EA032498B1 - ПРОМОТОР Pr13.5 ДЛЯ УСТОЙЧИВЫХ Т-КЛЕТОЧНЫХ И ГУМОРАЛЬНЫХ ИММУННЫХ РЕАКЦИЙ - Google Patents

ПРОМОТОР Pr13.5 ДЛЯ УСТОЙЧИВЫХ Т-КЛЕТОЧНЫХ И ГУМОРАЛЬНЫХ ИММУННЫХ РЕАКЦИЙ Download PDF

Info

Publication number
EA032498B1
EA032498B1 EA201590831A EA201590831A EA032498B1 EA 032498 B1 EA032498 B1 EA 032498B1 EA 201590831 A EA201590831 A EA 201590831A EA 201590831 A EA201590831 A EA 201590831A EA 032498 B1 EA032498 B1 EA 032498B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
promoter
mua
recombinant
nucleotide sequence
cell
Prior art date
Application number
EA201590831A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201590831A1 (ru
Inventor
Робин Штайгервальд
Кай Бринкманн
Original Assignee
Бавариан Нордик А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Бавариан Нордик А/С filed Critical Бавариан Нордик А/С
Publication of EA201590831A1 publication Critical patent/EA201590831A1/ru
Publication of EA032498B1 publication Critical patent/EA032498B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/863—Poxviral vectors, e.g. entomopoxvirus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
    • C12N2710/24122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
    • C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/60—Vector systems having a special element relevant for transcription from viruses

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение включает рекомбинантные поксвирусы, предпочтительно модифицированные вирусы осповакцины Анкара (MVA), содержащие промотор Pr13.5, функционально связанный с нуклеотидной последовательностью, кодирующей антиген, и способы их применения. Изобретение относится к композициям и способам индукции сильных CD8 Т-клеточных и гуморальных иммунных реакций на специфический(е) антиген(ы) путем проведения одной или более иммунизации рекомбинантным MVA млекопитающего, предпочтительно человека.

