KR20220041142A

KR20220041142A - 조류에 점막 투여하기 위한 조성물

Info

Publication number: KR20220041142A
Application number: KR1020227006049A
Authority: KR
Inventors: 피터 윈터; 카렌 브라운; 메건 퀸; 미셸 마티에센; 하일롱 궈; 제레미 그리펠; 헥토르 세르반테스; 베레케트 제카리아스; 샘 크리스텐베리
Original assignee: 피브로 애니멀 헬스 코포레이션
Priority date: 2019-07-30
Filing date: 2020-07-28
Publication date: 2022-03-31
Also published as: EP4003411A1; BR112022000626A2; IL289559A; MX2022001190A; US20220184198A1; CN114222584A; WO2021021778A1

Abstract

불활성화된 항원은 비경구로 투여된 백신의 조류 의약에서만 사용되었다. 점막으로 투여되는 유일한 백신은 생 백신, 변형된 생 백신 또는 약독화 백신이었다. 그러나, 생 백신은 질병을 유발할 위험을 포함하여 몇 가지 단점이 있다. 개시된 실시양태는 조류에 점막 투여하기 위해 제형화된 불활성화된 박테리아 및/또는 바이러스 항원을 포함하는 조성물, 및 조성물의 사용 방법에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 조성물은 불활성화된 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A 항원, 및/또는 살모넬라 종 항원, 예컨대 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 및/또는 살모넬라 엔테리디티스로부터의 항원, 또는 이. 콜라이 항원을 포함한다. 조성물은 폴리아크릴산 아주반트를 포함할 수 있다. 조성물은 부화 후 처음 14일 동안, 또는 처음 14일 후에 조류에 인 오보 투여될 수 있다.

Description

조류에 점막 투여하기 위한 조성물

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2019년 7월 30일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 62/880,458을 우선권 주장하며, 이 가출원은 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함된다.

분야

본 개시내용은 조류 종에 투여하기 위한, 불활성화된 항원 및 점막 아주반트를 포함하는 조성물, 및 이러한 조성물의 제조 및 사용 방법에 관한 것이다.

불활성화된 백신은 수년 동안 질병 예방을 돕기 위해 조류 의학에서 사용되어 왔다. 이러한 모든 백신은 비경구적으로, 예컨대 근육내 (IM) 또는 피하 (SC) 경로에 의해 투여되었다. 조류 종에 점막으로, 예컨대 경구로 또는 분무로서 투여되는 유일한 백신은 생, 변형된 생 또는 약독화된 유기체를 함유하는 백신 (본원에서 총칭하여 생 백신으로서 정의됨)이다. 이러한 경우, 상기 유기체는 전형적으로, 중대한 활동성 질병을 일으키지 않도록 변경되지만 활동성 질병과 유사한 방식으로 면역 체계를 자극하는 가벼운 증후군을 유발할 수 있다.

생 백신의 단점은 그들이 자신의 유기체를 환경 및/또는 다른 동물에 유출시키고, 일부 경우에는 백신 균주가 동물 집단을 통해 순환하는 유기체의 현장 균주와 재조합하여 치명적인 돌연변이 (새로운 바이러스 또는 박테리아 재조합체)를 일으킬 수 있으며, 이는 계속되는 질병 문제 또는 심지어 새로운 전염병을 유발한다는 점이다.

불활성화된 항원 및 적어도 하나의 점막 아주반트를 포함하는 조성물의 실시양태가 본원에 개시되며, 여기서 조성물은 조류에 투여하기 위해 제형화된다. 조성물은 폴리아크릴산 점막 아주반트 및/또는 예컨대 클로스트리디움 종(Clostridium spp.), 예컨대 클로스트리디움 페르프린겐스(Clostridium perfringens) 유형 A, 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 C, 클로스트리디움 셉티쿰(Clostridium septicum), 또는 클로스트리디움 콜리눔(Clostridium colinum); 헤모필루스 파라갈리나룸(Haemophilus paragalinarum) (코리자(Coryza)); 에스케리키아 종(Escherichia spp.), 예컨대 이. 콜라이(E. coli); 살모넬라 종(Salmonella spp.), 예컨대 살모넬라 켄터키(Salmonella kentucky), 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium), 또는 살모넬라 엔테리디티스(Salmonella enteriditis); 파스테우렐라 종(Pasteurella spp.), 예컨대 파스테우렐라 물토시다(Pasteurella Multocida), 또는 파스테우렐라 헤몰리카(Pasteurella Hemolyca); 스타필로코쿠스 종(Staphylococcus spp.); 미크로코쿠스 종(Micrococcus spp.); 캄필로박터 종(Campylobacter spp.), 예컨대 캄필로박터 헤파티쿠스(Campylobacter hepaticus), 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni), 또는 캄필로박터 콜라이(Campylobacter coli); 아비박테리움 종(Avibacterium spp.); 악티노바실루스 종(Actinobacillus spp.); 네이세리아 종(Neisseria spp.); 에리시펠로트릭스 종(Erysipelothrix spp.); 모락셀라 종(Moraxella spp.); 조류 클라미디아증 (클라미디아(Chlamydia)); 갈리박테리움 종(Gallibacterium spp.), 예컨대 갈리박테리움 아나티스(Galibacterium anatis); 슈도모나스 종(Pseudomonas spp.); 로도코쿠스 종(Rhodococcus spp.); 세라티아 종(Serratia spp.); 스트렙토코쿠스 종(Streptococcus spp.); 조류 미코플라스마 종 (미코플라스마(Mycoplasma)); 조류 콕시디아증 (콕시디아(Coccidia)); 레오바이러스 (REO); 조류 인플루엔자 바이러스 (IAV-A); 감염성 기관지염 바이러스 (IBV); 뉴캐슬병 바이러스 (NDV); 가금류 아데노바이러스 (FA); 감염성 윤활낭병 (IBD); 마렉병 (MDV); 닭 빈혈 (CAV); 감염성 후두기관염 (ILTV); 조류 뇌척수염 (AEV); 조류 간염 (HEV); 오리 간염 (DHV); 칠면조 출혈성 장염 (THEV); 산란 저하 증후군 바이러스 (EDS); 또는 그의 조합이나, 이에 제한되지는 않는 호흡기 또는 장내 박테리아 또는 바이러스로부터의 불활성화된 항원을 포함할 수 있다

임의의 실시양태에서, 조성물은 비히클, 계면활성제, 불활성화제, 중화제, 세포 단편, 또는 그의 조합을 추가로 포함할 수 있다. 불활성화제는 포름알데히드, 포르말린, 바이너리 에틸렌이민, 티메로살, 베타 프로피오락톤, 디터전트, 또는 그의 조합일 수 있다. 그러나, 특정 실시양태에서, 조성물은 식염수 용액을 포함하지 않는다.

조성물은 0 초과 내지 2% (w/v) 염화나트륨 용액의 오스몰농도를 가질 수 있고/거나 실질적으로 등장성 오스몰농도를 가질 수 있다. 부가적으로, 또는 대안적으로, 조성물은 0 초과 내지 6 mPa·s, 예컨대 2 mPa·s 내지 5 mPa·s의 점도를 가질 수 있다. 및/또는 일부 실시양태에서, 조성물은 수성 베이스 내의 입자의 현탁액으로서 또는 액체로서 제형화되지만, 다른 실시양태에서, 조성물은 겔로서 제형화될 수 있다. 겔은 겔화제, 예컨대 카르복시메틸 셀룰로스, 카르복시메틸 키토산, 키토산, 소듐 히알루로네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 크산탐 검, 전분, 펙틴, 젤라틴, 폴리사카라이드 및 올리고폴리사카라이드, 카라기난, 그의 유도체 및 조합을 포함할 수 있다. 부가적으로 또는 대안적으로, 조성물은 부가된 면역자극제, 예컨대 사포닌, 퀼(Quil) A, 디메틸디옥타데실 암모늄 브로마이드, 디메틸디옥타데실 암모늄 클로라이드, 폴록사머, 폴리에틸렌 말레산 무수물, 또는 그의 조합을 포함할 수 있다.

아주반트는 0 초과 내지 80% (v/v), 예컨대 5% 내지 80%, 또는 0 초과 내지 50%, 0.5% 내지 50%, 1% 내지 50% 또는 5% 내지 50%의 조성물 중 아주반트 농도를 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 음용수에 부가하기 위해 제형화되고, 아주반트 농도는 0 초과 내지 100% 미만, 예컨대 15% 내지 80%이다. 대안적으로, 조성물은 분무 투여하기 위해 제형화될 수 있고 0 초과 내지 80%, 예컨대 0.5% 내지 80%, 0.5% 내지 50%, 1% 내지 50%, 5% 내지 50% 또는 15% 내지 40%의 아주반트 농도를 가질 수 있다. 또는 조성물은 눈에 투여하기 위해 제형화될 수 있고 아주반트 농도는 5% 내지 25%일 수 있다. 그리고 다른 실시양태에서, 조성물은 겔 투여하기 위해 제형화되고, 아주반트 농도는 겔 조성물, 예컨대 겔화제를 포함하는 조성물과 혼합하기 전에 15% 내지 40%이다.

또한 물 및 0 초과 내지 100% (v/v) 미만, 예컨대 0 초과 내지 80% (v/v) 미만, 또는 0 초과 내지 50% (v/v)의 개시된 조성물을 포함하는 음용수 조성물의 실시양태, 및 또한 개시된 조성물을 포함하는 제1 조성물 및 겔화제를 포함하는 제2 조성물을 포함하는 겔 조성물의 실시양태가 본원에 개시된다. 겔 조성물은 25:75 내지 75:25, 예컨대 50:50의 제1 조성물 대 제2 조성물 사이의 비율을 가질 수 있다.

부가의 실시양태는 개시된 실시양태 중 임의의 것에 따른 조성물을 조류에 투여하는 것을 포함하는 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은 조류 점막에 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서 조류는 닭, 칠면조, 거위, 오리, 콘월 게임 암탉, 메추라기, 자고새, 꿩, 뿔닭, 타조, 에뮤, 백조, 또는 비둘기, 바람직하게 닭 또는 칠면조이다. 및/또는 조성물은 임의의 적합한 경로, 예컨대 경구로, 후비공 능선을 통해, 하르더샘을 통해, 안구로 또는 국소적으로 전달될 수 있다. 적용은 분무, 연무, 점안제, 음용수, 사료 및 그의 조합에 의해 이루어질 수 있다. 대안적으로, 조성물은 예컨대 주사에 의해 인 오보(in ovo) 투여될 수 있다.

특정 실시양태에서, 조성물은 먼저 0일 초과 내지 14일령의 조류, 예컨대 1일 내지 9일령의 조류 또는 임의의 연령에서 번식 또는 산란에 사용될 수 있는 나이 많은 조류에 투여된다. 부가적으로, 특정 실시양태에서, 조성물은 예컨대 난황, 난황낭 및/또는 배아막 내로 조성물을 주사함으로써 병아리에 인 오보 투여될 수 있다.

조성물을 투여하는 것은 조성물의 제1 투여에 이어 제1 투여에 후속하는 제2 투여를 포함할 수 있다. 또는 수명이 긴 조류에 한 번만 적용하거나 또는 여러 번 재투여할 수 있다. 제1 투여는 조류가 0일 초과 내지 14일령일 때 발생할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 투여는 제1 투여 후 0일 초과 내지 6주, 예컨대 제1 투여 후 1일 내지 4주, 또는 제1 투여 후 3일 내지 10일이다. 그리고 특정한 실시양태에서, 상기 방법은 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A 항원, 살모넬라 종, 예컨대 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 및/또는 살모넬라 엔테리디티스, 및/또는 에스케리키아 종, 예컨대 이. 콜라이로부터의 불활성화된 항원, 및 폴리아크릴산 아주반트를 포함하는 조성물을 0일 초과 내지 14일령의 조류에 투여하는 것을 포함할 수 있다.

임의의 실시양태에서, 조류에 투여하는 것은 조성물을 조류에 분무하는 것 및/또는 조성물을 조류의 눈에 투여하는 것을 포함할 수 있다. 대안적으로, 조류에 투여하는 것은 조류에게 음용수 조성물 또는 이러한 조성물을 포함하는 겔 조성물을 제공하는 것을 포함할 수 있다. 음용수 조성물은 0 초과 내지 100% (v/v) 미만, 예컨대 80% 내지 100% 미만, 또는 70% 내지 100% 미만의 조성물을 포함할 수 있다. 그리고 일부 실시양태에서, 상기 방법은 조성물을 물과 혼합하여 음용수 조성물을 형성하는 것을 추가로 포함한다.

조류 종에서 면역 반응을 유도하는 방법이 또한 개시되어 있다. 이러한 방법은 개시된 실시양태 중 임의의 것에 따른 조성물을 조류에 투여하는 것을 포함할 수 있다. 면역 반응을 유도하는 것은 IgA 반응 및 임의로 IgA 및 IgY 반응 둘 다를 유도하는 것을 포함할 수 있다. 또한, 조류에서 괴사성 장염을 치료 또는 예방하는 방법이 개시되며, 여기서 상기 방법은 개시된 실시양태 중 임의의 것에 따른 조성물을 조류에 투여하는 것을 포함하며, 여기서 조성물은 불활성화된 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A 항원을 포함한다. 또 다른 개시내용은 미생물, 예컨대 살모넬라 종, 및/또는 에스케리키아 종, 예컨대 오염된 가금류 고기에 의해 야기되는 인간 식품 안전 문제와 관련된 종의 이동을 감소시키는 방법이다. 이러한 유기체는 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스, 및 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

부가적으로, 불활성화된 항원 및 적어도 하나의 점막 아주반트를 포함하는 조성물을 조류에 점막으로 투여하는 것을 포함하는 방법이 본원에 개시된다. 조성물을 투여하는 것은 조성물을 조류에 분무하는 것을 포함할 수 있고/거나 조성물을 안구로, 코로 및/또는 경구로 투여하는 것을 포함할 수 있다. 조성물은 80% 내지 100% 미만의 물을 포함할 수 있고/거나 수성 기반 아주반트를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물은 0.5% 내지 50% 아주반트, 예컨대 1% 내지 50% 아주반트 또는 5% 내지 50% 아주반트를 포함하고/거나 아주반트는 폴리아크릴산 아주반트일 수 있다.

일부 실시양태에서, 조성물은 현탁액이고, 폴리아크릴산 입자, 예컨대 250 nm 내지 10 마이크로미터의 입자 크기를 갖는 폴리아크릴산 입자를 포함하는 수성 현탁액일 수 있다.

