EA031815B1 - Процесс очищения l-альфа-глицерофосфорилхолина - Google Patents
Процесс очищения l-альфа-глицерофосфорилхолина Download PDFInfo
- Publication number
- EA031815B1 EA031815B1 EA201790005A EA201790005A EA031815B1 EA 031815 B1 EA031815 B1 EA 031815B1 EA 201790005 A EA201790005 A EA 201790005A EA 201790005 A EA201790005 A EA 201790005A EA 031815 B1 EA031815 B1 EA 031815B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- glycerophosphorylcholine
- alpha
- gpc
- gfh
- hplc
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 88
- SUHOQUVVVLNYQR-MRVPVSSYSA-N choline alfoscerate Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP([O-])(=O)OC[C@H](O)CO SUHOQUVVVLNYQR-MRVPVSSYSA-N 0.000 title claims abstract description 35
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 230000008569 process Effects 0.000 title abstract description 14
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 85
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 35
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 28
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims abstract description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims abstract description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 31
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 31
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- DQBGWLUPOYEQQT-UHFFFAOYSA-N beta-glycerylphosphocholine Chemical class C[N+](C)(C)CCOP([O-])(=O)OC(CO)CO DQBGWLUPOYEQQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 claims description 2
- 125000001302 tertiary amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 claims 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 70
- 239000002904 solvent Substances 0.000 abstract description 26
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 abstract description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 14
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 abstract description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 abstract description 3
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 abstract description 3
- 229960001760 dimethyl sulfoxide Drugs 0.000 abstract 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 22
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 21
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 16
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 16
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 16
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 16
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 13
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- YQBIXSFJHZKZJR-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-2-[2-hydroxy-5-[3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrofuro[3,4-c]furan-6-yl]-3-methoxyphenyl]-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propan-1-one Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(C2C3C(C(OC3)C=3C=C(C(O)=C(OC)C=3)C(CO)C(=O)C=3C=C(OC)C(O)=CC=3)CO2)=C1 YQBIXSFJHZKZJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 5
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YKYOUMDCQGMQQO-UHFFFAOYSA-L cadmium dichloride Chemical compound Cl[Cd]Cl YKYOUMDCQGMQQO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 4
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 3
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 2
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- -1 ethane sulfoxide Chemical class 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 2
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- CTKINSOISVBQLD-GSVOUGTGSA-N (R)-Glycidol Chemical compound OC[C@@H]1CO1 CTKINSOISVBQLD-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- YZUPZGFPHUVJKC-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-2-methoxyethane Chemical compound COCCBr YZUPZGFPHUVJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- SSZWWUDQMAHNAQ-UHFFFAOYSA-N 3-chloropropane-1,2-diol Chemical compound OCC(O)CCl SSZWWUDQMAHNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008777 Glycerylphosphorylcholine Substances 0.000 description 1
- CTKINSOISVBQLD-UHFFFAOYSA-N Glycidol Chemical compound OCC1CO1 CTKINSOISVBQLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012565 NMR experiment Methods 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012490 blank solution Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical class [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- SUHOQUVVVLNYQR-MRVPVSSYSA-O glycerylphosphorylcholine Chemical compound C[N+](C)(C)CCO[P@](O)(=O)OC[C@H](O)CO SUHOQUVVVLNYQR-MRVPVSSYSA-O 0.000 description 1
- 229960004956 glycerylphosphorylcholine Drugs 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000003923 mental ability Effects 0.000 description 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 1
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000925 very toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/091—Esters of phosphoric acids with hydroxyalkyl compounds with further substituents on alkyl
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/10—Phosphatides, e.g. lecithin
- C07F9/103—Extraction or purification by physical or chemical treatment of natural phosphatides; Preparation of compositions containing phosphatides of unknown structure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/10—Phosphatides, e.g. lecithin
- C07F9/106—Adducts, complexes, salts of phosphatides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
- C07F9/6571—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07F9/6574—Esters of oxyacids of phosphorus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
- C07F9/6571—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07F9/6574—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/65742—Esters of oxyacids of phosphorus non-condensed with carbocyclic rings or heterocyclic rings or ring systems
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/47—Scattering, i.e. diffuse reflection
- G01N21/49—Scattering, i.e. diffuse reflection within a body or fluid
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
Описан процесс очищения L-альфа-глицерофосфорилхолина, в котором L-альфа-глицерофосфорилхолин кристаллизуют из диметилсульфоксида (ДМСО) или из смеси ДМСО как минимум с одним другим растворителем, предпочтительно выбранным из воды, спирта, галогенированных растворителей, простых и сложных эфиров и/или амидов. Такой процесс позволяет получить L-альфа-глицерофосфорилхолин с чистотой выше 99,5%, предпочтительно выше 99,7%, более предпочтительно даже выше или равной 99,9%. Также описан способ определения чистоты L-альфа-глицерофосфорилхолина, который включает элюирование L-альфа-глицерофосфорилхолина через ВЭЖХ колонку с неподвижной аминофазой и последующее детектирование самого L-альфа-глицерофосфорилхолина и всех его примесей, при помощи испарительного нефелометрического детектора.
Description
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ЕВРАЗИЙСКОМУ ПАТЕНТУ (45) Дата публикации и выдачи патента (51) Int. Cl. C07F9/10 (2006.ОТ)
2019.02.28 (21) Номер заявки
201790005 (22) Дата подачи заявки
2015.06.09 (54) ПРОЦЕСС ОЧИЩЕНИЯ L-АЛЬФА-ГЛИЦЕРОФОСФОРИЛХОЛИНА (31) MI2014A001053 (32) 2014.06.10 (33) IT (43) 2017.06.30 (86) РСТЛВ2015/054346 (87) WO 2015/189766 2015.12.17 (71) (73) Заявитель и патентовладелец:
КЕМИ СПА (IT) (72) Изобретатель:
Де Ферра Лоренцо, Анибалди Мауро, Зенони Маурицио (IT) (74) Представитель:
Гончаров В.В. (BY) (56) US-A1-2012244583
KANGYI ZHANG ET AL.: Purification of-alpha glycerylphosphorylcholine by column chromatography, JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY, ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS B.V, NL, vol. 1220, 1 December 2011 (2011-12-01), pages 108-114, XP028121751, ISSN: 0021-9673, DOI: 10.1016/J.CHROMA.2011.12.003 [retrievedon2011-12-ll], abstract and conclusion, the whole document
CN-A-102093410
EP-A1-0575717
031815 В1
031815 Bl (57) Описан процесс очищения L-альфа-глицерофосфорилхолина, в котором L-альфаглицерофосфорилхолин кристаллизуют из диметилсульфоксида (ДМСО) или из смеси ДМСО как минимум с одним другим растворителем, предпочтительно выбранным из воды, спирта, галогенированных растворителей, простых и сложных эфиров и/или амидов. Такой процесс позволяет получить L-альфа-глицерофосфорилхолин с чистотой выше 99,5%, предпочтительно выше 99,7%, более предпочтительно даже выше или равной 99,9%. Также описан способ определения чистоты L-альфа-глицерофосфорилхолина, который включает элюирование L-альфаглицерофосфорилхолина через ВЭЖХ колонку с неподвижной аминофазой и последующее детектирование самого L-альфа-глицерофосфорилхолина и всех его примесей, при помощи испарительного нефелометрического детектора.
