EA031234B1 - Вакцина с адъювантом на основе маннозилированного хитозана - Google Patents

Вакцина с адъювантом на основе маннозилированного хитозана Download PDF

Info

Publication number
EA031234B1
EA031234B1 EA201590829A EA201590829A EA031234B1 EA 031234 B1 EA031234 B1 EA 031234B1 EA 201590829 A EA201590829 A EA 201590829A EA 201590829 A EA201590829 A EA 201590829A EA 031234 B1 EA031234 B1 EA 031234B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
chitosan
vaccine
adjuvant
antigen
dose
Prior art date
Application number
EA201590829A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201590829A1 (ru
Inventor
Билли М. Харджис
Нейл Р. Памфорд
Марион Морган
Сричаитаня Шиварамаиах
Гильермо Теллес
Аманда Вулфенден
Original Assignee
Дзе Борд Оф Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Арканзас
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дзе Борд Оф Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Арканзас filed Critical Дзе Борд Оф Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Арканзас
Publication of EA201590829A1 publication Critical patent/EA201590829A1/ru
Publication of EA031234B1 publication Critical patent/EA031234B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7004—Monosaccharides having only carbon, hydrogen and oxygen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A61K31/716—Glucans
    • A61K31/722—Chitin, chitosan
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/68—Protozoa, e.g. flagella, amoebas, sporozoans, plasmodium or toxoplasma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/002—Protozoa antigens
    • A61K39/012—Coccidia antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/0241—Mollicutes, e.g. Mycoplasma, Erysipelothrix
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
    • A61K39/0258—Escherichia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
    • A61K39/0275—Salmonella
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
    • A61K39/0283—Shigella
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/08—Clostridium, e.g. Clostridium tetani
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/085—Staphylococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • A61K39/092—Streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/099—Bordetella
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
    • C08B37/0027—2-Acetamido-2-deoxy-beta-glucans; Derivatives thereof
    • C08B37/003—Chitin, i.e. 2-acetamido-2-deoxy-(beta-1,4)-D-glucan or N-acetyl-beta-1,4-D-glucosamine; Chitosan, i.e. deacetylated product of chitin or (beta-1,4)-D-glucosamine; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
    • A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
    • A61K2039/523—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/542—Mucosal route oral/gastrointestinal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55544—Bacterial toxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6087—Polysaccharides; Lipopolysaccharides [LPS]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16171—Demonstrated in vivo effect
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Изобретение относится к составу вакцины, содержащему адъювантную композицию, включающую хитозан, связанный с углеводом путем образования основания Шиффа, и по меньшей мере один антиген, где углевод является маннозой с открытым кольцом; и способу усиления иммунного ответа у индивидуума на антиген с помощью такой композиции.

