGGCA GGCCAGCCTG GAGATCAGCC CCATCACCTT
CCTGACTGCC CAGACCCTGC
4021 TGATGGACCT GGGCCAGTTC CTGCTGTTCT GCCACATCAG
CAGCCACCAG CATGATGGCA
4081 TGGAGGCCTA TGTGAAGGTG GACAGCTGCC CTGAGGAGCC
CCAGCTGAGG ATGAAGAACA
4141 ATGAGGAGGC TGAGGACTAT GATGATGACC TGACTGACTC
TGAGATGGAT GTGGTGAGGT
4201 TTGATGATGA CAACAGCCCC AGCTTCATCC AGATCAGGTC
TGTGGCCAAG AAGCACCCCA
4261 AGACCTGGGT GCACTACATT GCTGCTGAGG AGGAGGACTG
GGACTATGCC CCCCTGGTGC
4321 TGGCCCCTGA TGACAGGAGC TACAAGAGCC AGTACCTGAA
CAATGGCCCC CAGAGGATTG
4381 GCAGGAAGTA CAAGAAGGTC AGGTTCATGG CCTACACTGA
TGAAACCTTC AAGACCAGGG
- 95 038966
4441 AGGCCATCCA GCATGAGTCT GGCATCCTGG GCCCCCTGCT
GTATGGGGAG GTGGGGGACA
4501 CCCTGCTGAT CATCTTCAAG AACCAGGCCA GCAGGCCCTA
СААСАТСТАС CCCCATGGCA
4561 TCACTGATGT GAGGCCCCTG TACAGCAGGA GGCTGCCCAA
GGGGGTGAAG CACCTGAAGG
4621 ACTTCCCCAT CCTGCCTGGG GAGATCTTCA AGTACAAGTG
GACTGTGACT GTGGAGGATG
4681 GCCCCACCAA GTCTGACCCC AGGTGCCTGA CCAGATACTA
CAGCAGCTTT GTGAACATGG
4741 AGAGGGACCT GGCCTCTGGC CTGATTGGCC CCCTGCTGAT
CTGCTACAAG GAGTCTGTGG
4801 ACCAGAGGGG CAACCAGATC ATGTCTGACA AGAGGAATGT
GATCCTGTTC TCTGTGTTTG
4861 ATGAGAACAG GAGCTGGTAC CTGACTGAGA ACATCCAGAG
GTTCCTGCCC AACCCTGCTG
4921 GGGTGCAGCT GGAGGACCCT GAGTTCCAGG CCAGCAACAT
CATGCACAGC ATCAATGGCT
4981 ATGTGTTTGA CAGCCTGCAG CTGTCTGTGT GCCTGCATGA
GGTGGCCTAC TGGTACATCC
5041 TGAGCATTGG GGCCCAGACT GACTTCCTGT CTGTGTTCTT
CTCTGGCTAC ACCTTCAAGC
5101 ACAAGATGGT GTATGAGGAC ACCCTGACCC TGTTCCCCTT
CTCTGGGGAG ACTGTGTTCA
5161 TGAGCATGGA GAACCCTGGC CTGTGGATTC TGGGCTGCCA
CAACTCTGAC TTCAGGAACA
5221 GGGGCATGAC TGCCCTGCTG AAAGTCTCCA GCTGTGACAA
GAACACTGGG GACTACTATG
5281 AGGACAGCTA TGAGGACATC TCTGCCTACC TGCTGAGCAA
GAACAATGCC ATTGAGCCCA
5341 GGAGCTTCAG CCAGAATGCC ACTAATGTGT CTAACAACAG
CAACACCAGC AATGACAGCA
5401 ATGTGTCTCC CCCAGTGCTG AAGAGGCACC AGAGGGAGAT
CACCAGGACC ACCCTGCAGT
5461 CTGACCAGGA GGAGATTGAC TATGATGACA CCATCTCTGT
GGAGATGAAG AAGGAGGACT
- 96 038966
5521 TTGACATCTA CGACGAGGAC GAGAACCAGA GCCCCAGGAG
CTTCCAGAAG AAGACCAGGC
5581 ACТАСTTCAT TGCTGCTGTG GAGAGGCTGT GGGACTATGG
CATGAGCAGC AGCCCCCATG
5641 TGCTGAGGAA CAGGGCCCAG TCTGGCTCTG TGCCCCAGTT
CAAGAAGGTG GTGTTCCAGG
5701 AGTTCACTGA TGGCAGCTTC ACCCAGCCCC TGTACAGAGG
GGAGCTGAAT GAGCACCTGG
5761 GCCTGCTGGG CCCCTACATC AGGGCTGAGG TGGAGGACAA
CATCATGGTG ACCTTCAGGA
5821 ACCAGGCCAG CAGGCCCTAC AGCTTCTACA GCAGCCTGAT
CAGCTATGAG GAGGACCAGA
5881 GGCAGGGGGC TGAGCCCAGG AAGAACTTTG TGAAGCCCAA
TGAAACCAAG ACCTACTTCT
5941 GGAAGGTGCA GCACCACATG GCCCCCACCA AGGATGAGTT
TGACTGCAAG GCCTGGGCCT
6001 ACTTCTCTGA TGTGGACCTG GAGAAGGATG TGCACTCTGG
CCTGATTGGC CCCCTGCTGG
6061 TGTGCCACAC CAACACCCTG AACCCTGCCC ATGGCAGGCA
GGTGACTGTG CAGGAGTTTG
6121 CCCTGTTCTT CACCATCTTT GATGAAACCA AGAGCTGGTA
CTTCACTGAG AACATGGAGA
6181 GGAACTGCAG GGCCCCCTGC AACATGGAGA TGGAGGACCC
CACCTTCAAG GAGAACTACA
6241 GGTTCCATGC CATCAATGGC TACATCATGG ACACCCTGCC
TGGCCTGGTG ATGGCCCAGG
6301 ACCAGAGGAT CAGGTGGTAC CTGCTGAGCA TGGGCAGCAA
TGAGAACATC CACAGCATCC
6361 ACTTCTCTGG CCATGTGTTC ACTGTGAGGA AGAAGGAGGA
GTACAAGATG GCCCTGTACA
6421 ACCTGTACCC TGGGGTGTTT GAGACTGTGG AGATGCTGCC
CAGCAAGGCT GGCATCTGGA
6481 GGGTGGAGTG CCTGATTGGG GAGCACCTGG ATGCTGGCAT
GAGCACCCTG TTCCTGGTGT
6541 ACAGCAACAA GTGCCAGACC CCCCTGGGCA TGGCCTCTGG
CCACATCAGG GACTTCCAGA
- 97 038966
6601 TCACTGCCTC TGGCCAGTAT GGCCAGTGGG CCCCCAAGCT
GGCCAGGCTG CACTACTCTG
6661 GCAGCATCAA TGCCTGGAGC ACCAAGGAGC CCTTCAGCTG
GATCAAGGTG GACCTGCTGG
6721 CCCCCATGAT CATCCATGGC ATCAAGACCC AGGGGGCCAG
GCAGAAGTTC AGCAGCCTGT
6781 ACATCAGCCA GTTCATCATC ATGTACAGCC TGGATGGCAA
GAAGTGGCAG ACCTACAGGG
6841 GCAACAGCAC TGGCACCCTG ATGGTGTTCT TTGGCAATGT
GGACAGCTCT GGCATCAAGC
6901 ACAACATCTT CAACCCCCCC ATCATTGCCA GATACATCAG
GCTGCACCCC ACCCACTACA
6961 GCATCAGGAG CACCCTGAGG ATGGAGCTGA TGGGCTGTGA
CCTGAACAGC TGCAGCATGC
7021 CCCTGGGCAT GGAGAGCAAG GCCATCTCTG ATGCCCAGAT
CACTGCCAGC AGCTACTTCA
7081 CCAACATGTT TGCCACCTGG AGCCCCAGCA AGGCCAGGCT
GCACCTGCAG GGCAGGAGCA
7141 ATGCCTGGAG GCCCCAGGTC AACAACCCCA AGGAGTGGCT
GCAGGTGGAC TTCCAGAAGA
7201 CCATGAAGGT GACTGGGGTG ACCACCCAGG GGGTGAAGAG
CCTGCTGACC AGCATGTATG
7261 TGAAGGAGTT CCTGATCAGC AGCAGCCAGG ATGGCCACCA
GTGGACCCTG TTCTTCCAGA
7321 ATGGCAAGGT GAAGGTGTTC CAGGGCAACC AGGACAGCTT
CACCCCTGTG GTGAACAGCC
7381 TGGACCCCCC CCTGCTGACC AGATACCTGA GGATTCACCC
CCAGAGCTGG GTGCACCAGA
7441 TTGCCCTGAG GATGGAGGTG CTGGGCTGTG AGGCCCAGGA
CCTGTACTGA GCGGCCGCGG
7501 GCCCAATCAA CCTCTGGATT ACAAAATTTG TGAAAGATTG
ACTGGTATTC TTAACTATGT
7561 TGCTCCTTTT ACGCTATGTG GATACGCTGC TTTAATGCCT
TTGTATCATG CTATTGCTTC
7621 CCGTATGGCT TTCATTTTCT CCTCCTTGTA TAAATCCTGG
TTGCTGTCTC TTTATGAGGA
- 98 038966
7681 GTTGTGGCCC GTTGTCAGGC AACGTGGCGT GGTGTGCACT
GTGTTTGCTG ACGCAACCCC
7741 CACTGGTTGG GGCATTGCCA CCACCTGTCA GCTCCTTTCC
GGGACTTTCG CTTTCCCCCT
7801 CCCTATTGCC ACGGCGGAAC TCATCGCCGC CTGCCTTGCC
CGCTGCTGGA CAGGGGCTCG
7861 GCTGTTGGGC ACTGACAATT CCGTGGTGTT GTCGGGGAAA
TCATCGTCCT TTCCTTGGCT
7921 GCTCGCCTGT GTTGCCACCT GGATTCTGCG CGGGACGTCC
TTCTGCTACG TCCCTTCGGC
7981 CCTCAATCCA GCGGACCTTC CTTCCCGCGG CCTGCTGCCG
GCTCTGCGGC CTCTTCCGCG
8041 TCTTCGCCTT CGCCCTCAGA CGAGTCGGAT CTCCCTTTGG
GCCGCCTCCC CGCAAGCTTC
8101 GCACTTTTTA AAAGAAAAGG GAGGACTGGA TGGGATTTAT
TACTCCGATA GGACGCTGGC
8161 TTGTAACTCA GTCTCTTACT AGGAGACCAG CTTGAGCCTG
GGTGTTCGCT GGTTAGCCTA
8221 ACCTGGTTGG CCACCAGGGG TAAGGACTCC TTGGCTTAGA
AAGCTAATAA ACTTGCCTGC
8281 ATTAGAGCTC TTACGCGTCC CGGGCTCGAG ATCCGCATCT
CAATTAGTCA GCAACCATAG
8341 TCCCGCCCCT AACTCCGCCC ATCCCGCCCC TAACTCCGCC
CAGTTCCGCC CATTCTCCGC
8401 CCCATGGCTG ACTAATTTTT TTTATTTATG CAGAGGCCGA
GGCCGCCTCG GCCTCTGAGC
8461 TATTCCAGAA GTAGTGAGGA GGCTTTTTTG GAGGCCTAGG
CTTTTGCAAA AAGCTAACTT
8521 GTTTATTGCA GCTTATAATG GTTACAAATA AAGCAATAGC
ATCACAAATT TCACAAATAA
8581 AGCATTTTTT TCACTGCATT CTAGTTGTGG TTTGTCCAAA
CTCATCAATG TATCTTATCA
8641 TGTCTGTCCG CTTCCTCGCT CACTGACTCG CTGCGCTCGG
TCGTTCGGCT GCGGCGAGCG
8701 GTATCAGCTC ACTCAAAGGC GGTAATACGG TTATCCACAG
AATCAGGGGA TAACGCAGGA
- 99 038966
8761 AAGAACATGT GAGCAAAAGG CCAGCAAAAG GCCAGGAACC
GTAAAAAGGC CGCGTTGCTG
8821 GCGTTTTTCC ATAGGCTCCG CCCCCCTGAC GAGCAT GAGA
AAAATCGACG CTCAAGTCAG
8881 AGGTGGCGAA ACCCGACAGG ACTATAAAGA TACCAGGCGT
TTCCCCCTGG AAGCTCCCTC
8941 GTGCGCTCTC CTGTTCCGAC CCTGCCGCTT ACCGGATACC
TGTCCGCCTT TCTCCCTTCG
9001 GGAAGCGTGG CGCTTTCTCA TAGCTCACGC TGTAGGTATC
TCAGTTCGGT GTAGGTCGTT
9061 CGCTCCAAGC TGGGCTGTGT GCACGAACCC CCCGTTCAGC
CCGACCGCTG CGCCTTATCC
9121 GGTAACTATC GTCTTGAGTC CAACCCGGTA AGACACGACT
TATCGCCACT GGCAGCAGCC
9181 ACTGGTAACA GGATTAGCAG AGCGAGGTAT GTAGGCGGTG
CTACAGAGTT CTTGAAGTGG
9241 TGGCCTAACT ACGGCTACAC TAGAAGAACA GTATTTGGTA
TCTGCGCTCT GCTGAAGCCA
9301 GTTACCTTCG GAAAAAGAGT TGGTAGCTCT TGATCCGGCA
AACAAACCAC CGCTGGTAGC
9361 GGTGGTTTTT TTGTTTGCAA GCAGCAGATT ACGCGCAGAA
AAAAAGGATC TCAAGAAGAT
9421 CCTTTGATCT TTTCTACGGG GTCTGACGCT CAGTGGAACG
AAAACTCACG TTAAGGGATT
9481 TTGGTCATGA GATTATCAAA AAGGATCTTC ACCTAGATCC
TTTTAAATTA AAAATGAAGT
9541 TTTAAATCAA TCTAAAGTAT ATATGAGTAA ACTTGGTCTG
ACAGTTAGAA AAACTCATCG
9601 AGCATCAAAT GAAACTGCAA TTTATTCATA TCAGGATTAT
CAATACCATA TTTTTGAAAA
9661 AGCCGTTTCT GTAATGAAGG AGAAAACTCA CCGAGGCAGT
TCCATAGGAT GGCAAGATCC
9721 TGGTATCGGT CTGCGATTCC GACTCGTCCA ACATCAATAC
AACCTATTAA TTTCCCCTCG
9781 TCAAAAATAA GGTTATCAAG TGAGAAATCA CCATGAGTGA
CGACTGAATC CGGTGAGAAT
- 100 038966
9841 GGCAACAGCT TATGCATTTC TTTCCAGACT TGTTCAACAG
GCCAGCCATT ACGCTCGTCA
9901 TCAAAATCAC TCGCATCAAC CAAACCGTTA TTCATTCGTG
ATTGCGCCTG AGCGAGACGA
9961 AATACGCGAT CGCTGTTAAA AGGACAATTA CAAACAGGAA
TCGAATGCAA CCGGCGCAGG
10021 AACACTGCCA GCGCATCAAC AATATTTTCA CCTGAATCAG
GATATTCTTC TAATACCTGG
10081 AATGCTGTTT TTCCGGGGAT CGCAGTGGTG AGTAACCATG
CATCATCAGG AGTACGGATA
10141 AAATGCTTGA TGGTCGGAAG AGGCATAAAT TCCGTCAGCC
AGTTTAGTCT GACCATCTCA
10201 TCTGTAACAT CATTGGCAAC GCTACCTTTG CCATGTTTCA
GAAACAACTC TGGCGCATCG
10261 GGCTTCCCAT ACAATOGATA GATTGTCGCA CCTGATTGCC
CGACATTATC GCGAGCCCAT
10321 TTATACCCAT ATAAATCAGC ATCCATGTTG GAATTTAATC
GCGGCCTAGA GCAAGACGTT
10381 TCCCGTTGAA TATGGCTCAT AACACCCCTT GTATTACTGT
TTATGTAAGC AGACAGTTTT
10441 ATTGTTCATG AT GAT AT ATT TTTATCTTGT GCAATGTAAC
ATCAGAGATT TTGAGACACA
10501 ACAATTGGTC GACGGATCC
SEQ ID NO:13
GGTACCTCAA TATTGGCCAT TAGCCATATT ATTCATTGGT TATATAGCAT AAATCAATAT
TGGCTATTGG CCATTGCATA CGTTGTATCT ATATCATAAT ATGTACATTT ATATTGGCTC
121 ATGTCCAATA TGACCGCCAT GTTGGCATTG ATTATTGACT AGTTATTAAT AGTAATCAAT
181 TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC GTTACATAAC TTACGGTAAA
241 TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC CCGCCCATTG ACGTCAATAA TGACGTATGT
301 TCCCATAGTA ACGCCAATAG GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGAGT ATTTACGGTA
- 101 038966
361 AACTGCCCAC TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTCCGCCCC CTATTGACGT
421 CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAC GGGACTTTCC
481 TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC ATGGTGATGC GGTTTTGGCA
541 GTACACCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT
601 TGACGTCAAT GGGAGTTTGT TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA
661 CAACTGCGAT CGCCCGCCCC GTTGACGCAA ATGGGCGGTA GGCGTGTACG GTGGGAGGTC
721 TATATAAGCA GAGCTCGCTG GCTTGTAACT CAGTCTCTTA CTAGGAGACC AGCTTGAGCC
781 TGGGTGTTCG CTGGTTAGCC TAACCTGGTT GGCCACCAGG GGTAAGGACT CCTTGGCTTA
841 GAAAGCTAAT AAACTTGCCT GCATTAGAGC TTATCTGAGT CAAGTGTCCT CATTGACGCC
901 TCACTCTCTT GAACGGGAAT CTTCCTTACT GGGTTCTCTC TCTGACCCAG GCGAGAGAAA
961 CTCCAGCAGT GGCGCCCGAA CAGGGACTTG AGTGAGAGTG TAGGCACGTA CAGCTGAGAA
1021 GGCGTCGGAC GCGAAGGAAG CGCGGGGTGC GACGCGACCA
