EA036509B1 - Пегилированный свиной интерферон и способы его применения - Google Patents
Пегилированный свиной интерферон и способы его применения Download PDFInfo
- Publication number
- EA036509B1 EA036509B1 EA201892671A EA201892671A EA036509B1 EA 036509 B1 EA036509 B1 EA 036509B1 EA 201892671 A EA201892671 A EA 201892671A EA 201892671 A EA201892671 A EA 201892671A EA 036509 B1 EA036509 B1 EA 036509B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- variant
- pifn
- seq
- pig
- pegylated
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 title description 5
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 title description 5
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 39
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 29
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims abstract description 24
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims abstract description 17
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 38
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 23
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 22
- 239000004234 Yellow 2G Substances 0.000 claims description 17
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 16
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 11
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 8
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 6
- 239000004229 Alkannin Substances 0.000 claims description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 claims description 4
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000202347 Porcine circovirus Species 0.000 claims description 4
- 241000711484 Transmissible gastroenteritis virus Species 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 claims description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 2
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000725681 Swine influenza virus Species 0.000 claims description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 claims description 2
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 abstract description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 11
- 241000282887 Suidae Species 0.000 abstract description 9
- 238000003780 insertion Methods 0.000 abstract description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 abstract description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 31
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 30
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 25
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 21
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 18
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 14
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 6
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 6
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 6
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 6
- VOOGILFUHUXBEV-ZBRNBAAYSA-N (2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid;(2s)-pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical group OC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H]1CCCN1 VOOGILFUHUXBEV-ZBRNBAAYSA-N 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 244000144980 herd Species 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 241000282894 Sus scrofa domesticus Species 0.000 description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 3
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 102000005421 acetyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 108020002494 acetyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 125000002344 aminooxy group Chemical group [H]N([H])O[*] 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 241001361508 Porcine deltacoronavirus Species 0.000 description 2
- AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N trappsol cyclo Chemical compound CC(O)COC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)COCC(O)C)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1COCC(C)O ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)C(N)CCCN=C(N)N KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZFOMKMMPBOQKMC-KXUCPTDWSA-N L-pyrrolysine Chemical compound C[C@@H]1CC=N[C@H]1C(=O)NCCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O ZFOMKMMPBOQKMC-KXUCPTDWSA-N 0.000 description 1
- 102000005227 N-Terminal Acetyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108010056296 N-Terminal Acetyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101100395023 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) his-7 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000710778 Pestivirus Species 0.000 description 1
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 239000004376 Sucralose Substances 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- OFLXLNCGODUUOT-UHFFFAOYSA-N acetohydrazide Chemical compound C\C(O)=N\N OFLXLNCGODUUOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000013019 capto adhere Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 238000000670 ligand binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 150000002741 methionine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 244000309715 mini pig Species 0.000 description 1
- 238000012433 multimodal chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940002988 pegasys Drugs 0.000 description 1
- 108010092853 peginterferon alfa-2a Proteins 0.000 description 1
- 108010092851 peginterferon alfa-2b Proteins 0.000 description 1
- 229940106366 pegintron Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007981 phosphate-citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000030788 protein refolding Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 239000012609 strong anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 239000008362 succinate buffer Substances 0.000 description 1
- BAQAVOSOZGMPRM-QBMZZYIRSA-N sucralose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](Cl)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@]1(CCl)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CCl)O1 BAQAVOSOZGMPRM-QBMZZYIRSA-N 0.000 description 1
- 235000019408 sucralose Nutrition 0.000 description 1
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 108010046845 tryptones Proteins 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- -1 without limitation Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/21—Interferons [IFN]
- A61K38/212—IFN-alpha
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
В документе раскрыты варианты свиного интерферона альфа (pIFN-), содержащие синтетическую аминокислоту в выбранных местоположениях в pIFN- и вставку одной или двух аминокислот на N-конце после удаления сигнального пептида. Варианты pIFN- могут быть дополнительно пегилированными. Также предполагаются способы получения и введения этих соединений для лечения вирусных инфекций у свиней и составы, содержащие данные варианты.
Description
Данное изобретение содержит перечень последовательностей, который был предоставлен в формате
ASCII с использованием EFS-Web и который таким образом включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Указанная копия ASCII, созданная 15 июня 2017 г., имеет название
204257_0028_561478_SL_ST25.txt и размер 45280 байтов.
Введение интерферона альфа (IFN-α) имеет медицинские последствия, которые необходимо оценить и контролировать. Например, аутоиммунные реакции также могут индуцироваться у людей терапией хронического вирусного гепатита с использованием IFN-α. Таким образом, лечение людей, в целом, было ограничено пациентами, которые нуждались в терапии, поскольку терапия может усугублять ранее существующие аутоиммунные реакции, демаскировать скрытые аутоиммунные процессы или даже индуцировать аутоиммунные заболевания de novo. F.L. Dumoulin et al., Autoimmunity induced by interferonα therapy for chronic viral hepatitis, Biomed. & Pharmacother., 53: 242-54 (1999). Также наблюдали, что интерферон-α оказался неспособен к лечению инфекций вирусом гепатита С у людей.
Также наблюдали, что интерферон оказался эффективным для лечения некоторых людей с вирусом гепатита С (HCV) в такой степени, что на данный момент клиническое применение у людей имеют две пегилированные формы интерферона альфа (IFN-α), т.е. пегинтерферон-а-2а и пегинтерферон-α-2b, также известные как PEGASYS® и PEGINTRON® соответственно. Пока остается неясным то, как IFN-α ингибирует репликацию HCV. Что более интересно, пегинтерферон-α-2а и пегинтерферон-α-2b характеризуются только 7% и 28% активностью, соответственно, по сравнению с их нативными формами (диким типом).
В процессе получения интерферона были созданы различные варианты для лечения человека с целью повышения биологической доступности и содействия продуцированию белка. Один пример приведен в патенте США № 8106160, в котором обсуждается добавление одного или нескольких аминокислотных остатков к N-концевому цистеину зрелого человеческого интерферона </.-2b для снижения образования дисульфидных связей, не характерных для естественных условий, и, вследствие этого, снижения уровня структурных изоформ. Он включает добавление пролинового остатка на N-конце.
Способы введения не встречающихся в естественных условиях аминокислот, вставленных в сайты в белке, описаны, например, в международной заявке WO 2010/011735 и в международной заявке WO 2005/074650.
Свиной интерферон α-1 дикого типа имеет длину 189 аминокислот и находится под кодом доступа Х57191 в GenBank.
Требуются формы интерферона-α для применения у животных и в животноводстве, в особенности в лечении популяций свиней, чувствительных к вирусным инфекциям, и еще более конкретно в лечении популяций свиней с активными и протекающими вирусными инфекциями для защиты стад свиней от патологии, ассоциированной с вирусной инфекцией. Будет благоприятно обнаружить вариант IFN-α для применения у животных-свиней, который имеет продолжительное действие и является полезным для ингибирования или снижения репликации вируса, патологии в стаде и гибели животных, связанной с вирусной инфекцией. Вариант свиного IFN-α будет сохранять биологическую активность, будет иметь более длительный период биологической доступности и будет иметь малое число изоформ, что обеспечивает возможность более простой очистки.
На фиг. 1 изображена плазмида pKG0083 c pIFN-α-PS-E107amber, который включает в себя Nконцевую вставку пролин-серина. Эта плазмида управляет продукцией варианта белка с SEQ ID NO: 14 клеточной линией AXID2820.
На фиг. 2 изображены результаты выравнивания последовательностей и идентификаторы последовательностей для вариантов pIFN-α, имеющих синтетическую аминокислоту pAF, заменяющую остатки Q102, Е103, Е107, L112 и Y136. У всех последовательностей отсутствует сигнальная последовательность для pIFN-α. У последовательностей либо отсутствует (SEQ ID NO: 6, 9, 12, 15 и 18) дополнительная аминокислота на N-конце, либо они имеют пролин (SEQ ID NO: 7, 10, 13, 16 и 19) или пролин-серин, добавленные на N-конце (SEQ ID NO: 8, 11, 14, 17 и 20).
На фиг. 3 изображена последовательность мотива SEQ ID NO: 1. SEQ ID NO: 2 является такой же, как SEQ ID NO: 1, но включает в себя N-концевой метионин, который обычно отщепляется при созревании зрелого варианта pIFN-α. SEQ ID NO: 3 включает в себя сигнальную последовательность, но у нее отсутствует вставка пролина, пролина-серина и/или метионина. SEQ ID NO: 4 представляет собой зрелый pIFN-α дикого типа. SEQ ID NO: 5 представляет собой последовательность дикого типа с метионином на N-конце.