Description

Изобретение относится к составу вакцины, содержащему адъювантную композицию, включающую хитозан, связанный с углеводом путем образования основания Шиффа, и по меньшей мере один антиген, где углевод является маннозой с открытым кольцом; и способу усиления иммунного ответа у индивидуума на антиген с помощью такой композиции.
031234 Bl
Перекрестная ссылка на родственные заявки
Эта патентная заявка испрашивает приоритет предварительной патентной заявки Соединенных Штатов Америки № 61/719713, зарегистрированной 29 октября 2012 г., включенной в настоящий документ полностью в качестве ссылки.
Введение
Адъювант является фармакологическим или иммунологическим лекарственным средством, которое модифицирует эффект других препаратов, таких как лекарственное средство или вакцина. Адъюванты часто включают в вакцины для усиления иммунного ответа реципиента на представленный антиген, в то же время сводя инъецированный чужеродный материал до минимума.
Адъюванты сами по себе не обеспечивают иммунитет. Адъюванты могут действовать различными способами при презентировании антигена иммунной системе. Адъюванты могут действовать в качестве депо для антигена, презентируя антиген в течение длительного периода времени, таким образом максимизируя иммунный ответ до того, как организм очиститься от антигена. Примерами адъювантов типа депо являются масляные эмульсии, наподобие адъюванта Фрейнда. Адъюванты также могут действовать в качестве раздражителей, которые заставляют организм задействовать и усилить его иммунный ответ. Вакцина от столбняка, дифтерии и коклюша, например, содержит весьма малые количества токсинов, продуцируемых каждой из таргетных бактерий, но также содержит гидроксид алюминия. Соли алюминия являются распространенными адъювантами в вакцинах, продаваемых в Соединенных Штатах Америки, и применялись в вакцинах в течение 70 лет.
Хитозан является линейным полисахаридом, составленным из случайным образом распределенных в-(1-4)-связанного D-глюкозамина (деацетилированная единица) и N-ацетил-О-глюкозамина (ацетилированная единица). Он создан посредством обработки панцирей креветок и других ракообразных с применением щелочного гидроксида натрия. Хитозан с некоторым успехом применяли в качестве носителя как для пероральных, так и подкожных вакцин. Здесь авторы представляют новые составы, содержащие адъювант на основе хитозана, которые как продемонстрировано лучше действуют в качестве адъювантов, чем традиционно применяемые адъюванты на основе алюминия. В частности, адъюванты на основе хитозана, представленные в настоящем документе, были эффективными при стимуляции IgA ответа.
Сущность изобретения
В настоящем документе представлен состав вакцины, содержащий адъювантную композицию, и способ усиления иммунного ответа индивидуума на антиген, включающий введение указанного состава вакцины. В еще одном аспекте представлены составы вакцин. Составы вакцин могут включать адъюванты, представленные в настоящем документе, и антиген. Антигены могут быть белками или микробными по природе, подходящие микробы включают бактерии, дрожжи или другие грибы, эукариотических паразитов и вирусы и могут быть аттенуированными, рекомбинантными, убитыми или инактивированными другим способом.
Еще в одном дополнительном аспекте также представлены способы усиления иммунного ответа индивидуума на антиген. Эти способы включают введение индивидууму состава вакцины, содержащего антиген и адъювант на основе хитозана, описываемый в настоящем документе. Адъювант на основе хитозана может быть хитозаном, поперечно-сшитым альдегидом, или хитозаном, сшитым с углеводом.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 представлен график, демонстрирующий ответ антитела IgG на β-галактозидазу у индеек после первичной вакцинации и стимуляции посредством указанных составов вакцины-адъюванта. Различные буквы указывают на значимые различия (р<0,05).
На фиг. 2 представлен график, демонстрирующий ответ антитела IgG на Clostridium septicum у индеек после первичной вакцинации и стимуляции посредством указанных составов вакцины-адъюванта. Различные буквы указывают на значимые различия (р<0,05).
На фиг. 3 представлен набор графиков, демонстрирующих ответ антитела IgG (фиг. 3A) и IgA (фиг. 3B) у куриц в различные моменты времени после вакцинации и стимуляции посредством указанных Bacillus-векторных составов вакцины-адъюванта к птичьему гриппу.
На фиг. 4 представлен график, демонстрирующий уровни антитела IgG против Salmonella после первичной вакцинации и стимуляции посредством указанных составов вакцины-адъюванта, измеренные посредством конкурентного ELISA. Различные буквы указывают на значимые различия (р<0,05).
На фиг. 5 представлен график, демонстрирующий уровни антитела IgA против Salmonella после первичной вакцинации и стимуляции посредством указанных составов вакцины-адъюванта, измеренные посредством конкурентного ELISA. Различные буквы указывают на значимые различия (р<0,05).
На фиг. 6 представлен набор графиков, демонстрирующих уровни антител IgG (фиг. 6А) и IgA (фиг. 6В) против Salmonella после первичной вакцинации и стимуляции посредством указанных составов вакцины-адъюванта, измеренные посредством конкурентного ELISA. Различные буквы указывают на значимые различия (р<0,05).
На фиг. 7 представлен график, демонстрирующий процент восстановления Salmonella в печени и селезенке (L/S) или в скоплениях лимфоидной ткани в слепой кишке (СТ) на 22 сутки после первичной
- 1 031234 вакцинации (на 3 сутки после стимуляции антигеном). Протокол вакцинации был таким же, как и тот, что применяли на фиг. 6, и * указывает на Р<0,05.
На фиг. 8 представлен график, демонстрирующий уровень антитела IgA против Salmonella на 22 сутки после первичной вакцинации и стимуляции (12 сутки) посредством указанных составов вакциныадъюванта посредством указанных путей введения как измеренные с применением конкурентной ELISA. Различные буквы указывают на значимые различия (р<0,05).
На фиг. 9 представлен график, демонстрирующий иммунный ответ IgG на Salmonella после вакцинации цыплят с применением указанных составов вакцины-адъюванта, как было измерено посредством конкурентной ELISA. Различные буквы указывают на значимые различия (р<0,05).
На фиг. 10 представлен график, демонстрирующий иммунный ответ IgA на Salmonella после вакцинации цыплят с применением указанных составов вакцины-адъюванта, как было измерено посредством конкурентной ELISA. Различные буквы указывают на значимые различия (р<0,05).
На фиг. 11 представлен график, демонстрирующий иммунный ответ IgG на Bordetella avium после однократной парентеральной вакцинации индеек с применением указанных составов вакциныадъюванта. Различные буквы указывают на значимые различия (р<0,05).
На фиг. 12 представлен график, демонстрирующий иммунный ответ IgG на Bordetella avium после подкожной вакцинации посредством указанного состава вакцины-адъюванта вылупившихся индеек с последующим введением с питьевой водой той же комбинации вакцины-адъюванта на 14 сутки. Ответ измеряли на 21 сутки. Различные буквы указывают на значимые различия (р<0,05).
Подробное описание
В настоящем документе представлены адъюванты, которые включают хитозан, составы вакцины, содержащие адъюванты, способы создания адъювантов и способы применения адъювантов и составов вакцин. В сущности, в настоящем документе описана новая система адъювантов, которую можно использовать в подобных способах по отношению к другим адъювантам, таким как те, которые применяли для парентеральной (инъекции). Основная молекула включает хитозан, который является деацетилированной формой хитина, экзоскелета многих беспозвоночных животных (креветок, крабов, насекомых и т.д.). Хитозан считают общепризнанным в качестве безопасного (GRAS) соединения и применяют для потери массы, снижения холестерина, бессонницы и улучшения функции почек. Кроме того, хитозан применяют в качестве адъюванта, применяемого с различными мукозными вакцинами (Jabball-Gill et al., 2012), но хитозаны, описываемые в настоящем документе, являются новыми и функционируют лучше, чем традиционный хитозан, как продемонстрировано в примерах.
Хитозан-белок, поперечно-сшитый с применением формальдегида, и хитозан, сшитый с углеводом, представляют уникальный адъювант для пероральной или парентеральной доставки антигенов вакцины. Хитозан применяли в качестве носителя для пероральных и подкожных вакцин. В некоторых составах антиген ковалентно связан с хитозаном посредством обработки формальдегидом, в других систему адъюванта улучшают посредством добавления углевода (маннозы, фукозы и галактозы), связанного с хитозаном, обеспечивая таргетинг рецепторов маннозы на антиген-представляющих клетках, таким образом, усиливая иммунный ответ на хитозан-антигенный комплекс. Как хитозан-белок, поперечно-сшитый с применением формальдегида, так и маннозилированный хитозан-белковый комплекс дают надежный иммунный ответ посредством как парентерального, так и перорального (или других мукозных) путей доставки, что является уникальным для инактивированных вакцин.
В одном из аспектов, представлена композиция адъюванта, содержащая углевод, сшитый с хитозаном, для образования основания Шиффа. Этот адъювант можно комбинировать с антигеном. Углеводом может быть манноза, маннобиоза, глюкоза, галактоза или фруктоза. Можно использовать другие подходящие углеводы. Не ограничивая в теории, углевод добавляют к хитозану в целях таргетинга хитозана к рецепторам для этих углеводов на поверхности антиген-представляющих клеток.
Углевод-хитозан, применяемый в настоящем документе, создан как описано более подробно в примерах ниже. Наш способ основан на Jayasree (Jayasree et al., 2011) с применением углевода с открытым кольцом с доступной карбонильной группой, которая реагирует с аминогруппой на хитозане для образования основания Шиффа. Основание Шиффа можно стабилизировать посредством восстановления цианоборогидрида натрия (NaCNBH4). Авторы продемонстрировали, что восстановление не было необходимым для иммунопотенциирования на фиг. 6, на которой восстановленную (Man-C V1) сравнивали с невосстановленной формой (Man-C V2) хитозана. Невосстановленная форма производила лучший IgA ответ, таким образом, можно использовать любую форму. Кроме того, невосстановленная форма маннозилированного хитозана не требует добавления токсичного химиката (NaCNBH4). В кратком изложении, углевод, пригодно манноза (10 мкМ), растворяют в 0,1М ацетата натрия pH 4,0 при 60°C в течение 2 ч, и хитозан (0,2-2%) растворяют в 1,5% уксусной кислоте. Растворенную маннозу и растворенный хитозан затем комбинируют и инкубируют при комнатной температуре, чтобы позволить аминогруппе на хитозане реагировать с карбонилом на сахаре для образования основания Шиффа. Восстановление основания Шиффа не является необходимым для адъюванта, чтобы функционировать, и фактически примеры демонстрируют, что невосстановленное основание Шиффа является лучшим адъювантом (см. фиг. 6). В других вариантах осуществления основание Шиффа может быть
- 2 031234 других вариантах осуществления основание Шиффа может быть восстановленным.
В другом варианте осуществления хитозан и антиген могут быть поперечно-сшитыми с применением альдегида. В одном из аспектов композиция, содержащая от 0,5 до 2% хитозана, поперечно-сшитого альдегидом, и антиген. Конечный состав вакцины пригодно содержит от 0,5 до 1,5% хитозана. Адъювант может содержать от 0,5 до 3% хитозана, пригодно от 0,5 до 2% хитозана, пригодно от 0,5 до 1,5% хитозана, пригодно от 0,5 до 1,2% хитозана. Конечная концентрация альдегида в композиции вакцины пригодно менее чем 0,5%. Максимальная концентрация альдегида основана на максимальном уровне остаточного альдегида, допустимого в вакцинах. Более высокий уровень альдегида можно использовать для поперечного сшивания хитозана, но конечный состав вакцины пригодно содержит менее чем 0,5% альдегида. В примерах формальдегид применяли в качестве альдегида для поперечного сшивания хитозана.
Также можно использовать другие альдегиды, такие как формалин, глютаральдегид, ацетальдегид, пропиональдегид или бутиральдегид. Альдегиды поперечно сшивают аминогруппы хитозана с аминогруппами на других молекулах хитозана или на антигенах.