AGAAGGAGAC TTGGTGAGTA
1081 GGCTTCTCGA GTGCCGGGAA AAAGCTCGAG CCTAGTTAGA
GGACTAGGAG AGGCCGTAGC
1141 CGTAACTACT CTGGGCAAGT AGGGCAGGCG GTGGGTACGC
AATGGGGGCG GCTACCTCAG
1201 CACTAAATAG GAGACAATTA GACCAATTTG AGAAAATACG
ACTTCGCCCG AACGGAAAGA
1261 AAAAGTACCA AATTAAACAT TTAATATGGG CAGGCAAGGA
GATGGAGCGC TTCGGCCTCC
1321 ATGAGAGGTT GTTGGAGACA GAGGAGGGGT GTAAAAGAAT
CATAGAAGTC CTCTACCCCC
1381 TAGAACCAAC AGGATCGGAG GGCTTAAAAA GTCTGTTCAA
TCTTGTGTGC GTGCTATATT
- 102 038966
1441 GCTTGCACAA GGAACAGAAA GTGAAAGACA CAGAGGAAGC
AGTAGCAACA GTAAGACAAC
1501 ACTGCCATCT AGTGGAAAAA GAAAAAAGTG CAACAGAGAC
ATCTAGTGGA CAAAAGAAAA
1561 ATGACAAGGG AATAGCAGCG CCACCTGGTG GCAGTCAGAA
TTTTCCAGCG CAACAACAAG
1621 GAAATGCCTG GGTACATGTA CCCTTGTCAC CGCGCACCTT
AAATGCGTGG GTAAAAGCAG
1681 TAGAGGAGAA AAAATTTGGA GCAGAAATAG TACCCATGTT
TCAAGCCCTA TCGAATTCCC
1741 GTTTGTGCTA GGGTTCTTAG GCTTCTTGGG GGCTGCTGGA
ACTGCAATGG GAGCAGCGGC
1801 GACAGCCCTG ACGGTCCAGT CTCAGCATTT GCTTGCTGGG
ATACTGCAGC AGCAGAAGAA
1861 TCTGCTGGCG GCTGTGGAGG CTCAACAGCA GATGTTGAAG
CTGACCATTT GGGGTGTTAA
1921 AAACCTCAAT GCCCGCGTCA CAGCCCTTGA GAAGTACCTA
GAGGATCAGG GAGGAGTAAA
1981 CTCCTGGGGG TGCGCATGGA AACAAGTATG TCATACCACA
GTGGAGTGGC CCTGGACAAA
2041 TCGGACTCCG GATTGGCAAA ATATGACTTG GTTGGAGTGG
GAAAGACAAA TAGCTGATTT
2101 GGAAAGCAAC ATTACGAGAC AATTAGTGAA GGCTAGAGAA
CAAGAGGAAA AGAATCTAGA
2161 TGCCTATCAG AAGTTAACTA GTTGGTCAGA TTTCTGGTCT
TGGTTCGATT TCTCAAAATG
2221 GCTTAACATT TTAAAAATGG GATTTTTAGT AATAGTAGGA
ATAATAGGGT TAAGATTACT
2281 TTAGACAGTA TATGGATGTA TAGTGAGGGT TAGGCAGGGA
TATGTTCCTC TATCTCCACA
2341 GAT C CAT АТС CGCGGCAATT TTAAAAGAAA GGGAGGAATA
GGGGGACAGA CTTCAGCAGA
2401 GAGACTAATT AATATAATAA CAACACAATT AGAAATACAA
CATTTACAAA CCAAAATTCA
2461 AAAAATTTTA AATTTTAGAG CCGCGGAGAT CTCAATATTG
GCCATTAGCC ATATTATTCA
- 103 038966
2521 TTGGTTATAT AGCATAAATC AATATTGGCT ATTGGCCATT
GCATACGTTG TATCTATАТС
2581 ATAATATGTA CATTTATATT GGCTCATGTC CAATATGACC
GCCATGTTGG CATT GAT TAT
2641 TGACTAGTTA TTAATAGTAA TCAATTACGG GGTCATTAGT
TCATAGCCCA TATATGGAGT
2701 TCCGCGTTAC ATAACTTACG GTAAATGGCC CGCCTGGCTG
ACCGCCCAAC GACCCCCGCC
2761 CATTGACGTC AATAATGACG TATGTTCCCA TAGTAACGCC
AATAGGGACT TTCCATTGAC
2821 GTCAATGGGT GGAGTATTTA CGGTAAACTG CCCACTTGGC
AGTACATCAA GTGTATCATA
2881 TGCCAAGTCC GCCCCCTATT GACGTCAATG ACGGTAAATG
GCCCGCCTGG CATTATGCCC
2941 AGTACATGAC CTTACGGGAC TTTCCTACTT GGCAGTACAT
CTAGGTATTA GTCATCGCTA
3001 TTACCATGGT GATGCGGTTT TGGCAGTACA CCAATGGGCG
TGGATAGCGG TTTGACTCAC
3061 GGGGATTTCC AAGTCTCCAC CCCATTGACG TCAATGGGAG
TTTGTTTTGG CACCAAAATC
3121 AACGGGACTT TCCAAAATGT CGTAATAACC CCGCCCCGTT
GACGCAAATG GGCGGTAGGC
3181 GTGTACGGTG GGAGGTCTAT ATAAGCAGAG CTCGTTTAGT
GAACCGTCAG ATCACTAGAA
3241 GCTTTATTGC GGTAGTTTAT CACAGTTAAA TTGCTAACGC
AGTCAGTGCT TCTGACACAA
3301 CAGTCTCGAA CTTAAGCTGC AGAAGTTGGT CGTGAGGCAC
TGGGCAGGCT AGCCACCAAT
3361 GCAGATTGAG CTGAGCACCT GCTTCTTCCT GTGCCTGCTG
AGGTTCTGCT TCTCTGCCAC
3421 CAGGAGATAC TACCTGGGGG CTGTGGAGCT GAGCTGGGAC
TACATGCAGT CTGACCTGGG
3481 GGAGCTGCCT GTGGATGCCA GGTTCCCCCC CAGAGTGCCC
AAGAGCTTCC CCTTCAACAC
3541 CTCTGTGGTG TACAAGAAGA CCCTGTTTGT GGAGTTCACT
GACCACCTGT TCAACATTGC
- 104 038966
3601 CAAGCCCAGG CCCCCCTGGA TGGGCCTGCT GGGCCCCACC
ATCCAGGCTG AGGTGTATGA
3661 CACTGTGGTG ATCACCCTGA AGAACATGGC CAGCCACCCT
GTGAGCCTGC ATGCTGTGGG
3721 GGTGAGCTAC TGGAAGGCCT CTGAGGGGGC T GAG TAT GAT
GACCAGACCA GCCAGAGGGA
3781 GAAGGAGGAT GACAAGGTGT TCCCTGGGGG CAGCCACACC
TATGTGTGGC AGGTGCTGAA
3841 GGAGAATGGC CCCATGGCCT CTGACCCCCT GTGCCTGACC
TACAGCTACC TGAGCCATGT
3901 GGACCTGGTG AAGGACCTGA ACTCTGGCCT GATTGGGGCC
CTGCTGGTGT GCAGGGAGGG
3961 CAGCCTGGCC AAGGAGAAGA CCCAGACCCT GCACAAGTTC
ATCCTGCTGT TTGCTGTGTT
4021 TGATGAGGGC AAGAGCTGGC ACTCTGAAAC CAAGAACAGC
CTGATGCAGG ACAGGGATGC
4081 TGCCTCTGCC AGGGCCTGGC CCAAGATGCA CACTGTGAAT
GGCTATGTGA ACAGGAGCCT
4141 GCCTGGCCTG ATTGGCTGCC ACAGGAAGTC TGTGTACTGG
CATGTGATTG GCATGGGCAC
4201 CACCCCTGAG GTGCACAGCA TCTTCCTGGA GGGCCACACC
TTCCTGGTCA GGAACCACAG
4261 GCAGGCCAGC CTGGAGATCA GCCCCATCAC CTTCCTGACT
GCCCAGACCC TGCTGATGGA
4321 CCTGGGCCAG TTCCTGCTGT TCTGCCACAT CAGCAGCCAC
CAGCATGATG GCATGGAGGC
4381 CTATGTGAAG GTGGACAGCT GCCCTGAGGA GCCCCAGCTG
AGGATGAAGA ACAATGAGGA
4441 GGCTGAGGAC TATGATGATG ACCTGACTGA CTCTGAGATG
GATGTGGTGA GGTTTGATGA
4501 TGACAACAGC CCCAGCTTCA TCCAGATCAG GTCTGTGGCC
AAGAAGCACC CCAAGACCTG
4561 GGTGCACTAC ATTGCTGCTG AGGAGGAGGA CTGGGACTAT
GCCCCCCTGG TGCTGGCCCC
4621 TGATGACAGG AGCTACAAGA GCCAGTACCT GAACAATGGC
CCCCAGAGGA TTGGCAGGAA
- 105 038966
4681 GTACAAGAAG GTCAGGTTCA TGGCCTACAC TGATGAAACC
TTCAAGACCA GGGAGGCCAT
4741 CCAGCATGAG TCTGGCATCC TGGGCCCCCT GCTGTATGGG
GAGGTGGGGG ACACCCTGCT
4801 GATCATCTTC AAGAACCAGG CCAGCAGGCC CTACAACATC
TACCCCCATG GCATCACTGA
4861 TGTGAGGCCC CTGTACAGCA GGAGGCTGCC CAAGGGGGTG
AAGCACCTGA AGGACTTCCC
4921 CATCCTGCCT GGGGAGATCT TCAAGTACAA GTGGACTGTG
ACTGTGGAGG ATGGCCCCAC
4981 CAAGTCTGAC CCCAGGTGCC TGACCAGATA CTACAGCAGC
TTTGTGAACA TGGAGAGGGA
5041 CCTGGCCTCT GGCCTGATTG GCCCCCTGCT GATGTGCTAG
AAGGAGTCTG TGGACCAGAG
5101 GGGCAACCAG ATCATGTCTG ACAAGAGGAA TGTGATCCTG
TTCTCTGTGT TTGATGAGAA
5161 CAGGAGCTGG TACCTGACTG AGAACATCCA GAGGTTCCTG
CCCAACCCTG CTGGGGTGCA
5221 GCTGGAGGAC CCTGAGTTCC AGGCCAGCAA CATCATGCAC
AGCATCAATG GCTATGTGTT
5281 TGACAGCCTG CAGCTGTCTG TGTGCCTGCA TGAGGTGGCC
TACTGGTACA TCCTGAGCAT
5341 TGGGGCCCAG ACTGACTTCC TGTCTGTGTT CTTCTCTGGC
TACACCTTCA AGCACAAGAT
5401 GGTGTATGAG GACACCCTGA CCCTGTTCCC CTTCTCTGGG
GAGACTGTGT TCATGAGCAT
5461 GGAGAACCCT GGCCTGTGGA TTCTGGGCTG CCACAACTCT
GACTTCAGGA ACAGGGGCAT
5521 GACTGCCCTG CTGAAAGTCT CCAGCTGTGA CAAGAACACT
GGGGACTACT ATGAGGACAG
5581 CTATGAGGAC ATCTCTGCCT ACCTGCTGAG CAAGAACAAT
GCCATTGAGC CCAGGAGCTT
5641 CAGCCAGAAC AGCAGGCACC CCAGCACCAG GCAGAAGCAG
TTCAATGCCA CCACCATCCC
5701 TGAGAATGAC ATAGAGAAGA CAGACCCATG GTTTGCCCAC
CGGACCCCCA TGCCCAAGAT
- 106 038966
5761 CCAGAATGTG AGCAGCTCTG ACCTGCTGAT GCTGCTGAGG
CAGAGCCCCA CCCCCCATGG
5821 CCTGAGCCTG TCTGACCTGC AGGAGGCCAA GTATGAAACC
TTCTCTGATG ACCCCAGCCC
5881 TGGGGCCATT GACAGCAACA ACAGCCTGTC TGAGATGACC
CACTTCAGGC CCCAGCTGCA
5941 CCACTCTGGG GACATGGTGT TCACCCCTGA GTCTGGCCTG
CAGCTGAGGC TGAATGAGAA
6001 GCTGGGCACC ACTGCTGCCA CTGAGCTGAA GAAGCTGGAC
TTCAAAGTCT CCAGCACCAG
6061 CAACAACCTG ATCAGCACCA TCCCCTCTGA CAACCTGGCT
GCTGGCACTG ACAACACCAG
6121 CAGCCTGGGC CCCCCCAGCA TGCCTGTGCA CTATGACAGC
CAGCTGGACA CCACCCTGTT
6181 TGGCAAGAAG AGCAGCCCCC TGACTGAGTC TGGGGGCCCC
CTGAGCCTGT CTGAGGAGAA
6241 CAATGACAGC AAGCTGCTGG AGTCTGGCCT GATGAACAGC
CAGGAGAGCA GCTGGGGCAA
6301 GAATGTGAGC AGCAGGGAGA TCACCAGGAC CACCCTGCAG
TCTGACCAGG AGGAGATTGA
6361 СТАТ GAT GAG ACCATCTCTG TGGAGATGAA GAAGGAGGAC
TTTGACATCT ACGACGAGGA
6421 CGAGAACCAG AGCCCCAGGA GCTTCCAGAA GAAGACCAGG
САСТАСTTGA TTGCTGCTGT
6481 GGAGAGGCTG TGGGACTATG GCATGAGCAG CAGCCCCCAT
GTGCTGAGGA ACAGGGCCCA
6541 GTCTGGCTCT GTGCCCCAGT TCAAGAAGGT GGTGTTCCAG
GAGTTCACTG ATGGCAGCTT
6601 CACCCAGCCC CTGTACAGAG GGGAGCTGAA TGAGCACCTG
GGCCTGCTGG GCCCCTACAT
6661 CAGGGCTGAG GTGGAGGACA ACATCATGGT GACCTTCAGG
AACCAGGCCA GCAGGCCCTA
6721 CAGCTTCTAC AGCAGCCTGA TCAGCTATGA GGAGGACCAG
AGGCAGGGGG CTGAGCCCAG
6781 GAAGAACTTT GTGAAGCCCA ATGAAACCAA GACCTACTTC
TGGAAGGTGC AGCACCACAT
- 107 038966
6841 GGCCCCCACC AAGGATGAGT TTGACTGCAA GGCCTGGGCC
TACTTCTCTG ATGTGGACCT
6901 GGAGAAGGAT GTGCACTCTG GCCTGATTGG CCCCCTGCTG
GTGTGCCACA CCAACACCCT
6961 GAACCCTGCC CATGGCAGGC AGGTGACTGT GCAGGAGTTT
GCCCTGTTCT TCACCATCTT
7021 TGATGAAACC AAGAGCTGGT ACTTCACTGA GAACATGGAG
AGGAACTGCA GGGCCCCCTG
7081 CAACATCCAG ATGGAGGACC CCACCTTCAA GGAGAACTAC
AGGTTCCATG CCATCAATGG
7141 CTACATCATG GACACCCTGC CTGGCCTGGT GATGGCCCAG
GACCAGAGGA TCAGGTGGTA
7201 CCTGCTGAGC ATGGGCAGCA ATGAGAACAT CCACAGCATC
CACTTCTCTG GCCATGTGTT
7261 CACTGTGAGG AAGAAGGAGG AGTACAAGAT GGCCCTGTAC
AACCTGTACC CTGGGGTGTT
7321 TGAGACTGTG GAGATGCTGC CCAGCAAGGC TGGCATCTGG
AGGGTGGAGT GCCTGATTGG
7381 GGAGCACCTG CATGCTGGCA TGAGCACCCT GTTCCTGGTG
TACAGCAACA AGTGCCAGAC
7441 CCCCCTGGGC ATGGCCTCTG GCCACATCAG GGACTTCCAG
ATCACTGCCT CTGGCCAGTA
7501 TGGCCAGTGG GCCCCCAAGC TGGCCAGGCT GCACTACTCT
GGCAGCATCA ATGCCTGGAG
7561 CACCAAGGAG CCCTTCAGCT GGATCAAGGT GGACCTGCTG
GCCCCCATGA TCATCCATGG
7621 CATCAAGACC CAGGGGGCCA GGCAGAAGTT CAGCAGCCTG
TACATCAGCC AGTTCATCAT
7681 CATGTACAGC CTGGATGGCA AGAAGTGGCA GACCTACAGG
GGCAACAGCA CTGGCACCCT
7741 GATGGTGTTC TTTGGCAATG TGGACAGCTC TGGCATCAAG
CACAACATCT TCAACCCCCC
7801 CATCATTGCC AGATACATCA GGCTGCACCC CACCCACTAC
AGCATCAGGA GCACCCTGAG
7861 GATGGAGCTG ATGGGCTGTG ACCTGAACAG CTGCAGCATG
CCCCTGGGCA TGGAGAGCAA
- 108 038966
7921 GGCCATCTCT GATGCCCAGA TCACTGCCAG CAGCTACTTC
ACCAACATGT TTGCCACCTG
7981 GAGCCCCAGC AAGGCCAGGC TGCACCTGCA GGGCAGGAGC
AATGCCTGGA GGCCCCAGGT
8041 CAACAACCCC AAGGAGTGGC TGCAGGTGGA CTTCCAGAAG
ACCATGAAGG TGACTGGGGT
8101 GACCACCCAG GGGGTGAAGA GCCTGCTGAC CAGCATGTAT
GTGAAGGAGT TCCTGATCAG
8161 CAGCAGCCAG GATGGCCACC AGTGGACCCT GTTCTTCCAG
AATGGCAAGG TGAAGGTGTT
8221 CCAGGGCAAC CAGGACAGCT TCACCCCTGT GGTGAACAGC
CTGGACCCCC CCCTGCTGAC
8281 CAGATACCTG AGGATTCACC CCCAGAGCTG GGTGCACCAG
ATTGCCCTGA GGATGGAGGT
8341 GCTGGGCTGT GAGGCCCAGG ACCTGTACTG AGCGGCCGCG
GGCCCAATCA ACCTCTGGAT
8401 TACAAAATTT GTGAAAGATT GACTGGTATT CTTAACTATG
TTGCTCCTTT TACGCTATGT
8461 GGATACGCTG CTTTAATGCC TTTGTATCAT GCTATTGCTT
CCCGTATGGC TTTCATTTTC
8521 TCCTCCTTGT ATAAATCCTG GTTGCTGTCT CTTTATGAGG
AGTTGTGGCC CGTTGTCAGG
8581 CAACGTGGCG TGGTGTGCAC TGTGTTTGCT GACGCAACCC
CCACTGGTTG GGGCATTGCC
8641 ACCACCTGTC AGCTCCTTTC CGGGACTTTC GCTTTCCCCC
TCCCTATTGC CACGGCGGAA
