EA030004B1 - Иммуногенный пептидный конъюгат и способ индуцирования терапевтического гуморального ответа против вируса гриппа с его применением - Google Patents
Иммуногенный пептидный конъюгат и способ индуцирования терапевтического гуморального ответа против вируса гриппа с его применением Download PDFInfo
- Publication number
- EA030004B1 EA030004B1 EA201591747A EA201591747A EA030004B1 EA 030004 B1 EA030004 B1 EA 030004B1 EA 201591747 A EA201591747 A EA 201591747A EA 201591747 A EA201591747 A EA 201591747A EA 030004 B1 EA030004 B1 EA 030004B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- influenza
- protein
- hemagglutinin
- bei
- azp
- Prior art date
Links
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 title claims abstract description 83
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 60
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 title claims abstract description 52
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 35
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims description 5
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 title abstract 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims abstract description 78
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims abstract description 78
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims abstract description 78
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims abstract description 78
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims abstract description 62
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 53
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims abstract description 53
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 38
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims abstract description 17
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 10
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 121
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 claims description 29
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 29
- 101710146275 Hemagglutinin 2 Proteins 0.000 claims description 27
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 22
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 20
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 claims description 14
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 13
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 13
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 claims description 12
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 10
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 claims description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 6
- 125000002924 primary amino group Chemical class [H]N([H])* 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 4
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims description 4
- 101800001707 Spacer peptide Proteins 0.000 claims description 4
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 claims description 4
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 claims description 4
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical group O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 claims description 3
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 3
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 claims description 3
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 claims description 3
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 3
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 claims description 2
- 241001500350 Influenzavirus B Species 0.000 claims 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 claims 1
- 241000237988 Patellidae Species 0.000 claims 1
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 claims 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims 1
- 108700010850 rotavirus proteins Proteins 0.000 claims 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 abstract 2
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 abstract 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 56
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 49
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 24
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 10
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 8
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 7
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 7
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 6
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 9-ethyl-3-carbazolamine Chemical compound NC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 3
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 3
- 241000702437 Parvovirus H3 Species 0.000 description 3
- RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010059722 Viral Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- -1 aromatic amino acid Chemical class 0.000 description 3
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 3
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 3
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 3
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 3
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 2
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 2
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 description 2
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical group 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 2
- NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCCC1 NZNMSOFKMUBTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 2
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 2
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N oseltamivir Chemical compound CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N 0.000 description 2
- 229960002194 oseltamivir phosphate Drugs 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 2
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 2
- REYLLNRLWCBKCM-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-acetamido-4-sulfanylbutanoic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCS REYLLNRLWCBKCM-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 125000004080 3-carboxypropanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C(O[H])=O 0.000 description 1
- MFRZPLYKVDHOSN-UHFFFAOYSA-N 4-(2-isocyanoethyl)morpholine Chemical compound [C-]#[N+]CCN1CCOCC1 MFRZPLYKVDHOSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAYOCELKCDKZCA-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxy-2,4-dimethylthiophen-3-one Chemical compound CC1SC(O)=C(C)C1=O FAYOCELKCDKZCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000702620 H-1 parvovirus Species 0.000 description 1
- 101710082439 Hemagglutinin A Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108010042653 IgA receptor Proteins 0.000 description 1
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 1
- 101900234398 Influenza B virus Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100034014 Prolyl 3-hydroxylase 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 1
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 1
- QTENRWWVYAAPBI-YZTFXSNBSA-N Streptomycin sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@@H]1O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@H](N=C(N)N)[C@@H](O)[C@@H]1O QTENRWWVYAAPBI-YZTFXSNBSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N adipic acid dihydrazide Chemical compound NNC(=O)CCCCC(=O)NN IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002788 anti-peptide Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006193 diazotization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000007499 fusion processing Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 1
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 102200027165 rs201383094 Human genes 0.000 description 1
- 102200058937 rs45581936 Human genes 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- KDNYVXLYMQKQHH-UHFFFAOYSA-N trans-communol Natural products OCC1(C)CCCC2(C)C(CC=C(C=C)C)C(=C)CCC21 KDNYVXLYMQKQHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000019540 viral envelope fusion with host membrane Effects 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1018—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6081—Albumin; Keyhole limpet haemocyanin [KLH]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Иммуногенные пептидные конъюгаты, полученные из гемагглютинина вируса гриппа, представленные в настоящем описании, индуцируют специфический терапевтический гуморальный ответ против вируса гриппа. Иммуногенные пептидные конъюгаты содержат сегмент из домена области инициации слияния (FIR) белка гемагглютинина вируса гриппа, конъюгированного с белком-носителем, таким как гемоцианин морского блюдца (KLH), бычий сывороточный альбумин (BSA), белок гемагглютинин вируса гриппа (НА) (т.е. полноразмерный НА) и т.п. Иммуногенные пептидные конъюгаты, представленные в настоящем описании, можно применять для лечения или профилактики инфекции гриппа и для получения специфичных к вирусу гриппа терапевтических антител, противодействующих слиянию вируса гриппа и мембраны клетки-хозяина. Пептидные конъюгаты можно составлять в фармацевтических композициях, применимых для лечения широкого спектра или профилактики инфекции гриппа.
Description
изобретение относится к иммуногенным пептидным конъюгатам, полученным из гемагглютинина вируса гриппа А2 (НА2), и способам индуцирования специфичного гуморального ответа против вируса гриппа с применением конъюгатов.
Включение списка последовательностей
Информация о биологических последовательностях для настоящего изобретения включена в текстовый файл А8СП, поданный с настоящей заявкой, имеющий название файла "Ти-271-5-8Ер.1.\1". созданный 14 марта 2013 г. и имеющий размер файла 29368 байтов, включенный в настоящее описание в качестве ссылки.
Предпосылки изобретения
Гемагглютинин (НА) является белком оболочки вируса гриппа (ортомиксовируса) и белком слияния прототипичного РНК-вируса класса I. НА продуцируется в инфицированных клетках в виде белкапредшественника НАО, протеолитически расщепляемого на 2 белка, обозначаемых как НА1 и НА2. НА2 содержит амино-концевой гидрофобный домен, обозначаемый как пептид слияния, экспонируемый при расщеплении белка-предшественника гемагглютинина. Ретровирусные трансмембранные белки имеют несколько структурных черт наряду с известной структурой НА2 в дополнение к пептиду слияния, включая удлиненную амино-концевую спираль (Ν-спираль, как правило, "гептадный повтор" или "лейциновую молнию"), карбокси-концевую спираль (С-спираль), и ароматический мотив, проксимальный к трансмембранному домену. Наличие по меньшей мере четырех из этих пяти доменов определяет белок вирусной оболочки как белок слияния класса I.
На фиг. 1 показаны шесть идентифицированных доменов белков слияния шести семейств вирусов класса I. Белки слияния берут начало из гидрофобного пептида слияния, заканчиваются в якорном пептиде и включают удлиненную амино-концевую альфа-спираль (Ν-спираль, как правило, "гептадный повтор" или "лейциновую молнию"), карбокси-концевую альфа-спираль (С-спираль) и, иногда, ароматический мотив, проксимальный к оболочке вириона. Шестой домен, обозначаемый в настоящем описании как область инициации слияния (ПК), описываемый в патентах США № 7491793 и 8222204 (Сапу и XVIIкоп), содержание каждого из которых включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.
Существует множество подтипов вируса гриппа А. Каждый подтип вируса содержит одну конкретную комбинацию версий двух гликопротеинов, встроенных в оболочки вирусов из липидных мембран. Двумя определяющими подтип гликопротеинами являются гемагглютинин НА и нейраминидаза (ΝΑ). Существует семнадцать известных вариантов НА, обозначаемых как Н1-Н17 соответственно, и девять известных вариантов нейраминидазы, обозначаемых как Ν1-Ν9 соответственно. Каждый подтип вируса отличается номерами вариантов гемагглютинина и нейраминидазы соответственно. Например, вирус гриппа А подтипа Η3Ν2 является вирусом свиного гриппа, и подтип Η5Ν1 является вирусом птичьего гриппа.
Приблизительно от 10 до 20% населения США страдает от сезонного гриппа каждый год. Хотя большинство индивидуумов выздоравливают от гриппа за одну-две недели, у очень молодых индивидуумов, пожилых индивидуумов и индивидуумов с хроническими заболеваниями может развиваться постгриппозная пневмония и другие летальные осложнения. Возбудителем гриппа является вирус гриппа, ортомиксовирус, у которого посредством процесса рекомбинации и мутации сегментированного вирусного генома легко образуются новые штаммы.
ПК вирусов класса I является областью вирусных оболочечных белков слияния, участвующих в слиянии мембран вируса и клетки-хозяина, являющимся процессом, с помощью которого вирус, связавшийся с мембраной клетки-хозяина, нарушает целостность мембраны клетки-хозяина для впрыскивания генетического материала вируса в клетку-хозяина. Этот процесс включает слияние оболочки вируса и мембраны клетки-хозяина, опосредуемое вирусным белком слияния (например, гемагглютинином в случае вирусов гриппа), таким образом, подвергая внутреннюю часть клетки-хозяина воздействию внутренней части вируса. Как описано в патенте США № 7491793 и патенте США № 8222204 (Сапу и ^Икоп), указанных выше, относительно короткие пептиды, содержащие или состоящие из сегмента ПК, могут связываться с вирусным белком слияния и препятствовать конформационным изменениям, необходимым для осуществления слияния. Таким образом, такие пептиды предотвращают инфицирование клетокхозяев вирусов, несмотря на то, что вирусы все равно могут связываться с поверхностью мембраны клетки-хозяина. Таким образом, пептиды ПК ингибируют инфекционность вируса с помощью полностью иного механизма, чем общепринятые вакцинные способы лечения, как правило, включающие продукцию антител, предотвращающих связывание вируса с клеткой-хозяином, а не противодействие биохимическим явлениям, включающим механизм слияния вируса сам по себе.
