EA031390B1 - Система длительного высвобождения гидрофобных белков на основе амида гиалуроновой кислоты - Google Patents
Система длительного высвобождения гидрофобных белков на основе амида гиалуроновой кислоты Download PDFInfo
- Publication number
- EA031390B1 EA031390B1 EA201491991A EA201491991A EA031390B1 EA 031390 B1 EA031390 B1 EA 031390B1 EA 201491991 A EA201491991 A EA 201491991A EA 201491991 A EA201491991 A EA 201491991A EA 031390 B1 EA031390 B1 EA 031390B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- amide
- amidation
- protein
- molar percentage
- hgh
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 154
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 153
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims abstract description 64
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 64
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims abstract description 53
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 title claims abstract description 35
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims abstract description 78
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 claims abstract description 71
- 230000009435 amidation Effects 0.000 claims abstract description 66
- FJLUATLTXUNBOT-UHFFFAOYSA-N 1-Hexadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCN FJLUATLTXUNBOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 41
- 235000013882 gravy Nutrition 0.000 claims abstract description 31
- ILRSCQWREDREME-UHFFFAOYSA-N dodecanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCC(N)=O ILRSCQWREDREME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- HSEMFIZWXHQJAE-UHFFFAOYSA-N Amide-Hexadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(N)=O HSEMFIZWXHQJAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- YBRBMKDOPFTVDT-UHFFFAOYSA-N tert-butylamine Chemical compound CC(C)(C)N YBRBMKDOPFTVDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N benzylamine Chemical compound NCC1=CC=CC=C1 WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- -1 HA amide Chemical class 0.000 claims abstract description 21
- JPYQFYIEOUVJDU-UHFFFAOYSA-N beclamide Chemical compound ClCCC(=O)NCC1=CC=CC=C1 JPYQFYIEOUVJDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- JRBPAEWTRLWTQC-UHFFFAOYSA-N dodecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCN JRBPAEWTRLWTQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- IOQPZZOEVPZRBK-UHFFFAOYSA-N octan-1-amine Chemical compound CCCCCCCCN IOQPZZOEVPZRBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 claims description 23
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 19
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 19
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 18
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 claims description 14
- 102100026262 Metalloproteinase inhibitor 2 Human genes 0.000 claims description 13
- 108010031429 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-3 Proteins 0.000 claims description 13
- 108010031372 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2 Proteins 0.000 claims description 12
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 claims description 12
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 claims description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 12
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 claims description 12
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 11
- 102100024289 Metalloproteinase inhibitor 4 Human genes 0.000 claims description 11
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 claims description 11
- 102000009521 Vascular Endothelial Growth Factor B Human genes 0.000 claims description 11
- 108010073925 Vascular Endothelial Growth Factor B Proteins 0.000 claims description 11
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 claims description 11
- 108050006579 Metalloproteinase inhibitor 4 Proteins 0.000 claims description 10
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 9
- 108010081589 Becaplermin Proteins 0.000 claims description 8
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 claims description 6
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 claims description 6
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 claims description 6
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 claims description 6
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 claims description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 6
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 6
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 6
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 claims description 5
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 claims description 5
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000007774 longterm Effects 0.000 claims description 5
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 4
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 claims description 3
- 208000029549 Muscle injury Diseases 0.000 claims description 2
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 claims description 2
- 208000000491 Tendinopathy Diseases 0.000 claims description 2
- 206010043255 Tendonitis Diseases 0.000 claims description 2
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 claims description 2
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 claims description 2
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004415 tendinitis Diseases 0.000 claims description 2
- 102100026261 Metalloproteinase inhibitor 3 Human genes 0.000 claims 4
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 claims 3
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 claims 3
- 108010092408 Eosinophil Peroxidase Proteins 0.000 claims 2
- 102100028471 Eosinophil peroxidase Human genes 0.000 claims 2
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 claims 2
- 101000599048 Homo sapiens Interleukin-6 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims 2
- 102100037792 Interleukin-6 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims 2
- 101150068888 MET3 gene Proteins 0.000 claims 2
- 101100298086 Elizabethkingia miricola ngl gene Proteins 0.000 claims 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 39
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 9
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 abstract description 2
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 52
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 52
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 51
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 45
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 description 31
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 23
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 20
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 15
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 15
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 15
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 13
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 13
- 229960003773 calcitonin (salmon synthetic) Drugs 0.000 description 13
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 13
- 108010068072 salmon calcitonin Proteins 0.000 description 13
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 12
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 12
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 11
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 10
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 10
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 10
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 10
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 10
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 9
- 102000005406 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-3 Human genes 0.000 description 9
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 9
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 9
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 8
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 7
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 7
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 7
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 7
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 6
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 6
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 6
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 5
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N tetrabutylammonium Chemical compound CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 3
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 102000051628 Interleukin-1 receptor antagonist Human genes 0.000 description 2
- 108700021006 Interleukin-1 receptor antagonist Proteins 0.000 description 2
- 102000055008 Matrilin Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010072582 Matrilin Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 2
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 2
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 229940054136 kineret Drugs 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000005709 nerve cell growth Effects 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 2
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 210000002437 synoviocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZKRFOXLVOKTUTA-KQYNXXCUSA-N 9-(5-phosphoribofuranosyl)-6-mercaptopurine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(NC=NC2=S)=C2N=C1 ZKRFOXLVOKTUTA-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 206010000599 Acromegaly Diseases 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 1
- 210000003771 C cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 description 1
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 206010013883 Dwarfism Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000030814 Eating disease Diseases 0.000 description 1
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 description 1
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N Fe3+ Chemical compound [Fe+3] VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019454 Feeding and Eating disease Diseases 0.000 description 1
- 208000001640 Fibromyalgia Diseases 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 206010018265 Gigantism Diseases 0.000 description 1
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 description 1
- 102400000321 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001076407 Homo sapiens Interleukin-1 receptor antagonist protein Proteins 0.000 description 1
- 101000669513 Homo sapiens Metalloproteinase inhibitor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000645296 Homo sapiens Metalloproteinase inhibitor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 208000037147 Hypercalcaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 206010022971 Iron Deficiencies Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102100039364 Metalloproteinase inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N N-Methyl-D-aspartic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CC(O)=O HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 1
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 1
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 208000007913 Pituitary Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000015875 Pituitary gigantism Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 241000194048 Streptococcus equi Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 1
- 102000005876 Tissue Inhibitor of Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 108010005246 Tissue Inhibitor of Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 208000026928 Turner syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 1
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 210000004198 anterior pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000003293 cardioprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001925 catabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000002932 cholinergic neuron Anatomy 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229940124558 contraceptive agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003433 contraceptive agent Substances 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- 235000014632 disordered eating Nutrition 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 229910001447 ferric ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001448 ferrous ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000002178 gastroprotective effect Effects 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 210000001126 granulation tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N hepatitis b vaccine Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N 0.000 description 1
- 229940124736 hepatitis-B vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 102000046824 human IL1RN Human genes 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 238000002169 hydrotherapy Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000000148 hypercalcaemia Effects 0.000 description 1
- 208000030915 hypercalcemia disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005067 joint tissue Anatomy 0.000 description 1
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000004766 neurogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000004090 neuroprotective agent Substances 0.000 description 1
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 208000003068 pituitary dwarfism Diseases 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000026267 regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 201000010174 renal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 108010008883 tissue inhibitor of metalloproteinase-4 Proteins 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000004862 vasculogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000004127 vitreous body Anatomy 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 239000003357 wound healing promoting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/2006—IL-1
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/2235—Secretins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/28—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
- C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L89/00—Compositions of proteins; Compositions of derivatives thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к системе длительного высвобождения биологически активных белков, содержащей: a) белок гидрофобной природы и b) амид гиалуроновой кислоты (HA), где HA, используемая для получения амида, имеет среднюю молекулярную массу в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, где указанный белок гидрофобной природы имеет индекс GRAVY не менее -0,5 и амид HA выбран из: гексадециламида HA: амид HA, полученный с использованием гексадециламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 14%; октиламида HA: амид HA, полученный с использованием октиламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 15%; додециламида HA: амид HA, полученный с использованием додециламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 15%; трет-бутиламида HA: амид HA, полученный с использованием трет-бутиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 12%; бензиламида HA: амид HA, полученный с использованием бензиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 15%; и где соотношение амид гиалуроновой кислоты (HA)/белок составляет не менее 10:1. Изобретение обеспечивает длительное, замедленное по времени высвобождение, которое приводит к повышению эффективности лекарственного средства и облегчает соблюдение пациентом режима лечения.
Description
Настоящее изобретение относится к системе длительного высвобождения биологически активных белков, содержащей: а) белок гидрофобной природы и Ь) амид гиалуроновой кислоты (НА), где НА, используемая для получения амида, имеет среднюю молекулярную массу в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, где указанный белок гидрофобной природы имеет индекс GRAVY не менее -0,5 и амид НА выбран из: гексадециламида НА: амид НА, полученный с использованием гексадециламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 14%; октиламида НА: амид НА, полученный с использованием октиламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 15%; додециламидаНА: амид НА, полученный с использованием додециламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 15%; трет-бутиламида НА: амид НА, полученный с использованием трет-бутиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 12%; бензиламида НА: амид НА, полученный с использованием бензиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 15%; и где соотношение амид гиалуроновой кислоты (НА)/белок составляет не менее 10:1. Изобретение обеспечивает длительное, замедленное по времени высвобождение, которое приводит к повышению эффективности лекарственного средства и облегчает соблюдение пациентом режима лечения.
Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим специфические амиды гиалуроновой кислоты в сочетании с белками в основном гидрофобной природы, которые обладают терапевтической и/или биологической активностью, для приготовления систем длительного, замедленного высвобождения белков.
Уровень техники
Первое лекарственное средство, полученное методами генной инженерии из живой (бактериальной) системы, был инсулин, разрешенный к применению Администрацией США по контролю за использованием пищевых продуктов и лекарственных средств (FDA) в 1982 г. Гормон роста человека, ранее выделенный из трупов, был также быстро получен с использованием методов рекомбинантной технологии. В 1986 г. Администрация США по контролю за использованием пищевых продуктов и лекарственных средств (FDA) разрешила использование рекомбинантной человеческой вакцины против гепатита В. Промышленное получение лекарственных средств с использованием живых систем в качестве биореакторов стало распространяться, начиная с указанных выше препаратов, и в настоящее время стало предпочтительным способом для синтеза различных лекарственных средств, особенно ввиду относительно низкой стоимости такого способа получения.
Большое число белков человека, применяемых с целью их терапевтического (и не терапевтического использования), получаемые методами биоинженерии, включают эритропоэтин (для лечения анемии), интерлейкин 2 (для лечения карциномы почек), IL-1Ra (антагонист IL-1 рецептора), глюкагон, интерферон, фермент ДНКазу человека, кальцитонин и многие другие.