Description

Настоящее изобретение предлагает способы иммунизации млекопитающих, в том числе человека. В одном варианте реализации изобретения проводится иммунизация млекопитающих, в том числе крыс, кроликов, мышей и людей, включающая введение дозы рекомбинантного МУА млекопитающему, предпочтительно человеку. В одном варианте реализации изобретения первая доза содержит 108 ТСШ50 рекомбинантного вируса МУА, а вторая и дополнительные дозы (т.е. третья, четвертая, пятая и т.д.) содержат 108 ТСШ50 вируса. Введения могут проводиться в первой дозировке (для первичной иммунизации) и второй или дальнейших дозировке(ах) для реиммунизации.
Иммунизация может быть проведена систематически или местно, т.е. парентерально, подкожно, внутривенно, внутримышечно, интраназально или любым другим путем введения, известным квалифицированному специалисту.
- 9 032498
ί.'Ό8 Т-клеточные и гуморальные иммунные реакции.
Иммунизации рекомбинантным МУЛ, предлагаемым в настоящем изобретении, могут индуцировать устойчивую 0Ό8 Т-клеточную реакцию. В предпочтительных вариантах реализации изобретения после первой, второй, третьей, четвертой, пятой и т.д. иммунизации рекомбинантный МУА индуцирует у млекопитающего, предпочтительно человека, устойчивую 0Ό8 Т-клеточную реакцию на кодируемый антиген, более интенсивную, чем 0Ό8 Т-клеточная реакция на иммуноминантную вирусную 0Ό8 Тклеточную антигенную детерминанту, кодируемую вектором МУА, например Т8УКЕЕ8У (8ЕО ΙΌ N0:5). В предпочтительном варианте реализации изобретения после первой, второй, третьей, четвертой, пятой и т.д. иммунизации у млекопитающего, предпочтительно человека, индуцируется иммунодоминантная Т-клеточная реакция на кодируемый антиген. В предпочтительном варианте реализации изобретения после второй, третьей, четвертой, пятой и т.д. иммунизации рекомбинантный МУА индуцирует у млекопитающего, предпочтительно человека, СИ8 Т-клеточную реакцию на кодируемый антиген, затрагивающую по меньшей мере 10, 15, 20, 25, 30 или 35% от общего количества СИ8 Т-клеток. В предпочтительном варианте реализации изобретения после второй, третьей, четвертой, пятой и т.д. иммунизации рекомбинантный МУА усиливает 0Ό8 Т-клеточную реакцию на кодируемый антиген у млекопитающего, предпочтительно человека, по меньшей мере в 2, 3, 4, 5 или 10 раз (т.е. от 1 до 2, 3, 4, 5 или 10% от общего количества 0Ό8 Т-клеток) по сравнению с реакцией на кодируемый антиген после однократного введения или усиливает 0Ό8 Т-клеточную реакцию на кодируемый антиген у млекопитающего, предпочтительно человека, по меньшей мере в 2, 3, 4, 5 или 10 раз по сравнению с Т-клеточной реакцией на вирусный антиген (например, В8К). В предпочтительном варианте реализации изобретения рекомбинантный МУА вызывает 0Ό8 Т-клеточную реакцию на кодируемый антиген у млекопитающего, предпочтительно человека, по меньшей мере в 2, 3, 4, 5 или 10 раз более сильную, чем Т-клеточная реакция на вирусный антиген (например, В8К) после однократного введения. В наиболее предпочтительном варианте реализации изобретения 0Ό8 Т-клеточная реакция на кодируемый антиген у млекопитающего, предпочтительно человека, значительно усиливается вследствие 2, 3, 4 или 5 и т.д. иммунизаций по сравнению с реакцией на поздний вирусный антиген (например, В8К.).
Интенсивность 0Ό8 Т-клеточной реакции может быть определена, например, путем отбора примерно 100-120 мкл крови в ЕАС8/гепариновый буфер. МКПК могут быть получены путем лизиса эритроцитов с помощью лизирующего буфера для ККТ. Затем может быть проведено одновременное окрашивание 0УА- и В8В-специфических 0Ό8 Т-клеток в образцах МКПК с помощью анти-СИ8а-Е1ТС, СЭ44-РегСРСу5.5 и декстрамеров МНС I класса, образующих комплекс с соответствующими Н-2КЬсвязывающими пептидами δΙΙΝΕΕΚΕ (8ЕО ΙΌ N0:4) или Т8УКЕЕ8У (8Е0 ΙΌ N0:5). Декстрамер МНС I класса δΙΙΝΕΕΚΕ (8Е0 ΙΌ N0:4) может быть помечен РЕ, а декстрамер Т8УКЕЕ8У (8Е0 ΙΌ N0:5) АРС. Окрашенные клетки могут анализироваться с помощью проточной цитометрии в системе ВО Вю5С1епее5 ВО Ь8К. ΙΙ. Возможно получать по десять тысяч 0Ό8+ Т-клеток в каждом образце.