8701 CTCATCGCCG CCTGCCTTGC CCGCTGCTGG ACAGGGGCTC
GGCTGTTGGG CACTGACAAT
8761 TCCGTGGTGT TGTCGGGGAA ATCATCGTCC TTTCCTTGGC
TGCTCGCCTG TGTTGCCACC
8821 TGGATTCTGC GCGGGACGTC CTTCTGCTAC GTCCCTTCGG
CCCTCAATCC AGCGGACCTT
8881 CCTTCCCGCG GCCTGCTGCC GGCTCTGCGG CCTCTTCCGC
GTCTTCGCCT TCGCCCTCAG
8941 ACGAGTCGGA TCTCCCTTTG GGCCGCCTCC CCGCAAGCTT
CGCACTTTTT AAAAGAAAAG
- 109 038966
9001 GGAGGACTGG ATGGGATTTA TTACTCCGAT AGGACGCTGG
CTTGTAACTC AGTCTCTTAC
9061 TAGGAGACCA GCTTGAGCCT GGGTGTTCGC TGGTTAGCCT
AACCTGGTTG GCCACCAGGG
9121 GTAAGGACTC CTTGGCTTAG AAAGCTAATA AACTTGCCTG
CATTAGAGCT CTTACGCGTC
9181 CCGGGCTCGA GATCCGCATC TCAATTAGTC AGCAACCATA
GTCCCGCCCC TAACTCCGCC
9241 CATCCCGCCC CTAACTCCGC CCAGTTCCGC CCATTCTCCG
CCCCATGGCT GACTAATTTT
9301 TTTTATTTAT GCAGAGGCCG AGGCCGCCTC GGCCTCTGAG
СТАТТСGAGA AGTAGTGAGG
9361 AGGCTTTTTT GGAGGCCTAG GCTTTTGCAA AAAGCTAACT
TGTTTATTGC AGCTTATAAT
9421 GGTTACAAAT AAAGCAATAG CATCACAAAT TTCACAAATA
AAGCATTTTT TTCACTGCAT
9481 TCTAGTTGTG GTTTGTCCAA ACTCATCAAT GTATCTTATC
ATGTCTGTCC GCTTCCTCGC
9541 TCACTGACTC GCTGCGCTCG GTCGTTCGGC TGCGGCGAGC
GGTATCAGCT CACTCAAAGG
9601 CGGTAATACG GTTATCCACA GAATCAGGGG ATAACGCAGG
AAAGAACATG TGAGCAAAAG
9661 GCCAGCAAAA GGCCAGGAAC CGTAAAAAGG CCGCGTTGCT
GGCGTTTTTC CATAGGCTCC
9721 GCCCCCCTGA CGAGCATCAC AAAAATCGAC GCTCAAGTCA
GAGGTGGCGA AACCCGACAG
9781 GACTATAAAG ATACCAGGCG TTTCCCCCTG GAAGCTCCCT
CGTGCGCTCT CCTGTTCCGA
9841 CCCTGCCGCT TACCGGATAC CTGTCCGCCT TTCTCCCTTC
GGGAAGCGTG GCGCTTTCTC
9901 ATAGCTCACG CTGTAGGTAT CTCAGTTCGG TGTAGGTCGT
TCGCTCCAAG CTGGGCTGTG
9961 TGCACGAACC CCCCGTTCAG CCCGACCGCT GCGCCTTATC
CGGTAACTAT CGTCTTGAGT
10021 CCAACCCGGT AAGACACGAC TTATCGCCAC TGGCAGCAGC
CACTGGTAAC AGGATTAGCA
- 110 038966
10081 GAGCGAGGTA TGTAGGCGGT GCTACAGAGT TCTTGAAGTG
GTGGCCTAAC TACGGCTACA
10141 CTAGAAGAAC AGTATTTGGT ATCTGCGCTC TGCTGAAGCC
AGTTACCTTC GGAAAAAGAG
10201 TTGGTAGCTC TTGATCCGGC AAACAAACCA CCGCTGGTAG
CGGTGGTTTT TTTGTTTGCA
10261 AGCAGCAGAT TACGCGCAGA AAAAAAGGAT CTCAAGAAGA
TCCTTTGATC TTTTCTACGG
10321 GGTCTGACGC TCAGTGGAAC GAAAACTCAC GTTAAGGGAT
TTTGGTCATG AGATTATCAA
10381 AAAGGATCTT CACCTAGATC CTTTTAAATT AAAAATGAAG
TTTTAAATCA ATCTAAAGTA
10441 TATATGAGTA AACTTGGTCT GACAGTTAGA AAAACTCATC
GAGCAT CAAA TGAAACTGCA
10501 ATTTATTCAT ATCAGGATTA TCAATACCAT ATTTTTGAAA
AAGCCGTTTC TGTAATGAAG
10561 GAGAAAACTC ACCGAGGCAG TTCCATAGGA TGGCAAGATC
CTGGTATCGG TCTGCGATTC
10621 CGACTCGTCC AACATCAATA CAACCTATTA ATTTCCCCTC
GTCAAAAATA AGGTTATCAA
10681 GTGAGAAATC ACCATGAGTG ACGACTGAAT CCGGTGAGAA
TGGCAACAGC TTATGCATTT
10741 CTTTCCAGAC TTGTTCAACA GGCCAGCCAT TACGCTCGTC
ATCAAAATCA CTCGCATCAA
10801 CCAAACCGTT ATTCATTCGT GATTGCGCCT GAGCGAGACG
AAATACGCGA TCGCTGTTAA
10861 AAGGACAATT ACAAACAGGA ATCGAATGCA ACCGGCGCAG
GAACACTGCC AGCGCATCAA
10921 CAATATTTTC ACCTGAATCA GGATATTCTT CTAATACCTG
GAATGCTGTT TTTCCGGGGA
10981 TCGCAGTGGT GAGTAACCAT GCATCATCAG GAGTACGGAT
AAAATGCTTG ATGGTCGGAA
11041 GAGGCATAAA TTCCGTCAGC CAGTTTAGTC TGACCATCTC
ATCTGTAACA TCATTGGCAA
11101 CGCTACCTTT GCCATGTTTC AGAAACAACT CTGGCGCATC
GGGCTTCCCA TACAATCGAT
- 111 038966
11161 AGATTGTCGC ACCTGATTGC CCGACATTAT CGCGAGCCCA
TTTATACCCA TATAAATCAG
11221 CATCCATGTT GGAATTTAAT CGCGGCCTAG AGCAAGACGT
TTCCCGTTGA ATATGGCTCA
11281 TAACACCCCT TGTATTACTG TTTATGTAAG CAGACAGTTT
TATTGTTCAT GATGATATAT
11341 TTTTATCTTG TGCAATGTAA CATCAGAGAT TTTGAGACAC
AACAATTGGT CGACGGATCC
SEQ ID NO:14
GGTACCTCAA TATTGGCCAT TAGCCATATT ATTCATTGGT TATATAGCAT AAATCAATAT
TGGCTATTGG CCATTGCATA CGTTGTATCT ATATCATAAT ATGTACATTT ATATTGGCTC
121 ATGTCCAATA TGACCGCCAT GTTGGCATTG ATTATTGACT AGTTATTAAT AGTAATCAAT
181 TACGGGGTCA TTAGTTCATA GCCCATATAT GGAGTTCCGC GTTACATAAC TTACGGTAAA
241 TGGCCCGCCT GGCTGACCGC CCAACGACCC CCGCCCATTG ACGTCAATAA TGACGTATGT
301 TCCCATAGTA ACGCCAATAG GGACTTTCCA TTGACGTCAA TGGGTGGAGT ATTTACGGTA
361 AACTGCCCAC TTGGCAGTAC ATCAAGTGTA TCATATGCCA AGTCCGCCCC CTATTGACGT
421 CAATGACGGT AAATGGCCCG CCTGGCATTA TGCCCAGTAC ATGACCTTAC GGGACTTTCC
481 TACTTGGCAG TACATCTACG TATTAGTCAT CGCTATTACC ATGGTGATGC GGTTTTGGCA
541 GTACACCAAT GGGCGTGGAT AGCGGTTTGA CTCACGGGGA TTTCCAAGTC TCCACCCCAT
601 TGACGTCAAT GGGAGTTTGT TTTGGCACCA AAATCAACGG GACTTTCCAA AATGTCGTAA
661 CAACTGCGAT CGCCCGCCCC GTTGACGCAA ATGGGCGGTA GGCGTGTACG GTGGGAGGTC
721 TATATAAGCA GAGCTCGCTG GCTTGTAACT CAGTCTCTTA CTAGGAGACC AGCTTGAGCC
781 TGGGTGTTCG CTGGTTAGCC TAACCTGGTT GGCCACCAGG GGTAAGGACT
- 112 038966
CCTTGGCTTA
841 GAAAGCTAAT AAACTTGCCT GCATTAGAGC TTATCTGAGT CAAGTGTCCT
CATTGACGCC
901 TCACTCTCTT GAACGGGAAT CTTCCTTACT GGGTTCTCTC TCTGACCCAG
GCGAGAGAAA
961 CTCCAGCAGT GGCGCCCGAA CAGGGACTTG AGTGAGAGTG TAGGCACGTA
CAGCTGAGAA
1021 GGCGTCGGAC GCGAAGGAAG CGCGGGGTGC GACGCGACCA
AGAAGGAGAC TTGGTGAGTA
1081 GGCTTCTCGA GTGCCGGGAA AAAGCTCGAG CCTAGTTAGA
GGACTAGGAG AGGCCGTAGC
1141 CGTAACTACT CTTGGGCAAG TAGGGCAGGC GGTGGGTACG
CAATGGGGGC GGCTACCTCA
1201 GCACTAAATA GGAGACAATT AGACCAATTT GAGAAAATAC
GACTTCGCCC GAACGGAAAG
1261 AAAAAGTACC AAATTAAACA TTTAATATGG GCAGGCAAGG
AGATGGAGCG CTTCGGCCTC
1321 CATGAGAGGT TGTTGGAGAC AGAGGAGGGG TGTAAAAGAA
TCATAGAAGT CCTCTACCCC
1381 CTAGAACCAA CAGGATCGGA GGGCTTAAAA AGTCTGTTCA
ATCTTGTGTG CGTGCTATAT
1441 TGCTTGCACA AGGAACAGAA AGTGAAAGAC ACAGAGGAAG
CAGTAGCAAC AGTAAGACAA
1501 CACTGCCATC TAGTGGAAAA AGAAAAAAGT GCAACAGAGA
CATCTAGTGG ACAAAAGAAA
1561 AATGACAAGG GAATAGCAGC GCCACCTGGT GGCAGTCAGA
ATTTTCCAGC GCAACAACAA
1621 GGAAATGCCT GGGTACATGT ACCCTTGTCA CCGCGCACCT
TAAATGCGTG GGTAAAAGCA
1681 GTAGAGGAGA AAAAATTTGG AGCAGAAATA GTACCCATGT
TTCAAGCCCT ATCGAATTCC
1741 CGTTTGTGCT AGGGTTCTTA GGCTTCTTGG GGGCTGCTGG
AACTGCAATG GGAGCAGCGG
1801 CGACAGCCCT GACGGTCCAG TCTCAGCATT TGCTTGCTGG
GATACTGCAG CAGCAGAAGA
1861 ATCTGCTGGC GGCTGTGGAG GCTCAACAGC AGATGTTGAA
- 113 038966
GCTGACCATT 1921 TGGGGTGTTA
AAAACCTCAA TGCCCGCGTC ACAGCCCTTG AGAAGTACCT
AGAGGATCAG GCACGACTAA
1981 ACTCCTGGGG GTGCGCATGG AAACAAGTAT GTCATACCAC
AGTGGAGTGG CCCTGGACAA
2041 ATCGGACTCC GGATTGGCAA AATATGACTT GGTTGGAGTG
GGAAAGACAA ATAGCTGATT
2101 TGGAAAGCAA CATTAGGAGA CAATTAGTGA AGGCTAGAGA
ACAAGAGGAA AAGAATCTAG
2161 ATGCCTATCA GAAGTTAACT AGTTGGTCAG ATTTCTGGTC
TTGGTTCGAT TTCTCAAAAT
2221 GGCTTAACAT TTTAAAAATG GGATTTTTAG TAATAGTAGG
AATAATAGGG TTAAGATTAC
2281 TTTACACAGT ATATGGATGT ATAGTGAGGG TTAGGCAGGG
ATATGTTCCT CTATCTCCAC
2341 AGATCCATAT CCGCGGCAAT TTTAAAAGAA AGGGAGGAAT
AGGGGGACAG ACTTCAGCAG
2401 AGAGACTAAT TAATATAATA ACAACACAAT TAGAAATACA
ACATTTACAA ACCAAAATTC
2461 AAAAAATTTT AAATTTTAGA GCCGCGGAGA TCTGTTACAT
AACTTATGGT AAATGGCCTG
2521 CCTGGCTGAC TGCCCAATGA CCCCTGCCCA ATGATGTCAA
TAATGATGTA TGTTCCCATG
2581 TAATGCCAAT AGGGACTTTC CATTGATGTC AATGGGTGGA
GTATTTATGG TAACTGCCCA
2641 CTTGGCAGTA CATCAAGTGT ATCATATGCC AAGTATGCCC
CCTATTGATG TCAATGATGG
2701 TAAATGGCCT GCCTGGCATT ATGCCCAGTA CATGACCTTA
TGGGACTTTC CTACTTGGCA
2761 GTACATCTAT GTATTAGTGA T TGC TAT TAG CATGGGAATT
CACTAGTGGA GAAGAGCATG
2821 CTTGAGGGCT GAGTGCCCCT CAGTGGGCAG AGAGCACATG
GCCCACAGTC CCTGAGAAGT
2881 TGGGGGGAGG GGTGGGCAAT TGAACTGGTG CCTAGAGAAG
GTGGGGCTTG GGTAAACTGG
2941 GAAAGTGATG TGGTGTACTG GCTCCACCTT TTTCCCCAGG
- 114 038966
GTGGGGGAGA 3001 ACCATATATA AGTGCAGTAG TCTCTGTGAA CATTCAAGCT TCTGCCTTCT
CCCTCCTGTG 3061 AGTTTGCTAG CCACCAATGC AGATTGAGCT GAGCACCTGC TTCTTCCTGT
GCCTGCTGAG 3121 GTTCTGCTTC TCTGCCACCA GGAGATACTA CCTGGGGGCT GTGGAGCTGA
GCTGGGACTA 3181 CATGCAGTCT GACCTGGGGG AGCTGCCTGT GGATGCCAGG TTCCCCCCCA
GAGTGCCCAA 3241 GAGCTTCCCC TTCAACACCT CTGTGGTGTA CAAGAAGACC CTGTTTGTGG
AGTTCACTGA 3301 CCACCTGTTC AACATTGCCA AGCCCAGGCC CCCCTGGATG GGCCTGCTGG
GCCCCACCAT 3361 CCAGGCTGAG GTGTATGACA CTGTGGTGAT CACCCTGAAG AACATGGCCA
GCCACCCTGT 3421 GAGCCTGCAT GCTGTGGGGG TGAGCTACTG GAAGGCCTCT GAGGGGGCTG
AGTATGATGA 3481 CCAGACCAGC CAGAGGGAGA AGGAGGATGA CAAGGTGTTC CCTGGGGGCA
GCCACACCTA 3541 TGTGTGGCAG GTGCTGAAGG AGAATGGCCC CATGGCCTCT GACCCCCTGT
GCCTGACCTA 3601 CAGCTACCTG AGCCATGTGG ACCTGGTGAA GGACCTGAAC TCTGGCCTGA
TTGGGGCCCT 3661 GCTGGTGTGC AGGGAGGGCA GCCTGGCCAA GGAGAAGACC CAGACCCTGC
ACAAGTTCAT 3721 CCTGCTGTTT GCTGTGTTTG ATGAGGGCAA GAGCTGGCAC TCTGAAACCA
AGAACAGCCT 3781 GATGCAGGAC AGGGATGCTG CCTCTGCCAG GGCCTGGCCC AAGATGCACA
CTGTGAATGG 3841 CTATGTGAAC AGGAGCCTGC CTGGCCTGAT TGGCTGCCAC AGGAAGTCTG
TGTACTGGCA 3901 TGTGATTGGC ATGGGCACCA CCCCTGAGGT GCACAGCATC TTCCTGGAGG
GCCACACCTT 3961 CCTGGTCAGG AACCACAGGC AGGCCAGCCT GGAGATCAGC CCCATCACCT
TCCTGACTGC 4021 CCAGACCCTG CTGATGGACC TGGGCCAGTT CCTGCTGTTC TGCCACATCA
- 115 038966
GCAGCCACCA 4081 GCATGATGGC
ATGGAGGCCT ATGTGAAGGT GGACAGCTGC CCTGAGGAGC
CCCAGCTGAG GATGAAGAAC
4141 AATGAGGAGG CTGAGGACTA TGATGATGAC CTGACTGACT
CTGAGATGGA TGTGGTGAGG
4201 TTTGATGATG ACAACAGCCC CAGCTTCATC CAGATCAGGT
CTGTGGCCAA GAAGCACCCC
4261 AAGACCTGGG TGCACTACAT TGCTGCTGAG GAGGAGGACT
GGGACTATGC CCCCCTGGTG
4321 CTGGCCCCTG ATGACAGGAG CTACAAGAGC CAGTAGCTGA
ACAATGGCCC CCAGAGGATT
4381 GGCAGGAAGT ACAAGAAGGT CAGGTTCATG GCCTACACTG
ATGAAACCTT CAAGACCAGG
4441 GAGGCCATCC AGCATGAGTC TGGCATCCTG GGCCCCCTGC
TGTATGGGGA GGTGGGGGAC
4501 ACCCTGCTGA TCATCTTCAA GAACCAGGCC AGCAGGCCCT
ACAACATCTA CCCCCATGGC
4561 ATCACTGATG TGAGGCCCCT GTACAGCAGG AGGCTGCCCA
AGGGGGTGAA GCACCTGAAG
4621 GACTTCCCCA TCCTGCCTGG GGAGATCTTC AAGTACAAGT
GGACTGTGAC TGTGGAGGAT
4681 GGCCCCACCA AGTCTGACCC CAGGTGCCTG ACCAGATACT
ACAGCAGCTT TGTGAACATG
4741 GAGAGGGACC TGGCCTCTGG CCTGATTGGC CCCCTGCTGA
TCTGCTACAA GGAGTCTGTG
4801 GACCAGAGGG GCAACCAGAT CATGTCTGAC AAGAGGAATG
TGATCCTGTT CTCTGTGTTT
4861 GATGAGAACA GGAGCTGGTA CCTGACTGAG AACATCCAGA
GGTTCCTGCC CAACCCTGCT
4921 GGGGTGCAGC TGGAGGACCC TGAGTTCCAG GCCAGCAACA
TCATGCACAG CATCAATGGC