Также в настоящем документе представлены способы создания состава вакцины, содержащей хитозан, поперечно-сшитый альдегидом, и антиген. Способы включают растворение хитозана в растворе уксусной кислоты. В качестве хитозана по этому способу также можно использовать сшитый углеводом хитозан. Пригодно уксусную кислоту применяют при конечной концентрации в воде 1,5%, или 1,5 мл уксусной кислоты, растворенной в 1 л воды. Пригодно количество хитозана составляет от 0,5 до 2%, пригодно от 0,5 до 1,5%. К растворенному хитозану добавляют антиген на соответствующем уровне. Количество и форма антигенов, применяемых в составах вакцины, могут быть определены специалистами в данной области. В заключение, антиген и хитозан комбинируют с альдегидом таким образом, что конечная концентрация альдегида составляет от 0,02 до 0,5%. Альдегид способен химически перекрестно сшивать хитозан с другими молекулами хитозана и хитозан с антигеном. Трис-HCl можно добавлять, чтобы погасить свободные альдегиды. Трис можно добавлять до конечной концентрации 0,5 г/л.
Любую композицию адъюванта, описываемую в настоящем документе, можно комбинировать с усиливающими молекулами, включая в качестве неограничивающих примеров сапонин, толл-подобные рецепторы, субъединицу В бактериального токсина, бактериальные токсины, столбнячный токсин, CpG мотивы, липосомы или монофосфоридный липид А. Пригодные усиливающие молекулы действуют в качестве дополнительных стимуляторов иммунной системы и усиливают иммунный ответ, вызванный после введения состава вакцины индивидууму. Эти составы вакцин, представленные в настоящем документе, содержат адъюванты на основе хитозана, описываемые в настоящем документе, и антигены. Антигены могут быть любыми антигенами, доступными специалистам в данной области. Антигены, такие как белки, синтетические пептиды, пептиды, конъюгированные с носителями, или микробы можно использовать в вакцинах. Микробы включают бактерии, дрожжи, паразитов, грибы, вирусы, гельминтов или другие организмы, вызывающие заболевание. Микробы включают живые, мертвые, аттенуированные, рекомбинантные или инактивированные организмы. Примеры микробов в качестве неограничивающих примеров включают Salmonella, Escherichia, Shigella, Bordetella, Clostridium. Mycoplasma, Staphylococcus, Streptococcus, Bacillusr Influenza и Eimeria. Микробы могут быть инактивированными или убитыми перед применением лечения теплом, метанолом или другими фиксаторами, такими как формальдегид или другие альдегиды. Альдегиды могут быть погашены последующим добавлением Трис-HCl до конечной концентрации 0,5 г/л. Подходящие антигены также могут включать пептидные антигены, такие как Influenza M2e, гемагглютинин, нейраминидазу или ядерные белки; Eimeria TRAP или МРР; сиалидазу Clostridium, Sag А, α-токсин, NetB токсин или белок транспорта железа. Примеры других пептидных антигенов можно найти, по меньшей мере, в заявках US №№ 12/441855; 12/740631; 12/740608; 13/574504 и 13/702827, все из которых включены в настоящий документ полностью в качестве ссылки. Адъюванты на основе хитозана можно использовать для увеличения иммунного ответа на вакцины, уже доступные или недавно разработанные вакцины или аутогенные вакцины.
Существует два значительных улучшения вакцинации, связанные с этой работой. Первое, когда модифицированный хитозан вводят с инактивированной вакциной посредством парентерального пути введения, авторы видят иммунный ответ, который является превосходящим иммунный ответ, наблюдаемый при других адъювантах, таких как алюминиевые квасцы, с минимальной реакцией в месте инъекции. Многие адъюванты вызывают воспалительный ответ в месте инъекции или отложенную абсорбцию из места инъекции, или и то, и другое. Одной из обратных сторон традиционных адъювантов является то, что они часто вызывают некоторую реакцию, болезненность, и в некоторых случаях они вызывают стойкие поражения, которые вызывают понижение качества или выстрижку убойных животных при забое. Модифицированный хитозан может уменьшить эти основания для беспокойства, связанные с другими адъювантами вакцин. Его дешево производить и легко создавать в виде коммерческих вакцин. Кроме того, возникают надежные иммунные ответы, когда убитые антигены совместно присутствуют в пероральном виде либо посредством принудительного кормления или посредством включения в питьевую воду. Это действительно является важным для домашних животных, особенно птицы, поскольку обработка парентеральной инъекции является очень трудоемким и вызывает стресс у птиц или других животных. Применять инактивированные вакцины у птиц, за исключением инкубирования, как правило, явля
- 3 031234 ется слишком дорогостоящим ввиду затрат при введении. Способность доставить вакцину перорально меняет подход, с помощью которого мы способны вакцинировать животных. Существует два основных преимущества живых (называемых модифицированными живыми или аттенуированными вакцинами) для массового введения. Первое, можно в массовом порядке применять питьевую воду или спрей. Второе, эти живые вакцины также вырабатывают иммунитет в локальной слизистой оболочке (дыхательные пути и кишечный тракт, где инфицируется большинство патогенов). Как таковые, или убитые, или живые вакцины могут защитить от заболевания, но живые вакцины исторически являются более эффективными при предотвращении настоящей инфекции и, таким образом, являются предпочтительными.
Существует огромное преимущество убитых вакцин в том, что их можно получать быстро с очень низким риском вызвать инфекцию и заболевание, и они не могут генетически повернуть назад в вызывающий заболевание родительский тип, и по этим причинам они обладают гораздо меньшими регуляторными проблемами. Кроме того, существует большое и постоянно растущее число редких заболеваний, которые не являются достаточно распространенными для группы вакцин для развития нормированной/лицензированной вакцины, и в законе US (и многих других стран) существуют оговорки для получения аутогенных вакцин, специально созданных из патогена, представляющего интерес, убитых и применяемых на группах (или на животных или на человеческих популяциях). В развивающихся странах возникают редкие заболевания, которые требуют вакцин, которые не являются доступными или которые технически невозможно производить в данной местности или достаточно быстро, чтобы справиться со вспышкой заболевания. Адъюванты, представленные в настоящем документе, являются доступными и технологически открытыми для производства. Их можно легко комбинировать с убитым или инактивированным микробом для производства вакцины.
Некоторые потенциальные применения для технологии, описываемые в настоящем документе, являются доступными. Системный ответ на убитые вакцины можно улучшить посредством включения измененного хитозана в качестве адъюванта для инъекции. Авторы могут предотвратить некоторые заболевания посредством перорального введения убитых вакцин с применением этой адъювантной платформы. Эта адъювантная платформа, введенная перорально, может быть таргетирована для стимуляции системного и/или мукозного ответов - означая, что она обладает многими преимуществами живых вакцин, но лишена проблем живых вакцин, описанных выше.
Адъюванты и составы вакцин, описываемые в настоящем документе, могут быть скомбинированы с другими фармацевтически приемлемыми носителями. Фармацевтически приемлемым носителем является любой носитель, пригодный для введения in vivo. Примеры фармацевтически приемлемых носителей, пригодных для использования в композициях в качестве неограничивающих примеров, включают воду, буферные растворы, растворы глюкозы, жидкости на масляной основе или бактериальные культуральные жидкости. Дополнительные компоненты композиций могут пригодно включать, например, такие эксципиенты, как стабилизаторы, консерванты, разбавители, эмульгаторы и смазочные средства. Примеры фармацевтически приемлемых носителей или разбавителей включают стабилизаторы, такие как углеводы (например, сорбит, маннит, крахмал, сахароза, глюкоза, декстран), белки, такие как альбумин или казеин, белок-содержащие средства, такие как бычья сыворотка или снятое молоко и буферы (например, фосфатный буфер). Особенно, когда такие стабилизаторы добавляют к композиции, композиция является подходящей для лиофилизации или распылительной сушки. Композиция также может быть эмульсифицированной.
Композиции, описываемые в настоящем документе, также можно комбинировать с другими фармацевтическими композициями, и эти композиции можно вводить в любом порядке, в одно и то же время или в качестве части цельной композиции. Две композиции можно вводить таким образом, что одну вводят перед другой с разницей во времени введения в 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 12 ч, 16 ч, 20 ч, 1 сутки, 2 суток, 4 суток, 7 суток, 2 недели, 4 недели или более.
Эффективное количество или терапевтически эффективное количество составов вакцин, как применяют в настоящем документе, означает количество композиций, которое при введении индивидууму для повышения иммунного ответа индивидуума на таргетное заболевание способно увеличить иммунный ответ, такой как клеточно-опосредованный или антитело-опосредованный иммунный ответ для сокращения заболеваемости или смертности, связанных с инфекцией или проявлением таргетного заболевания. Иммунный ответ повышают до такого уровня, что введение является достаточным, чтобы сделать эффективным лечение или заблокировать заболевание, связанное с заболеваемостью или смертностью. Терапевтически эффективное количество будет варьировать в зависимости от вакцины, состава или композиции, заболевания и его тяжести, возраста, массы, физического состояния и чувствительности к лечению индивидуума. Например, уровень антитела, произведенный в ответ на вакцинацию, можно увеличить в два раза, три раза, четыре раза или более посредством включения адъюванта, описываемого в настоящем документе, по сравнению с введением того же антигена без адъюванта, или с алюминием в качестве адъюванта. Увеличенный иммунный ответ может быть IgA ответом или IgG ответом. Адъювант также может вести к снижению заболеваемости или смертности, связанных с последующей инфекцией. Как продемонстрировано в примерах, применение адъювантов, описываемых в настоящем документе, в комбинации с антигеном может привести к сокращению уровня последующей инфекции или тяжести
- 4 031234 последующей инфекции с применением микроба, на который антиген вызывает иммунный ответ, по сравнению с вакцинацией с применением антигена в отдельности или вакцинации с применением антигена и отдельно адъюванта. Тяжесть инфекции можно измерять способностью микроорганизма внедряться в ткани за пределами места введения, размножаться и/или персистировать внутри организма в течение длительного времени или вызывать заболеваемость или смертность. Вакцинированные животные могут быть затем инфицированы посредством патогена. В таких случаях рост патогена в индивидууме после стимуляции антигеном уменьшается, по меньшей мере, 1 log10, 2 log10 или даже 3 log10 в индивидуумах, которым ввели вакцину, по сравнению с индивидуумами, которым ввели контроль.
Композиции, описываемые в настоящем документе, можно вводить посредством любых способов, известных специалистам в данной области, включая в качестве неограничивающих примеров пероральный, интраназальный, интраперитонеальный, парентеральный, внутривенный, внутримышечный, подкожный, назофарингеальный или трансмукозальное всасывание. Таким образом, соединения можно формулировать в качестве принимаемого внутрь, распыляемого или инъецируемого состава. Например, пероральное введение может повлечь добавление в питьевую воду, распыление на пищу, распыление на животных (таких как курицы или индейки, которые проглотят эту вакцину в виде спрея, когда будут чистить свои перья). Индивидуумы могут быть млекопитающими, включая людей, коров, свиней, кошек, собак или других домашних животных, или не млекопитающих, таких как птица, т.е. курицы или индейки.
Следует понимать, что специфическая дозировка введения и режим введения (т.е. первичная вакцинация и стимуляция) в любом данном случае будет приспособлена к вводимому составу, заболеванию, против которого направлено лечение, риску воздействия инфекции, состоянию индивидуума и другим соответствующим медицинским факторам, которые могут модифицировать ответ индивидуума или целесообразность применения состава индивидуумом. Например, специфическая дозировка для индивидуума зависит от типа индивидуума, возраста, массы тела, общего состояния здоровья, диеты, распорядка и способа введения, уровня выведения, лекарственных средств, применяемых в комбинации, и тяжести конкретного нарушения, на которое направлена вакцина. Начальную вакцинацию и бустер-дозу можно вводить различными способами. Например, начальная вакцинация посредством подкожного пути введения может быть осуществлена посредством включения комплекса адъювант-антиген в питьевую воду или пищу. Процент хитозана в составах вакцины, как правило, составляет от 0,2 до 2%, пригодно 0,5-1,5%. Общее количество вводимого хитозана может составлять от менее чем 1 на вакцинацию до 100 мг, пригодно 2, 4, 5, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 50, 75 или 100 мг хитозана. В примерах применяли 2-5 мг хитозана на дозу. При комбинировании с микробным антигеном может быть включено от 1х106 до 1х 109 микробов на дозу. В примерах применяли от 1х 107 до 1х 108 микробов на дозу. Антиген может быть включен в количестве от 10 мкг до 10 мг на дозу. В примерах применяли 100 мкг на дозу.
