EA031067B1 - ИНГИБИТОРЫ Nedd8-АКТИВИРУЮЩЕГО ФЕРМЕНТА - Google Patents

Abstract

В изобретении описываются химические вещества, которые представляют собой ингибиторы Nedd8-активирующего фермента (NAE), а именно соединение {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат и его фармацевтически приемлемые соли; их твердые формы и их пролекарства. Также описываются способы применения этих химических веществ для лечения расстройств, таких как рак.

Description

Настоящее изобретение относится к соединениям, композициям и способам лечения различных расстройств, особенно расстройств клеточной пролиферации, включая раковые заболевания, и воспалительных расстройств. В частности, в настоящем изобретении представлены соединения, которые ингибируют активность NcddS-активирующего фермента.

Уровень техники

Посттрансляционная модификация белков убиквитин-подобных молекул (убпм) представляет собой важный внутриклеточный регуляторный процесс, играющий ключевые роли в регулировании многих биологических процессов, включая деление клеток, клеточную сигнализацию и иммунную реакцию. Убиквитин-подобная молекула представляют собой небольшие белки, ковалентно присоединенные к лизину на белке-мишени за счет изопептидной связи с С-концевым глицином убпм. Убиквитин-подобная молекула изменяет молекулярную поверхность белка-мишени и может влиять на такие свойства, как белок-белковые взаимодействия, ферментативная активность, стабильность и клеточная локализация мишени.

Убиквитин и другие убпм активируются специфическим ферментом Е1, который катализирует образование ацил-аденилатного промежуточного соединения с С-концевым глицином убпм. Затем активированная убп молекула переносится на каталитический остаток цистеина фермента Е1 за счет образования промежуточной тиоэфирной связи. Промежуточное соединение El-убпм и Е2 связываются, в результате чего происходит тиоэфирный обмен, где убпм переносится на активный сайт цистеина Е2. Затем убпм прямо или в сопряжении с лигазой ЕЗ сопрягается с белком-мишенью за счет образования изопептидной связи с аминогруппой боковой цепи лизина белка-мишени.

Биологическая последовательность модификации убпм зависит от рассматриваемой мишени. Убиквитин представляет собой лучше всего описанную убпм, и последовательность модификации под действием убиквитина заключается в разложении полиубиквитинилированных белков протеасомой 26S. Убиквитин сопряжен с его белками-мишенями посредством ферментативного каскада, включающего специфический Е1-активирующий фермент, Ubal (убиквитин-активирующий фермент, ИАЕ), конъюгирующий фермент из семейства Е28 и убиквитин-лигазу из классов RING или НЕСТ ЕЗ. См. Huang ct al., Oncogene, 23:1958-71 (2004). Специфичность к мишени контролируется определенной комбинацией белка Е2 и ЕЗ, в настоящее время известно >40 Е28 и >100 Е38. Помимо убиквитина, существует по меньшей мере 10 убиквитин-подобных белков, которые предположительно активируются специфичным Е1-активирующим ферментом и перерабатываются по схожим, но отдельным путям сопряжения в нисходящем направлении. Другие убпм, для которых были идентифицированы Е1-активирующие ферменты, включают Ncdd8 (APPBP1-Uba3), ISG15 (иВЕ1Ь) и семейство SUMO (Aos1-Uba2).

Убиквитин-подобная молекула Ncdd8 активируется гетеродимерным Ncdd8-аκтивирующим ферментом (APPBP1-Uba3) ^АЕ) и переносится на один Е2 (Ubc12), в конечном итоге приводя к лигированию с куллиновыми белками. Функция неддилирования заключается в активации основанных на куллине убиквитиновых киназ, участвующих в убиквитировании, и, следовательно, в обновлении многих клеточных циклов и клеточных сигнальных белков, включая р27 и Ι-κΒ. См. Pan ct al., Oncogene. 23:1985-97 (2004). Убиквитин-подобная молекула SUMO активируется гетеродимерным SUMO-активирующим ферментом (Aos1-Uba2) (ДАЕ) и переносится на один Е2 (Ubc9) с последующей координацией с несколькими лигазами Е3, что в конечном итоге приводит к сумоилированию белков-мишеней. Sumo-модификация может влиять на клеточную локализацию белков-мишеней, и белки, модифицированные членами семейства SUMO, участвуют в нуклеарном транспорте, сигнальной трансдукции и стрессовой реакции. См. Scclcr and Dcjcan, Nat Rev Mol Cell Biol. 4:690-9 (2003). Функция сумоилирования включает активацию клеточных сигнальных путей (например, передачу сигналов цитокинами, WNT, факторами роста и стероидными гормонами), участвующую в регуляции транскрипции; а также путей, участвующих в контролировании геномной целостности (например, репликация ДНК, реакция на повреждение ДНК, рекомбинация и репарация). См. Muller ct al., Oncogene. 23:1998-2006 (2004). Существуют другие убпм (например, ISG15, FAT10, Apg12p), биологические функции которых еще изучаются.

Особенно важный путь, который регулируется активностью Е1-активирующего фермента, представляет собой убиквитин-протеасомный путь (UPP). Как рассмотрено выше, ферменты UAE и NAE регулируют UPP на двух различных стадиях каскада убиквитинилирования. UAE активирует убиквитин на первой стадии этого каскада, тогда как NAE, посредством активации Ncdd8, отвечает за активацию основанных на куллине лигаз, которые в свою очередь необходимы для окончательного переноса убиквитина к определенным белкам-мишеням. Функциональный путь UPP необходим для сохранения нормальной клетки. UPP играет центральную роль в круговороте многих ключевых регуляторных белков, участвующих в транскрипции, развитии клеточного цикла и апоптозе, которые важны при болезненных состояниях, включая раковые клетки. См., например, King ct al., Science, 274:1652-1659 (1996); Vorhccs ct al., Clin. Cancer Res., 9:6316-6325 (2003) и Adams ct al., Nat. Rev. Cancer, 4:349-360 (2004). Пролиферирующие клетки особенно восприимчивы к ингибированию UPP. См. Drexler, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 94:855860 (1977). Роль UPP пути в онкогенезе обусловила исследование протеасомного ингибирования как потенциальной противораковой терапии. Например, доказано, что модулирование пути UPP за счет инги

- 1 031067 бирования протеасомы 26S действием VELCADE® (бортезомиб) представляет собой эффективное лечение некоторых видов рака, и оно одобрено для лечения пациентов, страдающих от множественной миеломы и лимфомы мантийных клеток, которые до этого прошли по меньшей мере одно лечение. Примеры белков, уровни которых контролируются основанными на куллине убиквитин-лигазами, которые находятся в нисходящем направлении активности ΝΑΕ и UAE, включают CDK ингибитор р27^К1р1 и ингибитор NF-κΒ, Ι-κΒ. См. Podust et al., Proc. Natl. Acad. Scl., 97:4579-4584 (2000) и Read et al., Mol. Cell Biol., 20:2326-2333 (2000). Ингибирование разложения р27 предположительно останавливает развитие клеток на фазах G1 и S клеточного цикла. Вмешательство за счет разложения Ι-κΒ должно предотвращать нуклеарную локализацию NF-κΒ, транскрипцию различных NF-кВ-зависимых генов, связанных со злокачественным фенотипом, и резистентность к стандартным цитотоксическим терапиям. Кроме того, NF-κΒ играет ключевую роль в экспрессии ряда провоспалительных медиаторов, означая роль таких ингибиторов в воспалительных заболеваниях. Более того, ингибирование UPP представляет собой пригодную мишень для дополнительных терапевтических показаний, таких как воспалительные расстройства, включая, например, ревматоидный артрит, астму, рассеянный склероз, псориаз и реперфузионное повреждение; нейродегенеративные расстройства, включая, например, болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, расстройства триплетных повторов; невропатическая боль; ишемические расстройства, например, инсульт, инфаркт, расстройства почек; и кахексия. См., например, Elliott and Ross, Am. J. Clin. Pathol., 116:637-46 (2001); Elliott et al., J. Mol. Med., 81:235-45 (2003); Tarlac and Storey, J. Neurosci. Res. 74:406416 (2003); Morl et al., Neuropath. Appl. Neuroblol., 31:53-61 (2005); Manning, Curr. Pain Headache Rep., 8:192-8 (2004); Dawson and Dawson, Science, 302:819-822 (2003); Kukan, J. Physiol. Pharmacol., 55:3-15 (2004); Wojcik and DiNapoli, Stroke, 35:1506-18 (2004); Lazarus et al., Am. J. Physiol., 27:E332-41 (1999).

Направленное действие El-активирующих ферментов дает уникальную возможность вмешательства в различные биохимические пути, важные для поддержания работоспособности деления клеток и клеточной сигнализации. El-активирующие ферменты действуют на первой стадии сопряжения убпм; поэтому ингибирование El-активирующего фермента будет специфически модулировать последующие биологические последовательности модификации убпм. Следовательно, ингибирование этих активированных ферментов и, как результат, ингибирование последующих эффектов убпм-сопряжения представляют собой способ вмешательства в работоспособность деления клеток, клеточной сигнализации и некоторых аспектов клеточной физиологии, которые являются важными для механизмов заболевания. Таким образом, ферменты E1, такие как UAE, NAE и SAE, как регуляторы различных клеточных функций, яв ляются потенциально важными терапевтическими мишенями для определения новых подходов к лечению заболеваний и расстройств.

В заявке на патент Соединенных Штатов Америки № 11/346469 (поданной 2 февраля 2006 г., публикация № US 2006/0189636) и в заявке на Международный патент № PCT/US06/04637 (поданной 2 февраля 2006 г., публикация № WO 2006/084281) (обобщенно, Critchley et al.) описаны различные ингибиторы фермента E1 формулы

где А представляет собой

A-iv

A-v

A-vi

A-vii или

В этих заявках не описаны химические соединения, рассмотренные в настоящем изобретении.

В заявке на патент Соединенных Штатов Америки № 11/700614 (поданной 31 января 2007 г., публикация № US 2007/0191293) и в заявке на Международный патент № PCT/US07/02560 (поданной 31 января 2007 г., публикация № WO 2007/092213) (обобщенно, Langston et al.) описаны различные ингибиторы фермента E1 формулы

- 2 031067 где А представляет собой

R^k

R^k

A-iv A-v A-vi _или A-vii

В этих заявках не описаны химические соединения, рассмотренные в настоящем изобретении.

В заявке на патент Соединенных Штатов Америки № 11/890338 (поданной 6 августа 2007 г., публикация № US 2008/0051404) и в заявке на Международный патент № PCT/US07/17463 (поданной 6 августа 2007 г., публикация № WO 2008/019124) (обобщенно, Claiborne et al.) описаны различные ингибиторы фермента Е1 формулы

где кольцо А представляет собой 6-членное азотсодержащее гетероариловое кольцо, необязательно конденсированное с 5- или 6-членным ариловым, гетероариловым, циклоалифатическим или гетероцик лическим кольцом; и

W представляет собой -СН₂-, -CHF-, -CF₂-, -CH(R¹)-, -CF(R¹)-, -NH-, -N(R¹)-, -Ο-, -S- или -NHC(O)-.

В этих заявках не описаны химические соединения, рассмотренные в настоящем изобретении.

В то же время государственными органами здравоохранения не был одобрен ни один ингибитор El-активирующего фермента в качестве лекарственного средства. Сохраняется потребность в ингибиторах El-активирующих ферментах, таких как ΝΑΕ.

Краткое описание изобретения

В одном аспекте настоящее изобретение относится к химическим веществам, которые представляют собой соединение {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1H-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат (1-216) и его фармацевтически приемлемые соли и пролекарства.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к композициям, содержащим химическое вещество, которое представляет собой соединение {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат (1-216), или его фармацевтически приемлемую соль, или его пролекарство, и один или более фармацевтически приемлемых носителей.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к твердым формам соединения {(1S,2S,4R)-4[(6- {[(1 R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1 H-инден-1 -ил] амино} пиримидин-4-ил)окси] -2гидроксициклопентил}метил сульфамата (1-216) или его фармацевтически приемлемой соли.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения рака, включающим введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, химического вещества, которое представляет собой соединение {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1H-инден-1-ил]амино}пиримидин-4ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат (1-216), или его фармацевтически приемлемую соль, или его пролекарства.

- 3 031067

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1 иллюстрирует фармакодинамические и фармакокинетические параметры {(1S,2S,4R)-2гидрокси-4-[(6- {[(1 R,2 S)-2-метокси-2,3 -дигидро-1 Н-инден-1 -ил] амино}пиримидин-4ил)окси]циклопентил}метил сульфамата (1-115) у самок голых мышей Ncr с ксенотрансплантатами опухоли НСТ116 после однократного подкожного введения при 30 мг/кг.

Фиг. 2 иллюстрирует фармакодинамические и фармакокинетические параметры {(1S,2S,4R)-4-[(6{[(^^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси-2гидроксициклопентил}метил сульфамата (1-216) у самок голых мышей Ncr с ксенотрансплантатами опухоли НСТ116 после однократного подкожного введения при 10 мг/кг.

Фиг. 3 иллюстрирует фармакодинамические и фармакокинетические параметры {(1S,2S,4R)-4-[(6{[(^^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси-2гидроксициклопентил}метил сульфамата (1-216) у самок голых мышей Ncr с ксенотрансплантатами опухоли НСТ116 после однократного подкожного введения при 30 мг/кг.

Фиг. 4 иллюстрирует диаграмму рентгеновской порошковой дифракции (РПД) для кристаллической формы I {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата (1-216) гидрохлорида.

Фиг. 5 иллюстрирует термограмму дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) для кристаллической формы I {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата (1-216) гидрохлорида.

Фиг. 6 иллюстрирует термограмму термогравиметрического анализа (ТГА) для кристаллической формы I {(^^АЕ)-4-[(6-{[(1^л,25)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата (1-216) гидрохлорида.

Фиг. 7 иллюстрирует диаграмму рентгеновской порошковой дифракции (РПД) для кристаллической формы I {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1H-инден-1-ил]амино}пиримидин-4ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата (1-216) гидрохлорида, полученного в примере 2, ниже.

Фиг. 8 иллюстрирует термограмму дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) для кристаллической формы I {(^^АЕ)-4-[(6-{[(^^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата (1-216) гидрохлорида, полученного в примере 2, ниже.

Фиг. 9 иллюстрирует термограмму термогравиметрического анализа (ТГА) для кристаллической формы I {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата (1-216) гидрохлорида, полученного в примере 2, ниже.

Фиг. 10 иллюстрирует диаграмму рентгеновской порошковой дифракции (РПД) для кристаллической формы II {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата (1-216) гидрохлорида, полученного в примере 9, ниже.

Описание изобретения

Представлены химические соединения, которые являются эффективными в качестве ингибиторов №бб8-активирующего фермента (ΝΑΕ). Эти химические соединения применимы для ингибирования активности NAE in vitro и in vivo и пригодны для лечения расстройств клеточной пролиферации, в частности рака, и других расстройств, связанных с активностью NAE. Эти химические вещества представляют собой {(^^АЕ)-4-[(6-{[(^^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат (упоминаемый в настоящем документе как 1-216)

и нековалентно связанные молекулярные соединения.

Таким образом, химическое вещество, содержащее соединение 1-216, включает, например, свободное соединение 1-216, фармацевтически приемлемые соли 1-216, фармацевтически приемлемые сольваты 1-216 и фармацевтически приемлемые сольваты фармацевтически приемлемых солей 1-216. В некоторых вариантах реализации химическое вещество представляет собой свободное соединение 1-216 или его фармацевтически приемлемую соль. В некоторых вариантах реализации химическое соединение представляет собой фармацевтически приемлемую соль 1-216. В некоторых вариантах реализации химическое вещество представляет собой свободное соединение 1-216 или его фармацевтически приемлемый

- 4 031067 сольват. В некоторых вариантах реализации химическое соединение представляет собой фармацевтически приемлемый сольват фармацевтически приемлемой соли 1-216.

В публикации Claiborne et al. описаны различные ингибиторы ферментов Е1, включая ΝΑΕ. Например, ученые Claiborne et al. описывают, что соединения в табл. 1 демонстрируют значения 1С₅₀ менее или равные 500 нМ в анализе ΝΑΕ (пример 137 в публикации Claiborne).

Таблица 1

1-1	{(17?,27?,35,47?)-4-[(6- {[(15)-4-фтор-2,3-дигидро-1 //-инден-1 -ил] амино} пиримидин-4-ил)амино]-2,3-дигидроксициклопентил}метил сульфамат;
1-2	{(1/?,2/?,35,47?)-2,3-дигидрокси-4-[(6-{[(17?,25)-2-метокси-2,3-дигидро-1Я-инден1 -ил]амино } пиримидин-4-ил)амино] циклопентил} метил сульфамат;
1-3	[(17?,27?,35,47?)-2,3-дигидрокси-4-(9Я-пурин-6-иламино)циклопентил]метил сульфамат;
1-5	[(15,25,47?)-4-({6-((15)-2,3-дигидро-1Я-инден-1-иламино]пиримидин-4-ил}амино)-2-гидроксициклопентил] метил сульфамат;
1-6	{(17?,27?,35,47?)-4-[(6-{ [(15)-4,7-дифтор-2,3-дигидро- 177-инден-1 -ил]амино}пиримидин-4-ил)амино]-2,3-дигидроксициклопентил}метил сульфамат;
1-8	[(1 7?,27?,35,47?)-4-({6-[( 1 7?)-2,3-дигидро-1 Я-инден-1 -иламино]пиримидин-4-ил } амино)-2,3-дигидроксициклопентил]метил сульфамат;
1-9	{(17?,27?,35,47?)-2,3-дигидрокси-4-((8-фенил-9Я-пурин-6-ил)амино]циклопентил}метил сульфамат;
1-10	[(17?,27?,35,47?)-2,3-дигидрокси-4-({2-[(3-метил-2,3-дигидро-1Я-инден-1-ил)амино] пиримидин-4-ил} амино)циклопентил] метил сульфамат;
1-11	[(15,27?,35,47?)-4-({6-[(15)-2,3-дигидро-1Я-инден-1-иламино]пиримидин-4-ил}амино)-2,3-дигидроксициклопентил]метил сульфамат;
1-12	[(17?,27?,35,47?)-2,3-дигидрокси-4-({6-[(15)-1,2,3,4-тетрагидронафталин-1иламино]пиримидин-4-ил}амино)циклопентил]метил сульфамат;
1-14	[(17?,27?,35,47?)-4-({6-((циклогексилметил)амино]пиримидин-4-ил}амино)-2,3дигидроксициклопентил]метил сульфамат;

- 5 031067

1-15	{(1/?,2Я,35,4Я)-4-[(2-{[(1ЭЭ З-диметил-2,3-дигидро-1 #-инден-1-ил] амино }пиримидин-4-ил)амино]-2,3-дигидроксициклопентил}метил сульфамат;
1-17	{(1/?, 2R, 3S, 47?)-4-[(6-{[(15)-5,6-ди фтор-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)амино]-2,3-дигидроксициклопентил}метил сульфамат;
1-18	[(1 R,2R,3S,4R)-4-( [6-[( 15)-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 -иламино]-2-метилпиримидин4-ил}амино)-2,3-дигидроксициклопентил]метил сульфамат;
1-19	{(1/?,27?,35',47?)-4-[(6-{ [(15)-5-хлор-2,3-дигидро- 1Н-инден-1 -ил]амино } пиримидин4-ил)амино]-2,3-дигидроксициклопентил}метил сульфамат;
1-21	{(1 R,2R,3S,4R)-4-[(6- {[(15)-3,3-диметил-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 -ил]амино} пиримидин-4-ил)амино]-2,3-дигидроксициклопентил}метил сульфамат;
1-24	{(17?,27?,35',47?)-4-[(6- {((15)-4-хлор-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 -ил]амино } пиримидин4-ил)амино]-2,3-дигидроксициклопентил}метил сульфамат;
1-25	[(1 7?,25',47?)-4-( {6-[( 10)-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 -иламино]пиримидин-4-ил } амино)-2-гидроксициклопентил]метил сульфамат;
1-26	[(17?, 2R,3S, 4R)-4-( {4-(( 15)-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 -иламино]-1,3,5-триазин-2-ил }амино)-2,3-дигидроксициклопентил]метил сульфамат;
1-27	((17?,27?,35',47?)-4- {[6-(бензиламино)пиримидин-4-ил]амино} -2,3дигидроксициклопентил)метил сульфамат;
1-29	[(1 R,2R,3S,4R)-4-( {6-((15)-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 -иламино] пиримидин-4-ил } амино)-2,3-дигидроксициклопентил]метил сульфамат;
1-32	[(15',25',47?)-4-({6-[( 15)-2,3-дигидро-1Н-инден-1-иламино]-5-метилпиримидин-4ил}окси)-2-гидроксициклопентил]метил сульфамат;
1-34	((18,28,4И)-4-{[8-(2-хлорфенил)-9Н-пурин-6-ил]амино}-2гидроксициклопентил)метил сульфамат;
1-37	((18,28,4К)-2-гидрокси-4-{[8-(2-феноксифенил)-9Н-пурин-6ил]амино}циклопентил)метил сульфамат;
1-38	{(18,28,4И)-2-гидрокси-4-[(6-фенил-7Н-пирроло[2,3-сГ]пиримидин-4ил)амино]циклопентил}метил сульфамат;
1-39	{(18,28,41<)-4-[(8-дибензо[Ь,с1]фуран-4-ил-9Н-пурин-6-ил)амино]-2гидроксициклопентил} метил сульфамат;
1-40	[(1 S,2S,4R)-2-rHflpoKCH-4-({6-[(lS)-1,2,3,4-тетрагидронафталин-1иламино]пиримидин-4-ил}окси)циклопентил]метил сульфамат;
1-41	((18,28,4Я)-4-{[8-(2,3-дигидро-1,4-бензодиоксин-5-ил)-9Н-пурин-6-ил]амино}-2гидроксициклопентил)метил сульфамат;
1-42	[(1 S,2 8,4К)-2-гидрокси-4-( {6-((1 -нафтилметил)амино] пиримидин-4ил}окси)циклопентил]метил сульфамат;