Высоковирулентные штаммы вируса гриппа типа А могут приводить к эпидемиям и пандемиям. За
- 1 030004
последние годы, возник высоко патогенный штамм вируса птичьего гриппа А подтипа Η5Ν1, способный вызывать высокую смертность. Первоочередной является борьба с угрозой, которую представляет собой вирус гриппа для здравоохранения и в качестве потенциального средства для биотерроризма. Таким образом, существует постоянная потребность в разработке лекарственных композиций и способов контроля сезонного гриппа и усиливающейся угрозы пандемического гриппа и гриппа для военных целей. Пептидные конъюгаты, антитела, представленные в настоящем описании, направлены на решение этой проблемы.
Сущность изобретения
Иммуногенные пептидные конъюгаты, полученные из гемагглютинина вируса гриппа, представленные в настоящем описании, индуцируют специфичный терапевтический гуморальный ответ против вируса гриппа. Иммуногенный пептидный конъюгат, как представлено в настоящем описании, содержит пептид области инициации слияния (ТТК.) гемагглютинина (НА) или его вариант, конъюгированный с белком-носителем (например, иммуногенным белком-носителем) посредством линкерной группы. Пептид ΡΙΚ. НА состоит из не более чем 50 аминокислотных остатков и содержит сегмент белка гемагглютинина вируса гриппа 2, включающий аминокислотную последовательность δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 1 или вариант δΕΟ ГО ΝΟ: 1, имеющий по меньшей мере 50% идентичности последовательности по отношению к ней и отличающийся от δΕΟ ГО ΝΟ: 1 одной или несколькими заменами аминокислот, выбранными из группы, состоящей из УИ, У1Ь, У1А, У1О, У1Т, У18, У1М, Ε2Ό, Е2К, Ε2Κ, Ό3Ε, Т4О, Τ4δ, Т4р, Т4А, К5Р, К5М, Κ5Ι, К5У, К5Ь, К5А, КЬ, 16У, Ι6Α, Ι6Τ, Ι6δ, Ι6Ο, Ι6Ν, Ό7Ε, Ь81, Ь8У, Ь8А, \\'9¥, δ10Τ, δ10Ο, δ10Α, δ10Μ и Е14К. В некоторых вариантах осуществления сегмент белка гемагглютинина вируса гриппа 2 включает до 25 дополнительных аминокислотных остатков из белка гемагглютинина 2 вируса гриппа А подтипа, выбранного из группы, состоящей из Η1, Н2, Η3, Н4, Н5, Н6, Н7, Н8, Η9, Η10, Η11, Н12, Η13, Н14, Н15, Н16 и Н17. Дополнительные остатки являются смежными с δΕΟ ГО ΝΟ: 1 или ее вариантом в аминокислотной последовательности белка гемагглютинина 2 выбранного подтипа вируса гриппа А. Необязательно, пептид ΡΙΚ НА может включать одну или несколько пептидных последовательностей не из белка гемагглютинина 2 вируса гриппа А.
Иммуногенные пептидные конъюгаты, представленные в настоящем описании, применимы для лечения или профилактики инфекций гриппа и для индуцирования специфичных к вирусу гриппа терапевтических антител, противодействующих слиянию мембран вируса гриппа и клетки-хозяина. Пептидные конъюгаты можно составлять в фармацевтических композициях, применимых для лечения или профилактики широкого спектра инфекций гриппа. Иммуногенные пептидные конъюгаты, представленные в настоящем описании, можно применять для лечения или профилактики инфекции гриппа и для индуцирования специфичных к вирусу гриппа терапевтических антител, противодействующих слиянию вируса гриппа и клетки-хозяина. Пептидные конъюгаты можно составлять в фармацевтических композициях, применимых для лечения или профилактики инфекции гриппа в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем и, необязательно, включающих один или несколько адъювантов, эксципиентов и т.п.
В одном из вариантов осуществления пептид ΡΙΚ гемагглютинина из иммуногенного пептидного конъюгата, полученного из гемагглютинина вируса гриппа, состоит из δΕΟ ГО ΝΟ: 1 (остатков 84-99 δΕΟ ГО ΝΟ: 2, являющейся типичной последовательностью гемагглютинина 2 вируса гриппа А подтипа Η3) или ее варианта.
Часть белка-носителя любого из иммуногенных пептидных конъюгатов, представленных в настоящем описании, может являться любой молекулой белка или полипептида, предпочтительно, такой, которая может вызывать иммунную реакцию (например, продукцию антител) при введении индивидууму. Неограничивающие примеры таких полипептидов включают, например, КЕЮ гемоцианин Сопейо1ера8 сопейо1ера8 (ССИ), бычий сывороточный альбумин (ΒδΑ), катионизированный ΒδΑ, овальбумин, белок гемагглютинина вируса гриппа и т. п. Такие иммуногенные белки хорошо известны в этой области.
Другим аспектом изобретения является применение иммуногенных пептидных конъюгатов, представленных в настоящем описании, в способе лечения или профилактики инфекции гриппа. Способ включает введение пептидного конъюгата (например, в терапевтически эффективной дозе) индивидууму. Пептидные конъюгаты стимулируют иммунную систему индивидуума для продукции терапевтического антитела, специфически направленного против части пептида ΡΙΚ конъюгата. Этот терапевтический гуморальный ответ происходит несмотря на то, что пептид ΡΙΚ в отдельности (без белка-носителя) не вызывает какой-либо иммунный ответ при введении индивидууму. Иммуногенные пептидные конъюгаты можно включать в фармацевтическую композицию, при желании, в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.
Другим аспектом настоящего изобретения является выделенное терапевтическое антитело, способное ингибировать слияние связавшегося с клеткой вируса гриппа с мембраной клетки, с которой вирус связан. Предпочтительно терапевтическое антитело является человеческим, гуманизированным или химерным моноклональным антителом. Такие терапевтические антитела можно получать, например, выделяя антитело из сывороток пациентов, которых лечили иммуногенным пептидным конъюгатом, как представлено в настоящем описании, получая рекомбинантную версию антитела человека из людей, которых лечили (т.е. которым вводили) иммуногенным пептидным конъюгатом, или получая рекомби- 2 030004
нантную химерную или гуманизированную версию антитела из подходящего не относящегося к человеку животного-хозяина (например, кролика или козы), которого лечили (т.е. которому вводили) иммуногенный пептидный конъюгат.
Следующие неограничивающие варианты осуществления представлены в целях иллюстрирования конкретных аспектов и признаков настоящего изобретения.
Вариантом осуществления 1 является иммуногенный пептидный конъюгат, содержащий пептид области инициации слияния (ПК) гемагглютинина (НА) или его вариант, конъюгированный с белкомносителем (например, иммуногенным белком-носителем) посредством линкерной группы; где пептид ПК НА состоит из не более чем 50 аминокислотных остатков и содержит сегмент белка гемагглютинина 2 вируса гриппа, включающий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0: 1 или вариант 8Е0 ГО N0: 1, имеющий по меньшей мере 50% идентичности последовательности по отношению к ней и отличающийся от 8Е0 ГО N0: 1 одной или несколькими заменами аминокислот, выбранными из группы, состоящей из УН, У1Ь, У1А, У1О, У1Т, У18, У1М, Е2О, Е2К, Е2К, Ό3Ε, Т4О, Т48, Т4(), Т4А, К5Е, К5М, К51, К5У, К5Е, К5А, Ι6Ε, КУ, КА, КТ, 168, 16р, Ι6Ν, О7Е, Ь81, Е8У, Е8А, А9У, 810Т, 8100, 810А, 810М и Е14К.
Вариант осуществления 2 содержит или состоит из иммуногенного пептидного конъюгата по варианту осуществления 1, где сегмент белка гемагглютинина 2 вируса гриппа включает до 25 дополнительных аминокислотных остатков белка гемагглютинина 2 вируса гриппа А подтипа, выбранного из группы, состоящей из Н1, Н2, Н3, Н4, Н5, Н6, Н7, Н8, Н9, Н10, Н11, Н12, Н13, Н14, Н15, Н16 и Н17, где дополнительные остатки являются смежными с 8Е0 ГО N0: 1 или ее вариантом в аминокислотной последовательности белка гемагглютинина 2 выбранного подтипа вируса гриппа А.
Вариант осуществления 3 содержит или состоит из иммуногенного пептидного конъюгата по варианту осуществления 1 или варианту осуществления 2, где пептид ΕΙΚ НА включает одну или несколько пептидных последовательностей не из белка гемагглютинина 2 вируса гриппа А.
Вариант осуществления 4 содержит или состоит из иммуногенного пептидного конъюгата по любому из вариантов осуществления 1-3, где пептид ΕΙΚ гемагглютинина имеет аминокислотную последовательность, состоящую из 8Е() ГО N0: 1 или варианта 8Е() ГО N0: 1, имеющего по меньшей мере 50% идентичности последовательности по отношению к ней и отличающегося от 8Е0 ГО N0: 1 одной или несколькими заменами аминокислот, выбранными из группы, состоящей из УН, У1Ь, У1А, У1О, У1Т, У18, У1М, Е2О, Е2К, Е2К, О3Е, Т4О, Т48, Т4(), Т4А, К5Е, К5М, К5Ц К5У, К5Е, К5А, КЬ, КУ, 16А, КТ, Ι68, Ι6Ρ, Ι6Η О7Е, Ε8Ι, Е8У, Е8А, А9У, 810Т, 8100, 810А, 810М, А13Т и Е14К.
Вариант осуществления 5 содержит или состоит из пептидного конъюгата по любому из вариантов осуществления 1-4, где белок-носитель выбран из группы, состоящей из комплекса белков внешней мембраны №1зегпа тешпдШЙ1з (0МРС), белка столбнячного токсина, производного дифтерийного токсина СКМ197, бычьего сывороточного альбумина (В8А), катионизированного В8А, гемоцианина СопеНо1ераз еопеЬо1ераз (ССН), поверхностного антигена вируса гепатита В (НВУ) (НВзАд), корового антигена НВУ, гемоцианина морского блюдечка (КЕН), белка капсида ротавируса, белка Е1 вируса папилломы крупного рогатого скота (ВРУ), белка Е1 вируса папилломы человек (НРУ), овальбумина и полноразмерного белка гемагглютинина вируса гриппа (НА).