Указанные лекарственные средства имеют в основном белковую или полипептидную природу и обычно вводятся парентерально, поскольку их прием через рот вызывает быстрое разложение активного ингредиента. Однако парентеральное введение может вызывать проблемы с соблюдением пациентом режима лечения, поскольку для достижения терапевтической эффективности необходимы повторные введения. Указанные белки в основном характеризуются очень коротким периодом полувыведения из организма; например, в случае гормона роста человека hGH (полученного по генноинженерной технологии) требуются ежедневные инъекции. В этой связи, в целях поиска способов снижения частоты введения и повышения комфортности лечения для пациента было проведено множество экспериментов, направленных на разработку систем высвобождения белка/лекарственных средств с увеличенным периодом полувыведения из организма.
Указанные системы высвобождения должны гарантировать, что активность лекарственного средства будет поддерживаться, и, соответственно, должны гарантировать, что трехмерная структура белка/лекарственного средства останется интактной; однако стрессовые ситуации, которые могут возникать в ходе их изготовления, такие как присутствие органического растворителя и/или вариации в значениях температуры и рН, могут вызвать дезамидирование или окисление белков в цепи, что ведет к их денатурации и потере терапевтической активности.
Например, известно, что использование микросфер с PLGA (полимолочной/гликолевой кислотой) в качестве системы высвобождения, применяемой для малых пептидов, дает прекрасные результаты (Hutchinson F.G., Biochem. Soc. Trans., 1985, 13:520-523); однако их применение с целью получения депопрепарата с высвобождением гормона роста человека (hGH) оказалось невозможным, поскольку в этом случае денатурация белка создает проблемы, связанные с воспалением.
Длительные поиски систем высвобождения белка/лекарственного средства, которые были бы нетоксичными, но обладали неизмененной эффективностью в отношении доставки активного ингредиента, привели к использованию природных полимеров при создании препаратов, которые (за счет их объединения с активным ингредиентом) вносят соответствующую модификацию в кинетику лекарственного средства, с которым их объединяют.
Гиалуроновая кислота (НА) представляет собой гетерополисахарид, состоящий из чередующихся остатков D-глюкуроновой кислоты и Ы-ацетил^-глюкозамина. Это природный линейноцепочечный полимер с молекулярной массой от 50000 до 13х106 Да, которая определяется как источником, из которого она была выделена, так и методом ее получения.
Она встречается в природных условиях в перицеллюлярной жидкости, в межуточном веществе соединительной ткани позвоночных (где она представляет один из основных компонентов), а также в синовиальной жидкости суставов, жидкости стекловидного тела и в пупочном канатике.
В этой связи, НА выполняет важную биологическую роль в жизнедеятельности живых систем за счет создания механической поддержки для клеток в различных тканях, таких как кожа, сухожилия, мышцы и хрящи.
Гиалуроновая кислота, благодаря этим присущим ей свойствам, защищает ткани от действия свободных радикалов, сдерживает воспалительные процессы и стимулирует ангиогенез и демонстрирует особую эффективность в качестве модулятора всех основных стадий в процессах заживления ран (ЕР 1196179).
Известно использование указанного полисахарида в качестве носителя для разного рода лекарственных средств в варианте их простого сочетания или в виде соли гиалуроновой кислоты, поскольку присущие ей свойства, такие как биосовместимость, способность к биоразложению, отсутствие иммуно
- 1 031390 генности, соответствующая вязкость и гидратируемость, делают ее особенно подходящей в качестве системы высвобождения для лекарственных средств и молекул, как на местном, так и на системном уровне (ЕР 197718, ЕР 445255). Указанный полисахарид исследовали также с точки зрения его применимости в качестве системы доставки для конкретных белков, таких как IL-1Ra (US 6096728), эритропоэтин (Hahn
S.K. et al., Int J Pharm., 2006, 28, 322:44-51), инсулин (Nomura M. et al., J Pharm Pharmacol, 1994, 46:768770), гормон роста (Kim S.J. et al., Journal of Controlled Release, 2005, 104:323-335), интерферон и фолликулостимулирующий гормон (US 8025900).
Во всех этих случаях сочетание лекарственного средства с полисахаридом приводило к достижению замедленного высвобождения доставляемого белка, но не настолько замедленного, чтобы можно было снизить количество инъекций лекарственного средства.
НА представляет собой полностью натуральный полисахарид, который быстро разлагается ферментами, присутствующими в организме (гиалуронидаза), относительно быстро высвобождая лекарственное средство, с которым она была объединена. По этим причинам карбоксильные и гидроксильные группы в НА были химически модифицированы для получения сшитых производных (US 4582865; US 4713448; US 5676964; US 495774; US 5827937) или дериватизированы с использованием других природных или синтетических полимеров или молекул с иными размерами и физико-химическими характеристиками (US 4851521); однако способы получения указанных производных зачастую затрагивают целостность доставляемого фармакологического агента.
Описание изобретения
Настоящее изобретение относится к новым системам высвобождения, содержащим специфические амиды гиалуроновой кислоты в сочетании с терапевтически и/или биологически активными белками, в основном гидрофобной природы, для целей пролонгированного, замедленного высвобождения в течение длительного периода времени, которые повышают эффективность лекарственного средства и облегчают соблюдение пациентом режима лечения.
Ниже приведено несколько примеров терапевтически и/или биологически активных белков, в основном гидрофобной природы, согласно настоящему изобретению:
Инсулин представляет собой белковый гормон с анаболическим свойствами, продуцируемый бетаклетками в островках Лангерганса в поджелудочной железе; он состоит из двух цепей, соединенных двумя сульфидными мостиками. Хорошо известная функция этого гормона заключается в регуляции уровня глюкозы в крови. В этой связи, данный белок применяется для лечения диабета типа 1 или типа 2, когда имеется очень слабая продукция инсулина или она вообще отсутствует. Указанный гормон вводится путем подкожной инъекции (поскольку, если его инъецировать непосредственно в кровоток, всасывание лекарственного средства происходит слишком быстро, что может привести к гипогликемии). Терапевтический подход основан на результатах тестов, проводимых в течение дня самим пациентом, с последующим введением инсулина в виде определенных, отмеренных доз (3 или более).
Гормон роста (GH) представляет собой пептидный гормон передней доли гипофиза, состоящий из 191 аминокислоты и имеющий массу 22005 Да. Основной функцией этого гормона является стимуляция развития тела человека (и многих других позвоночных организмов) за счет усиления роста и митотического деления клеток практически во всех тканях организма (в частности, он стимулирует рост костей, хрящей и соединительной ткани).
В детском возрасте гипосекреция GH вызывает развитие гипофизарной карликовости, тогда как гиперсекреция вызывает гипофизарный гигантизм. Если гиперсекреция начинается после завершения периода роста, что в основном связано с опухолевым процессом, развивается акромегалия, при которой происходит значительное расширение костей лица, рук и ног.
В этой связи, он применяется пациентами, которые либо находятся еще в фазе роста, либо взрослыми, у которых имеются опухоли гипофиза.
GH применяется также для лечения расстройств, которые не связаны с дефицитом GH, таких как синдром Тернера, хроническая болезнь почек, ISS (идиопатическая низкорослость) и рассеянный склероз, а также для усиления потери веса у пациентов с ожирением, при фибромиалгии, при болезни Крона и язвенном колите.
В последнее время были получены прекрасные результаты при оценке внутрисуставного введения hGH в процессе лечении остеоартрита (ОА), где была продемонстрирована эффективность данного гормона по восстановлению повреждения хрящевой ткани, вызванного ОА (ЕР1153607; Kim S.B. et al., J Korean Med Sci., 2010, 25:776-80).
Кальцитонин (СТ) представляет собой гормон, содержащий в своем составе полипептид из 32 аминокислот, который продуцируется в организме человека парафолликулярными клетками (которые известны также как С-клетки) щитовидной железы. Основной функцией кальцитонина является снижение концентрации кальция в крови за счет противодействия эффектам гормона паращитовидной железы паратгормона. Этот механизм регуляции был обнаружен у рыб, рептилий, птиц и млекопитающих. Г ормон кальцитонин также действует на уровне почек, стимулируя элиминацию кальция через канальцы. Кальцитонин из лосося (sCT) обычно используют для лечения остеопороза, гиперкальциемии, метастаз костей и болезни Педжета.
- 2 031390
И снова, полученные недавно экспериментальные данные продемонстрировали эффективность кальцитонина при лечении остеоартрита: его введение защищает поверхности суставов от эрозии, вызываемой ОА (Manicourt D.H. et al., J Musculoskelet Neuronal Interact, 2005, 5(3):285-293).
IL-1Ra представляет собой антагонист рецептора цитокина IL-1, мощного индуктора местных и системных воспалительных процессов. IL-1 в основном продуцируется В- и Т-лимфоцитами и макрофагами после бактериальной стимуляции или стимуляции другими цитокинами; он также секретируется альвеолярными макрофагами, эндотелиальными, эпителиальными и гладкомышечными клетками, фибробластами, остеокластами, синовиоцитами и клетками разных других типов. IL-1 вовлекается в развитие особенно серьезных расстройств, таких как псориаз и септический шок, а также в патогенез некоторых типов опухолей. В сочетании с другими цитокинами, IL-1 входит в число основных медиаторов воспалительных процессов и, таким образом, вовлекается в развитие множества расстройств и заболеваний, таких как остеопороз, ревматоидный артрит (RA), псориатический артрит и остеоартрит (ОА): примечательно, в этой связи, что большие количества IL-1 были обнаружены в синовиальной жидкости пациентов с ревматоидным артритом и/или остеоартритом.
Экспрессия IL-1 представляет собой важнейший фактор в патогенезе ОА, поскольку IL-1 стимулирует синтез, секрецию и активацию металлопротеаз (ММР), ферментов протеазного действия, продуцируемых хондроцитами, которые отвечают за деградацию хрящевого матрикса.
Все экспериментальные данные, относящиеся к процессу развития ОА, согласуются с представлениями о том, что IL-1 и TNFa составляют основную катаболическую систему, вовлекаемую в деструкцию ткани суставов; так, было показано, что блокирование продукции и/или активации IL-1 предотвращает или ослабляет деструкцию суставного матрикса (Caron J.P. et al., Arthritis Rheum, 1996, 39:15351544).
В настоящее время используются новые лекарственные средства, содержащие антагонист рецептора IL-1Ra, для целей противодействия эффектам этого цитокина, поскольку было показано, что блокирование этого рецептора представляет собой эффективный способ лечения заболеваний и расстройств, в патогенез которых вовлекается IL-1 (Burger D. et al., Cytokine Reference, Oppenheim J.J. and Feldmann M., Eds. New York, London, Academic Press, 2000, p. 31-336; Jiang Y. et al., Arthritis Rheum, 2000, 43 (5):10019).