На фиг. 4 в таблице изображены различные варианты pIFN-α с Q102, Е103, Е107, L112 и 136, либо не имеющие дополнительного остатка, либо имеющие пролин или пролин-серин, присоединенные на Nконце, как указано в положениях Xa и Xb. Под abs подразумевается отсутствие. SEQ ID NO: 1 приведена для сравнения.
На фиг. 5 изображены результаты выравнивания последовательностей для трех дополнительных вариантов pIFN-α, в которых pAF заменяет Н7, R34 и Н40. Эти последовательности либо не имеют про- 1 036509 лина или пролин-серина на N-конце, либо они не имеют N-концевого метионина. Сайты мутации изображены в рамке в последовательности pIFN-α WT над таблицей, и в таблице они изображены в виде
X в рамке. Xa и Xb являются такими, как определено в таблице. Под abs подразумевается отсутствие.
На фиг. 6 изображены дополнительные синтезированные мутации в Е107, в которых серии (SEQ ID NO: 24), серин-глицин (SEQ ID NO: 25) и гистидин (SEQ ID NO: 26) добавлены на аминоконце варианта pIFN-α, имеющего pAF, заменяющую Е107 (представленный как X в рамке). Xa и Xb являются такими, как определено в таблице. Под abs подразумевается отсутствие.
В данном документе представлены варианты свиного интерферона-α (pIFN-α) и способы их применения, которые можно применять у животных, которые не являются вакцинированными, таких как невакцинированные новорожденные поросята, а также животные с угнетенным иммунитетом, т.е. беременные свиньи (беременные свиноматки или молодые свиньи); у животных, которым вакцинация предоставляет недостаточную защиту; у животных, чувствительных к инфекции вирусом, для которого нет доступной эффективной вакцины; и у животных, инфицированных в настоящее время. Эти композиции и способы применения будут предупреждать инфекцию в случае вспышки вирусной инфекции. Композиции также можно применять для снижения тяжести заболевания у инфицированной свиньи. В целом, введение осуществляют по схеме дозирования с введением одной дозы. В качестве альтернативы и если это необходимо, дозы могут быть обеспечены с интервалом примерно 1 -3 или 2 недели, причем, необяза тельно, вводят только одну-две дозы.
Свиной интерферон-α (pIFN-α) дикого типа, который включает в себя сигнальную последователь ность из 23 остатков, представляет собой:
maptsaflta Ivllscnaic slqcdlpqth slahtralrl laqmrrispf scldhrrdfg spheafggnq vqkaqamalv hemlqqtfql fstegsaaaw nesllhqfct gldqqlrdle acvmqeagle gtplleedsi lavrkyfhrl tlylqeksys pcaweivrae vmrsfsssrn
Iqdrlrkke (SEQ ID NO: 3).
Выделенная двойным подчеркиванием часть представляет собой сигнальную последовательность, которая не присутствует в зрелой форме pIFN-α дикого типа.
В данном документе представлен вариант (pIFN-α). В варианте пропущена сигнальная последовательность из 23 аминокислот. Вариант может иметь метиониновый остаток на аминоконце, который может быть отщеплен в зрелой форме белка. Этот метионин не присутствует в форме pIFN-α дикого типа. Вариант pIFN-α дополнительно имеет вставку одной или двух аминокислот между метионином сигнальной последовательности и N-концевым цистеином. Вставка представляет собой либо пролин, либо пролин-серин. Последовательность представлена ниже
MXaXbCDLPQTHSLAHTRALRLLAQMRRISPFSCLDHRRDFGSPHEAFGGNQVQKAQAM
ALVHEMLQQTFQLFSTEGSAAAWNESLLHQFYTGLDQQLRDLEACVMQEAGLEGTPLL
EEDSIRAVRKYFHRLTLYLQEKSYSPCAWEIVRAEVMRSFSSSRNLQDRLRKKE (SEQ ID
NO: 2).
Xb (положение 3 в SEQ ID NO: 2) либо представляет собой любой из пролина, серина, либо отсутствует. Xa (положение 2 в SEQ ID NO: 2) либо отсутствует, либо представляет собой пролин. Если Xb отсутствует, Xa отсутствует, если Xb представляет собой пролин, Xa отсутствует, и если Xb представляет собой серин, Xa представляет собой пролин. Выделенный жирным шрифтом остаток глутаминовой кислоты Е располагается ниже Xa по направлению транскрипции, и Xb представляет собой сайт замены синтетической аминокислотой, т.е. pAF.
Вариант pIFN-α дополнительно имеет синтетическую аминокислоту, параацетилфенилаланин (pAF), заменяющую одно из 5 местоположений в SEQ ID NO: 1: остаток Е103 (SEQ ID NO: 9-11 соответственно), Е107 (SEQ ID NO: 12-14 соответственно), L112 (SEQ ID NO: 15-17 соответственно), Y136 (SEQ ID NO: 18-20) или Q102 (SEQ ID NO: 6-8 соответственно) (нумерация в соответствии с последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 4, без N-концевого Met).
Вариант pIFN-α может быть дополнительно пегилирован на pAF. Вариант pIFN-α может быть пегилирован с использованием PEG с молекулярной массой от приблизительно 5 до приблизительно 40 кДа или PEG с молекулярной массой 30 кДа. Вариант pIFN-α может быть пегилирован с использованием линейного оксиамино-PEG с молекулярной массой 30 кДа. Активированная оксиаминогруппа хемоселективно реагирует с ацетильной боковой цепью, присутствующей на синтетической аминокислоте, такой как параацетилфенилаланин. Вариант pIFN-α имеет линейный PEG с молекулярной массой 30 кДа, ковалентно связанный с pAF, заменяющей Е107 (SEQ ID NO: 12-14) (нумерация в соответствии со зрелой последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 4). Вариант pIFN-α с E107 может дополнитель- 2 036509 но иметь пролин или пролин и серии на N-конце, что отражено в SEQ ID NO: 13 и 14 соответственно.
Варианты pIFN-α могут быть включены в составы. Состав, содержащий варианты pIFN-α, может содержать 20 мМ ацетат натрия, 100 мМ хлорид натрия, 5% глицерин при рН 5,0 с титром свиного IFNα, составляющим от 2,0 до 6,0 г/л.
Составы могут быть получены с помощью способа, предусматривающего стадии:
(a) очистка pIFN-α;
(b) растворение указанного очищенного варианта pIFN-α в 50 мМ Tris, 6М гуанидине при рН 8;
(c) инкубирование растворенного варианта pIFN-aA при комнатной температуре в течение 16-24 ч в 20 мМ Tris, 1M аргинине, 10 мМ метионине (met), 1 мМ EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота) при рН 8,0 для обеспечения возможности рефолдинга белка;
(d) удаление оставшихся ацетилированных вариантов с помощью хроматографического разделения на сильной анионообменной смоле;
(e) конъюгирование варианта pIFN-a с PEG при соотношении PEG к белку, составляющем от 1:1 до 1:8 или от 1:1 до 1:2; и (f) очистка пегилированного варианта pIFN-a.
Варианты pIFN-a и составы с ними можно применять для лечения вирусной инфекции. Способ лечения вирусной инфекции у свиньи предусматривает подкожное введение варианта pIFN-a свинье в количестве любого из вариантов свиного интерферона-a (pIFN-a), составляющем от 25 до 150 мкг/кг массы животного. Способ может дополнительно предусматривать второе введение варианта pIFN-aA в количестве от приблизительно 25 до приблизительно 150 мкг/кг массы животного. Если способ включает второе введение, второе введение может происходить приблизительно через 7, 14 или 21 сутки после первого введения.
Способ лечения вирусной инфекции можно применять для лечения вирусной инфекции, выбранной из группы, состоящей из вируса свиного репродуктивного и респираторного заболевания, вируса ящура, вируса свиного гриппа, свиного цирковируса, свиного вируса эпизоотической диареи и вируса трансмиссивного гастроэнтерита. Способ можно применять для лечения новорожденного поросенка или беременной свиньи.
Также предполагается применение любого из вариантов pIFN-a (или состава, содержащего вариант) в терапии у свиньи для лечения вирусной инфекции, причем инфекция может быть вызвана любым из вирусов, обсуждаемых в данном документе.
Также описывается применение варианта pIFN-a для применения в производстве лекарственного средства для лечения вирусной инфекции у свиньи. Свинья может представлять собой новорожденного поросенка или беременную свинью.
Под введением подразумевается инъекция терапевтически эффективного количества соединений и композиций, содержащих указанные раскрытые соединения.
Введение может быть внутримышечным (i.m.) или подкожным (s.c). Количество вводимого варианта pIFN-a будут устанавливать на основании массы животного, например, при этом беременные свиньи получают большее количество, чем новорожденные поросята.
Составы, раскрытые в данном документе, также могут быть помещены во флакон с одной дозой или многодозовый флакон.