Вариант осуществления 6 содержит или состоит из пептидного конъюгата по одному из вариантов осуществления 1-5, где белок-носитель является полноразмерным белком гемагглютинина вируса гриппа.
Вариант осуществления 7 содержит или состоит из пептидного конъюгата по варианту осуществления 6, где полноразмерный белок гемагглютинина вируса гриппа является гемагглютинином вируса гриппа А подтипа, такого как, например, гемагглютинин, выбранный из группы, состоящей из Н1, Н2, Н3, Н4, Н5, Н6, Н7, Н8, Н9, Н10, Н11, Н12, Н13, Н14, Н15, Н16 и Н17.
Вариант осуществления 8 содержит или состоит из пептидного конъюгата по варианту осуществления 6, где полноразмерный белок гемагглютинина вируса гриппа является белком гемагглютинина вируса гриппа В.
Вариант осуществления 9 содержит или состоит из пептидного конъюгата по любому из вариантов осуществления 1-8, где линкерная группа содержит сульфидную связь (например, как в случае общепринятых способов конъюгации типа цистеин-малеинимид, представленных в настоящем описании).
Вариант осуществления 10 содержит или состоит из пептидного конъюгата по любому из вариантов осуществления 1-8, где линкерная группа является 4-^-сукцинимидометилциклогексан)-'1-карбонильной группой формулы (Ι)
- 3 030004
где остаток Су8 в формуле (I) соединяют с остатком сукцинимида через его сульфгидрильную группу и соединяют с Ν-концом пептида ΡΙΚ с помощью пептидной связи, необязательно, с использованием дополнительного спейсерного пептида из 1-5 остатков между Су8 и пептидом ΡΙΚ, и 1карбонильную группу на остатке циклогексила в формуле (I) соединяют с первичным амином на белкеносителе с помощью амидной связи.
Вариант осуществления 11 содержит или состоит из пептидного конъюгата по любому из вариантов осуществления 1-10, где пептид ΡΙΚ гемагглютинина имеет аминокислотную последовательность, состоящую из δΕφ ΙΌ ΝΟ: 1, конъюгированную с белком-носителем посредством линкерной группы.
Вариант осуществления 12 содержит или состоит из фармацевтической композиции для лечения или профилактики инфекции гриппа, содержащей иммуногенный пептидный конъюгат по любому из вариантов осуществления 1-11 в фармацевтически приемлемом носителе.
Вариант осуществления 13 содержит или состоит из способа лечения или профилактики инфекции гриппа, включающего введение терапевтически эффективного количества иммуногенного пептидного конъюгата по любому из вариантов осуществления 1-11 индивидууму, страдающему гриппом или имеющему риск заражения гриппом.
Вариант осуществления 14 содержит или состоит из способа индуцирования специфического терапевтического гуморального ответа у индивидуума, включающего введение индивидууму иммуногенного пептидного конъюгата по любому из вариантов осуществления 1-11.
Вариант осуществления 15 содержит или состоит из способа по варианту осуществления 14, где специфический терапевтический гуморальный ответ ингибирует слияние вируса гриппа (например, оболочки вируса) с мембраной клетки-хозяина.
Вариант осуществления 16 содержит или состоит из терапевтического моноклонального антитела, способного специфически связываться с областью ΡΙΚ белка гемагглютинина вируса гриппа, содержащего определяющие комплементарность области (СОК.) из антитела, продуцируемого в организме-хозяине после введения иммуногенного пептидного конъюгата по любому из вариантов осуществления 1-11, где антитело специфически связывается с областью ΡΙΚ белка гемагглютинина вируса гриппа.
Вариант осуществления 17 содержит или состоит из терапевтического моноклонального антитела по варианту осуществления 16, где терапевтическое моноклональное антитело является человеческим, гуманизированным или химерным моноклональным антителом.
Вариант осуществления 18 содержит или состоит из применения терапевтического моноклонального антитела по варианту осуществления 16 или варианту осуществления 17 для лечения или профилактики инфицирования индивидуума вирусом гриппа.
Вариант осуществления 19 содержит или состоит из применения иммуногенного пептидного конъюгата по любому из вариантов осуществления 1-11 для лечения или профилактики инфекции гриппа.
Вариант осуществления 20 содержит или состоит из применения иммуногенного пептидного конъюгата по любому из вариантов осуществления 1-11 для индуцирования специфического терапевтического гуморального ответа на вирус гриппа у индивидуума.
Обнаружено, что пептид гемагглютинина ΡΙΚ, имеющий аминокислотную последовательность, состоящую νΕΌΤΚΙΌΡ^δΥΝΑΕΡΡ, δΕφ ΙΌ ΝΟ: 1, обладает мощными противовирусными свойствами (см. патент США № 8222204). Иммуногенный пептидный конъюгат, содержащий тот же пептид ΡΙΚ гемагглютинина, конъюгированный с КЬН, вызывал у мышей, кроликов и коз продукцию антитела, специфически направленного против пептида ΡΙΚ гемагглютинина. Неожиданно обнаруживали, что это антитело препятствует процессу слияния оболочки вируса с мембраной клетки-хозяина, но не препятствует гемагглютинации в стандартном анализе значимым образом. Это отличается от механизма действия типичных антител против вируса гриппа, препятствующих конкретному физическому взаимодействию (например, связыванию) вируса с клеткой-хозяином.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 показаны шесть идентифицированных доменов белков слияния из шести семейств вирусов типа Ι, включая область инициации слияния (ΡΙΚ).
На фиг. 2 представлен график результатов конкурентного анализа связывания пептидов, в котором сравнивали свободный пептид ΡΙΚ и пептид ΡΙΚ, связанный с планшетом для ΕΌΙδΑ.
На фиг. 3 представлен график конкурентного связывания между гемагглютинином, связанным с планшетом для ΕΌΙδΑ, и свободным пептидом ΡΙΚ.
Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления
Иммуногенные пептидные конъюгаты, полученные из гемагглютинина вируса гриппа, представленные в настоящем описании, индуцируют специфический терапевтический гуморальный ответ против вируса гриппа. Иммуногенные пептидные конъюгаты состоят из сегмента из домена области инициации слияния (ΡΙΚ) белка гемагглютинина вируса гриппа (обозначаемого в настоящем описании как "пептид ΡΙΚ гемагглютинина" или "пептид ΡΙΚ"), конъюгированного с белком-носителем. Пептид ΡΙΚ гемагглютинина имеет аминокислотную последовательность, состоящую из δΕφ ΙΌ ΝΟ: 1 или варианта δΕφ ΙΌ ΝΟ: 1, имеющего по меньшей мере 50% идентичности последовательности по отношению к ней и отличающийся от δΕφ ΙΌ ΝΟ: 1 одной или несколькими заменами аминокислот, выбранными из группы, со- 4 030004
стоящей из VII, У1Ь, У1А, У1О, У1Т, У18, У1М, Ε2Ώ, Е2К, Е2К, Ώ3Ε, Т4О, Т48, Т49, Т4А, К5Р, К5М, К51, К5У, К5Б, К5А, 16Ь, 16У, Ι6Α, 16Т, 168, Ι69, Ι6Ν, Ώ7Ε, Ь81, Б8У, Б8А, Α9Υ, 810Т, 8100, 810А, 810М, А13Т и Е14К.
8ЕО ΙΌ ΝΟ: 1 является сегментом (т.е. остатками 84-99) ΡΙΚ гемагглютинина вируса гриппа А штамма подтипа Н3, имеющего аминокислотную последовательность 8ЕО ΙΌ ΝΟ: 2. Пептиды ΡΙΚ, являющиеся вариантами 8ЕО ГО ΝΟ: 1, отличаются от нее конкретными заменами, являющимися консервативными заменами или заменами соответствующими аминокислотными остатками из другого подтипа гемагглютинина (т.е. из Н1, Н2, Н4, Н5, Н6, Н7, Н9, Н10, Н11, Н12, Н13, Н15, Н16 или Н17). Пептиды, соответствующие 8ЕО ГО ΝΟ: 1 из этих других подтипов, представлены в табл. 1. Предпочтительно вариант идентичен или имеет высокую идентичность последовательности (например, 95% или более высокую идентичность последовательности, предпочтительно 98% или более высокую идентичность последовательности, более предпочтительно 100% идентичность последовательности) по отношению к 8ЕО ГО ΝΟ: 1.
Как применяют в настоящем описании, термин "консервативные замены" и его грамматические варианты относятся к наличию аминокислотного остатка в последовательности пептида, отличающегося, но принадлежащего к тому же классу аминокислот, что и остаток дикого типа (т.е. неполярным остатком заменяют неполярный остаток, ароматическим остатком заменяют ароматический остаток, полярным незаряженным остатком заменяют полярный незаряженный остаток, заряженным остатком заменяют заряженный остаток). Кроме того, консервативные замены могут включать остаток, имеющий значение межфазной гидрофобности того же знака и, как правило, аналогичного порядка, что и остаток дикого типа, который им заменяют.
Как применяют в настоящем описании, термин "неполярный остаток" относится к глицину, аланину, валину, лейцину, изолейцину и пролину; термин "ароматический остаток" относится к фенилаланину, тирозину, триптофану и гистидину (который также считают заряженной аминокислотой); термин "полярный незаряженный остаток" относится к серину, треонину, цистеину, метионину, аспарагину и глутамину; термин "заряженный остаток" относится к отрицательно заряженным аминокислотам аспарагиновой кислоте и глутаминовой кислоте, а также положительно заряженным аминокислотам лизину, аргинину и гистидину (который также считают ароматической аминокислотой).