Кроме того, интенсивность 0Ό8 Т-клеточной реакции может быть определена путем отбора крови у иммунизированного млекопитающего, предпочтительно человека, и отделения мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК). Они могут быть ресуспендированы в питательной среде, содержащей 5 мкг/мл брефелдина А (ВЕА, Со1щР1ид. ВО Вю5С1епее5) и 1 мкМ тестируемых пептидов, включая пептиды против иммунодоминантных антигенных детерминант МУА (т.е. Т8УКЕЕ8У; 8Е0 ΙΌ N0:5) (В8К) и пептиды, происходящие от экспрессируемого неоантигена. Затем МКПК можно инкубировать в течение 5 ч при 37°С в 5% СО2, собирать, ресуспендировать в 3 мл холодного ФСБ/10% ФТС/2 мМ ЭДТК и оставлять на ночь при 4°С. На следующий день МКПК могут быть окрашены антителами анти-СО8а-Рас-В1ие (клон 53-6.7), анти-СЭ62Е-РЕ-Су7, анти-СИ44-АРС-А1еха 750 и анти-СИ4РегСР-Су5.5 (все антитела от ВО ВюкаепСек). МКПК можно инкубировать с указанными антителами в необходимых разведениях в течение 30 мин при 4°С в темноте. После промывки клетки могут быть фиксированы и пермеабилизированы с помощью набора Су1оПх/Су1орегтТМ Р1и§ (ВО Вю5С1епее5) согласно инструкциям производителя. После промывки МКПК может быть проведено окрашивание внутриклеточного интерферона-γ (ШЫ-у) с помощью ЕНС-конъюгированного анти-ШЫ-у антитела (ВО ЬюкшепСек), разведенного в пермеабилизирующем буфере для отмывки (ВО ВюкаепСек). Окрашенные клетки могут анализироваться с помощью проточной цитометрии.
Иммунизации рекомбинантным МУА, предлагаемым в настоящем изобретении, могут индуцировать устойчивую гуморальную иммунную реакцию. Гуморальные иммунные реакции могут быть оценены с помощью твердофазного ИФА.
В рамках настоящего изобретения устойчивая СИ8 Т-клеточная реакция подразумевает больший процент неоантиген-специфических СИ8 Т-клеток, чем процент, который наблюдается для такого же МУА-конструкта, содержащего промотор Рг8 (5'АААААТТОАААТТТТАТТТТТТТТТТТТООААТАТАА 3'; 8Е0 ΙΌ N0:6), после однократной иммунизации. В некоторых вариантах реализации изобретения при СИ8 Т-клеточной реакции наблюдается по меньшей мере в 1,5 или 2 раза больше неоантигенспецифических СИ8 Т-клеток, чем для такого же МУА-конструкта, содержащего промотор Рг8 (8Е0 ΙΌ N0:6), после однократной иммунизации.
В рамках настоящего изобретения устойчивая гуморальная иммунная реакция подразумевает титр
- 10 032498 антител, более высокий, чем титр антител, наблюдаемый для такого же МУА-конструкта, содержащего промотор Рг8 (8ЕО ΙΌ N0:6), после однократной иммунизации. В некоторых вариантах реализации изобретения титр антител по меньшей мере в 1,5 или 2 раза больше, чем титр антител, наблюдаемый для такого же МУА-конструкта, содержащего промотор Рг8 (8Е0 ΙΌ N0:6), после однократной иммунизации.
Тип индуцируемой рекомбинантным МУА реакции на неоантиген - устойчивая СИ8 Т-клеточная реакция или устойчивая гуморальная иммунная реакция - может быть определен, как описано ниже в примерах. Например, как МУА13.5 51юг1. так и МУА13.5 1опд индуцируют устойчивую СИ8 Тклеточную реакцию, как определено в настоящем документе. МУА13.5 1опд индуцирует устойчивую гуморальную иммунную реакцию, как определено в настоящем документе.
Несмотря на то, что способ предпочтительно включает однократное введение вектора, в некоторых вариантах реализации изобретения могут проводиться две, три, четыре, пять, шесть, семь или более иммунизаций млекопитающего, предпочтительно человека, рекомбинантным МУА.
В предпочтительных вариантах реализации изобретения кодируемый антиген представляет собой бактериальный, вирусный или опухолевый антиген. В предпочтительном варианте реализации изобретения антиген является чужеродным антигеном для млекопитающего, в том числе человека.
Примеры.
Пример 1. Конструирование МУА-рекомбинантов.
Клетки НеЬа инфицировали МУА-ΒΝ при множественности заражения (М01), составляющей 10 (10 ТСГО50 на клетку), а на второй и восьмой час от начала инфекции получали тотальную РНК. Синтезировали специфические праймеры к различным 0КБ МУА и проводили ПЦР с быстрой амплификацией концов кДНК (ЕйцСНоюе® КЬМ-КАСЕ Κίΐ, ЫБе Теейпо1од1е8, ОапШабО Оегшапу) для получения ПЦРпродуктов, соответствующих РНК МУА, кодирующим эти 0КЕ. ПЦР-продукты былы секвенированы для определения сайтов инициации транскрипции. Исходя из этих данных были определены промоторы для транскрипции РНК, кодирующих эти 0КЕ. В МУА-конструкты были вставлены промоторы МУА для следующих 0КЕ (Ваиг е! а1., 1оигпа1 о£ У1го1оду, Уо1. 84 (17): 8743-8752 (2010)) для контроля экспрессии гена овальбумина (0УА): МУА13.5 (СУА022; УК 018), МУА050Б (Е3Ь; УК 059), МУА022Б (К1Ь; УК 032) и МУА170К (В3К; УК 185).
Пример 2. Промотор-зависимые уровни экспрессии РНК ίη νίΙΐΌ.