불활성화된 항원은 클로스트리디움 종, 예컨대 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 C, 클로스트리디움 셉티쿰, 또는 클로스트리디움 콜리눔; 헤모필루스 파라갈리나룸 (코리자); 에스케리키아 종, 예컨대 이. 콜라이; 살모넬라 종, 예컨대 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 또는 살모넬라 엔테리디티스; 파스테우렐라 종, 예컨대 파스테우렐라 물토시다, 또는 파스테우렐라 헤몰리카; 스타필로코쿠스 종; 미크로코쿠스 종; 캄필로박터 종, 예컨대 캄필로박터 헤파티쿠스, 캄필로박터 제주니, 또는 캄필로박터 콜라이; 아비박테리움 종; 악티노바실루스 종; 네이세리아 종; 에리시펠로트릭스 종; 모락셀라 종; 조류 클라미디아증 (클라미디아); 갈리박테리움 종, 예컨대 갈리박테리움 아나티스; 슈도모나스 종; 로도코쿠스 종; 세라티아 종; 스트렙토코쿠스 종; 조류 미코플라스마 종 (미코플라스마); 조류 콕시디아증 (콕시디아); 레오바이러스 (REO); 조류 인플루엔자 바이러스 (IAV-A); 감염성 기관지염 바이러스 (IBV); 뉴캐슬병 바이러스 (NDV); 가금류 아데노바이러스 (FA); 감염성 윤활낭병 (IBD); 마렉병 (MDV); 닭 빈혈 (CAV); 감염성 후두기관염 (ILTV); 조류 뇌척수염 (AEV); 조류 간염 (HEV); 오리 간염 (DHV); 칠면조 출혈성 장염 (THEV); 산란 저하 증후군 바이러스 (EDS); 또는 그의 조합이나, 이에 제한되지는 않는 것으로부터의 항원을 포함할 수 있다.

조성물은 세포 단편, 불활성화제, 계면활성제, 중화제, 또는 그의 조합을 추가로 포함할 수 있고, 불활성화제는 포름알데히드, 포르말린, 바이너리 에틸렌이민, 티메로살, 베타 프로피오락톤, 디터전트, 또는 그의 조합일 수 있다. 부가적으로, 또는 대안적으로, 조성물은 2 mPa·s 내지 5 mPa·s의 점도; 등장성 오스몰농도; 6.5 내지 7.5의 pH; 또는 그의 조합을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 조류는 닭, 칠면조, 거위, 오리, 콘월 게임 암탉, 메추라기, 자고새, 꿩, 뿔닭, 타조, 에뮤, 백조, 또는 비둘기이고, 특정 실시양태에서 조류는 닭 또는 칠면조이다.

조성물은 부화일 내지 14일령, 예컨대 부화일 내지 3일령의 조류에 투여될 수 있고, 특정 실시양태에서, 조성물은 부화일에 조류에 투여된다.

일부 실시양태에서, 조성물을 투여하는 것은 불활성화된 항원 및 적어도 하나의 점막 아주반트를 포함하는 제1 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 방법은 후속적으로 제2 조성물을 조류에 투여하는 것을 추가로 포함한다. 제2 조성물은 제1 조성물이 투여된 후 0일 초과 내지 6주, 예컨대 제1 조성물이 투여된 후 5일 내지 20일, 또는 10일 내지 15일에 투여될 수 있다. 제2 조성물은 제1 조성물과 동일한 불활성화된 항원 및 점막 아주반트를 포함할 수 있거나, 또는 대안적으로, 제2 조성물은 제1 조성물과 상이한 불활성화된 항원 및/또는 상이한 점막 아주반트를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 조성물은 점막으로, 예컨대 분무에 의해 및/또는 경구로 투여되지만, 대안적인 실시양태에서, 제2 조성물은 비-점막 아주반트를 사용하여 주사함으로써 투여된다.

임의의 실시양태에서, 방법은 조류 또는 수거 후 조류로부터 획득된 고기에서, 예컨대 살모넬라 종이 에스. 켄터키(S. kentucky), 에스. 엔테리디티스(S. enteriditis) 또는 에스. 티피뮤리움(S. typhimurium)인 경우, 살모넬라 종의 발생률을 감소시키는 방법일 수 있다.

임의의 실시양태에서, 방법은 조류 또는 수거 후 조류로부터 획득된 고기에서, 예컨대 에스케리키아 종이 에스케리키아 콜라이인 경우, 에스케리키아 종의 발생률을 감소시키는 방법일 수 있다.

특정한 실시양태에서, 상기 방법은 불활성화된 항원, 폴리아크릴산 입자, 및 70% 내지 100% 미만의 물을 포함하는 수성 현탁액을 조류에 분무하는 것을 포함한다. 그리고 상기 방법은 클로스트리디움 종 (예컨대 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 C, 클로스트리디움 셉티쿰, 또는 클로스트리디움 콜리눔), 헤모필루스 파라갈리나룸 (코리자), 에스케리키아 종 (예컨대 이. 콜라이), 살모넬라 종 (예컨대 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 또는 살모넬라 엔테리디티스), 파스테우렐라 종 (예컨대 파스테우렐라 물토시다, 또는 파스테우렐라 헤몰리카), 스타필로코쿠스 종, 미크로코쿠스 종, 캄필로박터 종 (예컨대 캄필로박터 헤파티쿠스, 캄필로박터 제주니, 또는 캄필로박터 콜라이), 아비박테리움 종, 악티노바실루스 종, 네이세리아 종, 에리시펠로트릭스 종, 모락셀라 종, 조류 클라미디아증 (클라미디아), 갈리박테리움 종 (예컨대 갈리박테리움 아나티스), 슈도모나스 종, 로도코쿠스 종, 세라티아 종, 스트렙토코쿠스 종, 조류 미코플라스마 종 (미코플라스마), 조류 콕시디아증 (콕시디아), 레오바이러스 (REO), 조류 인플루엔자 바이러스 (IAV-A), 감염성 기관지염 바이러스 (IBV), 뉴캐슬병 바이러스 (NDV), 가금류 아데노바이러스 (FA), 감염성 윤활낭병 (IBD), 마렉병 (MDV), 닭 빈혈 (CAV), 감염성 후두기관염 (ILTV), 조류 뇌척수염 (AEV), 조류 간염 (HEV), 오리 간염 (DHV), 칠면조 출혈성 장염 (THEV), 또는 산란 저하 증후군 바이러스 (EDS) 중 하나 이상으로부터의 항원으로부터 선택된 불활성화된 항원; 250 nm 내지 10 마이크로미터의 입자 크기를 갖는 폴리아크릴산 입자; 세포 단편, 불활성화제, 계면활성제, 중화제, 또는 그의 조합; 및 80% 내지 100% 미만의 물을 포함하는 수성 현탁액을 조류에 분무하는 것을 포함할 수 있다.

또한, 불활성화된 항원 및 적어도 하나의 점막 아주반트를 포함하는 조성물을 조류에 투여하는 것을 포함하는 방법에서 사용하기 위한 상기 조성물이 개시된다.

본 발명의 전술한 및 기타 목적, 특징 및 이점은 첨부 도면을 참조하여 진행되는 하기의 상세한 설명으로부터 더욱 명백해질 것이다.

도 1은 연구에서 각각의 처리 그룹에 대한 괴사성 장염으로 인한 사망 백분율을 예시하는, 처리 그룹과 비교한 사망률 퍼센트의 그래프이다.
도 2는 각각의 처리 그룹에 대한 제21일의 평균 괴사성 장염 장 병변 점수를 예시하는, 처리 그룹과 비교한 평균 괴사성 장염 병변 점수의 그래프이다.

I. 정의

용어 및 약어에 대한 하기 설명은 본 개시내용을 보다 잘 설명하고 본 개시내용의 실시에서 관련 기술분야의 통상의 기술자를 안내하기 위해 제공된다. 본원에 사용된 바와 같이, "포함하는"은 "포함한"을 의미하고 단수형은 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한 복수 대상물을 포함한다. 용어 "또는"은 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한, 명시된 대체 요소의 단일 요소 또는 둘 이상의 요소의 조합을 지칭한다.

달리 설명되지 않는 한, 본원에 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 개시내용이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 등가인 방법 및 재료가 본 개시내용의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료가 하기에 기재되어 있다. 재료, 방법 및 예는 예시일 뿐이며 제한하려는 의도가 아니다. 본 개시내용의 다른 특징은 하기 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백하다.

달리 지시되지 않는 한, 본 명세서 또는 청구범위에 사용된 바와 같은 성분, 분자량, 백분율, 온도, 시간 등의 양을 나타내는 모든 숫자는 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 암시적으로 또는 명시적으로 달리 지시되지 않는 한, 제시된 수치 파라미터는 추구하는 원하는 특성 및/또는 표준 시험 조건/방법 하의 검출 한계에 의존할 수 있는 근사치이다. 실시양태를 논의된 선행 기술과 직접적이고 명시적으로 구별할 때, 실시양태 번호는 "약"이라는 단어가 언급되지 않는 한 근사치가 아니다.

용어 "아주반트"는 면역 반응을 증강시키는 백신에 부가되는 임의의 성분을 지칭한다. 상기 용어는 조류 대상체에 투여하기 적합한 임의의 아주반트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아주반트는 카르비겐(CARBIGEN)™; 말레산 무수물, 예컨대 에틸렌 말레산 무수물 또는 폴리에틸렌 말레산 무수물; 알루미늄 염, 예컨대 수산화알루미늄 또는 인산알루미늄; 에멀시겐(EMULSIGEN)®, 에멀시겐®-D (디메틸디옥타데실암모늄 브로마이드(DDA) 함유), 에멀시겐®-BCL (블록 공중합체 면역자극제 함유), 및 에멀시겐®-P (독점 면역자극제 함유)를 포함한 에멀시겐® 기반 아주반트 [피브로 동물 보건 코포레이션 (Phibro Animal Health Corporation; 미국 네브래스카주 오마하)]; 유중수 에멀젼; 수중유 에멀젼; VetSap, QS21 [안티제닉스 (Antigenics; 미국 매사추세츠주 프레이밍햄)]을 포함한 사포닌 및 사포닌의 유도체; 폴리아크릴산; 저분자량 공중합체, 예컨대 폴리겐(Polygen)™ [피브로 동물 보건 코포레이션 (미국 네브래스카주 오마하)으로부터 입수가능함]을 포함한 공중합체; 카르보폴 기반 아주반트; 합성 폴리뉴클레오티드, 예컨대 CpG 모티프를 함유하는 올리고뉴클레오티드 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,207,646); 트리겐(TRIGEN)™; 폴리-IC; 폴리-ICLC; 카르복시메틸 키토산, 키토산, 몬타니즈(MONTANIDES); 또는 그의 조합이거나 또는 이를 포함한다.

본 기술에서 사용하기 적합한 박테리아 항원은 박테리움으로부터 정제, 단리 또는 유래될 수 있는 단백질, 폴리사카라이드, 리포폴리사카라이드, 및/또는 외막 소포를 포함한다. 박테리아 항원은 또한 박테리아 용해물 및 불활성화된 박테리아 제형을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 박테리아 항원은 재조합 발현에 의해 생산될 수 있다. 전형적으로, 박테리아 항원은 생활 주기의 적어도 하나의 단계 동안 박테리아의 표면에 노출되는 에피토프를 포함한다. 박테리아 항원은 여러 혈청형에 걸쳐 보존될 수 있다. 박테리아 항원은 본원에 개시된 박테리아 중 하나 이상으로부터 유래된 항원을 포함한다.

본 기술에서 사용하기 적합한 바이러스 항원은 불활성화된 (또는 사멸된) 바이러스 및/또는 바이러스로부터 단리, 정제 또는 유래될 수 있는 바이러스 단백질을 포함한다. 바이러스 항원은 기질, 예컨대 세포 배양물 또는 다른 기질에서 증식된 바이러스로부터 유래될 수 있거나, 또는 재조합에 의해 유래 또는 발현될 수 있으며, 이들은 생활 주기의 적어도 하나의 단계 동안 바이러스 표면에 노출되는 에피토프 또는 바이러스로부터 정제되거나 합성적으로 생산되는 항원성 펩티드를 포함하는 바이러스 항원일 수 있다. 바이러스 항원은 여러 혈청형 또는 단리물에 걸쳐 보존될 수 있다. 바이러스 항원은 본원에 개시된 바이러스 중 하나 이상으로부터 유래된 항원을 포함한다. 관심 바이러스 항원은 레오바이러스 (REO), 조류 인플루엔자 바이러스 (IAV-A), 감염성 기관지염 바이러스 (IBV), 뉴캐슬병 바이러스 (NDV), 가금류 아데노바이러스 (FA) 및 산란 저하 증후군 바이러스 (EDS)를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 본원에 개시된 호흡기 또는 장 바이러스로부터의 항원을 포함할 수 있다.

용어 "점막부착제", "점막 아주반트" 또는 "점막으로 아주반트 부가된"은 점막에 부착하고 면역 반응을 자극할 수 있는 능력을 가진 아주반트를 지칭한다. 점막은 비인두막, 구강막, 시신경 (눈), 질막 또는 항문막을 포함한다. 자극되는 면역 반응은 혈청 및 점막 세척액에서 발견되는 IgA, IgY, IgM 또는 그의 조합을 포함할 수 있다. 이러한 아주반트를 포함하는 조성물은 동물의 점막에 투여된다.

용어 "생 백신"은 불활성화된 항원 또는 사멸된 유기체와 대조적으로, 생, 변형된 생 및/또는 약독화된 유기체를 포함하는 백신을 지칭한다.

용어 "불활성화된 항원"은 질병을 재생 및/또는 유발할 수 없는 항원을 지칭한다. 불활성화된 항원은 사멸된 유기체로부터의 항원, 서브유닛, 재조합 항원, 또는 그의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "불활성화된 백신"은 불활성화된 항원을 포함하는 백신이며, 생, 변형된 생 및/또는 약독화된 유기체를 포함하지 않는다.