Таблица 1
| Пептидная последовательность | Ιϋ последователь ности | Подтип гемагглютинина А | ||
| УЕОТКЮЪИЗУИАЕЪЪ | 5Е<2 | Ю ΝΟ: | 1 | НЗ, Н4 и Н14 |
| УООСЕЬОНлГТЕИАЕЬЬ | 5Е<2 | Ю ΝΟ: | 3 | Н1 |
| МЕОСЕЬОУИТЕИАЕЬЬ | 5Е<2 | Ю ΝΟ: | 4 | Н5 |
| ТНО5МТЕУИ5¥ИАЕЬЬ | 5Е<2 | Ю ΝΟ: | 5 | Н7 |
| νϋϋΟ I <2ϋ IΜΑΥΝΑΕ ЬЬ | 5Е<2 | Ю ΝΟ: | 6 | Н9 |
| МЕОСЕЬОУИТУИАЕЬЬ | 5Е<2 | Ю ΝΟ: | 7 | Н2 и Нб |
| ТКО31ТО1ИТ¥ИАЕЬЬ | 5Е<2 | Ю ΝΟ: | 8 | НЮ |
| ΙϋϋΑνΤϋΙΚ5ΥΝΑΚ1Α | 5Е<2 | Ю N0: | 9 | Н13 |
| ТКО5ЬТЕ1И5¥НАЕЬЬ | 5Е<2 | Ю N0: | 10 | Н15 |
| νϋ ΏΑνΤ ϋIИ5 ΥΝΑΚΥЬ | 5Е<2 | Ю N0: | 11 | Н16 |
| УООАЬЬО1И5¥НТЕЬЬ | 5Е<2 | Ю N0: | 12 | Н17 |
Все последовательности в табл. 1 имеют более 50% идентичности последовательности по отношению к 8ЕО ГО ΝΟ: 1, т.е. 8Е9 ГО ΝΟ: 3, 4, 6, 7 и 12 являются на 62,5% идентичными 8ЕО ГО ΝΟ: 1; и 8Е9 ГО ΝΟ: 5, 8, 9, 10 и 11 являются на 56,2% идентичными 8ЕО ГО ΝΟ: 1. Таким образом, очевидно, что подтипы гемагглютинина вируса гриппа высоко гомологичны в сегменте ΡΙΚ из 16 аминокислотных остатков, примером которого является 8ЕО ГО ΝΟ: 1. Замены в части пептида ΡΙΚ (8Е9 ГО ΝΟ: 1) иммуногенных пептидных конъюгатов, представленных в настоящем описании, получают, главным образом, из вариантов, обнаруженных в 8ЕО ГО ΝΟ: 3-12, представленных в табл. 1, а также распространенных консервативных замен для одного из остатков, обнаруживаемых в 8ЕО ГО ΝΟ: 1 и 3-12, таких как замены остатка валина лейцином, глицином, серином или аланином; замена остатка аспарагиновой кислоты остатком глутаминовой кислоты; замена остатка серина глицином или метионином и т.п.
Использование терминов в единственном числе и аналогичные ссылки в отношении описания изобретения (особенно в отношении следующей формулы изобретения) предназначены для включения
- 5 030004
единственного и множественного числа, если в настоящем описании не указано иначе или четко не противоречит контексту. Термины "содержащий", "имеющий" и "включающий" следует истолковывать как неограничивающие термины (т.е. они означают "включая, в качестве неограничивающих примеров"), если не указано иначе. Перечисление диапазонов значений в настоящем описании предназначено исключительно, чтобы служить способом краткого обозначения отдельно в отношении каждого отдельного значения, попадающего в диапазон, если в настоящем описании не указано иначе, и каждое отдельное значение включено в описание так, как если бы его отдельно упоминали в настоящем описании. Все способы, представленные в настоящем описании, можно осуществлять в любом подходящем порядке, если в настоящем описании не указано иначе или иначе четко не противоречит контексту. Использование любого и всех примеров или формулировок примеров (например, "такой как"), представленных в настоящем описании, предназначено исключительно для лучшего разъяснения изобретения и не представляет ограничение объема изобретения, если не указано иначе. Ни одну из формулировок в описании не следует истолковывать в качестве указывающей на любой незаявленный элемент как необходимый для практического осуществления изобретения.
Белки-носители, применимые в пептидных конъюгатах и способах, представленных в настоящем описании, включают любой белок, предпочтительно иммуногенный белок, который может вызывать продукцию антител при введении индивидууму. Такие белки-носители и способы конъюгации белковносителей с интересующим пептидом хорошо известны в этой области и их используют в получении так называемых "конъюгатных вакцин". Некоторые примеры белков-носителей, линкерных групп и способов конъюгации описывают в международной публикации РСТ № XVО 2012/065034, поданной как заявка № РСТ/ИЗ2011/060318, включенной в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. Некоторые неограничивающие примеры белков-носителей включают комплекс белков внешней мембраны Νβίδета тептщОбЬ (ОМРС), белок столбнячного токсина, производное дифтерийного токсина (СРМ 197), бычий сывороточный альбумин (В8Л), катионизированный В8Л, гемоцианин Соисйо1ера8 соисйо1ера8 (ССН), белки вируса гепатита В (НВУ) (например, поверхностный антиген (НВкАд) и коровый антиген НВУ), гемоцианин морского блюдечка (КЬН), белки капсида ротавируса, белок Ь1 вируса папилломы крупного рогатого скота (ВРУ Ь1), белок Ь1 вируса папилломы человека (НРУ Ь1; например, НРУ типа 6, 11 или 16), овальбумин и белки гемагглютинина вируса гриппа (НА), такие как белки НА из гемагглютинина А подтипов Н1-Н17. Типичные последовательности белков НА вируса гриппа включают Н1 (ЗЕО ГО ΝΟ: 13), Н2 (ЗЕО ГО ΝΟ: 14), Н3 (ЗЕО ГО N0: 15), Н5 (ЗЕО ГО N0: 16) и Н7 (ЗЕО ГО N0: 17). Выбор белка-носителя, способов соединения (конъюгации) и линкерной группы для использования в иммуногенных пептидных конъюгатах, представленных в настоящем описании, вполне укладываются в возможности специалиста в области синтеза белковых вакцин.
Белки-носители конъюгируют через реакционные центры на белках-носителях и интересующих пептидах с помощью линкерной группы. Нуклеофильные функциональные группы, применимые для конъюгации, хорошо известны в этой области (см., например, патент США № 5606030, включенный в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме). Например, в качестве функциональных групп для конъюгации можно использовать первичные аминогруппы, присутствующие на аминокислотном остатке, таком как эпсилон-аминогруппа лизина и альфа-аминогруппа Ν-концевых аминокислот белков. Часто желательным является преобразование одной или нескольких первичных аминогрупп белканосителя в тиолсодержащую группу (например, из остатка цистеина или гомоцистеина), электрофильную ненасыщенную группу, такую как малеинимидная группа, или галогенированную группу, такую как бромацетильная группа, для конъюгации с тиол-реактивными пептидами. Необязательно, первичную аминогруппу на пептиде ΡΙΚ. гемагглютинина или линкерном остатке, прикрепленном к пептиду, можно преобразовывать в тиолсодержащую группу для соединения с тиоловым (сульфгидрильным) остатком на белке-носителе, например, посредством дисульфидной связи. Пептиды ΡΙΚ гемагглютинина и белкиносители можно конъюгировать с использованием любых линкерных групп и способов конъюгации, известных в этой области. В некоторых вариантах осуществления конъюгацию можно осуществлять, например, с использованием сукцинимидил-4-[Н-малеинимидометил]циклогексан-1-карбоксилата (8МСС), сульфосукцинимидил-4-^-малеинимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (кЗМСС), 8-[8малеинимидокапроилокси]сульфосукцинимидного сложного эфира (кЕМСЗ), бис-диазобензидина (ВИВ), ^малеинимидобензоил-Ы-гидроксисукцинимидного сложного эфира (МВ8), глутаральдегида, 1этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (ЕИС1) или тиолактона Ν-ацетилгомоцистеина (ЫАНТ).
В способе с использованием 8МСС он поперечно сшивает ЗН-группу остатка цистеина с аминогруппой остатка лизина на белке-носителе. В способе с использованием ЗМСС сначала активируют белок-носитель посредством реакции ЗМСС с первичным амином (например, на остатке лизина белканосителя). Затем полученный активированный носитель отделяют от какого-либо избытка ЗМСС и побочных продуктов и добавляют цистеинсодержащий пептид. Тиоловая группа цистеина присоединяется по двойной связи остатка малеинимида ЗМСС-дериватизированного белка-носителя, таким образом, образуя ковалентную сульфидную связь для соединения носителя и пептида. Если пептид ΡΙΚ. гемагглютинина не включает остаток цистеина, то необходимо добавлять остаток цистеина к пептиду, предпочтительно, на Ν-конец или С-конец. Если эпитопная часть пептида ΡΙΚ. гемагглютинина содержит цистеин,
- 6 030004
или если в пептиде присутствуют несколько цистеиновых групп, то необходимо использовать другой способ конъюгации, при котором не модифицируют остатки цистеина. Т.к. связь между белкомносителем и пептидом не должна мешать эпитопной части пептида, добавленный остаток цистеина, необязательно, можно отделять от пептида ПК гемагглютинина посредством включения одного или нескольких аминокислотных остатков в качестве спейсера. Цистеин, спейсерные остатки и модифицированный 8МСС, прикрепленные к носителю, вместе составляют линкерную группу конъюгата пептида ИК гемагглютинина.
Другое простое соединение пептида с белком-носителем можно осуществлять с использованием карбодиимидного кросслинкера, такого как 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид гидрохлорид (ЕЭС), 1-циклогексил-2-(2-морфолиноэтил)карбодиимид мето-п-толуолсульфонат (СМС) и т.п., для ковалентного присоединения карбоксильных групп к первичным аминогруппам. Этот способ прост и обеспечивает относительно случайную ориентацию, делающую возможным образование антител против многих возможных эпитопов. Одним из недостатков является то, что присоединение ЕЭС может приводить к некоторой степени полимеризации. Это может снижать растворимость конъюгата, что может осложнять обработку материала.
Можно использовать другие сшивающие средства для конъюгации пептида НК с белком-носителем напрямую или посредством линкерной группы. Например, конъюгацию можно осуществлять с использованием изоцианатных сшивающих средств, таких как 2-морфолиноэтилизоцианид; тиолактон Νацетилгомоцистеина, который можно использовать для добавления тиоловой группы к белку-носителю, такого как присоединение ОМРС к малеинимид- или бромацетил-функционализированному пептиду; или любых других средств для присоединения гаптенов (потенциальных иммуногенов) к полипептидам и белкам, многие из которых хорошо известны в области белков и вакцин.