Инфицирование клеток НеЬа рекомбинантными вирусами МУА при М01, составляющей 10, производилось с помощью прикрепления вирусов на льду в течение 1 ч. После прикрепления клетки промывали и собирали в нулевой момент времени (0 ч) или инкубировали при 37°С для сбора в другие моменты времени. Пробы отбирали на 0,5, 1, 2, 4 и 8 ч от начала инфекции. Клетки гомогенизировали и экстрагировали тотальную РНК. РНК подвергали ДНК-азному расщеплению, после чего с помощью олиго(бТ)праймирования была синтезирована кДНК. Полученные образцы кДНК использовались в качестве матрицы для одновременной амплификации кДНК 0УА и актина с помощью Тас|тап-с|РСК. Реакцию проводили в циклере АВ7500 от АррБеб Вюкуйет. Результаты представлены на фиг. 3.
Пример 3. Промотор-зависимые уровни белковой экспрессии ίη νίΙΐΌ.
Клетки НеЬа культивировали в ИМЕМ с добавлением 10% ФТС.
Клетки НеЬа инфицировали при М01 рекомбинантного вируса МУА, составляющей 10 (10 ТСШ50 на клетку). Инфицированные клетки отбирали на 1, 2, 4, 6, 8 и 24 ч от начала инфекции, фиксировали и пермеабилизировали. В половине клеток каждого образца проводили окрашивание белка 0УА с помощью антител кролика к 0УА цыпленка, а в другой половине проводили окрашивание антигенов МУА с помощью поликлональных антител кролика к УАСУ. Образцы анализировали с помощью проточного цитофлуориметра ЕАС8Са11Ьиг (ΒΌ ВюкОепсек) и программного обеспечения Е1о\\'1о. Результаты представлены на фиг. 4.
Пример 4. Иммунизации и забор крови у мышей.
В этом исследовании использовались группы мышей (С57/В16). В каждой группе проводили суммарно три иммунизации. В качестве контроля иммунных реакций использовали ФСБ-инъецированную группу. Для оценки иммунных реакций в течение исследования отбирали кровь из хвостовой вены.
Мышей иммунизировали интраперитонеально при 108 ТСШ50 соответствующих вирусов МУА в растворе ФСБ (300 мкл, общий объем) на 0, 4 и 8 недели. Заборы крови для анализа Т-клеток проводили на первую неделю после каждой иммунизации, а заборы крови для анализа антител - на третью неделю после каждой иммунизации.
Пример 5. Окрашивание Т-клеток и определение антител.
У каждой мыши отбирали примерно 100-120 мкл крови в ЕАС8/гепариновый буфер. МКПК получали путем лизиса эритроцитов с помощью лизирующего буфера для ККТ. Затем проводили одновременное окрашивание 0УА- и В8К-специфических СИ8 Т-клеток в образцах МКПК с помощью антиСО8а-Е1ТС, СИ44-РегСРСу5.5 и декстрамеров МНС I класса, образующих комплекс с соответствующими Н-2КЬ-связывающими пептидами: δΙΕΝΕΕΚΚ (8Е0 ΙΌ N0:4) или Т8УКЕЕ8У (8Е0 ΙΌ N0:5). Декстрамер МНС Ι класса МШЕЕКБ (8Е0 ΙΌ N0:4) был помечен РЕ, а декстрамер Т8УКЕЕ8У (8Е0 ΙΌ N0:5) - АРС. Окрашенные клетки анализировали с помощью проточной цитометрии в системе ΒΌ Вюкаепсек
- 11 032498
ΒΌ Ь8В II. Получали по десять тысяч СЭ8+ Т-клеток в каждом образце. Результаты представлены на фиг. 5-6.
Получали сыворотку из цельной крови. Для определения специфических антител проводили твердофазный ИФА овальбумина и твердофазный ИФА МУА (набор Зсгахуш от 8сгатцп П1адпо8Йка СтЬН. Нс1бсзсс. Ссгтапу). Результаты представлены на фиг. 7.
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> ΒΑνΑΚΙΑΝ ΝΟΚΌΙΟ Α/3 <120> ПРОМОТОР ΡΚ13.5 ДЛЯ УСТОЙЧИВЫХ Т-КЛЕТОЧНЫХ И ГУМОРАЛЬНЫХ ИММУННЫХ РЕАКЦИЙ <130> ΒΝ83ΡΟΤ <150> 61/719,429 <151> 2012-10-28 <160>7 <170> РаЬепЫп νθΓ^ίοη 3.5 <210> 1 <211>44 <212> ДНК <213> Вирус коровьей оспы <400>1
ЬаааааЬада аасЬаЬааЬс аЬаЬааЬадЬ дЬаддЬЬддЬ адЬа44 <210> 2 <211>124 <212> ДНК <213> Вирус коровьей оспы <400> 2
ЬаааааЬада аасЬаЬааЬс аЬаЬааЬадЬ дЬаддЬЬддЬ адЬаЬЬдсЬс ЬЬдЬдасЬад 60
адасЬЬЬадЬ ЬааддЬасЬд ЬаааааЬада аасЬаЬааЬс аЬаЬааЬадЬ дЬаддЬЬддЬ 120
адЬа 124
<210>3 <211>273 <212> ДНК <213> Вирус коровьей оспы <400>3
ЬадасдасаЬ даЬададдад дЬаЬссаЬЬд асдаЬааЬсд ЬЬЬаЬсааса сЬассдЬЬад60 аааЬЬадаса ЬЬЬдаЬЬЬЬс ЬсдЬасдсдЬ ЬссЬаЬаааа аЬадааасЬа ЬааЬсаЬаЬа120 аЬадЬдЬадд ЬЬддЬадЬаЬ ЬдсЬсЬЬдЬд асЬададасЬ ЬЬадЬЬаадд ЬасЬдЬаааа180 аЬадааасЬа ЬааЬсаЬаЬа аЬадЬдЬадд ЬЬддЬадЬад ддЬасЬсдЬд аЬЬааЬЬЬЬа240
ЬЬдЬЬааасЬ ЬдЬссЬЬаад ЬсЬЬаЬЬааЬ аЬд273 <210>4 <211> 8
- 12 032498 <212> Протеин <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Пептид ΟνΑ <400>4
5ег 11е 11е Азп РИе О1и Ьуз Ьеи <210>5 <211> 8 <212> Протеин <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Пептид Б8К.
<400> 5
ТИг Бег Туг Ьуз РИе О1и Бег να1
5
<210> <211> <212> <213> 6 37 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетический промотор
<400> 6
аааааЬЕдаа аЕЕЕЕаЬЕЕЕ ЁЁЁЁЁЁЁЁдд аакакаа 37
<210> <211> <212> <213> 7 16 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Синтетический промотор
<400> 7
ааЕЕЕЕЕааЬ аЕаЬаа 16