- 6 031067

1-43	{(1 S,2S,4R)-2-rHApoKCH-4-[(6-{ [(18,28)-2-метил-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]циклопентил}метил сульфамат;
1-45	[(1 R,2R,3S,4R)-4-({4-[( 1 S)-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 -иламино]-6-метил-1,3,5триазин-2-ил}амино)-2,3-дигидроксициклопентил]метил сульфамат;
1-46	((lS,2S,4R)-2-гидpoκcи-4-{мeτил[8-(l-нaφτил)-9H-πypин-6ил]амино} цикло пентил)метил сульфамат;
1-47	{(1 S,2S,4R)-2-nmpoKCH-4-[(6-{ [(1R,28)-2-мето кси-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 ил]амино}пиримидин-4-ил)амино]циклопентил}метил сульфамат;
1-49	((lS,2S,4R)-2-гидpoκcи-4-{[8-(l-нaφτил)-9H-πypин-6ил]амино}циклопентил)метил сульфамат;
1-55	{(1В.,2К.,38,4И)-2,3-дигидрокси-4-[(4-{[(11<28)-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден1-ил]амино}-1,3,5-триазин-2-ил)амино]циклопентил}метил сульфамат;
1-56	((lS,2S,4R)-4-{[6-xлop-2-(l-нaφτил)-ЗH-имидaзo[4,5-b]πиpидин-7-ил]aминo}-2гидроксициклопентил)метил сульфамат;
1-60	((lS,2S,4R)-4-{[8-(3-xлopφeнил)-9H-πypин-6-ил]aминo}-2гидроксициклопентил)метил сульфамат;
1-62	[(lS,2S,4R)-2-гидpoκcи-4-({8-[2-(τpиφτopмeτoκcи)φeнил]-9H-πypин-6ил}амино)циклопентил]метил сульфамат;
1-63	{(18,28,4И)-2-гидрокси-4-[(8-фенил-9Н-пурин-6-ил)окси]циклопентил}метил сульфамат;
1-64	[(lS,2S,4R)-4-({8-[4-(димeτилaминo)-l-нaφτил]-9H-πypин-6-ил}aминo)-2гидроксициклопентил] метил сульфамат;
1-65	{(1 S,2S,4R)-4-[(6-{ [(18)-3,3-диметил-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 ил]амино}пиримидин-4-ил)амино]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат;
1-67	((lS,2S,4R)-4-{[8-(2,3-димeτoκcиφeнил)-9H-πypин-6-ил]aминo}-2гидроксициклопентил)метил сульфамат;
1-68	[(18,28ДК.)-4-({8-[2-(бензилокси)фенил]-9Н-пурин-6-ил}амино)-2гидроксициклопентил]метил сульфамат;
1-69	{(lS,2S,4R)-2-гидpoκcи-4-[(8-φeнил-9H-πypин-6-ил)aминo]циκлoπeнτил}мeτил сульфамат;
1-71	{(lS,2S,4R)-4-[(6-{[(lS)-3,3-димeτил-2,3-дигидpo-lH-индeн-l-ил]aминo}-5фторпиримидин-4-ил)амино]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат;
1-73	((lS,2S,4R)-4-{[8-(7-xлopxинoлин-4-ил)-7H-πypин-6-ил]oκcи}-2гидроксициклопентил)метил сульфамат;
1-74	((lS,2S,4R)-2-гидpoκcи-4-{[6-(l-нaφτил)-7H-πиppoлo[2,3-d]πиpимидин-4ил]амино}циклопентил)метил сульфамат;

- 7 031067

1-82	N-({ (1 S,2S,4R)-2-rtwpoKCH-4-[(6- {[(1 Ц,28)-2-метокси-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]циклопентил}метил)сульфамид
1-83	{(1 S,2S,4R)-4-[(5-cJ)Top-6- {[(1 R,2S)-2-MeTOKCH-2,3^Hi4^po-1 Н-инден-1 ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат;
1-84	{(18,28,4К)-2-гидрокси-4-[(8-хинолин-8-ил-7Н-пурин-6ил)амино]циклопентил}метил сульфамат;
1-87	((18,28^)-2-гидрокси-4-{[8-(1-нафтил)-9Н-пурин-6-ил]окси}циклопентил)метил сульфамат;
1-88	{(1 S,2S,4R)-4- [(8-бензи л-9Н-пурин-6-ил)амино] -2-гидроксициклопентил } метил сульфамат;
1-90	{(lS,2S,4R)-2-гидpoκcи-4-[(2-φeнил[l,3]oκcaзoлo[5,4-d]πиpимидин-7ил)амино]циклопентил}метил сульфамат;
1-93	((18,28/Ж.)-4-{[8-(2,6-диметоксифенил)-9Н-пурин-6-ил]амино}-2гидроксициклопентил)метил сульфамат; .
1-99	((1 S,2S,4R)-2-rHflpoKCH-4- {[8-(3-метоксифенил)-9Н-пурин-6ил]амино}циклопентил)метил сульфамат;
1-100	((lS,2S,4R)-4-{[8-(2,2-димeτил-2,3-дигидpo-l-бeнзoφypaн-7-ил)-9H-πypин-6ил]амино}-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат;
1-101	[(18,28,4К)-2-гидрокси-4-({8-[(3-метилфенил)сульфонил]-9Н-пурин-6ил}окси)циклопентил]метил сульфамат;
1-102	[(1 S,2S,4R)-4-( { 8-[4-(бензилокси)фенил]-7Н-пурин-6-ил}амино)-2гидроксициклопентил] метил сульфамат;
1-103	[(lS,2S,4R)-4-({8-[4-(димeτилaминo)-l-нaφτил]-7H-πypин-6-ил}oκcи)-2гидроксициклопентил]метил сульфамат;
1-105	{(1 8,28,4К)-4-[(8-бифенил-3-ил-9Н-пурин-6-ил)амино]-2гидроксициклопентил} метил сульфамат;
1-106	{(1 R,2R,3 S,4R)-4-[ { 6 - [(18)-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 -иламино]пиримидин-4ил}(метил)амино]-2,3-дигидроксициклопентил}метил сульфамат;
1-107	((1 S,2S,4R)-2-rHflpoKCH-4- {[8-(2-метилфенил)-9Н-пурин-6ил]амино } циклопентил)метил сульфамат;
1-108	((lR,2R,ЗS,4R)-2,3-дигидpoκcи-4-{[6-(φeнилэτинил)πиpимидин-4ил]амино}циклопентил)метил сульфамат;
1-109	((1 S,2S,4R)-2-rHflpoKCH-4- {[2-(1 -нафтил)-ЗН-имидазо[4,5-Ь]пиридин-7ил]окси}циклопентил)метил сульфамат;
1-111	((lS,2S,4R)-4-{[8-(4-xлopφeнил)-9H-πypин-6-ил]aминo}-2гидроксициклопентил)метил сульфамат;

- 8 031067

1-112	{(18,28,4К)-2-гидрокси-4-[(8-изохинолин-4-ил-7Н-пурин-6ил)окси]циклопентил} метил сульфамат;
1-115	{(18,28,4И)-2-гидрокси-4-[(6-{[(1Я,28)-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]циклопентил}метил сульфамат;
1-117	((18,28,4К)-4-{[8-(2,3-Дигидро-1-бензофуран-7-ил)-7Н-пурин-6-ил]амино}-2гидроксициклопентил)метил сульфамат;
1-118	((1 R,2R,3 S,4R)-2,3 -дигидрокси-4- {[6-(5,6,7,8-тетрагидронафтал ин-1 иламино)пиримидин-4-ил]амино} циклопентил)метил сульфамат;
1-121	((1 S,2S,4R)-2-iwipokch-4-{ [8-( 1,2,3,4-тетрагидронафталин-1 -ил)-9Н-пурин-6ил]амино}циклопентил)метил сульфамат;
1-122	[(18,28/Щ)-2-гидрокси-4-({8-[2-(трифторметил)фенил]-9Н-пурин-6ил}амино)циклопентил]метил сульфамат;
1-124	{(1 S,2S,4R)-4-[(6- {[(18)-3,3-Диметил-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 ил]амино[пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил[метил сульфамат;
1-125	{(1 S,2S,4R)-2-rHflpoKCH-4-[(4-{ [(1 R,2S)-2-MeTO кси-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 ил]амино}-1,3,5-триазин-2-ил)амино]циклопентил}метил сульфамат;
1-126	((18,28,4И)-2-гидрокси-4-{[8-(5,6,7,8-тетрагидронафталин-1-ил)-9Н-пурин-6ил]амино[ цикло пентил)метил сульфамат;
1-128	{(lS,2S,4R)-4-[(8-UHKaoreKCHa-9H-nypHH-6-Ha)aMHHo]-2гидроксициклопентил[метил сульфамат;
1-129	((1 S,2 S,4R)-4- {[8-( 1 -бензил-1 Н-пиразол-4-ил)-7Н-пурин-6-ил]окси} -2гидроксициклопентил)метил сульфамат;
1-130	{(18,28,4К)-2-гидрокси-4-[(9-метил-8-фенил-9Н-пурин-6ил)амино]циклопентил [метил сульфамат;
1-131	{(lS,2S,4R)-4-[(8-TpeT-6yTwi-9H-nypHH-6-Ha)aMHHo]-2гидроксициклопентил } метил сульфамат;
1-133	((lS,2S,4R)-2-гидpoκcи-4-{[8-(2-мeτoκcиφeнил)-9H-πypин-6ил]амино } цикло пентил)метил сульфамат;
1-134	{(1 S,2S,4R)-4-[(4-{[(lS)-3,3-aHMeTwi-2,3-дигидро- 1Н-инден-1 -ил]амино[-1,3,5триазин-2-ил)амино]-2-гидроксициклопентил[метил сульфамат;
1-136	[(lS,2S,4R)-2-гидpoκcи-4-({8-[(3-мeτилφeнил)cyльφaнил]-7H-πypин-6ил } окси)циклопентил] метил сульфамат;
1-137	[(18,28^)-4-({8-[2-(диметиламино)фенил]-9Н-пурин-6-ил[амино)-2гидроксициклопентил]метил сульфамат;
1-139	((1 S,2S,4R)-2-rHflpoKCH-4- {[8-(4-пиррол идин-1 -ил-1 -нафтил)-7Н-пурин-6ил]окси[циклопентил)метил сульфамат;
1-140	((18,28,4И)-2-гидрокси-4-{[8-(1Н-индол-3-ил)-7Н-пурин-6ил]окси[ циклопентил)метил сульфамат;
1-142	{(1 S,2S,4R)-2-rHflpoKCH-4-[(6-{ [(1 R,2S)-2-MeTOKCH-1,2,3,4-тетрагидронафталин-1 ил]амино[пиримидин-4-ил)окси]циклопентил[ метил сульфамат;
1-143	{(1 S,2S,4R)-2-raapoKCH-4-[(6-{ [(1 S,2R)-2-MeTOKCH-1,2,3,4-тетрагидронафталин-1 ил]амино[пиримидин-4-ил)окси]циклопентил[метил сульфамат;
1-146	((1S,2S,4И)-4-[4-[(18)-2,3-дигидро-1 Н-инден-1-иламино]-5,6-дигидро-7Нпирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил}-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат;
1-147	{(1S,2S,4R)-4-[(4-{[(l И)-2,2-дифтор-2,3-дигидро-1 Н-инден-1-ил]амино[-1,3,5триазин-2-ил)амино]-2-гидроксициклопентил[метил сульфамат;
1-150	{(1 S,2S,4R)-2-rnapoKCH-4-[(6-{[(1 R,2S)-2-мето кси-4,4-дим етил-1,2,3,4тетрагидронафталин-! -ил]амино[пиримидин-4-ил)окси]циклопентил [метил сульфамат;
1-151	{(18,28,4И)-2-гидрокси-4-[(6-{[(18,2Н)-2-метокси-4,4-диметил-1,2,3,4тетрагидронафталин-1-ил]амино[пиримидин-4-ил)окси]циклопентил [метил сульфамат; и
1-153	[(1 S,2S,4R)-4-({4-[( 1 S)-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 -иламино]-1,3,5-триазин-2ил[амино)-2-гидроксициклопентил]метил сульфамат.

- 9 031067

Ученые Clalbome et al. далее описывают, что соединения в табл. 2 демонстрируют значения 1С₅₀ более 500 нМ и менее 10 мкМ в анализе NAE (пример 137 в публикации Clalbome).

Таблица 2

1-4	[(13?,27?,35',4/?)-4-({2-[(циклогексилметил)амино]пиримидин-4-ил}амино)-2,3дигидроксициклопентил]метил сульфамат
1-7	((17?,27?,35,47?)-4- {[2-(бензиламино)пиримидин-4-ил]амино} -2,3дигидроксициклопентил)метил сульфамат
1-16	{(1 R,2R,3S,4R)-2,3 -диги дрокси-4-[(пиридин-3 -илкарбонил)амино] циклопентил } метил сульфамат
1-28	[(1/?,27?,38,,4/?)-2,3-дигидрокси-4-(изоникотиноиламино)циклопентил]метил сульфамат
1-33	[(15,25,4Х)-4-({6-[(15)-2,3-дигидро-1Я-инден-1-иламино]пиримидин-4-ил}метил)2-гидроксициклопентил]метил сульфамат
1-35	{(18,28,4К)-4-[(2-{[(18)-5-хлор-3,3-диметил-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиридин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил} метил сульфамат

1-36	{(18,28,41<)-2-гидрокси-4-[(7-метил-8-фенил-7Н-пурин-6-ил)амино] цикло пентил } метил сульфамат
1-48	{(18,28,4И)-4-[(8-бифенил-2-ил-9Н-пурин-6-ил)амино]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат
1-53	((18,28,4Д)-4-{[6-({(18,2К)-2-[(диметиламино)метил]-2,3-дигидро-1 Н-инден-1ил}амино)пиримидин-4-ил]окси}-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат
1-54	[(1 S,2S,4R)-4-( {6-[( 18)-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 -иламино]-2-оксо-2,3дигидропиримидин-4-ил}амино)-2-гидроксициклопентил]метил сульфамат
1-66	((lS,2S,4R)-4-{[6-({(lS,2S)-2-[(flHMeTHaaMHHo)Kap6oHHa]-2,3-flHrHApo-lH-HHaeH-lил}амино)пиримидин-4-ил]окси}-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат
1-77	{(1 S,2S,4R)-2-rHApoKCH-4-[(6- {[(1 S,2R)-1 -мето кси-2,3-дигидро-1 Н-инден-2-ил]окси}пиримидин-4-ил)окси]циклопентил}метил сульфамат
1-79	{(1 S,2S,4R)-2-nmpoKCH-4-[(6-{ [(1 R,2S)-1 -мето кси-2,3-дигидро-1 Н-инден-2-ил]окси}пиримидин-4-ил)окси]циклопентил}метил сульфамат
1-80	{(1 S,2S,4R)-4- [(9-бензил-9Н-пурин-6-ил)окси] -2-гидроксициклопентил} метил сульфамат
1-81	((1 S,2 S,4R)-2-r^itpoKCH-4- {[6-(2-фени лэтил)пиримидин-4-ил] амино } циклопентил)метил сульфамат
1-86	((1Я,2И,38,4И)-2,3-дигидрокси-4-{[б-(2-фенилэтил)пиримидин-4-ил]амино}циклопентил)метил сульфамат
1-92	{(lR,2R,3S,4R)-4-[(6-{[(lS,2S)-2-(6eH3WiOKCH)HmcnoneHTHn]aMHHo}nHpHMHAHH-4ил)амино]-2,3-дигидроксициклопентил}метил сульфамат
1-94	[(lS,2S,4R)-4-({2-[(lS)-2,3-дигидро-1 Н-инден-1-иламино]пир идин-4-ил }окси)-2гидроксициклопентил]метил сульфамат
1-96	{(1 S,2S,4R)-2-thapokch-4-[(6-{ [(1 R,2S)-2-MeTOKCH-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 -ил]окси} пир имидин-4-ил)окси]цикло пентил} метил сульфамат
1-98	{(lS,2S,4R)-2-THflpoKCH-4-[(6-{[(lS,2R)-2-MeTOKCH-2,3-дигидро-1 Н-инден- 1-ил]окси} пиримидин-4-ил)окси]циклопентил} метил сульфамат
1-110	(lS,2S,4R)-2-(гидpoκcимeτил)-4-{[8-(5,6,7,8-τeτpaгидpoнaφτaлин-l-ил)-9H-πypин6-ил]амино} циклопентанол
1-113	[(Щ,21<,38,4И)-4-({2-[(18)-2,3-дигидро-1Н-инден-1-иламино]-5-фторпиримидин4-ил}амино)-2,3-дигидроксициклопентил]метил сульфамат
1-114	{(18,28,4Ц)-2-гидрокси-4-[(6-фенилпиримидин-4-ил)окси]циклопентил}метил сульфамат
1-119	((lS,2S,4R)-2-гидpoκcи-4-{[6-(l-нaφτилмeτoκcи)πиpимидин-4-ил]oκcи}циклопентил)метил сульфамат

- 10 031067

1-120	((18,28,4К)-4-{[6-(1,3-дигидро-2Н-изоиндол-2-ил)пиримидин-4-ил]окси}-2гидроксициклопентил)метил сульфамат
1-123	{(18,28,4К)-2-гидрокси-4-[метил(9-метил-8-фенил-9Н-пурин-6-ил)амино] циклопентил} метил сульфамат
1-127	((18,28,4К)-4-{[6-(циклопентиламино)пиримидин-4-ил]окси}-2гидроксициклопентил)метил сульфамат
1-132	{(1 S,2S,4R)-4- [(6-бензилпиримидин-4-ил)окси] -2-гидроксициклопентил } метил сульфамат
1-138	(18,28,4К)-4-{[8-(2,3-дигидро-1,4-бензодиоксин-5-ил)-9Н-пурин-6-ил]амино}-2(гидроксиметил)циклопентанол
1-141	((18,28,4К)-2-гидрокси-4-{[6-(2-нафтилметокси)пиримидин-4-ил]окси}циклопентил)метил сульфамат
1-148	{(lS,2S,4R)-4-[(6-{[(lS,2R)-2,7-димeτoκcи-l,2,3,4-τeτpaгидpoнaφτaлин-l-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат
1-149	{(1 S,2S,4R)-4- [(6- {[(1 R,2S)-2,7-диметокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-1 -ил] амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат
1-152	((1 S,3 S)-3 - {[8-( 1 -нафтил)-9Н-пурин-6-ил]окси} циклопентил)метил сульфамат

Ученые Claiborne ct al. описывают также, что соединения в табл. 3 демонстрируют значения IC₅₀ более 10 мкМ в анализе NAE (пример 137 в публикации Claiborne).

Таблица 3

1-13	{(17?,27?,35,47?)-4-[(6-амино-2-метилпиримидин-4-ил)амино]-2,3дигидроксициклопентил } метил сульфамат
1-20	[(17?,27?,35,47?)-4-({2-[бензил(метил)амино]пиримидин-4-ил}амино)-2,3дигидроксициклопентил]метил сульфамат
1-22	[(17?,27?,35,4/?)-4-({6-[бензил(метил)амино]пиримидин-4-ил}амино)-2,3дигидроксициклопентил] метил сульфам ат
1-23	{(17?, 2R, 3S, 47?)-2,3-дигидрокси-4-[(пир идин-2-илкарбонил)амино]циклопентил}метил сульфамат
1-30	((1 R,2R,3S,4R)-4- {[6-(бензиламино)-2-мети л пирими дин-4-ил] амино } -2,3дигидроксициклопентил)метил сульфамат
1-31	[(15,25,47?)-4-( { 6- [(15)-2,3-Дигидро-1 Я-иидеи-1 -иламино] пиримидин-4-ил } окси)2-гидроксициклопентил] метил сульфамат
1-58	[(lR,3R,4R)-3-({6-[(lS)-2,3-AHrHflpo-l Н-инден-1-иламино]пиримидин-4-ил }амино)-4-гидроксициклопентил]метил сульфамат
1-61	((lS,2S,4R)-4-{[6-(3,4-дигидpoизoxинoлин-2(lH)-ил)πиpимидин-4-ил]oκcи}-2гидроксициклопентил)метил сульфамат
1-76	[(18,ЗЯ,4И)-3-({6-[(18)-2,3-дигидро-1 Н-инден-1-иламино]пиримидин-4-ил}амино)-4-гидроксициклопентил] метил сульфамат
1-85	{(lR,2R,3S,4R)-4-[(6-{[(lR,2R)-2-(6eH3wioKCH)4HKnoneHmn]aMHHo}nHpHMnimH-4ил)амино]-2,3-дигидроксициклопентил}метил сульфамат
1-89	[(lS,2S,4R)-4-({6-[(4-xлopбeнзил)oκcи]πиpимидин-4-ил}oκcи)-2гидроксициклопентил]метил сульфамат
1-97	[(lS,2S,4R)-2-гидpoκcи-4-(πиpимидин-4-илoκcи)циκлoπeнτил]мeτил сульфамат
1-144	{(lR,2R,3S,4R)-4-[(2-{[(l 8)-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 -иламино]карбонил }пиридин4-ил)амино]-2,3-дигидроксициклопентил}метил сульфамат
1-145	((1 R,2R,3 S,4R)-4-{ [2-(2,3-дигидро-1 Н-индол-1 -илкарбонил)пиридин-4-ил]амино} 2,3-дигидроксициклопентил)метил сульфамат

Ученые Claibome et al. описывают также HTRF анализы sumo-активирующего фермента (SAE) и убиквитин-активирующего фермента (UAE) в примере 137. Однако значения IC₅₀ не указаны.

Как показано на фигурах, площадь под кривой зависимости концентрации в плазме от времени для 1-216, введенного при 10 мг/кг (фиг. 1), сравнима с этим же показателем для 1-115, введенного при 30 мг/кг (фиг. 2), и составляет приблизительно половину площади под кривой зависимости концентрации от времени, наблюдаемой для 1-216, введенного при 30 мг/кг (фиг. 3). Следовательно, можно ожидать, что соединение 1-216 представляет собой в 2-3 раза более эффективный ингибитор NAE, чем 1-115.

- 11 031067

Термин около используется в настоящем документе для обозначения приблизительного значения, в диапазоне, грубо или около. При использовании термина около в сочетании с числовым диапазоном, он модифицирует этот диапазон, расширяя границы выше и ниже указанных числовых значений. Если не указано иное, термин около используется в настоящем документе для модификации числового значения выше и ниже указанного значения на разницу 10%.

Если не указано иное, термины включает и включая и т.п. не являются ограничивающими. Например, включая означает включая, но не ограничиваясь этим, если не указано иное.

В соединениях, описанных в настоящем документе, в которых определена относительная стереохимия, диастереомерная чистота соединения предпочтительно составляет по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере 95% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99%. При использовании в настоящем документе термин диастереомерная чистота относится к количеству соединения, имеющего изображенную относительную стереохимию, выраженную в процентах от общего количества всех присутствующих диастереомеров.

Предпочтительно энантиомерная чистота соединения составляет по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, еще более предпочтительно по меньшей мере 95% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99%. При использовании в настоящем документе термин энантиомерная чистота относится к количеству соединения, имеющего изображенную абсолютную стереохимию, выраженную в процентах от общего количества изображенного соединения и его энантиомера.

Способы определения диастереомерной и энантиомерной чистоты хорошо известны в данной области. Диастереомерная чистота может быть определена любым аналитическим методом, способным количественно различать соединение и его диастереомеры. Примеры пригодных аналитических методов включают, без ограничения, спектроскопию ядерного магнитного резонанса (ЯМР), газовую хроматографию (ГХ) и высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ). Точно так же, энантиомерная чистота может быть определена любым аналитическим методом, способным количественно различать соединение и его энантиомер. Примеры пригодных аналитических способов включают, без ограничения, ГХ или ВЭЖХ с использованием хирального материала для упаковки колонки. Энантиомеры могут быть различены по ЯМР, если они сначала были дериватизованы оптически обогащенным дериватизующим агентом, например кислотой Мошера.

Термин кристаллический, используемый в настоящем документе, относится к твердому веществу, в котором составные атомы, молекулы или ионы упакованы симметрично упорядоченным, повторяющимся трехмерным способом, имеющим высокосимметричную химическую структуру. В частности, кристаллическая соль может быть получена в виде одной или более кристаллических форм. Для целей настоящего изобретения термины кристаллическая форма и полиморф являются синонимами; эти термины определяют различия между кристаллами, имеющими различные свойства (например, различные диаграммы РПД, различные результаты сканирования ДСК). Псевдополиморфы обычно являются различными сольватами материала, поэтому их свойства отличаются друг от друга. Так, в настоящем документе предполагается, что каждый отдельный полиморф и псевдополиморф представляет собой отдельную кристаллическую форму.