Неспецифические сшивающие средства и их применение хорошо известны в этой области. Примеры таких реагентов и их применение включают реакцию с глутаральдегидом; реакцию с Ν^τηπ-Ν'-(3диметиламинопропил)карбодиимидом с добавлением сукцинилированного носителя или без него; периодатное окисление гликозилированных заместителей с последующим присоединением к свободными аминогруппами белка-носителя в присутствие борогидрида натрия или цианоборогидрида натрия; периодатное окисление неацилированных концевых остатков серина и треонина, образующих концевые альдегиды, которые затем можно подвергать реакции с аминами или гидразидами, получая Шиффово основание или гидразон, который затем можно восстанавливать цианоборогидридом до вторичных аминов; диазотирование ароматических аминогрупп с последующим присоединением к остаткам тирозина боковой цепи белка; реакцию с изоцианатами или реакцию смешанных ангидридов. Линкеры можно дополнять и удлинять с помощью спейсерных групп, таких как дополнительные аминокислотные остатки, дигидразид адипиновой кислоты и т.п. Типичные спейсерные пептидные группы для использования в конъюгации пептида НК с белком-носителем включают отдельные аминокислоты (например, Су§) и короткие пептидные последовательности (т.е. короткие последовательности, не относящиеся к пептиду НК гемагглютинина), прикрепленные к пептиду НК, например, пептид, содержащий лизин, такой как последовательность Над-метки ΌΥΚΌΌΌΌΚ (5ЕО ГО N0: 18), пептид, содержащий цистеин, и т.п. Некоторые предпочтительные линкерные группы содержат сульфидную связь (например, как в 8МСС и родственных способах присоединения). Некоторые предпочтительные линкерные группы включают 4-(Νсукцинимидометилциклогексан)-1-карбонильные группы формулы (I)
в которой остаток Су§ в формуле (I) соединяют сукцинимидным остатком через его сульфгидрильную боковую цепь и соединяют Ν-конец пептида НК посредством пептидной связи. Необязательно, можно включать дополнительный спейсерный пептид из 1-5 аминокислотных остатков между Су§ и пептидом НК. 1-Карбонильную группу на циклогексильном остатке формулы (I) соединяют с первичным амином на белке-носителе с помощью амидной связи.
В некоторых вариантах осуществления пептидные конъюгаты включают один пептид ПК гемагглютинина, прикрепленный к белку-носителю, в то время как в других вариантах осуществления к белкуносителю можно прикреплять два или более пептида ПК гемагглютинина.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к терапевтическому моноклональному антителу, специфичному (т.е. способному специфически и избирательно связываться) к части пептида ПК гемагглютинина иммуногенных пептидных конъюгатов, представленных в настоящем описании, и связывающемуся с НК НА2 вируса гриппа. Такие терапевтические моноклональные антитела содержат определяющие комплементарность области (СОК), полученные из антитела, специфически связывающегося с частью НК иммуногенного пептидного конъюгата, как представлено в настоящем описании. Терапевтические антитела могут являться антителами человека (например, выделенными из сыворотки индиви- 7 030004
дуума, подвергнутого воздействию пептидного конъюгата), не принадлежащим человеку антителом (например, выделенным из не относящегося к человеку организма, такого как мышь, крыса, кролик, коза или другой подходящий организм, подвергнутый воздействию пептидного конъюгата), а также химерными и гуманизированными версиями таких не принадлежащих человеку антител.
При введении (например, в терапевтически эффективной дозе) индивидууму, подвергнутому воздействию вируса гриппа, терапевтические моноклональные антитела ингибируют слияние вируса гриппа с мембраной клетки-хозяина и, таким образом, предотвращают инфицирование клетки-хозяина вирусом гриппа. Этого ингибирования достигают посредством связывания антитела с областью ИК. белка НА вируса гриппа. Таким образом, терапевтические моноклональные антитела, представленные в настоящем описании, обладают терапевтическим механизмом, тем же или очень схожим с частью пептида ИК гемагглютинина иммуногенного пептидного конъюгата (см. обсуждение терапевтического механизма пептидов ИК в патенте США № 8222204).
Как применяют в настоящем описании, термин "терапевтически эффективная доза" и его грамматические варианты относятся к такому количеству иммуногенного пептидного конъюгата, которое при введении индивидууму вызывает специфичный терапевтический гуморальный ответ против вируса гриппа, или количеству терапевтического антитела, достаточному для профилактики или обеспечения клинического снижения инфекции гриппа. Доза и количество доз (например, однократная или многократная доза), вводимых индивидууму, будут варьироваться в зависимости от множества факторов, включая путь введения, состояние и характеристики пациента (пол, возраст, масса тела, состояние здоровья, размер), степень симптомов, одновременное лечение, периодичность лечения и желаемый эффект, концентрация конъюгата или антитела в его вводимой форме и т.п. Коррекция и манипуляция с диапазонами доз, а также способы определения терапевтической эффективности композиции у индивидуума ίη νίΐτο и ίη νΐνο вполне укладываются в способности специалистов в области медицины. В качестве примера, можно использовать дозу в диапазоне приблизительно от 1 до 100 мл раствора, содержащего пептидный конъюгат или терапевтическое антитело в фармацевтически приемлемом носителе. Пептидный конъюгат или терапевтическое антитело будут присутствовать в растворе в концентрации в диапазоне от приблизительно 0,01 мкг/мл до приблизительно 10 мг/мл. Пептид или антитело можно вводить парентерально (например, посредством внутривенной, интраперитонеальной, подкожной или внутримышечной инъекции или инфузии) или трансмукозально (например, посредством ингаляции аэрозольной жидкой или порошковой композиции).
Специфичность связывания и механизм действия терапевтических антител, представленных в настоящем описании, в корне отличаются от антител, образующихся в ответ на вакцинацию общепринятыми вакцинами против гриппа, как правило, противодействующих физическому взаимодействию вируса с клеткой-хозяином и, как правило, являющихся штаммоспецифичными, что подчеркивает необходимость ежегодного изменения состава сезонной вакцины для соответствия циркулирующим штаммам вируса гриппа. В отличие от этого, терапевтические антитела, представленные в настоящем описании, неожиданно противодействуют процессу слияния вируса и обладают обширной реакционной способностью против различных штаммов вируса гриппа (включая вирусы гриппа А и В).
Предпочтительно терапевтическое моноклональное антитело является человеческим, гуманизированным или химерным моноклональным антителом. Способы получения моноклональных антител хорошо известны в этой области, как и коммерческие предприятия, рутинно создающие моноклональные антитела из выделенных природных антител. Химерные и гуманизированные моноклональные антитела и способы получения таких антител также хорошо известны в этой области (см., например, патенты США № 5824307; 6800738; 7070775; 7087409; 7456260 и 7807161; содержание каждого из которых включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме).
Химеризация включает замену частей не принадлежащего человеку антитела соответствующими частями из антитела человека (например, константной области). Это осуществляют для предотвращения атаки иммунной системы человека на не принадлежащие человеку антитела, как на чужеродные белки. Как правило, в химерном антителе сохраняют СЭК и/или целую вариабельную область не принадлежащего человеку антитела и заменяют не принадлежащие человеку константные домены константными доменами человека. Таким образом, химерное антитело сохраняет антигенспецифичность не принадлежащего человеку антитела, но отличается сниженным уровнем нежелательных иммунных реакций (например, аллергических реакций) против антитела.
Гуманизированные антитела схожи с химерными антителами, за исключением того, что гуманизированные антитела, как правило, включают меньше не принадлежащих человеку черт. Этого можно достигать, например, модифицируя последовательность вариабельной области химерного антитела, чтобы она лучше отражала характеристики антитела человека, например, модифицируя последовательности между СОК или другими частями не принадлежащих человеку последовательностей в антителе. Не все терапевтические моноклональные антитела необходимо гуманизировать, так как некоторые терапевтические воздействия могут иметь достаточно небольшую длительность, чтобы делать аллергические побочные эффекты менее вероятными.
Также можно использовать полностью человеческие антитела. Такие антитела человека могут яв- 8 030004
ляться, например, генетически сконструированными антителами, например, антителами, в которых СГОР имеют человеческое происхождение, но которые имеют структуры человеческого происхождения, отличающиеся в одном или нескольких аспектах от продуцирующегося в природе антитела человека (т.е. антитела, продуцируемого человеком, которого лечили иммуногенным пептидным конъюгатом); или антитела человека могут являться клонами природных антител, полученных из сыворотки человека, которого лечили пептидным конъюгатом.
Другой аспект относится к фармацевтическим композициям, содержащим иммуногенный пептидный конъюгат или антитело, как представлено в настоящем описании, и которые можно применять для лечения или профилактики инфекции гриппа. В конкретных предпочтительных вариантах осуществления эта композиция включает иммуногенный пептидный конъюгат или антитело в фармацевтически приемлемом наполнителе или носителе, подходящем для доставки пептида, аналога, производного или антитела индивидууму, например, с помощью парентерального или энтерального введения, предпочтительно, посредством инъекции (например, предпочтительно, посредством внутривенной, интраперитонеальной, подкожной или внутримышечной инъекции), или посредством назального введения (например, с помощью аэрозоля). Наполнители или носители, подходящие для доставки активного ингредиента, хорошо известны в этой области и включают физиологический раствор, забуференный физиологический раствор и т.п., предпочтительно, при физиологическом рН (например, рН приблизительно от 6,5 до 7,4). Носитель также может включать другие эксципиенты, такие как поверхностно-активные вещества, консерванты, дисперсанты, дилюенты, стабилизаторы и т.п., хорошо известные в области фармацевтики. Фармацевтическую композицию можно применять как часть способа лечения или профилактики инфекции гриппа посредством введения индивидууму терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции. Носители для пептидных конъюгатов и антител могут являться твердыми или жидкими, выбор которых определяется желаемым способом введения.