Целью заявленного изобретения является процесс очищения L-альфа-глицерофосфорилхолина, в котором L-альфа-глицерофосфорилхолин (ГФХ) кристаллизуют из диметилсульфоксида (ДМСО) или из смеси ДМСО как минимум с одним другим растворителем, предпочтительно выбранным из воды, спирта, галогенированных растворителей, простых и сложных эфиров и/или амидов. Такой процесс позволяет получить L-альфа-глицерофосфорилхолин, который также составляет цель заявленного изобретения, с чистотой выше 99,5%, предпочтительно выше 99,7%, более предпочтительно даже выше или равной 99,9%; в частности позволяет получить ГФХ, содержащий менее 0,1% β-ГФХ изомера и/или менее 0,1% циклических молекул ГФХ.
Еще одной целью заявленного изобретения является способ определения чистоты L-альфаглицерофосфорилхолина, который включает элюирование L-альфа-глицерофосфорилхолина через ВЭЖХ колонку с неподвижной аминофазой и последующее детектирование самого L-альфаглицерофосфорилхолина и всех его примесей при помощи испарительного нефелометрического детектора. Текущие экономические и демографические тенденции привели к общему старению населения, и этот феномен особенно ярко проявляется в самых богатых районах мира.
Снижение потенциала человеческого организма в процессе старения поэтому стало очень важной проблемой, и в связи с этим присутствует насущная потребность определения способов, которые помогают замедлить эту тенденцию. В частности, ослабление умственных способностей - одно из наиболее негативных последствий старения, и множество научно-исследовательских работ посвящены поиску эффективных методов лечения для борьбы с этим недугом. В данной области одним из самых востребованных препаратов является L-альфа-глицерофосфорилхолин (ГФХ), строение которого представлено далее.
ГФХ общепризнанно используется в качестве терапевтического агента в лечении когнитивных расстройств, и его международное потребление на основе широкого подтверждения эффективности в медицинской практике и в многочисленных клинических испытаниях находится на устойчивом уровне.
Способы получения ГФХ могут быть разделены на два главных типа: на основе реакции деацетилирования фосфатидилхолина естественного происхождения и тех, при которых ГФХ синтезируется из сырья, коммерчески доступного на рынке химических промежуточных продуктов.
Способы первого типа имеют преимущество использования в качестве сырья таких продуктов, как лецитин сои, уже широко используемый в пищевой промышленности, отличающихся тем, что их обработка не представляет никакого конкретного риска для безопасности дальнейшего применения. Способы на основе использования синтетического ГФХ могут, наоборот, привести к проблемам в контроле характеристик используемых веществ и, в частности, хиральных синтетических предшественников. Это, главным образом, R-глицидол и R-хлорпропандиол (структуры I и II, обрисованные в общих чертах ниже, соответственно), и в обоих случаях они алкилируют молекулы, имеющие высокие характеристики токсичности. Поэтому предельно ясно, как их использование может вызвать риск во время использования и обработки и даже опасность в употреблении ГФХ, полученного из них, в случае присутствия остаточных примесей или других соединений (например, промежуточные продукты или побочные продукты), сохраняющие токсичность.
Вне зависимости от способа получения ГФХ, этап, относящийся к очищению и изолированию, имеет огромное влияние на качество продукта, в особенности его химическая чистота может влиять на его токсичность и терапевтический профиль. Такую чистоту традиционно проверяют при помощи тонкослойной хроматографии (ТСХ). Этот тип анализа имеет высокие характеристики многосторонности и позволяет оценивать образцы в целом, так как все компоненты, от самого полярного до наименее полярного, являются видимыми в одно и то же время. Этот аналитический метод не является, однако, полностью удовлетворительным в отношении количественного определения всех примесей и разделения соединений с одинаковыми структурными особенностями, что касается, например, изомеров с сопоставимой полярностью.
- 1 031815
ВЭЖХ является аналитическим методом, наиболее часто используемым для того, чтобы преодолеть эти недостатки ТСХ; в случае ГФХ использование ВЭЖХ, однако, менее удачно, чем обычно, из-за характеристик высокополярности аналита, которые ограничивают взаимодействие с неподвижными фазами, и отсутствия хромофоров, которые делают возможным использование ультрафиолетового датчика, т.е. более распространенного датчика в лабораториях контроля качества. Опубликованные методы являются неудовлетворительными для чувствительности и для формы хроматографических сигналов с увеличивающимися или асимметричными пиками; в этих условиях наблюдают снижение разделительной способности, и есть риск наличия сигналов, соответствующих определенным соединениям, которые скрыты под другими хроматографическими сигналами, приводящими к потере способности выделять любые существующие примеси. См., например, J. Am. Oil. Chem. Soc. (2012), 89:1155-1163; Talanta (2012), 94:22-29; Journal of Chromatography A, (2012), 1220:108-114, указанные в данном описании в ссылочном порядке.
Эта ситуация несопоставима с действующими рекомендациями в фармацевтической индустрии, которые предоставляют подробное описание профиля примесей в производстве активных ингредиентов, предназначенных для использования людьми.
Разработка новых аналитических методов для определения качества различных способов получения ГФХ имеет в связи с этим первостепенное значение и, если присутствие примесей в полученном ГФХ было определено такими аналитическими методами, введения новых стандартов чистоты для ГФХ и новых методик очищения, например производство ГФХ в соответствии с действующими стандартами качества.
Описание чертежей по светорассеянию испаренного образца) хроматограмма по светорассеянию испаренного образца) хроматограмма по светорассеянию испаренного образца) хроматограмма
Фиг. 1. HPLC-ELSD (ВЭЖХ-детекция ГФХ, полученного по методике 1.
Фиг. 2. HPLC-ELSD (ВЭЖХ-детекция ГФХ, полученная из образца 2.
Фиг. 3. HPLC-ELSD (ВЭЖХ-детекция
ГФХ, полученная из образца 1 (сравнительный).
Фиг. 4. 31Р (Кв)-ЯМР спектр ГФХ, полученного по методике 2.
Фиг. 5. 31Р (Кв)-ЯМР спектр ГФХ, полученный из образца 3.
Фиг. 6. HPLC-ELSD (ВЭЖХ-детекция по светорассеянию испаренного образца) ГФХ, полученного по методике 1.
Фиг. 7. HPLC-ELSD (ВЭЖХ-детекция по светорассеянию испаренного образца) ГФХ, полученная из образца 3.