Свинья, подвергающаяся лечению с помощью способов, описанных в данном документе, будет представлять собой новорожденного поросенка или беременную свинью (беременную молодую свинью или свиноматку).
Под терминами лечить, осуществлять лечение или лечение подразумевается снижение или ослабление одного или нескольких симптомов, ассоциированных с инфекцией одним из вирусов, упомянутых в данном документе. Композицию можно дополнительно применять в производстве лекарственного средства для лечения вирусной инфекции у свиньи. Композицию или лекарственное средство можно применять для лечения свиньи. Свинья может представлять собой новорожденного поросенка или беременную свинью.
Будут подробно обсуждаться соединения, составы с указанными соединениями, способы получения составов и способы применения соединений и составов для лечения свиней (подсвинков или хряков), имеющих вирусную инфекцию.
В контексте данного документа и пунктов приложенной формулы изобретения формы единственного числа включают в себя соответствующие формы множественного числа, если контекст явно не указывает иное, и использование форм множественного числа, в свою очередь, также может охватывать использование в единственном числе.
Синтетическая аминокислота относится к аминокислоте, которая не является одной из 20 распространенных аминокислот, или пирролизином, или селеноцистеином. Примеры таких синтетических аминокислот включают в себя, без ограничения, параацетилфенилаланин (pAF), ацетилглюкозаминил-Lсерин и №ацетилглюкозаминил-Ь-треонин. Для дополнительных подробностей относительно таких синтетических аминокислот и их включения и модификации, см. международные заявки WO 2010/011735 и
- 3 036509
WO 2005/074650.
Термин субъект в контексте данного документа относится к свинье, в особенности к домашней свинье (Sus scrofa domesticus или Sus domesticus), и может включать в себя карликовых свиней, а также их породы, которые разводят для получения мяса. Предполагается, что термины свинья, хряк или подсвинок включают в себя все породы свиней.
Используемый термин эффективное количество относится к такому количеству варианта pIFN-α, которое при введении будет обеспечивать предупреждение, лечение или снижение переноса свиного вируса от инфицированного животного к неинфицированному животному или будет обеспечивать предупреждение, лечение или снижение симптома заболевания, вызванного инфекцией свиным вирусом. В данном документе раскрыты варианты свиного интерферона альфа (pIFN-α). Эти варианты имеют синтетические аминокислоты, заменяющие различные положения в последовательности свиного IFN-α. Ген pIFN-α Sus scrofa domestica (GenBank X57191), в котором подчеркнутая лидерная последовательность (остатки 1-23 в SEQ ID NO: 3) удалена, как представлено ниже (в ориентации от амино- к карбоксиконцу)
MAPTSAFLTALVLLSCNAICSLGCDLPOTHSLAHTRALRLLAQMRRISPFSCLDHRRDFG
SPHEAFGGNQVQKAQAMALVHEMLQQTFQLFSTEGSAAAWNESLLHQFYTGLDQQLR
DLEACVMQEAGLEGTPLLEEDSIRAVRKYFHRLTLYLOEKSYSPCAWEIVRAEVMRSFS
SSRNLQDRLRKKE. (SEQ ID NO:3).
Зрелая последовательность представляет собой
CDLPQTHSLAHTRALRLLAQMRRISPFSCLDHRRDFGSPHEAFGGNQVQKAQAMALVH
EMLOOTFOLFSTEGSAAAWNESLLHOFYTGLDOOLRDLEACVMQEAGLEGTPLLEEDS
IRAVRKYFHRLTLYLQEKSYSPCAWEIVRAEVMRSFSSSRNLQDRLRKKE (SEQ ID NO:
4). Подчеркнутая сигнальная последовательность на N-конце SEQ ID NO: 3 может быть заменена на другую сигнальную последовательность или даже на один метиониновый остаток, например, для транскрипции in vitro, что приводит в результате к следующей последовательности:
MCDLPQTHSLAHTRALRLLAQMRR1SPFSCLDHRRDFGSPHEAFGGNQVQKAQA
MALVHEMLQQTFQLFSTEGSAAAWNESLLHQFYTGLDQQLRDLEACVMQEAGLEGTP
LLEEDSIRAVRKYFHRLTLYLQEKSYSPCAWEIVRAEVMRSFSSSRNLQDRLRKKE (SEQ
Ш NO: 5) или она может включать в себя остатки пролина или пролин-серина между N-концевым метионином и цистеином (см. SEQ ID NO: 2). Можно применять другие родственные свиные последовательности.
Варианты pIFN-α имеют синтетические аминокислоты, введенные в одно из следующих местоположений на Sus scrofa domestica (при использовании нумерации, соответствующей зрелой последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4): Q102 (SEQ ID NO: 6), Е103 (SEQ ID NO:9), E107 (SEQ ID NO: 12), L112 (SEQ ID NO: 15) и Y136 (SEQ ID NO: 18) (которые выделены жирным шрифтом и подчеркиванием в последовательности выше), а также изображены на фиг. 2-4. У зрелого pIFN-α N-концевой метиониновый остаток (например, остаток 1 в SEQ ID NO: 5) может отщепляться при созревании.
Синтетические аминокислоты и их включение являются такими, как обсуждается, например, в международной заявке WO 2010/011735. Синтетические аминокислоты можно применять у Escherichia coli (Е. coif) (например, L. Wang, et al., (2001), Science 292: 498-500) и у эукариота Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) (например, J. Chin et al., Science 301: 964-7 (2003)), которые обеспечивают возможность включения синтетических аминокислот в белки in vivo.
Из пяти (5) перечисленных вариантов с заменой на синтетическую аминокислоту, характеризующихся биологической активностью (замены на pAF в одном из пяти остатков Е103, Е107, L112, Y136 или Q102, которые выделены подчеркиванием в последовательности ниже), эти варианты могут быть дополнительно модифицированы посредством вставки аминокислот на N-конце молекулы. Например, пролин (Pro) или пролин-серин (Pro-Ser) могут быть вставлены между N-концевым Met и Cys.
В зрелой форме вариантов будет исключен N-концевой метионин.
В данном документе описываются способы получения полипептида pIFN-α, связанного с водорастворимым полимером. Подразумевается, что термины пегилирование и пегилированный относятся к ковалентному связыванию определенной синтетической аминокислоты с молекулой полиэтиленгликоля (PEG). Способ может предусматривать приведение в контакт выделенного полипептида pIFN-α, содержащего синтетическую аминокислоту, с водорастворимым полимером, содержащим фрагмент, который реагирует с синтетической аминокислотой.
Молекула поли(этиленгликоля) может характеризоваться молекулярной массой, составляющей от приблизительно 0,1 до приблизительно 100 кДа. Молекула поли(этиленгликоля) может характеризоваться молекулярной массой, составляющей от 0,1 до 50 кДа, от 20 до 40 кДа и любое значение в виде целого числа от 25 до 35 кДа. Молекула поли(этиленгликоля) может характеризоваться молекулярной массой,
- 4 036509 составляющей приблизительно 30 кДа. Молекула поли(этиленгликоля) может представлять собой линейную молекулу, характеризующуюся молекулярной массой, составляющей от 0,1 до 50 кДа, от 20 до 40 кДа и любое значение в виде целого числа от 25 до 35 кДа. Молекула поли(этиленгликоля) может представлять собой линейную молекулу, характеризующуюся молекулярной массой, составляющей 30 кДа. Молекула поли(этиленгликоля) может иметь аминооксигруппу, способную к реакции с ацетильной группой на синтетической аминокислоте. Молекула поли(этиленгликоля) может представлять собой линейный PEG молекулярной массой 30 кДа с активированной аминооксигруппой, способный к образованию оксимной связи с ацетильной боковой цепью параацетилфенилаланина.
Один pIFN-α имеет линейный PEG, который характеризуется молекулярной массой приблизительно 30 кДа, прикрепленный к остатку pAF.
Варианты, которые обсуждались выше и которые обсуждаются далее по тексту, могут быть дополнительно смешаны в составе с различными вспомогательными веществами, стабилизаторами, буферами и другими компонентами для введения животным. Идентификация подходящих составов в отношении стабильности, введения животным и активности не является простой задачей. Наоборот, состав должен быть адаптирован для каждого соединения, исходя из требований к очистке этого соединения, стабилизатора, необходимого для сохранения соединения, и различных других компонентов состава.
Подходящие соли для включения в состав включают в себя хлорид натрия, хлорид калия или хлорид кальция.
Ацетат натрия можно применять в качестве буферного средства и/или стабилизирующего средства.
Подходящие буферы могут включать в себя фосфатно-цитратный буфер, фосфатный буфер, цитратный буфер, L-гистидин, L-аргинина гидрохлорид, бикарбонатный буфер, сукцинатный буфер, цитратный буфер и TRIS буфер либо отдельно, либо в комбинации.