Следующие неограничивающие примеры представлены для дополнительного иллюстрирования конкретных аспектов и черт иммуногенных пептидных конъюгатов и способов, представленных в настоящем описании.
Пример 1. Получение конъюгата пептид ΡΙΚ гемагглютинина-КЬН.
Пептид ΡΙΚ 8ЕО ГО N0: 1 синтезировали с добавлением Ν-концевого линкерного остатка Сук; т.е. для получения пептида 8Е0 ГО N0: 19, который затем конъюгировали с КЬН с использованием способа §МСС. В кратком изложении, белок-носитель КЬН сначала активировали посредством реакции §МСС с одной или несколькими первичными аминогруппами (например, на остатке лизина белка-носителя). Затем полученный активированный носитель отделяли от любого избытка 8МСС и побочных продуктов. Затем проводили реакцию цистеин-дериватизированного пептида ΡΙΚ с активированным КЬН; сульфгидрильную (тиольную) группу цистеина добавляют по двойной связи остатка малеинимида 8МССдериватизированного белка-носителя, таким образом, получая ковалентную сульфидную связь. Затем выделяли полученный конъюгат пептид ΡΙΚ-КЬН.
Пример 2. Получение моноклонального антитела мыши против пептида ΡΙΚ.
Пяти мышам Ва1Ь/С инъецировали конъюгат, полученный по примеру 1. В первой инъекции использовали конъюгат пептид ΡΙΚ-КЬН, смешанный с полным адъювантом Фрейнда, в день 0. В дни 21, 35, 49 и 63 мышам инъецировали конъюгат пептид ΡΙΚ-КЬН в неполном адъюванте Фрейнда. Образцы сыворотки собирали из мышей в дни 45, 59 и 73 и тестировали на наличие антител против пептида ΡΙΚ с использованием способа ЕЫ8А с пептидом ΡΙΚ (8Е0 ГО N0: 1), пассивно связанного с лунками 96луночных пластиковых планшетов. Трех мышей с наиболее высоким титром антител против ΡΙΚ умерщвляли и собирали селезенки. Используя стандартные способы, собирали спленоциты и подвергали слиянию с клетками кр2/0, с помощью ЕЫ8А идентифицировали гибридомы, продуцирующие антитела против ΡΙΚ, и субклонировали их с помощью предельного разведения. Идентифицировали несколько клонов и один из них, обозначенный как МАР3-2, использовали для дальнейшего анализа.
Пример 3. Получение терапевтического антитела против пептида ΡΙΚ у коз.
Козе инъецировали конъюгат, полученный по примеру 1. Осуществляли первую инъекцию 500 мкг конъюгата пептид ΡΙΚ-КЬН в полном адъюванте Фрейнда. Последующие инъекции с двухнедельными интервалами осуществляли с использованием доз 250 мкг конъюгата в неполном адъюванте Фрейнда. Всего после трех инъекций получали образец сыворотки на неделе 5 после первой инъекции.
Обнаруживали, что образец сыворотки содержит детектируемый титр антител к пептиду ΡΙΚ при тестировании с помощью ЕЫ8А в формате планшета.
Козе еще раз инъецировали 250 мкг пептида ΡΙΚ-КЬН и получали образцы сыворотки на неделях 7 и 8. Образцы сыворотки на неделях 7 и 8 титровали на их реакционную способность в отношении пептида ΡΙΚ (8Е0 ГО N0: 1) с использованием анализа ЕЫ8А в формате планшета. Планшеты покрывали неконъюгированным пептидом ΡΙΚ и обнаруживали, что антитела в образцах сыворотки специфически связываются с покрытым планшетом.
Пример 4. Получение терапевтического антитела против пептида ΡΙΚ у кроликов.
Двум кроликам инъецировали конъюгат, полученный по примеру 1. Осуществляли первую инъекцию 200 мкг конъюгата пептид ΡΙΚ-КЬН в полном адъюванте Фрейнда. Последующие инъекции с двух- 9 030004
недельными интервалами осуществляли с использованием доз 100 мкг конъюгата в неполном адъюванте Фрейнда. Всего после трех инъекций получали образцы сыворотки из каждого животного на неделе 5 после первой инъекции. Обнаруживали, что образцы сыворотки содержат детектируемый титр антител к пептиду ΡΙΚ. при тестировании с помощью ЕЫ§Л в формате планшета.
Кроликам делали еще одну инъекцию и собирали образцы сыворотки на неделях 7 и 8. Образцы сыворотки на неделях 7 и 8 титровали на их реакционную способность в отношении пептида ΡΙΚ с использованием анализа ЕЬРЗЛ в формате планшета. Планшеты покрывали неконъюгированным пептидом ΡΙΚ. и обнаруживали, что антитела в образцах сыворотки специфически связываются с покрытым планшетом. Выделяли антитело из образца сыворотки посредством связывания с пептидом ΡΙΚ, прикрепленным к твердой подложке для хроматографии. Антитело высвобождалось при низком рН (т.е. рН приблизительно 2,68).
Обнаруживали, что выделенное антитело является специфичным к пептиду ΡΙΚ, как общепринято определяют по конкуренции между связанным с планшетом пептидом ΡΙΚ и свободным пептидом ΡΙΚ в растворе. Для демонстрации специфичности лунки 96-луночного планшета для иммунологических анализов покрывали пептидом ΡΙΚ, растворенным в карбонат-бикарбонатном буфере. Несвязавшиеся заряженные участки на пластике блокировали забуференной суспензией обезжиренного сухого молока/детергента. Очищенное антитело кролика против пептида ΡΙΚ. соединяли с биотином. Затем аликвоты приблизительно 0,1 мл раствора биотинилированного антитела нейтрализовали серийными разведениями пептида ΡΙΚ. в течение приблизительно 45 минут перед добавлением на планшет. После дальнейшей инкубации лунки промывали забуференным физиологическим раствором, содержащим детергент. Определяли связавшееся антитело против ΡΙΚ. посредством инкубации с конъюгатом стрептавидин-пероксидаза хрена с последующей промывкой и нанесением колориметрического реагента 3,3',5,5'тетраметилбензидина. На фиг. 2 представлен график конкуренции за связывание между связанным с планшетом и свободным пептидом ΡΙΚ.
Пример 5. Связывание моноклонального антитела мыши широкого спектра.
Обнаруживали, что выделенное моноклональное антитело мышиного происхождения против пептида ΡΙΚ из примера 2 (ΜΑΡ3-2) распознает и специфически связывается с различными подтипами гемагглютинина (НА), как общепринято определяют по конкуренции с антигеном пептидом ΡΙΚ. Для демонстрации специфичности лунки 96-луночного планшета для иммунологических анализов покрывали различными подтипами коммерчески доступного гемагглютинина (НА: штамм ΗΙ А/СаШогта/04/2009 (Η1Ν1) рбш09; штамм Н3 А/игидиау/716/07 (Η3Ν2); штамм Н3 ΑΛνί5θοη5ίη/67/2005 (Η3Ν2); штамм Н5 А/Ьаг-Ьеабеб доохс/ОтДинЯА/Ш (Ν^Ν^), растворенного в карбонат-бикарбонатном буфере. Несвязавшиеся заряженные участки на пластике блокировали забуференной суспензией обезжиренного сухого молока/детергента. Очищенное антитело ΜΑΡ3-2 соединяли с биотином φίη-ΜΑΡ3-2). Затем аликвоты приблизительно 0,1 мл раствора антитела нейтрализовали серийными разведениями пептида ΡΙΚ. в течение приблизительно 45 минут перед добавлением на покрытый НА планшет. После дальнейшей инкубации лунки промывали забуференным физиологическим раствором, содержащим детергент. Определяли связавшееся антитело против ΡΙΚ посредством инкубации с конъюгатом стрептавидин-пероксидаза хрена с последующей промывкой и нанесением колориметрического реагента 3,3',5,5'-тетраметилбензидина. На фиг. 3 представлен график конкуренции за связывания между НА, связанным с планшетом для ЕЫ8А, и свободным пептидом ΡΙΚ, на котором снова продемонстрирована специфичность антитела против пептида ΡΙΚ к антигену ΡΙΚ.
Пример 6. Оценка терапевтического антитела против пептида ΡΙΚ против вирусов гриппа.
Клетки и вирусы. Для всех экспериментов использовали клетки Мадин-Дарби почек собак (МИСК). Клетки поддерживали и выращивали в полной модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (сИМЕМ), дополненной раствором пенициллина/стрептомицина, раствором бикарбоната натрия, раствором не являющихся незаменимыми аминокислот и термоинактивированной эмбриональной телячьей сывороткой. Вирусы гриппа, включенные в табл. 2, использовали для всех исследований инфицирования/связывания антитела. Все вирусы выращивали в 9-дневных оплодотворенных куриных яйцах с использованием стандартных способов и очищали посредством центрифугирования из аллантоисной жидкости. Все инфицирование осуществляли при множественности заражения 5,0.
- 10 030004
Таблица 2
Вирусы гриппа А и В, использованные в исследованиях связывания антитела против ΡΙΚ
| Вирус | Подтип | Описание и комментарии |
| А/СаИ£огп1а/04/2004 | Η3Ν2 | Сезонный |
| А/Нопд Копд/2369/2009 | Η1Ν1 | Пандемический; резистентный к осельтамивир фосфату |
| Α/ΡΗ/8/1934-Η5Ν1 | Η5Ν1 | Реассортантный вирус, содержащий Η5Ν1 из А/УФеФпат/12 03/2 0 04 |
| В/ЗПапдПа1/362/2002 | В | Сезонный |
Антитела и реагенты. Сыворотку с антителом козы против пептида ΡΙΚ из примера 3 поддерживали при 4°С до использования в исследованиях связывания. Исследования связывания осуществляли с использованием антитела, разбавленного 1:500 в фосфатно-солевом буфере (РВЗ), дополненном 1% бычьим сывороточным альбумином. В качестве контроля инфицирования вирусом гриппа А или В осуществляли окрашивание дублирующих культур с использованием моноклонального антитела мыши, индуцированного против нуклеопротеина вируса гриппа А или вируса гриппа В (ΝΡ) (Зап1а Сти/ Вю1есйпо1о§у), в разведении 1:1000 в РВЗ/ВЗА. Для визуализации связавшегося первичного антитела использовали вторичные антитела (против козы или против мыши), конъюгированные с пероксидазой хрена (ИКР) или АЕЕХА 488 (Мо1еси1аг РгоЬез).