Следующие примеры призваны быть иллюстрирующими и не ограничивающими объем изобретения или приложенные формулы изобретения. Все цитируемые в настоящем документе ссылки включены в качестве ссылки полностью.
Примеры
Пример I. Иммунный ответ на β-галактозидазу после первичной вакцинации и введения бустердозы.
В нашем первом эксперименте для тестирования хитозан-белка, поперечно-сшитого с формальдегидной вакциной в качестве модельного белка применяли классический белок β-галактозидазу (β-Gal). Индюшат вакцинировали посредством β-Gal, как описано в таблице ниже, с шестью лечебными группами и одним контролем. Индюшат вакцинировали с применением физиологического раствора или β-Gal 100 мкг (0,25 мл) тоже в физиологическом растворе, 15% алюминиевых квасцов, 1% хитозана, поперечно-сшитого (3 группы) с применением формальдегида (форм), или 1,5% хитозана, не поперечно-сшитого с применением формальдегида, посредством парентеральной подкожной (sq) инъекции в день вылупления. Всем группам вводили бустер-дозу с применением той же формулы sq на 14 и 25 сутки, за исключением двух групп 1% хитозана, одной бустер-дозы оба дня с применением 1% хитозан-β-Gal посредством перорального принудительного кормления и одной бустер-дозы посредством спрея с 1% хитозаном-βGal (2 мл).
Иммунный ответ на β-галактозидазу определяли с применением сыворотки в ELISA для βгалактозидазы, и результаты представлены на фиг. 1. Об уровнях иммунного ответа сообщали в качестве образца к положительным контрольным соотношениям оптической плотности в непрямой ELISA. Более высокие соотношения S/P указывают на более высокие титры антител к β-галактозидазе. Существовала очень небольшая перекрестная реактивность в ELISA с применением сыворотки из индеек, вакцинированных с применением физиологического раствора, и только умеренного количественного повышения при вакцинации посредством β-Gal в физиологическом растворе.
Общераспространенный коммерческий адъювант, применяемый в настоящее время, является 15% алюминиевыми квасцами, и при их применении наблюдался хороший иммунный ответ. Применяя нашу иммуностимулированную хитозаном и поперечно-сшитую формальдегидом вакцинную систему (поме
- 5 031234 ченную как 1% хитозан), наблюдали значительное повышение иммунного ответа на модельный антиген, β-Gal. С применением хитозана в отдельности даже при более высокой концентрации в 1,5% наблюдали значительно более низкий иммунный ответ. Кроме того, когда антиген был введен в составе бустер-дозы с адъювантом, обработанным 1% хитозан-формальдегидом, посредством спрея или перорально, наблюдали ответ, сравнимый со стандартным адъювантом, 15% алюминиевыми квасцами, введенными подкожно.
Лечебные группы
Группа Иммуноген Первичный день вылупления (100 мкг/ 0,25 мл) Вторичная иммунизация на 14 день после вылупления
Физиологический раствор Нет SQ SQ (100 мкг/0,5 мл)
3G в β- SQ SQ (100 мкг/0,5
физиологическом растворе галактозидаза мл)
15% алюминиевые β- SQ SQ (100 мкг/0,5
квасцы галактозидаза мл)
1% хитозан βгалактозидаза SQ SQ (100 мкг/0,5 мл)
1,5% хитозан β- SQ SQ (100 мкг/0,5
без Форм галактозидаза мл)
1% хитозан 2й β- SQ Пероральное
пероральный галактозидаза принудительное кормление (100 мкг/0,5 мл)
1% хитозан 2й β- SQ Спрей (100
спрей галактозидаза мкг/мл) Атомизированный спрей 50 мл на 20 птиц в комнате 20 кв.фут
Пример II. Иммунный ответ на Clostridium после вакцинации с различными адъювантами.
Эксперимент, подобный тому, который описан выше, проводили посредством введения 4х108 КОЕ/мл Clostridium septicum бактерина (CS) в любом поперечно-сшитом с применением алюминиевых квасцов или фармалина хитозане, таким образом, что конечная доза на птицу составляет 1х108 КОЕ/птицу на индюшат в день вылупления подкожно (в 0,25 мл) или в отдельности или в комбинации с 12% алюминиевых квасцов или 0,5% поперечно-сшитого формалином хитозана. Всем птицам была введена бустер-доза на 14 сутки той же вакциной тем же путем. Уровни окончательного иммунного ответа измеряли посредством непрямого анализа ELISA и сообщали в виде соотношений оптической плотности положительного контроля (S/P). Более высокие соотношения S/P являются показателем более высоких антител к CS.
У птиц, получавших вакцину без адъюванта, результатом стал детектируемый ELISA ответ антител с соотношением S/P 0,16, как показано на фиг. 2. Этот уровень антител не отличался статистически от уровня CS, с добавлением адъюванта на основе алюминиевых квасцов. После введения одной бустердозы (через 14 суток после первичной вакцинации) индюшек вакцинировали посредством CS бактерина с добавлением адъюванта с 0,5% поперечно-сшитого формалином хитозана, и они продемонстрировали уровни IgG, которые дали в результате соотношения S/P, приблизительно удвоенные по сравнению с CS бактерином без адъюванта, 0,4 и 0,16 соответственно. CS бактерии с адъювантом на основе гидроксида алюминия индуцировал уровни IgG, которые были приблизительно на 30% ниже, чем уровни IgG, инду
- 6 031234 цированные посредством CS с применением хитозана по сравнению с соотношениями S/P, 0,27 и 0,4 соответственно (см. фиг. 2). Важно, что повреждения в месте инъекции являются менее выраженными на 72 ч (или позже) благодаря введению хитозана, тогда как алюминиевые квасцы всегда производили местное воспаление и гранулемы, часто приводящие к инкапсулированной рубцовой ткани.
Пример III. Эксперименты по вакцинации от птичьего гриппа.
Птичий грипп (AI) является значительной проблемой общественного здравоохранения и серьезной экономической угрозой для коммерческого птицеводства во всем мире. Наши предыдущие данные позволяют предположить, что Salmonella-векторные вакцины, экспрессирующие М2е совместно с CD154, являются эффективными против AI. Были протестированы новые конструкты, применяющие Bacillus subtilis в качестве вектора и эпитопы М2е с иммуностимулирующими молекулами. Уровни М2е специфической сыворотки IgG и мукозального антитела IgA определяли посредством ELISA на 11, 15 и 21 сутки после вылупления. В день вылупления индюшат вакцинировали либо посредством перорального принудительного кормления, либо посредством подкожной инъекции с применением либо Bacillus дикого типа (BSBB), либо Bacillus векторной вакцины от птичьего гриппа (BSAI) в качестве живой вакцины, BSAI после инактивации формалином, BSAI после инактивации формалином, лиофилизации и реконструкции с применением физиологического раствора или BSAI после инактивации формалином и поперечно-сшитый с 1% хитозана. Каждую вакцину вводили в концентрации 106 КОЕ/цыпленка в 0,25 мл или 0,25 мл физиологического раствора. На 10 сутки только что вылупившимся цыплятам в двух группах (BSAI живые, BSAI инактивированные и лиофилизированные) вводили бустер-дозу того же препарата, который они получали на 0 сутки, и все другие группы не получали 2-ю дозу вакцины.
Образцы сыворотки IgG и мукозального IgA от птиц во всех группах на 11, 15 и 21 сутки получали после вылупления и применяли ELISA захват антител. Планшеты покрывали М2е конъюгированным с BSA (10 мкг/мл), блокировали, инкубировали с сывороткой от каждой лечебной группы, растворенной в концентрации 1:50 в 2% FBS/PBS, с последующей инкубацией с HRP-конъюгированным вторичным антителом, растворенным в концентрации 1:7500, и развивали с применением ТМВ субстрата. Результаты представлены как средние соотношения S/P (средний образец - средний отрицательный контроль)/(средний положительный контроль - средний отрицательный контроль) ± SEM (n-20).
При сравнении с Bacillus backbone control (BSBB) наблюдали значительные повышения М2е специфических ответов антител IgG в каждой вакцинированной группе в каждый тестируемый момент времени. Однако не наблюдали никаких различий между различными моментами времени между какими-либо шестью вакцинированными группами в увеличенном ответе IgG антител (см. фиг. 3A). Реальная разница в иммунном ответе является очевидной, когда смотришь на специфический ответ IgA антитела (см. фиг. 3B). BSAI+1% хитозана продемонстрировал заметное повышение в специфическом ответе IgA при сравнении с контролем или дополнительными пятью лечебными группами, получившими вакцинацию во все три протестированные момента времени.
Суммируя сказанное, в экспериментах с применением поперечно-сшитого хитозана авторы продемонстрировали, что эта модификация хитозана является лучшим адъювантом, чем гидроксид алюминия, введенный как парентеральным, так и пероральным способами (фиг. 1 и 2). Было продемонстрировано, что хитозан, обработанный формальдегидом в качестве кросс-линкера, был более эффективным, чем хитозан без формальдегида. (фиг. 1). При пероральном применении хитозан повышал продукцию IgA (фиг. 3B) предпочтительно над IgG (фиг. 3A).
Пример IV. Усиление адъюванта на основе хитозана.
В дальнейшем адъювант усиливали посредством серии экспериментов, спланированных, чтобы улучшить адъювант на основе хитозана посредством добавления усиливающих молекул или альтернативных стратегий доставки. Иммуностимулирующие соединения могут потенциально улучшить ответы при применении с адъювантами, и ранее некоторые из них уже были исследованы; см. обзоры (Guy, 2007; Mutwiri et al., 2011). Потенциальные адъюванты включают сапонины, бактериальные компоненты, соединения, которые взаимодействуют с врожденными иммунными системами, такими как толлподобные рецепторы, нуклеиновые кислоты, такие как CpG мотив, вирусы, эмульсии, включая липосомы, или комбинацию любых этих компонентов. Некоторые из более многообещающих иммуностимулирующих молекул, которые взаимодействуют с врожденной иммунной системой, являются столбнячным токсином (ТТ), В субъединицей термолабильного энтеротоксина (LTB), и В субъединицей холерного токсина (СТВ). Другие соединения, которые, как было показано, усиливали иммунную систему, эмпирически через присущие химические свойства включают сапонин и монофосфорил липид A (MPLA). Иммунную функцию можно усилить с применением маннозы или других сахаров для таргетинга связи с рецепторами макрофага.
Комбинации различных адъювантов могут действовать синергетически, как, например, с IL-12 или другими цитокинами для стимуляции иммунного ответа.
Первый эксперимент для улучшения адъюванта по сравнению с адъювантом на основе хитозана поперечно-сшитого формальдегидом, который состоит из интересующего антигена, поперечно-сшитого 0,5% хитозаном с применением формальдегида для получения данных, представленных выше на фиг. 1-
3. Эту адъювантную систему затем применяли в качестве контроля или исходного уровня для отбора
- 7 031234 лучших комбинаций выбранных иммунных усиливающих молекул. Тестовым иммуногеном был Salmonella enteritidis (SE) бактерии, выросший до 108 КОЕ/мл и инактивированный формальдегидом. Для определения того, может ли адъювант на основе поперечно-сшитого хитозана быть улучшен в дальнейшем, тестовый иммуноген (Salmonella бактерии с хитозаном составлял 4х107 КОЕ/мл с конечной дозой 1х107 КОЕ на птицу) смешивали в соотношении 2:1 с поперечно-сшитым хитозаном в отдельности с усиленным с применением столбнячного токсина (XT), В субъединицы термолабильного энтеротоксина (LIB) или маннозилированного хитозана и введенного либо в питьевую воду, либо в пищу. Результаты представлены на фиг. 4.
ТТ может быть потенциальной иммунной усиливающей молекулой, и ее применяли экстенсивно в развитии вакцин. Было показано, что термолабильный энтеротаксин из Е. Coli является мощной иммуностимулирующей молекулой, но является очень токсичным и, таким образом, не годным в качестве адъюванта. Термолабильный энтеротоксин состоит из двух субъединиц, центрального ядра LTA и пяти субъединиц LTB (da Hora et al., 2011). Субъединица LIB сохраняет иммунные свойства адъюванта и все же является нетоксичной. Таким образом, она является безопасным потенциальным компонентом адъюванта. Манноза и некоторые другие углеводы (такие как галактоза и фукоза) являются лигандами для рецепторов, которые активируют макрофаги. Маннозилированный хитозан получали посредством способа, сходного с описанным ранее Yalpani и Hall (1980 и 1985) и Jayasree et al. (2011) без добавления цинка. В кратком изложении два молярных эквивалента маннозы в одном объеме 0,1М ацетата натрия нагревали при 60°C в течение 2 ч. К раствору затем добавляли два объема одного молярного эквивалента 2% хитозана в 0,15% уксусной кислоты и оставляли для реакции в течение 10 мин при комнатной температуре для получения 1,5% маннозилированного хитозана. Затем к 1,5% маннозилированному хитозану добавляли SE бактерии в соотношении два к одному. Образовавшиеся основания Шиффа затем убирали посредством натрий цианборогидрата (NaCNBH4).