Claims (6)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ индукции СИ8 Т-клеточного ответа на неоантиген у человека, включающий одно или более введений рекомбинантного модифицированного вируса осповакцины Анкара (МУА), где рекомбинантный МУА содержит промотор Рг13.5, функционально связанный с нуклеотидной последовательностью, кодирующей неоантиген, причем промотор Рг13.5 содержит 1 или 2 копии нуклеотидной последовательности, состоящей по меньшей мере из 40 оснований, которая на 100% идентична 8ЕО ГО N0:1.
  2. 2. Способ по п.1, в котором промотор Рг13.5 содержит 2 копии нуклеотидной последовательности, состоящей по меньшей мере из 40 нуклеотидов, которая на 100% идентична 8Е0 ГО N0:1.
  3. 3. Способ по п.1, в котором промотор Рг13.5 содержит 8Е0 ГО N0:2.
  4. 4. Рекомбинантный модифицированный вирус осповакцины Анкара (МУА) для индукции СГО8 Тклеточного ответа на неоантиген у человека, содержащий промотор Рг13.5, функционально связанный с нуклеотидной последовательностью, кодирующей неоантиген, в котором промотор Рг13.5 содержит 1 или 2 копии нуклеотидной последовательности, состоящей по меньшей мере из 40 оснований, которая на
    - 13 032498
    100% идентична 8Ε^ ΙΌ N0:1.
  5. 5. Рекомбинантный МУЛ по п.4, в котором промотор Рг13.5 содержит 2 копии нуклеотидной последовательности, состоящей по меньшей мере из 40 нуклеотидов, которая на 100% идентична 8Ε^ ΙΌ N0:1.
  6. 6. Рекомбинантный МУА по п.4, в котором промотор Рг13.5 содержит 8Ε^ ΙΌ N0:2.
    ТАЕ
    Рг13.5-1оп§ ат;
    ТГ ТТАОТТА
    Т- Т%Т-_А
    ААСТА ТААТСАТАТА
    Рг13 .δ-δήοΓίζ
    г.тетет
EA201590831A 2012-10-28 2013-10-28 ПРОМОТОР Pr13.5 ДЛЯ УСТОЙЧИВЫХ Т-КЛЕТОЧНЫХ И ГУМОРАЛЬНЫХ ИММУННЫХ РЕАКЦИЙ EA032498B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261719429P 2012-10-28 2012-10-28
PCT/EP2013/003239 WO2014063832A1 (en) 2012-10-28 2013-10-28 Pr13.5 promoter for robust t-cell and antibody responses