IL-1Ra представляет собой белок, который действует как ингибитор указанного интерлейкина; однако лекарственные средства, содержащие IL-1Ra (такие как Кинерет® (Kineret®, основанный на анакинре, рекобинантной, негликозилированной форме человеческого белка IL-1Ra), имеют очень короткий период полувыведения из организма, который зачастую усложняет трактовку клинического результата. В этой связи, важно создать новую фармацевтическую композицию, содержащую IL-1Ra, подходящую для доставки лекарственного средства в пролонгированном, замедленном режиме, которая бы обеспечивала более длительный период полувыведения из организма и гарантировала получение консолидированных клинических результатов.
Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF) представляет собой гликопротеин, содержащий в своем составе 174-180 аминокислот, который стимулирует продукцию в костном мозге гранулоцитов и стволовых клеток, которые затем высвобождаются в кровоток. Этот ростовой фактор проявляет активность в качестве нейротропина и, в этой связи, в настоящее время исследуется с целью оценки возможностей его применения при лечении церебральной ишемии и амиотрофического бокового склероза. Обычно он используется при лечении онкологических больных, для ослабления нейтропении, ассоциированной с проведением химиотерапии; и, наконец, результаты последних экспериментальных исследований показали, что внутривенное введение G-CSF способствует регенерации поврежденных клеток сердца.
Фактор роста тромбоцитов (PDGF) представляет собой биологически активный белок, включающий димер, состоящий из двух полипептидов, соединенных дисульфидным мостиком, обозначаемых как А и В. Он синтезируется, главным образом, в мегакариоцитах, и у людей представляет основной митогенный агент в сыворотке крови для клеток мезенхимального происхождения. Он используется для ускорения заживления ран/язвенных поражений, поскольку действует как медиатор образования соединительной ткани стромы, и, в этой связи, в настоящее время используется также как средство, способствующее образованию новой костной ткани.
Трансформирующий фактор роста-β (TGF3) представляет собой пептид, который играет важнейшую роль в регуляции иммунной системы и в регенерации тканей, дифференцировке клеток и эмбриогенезе. Он используется в основном как ранозаживляющий агент, поскольку способен усиливать заживление ран/язвенных поражений кожи, а также способствует срастанию костных переломов; по этим причинам он также применяется при лечении остеопороза и ОА. И, наконец, результаты проведенных экспериментов показывают, что TGF3 также обладает кардиопротекторными свойствами, важными для сердца после ишемического повреждения.
Эпидермальный фактор роста (EGF) представляет собой фактор роста, который играет важную роль в регуляции роста, пролиферации и дифференцировке клеток. Человеческий EGF представляет собой
- 3 031390 белок массой 6045 Да, состоящий из 53 аминокислотных остатков и трех внутримолекулярных дисульфидных мостиков. Он обнаружен в тромбоцитах, макрофагах, моче, слюне, молоке и плазме.
Это белок, применяемый в качестве гастропротекторного средства, поскольку стимулирует пролиферацию клеток слизистой желудочно-кишечного тракта; он используется для усиления регенерации тканей кожи, в связи с тем, что способен стимулировать образование новой грануляционной ткани при лечении ран/язвенных поражений кожи, вен и других типов ран/язвенных поражений. И, наконец, местное применение EGF дает прекрасные результаты по регенерации поврежденной корнеальной ткани, например, после хирургического вмешательства на роговице или в случае дегенеративных расстройств, таких как кератит.
Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF-B) представляет собой белковый фактор роста, вовлекаемый в процессы васкулогенеза (а именно ex novo образование системы кровообращения на эмбриональной стадии), нейрогенеза и ангиогенеза. Он также представляет собой нейропротекторный агент, который защищает нейроны от NMDA-опосредованного ишемического повреждения.
Эритропоэтин (ЕРО) представляет собой гликопротеиновый гормон, продуцируемый в организме человека почками, и, в меньших количествах, печенью и головным мозгом, основной функцией которого является регуляция эритропоэза (продукция эритроцитов костным мозгом).
ЕРО был также получен в лабораторных условиях и использовался в качестве лекарственного средства при лечении анемии у пациентов с заболеванием почек или нарушениями в системе кроветворения, а также для ускорения восстановления после проведения химиотерапии у больных раком. По данным проведенных недавно исследований, ЕРО также выполняет определенную нейропротекторную функцию, действуя как противовоспалительный агент.
Эритропоэтин представляет собой молекулу гликопротеина массой примерно 30000 Да. И, наконец, начиная с 1989 г., ЕРО стал доступен в виде лекарственного препарата для больных с анемией, подвергающихся диализу. Позже его применение распространили на пациентов с хронической почечной недостаточностью, проходящих консервативное лечение, поскольку этот препарат помогает улучшить качество жизни у этих больных. Получение фармацевтического средства на основе эритропоэтина основано на методе рекомбинантных ДНК.
Фактор роста нервных клеток (NGF) представляет собой белок, секретируемый в гипоталамус из щитовидной железы и гипофиза; он также продуцируется гладкомышечными клетками и фибробластами. Активной формой является NGF3 массой 26 кДа, гомодимер с двумя дисульфидными мостиками, которые соединяют две белковых цепи из 118 аминокислот. Он отвечает за дифференцировку и функциональную активность нейронов в периферической нервной системе и холинэргических нейронов в ЦНС. В этой связи, он применяется при лечении нейродегенеративных расстройств и заболеваний, таких как деменция; кроме того, было показано, что NGF полезен при лечении глаукомы.
Трансферрин представляет собой основной белок-переносчик железа в кровоток. Трансферрин, синтезируемый в печени и моноцитарно-макрофагальной системе, связывает достаточно стабильно, хотя и обратимо, железо, поглощенное в кишечнике, а также железо, образуемое при разрушении эритроцитов, и переносит его в сайты последующего использования (в частности, в костный мозг) и в сайты его отложения (в частности, в печень).
С точки зрения структуры, это гликопротеин, сформированный на основе полипептидной цепи из 679 аминокислот с молекулярной массой примерно 80 кДа, который содержит два сайта связывания ионов трехвалентного железа (Fe3+), однако здесь отсутствует аффинность для ионов двухвалентного железа (Fe2+); период его полувыведения составляет примерно 8 дней.
Трансферрин в основном синтезируется в печени и стандартные значения его содержания в крови укладываются в диапазон 200-360 мг/дл. Уровни трансферрина в крови возрастают при использовании контрацептивных средств, во время беременности, а также при недостаточности железа. И наоборот, эти уровни падают в случае нефротического синдрома, болезни печени, нарушения питания, хронических воспалительных заболеваний, опухолей, и при лечении с использованием железа или кортизона. Физиологическое снижение может наблюдаться в неонатальном периоде и в пожилом возрасте.
TIMP представляют собой белки, которые ингибируют металлопротеазы, т.е. ферменты, вовлекаемые в разложение хрящевого матрикса; семейство белков TIMP включает следующие формы: TIMP-2, TIMP-3 и TIMP-4, продуцируемые хондроцитами, фибробластами, синовиоцитами, остеобластами, нейронами, макрофагами, гладкомышечными клетками, гепатоцитами и т.п.
В этой связи, они выполняют защитную функцию в отношении действия хондроцитов и эрозии хряща, вызываемой ОА.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к новым фармацевтическим композициям, содержащим специфические амиды гиалуроновой кислоты в сочетании (т.е. не связанные химически) с белками, в основном гидрофобной природы, которые обладают терапевтической и/или биологической активностью, для получения систем длительного, замедленного высвобождения белка.
Системы по настоящему изобретению вызывают
Пролонгированное высвобождение указанного белка в течение увеличенного по длительности пе
- 4 031390 риода времени (в сравнении с тем же белком, вводимым в исходном виде). Такой режим непрерывного высвобождения усиливает терапевтическое окно лекарственного средства, поскольку оно не высвобождается в больших количествах в период времени непосредственно после введения (что обычно имеет место в том случае, когда лекарственные средства вводятся в исходном виде). Введение в виде системы высвобождения в сочетании с определенными амидами НА модулирует высвобождаемое количество (по временным параметрам) и период высвобождения лекарственного средства (при этом достигается постепенное повышение количества высвобождаемого со временем белка, так что конечный период высвобождения превышает таковой, который имеет место в случае введения в исходном виде); таким образом, можно сделать вывод о том, что профиль кинетики высвобождения белка существенно модифицируется, при сохранении профиля его терапевтической эффективности.
Новая система высвобождения является нетоксичной, поскольку характеризуется такими свойствами, как биосовместимость и биодеградируемость, и определяет замедленное высвобождение переносимого белка/лекарственного средства, что гарантирует поддержание терапевтической активности; при этом сохраняется целостность трехмерной структуры активного ингредиента, который не подвергается каким-либо денатурирующим изменениям.
Система высвобождения по настоящему изобретению не создает каких-либо химических модификаций в переносимом белке, поскольку она получена за счет сочетания определенных амидов НА и переносимых белков, которые объединены в виде смеси. Соответственно, здесь не устанавливаются ковалентные химические связи между носителем и лекарственным средством, что гарантирует поддержание структурной целостности белка/лекарственного средства.
Указанные новые характеристики полученного продукта повышают комфортность терапии для пациентов, способствуя соблюдению нужного режима лечения, поскольку данное лекарственное средство может вводиться согласно показателям новой фармакокинетики, и, соответственно, здесь могут использоваться другие дозы: так, будут применяться более длинные интервалы между инъекциями и внесены соответствующие изменения в количество вводимого лекарственного средства, что приведет к повышению эффективности лечения и к снижению побочных реакций.
Фармакологически и/или биологически активные белки, рассматриваемые в контексте настоящего изобретения, должны обладать преимущественно гидрофобными характеристиками, оценка которых проводится по индексу GRAVY (Grand Average of Hydropathy); указанный индекс GRAVY представляет собой величину, характеризующую пептид или белок, которая рассчитывается как сумма показателей гидрофобности всех аминокислот, входящих в данный белок, которую делят на число остатков в белковой последовательности. Каждая аминокислота характеризуется определенным индексом гидрофобности, значения которого варьируют от 4,5 для изолейцина (аминокислоты с остатком, образованным ароматическим углеводородным радикалом, который придает молекуле явные неполярные свойства и соответственно гидрофобный характер) до -4,5 в случае аргинина, аминокислоты с положительно заряженным остатком (Kyte J. et al., J. Mol. Biol., 1982, 157:105-132). Данная шкала показывает, что чем выше индекс гидрофобности, тем выше гидрофобность анализируемой аминокислоты (фиг. 1). Для целей облегчения оценки индекса GRAVY у анализируемого белка обычно используют программу ProtParam (Gasteiger E. et al., Protein Identification and Analysis Tools on the ExPASy Server, JM Walker ed., The Proteomics Protocols Handbook, Humana Press, 2005, 571-607), которая дает информацию обо всех физикохимических характеристиках исследуемых белков путем анализа их последовательностей; когда вводится та или иная аминокислотная последовательность, программа рассчитывает показатель GRAVY для белка, степень гидрофобности которого нужно определить.