4981 TATGTGTTTG ACAGCCTGCA GCTGTCTGTG TGCCTGCATG
AGGTGGCCTA CTGGTACATC
5041 CTGAGCATTG GGGCCCAGAC TGACTTCCTG TCTGTGTTCT
TCTCTGGCTA CACCTTCAAG
5101 CACAAGATGG TGTATGAGGA CACCCTGACC CTGTTCCCCT
- 116 038966
TCTCTGGGGA 5161 GACTGTGTTC
ATGAGCATGG AGAACCCTGG CCTGTGGATT CTGGGCTGCC
ACAACTCTGA CTTCAGGAAC
5221 AGGGGCATGA CTGCCCTGCT GAAAGTCTCC AGCTGTGACA
AGAACACTGG GGACTACTAT
5281 GAGGACAGCT ATGAGGACAT CTCTGCCTAC CTGCTGAGCA
AGAACAATGC CATTGAGCCC
5341 AGGAGCTTCA GCCAGAACAG CAGGCACCCC AGCACCAGGC
AGAAGCAGTT CAATGCCACC
5401 ACCATCCCTG AGAATGACAT AGAGAAGACA GACCCATGGT
TTGCCCACCG GACCCCCATG
5461 CCCAAGATCC AGAATGTGAG CAGCTCTGAC CTGCTGATGC
TGCTGAGGCA GAGCCCCACC
5521 CCCCATGGCC TGAGCCTGTC TGACCTGCAG GAGGCCAAGT
ATGAAACCTT CTCTGATGAC
5581 CCCAGCCCTG GGGCCATTGA CAGCAACAAC AGCCTGTCTG
AGATGACCCA CTTCAGGCCC
5641 CAGCTGCACC ACTCTGGGGA CATGGTGTTC ACCCCTGAGT
CTGGCCTGCA GCTGAGGCTG
5701 AATGAGAAGC TGGGCACCAC TGCTGCCACT GAGCTGAAGA
AGCTGGACTT CAAAGTCTCC
5761 AGCACCAGCA ACAACCTGAT CAGCACCATC CCCTCTGACA
ACCTGGCTGC TGGCACTGAC
5821 AACACCAGCA GCCTGGGCCC CCCCAGCATG CCTGTGCACT
ATGACAGCCA GCTGGACACC
5881 ACCCTGTTTG GCAAGAAGAG CAGCCCCCTG ACTGAGTCTG
GGGGCCCCCT GAGCCTGTCT
5941 GAGGAGAACA ATGACAGCAA GCTGCTGGAG TCTGGCCTGA
TGAACAGCCA GGAGAGCAGC
6001 TGGGGCAAGA ATGTGAGCAG CAGGGAGATC ACCAGGACCA
CCCTGCAGTC TGACCAGGAG
6061 GAGATTGACT ATGATGACAC CATCTCTGTG GAGATGAAGA
AGGAGGACTT TGACATCTAC
6121 GACGAGGACG AGAACCAGAG CCCCAGGAGC TTCCAGAAGA
AGACCAGGCA CTACTTCATT
6181 GCTGCTGTGG AGAGGCTGTG GGACTATGGC ATGAGCAGCA
- 117 038966
GCCCCCATGT 6241 GCTGAGGAAC
AGGGCCCAGT CTGGCTCTGT GCCCCAGTTC AAGAAGGTGG
TGTTCCAGGA GTTCACTGAT
6301 GGCAGCTTCA CCCAGCCCCT GTACAGAGGG GAGCTGAATG
AGCACCTGGG CCTGCTGGGC
6361 CCCTACATCA GGGCTGAGGT GGAGGACAAC ATCATGGTGA
CCTTCAGGAA CCAGGCCAGC
6421 AGGCCCTACA GCTTCTACAG CAGCCTGATC AGCTATGAGG
AGGACCAGAG GCAGGGGGCT
6481 GAGCCCAGGA AGAACTTTGT GAAGCCCAAT GAAACCAAGA
CCTACTTCTG GAAGGTGCAG
6541 CACCACATGG CCCCCACCAA GGATGAGTTT GACTGCAAGG
CCTGGGCCTA CTTCTCTGAT
6601 GTGGACCTGG AGAAGGATGT GCACTCTGGC CTGATTGGCC
CCCTGCTGGT GTGCCACACC
6661 AACACCCTGA ACCCTGCCCA TGGCAGGCAG GTGACTGTGC
AGGAGTTTGC CCTGTTCTTC
6721 ACCATCTTTG ATGAAACCAA GAGCTGGTAC TTCACTGAGA
ACATGGAGAG GAACTGCAGG
6781 GCCCCCTGCA ACATCCAGAT GGAGGACCCC ACCTTCAAGG
AGAACTACAG GTTCCATGCC
6841 ATCAATGGCT ACATCATGGA CACCCTGCCT GGCCTGGTGA
TGGCCCAGGA CCAGAGGATC
6901 AGGTGGTACC TGCTGAGCAT GGGCAGCAAT GAGAACATCC
ACAGCATCCA CTTCTCTGGC
6961 CATGTGTTCA CTGTGAGGAA GAAGGAGGAG TACAAGATGG
CCCTGTACAA CCTGTACCCT
7021 GGGGTGTTTG AGACTGTGGA GATGCTGCCC AGCAAGGCTG
GCATCTGGAG GGTGGAGTGC
7081 CTGATTGGGG AGCACCTGCA TGCTGGCATG AGCACCCTGT
TCCTGGTGTA CAGCAACAAG
7141 TGCCAGACCC CCCTGGGCAT GGCCTCTGGC CACATCAGGG
ACTTCCAGAT CACTGCCTCT
7201 GGCCAGTATG GCCAGTGGGC CCCCAAGCTG GCCAGGCTGC
ACTACTCTGG CAGCATCAAT
7261 GCCTGGAGCA CCAAGGAGCC CTTCAGCTGG ATCAAGGTGG
- 118 038966
ACCTGCTGGC 7321 CCCCATGATC
ATCCATGGCA TCAAGACCCA GGGGGCCAGG CAGAAGTTCA
GCAGCCTGTA CATCAGCCAG
7381 TTCATCATGA TGTACAGCCT GGATGGCAAG AAGTGGCAGA
CCTACAGGGG CAACAGCACT
7441 GGCACCCTGA TGGTGTTCTT TGGCAATGTG GACAGCTCTG
GCATCAAGCA CAACATCTTC
7501 AACCCCCCCA TCATTGCCAG ATACATCAGG CTGCACCCCA
CCCACTACAG CATCAGGAGC
7561 ACCCTGAGGA TGGAGCTGAT GGGCTGTGAC CTGAACAGCT
GCAGCATGCC CCTGGGCATG
7621 GAGAGCAAGG CCATCTCTGA TGCCCAGATC ACTGCCAGCA
GCTACTTCAC CAACATGTTT
7681 GCCACCTGGA GCCCCAGCAA GGCCAGGCTG CACCTGCAGG
GCAGGAGCAA TGCCTGGAGG
7741 CCCCAGGTCA ACAACCCCAA GGAGTGGCTG CAGGTGGACT
TCCAGAAGAC CATGAAGGTG
7801 ACTGGGGTGA CCACCCAGGG GGTGAAGAGC CTGCTGACCA
GCATGTATGT GAAGGAGTTC
7861 CTGATCAGCA GCAGCCAGGA TGGCCACCAG TGGACCCTGT
TCTTCCAGAA TGGCAAGGTG
7921 AAGGTGTTCC AGGGCAACCA GGACAGCTTC ACCCCTGTGG
TGAACAGCCT GGACCCCCCC
7981 CTGCTGACCA GATACCTGAG GATTCACCCC CAGAGCTGGG
TGCACCAGAT TGCCCTGAGG
8041 ATGGAGGTGC TGGGCTGTGA GGCCCAGGAC CTGTACTGAG
CGGCCGCGGG CCCAATCAAC
8101 CTCTGGATTA CAAAATTTGT GAAAGATTGA CTGGTATTCT
TAACTATGTT GCTCCTTTTA
8161 CGCTATGTGG ATACGCTGCT TTAATGCCTT TGTATCATGC
TATTGCTTCC CGTATGGCTT
8221 TCATTTTCTC CTCCTTGTAT AAATCCTGGT TGCTGTCTCT
TTATGAGGAG TTGTGGCCCG
8281 TTGTCAGGCA ACGTGGCGTG GTGTGCACTG TGTTTGCTGA
CGCAACCCCC ACTGGTTGGG
8341 GCATTGCCAC CACCTGTCAG CTCCTTTCCG GGACTTTCGC
- 119 038966
тттссссстс 8401 CCTATTGCCA CGGCGGAACT CATCGCCGCC TGCCTTGCCC GCTGCTGGAC
AGGGGCTCGG 8461 CTGTTGGGCA CTGACAATTC CGTGGTGTTG TCGGGGAAAT CATCGTCCTT
TCCTTGGCTG 8521 CTCGCCTGTG TTGCCACCTG GATTCTGCGC GGGACGTCCT TCTGCTACGT
CCCTTCGGCC 8581 CTCAATCCAG CGGACCTTCC TTCCCGCGGC CTGCTGCCGG CTCTGCGGCC
TCTTCCGCGT 8641 CTTCGCCTTC GCCCTCAGAC GAGTCGGATC TCCCTTTGGG CCGCCTCCCC
GCAAGCTTCG 8701 CACTTTTTAA AAGAAAAGGG AGGACTGGAT GGGATTTATT ACTCCGATAG
GACGCTGGCT 8761 TGTAACTCAG TCTCTTACTA GGAGACCAGC TTGAGCCTGG GTGTTCGCTG
GTTAGCCTAA 8821 CCTGGTTGGC CACCAGGGGT AAGGACTCCT TGGCTTAGAA AGCTAATAAA
CTTGCCTGCA 8881 TTAGAGCTCT TACGCGTCCC GGGCTCGAGA TCCGCATCTC AATTAGTCAG
CAACCATAGT 8941 CCCGCCCCTA ACTCCGCCCA TCCCGCCCCT AACTCCGCCC AGTTCCGCCC
ATTCTCCGCC 9001 CCATGGCTGA CTAATTTTTT TTATTTATGC AGAGGCCGAG GCCGCCTCGG
CCTCTGAGCT 9061 ATTCCAGAAG TAGTGAGGAG GCTTTTTTGG AGGCCTAGGC TTTTGCAAAA
AGCTAACTTG 9121 TTTATTGCAG CTTATAATGG TTACAAATAA AGCAATAGCA TCACAAATTT
CACAAATAAA 9181 GCATTTTTTT CACTGCATTC TAGTTGTGGT TTGTCCAAAC TCATCAATGT
ATCTTATCAT 9241 GTCTGTCCGC TTCCTCGCTC ACTGACTCGC TGCGCTCGGT CGTTCGGCTG
CGGCGAGCGG 9301 TATCAGCTCA CTCAAAGGCG GTAATACGGT TATCCACAGA ATCAGGGGAT
AACGCAGGAA 9361 AGAACATGTG AGCAAAAGGC CAGCAAAAGG CCAGGAACCG TAAAAAGGCC
GCGTTGCTGG 9421 CGTTTTTCCA TAGGCTCCGC CCCCCTGACG AGCATCACAA AAATCGACGC
- 120 038966
TCAAGTCAGA 9481 GGTGGCGAAA
CCCGACAGGA CTATAAAGAT ACCAGGCGTT TCCCCCTGGA
AGCTCCCTCG TGCGCTCTCC
9541 TGTTCCGACC CTGCCGCTTA CCGGATACCT GTCCGCCTTT
CTCCCTTCGG GAAGCGTGGC
9601 GCTTTCTCAT AGCTCACGCT GTAGGTATCT CAGTTCGGTG
TAGGTCGTTC GCTCCAAGCT
9661 GGGCTGTGTG CACGAACCCC CCGTTCAGCC CGACCGCTGC
GCCTTATCCG GTAACTATCG
9721 TCTTGAGTCC AACCCGGTAA GACACGACTT ATCGCCACTG
GCAGCAGCCA CTGGTAACAG
9781 GATTAGCAGA GCGAGGTATG TAGGCGGTGC TACAGAGTTC
TTGAAGTGGT GGCCTAACTA
9841 CGGCTACACT AGAAGAACAG TATTTGGTAT CTGCGCTCTG
CTGAAGCCAG TTACCTTCGG
9901 AAAAAGAGTT GGTAGCTCTT GATCCGGCAA ACAAACCACC
GCTGGTAGCG GTGGTTTTTT
9961 TGTTTGCAAG CAGCAGATTA CGCGCAGAAA AAAAGGATCT
CAAGAAGATC CTTTGATCTT
10021 TTCTACGGGG TCTGACGCTC AGTGGAACGA AAACTCACGT
TAAGGGATTT TGGTCATGAG
10081 ATTATCAAAA AGGATCTTCA CCTAGATCCT TTTAAATTAA
AAATGAAGTT TTAAATCAAT
10141 CTAAAGTATA TATGAGTAAA CTTGGTCTGA CAGTTAGAAA
AACTCATCGA GCATCAAATG
10201 AAACTGCAAT TTATTCATAT CAGGATTATC AATACCATAT
TTTTGAAAAA GCCGTTTCTG
10261 TAATGAAGGA GAAAACTCAC CGAGGCAGTT CCATAGGATG
GCAAGATCCT GGTATCGGTC
10321 TGCGATTCCG ACTCGTCCAA CATCAATACA ACCTATTAAT
TTCCCCTCGT CAAAAATAAG
10381 GTTATCAAGT GAGAAATCAC CATGAGTGAC GACTGAATCC
GGTGAGAATG GCAACAGCTT
10441 ATGCATTTCT TTCCAGACTT GTTCAACAGG CCAGCCATTA
CGCTCGTCAT CAAAATСАСT
10501 CGCATCAACC AAACCGTTAT TCATTCGTGA TTGCGCCTGA
- 121 038966
GCGAGACGAA 10561 ATACGCGATC
GCTGTTAAAA GGACAATTAC AAACAGGAAT CGAATGCAAC
CGGCGCAGGA ACACTGCCAG
10621 CGCATCAACA ATATTTTCAC CTGAATCAGG ATATTCTTCT
AATACCTGGA ATGCTGTTTT
10681 TCCGGGGATC GCAGTGGTGA GTAACCATGC ATCATCAGGA
GTACGGATAA AATGCTTGAT
10741 GGTCGGAAGA GGCATAAATT CCGTCAGCCA GTTTAGTCTG
ACCATCTCAT CTGTAACATC
10801 ATTGGCAACG CTACCTTTGC CATGTTTCAG AAACAACTCT
GGCGCATCGG GCTTCCCATA
10861 CAATCGATAG ATTGTCGCAC CTGATTGCCC GACATTATCG
CGAGCCCATT TATACCCATA
10921 TAAATCAGCA TCCATGTTGG AATTTAATCG CGGCCTAGAG
CAAGACGTTT CCCGTTGAAT
10981 ATGGCTCATA ACACCCCTTG TATTACTGTT TATGTAAGCA
GACAGTTTTA TTGTTCATGA
11041 TGATATATTT TTATCTTGTG CAATGTAACA TCAGAGATTT
TGAGACACAA CAATTGGTCG
11101 ACGGATCC
SEQ ID NO: 15
ATGCCCAGCTCTGTGTCCTGGGGCATTCTGCTGCTGGCTGGCCTGTGCTGTCTGGTGC CTGTGTCCCTGGCTGAGGACCCTCAGGGGGATGCTGCCCAGAAAACAGACACCTCCCACCATG ACCAGGACCACCCCACCTTCAACAAGATCACCCCCAACCTGGCAGAGTTTGCCTTCAGCCTGT ACAGACAGCTGGCCCACCAGAGCAACAGCACCAACATCTTTTTCAGCCCTGTGTCCATTGCCA CAGCCTTTGCCATGCTGAGCCTGGGCACCAAGGCTGACACCCATGATGAGATCCTGGAAGGCC TGAACTTCAACCTGACAGAGATCCCTGAGGCCCAGATCCATGAGGGCTTCCAGGAACTGCTGA GAACCCTGAACCAGCCAGACAGCCAGCTGCAGCTGACAACAGGCAATGGGCTGTTCCTGTCTG AGGGCCTGAAGCTGGTGGACAAGTTTCTGGAAGATGTGAAGAAGCTGTACCACTCTGAGGCCT T CACAGT GAAC T T T GGGGACACAGAAGAGGCCAAGAAACAGAT CAAT GAG TAT GT GGAAAAGG GCACCCAGGGCAAGATTGTGGACCTTGTGAAAGAGCTGGACAGGGACACTGTGTTTGCCCTTG TGAACTACATСTTСTTCAAGGGCAAGTGGGAGAGGCCCTTTGAAGTGAAGGACACTGAGGAAG AGGACTTCCATGTGGACCAAGTGACCACAGTGAAGGTGCCAATGATGAAGAGACTGGGGATGT TCAATATCCAGCACTGCAAGAAACTGAGCAGCTGGGTGCTGCTGATGAAGTACCTGGGCAATG CTACAGCCATATTCTTTCTGCCTGATGAGGGCAAGCTGCAGCACCTGGAAAATGAGCTGACCC ATGACATCATCACCAAATTTCTGGAAAATGAGGACAGAAGATCTGCCAGCCTGCATCTGCCCA
- 122 038966
AGCTGAGCATCACAGGCACATATGACCTGAAGTCTGTGCTGGGACAGCTGGGAATCACCAAGG TGTTCAGCAATGGGGCAGACCTGAGTGGAGTGACAGAGGAAGCCCCTCTGAAGCTGTCCAAGG CTGTGCACAAGGCAGTGCTGACCATTGATGAGAAGGGCACAGAGGCTGCTGGGGCCATGTTTC TGGAAGCCATCCCCATGTCCATCCCCCCAGAAGTGAAGTTCAACAAGCCCTTTGTGTTCCTGA TGATTGAGCAGAACACCAAGAGCCCCCTGTTCATGGGCAAGGTTGTGAACCCCACCCAGAAAT GA
SEQ ID NO: 16