Фиг. 8. HPLC-ELSD хроматограмма ГФХ, полученного по методике 3.
Фиг. 9. HPLC-ELSD (ВЭЖХ-детекция по светорассеянию ГФХ, полученная из образца 4.
Фиг. 10. HPLC-ELSD (ВЭЖХ-детекция по ГФХ, полученная из образца 5 (сравнительный).
Фиг. 11. HPLC-ELSD (ВЭЖХ-детекция ГФХ, полученного по методике 4.
Фиг. 12. HPLC-ELSD (ВЭЖХ-детекция
ГФХ, полученная из образца 6.
Фиг. 13. HPLC-ELSD (ВЭЖХ-детекция
ГФХ, полученная из образца 7 (сравнительный).
Сущность изобретения
Изобретателями неожиданно было установлено, что при проведении ВЭЖХ исследования ГФХ можно устранить проблемы, описанные выше, используя ВЭЖХ колонку с аминофазой, т.е. те проблемы, при которых аминофункциональность связана с поверхностью неподвижной фазы. Некоторые колонки такого типа доступны на рынке: например, Supelcosil™ LC-NH2, Hypersil Gold™ амино, Zorbax® NH2, YMC™ Polyamine II, Nucleosil® NH2, Luna® NH2. Упомянутая неподвижная фаза может состоять из светорассеянию по по по испаренного испаренного образца) образца) хроматограмма хроматограмма хроматограмма хроматограмма светорассеянию светорассеянию светорассеянию испаренного испаренного испаренного образца) образца) образца) хроматограмма хроматограмма хроматограмма частиц материала-основы, например диоксида кремния, с покрытием, включающим полимерное покрытие, содержащим аминогруппы, предпочтительно вторичные и третичные аминогруппы. Описание неподвижной фазы данного типа можно найти на с. 22, 23 публикации HPLC Columns YMC Classics, изданной YMC Europe GmbH, указанной в данном описании в ссылочном порядке.
Одновременно использован испарительный нефелометрический детектор (ELSD).
Такие детекторы описаны, к примеру, в публикациях Anal. Chem (1997), 69:561А-563А и US 6229605, указанных в данном описании в ссылочном порядке. Они представляют собой инструменты, в которых элюат перемещают в камеру испарения, где растворитель испаряется, образуя туман из крошечных типовых частиц, которые рассеивают луч света. Ответ датчика пропорционален распространению, которое зависит от объема присутствующего образца; эта система делает возможным обнаружение примесей, лишенных хромофоров, таких как ГФХ, также используя неизократические методы элюирования.
- 2 031815
При такой комбинации неподвижной фазы и датчика могут использоваться различные элюенты и, в частности, системы, соответственно состоящие из водных буферных систем, таких как, например, буфер уксуснокислого аммония, возможно в сочетании с органическими растворителями, например метанолом и/или ацетонитрилом. Такие элюирующие системы могут использоваться в изократическом режиме, т.е. поддерживающем тот же самый элюент во время хроматографического анализа, или в градиентном режиме, при котором состав элюента варьируется во время хроматографии согласно предопределенной программе. Оптимизацию аналитического метода выполняют с использованием информации из источников, описывающих предшествующее и текущее состояния техники.
Целью заявленного изобретения, таким образом, является способ определения чистоты L-альфаглицерофосфорилхолина, который включает элюирование L-альфа-глицерофосфорилхолина через ВЭЖХ колонку с неподвижной аминофазой и последующее детектирование самого L-альфаглицерофосфорилхолина и всех его примесей при помощи испарительного нефелометрического детектора. Подвижная фаза или фазы могут состоять из водного раствора, дипольного органического растворителя или их смеси; упомянутый водный раствор предпочтительно имеет рН от 3 до 6, более предпочтительно от 4 до 5. Упомянутый дипольный органический растворитель может быть Ц-Сд-спиртом, ацетонитрилом или их смесью; упомянутый С1-С4-спирт предпочтительно является метанолом.
Эта комбинация позволяет преодолевать дефект расширения хроматографического пика, соответствующего ГФХ, и в то же время позволяет выполнять определение концентрации ГФХ с высокой чувствительностью.
В то же время было установлено, что можно обнаружить присутствие в полученном ГФХ других соединений, образующихся во время процесса производства ГФХ, начиная с соевого лецитина.
Среди этих соединений есть L-альфа-глицерофосфоэтаноламин (ГФЭ), сахароза и их аналоги, вырабатываемые в их присутствии или присутствии одного из их предшественников в соевом лецитине, используемом в качестве сырья в производственном процессе ГФХ.
На фоне этого важного результата представляла непосредственный интерес проверка более чувствительным и селективным способом, чем в предыдущих случаях, профиля примесей, если таковые имелись, в образцах ГФХ, полученного производственными методами, наиболее подходящими для получения продукта, предназначенного для человеческого использования.
С этой целью были признаны приемлемыми полусинтетические процессы на основе деацетилирования лецитина, т.е. способа, который, главным образом, будучи полностью синтетической методикой, был признан неприемлемым для производства ГФХ для человеческого использования ввиду потенциального загрязнения очень токсичным используемым сырьем, таким как глицидол или хлорпропандиол. Принимая во внимание противопоказания, связанные с производством ГФХ полностью синтетическим способом, образец ГФХ китайского происхождения, произведенный вышеупомянутым способом, был представлен по новой аналитической методике для полномасштабного анализа. Образцы, полученные по полусинтетическим методикам, описаны в WO 9013552 (а именно, пример 2) и ЕР575717 (а именно, пример 1).
В этих документах описаны методики на основе очистки ГФХ с ионообменными смолами, которые не включают осаждение ГФХ как аддукта с хлоридом кадмия (GPC-CdCl2) и хроматографию кварца; поэтому эти методы, если пренебречь использованием токсичных солей кадмия и низкой производительностью, действительно применимы к крупномасштабному производству ГФХ. Аналитические результаты подтвердили во всех образцах присутствие пика, элюирующего раньше и со временем удерживания, очень близким к аналогичным показателям ГФХ, с ОВУ (относительное время удерживания) приблизительно 0,94. Этот сигнал значительной интенсивности не соответствует соединениям, наличия которых было бы логично ожидать ввиду особенностей процесса получения, таких как глицерин, ГФЭ, глицерофосфорная кислота или сахароза. Учитывая, что хроматографические характеристики вновь обнаруженных примесей были настолько схожи с ГФХ, чтобы не акцентировать на них внимание до данного момента, так, что даже с новым объектом согласно заявленному изобретению данные ВЭЖХ отличались очень незначительно от ГФХ, авторы выдвигали гипотезу, что данные исследований соответствовали его позиционному изомеру. Химическое строение бета-изомера ГФХ (β-ГФХ) приведено ниже.