Согласно настоящему изобретению фраза белки преимущественно гидрофобной природы обозначает такие белки, которые характеризуются индексом GRAVY в диапазоне значений от не менее -0,5 до положительных значений: и здесь вновь следует отметить, что чем выше индекс GRAVY, тем выше гидрофобность анализируемого белка.
Ниже приведено несколько примеров белков преимущественно гидрофобной природы, которые входят в область настоящего изобретения:
Инсулин: индекс GRAVY=0,2
Гормон роста человека, hGH: индекс GRAVY=-0,3
Кальцитонин, sCT (СТ из лосося): индекс GRAVY=-0,5
IL-1, антагонист рецептора IL-1Ra: индекс GRAVY=-0,4
Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, G-CSF: индекс GRAVY=0,2
Фактор роста тромбоцитов, PDGF: индекс GRAVY=-0,5, предпочтителен PDGF-BB с индексом GRAVY=-0,1
Трансформирующий фактор роста TGF-β: индекс GRAVY=-0,3
Эпидермальный фактор роста, EGF: индекс GRAVY=-0,5
Фактор роста эндотелия сосудов В, VEGF-B: индекс GRAVY=-0,2
Эритропоэтин (человеческий) или ЕРО: индекс GRAVY=-0,03
Фактор роста нервных клеток или NGF[F индекс GRAVY=-0,3
- 5 031390
Трансферрин (человеческий): индекс GRAVY=-0,2
Тканевой ингибитор металлопротеиназы-2 (человеческий), TIMP-2: индекс GRAVY=-0,2 Тканевой ингибитор металлопротеиназы-3 (человеческий), TIMP-3: индекс GRAVY=-0,3 Тканевой ингибитор металлопротеиназы-4 (человеческий), TIMP-4: индекс GRAVY=-0,18.
Автор настоящего изобретения показал, что амиды гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению, приведенные ниже, создают систему высвобождения, которая характеризуется длительным, замедленным высвобождением белков гидрофобной природы, которые в ней содержатся, тогда как белки преимущественно гидрофильной природы, если их объединять с теми же самыми амидами, не создают систему высвобождения, подходящую для их длительного, замедленного по времени высвобождения.
Амиды НА, подходящие для создания указанной системы высвобождения по настоящему изобретению, приведены ниже.
Г ексадециламид НА: амид НА на основе гексадециламина, характеризующийся молярным процентом амидирования (определяемым по методу 1Н-ЯМР) в диапазоне значений от 7 до 14%, предпочтительно от 8 до 9%;
Октиламид НА: амид НА на основе октиламина, характеризующийся молярным процентом амидирования (определяемым по методу 1Н-ЯМР) в диапазоне значений от 10 до 15%, предпочтительно от 10 до 11%;
Додециламид НА: амид НА на основе додециламина, характеризующийся молярным процентом амидирования (определяемым по методу !Н-ЯМР) в диапазоне значений от 10 до 15%, предпочтительно от 10 до 11%;
трет-Бутиламид НА: амид НА на основе трет-бутиламина, характеризующийся молярным процентом амидирования (определяемым по методу 1Н-ЯМР) в диапазоне значений от 7 до 12%, предпочтительно от 7 до 8%;
Бензиламид НА: амид НА на основе бензиламина, характеризующийся молярным процентом амидирования (определяемым по методу !Н-ЯМР) в диапазоне значений от 7 до 15%, предпочтительно от 8 до 9%.
Гиалуроновая кислота (НА), используемая в настоящем изобретении для формирования указанных амидов, может быть получена из любого источника, например, путем экстракции из морского петушка (ЕР 138572) или путем ферментации (например, с использованием Streptococcus equi, как это известно специалистам в данной области), или с использованием соответствующего технологического процесса (например, из Bacillus, WO 2012/032154), со средней молекулярной массой (определяемой по методу оценки предельного показателя вязкости: Terbojevich et al., Carbohydrate Research, 1986, 149:363-377) в диапазоне значений от 400 до 3х106 Да, предпочтительно от 50 до 730 кДа, от 750 до 1230 кДа или от 1500 до 2500 кДа и еще более предпочтительно от 150 до 250 кДа и/или от 500 до 730 кДа.
Предпочтителен гексадециламид НА со средним значением молекулярной массы от 150 до 250 кДа или от 500 до 730 кДа.
Перечисленные выше амиды НА по настоящему изобретению могут быть получены по процедуре, описанной в ЕР 1095064, где также приводятся различные варианты их применения, включая создания систем высвобождения для фармакологически активных веществ, но при этом не проводится разграничение между химическими видами используемых лекарственных средств и типом выбранного амида, и кроме того, там не описывается полученный при этом эффект. Однако в настоящем изобретении показано, что определенные амиды НА, такие как гексадециламид, октиламид, додециламид, трет-бутиламид и бензиламид, характеризующиеся определенным уровнем амидирования и значением М.М. в определенном диапазоне значений, в сочетании с белками преимущественно гидрофобной природы (и имеющие, в этой связи, индекс GRAVY выше -0,5), которые являются терапевтически и/или биологически активными, могут применяться для создания новой системы длительного, замедленного высвобождения указанных белков.
Предпочтительны следующие, приведенные ниже белки:
Инсулин hGH sCT
IL-1Ra
G-CSF
PDGF, предпочтительно PDGF-BB
TGF-β
EGF
VEGF-B
EPO
NGFp
Трансферрин
TIMP-2, TIMP-3, TIMP-4.
- 6 031390
Указанные белки могут быть получены с использованием технологии рекомбинатных ДНК или путем экстракции из ткани.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к новым системам высвобождения, содержащим:
1) гексадециламид, октиламид, додециламид, трет-бутиламид или бензиламид НА, в сочетании с
2) инсулином, hGH, sCT, IL-1Ra, G-CSF, PDGF, предпочтительно PDGF-BB, TGF-β, EGF, VEGF-B, EPO, NGF[F трансферрином, TIMP-2, TIMP-3 и TIMP-4, а также, возможно, в сочетании со стабилизаторами (при необходимости) и эксципиентами.
В частности, настоящее изобретение относится к системе, содержащей:
1) гексадециламид НА, предпочтительно гексадециламид НА с молекулярной массой в диапазоне значений от 150 до 250 кДа или от 500 до 730 кДа.
2) hGH или sCT, возможно, в сочетании со стабилизаторами и эксципиентами.
Новые системы применимы в режиме длительного, замедленного высвобождения активных агентов, которые они содержат, поскольку они изменяют терапевтическое окно объединенного с ними белка/лекарственного средства: в этой связи, можно использовать другие схемы дозирования, что будет облегчать соблюдение пациентом режима лечения.
Белки, содержащиеся в рассматриваемой системе высвобождения, будут определять вариант применения такой системы. Так, например, система высвобождения, содержащая гексадециламид гиалуроновой кислоты в сочетании с hGH или sCT, предпочтительно будет использоваться в варианте внутрисуставного введения при лечении ОА, ревматоидного артрита, псориатического артрита и остеопороза.
Автор настоящего изобретения показал, что рассматриваемая новая система высвобождения определяет непрерывный характер высвобождения hGH в синовиальной жидкости подлежащего лечению сустава, что повышает его терапевтический эффект, при том, что данный активный агент не проходит в плазму (что снижало бы концентрацию в суставе), предупреждая, таким образом, появление системных побочных реакций, вызываемых лекарственным средством.
Настоящее изобретение также относится к системе длительного высвобождения биологически активных белков, содержащей:
a) белок гидрофобной природы и
b) амид гиалуроновой кислоты (НА), где НА, используемая для получения амида, имеет среднюю молекулярную массу в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, где указанный белок гидрофобной природы имеет индекс GRAVY не менее -0,5 и амид НА выбран из гексадециламида НА: амид НА, полученный с использованием гексадециламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 14%;
октиламида НА: амид НА, полученный с использованием октиламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 15%;
додециламида НА: амид НА, полученный с использованием додециламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 15%;
трет-бутиламида НА: амид НА, полученный с использованием трет-бутиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 12%;
бензиламида НА: амид НА, полученный с использованием бензиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 15%;
и где соотношение амид гиалуроновой кислоты (НА)/белок составляет не менее 10:1.
Предпочтительно указанные биологически активные белки гидрофобной природы представляют собой инсулин, hGH, sCT, IL-1Ra, G-CSF или PDGF.
В другом варианте осуществления изобретения, указанные биологически активные белки гидрофобной природы представляют собой PDGF-BB, TGF-β, EGF, VEGF-B, EPO, NGF[F трансферрин, TIMP2, TIMP-3 или TIMP-4.
В системе длительного высвобождения белков согласно изобретению, указанный амид НА может представлять собой гексадециламид.
В предпочтительных вариантах осуществления, указанный биологически активный белок представляет собой hGH, sCT или инсулин.
В других вариантах осуществления, указанный биологически активный белок представляет собой PDGF, ингибитор металлопротеазы TIMP-2, TIMP-3 или TIMP-4.
Далее, указанный амид НА в системе длительного высвобождения белков по изобретению может быть выбран из следующих:
гексадециламида НА: амид НА, полученный с использованием гексадециламина, с молярным процентом амидирования от 8 до 9%;
октиламида НА: амид НА, полученный с использованием октиламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 11%;
додециламида НА: амид НА, полученный с использованием додециламина, с молярным процентом
- 7 031390 амидирования от 10 до 11%;
трет-бутиламида НА: амид НА, полученный с использованием трет-бутиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 8%;
бензиламида НА: амид НА, полученный с использованием бензиламина, с молярным процентом амидирования от 8 до 9%.
Согласно изобретению указанные биологически активные белки гидрофобной природы могут представлять собой PDGF-BB, TGF-β, EGF или VEGF-B.
Система длительного высвобождения белков по изобретению дополнительно может содержать стабилизаторы и эксципиенты.
Изобретение также относится к применению амида гиалуроновой кислоты (НА) для создания вышеуказанной системы, где указанный белок гидрофобной природы имеет индекс GRAVY не менее -0,5 и где указанный амид НА выбран из:
a) гексадециламида НА: амид НА, полученный с использованием гексадециламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 14%;
b) октиламида НА: амид НА, полученный с использованием октиламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 15%;
c) додециламида НА: амид НА, полученный с использованием додециламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 15%;
d) трет-бутиламида НА: амид НА, полученный с использованием трет-бутиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 12%;
e) бензиламида НА: амид НА, полученный с использованием бензиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 15%;
где НА, используемая для получения амидов, имеет среднюю молекулярную массу в диапазоне значений от 500 до 730 кДа и где соотношение амид гиалуроновой кислоты (НА)/белок составляет не менее 10:1.