Вдобавок к иммунопотенциирующим молекулам были также исследованы различные системы доставки, как указано выше. Типичная система доставки питьевой воды, применяемая в промышленном птицеводстве, растворяет лекарственное средство или химическую 1 часть к 128 частям воды. Оригинальную рецептуру хитозана, применяемую на фиг. 1-3, разбавляли 1:128 в питьевой воде в качестве потенциальной системы доставки. Последняя тестовая группа была 0,5% хитозаном, поперечно-сшитым с формальдегидом с применением SE бактерина (оригинальная рецептура с хитозаном), инкапсулированная посредством добавления по каплям к триполифосфату (ТРР), затем осушали и размалывали в порошок для добавления к еде на уровне 0,5% (wt/wt).
Бройлерным цыплятам в день вылупления давали 0,25 мл указанных препаратов подкожно, как обозначено выше. Эти группы кормили так же, как и группу, получавшую только хитозан. Цыплятам была введена бустер-доза посредством перорального принудительного кормления на 12 сутки от рождения за исключением питьевой воды и ТРР групп, которым была введена бустер-доза в воде в соотношении 1:128 или в пище в концентрации 0,5% (wt/wt) в течение 8 ч соответственно. Уровни антител на 22 сутки в сыворотке (IgG) и илеальный мукозальный (IgA) определяли с применением конкурентного набора ELISA (IDEXX). Сниженные уровни оптической плотности или образец для контрольных соотношений указывают на более высокие уровни антител, которые распознают планшеты, покрытые SE флагеллином.
Как отмечено на фиг. 1 и 2 выше, адъювант хитозана превосходил алюминиевые квасцы при получении надежного иммунного ответа. В настоящем документе каждый из адъювантов на основе хитозана был способен получать надежный ответ на SE бактерии со значительно более высокими уровнями IgG и IgA по сравнению с хитозаном в отдельности, введенным подкожно (фиг. 4 и 5 соответственно). Группы ТТ и сухого порошка ТРР имели значительно более высокий иммунный ответ, чем sq, получавшие sq бустер-дозу с адъювантом на основе хитозана (фиг. 4 и 5). Остальные три группы, хитозан с LTB, маннозилированный хитозан и бустер-доза на основе хитозана, в питьевой воде были постоянно выше при получении антител по сравнению с хитозаном в отдельности, введенным подкожно (фиг. 4 и 5).
В последующем ряде экспериментов три лучшие группы из предыдущих экспериментов (LTB, бустер-доза на основе хитозана в DW и восстановленный маннозилированный хитозан) повторили наряду с отрицательным контролем (физиологический раствор) и эталонным контролем 0,5% хитозана поперечносшитого формальдегидом, введенного sq для первичной вакцинации и бустер-дозы, что, как ранее было показано, превосходило алюминиевые квасцы. В этом эксперименте авторы добавили три новые лечебные группы с применением эталонного контроля 0,5% хитозана поперечно-сшитого формальдегидом иммунопотенциированного В субъединицей холерного токсина (СТВ), липида А из Salmonella (MPLA) или сапонином. Также в этом эксперименте добавили другую лечебную группу, которая была подобной лечебной группе, получавшей маннозилированный хитозан, который, как было показано, являлся превосходным адъювантом в предыдущем эксперименте (маннозилированный хитозан версия 1, Man-C V1), но эта группа не была уменьшена с применением NaCNBH4 (Man-C V2).
В конкурентном ELISA с SE флагеллином было опять продемонстрировано, что птицы, вакцинированные подкожно с применением 0,5% хитозана (С) как для первичной вакцинации, так и для бустердозы, имели более высокие уровни иммуноглобулина в сыворотке (фиг. 6А). Птицы, вакцинированные
- 8 031234
0,5% хитозана с СТВ (С + СТВ), Man-C V2 и хитозана с сапонином (С + сапонин) демонстрировали лучший ответ IgG (фиг. 6А). Man-C V2 демонстрировали количественно лучший ответ IgA (фиг. 6В). Все три эти лечебные группы значительно отличались от эталонной группы (0,5% хитозана, инъецированного подкожно как для первичной вакцинации, так и для бустер-дозы) (фиг. 6).
Кроме того, птицам вводили антиген на 19 сутки с применением живой Salmonella в концентрации 5х107 КОЕ/цыпленок. Через три дня после введения антигена птиц культивировали для Salmonella в скоплениях лимфоидной ткани в кишечнике (СТ) и печени/селезенке (L/S). Хитозан с СТВ, обе версии маннозилированного хитозана, хитозан в питьевой воде с бустер-дозой и хитозан плюс сапонин, значительно снижали Salmonella до уровней ниже детектируемых в печени/селезенке (L/S) при сравнении с отрицательным (вакцинацией физиологическим раствором) контролем (фиг. 7; р <0,05). В кишечнике (СТ) уровни Salmonella были значительно снижены с применением одной из двух версий маннозилированного хитозана и в группе с бустер-дозой с 0,5% хитозана, разведенного 1:128 в питьевой воде. Значительное снижение в группах, получавших маннозилированный хитозан, указывает на то, что прямой таргетинг макрофага с лигандом для рецептора маннозы увеличивает эффективность адъюванта на основе хитозана. Кроме того, очень важным является то, что неуменыпенный состав основания Шиффа маннозилированного хитозана был лишь так же эффективен, как NaCNBH4; восстановленный маннозилированный хитозан, который не обладал дополнением потенциально вредного химиката. Другим важным сюрпризом было то, что 0,5% хитозан, растворенный в питьевой воде в соотношении 1:128, который применяли для бустер-инъекции, демонстрировал лучшие результаты при уменьшении колонизации Salmonella по сравнению с только парентеральной вакцинацией (фиг. 7).
Пример V. Путь введения при вакцинации.
Были исследованы лучший путь введения и комбинация адъюванта для вакцинации. Только что вылупившимся цыплятам вводили 0,25 мл или физиологического раствора, или вакцины с соответствующей смесью адъюванта, как указано на фиг. 8. Сравниваемые адъюванты включают хитозан поперечно-сшитый формальдегидом, восстановленный маннозилированный хитозан (Man С V1), невосстановленный маннозилированный хитозан (Man С V2), каждый адъювант объединяли с антигеном и вводили при вылуплении или подкожно, или с питьевой водой. Птицы получали бустер-инъекцию с вторым введением той же комбинации адъюванта-антигена или подкожно, или с питьевой водой, или посредством перорального принудительного кормления. Группы, которые вакцинировали посредством питьевой воды (DW), растворяли 1:128 в воде. Этим получившим бустер-дозу посредством перорального принудительного кормления давали 0,25 мл. Мукозальный IgA ответ измеряли посредством конкурентного анализа ELISA с SE флагеллином (IDEXX), как описано выше. Хотя последние пять лечебных групп на фиг. 8 значимо не отличались, численно самая нижняя группа была маннозилированным хитозаном V2, доставленным sq во время первичной вакцинации и 1:128 разведения в DW для бустер-инъекции. Эта группа обладала значительно более высокими уровнями IgA в подвздошной кишке по сравнению с 0,5% хитозана посредством sq первичной вакцинацией и/или sq, или DW бустер-инъекции. Никаких значимых отличий не наблюдали между восстановленными и невосстановленными формами маннозилированного хитозана или когда давали бустер-дозу через питьевую воду или посредством перорального принудительного кормления.
Пример VI. Сравнение с адъювантом на основе минерального масла.
Маннозилированный хитозан затем сравнивали и комбинировали с коммерчески доступным адъювантом на основе минерального масла. Salmonella enteritidis (SE) бактерии, выросшие до 108 КОЕ/мл и инактивированные посредством формальдегида применяли в качестве антигена. Salmonella бактерии смешивали с хитозаном, маннозилированным хитозаном, адъювантом на основе минерального масла, комбинации хитозана и адъюванта на основе минерального масла или PBS на уровне 4х107 КОЕ/мл с конечной дозой 1 х 107 КОЕ на птицу в соотношении 2:1. Только что вылупившиеся бройлерные цыплята получали 0,25 мл указанных препаратов подкожно, как было обозначено выше. Цыплятам давали бустердозу посредством перорального принудительного кормления в возрасте 12 суток. Уровни антител на 22 сутки в сыворотке (IgG) и илеальном мукозальном (IgA) определяли посредством набора ELISA (IDEXX), результаты представлены на фиг. 9 и 10 соответственно.
Сниженные уровни оптической плотности образца контрольных соотношений указывают на более высокие уровни антител, которые распознают плашки, покрытые SE флагеллином. Вакцинация маннозилированным хитозаном и протокол введения бустер-дозы производили значительные увеличения уровней IgG и IgA по сравнению с каждой из других групп.
Пример VII. IgG ответ после однократного введения.
Для исследования IgG иммунного ответа после однократной парентеральной вакцинации только что вылупившихся цыплят вакцинировали подкожно посредством 2,5х108 КОЕ/птенец Bordetella avium бактерином, комбинированным с физиологическим раствором, нормальным хитозаном или маннозилированным хитозаном. Сыворотку собирали на 14 сутки и Bordetella специфический IgG измеряли посредством ELISA. Результаты представлены на фиг. 11 и демонстрируют образец положительных контрольных соотношений оптической плотности для указанных видов лечения. Более высокие уровни оп
- 9 031234 тической плотности являются показателем увеличенного специфического IgG. Маннозилированный хитозан, комбинированный с антигеном Bordetella, произвел самый высокий уровень IgG.
Пример VIII. IgG ответ после введения бустер-дозы в питьевой воде.
Для исследования иммунного ответа IgG после введения Bordetella avium бактерина подкожно с последующей бустер-дозой в питьевой воде на 14 сутки только что вылупившихся цыплят вакцинировали подкожно 2,5х108 КОЕ/птенец Bordetella avium бактерина в комбинации с физиологическим раствором, нормальным хитозаном или маннозилированным хитозаном. На 14 сутки 7,8х106 КОЕ/мл Bordetella avium бактерии включали в питьевую воду в качестве бустер-дозы для вакцинации. На 21 сутки в течение 7 суток собирали сыворотку после введения бустер-дозы и специфический ответ IgG измеряли посредством ELISA. Результаты показаны на фиг. 12 и представляют образец соотношений положительного контроля оптической плотности для указанных лечений. Более высокие уровни оптической плотности являются показателем повышенного специфического IgG. Маннозилированный хитозан, комбинированный с антигеном Bordetella, произвел заметно более высокие уровни IgG по сравнению с контролем или не модифицированным хитозаном.
Способы получения адъюванта
Получение белка хитозана поперечно-сшитого с формальдегидной вакциной.
Конечный продукт хитозана без маннозы может варьировать от минимальной конечной концентрации 0,5% хитозана до максимальной конечной концентрации 2% хитозана в составе вакцины. Хитозан растворяют в растворе, содержащем 15 мл ледяной уксусной кислоты на 1 л деионизированной воды в соответствующей концентрации (1,5% уксусной кислоты в воде). Как типично для бульонных культур, 2 объема культуры смешивают с одним объемом 1,5% хитозана (0,5% хитозана в конечном составе вакцины). Другие антигены разбавляют в настолько минимальном количестве, как это возможно, в конечной концентрации до 1,5% хитозана. К смеси хитозана, растворенного с антигеном, добавляют формальдегид таким образом, чтобы конечная концентрация составляла 0,2% формальдегида или 0,008 М формальдегида. В примерах выше применяют 37% раствор формальдегида. К конечной концентрации 0,5 г/л добавляют трис-HCl.
Получение маннозилированного хитозана.
Два молярных эквивалента маннозы в одном объеме 0,1М ацетата натрия, pH 4,0 нагревали при 60°C в течение 2 ч. Раствор затем добавляли к двум объемам одного молярного эквивалента 2% хитозана в 0,15% уксусной кислоты и оставляли реагировать в течение 10 мин при комнатной температуре для получения 1,5% раствора манозилированного хитозана. Его затем можно смешать с бульонными культурами таким образом, что 2 объема культуры смешивают с одним объемом 1,5% маннозилированного хитозана. Концентрированные антигены можно растворять как можно в более минимальном количестве, как возможно или как желательно. Трис-HCl можно добавлять до конечной концентрации 0,5 г/л.