β-ГФХ недоступен в коммерческих объемах, и, чтобы проверить, мог ли β-ГФХ быть примесью, обнаруженной новым методом, его синтез был выполнен согласно схеме, иллюстрированной ниже.
- 3 031815
β-ГФХ, полученный таким способом, подвергли анализу при помощи ЯМР, для подтверждения структуры, и ВЭЖХ, показывающим не только его высокую чистоту, но также и то, что его время удерживания совместимо с неизвестными примесями, обнаруженными в различных образцах ГФХ. В связи с этим можно приписать неизвестному сигналу соответствие структуре β-ГФХ, и эта атрибуция была подтверждена экспериментами ВЭЖХ методом добавок, при этом к образцу ГФХ, показавшему присутствие примесей с ОВУ приблизительно 0,94 в ВЭЖХ, добавили калиброванные количества β-ГФХ, наблюдая соответствующее увеличение сигнала с ОВУ приблизительно 0,94 без расщепления оного. Как дальнейшее подтверждение соответствия структуры были выполнены 31Р (Кв)-ЯМР эксперименты, которые позволили осуществить идентификацию сигнала на уровне приблизительно -0,6 ч./млн в образцах, в которых присутствие примесей с ОВУ приблизительно 0,94 было выше. Сигнал β-ГФХ, синтезируемого по вышеупомянутой схеме, был показан в том же самом значении поля. Метод 31Р (Кв)-ЯМР является, таким образом, возможной альтернативой ВЭЖХ, однако из-за его более низкой чувствительности и более широкого оснащения ВЭЖХ в лабораториях контроля качества объект ВЭЖХ данного изобретения остается предпочтительным для определения соединений, имеющих ОВУ приблизительно 0,94 (β-ГФХ).
Посредством 31Р (Кв)-ЯМР анализа было также возможно определение в спектре продукта, полученного согласно ЕР575717, дополнительного сигнала на уровне приблизительно 18,4 ч./млн. Эти значения совместимы со значениями циклического фосфата цГФ, иллюстрированного ниже в форме натриевой соли.
Формирование этого циклического фосфата является осуществимым в условиях изоляции ГФХ согласно методике по ЕР575717. Чтобы поддержать эту гипотезу, подлинный образец цГФ был подготовлен согласно схеме, иллюстрированной ниже.
31Р (Кв)-ЯМР анализ этого продукта подтвердил назначение, показав тот же самый сигнал на уровне приблизительно 18,4 ч./млн. и отсутствие разделения сигнала в соответствующих с использованием до- 4 031815 бавок.
В свете данных, обнаруженных при помощи инновационных аналитических методов, которые представляют практическое воплощение заявленного изобретения, авторы экспериментально проверили, могли бы известные методы очистки ГФХ соответственно удалить помеченные примеси.
Исключая, по уже упомянутым причинам, очищение комплексообразованием с хлоридом кадмия и хроматографию на диоксиде кремния, авторы определили кристаллизацию из этанола как наилучший метод, с точки зрения промышленной применимости, из тех, о которых сообщают публикации по предшествующему уровню техники (см., например, WO 9013552).
Образец, полученный согласно методу по WO 9013552, был кристаллизован на этаноле, но анализ ВЭЖХ показал, что очистка была только частичной, с существенным количеством бета изомера (0,48%), все-таки присутствующего в продукте.
Табл. 1 суммирует аналитические результаты изучения образцов ГФХ, полученных при помощи различных методик приготовления.
Таблица 1
| Образец | Методика приготовления | β-ΓΦΧ (%площади по ВЭЖХ) | цГФ (%плогцади по jlP-HMP | Примечания |
| Методика 1 | WO9013552 | 0.8% | ||
| Методика 2 | ЕР575717 | 0.1% | 0.2% | |
| Пример 1 (Сравнительный) | 0.48% | Кристаллизация на этаноле образца, полученного по методике 1 | ||
| ГФХ в коммерческих объёмах | Синтез | 1.8% | Коммерческий ГФХ из Китая. Прочие примеси присутствуют в общем объёме 3% как ?/оплощади по ВЭЖХ |
Новая система для очищения ГФХ была определена, и это открытие также представляет воплощение изобретения.
Новая очистка основана на использовании сульфоксида этана (диметилсульфоксид, ДМСО). Для реализации изобретения этот растворитель может использоваться в различных условиях и в различных количественных отношениях относительно объема ГФХ, который необходимо очистить.
В воплощении изобретения, в дополнение к диметилсульфоксиду, могут присутствовать другие растворители, такие как полярные, средней полярности или неполярные растворители. Эти дополнительные растворители могут принадлежать различным классам растворителей, таких как, но не ограничиваясь, галогенированные растворители, спирты, простые эфиры, сложные эфиры и амиды. Примерами растворителей, которые могут использоваться для реализации изобретения, но не ограничены ими, являются вода, метанол, этанол, изопропиловый спирт, н-бутанол, хлористый метилен, тетрагидрофуран, этилацетат и ДМФ. Согласно аспекту изобретения диметилсульфоксид используется в количестве от 2 до 100 об.ч. на 1 вес.ч. L-альфа-глицерофосфорилхолина, предпочтительно от 3 до 70, более предпочтительно в пределах от 4 до 30, более предпочтительно в пределах от 5 до об.ч.
Согласно дальнейшему аспекту изобретения любой растворитель или любые дополнительные растворители используются в количестве от 0,01 до 10 объемов на объем диметилсульфоксида ДМСО, предпочтительно от 0,05 до 5, более предпочтительно в пределах от 0,1 до 1.
В зависимости от параметров процесса может быть получена надлежащая кристаллизация ГФХ или может также быть выполнена очистка кристаллов ГФХ, содержащих примеси, путем их суспендирования в диметилсульфоксиде, используя подходящие сочетания времени и температуры, и затем отделение кристаллов от жидкой фазы; также в этом случае другие растворители могут присутствовать в сочетании с диметилсульфоксидом.
Очистка может быть выполнена при различных температурах; как правило, удобно установить различные температуры на различных стадиях процесса очищения, с более низкой температурой в фазе заключительной изоляции ГФХ.
Подходящие температуры для проведения очищения могут быть выбраны между 100 и 0°C, предпочтительно между 70 и 5°C, более предпочтительно между 50 и 15°C.
- 5 031815
В выборе температуры было бы предпочтительно принять во внимание температуру замерзания диметилсульфоксида, которая может измениться, главным образом, в зависимости от присутствия дополнительных растворителей и концентрации ГФХ других присутствующих примесей.
Для изоляции ГФХ может использоваться оборудование, известное специалисту в данной области техники, такое как центрифуги или системы фильтрации, закрытые или открытые. Кристаллы могут быть непосредственно подвергнуты промыванию, используя тот же самый растворитель или ту же самую смесь растворителей, используемых для очищения; альтернативно, для промывания продукта могут применять растворители или растворяющие смеси, кроме используемых в этапах кристаллизации или суспендирования.