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201590831A1 EA201590831A1 (ru) 2015-08-31
EA032498B1 true EA032498B1 (ru) 2019-06-28

Family

ID=49513897

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201590831A EA032498B1 (ru) 2012-10-28 2013-10-28 ПРОМОТОР Pr13.5 ДЛЯ УСТОЙЧИВЫХ Т-КЛЕТОЧНЫХ И ГУМОРАЛЬНЫХ ИММУННЫХ РЕАКЦИЙ
EA201990114A EA201990114A1 (ru) 2012-10-28 2013-10-28 Промотор pr13.5 для устойчивых т-клеточных и гуморальных иммунных реакций

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201990114A EA201990114A1 (ru) 2012-10-28 2013-10-28 Промотор pr13.5 для устойчивых т-клеточных и гуморальных иммунных реакций

Country Status (26)

Country Link
US (2) US9828414B2 (ru)
EP (2) EP2912183B1 (ru)
JP (2) JP6505016B2 (ru)
KR (2) KR20200087880A (ru)
CN (1) CN104755622B (ru)
AU (1) AU2013337018B2 (ru)
BR (1) BR112015009320A2 (ru)
CA (1) CA2887623C (ru)
CY (1) CY1123181T1 (ru)
DK (1) DK2912183T3 (ru)
EA (2) EA032498B1 (ru)
ES (1) ES2800623T3 (ru)
HK (1) HK1212383A1 (ru)
HU (1) HUE049706T2 (ru)
IL (1) IL238130B (ru)
IN (1) IN2015DN03326A (ru)
LT (1) LT2912183T (ru)
MX (2) MX2015005264A (ru)
MY (2) MY194609A (ru)
NZ (1) NZ706637A (ru)
PT (1) PT2912183T (ru)
SG (2) SG10201704657WA (ru)
SI (1) SI2912183T1 (ru)
UA (1) UA118340C2 (ru)
WO (1) WO2014063832A1 (ru)
ZA (1) ZA201502892B (ru)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IN2015DN03326A (ru) * 2012-10-28 2015-10-09 Bavarian Nordic As
FR3042121A1 (fr) 2015-10-08 2017-04-14 Jean-Marc Limacher Composition anti-tumorale
PL3407910T3 (pl) 2016-01-29 2022-08-16 Bavarian Nordic A/S Rekombinowana zmodyfikowana szczepionka przeciwko wirusowi krowianki ankara (mva) przeciwko wirusowi zapalenia mózgu koni
CN109922829A (zh) * 2016-05-02 2019-06-21 扬森疫苗与预防公司 治疗性hpv疫苗组合
JP7062003B2 (ja) 2016-09-28 2022-05-02 バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ ポックスウイルス内における導入遺伝子の安定性を向上させるための組成物及び方法
WO2018091680A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Transgene Sa Cowpox-based oncolytic vectors
ES2905478T3 (es) 2016-12-28 2022-04-08 Transgene Sa Virus oncolíticos y moléculas terapéuticas
EP3638302B1 (en) 2017-06-15 2024-03-13 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Poxvirus vectors encoding hiv antigens, and methods of use thereof
WO2019020543A1 (en) 2017-07-28 2019-01-31 Transgene Sa ONCOLYTIC VIRUSES EXPRESSING AGENTS TARGETING METABOLIC IMMUNE MODULATORS
CA3073310A1 (en) 2017-08-24 2019-02-28 Bavarian Nordic A/S Combination therapy for treating cancer with an intravenous administration of a recombinant mva and an antibody
MX2020006471A (es) 2017-12-19 2020-09-22 Janssen Sciences Ireland Unlimited Co Metodos y composiciones para inducir una respuesta inmune contra el virus de hepatitis b (hbv).
GB201807932D0 (en) * 2018-05-16 2018-06-27 Redchenko Irina Compositions and methods for inducing an immune response
WO2020011754A1 (en) 2018-07-09 2020-01-16 Transgene Chimeric vaccinia viruses
CN110904127B (zh) 2018-09-18 2024-09-20 瓦赫宁恩研究基金会 非洲猪瘟病毒疫苗
AU2019354101A1 (en) 2018-10-05 2021-04-15 Bavarian Nordic A/S Combination therapy for treating cancer with an intravenous administration of a recombinant mva and an immune checkpoint antagonist or agonist
AU2019385665A1 (en) 2018-11-20 2021-05-27 Bavarian Nordic A/S Therapy for treating cancer with an intratumoral and/or intravenous administration of a recombinant MVA encoding 4-1BBL (CD137L) and/or CD40l
US20230190922A1 (en) 2019-11-20 2023-06-22 Bavarian Nordic A/S Recombinant MVA Viruses for Intratumoral and/or Intravenous Administration for Treating Cancer
US20230233670A1 (en) 2020-06-10 2023-07-27 Bavarian Nordic A/S A Recombinant Modified Vaccinia Virus (MVA) Vaccine Against Coronavirus Disease
WO2022084333A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Hiv vaccine regimens
CA3230406A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Jurgen Hausmann Utilization of micro-rna for downregulation of cytotoxic transgene expression by modified vaccinia virus ankara (mva)
CA3240596A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Cigdem ATAY LANGBEIN Therapy for modulating immune response with recombinant mva encoding il-12
WO2023118508A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Bavarian Nordic A/S Recombinant mva viruses for intraperitoneal administration for treating cancer
WO2024003239A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Bavarian Nordic A/S RECOMBINANT MODIFIED saRNA (VRP) AND VACCINIA VIRUS ANKARA (MVA) PRIME-BOOST REGIMEN
WO2024038175A1 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Transgene Chimeric poxviruses
WO2024149832A1 (en) 2023-01-12 2024-07-18 Bavarian Nordic A/S RECOMBINANT MODIFIED saRNA (VRP) FOR CANCER VACCINE

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006073431A2 (en) * 2004-06-25 2006-07-13 Merial Limited Avipox recombinants expressing foot and mouth disease virus genes

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9711957D0 (en) * 1997-06-09 1997-08-06 Isis Innovation Methods and reagents for vaccination
GB9922361D0 (en) * 1999-09-21 1999-11-24 Isis Innovation Generating an immune response to an antigen
AU2002231639B2 (en) 2000-11-23 2007-01-04 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia ankara virus variant
JP2008301792A (ja) * 2007-06-11 2008-12-18 National Univ Corp Shizuoka Univ 改変ポリヘドリンプロモーター、バクミド変異体及び目的タンパク質の製造方法
EP2367944B1 (en) 2008-11-27 2019-01-09 Bavarian Nordic A/S Promoters for recombinant viral expression
US8394385B2 (en) * 2009-03-13 2013-03-12 Bavarian Nordic A/S Optimized early-late promoter combined with repeated vaccination favors cytotoxic T cell response against recombinant antigen in MVA vaccines
IN2015DN03326A (ru) * 2012-10-28 2015-10-09 Bavarian Nordic As

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006073431A2 (en) * 2004-06-25 2006-07-13 Merial Limited Avipox recombinants expressing foot and mouth disease virus genes