Термин в основном кристаллический относится к солям, содержащим по меньшей мере определенный весовой процент кристаллического вещества. Определенные весовые проценты включают 50, 60, 70, 75, 80, 85, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5 и 99,9%. В некоторых вариантах реализации в основном кристаллический относится к солям, содержащим по меньшей мере 70% кристаллического вещества. В некоторых вариантах реализации в основном кристаллический относится к солям, содержащим по меньшей мере 80% кристаллического вещества. В некоторых вариантах реализации в основном кристаллический относится к солям, содержащим по меньшей мере 85% кристаллического вещества. В некоторых вариантах реализации в основном кристаллический относится к солям, содержащим по меньшей мере 90% кристаллического вещества. В некоторых вариантах реализации в основном кристаллический относится к солям, содержащим по меньшей мере 95% кристаллического вещества.

Термин сольват или сольватированный означает физическую связь соединения настоящего изобретения с одной или более молекулами растворителя. Эта физическая связь включает водородную связь. В некоторых случаях сольват можно выделить, например, если одна или более молекул растворителя включена в кристаллическую решетку твердого кристаллического вещества. Сольват или сольватированный включает фазу раствора и поддающиеся выделению растворители. Типичные сольваты включают, например, гидраты, этанолаты и метанолаты.

Термин гидрат относится к сольвату, в котором молекула растворителя представляет собой Н₂О, которая присутствует в определенном стехиометрическом количестве и включает, например, гемигидраты, моногидраты, дигидраты и тригидраты.

Термин смесь относится к смешанным компонентам смеси, независимо от фазового состояния этой комбинации (например, жидкость или жидкость/кристаллическое вещество).

Термин затравка относится к добавлению кристаллического материала к раствору или смеси для инициации кристаллизации.

- 12 031067

Некоторые варианты реализации настоящего изобретения относятся к солянокислой соли 1-216, в которой, по меньшей мере, определенный весовой процент солянокислой соли представляет собой кристаллическое вещество. В некоторых вариантах реализации солянокислая соль является в основном кристаллической. Примеры кристаллической или в основном кристаллической солянокислой соли включают кристаллическую форму солянокислой соли или смесь различных кристаллических форм. Некоторые варианты реализации настоящего изобретения относятся к солянокислой соли, в которой, по меньшей мере, определенный весовой процент солянокислой соли является кристаллическим веществом. Определенный весовой процент включает 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 85, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5 и 99,9%. Если определенный весовой процент солянокислой соли является кристаллическим веществом, остальная часть солянокислой соли представляет собой аморфную форму солянокислой соли.

Некоторые варианты реализации настоящего изобретения относятся к солянокислой соли 1-216 в кристаллической форме или в основном в кристаллической форме. Кристаллическая форма может представлять собой определенный весовой процент кристаллической солянокислой соли. Определенный весовой процент включает 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 85, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5 и 99,9%. Если определенный весовой процент солянокислой соли представляет собой определенную кристаллическую форму, то остальная часть солянокислой соли представляет собой некую комбинацию аморфной соли солянокислой соли и одной или более кристаллических форм солянокислой соли, кроме указанной кристаллической формы. В некоторых вариантах реализации солянокислая соль представляет собой кристаллическую форму по меньшей мере на 90 вес.%. В некоторых вариантах реализации солянокислая соль представляет собой кристаллическую форму по меньшей мере на 95 вес.%. В некоторых вариантах реализации солянокислая соль представляет собой кристаллическую форму по меньшей мере на 80 вес.%. В некоторых вариантах реализации солянокислая соль представляет собой кристаллическую форму по меньшей мере на 85 вес.%.

Если не указано иное, при определении кристаллической формы солянокислой соли с помощью одного или более пиков РПД, представленных в углах 2θ, каждое из значений 2Θ следует понимать как данное значение ± 0,2°.

В описании и формуле изобретения при определении кристаллической формы солянокислой соли с помощью одной или более температур кривой ДСК (например, начало эндотермического перехода, плавление и тому подобное) каждое из температурных значений следует понимать как данное значение ± 2°С.

Твердые состояния

В настоящем документе представлен набор характеризующей информации для описания кристаллической формы 1 (формы 1) солянокислой соли 1-216.

Фиг. 4 иллюстрирует диаграмму порошковой рентгеновской дифракции (РПД) формы I солянокислой соли 1-216, полученной с помощью излучения СиКа. Пики, указанные на фиг. 4, включают пики, перечисленные в табл. 4.

Таблица 4

Угол 2-тета °	Интенсив ность %		Угол 2-тета °	Интенсив ность %
4,491	63,1		21,31	67,6
7,506	58,9		21,771	83,5
8,89	24,7		22,206	34,2
9,847	41,6		22,35	55,6
13,274	29,2		22,707	58,9
14,418	59,1		23,045	27,4
14,613	58		23,528	34,4
15,176	100		24,032	69,3
15,874	58,1		24,803	53,6
17,012	16,7		25,654	41,1
17,205	42,1		26,407	40,9
17,847	28,4		26,694	34,5
18,241	32,2		26,932	33,1
18,49	21,7		27,978	17
19,177	33,9		28,36	16,7
19,454	53,6		29,066	21,4
20,045	35,4

В некоторых вариантах реализации форма I характеризуется диаграммой РПД, имеющей пики при углах 2Θ 4,5, 15,2, 21,3, 21,8 и 24,0°. В некоторых вариантах реализации форма I характеризуется диаграммой РПД, имеющей пики при углах 2Θ 4,5, 7,5, 14,4, 14,6, 15,2, 15,9, 19,5, 21,3, 21,8, 22,4, 22,7, 24,0 и 24,8°. В некоторых вариантах реализации форма I характеризуется диаграммой РПД, имеющей пики при углах 2Θ 4,5, 7,5, 8,9, 9,8, 13,3, 14,4, 14,6, 15,2, 15,9, 17,2, 19,5, 20,0, 21,3, 21,8, 22,4, 22,7, 24,0, 24,8, 25,7 и

- 13 031067

26,4°. В некоторых вариантах реализации форма I характеризуется диаграммой РПД, представленной на фиг. 4.

В некоторых вариантах реализации форма I характеризуется диаграммой РПД, имеющей эталонный пик с углом 2Θ 4,5±0,3°, и имеющей пики при углах 2Θ 10,7, 16,8, 17,3 и 19,5° относительно этого эталонного пика.

Термин эталонный пик относится к пику на РПД дифрактограмме, который специалисты в данной области рассматривают как информирующий о полиморфной форме материала, т.е. дифференцированный от аппаратурного шума. Под относительным понимают, что наблюдаемый угол 2Θ каждого пика представляет собой сумму угла 2Θ эталонного пика и относительного угла 2Θ этого пика. Например, если эталонный пик имеет угол 2Θ 4,4°, то относительные пики имеют углы 2Θ 15,1, 21,2, 21,7 и 23,9°; если эталонный пик имеет угол 2Θ 4,5°, то относительные пики имеют углы 2Θ 15,2, 21,3, 21,8 и 24,0°; если эталонный пик имеет угол 2Θ 4,6°, то относительные пики имеют углы 2Θ 15,3, 21,4, 21,9 и 24,1°; и т.д. В некоторых вариантах реализации форма I характеризуется диаграммой РПД, имеющей эталонный пик с углом 2Θ 4,5±0,3° и имеющей пики с углами 2Θ 3,0, 9,9, 10,1, 10,7, 11,4, 15,0, 16,8, 17,3, 17,9, 18,2, 19,5 и 20,3° относительного этого эталонного пика. В некоторых вариантах реализации форма I характеризуется диаграммой РПД, имеющей эталонный пик с углом 2Θ 4,5±0,3° и имеющей пики с углами 2Θ 3,0, 4,4, 5,3, 8,8, 9,9, 10,1, 10,7, 11,4, 12,7, 15,0, 15,5, 16,8, 17,3, 17,9, 18,2, 19,5, 20,3, 21,2 и 21,9° относительно этого эталонного пика. Любой из пиков, которые рассматриваются специалистами в данной области как информирующие о полиморфной форме материала, может служить в качестве эталонного пика, а затем могут быть рассчитаны относительные пики. Например, если эталонный пик имеет угол 2Θ 24.0°, то относительные пики имеют углы 2Θ -19,5°, -8,8°, -2,7° и -2,2° относительно этого эталонного пика.

Фиг. 5 иллюстрирует профиль дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) формы I. Термограмма ДСК изображает график зависимости теплового потока от температуры образца, скорость изменения температуры составляет около 10°С/мин. В некоторых вариантах реализации форма I характеризуется в основном таким же профилем ДСК, как показан на фиг. 5. Фиг. 5 иллюстрирует эндотермическое событие с началом при температуре около 129,8°С и пик при температуре около 135,6°С, соответствующий потере воды, связанной с плавлением. Наблюдается также широкая эндотерма с началом при температуре около 181,6°С и пиком при температуре около 195,5°С и узкая эндотерма с началом при температуре около 275,3°С и пиком при температуре около 275,5°С.

Фиг. 6 иллюстрирует профиль термогравиметрического анализа (ТГА) формы I солянокислой соли

1-216. Термограмма ТГА изображает график зависимости процентной потери массы образца от температуры, скорость изменения температуры составляет около 10°С/мин. Фиг. 6 иллюстрирует приблизительно 3,7% снижение массы между 100°С и 150°С, позволяя предположить, что 1-216 НС1 форма I представляет собой моногидрат. В некоторых вариантах реализации 1-216 НС1 форма I характеризуется в основном таким же профилем ТГА, как показан на фиг. 6. Измерения Карла Фишера демонстрируют содержание воды около 3,5%, дополнительно подтверждая, что снижение массы, наблюдаемое на профиле ТГА, обусловлено потерей воды, указывая, что форма I представляет собой моногидрат.

Фиг. 10 иллюстрирует диаграмму порошковой рентгеновской дифракции (РПД) формы II солянокислой соли 1-216, полученной с помощью излучения СиКа. Пики, указанные на фиг. 10, включают пики, перечисленные в табл. 5.

Таблица 5

Угол 2-тета °	Интенсив ность %		Угол 2-тета °	Интенсив ность %
3,261	8,4		18,202	12
4,269	24,9		18,495	11,8
6,85	5,1		19,579	37,2
8,693	81,3		20,014	27,6
Н,1	2,6		20,813	20,1
11,252	3,8		22,004	18,4
12,426	18,4		22,456	23
13,115	3,3		23,128	29
13,522	3,6		24,234	50,4
14,529	13		24,728	18
15,176	37,4		25,737	16,5
15,708	100		28,163	9,6
16,574	6,9		29,403	11
17,253	11,3

В некоторых вариантах реализации форма II характеризуется диаграммой РПД, имеющей пики при углах 2Θ 8,7, 15,2, 15,7, 19,6 и 24,2°. В некоторых вариантах реализации форма II характеризуется диаграммой РПД, имеющей пики при углах 2Θ 4,3, 8,7, 15,2, 15,7, 19,6, 20,0, 20,8, 22,5, 23,1 и 24,2°. В некоторых вариантах реализации форма II характеризуется диаграммой РПД, имеющей пики при углах 2Θ 4,3, 8,7, 12,4, 14,5, 15,2, 15,7, 17,3, 18,2, 18,5, 19,6, 20,0, 20,8, 22,0, 22,5, 23,1, 24,2, 24,7, 25,7, 28,2 и 29,4°.

- 14 031067

В некоторых вариантах реализации форма II характеризуется практически такой же диаграммой РПД, как показана на фиг. 10.

В некоторых вариантах реализации форма II характеризуется диаграммой РПД, имеющей эталонный пик с углом 2Θ 8,7±0,3° и имеющей пики при углах 2Θ 6,5, 7,0, 10,9 и 15,5° относительно этого эталонного пика. Термины эталонный пик и относительно имеют такие же значения, как описано ранее. В некоторых вариантах реализации форма II характеризуется диаграммой РПД, имеющей эталонный пик с углом 2Θ 8,7±0,3° и имеющей пики при углах 2Θ -4,4, 6,5, 7,0, 10,9, 11,3, 12,1, 13,8, 14,4 и 15,5° относительно этого эталонного пика. В некоторых вариантах реализации форма II характеризуется диаграммой РПД, имеющей эталонный пик с углом 2Θ 8,7±0,3° и имеющей пики с углами 2Θ -4,4, 3,7, 5,8, 6,5, 7,0, 8,6, 9,5, 9,8, 10,9, 11,3, 13,3, 13,8, 14,4, 15,5, 16,0, 17,0, 19,5 и 20,7° относительно этого эталонного пика. Любой из пиков, которые рассматриваются специалистами в данной области как информирующие о полиморфной форме материала, может служить в качестве эталонного пика, а затем могут быть рассчитаны относительные пики. Например, если эталонный пик имеет угол 2Θ 24,2°, то относительные пики имеют углы 2Θ -15,5, -9,0, -8,5 и -4,6° относительно этого эталонного пика.

Синтетические способы

Соединение 1-216 может быть получено по способам, известным специалистам в данной области, и/или со ссылкой на схемы, представленные ниже, и следующие примеры. Примеры синтетических путей представлены далее на схемах 1-4, а также в следующих примерах.

Схема 1

(1) (R ,R)-N ,ЬГ-Бис(3,5-ди-третбутилсалицилиден)-1,2циклогександиамино-Mn-CI ^С|

NaOCI/P₃NO 0 °C 1 час, комнатная температура 1 час

KOtBu (медленное добавление)

Mel, ТГФ

гидразин этанол

На схеме 1 описан синтез (1И,28)-5-хлор-2-метоксииндан-1-амина (8), который дополнительно иллюстрирован ниже в примере 1. 6-Хлор-1Н-инден (1) эпоксидировали с помощью катализатора Якобсена для получения оксирена (2), который обработали дымящей серной кислотой в ацетонитриле, в результате чего после добавления воды и нагревания получили ге1-(1И,28)-1-амино-5-хлориндан-2-ол (3). Ке1-(1И,28)-1-амино-5-хлориндан-2-ол (3) хирально разделили с помощью П-(-)-миндальной кислоты для получения (1Я,28)-1-амино-5-хлориндан-2-ола (5) после удаления хирального вспомогательного вещества. Защиту первичного амина в соединении (5) выполнили с помощью фталевого ангидрида, получив соединение (6). Метилирование гидроксильной группы метилйодидом дало соединение (7), с которого затем сняли защиту с помощью гидразина для получения заданного (1И,28)-5-хлор-2-метоксииндан-1амина (8).

- 15 031067

Схема 2

TBSD

T0SO (12)

Катехолборан, Rh катализатор

Ферментативное разделение

Комнатная температура 24 часа

Рацемический ^с'ХХ>'^оме

FjHj. n-BuOH, DI PEA.

148 °C

<1® 1216 1-216 HCl

На схеме 2 показан синтез {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата НС1 формы 1, который дополнительно иллюстрирован ниже в примере 2. Выполнили защиту первичного спирта рацемического соединения (9) в виде трет-бутилдиметилсилилового эфира с образованием соединения (10), которое ферментативно разделили с помощью Candida Antartica на акриловой смоле с образованием соединения (11) с энантиомерным избытком более 99%. Затем выполнили защиту вторичного спирта в соединении (11) в виде его трет-бутилдиметилсилилового эфира с образованием (12). Соединение (12) обработали катехолбораном в присутствии катализатора Вилкинсона для получения (13), которое затем взаимодействовало с 4,6-дихлорпиримидином с образованием соединения (14). С первичного спирта (14) селективно сняли защиту, а затем установили индановую часть молекулы путем взаимодействия (15) с (^^)-5-хлор-2-метоксииндан-1-амином (8) с образованием соединения (16). 1-216 получили взаимодействием соединения (16) с хлорсульфонамидом, с последующим снятием защиты вторичного спирта в кислотных условиях. 1-216 обработали хлороводородной кислотой в ацетонитриле для получения формы I солянокислой соли 1-216.

На схеме 3 описано получение (^^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-амина гидрохлорида (20), которое дополнительно иллюстрировано ниже в примере 4. 5-Хлор-2,3-дигидро-1Н-инден-1-он (17) взаимодействовал с триметилортоформиатом в кислотных условиях, затем выполнили обработку

- 16 031067 реагентом Козера [PhI(OH)(OTs)] для получения 5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-она (18). Инденон обработали (Я)-трет-бутил сульфинамидом в присутствии тетраэтоксида титана для получения соответствующего сульфинамида (19). Реакцию выполняли до тех пор, пока не осталось менее 5% нежелательного диастереомера, обнаруживаемого по ВЭЖХ. Неочищенный сульфинамид восстановили с помощью NaBH4 для получения первичного амина, который обработали хлороводородной кислотой для получения (1К,28)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-амина гидрохлорида (20).

Схема 4

2) TMSCI

Стадия 1

2) ВщГЧОАс

3) 1Мводный NaOH

HCl Форма I

Схема 4 иллюстрирует способ получения формы I гидрохлоридной соли 1-216, который дополнительно иллюстрирован ниже в примере 5. Эпоксидное кольцо в (18,2К,38,5К)-3-(бензилокси)-2(бензилоксиметил)-6-оксабицикло[3.1.0]гексане (21) открыли обработкой диизопропиламидом лития, и полученный анион уловили обработкой триметилсилилхлоридом для получения (22). Двойную связь восстановили с помощью водорода и катализатора Pd/BaSO₄, а триметилсилиловую защитную группу сняли для получения вторичного спирта (23). Вторичный спирт (23) мезилировали, а затем обработали тетрабутиламмония ацетатом, затем гидроксидом натрия для получения соединения (24), которое взаимодействовало с гидридом натрия и 4,6-дихлорпиримидином с образованием промежуточного соединения (25). Удаление бензиловых защитных групп с помощью трихлорида бора для получения (26) с последующим взаимодействием с (1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-амина гидрохлоридом (20) при 130°С и 50 psi привело к образованию ((^^,4Е)-4-(6-((1Е^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро1Н-инден-1-иламино)пиримидин-4-илокси)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамата (27). Первичный спирт в соединении (27) сульфамировали для получения 1-216. форму I солянокислой соли 1-216 получили обработкой 1-216 в изопропиловом спирте 6 М хлороводородной килотой с последующим добавлени ем изопропилацетата в качестве анти-растворителя.

Применение

Химические соединения настоящего изобретения представляют собой пригодные ингибиторы активности фермента Е1. В частности, указанные химические соединения созданы в качестве ингибиторов ΝΑΕ. Понятие ингибиторов включает химические соединения, которые снижают промотирующее действие ферментов Е1 в сопряжении убпм (в частности, Nedd8) с белками-мишенями (например, снижение убиквитинилирования, неддилирования), уменьшают межклеточную сигнализацию, опосредованную сопряжением убпм (в частности, Nedd8), и/или снижают протеолиз, опосредованный сопряжением убпм (в частности, Nedd8) (например, ингибирование куллин-зависимого убиквитинилирования и протеолиза (например, убиквитин-протеасомный путь)). Так, химические соединения настоящего изобретения могут быть оценены на их способность ингибировать фермент El in vitro или in vivo или в клетках, или в животных моделях в соответствии со способами, подробно представленными далее в настоящем документе, или со способами, известными в данной области. Химические соединения могут быть оценены на их способность связывать или напрямую опосредовать активность фермента Е1. Альтернативно, активность химических соединений может быть проверена непрямыми клеточными анализами или анализами, изме

- 17 031067 ряющими нисходящие эффекты активации Е1 для оценки ингибирования нисходящих эффектов ингибирования

Е1 (например, ингибирование куллин-зависимого убиквитинилирования и протеолиза). Например, активность может быть оценена определением убпм-сопряженных субстратов (например, убпмсопряженных Е2, неддилированных куллинов, убиквитинилированных субстратов); определением стабилизации нисходящих белковых субстратов (например, стабилизация р27, стабилизация I-κΒ); определением ингибирования активности UPP; определением нисходящих эффектов ингибирования белка Е1 и стабилизации субстрата (например, репортерные анализы, например, анализ по гену-репортеру NF-κΒ, анализ по гену-репортеру р27). Анализы для оценки активности описаны ниже в Экспериментальном разделе и/или известны в данной области.

Следует понимать, что химические соединения настоящего изобретения могут быть дериватизованы по функциональным группам для получения пролекарственных производных, которые могут превращаться обратно в исходные химические соединения in vivo. Примеры таких пролекарств включают физиологически приемлемые и метаболически лабильные производные. Более конкретно, пролекарство химического соединения настоящего изобретения представляет собой карбамат или амид группы -NHхимического вещества, или простой или сложный эфиры группы -ОН химического вещества.

Такие карбаматные пролекарства группы -NH- химического соединения включают следующие карбаматы:

9-флуоренилметил, 9-(2-сульфо)флуоренилметил, 9-(2,7-дибром)флуоренилметил,

-тетрабензо [a,c,g,i] флуоренилметил, 2-хлор-3 -инденилметил, бенз [f| инден-3 -илметил, 2,7-ди-трет-бутил-[9-(10,10-диоксо-10,10,10,10-тетрагидротио-ксантил)]метил,

1,1 -диоксобензо [Ь]тиофен-2-ил-метил, 2,2,2-трихлорэтил, 2-триметилсилилэтил,

2-фенилэтил, 1-(1-адамантил)-1-метилэтил, 2-хлорэтил, 1,1-диметил-2-галоэтил,

1,1 -диметил-2,2-дибромэтил, 1,1 -диметил-2,2,2-трихлорэтил, 1 -метил-1 -(4-бифенилил)этил,

1- (3,5-ди-трет-бутилфенил)-1-метилэтил, 2-(2'- и 4'-пиридил)этил, 2,2-бис-(4'-нитрофенил)этил, №2-пивалоиламино)-1,1-диметилэтил, 2-[(2-нитрофенил)дитио]-1-фенилэтил,

2- Щ,№дициклогексилкарбоксамидо)этил, трет-бутил, 1-адамантил, 2-адамантил, винил, аллил, 1-изопропилаллил, циннамил, 4-нитроциннамил, 3-(3'-пиридил)проп-2-енил, 8-хинолил, N-гидроксипиперидинил, алкилдитио, бензил, параметоксибензил, паранитробензил, парабромбензил, парахлорбензил, 2,4-дихлорбензил, 4-метилсульфинилбензил, 9-антрилметил, дифенилметил, фенотиазинил-(10)-карбонил, N'-паратолуолсульфониламинокарбонил и N'-фениламинотиокарбонил.

Такие амидные пролекарства группы -NH- химического соединения включают следующие амиды: N-формил, N-ацетил, N-хлорацетил, N-трихлорацетил, N-трифторацетил, N-фенилацетил, N-3-фенилпропионил, N-4-пентеноил, N-пиколиноил, N-3-пиридилкарбоксамидо, N-бензоилфенилаланил, N-бензоил и N-пара-фенилбензоил.

Такие эфирные пролекарства группы -ОН химического соединения включают следующие простые эфиры:

метил, метоксиметил, метилтиометил, (фенилдиметилсилил)метоксиметил, бензилоксиметил, параметоксибензилоксиметил, паранитробензилоксиметил, ортонитробензилоксиметил, (4-метоксифенокси)метил, гваяколметил, трет-бутоксиметил, 4-пентенилоксиметил, силоксиметил, 2-метоксиэтоксиметил, 2,2,2-трихлорэтоксиметил, бис-(2-хлорэтокси)метил, 2-(триметилсилил)этоксиметил, ментоксиметил, тетрагидропиранил, 3-бромтетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, 1-метоксициклогексил, 4-метокситетрагидропиранил, 4-метокситетрагидротиопиранил, 4-метокситетрагидротиопиранила S.S-диоксид.