ATGCAGATTGAGCTGAGCACCTGCTTCTTCCTGTGCCTGCTGAGGTTCTGCTTCTCTG CCACCAGGAGATACTACCTGGGGGCTGTGGAGCTGAGCTGGGACTACATGCAGTCTGACCTGG GGGAGCTGCCTGTGGATGCCAGGTTCCCCCCCAGAGTGCCCAAGAGCTTCCCCTTCAACACCT CTGTGGTGTACAAGAAGACCCTGTTTGTGGAGTTCACTGACCACCTGTTCAACATTGCCAAGC CCAGGCCCCCCTGGATGGGCCTGCTGGGCCCCACCATCCAGGCTGAGGTGTATGACACTGTGG TGATCACCCTGAAGAACATGGCCAGCCACCCTGTGAGCCTGCATGCTGTGGGGGTGAGCTACT GGAAGGCCTCTGAGGGGGCTGAGTATGATGACCAGACCAGCCAGAGGGAGAAGGAGGATGACA AGGTGTTCCCTGGGGGCAGCCACACCTATGTGTGGCAGGTGCTGAAGGAGAATGGCCCCATGG CCTCTGACCCCCTGTGCCTGACCTACAGCTACCTGAGCCATGTGGACCTGGTGAAGGACCTGA ACTCTGGCCTGATTGGGGCCCTGCTGGTGTGCAGGGAGGGCAGCCTGGCCAAGGAGAAGACCC AGACCCTGCACAAGTTCATCCTGCTGTTTGCTGTGTTTGATGAGGGCAAGAGCTGGCACTCTG AAACCAAGAACAGCCTGATGCAGGACAGGGATGCTGCCTCTGCCAGGGCCTGGCCCAAGATGC ACACTGTGAATGGCTATGTGAACAGGAGCCTGCCTGGCCTGATTGGCTGCCACAGGAAGTCTG TGTACTGGCATGTGATTGGCATGGGCACCACCCCTGAGGTGCACAGCATCTTCCTGGAGGGCC ACACCTTCCTGGTCAGGAACCACAGGCAGGCCAGCCTGGAGATCAGCCCCATCACCTTCCTGA CTGCCCAGACCCTGCTGATGGACCTGGGCCAGTTCCTGCTGTTCTGCCACATCAGCAGCCACC AGCATGATGGCATGGAGGCCTATGTGAAGGTGGACAGCTGCCCTGAGGAGCCCCAGCTGAGGA T GAAGAACAAT GAGGAGGC T GAGGAC TAT GAT GAT GACC T GAC T GAC T С T GAGAT GGAT GT GG TGAGGTTTGATGATGACAACAGCCCCAGCTTCATCCAGATCAGGTCTGTGGCCAAGAAGCACC CCAAGACCTGGGTGCACTACATTGCTGCTGAGGAGGAGGACTGGGACTATGCCCCCCTGGTGC TGGCCCCTGATGACAGGAGCTACAAGAGCCAGTACCTGAACAATGGCCCCCAGAGGATTGGCA GGAAGTACAAGAAGGTCAGGTTCATGGCCTACACTGATGAAACCTTCAAGACCAGGGAGGCCA TCCAGCATGAGTCTGGCATCCTGGGCCCCCTGCTGTATGGGGAGGTGGGGGACACCCTGCTGA TCATCTTCAAGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAACATCTACCCCCATGGCATCACTGATGTGA GGCCCCTGTACAGCAGGAGGCTGCCCAAGGGGGTGAAGCACCTGAAGGACTTCCCCATCCTGC CTGGGGAGATCTTCAAGTACAAGTGGACTGTGACTGTGGAGGATGGCCCCACCAAGTCTGACC CCAGGTGCCTGACCAGATACTACAGCAGCTTTGTGAACATGGAGAGGGACCTGGCCTCTGGCC TGATTGGCCCCCTGCTGATCTGCTACAAGGAGTCTGTGGACCAGAGGGGCAACCAGATCATGT CTGACAAGAGGAATGTGATCCTGTTCTCTGTGTTTGATGAGAACAGGAGCTGGTACCTGACTG
- 123 038966
AGAACATCCAGAGGTTCCTGCCCAACCCTGCTGGGGTGCAGCTGGAGGACCCTGAGTTCCAGG CCAGCAACATCATGCACAGCATCAATGGCTATGTGTTTGACAGCCTGCAGCTGTCTGTGTGCC TGCATGAGGTGGCCTACTGGTACATCCTGAGCATTGGGGCCCAGACTGACTTCCTGTCTGTGT TCTTCTCTGGCTACACCTTCAAGCACAAGATGGTGTATGAGGACACCCTGACCCTGTTCCCCT TCTCTGGGGAGACTGTGTTCATGAGCATGGAGAACCCTGGCCTGTGGATTCTGGGCTGCCACA ACTCTGACTTCAGGAACAGGGGCATGACTGCCCTGCTGAAAGTCTCCAGCTGTGACAAGAACA CTGGGGACTACTATGAGGACAGCTATGAGGACATCTCTGCCTACCTGCTGAGCAAGAACAATG CCATTGAGCCCAGGAGCTTCAGCCAGAACAGCAGGCACCCCAGCACCAGGCAGAAGCAGTTCA AT G С САС САС CAT С С С T GAGAAT GAGATAGAGAAGACAGAC CCATGGTTTGCC САС C G GAG С C CCATGCCCAAGATCCAGAATGTGAGCAGCTCTGACCTGCTGATGCTGCTGAGGCAGAGCCCCA CCCCCCATGGCCTGAGCCTGTCTGACCTGCAGGAGGCCAAGTATGAAACCTTCTCTGATGACC CCAGCCCTGGGGCCATTGACAGCAACAACAGCCTGTCTGAGATGACCCACTTCAGGCCCCAGC TGCACCACTCTGGGGACATGGTGTTCACCCCTGAGTCTGGCCTGCAGCTGAGGCTGAATGAGA AGCTGGGCACCACTGCTGCCACTGAGCTGAAGAAGCTGGACTTCAAAGTCTCCAGCACCAGCA ACAACCTGATCAGCACCATCCCCTCTGACAACCTGGCTGCTGGCACTGACAACACCAGCAGCC TGGGCCCCCCCAGCATGCCTGTGCACTATGACAGCCAGCTGGACACCACCCTGTTTGGCAAGA AGAGCAGCCCCCTGACTGAGTCTGGGGGCCCCCTGAGCCTGTCTGAGGAGAACAATGACAGCA AGCTGCTGGAGTCTGGCCTGATGAACAGCCAGGAGAGCAGCTGGGGCAAGAATGTGAGCAGCA GGGAGATCACCAGGACCACCCTGCAGTCTGACCAGGAGGAGATTGACTATGATGACACCATCT CTGTGGAGATGAAGAAGGAGGACTTTGACATCTACGACGAGGACGAGAACCAGAGCCCCAGGA GCTTCCAGAAGAAGACCAGGCACTACTTCATTGCTGCTGTGGAGAGGCTGTGGGACTATGGCA TGAGCAGCAGCCCCCATGTGCTGAGGAACAGGGCCCAGTCTGGCTCTGTGCCCCAGTTCAAGA AGGTGGTGTTCCAGGAGTTCACTGATGGCAGCTTCACCCAGCCCCTGTACAGAGGGGAGCTGA ATGAGCACCTGGGCCTGCTGGGCCCCTACATCAGGGCTGAGGTGGAGGACAACATCATGGTGA CCTTCAGGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAGCTTCTACAGCAGCCTGATCAGCTATGAGGAGG ACCAGAGGCAGGGGGCTGAGCCCAGGAAGAACTTTGTGAAGCCCAATGAAACCAAGACCTACT TCTGGAAGGTGCAGCACCACATGGCCCCCACCAAGGATGAGTTTGACTGCAAGGCCTGGGCCT ACTTCTCTGATGTGGACCTGGAGAAGGATGTGCACTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGGTGT GCCACACCAACACCCTGAACCCTGCCCATGGCAGGCAGGTGACTGTGCAGGAGTTTGCCCTGT T С T T GAGCAT С T T T GAT GAAACCAAGAGC T GGTAC T T САС T GAGAACAT GGAGAGGAAC T GCA GGGCCCCCTGCAACATCCAGATGGAGGACCCCACCTTCAAGGAGAACTACAGGTTCCATGCCA TCAATGGCTACATCATGGACACCCTGCCTGGCCTGGTGATGGCCCAGGACCAGAGGATCAGGT GGTACCTGCTGAGCATGGGCAGCAATGAGAACATCCACAGCATCCACTTCTCTGGCCATGTGT TCACTGTGAGGAAGAAGGAGGAGTACAAGATGGCCCTGTACAACCTGTACCCTGGGGTGTTTG AGACTGTGGAGATGCTGCCCAGCAAGGCTGGCATCTGGAGGGTGGAGTGCCTGATTGGGGAGC ACCTGCATGCTGGCATGAGCACCCTGTTCCTGGTGTACAGCAACAAGTGCCAGACCCCCCTGG
- 124 038966
GCATGGCCTCTGGCCACATCAGGGACTTCCAGATCACTGCCTCTGGCCAGTATGGCCAGTGGG CCCCCAAGCTGGCCAGGCTGCACTACTCTGGCAGCATCAATGCCTGGAGCACCAAGGAGCCCT TCAGCTGGATCAAGGTGGACCTGCTGGCCCCCATGATCATCCATGGCATCAAGACCCAGGGGG CCAGGCAGAAGTTCAGCAGCCTGTACATCAGCCAGTTCATCATCATGTACAGCCTGGATGGCA AGAAGTGGCAGACCTACAGGGGCAACAGCACTGGCACCCTGATGGTGTTCTTTGGCAATGTGG ACAGCTCTGGCATCAAGCACAACATCTTCAACCCCCCCATCATTGCCAGATACATCAGGCTGC ACCCCACCCACTACAGCATCAGGAGCACCCTGAGGATGGAGCTGATGGGCTGTGACCTGAACA GCTGCAGCATGCCCCTGGGCATGGAGAGCAAGGCCATCTCTGATGCCCAGATCACTGCCAGCA GCTACTTCACCAACATGTTTGCCACCTGGAGCCCCAGCAAGGCCAGGCTGCACCTGCAGGGCA GGAGCAATGCCTGGAGGCCCCAGGTCAACAACCCCAAGGAGTGGCTGCAGGTGGACTTCCAGA AGACCATGAAGGTGACTGGGGTGACCACCCAGGGGGTGAAGAGCCTGCTGACCAGCATGTATG TGAAGGAGTTCCTGATCAGCAGCAGCCAGGATGGCCACCAGTGGACCCTGTTCTTCCAGAATG GCAAGGTGAAGGTGTTCCAGGGCAACCAGGACAGCTTCACCCCTGTGGTGAACAGCCTGGACC CCCCCCTGCTGACCAGATACCTGAGGATTCACCCCCAGAGCTGGGTGCACCAGATTGCCCTGA GGATGGAGGTGCTGGGCTGTGAGGCCCAGGACCTGTACTGA
SEQ ID NO: 17
CCGCGGAGATCTCAATATTGGCCATTAGCCATATTATTCATTGGTTATATAGCATAAA TCAATATTGGCTATTGGCCATTGCATACGTTGTATCTATATCATAATATGTACATTTATATTG GCTCATGTC СAATAT GAG CGCCATGTTGGCATTGATTATT GAG TAGTTATTAATAGTAAT СAA TTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATG GCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCA TAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCC ACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTCCGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTA AATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTACGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACA TCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACACCAATGGGCGTG GATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGT TTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAATAACCCCGCCCCGTTGACGCAAA TGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGA TCACTAGAAGCTTTATTGCGGTAGTTTATCACAGTTAAATTGCTAACGCAGTCAGTGCTTCTG ACACAACAGTCTCGAACTTAAGCTGCAGAAGTTGGTCGTGAGGCACTGGGCAGGCTAGC
SEQ ID NO: 18
TCGAGATGTGGTCTGAGTTAAAAATCAGGAGCAACGACGGAGGTGAAGGACCAGACGC CAACGACCC
SEQ ID NO: 19
CCGGGGGTCGTTGGCGTCTGGTCCTTCACCTCCGTCGTTGCTCCTGATTTTTAACTCA GAGСАСАТС
- 125 038966
SEQ ID NO: 20
CCGGGGAAAGGGGGTGCAACACATCCATATCCAGCCATCTCTACCTGTTTATGGACA
SEQ ID NO: 21
ACCCTCTGTCCATAAACAGGTAGAGATGGCTGGATATGGATGTGTTGCACCCCTTTCC
SEQ ID NO: 22
GGGTTAGGTGGTTGCTGATTCTCTCATTCACCCAGTGGG
SEQ ID NO: 23
GAT С С С САС T G G G T GAAT GAGAGAAT GAG СAAC САС СТА
SEQ ID NO: 24
GAGAC T C GAGAT G T G G T С T GAG T TAAAAAT CAG G
SEQ ID NO: 25
AGAGGTAGACCAGTACGAGTCACGTTTGCCCCTATCACCATCCCTAACCCTCTGTCAT AAAC
SEQ ID NO: 26
T AC G G G T C GAGAC AC AG GAC С С C G T AAGAC GAC GAC C GAC C G GAC AC GAC AGAC C AC G GACACAGGGACCGACTCCTGGGAGTCCCCCTACGACGGGTCTTTTGTCTGTGGAGGGTGGTAC TGGTCCTGGTGGGGTGGAAGTTGTTCTAGTGGGGGTTGGACCGTCTCAAACGGAAGTCGGACA TGTCTGTCGACCGGGTGGTCTCGTTGTCGTGGTTGTAGAAAAAGTCGGGACACAGGTAACGGT GTCGGAAACGGTACGACTCGGACCCGTGGTTCCGACTGTGGGTACTACTCTAGGACCTTCCGG ACTTGAAGTTGGACTGTCTCTAGGGACTCCGGGTCTAGGTACTCCCGAAGGTCCTTGACGACT CTTGGGACTTGGTCGGTCTGTCGGTCGACGTCGACTGTTGTCCGTTACCCGACAAGGACAGAC TCCCGGACTTCGACCACCTGTTCAAAGACCTTCTACACTTCTTCGACATGGTGAGACTCCGGA AGTGTCACTTGAAACCCCTGTGTCTTCTCCGGTTCTTTGTCTAGTTACTGATACACCTTTTCC CGTGGGTCCCGTTCTAACACCTGGAACACTTTCTCGACCTGTCCCTGTGACACAAACGGGAAC ACTTGATGTAGAAGAAGTTCCCGTTCACCCTCTCCGGGAAACTTCACTTCCTGTGACTCCTTC TCCTGAAGGTACACCTGGTTCACTGGTGTCACTTCCACGGTTACTACTTCTCTGACCCCTACA AGTTATAGGTCGTGACGTTCTTTGACTCGTCGACCCACGACGACTACTTCATGGACCCGTTAC GATGTCGGTATAAGAAAGACGGACTACTCCCGTTCGACGTCGTGGACCTTTTACTCGACTGGG TACTGTAGTAGTGGTTTAAAGACCTTTTACTCCTGTCTTCTAGACGGTCGGACGTAGACGGGT TCGACTCGTAGTGTCCGTGTATACTGGACTTCAGACACGACCCTGTCGACCCTTAGTGGTTCC ACAAGTCGTTACCCCGTCTGGACTCACCTCACTGTCTCCTTCGGGGAGACTTCGACAGGTTCC GACACGTGTTCCGTCACGACTGGTAACTACTCTTCCCGTGTCTCCGACGACCCCGGTACAAAG ACCTTCGGTAGGGGTACAGGTAGGGGGGTCTTCACTTCAAGTTGTTCGGGAAACACAAGGACT ACTAACTCGTCTTGTGGTTCTCGGGGGACAAGTACCCGTTCCAACACTTGGGGTGGGTCTTTA CT
SEQ ID NO: 27
- 126 038966
AEDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFAEDPQGDAAQKTDTSHHDQDHPTFNKITPNLAEF AFSLYRQLAHQSNSTNIFFSPVSIATAFAMLSLGTKADTHDEILEGLNFNLTEIPEAQIHEGF QELLRTLNQPDSQLQLTTGNGLFLSEGLKLVDKFLEDVKKLYHSEAFTVNFGDTEEAKKQIND YVEKGTQGKIVDLVKELDRDTVFALVNYIFFKGKWERPFEVKDTEEEDFHVDQVTTVKVPMMK RLGMFNIQHCKKLSSWVLLMKYLGNATAIFFLPDEGKLQHLENELTHDIITKFLENEDRRSAS LHLPKLSITGTYDLKSVLGQLGITKVFSNGADLSGVTEEAPLKLSKAVHKAVLTIDEKGTEAA GAMFLEAIPMSIPPEVKFNKPFVFLMIEQNTKSPLFMGKVVNPTQK
SEQ ID NO: 28
TAC G T С TAAC T C GAC T C G T G GAC GAAGAAG GACAC G GAC GAC T С CAAGAC GAAGAGAC GGTGGTCCTCTA
TGATGGACCCCCGACACCTCGACTCGACCCTGATGTACGTCAGACTGGACCCCCTCGA CGGACACCTACG
GTCCAAGGGGGGGTCTCACGGGTTCTCGAAGGGGAAGTTGTGGAGACACCACATGTTC TTCTGGGACAAA
CACCTCAAGTGACTGGTGGACAAGTTGTAACGGTTCGGGTCCGGGGGGACCTACCCGG ACGACCCGGGGT
GGTAGGTCCGACTCCACATACTGTGACACCACTAGTGGGACTTCTTGTACCGGTCGGT GGGACACTCGGA
CGTACGACACCCCCACTCGATGACCTTCCGGAGACTCCCCCGACTCATACTACTGGTC TGGTCGGTCTCC
CTCTTCCTCCTACTGTTCCACAAGGGACCCCCGTCGGTGTGGATACACACCGTCCACG ACTTCCTCTTAC
CGGGGTACCGGAGACTGGGGGACACGGACTGGATGTCGATGGACTCGGTACACCTGGA CCACTTCCTGGA
CTTGAGACCGGACTAACCCCGGGACGACCACACGTCCCTCCCGTCGGACCGGTTCCTC TTCTGGGTCTGG
GAC G T G T T CAAG TAG GAC GACAAAC GACACAAAC TACTCCCGTTCTC GAC C G T GAGAC TTTGGTTCTTGT
CGGACTACGTCCTGTCCCTACGACGGAGACGGTCCCGGACCGGGTTCTACGTGTGACA CTTACCGATACA
CTTGTCCTCGGACGGACCGGACTAACCGACGGTGTCCTTCAGACACATGACCGTACAC TAACCGTACCCG
TGGTGGGGACTCCACGTGTCGTAGAAGGACCTCCCGGTGTGGAAGGACCAGTCCTTGG TGTCCGTCCGGT