Non-Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Anonymous: "Vaccinia virus WR, complete genome - Nucleotide - NCBI", GenBank Accession Number AY243312, 14 June 2006 [2006-06-14], XP055095213, Retrieved from the Internet: URL:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/29 692106 [retrieved on 2014-01-08] cited in the application *VACWR018 nucleotide and amino acid sequence* *
DAVISON, A.J. ; MOSS, B.: "Structure of vaccinia virus early promoters", JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY, ACADEMIC PRESS, UNITED KINGDOM, vol. 210, no. 4, 20 December 1989 (1989-12-20), United Kingdom, pages 749 - 769, XP024010295, ISSN: 0022-2836, DOI: 10.1016/0022-2836(89)90107-1 *
J A TINE, D E LANAR, D M SMITH, B T WELLDE, P SCHULTHEISS, L A WARE, E B KAUFFMAN, R A WIRTZ, C DE TAISNE, G S HUI, S P CHANG, P C: "NYVAC-Pf7: a poxvirus-vectored, mutliantigen, multistage vaccine candidate for Plasmodium falciparum malaaia.", INFECTION AND IMMUNITY, vol. 64, no. 9, 1 September 1996 (1996-09-01), pages 3833 - 3844, XP055095101 *
KAREN BAUR, BRINKMANN, SCHWENEKER, P�TZHOLD, MEISING-HENSCHEL, HERMANN, STEIGERWALD, CHAPLIN, SUTER, HAUSMANN: "Immediate-early expression of a recombinant antigen by modified vaccinia virus Ankara breaks the immunodominance of strong vector-specific B8R antigen in acute and memory CD8 T-cell responses", JOURNAL OF VIROLOGY, vol. 84, no. 17, 1 September 2010 (2010-09-01), pages 8743 - 8752, XP055057695, DOI: 10.1128/JVI.00604-10 *
KOTWAL, G.J. ; MOSS, B.: "Analysis of a large cluster of nonessential genes deleted from a vaccinia virus terminal transposition mutant", VIROLOGY, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 167, no. 2, 1 December 1988 (1988-12-01), AMSTERDAM, NL, pages 524 - 537, XP023051144, ISSN: 0042-6822 *
M WACHSMAN, J H LUO, L AURELIAN, M E PERKUS, E PAOLETTI: "Antigen-presenting capacity of epidermal cells infected with vaccinia virus recombinants containing the herpes simplex virus glycoprotein D, and protective immunity", THE JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY, SOC GENERAL MICROBIOL, ENGLAND, 1 September 1989 (1989-09-01), ENGLAND, pages 2513 - 2520, XP055095225, Retrieved from the Internet <URL:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2550579> DOI: 10.1099/0022-1317-70-9-2513 *
MAGDALINI MOUTAFTSI, DAVID C TSCHARKE, KERRIE VAUGHAN, DAVID M KOELLE, LAWRENCE STERN, MAURICIO CALVO-CALLE, FRANCIS ENNIS, MASANO: "Uncovering the interplay between CD8, CD4 and antibody responses to complex pathogens", FUTURE MICROBIOLOGY, vol. 5, no. 2, 1 February 2010 (2010-02-01), pages 221 - 239, XP055095338, ISSN: 17460913, DOI: 10.2217/fmb.09.110 *
MAGDALINI, MOUTAFTSI, BUI HUYNH-HOA, PETERS BJOERN, SIDNEY JOHN, SALEK-ARDAKANI SHAHRAM, OSEROFF CARLA, PASQUETTO VALERIE, CROTTY: "Vaccinia Virus-Specific CD4+ T Cell Responses Target a Set of Antigens Largely Distinct from Those Targeted by CD8 T Cell Responses", THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY, vol. 178, no. 11, 1 June 2007 (2007-06-01), pages 6814 - 6820, XP055095361 *
PERKUS M.E., LIMBACH K., PAOLETTI E.: "CLONING AND EXPRESSION OF FOREIGN GENES IN VACCINIA VIRUS, USING A HOST RANGE SELECTION SYSTEM.", JOURNAL OF VIROLOGY., THE AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY., US, vol. 63., no. 09., 1 September 1989 (1989-09-01), US, pages 3829 - 3836., XP000351647, ISSN: 0022-538X *
SONIA T. WENNIER, BRINKMANN KAY, STEINH�U�ER CHARLOTTE, MAYL�NDER NICOLE, MNICH CLAUDIA, WIELERT URSULA, DIRMEIER ULRIKE, HAUSMANN: "A Novel Naturally Occurring Tandem Promoter in Modified Vaccinia Virus Ankara Drives Very Early Gene Expression and Potent Immune Responses", PLOS ONE, vol. 8, no. 8, pages e73511, XP055075403, DOI: 10.1371/journal.pone.0073511 *