Claims (16)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1.25
Фиг. 10
Уровни IgG против Bordetella avium (соотношение S/P)
Фиг. 11
.1!) · i
Оп>ац»- Хитозан тельный ~ контроль c + ITS c +
CTB
C*
MFLA
Фиг. 6В
Иап-С Мап-С
V1 V2
С in С*
DW сапонин
1:
АВ
О
НН ζ/2
О
S
О а о н о о о
ВС
ВС о H s ce
H о
CO
H О
Отрицательный контроль
Хитозан «С
C+
LTB со
C + CTB c+ mpla
Мз»«С МагьС
V1 V2
Ci» DW c+ сапонин
Фиг. 6А .16
Конкурентный ELISA для идеального slgA день 22 после 1й вакцинации
AB
T
ВС
BCD
BCD
ВС
SC
CD
п о С/9 н ω S S н Щ к ω се з S о к щ и н о о Q- о >> Q
1. Состав вакцины для введения в пищу или питьевую воду, содержащий адъювантную композицию, включающую хитозан, связанный с углеводом путем образования основания Шиффа, и по меньшей мере один антиген, где углевод является маннозой с открытым кольцом.
2. Вакцина по п.1, где основание Шиффа не восстановлено.
3. Вакцина по п.1, где основание Шиффа восстановлено.
4. Вакцина по п.1, где антиген(ы) содержится(атся) в микробе.
5. Вакцина по п.4, где микробом является Salmonella, Escherichia, Shigella, Bordetella, Clostridium, Mycoplasma, Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus, Influenza или Eimeria.
6. Вакцина по п.4 или 5, где микроб является инактивированным или убитым.
7. Вакцина по п.6, где микроб убит с применением формальдегида, глутаральдегида или формалина.
8. Способ усиления иммунного ответа индивидуума на антиген, включающий введение состава вакцины по любому из пп.1-7 индивидууму в количестве, эффективном для усиления иммунного ответа на антиген.
9. Способ по п.8, где иммунный ответ включает усиленный ответ антител по сравнению с введением вакцины без адъюванта.
- 10 031234
УрОВНИ антител Анти- β -галактозидаза (соотношение S/P)
Фиг. 1
Уровни антител против C.Septicum (CS) после одной бустер-дозы
050--------------------------------------------------------а
CS без адъюванта CS w/12% CS w/0,5% хитозан алюминиевые квасцы
Фиг. 2
10. Способ по п.9, где усиленный ответ антигена является усиленным ответом секреторного антитела IgA по сравнению с введением вакцины без адъюванта.
- 11 031234
Фиг. 3A
Фиг. 3B
11. Способ по любому из пп.8-10, где индивидуум представляет собой млекопитающее или птицу.
- 12 031234
Фиг. 5
- 13 031234
В
Конкурентный ELISA для IgG сыворотки день 22 после 1й вакцинации
- 14 031234
Уровень антител IgA Процент восстановления Salmonella
Отрица- Хитозан С + С + С + тельный яС LTg ств MptA контроль
* * * * Мап«С Мап>С С in V1 V2 DW
с+ сапонин
Фиг. 7
Маннозилированный хитозан 1 -О SQ первичная доза/принудительное кормление бустер-доза
Хитозан SQ первичная доза/DW бустер-доза
Хитозан DW первичная доза/DW бустер-доза
Маннозилированный хитозан DW первичная доза/DW бустер-доза
Маннозилированный хитозан 2.0 SQ первичная доза/принудительное кормление бустер-доза
Маннозилированный хитозан 2 0SQ первичная доза/DW бустер-доза
Отрица- Хитозан SQ тельный первичная контроль доза/SQ бустер-доза
Фиг. 8
Фиг. 9
- 15 031234
- 16 031234
Фиг. 12
EA201590829A 2012-10-29 2013-10-29 Вакцина с адъювантом на основе маннозилированного хитозана EA031234B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261719713P 2012-10-29 2012-10-29
PCT/US2013/067212 WO2014070709A1 (en) 2012-10-29 2013-10-29 Novel mucosal adjuvants and delivery systems