В соответствии с данным применением, указанные биологически активные белки гидрофобной природы могут включать инсулин, hGH, sCT, IL-1Ra, G-CSF и PDGF.
В другом варианте осуществления изобретения, указанные биологически активные белки представляют собой PDGF-BB, TGF-β, EGF, VEGF-B, EPO, NGI β. трансферрин, TIMP-2, TIMP-3 и TIMP-4.
Указанный амид НА может представлять собой гексадециламид.
Биологически активный белок согласно изобретению также может представлять собой hGH или sCT.
Кроме того, изобретение относится к применению данной системы для внутрисуставного лечения остеоартрита, ревматоидного артрита или псориатического артрита, и/или остеопороза.
Далее, изобретение включает применение данной системы для лечения повреждения суставов, вызванного остеоартритом, лечения тендинита, восстановления поражения сердечной мышцы, восстановления костных переломов/полостей или лечения язвенных поражений/ран/повреждений кожи посредством инъекций, внутрисуставного или местного введения, или перорального введения.
Согласно вышеприведенному применению, биологически активный белок может представлять собой ингибитор металлопротеазы TIMP-2, TIMP-3 или TIMP-4, для инъекционного или внутрисуставного лечения повреждения хрящевой ткани сустава, вызванного остеоартритом, и/или для восстановления остеохондральных эрозий.
В предпочтительных вариантах осуществления изобретения, амид НА выбран из гексадециламида НА: амид НА, полученный с использованием гексадециламина, с молярным процентом амидирования от 8 до 9%;
октиламида НА: амид НА, полученный с использованием октиламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 11%;
додециламида НА: амид НА, полученный с использованием додециламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 11%;
трет-бутиламида НА: амид НА, полученный с использованием трет-бутиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 8%;
бензиламида НА: амид НА, полученный с использованием бензиламина, с молярным процентом амидирования от 8 до 9%.
Новая система высвобождения будет предпочтительно использоваться для лечения повреждений суставов, хрящей, вызванных ОА, и для восстановления остеохондральных эрозий.
Примеры получения новых систем высвобождения и эксперименты, проведенные автором для подтверждения эффективности указанных систем по настоящему изобретению описаны ниже.
Пример 1. Синтез гексадециламидного производного НА со средней молекулярной массой (М.М.) в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, Hyadd4, с молярным процентом амидирования от 8 до 9%
5,00 г натриевой соли гиалуроновой кислоты, полученной путем ферментации, с М.М. в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, растворяют в 250 мл воды, и полученный раствор пропускают через стек
- 8 031390 лянную колонку, заполненную 100 мл смолы Дауэкс (Dowex), в виде тетрабутиламмония. Раствор НА в виде соли ТВА элюируют, собирают и лиофилизируют.
г полученного таким образом продукта растворяют в 200 мл диметилсульфоксида (ДМСО) и добавляют 64 мкл метансульфоновой кислоты; добавляют также 53 мг 1,1'-карбонилдиимидазола и полученную смесь оставляют при слабом перемешивании на 1 ч при комнатной температуре. Затем добавляют 998 мг гексадециламина и проводят реакцию амидирования при температуре 42°C в течение 24 ч.
Реакцию останавливают добавлением 5 мл насыщенного водного раствора NaCl и через 30 мин добавляют 1,5 объема абсолютного этанола для выделения полученного производного. Осадок промывают с использованием смеси этанол/И2С (80:20) и в итоге абсолютным этанолом, после чего сушат в условиях высокого вакуума при температуре 40°C.
Получают 1,3 г данного производного и определяют степень его амидирования с помощью 'Н-ЯМР.
Пример 2. Синтез октиламидного производного НА со средней молекулярной массой в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, Hyadd2, с молярным процентом амидирования от 10 до 11%
5,00 г натриевой соли гиалуроновой кислоты, полученной путем ферментации, с М.М. в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, растворяют в 250 мл воды и полученный раствор пропускают через стеклянную колонку, заполненную 100 мл смолы Дауэкс (Dowex), в виде тетрабутиламмония. Раствор НА в виде соли ТВА элюируют, собирают и лиофилизируют.
г полученного таким образом продукта растворяют в 200 мл диметилсульфоксида (ДМСО) и добавляют 64 мкл метансульфоновой кислоты; добавляют также 61,4 мг 1,1'-карбонилдиимидазола и полученную смесь оставляют при слабом перемешивании на 1 ч при комнатной температуре. Затем добавляют 330 мг октиламина и проводят реакцию амидирования при температуре 42°C в течение 24 ч.
Реакцию останавливают добавлением 5 мл насыщенного водного раствора NaCl и через 30 мин добавляют 1,5 объема абсолютного этанола для выделения полученного производного. Осадок промывают с использованием смеси этанол/Н2О (80:20) и в итоге абсолютным этанолом, после чего сушат в условиях высокого вакуума при температуре 40°C.
Получают 1,2 г данного производного и определяют степень его амидирования с помощью 1Н-ЯМР.
Пример 3. Синтез додециламидного производного НА со средней молекулярной массой в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, Hyadd3, с молярным процентом амидирования от 10 до 11%
5,00 г натриевой соли гиалуроновой кислоты, полученной путем ферментации, с М.М. в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, растворяют в 250 мл воды и полученный раствор пропускают через стеклянную колонку, заполненную 100 мл смолы Дауэкс (Dowex), в виде тетрабутиламмония. Раствор НА в виде соли ТВА элюируют, собирают и лиофилизируют.
г полученного таким образом продукта растворяют в 200 мл диметилсульфоксида (ДМСО) и добавляют 64 мкл метансульфоновой кислоты; добавляют также 54,2 мг 1,1'-карбонилдиимидазола и полученную смесь оставляют при слабом перемешивании на 1 ч при комнатной температуре. Затем добавляют 448 мг додециламина и проводят реакцию амидирования при температуре 42°C в течение 24 ч.
Реакцию останавливают добавлением 5 мл насыщенного водного раствора NaCl и через 30 мин добавляют 1,5 объема абсолютного этанола для выделения полученного производного.
Осадок промывают с использованием смеси этанол/Н2О (80:20) и в итоге абсолютным этанолом, после чего сушат в условиях высокого вакуума при температуре 40°C.
Получают 1,25 г данного производного и определяют степень его амидирования с помощью 1НЯМР.
Пример 4. Синтез трет-бутиламидного производного НА со средней молекулярной массой в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, Hyadd6, с молярным процентом амидирования от 7 до 8%
5,00 г натриевой соли гиалуроновой кислоты, полученной путем ферментации, с М.М. в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, растворяют в 250 мл воды и полученный раствор пропускают через стеклянную колонку, заполненную 100 мл смолы Дауэкс (Dowex), в виде тетрабутиламмония. Раствор НА в виде соли ТВА элюируют, собирают и лиофилизируют.
г полученного таким образом продукта растворяют в 200 мл диметилсульфоксида (ДМСО) и добавляют 64 мкл метансульфоновой кислоты; добавляют также 53 мг 1,1'-карбонилдиимидазола и полученную смесь оставляют при слабом перемешивании на 1 ч при комнатной температуре. Затем добавляют 178 мг трет-бутиламина и проводят реакцию амидирования при температуре 42°C в течение 24 ч.
Реакцию останавливают добавлением 5 мл насыщенного водного раствора NaCl и через 30 мин добавляют 1,5 объема абсолютного этанола для выделения полученного производного. Осадок промывают с использованием смеси этанол/Н2О (80:20) и в итоге абсолютным этанолом, после чего сушат в условиях высокого вакуума при температуре 40°C.
Получают 1,25 г данного производного и определяют степень его амидирования с помощью 1НЯМР.
Пример 5. Синтез бензиламидного производного НА со средней молекулярной массой в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, Hyadd1, с молярным процентом амидирования от 8 до 9%
5,00 г натриевой соли гиалуроновой кислоты, полученной путем ферментации, с М.М. в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, растворяют в 250 мл воды, и полученный раствор пропускают через стек
- 9 031390 лянную колонку, заполненную 100 мл смолы Дауэкс (Dowex), в виде тетрабутиламмония. Раствор НА в виде соли ТВА элюируют, собирают и лиофилизируют.
г полученного таким образом продукта растворяют в 200 мл диметилсульфоксида (ДМСО) и добавляют 64 мкл метансульфоновой кислоты; добавляют также 54,0 мг 1,1'-карбонилдиимидазола и полученную смесь оставляют при слабом перемешивании на 1 ч при комнатной температуре. Затем добавляют 260 мг бензиламина и проводят реакцию амидирования при температуре 42°C в течение 24 ч.
Реакцию останавливают добавлением 5 мл насыщенного водного раствора NaCl и через 30 мин добавляют 1,5 объема абсолютного этанола для выделения полученного производного. Осадок промывают с использованием смеси этанол/И2О (80:20) и в итоге абсолютным этанолом, после чего сушат в условиях высокого вакуума при температуре 40°C.
Получают 1,25 г данного производного и определяют степень его амидирования с помощью 'НЯМР.
Пример 6. Получение композиций, содержащих НА и hGH в соотношении 10:1 и 20:1 (мас./мас.) мг натриевой соли гиалуроновой кислоты, полученной путем ферментации, с М.М. в диапазоне значений от 150 до 250 кДа (низкомолекулярный продукт, LMW) и от 500 до 730 кДа (продукт со средним значением молекулярной массы, MMW) растворяют в 1 мл фосфатного буфера с рН 7,4. После полного растворения добавляют 0,8 мг hGH с достижением массового соотношения полисахарид/белок 10:1, и 0,4 мг hGH с достижением массового соотношения полисахарид/белок 20:1. Оба ингредиента перемешивают с получением однородной композиции. Содержание фактора роста рассчитывают при разбавлении смеси буфером в пропорции 1:10 и последующем измерении УФ-поглощения при длине волны 280 нм и затем, с использованием калибровочной кривой, определяют концентрацию GH.
Пример 7. Получение композиции, содержащей систему высвобождения, созданную с использованием гексадециламида НА и hGH, взятых в соотношении 10:1 (мас./мас.) мг гексадециламидного производного НА, Hyadd4, полученного по процедуре примера 1, растворяют в 1 мл фосфатного буфера с рН 6,9. После полного растворения добавляют 0,8 мг hGH, предварительно растворенного в водном растворе, и все перемешивают, так чтобы композиция стала однородной и белок включился в гель. Уровень нагрузки геля рассчитывают при разбавлении буфером в пропорции 1:10, с последующим измерением УФ-поглощения при длине волны 280 нм и затем, с использованием калибровочной кривой, определяют концентрацию GH.