본원에 사용된 바와 같이, 백신을 점막으로 투여하는 것은, 예컨대 조류의 입, 눈, 하르더샘, 후비공 열구 또는 항문에 백신을 직접 투여함으로써 조류에 백신을 직접 투여하는 것, 및 조류가 섭취하도록 백신을 제공하는 것, 예컨대 새들이 먹거나, 마시거나 또는 서로 쪼을 수 있도록 백신을 제공하는 것 둘 다를 포함한다. 백신을 제공하는 예시적인 방법은 새에 백신을 분무하는 것, 및/또는 그렇지 않으면 깃털에 백신을 적용하여 새들이 서로의 깃털을 쪼고/거나 스스로를 다듬을 때 백신이 섭취되도록 하는 것, 또는 새들이 섭취할 수 있는 형태로, 예컨대 새가 쪼아먹을 겔이나 새가 마실 액체에 백신을 제공하는 것을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 분무 액적이 새의 입, 후비공 열구 및/또는 눈에 직접 유입될 수 있기 때문에 분무가 또한 직접 투여를 용이하게 할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 분무하는 것은 임의의 적합한 기술, 예컨대 백팩 분무기 또는 스프레이 캐비닛에 의해 수행될 수 있다. 전형적으로, 적절한 분무 기술은 가능한 한 새의 상부 노출된 표면, 예컨대 새의 등, 머리, 얼굴, 꼬리 깃털 등에 조성물을 분무할 것이다.

감염 또는 챌린지는 대상체가 질병의 한 가지 이상의 임상 징후를 나타내도록 할 수 있는, 살아있는 질병 유발 유기체에 노출되었음을 의미한다.

용어 "유효량" 또는 "치료상 유효량"은 원하는 생물학적 결과를 유도하기에 충분한 활성제 (예컨대 단독으로, 조합하여, 또는 잠재적으로 다른 치료제(들)와 조합하여 본원에 제공된 하나 이상의 실시양태)의 양을 지칭한다. 그 결과는 질병 징후의 감소, 질병의 징후, 증상 또는 원인의 개선 또는 완화, 또는 생물학적 시스템의 임의의 다른 원하는 변경일 수 있다. 용어 "유효량" 또는 "치료상 유효량"은 질병 상태의 개선 또는 질병 증상의 예방을 유발하는 치료제 및/또는 예방제의 임의의 양을 나타내기 위해 본원에서 사용된다. 그 양은 치료 중인 병태, 병태의 진행 단계, 적용되는 제형의 유형 및 농도, 대상체의 연령, 성별 및 종에 따라 달라질 수 있다. 임의의 주어진 경우에 적절한 양은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 쉽게 명백하거나, 또는 일상적인 실험, 예컨대 백신접종 및 항체 반응의 관찰 또는 백신접종에 이은 챌린지에 의해 결정할 수 있으며, 여기서 백신접종된 동물은 유사하게 챌린지되는 백신접종되지 않은 동물보다 더 나은 성과를 올린다.

용어 "겔"은 액체 내에 고체 3차원 네트워크를 포함하는 콜로이드 시스템을 지칭한다. 중량 기준으로, 겔은 주로 액체이지만 액체 내 고체의 얽힌 및/또는 가교된 분자의 3차원 네트워크로 인해 고체처럼 행동한다. 유변학적 관점에서, 겔은 손실 계수 G''를 초과하는 저장 탄성률 G' 값을 갖는다. 저장 탄성률은 변형 (예를 들어, 사인파 진동 전단)이 부과된 재료에 저장된 에너지의 측정기준이며; 저장 탄성률은 탄성 변형에 기인하는 재료의 총 강성의 비율로 생각될 수 있다. 손실 계수는 변형 (예를 들어, 사인파 진동 전단)이 부과된 재료에서 소산되는 에너지의 측정기준이며; 손실 계수는 탄성 변형보다는 점성 흐름에 기인하는 재료의 총 강성의 비율로 생각될 수 있다. 저장 탄성률 및 손실 계수는 레오미터로 결정될 수 있다.

겔은 물에 부가되면 분산될 수 있다. 그러나, 새의 깃털에 적용될 때, 겔은 전형적으로 그것이 적용된 새 및/또는 다른 새가 깃털에서 겔을 쪼아낼 수 있도록 깃털에 접착될 것이므로, 겔 내에 함유되어 있는 개시된 항원 조성물이 새(들)에 투여된다. 겔은 개시된 조성물에 겔화제를 포함함으로써 형성될 수 있다. 적합한 겔화제는 카르복시메틸 셀룰로스, 카르복시메틸 키토산, 키토산, 소듐 히알루로네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 크산탐 검, 전분, 펙틴, 젤라틴, 폴리사카라이드 및 올리고폴리사카라이드, 카라기난, 그의 유도체 및 조합을 포함할 수 있다.

II. 개요

현재, 점막으로 투여되는 불활성화된 항원을 포함하는 조류 백신은 없다. 그러나, 불활성화된 백신은 유기체를 유출시키는 위험 및/또는 현장 균주와 재조합하여 새로운 질병 변이체를 형성시키는 위험을 감소시키는 것을 포함하여, 생 백신에 비해 특정 이점을 지닌다. 부가적으로, 점막 투여는 비경구 투여에 비해 몇 가지 장점이 있다. 예를 들어, 분무 투여는 여러 마리의 새를 개별적으로 처리할 필요를 없애고, 그에 의해 관련 작업량을 감소시킴으로써 새 그룹에 백신을 투여하는 비용을 상당히 절감시킨다. 그리고 점막 투여는 또한 조류가 잠재적으로 스트레스가 많은 바늘 주사에 노출되지 않도록 하고, 주사 부위에 잔류 아주반트/백신의 존재로 인한 고기 손실의 가능성을 감소시키며, 또한 작업자에 의한 우발적인 자가 주사의 위험을 감소시키거나 실질적으로 제거한다. 부가적으로, 점막 투여는 상당한 IgA 반응을 일으키기 때문에, 불활성화된 항원의 이러한 투여 경로는 인 오보 통과된 암탉으로부터 획득된 모체 항체를 극복할 가능성이 더 크다.

개시된 방법 및 조성물이 유용한 하나의 예시적인 조류 질병은 괴사성 장염이다. 이러한 질병은 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A에 의해 유발되며, 전형적으로 생후 10일 내지 15일 이내에 어린 가금류에서 장 병변, 체중 감소 및 사망을 동반하는 심각한 위장염을 유발한다. 감염된 새를 수거할 때 도축장에서 부가의 문제가 발생한다. 프로세스 라인은 폐쇄되어야만 하고, 병변이 발견되고 씨. 페르프린겐스(C. perfringens)로 구내를 감염시킬 가능성이 있는 경우에는 도축장에 막대한 비용을 들이고 광범위한 청소를 수행해야만 한다. 이러한 질병에 대항하여 가금류를 보호하는 백신은 발견되지 않았다. 그리고 시도된 모든 백신은 비경구적으로 투여되었다.

이상적인 접근법은 생 백신의 경우에 관찰된 보호 기능을 복제하는 불활성화된 백신을 투여할 수 있는 것이다. 본 발명자들은 놀랍게도, 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A을 사용한 백신접종/챌린지 시험에서 입증된 바와 같이 질병으로부터 동물을 보호하기 위해 점막으로, 예컨대 경구로, 안구로 또는 국소로 투여될 수 있는 불활성화된 항원을 포함하는 조성물을 발견하였다.

점막으로 적용될 수 있는 불활성화된 백신의 또 다른 예시적인 용도는 가금류에서 살모넬라 종 및/또는 에스케리키아 종을 감소시키는 것이다. 이들 유기체는 가금류에서 질병을 일으키지 않을 수 있지만, 육류를 통해 인간에게 유출되어, 심각한 위장염을 일으키고 일부 경우에는 사망에 이를 수 있는 식품 매개 질병을 유발시킬 수 있다. 이들 박테리아는 정상적으로는 가금류의 장관에서 발견된다. 그들은 장기와 심지어 새의 고기로 이동되는 것으로 공지되어 있다. 본 발명자들은 놀랍게도, 살모넬라 종 및 에스케리키아 종 수준이 가금류에서 감소될 수 있고, 이에 의해 인간 소비를 위한 가금류 고기의 안전성을 잠재적으로 개선할 수 있음을 발견하였다.

III. 조성물

불활성화된 항원 및 점막 아주반트, 예컨대 점막부착 아주반트를 포함하는 조성물의 실시양태가 본원에 개시되어 있다. 불활성화된 항원은 임의의 적합한 항원, 예컨대 박테리아 및/또는 바이러스 조류 질병으로부터의 항원일 수 있다. 조성물은 조류에 대한 점막 투여, 예컨대 경구, 비강, 안구, 질 또는 항문 투여, 또는 그의 조합을 위해 제형화될 수 있다. 조성물은 조류에서 면역 반응을 자극할 수 있으며, 이에 의해 대상체가 나중에 살아있는 유기체에 노출됨으로써 챌린지될 때 질병의 중증도 및 발병률을 감소시키는데 도움이 될 수 있다. 면역 반응은 IgA 면역 반응 및 또한 IgY 반응을 포함할 수 있다.

개시된 조성물에서 사용하기 적합한 예시적인 항원은 임의의 적합한 조류 박테리아 또는 바이러스 질병으로부터의 불활성화된 항원을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 하나 이상의 박테리아 및/또는 바이러스, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10종 또는 그 초과의 박테리아 및/또는 바이러스로부터 획득된 항원을 포함한다. 특정 개시된 실시양태에서, 조성물은 하기 유기체 중 하나 이상으로부터 획득된 불활성화된 항원을 포함한다: 클로스트리디움 종, 예컨대 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 C, 클로스트리디움 셉티쿰, 또는 클로스트리디움 콜리눔; 헤모필루스 파라갈리나룸 (코리자); 에스케리키아 종, 예컨대 이. 콜라이; 살모넬라 종, 예컨대 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 또는 살모넬라 엔테리디티스; 파스테우렐라 종, 예컨대 파스테우렐라 물토시다, 또는 파스테우렐라 헤몰리카; 스타필로코쿠스 종; 미크로코쿠스 종; 캄필로박터 종, 예컨대 캄필로박터 헤파티쿠스, 캄필로박터 제주니, 또는 캄필로박터 콜라이; 아비박테리움 종; 악티노바실루스 종; 네이세리아 종; 에리시펠로트릭스 종; 모락셀라 종; 조류 클라미디아증 (클라미디아); 갈리박테리움 종, 예컨대 갈리박테리움 아나티스; 슈도모나스 종; 로도코쿠스 종; 세라티아 종; 스트렙토코쿠스 종; 조류 미코플라스마 종 (미코플라스마); 조류 콕시디아증 (콕시디아); 레오바이러스 (REO); 조류 인플루엔자 바이러스 (IAV-A); 감염성 기관지염 바이러스 (IBV); 뉴캐슬병 바이러스 (NDV); 가금류 아데노바이러스 (FA); 감염성 윤활낭병 (IBD); 마렉병 (MDV); 닭 빈혈 (CAV); 감염성 후두기관염 (ILTV); 조류 뇌척수염 (AEV); 조류 간염 (HEV); 오리 간염 (DHV); 칠면조 출혈성 장염 (THEV); 또는 산란 저하 증후군 바이러스 (EDS).

일부 실시양태에서, 불활성화된 항원은 전체 배양 박테리아; 전체 배양 바이러스; 배양물로부터 추출되거나 분리된 박테리아 또는 바이러스로부터 획득된 서브유닛; 세포로부터 추출되거나 분리된 서브유닛; 주요 관심의 특정한 박테리아 또는 바이러스(들) 이외의 재조합 유기체로부터 획득되지만, 주요 관심의 박테리아 또는 바이러스(들)에 의한 감염 또는 챌린지에 대항하여 보호하는 항원; 또는 그의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 주요 관심의 박테리아 또는 바이러스(들)는 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 이. 콜라이, 및/또는 살모넬라 종, 예컨대 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 또는 살모넬라 엔테리디티스를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이러한 항원은 또한, 전형적으로 조류에 투여되는 다른 항원과 조합될 수 있다. 이러한 부가의 항원은 본원에 개시된 박테리아 및/또는 바이러스로부터의 항원을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

조성물은 불활성화된 항원 및 적합한 아주반트, 예컨대 점막 또는 점막부착 아주반트를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 점막 아주반트는 카르비겐™; 말레산 무수물, 예컨대 에틸렌 말레산 무수물 또는 폴리에틸렌 말레산 무수물; 알루미늄 염, 예컨대 수산화알루미늄 또는 인산알루미늄; 에멀시겐®, 에멀시겐®-D (디메틸디옥타데실암모늄 브로마이드(DDA) 함유), 에멀시겐®-BCL (블록 공중합체 면역자극제 함유), 및 에멀시겐®-P (독점 면역자극제 함유)를 포함한 에멀시겐® 기반 아주반트 (피브로 동물 보건 코포레이션; 미국 네브래스카주 오마하); 키토산, 히드록시메틸 키토산, 유중수 에멀젼; 수중유 에멀젼; VetSap, QS21 (안티제닉스; 미국 매사추세츠주 프레이밍햄)을 포함한 사포닌 및 사포닌의 유도체; 폴리아크릴산; 저분자량 공중합체, 예컨대 폴리겐™ [피브로 동물 보건 코포레이션 (미국 네브래스카주 오마하)으로부터 입수가능함]을 포함한 공중합체; 카르보폴 기반 아주반트; 합성 폴리뉴클레오티드, 예컨대 CpG 모티프를 함유하는 올리고뉴클레오티드 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,207,646); 트리겐™; 폴리-IC; 폴리-ICLC; 몬타니즈; 또는 그의 조합이다. 특정 실시양태에서, 아주반트는 카르비겐™, 폴리아크릴산, 사포닌, 폴리겐™, 에틸렌 말레산 무수물, ENABL®, 또는 그의 조합이다. 바람직한 실시양태에서, 아주반트는 0 초과 내지 80% 이상 (v/v), 예컨대 0.5% 내지 80%, 1% 내지 80%, 5% 내지 80%, 10% 내지 80%, 10%에서 70%, 10% 내지 60% 또는 10% 내지 50%의 조성물 중 농도로 존재한다. 일부 실시양태, 예컨대 눈에 투여하기 위해 제형화된 특정 실시양태에서, 아주반트 농도는 0.5% 내지 25% (v/v) 이상, 예컨대 5% 내지 25%, 예컨대 10% 내지 20%일 수 있다. 다른 실시양태, 예컨대 겔 투여하기 위해 제형화된 특정 실시양태에서, 아주반트 농도는 15% 내지 40% (v/v) 이상, 예컨대 15% 내지 35% 또는 20% 내지 30%일 수 있다. 분무 제형의 경우, 아주반트는 0.5% 내지 80% (v/v) 이상, 예컨대 0.5% 내지 50%, 1% 내지 50%, 5% 내지 50% 또는 10% 내지 50%의 농도를 가질 수 있다. 그리고 다른 특정 실시양태, 예컨대 음용수에 부가하기 위해 제형화된 실시양태에서, 아주반트 농도는 0.5% 내지 80% (v/v) 이상, 예컨대 15% 내지 80%, 또는 20% 내지 80%일 수 있다. 이러한 실시양태에서, 그 결과로 생성된 조성물은 물 중 0 초과 내지 20% (v/v) 이상, 예컨대 5% 내지 15% 또는 10% (v/v)의 농도로 물에 부가되어 음용수 조성물을 형성할 수 있다. 음용수 조성물은 또한, 새의 부리를 염색함으로써 특정한 새가 물을 마셨는지 여부를 나타낼 수 있는 착색 염료를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 조성물은 비히클, 보존제, 중화제, 계면활성제, 불활성화제, 세포 단편, 배지, 또는 그의 임의의 조합을 추가로 포함할 수 있다. 비히클은 각각의 점막에 자극을 일으키지 않는 임의의 적합한 비히클일 수 있다. 비히클은 희석제, 예컨대 물, 수성 식염수, 인산염 완충 식염수 (PBS), 배양 배지, 또는 그의 조합, 또는 개시된 조성물의 다른 성분과 조합하여 사용될 수 있는 기타 공지된 물질일 수 있다.