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201590829A1 EA201590829A1 (ru) 2015-08-31
EA031234B1 true EA031234B1 (ru) 2018-12-28

Family

ID=50627985

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201590829A EA031234B1 (ru) 2012-10-29 2013-10-29 Вакцина с адъювантом на основе маннозилированного хитозана
EA201891124A EA039237B1 (ru) 2012-10-29 2013-10-29 Применение маннозилированного хитозана в качестве адъюванта в составе вакцин для пероральной или мукозной доставки

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201891124A EA039237B1 (ru) 2012-10-29 2013-10-29 Применение маннозилированного хитозана в качестве адъюванта в составе вакцин для пероральной или мукозной доставки

Country Status (23)

Country Link
US (4) US20150297714A1 (ru)
EP (1) EP2911676B1 (ru)
JP (1) JP6284537B2 (ru)
KR (1) KR102144602B1 (ru)
CN (2) CN104884069B (ru)
AU (2) AU2013338153B2 (ru)
BR (1) BR112015009541B1 (ru)
CA (1) CA2889841C (ru)
CL (1) CL2015001111A1 (ru)
DK (1) DK2911676T3 (ru)
EA (2) EA031234B1 (ru)
ES (1) ES2809220T3 (ru)
HK (1) HK1214507A1 (ru)
HU (1) HUE049965T2 (ru)
MX (1) MX2015005444A (ru)
MY (2) MY190866A (ru)
NZ (1) NZ708065A (ru)
PH (2) PH12015500956A1 (ru)
PL (1) PL2911676T3 (ru)
PT (1) PT2911676T (ru)
SG (1) SG11201503319UA (ru)
WO (1) WO2014070709A1 (ru)
ZA (1) ZA201503004B (ru)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL2214701T3 (pl) * 2007-11-01 2017-01-31 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Kompozycje i sposoby wzmacniania odpowiedzi odpornościowych na Eimeria
NZ708065A (en) * 2012-10-29 2019-07-26 Univ Arkansas Novel mucosal adjuvants and delivery systems
NZ711019A (en) 2013-02-14 2019-07-26 Univ Arkansas Compositions and methods of enhancing immune responses to eimeria or limiting eimeria infection
EP2968423A4 (en) 2013-03-15 2016-11-09 Univ Arkansas COMPOSITIONS AND METHODS FOR INCREASING IMMUNE REACTIONS AGAINST ENTERAL PATHOGENES
CN106659799B (zh) * 2014-07-25 2020-07-17 碧奥辛斯有限责任公司 用于制备针对因肠致病性细菌引起的感染的广谱疫苗的包含表达内置的多个表位的分子构建体的基本单元的糖缀合物疫苗
GB201522541D0 (en) * 2015-12-21 2016-02-03 Inst Research In Biomedicine Compositions
BR112018072592A2 (pt) 2016-05-03 2019-04-16 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas vetor de vacina de levedura que inclui polipeptídeos imunoestimulantes e antigênicos, e métodos de uso dos mesmos
WO2018225662A1 (ja) * 2017-06-07 2018-12-13 出光興産株式会社 自然免疫増強剤
CN111603566A (zh) * 2019-02-25 2020-09-01 河南农业大学 一种靶向呼吸道黏膜的递呈载体复合物及应用
WO2022256740A1 (en) 2021-06-04 2022-12-08 Curia Ip Holdings, Llc Polymeric fusion proteins and compositions for inducing an immune response against infection
CN114134167A (zh) * 2021-11-30 2022-03-04 山东邦盛达生物科技有限公司 具有粘膜免疫调节作用的重组枯草芽孢杆菌的制备方法及重组枯草芽孢杆菌和应用
CN114288401B (zh) * 2021-12-31 2023-10-03 四川农业大学 抗原蛋白的应用、引物组以及试剂盒
WO2023183080A1 (en) * 2022-03-21 2023-09-28 University Of Southern California Triple vaccine protects against bacterial and fungal pathogens via trained immunity