CGGACCTCTAGTCGGGGTAGTGGAAGGACTGACGGGTCTGGGACGACTACCTGGACCC GGTCAAGGACGA
- 127 038966
CAAGACGGTGTAGTCGTCGGTGGTCGTACTACCGTACCTCCGGATACACTTCCACCTG
TCGACGGGACTC
CTCGGGGTCGACTCCTACTTCTTGTTACTCCTCCGACTCCTGATACTACTACTGGACT
GACTGAGACTCT
ACCTACACCACTCCAAACTACTACTGTTGTCGGGGTCGAAGTAGGTCTAGTCCAGACA
CCGGTTCTTCGT
GGGGTTCTGGACCCACGTGATGTAACGACGACTCCTCCTCCTGACCCTGATACGGGGG
GACCACGACCGG
GGACTACTGTCCTCGATGTTCTCGGTCATGGACTTGTTACCGGGGGTCTCCTAACCGT
CCTTCATGTTCT
TCCAGTCCAAGTACCGGATGTGACTACTTTGGAAGTTCTGGTCCCTCCGGTAGGTCGT
ACTCAGACCGTA
GGACCCGGGGGACGACATACCCCTCCACCCCCTGTGGGACGACTAGTAGAAGTTCTTG
GTCCGGTCGTCC
GGGATGTTGTAGATGGGGGTACCGTAGTGACTACACTCCGGGGACATGTCGTCCTCCG
ACGGGTTCCCCC
ACTTCGTGGACTTCCTGAAGGGGTAGGACGGACCCCTCTAGAAGTTCATGTTCACCTG
ACACTGACACCT
CCTACCGGGGTGGTTCAGACTGGGGTCCACGGACTGGTCTATGATGTCGTCGAAACAC
TTGTACCTCTCC
CTGGACCGGAGACCGGACTAACCGGGGGACGACTAGACGATGTTCCTCAGACACCTGG
TCTCCCCGTTGG
T С TAG TACAGAC TGTTCTCCT TAGAC TAG GACAAGAGACACAAACTACTCTTGTCCTC
GACCATGGACTG
ACTCTTGTAGGTCTCCAAGGACGGGTTGGGACGACCCCACGTCGACCTCCTGGGACTC
AAGGTCCGGTCG
TTGTAGTACGTGTCGTAGTTACC GATACACAAACT G T CGGACGT CGACAGACACACGG
ACGTACTCCACC
GGATGACCATGTAGGACTCGTAACCCCGGGTCTGACTGAAGGACAGACACAAGAAGAG
ACCGATGTGGAA
GTTCGTGTTCTACCACATACTCCTGTGGGACTGGGACAAGGGGAAGAGACCCCTCTGA
CACAAGTACTCG
TACCTCTTGGGACCGGACACCTAAGACCCGACGGTGTTGAGACTGAAGTCCTTGTCCC
CGTACTGACGGG
ACGACTTTCAGAGGTCGACACTGTTCTTGTGACCCCTGATGATACTCCTGTCGATACT
CCTGTAGAGACG
- 128 038966
GATGGACGACTCGTTCTTGTTACGGTAACTCGGGTCCTCGAAGTCGGTCTTGTCGTCC
GTGGGGTCGTGG
TCCGTCTTCGTCAAGTTACGGTGGTGGTAGGGACTCTTACTGTATCTCTTCTGTCTGG
GTACCAAACGGG
TGGCCTGGGGGTACGGGTTCTAGGTCTTACACTCGTCGAGACTGGACGACTACGACGA
CTCCGTCTCGGG
GTGGGGGGTACCGGACTCGGACAGACTGGACGTCCTCCGGTTCATACTTTGGAAGAGA
CTACTGGGGTCG
GGACCCCGGTAACTGTCGTTGTTGTCGGACAGACTCTACTGGGTGAAGTCCGGGGTCG
ACGTGGTGAGAC
CCCTGTACCACAAGTGGGGACTCAGACCGGACGTCGACTCCGACTTACTCTTCGACCC
GTGGTGACGACG
GTGACTCGACTTCTTCGACCTGAAGTTTCAGAGGTCGTGGTCGTTGTTGGACTAGTCG
TGGTAGGGGAGA
CTGTTGGACCGACGACCGTGACTGTTGTGGTCGTCGGACCCGGGGGGGTCGTACGGAC
ACGTGATACTGT
CGGTCGACCTGTGGTGGGACAAACCGTTCTTCTCGTCGGGGGACTGACTCAGACCCCC
GGGGGACTCGGA
CAGACTCCTCTTGTTACTGTCGTTCGACGACCTCAGACCGGACTACTTGTCGGTCCTC
TCGTCGACCCCG
TTCTTACACTCGTCGTCCCTCTAGTGGTCCTGGTGGGACGTCAGACTGGTCCTCCTCT
AACTGATACTAC
TGTGGTAGAGACACCTCTACTTCTTCCTCCTGAAACTGTAGATGCTGCTCCTGCTCTT
GGTCTCGGGGTC
CTCGAAGGTCTTCTTCTGGTCCGTGATGAAGTAACGACGACACCTCTCCGACACCCTG
ATACCGTACTCG
TCGTCGGGGGTACACGACTCCTTGTCCCGGGTCAGACCGAGACACGGGGTCAAGTTCT
TCCACCACAAGG
TCCTCAAGTGACTACCGTCGAAGTGGGTCGGGGACATGTCTCCCCTCGACTTACTCGT
GGACCCGGACGA
CCCGGGGATGTAGTCCCGACTCCACCTCCTGTTGTAGTACCACTGGAAGTCCTTGGTC
CGGTCGTCCGGG
ATGTCGAAGATGTCGTCGGACTAGTCGATACTCCTCCTGGTCTCCGTCCCCCGACTCG
GGTCCTTCTTGA
AACACTTCGGGTTACTTTGGTTCTGGATGAAGACCTTCCACGTCGTGGTGTACCGGGG
GTGGTTCCTACT
- 129 038966
CAAACTGACGTTCCGGACCCGGATGAAGAGACTACACCTGGACCTCTTCCTACACGTG
AGACCGGACTAA
CCGGGGGACGACCACACGGTGTGGTTGTGGGACTTGGGACGGGTACCGTCCGTCCACT
GACACGTCCTCA
AACGGGACAAGAAGTGGTAGAAACTACTTTGGTTСTCGAGCATGAAGTGAGTСTTGTA
CCTCTCCTTGAC
GTCCCGGGGGACGTTGTAGGTCTACCTCCTGGGGTGGAAGTTCCTCTTGATGTCCAAG
GTACGGTAGTTA
CCGATGTAGTACCTGTGGGACGGACCGGACCACTACCGGGTCCTGGTCTCCTAGTCCA
CCATGGACGACT
CGTACCCGTCGTTACTCTTGTAGGTGTCGTAGGTGAAGAGACCGGTACACAAGTGACA
CTCCTTCTTCCT
CCTCATGTTCTACCGGGACATGTTGGACATGGGACCCCACAAACTCTGACACCTCTAC
GACGGGTCGTTC
CGACCGTAGACCTCCCACCTCACGGACTAACCCCTCGTGGACGTACGACCGTACTCGT
GGGACAAGGACC
ACATGTCGTTGTTCACGGTCTGGGGGGACCCGTACCGGAGACCGGTGTAGTCCCTGAA
GGTCTAGTGACG
GAGACCGGTCATACCGGTCACCCGGGGGTTCGACCGGTCCGACGTGATGAGACCGTCG
TAGTTACGGACC
TCGTGGTTCCTCGGGAAGTCGACCTAGTTCCACCTGGACGACCGGGGGTACTAGTAGG
TACCGTAGTTCT
GGGTCCCCCGGTCCGTCTTCAAGTCGTCGGACATGTAGTCGGTCAAGTAGTAGTACAT
GTCGGACCTACC
GTTCTTCACCGTCTGGATGTCCCCGTTGTCGTGACCGTGGGACTACCACAAGAAACCG
TTACACCTGTCG
AGACCGTAGTTCGTGTTGTAGAAGTTGGGGGGGTAGTAACGGTCTATGTAGTCCGACG
TGGGGTGGGTGA
TGTCGTAGTCCTCGTGGGACTCCTACCTCGACTACCCGACACTGGACTTGTCGACGTC
GTACGGGGACCC
GTACCTCTCGTTCCGGTAGAGACTACGGGTCTAGTGACGGTCGTCGATGAAGTGGTTG
TACAAACGGTGG
ACCTCGGGGTCGTTCCGGTCCGACGTGGACGTCCCGTCCTCGTTACGGACCTCCGGGG
TCCAGTTGTTGG
GGTTCCTCACCGACGTCCACCTGAAGGTCTTCTGGTACTTCCACTGACCCCACTGGTG
GGTCCCCCACTT
- 130 038966
CTCGGACGACTGGTCGTACATACACTTCCTCAAGGACTAGTCGTCGTCGGTCCTACCG GTGGTCACCTGG
GACAAGAAGGTCTTACCGTTCCACTTCCACAAGGTCCCGTTGGTCCTGTCGAAGTGGG GACACCACTTGT
CGGACCTGGGGGGGGACGACTGGTCTATGGACTCCTAAGTGGGGGTCTCGACCCACGT GGTCTAACGGGA
CTCCTACCTCCACGACCCGACACTCCGGGTCCTGGACATGACT
SEQ ID NO: 29
MQIELSTCFFLCLLRFCFSATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKSFP FNTSWYKKTLFVEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTWITLKNMASHPVSLHAVG VSYWKASEGAEYDDQTSQREKEDDKVFPGGSHTYVWQVLKENGPMASDPLCLTYSYLSHVDLV KDLNSGLIGALLVCREGSLAKEKTQTLHKFILLFAVFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAW PKMHTVNGYVNRS LPGLIGCHRKSVYWHVIGMGT T PEVHSIFLEGHT FLVRNHRQAS LEIS PI TFLTAQTLLMDLGQFLLFCHISSHQHDGMEAYVKVDSCPEEPQLRMKNNEEAEDYDDDLTDSE MDWRFDDDNSPSFIQIRSVAKKHPKTWVHYIAAEEEDWDYAPLVLAPDDRSYKSQYLNNGPQ RIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILGPLLYGEVGDTLLIIFKNQASRPYNIYPHGI TDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTVEDGPTKSDPRCLTRYYSSFVNMERDL ASGLIGPLLICYKESVDQRGNQIMSDKRNVILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPAGVQLEDP EEQASNIMHSINGYVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHKMVYEDTLT LFPFSGETVFMSMENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALLKVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLS KNNAIEPRSFSQNSRHPSTRQKQFNATTIPENDIEKTDPWFAHRTPMPKIQNVSSSDLLMLLR QSPTPHGLSLSDLQEAKYETFSDDPSPGAIDSNNSLSEMTHFRPQLHHSGDMVFTPESGLQLR LNEKLGTTAATELKKLDFKVSSTSNNLISTIPSDNLAAGTDNTSSLGPPSMPVHYDSQLDTTL FGKKSSPLTESGGPLSLSEENNDSKLLESGLMNSQESSWGKNVSSREITRTTLQSDQEEIDYD DTISVEMKKEDFDIYDEDENQSPRSFQKKTRHYFIAAVERLWDYGMSSSPHVLRNRAQSGSVP QFKKWFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHLGLLGPYIRAEVEDNIMVTFRNQASRPYSFYSSLIS YEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTYFWKVQHHMAPTKDEFDCKAWAYFSDVDLEKDVHSGLIGP LLVCHTNTLNPAHGRQVTVQEFALFFTIFDETKSWYFTENMERNCRAPCNIQMEDPTFKENYR FHAINGYIMDTLPGLVMAQDQRIRWYLLSMGSNENIHSIHFSGHVFTVRKKEEYKMALYNLYP GVFETVEMLPSKAGIWRVECLIGEHLHAGMSTLFLVYSNKCQTPLGMASGHIRDFQITASGQY GQWAPKLARLHYSGSINAWSTKEPFSWIKVDLLAPMIIHGIKTQGARQKFSSLYISQFIIMYS LDGKKWQTYRGNSTGTLMVFFGNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTHYSIRSTLRMELMGC DLNSCSMPLGMESKAISDAQITASSYFTNMFATWSPSKARLHLQGRSNAWRPQVNNPKEWLQV DFQKTMKVTGVTTQGVKSLLTSMYVKEFLISSSQDGHQWTLFFQNGKVKVFQGNQDSFTPVVN SLDPPLLTRYLRIHPQSWVHQIALRMEVLGCEAQDLY
SEQ ID NO: 30
- 131 038966
ATGCAGATTGAGCTGAGCACCTGCTTCTTCCTGTGCCTGCTGAGGTTCTGCTTCTCTG CCACCAGGAGATACTACCTGGGGGCTGTGGAGCTGAGCTGGGACTACATGCAGTCTGACCTGG GGGAGCTGCCTGTGGATGCCAGGTTCCCCCCCAGAGTGCCCAAGAGCTTCCCCTTCAACACCT CTGTGGTGTACAAGAAGACCCTGTTTGTGGAGTTCACTGACCACCTGTTCAACATTGCCAAGC CCAGGCCCCCCTGGATGGGCCTGCTGGGCCCCACCATCCAGGCTGAGGTGTATGACACTGTGG TGATCACCCTGAAGAACATGGCCAGCCACCCTGTGAGCCTGCATGCTGTGGGGGTGAGCTACT GGAAGGCCTCTGAGGGGGCTGAGTATGATGACCAGACCAGCCAGAGGGAGAAGGAGGATGACA AGGTGTTCCCTGGGGGCAGCCACACCTATGTGTGGCAGGTGCTGAAGGAGAATGGCCCCATGG CCTCTGACCCCCTGTGCCTGACCTACAGCTACCTGAGCCATGTGGACCTGGTGAAGGACCTGA ACTCTGGCCTGATTGGGGCCCTGCTGGTGTGCAGGGAGGGCAGCCTGGCCAAGGAGAAGACCC AGACCCTGCACAAGTTCATCCTGCTGTTTGCTGTGTTTGATGAGGGCAAGAGCTGGCACTCTG AAACCAAGAACAGCCTGATGCAGGACAGGGATGCTGCCTCTGCCAGGGCCTGGCCCAAGATGC ACACTGTGAATGGCTATGTGAACAGGAGCCTGCCTGGCCTGATTGGCTGCCACAGGAAGTCTG TGTACTGGCATGTGATTGGCATGGGCACCACCCCTGAGGTGCACAGCATCTTCCTGGAGGGCC ACACCTTCCTGGTCAGGAACCACAGGCAGGCCAGCCTGGAGATCAGCCCCATCACCTTCCTGA CTGCCCAGACCCTGCTGATGGACCTGGGCCAGTTCCTGCTGTTCTGCCACATCAGCAGCCACC AGCATGATGGCATGGAGGCCTATGTGAAGGTGGACAGCTGCCCTGAGGAGCCCCAGCTGAGGA T GAAGAACAAT GAGGAGGC T GAGGAC TAT GAT GAT GACC T GAG T GAG T С T GAGAT GGAT GT GG TGAGGTTTGATGATGACAACAGCCCCAGCTTCATCCAGATCAGGTCTGTGGCCAAGAAGCACC CCAAGACCTGGGTGCACTACATTGCTGCTGAGGAGGAGGACTGGGACTATGCCCCCCTGGTGC TGGCCCCTGATGACAGGAGCTACAAGAGCCAGTACCTGAACAATGGCCCCCAGAGGATTGGCA GGAAGTACAAGAAGGTCAGGTTCATGGCCTACACTGATGAAACCTTCAAGACCAGGGAGGCCA TCCAGCATGAGTCTGGCATCCTGGGCCCCCTGCTGTATGGGGAGGTGGGGGACACCCTGCTGA TCATCTTCAAGAACCAGGCCAGCAGGCCCTACAACATCTACCCCCATGGCATCACTGATGTGA GGCCCCTGTACAGCAGGAGGCTGCCCAAGGGGGTGAAGCACCTGAAGGACTTCCCCATCCTGC CTGGGGAGATCTTCAAGTACAAGTGGACTGTGACTGTGGAGGATGGCCCCACCAAGTCTGACC CCAGGTGCCTGACCAGATACTACAGCAGCTTTGTGAACATGGAGAGGGACCTGGCCTCTGGCC TGATTGGCCCCCTGCTGATCTGCTACAAGGAGTCTGTGGACCAGAGGGGCAACCAGATCATGT CTGACAAGAGGAATGTGATCCTGTTCTCTGTGTTTGATGAGAACAGGAGCTGGTACCTGACTG AGAACATCCAGAGGTTCCTGCCCAACCCTGCTGGGGTGCAGCTGGAGGACCCTGAGTTCCAGG CCAGCAACATCATGCACAGCATCAATGGCTATGTGTTTGACAGCCTGCAGCTGTCTGTGTGCC TGCATGAGGTGGCCTACTGGTACATCCTGAGCATTGGGGCCCAGACTGACTTCCTGTCTGTGT TCTTCTCTGGCTACACCTTCAAGCACAAGATGGTGTATGAGGACACCCTGACCCTGTTCCCCT TCTCTGGGGAGACTGTGTTCATGAGCATGGAGAACCCTGGCCTGTGGATTCTGGGCTGCCACA ACTCTGACTTCAGGAACAGGGGCATGACTGCCCTGCTGAAAGTCTCCAGCTGTGACAAGAACA CTGGGGACTACTATGAGGACAGCTATGAGGACATCTCTGCCTACCTGCTGAGCAAGAACAATG
- 132 038966