보존제는 개시된 조성물에서 사용하기 적합한 임의의 보존제일 수 있다. 예시적인 보존제는 겐타마이신, 페니실린, 스트렙토마이신, 폴리믹신 B, 포름알데히드, 포르말린, 티메로살, 또는 그의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 개시된 조성물에서 사용하기 적합한 불활성화제는 포름알데히드, 포르말린, 바이너리 에틸렌이민, 티메로살, 베타 프로피오락톤, 디터전트, 예컨대 NP40 및 트리톤 X 100, 및 그의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 부가적으로 또는 대안적으로, 개시된 조성물은 중화제, 예컨대 티오황산나트륨 및/또는 중아황산나트륨을 포함할 수 있다. 및/또는 계면활성제가 존재할 수 있고 코 점막에 의한 대상 단백질의 흡수를 증강시킬 수 있다. 적합한 계면활성제는 트윈, 스팬 및 디터전트, 예컨대 NP40 및 트리톤 X 100, 또는 그의 임의의 조합을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 조성물에 존재하는 경우, 계면활성제, 예컨대 디터전트는 0 초과 내지 100% 미만, 예컨대 0 초과 내지 50%, 0 초과 내지 35% 또는 0 초과 내지 25%의 양으로 존재할 수 있다. 그러나, 조성물의 특정 실시양태는 계면활성제를 포함하지 않는다.

그리고 세포 단편 및/또는 배지는 항원이 불활성화될 때 형성된 세포의 단편 및/또는 박테리아 또는 바이러스가 항원을 생산하기 위해 배양된 배지를 포함할 수 있다. 조성물에 존재하는 경우, 세포 단편 및/또는 배지는 0 초과 내지 100% 미만, 예컨대 0 초과 내지 75%, 0 초과 내지 65% 또는 0 초과 내지 50%의 양으로 존재할 수 있다. 그러나, 조성물의 특정 실시양태는 세포 단편 및/또는 배지를 포함하지 않는다.

특정한 실시양태에서, 조성물은 불활성화된 항원, 예컨대 씨. 페르프린겐스 유형 A, 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스, 및/또는 이. 콜라이로부터의 항원, 폴리아크릴산 아주반트, 예컨대 카르비겐™, 포름알데히드, 및 임의로, 세포 단편 및/또는 성장 배지를 포함한다.

일부 실시양태에서, 조성물은 PBS 및/또는 식염수 용액을 포함한 식염수 용액을 포함하지 않거나 PBS가 조성물에 부가되지 않는다. 그러나, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 사용되는 성장 배지에 식염수가 존재하는 경우 조성물의 특정 실시양태가 잔류량의 식염수를 포함할 수 있음을 이해할 것이다.

일부 실시양태에서, 조성물은 에멀젼이 아니고, 예를 들어 나노에멀젼이 아니고/거나 오일 기반 에멀젼이 아니다.

일부 실시양태에서, 조성물은 0 초과 내지 2% (w/v) 염화나트륨 용액, 예컨대 0.1% 내지 1.9%, 0.2% 내지 1.8%, 0.3% 내지 1.7%, 0.4% 내지 1.6%, 0.4% 내지 1.5%, 0.4% 내지 1.4%, 0.4% 내지 1.3%, 0.5% 내지 1.2%, 또는 0.5% 내지 1.1%, 또는 0.5% 내지 1% (w/v) 염화나트륨 용액의 오스몰농도을 갖는다. 특정 실시양태에서, 조성물은 조류 조직 세포의 오스몰농도, 전형적으로 약 0.5-0.9% (w/v) 염화나트륨 용액의 오스몰농도와 실질적으로 동일한 오스몰농도를 갖는다. 특정 실시양태에서, 조성물은 실질적으로 등장성 오스몰농도를 가지며, 300 내지 312 mOsm/L일 수 있다.

일부 실시양태에서, 조성물은 6.5 내지 7.5의 pH를 갖는다.

일부 실시양태에서, 조성물은 0 초과 내지 6 mPa·s 이상, 예컨대 0 초과 내지 5 mPa·s, 1 mPa·s 내지 5 mPa·s, 또는 2 mPa·s 내지 5mPa·s의 점도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 점도는 5 mPa·s 미만, 예컨대 0 초과 내지 5 mPa·s 미만, 1 mPa·s 내지 5 mPa·s 미만, 또는 2 mPa·s 내지 5 mPa·s 미만이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 개시된 조성물이 본원에 기재된 바와 같이 새가 쪼아먹는 것과 같은 겔로서 제형화될 때, 겔 조성물이 액상 제형, 예컨대 분무 또는 점안 제형의 점도보다 실질적으로 더 큰 점도를 가질 것임을 이해할 것이다. 그리고 음용수에 부가하기 위해 제형화된 실시양태에서, 그 결과로 생성된 음용수 조성물의 점도는 전형적으로, 음용수에 부가되기 전의 아주반트 부가된 면역원성 조성물의 점도보다 더 낮은 점도를 가질 것이다.

일부 실시양태에서, 조성물은 자가 불활성화된 백신에 사용된다. 자가 백신은 감염된 무리의 동물로부터 획득된 생물학적 샘플로부터 단리된 박테리아 또는 바이러스 균주로부터 생산된다. 따라서, 자가 백신은 종종 균주 특이적이므로, 처방전 없이 살 수 있는 제너릭 백신보다 더 나은 결과를 초래할 수 있다. 자가 백신은 생물학적 샘플을 공급한 수의사만 입수가능할 수 있지만, 동일한 수의사를 이용하는 경우에는 질병이 확산될 우려가 있는 경우 동일한 지역의 인접 업체 또는 위험에 처한 업체도 그 제품을 입수할 수 있게 된다.

대안적으로, 조성물은 미국 뿐만 아니라 규제 요건을 충족하는 다른 국가 어디에서나 판매될 수 있는 완전 허가된 백신에 사용될 수 있다.

특정한 실시양태에서, 조성물은 80% 내지 100% 미만의 물, 예컨대 적어도 85% 물, 적어도 90% 물 또는 적어도 95% 물을 포함한다. 조성물은 수성 기반 아주반트, 예컨대 폴리아크릴산을 포함하는 수성 기반 아주반트를 포함할 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이러한 조성물이, 예를 들어 0.5% 내지 50% 아주반트, 예컨대 1% 내지 50%, 5% 내지 50%, 10% 내지 50%, 또는 15% 내지 50% 아주반트를 포함하는 경우, 수성 기반 아주반트는 또한 물을 포함하고, 따라서 조성물은 최대 50% 아주반트 및 최대 95% 물 둘 다를 포함할 수 있다는 것을 이해한다.

특정 실시양태에서, 수성 기반 아주반트는 폴리아크릴산 기반 아주반트이다. 일부 실시양태에서, 이러한 폴리아크릴산은 물에서 현탁액을 형성할 수 있다. 현탁액은 250 nm 초과 내지 10 마이크로미터 이상, 예컨대 300 nm 내지 10 마이크로미터, 500 nm 내지 10 마이크로미터, 1 마이크로미터 내지 10 마이크로미터, 1 마이크로미터 내지 5 마이크로미터, 또는 1 마이크로미터 내지 3 마이크로미터의 크기를 갖는 폴리아크릴산 입자를 포함할 수 있다.

임의의 실시양태에서, 조성물은 원하는 경로에 의한 투여에 적합한 최종 조성물을 만들기 위해, 최종 사용자, 예컨대 물에 의해 희석될 수 있다. 일부 실시양태에서, 원하는 경로는 분무이고, 최종 조성물을 만드는 것은 조성물을 물로 희석하여 0 초과:1 내지 2 이상:1 물:조성물, 예컨대 0.5:1 내지 1.5:1 물:조성물, 또는 약 1:1 물:조성물의 물:조성물 비율을 형성하는 것을 포함할 수 있다.

IV. 투여

일부 실시양태에서, 조성물은 조류에 점막으로, 예컨대 경구, 국소 또는 안구로 투여된다. 예시적인 조류는 산란계, 종계 및 육계를 포함한 닭, 칠면조, 거위, 오리, 콘월 게임 암탉, 메추라기, 자고새, 꿩, 뿔닭, 타조, 에뮤, 백조, 또는 비둘기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서 조류는 닭 또는 칠면조이다. 조성물은 임의의 연령의 조류에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 초기 투여는 부화일 내지 14일령, 예컨대 부화일 내지 10일령, 부화일 내지 5일령, 또는 부화일 내지 3일령의 조류에 대한 것이다. 조성물은 제0일, 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일 또는 제10일에 투여될 수 있고, 일부 실시양태에서, 조성물은 부화일에, 예를 들어 분무에 의해 투여된다. 또한 도체 프로세싱 후 7일 이내까지 투여할 수 있다. 또한, 조류의 일생 동안 음용수 중에 매일 투여할 수 있다.

조성물을 조류에 점막으로 투여하는 것은 전형적으로, 면역 반응, 예컨대 IgA 면역 반응 및/또는 IgY 반응을 초래한다. 면역 반응은 조류가 박테리아 또는 바이러스에 양성인 암탉으로부터 받을 수 있는 모체 항체를 극복하는데 도움이 될 수 있다. 이러한 모체 항체는 인 오보 배아로 전달될 수 있다. 조류가 인 오보 동안 모체 항체를 받은 다음, 부화 후 비경구 백신접종을 받게 되면, 모체 항체는 종종 대상체가 자체 보호 항체를 생성하는 것을 차단한다. 점막 백신접종 방법, 예컨대 본원에 기재된 투여 경로는 조류에게 전달된 모체 항체의 효과를 극복하는데 도움이 될 수 있는 IgA 면역 반응을 야기할 수 있다.

점막 투여, 에컨대 경구, 국소 또는 안구 투여를 위한 면역원성 조성물은 다른 경로, 예컨대 근육내 또는 피하 경로에 의해 투여되는 조성물에 비해 몇 가지 이점이 있다. 그 이점은 하기를 포함하나 그에 제한되지는 않는다: 1) 인도적 기술을 사용하여 어린 새를 보호하는 것; 2) 어린 새를 스트레스가 많은 바늘 주사에 노출시키지 않는 것; 3) 질병을 유출시키고 확산시킬 수 있는 생 또는 변형된 생 유기체를 새에게 주사하는 것을 포함하지 않는 것; 4) 어린 새가 어미로부터 전달된 임의의 모체 IgY 항체의 효과를 극복할 수 있는 IgA 항체를 발생하도록 허용하는 것; 5) 어떠한 주사 부위 병변도 남기지 않으므로 0일 인출 시간을 허용하는 것; 6) 투여하기가 더 용이하고 작업량을 감소시키는 것; 7) 작업자의 우발적인 자기 주사 위험을 감소시거나 실질적으로 제거하는 것; 및/또는 8) 돌발에 직면하여 질병 확산을 막기 위해 투여될 수 있다는 것. 다른 이점은 하기 설명과 실시예 섹션으로부터 명백할 수 있다.

일부 실시양태에서, 개시된 조성물은 조류에 점막 투여하기 위해 제형화된다. 점막 투여는 경구, 안구, 비강, 국소 및/또는 항문 투여를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 조성물은 안구로, 예컨대 점안제 또는 분무에 의해 전달된다. 다른 실시양태에서, 조성물은 경구로 투여되고, 새에 분무하거나 조성물을 포함하는 겔을 제공하여 새가 겔/조성물 혼합물을 쪼아 먹도록 함으로써 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 겔은 다른 새가 겔 반점을 쪼도록 새의 등에 국소적으로 투여된다. 겔은 쪼는 것을 유인하기 위해, 예컨대 적색 또는 청색으로 착색될 수 있다. 이러한 실시양태에서, 아주반트 부가된 면역원성 조성물은 이러한 아주반트 부가된 면역원성 조성물의 유효량을 새(들)에게 제공하기에 적합한 비율로 겔화제를 포함하는 겔화 조성물과 혼합된다. 그 비율은 25:75 (면역원성 조성물:겔화 조성물) 내지 75:25, 예컨대 34:66 내지 66:34, 또는 40:60 내지 60:40일 수 있고, 일부 실시양태에서, 비율은 50:50이다.

대안적으로, 조성물은 새가 섭취할 수 있는 액체 또는 현탁액으로서 제공될 수 있다. 액체 또는 현탁액은 음용 액체로서 제공될 수 있거나, 또는 액체 또는 현탁액으로서 새에 분무될 수 있다. 일부 실시양태에서, 새에 분무하는 것은 조성물을 안구로, 비강으로, 국소로 및/또는 경구로 눈, 비강, 후비공 능선 및/또는 입에 직접적으로 투여할 수 있거나, 또는 간접적으로, 예컨대 새들이 서로를 쪼거나 자신의 깃털을 다듬을 때 조성물을 섭취함으로써 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 조성물을 분무하는 것은 조성물을 안구로, 비강으로 및 임의로 경구로 투여하는 것이다.