Соотношение диметилсульфоксида, который будет использоваться, по сравнению с количеством ГФХ, используемого в процессе очищения L-альфа-глицерофосфорилхолина, может значительно измениться, и его удобно подбирать согласно существующим методам. На практике, чтобы не снизить более чем необходимо производительность процесса, удобно использовать не слишком большие количества диметилсульфоксида, и, с другой стороны, эти количества не должны быть чрезмерно малыми, чтобы избежать появления затруднений при операциях разделения кристаллизованного продукта. Соотношения диметилсульфоксида и ГФХ в пределах от 2 до 100 об.ч. (л) на вес.ч. (кг) можно считать приемлемыми для этого воплощения, более предпочтительно соотношения в пределах от 3 до 70, более предпочтительно соотношения в пределах от 4 до 30, более предпочтительно соотношения в пределах от 5 до 15 об.ч./вес.ч. ГФХ.
Особенно преимущественным способом для практического воплощения заявленного изобретения является кристаллизация ГФХ из его растворов в воде, или других растворителей, или растворяющих смесей. Добавляя диметилсульфоксид к таким растворам, было установлено, что получены растворы, которые стабильны в течение времени, достаточного, чтобы осуществить дистилляцию без одновременного осаждения ГФХ. Использование более высокой температуры кипения диметилсульфоксида в сравнении с другими традиционными растворителями, обычно используемыми, позволяет незатруднительно изменить, без одновременного осаждения продукта, состав смеси растворителей, используемых для кристаллизации.
Как только готов состав смеси растворителей, можно инициировать кристаллизацию ГФХ добавлением аликвота кристаллизованного ГФХ, который будет действовать как механизм запуска процесса кристаллизации. Этот вариант не является обязательным; если его применение желательно, образец кристаллов ГФХ может использоваться в качестве механизма запуска, у которого может и не быть особенно высокой степени чистоты, так как отсутствует непосредственная зависимость между качеством используемого механизма запуска процесса кристаллизации и кристаллов ГФХ, изолированных в конце очистки. Было удивительно наблюдать, как эти методики очищения с использованием диметилсульфоксида позволяют получать ГФХ с высокой степенью очистки, даже полученного от приготовлений, содержащих существенное количество других молекулярных соединений, включая ранее описанные.
В частности, способность системного объекта очищения согласно данному изобретению удалить бета-изомер ГФХ представляется значительной и малопрогнозируемой, так как у него наблюдаются химико-физические свойства, очень схожие с продуктом, изоляция которого предпочтительна с высокой степенью чистоты.
В отличие от кристаллизации из этанола, было также обнаружено, что объект метода очищения изобретения позволяет освободить ГФХ от некоторых соединений, наиболее часто встречающихся в ГФХ, полученном из лецитинов. В частности, было обнаружено в воплощениях изобретения, что можно эффективно удалить примеси ГФХ, такие как сахароза и ГФЭ.
Табл. 2 суммирует основные результаты, достигнутые в этих экспериментах по сравнению с теми, которые получены в ходе сравнительных экспериментов, выполненных с использованием этанола в качестве растворителя.
- 6 031815
Таблица 2
| Пример | Кристаллиза ционный растворитель | Примеси, присутствующие в ГФХ, используемые как испытательные образцы | Остаточное содержание примеси в кристаллизован ном ГФХ (%площади ВЭЖХ) | Примечания | |
| Примесь | Содержание (%площади по ВЭЖХ) | ||||
| 1 (сравните льный) | Этанол | β-ΓΦΧ | 0.8% | 0.48% | Кристаллизация ГФХ по методике 1 |
| 2 | ДМСО | β-ΓΦΧ | 0.8% | 0.16% | Кристаллизация ГФХ по методике 1 |
| 3 | ДМСО | β-ΓΦΧ | 0.1% | <0.01% | Кристаллизация ГФХ по методике 2 |
| цГФ | 0.2%* | <0.01%* |
| 4 | ДМСО | ГФЭ | 0.2% | <0.01% | Кристаллизация ГФХ по методике 3 |
| 5 (сравните льный) | Этанол | ГФЭ | 0.2% | 0.02% | Кристаллизация ГФХ по методике 3. Низкий выход. |
| 6 | ДМСО | Сахароза | 2% | <0.01% | Кристаллизация ГФХ по методике 4. |
| 7 (сравните льный) | Этанол | Сахароза | 2% | 0.14% | Кристаллизация ГФХ по методике 4. Низкий выход. |
* 31Р (Кв)-ЯМР измерение.
Результаты, представленные в табл. 2, подчеркивают полноценность воплощений изобретения в очищении ГФХ. В этом отношении примечательно то, что, как в примере 6, реализация изобретения демонстрирует возможность кристаллизовать ГФХ также в присутствии сахаров, в этом случае сахарозы, и высокой эффективности очищения, достижимого даже в этих случаях. С другой стороны, кристаллизация ГФХ из этанола не позволила удовлетворительно удалить сахарозу. Кроме того, ГФХ, и в еще большей степени, сахара, такие как сахароза, ведут себя как ингибиторы кристаллизации, когда этанол используется в качестве растворителя кристаллизации; следовательно, в этих случаях выходы кристаллизации являются настолько низкими, что получают методику, непрактичную в процессах для промышленного производства ГФХ. Дальнейшее воплощение изобретения состоит в ГФХ, чистота которого выше чем 99,5%, предпочтительно выше чем 99,7%, еще более предпочтительно с чистотой выше чем или равной 99,9%. Определенная особенность представлена ГФХ, загрязненным меньше чем на 0,1% его изомером β-ГФХ, и ГФХ, загрязненным меньше чем на 0,1% циклическими разновидностями цГФ.
В целях данного изобретения чистота, обозначенная выше, измерена как области процента с методами ВЭЖХ и/или 31Р (Кв)-ЯМР и предпочтительно с методами ВЭЖХ и/или 31Р (Кв)-ЯМР, описанными и иллюстрируемыми примерами 8 и 9 соответственно.
Следующие примеры предназначены, без ограничительного характера, для описания некоторых методов изобретения.
- 7 031815
Примеры
Методика 1.
Приготовление ГФХ согласно примеру 2 по WO 9013552.
К 125 г соевого лецитина добавили 500 мл метанола и держали при помешивании до полного растворения. Добавили 20 мл 30%-ного метилата натрия в метаноле. Помешивание продолжили при комнатной температуре в течение 3 ч. После фильтрации остаток промыли с метанолом (3x10 мл). Фильтрат нейтрализовали (рН приблизительно 6) с ледяной уксусной кислотой, затем сконцентрировали до остаточного объема приблизительно 125 мл с отделением верхней масляной фазы. Обогащенную более низкую фазу элюировали на колонке, содержащей 140 мл смолы Amberlyst 15 (в кислотной форме), установленной в метаноле. Элюирование продолжили с 375 мл метанола, сопровождаемого 300 мл воды. Водный элюат элюирован на последовательности трех хроматографических колонок, следующим образом подготовленных: первая с 30 мл смолы IR 93 в ОН-форме в воде, вторая с 30 мл смолы IR 401 в ОН-форме в воде, третья с 12 мл смолы IRC 50 в кислотной форме в воде. Заключительный элюат сконцентрирован до остаточной вязкой жидкости с содержанием воды, равным 15%. Анализ ВЭЖХ-ELSD показал содержание β-ГФХ, равного 0,8% (процент площади).