Протокол инфицирования МЭСК и связывания антитела. Клетки МЭСК выращивали до конфлюэнтности 90% в слайд-камерах с использованием стандартных способов. Для инфицирования вирусом удаляли среды и каждый вирус добавляли в соответствующую камеру в объеме 200 мкл на один час при 37°С во влажной камере с СО2. После инкубации несвязавшийся вирус удаляли отсасыванием с промывкой и заменяли среды бессывороточной сЭМЕМ, дополненной трипсином ТРСК (АоПИтШоп СйетюаВ, иЗА). Инфицированные клетки МЭСК инкубировали при 35°С/5% СО2 в течение 24 ч, чтобы сделать возможной репликацию вируса. Для исследований связывания антитела удаляли среды из каждой камеры и клетки фиксировали 4% параформальдегидом (в РВЗ) в течение 3 0 мин при 4°С. После промывки клетки пермеабилизовали и остаточные альдегиды блокировали посредством инкубации с РВЗ + 20 мМ глицин/0,01% поверхностно-активное вещество ΤΚΙΤΟΝ Х-100 при комнатной температуре в течение двадцати минут. После промывки в камеры добавляли сыворотку козы против ΡΙΚ (1:500 в РВЗ + 1% ВЗА) на 3 ч при комнатной температуре. Несвязавшееся антитело удаляли промывкой в РВЗ. Визуализацию связавшегося антитела против пептида ΡΙΚ осуществляли посредством инкубации в течение 30 мин с вторичным антителом (против козы), конъюгированным с АЕЕХА 488 или пероксидазой хрена для флуоресцентной или световой микроскопии. После удаления несвязавшегося вторичного антитела посредством промывки (РВЗ/ВЗА) камеры, обработанные конъюгатом с НКР, проявляли добавлением субстрата 3-амино-9-этилкарбазола (АЕС) (Уес1ог 1аЬз, иЗА) по инструкциям производителя. Камеры с конъюгатом с АЕЕХА 488 собирали с использованием водных заливочных сред УЕСТАЗНШЕЭ (Уес1ог 1аЬз, иЗА), дополненных контрастным красителем йодидом пропидия, и запаивали камеры лаком для ногтей после добавления покровного стекла.
Микроскопическая оценка связывания антитела. Слайд-камеры оценивали с помощью световой микроскопии с использованием светового микроскопа ЕУОЗ с возможностью получения цифровых изображений (АМС 1пз1гитеп18, иЗА). Типичные изображения получали с использованием программного обеспечения устройства и сохраняли как файлы изображения в теговом формате (ΤΙΡ). Флуоресцентно меченые (АЕЕХА 488) окрашенные камеры исследовали с помощью лазерного сканирующего конфокального микроскопа 7е155 ЕЗМ 700 (1епа Сегтапу) с использованием линий излучения лазера 488 нм и 455 нм для визуализации зеленой и красной флуоресценции соответственно. Для сохранения типичных изображений в виде файлов изображения в теговом формате (ΤΙΡ) использовали программное обеспечение ЕЗМ.
Видимые изображения получали для инфицированных клеток перед фиксацией и связывания антитела. Цитопатические эффекты вирусной инфекции через 24 ч после инфицирования наблюдали в культурах клеток МЭСК, инфицированных А/Нопд Копд/2369/2009, А/РК/8/34 (Η5Ν1) и
В/Зйапдйа1/362/2002. Вирус гриппа А/Са1йогп1а/04/2004 не индуцировал СРЕ в этот момент времени после инфицирования.
Видимо (АЕС) и флуоресцентно (А1еха488) окрашенные изображения антитела против пептида ΡΙΚ или антитела против белка нуклеокапсида (№) вируса гриппа (А или В) оценивали визуально. Для всех исследуемых вирусов наблюдали положительное окрашивание для антител против NΡ и ΡΙΚ с наблюдаемым диапазоном реакционной способности. В обоих условиях визуализации наблюдали более диффузное окрашивание Н5-экспрессирующих клеток (А/РК/8/1934 ιΐ Ι5Ν1), чем клеток, экспрессирующих Н1, Н3 или инфицированные вирусом гриппа В. В таблице 3 представлено краткое изложение наблюдаемых свойств связывания. Количеством символов "+" в табл. 3 указана степень связывания антитела с
- 11 030004
клетками, инфицированными указанными вирусами; большим количеством символов "+" указана большая степень связывания.
Таблица 3
Краткое изложение связывания антитела
| Вирус | Подтип | Описание | ΕΊΕ МАЪ | ΝΡ „ , Комментарии МАЪ |
| А/ СаИ£огп1а/ 04/2004 | Η3Ν2 | Сезонный Пандемический; | +++ | +++ |
| А/Нопд Копд/2369/2009 | Η1Ν1 | резистентный к осельтамивир фосфату Реассортантный вирус, | +++ | + |
| Α/ΡΚ/8/1934-Η5Ν1 | Η5Ν1 | содержащий Η5Ν1 из А/У1е£пат/1203/ 2004 | +++ | ++++ |
| В/ЗПапдПат/ 362/2002 | В | Сезонный | + | ++ |
В совокупности, эти результаты свидетельствуют о широкой специфичности связывания антител, индуцированных против пептида ΡΙΚ 5ЕЦ ГО N0: 1, в отношении вирусов гриппа А и В. Эта широта может являться результатом высокой гомологии белков гемагглютининов различных подтипов в области, из которой получают пептид ΡΙΚ. Связывание контрольного антитела, распознающего нуклеопротеин (ΝΡ) вируса гриппа, подтверждало, что клетки МЭСК инфицировали каждым вирусом, что подтверждало специфичность антитела против пептида ΡΙΚ к вирусу гриппа.
В заключение, введение пептидного конъюгата, состоящего из пептида ΡΙΚ гемагглютинина 5ЕЦ ГО N0: 1, конъюгированного с КЬН, кроликам, мышам и козам стимулировало продукцию животными антител против пептида ΡΙΚ. В тестах с использованием вирусов гриппа А (Н1, Н3 и Н5) и В неожиданно обнаруживали, что сыворотки из этих животных связывались с самим пептидом ΡΙΚ, связывались с клетками, подвергнутыми воздействию вируса, и ингибировали инфекционность вируса. Антитела реагировали с НА на поверхности подвергнутых воздействию клеток, что определяли с использованием видимых и флуоресцентных способов. Сыворотки от индивидуумов, вакцинированных современной вакциной против гриппа, вызывали устойчивый ответ против НА, но неожиданно оказалось, что в них не продуцируются антитела против пептида ΡΙΚ 5ЕЦ ГО N0: 1.
В настоящем описании представлены предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения, включая лучший способ осуществления изобретения, известный авторам настоящего изобретения. Варианты этих предпочтительных вариантов осуществления могут стать очевидными специалистам в этой области после прочтения изложенного выше описания. Авторы настоящего изобретения ожидают, что специалисты в этой области будут при необходимости применять такие варианты, и авторы настоящего изобретения предполагают, что изобретение будут осуществлять на практике иначе, чем конкретно представлено в настоящем описании. Таким образом, настоящее изобретение включает все модификации и эквиваленты объекта изобретения, изложенного в формуле изобретения в соответствии с действующим законодательством. Кроме того, любая комбинация описанных выше элементов во всех их возможных вариантах включена в изобретение, если в настоящем описании не указано иначе или четко не противоречит контексту. Каждая ссылка, процитированная в настоящем описании, включая патенты США и непатентные источники США, опубликованные патентные заявки, журнальные статьи, книги, главы книг и любые другие документы США и не из США, упомянутые в настоящем описании, таким образом, включена в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме, включая все ее подробности, до той степени, как если бы она была включена в отдельности.
- 12 030004
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ΟΑΚΚΥ, КоЬегЬ Р.
И1ЬЗОЫ, Киззе11 В.