1- [(2-хлор-4-метил)фенил]-4-метоксипиперидин-4-ил, 1-(2-фторфенил)-4-метоксипиперидин-4-ил, 1,4-диоксан-2-ил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофуранил, 2,3,3а,4,5,6,7,7а-октагидро-7,8,8,-триметил-4,7-метанобензофуран-2-ил, 1-этоксиэтил,

-(2-хлорэтокси)этил, 1-[2 -(триметилсилил)этокси] этил, 1 -метил-1 -метоксиэтил,

-метил-1 -бензилоксиэтил, 1 -метил-1 -бензилокси-2-фторэтил, 1 -метил-1 -феноксиэтил, 2,2,2-трихлорэтил, 1,1 -дианисил-2,2,2-трихлорэтил, 1,1,1,3,3,3-гексафтор-2-фенилизопропил,

2- триметилсилилэтил, 2-(бензилтио)этил, 2-(фенилселенил)этил, трет-бутил, аллил, пропаргил, парахлорфенил, параметоксифенил, паранитрофенил, 2,4-динитрофенил, 2,3,5,6-тетрафтор-(4-трифторметил)фенил, бензил, параметоксибензил, 3,4-диметоксибензил, ортонитробензил, паранитробензил, парагалобензил, 2,6-дихлорбензил, парацианобензил, парафенилбензил, 2,6-дифторбензил, параациламинобензил, параазидобензил, 4-азидо-3-хлорбензил, 2-трифторметилбензил, пара(метилсульфинил)бензил, 2-пиколил, 4-пиколил,

3- метил-2-пиколил N-оксидо, 2-хинолинилметил, 1-пиренилметил, дифенилметил, р,р'-динитробензгидрил, 5-дибензосуберил, трифенилметил, альфа-нафтилдифенилметил, параметоксифенилдифенилметил, ди(параметоксифенил)фенилметил, три(пара-метоксифенил)метил, 4-(4'-бромфенацилокси)фенилдифенилметил,

- 18 031067

4,4',4-трис-(4,5-дихлорфталимидофенил)метил, 4,4',4-три(левулиноилоксифенил)метил, 4,4',4-три(бензоилоксифенил)метил, 4,4'-диметокси-3-[Ы-(имидазолилметил)тритил, 4,4'-диметокси-3 [Ы-имидазолилэтил]карбамоил]тритил,

1,1 -бис-(4-метоксифенил)-1'-пиренилметил,

4-(17-тетрабензо [а,с^д] флуоренилметил)-4,4 -диметокситритил, 9-антрил, 9-(9-фенил)ксантенил, 9-(9-фенил-10-оксо)антрил, 1,3-бензодитиолан-2-ил, бинзизотиазолил S.S-диоксидо.

триметилсилил, триэтилсилил, триизопропилсилил, диметилизопропилсилил, диэтилизопропилсилил, диметилгексилсилил, трет-бутилдиметилсилил, трет-бутилдифенилсилил, трибензилсилил, трипараксилилсилил, трифенилсилил, дифенилметилсилил, ди-трет-бутилметилсилил, трис-(триметилсилил)силил, (2-гидроксистирил)диметилсилил, (2-гидроксистирил)диизопропилсилил, трет-бутилметоксифенилсилил и трет-бутоксидифенилсилил.

Такие сложноэфирные пролекарства группы -ОН химического соединения включают следующие сложные эфиры:

формиат, бензоилформиат, ацетат, хлорацетат, дихлорацетат, трихлорацетат, трифторацетат, метоксиацетат, трифенилметоксиацетат, феноксиацетат, пара-хлорфеноксиацетат, фенилацетат, пара-Р-фенилацетат, дифенилацетат, никотинат, 3-фенилпропионат, 4-пентеноат, 4-оксопентаноат, 4,4-(этилендитио)пентаноат, 5-[3-бис-(4-метоксифенил)гидроксиметилфенокси]левулинат, пивалоат, 1-адамантоат, кротонат, 4-метоксикротонат, бензоат, парафенилбензоат и 2,4,6-триметилбензоат.

Дополнительно, в рамки настоящего изобретения входят любые физиологически приемлемые эквиваленты представленных химических соединений, аналогичные метаболически лабильным простым, сложным эфирам группы -ОН или карбаматам или амидам группы -NH-, которые могут давать исходные химические соединения, описанные в настоящем документе, in vivo. См., например, Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3-е изд. John Wiley & Sons, Inc. (1999).

Некоторые варианты реализации настоящего изобретения относятся к композиции, содержащей химическое соединение настоящего изобретения и фармацевтически приемлемый носитель. Некоторые варианты реализации настоящего изобретения относятся к композиции, содержащей пролекарство химического соединения настоящего изобретения и фармацевтически приемлемый носитель.

Если фармацевтически приемлемая соль представляет собой химическое соединение настоящего изобретения, используемое в этих композициях, то эта соль предпочтительно получена из неорганических или органических кислот и оснований. Обзоры соответствующих солей представлены, например, в публикациях Berge et al., J. Pham. Sci. 66:1-19 (1977) и Reraington: The Science and Practice of Pharnacy, 20-е изд., A. Gennaro (ed.), Lippincott Williams & Wilkins (2000) (Reraington's).

Примеры соответствующих солей присоединения кислот включают следующие: ацетат, адипинат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат.

Соответствующие соли присоединения оснований включают соли аммония, соли щелочных металлов, такие как соли натрия и калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и магния, соли с органическими основаниями, такие как соли дициклогексиламина, N-метил-О-глюкамина, и соли с аминокислотами, такими как аргинин, лизин и т.д.

Также основные азотсодержащие группы могут быть кватернизованы такими агентами, как низшие алкилгалогениды, такие как метил, этил, пропил и бутил хлориды, бромиды и йодиды; диалкилсульфаты, такие как диметил, диэтил, дибутил и диамил сульфаты, длинноцепные галогениды, такие как децил, лаурил, миристил и стеарил хлориды, бромиды и йодиды, аралкил галогениды, такие как бензил и фенетил бромиды, и др. Таким образом получают водо- или маслорастворимые или диспергируемые продукты.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения предпочтительно находятся в форме, пригодной для введения субъекту, предпочтительно млекопитающему, более предпочтительно человеку. Термин фармацевтически приемлемый носитель используется в настоящем документе для обозначения материала, совместимого с организмом реципиента и пригодного для доставки активного агента к сайтумишени без прекращения активности агента. Токсичность или возможные побочные эффекты, обусловленные носителем, предпочтительно являются соразмерными с целесообразным соотношением риска/пользы для предназначенного использования активного агента. В данной области известные многие такие фармацевтически приемлемые носители. См., например, Remington; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6-е изд., R.C. Rowe et al. (ред.), Pharmaceutical Press (2009).

Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут выпускаться по способам, хорошо известным в данной области, среди которых такие традиционные способы, как гранулирование, смеши- 19 031067 вание, растворение, производство капсул, лиофилизация или эмульгирование. Композиции могут выпускаться в различных формах, включая гранулы, осадки или частицы, порошки, включая замороженные обезвоженные порошки, высушенные в ротационном испарителе или высушенные распылительной сушкой, аморфные порошки, таблетки, капсулы, сиропы, суппозитории, инъекции, эмульсии, эликсиры, суспензии или растворы. Композиции могут необязательно содержать стабилизаторы, модификаторы рН, поверхностно-активные вещества, солюбилизаторы, модификаторы биодоступности и их комбинации.

Фармацевтически приемлемые наполнители, которые могут использоваться в этих композициях, включают ионообменники, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, белки сыворотки, такие как альбумин сыворотки человека, буферные вещества, такие как фосфаты или карбонаты, глицин, сорбиновую кислоту, сорбат калия, смеси неполных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как протамина сульфат, динатрия гидрофосфат, калия гидрофосфат, натрия хлорид, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, натрия карбоксиметилцеллюлозу, полиакрилаты, воски, полиэтилен-полиоксипропиленовые блок-полимеры, полиэтиленгликоль и ланолин.

В соответствии с предпочтительным вариантом реализации композиции настоящего изобретения составляют для фармацевтического введения млекопитающим, предпочтительно человеку. Такие фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть введены перорально, парентерально, ингаляцией спрея, локально, ректально, назально, трансбуккально, вагинально или через имплантированный резервуар. Термин парентеральный, используемый в настоящем документе, включает подкожный, внутривенный, внутрибрюшинный, внутримышечный, внутрисуставный, внутрисиновиальный, внутристернальный, внутритекальный, внутрипеченочный, внутритканевый и внутричерепный способ введения инъекций или инфузий. Предпочтительно композиции вводят перорально, внутривенно или подкожно. Композиции настоящего изобретения могут быть созданы как препараты быстрого высвобождения, краткосрочного или долгосрочного действия. Кроме того, соединения могут быть введены локально, а не системно, например, введением (например, инъекцией) в очаг опухоли.

Фармацевтические композиции могут быть получены в виде жидких суспензий или растворов с использованием жидкостей, таких как масло, вода, спирт или их комбинаций. Могут быть включены солюбилизирующие агенты, такие как циклодекстрины. Для перорального или парентерального введения могут быть добавлены фармацевтически приемлемые поверхностно-активные вещества, суспендирующие агенты или эмульгаторы. Суспензии могут содержать масла, такие как арахисовое масло, кунжутное масло, хлопковое масло, кукурузное масло и оливковое масло. Препараты в виде суспензий также могут содержать сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат, изопропилмиристат, глицериды жирных кислот и ацетилированные глицериды жирных кислот. Композиции в виде суспензий могут содержать спирты, такие как этанол, изопропиловый спирт, гексадециловый спирт, глицерин и пропиленгликоль. В композициях в виде суспензий могут использоваться также простые эфиры, такие как поли(этиленгликоль), нефтяные углеводороды, такие как минеральное масло и петролатум; а также вода.

Стерильные формы для инъекций композиций настоящего изобретения могут быть водными или масляными суспензиями. Эти суспензии могут быть составлены в соответствии с методиками, известными в данной области, при помощи подходящих диспергирующих или увлажняющих агентов и суспендирующих агентов. Стерильные композиции для инъекций могут также быть стерильным раствором или суспензией для инъекций в нетоксичном, приемлемом для парентерального введения разбавителе или растворителе, например раствором в 1,3-бутандиоле. Среди приемлемых сред и растворителей, которые можно использовать, - вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды обычно используют стерильные нелетучие масла. Для этой цели могут быть использованы любые безвкусные жирные масла, включая синтетические моноили диглицериды. Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, являются пригодными в производстве препаратов для инъекций, как и природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, в частности, в их полиоксиэтилированных формах. Эти масляные растворы или суспензии могут также содержать длинноцепный спиртовой разбавитель или диспергатор, такие как карбоксиметилцеллюлоза или аналогичные диспергирующие агенты, обычно используемые в приготовлении фармацевтически приемлемых лекарственных форм, включая эмульсии и суспензии. Другие широко применяемые поверхностно-активные вещества, такие как Твины, Спаны и другие эмульгирующие агенты или добавки, улучшающие биодоступность, которые обычно используются в производстве фармацевтически приемлемых твердых, жидких или других лекарственных форм, также могут быть использованы для составления композиций. Соединения могут входить в составы для парентерального введения путем инъекций, таких как инъекция ударной дозы, или непрерывной инфузии. Единичные лекарственные формы для инъекции могут быть в виде ампул или упаковки лекарственных средств для многократного приема.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть введены перорально в любой лекарственной форме, приемлемой для перорального введения, включая капсулы, таблетки, водные суспензии или растворы. При необходимости перорального использования водных суспензий, активный компонент комбинируют с эмульгирующими и суспендирующими агентами. При желании также могут

- 20 031067 быть добавлены определенные подсластители, вкусовые добавки или красители. В таких твердых лекарственных формах активное химическое соединение смешивают по меньшей мере с одним инертным фармацевтически приемлемым формообразующим средством или носителем, таким как цитрат натрия или фосфат дикальция, и/или а) наполнителями или сухими разбавителями, такими как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит, микрокристаллическая целлюлоза и кремниевая кислота, Ь) связующими агентами, такими как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, сахароза и гуммиарабик, с) увлажнителями, такими как глицерин, d) средствами для улучшения распадаемости таблеток, такими как агар-агар, карбонат кальция, поливинилпирролидон, кроскармеллоза, натрия крахмалгликолят, картофельный или тапиоковый крахмал, альгиновая кислота, некоторые силикаты и карбонат натрия, е) ингибиторами растворения, такими как парафин, f) ускорителями абсорбции, такими как четвертичные аммониевые соединения, g) смачивающими агентами, такими как, например, цетиловый спирт и глицерина моностеарат, h) абсорбентами, такими как каолин и бентонитовая глина, и i) смазывающими агентами, такими как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, натрия стеарилфумарат, твердые полиэтиленгликоли, натрия лаурилсульфат, диоксид кремния, и их смесями. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственная форма может также содержать буферные агенты.

Активное химическое соединение также может быть в микроинкапсулированной форме с одним или несколькими из вышеупомянутых формообразующих средств. Твердые лекарственные формы таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул также могут быть приготовлены с покрытиями и оболочками, такими как энтеросолюбильные покрытия, покрытия для контролирования высвобождения и другие покрытия, хорошо известные в области составления фармацевтических композиций. В таких твердых лекарственных формах активное соединение может быть смешано по меньшей мере с одним инертным разбавителем, таким как сахароза, лактоза или крахмал. Такие лекарственные формы могут также содержать, что является обычной практикой, дополнительные вещества, отличные от инертных разбавителей, например, таблетирующие смазывающие вещества и другие таблетирующие добавки, такие как стеарат магния и микрокристаллическая целлюлоза. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственные формы могут также содержать буферные агенты. Они могут необязательно содержать контрастные агенты, и также могут иметь такой состав, что активный компонент(ы) высвобождается только или предпочтительно в определенной части кишечного тракта, необязательно, замедленным образом. Примеры залитых композиций, которые могут быть использованы, включают полимерные вещества и воски.

Альтернативно, фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть введены в форме суппозиториев для ректального введения. Они могут быть получены смешением агента с подходящим не раздражающим наполнителем, который является твердым при комнатной температуре и жидким при ректальной температуре и поэтому плавится в прямой кишке, высвобождая лекарство. Такие материалы включают какао-масло, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения также могут быть введены локально, особенно если цель лечения включает области или органы, легко доступные для локального нанесения, включая заболевания глаз, кожи или нижней части кишечного тракта. Соответствующие локальные композиции легко изготавливают для каждой из этих областей или органов.

Локальное введение в нижней части кишечного такта может осуществляться в виде композиций ректальных суппозиториев (см. выше) или в форме подходящей композиции клизмы. Могут быть использованы также локальные трансдермальные пластыри. Фармацевтические композиции для локального применения могут быть составлены в виде подходящей мази, содержащей активный компонент, суспендированный или растворенный в одном или более носителях. Носители для локального введения соединений настоящего изобретения включают минеральное масло, жидкий петролатум, белый петролатум, пропиленгликоль, полиоксиэтилен, полиоксипропиленовые соединения, эмульгирующий воск и воду. Альтернативно, фармацевтические композиции могут быть составлены в виде подходящего лосьона или крема, содержащего активный компонент, суспендированный или растворенный в одном или более фармацевтически приемлемых носителях. Приемлемые носители включают минеральное масло, сорбитмоностеарат, полисорбат 60, воски сложных цетиловых эфиров, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду.

Фармацевтические композиции для офтальмического применения могут быть составлены в виде микронизированных суспензий в изотоническом стерильном физрастворе с выверенным рН или предпочтительно в виде раствора в изотоническом стерильном физрастворе с выверенным рН с использованием или без использования консерванта, такого как хлорид бензалкония. Альтернативно, фармацевтические композиции для офтальмического применения могут быть составлены в форме мази, такой как петролатум.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения также могут быть введены в виде назального аэрозоля или раствора для ингаляции. Такие композиции приготавливают в соответствии с методиками, хорошо известными в области составления фармацевтических композиций, и они могут быть получены в виде растворов в физрастворе с использованием бензилового спирта или других пригодных консервантов, ускорителей абсорбции для улучшения биодоступности, фторуглеродов и/или других стандартных солюбилизирующих или диспергирующих агентов.

- 21 031067

Фармацевтические композиции настоящего изобретения особенно применимы для терапевтических применений, связанных с нарушениями, описанными в настоящем документе (например, нарушения пролиферации, например раковые заболевания, воспаления, нейродегенеративные заболевания). Термин субъект, используемый в настоящем документе, означает животное, предпочтительно млекопитающее, более предпочтительно человека. Термин пациент, используемый в настоящем документе, означает человека. Предпочтительно композиция составляется для введения пациенту или субъекту, у которого наблюдается или существует риск развития или рецидива заболевания, подлежащего лечению. Предпочтительными фармацевтическими композициями настоящего изобретения являются композиции для перорального, внутривенного или подкожного введения. Тем не менее, любая из представленных выше лекарственных форм, содержащая терапевтически эффективное количество химического соединения настоящего изобретения, хорошо вписывается в рамки обычных экспериментов и поэтому входит в рамки этого изобретения. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция настоящего изобретения может дополнительно содержать другое лекарственное средство. Предпочтительно другое лекарственное средство представляет собой средство, обычно вводимое пациентам с расстройствами, заболеваниями или состояниями, подлежащими лечению.

Термин терапевтически эффективное количество означает такое количество химического соединения или композиции, которого достаточно, при однократном или многократном введении дозы, для заметного снижения активности фермента Е1 и/или степени расстройства или болезненного состояния, подлежащего лечению. Термин терапевтически эффективное количество включает также такое количество, которого достаточно для лечения клетки, отсрочки или предотвращения развития расстройства или болезненного состояния, подлежащего лечению (например, предотвращения дополнительного роста раковой опухоли, предотвращения дополнительной воспалительной реакции), улучшения, облегчения или снижения симптомов пациента, страдающего расстройством, по сравнению с состоянием, ожидаемым в отсутствии такого лечения. Необходимое количество ингибитора фермента Е1 зависит от конкретного соединения в данной композиции, типа расстройства, подлежащего лечению, способа введения и заданной продолжительности лечения этого расстройства. Следует также понимать, что индивидуальная доза и режим лечения для любого конкретного пациента зависит от разных факторов, включая активность конкретного используемого химического соединения, возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол и рацион пациента, время введения, скорость экскреции, сочетание лекарств, оценку лечащего врача и степень конкретного заболевания, подлежащего лечению. В некоторых аспектах, в которых ингибитор вводят в сочетании с другим агентом, количество дополнительного терапевтического средства, присутствующего в композиции настоящего изобретения, обычно не больше, чем количество, обычно вводимое в составе композиции, включающей это терапевтическое средство в качестве единственного активного агента. Предпочтительно количество дополнительного терапевтического средства составляет от около 50 до около 100% от количества, обычно присутствующего в композиции, включающей это средство в качестве единственного активного агента.

В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к способу ингибирования или уменьшения активности фермента Е1 в образце, включающему контакт указанного образца с химическим соединением настоящего изобретения или композицией, содержащей химическое соединение настоящего изобретения. Образец при использовании в настоящем документе включает образец, содержащий очищенный или частично очищенный фермент Е1, выращенные клетки или экстракты клеточных культур; биопсийные клетки или жидкость, полученные из млекопитающего, или их экстракты и жидкость организма (например, кровь, плазму, слюну, мочу, кал, сперму, слезы) или их экстракты. Ингибирование активности фермента Е1 в образце может выть осуществлено in vitro или in vivo, in cellulo или in situ.

В некоторых вариантах реализации в настоящем изобретении представлен способ лечения пациента, у которого наблюдается расстройство, симптом расстройства, риск развития или рецидив расстройства, включающий введение указанному пациенту химического соединения или фармацевтической композиции по настоящему изобретению. Лечение может быть направлено на исцеление, смягчение, облегчение, ослабление, уменьшение, изменение, устранение, улучшение или воздействие на расстройство, симптомы расстройства или предрасположенность к расстройству. Не ограничиваясь теорией, предполагается, что лечение обусловливает замедление роста, разрушение или гибель клеток или тканей in vitro или in vivo или иначе снижает способность клетки или ткани (например, аберрантной клетки, пораженной ткани) распространять заболевание, например расстройство, описанное в настоящем документе (например, пролиферативное расстройство, например рак, воспалительное расстройство). Используемый в настоящем документе термин ингибирующий рост или ингибирование роста клетки или ткани (например, пролиферативной клетки, опухолевой ткани) относится к замедлению, прекращению, блокированию или остановке ее роста и метастазов и необязательно указывает на общее исключение роста.

Лечение заболеваний включает такие расстройства, в которых ингибирование активности фермента Е1 является губительным для выживания и/или распространения пораженных клеток или тканей (например, клетки являются чувствительными к ингибированию Е1; ингибирование активности Е1 разрушает механизм заболевания; снижение активности Е1 стабилизирует белки, которые являются ингибиторами

- 22 031067 механизма заболевания; снижение активности Е1 приводит к ингибированию белков, которые являются активаторами механизмов заболевания). Предполагается, что лечение заболеваний включает также любое расстройство, заболевание или состояние, для которого необходима эффективная активность куллина и/или убиквитинилирования, которая может регулироваться снижением активности фермента Е1 (например, активности ΝΑΕ).

Например, способы настоящего изобретения пригодны для лечения расстройств, затрагивающих клеточную пролиферацию, включая расстройства, для которых необходимы эффективные пути куллинзависимого убиквитинилирования и протеолиза (например, убиквитин-протеасомный путь) для сохранения и/или развития состояния заболевания. Способы настоящего изобретения применимы для лечения заболеваний, опосредованных белками (например, активация NF-κΒ, активация р27^К1р, активация p21^WAF/CIP1, активация р53), которые регулируются активностью Е1 (например, активностью ΝΑΕ). Соответствующие заболевания включают пролиферативные расстройства, в первую очередь раковые заболевания и воспалительные нарушения (например, ревматоидный артрит, воспалительная болезнь кишечника, астма, хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), остеоартрит, дерматоз (например, атопический дерматит, псориаз), сосудистые пролиферативные расстройства (например, атеросклероз, рестеноз), аутоиммунные заболевания (например, рассеянный склероз, отторожение тканей и органов)); а также воспаления, связанные с инфекцией (например, иммунные реакции), нейродегенеративные расстройства (например, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, заболевания двигательных нейронов, невропатическая боль, нарушения повторяющихся триплетов, астроцитома и нейродегенерация в результате алкогольной болезни печени), ишемическое повреждение (например, инсульт) и кахексия (например, ускоренное разрушение мышечного белка, которое сопровождает различные физиологические и патологические состояния (например, повреждение нерва, голодание, лихорадка, ацидоз, ВИЧ-инфекция, рак и некоторые эндокринопатии)).

Соединения и фармацевтические композиции настоящего изобретения особенно пригодны для лечения рака. Используемый в настоящем документе термин рак относится к клеточному расстройству, характеризующемуся неконтролируемым или неупорядоченным разрастанием клеток, пониженной клеточной дифференцировкой, неуместной способностью вторгаться в окружающие ткани и/или способностью образовывать новообразование в эктопических участках. Термин рак включает солидные опухоли и передающиеся с кровью опухоли. Термин рак включает заболевания кожи, тканей, органов, костей, хрящей, крови и сосудов. Термин рак дополнительно включает первичные и метастатические раковые заболевания.