일부 실시양태에서, 점막 투여에 적합한 조성물의 용량은 새당 0.15 mL 이하 내지 새당 0.35 mL 이상, 예컨대 새당 0.2 mL 내지 새당 0.3 mL, 또는 새당 약 0.25 mL이다. 예를 들어, 분무 또는 음용수 제공에 의해 점막으로 투여되는 경우, 조성물은 15 mL 이상/100마리 새 내지 35 mL 이상/100마리 새, 예컨대 20 mL/100마리 새 내지 30 mL/100마리 새 또는 약 25 mL/100마리 새의 양으로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 각각의 새는 이론적으로 조성물의 용량의 약 80%, 예컨대 0.25 mL 용량을 받는다.

개시된 조성물의 일부 실시양태는 조성물이 투여되는 개체의 >50%, 전형적으로 >80%, >85%, >90%, 또는 >95%에서 ELISA에 의해 측정된 바와 같이 항체의 보호 수준을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서, 점막부착 조성물은 또한 부화 후 조류의 초기 성장 기 전반에 걸쳐 박테리아 및/또는 바이러스 균주, 예컨대 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스 및/또는 이. 콜라이에 대항한 항체의 보호 수준을 유지할 수 있다. 따라서, 특정 실시양태에서, 조성물은 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스 및/또는 이. 콜라이, 및/또는 다른 조류 질병, 예컨대 본원에 열거된 질병에 대항한 지속적인 면역 반응을 초래할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, "지속적인 면역 반응"은 부화에서 성충까지의 성장 기간 전반에 걸쳐 조류를 보호할 수 있는 보호 항체 면역 반응을 지칭한다.

조류 질병, 예컨대 본원에 개시된 질병의 하나 이상의 균주, 예를 들어 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스 및/또는 이. 콜라이로부터의 불활성화된 항원을 포함하는 면역원성 조성물의 실시양태 - 여기서 각각의 균주는 독립적으로 10² CFU/mL 초과, 바람직하게 10⁵ CFU/mL 초과, 보다 바람직하게 10⁷ CFU/mL 초과 역가로 성장한다 - 는 병아리에서 높은 IgA 항체 역가를 유도한다.

일부 실시양태에서, 개시된 조성물은 불활성화된 백신이다.

조류는 개시된 조성물의 단일 용량을 받을 수 있지만, 대안적인 실시양태에서, 개시된 조성물의 초기 투여 후에, 하나 이상의 조류 질병, 예컨대 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스 및/또는 이. 콜라이의 하나 이상의 균주로부터 획득된 하나 이상의 불활성화된 항원을 포함하는 조성물의 1회 이상의 부가의 투여가 필요할 수 있다. 제2 투여는 초기 투여 후 0일 초과 내지 6주 이상, 예컨대 초기 투여 후 1일 내지 6주, 1일 내지 5주, 1일 내지 4주, 5일 내지 3주, 5일 내지 20일, 10일 내지 20일, 또는 10일 내지 15일일 수 있다. 제2 투여 및/또는 다수 부스터 투여는 번식, 산란 또는 심지어 애완용으로서 사용되는 조류의 일생 동안 제공될 수도 있다. 이러한 제2 투여, 및 임의의 후속 투여는 또한, 점막으로, 예컨대 분무에 의해 전달될 수 있거나, 또는 대안적으로 비경구로 전달될 수 있고 점막 및/또는 비-점막부착 아주반트를 포함할 수 있다. 예를 들어, 제2 및/또는 부가의 투여는 점막, 예컨대 경구, 국소 또는 안구; 근육내; 피하; 복강내; 정맥내; 또는 그의 조합이 될 수 있다. 특정 실시양태에서, 개시된 조성물은 적어도 2회 투여되고, 제1 및 제2 투여 둘 다는 점막 투여 경로를 통해, 예컨대 분무에 의해 이루어진다. 그러나 다른 실시양태에서, 제1 투여는 점막이지만 제2 및/또는 후속 투여(들)는 비-점막 경로에 의한 것이다.

일부 실시양태에서, 제2 및/또는 후속 투여에 의해 투여되는 조성물은 초기에 투여되는 조성물과 동일하며, 예컨대 실질적으로 동일한 농도의 동일한 항원 및 아주반트를 포함한다. 그러나 다른 실시양태에서, 제2 및/또는 후속 투여는 둘 다 또는 모든 투여가 동일한 투여 경로에 의한 것이더라도 초기 투여와 상이한 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 제2 및/또는 후속 투여로서 투여되는 조성물은 상이한 항원 및/또는 상이한 아주반트를 포함할 수 있고/거나 항원 및/또는 아주반트의 농도는 초기 조성물에서의 농도와 상이할 수 있다.

V. 실시예

실시예 1

괴사성 장염은 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A에 의해 유발되는 어린 닭의 심각한 위장병이다. 현재, 이러한 질병을 예방하거나 치료할 수 있는 상업적으로 이용가능한 백신이 없다. 연구의 초점은 점막부착 아주반트로 아주반트 부가된 사멸 항원을 사용하는 다양한 백신접종 방법이 보호를 제공할 수 있었는지 확인하는 것이다.

A. 씨. 페르프린겐스의 성장

씨. 페르프린겐스 유형 A로 인한 사망을 경험한 생산자로부터 여러 장 조직 샘플을 획득하였다. 장 내용물을 혐기성 박테리아의 단리에 특이적인 혈액 한천 플레이트 위에 놓아두었다. 5개의 단리물을 획득하였다. 그런 다음 각각의 단리물을 혐기성 조건 하에 인큐베이션한 플라스크 내의 레이크-쉽 혈액 한천 상에 스트리킹한 다음, 0.1% 덱스트로스와 1% 황산아연을 함유하는 변형된 트립신 분해 콩 브로스에 접종하였다. 성장이 획득된 후, 각각의 성장된 단리물은 PCR을 사용하여 알파 독소, 베타 2 독소 및 뉴라미니다제 뿐만 아니라 TpeLsc 및 NetB 유전자의 생산에 대해 분석하였다. 표 1은 이러한 시험의 결과를 제공한다. 장 샘플 4는 가장 높은 알파 독소를 생산하므로, 백신 생산을 위해 선택되었다. 단리물 시드를 0.1% 덱스트로스와 1% 황산아연이 보충된 트립신 분해 콩 브로스에 접종하고 37℃에서 약 8시간 동안 혐기적으로 인큐베이션하였다. 성장이 완료된 후, 유기체의 불활성화를 위해 1% v/v 포름알데히드를 부가하였다. 7일 후, 포름알데히드를 중아황산나트륨으로 부분적으로 중화시켰다. 그런 다음 불활성화된 배양물을 2개의 분취액으로 나누었다. 하나의 분취액은 15% v/v 카르비겐™으로 아주반트 부가된 반면, 다른 분취액은 20% v/v 농도의 카르비겐™으로 아주반트 부가되었다.

표 1. 씨. 페르프린겐스 단리 및 시험 결과

B. 백신접종/챌린지 연구 프로토콜

갓 부화한 병아리를 각각 30마리씩 10개 그룹으로 나누었다. 5가지 처리가 있었고, 각각은 2개 그룹의 병아리를 포함하였다 (처리당 병아리 총 60마리). 병아리를 제0일에 받고 체중을 측정하고, 뉴캐슬병 백신을 접종하며 콕시디아로 챌린지시킨 후, 표 2에 기재된 바와 같이 상기 섹션 A에 따라 제조된 처리로 부화일 (제0일)에 이들을 처리하였다.

표 2. 씨. 페르프린겐스 연구를 위한 처리 그룹

제7일에, 처리 그룹 4의 새들에 부스터를 투여하였다. 모든 새를 제0일부터 제17일까지 스타터 사료에 놓아 두었다가 챌린지시켰다.

제17일에, 모든 새의 체중을 다시 측정하고 사료를 통해 독성 씨. 페르프린겐스로 챌린지하였다. 스타터 사료의 무게를 다시 측정한 다음, 새를 육성용 사료에 놓아두었다. 제21일에, 우리당 10마리의 새를 꺼내고 공장 조직을 대상으로 병변의 점수를 매겼다. 제28일에, 새의 체중을 다시 측정하고, 남아 있는 모든 새의 공장 조직 샘플을 채취하며 육성용 사료의 무게를 다시 측정하였다. 연구 전반에 걸쳐, 죽은 모든 새를 부검하고 사망 원인을 기록하였다.

C. 백신접종/챌린지 연구 결과

표 3 및 도 1 및 2는 본 연구에 대한 사망률 및 장 병변 결과를 나타낸다. 사용된 모델은 대략 15%의 사망률을 야기하는 것으로 가정되었다. 그러나, 이것은 정상보다 더 강력하여, 대조군에서는 35%의 사망률을 초래하였고 다른 백신접종 그룹의 일부에서는 최대 40%의 사망률을 초래하였다.

표 3. 각각의 처리 그룹에 대한 사망률 및 장 병변 결과

처리 그룹 4는 대조군 처리 그룹 5와 비교하여 괴사성 장염과 관련된 사망률을 52% 초과만큼 감소시킴으로써 보호를 명확히 보여주었다. 다른 모든 그룹은 대조군과 비교하여 보호를 나타내지 않았다. 처리 그룹 2와 3은 대부분의 변형된 생 백신에 사용되는 국소 적용 절차를 사용하였다. 변형된 생 백신을 사용하면 유기체는 살아 있고 새가 서로 쪼거나 깃털을 다듬을 때, 이들은 살아 있는 유기체로 백신접종을 받았다.

장 병변 분석은 또한, 처리 그룹 4가 장 병변에 있어서 26.6% 감소를 보인 반면, 다른 처리 그룹은 대조군으로부터 어떠한 변화도 보여주지 않았다는 것을 나타내었다.

그 결과는 불활성화된 항원을 포함하는 개시된 조성물이 괴사성 장염으로부터의 보호를 제공한다는 것을 입증해주었다. 불활성화된 백신을 점막으로 투여한 다음, 씨. 페르프린겐스를 이용한 과중한 챌린지로 병아리를 챌린지함으로써 얻어진 이러한 보호는 매우 중요한 결과인데, 이는 이러한 유기체에 의해 야기된 괴사성 장염 사망률을 감소시키는 것으로 밝혀진 다른 백신이 없었기 때문이다.

실시예 2

연구 환경에서 획득된 결과가 현장에서 반복되는지 여부를 결정하기 위해, 괴사성 장염으로 인해 심각한 문제를 경험하고 있는 시설의 현장 연구에서 점안제/후비공 능선 적용을 반복하였다. 1700마리의 새를 사용하여 그 결과가 통계적으로 유의할 것이라는 사실을 보장하였다.

이러한 연구에서는, 높은 알파 독소 수준을 명확히 보여주는 실시예 1로부터의 씨. 페르프린겐스 유형 A 단리물 중 2개 (단리물 4 및 단리물 1)를 사용하여 기원 무리에서 평가를 위해 사용될 박테린을 제조하였다. 이들은 프로테오스 펩톤, 효모 추출물, 덱스트린, 인산칼륨 일염기성, 락트알부민 가수분해물, L-시스테인, N-Z 아민 및 탈이온수를 함유하는 씨. 페르프린겐스 배지에서 성장시켰다. 수산화나트륨으로 pH를 약 7로 조정하였다. 시드 배양물을, 상기 배지를 함유하는 용기에 접종하였다. 단리물 4는 2리터 용기에 접종하고 단리물 1은 1리터 용기에 접종하였다. 용기를 37℃에서 8시간 동안 혐기적으로 인큐베이션한 후, 배양물을 수거하고 30-36℃에서 7일 동안 1% 포르말린 v/v로 불활성화시켰다. 불활성화가 완료된 후, 중아황산나트륨을 부가하여 포르말린을 중화시킨 다음, 배양물 둘 다를 20% 카르비겐™으로 아주반트 부가하여 밤새 계속 혼합하였다. 혼합이 완료된 후, 불활성화된 및 아주반트 부가된 배양물을 하나의 일련의 박테린으로 조합하였다.

일련의 박테린은 단리물을 획득한 시설로 운송되었고, 점안제/후비공 능선 방법을 사용하여 새로 부화한 1800마리의 병아리에 백신접종을 하는데 사용되었다. 동일한 사육장에서, 동일한 부화로부터 새로 부화한 22,100마리의 병아리를 대조군으로서 백신접종하지 않은 채로 두었다. 백신접종군은 연구 종료 시 부스터링 및 성능을 추적할 수 있도록 식품에 허용되는 염료로 표시되었다. 제7일에, 백신접종된 병아리를, 새로 부화했을 때 사용된 것과 동일한 방법으로 부스터링하였다.

모든 병아리를 모니터링하여 각각의 그룹에 대한 사망체를 기록하였다. 그 결과가 하기 표 4에 제시된다. 데이터에 대해 카이-제곱 시험을 시행하였다. 그 결과는 백신접종을 받은 것의 생존가능성에서 통계적으로 유의한 개선 (P<0.01)이 있었으며, 그 생존가능성은 1.326%임을 보여준다. 이러한 데이터는 불활성화된 항원과 카르비겐™ 아주반트 부가된 백신 (또는 박테린)을 점막에 적용하여 사용한 경우의 CQR 연구 결과가, 어린 닭에서 괴사성 장염을 유발하는 씨. 페르프린겐스와 관련된 사망을 유의하게 감소시킬 수 있다는 것을 명확히 입증해준다.

표 4. 연구 종료 시 사망률 결과

실시예 3

실시예 2에 기재된 바와 같이, 괴사성 장염으로 닭을 잃은 두 번째 가금류 생산자로부터의 죽은 닭으로부터 단리물을 획득하였다. 단리물을 성장시키고, 불활성화시키며, 실시예 2에 기재된 바와 같이 20% 농도의 카르비겐™으로 아주반트 부가하였다. 본 실험에서는, 병아리를 2개 그룹으로 분할하였으며, 각각의 그룹은 11,950마리의 새를 포함한다. 하나의 그룹은 병아리를 스프레이 캐비넷에 놓아두고 본원에 개시된 바와 같이 불활성화된 씨. 페르프린겐스 카르비겐-아주반트 부가된 백신을 분무함으로써 백신접종하였다. 병아리가 적절한 백신접종을 받았는지 확인하기 위해 스프레이 캐비닛을 두 번 통과시켰다. 백신접종된 병아리를 구획으로 분리하여 백신접종되지 않은 대조군과 분리하였다. 10일령에, 백팩 분무기로 분무함으로써 백신접종군을 부스터링하였다. 각각의 그룹에서 총 사망률만 기록되었다. 이러한 연구의 결과가 표 5에 제시된다.