Also Published As

Publication number Publication date
IN2015DN03326A (ru) 2015-10-09
SG10201704657WA (en) 2017-07-28
KR102135818B1 (ko) 2020-07-22
SG11201503200PA (en) 2015-05-28
SI2912183T1 (sl) 2020-07-31
IL238130B (en) 2019-09-26
EP2912183B1 (en) 2020-05-06
CY1123181T1 (el) 2021-10-29
PT2912183T (pt) 2020-06-05
KR20200087880A (ko) 2020-07-21
MY194609A (en) 2022-12-06
BR112015009320A2 (pt) 2017-10-17
WO2014063832A1 (en) 2014-05-01
US9828414B2 (en) 2017-11-28
HK1212383A1 (en) 2016-06-10
US20150299267A1 (en) 2015-10-22
AU2013337018A9 (en) 2018-08-30
CA2887623C (en) 2021-02-16
MX2015005264A (es) 2015-07-17
EA201590831A1 (ru) 2015-08-31
US20180111966A1 (en) 2018-04-26
AU2013337018A1 (en) 2015-04-30
KR20150079596A (ko) 2015-07-08
LT2912183T (lt) 2020-07-27
CA2887623A1 (en) 2014-05-01
CN104755622B (zh) 2021-04-20
US11028130B2 (en) 2021-06-08
JP2015533841A (ja) 2015-11-26
EP2912183A1 (en) 2015-09-02
AU2013337018B2 (en) 2019-09-05
JP6505016B2 (ja) 2019-04-24
HUE049706T2 (hu) 2020-10-28
EP3778904A1 (en) 2021-02-17
CN104755622A (zh) 2015-07-01
MX2021001638A (es) 2021-05-12
ZA201502892B (en) 2020-08-26
JP6818797B2 (ja) 2021-01-20
IL238130A0 (en) 2015-05-31
ES2800623T3 (es) 2021-01-04
JP2019131572A (ja) 2019-08-08
DK2912183T3 (da) 2020-07-27
NZ706637A (en) 2019-02-22
MY171687A (en) 2019-10-23
UA118340C2 (uk) 2019-01-10
EA201990114A1 (ru) 2019-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA032498B1 (ru) ПРОМОТОР Pr13.5 ДЛЯ УСТОЙЧИВЫХ Т-КЛЕТОЧНЫХ И ГУМОРАЛЬНЫХ ИММУННЫХ РЕАКЦИЙ
Scheid et al. A method for identification of HIV gp140 binding memory B cells in human blood
EA002390B1 (ru) Полиоболочечная вирусная вакцина против вируса иммунного дефицита человека (вич), способ генерации гуморального и/или клеточного иммунного ответа у млекопитающих на вич и бифункциональная плазмида
CN116437951A (zh) Sars-cov-2疫苗
JP2010540674A5 (ru)
US9913895B2 (en) Cross-reactive T cell epitopes of HIV, SIV, and FIV for vaccines in humans and cats
Miyahira et al. Immune responses against a single CD8+-T-cell epitope induced by virus vector vaccination can successfully control Trypanosoma cruzi infection
WO2021119545A1 (en) Durable vaccination
JP2022539417A (ja) Ｈｉｖ抗原及びｍｈｃ複合体
Jing et al. An extremely diverse CD4 response to vaccinia virus in humans is revealed by proteome-wide T-cell profiling
CA3173795A1 (en) Attenuated poxvirus vector based vaccine for protection against covid-19
Lu et al. Epitope analysis, expression and protection of SAG5A vaccine against Toxoplasma gondii
CN112220921B (zh) 一种针对呼吸道合胞病毒感染的组合疫苗
EP3792360A1 (en) Marburg virus vaccine with human replication-deficient adenovirus as vector
JP2023521662A (ja) 感染症抗原及びワクチン
EP4138890A2 (en) Antigen-encoding cassettes
Rojas et al. Vaccination with recombinant adenovirus expressing peste des petits ruminants virus-F or-H proteins elicits T cell responses to epitopes that arises during PPRV infection
EP4192496A2 (en) Multiepitope vaccine cassettes
Wijesundara et al. IL-4 and IL-13 mediated down-regulation of CD8 expression levels can dampen anti-viral CD8+ T cell avidity following HIV-1 recombinant pox viral vaccination
ES2544702T3 (es) Vacunas en forma de ADNi y métodos para utilizarlas
Rodríguez-Martín et al. Immunization with bovine herpesvirus-4-based vector delivering PPRV-H protein protects sheep from PPRV challenge
Thomson et al. Development of a synthetic consensus sequence scrambled antigen HIV-1 vaccine designed for global use
Feng et al. Pathogen-associated T follicular helper cell plasticity is critical in anti-viral immunity
US20210052720A1 (en) Cap260, cap174 and k0224 hiv-1 envelopes, peptide and compositions
Seaman et al. Vaccine-elicited memory cytotoxic T lymphocytes contribute to Mamu-A* 01-associated control of simian/human immunodeficiency virus 89.6 P replication in rhesus monkeys

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KZ KG TJ TM