В некоторых вариантах реализации рак представляет собой солидную опухоль. Примеры солидных опухолей, которые можно лечить с помощью способов настоящего изобретения, включают рак поджелудочной железы; рак мочевого пузыря; колоректальный рак; рак молочной железы, в том числе метастатический рак молочной железы; рак простаты, в том числе андроген-зависимый и андроген-независимый рак простаты; рак почек, в том числе, например, метастатическую карциному клеток почечного эпителия; гепатоцеллюлярный рак; рак легких, в том числе, например, немелкоклеточный рак легких (НМРЛ), мелкоклеточный рак легких, бронхиолоальвеолярную карциному (БАК) и аденокарциному легких; рак яичников, в том числе, например, прогрессивный эпителиальный или первичный перитонеальный рак; рак шейки матки; рак желудка; рак пищевода; рак головы и шеи, в том числе, например, плоскоклеточный рак головы и шеи; меланому; нейроэндокринный рак, в том числе, метастатические нейроэндокринные опухоли; опухоли головного мозга, в том числе, например, глиому, анапластическую олигодендроглиому, мультиформную глиобластому взрослых и анапластическую астроцитому взрослых; рак костей и саркому мягких тканей.

В некоторых вариантах реализации рак представляет собой гематологическое злокачественное заболевание. Примеры гематологических злокачественных заболеваний включают острый миелоидный лейкоз (ОМЛ), хронический миелогенный лейкоз (ХМЛ), в том числе ускоренный ХМЛ и бластный криз ХМЛ (БК-ХМЛ); острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ), хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ); болезнь Ходжкина, неходжкинскую, в том числе фолликулярную лимфому и лимфому клеток мантийной зоны; лимфому В-клеток; лимфому Т-клеток; множественную миелому (ММ); макроглобулинемию Вальденстрема; миелодиспластический синдром (МДС), в том числе рефрактерную анемию (РА), рефрактерную анемию с кольцевыми сидеробластами (РАКС), рефрактерную анемию с избытком бластов (РАИБ) и РАИБ в трансформации (РАИБ-Т) и миелопролиферативные синдромы.

В зависимости от конкретного расстройства или состояния, подлежащего лечению, в некоторых вариантах реализации настоящего изобретения ингибитор фермента Е1 вводят в сочетании с дополнительным лекарственным агентом или агентами. В некоторых вариантах реализации дополнительный лекарственный агент(ы) представляет собой агент, обычно вводимый пациентам с расстройством или состоянием, подлежащим лечению. При использовании в настоящем документе, дополнительные терапевтические агенты, которые обычно вводят для лечения конкретного расстройства или состояния, известного как соответствующие для указанного расстройства или состояния, подлежащего лечению.

Ингибитор Е1 настоящего изобретения может быть введен с другим терапевтическим агентом в одной лекарственной форме или в виде отдельной лекарственной формы. При введении в отдельной лекар

- 23 031067 ственной форме другой терапевтический агент может быть введен до, во время или после введения ингибитора Е1 настоящего изобретения.

В некоторых вариантах реализации ингибитор фермента Е1 настоящего изобретения вводят в сочетании с терапевтическим агентом, выбранным из цитотоксических агентов, лучевой терапии и иммунотерапии, пригодной для лечения пролиферативных расстройств и рака. Примеры цитотоксических агентов, пригодных для применения в сочетании с ингибиторами фермента Е1 настоящего изобретения, включают антиметаболиты, в том числе, например, капецитибин, гемцитабин, 5-фторурацил или 5фторурацил/лейковорин, флударабин, цитарабин, меркаптопурин, тиогуанин, пентостатин и метотрексат; ингибиторы топоизомеразы, в том числе, например, этопозид, тенипозид, камптотецин, топотекан, иринотекан, доксорубицин и даунорубицин; алкалоиды барвинка, в том числе, например, винкристин и винбластин; таксаны, в том числе, например, паклитаксел и доцетаксел; платиновые агенты, в том числе, например, цисплатин, карбоплатин и оксалиплатин; антибиотики, в том числе, например, актиномицин D, блеомицин, митомицин С, адриамицин, даунорубицин, идарубицин, доксорубицин и пегилированный липосомальный доксорубицин; алкилирующие агенты, такие как мелфалан, хлорамбуцил, бусульфан, тиотепа, ифосфамид, кармустин, ломустин, семустин, стрептозоцин, декарбазин и циклофосфамид; включая, например, СС-5013 и СС-4047; ингибиторы протеин-тирозинкиназы, включая, например, иматиниб мезилат и гефитиниб; ингибиторы протеасом, в том числе, например, бортезомиб; талидомид и родственные аналоги; антитела, в том числе, например, трастузумаб, ритуксимаб, цетуксимаб и бевацизумаб; митоксантрон; дексаметазон; преднизон; и темозоломид.

Другие примеры агентов, с которыми могут быть объединены ингибиторы настоящего изобретения, включают противовоспалительные агенты, такие как кортикостероиды, блокаторы TNF, 11-1 RA, азатиоприн, циклофосфамид и сульфасалазин; иммуномодулирующие и иммуноподавляющие агенты, таких как циклоспорин, такролимус, рапамицин, микофенолят мофетил, интерфероны, кортикостероиды, циклофосфамид, азатиоприн, метотрексат и сульфасалазин; антибактериальные и противовирусные агенты; и агенты для лечения болезни Альцгеймера, такие как донепезил, галантамин, мемантин и ривастигмин.

Для более полного понимания настоящего изобретения, далее представлены следующие препаративные и испытательные примеры. Эти примеры представлены лишь для цели иллюстрации, и их не следует толковать как ограничение рамок настоящего изобретения каким-либо образом.

Примеры

Сокращения:

АсОН - уксусная кислота,

ACN - ацетонитрил,

DABCO - триэтилендиамин,

ДХМ - дихлорметан,

DCP - 4,6-дихлорпиримидин,

ДЭА - диэтиламин,

DIPEA - Ν,Ν-диизопропилэтиламин,

ДМСО - диметилсульфоксид,

Et₂O - диэтиловый эфир,

EtOAc - этилацетат,

EtOH - этанол,

Et₃N - триэтиламин,

МК - муравьиная кислота,

H2O - вода, ч - часы,

IPA - изопропиловый спирт,

IPAc - изопропилацетат,

ЖХ/МС - жидкостный хромато-масс-спектр,

LDA - лития диизопропиламид,

МТБЭ - метил-трет-бутиловый эфир,

MeOH - метанол, мин - минуты,

МС - масс-спектр,

NMP - №метил-2-пирролидон, rt - комнатная температура, P₃NO - 4-фенилпропилпиридин-№оксид, TBS - трет-бутилдиметилсилил, ТФК - трифторуксусная кислота, ТГФ - тетрагидрофуран,

ТСХ - тонкослойная хроматография,

TMS - триметилсилил.

- 24 031067

Общие способы.

Порошковая рентгеновская дифракция. РПД выполнили с помощью рентгеновского дифрактометра Broker AXS D8 Advance. Около 100 мг образца осторожно спрессовали в кварцевой кювете для образцов диаметром 50 мм для порошковых измерений. Образец непрерывно сканировали от 2,9 до 29,6° 2Θ, используя фиксированные спаренные углы 2Θ/Θ. Каждый интервал углов составил 0,05° 2Θ, а данные собрали за 2 с. Сканирование образца выполняли при комнатных условиях, а анализ всех данных выполнили с помощью программы EVA версии 9.0. Термический анализ. Термические события анализировали с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) и термогравиметрического анализа (ТГА). Для исследования всех образцов использовали приборы для термического анализа DSC Q200 и TGA Q500. Термограммы анализировали с помощью программы Thermal Advantage для Q-серий.

Дифференциальная сканирующая калориметрия. Образец (1-2 мг) в алюминиевом тигле закрыли крышкой. Образец нагревали со скоростью 10°С/мин с 25°до 400°С, постоянно продувая образец азотом при 50 мл/мин.

Термогравиметрический анализ. Образцы (5-10 мг) испытывали в открытом платиновом тигле. Образец нагревали со скоростью 10°С/мин до 400°С, продувая образец азотом при 60 мл/мин.

Пример 1. Синтез (1И^)-5-хлор-2-метоксииндан-1-амина (8).

Стадия 1. rel-(1aR,6aS)-4-Xлор-6,6а-дигидро-1аН-индено[1,2-b]оксирен (2).

К перемешанному раствору 4-фенилпропилпиридиноксида (278 мг, 1,31 ммоль) в метиленхлориде (20 мл) добавили катализатор (К,И)-Якобсена (237,0 мг, 0,3732 ммоль) и раствор гипохлорита натрия (2,0 М в воде; 16 мл, 32 ммоль) при 0°С. полученную коричневую суспензию перемешивали при 0°С в течение 15 мин, затем через шприц добавили раствор 6-хлор-1Н-индена (1) (2,81 г, 18,6 ммоль) в метиленхлориде (20 мл) с одновременным добавлением дополнительного количества гипохлорита натрия (2,0 М в воде; 16 мл, 32 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, затем убрали ледяную баню, а реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Взяли алкивоту, и данные ТСХ на диоксиде кремния (гексаны) показали, что весь исходный материал израсходован. Реакционную смесь вылили в насыщенный солевой раствор и экстрагировали метиленхлоридом. Объединенные экстракты промыли солевым раствором, затем высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и выпарили под пониженным давлением для получения в остатке неочищенного продукта, который затвердел под высоким вакуумом. Выход ~3,7 г коричневого твердого вещества.

'll ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ 7.55 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 7.32 (s, 1Н), 7.23 (d, J=7.3 Гц, 1Н), 4.36 (s, 1Н), 4.16 (s, 1Н), 3.03 (dd, J=45.8, 18.2 Гц, 2Н).

Стадия 2. ге1-(1И^)-1-Амино-5-хлорииндан-2-ол (3).

К охлажденной до -40°С смеси дымящей серной кислоты (4,098 мл, 44,06 ммоль) в ацетонитриле (30 мл, 500 ммоль) по каплям добавили суспензию re1-(1aR,6aS)-4-хлор-6,6а-дигидро-1аН-индено[1,2Ь]оксирена (2) (2,94 г, 17,6 ммоль) в ацетонитриле (70 мл) и гексане (40 мл). Затем двухфазную смесь оставили нагреваться до комнатной температуры и перемешивали еще 1 ч, в результате чего получили мутную смесь ржаво-красного цвета. Осторожно добавили воду (30 мл) (твердые вещества полностью растворились с образованием красно-коричневого раствора), и полученный раствор перемешивали в течение 30 мин. Затем добавили дополнительное количество воды (70 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение ночи под атмосферой азота при комнатной температуре. К реакционной смеси добавили воду (50 мл), присоединили дистилляционную головку, смесь довели до дефлегмации и перегоняли до достижения температуры дефлегматора 100°С. Дистилляционную отсоединили и присоединили обратный холодильник, и нагревали реакционную смесь при дефлегмации в течение 1 ч для получения прозрачного оранжевого раствора с небольшим количеством темного смолянистого вещества по краям. Реакционную смесь немного охладили, затем горячий раствор декантировали со смолянистого вещества в 500 мл круглодонную колбу. Раствор перемешали и оставили остывать до комнатной температуры, затем подщелочили (рН 12), добавляя по каплям 50% водный раствор NaOH. Добавили метиленхлорид; смесь хорошо перемешали, а затем перенесли в делительную воронку. Органический слой отделили, а водный слой повторно экстрагировали дополнительным количеством метиленхлорида (до тех пор, пока анализ ТСХ не показал, что из водного слоя экстрагирован весь продукт). Органические экстракты объединили, промыли солевым раствором, высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и выпарили in vacuo, получив 2,53 г неочищенного продукта в виде светло-коричневого порошка.

ЖХМС: муравьиная кислота, [М+Н⁺ + Na⁺] = 208;

'll ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ 7.31 (d, J=7.8 Гц, 1Н), 7.24-7.15 (m, 2Н), 4.79 (s, 1Н), 4.20 (s, 1H), 4.01 (s, 1Н), 2.92 (d, J=15.3 Гц, 1Н), 2.73 (d, J=16.2 Гц, 1H), 2.15-1.43 (s, 2H).

Хиральная ВЭЖХ (колонка Chiralpak AD 4,6x250, элюировали 95/5/0,1% гексан/ЕЮН/ДЭА при 2,0 мл/мин - 45-минутный анализ) показала э.и. 80%.

Стадии 3 и 4. Хиральное разделение (1И^)-1-амино-5-хлориндан-2-ола (5).

В колбу, содержащую раствор ге1-(1И^)-1-амино-5-хлориндан-2-ола (3) (2,53 г, 13,8 ммоль) в метаноле (100 мл), при дефлегмации добавили Щ)-(-)-миндальную кислоту (2,09 г, 13,8 ммоль) при перемешивании. После дефлегмации в течение ~15 мин колбонагреватель убрали, а раствор оставили осты

- 25 031067 вать до комнатной температуры при перемешивании. Твердое вещество начало осаждаться через ~15 мин после того, как убрали источник нагревания. Полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Затем смесь отфильтровали, промыли метанолом (10 мл), затем диэтиловым эфиром (15 мл) и высушили in vacuo для получения 2,50 г промежуточной соли. Фильтрат концентрировали до ~1/3 объема и замораживали в течение ночи, за это время в осадок выпало дополнительное количество продукта. Смесь снова отфильтровали и промыли метанолом (7,5 мл), затем диэтиловым эфиром (10 мл) высушили in vacuo для получения дополнительно 0,60 г промежуточной соли. В целом собрали 3,1 г.

Промежуточную соль перемешивали в смеси этилацетата (50 мл) и водного NaOH (0,2 М, 60 мл) до завершения растворения. Смесь перенесли в делительную воронку и отделили органический слой. Водный слой дополнительно экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором до нейтральной реакции промывочных растворов, затем высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и выпарили, получив светло-коричневое твердое вещество. В результате дополнительного высушивания под высоким вакуумом получили 1,42 г (выход 56%) указанного в заголовке соединения в виде светло-коричневого порошка. Аналитические данные для указанного в заголовке соединения:

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ 7.31 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 7.24-7.15 (m, 2Н), 4.83 (s, 1Н), 4.20 (t, J=3.9 Гц, 1Н), 4.00 (d, J=4.5 Гц, 1Н), 2.92 (dd, J=16.2, 4.9 Гц, 1Н), 2.73 (d, J=15.2 Гц, 1H), 1.85 (s, 2H).

Хиральная ВЭЖХ (колонка Chiralpak AD 4,6x250, элюировали 95/5/0,1% геκсан/EtOH/ДЭА при 2,0 мл/мин - 45-минутный анализ) показала э.и. >99%.

Стадия 5. 2-[(1R,2S)-5-Хлор-2-гидроκси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]-1Н-изоиндол-1,3(2Н)-дион (6).

В 1 л круглодонной колбе N.N-диизопропилэтиламин (15,2 мл, 0,0871 моль) добавили к суспензии (1S,2R)-1-амино-5-хлориндан-2-ола (16,0 г, 0,0871 моль) и фталевого ангидрида (14,2 г, 0,0958 моль) в толуоле (473 мл, 4,44 ммоль) и нагревали реакционную смесь при дефлегмации в течение 18 ч. Реакционную смесь охладили до комнатной температуры, и в это время в осадок выпало большое количество твердого вещества. Твердое вещество, которое представляло собой заданный продукт, отфильтровали, промыли EtOAc и собрали. Фильтрат охладили до 0°C, отфильтровали, а твердое вещество промыли EtOAc и смешали с первой партией. Фильтрат перенесли в делительную воронку и разбавили H₂O (200 мл). Слои разделили, а водный слой экстрагировали EtOAc (3x200 мл). Объединенные органические слои промыли lx насыщенным солевым раствором (100 мл), высушили над MgSO₄, отфильтровали и концентрировали in vacuo. Полученное грязновато-белое твердое вещество суспендировали в EtOAc, крупные куски разрушили ультразвуковой обработкой и охладили суспензию до 0°C. Твердое вещество отфильтровали и объединили с предыдущими 2 партиями. Фильтрат концентрировали in vacuo, а полученное белое твердое вещество суспендировали последний раз в ЕЦО (100 мл), отфильтровали и объединили с предыдущими 3 партиями. Общий выход для всех четырех партий твердого вещества составил 25,3 г (92%).

ЖХМС: (МК) ES⁺ молекулярный ион 314, основная ионизация 167;

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ 7.83 (s, 4Н), 7.33 (s, 1Н), 7.27 (d, J=8.2 Гц, 1Н), 7.19 (dd, J=2.0, 8.1 Гц, 1H), 5.52 (d, J=7.4 Гц, 1H), 5.34 (d, J=5.2 Гц, 1H), 4.64 (dt, J=6.9, 12.7 Гц, 1H),3.21 (dd, J=7.4, 16.1 Гц, 1H), 3.02 (dd, J=6.1, 16.1 Гц, 1H).

Стадия 6. 2-[(1R,2S)-5-Хлор-2-метоκси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]-1Н-изоиндол-1,3(2Н)-дион (7).

К раствору 2-[(1R,2S)-5-хлор-2-гидроκси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]-1Н-изоиндол-1,3(2Н)-диона (25,8 г, 0,0822 моль) в тетрагидрофуране (186 мл, 2,29 моль) добавили метилйодид (20,5 мл, 0,329 моль) и перемешивали раствор при 0°C. К этому раствору через капельную воронку по каплям добавили 1,00 М трет-бутоксид калия в тетрагидрофуране (90,4 мл, 0,0904 моль) за 1 ч. Реакцию погасили добавлением 0,1н. HC1 (250 мл) и перенесли в делительную воронку, содержащую EtOAc (600 мл). Слои разделили, а органический слой промыли 1н. NaOH (2x100 мл каждый) и насыщенным солевым раствором (100 мл). Органический слой высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали для получения 2-[(1R,2S)-5-хлор-2-метоκси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]-1Н-изоиндол-1,3(2Н)-диона (25,8 г, 96%), который использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.

Стадия 7. (1R,2S)-5-Хлор-2-метоκсииндан-1-амин (8).

К суспензии 2-[(1R,2S)-5-хлор-2-метоκси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]-1Н-изоиндол-1,3(2Н)-диона (7) (25,8 г, 0,0787 моль) в этаноле (260 мл, 4,4 моль) добавили гидразин (4,94 мл, 0,157 моль), и присоединили к колбе обратный холодильник и нагревали до температуры бани 90°C. Через несколько минут перемешивания начал образовываться осадок, а через 1 ч нагревания смесь стала густой суспензией/твердым веществом. Реакционную смесь охладили до комнатной температуры, а твердые побочные продукты реакции отфильтровали и промыли CH₂C1₂ (~300 мл). Летучие вещества удалили из фильтрата in vacuo, а остаток суспендировали в CH₂C1₂ (250 мл), в это время твердые побочные продукты снова удалили фильтрацией. Летучие вещества удалили in vacuo, а остаток снова суспендировали в CH₂C1₂ (~50 мл). Твердые побочные продукты последний раз удалили фильтрацией для получения (Ш^^-хлорЛ-метоксиинданЛ-амина (15,5 г, 99%) в виде красно-оранжевого воскообразного вещест

- 26 031067 ва.

ЖХМС: (МК) ES⁺ молекулярный ион 198, основная ионизация 181;

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ 7.30 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 7.25-7.16 (m, 2H), 4.14 (d, J=4.9 Гц, 1H), 3.89 (td, J=2.8, 4.9 Гц, 1H), 3.29 (s, 3H), 2.89 (ddd, J=3.8, 16.4, 21.3 Гц, 2H), 2.04 (s, 2H).

Хиральная ВЭЖХ (колонка Chiralpak AD 4,6x250, элюировали 95/5/0,1% гексан/EtOH/ДЭA при 1,0 мл/мин - 30-минутный анализ) показала э.и. >99%.

Пример 2. Синтез {(^^,4К)-4-[(6-{[(1К^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата (1-216).

Стадия 1. ге1-(1К,5К)-5-({[трет-бутил(диметил)силил]окси}метил)циклопент-2-ен-1-ол (10).

К раствору ге1-(1К,5И)-5-(гидроксиметил)циклопент-2-ен-1-ола (47,20 г, 0,4135 моль), Ν,Ν-диметиламинопиридина (2,52 г, 0,0207 моль) и 1Н-имидазола (30,97 г, 0,4549 моль) в метиленхлориде (800 мл, 10 моль) при 0°С под атмосферой азота добавили трет-бутилдиметилсилил хлорид (28,0 г, 0,186 моль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2,5 ч и в это время добавили третбутилдиметилсилил хлорид (28,0 г, 0,186 моль). Реакционную смесь перемешивали еще 2 ч. Реакцию погасили добавлением насыщенного водного раствора NaCl (200 мл) и воды (200 мл). Слои разделили, а органический слой промыли водой (3x200 мл) и насыщенным солевым раствором (1x200 мл), высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали in vacuo. Этот материал использовали без дополнительной очистки на следующей стадии.

Стадия 2. (^^)-5-({[трет-Бутил(диметил)сили]окси}метил)циклопент-2-ен-1-ол (11)6

К суспензии ге1-(1К,5К)-5-({[трет-бутил(диметил)силил]окси}метил)циклопент-2-ен-1-ола (неочищенное соединение (10) из предыдущей стадии) и Candida Antarctica на акриловой смоле (24,9 г; 10800 единиц/г) в метил-трет-бутиловом эфире (1500 мл, 10 моль) добавили этениловый эфир уксусной кислоты (190 мл, 2,05 моль) и перемешивали реакционную смесь в течение ночи. Твердые вещества удалили фильтрацией, а летучие вещества удалили in vacuo для получения бесцветного маслянистого вещества (143г), которое очистили колоночной хроматографией (1 кг силикагелевая колонка, элюент 0-30% ЕТ₂О:гексаны) для получения заданного энантиомера (^^)-5-({[трет-бутил(диметил)силил]окси}метил)циклопент-2-ен-1-ола (37,5 г, 79,5%). Хиральная ВЭЖХ; колонка Chiral Technologies Chiralpak AS RH (4,6x150 мм) 5 мкм, элюент - 55% (0,1% муравьиной кислоты в 99:1 H₂O/CH₃CN), 45% (0,1% муравьиной кислоты в 95:5 CH₃CN/H₂O) показала э.и. >99%.

Ή ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ 5.96-5.91 (m, 1H), 5.86-5.80 (m, 1H), 4.87 (dd, J=2.3, 4.9 Гц, 1H), 3.87 (dd, J=4.7, 10.1 Гц, 1H), 3.79 (dd, J=7.7, 10.1 Гц, 1H), 2.50-2.40 (m, 1H), 2.35 (ddt, J=2.0, 8.4, 16.8 Гц, 1H), 2.23-2.14 (m, 1H), 0.90 (s, 9H), 0.08 (s, 3H), 0.07 (s, 3H).

Нежелательный энантиомер выделили в виде соответствующего ацетата с выходом 81,6%.

Стадия 3. трет-Бутил[((^^)-2-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}циклопент-3-ен-1ил)метокси]диметилсилан (12).

В высушенной в печи 2 л двухгорлой колбе, охлажденной под азотом, к раствору (^^)-5-({[третбутил(диметил)силил]окси}метил)циклопент-2-ен-1-ола (11) (98,07 г, 0,3864 моль) в метиленхлориде (500 мл, 8 моль) добавили 1Н-имидазол (31,57 г, 0,4637 моль). К полученному желтому раствору добавили раствор трет-бутилдиметилсилил хлорида (58,2 г, 0,386 моль) в метиленхлориде (300 мл, 5 моль) через капельную воронку за ~30 мин. Смесь механически перемешивали в течение 18 ч. Реакцию погасили добавлением воды (500 мл) и разделили слои. Органический слой промыли водой (2x500 мл), высушили над MgSO₄, отфильтровали и концентрировали in vacuo для получения трет-бутил[((^^)-2-{[третбутил(диметил)силил]окси}циклопент-3-ен-1-ил)метокси]диметилсилана (143,3 г) в виде неочищенного остатка, который использовали без дополнительной очистки.