표 5. 연구 종료 시 사망률 결과

17일령에, 백신접종된 새 중 131마리가 사망한 반면, 백신접종되지 않은 대조군 새에서는 283마리가 사망하였다. 이는 사망체가 54% 감소한 것이다. 부가적으로, 무리 감독관은 백신이 괴사성 장염으로 인한 사망 뿐만 아니라 괴사성 장염과 관련이 없는 것으로 보이는 질병과 관련된 사망으로부터 보호하는 것으로 나타났다고 보고하였다.

이들 결과는 상업적 절차를 사용하여 병아리에 본원에 개시된 바와 같은 불활성화된 카르비겐-아주반트 부가된 백신을 분무하는 것이 사망체의 현저한 감소를 초래하였음을 나타낸다.

실시예 4

불활성화된 살모넬라 켄터키를 부화일 및 14일령 병아리에 분무하였다

살모넬라 켄터키는 장관에서 간과 비장으로 쉽게 이동한다. 이 때문에, 에스. 켄터키는 육계 가공 공장으로부터 단리된 주요 살모넬라이며 육계 회사가 USDA 성능 표준에 실패하는 가장 흔한 원인이다. 에스. 켄터키는 가금류에서 이동을 방지하기에 가장 어려운 살모넬라 종 중 하나이기 때문에 부분적으로 사용되었으며, 따라서 종종 시험용 살모넬라 종으로서 사용된다. 전형적으로, 특정 처리로 인해 에스. 켄터키 이동이 감소되거나 실질적으로 방지되는 경우, 그러한 처리는 또한 가금류에서 다른 살모넬라 종에 의한 이동을 감소시키거나 방지할 것이다.

현재 미국 시장에 나와 있는 백신은 에스. 켄터키에 대항한 면역을 거의 또는 전혀 제공하지 않는다. 따라서, 본 연구의 목적은 본 개시내용에 따른 불활성화된 살모넬라 백신/아주반트 백신 및 분무 적용에 의한 2회 투여가 이러한 이동을 감소시키거나 맹장 내의 유기체 수를 감소시켜, 에스. 켄터키 챌린지로부터 닭을 보호할 수 있었는지 여부를 평가하는 것이다.

이러한 연구에서는, 1일령 육계에 개시된 백신의 1회 용량을 1일 (DOT 0)에 분무하고 14일에 다시 분무하여 백신접종하였다. 1일령의 모든 새에게 고유 번호가 태그부착되었다. 제30일에 모든 새를 함께 섞고, 이들에게 에스. 켄터키를 10⁷ CFU/병아리 용량으로 경구 위관 영양 공급하였다. 각각의 처리를 2회 반복하였다. 2가지 처리 (표 6) 각각은 절반 (1/2)으로 세분화된 격리실 둘 다에 표시되었다. 각각의 반복실험은 42마리의 병아리를 함유하였다. 배치된 총 병아리는 168마리였다.

표 6. 연구 설계

* 챌린지는 14일 백신접종에 대한 충분한 반응 시간을 확보하기 위해 제30일에 수행되었다.

절차

부하 168일의 로스 x 로스(Ross x Ross) 수컷 육계 병아리를 아비아겐 해처리 (Aviagen Hatchery; 미국 조지아주 블레어스빌)로부터 획득하였다. 새의 성별을 구분하고, 정기적인 백신접종 (HVTSB1)을 받았으며 부화장에서 종계 무리 수 정보를 기록하였다. DOT 0에, 모든 태그 번호는 무작위로 할당되었고 모든 병아리는 태그부착되었으며 태그 번호는 처리별로 기록되었다. 샘플은 무작위 표로부터 이전에 결정된 바와 같은 태그 번호로 제36일과 제43일에 취하였다.

백신은 병아리당 0.25 ml의 용적으로 새 1마리당 1회 용량으로만 1일령 (DOT 0)에 처리 2에 대해 거칠게 분무되었다. 그런 다음 제14일에, 처리 2로부터의 병아리를 우리 구석에 가두어 두고, 새 1마리당 0.25 ml의 1회 용량을 거친 스프레이로 분무하였다. 분무기는 병아리의 부리와 눈에 백신이 보급되는 것을 보장하였다.

새는 주변 습도 하에 사육되었고 1차 사육자의 권장 사항에 따라 조명 프로그램을 제공받았다. 배치 시, 각각의 우리에는 대략 4인치의 신선한 소나무 부스러기가 들어 있었다. 배설물 처리용 깔집은 연구 과정 동안 교체되지 않았다. 각각의 부문에는 1개의 튜브 피더와 1개의 벨 급수기가 포함되어 40마리의 새/피더 및 급수기 비율이 생성되었다. 사료와 급수는 마음대로 하였다. 모든 규정식은 113.5g/ton 암프롤리움(amprolium)을 함유하였다. 배급량은 하기과 같이 공급되었다: 스타터 DOT 0 내지 DOT 22, 육성용 DOT 22 내지 DOT 30, 피니셔 DOT 30 내지 DOT 43. 규정식은 크럼블 (스타터 사료) 또는 펠릿 (육성용 및 피니셔)으로서 공급되었다. 이러한 연구를 위한 사료 제형은 NRC 표준을 충족하거나 초과하기 위해 계산된 분석을 통해, 국소 제형을 대표하는 흔히 사용되고 있는 미국 사료와 혼합된 비-의약용의 상업적-유형 육계 스타터 및 육성용 규정식으로 이루어졌다. 어떠한 사료에도 항생제를 부가하지 않았다. 연구 기간 동안 동반 약물 요법은 사용되지 않았다. 교차 오염을 방지하기 위해, 우리에 들어갈 때 플라스틱 일회용 부츠를 착용하였고 각각의 우리마다 갈아신었다.

우리별 새 체중 (kg)은 연구 시작 (DOT 0), DOT 30 및 종료 (DOT 43)에 기록되었다. DOT 30에서, 모든 새에게 ~5.0 X 10⁷ CFU 날리딕식산 내성 살모넬라 켄터키의 병아리 용량에 대해 대략 10⁸ CFU/ml의 0.5 ml 용량을 경구 투여 (위관 영양 공급)하였다.

태그 번호에 의한 샘플링은 DOT 36 및 DOT 43에서 완료되었다. DOT 43에서, 그룹당 20개의 맹장 (간/비장이 아님)이 수집되었다. DOT 36에서, 반복실험 (40마리/처리)당 20마리의 새 간/비장 풀을 각각의 개별 우리로부터 취하고, 안락사시키며 (경추 탈구에 의함), 새에 의한 풀링된 간/비장 또는 맹장을 무균적으로 제거하였다. 제거한 후, 각각의 샘플을 하나의 멸균 플라스틱 샘플 백 [피셔 사이언티픽(Fisher Scientific)]에 놓아두고, 표지하며, 얼음 상에 저장한 다음, 살모넬라 분석을 위해 현지의 남부 가금류 연구 그룹 실험실로 옮겼다. 살모넬라 단리 및 확인을 위해 제출된 모든 샘플 (간/비장 풀 또는 맹장)은 살모넬라 켄터키 유기체 계수를 위해 멸균 월 팩(Whirl Pack) 백에 담긴 얼음 위에서 현지의 남부 가금류 연구 그룹 실험실로 가져갔다.

모든 새들은 일반적인 무리 상태, 온도, 조명, 물, 사료, 배설물 처리용 깔집 상태 및 예상치 못한 사육장 상태/사건에 대해 모니터링되었다. 그 결과는 정규 근무 시간 동안 매일 두 번 문서화되었다 (최종 연구일에 하나의 관찰이 기록됨). 하나의 관찰은 토요일, 일요일 및 관찰된 공휴일을 기록하였다. 우리 내의 사망률을 매일 확인하였다. 단지 고통을 덜어주기 위해 새를 도태시켰다. 도태된 (또는 죽은 채로 발견된) 임의의 새에 대해 날짜 및 제거 중량 (Kg)을 기록하고, 도태된 (또는 죽은) 모든 새에 대해 총체적 부검을 수행하고, 하기 정보를 기록하였다: 성별 및 가능한 사망 원인.

결과 -- 간/비장 살모넬라 유병률.

제36일에 2개의 격리실 각각에서 그룹당 20마리의 새로부터 조합된 간/비장 샘플을 수집하였다. 2개의 처리 그룹으로부터의 새를 격리실 둘 다에서 혼합하여 백신으로 스트레스를 가하였다. 간/비장 샘플에서의 살모넬라 유병률은 표 7에 요약되어 있다. 대조군 그룹의 40마리 새 중 32마리가 양성인 반면 백신접종군 그룹에서는 40마리 중 22마리만이 양성이었다. 따라서, 백신접종된 새는 백신접종되지 않은 새와 비교하여 간/비장 샘플에서 살모넬라 유병률이 유의하게 더 낮았다 (P = 0.010). 간/비장 샘플로부터 획득된 모든 살모넬라 단리물은 에스. 켄터키 챌린지 균주와 일치하는 혈청군 C2에 속하는 것으로 확인되었다.

표 7. 처리 그룹별 간/비장 샘플에서의 살모넬라 유병률 (%)

맹장 살모넬라 확률이 가장 높은 숫자 (MPN) - 배양 양성 샘플.

배양 양성 맹장 샘플에 대한 살모넬라 MPN은 표 8에 요약되어 있다. 백신접종군 그룹에서는 제36일과 제43일 사이에 MPN이 감소했지만, 처리의 유의한 효과는 없었고 (P = 0.994), 날짜의 유의한 효과도 없었으며 (P = 0.228), 처리 효과와 날짜 효과 간의 유의한 상호작용도 없었다 (P = 0.218). 처리 그룹의 별도의 비교가 각각의 날짜에 수행된 경우, 제36일 (P = 0.365) 또는 제43일 (P = 0.400)에 처리의 유의한 효과가 없었다.

2개의 맹장은 각각의 그룹에서의 다른 관찰보다 더 높은 MPN을 가졌다: 하나는 제36일에 백신접종된 그룹에서였고, 다른 하나는 제43일에 백신접종되지 않은 그룹에서였다. 이들 두 가지 관찰을 제외하면, 제36일의 백신접종된 그룹의 평균 (SE)은 2.36 (0.18) log₁₀ MPN/g로 감소되었고, 제43일의 백신접종되지 않은 그룹의 평균 (SE)은 2.13 (0.19) log₁₀ MPN/g로 감소되었다. 처리 효과 (P = 0.975), 날짜 효과 (P = 0.199), 및 날짜별 처리 상호작용 (P = 0.431)은 모두 유의하지 않았다.

표 8. 배양 양성 맹장 샘플에서의 처리 및 날짜별 추정 평균 (SE) 살모넬라 log ₁₀ MPN/g

성능/사망률

사료 섭취량/(최종 생 체중 + 사망 체중) 및 사망 원인을 계산하였다. 사망률은 부검 시 전체 병변에 의해 평가되었다. 그 결과가 표 9 및 10에 제시된다. 22일 또는 30일에 측정된 임의의 성능 파라미터에 있어서는 유의한 차이가 없었다. 처리 둘 다가 제30일에 혼합되었기 때문에, 최종 성능 차이를 결정할 수 없었다. 그러나 그룹 간의 사망률에 있어서는 차이가 있었다. 대조군 그룹에서는 새의 3.57%가 사망한 반면 백신접종군 그룹에서는 2.38%가 사망하였다.

표 9. 제0일 내지 제22일 성능 결과

표 10. 제0일 내지 제30일 성능 결과

결론.

상기 백신은 살모넬라 켄터키가 장에서 내부 장기로 이동하는 것을 감소시키는데 매우 성공적이었다. USDA는 이러한 장기를 포함하는 325 gm의 갈아 놓은 닭고기를 시험하기 때문에, 내부 장기가 양성의 갈아 놓은/오염된 가금류에 대한 살모넬라 공급원일 수 있다는 우려가 있었다. 에스. 켄터키는 육계의 내장을 콜로니화하는데 매우 효율적이라는 점도 주목해야 한다. 표 8에서 볼 수 있는 바와 같이, 백신접종된 처리에서 제30일부터 제43일까지 맹장 함량의 MPN/g의 더 큰 수치적 감소는, 백신이 맹장의 S.K. 수를 낮추기 시작했다는 것을 나타낼 수 있다. 부가적으로, 자가 백신은 육계 체중, 사료 효율 또는 생존가능성에 대한 해로운 영향이 없었다. 따라서, 개시된 방법 및 조성물을 사용한 살모넬라 켄터키에 대항한 백신접종은 살모넬라 발생률과 관련한 고기 품질을 상당히 개선시킬 수 있다.

실시예 5

다른 점막 투여 경로가 가금류 질병, 예컨대 괴사성 장염으로부터 효과적으로 보호할 수 있는지 여부를 결정하기 위해, 현장 연구가 시행되었다. 이러한 연구에서는, 부화 후 제3일에 분무 적용한 다음 10일령에 음용수를 적용하는 조합 적용을 평가하였다. 이러한 연구는 23,900마리의 새를 대상으로 시행되었다.

클로스트리디움 페르프린겐스에 의한 괴사성 장염의 돌발을 경험한 생산자에 의해 제공된 죽은 닭으로부터 단리물을 획득하였다. 이러한 단리물을 실시예 2에 기재된 바와 같이 성장시키고, 불활성화시키며, 20% 농도의 카르비겐™으로 아주반트 부가하였다.

단일 사육장에 있는 23,900마리의 병아리를 2개 그룹으로 분할하였으며, 각각의 그룹은 11,950마리의 새를 포함한다. 사육장 중앙에 칸막이가 있어 백신접종군과 대조군을 분리하였다. 대조군 새들은 사육장의 앞쪽 절반에 거주하고 백신접종군은 동일한 사육장의 뒤쪽 절반에 거주하였다. 3일령에, 11,950마리의 백신접종군 새들은 슈틸(Stihl) 백팩 분무기를 사용하여 분무 백신접종을 받았다. 백신은 1갤런의 증류수를 12,250회분의 백신에 부가하여 12,950회분에 충분하도록 용적을 증가시킴으로써 제조되었다. 노즐을 조정하는 동안 분무기와 관련된 손실이 있기 때문에 추가 용량을 준비하였다. 대조군 새들은 처리를 받지 않았다. 제10일에, 백신접종된 새들에게 음용수를 통해 부스터링하였다. 백신 투여 전, 몇 시간 동안 물을 공급하지 않은 후 백신을 함유한 물을 마실 수 있게 하였다. 이러한 경우, 백신 12,250회 분량이 음용수 1갤런당 백신 1온스의 비율로 비례기를 통해 음용수 시스템에 계량되었다. 대조군 그룹은 동일한 기간 동안 음용수를 보류했지만 그들이 마실 수 있는 음용수에는 백신이 부가되지 않았다. 괴사성 장염의 임상 징후에 대해 매일 새를 관찰하였다.