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5747475A (en) * 1995-04-04 1998-05-05 Wound Healing Of Oklahoma Chitosan-derived biomaterials
WO2010067318A1 (en) * 2008-12-10 2010-06-17 Medipol Sa Compound, medicament, vaccine composition and nanocapsules
US20100316715A1 (en) * 2007-10-30 2010-12-16 Mats Andersson Chitosan composition
WO2011057200A1 (en) * 2009-11-06 2011-05-12 Pharmasan Labs, Inc. Preparing hapten-specific antibodies and their application for immunodiagnostics and research

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3501770A (en) * 1967-04-13 1970-03-17 Lilly Co Eli Shipping fever vaccine
AU6642390A (en) * 1989-10-27 1991-05-31 Arch Development Corporation Methods and compositions for promoting immunopotentiation
GB9725084D0 (en) * 1997-11-28 1998-01-28 Medeva Europ Ltd Vaccine compositions
AT410635B (de) * 2000-10-18 2003-06-25 Cistem Biotechnologies Gmbh Vakzin-zusammensetzung
FI20010118A (fi) * 2001-01-19 2002-07-20 Carbion Oy Uudet helicobacter pylori reseptorit ja niiden käyttö
NO317654B1 (no) * 2002-05-03 2004-11-29 Stiftelsen Biopolymer Formulering som inneholder en nukleinsyre og et kitosan, fremgangsmate for fremstilling av formuleringen, samt anvendelser derav.
WO2005077977A2 (en) 2004-02-11 2005-08-25 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P Angeletti Spa Carcinoembryonic antigen fusions proteins and uses thereof
GB0405787D0 (en) * 2004-03-15 2004-04-21 Chiron Srl Low dose vaccines
UA5098U (ru) 2004-07-05 2005-02-15 Михайло Валерійович Бабкін Использование хитозана как адъюванта
US20060045912A1 (en) * 2004-08-30 2006-03-02 Peter Truog 4-phenylbutyric acid controlled-release formulations for therapeutic use
CA2580343A1 (en) * 2004-09-14 2006-03-23 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Imidazoquinoline compounds
US20090028932A1 (en) * 2005-04-15 2009-01-29 Wilson Mary E Vaccine formulations for leishmania
EP1951299B1 (en) 2005-11-04 2012-01-04 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Influenza vaccines including combinations of particulate adjuvants and immunopotentiators
WO2008060617A2 (en) * 2006-11-15 2008-05-22 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Therapeutic uses of tim-3 modulators
US8778384B2 (en) * 2008-03-24 2014-07-15 Advanced Bionutrition Corporation Compositions and methods for encapsulating vaccines for the oral vaccination and boostering of fish and other animals
JP5339243B2 (ja) * 2008-04-24 2013-11-13 株式会社微生物化学研究所 ストレプトコッカス・スイス感染症予防用ワクチン
JP2010065027A (ja) * 2008-08-12 2010-03-25 Mie Univ 魚類のウイルス性出血性敗血症に対する不活化ワクチンとその処方
EP2364153B1 (en) * 2008-11-12 2015-05-06 Synedgen, Inc. Chitosan derivatives to optimize animal weight gain
JP5292141B2 (ja) * 2009-03-17 2013-09-18 シチズンマシナリーミヤノ株式会社 タレット刃物台のクーラント供給構造
EP2508212A1 (en) * 2011-04-05 2012-10-10 Universitätsklinikum Freiburg Biocompatible and biodegradable gradient layer system for regenerative medicine and for tissue support
NZ708065A (en) * 2012-10-29 2019-07-26 Univ Arkansas Novel mucosal adjuvants and delivery systems

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5747475A (en) * 1995-04-04 1998-05-05 Wound Healing Of Oklahoma Chitosan-derived biomaterials
US20100316715A1 (en) * 2007-10-30 2010-12-16 Mats Andersson Chitosan composition
WO2010067318A1 (en) * 2008-12-10 2010-06-17 Medipol Sa Compound, medicament, vaccine composition and nanocapsules
WO2011057200A1 (en) * 2009-11-06 2011-05-12 Pharmasan Labs, Inc. Preparing hapten-specific antibodies and their application for immunodiagnostics and research

Also Published As

Publication number Publication date
AU2018232919B2 (en) 2020-04-23
CN109364244A (zh) 2019-02-22
EP2911676A1 (en) 2015-09-02
CN104884069A (zh) 2015-09-02
US10258688B2 (en) 2019-04-16
US20170143823A1 (en) 2017-05-25
US20210000947A1 (en) 2021-01-07
HUE049965T2 (hu) 2020-11-30
SG11201503319UA (en) 2015-05-28
PH12015500956B1 (en) 2015-07-27
EA201590829A1 (ru) 2015-08-31
PT2911676T (pt) 2020-08-05
EA201891124A3 (ru) 2019-03-29
US20190231869A1 (en) 2019-08-01
CA2889841C (en) 2021-12-28
CN109364244B (zh) 2022-04-29
KR20150076239A (ko) 2015-07-06
CA2889841A1 (en) 2014-05-08
EP2911676B1 (en) 2020-05-20
US10780162B2 (en) 2020-09-22
BR112015009541B1 (pt) 2021-01-12
JP6284537B2 (ja) 2018-02-28
PH12015500956A1 (en) 2015-07-27
AU2013338153A2 (en) 2015-06-11
NZ708065A (en) 2019-07-26
AU2013338153B2 (en) 2018-06-21
CL2015001111A1 (es) 2015-07-31
WO2014070709A1 (en) 2014-05-08
EA201891124A2 (ru) 2018-10-31
JP2015535259A (ja) 2015-12-10
KR102144602B1 (ko) 2020-08-13
MY202024A (en) 2024-03-29
EA039237B1 (ru) 2021-12-21
EP2911676A4 (en) 2016-10-26
US20150297714A1 (en) 2015-10-22
MY190866A (en) 2022-05-13
ES2809220T3 (es) 2021-03-03
PL2911676T3 (pl) 2020-12-28
HK1214507A1 (zh) 2016-07-29
ZA201503004B (en) 2021-03-31
BR112015009541A2 (pt) 2017-07-04
AU2018232919A1 (en) 2018-10-04
MX2015005444A (es) 2015-07-17
US11883489B2 (en) 2024-01-30
DK2911676T3 (da) 2020-08-03
AU2013338153A1 (en) 2015-06-11
PH12020500101A1 (en) 2021-01-11
CN104884069B (zh) 2018-11-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11883489B2 (en) Mucosal adjuvants and delivery systems
EP2331128B1 (en) Composition comprising chitosan for ocular administration of vaccine(s) to avians
US11524061B2 (en) Poultry vaccine for clostridium perfringens
EP3471706B1 (en) Oral pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically active agent, at least one cationic bioadhesive polymer and at least two anionic polymers
KR20220041142A (ko) 조류에 점막 투여하기 위한 조성물
WO1995031184A1 (en) Bioactive molecule delivery
KR20210045900A (ko) 락토바실러스 플란타룸 및 뉴캣슬병 바이러스를 포함하는 백신 조성물
MX2011004840A (es) Composiciones de vacuna.
KR100267747B1 (ko) 돼지 대장균 및 유행성 설사바이러스에 의한 설사증 예방 및치료용 난황항체를 이용한 복합 면역제제
KR100267746B1 (ko) 돼지 대장균 설사증 예방 및 치료용 난황항체를 이용한 경구용 면역제제
Hargis et al. Mucosal adjuvants and delivery systems
RU2683027C2 (ru) Поливалентная иммунизирующая и/или терапевтическая композиция для применения при бактериальных инфекциях или пищевом отравлении, в частности сальмонеллёзе, способ получения этой композиции, её применение и вакцина, содержащая эту композицию
CN116457004A (zh) 用于保护猪免于各种疾病的组合疫苗
KR20220127524A (ko) 약독화된 살모넬라 갈리나룸 생균 및 사균을 포함하는 가금티푸스 예방용 백신 조성물
KR20210045899A (ko) 락토바실러스 플란타룸 및 h5n9형 조류인플루엔자 바이러스를 포함하는 백신 조성물
Akerele Evaluating the in vitro Characteristics and Protective Efficacy of Chitosan Nanoparticle Vaccines Against Necrotic Enteritis in Broiler Chickens