Стадия 4. (Ш^^)-3-{[трет-Бутил(диметил)силил]окси}-4-({[трет-бутил(ди-метил)силил]окси}метил)циклопентанол (13).

В 2 л круглодонной колбе, трет-бутил[((^^)-2-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}циклопент-3ен-1-ил)метокси]диметилсилан (12) (12,08 г неочищенного остатка) три раза перегнали азеотропной перегонкой с толуолом, высушили под вакуумом в течение 30 мин и растворили в безводном тетрагидрофуране (402,7 мл) под атмосферой аргона. К этому раствору по каплям добавили катехолборан в тетрагидрофуране (1,00 М, 88,1 мл, 0,0881 моль). Затем в течение 20 мин продували аргон для дезоксигенирования реакционного раствора. Затем добавили трис-(трифенилфосфин)родия(1) хлорид (3,26 г, 0,00352 моль) и перемешивали реакционную смесь в течение 18 ч при комнатной температуре под аргоном. К реакционной смеси добавили 1,00 М гидроксид натрия в воде (528,8 мл, 0,5288 моль), затем осторожно добавили раствор пероксида водорода (35 вес.% в воде, 30,79 мл, 0,3525 моль) и перемешивали смесь в течение 4 ч при комнатной температуре. Реакцию погасили добавлением насыщенного раствора Na₂S₂O₃ (500 мл), слои разделили, а водный слой экстрагировали EtOAc (2x300 мл). Объединенные органические части промыли насыщенным солевым раствором, высушили над Na2SO4, отфильтровали и концентрировали in vacuo. Коричневое маслянистое вещество очистили колоночной хроматографией (элюент от 0% до 20% эфира в гексанах) для получения (Ш^^)-3-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}-4({[трет-бутил(ди-метил)силил]окси}метил)циклопентанола (7,78 г, выход за 2 стадии = 66%).

- 27 031067

Ή ЯМР (400 МГц, CDC1₃): δ 4.50 (d, J=4.3 Гц, 1H), 4.34 (td, J=2.7, 4.8 Гц, 1H), 3.71 (dd, J=7.0, 10.0 Гц, 1H), 3.53 (dd, J=7.0, 10.0 Гц, 1H), 2.32-2.20 (m, 1H), 2.04 (ddd, J=2.6, 6.7, 13.9 Гц, 1H), 1.85 (ddd, J=7.1, 10.3, 13.5 Гц, 1H), 1.73 (dt, J=4.8, 13.9 Гц, 1H), 1.63 (ddd, J=2.1, 7.9, 13.5 Гц, 1H), 1.35 (s, 1H), 0.88 (s, 9H), 0.86 (s, 9H), 0.04 (s, 3H), 0.03 (s, 9H).

Стадия 5. 4-{ [(1R,3S,4S)-3-{ [трет-Бутил(диметил)силил]окси}-4-({ [трет-бутил(диметил)силил]окси}метил)циклопентил] окси}-6 -хлорпиримидин (14).

В высушенную на пламени 50 мл круглодонную колбу загрузили гидрид натрия (0,322 г, 0,008 моль) и тетрагидрофуран (20 мл, 0,3 моль) и полученную суспензию охладили до 0°С под атмосферой азота. К этой суспензии по каплям добавили раствор (Ш^^)-3-{[третбутил(диметил)силил]окси}-4-({[трет-бутил(диметил)силил]окси}метил)циклопентанола (13) (1,45 г, 0,004 моль) в 0,5 мл ТГФ при 0°C. Смесь перемешивали при 0°C в течение 10 мин и в это время добавили 4,6-дихлорпиримидин (0,659 г, 0,004 моль) и оставили смесь нагреваться до комнатной температуры, и перемешивали в течение 18 ч. Реакцию погасили добавлением насыщенного водного раствором NH₄C1 (25 мл) и перенесли в делительную воронку. Слои разделили, а водный слой экстрагировали трет-ВиОМе (3x25 мл). Объединенные органические слои промыли насыщенным солевым раствором, высушили над безводным MgSO₄, отфильтровали и концентрировали in vacuo. Полученное маслянистое вещество очистили силикагелевой хроматографией (элюент - 0-10% EtOAc в гексанах) для получения 4-{[(1R,3S,4S)3-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}-4-({[трет-бутил(диметил)силил]окси}метил)циклопентил]окси}-6хлорпиримидина (1,75 г, выход 92%).

ЖХМС: (МК) ES⁺ 473;

Ή ЯМР (300 МГц, CDC1₃): δ 8.55 (d, J=0.7 Гц, 1H), 6.69 (d, J=0.8 Гц, 1H), 5.61-5.49 (m, 1H), 4.36 (dd, J=4.6, 6.8 Гц, 1H), 3.73 (dd, J=7.0, 10.0 Гц, 1H), 3.57 (dd, J=6.7, 9.9 Гц, 1H), 2.36-2.13 (m, 2H), 2.10-1.73 (m, 3H), 0.89 (s, 9H), 0.88 (s, 9H), 0.08-0.00 (m, 12H).

Стадия 6. {(1S,2S,4R)-2-{[трет-Бутил(диметил)силил]окси}-4-[(6-хлорпиримидин-4-ил)окси]циклопентил}метанол (15).

В 2 л круглодонной колбе 4-{[(Ш^^)-3-{[трет-бутил(диметил)силил]-окси}-4-({[третбутил(диметил)силил]окси}метил)циклопентил]окси}-6-хлорпиримидин (14) (20,5 г, 0,0433 моль) растворили в этаноле (647,2 мл, 11,08 моль) и охладили до внутренней температуры -45°C. К нему добавили предварительно охлажденный (-20°С) раствор HC1 в EtOH концентрацией 2% (326 мл, 0,0516 моль, полученный разбавлением 6,5 мл концентрированной HC1 в 319,5 мл этанола). Реакционную смесь нагрели до -25°C (для предотвращения роста давления при закрывании колбы), а затем закрыли и поместили в морозильную камеру при -35°С. Реакционную смесь оставили стоять при -35°С в течение 18 ч. Реакцию погасили карбонатом натрия (13,78 г, 0,1300 моль) (~3 экв. относительно HC1) в виде раствора в воде (40 мл, 2 моль). Летучие вещества удалили in vacuo, а реакционную смесь разбавили CH₂C1₂ (750 мл). Твердое вещество отфильтровали и отложили в сторону, а летучие вещества удалили из фильтрата in vacuo. Полученную водную смесь разбавили EtOAc (500 мл) и водой (200 мл) и перенесли в делительную воронку. Слои разделили, а водный слой экстрагировал 2x250 мл EtOAc. Объединенные органические слои высушили над Na2SO4, отфильтровали и концентрировали in vacuo. Неочищенный остаток очистили колоночной хроматографией (нанесли на колонку с ~50 мл CH₂C1₂, 400 г колонка, элюент 0-40% EtOAc:гексаны за 40 мин), для получения {(1S,2S,4R)-2-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}-4-[(6хлорпиримидин-4-ил)окси]циклопентил}метанола (11,2 г, 72%).

ЖХМС: (МК) ES⁺ 359;

Ή ЯМР (400 МГц, CDC1₃): δ 8.56 (арр d, J=0.6 Гц, 1H), 6.70 (арр d, J=0.8 Гц, 1H), 5.62 - 5.54 (m, 1H), 4.56 (dd, J=5.6, 10.9 Гц, 1H), 3.86-3.78 (m, 1H), 3.70 (ddd, J=6.0, 7.6, 11.3 Гц, 1H), 2.48 (dd, J=4.6, 7.6 Гц, 1H), 2.42-2.31 (m, 1H), 2.23 (ddd, J=6.3, 9.8, 14.2 Гц, 1H), 2.15-2.09 (m, 2H), 1.89 (ddd, J=1.9, 8.0, 14.3 Гц, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.12 (s, 3H), 0.11 (s, 3H).

Стадия 7. {(1S,2S,4R)-2-{[трет-Бутил(диметил)силил]окси}-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3дигидро-1H-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]циклопентил}метанол (16).

К раствору {(1S,2S,4R)-2-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}-4-[(6-хлорпиримидин-4-ил)окси]циклопентил}метанола (15) (11,2 г, 0,0312 моль) и ^5-дихлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-амина (9,00 г, 0,0384 моль) в 1-бутаноле (99,2 мл, 1,09 моль) в 350 мл закрывающейся реакционной емкости добавили триэтиламин (21,7 мл, 0,156 моль). Емкость закрыли, а затем нагревали при перемешивании до 148°C на масляной бане в течение 72 ч. Емкость охладили до комнатной температуры, а летучие вещества удалили in vacuo и к полученному остатку добавили Et2O (200 мл). Твердые вещества гомогенизировали обработкой ультразвуком, отфильтровали и промыли Et₂O (50 мл). К фильтрату добавили Celite® (100 мл) и удалили летучие вещества in vacuo. Продукт, адсорбированный не Celite®, добавили к картриджу, загруженному сухим способом, и очистили колоночной хроматографией (колонка 400 г, элюент 0-80% EtOAc:гексаны за 80 мин) для получения {(1S,2S,4R)-2-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}-4-[(6{[(Ш^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1 -ил] амино}пиримидин-4-ил)окси]циклопентил}метанола (11,5 г, 71%).

ЖХМС: (МК) ES⁺ 520;

- 28 031067 ¹Н ЯМР (400 МГц, CDC1₃): δ 8.31 (s, 1Н), 7.24-7.13 (m, 3H), 5.75 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.45 (dt, J=2.9, 5.8 Гц, 2H), 4.57 (dd, J=5.9, 11.2 Гц, 1H), 4.19 (td, J=1.3, 4.7 Гц, 1H), 3.84-3.77 (m, 1H), 3.75-3.65 (m, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.10 (d, J=16.6 Гц, 1H), 2.97 (dd, J=4.5, 16.7 Гц, 1H), 2.58 (dd, J=4.8, 7.4 Гц, 1H), 2.43-2.32 (m, 1H), 2.23-2.06 (m, 3H), 1.90 (dd, J=8.0, 14.2 Гц, 1H), 0.91 (s, 9H), 0.11 (s, 3H), 0.10 (s, 3H).

Стадия 8. {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-Хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1H-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат (1-216).

К раствору {(Ш^,4Е)-2-{[трет-бутил(диметил)силил]окси}-4-[(6-{[(1Е^)-5-хлор-2-метокси-2,3дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]циклопентил}метанола (16) (11,5 г, 0,0221 моль) в Ν,Ν-диметилацетамиде (160 мл, 1,7 моль) добавили хлорсульфонамид (6,64 г, 0,0575 моль) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь затем охладили до 0°С и в это время по каплям через капельную воронку добавили 12 М хлороводородную кислоту (90 мл, 1,1 моль) за 25 мин, поддерживая внутреннюю температуру реакционной смеси ниже 50°С. После завершения добавления охлаждающую баню убрали, а реакционную смесь оставили нагреваться до комнатной температуры при перемешивании в течение 2 ч. Затем реакцию осторожно погасили медленным добавлением суспензии карбоната натрия (70,30 г, 0,6633 моль) в воде (200,0 мл, 11,10 моль). Полученную суспензию отфильтровали, а твердые вещества промыли EtOAc (3 промывания, в целом - 800 мл). Твердые вещества убрали в сторону, а фильтрат перенесли в делительную воронку и разделили слои. Водный слой экстрагировали 3xEtOAc (общий объем EtOAc - 2000 мл), а объединенные органические слои высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и концентрировали in vacuo. Неочищенный остаток очистили колоночной хроматографией (выполнили с CH₂C1₂, 400 г колонка, элюент 0-10% MeOH:CH₂C1₂ за 80 мин, затем 10% MeOH:CH₂C1₂ за 20 мин) для получения {(Ш^,4Е)-4-[(6-{[(1Е^)-5-хлор-2-метокси2,3-дигидро-1Н-инден-1 -ил] амино}пиримидин-4-ил)окси] -2-гидроксициклопентил}метил сульфамата (10,3 г, 96%).

ЖХМС: (МК) ES⁺ 485;

Ή ЯМР (400 МГц, MeOD): δ 8.16 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.22-7.13 (m, 2H), 5.98 (s, 1H), 5.52 (d, J=32.8 Гц, 1H), 5.34 (s, 1H), 4.43-4.35 (m, 1H), 4.32 (dd, J=7.5, 9.8 Гц, 1H), 4.22 (td, J=2.5, 5.0 Гц, 1H), 4.16 (dd, J=7.3, 9.8 Гц, 1H), 3.34 (s, 4H), 3.10 (dd, J=2.1, 16.6 Гц, 1H), 3.02 (dd, J=4.8, 16.6 Гц, 1H), 2.58-2.46 (m, 1H), 2.28 (ddd, J=2.2, 6.9, 14.8 Гц, 1H), 2.12-1.90 (m, 4H).

Стадия 9: {(Ш^,4Е)-4-[(6-{[(1Е^)-5-Хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата HCl соль (1-216, HCl форма I).

{(Ш^,4Е)-4-[(6-{[(1Е^)-5-Хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат (1-216) (24,1 г, 0,0497 моль) поместили в 500 мл круглодонную колбу, оснащенную мешалкой. При перемешивании добавили ацетонитрил (500 мл). Смесь обрабатывали ультразвуком в течение 1 мин, а затем перемешивали при комнатной температуре под атмосферой азота в течение 1 ч, чтобы твердое вещество полностью диспергировалось. Медленной струей добавили водный раствор хлороводородной кислоты (6,0 М, 9,15 мл, 0,0549 моль) - раствор стал менее плотным, но полное растворение не наблюдали. В смесь внесли затравку нескольких кристаллов ранее приготовленной HC1 соли 1-216 (полученной так, как описано ниже в примере 3) и обрабатывали смесь ультразвуком в течение 1 мин, затем перемешивали при комнатной температуре под атмосферой азота в течение 2 ч; за это время смесь стала достаточно густой, поскольку из раствора в осадок выпало белое твердое вещество. Перемешанную смесь разбавили диэтиловым эфиром (500 мл), а затем хранили в холодильнике в течение ночи. Осадок собрали на стеклянной фильтровальной воронке, промыли эфиром, затем высушили in vacuo в течение ночи при 40°C, получив в остатке указанное в заголовке соединение в виде рыхлого белого кристаллического порошка, 24,37 г (выход 94%).

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО): δ 8.44 (s, 1Н), 8.38 (s, 2Н), 7.43 (s, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.23 (dd, J=20.1, 8.1 Гц, 3H), 6.22 (s, 1H), 5.68 (s, 1H), 5.26 (s, 1H), 4.31-4.12 (m, 4Н), 4.09-3.92 (m, 1Н), 3.05 (s, 3H), 2.36 (dt, J=18.8, 7.6 Гц, 1Н), 2.21 (dd, J=14.0, 6.5 Гц, 1Н), 2.05-1.93 (m, 2Н), 1.89 (dd, J=13.3, 8.3 Гц, 1H).

ЖХМС: муравьиная кислота, [М+Н⁺] = 485,3.

Хиральная ВЭЖХ (колонка Chiralcel OJ 4,6x250, элюировали 60/40/0,1% гексан/EtOH/ДЭA при 0,75 мл/мин - 60-минутный анализ) показала э.и. 99,7%. Анализ ВЭЖХ показал, что чистота продукта составляет 99,2%. Данные РПД для I-216 HCl формы I, полученной в этом примере 2, представлены на фиг. 7. Пики, указанные на фиг. 7, включают пики, перечисленные в табл. 6.

- 29 031067

Таблица 6

Угол 2-тета °	Интенс ивность %
4,759	56,2
7,807	81,1
9,16	27,8
10,089	42,6
13,512	29,6
14,748	78,7
14,812	71,9
15,486	89,9
16,166	68,6
17,151	26,3
17,484	38,5
18,13	29
18,255	23,3
18,519	42,6
19,439	37,9
19,729	53,8
20,296	37,9

Угол 2-тета °	Интенс ивность %
21,581	77,5
22,065	100
22,391	48,5
22,662	60,9
22,993	66,3
23,323	37,5
23,796	45,6
24,289	81,7
25,086	63,3
25,927	43,8
26,678	52,7
26,961	47,1
27,069	50,1
28,185	26
28,63	26,6
29,277	29,6

Данные ДСК для 1-216 НС1 формы I, полученной в этом примере 2, представлены на фиг. 8, а данные ТГК для 1-216 НС1 формы I, полученной в этом примере 2, представлены на фиг. 9.

Пример 3. Синтез {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1H-инден-1ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата гидрохлоридной соли (1-216 НС1).

{(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-Хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамат 1-216 (4,44 г, 0,00916 моль) поместили в 250 мл круглодонную колбу, оснащенную мешалкой. При перемешивании добавили ацетонитрил (82,5 мл). Смесь перемешали и несколько раз обработали ультразвуком (твердые вещества растворились не полностью). Колбу погрузили на ледяную баню, а затем при перемешивании медленной струей добавили водный раствор хлороводородной кислоты (6,0 М, 1,69 мл, 0,0101 моль), за это время твердые вещества частично растворились. Ледяную баню убрали, а реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре под атмосферой азота в течение 2 ч, и за это время образовался плотный белый осадок. При перемешивании добавили диэтиловый эфир (82,5 мл) и полученную смесь хранили в холодильнике в течение ночи. Осажденный продукт собрали на пористой воронке, промыли холодным эфиром, затем высушили в течение 24 ч при 42°С под вакуумом для получения указанного в заголовке соединения в виде рыхлого белого порошка, 3,84 г (выход 80%).

ЖХМС: муравьиная кислота, [М+Н⁺] = 485,2.

¹Н ЯМР (400 МГц, MeOD): δ 8.42 (s, 1Н), 7.30 (s, 1H), 7.27-7.18 (m, 2H), 6.26 (s, 1H), 5.78 (s, 1H), 5.30 (s, 1H), 4.46-4.38 (td, J=5.2, 2.0 Гц, 1H), 4.39-4.25 (m, 2H), 4.23-4.13 (dd, J=9.9, 7.4 Гц, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.18-3.04 (m, 2H), 2.62-2.47 (m, 1H), 2.42-2.31 (ddd, J=15.0, 6.9, 2.0 Гц, 1Н), 2.24-2.14 (dt, J=15.0, 4.6 Гц, 1Н), 2.14-2.02 (dd, J=10.3, 5.9 Гц, 2Н).

Пример 4. Синтез (1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-амина гидрохлорида (20).

Стадия 1. 5-Хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-он (18).

В 22 л многогорлый реактор, оснащенный датчиком температуры, подачей азота, охлаждающей баней и верхней механической мешалкой, загрузили метанол (2400 мл) и охладили до -20°С. Через капельную воронку добавили серную кислоту (384 мл, 7,22 моль) за 1 ч. Температура сохранялась приблизительно при -25°С с увеличением до -18°С в течение ~5 мин. За 10 мин добавили триметилортоформиат (906 мл, 8,3 моль), затем 5-хлор-2,3-дигидро-1Н-инден-1-он (17) (600,00 г, 3,61 моль) в виде твердого вещества. Внутренняя температура медленно увеличилась на 2°С. Реагент Козера (1553 г, 3,97 моль) растворили в метаноле (2400 мл) за 20 мин и добавили в реакционный сосуд за 1 ч и 15 мин. Добавление было экзотермическим, а внутреннюю температуру поддерживали приблизительно при -20°С. После завершения добавления темно-красный раствор перемешивали при -20°С в течение 1 ч, и в это время анализ ВЭЖХ показал полное превращение в заданный продукт. Небольшими частями добавили воду (7200 мл). После добавления небольшого количества воды (~50 мл) продукт быстро выпал в осадок. Перемешивание стало медленным и затруднительным. Смесь перемешивали при 0~10°С в течение 1 ч и отфильтровали через 3000 мл крупную пористую воронку. Фильтрацию завершили за 2 ч, а осадок на фильтре промыли водой (7200 мл) до достижения рН фильтрата около 5. Влажный осадок на фильтре снова добавили в реактор и добавили гептан (3000 мл). Смесь перемешивали при -20°С в течение 1 ч и отфильтровали. Осадок на фильтре промыли гептанами (1200 мл) и кондиционировали в течение 30 мин.

- 30 031067

Влажный осадок на фильтре высушили под вакуумом в течение 3 дней для полного удаления гептана и уменьшения содержания воды до <2%. Материал имел чистоту 99% (площадь под кривой по ВЭЖХ) и 93 вес.% по вес.% анализу (622,88 г, 88%).

¹Н ЯМР (300 МГц, СОС1₃): δ 7.69 (m, 1Н), 7.43 (s, 1Н), 7.38 (m, 1Н), 4.18 (m, 1Н), 3.63 (s, 3H), 3.47 (m, 1Н) и 2.99 (m, 1Н).

Стадия 2. (К,Е)-№(^)-5-Хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-илиден)-2-метилпропан-2сульфамид (19).

В 22 л многогорлый реактор, оснащенный холодильником, подачей азота, колбонагревателем и верхней механической мешалкой, загрузили 5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-он (18) (622,88 г, 3,17 моль) и (Щ-трет-бутилсульфинамид (460,7 г, 3,8 моль). К смеси добавили тетрагидрофуран (3100 мл), и температура упала до 9°С. За 10 мин добавили ЩОЕЩ (985 мл, 4,76 моль). Смесь нагрели до 68°С, и твердые вещества полностью растворились приблизительно при 35°С. Через 5 ч реакция достигла 50% выхода, по данным вес.% анализа ВЭЖХ. Реакционную смесь перемешивали при 68°С еще 5 ч до разложения нежелательного диастереомера до уровня менее 5% (площадь под кривой). Реакционную смесь охладили до комнатной температуры за 2 ч и перемешивали в течение 16 ч. За это время анализ ВЭЖХ показал отсутствие существенных изменений профиля реакции. Эту неочищенную реакционную смесь использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадии 3 и 4. (1К^)-5-Хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-амина гидрохлорид(20).

В 22 л многогорлый реактор, оснащенный подачей азота, охлаждающей баней и верхней механической мешалкой, загрузили неочищенный (К,Е)-№(^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1илиден)-2-метилпропан-2-сульфинамид (21) [приблизительно 475 г, приблизительно 1,58 моль] в тетрагидрофуране (4000 мл). Небольшими частями добавили метанол (9300 мл). Существенного изменения температуры не наблюдали. Смесь охладили до -24°С, используя баню из ацетона/сухого льда. В 2 л трехгорлую круглодонную колбу загрузили триглим (528 мл) и охладили до 9°С. Небольшими частями добавили NaBH₄ (60,2 г, 1,58 моль). Температура немного увеличилась на 1°С. Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч до полного растворения твердых веществ, для получения слегка мутного раствора. В 22 л реактор загрузили раствор NaBH₄ за 50 мин при -24°С. Экзотерму контролировали скоростью добавления. Существенного выделения газа не наблюдали. После завершения добавления, смесь перемешивали при -24°С еще 2 ч, и в это время анализ ВЭЖХ показал завершение реакции и диастереомерное соотношение 92%. Смесь нагрели до комнатной температуры за 3 ч и перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь снова охладили до ~7°С и частями добавили воду (950 мл), что привело к увеличению внутренней температуры на 5°С. Добавили Целит (475 г) и перемешивали смесь в течение 1 ч. Затем смесь отфильтровали через большой настольный фильтр (внутренний диаметр: 19 дюймов), а осадок на фильтре промыли метанолом (4000 мл). Анализ ВЭЖХ последней порции фильтрата показал практически отсутствие продукта. Объединенные фильтраты концентрировали под пониженным давлением до объема ~6 л. Добавили изопропилацетат (950 мл) и оставили слои разделяться. Водный слой экстрагировали изопропилацетатом (900 мл), а объединенный органический слой промыли насыщенным солевым раствором (2000 мл). Затем раствор высушили над сульфатом натрия и концентрировали приблизительно до 2 л. Затем смесь перегнали азеотропной перегонкой с тетрагидрофураном (2x3000 мл). Анализ Карла-Фишера показал содержание воды ~0,2%.