Методика 2.
Приготовление ГФХ согласно примеру 1 по ЕР575717.
200 г фракции, обогащенной в фосфатидилхолине, полученном в коммерческих объемах извлечением лецитина сои, растворили в 600 мл метанола. Полученный раствор элюировали на хроматографической колонке, содержащей смолу Duolite 147 в основной форме, установленной в метаноле. После загрузки обогащенного раствора элюирование ГФХ завершили с метанолом. Элюат нейтрализован с уксусной кислотой и сконцентрирован до остаточного объема 300 мл, получая острую стратификацию двух фаз. Обогащенная более низкая фаза отделена, разбавлена метанолом и извлечена дважды с 200 мл нгептана. 800 мл н-бутанола добавлены к обогащенной более низкой фазе и раствор сконцентрирован к остаточному объему приблизительно 300 мл, охлажден до температуры T ~5°C и отфильтрован. Кристаллы ГФХ растворены в 30 мл дистиллированной воды и раствор сконцентрирован до вязкой жидкости с остаточным содержанием воды, равным 15%. Анализ ВЭЖХ-ELSD показал содержание β-ГФХ, равное 0,1% (процент площади).
31Р (Кв)-ЯМР анализ показал содержание цГФ, равное 0,2% (процент площади).
Методика 3.
Получение ГФХ с примесью ГФЭ.
ГФЭ в кристаллах добавлен к раствору ГФХ в воде, раствор концентрирован до вязкой жидкости с остаточным содержанием воды, равной 15%. Анализ ВЭЖХ-ELSD показал содержание ГФЭ, равное 0,2% (как процент площади).
Методика 4.
Получение ГФХ с примесью сахарозы.
Сахароза в кристаллах добавлена к раствору ГФХ в воде, раствор концентрирован до вязкой жидкости с остаточным содержанием воды, равным 15%. Анализ ВЭЖХ-ELSD показал содержание сахарозы, равное 2% (как процент площади).
Пример 1 (сравнительный).
Очищение ГФХ, полученного по методике 1 посредством кристаллизации из этанола.
2,5 г ГФХ в форме вязкой жидкости (полученной по методике 1) разбавлено в 5 мл этанола при помешивании при температуру Т ~50°C. Раствор охлажден до температуры T ~10°C и активирован добавлением нескольких кристаллов ГФХ, через несколько минут наблюдается формирование осадка. Его охладили до температуры T ~5°C и держали при помешивании от 0 до 5°C в течение 1,5 ч, кристаллы отфильтровали через бюхнеровскую воронку, промывая с этанолом. После сушки в вакууме получено 1,4 г ГФХ. Анализ ВЭЖХ-ELSD показал содержание β-ГФХ, равное 0,48% (как процент площади).
Пример 2.
Очищение ГФХ, полученного по методике 1 посредством кристаллизации из ДМСО.
К 2,5 г ГФХ в форме вязкой жидкости (полученной по методике 1), добавлены 14 мл диметилсульфоксида, смесь подогрели до температуры T ~50°C при помешивании, затем охладили до температуры T ~25°C и активировали добавлением нескольких кристаллов ГФХ. Держали при помешивании от 20 до 25°C в течение 16 ч; за это время наблюдается формирование осадка, кристаллы отфильтровали через бюхнеровскую воронку, промывая с этанолом. После сушки в вакууме получено 1,9 г ГФХ. Анализ ВЭЖХ-ELSD показал содержание β-ГФХ, равное 0,16% (процент площади).
Пример 3.
Очищение ГФХ, полученного по методике 2 посредством кристаллизации из ДМСО.
К 11,2 г ГФХ в форме вязкой жидкости (полученной по методике 2) добавлены 60 мл диметилсульфоксида, смесь подогрели до температуры T ~50°C при помешивании, затем охладили до температуры T ~25°C и активировали добавлением нескольких кристаллов ГФХ. Держали при помешивании от 20 до 25°C в течение 16 ч; за это время наблюдается формирование осадка, кристаллы отфильтровали через
- 8 031815 бюхнеровскую воронку, промывая с этанолом. После сушки в вакууме получено 8,2 г ГФХ. Анализ ВЭЖХ-ELSD показал отсутствие β-ГФХ 31P (Rb)-NMR анализ показал отсутствие цГФ.
Пример 4.
Очищение ГФХ (с примесью ГФЭ) посредством кристаллизации из ДМСО.
К 10,7 г ГФХ в форме вязкой жидкости (полученной по методике 3) добавлены 20 мл диметилсульфоксида, смесь подогрели до температуры T ~70°C при помешивании, добавили 80 мл диметилсульфоксида, затем охладили до температуры T ~25°C и активировали добавлением нескольких кристаллов ГФХ. Держали при помешивании от 20 до 25°C в течение 16 ч; за это время наблюдается формирование осадка, кристаллы отфильтровали через бюхнеровскую воронку, промывая с этанолом. После сушки в вакууме получены 8,7 г ГФХ. Анализ ВЭЖХ-ELSD показал отсутствие ГФЭ.
Пример 5 (сравнительный).
Очищение ГФХ (с примесью ГФЭ) посредством кристаллизации из ДМСО.
К 10,7 г ГФХ в форме вязкой жидкости (полученной по методике 3) добавлены 20 мл диметилсульфоксида, смесь подогрели до температуры T ~70°C при помешивании, добавили 80 мл диметилсульфоксида, затем охладили до температуры T ~25°C и активировали добавлением нескольких кристаллов ГФХ. Держали при помешивании от 20 до 25°C в течение 16 ч; за это время наблюдается формирование осадка, кристаллы отфильтровали через бюхнеровскую воронку, промывая с этанолом. После сушки в вакууме получены 8,7 г ГФХ. Анализ ВЭЖХ-ELSD показал отсутствие ГФЭ.
Пример 6.
Очищение ГФХ (с примесью сахарозы) посредством кристаллизации из ДМСО.
К 11 г ГФХ в форме вязкой жидкости (полученной по методике 4) добавлены 20 мл диметилсульфоксида, смесь подогрели до температуры T ~70°C при помешивании, добавили 80 мл диметилсульфоксида, затем охладили до температуры T ~25°C; за это время наблюдается формирование осадка. Держали при помешивании от 20 до 25°C в течение 16 ч, кристаллы отфильтровали через бюхнеровскую воронку, промывая с этанолом. После сушки в вакууме получены 7,8 г ГФХ. Анализ ВЭЖХ-ELSD показал отсутствие сахарозы.