Состав также может включать в себя криопротектор. Криопротекторы могут включать в себя криопротектор, выбранный из группы, состоящей из гидроксипропил-в-циклодекстрина (HPBCD), сукралозы и поливинилпирролидона 4000 (PVP 4000).
Состав, необязательно, может включать в себя поверхностно-активное вещество. Подходящие поверхностно-активные вещества включают в себя полисорбаты (например, полисорбат 80), додецилсульфат (SDS), лецитин либо отдельно, либо в комбинации.
Состав может представлять собой водную композицию, или он может иметь форму восстановленной жидкой композиции или присутствовать в виде порошка. Кроме того, состав можно хранить во флаконе или картридже или в предварительно заполненном стерильном шприце, готовом для введения субъекту.
рН состава может находиться в диапазоне от 4,0 до 7,0 или от 4,5 до 6,5, когда состав имеет форму жидкости.
Подходящие вирусные инфекции, лечение которых можно осуществлять, включают в себя, без ограничения, коронавирус, пестивирус (вирус чумы свиней или классической чумы свиней, CSF), коронавирус, вызывающий трансмиссивный гастроэнтерит (TGEV), свиной артеривирус (PoAV), вирус свиного репродуктивного и респираторного синдрома (PRRSV), свиной цирковирус (PCV), вирус свиной эпизоотической диареи (PEDV), вирус ящура (FMDV), свиной коронавирус, такой как свиной дельтакоронавирус (PDCoV), и вирус свиного гриппа (SIV).
Введение варианта или состава, содержащего вариант, может представлять собой введение единственной дозы или за введением одной дозы следует введение второй дозы через 7-21 сутки после первой дозы, например приблизительно через 14 суток после первой дозы. Животному вводят вариант в количестве, составляющем от приблизительно 25 до приблизительно 150 мкг/кг варианта на 1 кг массы животного. Другой диапазон эффективных количеств варианта pIFN-α составляет от приблизительно 50 мкг/кг до приблизительно 100 мкг/кг массы животного. Вариант можно вводить в составе или сам по себе. Вариант можно вводить однократно, например, перед вспышкой заболевания. Вариант также можно вводить после вспышки вирусной инфекции стаду с целью предотвращения дальнейших потерь в стаде. Вариант или состав с ним можно вводить во второй раз. Второе введение можно назначать после периода от приблизительно 7 до приблизительно 21 суток после первого введения, например через 14 суток после первого введения. Дополнительные введения могут предполагаться, если они необходимы для снижения или предупреждения заболевания, ассоциированного с вирусными инфекциями.
Специалисту в данной области техники будет очевидно, что различные модификации и изменения могут быть выполнены без отступления от идеи или объема композиций, соединений и способов, раскрытых в данном документе. Таким образом, предполагается, что настоящим изобретением покрываются модификации и варианты настоящего изобретения при условии, что они попадают в объем пунктов прилагаемой формулы изобретения и их эквивалентов.
Примеры
Пример 1. Варианты с pAF.
Одиннадцать (11) вариантов с pAF создают и сравнивают относительно pIFN-α дикого типа (wt). Из них три варианта pIFN-α исключают из продолжающегося исследования вследствие плохой экспрессии
- 5 036509 белка/проблем с продуцированием в случае синтетических аминокислот, замещенных в различных точках в pIFN-a.
AXID2820 имеет плазмиду pKG0083 с pIFN-a-E107amber и N-концевой вставкой пролин-серина (фиг. 1). Нумерация остатков была стандартизирована для обеспечения соответствия последовательности pIFN-α дикого типа (SEQ ID NO: 4). Аминокислотную последовательность свиного интерферона-а-1 дикого типа получают из GenBank (номер доступа Х57191). Соответствующую последовательность нуклеиновой кислоты синтезируют и клонируют в вектор экспрессии. Стоп-кодон янтарь (TAG) вставляют в кодон глутаминовой кислоты, соответствующий положению аминокислоты 107 (или другим положениям, которые указаны) в кодирующем участке зрелой последовательности дикого типа. Нуклеиновые кислоты, кодирующие Pro-Ser, вставляют на аминоконец после инициирующего метионинового кодона (AUG). Для подтверждения того, что клонирование и последующий мутагенез протекали, как ожидается, без включения нежелательной(нежелательных) мутации(мутаций), полную последовательность плазмидной ДНК pKG0083 подвергают секвенированию.
Восемь (8) вариантов pIFN-α в табл. 1 были способны экспрессироваться в виде белка. Эти восемь вариантов также пегилируют с использованием линейного PEG молекулярной массой 30 кДа с активированной аминооксигруппой. Пегилирование вариантов осуществляют посредством доведения раствора белка (при концентрации белка, составляющей примерно 20 мг/мл или более) до рН 4,0 с использованием 10% ледяной уксусной кислоты. Гидразид уксусной кислоты добавляют до конечной концентрации 100 мМ и оксиамино-PEG добавляют в молярном отношении от 1:1 до 2:1 или вплоть до приблизительно 8:1 относительно варианта pIFNa. Реакции позволяют протекать в течение 1-3 суток при 28-30°С в темноте. Реакцию гасят посредством 5-кратного разведения реакционной смеси 30 мМ ацетатом натрия, рН 5,0. Эти 8 пегилированных вариантов анализируют с использованием гель-хроматографии (SEC), как показано в табл. 1. Варианты pIFN-α являются такими же, как pIFN-α дикого типа, за исключением замены на pAF в указанном остатке, например His7 заменяли на pAF, Arg34 заменяли на pAF и так далее. Концентрация белка указана в мг/мл. RP обозначает обращенную фазу (т.е. обращенно-фазовую хроматографию или RP-HPLC).
Таблица 1
Получение пегилированных вариантов pIFNa
| Образец | Конц, белка (мг/мл) | % от главного пика согласно RP | % мономера согласно SEC |
| pIFN-a wt SEQ Ш NO: 4 | 1,5 | 69,4 | 99,5 |
| pIFNa-H7-PEG30 SEQ ГО NO: 21 | 2,6 | 67,0 | 94,7 |
| pIFNa-R34-PEG30 SEQ ГО NO: 22 | 2,2 | 73,8 | 99,6 |
| pIFNa-Q102-PEG30 SEQ ID NO: 6 | 1,9 | 68,1 | 97,7 |
| pIFNa-E103-PEG30 SEQ ID NO: 9 | 2,1 | 58,2 | 96,3 |
| pIFNa-E107-PEG30 SEQ ID NO: 12 | 1,9 | 60,2 | 98,2 |
| pIFNa-L112-PEG30 SEQ ID NO: 15 | 3,4 | 60,1 | 98,3 |
| pIFNa-Y136-PEG30 SEQ ID NO: 18 | 2,1 | 51,9 | 99,1 |
| pIFNa-H40-PEG30 SEQ ID NO: 23 | 1,9 | 52,1 | 98,7 |
SEC выполняют с использованием системы для HPLC, способной к детекции при нескольких длинах волны (Agilent 1100 или 1200 или эквивалент). Подвижная фаза представляет собой 200 мМ фосфат калия, 250 мМ хлорид калия, рН 6,0, 10% изопропанол (IPA).
Эти 8 вариантов исследуют в in vitro анализе биологической активности. Коммерчески доступный набор для анализа интерферона iLite™ huIFNa от Pestka Biomedical Laboratories, Inc. (Пискатауэй, НьюДжерси, США) используют для исследования биологической активности pIFN-α. Кратность потери активности у вариантов PEG рассчитывают относительно белка Ambrx WT следующим образом:
- 6 036509
Кратность потери _ ЕС50 PEG-варианта активности PEG-варианта Е”С5О АтЬгх WT
Как показано в табл. 2, из восьми исследуемых вариантов три варианта pIFN-α характеризовались значительно меньшей активностью, чем непегилированный pIFN-α дикого типа.
Таблица 2
| Порядок по рангу | Исследуемый образец | Кратность потери активности по сравнению с pIFNa WT | ЕС50 [нг/мл] Исследуемый образец | ЕС50 [нг/мл] Ambrx pIFNa WT |
| 1 | pIFNoc El 03PEG30K | 8х | 184 | 22 |
| 2 | pIFNoc L112PEG30K | 15х | 475 | 32 |
| 3 | pIFNaoc El 07PEG30K | 23х | 731 | 32 |
| 4 | pIFNaoc Y136PEG30K | 26х | 874 | 33 |
| 5 | pIFNaa QI 02PEG30K | 32х | 693 | 22 |
| 6 | pIFNaoc H40PEG30K | 171х | 5662 | 33 |
| 7 | pIFNaoc H7PEG30K | 387х | 8761 | 23 |
| нет активности | pIFNaoc R34PEG30K | нет активности | нет активности | 23 |
У контрольного pIFN-α дикого типа отсутствует сигнальный пептид, нет вставленных N-концевых аминокислот (метионин, пролин или серин), нет замены любой аминокислоты на pAF, и он не является пегилированным (SEQ ID NO: 4).