Пример 8. Получение композиции, содержащей систему высвобождения, созданную с использованием трет-бутиламида НА и hGH, взятых в соотношении 10:1 (мас./мас.) мг Hyadd6, полученного по процедуре примера 4, растворяют в 1 мл фосфатного буфера с рН 6,9 (8 мг/мл). После полного растворения, добавляют 0,8 мг hGH, предварительно растворенного в водном растворе, и все перемешивают, так чтобы композиция стала однородной и белок включился в гель. Уровень нагрузки геля рассчитывают при разбавлении буфером в пропорции 1:10, с последующим измерением УФ-поглощения при длине волны 280 нм и затем, с использованием калибровочной кривой, определяют концентрацию GH.
Пример 9. Получение композиции, содержащей систему высвобождения, созданную с использованием октиламида НА и hGH, взятых в соотношении 10:1 (мас./мас.) мг Hyadd2, полученного по процедуре примера 2, растворяют в 1 мл фосфатного буфера с рН 6,9 (8 мг/мл). После полного растворения, добавляют 0,8 мг hGH, предварительно растворенного в водном растворе, и все перемешивают, так чтобы композиция стала однородной и белок включился в гель. Уровень нагрузки геля рассчитывают при разбавлении буфером в пропорции 1:10, с последующим измерением УФ-поглощения при длине волны 280 нм и затем, с использованием калибровочной кривой, определяют концентрацию GH.
Пример 10. Получение композиции, содержащей систему высвобождения, созданную с использованием додециламида НА и hGH, взятых в соотношении 10:1 (мас./мас.) мг Hyadd3, полученного по процедуре примера 3, растворяют в 1 мл фосфатного буфера с рН 6,9 (8 мг/мл). После полного растворения добавляют 0,8 мг hGH, предварительно растворенного в водном растворе, и все перемешивают, так чтобы композиция стала однородной и белок включился в гель. Уровень нагрузки геля рассчитывают при разбавлении буфером в пропорции 1:10, с последующим измерением УФ-поглощения при длине волны 280 нм и затем, с использованием калибровочной кривой, определяют концентрацию GH.
Пример 11. Получение композиции, содержащей систему высвобождения, созданную с использованием бензиламида НА и hGH, взятых в соотношении 10:1 (мас./мас.) мг Hyadd1, полученного по процедуре примера 5, растворяют в 1 мл фосфатного буфера с рН 6,9 (8 мг/мл). После полного растворения добавляют 0,8 мг hGH, предварительно растворенного в водном растворе, и все перемешивают, так чтобы композиция стала однородной и белок включился в гель. Уровень нагрузки геля рассчитывают при разбавлении буфером в пропорции 1:10, с последующим измерением УФ-поглощения при длине волны 280 нм и затем, с использованием калибровочной кривой, определяют концентрацию GH.
Пример 12. Получение композиции, содержащей систему высвобождения, созданную с использова
- 10 031390 нием гексадециламида НА и cST, взятых в соотношении 10:1 (мас./мас.) мг Hyadd4, полученного по процедуре примера 1, растворяют в 1 мл фосфатного буфера с рН 6,9. После полного растворения добавляют 0,8 мг кальцитонина из лосося (cST), предварительно растворенного в фосфатном буфере, и все перемешивают, так чтобы композиция стала однородной и белок включился в гель. Уровень нагрузки геля рассчитывают при разбавлении буфером в пропорции 1:10, с последующим измерением УФ-поглощения при длине волны 280 нм и затем, с использованием калибровочной кривой, определяют концентрацию кальцитонина.
Пример 13. Получение композиции, содержащей систему высвобождения, созданную с использованием гексадециламида НА и IL-1Ra, взятых в соотношении 10:1 (мас./мас.) мг Hyadd4, полученного по процедуре примера 1, растворяют в 1 мл фосфатного буфера с рН 6,9. После полного растворения добавляют 0,8 мг IL-1Ra, предварительно растворенного в водном растворе, и все перемешивают, так чтобы композиция стала однородной и белок включился в гель. Уровень нагрузки геля рассчитывают при разбавлении буфером в пропорции 1:10, с последующим измерением УФпоглощения при длине волны 280 нм и затем, с использованием калибровочной кривой, определяют концентрацию IL-1Ra.
Пример 14. Получение композиции, содержащей систему высвобождения, созданную с использованием гексадециламида НА и РНКазы, взятых в соотношении 10:1 (мас./мас.) мг Hyadd4, полученного по процедуре примера 1, растворяют в 1 мл фосфатного буфера с рН 6,9. После полного растворения добавляют 0,8 мг РНКазы, предварительно растворенной в фосфатном буфере, и все перемешивают, так чтобы белок включился в гель. Уровень нагрузки геля рассчитывают при разбавлении буфером в пропорции 1:10, с последующим измерением УФ-поглощения при длине волны 280 нм и затем, с использованием калибровочной кривой, определяют концентрацию РНКазы.
Пример 15. Получение композиции, содержащей систему высвобождения, созданную с использованием гексадециламида НА и инсулина, взятых в соотношении 10:1 (мас./мас.) мг Hyadd4, полученного по процедуре примера 1, растворяют в 1 мл фосфатного буфера с рН 6,9. После полного растворения, добавляют 0,8 мг инсулина, предварительно растворенного в фосфатном буфере, и все перемешивают, так чтобы белок включился в гель. Уровень нагрузки геля рассчитывают при разбавлении буфером в пропорции 1:10, с последующим измерением УФ-поглощения при длине волны 280 нм и затем, с использованием калибровочной кривой, определяют концентрацию инсулина.
Пример 16. Исследование уровня высвобождения hGH из композиции, полученной с включением НА или амидов НА
Композиции, полученные по процедурам примеров 6-11, вносят в диализные трубки, с отсекаемым значением М.М. 100 кДа, и погружают в фосфатный буфер при рН 7, при осторожном перемешивании, для отслеживания их высвобождения из соответствующего отсека. Для целей сравнительного анализа смешивают 0,8 мг hGH с 1 мл фосфатного буфера (PBS), и полученную композицию вносят в диализную трубку.
Условия достаточного растворения поддерживаются в течение всех экспериментов. В заданные временные точки отбирают аликвоты по 50 мкл из донорского отсека и разбавляют в пропорции 1:10 для определения содержания белка и его изменений с течением времени. Параллельно проводят определение УФ-поглощения при длине волны 280 нм и оценку результатов ОФ-ВЭЖХ при длине волны 220 нм для определения количества оставшегося белка и наличия его деградации, если она имеет место. Проводят также анализ по методу анализа рассеяния для оценки агрегации введенного в состав композиции белка. И, наконец, отбирают образцы из рецепторного отсека для проверки, соответствует ли высвобожденный уровень количеству, которое исчезает из донорского отсека, а также проводят масс-спектрометрический анализ (Esi-Tof) для подтверждения того, что высвобожденный GH не подвергается какой-либо структурной деградации. Далее, строят кривые, описывающие уровень деградации, которые показывают процент белка, высвобожденного с течением времени. Фиг. 2, 3, 4 и 5.
Результаты
На фиг. 2 показан профиль высвобождения hGH, определяемый системой, созданной с использованием Hyadd4 и hGH, в сравнении с контролем, в котором тот же белок находится в PBS.
На фиг. 3 показан профиль высвобождения белка, hGH, введенного в состав композиции в сочетании с LMW-HA и MMW-HA: в обоих случаях тестировали препараты с двумя разными весовыми отношениями НА к hGH (10:1 и 20:1), этот эксперимент автор провел с целью продемонстрировать, что сочетание белков гидрофобной природы, даже с большими количествами НА с разными значениями М.М., не приводит к какому-либо изменению профиля высвобождения белка в сравнении с профилем высвобождения, получаемым при его введении в PBS, т.е. в водном растворителе.
На фиг. 4 показаны профили высвобождения hGH из систем высвобождения, созданных с использованием амидов по настоящему изобретению и hGH, в сравнении с контрольным вариантом, где hGH был введен в композицию с PBS.
На фиг. 5 проиллюстрировано время высвобождения 50% hGH из систем высвобождения, созданных с использованием амидов по настоящему изобретению, также в сравнении с контролем, как было указано выше.
- 11 031390
Если сравнивать фиг. 3 с фиг. 2 и 4, можно заметить, что системы высвобождения, полученные с использованием амидов НА (описанных выше) в сочетании с белками преимущественно гидрофобной природы (в данном случае, в сочетании с hGH), создают вполне очевидное пролонгированное по времени, замедленное высвобождение белка, в сравнении с контролем, где анализируемые белки были изготовлены с использованием PBS, a также в сравнении с белками, которые введены в состав композиций в сочетании с НА разного М.М. и с разными показателями массового соотношения. Из этого следует, что не концентрация и/или не М.М. полисахарида определяет модификацию профиля высвобождения исследуемого гидрофобного белка, а химическая природа полимера. Все это еще более явно следует из фиг. 5, где показано сравнение времени высвобождения 50% hGH: на фигуре продемонстрировано, что новые системы высвобождения по настоящему изобретению увеличивают период высвобождения до трех раз, в сравнении с контрольным вариантом (hGH в PBS).
Пример 17. Исследование высвобождения sCT, IL1-Ra и инсулина в сравнении с профилем высвобождения гидрофильного белка РНКазы А
Каждую из исследуемых композиций получали по процедурам, описанным в примерах 12-15, и затем вводили в диализную трубку, с отсекаемым значением М.М. 100 кДа, и погружали в фосфатный буфер при рН 7, при осторожном перемешивании. Для целей сравнительного анализа смешивали 0,8 мг кальцитонина, IL-1Ra или инсулина с 1 мл фосфатного буфера, и полученные композиции вводили в диализную трубку для мониторинга их высвобождения из донорного отсека с течением времени.
Условия достаточного растворения поддерживались в течение всех экспериментов. В заданные временные точки отбирали аликвоты по 10 мкл из донорского отсека и разбавляли в пропорции 1:10 для определения содержания белка и его изменений с течением времени. Параллельно проводили определение УФ-поглощения при длине волны 280 нм для определения количества оставшегося белка. Проводили также анализ по методу рассеяния анализа рассеяния для оценки агрегации введенного в состав композиции белка. И, наконец, отбирали образцы из рецепторного отсека для проверки, соответствует ли высвобожденный уровень количеству, которое исчезает из донорского отсека. Далее, строят кривые, описывающие уровень деградации, которые показывают процент белка, высвобожденного с течением времени, в сравнении с его значением в контроле.
Белок РНКаза А характеризуется индексом GRAVY, равным -0,67, и, следовательно, не может рассматриваться как преимущественно гидрофобный белок, а, скорее, как гидрофильный белок. Приведенное ниже описание дано с целью сравнения получаемого в данном случае профиля высвобождения с профилем высвобождения, характерным для системы высвобождения Hyadd, в которой используется сочетание с использованием белков преимущественно гидрофобной природы, с тем чтобы проиллюстрировать имеющиеся различия.