В 22 л многогорлый реактор, оснащенный подачей азота, охлаждающей баней и верхней механической мешалкой, загрузили неочищенный промежуточный сульфонил (приблизительно 475 г, приблизительно 1,58 моль) и 2-метил-тетрагидрофуран (9500 мл). Раствор охладили до -20°С и за 40 мин добавили 4 М хлороводородную кислоту в диоксане (800 мл, 3,16 моль). Экзотерму не наблюдали. Продукт выпал в осадок в конце добавления. Смесь перемешивали при -20°С еще 1 ч, и в это время анализ ВЭЖХ показал полное превращение. Смесь отфильтровали через большую воронку Бюхнера (внутренний диаметр: 11 дюймов). Фильтрация заняла более 2 ч. Осадок на фильтре промыли ацетоном (1000 мл) и кондиционировали в течение 1 ч. Затем твердое веществе перенесли обратно в реактор и добавили ацетон (3500 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, а затем отфильтровали. Осадок на фильтре промыли ацетоном (500 мл), а затем высушили под вакуумом в течение 16 ч. Получили приблизительно 293 г продукта в виде грязновато-белого твердого вещества. Анализ ВЭЖХ показал 96% чистоту и 96% э.и. В 22 л многогорлый реактор, оснащенный холодильником, подачей азота, колбонагревателем и верхней механической мешалкой, загрузили (1К^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Нинден-1-амина гидрохлорид (20) (290 г, 1,24 моль) и этанол (5200 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч и получили слегка мутный раствор. Смесь отфильтровали через мелкую пористую воронку, а прозрачный фильтрат загрузили обратно в реактор. Раствор нагревали при 55°С и перемешивали в течение 30 мин. За 1,5 ч добавили 2-метокси-2-метилпропан (5200 мл) и при добавлении поддерживали температуру 55°С. Твердое вещество выпало в осадок в конце добавления. Полученную белую суспензию перемешивали при 55°С в течение 1 ч и медленно охладили до комнатной температуры за 2 ч. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней, а затем отфильтровали через большую воронку Бюхнера (внутренний диаметр: 11 дюймов). Осадок на фильтре промыли МТБЭ (1000 мл) и высушили

- 31 031067 под вакуумом в течение 16 ч. Получили продукт в виде белого твердого вещества (184,4 г, 50%, площадь под кривой >99%, э.и. >99%).

¹Н ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 7.50 (m, 1Н), 7.37 (m, 2H), 4.78 (m, 1H), 4.40 (m, 1H), 3.51 (s, ЗН) и 3.19 (m, 1Н).

Пример 5. Синтез ((13,23,4К)-4-(6-((1К,2Б)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1иламино)пиримидин-4-илокси)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамата гидрохлорида, формы I (1-216 НС1 форма I).

Стадия 1. ((1К,4Б)-4-(Бензилокси)-3-(бензилоксиметил)циклопент-2-енилокси)триметилсилан (22).

К раствору дипропиламина (212 мл, 1,55 моль) в 2-метокси-2-метилпропане (2000 мл) при -15°С под защитным слоем азота медленно, за 10 мин добавили 2,50 М н-бутиллитий в гексане (567 мл, 1,42 моль), поддерживая температуру ниже -10°C. Полученную белую суспензию перемешивали в течение 30 мин при -15°С. К этой суспензии медленно добавили (18,2К,3Б,5К)-3-(бензилокси)-2(бензилоксиметил)-6-оксабицикло[3.1.0]гексан (21) (400,00 г, 1,29 моль) в виде раствора в метил-третбутиловом эфире (1200 мл) за 30 мин, поддерживая внутреннюю температуру ниже -10°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при -15°С. Анализ ТСХ показал отсутствие оставшегося исходного материала (20% этилацетат/гептан). Добавили хлортриметилсилан (204 мл, 1,61 моль), поддерживая температуру ниже -10°С. Смесь оставили нагреваться до 0°С и перемешивали в течение 30 мин. Анализ ТСХ показал отсутствие промежуточного спирта (20% этилацетат/гептан). Реакционную смесь погасили медленным добавлением воды (4 л), поддерживая внутреннюю температуру менее 8°С. Водный слой отделили, а органический слой 3 раза экстрагировали водой (3x4 л) и один раз - насыщенным раствором хлорида натрия в воде (4 л). Органический слой концентрировали под пониженным давлением для получения оранжевого маслянистого вещества (480 г, 97,4%), которое использовали без дополнительной очистки.

¹Н ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 7.18 (m, 10Н), 5.65 (s, 1H), 4.55 (t, 1Н), 4.30 (m, 5Н), 4.02 (s, 2Н), 2.58 (m, 1H), 1.47 (m, 1Н) и 0.00 (s, 9H).

Стадия 2. (18,38,4Б)-3-(Бензилокси)-4-(бензилоксиметил)циклопентанол (23).

К раствору ((1К,4Б)-4-(бензилокси)-3-(бензилоксиметил)циклопент-2-енилокси)триметилсилана (22) (478,00 г, 1,2494 моль) в тетрагидрофуране (9,6 л) добавили Pd, 5 вес.% на сульфате бария (265,9 г, 0,1249 моль) и перемешивали смесь под давлением водорода 100 psi при комнатной температуре в течение 18 ч, перемешивая при 200 об/мин.

Анализ ВЭЖХ через 18 ч показал расходование исходного материала. Реакционную смесь отфильтровали через среднюю пористую воронку, а осадок на фильтре промыли тетрагидрофураном (2000 мл). Фильтрат концентрировали, получив желтое маслянистое вещество. Полученное маслянистое вещество растворили в этилацетате (2000 мл), к которому добавили 2,0 М раствор хлороводородной кислоты в воде (2000 мл), и перемешивали двухфазную смесь в течение 1 ч. Органический слой отделили и один раз экстрагировали насыщенным раствором бикарбоната натрия в воде (2000 мл), два раза 2,0 М раствором гидроксида натрия в воде (2000 мл) и, наконец, насыщенным раствором хлорида натрия в воде (2000 мл). Органический слой концентрировали для получения коричневого маслянистого вещества (344 г, 88%), которое использовали без дополнительной очистки.

¹Н ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 7.18 (m, 10Н), 4.38 (m, 4Н),4.12 (m, 1Н), 3.85 (t, 1Н), 3.68 (m, 1Н), 3.44 (m, 1Н), 2.00 (m, 3Н), 1.75 (m, 1Н) и 1.42 (m, 1Н).

Стадия 3. (1К,33,4Б)-3-(Бензилокси)-4-(бензилоксиметил)цикло пентанол (24).

К раствору (18,38,4Б)-3-(бензилокси)-4-(бензилоксиметил)циклопентанола (23) (340,00 г,

1088,3 ммоль) в метиленхлориде (3400 мл) и триэтиламине (455,08 мл, 3265,0 ммоль) при 0°С медленно добавили метансульфонилхлорид (92,661 мл, 1197,2 ммоль) под защитным слоем азота, поддерживая температуру ниже 10°С. Реакционную смесь оставили нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Данные ВЭЖХ показали полное расходование исходного материала. Реакционную смесь охладили до 0°С и погасили водой (1700 мл), поддерживая температуру ниже 10°С.

Органические вещества отделили и два раза экстрагировали водой (1700 мл) и два раза насыщенным раствором бикарбоната натрия в воде (1700 мл). Добавили сульфат натрия (50 мл) и перемешивали смесь в течение 10 мин. Суспензию отфильтровали, а фильтрат концентрировали для получения коричневого маслянистого вещества. Маслянистое вещество растворили в тетрагидрофуране (3400 мл), к которому добавили тетрабутиламмония ацетат (656,28 г, 2176,7 ммоль), и перемешивали смесь при комнатной температуре в течение 20 ч. Анализ ВЭЖХ показал полное расходование исходного материала. Реакционную смесь концентрировали до ~2 объемов (700 мл), добавили этилацетат (3400 мл) и три раза экстрагировали смесь водой (1700 мл) и один раз - насыщенным раствором хлорида натрия в воде (1700 мл). Органические вещества концентрировали, а полученный остаток элюировали через слой силикагеля (1 кг) с 0-20% этилацетата в гексане [этилацетат (4 л) + гексан (16 л)]. Заданные фракции объединили и концентрировали для получения коричневого остатка. К полученному остатку добавили метанол (4000 мл), затем смесь гидроксида натрия (130,59 г, 3265,0 ммоль) в воде (2000 мл) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 1 ч. Анализ ВЭЖХ показал

- 32 031067 полное расходование исходного материала. Большую часть метанола в реакционной смеси концентрировали и добавили воду (1700 мл). Смесь три раза экстрагировали этилацетатом (3x1700 мл). Объединенные органические слои промыли насыщенным раствором хлорида натрия в воде (1700 мл) и высушили над сульфатом натрия (50 г). Полученную суспензию отфильтровали и концентрировали для получения светло-коричневого маслянистого вещества (238 г, 70%).

¹Н ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 7.28 (m, 10Н), 4.50 (m, 3H), 4.38 (m, 2H), 4.12 (t, 1H), 3.70 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 2.52 (m, 1H), 2.11 (m, 1H) и 1.75 (m, 3H).

Стадия 4. 4-((т^^)-3-(Бензилокси)-4-(бензилоксиметил)циклопентилокси)-6-хлорпиримидин (25).

При 0°C под защитным слоем азота к раствору (Ш^^)-3-(бензилокси)-4(бензилоксиметил)циклопентанола (24) (226,500 г, 725,026 ммоль) в тетрагидрофуране (1150 мл) частями добавили NaH, 60% в минеральном масле (86,995 г, 2175,1 ммоль), поддерживая температуру ниже 10°С. Затем за 30 мин добавили раствор 4,6-дихлорпиримидина (118,81 г, 797,53 ммоль) в тетрагидрофуране (1150 мл), поддерживая температуру ниже 5°С. Смесь оставили нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 24 ч. Анализ ВЭЖХ показал, что реакционная смесь содержит 74% исходного материала. Реакционную смесь погасили смесью воды (1150 мл) и насыщенного раствора хлорида аммония в воде (1150 мл), поддерживая температуру ниже 10°С. Тетрагидрофурановый слой отделили и концентрировали до ~2 объемов (500 мл). Водный слой два раза экстрагировали этилацетатом (1150 мл). Органические слои объединили и два раза промыли водой (1150 мл) и один раз - насыщенным раствором хлорида натрия в воде (1150 мл). Затем концентрировали органические вещества. Остаток растворили в тетрагидрофуране (2300 мл) и охладили до 0°С под защитным слоем азота. Частями добавили NaH, 60% в минеральном масле (86,995 г, 2175,1 ммоль), поддерживая температуру ниже 10°С. Смесь оставили нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч. Анализ ВЭЖХ показал, что реакция завершена. Реакционную смесь погасили смесью воды (1150 мл) и насыщенного раствора хлорида аммония в воде (1150 мл). Тетрагидрофурановый слой отделили и концентрировали до ~2 объемов (500 мл). Водный слой два раза экстрагировали этилацетатом (1150 мл). Органические слои объединили и два раза промыли водой (1150 мл) и один раз - насыщенным раствором хлорида натрия в воде (1150 мл). Затем органические вещества концентрировали для получения неочищенного промежуточного 4-((т^^)-3-(бензилокси)-4-(бензилоксиметил)циклопентилокси)-6-хлорпиримидина. Эту неочищенную реакционную смесь использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 5. (1S,2S,4R)-4-(6-Хлорпиримидин-4-илокси)-2-(гидроксиметил)циклопентанол (26).

Hеочищенный промежуточный 4-((т^^)-3-(бензилокси)-4-(бензилоксиметил)циклопентилокси)-6-хлорпиримидин (25) растворили в метиленхлориде (3000 мл) и охладили смесь до 0°С. Медленно добавили 1,0 М трихлорборан в метиленхлориде (1087,538 мл, 1087,538 ммоль), поддерживая температуру <10°С. Полученную смесь оставили перемешиваться в течение 1 ч при 0°С. Анализ ВЭЖХ показал расходование исходного материала. Реакционную смесь медленно добавили к насыщенному раствору бикарбоната натрия в воде (2300 мл) и оставили двухфазную смесь перемешиваться в течение 20 мин. Метиленхлоридный слой отделили, а водный слой дважды экстрагировали метиленхлоридом (2300 мл). Органические слои объединили и концентрировали. Остаток очистили, элюируя через силикагелевый (1 мг) слой с 50-100% этилацетата в гексане (гексан (6 л) + этилацетат (14 л)). Заданные фракции объединили и концентрировали для получения красного твердого вещества (124 г, 70%).

¹H ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 8.58 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.61 (m, 1H), 4.39 (t, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.61 (m, 1H), 2.25 (m, 3H) и 2.00 (m, 2H).

Стадия 6. (1S,2S,4R)-4-(6-((1R,2S)-5-Хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1H-инден-1-иламино)пиримидин4-илокси)-2-(гидроксиметил)циклопентанол (27).

В 500 мл аппарат Парра добавили (1S,2S,4R)-4-(6-хлорпиримидин-4-илокси)-2(гидроксиметил)циклопентанол (26) (25,00 г, 102,2 ммоль) в N-метилпирролидиноне (200 мл). К этой смеси добавили (1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1H-инден-1-амина гидрохлорид (31,10 г, 132,8 ммоль), затем N.N-диизопропилэтиламин (88,99 мл, 510,9 ммоль). Затем сосуд закрыли, закачали азот под давлением 30 psi и нагревали до 130°С в течение 22 ч. Когда реакция достигла этой температуры, давление повысили до 50 psi и поддерживали в течение выполнения реакции. Через 22 ч реакционную смесь охладили до комнатной температуры и сбросили давление. К реакционной смеси добавили метиленхлорид (250 мл), а затем экстрагировали смесь насыщенным раствором бикарбоната натрия в воде (250 мл). Затем органический слой четыре раза экстрагировали водой (250 мл) и один раз - насыщенным раствором хлорида натрия в воде (250 мл). Затем органический слой высушили над сульфатом натрия (7,5 г), отфильтровали и концентрировали. К черному полутвердому маслянистому веществу добавили ацетонитрил (250 мл) и перемешивали смесь в течение 2 ч при комнатной температуре. В течение этого времени в осадок выпало бежевое твердое вещество, его отфильтровали и высушили под пониженным давлением при 40°C в течение 16 ч. Получили светло-бежевое твердое вещество (17 г, 41%).

¹H ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 8.19 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.18 (m, 2H), 5.97 (s, 1H), 5.58 (m, 1H), 5.30 (m, 1H), 4.41 (m, 1H), 4.22 (m, 1H), 3.76 (m, 1H), 3.61 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.05 (m, 2H), 2.30 (m, 2H) и 1.97

- 33 031067 (m, ЗН).

Стадия 7. ((1S,2S,4R)-4-(6-((1R,2S)-5-Хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1H-инден-1-иламино)пиримидин-4-илокси)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамат (1-216).

(1S,2S,4R)-4-(6-((1R,2S)-5-Хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1H-инден-1-иламино)пиримидин-4-илокси)2-(гидроксиметил)циклопентанол (27) (85,00 г, 209,4 ммоль) растворили в N-метилпирролидиноне (510 мл) в 3 л реакторе. К этому раствору одной частью добавили (4-аза-1-азониабицикло[2.2.2]окт-1илсульфонил)(трет-бутоксикарбонил)азанид-1,4-диазабицикло[2.2.2]октана (1:1) гидрохлорид (полученный так, как описано в примере 6) (368 г, 838 ммоль), затем медленно добавили ацетонитрил (255 мл). Полученную густую суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После завершения реакции медленно добавили воду (595 мл) при комнатной температуре. К полученной смеси добавили этилацетат (1,70 л). Органический слой отделили и два раза промыли водой (2x595 мл) и один раз насыщенным раствором хлорида натрия в воде (595 мл). Объединенные водные слои три раза экстрагировали этилацетатом (850 мл). Объединенные органические слои высушили над сульфатом натрия (20 г), отфильтровали и концентрировали. Остаток растворили в ацетонитриле (680 мл), а полученный раствор охладили до температуры ниже 5°С. Медленно добавили 12,0 М хлороводородную кислоту в воде (255 мл, 3060 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру ниже 10°С, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 13 ч. Анализ ВЭЖХ показал отсутствие оставшегося Вос-защищенного промежуточного соединения. Реакционную смесь медленно добавили к смеси насыщенного раствора карбоната натрия в воде (850 мл) и воды (850 мл), поддерживая температуру <20°С. Затем добавили этилацетат (850 мл). Органический слой отделили и два раза экстрагировали водой (850 мл) и один раз - насыщенным раствором хлорида натрия в воде (850 мл). Водные слои объединили и два раза экстрагировали этилацетатом (850 мл). Органические слои объединили и высушили над сульфатом натрия (20 г), отфильтровали и концентрировали. Полученный остаток растворили в метиленхлориде (170 мл) и элюировали через слой диоксида кремния (1 кг) с 4 л метиленхлорида, 4 л метиленхлорида в этилацетате (1:1) и, наконец, 8 л этилацетата. Заданные фракции объединили и концентрировали для получения желтого полутвердого вещества (71 г), содержащего остаточный NMP.

'll ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 8.19 (s, 1Н), 7.25 (s, 1H), 7.18 (m, 2H), 5.97 (s, 1H), 5.58 (m, 1H), 5.35 (m, 1H), 4.35 (m, 2H), 4.15 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.05 (m, 2H), 2.51 (m, 1H), 2.30 (m, 2H) и 2.00 (m, 2H).

Стадия 8. Получение ((1S,2S,4R)-4-(6-((1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1H-инден-1иламино)пиримидин-4-илокси)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамата гидрохлорида, формы I (1-216 HC1 форма I).

В 3-горлом 3 л реакторе суспендировали неочищенный 1-216 из стадии 7 (142,00 г, 292,81 ммоль) в изопропиловом спирте (710 мл) и нагревали смесь до 60°С в течение 20 мин. Затем очень медленно добавили 6,0 М хлороводородную кислоту в воде (97,604 мл, 585,62 ммоль) и перемешивали смесь при 60°С в течение 10 мин. Полное растворение наблюдали после добавления 10 мл 6 М HC1, с экзотермой 7°С. Реакционную смесь охладили до 50°С и внесли затравку предварительно приготовленного 1-216, HC1 формы I (полученного так, как описано ниже в примере 7) (100 мг). Твердое вещество начало медленно осаждаться и эту суспензию оставили перемешиваться при 50°С в течение 60 мин. За 1 ч медленно добавили изопропилацетат (1420 мл), поддерживая температуру >45°С. Смесь оставили охлаждаться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч, охладили до <5°С и перемешивали в течение 2 ч. Твердые вещества отфильтровали, а осадок на фильтре промыли самотеком уксусной кислотой, 1-метилэтиловым эфиром (710 мл). Твердые вещества высушили под пониженным давлением при 45°С в течение 16 ч, получив белое твердое вещество (113,5 г, 51% за 2 стадии).

'll ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 8.48 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.22 (m, 2H), 6.30 (m, 1H), 5.82 (m, 1H), 5.31 (m, 1H), 4.44 (t, 1H), 4.30 (m, 2H), 4.18 (m, 1H), 3.35 (s, 3H), 3.15 (m, 2H), 2.55 (m, 1H), 2.38 (m, 1H) и 2.17 (m, 3H).

ЖХМС: Rf=9,30 мин., ES⁺=485 (МК).

Данные РПД для формы I представлены на фиг. 4. Данные ДСК для формы I представлены на фиг. 5, а данные ТГА для формы I представлены на фиг. 6.

Пример 6. Синтез (4-аза-1-азониабицикло[2.2.2]окт-1-илсульфонил)(трет-бутоксикарбонил)азанид1,4-диазабицикло[2.2.2]октана (1:1) гидрохлорида.

Хлорсульфонила изоцианат (45,2 кг, 319,4 моль) добавили к толуолу (194,2 кг) и охладили полученный раствор до температуры примерно между 0-6°С. Затем за 90 мин добавили раствор третбутилового спирта (23,6 кг, 318,4 моль) в толуоле (48,0 кг), поддерживая температуру в диапазоне около 0-6°С. Затем смесь перемешивали до завершения расходования трет-бутилового спирта (приблизительно 80 мин). Затем к смеси за 2,5 ч добавили раствор триэтилендиамина (DABCO, 71,4 кг, 636,5 моль) в толуоле (293,0 кг), поддерживая температуру в диапазоне около 0-6°С. Затем смесь нагрели до 20-25°С и перемешивали в течение 8 ч. Твердый продукт выделили центробежной фильтрацией под атмосферой азота и промыли толуолом (180,8 кг), а затем трет-бутил-метиловым эфиром (51,0 галлон) и вращали до исчезновения видимых жидких веществ (приблизительно 60 мин). Твердые вещества затем дополнительно высушили под вакуумом для получения 132,9 кг (4-аза-1-азониабицикло[2.2.2]окт-1

- 34 031067 илсульфонил)(трет-бутоксикарбонил)азанид-1,4-диазабицикло[2.2.2]октана (1:1) гидрохлорида.

Пример 7. Синтез затравки 1-216 гидрохлоридной соли, формы I, использованной в примере 5.

Стадия 1. трет-Бутил [({(^^,4К)-4-[(6-{[(1К^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метокси)сульфонил]карбамат.

К раствору (4-аза-1 -азониабицикло [2.2.2]окт-1 -илсульфонил)(трет-бутоксикарбонил)азанид-1,4диазабицикло[2.2.2]октана (1:1) гидрохлорида (43,4 г, 98,6 ммоль) в ацетонитриле (30 мл), в 500 мл реакторе, добавили (^^,4К)-4-(6-((1К^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-иламино)пиримидин4-илокси)-2-(гидроксиметил)циклопентанол (27) (10 г, 24,6 ммоль) в N-метилпирролидиноне (60 мл). Полученную густую суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После завершения реакции медленно добавили воду (66,6 мл) при комнатной температуре. К полученной смеси добавили этилацетат (66,7 мл). Водный слой три раза экстрагировали этилацетатом (3x66,6 мл). Объединенные органические слои один раз промыли водой (66,7 мл) и один раз - насыщенным раствором хлорида натрия в воде (66,7 мл). Объединенные органические слои высушили над сульфатом магния (3 г), отфильтровали и концентрировали. Этот продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 2. Получение ((^^,4К)-4-(6-((1И^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1иламино)пиримидин-4-илокси)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамата гидрохлорида, формы I (I-216 НС1 форма I).

Остаток из стадии 1 (10 г) растворили в ацетонитриле (81,5 мл) и полученный раствор охладили до температуры ниже 5°С. Медленно добавили 12,0 М хлороводородную кислоту (27,7 мл, 904 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру ниже 10°С, и полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 4 ч, затем нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 ч. Анализ ВЭЖХ показал отсутствие оставшегося Вос-защищенного промежуточного соединения. К реакционной смеси добавили воду (20 мл, 1110 ммоль) и повысили температуру до 60°С. По достижении этой температуры в реакционную смесь внесли затравку материала, полученного так, как описано в примере 8. Оставив затравку, реакционную смесь оставили медленно остывать до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь отфильтровали, промыли водой (66 мл) и высушили в течение ночи под пониженным давлением. В результате получили белое твердое вещество (5,3 г, 9,8 ммоль) продукта с выходом 60%.