В результате этих экспериментов пегилированные варианты pIFN-α, имеющие замену на pAF в Н40 (SEQ ID NO: 23), Н7 (SEQ ID NO: 21) и R34 (SEQ ID NO: 22), считаются бесполезными вариантами pIFN-α для лечения вирусной инфекции у свиней вследствие низких уровней их активности по сравнению с диким типом в анализе iLite™ huIFNa.
В анализе методом RP-HPLC и пегилированных, и непегилированных вариантов для результатов в табл. 2 используется подвижная фаза А (0,05% TFA/вода) и подвижная фаза В (0,05% TFA/ACN).
Пример 2. Исследование in vivo.
Восемнадцать крыс линии Спраг-Доули (n=3 в группе) получают дозу 0,2 мг/кг каждого из 6 исследуемых образцов (ресуспендированных в 20 мМ ацетате натрия, рН 5,0, 100 мМ NaCl и 5% глицерине) подкожно в заднюю часть шеи, отдаленную от катетера: (1) pIFNa-E103-PEG30K (пегилированная SEQ ID NO: 9), (2) pIFNa-L112-PEG30K (пегилированная SEQ ID NO: 15), (3) pIFNa-E107-PEG30K (пегилированная SEQ ID NO: 12), (4) pIFNa-Y136-PEG30K (пегилированная SEQ ID NO: 18) и (5) pIFNa-a-Q102PEG30K (пегилированная SEQ ID NO: 6).
Варианты pIFN-α растворяют в 20 мМ ацетате натрия с рН 5,0, 100 мМ NaCl и 5% глицерине. Каждому животному вводят инъекцией подкожно (т.е. в заднюю часть шеи) один из 5 вариантов или pIFN-a дикого типа (такого же, как используется в примере 1) с образованием, таким образом, 6 тестовых групп, по 3 крысы в каждой.
Забор образцов осуществляют в следующие моменты времени: перед введением дозы и после введения дозы через 1 ч, 6 ч, 24 ч, 48 ч, 72 ч, 144 ч, 192 ч и 240 ч после введения дозы. Образцы крови получают через катетер в яремной вене, или через боковую хвостовую вену, или в момент завершения эксперимента посредством прокола сердца и их подвергают обработке, позволяя крови свернуться и удаляя образующуюся в результате сыворотку. Концентрации каждого пегилированного варианта pIFN-α определяют с помощью анализа связывания лиганда при использовании моноклонального антитела к PEG для захвата и козьего поликлонального антитела к свиному IFN-α для выявления. AUClast, Cmax, Tmax рассчитывают посредством анализа необработанных данных с использованием программного обеспечения WINNONLIN® для моделирования PK (фармакокинетических) свойств (Pharsight Corporation, сейчас Certara USA, Inc.). Воздействие (AUClast) для пегилированных вариантов делили на воздействие для pIFN дикого типа (pIFN WT) с получением кратности различий. Результаты для пегилированных вариантов представлены ниже в табл. 3.
- 7 036509
Таблица 3
Биологическая доступность пегилированных вариантов IFN-a
| Соединение | Животное № | AUClast | Кратность различия в сравнении с pIFN WT | С max | т max | Оцен. Т 1/2 |
| (нг*час/мл) | (нг/мл) | час | час | |||
| PEG Q102 pIFNa | Среднее значение | 12500 | 133 | 339 | 24 | 16,3 |
| SD | 686 | 14,4 | 0 | 2,10 | ||
| PEG El07 pIFNa | Среднее значение | 9420 | 100 | 246 | 24 | 17,6 |
| SD | 2590 | 77,6 | 0 | 3,93 | ||
| PEG LI 12 pIFNa | Среднее значение | 6000 | 64 | 165 | 24 | 12,7 |
| SD | 510 | 15,6 | 0 | 1,11 | ||
| PEG El03 pIFNa | Среднее значение | 5210 | 55 | 147 | 18 | 11,7 |
| SD | 365 | 12,5 | 10,4 | 0,479 | ||
| PEGY136 pIFNa | Среднее значение | 5140 | 55 | 141 | 24 | 12,4 |
| SD | 788 | 23,2 | 0 | 0,987 | ||
| WT pIFNa SEQ ID NO: 4 | Среднее значение | 94,2 | 1 | 81 | 1 | NC |
| SD | 49,3 | 49,9 | 0 | NC |
DN обозначает нормализованный к дозе; единицы для DN AUClast представляют собой (нг-ч/мл)/(мг/кг), а ДЛЯ DN Cmax представляют собой (нг/мл)/(мг/кг). Cmax используют для расчета периода полужизни. Тем не менее, пегилированный по Е107 вариант pIFN-α характеризовался наибольшим периодом полужизни из пяти (5) вариантов. NC означает не поддающийся расчету, поскольку концентрации поддавались измерению только в два момента времени.
Подтверждено, что воздействие (по показателю AUClast) является наивысшим для PEG30K-Q102 и PEG30K-E107, и они представлены в таблице в порядке убывания воздействия. Все из пяти исследуемых вариантов pIFN-α характеризуются большим воздействием для pIFN-α, чем форма pIFN-α дикого типа (SEQ ID NO: 4). Tmax обычно наблюдают через 24 ч после введения дозы для пегилированных вариантов pIFN-α по сравнению с 1 ч после введения дозы для pIFN-α дикого типа. В случае этого эксперимента Cmax включают в расчет периода полужизни вследствие несоответствующих точек данных в окончательной фазе. Поскольку время в момент Cmax не представляет истинную фазу выведения, оценки периода полужизни следует рассматривать как приближенную величину.
Следует заметить, что гетерологичность молекулы не оказывает влияния в этом типе исследования.
Пример 3. Характеристика связанных с продуктом загрязняющих примесей для pIFNa-E107pAF.
Исходя из результатов масс-спектроскопии (MS) pIFN-aA-E107 (SEQ ID NO: 12), присутствуют ацетилированные формы, 58 Да форма и образующиеся в результате окисления загрязняющие примеси. Вариант становится ацетилированным в ходе биосинтеза внутри продуцирующего штамма Е. coli. Таким образом, один вариант для продуцирования pIFN-aA-E107 заключается в добавлении ацетилтрансфераз в соответствующий момент в ходе продуцирования или в использовании нокаутной ацетилтрансферазы аланина рибосомального белка (ribosomal-protein-alanine acetyltransferase) (RimJ) (N-концевая ацетилтрансфераза). Кроме того, для очистки можно использовать мелко- и крупномасштабную хроматографию. В качестве альтернативы и как показано в данном документе, последовательность N-конца может быть дополнительно модифицирована для предотвращения ацетилирования на варианте в целом.
В случае хроматографических методов один способ заключается в применении САРТО Adhere Impres (GE Healthcare Lifesciences), которая представляет собой сильную анионообменную среду (смолу) для мультимодальной хроматографии с использованием технологии BIOPROCESS. В этом способе используется подвижная фаза из 25 мМ ацетата аммония (при рН 6,5), загрузка немодифицированного (т.е. непегилированного) варианта pIFN-α до концентрации 1-5 мг/мл смолы. Колонку промывают 5 объемами колонки (CV) 25 мМ ацетата аммония при рН 6,5. Элюирование варианта pIFN-aA осуществляется с использованием линейного градиента к 100% буферу для элюирования (5 мМ уксусная кислота) и 0100% В за 40 CV (объем колонки), при помощи чего удаляют пики, соответствующие окисленному pIFN-a. Пик один имеет N-конец pIFN-α без ацетилирования цистеина, в то время как пик 2 содержал ацетилированную форму (+42 Да), +58 Да форму, +58+1 Ох форму (вероятно, ацетилированные и однократно окисленные молекулы) и +58 Да+2 Ох форму (вероятно, ацетилированная форма по меньшей мере с двумя окисленными остатками).
Исходя из результатов пролин вставляли на аминоконце pIFN-a для предотвращения образования ацетилированных форм. Таким образом, создали Pro-pIFNa-E107pAF (SEQ ID NO: 13). Для наглядности,
- 8 036509 нумерация положений аминокислот всегда начинается с N-концевого цистеина (С1). Добавленный пролин становится остатком -1, и N-концевой метионин (если он присутствует) становится остатком -2. Также можно выполнить вставку Pro-Ser, при этом пептид содержит серин в положении -1, пролин в положении -2 и, возможно, метионин в положении -3 относительно N-концевого цистеина. Добавление пролина удаляло другие пики, наблюдаемые для предыдущего варианта при анализе посредством массспектроскопии.