CCATTGAGCCCAGGAGCTTCAGCCAGAATGCCACTAATGTGTCTAACAACAGCAACACCAGCA ATGACAGCAATGTGTCTCCCCCAGTGCTGAAGAGGCACCAGAGGGAGATCACCAGGACCACCC T GCAGT С T GACCAGGAGGAGAT T GAG TAT GAT GACACCAT С T С T GT GGAGAT GAAGTAGGAGG ACTTTGACATCTACGACGAGGACGAGAACCAGAGCCCCAGGAGCTTCCAGAAGAAGACCAGGC ACTACTTCATTGCTGCTGTGGAGAGGCTGTGGGACTATGGCATGAGCAGCAGCCCCCATGTGC TGAGGAACAGGGCCCAGTCTGGCTCTGTGCCCCAGTTCAAGAAGGTGGTGTTCCAGGAGTTCA CTGATGGCAGCTTCACCCAGCCCCTGTACAGAGGGGAGCTGAATGAGCACCTGGGCCTGCTGG GCCCCTACATCAGGGCTGAGGTGGAGGACAACATCATGGTGACCTTCAGGAACCAGGCCAGCA GGCCCTACAGCTTCTACAGCAGCCTGATCAGCTATGAGGAGGACCAGAGGCAGGGGGCTGAGC CCAGGAAGAACTTTGTGAAGCCCAATGAAACCAAGACCTACTTCTGGAAGGTGCAGCACCACA TGGCCCCCACCAAGGATGAGTTTGACTGCAAGGCCTGGGCCTACTTCTCTGATGTGGACCTGG AGTAGGATGTGCACTCTGGCCTGATTGGCCCCCTGCTGGTGTGCCACACCTACACCCTGTACC CTGCCCATGGCAGGCAGGTGACTGTGCAGGAGTTTGCCCTGTTCTTCACCATCTTTGATGTAA CCTAGAGCTGGTACTTCACTGAGTACATGGAGAGGTACTGCAGGGCCCCCTGCTACATCCAGA TGGAGGACCCCACCTTCTAGGAGTACTACAGGTTCCATGCCATCTATGGCTACATCATGGACA CCCTGCCTGGCCTGGTGATGGCCCAGGACCAGAGGATCAGGTGGTACCTGCTGAGCATGGGCA GCTATGAGTACATCCACAGCATCCACTTCTCTGGCCATGTGTTCACTGTGAGGTAGTAGGAGG AGTACTAGATGGCCCTGTACTACCTGTACCCTGGGGTGTTTGAGACTGTGGAGATGCTGCCCA GCTAGGCTGGCATCTGGAGGGTGGAGTGCCTGATTGGGGAGCACCTGCATGCTGGCATGAGCA CCCTGTTCCTGGTGTACAGCTACTAGTGCCAGACCCCCCTGGGCATGGCCTCTGGCCACATCA GGGACTTCCAGATCACTGCCTCTGGCCAGTATGGCCAGTGGGCCCCCTAGCTGGCCAGGCTGC ACTACTCTGGCAGCATCTATGCCTGGAGCACCTAGGAGCCCTTCAGCTGGATCTAGGTGGACC TGCTGGCCCCCATGATCATCCATGGCATCTAGACCCAGGGGGCCAGGCAGTAGTTCAGCAGCC TGTACATCAGCCAGTTCATCATCATGTACAGCCTGGATGGCTAGTAGTGGCAGACCTACAGGG GCTACAGCACTGGCACCCTGATGGTGTTCTTTGGCTATGTGGACAGCTCTGGCATCTAGCACA ACATCTTCTACCCCCCCATCATTGCCAGATACATCAGGCTGCACCCCACCCACTACAGCATCA GGAGCACCCTGAGGATGGAGCTGATGGGCTGTGACCTGTACAGCTGCAGCATGCCCCTGGGCA TGGAGAGCTAGGCCATCTCTGATGCCCAGATCACTGCCAGCAGCTACTTCACCTACATGTTTG CCACCTGGAGCCCCAGCTAGGCCAGGCTGCACCTGCAGGGCAGGAGCTATGCCTGGAGGCCCC AGGTCTACTACCCCTAGGAGTGGCTGCAGGTGGACTTCCAGTAGACCATGTAGGTGACTGGGG TGACCACCCAGGGGGTGTAGAGCCTGCTGACCAGCATGTATGTGTAGGAGTTCCTGATCAGCA GCAGCCAGGATGGCCACCAGTGGACCCTGTTCTTCCAGTATGGCTAGGTGTAGGTGTTCCAGG GCTACCAGGACAGCTTCACCCCTGTGGTGTACAGCCTGGACCCCCCCCTGCTGACCAGATACC TGAGGATTCACCCCCAGAGCTGGGTGCACCAGATTGCCCTGAGGATGGAGGTGCTGGGCTGTG AGGCCCAGGACCTGTACTGA
SEQ ID NO: 31
- 133 038966
TAC G Т С ТAAC Т С GAC Т С G Т G GAC GAAGAAG GACAC G GAC GAC Т С СAAGAC GAAGAGAC GGTGGTCCTCTATGATGGACCCCCGACACCTCGACTCGACCCTGATGTACGTCAGACTGGACC CCCTCGACGGACACCTACGGTCCAAGGGGGGGTCTCACGGGTTCTCGAAGGGGAAGTTGTGGA GACACCACATGTTCTTCTGGGACAAACACCTCAAGTGACTGGTGGACAAGTTGTAACGGTTCG GGTCCGGGGGGACCTACCCGGACGACCCGGGGTGGTAGGTCCGACTCCACATACTGTGACACC ACTAGTGGGACTTCTTGTACCGGTCGGTGGGACACTCGGACGTACGACACCCCCACTCGATGA CCTTCCGGAGACTCCCCCGACTCATACTACTGGTCTGGTCGGTCTCCCTCTTCCTCCTACTGT TCCACAAGGGACCCCCGTCGGTGTGGATACACACCGTCCACGACTTCCTCTTACCGGGGTACC GGAGACTGGGGGACACGGACTGGATGTCGATGGACTCGGTACACCTGGACCACTTCCTGGACT TGAGACCGGACTAACCCCGGGACGACCACACGTCCCTCCCGTCGGACCGGTTCCTCTTCTGGG ТСТGGGACGТGТТСAAGТAGGACGACАААСGACАСАААСТАСТСССGТТСТСGACСGТGAGAC TTTGGTTCTTGTCGGACTACGTCCTGTCCCTACGACGGAGACGGTCCCGGACCGGGTTCTACG TGTGACACTTACCGATACACTTGTCCTCGGACGGACCGGACTAACCGACGGTGTCCTTCAGAC ACATGACCGTACACTAACCGTACCCGTGGTGGGGACTCCACGTGTCGTAGAAGGACCTCCCGG TGTGGAAGGACCAGTCCTTGGTGTCCGTCCGGTCGGACCTCTAGTCGGGGTAGTGGAAGGACT GACGGGTCTGGGACGACTACCTGGACCCGGTCAAGGACGACAAGACGGTGTAGTCGTCGGTGG TCGTACTACCGTACCTCCGGATACACTTCCACCTGTCGACGGGACTCCTCGGGGTCGACTCCT ACTTCTTGTTACTCCTCCGACTCCTGATACTACTACTGGACTGACTGAGACTCTACCTACACC ACTCCAAACTACTACTGTTGTCGGGGTCGAAGTAGGTCTAGTCCAGACACCGGTTCTTCGTGG GGTTCTGGACCCACGTGATGTAACGACGACTCCTCCTCCTGACCCTGATACGGGGGGACCACG ACCGGGGACTACTGTCCTCGATGTTCTCGGTCATGGACTTGTTACCGGGGGTCTCCTAACCGT CCTTCATGTTCTTCCAGTCCAAGTACCGGATGTGACTACTTTGGAAGTTCTGGTCCCTCCGGT AGGTCGTACTCAGACCGTAGGACCCGGGGGACGACATACCCCTCCACCCCCTGTGGGACGACT AGTAGAAGTTCTTGGTCCGGTCGTCCGGGATGTTGTAGATGGGGGTACCGTAGTGACTACACT CCGGGGACATGTCGTCCTCCGACGGGTTCCCCCACTTCGTGGACTTCCTGAAGGGGTAGGACG GACCCCTCTAGAAGTTCATGTTCACCTGACACTGACACCTCCTACCGGGGTGGTTCAGACTGG GGTCCACGGACTGGTCTATGATGTCGTCGAAACACTTGTACCTCTCCCTGGACCGGAGACCGG ACTAACCGGGGGACGACTAGACGATGTTCCTCAGACACCTGGTCTCCCCGTTGGTCTAGTACA GAC TGTTCTCCT ТАСAC TAG GACAAGAGACАСАААСTACTCTTGTCCTCGACCAT GGAC T GAC TCTTGTAGGTCTCCAAGGACGGGTTGGGACGACCCCACGTCGACCTCCTGGGACTCAAGGTCC GGTCGTTGTAGTACGTGTCGTAGTTACCGATACACAAACTGTCGGACGTCGACAGACACACGG AC G TAC T С СAC C G GAT GAC CAT G TAG GAC T C G TAAC CCCGGGTCT GAC T GAAG GACAGACACA AGAAGAGACCGATGTGGAAGTTCGTGTTCTACCACATACTCCTGTGGGACTGGGACAAGGGGA AGAGACCCCTCTGACACAAGTACTCGTACCTCTTGGGACCGGACACCTAAGACCCGACGGTGT TGAGACTGAAGTCCTTGTCCCCGTACTGACGGGACGACTTTCAGAGGTCGACACTGTTCTTGT GACCCCTGATGATACTCCTGTCGATACTCCTGTAGAGACGGATGGACGACTCGTTCTTGTTAC
- 134 038966
GGTAACTCGGGTCCTCGAAGTCGGTCTTACGGTGATTACACAGATTGTTGTCGTTGTGGTCGT TACTGTCGTTACACAGAGGGGGTCACGACTTCTCCGTGGTCTCCCTCTAGTGGTCCTGGTGGG ACGTCAGACTGGTCCTCCTCTAACTGATACTACTGTGGTAGAGACACCTCTACTTCTTCCTCC TGAAACTGTAGATGCTGCTCCTGCTCTTGGTCTCGGGGTCCTCGAAGGTCTTCTTCTGGTCCG TGATGAAGTAACGACGACACCTCTCCGACACCCTGATACCGTACTCGTCGTCGGGGGTACACG ACTCCTTGTCCCGGGTCAGACCGAGACACGGGGTCAAGTTCTTCCACCACAAGGTCCTCAAGT GACTACCGTCGAAGTGGGTCGGGGACATGTCTCCCCTCGACTTACTCGTGGACCCGGACGACC CGGGGATGTAGTCCCGACTCCACCTCCTGTTGTAGTACCACTGGAAGTCCTTGGTCCGGTCGT CCGGGATGTCGAAGATGTCGTCGGACTAGTCGATACTCCTCCTGGTCTCCGTCCCCCGACTCG GGTCCTTCTTGAAACACTTCGGGTTACTTTGGTTCTGGATGAAGACCTTCCACGTCGTGGTGT ACCGGGGGTGGTTCCTACTCAAACTGACGTTCCGGACCCGGATGAAGAGACTACACCTGGACC TCTTCCTACACGTGAGACCGGACTAACCGGGGGACGACCACACGGTGTGGTTGTGGGACTTGG GACGGGTACCGTCCGTCCACTGACACGTCCTCAAACGGGACAAGAAGTGGTAGAAACTACTTT GGTTCTCGACCATGAAGTGACTCTTGTACCTCTCCTTGACGTCCCGGGGGACGTTGTAGGTCT ACCTCCTGGGGTGGAAGTTCCTCTTGATGTCCAAGGTACGGTAGTTACCGATGTAGTACCTGT GGGACGGACCGGACCACTACCGGGTCCTGGTCTCCTAGTCCACCATGGACGACTCGTACCCGT CGTTACTCTTGTAGGTGTCGTAGGTGAAGAGACCGGTACACAAGTGACACTCCTTCTTCCTCC TCATGTTCTACCGGGACATGTTGGACATGGGACCCCACAAACTCTGACACCTCTACGACGGGT CGTTCCGACCGTAGACCTCCCACCTCACGGACTAACCCCTCGTGGACGTACGACCGTACTCGT GGGACAAGGACCACATGTCGTTGTTCACGGTCTGGGGGGACCCGTACCGGAGACCGGTGTAGT CCCTGAAGGTCTAGTGACGGAGACCGGTCATACCGGTCACCCGGGGGTTCGACCGGTCCGACG TGATGAGACCGTCGTAGTTACGGACCTCGTGGTTCCTCGGGAAGTCGACCTAGTTCCACCTGG ACGACCGGGGGTACTAGTAGGTACCGTAGTTCTGGGTCCCCCGGTCCGTCTTCAAGTCGTCGG ACATGTAGTCGGTCAAGTAGTAGTACATGTCGGACCTACCGTTCTTCACCGTCTGGATGTCCC CGTTGTCGTGACCGTGGGACTACCACAAGAAACCGTTACACCTGTCGAGACCGTAGTTCGTGT TGTAGAAGTTGGGGGGGTAGTAACGGTCTATGTAGTCCGACGTGGGGTGGGTGATGTCGTAGT CCTCGTGGGACTCCTACCTCGACTACCCGACACTGGACTTGTCGACGTCGTACGGGGACCCGT ACCTCTCGTTCCGGTAGAGACTACGGGTCTAGTGACGGTCGTCGATGAAGTGGTTGTACAAAC GGTGGACCTCGGGGTCGTTCCGGTCCGACGTGGACGTCCCGTCCTCGTTACGGACCTCCGGGG TCCAGTTGTTGGGGTTCCTCACCGACGTCCACCTGAAGGTCTTCTGGTACTTCCACTGACCCC ACTGGTGGGTCCCCCACTTCTCGGACGACTGGTCGTACATACACTTCCTCAAGGACTAGTCGT CGTCGGTCCTACCGGTGGTCACCTGGGACAAGAAGGTCTTACCGTTCCACTTCCACAAGGTCC CGTTGGTCCTGTCGAAGTGGGGACACCACTTGTCGGACCTGGGGGGGGACGACTGGTCTATGG ACTCCTAAGTGGGGGTCTCGACCCACGTGGTCTAACGGGACTCCTACCTCCACGACCCGACAC TCCGGGTCCTGGACATGACT
SEQ ID NO: 32
- 135 038966
MQIELSTCFFLCLLRFCFSATRRYYLGAVELSWDYMQSDLGELPVDARFPPRVPKSFP
FNTSWYKKTLF
VEFTDHLFNIAKPRPPWMGLLGPTIQAEVYDTWITLKNMASHPVSLHAVGVSYWKAS
EGAEYDDQTSQR
EKEDDKVFPGGSHTYVWQVLKENGPMASDPLCLTYSYLSHVDLVKDLNSGLIGALLVC
REGSLAKEKTQT
LHKFILLFAVFDEGKSWHSETKNSLMQDRDAASARAWPKMHTVNGYVNRSLPGLIGCH
RKSVYWHVIGMG
TTPEVHSIFLEGHTFLVRNHRQASLEISPITFLTAQTLLMDLGQFLLFCHISSHQHDG
MEAYVKVDSCPE
EPQLRMKNNEEAEDYDDDLTDSEMDWRFDDDNSPSFIQIRSVAKKHPKTWVHYIAAE
EEDWDYAPLVLA
PDDRSYKSQYLNNGPQRIGRKYKKVRFMAYTDETFKTREAIQHESGILGPLLYGEVGD
TLLIIFKNQASR
PYNIYPHGITDVRPLYSRRLPKGVKHLKDFPILPGEIFKYKWTVTVEDGPTKSDPRCL
TRYYSSFVNMER
DLASGLIGPLLICYKESVDQRGNQIMSDKRNVILFSVFDENRSWYLTENIQRFLPNPA
GVQLEDPEFQAS
NIMHSINGYVFDSLQLSVCLHEVAYWYILSIGAQTDFLSVFFSGYTFKHKMVYEDTLT
LFPFSGETVFMS
MENPGLWILGCHNSDFRNRGMTALLKVSSCDKNTGDYYEDSYEDISAYLLSKNNAIEP
RSFSQNATNVSN
NSNTSNDSNVSPPVLKRHQREITRTTLQSDQEEIDYDDTISVEMKKEDFDIYDEDENQ
SPRSFQKKTRHY
FIAAVERLWDYGMSSSPHVLRNRAQSGSVPQFKKWFQEFTDGSFTQPLYRGELNEHL
GLLGPYIRAEVE
DNIMVTFRNQASRPYSFYSSLISYEEDQRQGAEPRKNFVKPNETKTYFWKVQHHMAPT
KDEFDCKAWAYF
SDVDLEKDVHSGLIGPLLVCHTNTLNPAHGRQVTVQEFALFFTIFDETKSWYFTENME
RNCRAPCNIQME
DPTFKENYRFHAINGYIMDTLPGLVMAQDQRIRWYLLSMGSNENIHSIHFSGHVFTVR
KKEEYKMALYNL
YPGVFETVEMLPSKAGIWRVECLIGEHLHAGMSTLFLVYSNKCQTPLGMASGHIRDFQ
ITASGQYGQWAP
KLARLHYSGSINAWSTKEPFSWIKVDLLAPMIIHGIKTQGARQKFSSLYISQFIIMYS
LDGKKWQTYRGN
- 136 038966
STGTLMVFFGNVDSSGIKHNIFNPPIIARYIRLHPTHYSIRSTLRMELMGCDLNSCSM
PLGMESKAISDA
QITASSYFTNMFATWSPSKARLHLQGRSNAWRPQVNNPKEWLQVDFQKTMKVTGVTTQ
GVKSLLTSMYVK
EFLISSSQDGHQWTLFFQNGKVKVFQGNQDSFTPVVNSLDPPLLTRYLRIHPQSWVHQ
IALRMEVLGCEA
QDLY
SEQ ID NO: 33
GGCGCCTCTAGAGTTATAACCGGTAATCGGTATAATAAGTAACCAATATATCGTATTT
AGTTATAACCGA
TAAC C G G TAAC G TAT G СAACATAGATATAGTAT TATACAT GTAAATATAACCGAGTAG
AGGTTATACTGG
C G G TAGAAC C G TAAC TAATAAC T GAT СAATAAT TATCATTAGTTAATGCCC CAG TAAT
CAAGTATCGGGT
ATATACCTCAAGGCGCAATGTATTGAATGCCATTTACCGGGCGGACCGACTGGCGGGT
TGCTGGGGGCGG
GTAACTGCAGTTATTACTGCATACAAGGGTATCATTGCGGTTATCCCTGAAAGGTAAC
TGCAGTTACCCA
С С T CATAAATGСCAT T T GACGGGT GAACCGTCATGTAGTT CACATAGTATACGGTTCA
GGCGGGGGATAA
CTGCAGTTACTGCCATTTACCGGGCGGACCGTAATACGGGTCATGTACTGGAATGCCC
TGAAAGGATGAA
С C G T CAT G TAGAT G CATAATCAGTAGCGATAAT GGTACСAC TACGССAAAACCGT CAT
GTGGTTACCCGC
ACCTATCGCCAAACTGAGTGCCCCTAAAGGTTCAGAGGTGGGGTAACTGCAGTTACCC
TCAAACAAAACC
GTGGTTTTAGTTGCCCTGAAAGGTTTTACAGCATTATTGGGGCGGGGCAACTGCGTTT
ACCCGCCATCCG
CACAT G С СAC С С T С CAGATATAT T C G T С T C GAG CAAAT СAC T T G G CAG T С TAG T GAT C
TTCGAAATAACG
СCATCAAATAGTGTCAATTTAACGATTGCGTCAGTCACGAAGACTGTGTTGTCAGAGC
TTGAATTCGACG
TCTTCAACCAGCACTCCGTGACCCGTCCGATCG

Claims (20)

1. Лентивирусный вектор для генной терапии, псевдотипированный гемагглютининнейраминидазой HN и F-белками из респираторного парамиксовируса, содержащий гибридный энхансер/промотор человеческих CMV и EF1a (hCEF) и трансген, кодирующий терапевтический белок, причем между hCEF и трансгеном отсутствует какой-либо интрон.