임상적 괴사성 장염은 무리 감독관에 의해 제17일에 시작되는 것으로 관찰되었다. 이것은 이러한 농장의 특정한 사육장에서의 이력과 일치하였다. 사망률은 3일 연속으로 지속되다가 제4일부터 감소하기 시작하였다. 사망률 결과는 표 11에 제시된다. 사망률은 상대적으로 낮았지만, 카이-제곱에서는 통계적으로 유의한 차이가 있었다 (P=0.0053). 따라서, 제3일에 분무 적용을 통해 투여되고 제10일에 경구 적용을 통해 투여된 백신은 괴사성 장염의 발병률을 유의하게 감소시켰다.

표 11. 연구 종료 시 사망률 결과

이러한 결과는 상업적 절차를 사용하여 본원에 개시된 바와 같은 불활성화된 카르비겐-아주반트 부가된 백신을 분무한 후 경구 적용하는 것이 괴사성 장염과 관련된 사망의 상당한 감소를 초래하였다는 것을 나타낸다.

실시예 6

실시예 1에 기재된 연구에서 이중 분무가 작동하지 않는 것으로 나타났지만, 분무 적용은 상업용 분무기를 사용하여 투여되지 않은 것으로 결정되었다. 따라서, 상업용 장비를 사용하여 현장 연구를 시행하였다. 이러한 연구에서는 부화 당일에 상업용 분무 챔버를 사용하여 분무 적용을 수행하였다. 이어서, 분무 적용된 부스터 용량을 10일령에 투여하였다. 이러한 연구는 33,500마리의 새를 대상으로 시행되었다.

클로스트리디움 페르프린겐스에 의한 괴사성 장염의 징후을 경험한 죽은 닭으로부터 단리물을 획득하였다. 단리물을 실시예 2에 기재된 바와 같이 성장시키고, 불활성화시키며 20% 농도의 카르비겐™으로 아주반트 부가하였다. 본 실험에서는, 33,500마리의 아비아젠 육계 병아리를 2개 그룹으로 분할하였으며, 각각의 그룹은 16,750마리의 새를 포함하였다. 새들은 중앙에 놓인 칸막이로 분리된 단일 사육장에 위치하였다. 대조군 새들은 사육장의 앞쪽 절반에 거주하고 백신접종되지 않았다. 백신접종군은 동일한 사육장의 뒤쪽 절반에 거주하였다.

첫 번째 백신접종 시, 100마리 병아리의 각각의 상자에 21 mL의 백신을 투여하도록 상업용 스프레이 캐비닛을 설치하였다. 이러한 투여를 통해, 각각의 새는 이론적으로 용량의 약 80%를 받았다. 용량은 정상적으로 0.25 mL일 것이다. 백신은 부화일 (제0일)에 이러한 스프레이 캐비닛을 통해 투여되었다. 10일령에, 백신접종된 새는 0.25 mL의 계산된 전체 용량으로 모델 SR430 슈틸 백팩 분무기를 사용하여 분무 백신접종되었다.

제2주부터 제5주까지 모든 새의 사망률을 관찰하였다. 사망률 결과가 표 12에 제시된다. 대조군 그룹에서는, 373마리가 사망한 반면 백신접종군 그룹에서는 289마리가 사망하였다. 그룹 간에 통계적으로 유의한 차이는 없었지만, 백신접종된 그룹에서는 사망률이 확실히 감소하였다. 이는 대조군과 비교할 때 백신접종군 그룹에서 사망률이 22.5% 감소한 것에 해당한다. 무리 감독관은 그 사육장에 이. 콜라이가 존재하였다고 보고하였다. 따라서, 사망체 중 일부는 이. 콜라이에 의한 것일 수 있다. 이것은 백신접종군 그룹 내의 사망체의 일부를 설명할 수 있다.

표 12. 연구 종료 시 사망률 결과

실시예 7

실시예 6에 기재된 연구에서 괴사성 장염의 수준이 낮기 때문에, 괴사성 장염으로 인한 사망률에서의 감소를 위한 불활성화된 클로스트리디움 페르프린겐스의 분무 적용을 평가하는 두 번째 연구는 3개의 가금류 사육장과 71,700마리의 새를 포함하는 두 번째 현장 시험에서 시행되었다. 프로토콜은 실시예 6에 기재된 것과 동일하였다. 다시, 각각의 사육장의 앞쪽 절반에 있는 새를 대조군으로 지정하고 각각의 사육장의 뒤쪽 절반에 있는 새를 백신접종군으로 지정하였다. 실시예 5에 기재된 바와 같이 백신을 제조하고 투여하였다. 따라서, 백신 용량 둘 다를 분무에 의해 투여하였다. 각각의 사육장에는 23,900마리의 새가 포함되어 있으며, 각각의 사육장에 있는 새 중 11,950마리는 백신접종되었고 나머지 11,950마리는 백신접종되지 않은 대조군으로 두었다.

5주 기간 동안 괴사성 장염과 관련된 사망률에 대해 새를 매일 관찰하였다. 다시 한번, 괴사성 장염은 이러한 연구 동안 최소화되었다. 각각의 사육장에 대한 사망률 결과가 표 13에 열거되어 있다. 사육장 #1에서는 대조군 그룹 중 45마리의 새가 사망하였고, 백신접종군 그룹 중 21마리의 새가 사망하였다. 사육장 #2에서는 대조군 그룹 중 61마리의 새가 괴사성 장염으로 사망하였고, 백신접종군 그룹 중 42마리가 상기 질병으로 사망하였다. 사육장 #3에서는 대조군 중 35마리가 사망한 반면 백신접종군 그룹에서 24마리가 사망한 것으로 그 차이가 있었다. 평가 기간 동안 사망률은 상대적으로 낮았지만, 각각의 백신접종군에서의 사망률은 대조군과 비교 시 감소되었다 (사육장 #1 = 53%, 사육장 #2 = 31% 및 사육장 #3 = 31%). 각각의 사육장에서의 사망률은 대조군 그룹에서의 사망률과 비교할 때 31 내지 53%만큼 감소되었고, 백신접종군 그룹에서의 총 사망률은 38%만큼 감소되었다.

표 13. 연구 종료 시 사망률 결과

실시예 6으로부터의 결과와 커플링된 본 실시예의 결과는 상업용 분무 장비를 사용하여 새에 적용되는 2회 용량의 백신이 괴사성 장염으로 인한 사망률을 감소시킬 수 있다는 것을 입증시켜 준다.

VI. 예시적인 실시양태

하기의 넘버링된 단락은 개시된 기술의 예시적인 실시양태를 예시한다.

단락 1. 불활성화된 항원 및 적어도 하나의 점막 아주반트를 포함하는 조성물로서, 조류에 투여하기 위해 제형화된 조성물.

단락 2. 단락 1에 있어서, 점막 아주반트가 폴리아크릴산을 포함하는 것인 조성물.

단락 3. 단락 1 또는 단락 2에 있어서, 불활성화된 항원이 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 C, 헤모필루스 파라갈리나룸, 이. 콜라이 종, 살모넬라 종, 파스테우렐라 종, 캄필로박터 헤파티쿠스, 조류 클라미디아증 (클라미디아), 조류 미코플라스마 종 (미코플라스마), 조류 콕시디아증 (콕시디아), 레오바이러스 (REO), 조류 인플루엔자 바이러스 (IAV-A), 감염성 기관지염 바이러스 (IBV), 뉴캐슬병 바이러스 (NDV), 가금류 아데노바이러스 (FA), 감염성 윤활낭병 (IBD), 마렉병 (MDV), 닭 빈혈 (CAV), 감염성 후두기관염 (ILTV), 조류 뇌척수염 (AEV), 조류 간염 (HEV), 오리 간염 (DHV), 칠면조 출혈성 장염 (THEV), 또는 산란 저하 증후군 바이러스 (EDS) 중 하나 이상으로부터의 항원을 포함하는 것인 조성물.

단락 4. 단락 1 내지 단락 3 중 어느 한 단락에 있어서, 불활성화된 항원이 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A로부터의 불활성화된 항원을 포함하는 것인 조성물.

단락 5. 단락 1 내지 단락 4 중 어느 한 단락에 있어서, 조성물이 비히클, 계면활성제, 불활성화제, 중화제, 세포 단편, 또는 그의 조합을 추가로 포함하는 것인 조성물.

단락 6. 단락 5에 있어서, 불활성화제가 포름알데히드, 포르말린, 바이너리 에틸렌이민, 티메로살, 베타 프로피오락톤, 디터전트, 또는 그의 조합인 조성물.

단락 7. 단락 1 내지 단락 6 중 어느 한 단락에 있어서, 조성물이 식염수 용액을 포함하지 않는 것인 조성물.

단락 8. 단락 1 내지 단락 7 중 어느 한 단락에 있어서, 조성물이 0 초과 내지 2% (w/v) 염화나트륨 용액의 오스몰농도를 갖는 것인 조성물.

단락 9. 단락 1 내지 단락 8 중 어느 한 단락에 있어서, 조성물이 0 초과 내지 6 mPa·s의 점도를 갖는 것인 조성물.

단락 10. 단락 9에 있어서, 점도가 2 mPa·s 내지 5 mPa·s인 조성물.

단락 11. 단락 1 내지 단락 10 중 어느 한 단락에 있어서, 아주반트가 0 초과 내지 80% (v/v)의 조성물 중 아주반트 농도를 갖는 것인 조성물.

단락 12. 단락 11에 있어서, 아주반트 농도가 5% 내지 80%인 조성물.

단락 13. 단락 11에 있어서, 조성물이 음용수에 부가하기 위해 제형화되고 아주반트 농도가 15% 내지 80%인 조성물.

단락 14. 단락 11에 있어서, 조성물이 분무 투여하기 위해 제형화되고 아주반트 농도가 15% 내지 40%인 조성물.

단락 15. 단락 11에 있어서, 조성물이 눈에 투여하기 위해 제형화되고 아주반트 농도가 5% 내지 25%인 조성물.

단락 16. 단락 11에 있어서, 조성물이 겔 투여하기 위해 제형화되고 아주반트 농도가 겔 조성물과 혼합되기 전에 15% 내지 40%인 조성물.

단락 17. 단락 1 내지 단락 13 중 어느 한 단락의 조성물 0 초과 내지 20% (v/v), 및 물을 포함하는 음용수 조성물.

단락 18. 단락 1 내지 단락 12 또는 단락 16 중 어느 한 단락의 조성물을 포함하는 제1 조성물, 및 겔화제를 포함하는 제2 조성물을 포함하는 겔 조성물.

단락 19. 단락 18에 있어서, 제1 조성물 대 제2 조성물의 비율이 25:75 내지 75:25인 겔 조성물.

단락 20. 단락 18에 있어서, 제1 조성물 대 제2 조성물의 비율이 50:50인 겔 조성물.

단락 21. 단락 1 내지 단락 20 중 어느 한 단락의 조성물을 조류에 투여하는 것을 포함하는 방법.

단락 22. 단락 21에 있어서, 투여하는 것이 점막에 투여하는 것을 포함하는 방법.

단락 23. 단락 21 또는 단락 22에 있어서, 조류가 닭, 칠면조, 거위, 오리, 콘월 게임 암탉, 메추라기, 자고새, 꿩, 뿔닭, 타조, 에뮤, 백조, 또는 비둘기인 방법.

단락 24. 단락 23에 있어서, 조류가 닭 또는 칠면조인 방법.

단락 25. 단락 21 내지 단락 24 중 어느 한 단락에 있어서, 조성물이 경구로, 안구로 또는 국소로 투여되는 것인 방법.

단락 26. 단락 21 내지 단락 25 중 어느 한 단락에 있어서, 조성물이 0일령 초과 내지 14일령의 조류에 투여되는 것인 방법.

단락 27. 단락 21 내지 단락 26 중 어느 한 단락에 있어서, 조성물이 5일령 내지 9일령의 조류에 투여되는 것인 방법.

단락 28. 단락 21 내지 단락 24 중 어느 한 단락에 있어서, 조성물이 인 오보 투여되는 것인 방법.

단락 29. 단락 21 내지 단락 28 중 어느 한 단락에 있어서, 조성물을 투여하는 것이 제1 투여 및 제1 투여에 후속하는 제2 투여를 포함하는 것인 방법.

단락 30. 단락 29에 있어서, 제1 투여가 조류가 0일령 초과 내지 14일령일 때 발생하는 것인 방법.

단락 31. 단락 29 또는 단락 30에 있어서, 제2 투여가 제1 투여 후 0일 초과 내지 6주에 이루어지는 것인 방법.

단락 32. 단락 31에 있어서, 제2 투여가 제1 투여 후 1일 내지 4주에 이루어지는 것인 방법.

단락 33. 단락 31에 있어서, 제2 투여가 제1 투여 후 3일 내지 10일에 이루어지는 것인 방법.

단락 34. 단락 21 내지 단락 33 중 어느 한 단락에 있어서, 조성물이 불활성화된 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A 항원을 포함하는 것인 방법.

단락 35. 단락 21 내지 단락 34 중 어느 한 단락에 있어서, 불활성화된 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A 항원 및 폴리아크릴산 아주반트를 포함하는 조성물을 0일령 초과 내지 14일령의 조류에 투여하는 것을 포함하는 방법.

단락 36. 단락 21 내지 단락 35 중 어느 한 단락에 있어서, 조류에 투여하는 것이 조성물을 조류에 분무하는 것을 포함하는 방법.

단락 37. 단락 21 내지 단락 35 중 어느 한 단락에 있어서, 조류에 투여하는 것이 조성물을 포함하는 음용수 조성물을 조류에게 제공하는 것을 포함하는 방법.

단락 38. 단락 37에 있어서, 음용수 조성물이 0 초과 내지 20% (v/v)의 조성물을 포함하는 것인 방법.

단락 39. 단락 38에 있어서, 조성물이 단락 1 내지 단락 13 중 어느 한 단락에 따른 조성물이고; 조성물을 물과 혼합하여 음용수 조성물을 형성하는 것을 추가로 포함하는 방법.

단락 40. 단락 21 내지 단락 35 중 어느 한 단락에 있어서, 조류에 투여하는 것이 조성물을 조류의 눈에 투여하는 것을 포함하는 방법.