В табл. 4 ниже Pro-pIFNa-E107pAF имеет пролин на N-конце и замену на pAF в Е107. Активность варианта Pro-pIFNa-E107pAF сравнивают с активностью варианта, лишенного добавления пролина на Nконце, pIFNa-E107pAF. Вариант, имеющий добавленный пролин, имеет меньшее число ацетилированных и окисленных вариантов. Стоит заметить, что эти варианты не являются пегилированными и они не включают в себя метионин сигнальной последовательности.
Таблица 4
| Pro-pIFNa-E107pAF ЕС50, нг/мл | pIFNa-E107pAF ЕС50, нг/мл | |
| Прогон 1 | 6,46 | 8,08 |
| Прогон 2 | 4,55 | 7,01 |
Пример 4. Другие варианты N-концов.
С учетом успеха с добавлением пролина на N-конец pIFNa-E107pAF также оценивали другие варианты N-концов, включающие добавление серина (Ser, S), добавление Pro-Ser (PS), добавление His (H) и добавление Ser-Gly (SG) к pIFNa-E107pAR Эти варианты N-концов не являются пегилированными. Активность этих вариантов N-концов (все они являются вариантами с E107-pAF) затем оценивали в биологическом in vitro анализе с использованием набора iLite™ huIFNa kit от Pestka Biomedical Laboratories, описанного выше, и результаты представлены в табл. 5.
Таблица 5
| Мутация | EC 50 (нг/мл) |
| Pro-pIFNa SEQ Ю NO: 13 | 18,3 |
| S (-1) pIFNa SEQ Ш NO: 24 | 34,2 |
| SG (-2/-1) pIFNa SEQ ID NO: 25 | 69,1 |
| PS (-2/-1) pIFNa SEQ ID NO: 14 | 28,7 |
| H (-1) pIFNa SEQ ID NO: 26 | 25,4 |
Pro-pIFNa представляет собой вариант, имеющий пролин, добавленный на аминоконце между метионином (в незрелом пептиде) и цистеином.
Пример 5. Конъюгирование варианта pIFN-α с PEG.
Вариант pIFNa-PS-E107 (SEQ ID NO: 14) получают из пула, собранных с помощью хроматографии по методу Capto после применения хроматографии по методу Capto в соответствии с инструкциями производителя, и 0,2М глицин добавляют к очищенной форме. рН смеси доводят до 4,0 с использованием уксусной кислоты. Вариант pIFN-α затем концентрируют до 8,2 мг/мл с использованием фильтрующей центрифуги Amicon Ultra в соответствии с инструкциями производителя. После концентрирования линейный PEG с молекулярной массой 30 кДа (PEG может быть коммерчески приобретен, например, у NOF America Corporation или EMD Merck) добавляют при молярном отношении pEG^p^^ pIFNa, составляющем 8:1. Смесь PEG/вариант pIFN-α затем инкубируют при 28°С в течение приблизительно 18 ч. Этот способ приводит в результате к тому, что >95% варианта pIFN-a конъюгируются с PEG после 18 ч инкубирования.
Пегилированный вариант (pIFNa-PS-E107-PEG30K) затем может быть очищен следующим образом. Колонку Tosoh SP650S объемом 143 мл можно применять для очистки пегилированного варианта при использовании следующей подвижной фазы:
А: 30 мМ ацетат натрия, рН 5,0,
- 9 036509
В: 30 мМ ацетат натрия, 5% этиленгликоль, рН 5,0 от 0 до 100% В за 20 объемов колонки.
Пример 6. Сравнительное исследование вариантов с различными N-концами.
Анализы активности проводят для нескольких вариантов как в их пегилированных (линейным PEG с молекулярной массой 30 кДа), так и непегилированных формах для оценки воздействия пегилирования на варианты, имеющие замену на pAF в Е107 и имеющие пролин-серин на аминоконце (SEQ ID NO: 14). Результаты представлены ниже в таблице 6. Концентрация белка, значения SEC, RP и ЕС50 определены, как обсуждалось выше. pIFNa-P-E107-pAF используют в качестве сравнительного образца, чтобы отразить результаты для белка без аминоконцевого удлинения.
Таблица 6
| Образец | Конц, белка (мг/мл) | SEC, % мономера | RP, % от главного пика | ЕС50 (нг/мл) |
| pIFNa-PS-E107-pAF | 8,2 | 99,8 | 84,8 | 5,96 |
| pIFNa-P S -Е107-3 0KPEG | 7,3 | 99,0 | 98,2 | 409,7 |
| pIFNa-P-E107-pAF | 4,27 | |||
| pIFNa-P-Е 107-3 0KPEG | з,з | 99,3 | 99,7 | 641,2 |
При исследовании для характеристики вариантов наблюдали ошибочное включение норлейцина. Известно, что норлейцин ошибочно включается в положении аминокислоты метионина при ферментации с использованием Е. coli при высокой плотности. Это наблюдалось при проведении экспериментов по ферментации. Включение норлейцина снижалось при использовании одной или нескольких из следующих стадий: подача растворов с метионином, ферментация с использованием комплексных сред вместо определенной среды (комплексные среды имеют один или несколько неопределенных компонентов в своем составе, в том числе, без ограничения, глицерин, соли, аминокислоты, витамины, дрожжевые экстракты, растительные и животные гидролизаты, пептоны и триптоны) и/или снижение температуры реакционной смеси после продуцирования. L-метионин добавляют в партию среды в концентрации 1,2 мМ, а также непрерывно подают через питательный раствор, который содержит 20 мМ L-метионин.
Варианты pIFN-α находятся под контролем промотора Т7. Добавление арабинозы (индуктор) к среде ферментации приводит в результате к каскаду, который обеспечивает возможность продуцирования вариантов. Таким образом, после индукции означает после добавления индуктора, в данном случае арабинозы.
Пример 7. Влияние замораживания-оттаивания на пегилированные и непегилированные варианты.
Образцы подвергали замораживанию и оттаиванию в течение пяти циклов посредством замораживания до 0°С в пробирках объемом 1,5 мл и оттаивания на водяной бане комнатной температуры. Не наблюдали какого-либо значительного воздействия в случае профиля белка с высокой молекулярной массой (HMW) в течение пяти циклов замораживания-оттаивания, что подтверждается ниже в табл. 7.
Таблица 7
| pIFNa-PS-E107pAF | pIFNa-PS-E107-30KPEG | |||
| Цикл замораживания/оттаивания | % от главного пика | % IIMW | % от главного пика | %HMW |
| 0 | 99,8 | 0,2 | 99,0 | 0,7 |
| 1 | 99,8 | 0,2 | 99,0 | 0,8 |
| 3 | 99,8 | 0,2 | 99,0 | 0,9 |
| 5 | 99,8 | 0,2 | 99,0 | 0,9 |
В табл. 7 отражены различия между пегилированными и непегилированными вариантами, имеющими пролин-серин на N-конце, а также замену на pAF в Е107, причем вариант имеет вставку пролинсерина на аминоконце (pIFNa-PS-E107-30), т.е. в виде остатков -2 и -1.
Claims (30)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Вариант свиного интерферона-α (pIFN-α), содержащийXAXBCDLPQTHSLAHTRALRLLAQMRRISPFSCLDHRRDFGSPHEAFGGNQVQKAQAMALV HEMLQQTFQLFSTEGSAAAWNESLLHQFYTGLDQQLRDLEACVMQEAGLEGTPLLEEDSIR AVRKYFHRLTLYLQEKSYSPCAWEIVRAEVMRSFSSSRNLQDRLRKKE (SEQ ID NO: 1), причем остаток Е103, Е107, L112, Y136 или Q102 (нумерация относительно SEQ ID NO: 4) заменен на синтетическую аминокислоту.
- 2. Вариант pIFN-α по п.1, причем синтетическая аминокислота представляет собой параацетилфе- 10 036509 нилаланин (pAF).
- 3. Вариант pIFN-α по п.1, причем вариант представляет собой SEQ ID NO: 7.
- 4. Вариант pIFN-α по п.1, причем вариант представляет собой SEQ ID NO: 10.
- 5. Вариант pIFN-α по п.1, причем вариант представляет собой SEQ ID NO: 13.
- 6. Вариант pIFN-α по п.1, причем вариант представляет собой SEQ ID NO: 16.
- 7. Вариант pIFN-α по п.1, причем вариант представляет собой SEQ ID NO: 19.
- 8. Вариант pIFN-α по п.1, причем вариант представляет собой SEQ ID NO: 8.
- 9. Вариант pIFN-α по п.1, причем вариант представляет собой SEQ ID NO: 11.