2. Лентивирусный вектор по п.1, выбранный из вектора на основе вируса иммунодефицита человека (HIV), вируса иммунодефицита обезьян (SIV), вируса иммунодефицита кошачьих (FIV), вируса инфекционной анемии лошадей (EIAV) и вируса висна/маэди.
3. Лентивирусный вектор по п.1 или 2, представляющий собой вектор на основе SIV.
4. Лентивирусный вектор по любому из пп.1-3, где респираторный парамиксовирус представляет собой вирус Сендай.
5. Лентивирусный вектор по любому из пп.1-4, в котором терапевтический белок представляет собой (a) секретируемый терапевтический белок, в частности α-1-антитрипсин (А1АТ), фактор VIII, поверхностно-активный белок В (SFTPB), фактор VII, фактор IX, фактор X, фактор Cl, фактор фон Виллебранда, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF) или моноклональное антитело к инфекционному агенту; или (b) CFTR, DNAH5, DNAH11, DNAI1 или DNAI2.
6. Лентивирусный вектор по любому из пп.1-5, в котором терапевтический белок представляет собой CFTR.
7. Лентивирусный вектор по любому из пп.1-5, в котором терапевтический белок представляет собой А1АТ.
8. Лентивирусный вектор по любому из пп.1-5, в котором терапевтический белок представляет собой FVIII.
9. Способ получения лентивирусного вектора, определенного в любом из пп.1-8, включающий сле
- 137 038966 дующие последовательные стадии:
(а) выращивание клеток HEK293T или 293Т/17 в суспензии;
(b) трансфекция клеток с использованием (i) плазмиды с геномом вектора, содержащей весь генетический материал, который упакован в конечный лентивирусный вектор, включая трансген, кодирующий терапевтический белок, под контролем промотора hCEF; и (ii) одной или более производящих плазмид, кодирующих белки Gag-Pol, Rev, F и HN;
(c) добавление нуклеазы;
(d) сбор лентивируса;
(e) добавление трипсина и (f) очистка.
10. Способ по п.9, в котором используют четыре производящие плазмиды.
11. Способ по п.9 или 10, где:
(a) плазмида с геномом вектора соответствует плазмиде, выбранной из pGM326 согласно фиг. 1А, pGM407 согласно фиг. 15А или одной из pGM411-pGM414 согласно фиг. 22C-F; и (b) производящая плазмида, кодирующая белок Gag-Pol, соответствует pGM297 согласно фиг. 1В; производящая плазмида, кодирующая белок Rev, соответствует pGM299 согласно фиг. 1С; производящая плазмида, кодирующая белок F, соответствует pGM301 согласно фиг. 1D; и/или производящая плазмида, кодирующая белок HN, соответствует pGM303 согласно фиг. 1E.
12. Способ по пп.9-11, где стадия очистки включает проведение хроматографии.
13. Способ лечения заболевания, включающий введение пациенту лентивирусного вектора по любому из пп.1-8.
14. Способ по п.13, где заболевание представляет собой заболевание легких, выбранное из муковисцидоза (КФ); первичной цилиарной дискинезии (ПЦД); недостаточности поверхностно-активного белка В (ПАБ-В); недостаточности α-1-антитрипсина (А1АТ); легочного альвеолярного протеиноза (ЛАП) и хронического обструктивного заболевания легких (ХОБЛ).
15. Способ по п.13, в котором лентивирусный вектор содержит трансген, кодирующий терапевтический белок, который представляет собой фактор VIII, и заболевание представляет собой гемофилию.
16. Применение лентивирусного вектора по любому из пп.1-6 в лечении КФ.
17. Применение лентивирусного вектора по любому из пп.1-5 или 7 в лечении недостаточности α-1антитрипсина (А1АТ).
18. Применение лентивирусного вектора по любому из пп.1-5 или 8 в лечении гемофилии.
19. Клетка-хозяин, содержащая вектор по любому из пп.1-8.
20. Композиция для применения в генной терапии, содержащая лентивирусный вектор по любому из пп.1-8 и фармацевтически приемлемый носитель.
EA201692361A 2014-05-21 2015-04-23 Лентивирусный вектор для генной терапии, способ его получения и его применение EA038966B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB1409089.8A GB2526339A (en) 2014-05-21 2014-05-21 Lentiviral vectors
PCT/GB2015/051201 WO2015177501A1 (en) 2014-05-21 2015-04-23 Lentiviral vectors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201692361A1 EA201692361A1 (ru) 2017-05-31
EA038966B1 true EA038966B1 (ru) 2021-11-16

Family

ID=51135270

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201692361A EA038966B1 (ru) 2014-05-21 2015-04-23 Лентивирусный вектор для генной терапии, способ его получения и его применение

Country Status (20)

Country Link
US (1) US10704061B2 (ru)
EP (1) EP3145949B1 (ru)
JP (1) JP6637444B2 (ru)
AU (1) AU2015263150B2 (ru)
CA (1) CA2947125C (ru)
CY (1) CY1123413T1 (ru)
DK (1) DK3145949T3 (ru)
EA (1) EA038966B1 (ru)
ES (1) ES2805045T3 (ru)
GB (1) GB2526339A (ru)
HR (1) HRP20200930T1 (ru)
HU (1) HUE051269T2 (ru)
LT (1) LT3145949T (ru)
ME (1) ME03789B (ru)
PL (1) PL3145949T3 (ru)
PT (1) PT3145949T (ru)
RS (1) RS60586B1 (ru)
SI (1) SI3145949T1 (ru)
UA (1) UA122127C2 (ru)
WO (1) WO2015177501A1 (ru)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR102015012334A2 (pt) * 2015-05-27 2016-11-29 Fundação Hemoct De Ribeirão Preto Fundherp processo de produção do fator vii de coagulação sanguínea e fator vii de coagulação sanguínea
DK3377637T3 (da) 2016-04-08 2020-05-18 Krystal Biotech Inc Sammensætninger til anvendelse i fremgangsmåder til behandling af sår, lidelser og sygdomme i huden
JP2018174874A (ja) * 2017-04-19 2018-11-15 国立大学法人 東京医科歯科大学 上皮細胞の水分泌機能測定方法
GB201814590D0 (en) * 2018-09-07 2018-10-24 Oxford Biomedica Ltd Viral vector production system
CA3094345A1 (en) 2018-04-12 2019-10-17 Krystal Biotech, Inc. Compositions and methods for the treatment of autosomal recessive congenital ichthyosis
JP7300764B2 (ja) * 2018-07-02 2023-06-30 キュラミス カンパニー・リミテッド 細胞融合技術を用いた遺伝子及び細胞治療剤、並びにその用途
WO2020009444A1 (ko) * 2018-07-02 2020-01-09 서울대학교산학협력단 세포융합 기술을 이용한 유전자 및 세포 치료제 및 이의 용도
CA3112627A1 (en) 2018-09-24 2020-04-02 Krystal Biotech, Inc. Compositions and methods for the treatment of netherton syndrome
CN113874513A (zh) * 2019-03-13 2021-12-31 世代生物公司 非病毒dna载体及其用于表达fviii治疗剂的用途
CN112575034B (zh) * 2019-09-29 2023-04-25 济南赛尔生物科技股份有限公司 一种治疗a型血友病的产品及应用
US20210189427A1 (en) * 2019-12-20 2021-06-24 Krystal Biotech, Inc. Compositions and methods for gene delivery to the airways and/or lungs
AU2021264465A1 (en) * 2020-04-27 2022-12-15 University Of Iowa Research Foundation Compositions and methods for the treatment of cystic fibrosis
US20230190871A1 (en) 2020-05-20 2023-06-22 Sana Biotechnology, Inc. Methods and compositions for treatment of viral infections
WO2021252549A1 (en) 2020-06-09 2021-12-16 Inozyme Pharma, Inc. Soluble enpp1 or enpp3 proteins and uses thereof
JP2023540705A (ja) 2020-08-28 2023-09-26 サナ バイオテクノロジー，インコーポレイテッド 修飾された抗ウイルス結合剤
GB202100688D0 (en) * 2021-01-19 2021-03-03 Autolus Ltd Process
GB202102832D0 (en) * 2021-02-26 2021-04-14 Ip2Ipo Innovations Ltd Retroviral vectors
JP2024513826A (ja) 2021-04-02 2024-03-27 クリスタル バイオテック インコーポレイテッド がん治療のためのウイルスベクター
GB202105278D0 (en) 2021-04-13 2021-05-26 Imperial College Innovations Ltd Cell therapy
GB202105276D0 (en) * 2021-04-13 2021-05-26 Imperial College Innovations Ltd Delivery of gene therapy vectors
CN117916383A (zh) * 2021-07-19 2024-04-19 2赛文缇生物公司 载体制备方法
WO2023114949A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 Sana Biotechnology, Inc. Methods and systems of particle production
WO2023133595A2 (en) 2022-01-10 2023-07-13 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023150647A1 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Sana Biotechnology, Inc. Methods of repeat dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
US20240024515A1 (en) 2022-04-11 2024-01-25 Imperial College Of Science, Technology And Medicine Combination treatment
WO2024026377A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Sana Biotechnology, Inc. Methods of transduction using a viral vector and inhibitors of antiviral restriction factors
WO2024044655A1 (en) 2022-08-24 2024-02-29 Sana Biotechnology, Inc. Delivery of heterologous proteins
GB202212472D0 (en) * 2022-08-26 2022-10-12 Ip2Ipo Innovations Ltd Retroviral vectors
WO2024057315A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Yeda Research And Development Co. Ltd. Compositions and methods for virotherapy

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003029274A2 (en) * 2001-09-28 2003-04-10 University Of North Carolina At Chapel Hill Paramyxoviruses as gene transfer vectors to lung cells
WO2007110628A2 (en) * 2006-03-28 2007-10-04 Isis Innovation Limited Compositions and methods for therapy of cystic fibrosis
EP1950307A1 (en) * 2005-10-28 2008-07-30 Dnavec Research Inc. Gene transfer into airway epithelial stem cell by using lentiviral vector pseudotyped with rna virus or dna virus spike protein

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2360347C (en) * 1998-12-31 2013-05-07 Chiron Corporation Improved expression of hiv polypeptides and production of virus-like particles
KR100807016B1 (ko) * 2000-06-01 2008-02-25 가부시키가이샤 디나벡크 겐큐쇼 헤마글루티닌 활성을 갖는 막단백질을 포함하는 슈도타입레트로바이러스 벡터
AU2002343458B2 (en) * 2001-10-02 2008-03-20 Institut Clayton De La Recherche Methods and compositions relating to restricted expression lentiviral vectors and their applications
EP1950303A1 (de) 2007-01-26 2008-07-30 Bayer CropScience AG Genetisch modifizierte Pflanzen, die eine Stärke mit geringem Amylosegehalt und erhöhtem Quellvermögen synthetisieren
DK2191001T3 (en) * 2007-04-09 2016-09-19 Univ Florida RAAV VECTOR COMPOSITIONS WITH TYROSIN MODIFIED CAPSIDE PROTEINS AND PROCEDURES FOR USE THEREOF

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003029274A2 (en) * 2001-09-28 2003-04-10 University Of North Carolina At Chapel Hill Paramyxoviruses as gene transfer vectors to lung cells
EP1950307A1 (en) * 2005-10-28 2008-07-30 Dnavec Research Inc. Gene transfer into airway epithelial stem cell by using lentiviral vector pseudotyped with rna virus or dna virus spike protein
WO2007110628A2 (en) * 2006-03-28 2007-10-04 Isis Innovation Limited Compositions and methods for therapy of cystic fibrosis

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHUAH M K L, COLLEN D, VANDENDRIESSCHE T: "GENE THERAPY FOR HEMOPHILIA", THE JOURNAL OF GENE MEDICINE, JOHN WILEY & SONS, INC, US, vol. 03, no. 01, 1 January 2001 (2001-01-01), US , pages 03 - 20, XP009017044, ISSN: 1099-498X, DOI: 10.1002/1521-2254(200101/02)3:1<3::AID-JGM167>3.0.CO;2-H *
DANIELA ZYCHLINSKI, AXEL SCHAMBACH, UTE MODLICH, TOBIAS MAETZIG, JOHANN MEYER, ELKE GRASSMAN, ANJALI MISHRA, CHRISTOPHER BAUM: "Physiological Promoters Reduce the Genotoxic Risk of Integrating Gene Vectors", MOLECULAR THERAPY, NO LONGER PUBLISHED BY ELSEVIER, vol. 16, no. 4, 1 April 2008 (2008-04-01), pages 718 - 725, XP055199418, ISSN: 15250016, DOI: 10.1038/mt.2008.5 *
JAMES CRONIN, ZHANG XIAN-YANG, REISER JAKOB: "Altering the Tropism of Lentiviral Vectors through Pseudotyping", CURRENT GENE THERAPY, vol. 5, no. 4, 1 August 2005 (2005-08-01), pages 387 - 398, XP055199682, ISSN: 15665232, DOI: 10.2174/1566523054546224 *
JOHN F. ENGELHARDT: "The lung as a metabolic factory for gene therapy", JOURNAL OF CLINICAL INVESTIGATION, vol. 110, no. 4, 15 August 2002 (2002-08-15), pages 429 - 432, XP055199495, ISSN: 00219738, DOI: 10.1172/JCI200216443 *
KATSUYUKI MITOMO, GRIESENBACH UTA, INOUE MAKOTO, SOMERTON LUCINDA, MENG CUIXIANG, AKIBA EIJI, TABATA TOSHIAKI, UEDA YASUJI, FRANKE: "Toward Gene Therapy for Cystic Fibrosis Using a Lentivirus Pseudotyped With Sendai Virus Envelopes", MOLECULAR THERAPY, NO LONGER PUBLISHED BY ELSEVIER, vol. 18, no. 6, 1 June 2010 (2010-06-01), pages 1173 - 1182, XP055199531, ISSN: 15250016, DOI: 10.1038/mt.2010.13 *
NAKAJIMA T, ET AL.: "DEVELOPMENT OF NOVEL SIMIAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS VECTORS CARRYINGA DUAL GENE EXPRESSION SYSTEM", HUMAN GENE THERAPY, MARY ANN LIEBERT, INC. PUBLISHERS, GB, vol. 11, no. 13, 1 September 2000 (2000-09-01), GB , pages 1863 - 1874, XP001033905, ISSN: 1043-0342, DOI: 10.1089/10430340050129486 *
SCOTT R. WITTING, LIN-HONG LI, APARNA JASTI, CORNELL ALLEN, KENNETH CORNETTA, JAMES BRADY, RAMA SHIVAKUMAR, MADHUSUDAN V. PESHWA: "Efficient Large Volume Lentiviral Vector Production Using Flow Electroporation", HUMAN GENE THERAPY, MARY ANN LIEBERT, vol. 23, no. 2, 1 February 2012 (2012-02-01), pages 243 - 249, XP055143670, ISSN: 10430342, DOI: 10.1089/hum.2011.088 *

Also Published As

Publication number Publication date
RS60586B1 (sr) 2020-08-31
PL3145949T3 (pl) 2021-01-25
US10704061B2 (en) 2020-07-07
CA2947125A1 (en) 2015-11-26
WO2015177501A1 (en) 2015-11-26
EA201692361A1 (ru) 2017-05-31
HUE051269T2 (hu) 2021-03-01
EP3145949B1 (en) 2020-04-08
EP3145949A1 (en) 2017-03-29
GB2526339A (en) 2015-11-25
US20170096684A1 (en) 2017-04-06
GB201409089D0 (en) 2014-07-02
ES2805045T3 (es) 2021-02-10
ME03789B (me) 2021-04-20
CA2947125C (en) 2023-02-28
JP6637444B2 (ja) 2020-01-29
UA122127C2 (uk) 2020-09-25
SI3145949T1 (sl) 2020-08-31
HRP20200930T1 (hr) 2020-09-18
PT3145949T (pt) 2020-07-13
AU2015263150A1 (en) 2016-11-10
LT3145949T (lt) 2020-08-25
AU2015263150B2 (en) 2020-04-16
CY1123413T1 (el) 2021-12-31
DK3145949T3 (da) 2020-06-29
JP2017521049A (ja) 2017-08-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10704061B2 (en) Lentiviral vectors
AU2020260485B2 (en) Gene therapies for lysosomal disorders
RU2650860C2 (ru) Векторы для экспрессии простатоассоциированных антигенов
RU2758489C2 (ru) Композиции и способы для экспрессии нескольких биологически активных полипептидов с одного вектора для лечения заболеваний сердца и других патологий
US20030119104A1 (en) Chromosome-based platforms
KR20220078607A (ko) 융합 단백질들을 이용한 tcr 재프로그래밍을 위한 조성물 및 방법들
KR20230066360A (ko) 신경퇴행성 장애를 위한 유전자 요법
KR20210150486A (ko) 리소좀 장애에 대한 유전자 요법
CN110225765B (zh) 减毒猪流感疫苗以及其制备和使用方法
US20240082327A1 (en) Retroviral vectors
US20220273821A1 (en) Retroviral vectors
WO2024062259A1 (en) Retroviral vector comprising rre inserted within an intron
TW202233830A (zh) 使用下一代工程化t細胞療法治療癌症之組合物及方法
CA2522166C (en) Lambda integrase mutein for use in recombination
WO2024069192A1 (en) Gene therapy
KR20210150487A (ko) 리소좀 장애를 위한 유전자 요법