단락 41. 단락 21 내지 단락 35 중 어느 한 단락에 있어서, 조류에 투여하는 것이 겔 조성물을 조류에게 제공하는 것을 포함하는 방법.

단락 42. 단락 41에 있어서, 겔 조성물이 단락 18 내지 단락 20 중 어느 한 단락에 따른 겔 조성물인 방법.

단락 43. 단락 1 내지 단락 20 중 어느 한 단락의 조성물을 조류에 투여하는 것을 포함하는, 조류에서 면역 반응을 유도하는 방법.

단락 44. 단락 43에 있어서, 면역 반응을 유도하는 것이 조류에서 IgA 반응을 유도하는 것을 포함하는 방법.

단락 45. 단락 44에 있어서, 면역 반응을 유도하는 것이 조류에서 IgY 반응을 유도하는 것을 추가로 포함하는 방법.

단락 46. 단락 1 내지 단락 20 중 어느 한 단락에 따른 조성물을 조류에 투여하는 것을 포함하며, 여기서 조성물은 불활성화된 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A 항원을 포함하는 것인, 조류에서 괴사성 장염을 치료 또는 예방하는 방법.

개시된 발명의 원리가 적용될 수 있는 많은 가능한 실시양태의 관점에서, 예시된 실시양태는 단지 기술의 바람직한 예일 뿐이며 기술의 범위를 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다는 것을 인식해야 한다. 오히려, 기술의 범위는 하기 청구범위에 의해 정의된다. 따라서 본 발명자들은 이러한 청구범위의 범위와 요지 내에 있는 모든 것을 본 발명자들의 발명으로서 청구한다.

Claims

불활성화된 항원 및 적어도 하나의 점막 아주반트를 포함하는 조성물을 조류에 점막으로 투여하는 것을 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 조성물이 80% 내지 100% 미만의 물을 포함하는 것인 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 조성물이 수성 기반 아주반트를 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 0.5% 내지 50% 아주반트를 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 아주반트가 폴리아크릴산 아주반트인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 현탁액인 방법.
제6항에 있어서, 조성물이 폴리아크릴산 입자를 포함하는 수성 현탁액인 방법.
제7항에 있어서, 폴리아크릴산 입자가 250 nm 내지 10 마이크로미터의 입자 크기를 갖는 것인 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물을 투여하는 것이 조성물을 조류에 분무하는 것을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물을 투여하는 것이 조성물을 안구로, 비강으로 및/또는 경구로 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 불활성화된 항원이 클로스트리디움 종(Clostridium spp.), 헤모필루스 파라갈리나룸(Haemophilus paragalinarum) (코리자(Coryza)), 에스케리키아 종(Escherichia spp.), 살모넬라 종(Salmonella spp.), 파스테우렐라 종(Pasteurella spp.), 스타필로코쿠스 종(Staphylococcus spp.), 미크로코쿠스 종(Micrococcus spp.), 캄필로박터 종(Campylobacter spp.), 아비박테리움 종(Avibacterium spp.), 악티노바실루스 종(Actinobacillus spp.), 네이세리아 종(Neisseria spp.), 에리시펠로트릭스 종(Erysipelothrix spp.), 모락셀라 종(Moraxella spp.), 조류 클라미디아증 (클라미디아(Chlamydia)), 갈리박테리움 종(Gallibacterium spp.), 슈도모나스 종(Pseudomonas spp.), 로도코쿠스 종(Rhodococcus spp.), 세라티아 종(Serratia spp.), 스트렙토코쿠스 종(Streptococcus spp.), 조류 미코플라스마 종 (미코플라스마(Mycoplasma)), 조류 콕시디아증 (콕시디아(Coccidia)), 레오바이러스 (REO), 조류 인플루엔자 바이러스 (IAV-A), 감염성 기관지염 바이러스 (IBV), 뉴캐슬병 바이러스 (NDV), 가금류 아데노바이러스 (FA), 감염성 윤활낭병 (IBD), 마렉병 (MDV), 닭 빈혈 (CAV), 감염성 후두기관염 (ILTV), 조류 뇌척수염 (AEV), 조류 간염 (HEV), 오리 간염 (DHV), 칠면조 출혈성 장염 (THEV), 또는 산란 저하 증후군 바이러스 (EDS) 중 하나 이상으로부터의 항원을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 불활성화된 항원이 클로스트리디움 페르프린겐스(Clostridium perfringens) 유형 A, 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 C, 클로스트리디움 셉티쿰(Clostridium septicum), 클로스트리디움 콜리눔(Clostridium colinum), 이. 콜라이(E. coli), 살모넬라 켄터키(Salmonella kentucky), 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium), 살모넬라 엔테리디티스(Salmonella enteriditis), 파스테우렐라 물토시다(Pasteurella Multocida), 파스테우렐라 헤몰리카(Pasteurella Hemolyca), 캄필로박터 헤파티쿠스(Campylobacter hepaticus), 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni), 캄필로박터 콜라이(Campylobacter coli), 갈리박테리움 아나티스(Galibacterium anatis), 또는 그의 조합으로부터의 항원을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 불활성화된 항원이 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스, 이. 콜라이, 또는 그의 조합으로부터의 항원을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 불활성화된 항원이 살모넬라 종으로부터의 불활성화된 항원을 포함하는 것인 방법.
제14항에 있어서, 살모넬라 종이 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스, 또는 그의 조합인 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 세포 단편, 불활성화제, 계면활성제, 중화제, 또는 그의 조합을 추가로 포함하는 것인 방법.
제16항에 있어서, 불활성화제가 포름알데히드, 포르말린, 바이너리 에틸렌이민, 티메로살, 베타 프로피오락톤, 디터전트, 또는 그의 조합인 조성물.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 하기를 갖는 것인 방법:
2 mPa·s 내지 5 mPa·s의 점도;
등장성 오스몰농도;
6.5 내지 7.5의 pH; 또는
그의 조합.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 조류가 닭, 칠면조, 거위, 오리, 콘월 게임 암탉, 메추라기, 자고새, 꿩, 뿔닭, 타조, 에뮤, 백조, 또는 비둘기인 방법.
제19항에 있어서, 조류가 닭 또는 칠면조인 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 부화일 내지 제14일에 조류에 투여되는 것인 방법.
제21항에 있어서, 조성물이 부화일 내지 제3일에 조류에 투여되는 것인 방법.
제22항에 있어서, 조성물이 부화일에 조류에 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물을 투여하는 것이 불활성화된 항원 및 적어도 하나의 점막 아주반트를 포함하는 제1 조성물을 투여하는 것을 포함하고; 방법이 후속적으로 제2 조성물을 조류에 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법.
제24항에 있어서, 제2 조성물이, 제1 조성물이 투여된 후 0일 초과 내지 6주에 투여되는 것인 방법.
제25항에 있어서, 제2 조성물이, 제1 조성물이 투여된 후 5일 내지 20일에 투여되는 것인 방법.
제26항에 있어서, 제2 조성물이, 제1 조성물이 투여된 후 10일 내지 15일에 투여되는 것인 방법.
제24항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물과 동일한 불활성화된 항원 및 점막 아주반트를 포함하는 것인 방법.
제24항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물과 상이한 불활성화된 항원 및/또는 상이한 점막 아주반트를 포함하는 것인 방법.
제24항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 조성물이 분무에 의해 투여되는 것인 방법.
제24항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 조성물이 안구로 및/또는 비강으로 투여되는 것인 방법.
제24항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 조성물이 경구로 투여되는 것인 방법.
제24항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 조성물이 주사에 의해 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 조류에서 살모넬라 종의 발생률을 감소시키는 방법인 방법.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 수거 후 조류로부터 획득된 고기에서 살모넬라 종의 발생률을 감소시키는 방법인 방법.
제34항 또는 제35항에 있어서, 살모넬라 종이 에스. 켄터키(S. kentucky)인 방법.
제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 조류에서 면역 반응을 유도하는 방법인 방법.
제37항에 있어서, 면역 반응을 유도하는 것이 조류에서 IgA 반응을 유도하는 것을 포함하는 것인 방법.
제38항에 있어서, 면역 반응을 유도하는 것이 조류에서 IgY 반응을 유도하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 조류에서 괴사성 장염을 치료 또는 예방하는 방법인 방법.
제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 불활성화된 항원, 폴리아크릴산 입자, 및 80% 내지 100% 미만의 물을 포함하는 수성 현탁액을 조류에 분무하는 것을 포함하는 방법.
제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는 수성 현탁액을 조류에 분무하는 것을 포함하는 방법:
클로스트리디움 종, 헤모필루스 파라갈리나룸 (코리자), 에스케리키아 종, 살모넬라 종, 파스테우렐라 종, 스타필로코쿠스 종, 미크로코쿠스 종, 캄필로박터 종, 아비박테리움 종, 악티노바실루스 종, 네이세리아 종, 에리시펠로트릭스 종, 모락셀라 종, 조류 클라미디아증 (클라미디아), 갈리박테리움 종, 슈도모나스 종, 로도코쿠스 종, 세라티아 종, 스트렙토코쿠스 종, 조류 미코플라스마 종 (미코플라스마), 조류 콕시디아증 (콕시디아), 레오바이러스 (REO), 조류 인플루엔자 바이러스 (IAV-A), 감염성 기관지염 바이러스 (IBV), 뉴캐슬병 바이러스 (NDV), 가금류 아데노바이러스 (FA), 감염성 윤활낭병 (IBD), 마렉병 (MDV), 닭 빈혈 (CAV), 감염성 후두기관염 (ILTV), 조류 뇌척수염 (AEV), 조류 간염 (HEV), 오리 간염 (DHV), 칠면조 출혈성 장염 (THEV), 또는 산란 저하 증후군 바이러스 (EDS) 중 하나 이상으로부터의 항원으로부터 선택된 불활성화된 항원;
250 nm 내지 10 마이크로미터의 입자 크기를 갖는 폴리아크릴산 입자;
세포 단편, 불활성화제, 계면활성제, 중화제, 또는 그의 조합; 및
80% 내지 100% 미만의 물.
제41항 또는 제42항에 있어서, 불활성화된 항원이 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 C, 클로스트리디움 셉티쿰, 클로스트리디움 콜리눔, 이. 콜라이, 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스, 파스테우렐라 물토시다, 파스테우렐라 헤몰리카, 캄필로박터 헤파티쿠스, 캄필로박터 제주니, 캄필로박터 콜라이, 갈리박테리움 아나티스, 또는 그의 조합으로부터의 항원을 포함하는 것인 방법.
제42항에 있어서, 불활성화된 항원이 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스, 이. 콜라이, 또는 그의 조합으로부터의 항원을 포함하는 것인 방법.
제42항에 있어서, 불활성화된 항원이 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스, 또는 그의 조합으로부터의 항원을 포함하는 것인 방법.
조류에 투여하는 방법에서 사용하기 위한 불활성화된 항원 및 적어도 하나의 점막 아주반트를 포함하는 조성물.
제46항에 있어서, 방법이 조류에서 살모넬라 종의 발생률을 감소시키는 방법인 사용하기 위한 조성물.
제47항에 있어서, 살모넬라 종이 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스 또는 그의 조합인 사용하기 위한 조성물.
제46항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 조류에서 면역 반응을 유도하는 방법인 사용하기 위한 조성물.
제49항에 있어서, 면역 반응을 유도하는 것이 조류에서 IgA 반응을 유도하는 것을 포함하는 것인 사용하기 위한 조성물.
제50항에 있어서, 면역 반응을 유도하는 것이 조류에서 IgY 반응을 유도하는 것을 추가로 포함하는 것인 사용하기 위한 조성물.
제46항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 조류에서 괴사성 장염을 치료 또는 예방하는 방법인 사용하기 위한 조성물.
제46항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 불활성화된 항원, 폴리아크릴산 입자, 및 80% 내지 100% 미만의 물을 포함하는 수성 현탁액을 조류에 분무하는 것을 포함하는 방법에서 사용하기 위한 조성물.
제46항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는 수성 현탁액을 조류에 분무하는 것을 포함하는 방법에서 사용하기 위한 조성물:
클로스트리디움 종, 헤모필루스 파라갈리나룸 (코리자), 에스케리키아 종, 살모넬라 종, 파스테우렐라 종, 스타필로코쿠스 종, 미크로코쿠스 종, 캄필로박터 종, 아비박테리움 종, 악티노바실루스 종, 네이세리아 종, 에리시펠로트릭스 종, 모락셀라 종, 조류 클라미디아증 (클라미디아), 갈리박테리움 종, 슈도모나스 종, 로도코쿠스 종, 세라티아 종, 스트렙토코쿠스 종, 조류 미코플라스마 종 (미코플라스마), 조류 콕시디아증 (콕시디아), 레오바이러스 (REO), 조류 인플루엔자 바이러스 (IAV-A), 감염성 기관지염 바이러스 (IBV), 뉴캐슬병 바이러스 (NDV), 가금류 아데노바이러스 (FA), 감염성 윤활낭병 (IBD), 마렉병 (MDV), 닭 빈혈 (CAV), 감염성 후두기관염 (ILTV), 조류 뇌척수염 (AEV), 조류 간염 (HEV), 오리 간염 (DHV), 칠면조 출혈성 장염 (THEV), 또는 산란 저하 증후군 바이러스 (EDS) 중 하나 이상으로부터의 항원으로부터 선택된 불활성화된 항원;
250 nm 내지 10 마이크로미터의 입자 크기를 갖는 폴리아크릴산 입자;
세포 단편, 불활성화제, 계면활성제, 중화제, 또는 그의 조합; 및
80% 내지 100% 미만의 물.
제53항 또는 제54항에 있어서, 불활성화된 항원이 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 C, 클로스트리디움 셉티쿰, 클로스트리디움 콜리눔, 이. 콜라이, 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스, 파스테우렐라 물토시다, 파스테우렐라 헤몰리카, 캄필로박터 헤파티쿠스, 캄필로박터 제주니, 캄필로박터 콜라이, 갈리박테리움 아나티스, 또는 그의 조합으로부터의 항원을 포함하는 것인 사용하기 위한 조성물.
제54항에 있어서, 불활성화된 항원이 클로스트리디움 페르프린겐스 유형 A, 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스, 이. 콜라이, 또는 그의 조합으로부터의 항원을 포함하는 것인 사용하기 위한 조성물.
제54항에 있어서, 불활성화된 항원이 살모넬라 켄터키, 살모넬라 티피뮤리움, 살모넬라 엔테리디티스, 또는 그의 조합으로부터의 항원을 포함하는 것인 사용하기 위한 조성물.