- 10. Вариант pIFN-α по п.1, причем вариант представляет собой SEQ ID NO: 14.
- 11. Вариант pIFN-α по п.1, причем вариант представляет собой SEQ ID NO: 17.
- 12. Вариант pIFN-α по п.1, причем вариант представляет собой SEQ ID NO: 20.
- 13. Вариант pIFN-α по любому из пп.1-12, причем синтетическая аминокислота является пегилированной.
- 14. Вариант pIFN-α по п.13, причем пегилированный вариант pIFN-α пегилирован с использованием PEG с молекулярной массой приблизительно от 5 до 40 кДа.
- 15. Вариант pIFN-α по п. 14, причем PEG представляет собой PEG с молекулярной массой 30 кДа.
- 16. Вариант свиного интерферона-α (pIFN-α), состоящий изPSCDLPQTHSLAHTRALRLLAQMRRISPFSCLDHRRDFGSPHEAFGGNQVQKAQAMALVHE MLQQTFQLFSTEGSAAAWNESLLHQFYTGLDQQLRDLEACVMQEAGL-pAF-GTPLLEEDSIRAVR KYFHRLTLYLQEKSYSPCAWEIVRAEVMRSFSSSRNLQDRLRKKE (SEQ ID NO: 14), причем остаток, соответствующий E107 (нумерация относительно SEQ ID NO: 4), заменен на параацетилфенилаланин (pAF), и указанный остаток pAF пегилирован с использованием линейного PEG с молекулярной массой 30 кДа.
- 17. Состав для предупреждения или лечения вирусной инфекции, содержащий вариант pIFN-α по любому из пп.1-16, содержащий 20 мМ ацетат натрия, 100 мМ хлорид натрия, 5% глицерин при рН 5,0 с титром варианта pIFN-α от приблизительно 2,0 до приблизительно 6,0 г/л.
- 18. Способ получения состава варианта pIFN-α по п.1, предусматривающий стадии:(a) очистка pIFN-α;(b) растворение указанного очищенного варианта pIFN-α в 50 мМ Tris, 6М гуанидине при рН 8;(c) инкубирование растворенного варианта pIFN-α при комнатной температуре в течение 16-24 ч в 20 мМ Tris, 1М аргинине, 10 мМ метионине (met), 1 мМ EDTA при рН 8,0;(d) удаление оставшихся ацетилированных вариантов;(e) конъюгирование варианта pIFN-α с PEG при отношении PEG к белку, составляющем от 1:1 до 1:2; и (f) очистка пегилированного варианта pIFN-α.
- 19. Способ предупреждения или лечения вирусной инфекции у свиньи, предусматривающий подкожное введение указанной свинье, нуждающейся в этом, варианта pIFN-α по любому из пп.1-16.
- 20. Способ по п. 19, причем вариант pIFN-α вводят в количестве от 25 до 150 мкг/кг массы животного.
- 21. Способ по п.20, предусматривающий второе введение указанного варианта pIFN-α в количестве от 25 до 150 мкг/кг массы животного.
- 22. Способ по п.21, причем второе введение осуществляют через 7-14 суток после первого введения.
- 23. Способ по п.19, причем вирусная инфекция выбрана из группы, состоящей из вируса свиного репродуктивного и респираторного заболевания, вируса ящура, вируса свиного гриппа, свиного цирковируса, вируса свиной эпизоотической диареи и вируса трансмиссивного гастроэнтерита.
- 24. Способ по любому из пп.19-23, причем свинья представляет собой новорожденного поросенка, или свинья представляет собой беременную свинью.
- 25. Многодозовый флакон, содержащий состав по п.17.
- 26. Применение варианта pIFN-α по любому из пп.1-16 в терапии у свиньи для лечения вирусной инфекции.
- 27. Применение варианта pIFN-α по любому из пп.1-16 для предупреждения или лечения вирусной инфекции.
- 28. Применение состава по п.17 или варианта pIFN-α по любому из пп.1-16 для лечения вирусной инфекции у свиньи.
- 29. Применение состава по п.17 или варианта pIFN-α по любому из пп.1-16 в производстве лекарственного средства для лечения вирусной инфекции у свиньи.
- 30. Применение по одному из пп.28 или 29, причем свинья представляет собой новорожденного поросенка или беременную свинью.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662352163P | 2016-06-20 | 2016-06-20 | |
| PCT/US2017/037964 WO2017222940A1 (en) | 2016-06-20 | 2017-06-16 | Pegylated porcine interferon and methods of use thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201892671A1 EA201892671A1 (ru) | 2019-05-31 |
| EA036509B1 true EA036509B1 (ru) | 2020-11-18 |
Family
ID=59258379
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201892671A EA036509B1 (ru) | 2016-06-20 | 2017-06-16 | Пегилированный свиной интерферон и способы его применения |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10960080B2 (ru) |
| EP (1) | EP3471755B1 (ru) |
| JP (2) | JP7093311B2 (ru) |
| KR (2) | KR102409470B1 (ru) |
| CN (2) | CN117024562A (ru) |
| AU (2) | AU2017280958A1 (ru) |
| BR (1) | BR112018076437A2 (ru) |
| CA (1) | CA3028683A1 (ru) |
| CL (1) | CL2018003697A1 (ru) |
| DK (1) | DK3471755T3 (ru) |
| EA (1) | EA036509B1 (ru) |
| ES (1) | ES2793773T3 (ru) |
| MX (1) | MX2018016295A (ru) |
| NZ (1) | NZ749962A (ru) |
| PL (1) | PL3471755T3 (ru) |
| PT (1) | PT3471755T (ru) |
| WO (1) | WO2017222940A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201808352B (ru) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3365340B1 (en) | 2015-10-19 | 2022-08-10 | Incyte Corporation | Heterocyclic compounds as immunomodulators |
| MD3377488T2 (ro) | 2015-11-19 | 2023-02-28 | Incyte Corp | Compuși heterociclici ca imunomodulatori |
| SG11201805300QA (en) | 2015-12-22 | 2018-07-30 | Incyte Corp | Heterocyclic compounds as immunomodulators |
| ES2906460T3 (es) | 2016-05-06 | 2022-04-18 | Incyte Corp | Compuestos heterocíclicos como inmunomoduladores |
| US20170342060A1 (en) | 2016-05-26 | 2017-11-30 | Incyte Corporation | Heterocyclic compounds as immunomodulators |
| CA3028685A1 (en) | 2016-06-20 | 2017-12-28 | Incyte Corporation | Heterocyclic compounds as immunomodulators |
| US20180016260A1 (en) | 2016-07-14 | 2018-01-18 | Incyte Corporation | Heterocyclic compounds as immunomodulators |
| ES2941716T3 (es) | 2016-08-29 | 2023-05-25 | Incyte Corp | Compuestos heterocíclicos como inmunomoduladores |
| US20180179179A1 (en) | 2016-12-22 | 2018-06-28 | Incyte Corporation | Heterocyclic compounds as immunomodulators |
| HRP20221216T1 (hr) | 2016-12-22 | 2022-12-23 | Incyte Corporation | Derivati tetrahidro imidazo[4,5-c]piridina kao induktori internalizacije pd-l1 |
| US20180179201A1 (en) | 2016-12-22 | 2018-06-28 | Incyte Corporation | Heterocyclic compounds as immunomodulators |
| ES2934230T3 (es) | 2016-12-22 | 2023-02-20 | Incyte Corp | Derivados de benzooxazol como inmunomoduladores |
| FI3774791T3 (fi) | 2018-03-30 | 2023-03-21 | Incyte Corp | Heterosyklisiä yhdisteitä immunomodulaattoreina |
| CN112752756A (zh) | 2018-05-11 | 2021-05-04 | 因赛特公司 | 作为PD-L1免疫调节剂的四氢-咪唑并[4,5-c]吡啶衍生物 |
| TW202115059A (zh) | 2019-08-09 | 2021-04-16 | 美商英塞特公司 | Ｐｄ—１／ｐｄ—ｌ１抑制劑之鹽 |
| CN110343164A (zh) * | 2019-08-22 | 2019-10-18 | 安阳工学院 | 一种高活性7位点突变的猪干扰素α突变体及其制备方法和应用 |
| AU2020357514A1 (en) | 2019-09-30 | 2022-04-07 | Incyte Corporation | Pyrido[3,2-d]pyrimidine compounds as immunomodulators |