Результаты
На фиг. 6-8 показаны профили высвобождения 3 анализируемых белков гидрофобной природы: во всех трех случаях система, сформированная с использованием гексадециламида НА в сочетании с указанными белками, демонстрирует пролонгированное, замедленное высвобождение в течение более длительного периода времени, чем в контрольном варианте.
Тогда как на фиг. 9 показано сочетание того же гексадециламида, взятого в том же отношении (10:1, мас./мас.), в сочетании с РНКазой, которая имеет преимущественно гидрофильную природу и характеризуется индексом GRAVY=-0,67, где наблюдается профиль высвобождения, идентичный тому профилю, который получают при использовании в композиции сочетания такого же белка с PBS.
Пример 18: Исследование высвобождения hGH в синовиальную жидкость человека (LS), полученную от пациентов с остеоартритом
Гормон hGH вначале ковалентно связывают с флуоресцентным зондом (Су5.5), так чтобы его можно было определенно распознать в присутствии других синовиальных белков. С этой целью, 1,5 мг hGH растворяют в 2 мл боратного буфера при рН 8, к которому затем добавляют 2 мг Су5.5, предварительно растворенного в 60 мкл ДМСО. Проводят реакцию мечения в защищенных от света условиях, при несильном перемешивании в течение 18 ч. Затем проводят очистку путем диализа против фосфатного буфера в течение 4 дней и против MilliQ воды в течение 1 дня. Далее меченый белок анализируют с использованием гель-фильтрации для подтверждения его чистоты.
Композицию на основе Hyadd4 и hGH-Cy5.5, изготавливают по процедуре примера 7, с поддержанием массового соотношения 10:1. Оба указанных ингредиента хорошо перемешивают, с тем чтобы получить однородную композицию и белок включился в гель. Полученный таким образом гель вводят в диализную трубку с отсекаемым значением М.М. 100 кДа, погружают в среду, содержащую фосфатный буфер и синовиальную жидкость, взятую от пациентов с остеоартритом (1:1, об./об.), и продолжат осторожное перемешивание.
В заданные временные точки определяют количество белка, высвободившегося с течением времени в рецепторный отсек. Анализы проводят по процедуре ОФ-ВЭЖХ с использованием флуоресцентного детектора, не только с тем чтобы определить содержание hGH, но также для проверки, подвергается ли белок деградации. Далее строят кривые, иллюстрирующие профиль высвобождения, на которых показан процент белка, высвободившегося из композиции за период 48 ч.
- 12 031390
Результаты
На фиг. 10 показан полученный результат: высвобождение hGH в LS из системы, созданной на основе Hyadd4 в сочетании с исследуемым белком, показывает, что длительный, замедленный профиль высвобождения, ранее проиллюстрированный на фиг. 2, поддерживается в неизмененном состоянии. В этой связи, можно полагать, что белок/лекарственное средство, включенное в систему Hyadd, защищено и не подвергается деградации в среде, в которую он высвобождается, где указанная среда обогащена ферментами, белками, причем некоторые из них неопределенной природы, а также провоспалительными молекулами, какой является синовиальная жидкость от пациентов с ОА.
Пример 19: Исследование фармакокинетики системы, созданной на основе Hyadd4 и hGH, после ее внутрисуставного введения крысам мг Hyadd4, полученного по процедуре, описанной в примере 1, растворяют в 1 мл фосфатного буфера с рН 6,9 и стерилизуют в условиях влажного тепла при температуре 121°C. Далее 0,8 мг hGH, предварительно растворенного в водном растворе и простерилизованного фильтрацией через регенерированные целлюлозные фильтры с размером пор 0,2 мкм, добавляют в асептических условиях и все хорошо перемешивают, так чтобы композиция стала однородной и белок включился в гель.
Для проведения исследования in vivo, количество композиции, эквивалентное 100 мкг белка/на животное, инъецируют в коленный сустав крысы. В заданные временные точки (0,15, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 24 и 48 ч) отбирают образцы плазмы и проводят анализ по процедуре ELISA для определения концентрации hGH, который проходит в плазму после его внутрисуставного введения. Данный эксперимент проводят в трехкратном повторе.
Для целей сравнения, одну группу животных подвергают лечению эквивалентным количеством свободного hGH (100 мкг), также при проведении внутрисуставного введения. Параметры фармакокинетики определяют при построении графика зависимости концентрации hGH в нг/мл, обнаруженной в плазме, от времени, т.е. как графика указанной концентрации в виде функции времени, до 48 ч.
Результаты
Как показано на фиг. 11, инъецированный белок обнаруживается в плазме сразу же после его внутрисуставного введения.
Однако в связи с пролонгированным характером высвобождения белка, созданного системой Hyadd, он остается in situ, а именно: в полости сустава, и не проходит в кровоток, так что весь эффект белка ограничивается местом его инъекции.
Claims (20)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Система длительного высвобождения биологически активных белков, содержащая:a) белок гидрофобной природы иb) амид гиалуроновой кислоты (НА), где НА, используемая для получения амида, имеет среднюю молекулярную массу в диапазоне значений от 500 до 730 кДа, где указанный белок гидрофобной природы имеет индекс GRAVY не менее -0,5 и амид НА выбран из гексадециламида НА: амид НА, полученный с использованием гексадециламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 14%;октиламида НА: амид НА, полученный с использованием октиламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 15%;додециламида НА: амид НА, полученный с использованием додециламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 15%;трет-бутиламида НА: амид НА, полученный с использованием трет-бутиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 12%;бензиламида НА: амид НА, полученный с использованием бензиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 15%;и где соотношение амид гиалуроновой кислоты (НА)/белок составляет не менее 10:1.
- 2. Система длительного высвобождения белков по п.1, где указанные биологически активные белки гидрофобной природы представляют собой инсулин, hGH, sCT, IL-1Ra, G-CSF, PDGF.
- 3. Система длительного высвобождения белков по п.1, где указанные биологически активные белки гидрофобной природы представляют собой PDGF-BB, TGF-β, EGF, VEGF-B, EPO, NGF/. трансферрин, TIMP-2, TIMP-3 и TIMP-4.
- 4. Система длительного высвобождения белков по любому из пп.1-3, где указанный амид НА представляет собой гексадециламид.
- 5. Система длительного высвобождения белков по п.4, где указанный биологически активный белок представляет собой hGH или sCT.
- 6. Система длительного высвобождения белков по п.2, где указанный биологически активный белок представляет собой инсулин.
- 7. Система длительного высвобождения белков по п.4, где указанный биологически активный белок- 13 031390 представляет собой PDGF.
- 8. Система длительного высвобождения белков по п.4, где указанный биологически активный белок представляет собой ингибитор металлопротеазы TIMP-2, TIMP-3 или TIMP-4.
- 9. Система длительного высвобождения белков по любому из пп.1-8, где указанный амид НА выбран из гексадециламида НА: амид НА, полученный с использованием гексадециламина, с молярным процентом амидирования от 8 до 9%;октиламида НА: амид НА, полученный с использованием октиламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 11%;додециламида НА: амид НА, полученный с использованием додециламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 11%;трет-бутиламида НА: амид НА, полученный с использованием трет-бутиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 8%;бензиламида НА: амид НА, полученный с использованием бензиламина, с молярным процентом амидирования от 8 до 9%.
- 10. Система длительного высвобождения белков по п.4, где указанные биологически активные белки гидрофобной природы представляют собой PDGF-BB, TGF-β, EGF или VEGF-B.
- 11. Система длительного высвобождения белков по любому из пп.5-8 и 10, которая дополнительно содержит стабилизаторы и эксципиенты.
- 12. Применение амида гиалуроновой кислоты (НА) для создания системы по любому из пп.1-11, где указанный белок гидрофобной природы имеет индекс GRAVY не менее -0,5 и где указанный амид НА выбран из:a) гексадециламида НА: амид НА, полученный с использованием гексадециламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 14%;b) октиламида НА: амид НА, полученный с использованием октиламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 15%;c) додециламида НА: амид НА, полученный с использованием додециламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 15%;d) трет-бутиламида НА: амид НА, полученный с использованием трет-бутиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 12%;e) бензиламида НА: амид НА, полученный с использованием бензиламина, с молярным процентом амидирования от 7 до 15%;где НА, используемая для получения амидов, имеет среднюю молекулярную массу в диапазоне значений от 500 до 730 кДа и где соотношение амид гиалуроновой кислоты (НА)/белок составляет не менее 10:1.
- 13. Применение по п.12, где указанные биологически активные белки гидрофобной природы включают инсулин, hGH, sCT, IL-1Ra, G-CSF, PDGF.
- 14. Применение по п.12, где указанные биологически активные белки представляют собой PDGFBB, TGF-β, EGF, VEGF-B, ЕРО, NGl®. трансферрин, TIMP-2, TIMP-3 и TIMP-4.
- 15. Применение по любому из пп.12-14, где указанный амид НА представляет собой гексадециламид.
- 16. Применение по п.15, где указанный биологически активный белок представляет собой hGH или sCT.
- 17. Применение системы по любому из пп.1-11 для внутрисуставного лечения остеоартрита, ревматоидного артрита или псориатического артрита и/или остеопороза.
- 18. Применение системы по любому из пп.1-11 для лечения повреждения суставов, вызванного остеоартритом, лечения тендинита, восстановления поражения сердечной мышцы, восстановления костных переломов/полостей или лечения язвенных поражений/ран/повреждений кожи посредством инъекций, внутрисуставного или местного введения или перорального введения.
- 19. Применение системы по п.4, где указанный биологически активный белок представляет собой ингибитор металлопротеазы TIMP-2, TIMP-3 или TIMP-4 для инъекционного или внутрисуставного лечения повреждения хрящевой ткани сустава, вызванного остеоартритом, и/или для восстановления остеохондральных эрозий.