Пример 7 (сравнительный).
Очищение ГФХ (с примесью сахарозы) посредством кристаллизации из этанола.
11,0 г ГФХ в форме вязкой жидкости (полученной по методике 4) растворены в 20 мл этанола при помешивании при Т ~45°C. Раствор охлажден до температуры T ~5°C и активирован с несколькими кристаллами ГФХ. Охладили до температуры T ~5°C и выдерживали при помешивании от 0 до 5°C в течение 2,5 ч; за это время наблюдается формирование осадка, кристаллы отфильтровали через бюхнеровскую воронку, промывая с этанолом. После сушки в вакууме получены 1,1 г ГФХ. Анализ ВЭЖХ-ELSD показал содержание сахарозы, равное 0,14% (как процент площади).
Пример 8.
Аналитический метод исследования ГФХ посредством ВЭЖХ-ELSD.
Рабочие параметры:
ВЭЖХ колонка: YMC™ Polyamine II 250x4,6 мм (5 мкм).
Температурный режим термостата: 35°C.
Скорость потока: 0,7 мл/мин.
Подвижные фазы:
фаза А: 85% (ацетонитрил 75%, метанол 25%), 15% (50 мМ аммониево-ацетатный буфер рН 4,5), фаза В: 65% (ацетонитрил 75%, метанол 25%), 35% (50 мМ аммониево-ацетатный буфер рН 4.5) Градиентный режим:
Приготовление образцов: разбавление образцов ГФХ примерно до 20 мг/мл в метаноле.
- 9 031815
Объем пробы: 20-40 мкл.
Примечание: колебания начального порога, которые наблюдаются до ВУ ~5 мин, присутствуют в холостом растворе (не из-за веществ, присутствующих в образце).
В табл. 3 представлены референтные значения элюирования химических соединений, представляющих интерес.
Таблица 3
| Химические соединения | ВУ Время удерживания | ОВУ Относительное время удерживания касательно ГФХ |
| ГФХ | —16,2 мин | 1 |
| β-ΓΦΧ | -15,3 мин | -0,94 |
| ГФЭ | -31,5 мин | -1,94 |
| сахароза | -22,0 мин | -1,36 |
Предел обнаружения (LOD) примесей, проанализированных с использованием этого метода, составляет меньше чем 0,01% относительно ГФХ.
Пример 9.
Аналитический метод исследования ГФХ посредством 31Р (Кв)-ЯМР.
Оборудование: ЯМР Varian VXR-200 или, как минимум, аналог.
Приготовление образца: 0,8 г ГФХ для анализа растворяют в 0,8 мл D2O и помещают в ЯМР колбу. Температура: комнатная.
Количество остановок сбора данных: ее менее 400.
В табл. 4 представлены референтные значения элюирования исследованных соединений.
Таблица 4
| Химические | 31Р-ЯМР химический сдвиг |
| соединения | (ч./млн.) |
| ГФХ | -0,1 |
| β-ΓΦΧ | -0,6 |
| ГФЭ | 0,4 |
| цГФ | 18,4 |
Предел обнаружения (LOD) примесей, проанализированных с использованием этого метода, составляет меньше чем 0,01% относительно ГФХ.
Claims (9)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Способ очистки L-альфа-глицерофосфорилхолина, отличающийся тем, что L-альфаглицерофосфорилхолин кристаллизуют из диметилсульфоксида (ДМСО), представленного в количестве от 2 до 100 объемных долей на массовую долю L-альфа-глицерофосфорилхолина.
- 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что ДМСО представлен в количестве от 5 до 15 объемных долей на массовую долю L-альфа-глицерофосфорилхолина.
- 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что упомянутую кристаллизацию проводят в температурном диапазоне от 0 до 100°C.
- 4. Способ по п.3, отличающийся тем, что упомянутую кристаллизацию проводят в температурном диапазоне от 15 до 50°C.
- 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что очищенный L-альфа-глицерофосфорилхолин обладает чистотой выше или равной 99,9%.
- 6. Способ по п.1, отличающийся тем, что очищенный L-альфа-глицерофосфорилхолин содержит менее 0,1% β-ГФХ изомера и/или менее 0,1% циклических молекул ГФХ.
- 7. Способ определения чистоты L-альфа-глицерофосфорилхолина, который включает элюирование L-альфа-глицерофосфорилхолина через ВЭЖХ колонку с аминонеподвижной фазой и последующее детектирование самого L-альфа-глицерофосфорилхолина и всех его примесей при помощи испарительного нефелометрического детектора, отличающийся тем, что упомянутая неподвижная фаза состоит из диоксида кремния с полимерным покрытием, включающим вторичные и третичные аминогруппы, и подвижные фазы состоят из ацетонитрила, метанола и буферного раствора уксуснокислого аммония.- 10 031815
- 8. Способ по п.7, отличающийся тем, что упомянутые подвижные фазы имеют рН от 3 до 6.