| WO2021096849A1 (en) | 2019-11-11 | 2021-05-20 | Incyte Corporation | Salts and crystalline forms of a pd-1/pd-l1 inhibitor |
| US11760756B2 (en) | 2020-11-06 | 2023-09-19 | Incyte Corporation | Crystalline form of a PD-1/PD-L1 inhibitor |
| IL302590A (en) | 2020-11-06 | 2023-07-01 | Incyte Corp | Process for preparing PD-1/PD-L1 inhibitor and salts and crystalline forms thereof |
| US11780836B2 (en) | 2020-11-06 | 2023-10-10 | Incyte Corporation | Process of preparing a PD-1/PD-L1 inhibitor |
| CN113845599B (zh) * | 2021-11-01 | 2023-09-19 | 长春萤火虫生物科技有限公司 | 一种重组猪干扰素融合蛋白及其应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20070237743A1 (en) * | 2005-06-20 | 2007-10-11 | Villarete Lorelie H | Combination therapies using low-toxicity, long-circulating human interferon-alpha analogs |
| US20080132681A1 (en) * | 2005-06-03 | 2008-06-05 | Ambrx, Inc. | Human Interferon Molecules and Their Uses |
| CN104262480A (zh) * | 2014-09-28 | 2015-01-07 | 重庆理工大学 | 重组猪长效-α干扰素的构建和修饰方法及其冻干注射剂的制备方法 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6858409B1 (en) * | 1988-05-27 | 2005-02-22 | Amgen Inc. | Nucleic acids encoding interleukin-1 inhibitors and processes for preparing interleukin-1 inhibitors |
| DK0730470T3 (da) * | 1993-11-10 | 2002-06-03 | Enzon Inc | Forbedrede interferonpolymerkonjugater |
| US5908621A (en) * | 1995-11-02 | 1999-06-01 | Schering Corporation | Polyethylene glycol modified interferon therapy |
| JP2006213597A (ja) * | 2000-07-19 | 2006-08-17 | Pepgen Corp | インターフェロン−タウを用いるｃ型肝炎ウイルスの処置のための組成物およびモニタリングの方法 |
| US20050226845A1 (en) * | 2004-03-10 | 2005-10-13 | Chih-Ping Liu | Method of treatment using interferon-tau |
| AU2005211385B2 (en) | 2004-02-02 | 2008-12-11 | Ambrx, Inc. | Modified human growth hormone polypeptides and their uses |
| WO2009046080A1 (en) | 2007-10-01 | 2009-04-09 | Pharmaessentia Corp. | N-terminal modified interferon-alpha |
| JP5680534B2 (ja) | 2008-07-23 | 2015-03-04 | イーライ リリー アンド カンパニー | 修飾されているウシｇ−ｃｓｆポリペプチドおよびそれらの使用 |
-
2017
- 2017-06-16 WO PCT/US2017/037964 patent/WO2017222940A1/en unknown
- 2017-06-16 EA EA201892671A patent/EA036509B1/ru unknown
- 2017-06-16 CN CN202310995289.4A patent/CN117024562A/zh active Pending
- 2017-06-16 DK DK17734584.0T patent/DK3471755T3/da active
- 2017-06-16 KR KR1020187036853A patent/KR102409470B1/ko active IP Right Grant
- 2017-06-16 JP JP2018566519A patent/JP7093311B2/ja active Active
- 2017-06-16 BR BR112018076437A patent/BR112018076437A2/pt unknown
- 2017-06-16 MX MX2018016295A patent/MX2018016295A/es unknown
- 2017-06-16 US US16/311,540 patent/US10960080B2/en active Active
- 2017-06-16 ES ES17734584T patent/ES2793773T3/es active Active
- 2017-06-16 NZ NZ749962A patent/NZ749962A/en unknown
- 2017-06-16 CA CA3028683A patent/CA3028683A1/en active Pending
- 2017-06-16 EP EP17734584.0A patent/EP3471755B1/en active Active
- 2017-06-16 KR KR1020227019809A patent/KR102518451B1/ko active IP Right Grant
- 2017-06-16 PT PT177345840T patent/PT3471755T/pt unknown
- 2017-06-16 CN CN201780051072.0A patent/CN109641034B/zh active Active
- 2017-06-16 AU AU2017280958A patent/AU2017280958A1/en not_active Abandoned
- 2017-06-16 PL PL17734584T patent/PL3471755T3/pl unknown
-
2018
- 2018-12-11 ZA ZA2018/08352A patent/ZA201808352B/en unknown
- 2018-12-19 CL CL2018003697A patent/CL2018003697A1/es unknown
-
2021
- 2021-02-26 US US17/186,642 patent/US20210177980A1/en active Pending
- 2021-09-06 AU AU2021229132A patent/AU2021229132B2/en active Active
-
2022
- 2022-06-17 JP JP2022098147A patent/JP7441892B2/ja active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080132681A1 (en) * | 2005-06-03 | 2008-06-05 | Ambrx, Inc. | Human Interferon Molecules and Their Uses |
| US20070237743A1 (en) * | 2005-06-20 | 2007-10-11 | Villarete Lorelie H | Combination therapies using low-toxicity, long-circulating human interferon-alpha analogs |
| CN104262480A (zh) * | 2014-09-28 | 2015-01-07 | 重庆理工大学 | 重组猪长效-α干扰素的构建和修饰方法及其冻干注射剂的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| F LEFEVRE, LA BONNADIERE C: "Molecular cloning and sequencing of a gene encoding biologically active porcine alpha-interferon", JOURNAL OF INTERFERON RESEARCH, MARY ANN LIEBERT, INC., NEW YORK, NY, US, vol. 6, no. 4, 1 August 1986 (1986-08-01), US, pages 349 - 360, XP055396551, ISSN: 0197-8357, DOI: 10.1089/jir.1986.6.349 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20190039889A (ko) | 2019-04-16 |
| MX2018016295A (es) | 2019-09-16 |
| BR112018076437A2 (pt) | 2019-10-01 |
| KR102518451B1 (ko) | 2023-04-04 |
| EP3471755B1 (en) | 2020-04-22 |
| AU2017280958A1 (en) | 2018-12-20 |
| US10960080B2 (en) | 2021-03-30 |
| KR102409470B1 (ko) | 2022-06-16 |
| JP7093311B2 (ja) | 2022-06-29 |
| NZ749962A (en) | 2020-06-26 |
| EA201892671A1 (ru) | 2019-05-31 |
| US20190192673A1 (en) | 2019-06-27 |
| CN109641034A (zh) | 2019-04-16 |
| CN109641034B (zh) | 2023-08-15 |
| AU2021229132B2 (en) | 2023-04-06 |
| JP7441892B2 (ja) | 2024-03-01 |
| CL2018003697A1 (es) | 2019-05-10 |
| ES2793773T3 (es) | 2020-11-16 |
| JP2019519553A (ja) | 2019-07-11 |
| PL3471755T3 (pl) | 2020-10-19 |
| PT3471755T (pt) | 2020-05-22 |
| WO2017222940A1 (en) | 2017-12-28 |
| DK3471755T3 (da) | 2020-05-18 |
| KR20220086700A (ko) | 2022-06-23 |
| JP2022137063A (ja) | 2022-09-21 |
| ZA201808352B (en) | 2020-08-26 |
| US20210177980A1 (en) | 2021-06-17 |
| EP3471755A1 (en) | 2019-04-24 |
| CA3028683A1 (en) | 2017-12-28 |
| CN117024562A (zh) | 2023-11-10 |
| AU2021229132A1 (en) | 2021-09-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2021229132B2 (en) | Pegylated Porcine Interferon and Methods of Use Thereof | |
| EP2853536B1 (en) | Long-acting erythropoietin polypeptides and uses thereof | |
| KR20090089316A (ko) | Ｐｅｇ 변형된 엑센딘 또는 엑센딘 유사체 및 조성물 및 이의 용도 | |
| EA019968B1 (ru) | Модифицированные бычьи полипептиды g-csf и их применение | |
| EA033788B1 (ru) | Способ увеличения гидродинамического объема полипептида путем присоединения карбоксиконцевого пептида гонадотропина | |
| US10406235B2 (en) | Use of multi-arm polyethylene glycol modifier and application of multi-arm polyethylene glycol modifier in L-asparaginasum modification | |
| CN107056929A (zh) | 经过修饰的猪促生长素多肽和其用途 | |
| CN107674121A (zh) | 经过修饰的牛促生长素多肽和其用途 | |
| CA2710841A1 (en) | Y-shaped polyethylene glycol modified g-csf, the preparation and use thereof | |
| WO2005105151A1 (fr) | Derives pegyles de thymosine 1 | |
| CN101671390B (zh) | 人干扰素α衍生物及其聚乙二醇化修饰物的制备和用途 | |
| US20240052330A1 (en) | Blockade of sars-cov-2 infection using hydrocarbon stapled peptides | |
| US9895420B2 (en) | IL-1beta propeptide and IL-1Ra chimera and methods of using the same | |
| CN112029000A (zh) | 鸭干扰素α融合蛋白在制备抗鸭1型肝炎病毒的药物中的用途 |