- 20. Применение по пп.12-19, где амид НА выбран из гексадециламида НА: амид НА, полученный с использованием гексадециламина, с молярным процентом амидирования от 8 до 9%;октиламида НА: амид НА, полученный с использованием октиламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 11%;додециламида НА: амид НА, полученный с использованием додециламина, с молярным процентом амидирования от 10 до 11%;трет-бутиламида НА: амид НА, полученный с использованием трет-бутиламина, с молярным про- 14 031390 центом амидирования от 7 до 8%;бензиламида НА: амид НА, полученный с использованием бензиламина, с молярным процентом амидирования от 8 до 9%.Шкала значений гидрофобности для аминокислотНе: 4.500Val: 4.200Leu: 3.800Phe: 2.800Cys: 2.500Met: 1.900Ala: 1.800Gly: -0.400Asn: -3.500Thr: -0.700Trp: -0.900Ser: -0.800Tyr:-1.300Pro: -1.600His: -3.200Glu: -3.500Asp:-3.500Gln: -3.500Lys: -3.900Arg: -4.500Фиг. 1Профиль высвобождения hGH из системы Hyadd4Фиг. 2PBSНА LMW+hGH 10:1НА MMW+hGH 10:1НА LMW+hGH 20:1НА MMW+hGH 20:1Фиг. 3- 15 031390Профиль высвобождения hGH из систем HyaddВремя (час)-♦ hGH в PBS —X—Hyaddl —t-—- Hyadd2 -к ~Hyadd3 —®— Hyadd4 —k—Hyadd6Фиг. 4 время в часахФиг. 5Фиг. 7- 16 031390Фиг. 9PBS- Hyadd4+ РНКаза ♦·*· hGH —Hyadd4+ hGH----40 SO
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT000173A ITPD20120173A1 (it) | 2012-05-31 | 2012-05-31 | "nuovo sistema di rilascio di proteine idrofobiche" |
| PCT/IB2013/054477 WO2013179258A1 (en) | 2012-05-31 | 2013-05-30 | New release system of hydrophobic proteins |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201491991A1 EA201491991A1 (ru) | 2015-03-31 |
| EA031390B1 true EA031390B1 (ru) | 2018-12-28 |
Family
ID=46321311
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201491991A EA031390B1 (ru) | 2012-05-31 | 2013-05-30 | Система длительного высвобождения гидрофобных белков на основе амида гиалуроновой кислоты |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9731019B2 (ru) |
| EP (1) | EP2854830B1 (ru) |
| JP (1) | JP6247687B2 (ru) |
| KR (1) | KR102090551B1 (ru) |
| CN (1) | CN104349788B (ru) |
| CA (1) | CA2874958C (ru) |
| EA (1) | EA031390B1 (ru) |
| ES (1) | ES2885764T3 (ru) |
| HK (1) | HK1206993A1 (ru) |
| IN (1) | IN2014KN02739A (ru) |
| IT (1) | ITPD20120173A1 (ru) |
| MX (1) | MX357799B (ru) |
| PT (1) | PT2854830T (ru) |
| WO (1) | WO2013179258A1 (ru) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT201900003887A1 (it) | 2019-03-18 | 2020-09-18 | Fidia Farm Spa | Sistemi di stabilizzazione e di rilascio controllato di farmaci instabili alla sterilizzazione |
| IT201900009933A1 (it) * | 2019-06-24 | 2020-12-24 | Fidia Farm Spa | Composizioni farmaceutiche comprendenti derivati ammidici dell'acido ialuronico per uso nel trattamento di traumi ossei, in particolare in pazienti con problemi di osteopenia o osteoporosi |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1095064A1 (en) * | 1998-07-06 | 2001-05-02 | Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. | Amides of hyaluronic acid and the derivatives thereof and a process for their preparation |
| WO2006092233A1 (en) * | 2005-03-02 | 2006-09-08 | Fidia Farmaceutici S.P.A. | Amide derivatives of hyaluronic acid in osteoarthrosis |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US495774A (en) | 1893-04-18 | Island | ||
| IT1229075B (it) | 1985-04-05 | 1991-07-17 | Fidia Farmaceutici | Medicamenti per uso topico, ottenuti tramite l'impiego dell'acido ialuronico |
| NO169637C (no) | 1983-10-11 | 1992-07-22 | Fidia Spa | Fremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive hyaluronsyre-fraksjoner |
| US4582865A (en) | 1984-12-06 | 1986-04-15 | Biomatrix, Inc. | Cross-linked gels of hyaluronic acid and products containing such gels |
| US4713448A (en) | 1985-03-12 | 1987-12-15 | Biomatrix, Inc. | Chemically modified hyaluronic acid preparation and method of recovery thereof from animal tissues |
| US4851521A (en) | 1985-07-08 | 1989-07-25 | Fidia, S.P.A. | Esters of hyaluronic acid |
| IT1219587B (it) | 1988-05-13 | 1990-05-18 | Fidia Farmaceutici | Polisaccaridi carbossiilici autoreticolati |
| CA1340994C (en) | 1989-09-21 | 2000-05-16 | Rudolf Edgar Dr. Falk | Treatment of conditions and disease |
| US5827937A (en) | 1995-07-17 | 1998-10-27 | Q Med Ab | Polysaccharide gel composition |
| US6096728A (en) | 1996-02-09 | 2000-08-01 | Amgen Inc. | Composition and method for treating inflammatory diseases |
| IT1306679B1 (it) | 1999-06-29 | 2001-10-02 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Uso dei derivati dell'acido ialuronico per la preparazione dicomposizoni farmaceutiche e biomateriali per la prevenzione della |
| US6645485B2 (en) | 2000-05-10 | 2003-11-11 | Allan R. Dunn | Method of treating inflammation in the joints of a body |
| WO2006063758A2 (en) * | 2004-12-14 | 2006-06-22 | Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. | Process for the preparation of two and three dimensional polymer scaffolds |
| TW200640492A (en) | 2005-02-21 | 2006-12-01 | Lg Life Sciences Ltd | Sustained release composition of protein drug |
| ITPD20050207A1 (it) * | 2005-07-07 | 2007-01-08 | Fidia Farmaceutici | Nuove composizioni farmaceutiche contenenti acido ialuronico e collagenas nel trattamento topico di ferite, ustioni ed ulcere |
| IT1402385B1 (it) | 2010-09-09 | 2013-09-04 | Fidia Farmaceutici | Processo per la produzione di acido ialuronico in escherichia coli o bacillus subtilis |
-
2012
- 2012-05-31 IT IT000173A patent/ITPD20120173A1/it unknown
-
2013
- 2013-05-30 MX MX2014014536A patent/MX357799B/es active IP Right Grant
- 2013-05-30 JP JP2015514665A patent/JP6247687B2/ja active Active
- 2013-05-30 ES ES13737417T patent/ES2885764T3/es active Active
- 2013-05-30 CA CA2874958A patent/CA2874958C/en active Active
- 2013-05-30 CN CN201380028007.8A patent/CN104349788B/zh active Active
- 2013-05-30 WO PCT/IB2013/054477 patent/WO2013179258A1/en active Application Filing
- 2013-05-30 EP EP13737417.9A patent/EP2854830B1/en active Active
- 2013-05-30 EA EA201491991A patent/EA031390B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2013-05-30 IN IN2739KON2014 patent/IN2014KN02739A/en unknown
- 2013-05-30 KR KR1020147033477A patent/KR102090551B1/ko active IP Right Grant
- 2013-05-30 US US14/404,138 patent/US9731019B2/en active Active
- 2013-05-30 PT PT137374179T patent/PT2854830T/pt unknown
-
2015
- 2015-08-10 HK HK15107694.7A patent/HK1206993A1/xx unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1095064A1 (en) * | 1998-07-06 | 2001-05-02 | Fidia Advanced Biopolymers S.R.L. | Amides of hyaluronic acid and the derivatives thereof and a process for their preparation |
| WO2006092233A1 (en) * | 2005-03-02 | 2006-09-08 | Fidia Farmaceutici S.P.A. | Amide derivatives of hyaluronic acid in osteoarthrosis |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| A. BORZACCHIELLO1, L. MAYOL, A. SCHIAVINATO, L. AMBROSIO: "Effect of hyaluronic acid amide derivative on equine synovial fluid viscoelasticity", JOURNAL OF BIOMEDICAL MATERIALS RESEARCH, WILEY, NEW YORK, NY, US, vol. 92A, no. 3, 1 March 2010 (2010-03-01), US, pages 1162 - 1170, XP002619476, ISSN: 0021-9304, DOI: 10.1002/JBM.A.32455 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2854830A1 (en) | 2015-04-08 |
| EA201491991A1 (ru) | 2015-03-31 |
| PT2854830T (pt) | 2021-09-02 |
| IN2014KN02739A (ru) | 2015-05-08 |
| CA2874958A1 (en) | 2013-12-05 |
| ITPD20120173A1 (it) | 2013-12-01 |
| KR102090551B1 (ko) | 2020-03-19 |
| MX2014014536A (es) | 2015-02-24 |
| KR20150016951A (ko) | 2015-02-13 |
| EP2854830B1 (en) | 2021-06-30 |
| CA2874958C (en) | 2023-02-14 |
| CN104349788B (zh) | 2017-07-28 |
| US9731019B2 (en) | 2017-08-15 |
| JP6247687B2 (ja) | 2017-12-13 |
| MX357799B (es) | 2018-07-25 |
| HK1206993A1 (en) | 2016-01-22 |
| CN104349788A (zh) | 2015-02-11 |
| ES2885764T3 (es) | 2021-12-15 |
| WO2013179258A1 (en) | 2013-12-05 |
| JP2015518042A (ja) | 2015-06-25 |
| US20150290326A1 (en) | 2015-10-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9561260B2 (en) | Compositions for treating joints comprising bone morphogenetic protein and hyaluronic acid | |
| KR100577041B1 (ko) | 서방성제형 | |
| US8524662B2 (en) | Compositions and methods for treating joints | |
| KR20100051695A (ko) | 양쪽 친매성 폴리머와 ｂｍｐ 패밀리의 골형성 단백질의 복합체 | |
| US20020032153A1 (en) | Methods and compositions for the treatment and prevention of erectile dysfunction | |
| CN105125508A (zh) | 瞬时连接于聚合物载体的干生长激素组合物 | |
| JP2015057384A (ja) | 薬学的使用のための新規のニュールツリン複合体 | |
| EP3539570B1 (en) | Pegylated endostatin analogue and application thereof | |
| Wang et al. | Characterization, stability, and formulations of basic fibroblast growth factor | |
| KR20110014564A (ko) | 이중-가닥 폴리에틸렌 글리콜-수식된 성장 호르몬, 이의 제조 방법 및 용도 | |
| US9731019B2 (en) | Release system of hydrophobic proteins | |
| CN109836487B (zh) | 一种人成纤维细胞生长因子18及其可溶性重组表达方法、制备方法、制剂和应用 | |
| KR102171363B1 (ko) | 전구세포 또는 줄기세포 동원 활성을 가지는 물질 p 유사체 및 이를 포함하는 조성물 | |
| US11951176B2 (en) | Stabilization of glucagon by trehalose glycopolymer nanogels | |
| Tiwari et al. | Fibroblast growth factors: properties, biosynthesis, biological functions, therapeutic applications and engineering. | |
| RU2664192C1 (ru) | Рекомбинантный ген, кодирующий белок hbd-epo, рекомбинантная плазмидная днк pl610, способ получения рекомбинантного белка hbd-epo, рекомбинантный белок hbd-epo, композиция для специфической индукции регенерации костной ткани, способ специфической индукции регенерации костной ткани | |
| KR20140015264A (ko) | 서방성 의약 조성물 | |
| JP2002338599A (ja) | 血中滞留性が向上した生理活性タンパク質およびその調製方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): TJ TM |