'|| ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 8.19 (s, 1Н), 7.25 (s, 1Н), 7.18 (m, 2Н), 5.97 (s, 1Н), 5.58 (m, 1Н), 5.35 (m, 1Н), 4.35 (m, 2Н), 4.15 (m, 2Н), 3.30 (s, 3H), 3.05 (m, 2Н), 2.51 (m, 1Н), 2.30 (m, 2Н) и 2.00 (m, 2Н).

Пример 8. Синтез затравки 1-216 гидрохлоридной соли, формы I, использованной в примере 7.

трет-Бутил [({(^^,4К)-4-[(6-{[(1И^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}_- пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метокси)сульфонил]карбамат (1 г; полученный таким же образом, как описано в примере 7, стадия 1) растворили в ацетонитриле (8,12 мл) и полученный раствор охладили до температуры ниже 5°С. Медленно добавили 12,0 М хлороводородную кислоту (2,7 мл, 89 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру ниже 10°С, и полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 4 ч, затем нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 15 ч. Анализ ВЭЖХ показал отсутствие оставшегося Вос-защищенного промежуточного соединения. К реакционной смеси добавили небольшое количество воды и бикарбоната натрия для нейтрализации, но это количество не полностью нейтрализовало раствор. Реакционную смесь концентрировали при 40°С, а затем охладили раствор до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Добавили дополнительное количество воды и перемешивали раствор еще 1 ч. Реакционную смесь отфильтровали, промыли водой и высушили в течение ночи под пониженным давлением для получения белого твердого вещества (0,598 г, 1,15 ммоль) продукта с выходом 68%.

'll ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 8.19 (s, 1Н), 7.25 (s, 1Н), 7.18 (m, 2Н), 5.97 (s, 1Н), 5.58 (m, 1Н), 5.35 (m, 1Н), 4.35 (m, 2Н), 4.15 (m, 2Н), 3.30 (s, 3H), 3.05 (m, 2Н), 2.51 (m, 1Н), 2.30 (m, 2Н) и 2.00 (m, 2Н).

Это белое твердое вещество (250 мг, 0,479 ммоль) суспендировали в изопропиловом спирте (2,5 мл, 32,6 ммоль) и нагревали до 60°С, добавили 8,0 М НС1 в воде (0,120 мл, 0,959 ммоль) и наблюдали растворение некоторого количества вещества. Через 15 мин нагревание убрали, а суспензию охладили до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Твердое вещество отфильтровали и промыли 5% водным раствором изопропилового спирта и высушили в течение ночи под пониженным давлением. В результате получили указанное в заголовке соединение (0,204 г, 0,391 ммоль) с выходом 81,6%.

'll ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 8.19 (s, 1Н), 7.25 (s, 1H), 7.18 (m, 2Н), 5.97 (s, 1H), 5.58 (m, 1Н), 5.35 (m, 1Н), 4.35 (m, 2Н), 4.15 (m, 2Н), 3.30 (s, 3H), 3.05 (m, 2Н), 2.51 (m, 1Н), 2.30 (m, 2Н) и 2.00 (m, 2Н).

Пример 9. Получение ((^^,4К)-4-(6-((1И^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1иламино)пиримидин-4-илокси)-2-гидроксициклопентил)метил сульфамата гидрохлорида, формы II (1-216 HCl форма II).

1-216 HCl форму I (0,5 г, полученную так, как описано выше в примере 5) суспендировали в воде (10 мл) при комнатной температуре в течение 18 ч. Полученные твердые вещества отфильтровали, промыли водой (2,5 мл) и высушили под пониженным давлением при комнатной температуре в течение 16 ч.

- 35 031067

В результате получили форму III-216 HC1 в виде белого твердого вещества (0,45 г) с выходом 90%.

¹H ЯМР (300 МГц, CD₃OD): δ 8.35 (s, 1Н), 7.30 (s, 1H), 7.21 (m, 2H), 6.17 (m, 1H), 5.65 (m, 1H), 5.35 (m, 1H), 4.41 (t, 1H), 4.30 (m, 2H), 4.17 (m, 1H), 3.36 (s, 3H), 3.10 (m, 2H), 2.55 (m, 1H), 2.35 (m, 1H) и 2.10 (m, 3H).

ЖХМС: Rf=9,29 мин., ES⁺=485 (МК).

Данные РПД для формы II представлены на фиг. 10.

Пример 10. Фармакодинамическая модель на опухоли in vivo.

Клетки опухоли НСТ116 (2x10⁶) (АТСС № CCL-247) в 100 мкл фосфатно-солевого буферного раствора асептически инъецировали в подкожную зону правого бока спины самок голых мышей Ncr (возрастом 5-8 недель, Charles River), используя иглу 26 калибра. Начиная с 7 дня после инокуляции опухоли измеряли дважды в неделю с помощью штангенциркуля. Объемы опухоли рассчитали по стандартным способам (0,5x(длинаxширина²)). Когда опухоли достигли объема приблизительно 3-700 мм³, мышей случайным образом разделили на группы и ввели подкожные инъекции соединения-ингибитора (200 мкл) в различных дозах. Опухоли собрали и разрушили в пакетах Covaris, а затем перенесли в стеклянные пробирки на сухом льду для обработки ультразвуком в устройстве Covaris Е200. Лизисный буфер реагента для экстракции белков млекопитающих (MPER) (Pierce, 78501) дополнили следующими веществами (конечные концентрации): lx набора смеси ингибиторов протеаз (Calbiochem, 539134), 5 мМ о-фенантролина в диметилсульфоксиде (ДМСО) (Sigma, № Р1294 и Sigma ДМСО № D2650), 10 мМ йодацетимида (Sigma), 2 мМ ортованадата натрия (Sigma, № S6508), 25 мМ фторида натрия и 25 мМ β-глицерофосфата. Холодный лизисный буфер (300-800 мкл) добавили к опухолям непосредственно перед ультразвуковой обработкой. Стадии ультразвуковой обработки: 10 с, 1% 500 мВ 50, 20 с, 20% 500 мВ 50, 20 с, 10% 500 мВ 50. После ультразвуковой обработки образцы поместили на влажный лед, вылили в пробирки Эппендорфа и вращали при 14000 об/мин. в течение 20 мин при 4°C в микроцентрифуге. Надосадочные жидкости перенесли в новые пробирки и определили концентрации белка с помощью реагентов бицинхониновой кислоты Pierce (BCA) и белковых стандартов. Опухолевые лизаты хранили при -80°C.

Для количественного анализа неддилированных куллинов использовали следующий способ: 20 мкг опухолевого лизата с загрузочным буфером додецилсульфата лития (ЛДС) и эталонным восстановительным агентом (Invitrogen NP0007 и NP0004) загрузили на 4-12% бис-Tris гели, 1,5 мМ, 10-луночные гели (Invitrogen №0315Вох). Гели обрабатывали при 150 В в электродном буфере 2-(Ы-морфолино)этансульфоновой кислоты (МЭС) (Invitrogen NP0002). Гели отсекли по маркеру соответствующего молекулярного веса и перенесли в PVDF-FL (Millipore, IPFL00010), используя устройство для переноса полутвердых веществ (Amersham Biosciences, ТЕ70). После переноса мембраны блокировали в блокаторе Odyssey (LI-COR Biosciences № 927-40000), затем инкубировали с первичными антителами в блокаторе Odyssey + 0,1% Tween-20 (Sigma № Р7949) в течение ночи при 4°C. Мембраны три раза промыли в Tris-буферном солевом растворе с Tween-20 (TBST), а затем инкубировали с козьим антикроличьим иммуноглобулином G с меткой Alexa Fluor 680, антителом тяжелой и легкой цепей (IgG (H+L)) (Molecular Probes, номер по каталогу А-21109). Через 1 ч инкубирования со вторичным антителом в темноте мембраны 5 раз промыли TBST и один раз - Tris-буферным солевым раствором (TBS), защищая от света. Мембраны высушили по меньшей мере в течение 1 ч, а затем сканировали на системе инфракрасной визуализации Odyssey (LI-COR Biosciences). Использовали следующее первичное антитело: Anti-Nedd-8 (MIL10 клон 52-9-5, разработанный компанией Epitomics, разбавление 1:4000). Вторичное антитело использовали при 1:2000. Количественную оценку сигналов на вестерн-блотах выполнили с помощью программы Odyssey.

В патентной и специальной литературе, упомянутой в настоящем документе, представлена информация, доступная специалистам в данной области. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют такое же значение, какое обычно понимается специалистами в области, к которой относится это изобретение. Изданные патенты, заявки и стандарты, цитируемые в настоящем документе, включены в настоящий документ посредством ссылки в такой же степени, как если бы каждый из них был специально и отдельно указан для включения посредством ссылки. В случае противоречий следует руководствоваться настоящим описанием, включая определения.

Хотя был описан ряд вариантов реализации настоящего изобретения, понятно, что представленные базовые примеры могут быть изменены для получения других вариантов реализации, в которых используются соединения, способы и т.д. настоящего изобретения. Поэтому следует понимать, что рамки настоящего изобретения представлены в настоящем документе в качестве примера, и они не ограничиваются конкретными вариантами реализации.

- 36 031067

Claims (44)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение {(1 S,2S,4R)-4-[(6-{ [(1 R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3 -дигидро-1 Н-инден-1 - ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопенти}метил сульфамат формулы 1-216 его фармацевтически приемлемая соль или фармацевтически приемлемый гидрат любого из них.

2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что его фармацевтически приемлемая соль представляет собой гидрохлоридную соль.

3. Соединение по п.1, отличающееся тем, что фармацевтически приемлемый гидрат представляет собой моногидрат {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопенти}метил сульфамата гидрохлоридной соли.

4. Соединение по п.2, отличающееся тем, что указанное соединение в основном имеет кристаллическую форму I, которая характеризуется диаграммой рентгеновской порошковой дифракции (РПД), имеющей пики при углах 2Θ 4,5, 15,2, 21,3, 21,8 и 24,0°, где каждое из значений угла 2Θ составляет указанное значение ± 0,2°.

5. Соединение по п.4, отличающееся тем, что форма I характеризуется диаграммой РПД, имеющей пики при углах 2Θ 4,5, 7,5, 14,4, 14,6, 15,2, 15,9, 19,5, 21,3, 21,8, 22,4, 22,7, 24,0 и 24,8°, где каждое из значений угла 2Θ составляет указанное значение ± 0,2°.

6. Соединение по п.4, отличающееся тем, что форма I характеризуется диаграммой РПД, имеющей пики при углах 2Θ 4,5, 7,5, 8,9, 9,8, 13,3, 14,4, 14,6, 15,2, 15,9, 17,2, 19,5, 20,0, 21,3, 21,8, 22,4, 22,7, 24,0, 24,8, 25,7 и 26,4°, где каждое из значений угла 2Θ составляет указанное значение ± 0,2°.

7. Соединение по п.2, отличающееся тем, что указанное соединение в основном имеет кристаллическую форму I, которая характеризуется диаграммой рентгеновской порошковой дифракции (РПД), имеющей эталонный пик с углом 2Θ 4,5±0,3° и имеющей пики при углах 2Θ 10,7, 16,8, 17,3 и 19,5° относительно этого эталонного пика.

8. Соединение по п.7, отличающееся тем, что форма I характеризуется диаграммой рентгеновской порошковой дифракции (РПД), имеющей эталонный пик с углом 2Θ 4,5±0,3° и имеющей пики при углах 2Θ 3,0, 9,9, 10,1, 10,7, 11,4, 15,0, 16,8, 17,3, 17,9, 18,2, 19,5 и 20,3° относительно этого эталонного пика.

9.8, 10,9, 11,3, 13,3, 13,8, 14,4, 15,5, 16,0, 17,0, 19,5 и 20,7° относительно этого эталонного пика.

9. Соединение по п.7, отличающееся тем, что форма I характеризуется диаграммой рентгеновской порошковой дифракции (РПД), имеющей эталонный пик с углом 2Θ 4,5±0,3° и имеющей пики с углами 2Θ 3,0, 4,4, 5,3, 8,8, 9,9, 10,1, 10,7, 11,4, 12,7, 15,0, 15,5, 16,8, 17,3, 17,9, 18,2, 19,5, 20,3, 21,2 и 21,9° отно сительно этого эталонного пика.

10. Соединение по п.4, отличающееся тем, что форма I характеризуется диаграммой РПД, как имеющей пики, указанные в следующей таблице:

Угол 2-тета (20), ⁰ Интенсивность, % 4,491 63,1 7,506 58,9 8,89 24,7 9,847 41,6 13,274 29,2 14,418 59,1 14,613 58 15,176 100 15,874 58,1 17,012 16,7 17,205 42,1 17,847 28,4 18,241 32,2 18,49 21,7 19,177 33,9 19,454 53,6 20,045 35,4

Угол 2-тета (20), ⁰ Интенсивность, % 21,31 67,6 21,771 83,5 22,206 34,2 22,35 55,6 22,707 58,9 23,045 27,4 23,528 34,4 24,032 69,3 24,803 53,6 25,654 41,1 26,407 40,9 26,694 34,5 26,932 33,1 27,978 17 28,36 16,7 29,066 21,4

11. Соединение по п.2, отличающееся тем, что указанное соединение в основном имеет кристаллическую форму I, которая характеризуется термограммой дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), характеризующейся эндотермой с пиком приблизительно при 135,7°С с температурой начала около 129,6°С.

12. Соединение по п.2, отличающееся тем, что указанное соединение в основном имеет кристаллическую форму I, которая характеризуется термограммой ДСК, характеризующейся эндотермой с началом при температуре около 129,8°С и пиком при температуре около 135,6°С, и широкой эндотермой с началом при температуре около 181,6°С и пиком при температуре около 195,5°С, и узкой эндотермой с началом при температуре около 275,3°С и пиком при температуре около 275,5°С.

13.8, 14,4 и 15,5° относительно этого эталонного пика.

13.8, 14,4 и 15,5° относительно этого эталонного пика.

13. Соединение по п.2, отличающееся тем, что указанное соединение в основном имеет кристаллическую форму I, которая характеризуется термограммой термогравиметрического анализа (ТГА), характеризующейся потерей веса около 3,7% при температуре от около 100 до около 150°С.

14. Соединение по любому из пп.4-13, отличающееся тем, что ляет собой кристаллическую форму I.

15. Соединение по любому из пп.4-13, отличающееся тем, что ляет собой кристаллическую форму I.

16. Соединение по любому из пп.4-13, отличающееся тем, что ляет собой кристаллическую форму I.

17. Соединение по любому из пп.4-13, отличающееся тем, что ляет собой кристаллическую форму I.

18. Соединение по п.2, отличающееся тем, что указанное соединение в основном имеет кристаллическую форму II, которая характеризуется диаграммой рентгеновской порошковой дифракции (РПД), имеющей пики при углах 2Θ 8,7, 15,2, 15,7, 19,6 и 24,2°, где каждое из значений угла 2Θ составляет указанное значение ± 0,2°.

19. Соединение по п.18, отличающееся тем, что форма II характеризуется диаграммой рентгеновской порошковой дифракции (РПД), имеющей пики при углах 2Θ 8,7, 15,2, 15,7, 19,6 и 24,2°, где каждое из значений угла 2Θ составляет указанное значение ± 0,2°.

20. Соединение по п.18, отличающееся тем, что форма II характеризуется диаграммой РПД, имеющей пики при углах 2Θ 4,3, 8,7, 15,2, 15,7, 19,6, 20,0, 20,8, 22,5, 23,1 и 24,2°, где каждое из значений угла 2Θ составляет указанное значение ± 0,2°.

21. Соединение по п.18, отличающееся тем, что форма II характеризуется диаграммой РПД, имеющей пики при углах 2Θ 4,3, 8,7, 12,4, 14,5, 15,2, 15,7, 17,3, 18,2, 18,5, 19,6, 20,0, 20,8, 22,0, 22,5, 23,1, 24,2,

22. Соединение по п.2, отличающееся тем, что указанное соединение в основном имеет кристаллическую форму II, которая характеризуется диаграммой рентгеновской порошковой дифракции (РПД), имеющей эталонный пик с углом 2Θ 8,7±0,3° и имеющей пики при углах 2Θ -4,4, 6,5, 7,0, 10,9, 11,3, 12,1,

23. Соединение по п.22, отличающееся тем, что диаграмма рентгеновской порошковой дифракции (РПД) имеет эталонный пик с углом 2Θ 8,7±0,3° и имеет пики с углами 2Θ -4,4, 6,5, 7,0, 10,9, 11,3, 12,1,

24. Соединение по п.22, отличающееся тем, что диаграмма рентгеновской порошковой дифракции (РПД) имеет эталонный пик с углом 2Θ 8,7±0,3° и имеет пики с углами 2Θ -4,4, 3,7, 5,8, 6,5, 7,0, 8,6, 9,5,

24.7, 25,7, 28,2 и 29,4°, где каждое из значений угла 2Θ составляет указанное значение ± 0,2°.

25. Соединение по любому из пп.18-24, отличающееся тем, ставляет собой кристаллическую форму II.

26. Соединение по любому из пп.18-24, отличающееся тем, ставляет собой кристаллическую форму II.

27. Соединение по любому из пп.18-24, отличающееся тем, ставляет собой кристаллическую форму II.

28. Соединение по любому из пп.18-24, отличающееся тем, ставляет собой кристаллическую форму II.

29. Композиция для лечения опухоли, содержащая соединение по любому из пп.1-28 и фармацевтически приемлемый носитель.

30. Композиция по п.29, пригодная для перорального введения.

31. Применение соединения по любому из пп.1-28 для производства лекарственного препарата для что что что что по по по по меньшей меньшей меньшей меньшей мере мере мере мере вес.% вес.% вес.% вес.% предпредпредпредлечения рака у пациента, нуждающегося в таком лечении.

32. Способ лечения рака, включающий введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, соединения по любому из пп.1-28.

33. Применение соединения по любому из пп.1-28 для производства лекарственного препарата для лечения заболевания, опосредованного активностью №бб8-активирующего фермента (ΝΑΕ).

34. Применение соединения по любому из пп.1-28 для производства лекарственного препарата для лечения воспалительных нарушений, воспаления, связанного с инфекцией, дегенеративными расстройствами, ишемическим повреждением или кахексией.

35. Применение соединения по любому из пп.1-28 для производства лекарственного препарата для лечения солидной опухоли.

36. Применение соединения по любому из пп.1-28 для производства лекарственного препарата для лечения рака поджелудочной железы, рака мочевого пузыря, колоректального рака, рака молочной железы, рака простаты, рака почек, гепатоцеллюлярного рака, рака легких, рака яичников, рака шейки матки, рака желудка, рака пищевода, рака головы и шеи, меланомы, нейроэндокринного рака, опухоли головного мозга, рака костей или саркомы мягких тканей.

37. Применение соединения по любому из пп.1-28 для производства лекарственного препарата для лечения гематологического злокачественного заболевания.

- 37 031067 по по по по меньшей меньшей меньшей меньшей мере мере мере мере вес.% представ80 вес.% представ90 вес.% представ95 вес.% представ-

38. Применение соединения по любому из пп.1-28 для производства лекарственного препарата для лечения острого миелоидного лейкоза, хронического миелоидного лейкоза, острого лимфобластного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза, болезни Ходжкина, неходжкинской лимфомы, лимфомы β-клеток, лимфомы Т-клеток, множественной миеломы, макроглобулинемии Вальденстрема, миелодиспластических синдромов или миелопролиферативных синдромов.

- 38 031067

- 39 031067 включающий сульфамирование соединения формулы (16) . аОМе Cl—-fW 'NH

TBScf (16) и удаление защиты в кислой среде с образованием !(^^.4Н)-4-|(6-;|(1Н^)-5-хлор-2-метокси2,3-дигидро- 1Н-инден-1 -ил] амино} пиримидин-4-ил)окси] -2-гидроксициклопентил} метил сульфамата.

44. Способ по п.43, дополнительно включающий обработку {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2метокси-2,3-дигидро-1 Н-инден-1 -ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата хлороводородной кислотой с получением гидрохлоридной соли {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2гидроксициклопентил}метил сульфамата.

45. Способ по п.43, в котором соединение формулы (16) получают взаимодействием соединения формулы (15)

CI с соединением формулы (8) tbscJ

39. Способ получения {(^^,4К)-4-[(6-{[(1К^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата формулы (1-216) включающий сульфамирование соединения формулы (27) (S) Ό- (27) при группе первичного спирта, чтобы получить {(^^,4К)-4-[(6-{[(1Я^)-5-хлор-2-метокси-2,3дигидро-Ш-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата.

- 40 031067

Исследование фармакодинамики

НСТ-116: 30 мг/кг 1-115

О 4 3 12 16 20 М

Время после введения дозы (часы)

ФК параметры К-1-115 в самках «голых» мышей Ncr с ксенотрансплантатами опухоли НСТ 116 после однократного подкожного введения при 30 мгЛгг.

Образец Последняя площадь под кривой (нМ-ч) Стах (нМ)

Плазма * J ~ ^Г; 2 26271 ..... 27138

Фиг. 1

Исследование фармакодинамики

НСТ-116: 10 мг/кг 1-216

Время после введения дозы (часы)

ФК параметры 1-216 HCI в самках «голых» мышей Ncr с ксенотрансплантатами опухоли НСТ 116 после однократного подкожного введения при 10 мг/кг.

.......'°бра^ietJ. Последняя площадь под кривой ГнМ-чщСгпах (нМ) , „ Плазма ............................................... шаэ '____________________ им'13

Фиг. 2

40. Способ по п.39, дополнительно включающий обработку {(^^,4К)-4-[(6-{[(1Я^)-5-хлор-2метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата хлороводородной кислотой с получением гидрохлоридной соли {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5хлор-2-метокси-2,3-дигидро-Ш-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2гидроксициклопентил}метил сульфамата.

- 41 031067

Исследование фармакодинамики НСТ-116: 30 мг/кг 1-216

Время после введения дозы (часы)

ФК параметры 1-216 HCI в самках «голых» мышей Нсг с ксенотрансплантатами опухоли НСТ 116 после однократного подкожного введения при 30 мг/кг.

.............Образец...... Последняя площадь под кривой (нМ*ч) Стах (нМ)_______

Плазма ХХХХ&ЙО ~ ........24Ж.. '''

Фиг. 3

Фиг. 4

41. Способ по п.40, дополнительно включающий обработку гидрохлоридной соли {(1S,2S,4R)-4-[(6{[(^^)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-Ш-инден-1-ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2гидроксициклопентил}метил сульфамата антирастворителем с образованием формы I гидрохлоридной соли {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1H-инден-1-ил]амино}пиримидин-4 ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата.

- 42 031067

42. Способ по п.39, в котором соединение формулы (27) получают путем взаимодействия соединения (26) (26) с соединением формулы (20)

- 43 031067

Тепловой поток (Вт/г) Линейная функция (импульсы)

- » * ’ I « г « · » » Й И К · ’Я

Шкала 2-тета

Фиг. 7 дек

Температура (°C)

Фиг. 8

43. Способ получения {(1S,2S,4R)-4-[(6-{[(1R,2S)-5-хлор-2-метокси-2,3-дигидро-1Н-инден-1ил]амино}пиримидин-4-ил)окси]-2-гидроксициклопентил}метил сульфамата формулы (1-216)

- 44 031067

РПД формы II —\J----------(----------f----------1----------₁...... .,y,„r„ ---------]--------|----------J-----' ...jnVH.n.U.UJ,,·,·,·,·,·,,,·,,··,,·,.....,......... 1---------J----._r ал »

Шкала 2-тета

Фиг. 10