- 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что упомянутый рН варьируется от 4 до 5.- 11 031815
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITMI20141053 | 2014-06-10 | ||
| PCT/IB2015/054346 WO2015189766A1 (en) | 2014-06-10 | 2015-06-09 | Process for the purification of l-alpha-glycerophosphorylcholine |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201790005A1 EA201790005A1 (ru) | 2017-06-30 |
| EA031815B1 true EA031815B1 (ru) | 2019-02-28 |
| EA031815B8 EA031815B8 (ru) | 2019-11-29 |
Family
ID=51230038
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201790005A EA031815B8 (ru) | 2014-06-10 | 2015-06-09 | Процесс очищения l-альфа-глицерофосфорилхолина |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20170101425A1 (ru) |
| EP (1) | EP3154993B1 (ru) |
| JP (2) | JP6659592B2 (ru) |
| KR (2) | KR101622376B1 (ru) |
| CN (2) | CN106459107B (ru) |
| AU (1) | AU2015273073B2 (ru) |
| BR (1) | BR112016028911B1 (ru) |
| CA (1) | CA2951365C (ru) |
| CL (1) | CL2016003157A1 (ru) |
| EA (1) | EA031815B8 (ru) |
| ES (1) | ES2695505T3 (ru) |
| MX (1) | MX370921B (ru) |
| PE (1) | PE20170386A1 (ru) |
| PL (1) | PL3154993T3 (ru) |
| SA (1) | SA516380459B1 (ru) |
| WO (1) | WO2015189766A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201608307B (ru) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114113405B (zh) * | 2021-12-08 | 2023-06-09 | 中山百灵生物技术股份有限公司 | 一种甘油磷酸胆碱及其异构体的高效液相色谱分析方法 |
| IT202200010199A1 (it) | 2022-05-17 | 2023-11-17 | Plantarei Biotech S R L | Glicerofosfoinositolo nella prevenzione e nel trattamento di infezioni da covid-19 e metodo per il suo ottenimento |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0575717A1 (en) * | 1992-06-24 | 1993-12-29 | CHEMI S.p.A. | A process for the preparation of glycerophospholipids |
| CN102093410A (zh) * | 2011-01-11 | 2011-06-15 | 江南大学 | 一种用硅胶柱层析法分离纯化甘油磷酸胆碱的方法 |
| US20120244583A1 (en) * | 2011-03-24 | 2012-09-27 | Yuanfa Liu | Method for Preparing High Purity L-alpha Glycerylphosphorylcholine |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61158990A (ja) * | 1984-12-28 | 1986-07-18 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | グリセロホスホリルコリンの製造方法 |
| JPS63225387A (ja) * | 1987-03-13 | 1988-09-20 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | ホスフアチジルコリンの製造方法 |
| IT1229238B (it) | 1989-05-08 | 1991-07-26 | Istituto Chemioterapico | Procedimento per la preparazione di l-alfa-glicerilfosforilcolina e l alfa glicerilfosforiletanolammina. |
| US6229605B1 (en) | 2000-03-10 | 2001-05-08 | Alltech Associates, Inc. | Evaporative light scattering device |
| JP2002275187A (ja) * | 2001-03-21 | 2002-09-25 | Nof Corp | ホスファチジルコリンの製造方法 |
| KR100966627B1 (ko) * | 2006-06-14 | 2010-06-29 | 주식회사 대웅제약 | Ｌ-α-글리세로포스포릴 콜린의 제조방법 |
| CN102093140A (zh) * | 2010-12-29 | 2011-06-15 | 天津市金三农农业科技开发有限公司 | 一种能抗虫害的生物有机复合肥 |
| JP5711272B2 (ja) | 2011-01-17 | 2015-04-30 | 築野食品工業株式会社 | ビタミンｅの分析方法 |
| CN102260286B (zh) * | 2011-05-27 | 2014-01-15 | 合肥工业大学 | 一种分离纯化粗产品L-α-甘油磷酸胆碱的方法 |
| JP2013136025A (ja) | 2011-12-28 | 2013-07-11 | Tosoh Corp | アニオン交換体、その製造方法及びそれを用いた用途 |
| CN102964377B (zh) * | 2012-11-30 | 2015-05-27 | 西北大学 | 一种天然L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备方法 |
| CN103172659A (zh) | 2013-03-29 | 2013-06-26 | 山东罗欣药业股份有限公司 | L-α-甘油磷酰胆碱晶型化合物 |
| CN103193821A (zh) * | 2013-03-29 | 2013-07-10 | 山东罗欣药业股份有限公司 | L-α-甘油磷酰胆碱的合成方法 |
-
2015
- 2015-06-09 PL PL15732957T patent/PL3154993T3/pl unknown
- 2015-06-09 MX MX2016016421A patent/MX370921B/es active IP Right Grant
- 2015-06-09 JP JP2016572684A patent/JP6659592B2/ja active Active
- 2015-06-09 EA EA201790005A patent/EA031815B8/ru not_active IP Right Cessation
- 2015-06-09 CN CN201580030638.2A patent/CN106459107B/zh active Active
- 2015-06-09 KR KR1020157022718A patent/KR101622376B1/ko active IP Right Grant
- 2015-06-09 BR BR112016028911-0A patent/BR112016028911B1/pt active IP Right Grant
- 2015-06-09 KR KR1020167012568A patent/KR101977691B1/ko active IP Right Grant
- 2015-06-09 WO PCT/IB2015/054346 patent/WO2015189766A1/en active Application Filing
- 2015-06-09 CA CA2951365A patent/CA2951365C/en active Active
- 2015-06-09 EP EP15732957.4A patent/EP3154993B1/en active Active
- 2015-06-09 CN CN201910131704.5A patent/CN109776601B/zh active Active
- 2015-06-09 ES ES15732957T patent/ES2695505T3/es active Active
- 2015-06-09 PE PE2016002696A patent/PE20170386A1/es unknown
- 2015-06-09 US US15/317,441 patent/US20170101425A1/en not_active Abandoned
- 2015-06-09 AU AU2015273073A patent/AU2015273073B2/en active Active
-
2016
- 2016-12-01 ZA ZA2016/08307A patent/ZA201608307B/en unknown
- 2016-12-07 CL CL2016003157A patent/CL2016003157A1/es unknown
- 2016-12-08 SA SA516380459A patent/SA516380459B1/ar unknown
-
2019
- 2019-03-21 US US16/360,052 patent/US10787469B2/en active Active
- 2019-03-29 JP JP2019067180A patent/JP6792018B2/ja active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0575717A1 (en) * | 1992-06-24 | 1993-12-29 | CHEMI S.p.A. | A process for the preparation of glycerophospholipids |
| CN102093410A (zh) * | 2011-01-11 | 2011-06-15 | 江南大学 | 一种用硅胶柱层析法分离纯化甘油磷酸胆碱的方法 |
| US20120244583A1 (en) * | 2011-03-24 | 2012-09-27 | Yuanfa Liu | Method for Preparing High Purity L-alpha Glycerylphosphorylcholine |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KANGYI ZHANG; XINGGUO WANG; JIANHUA HUANG; YUANFA LIU;: "Purification of-alpha glycerylphosphorylcholine by column chromatography", JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 1220, 1 December 2011 (2011-12-01), AMSTERDAM, NL, pages 108 - 114, XP028121751, ISSN: 0021-9673, DOI: 10.1016/j.chroma.2011.12.003 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2020202064B2 (en) | Novel compound contained in manuka honey and use of same | |
| EA031815B1 (ru) | Процесс очищения l-альфа-глицерофосфорилхолина | |
| Alfonso et al. | Purification of five azaspiracids from mussel samples contaminated with DSP toxins and azaspiracids | |
| Otero et al. | New protocol to obtain spirolides from Alexandrium ostenfeldii cultures with high recovery and purity | |
| Dong et al. | Effect of inorganic salt on partition of high‐polarity parishins in two‐phase solvent systems and separation by high‐speed counter‐current chromatography from Gastrodia elata Blume | |
| WO2015050191A1 (ja) | 二重鎖リボ核酸の精製方法 | |
| WO2014178017A1 (en) | Dabigatran etexilate impurity, process of its preparation, and its use as a reference standard | |
| CN117269375B (zh) | 一种测定维生素a醋酸酯粉中有关物质的方法 | |
| RU2186069C1 (ru) | Способ получения технического дигоксина | |
| Lea et al. | Evaluation of quality of bee venom by RP-HPLC/ESI-Q-TOF | |
| SU1133275A1 (ru) | Способ выделени сфингомиелина | |
| NZ625099B2 (en) | Novel compound contained in manuka honey and use of same |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM BY KG TJ TM |