<120> ИММУНОГЕННЫЙ ПЕПТИДНЫЙ КОНЪЮГАТ И СПОСОБ ИНДУЦИРОВАНИЯ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО ГУМОРАЛЬНОГО ОТВЕТА ПРОТИВ ВИРУСА ГРИППА С ЕГО ПРИМЕНЕНИЕМ
<130> Ти-271.5
<160> 19
<170> РазС5Е12 для ЬЬпЬоиз УегзЧоп 4.0
<210> 1
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Вирус гриппа А
<220>
<223> Остатки 84-99 гемагглютинина 2 вируса гриппа А/Н3
| <400> 1 | |||
| Уа1 О1и Азр | ТЬг Ьуз | 11е Азр Ьеи Тгр Зег | Туг Азп А1а О1и Ьеи Ьеи |
| 1 | 5 | 10 | 15 |
| <210> | 2 |
| <211> | 222 |
| <212> | БЕЛОК |
| <213> | Вирус гриппа А |
| <220> | |
| <223> | Гемагглютинин 2 вируса гриппа А/Н3 |
<400> 2
| О1у | Ьеи | РЬе | О1у | А1а | 11е | А1а | О1у | РЬе | 11е | О1и | О1у | О1у | Тгр | О1п | О1у |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| МеЬ | Уа1 | Азр | О1у | Тгр | Туг | О1у | Туг | НЧз | НЧз | Зег | Азп | Азр | О1п | О1у | Зег |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| О1у | Туг | А1а | А1а | Азр | Ьуз | О1и | Зег | ТЬг | О1п | Ьуз | А1а | РЬе | Азр | О1у | 11е |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| ТЬг | Азп | Ьуз | Уа1 | Азп | Зег | Уа1 | 11е | О1и | Ьуз | МеЬ | Азп | ТЬг | О1п | РЬе | О1и |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| А1а | Уа1 | О1у | Ьуз | О1и | РЬе | Зег | Азп | Ьеи | О1и | Агд | Агд | Ьеи | О1и | Азп | Ьеи |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Азп | Ьуз | Ьуз | МеЬ | О1и | Азр | О1у | РЬе | Ьеи | Азр | Уа1 | Тгр | ТЬг | Туг | Азп | А1а |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| О1и | Ьеи | Ьеи | Уа1 | Ьеи | МеЬ | О1и | Азп | О1и | Агд | ТЬг | Ьеи | Азр | РЬе | НЧз | Азр |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Зег | Азп | Уа1 | Ьуз | Азп | Ьеи | Туг | Азр | Ьуз | Уа1 | Агд | МеЬ | О1п | Ьеи | Агд | Азр |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Азп | Уа1 | Ьуз | О1и | Ьеи | О1у | Азп | О1у | Суз | РЬе | О1и | РЬе | Туг | НЧз | Ьуз | Суз |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Азр | Азр | О1и | Суз | МеЬ | Азп | Зег | Уа1 | Ьуз | Азп | О1у | ТЬг | Туг | Азр | Туг | Рго |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Ьуз | Туг | О1и | О1и | О1и | Зег | Ьуз | Ьеи | Азп | Агд | Азп | О1и | 11е | Ьуз | О1у | Уа1 |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Ьуз | Ьеи | Зег | Зег | МеЬ | О1у | Уа1 | Туг | О1п | 11е | Ьеи | А1а | 11е | Туг | А1а | ТЬг |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Уа1 | А1а | О1у | Зег | Ьеи | Зег | Ьеи | А1а | 11е | МеЬ | МеЬ | А1а | О1у | 11е | Зег | РЬе |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Тгр | МеЬ | Суз | Зег | Азп | О1у | Зег | Ьеи | О1п | Суз | Агд | 11е | Суз | 11е |
- 13 030004
210
215
220
| <210> | 3 | ||||
| <211> | 16 | ||||
| <212> | БЕЛОК | ||||
| <213> | Вирус гриппа А | ||||
| <220> | |||||
| <223> | Остатки 84-99 | гемагглютинина 2 вируса | |||
| <400> | 3 | ||||
| Уа1 Азр Азр О1у РНе | Ьеи | Азр | 11е | Тгр ТНг Туг | |
| 1 | 5 | 10 | |||
| <210> | 4 | ||||
| <211> | 16 | ||||
| <212> | БЕЛОК | ||||
| <213> | Вирус гриппа А | ||||
| <220> | |||||
| <223> | Остатки 84-99 | гемагглютинина 2 вируса | |||
| <400> | 4 | ||||
| МеЬ О1и Азр О1у РНе | Ьеи | Азр | Уа1 | Тгр ТНг Туг | |
| 1 | 5 | 10 | |||
| <210> | 5 | ||||
| <211> | 16 | ||||
| <212> | БЕЛОК | ||||
| <213> | Вирус гриппа А | ||||
| <220> | |||||
| <223> | Остатки 84-99 | гемагглютинина 2 вируса | |||
| <400> | 5 | ||||
| ТНг Агд Азр А1а МеЬ | ТНг | О1и | Уа1 | Тгр Бег Туг | |
| 1 | 5 | 10 | |||
| <210> | 6 | ||||
| <211> | 16 | ||||
| <212> | БЕЛОК | ||||
| <213> | Вирус гриппа А | ||||
| <220> | |||||
| <223> | Остатки 84-99 | гемагглютинина 2 вируса | |||
| <400> | 6 | ||||
| Уа1 Азр Азр О1п 11е | О1п | Азр | 11е | Тгр А1а Туг | |
| 1 | 5 | 10 | |||
| <210> | 7 | ||||
| <211> | 16 | ||||
| <212> | БЕЛОК | ||||
| <213> | Вирус гриппа А | ||||
| <220> | |||||
| <223> | Остатки 84-99 | гемагглютинина 2 вируса |
гриппа А/Н1
Азп А1а О1и
гриппа А/Н5
Азп А1а О1и
гриппа А/Н7
Азп А1а О1и
гриппа А/Н9
Азп А1а О1и
Ьеи Ьеи 15
Ьеи Ьеи 15
Ьеи Ьеи 15
Ьеи Ьеи 15
гриппа А/Н2
и А/Н6
- 14 030004
Азп А1а О1и Ьеи Ьеи
15
| <400> | 7 | |||||||
| МеЬ О1и Азр | О1у РЬе | Ьеи | Азр | Уа1 | Тгр | ТЬг | Туг | |
| 1 | 5 | 10 | ||||||
| <210> | 8 | |||||||
| <211> | 16 | |||||||
| <212> | БЕЛОК | |||||||
| <213> | Вирус | гриппа | А | |||||
| <220> | ||||||||
| <223> | Остатки 84-99 | гемагглютинина 2 | вируса | |||||
| <400> | 8 | |||||||
| ТЬг Ьуз Азр | Бег 11е | ТЬг | Азр | 11е | Тгр | ТЬг | Туг | |
| 1 | 5 | 10 | ||||||
| <210> | 9 | |||||||
| <211> | 16 | |||||||
| <212> | БЕЛОК | |||||||
| <213> | Вирус | гриппа | А | |||||
| <220> | ||||||||
| <223> | Остатки 84-99 | гемагглютинина 2 | вируса | |||||
| <400> | 9 | |||||||
| 11е Азр Азр | А1а Уа1 | ТЬг | Азр | 11е | Тгр | Бег | Туг | |
| 1 | 5 | 10 | ||||||
| <210> | 10 | |||||||
| <211> | 16 | |||||||
| <212> | БЕЛОК | |||||||
| <213> | Вирус | гриппа | А | |||||
| <220> | ||||||||
| <223> | Остатки 84-99 | гемагглютинина 2 | вируса | |||||
| <400> | 10 | |||||||
| ТЬг Агд Азр | Бег Ьеи | ТЬг | О1и | 11е | Тгр | Бег | Туг | |
| 1 | 5 | 10 | ||||||
| <210> | 11 | |||||||
| <211> | 16 | |||||||
| <212> | БЕЛОК | |||||||
| <213> | Вирус | гриппа | А | |||||
| <220> | ||||||||
| <223> | Остатки 84-99 | гемагглютинина 2 | вируса | |||||
| <400> | 11 | |||||||
| Уа1 Азр Азр | А1а Уа1 | ТЬг | Азр | 11е | Тгр | Бег | Туг | |
| 1 | 5 | 10 | ||||||
| <210> | 12 | |||||||
| <211> | 16 | |||||||
| <212> | БЕЛОК | |||||||
| <213> | Вирус | гриппа | В | |||||
| <220> |
гриппа А/Н10
Азп А1а О1и Ьеи Ьеи 15
гриппа А/Н13
Азп А1а Ьуз Ьеи Ьеи 15
гриппа А/Н15
Азп А1а О1и Ьеи Ьеи 15
гриппа А/Н16
Азп А1а Ьуз Ьеи Ьеи 15
- 15 030004
<223> Остатки 84-99 гемагглютинина 2 вируса гриппа А/Н17
<400> 12
Уа1 Азр Азр А1а Ьеи Ьеи Азр 11е Тгр Бег Туг О1п ТЬг О1и Ьеи Ьеи 1 5 10 15
<210> 13
<211> 566
<212> БЕЛОК
<213> Вирус гриппа А
<220>
<223> Гемагглютинин вируса гриппа А/Н1
<400> 13
| МеЬ 1 | Ьуз | ТЬг | 11е | 11е 5 | А1а | РЬе | Бег | Суз | 11е 10 | Ьеи | Суз | Ьеи | 11е | РЬе 15 | А1а |
| О1п | Ьуз | Ьеи | Рго | О1у | Бег | Азр | Азп | Бег | МеЬ | А1а | ТЬг | Ьеи | Суз | Ьеи | О1у |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Н1з | Н1з | А1а | Уа1 | Рго | Азп | О1у | ТЬг | Ьеи | Уа1 | Ьуз | ТЬг | 11е | ТЬг | Азр | Азр |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| О1п | 11е | О1и | Уа1 | ТЬг | Азп | А1а | ТЬг | О1и | Ьеи | Уа1 | О1п | Бег | Бег | Бег | ТЬг |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| О1у | Агд | 11е | Суз | Азп | Бег | Рго | Н1з | О1п | 11е | Ьеи | Азр | О1у | Ьуз | Азп | Суз |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| ТЬг | Ьеи | 11е | Азр | А1а | Ьеи | Ьеи | О1у | Азр | Рго | Н1з | Суз | Азр | Азр | РЬе | О1п |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Азп | Ьуз | О1и | Тгр | Азр | Ьеи | РЬе | Уа1 | О1и | Агд | Бег | ТЬг | А1а | Туг | Бег | Азп |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Суз | Туг | Рго | Туг | Туг | Уа1 | Рго | Азр | Туг | А1а | ТЬг | Ьеи | Агд | Бег | Ьеи | Уа1 |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| А1а | Бег | Бег | О1у | Азп | Ьеи | О1и | РЬе | ТЬг | О1п | О1и | Бег | РЬе | Азп | Тгр | ТЬг |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| О1у | Уа1 | А1а | О1п | Азр | О1у | Бег | Бег | Туг | А1а | Суз | Агд | Агд | О1у | Бег | Уа1 |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Азп | Бег | РЬе | РЬе | Бег | Агд | Ьеи | Азп | Тгр | Ьеи | Туг | Азп | Ьеи | Азп | Туг | Ьуз |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Туг | Рго | О1и | О1п | Азп | Уа1 | ТЬг | МеЬ | Рго | Азп | Азп | Азр | Ьуз | РЬе | Азр | Ьуз |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Ьеи | Туг | 11е | Тгр | О1у | Уа1 | Н1з | Н1з | Рго | О1у | ТЬг | Азр | Ьуз | Азр | О1п | ТЬг |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Азп | Ьеи | Туг | Уа1 | О1п | А1а | Бег | О1у | Агд | Уа1 | 11е | Уа1 | Бег | ТЬг | Ьуз | Агд |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Бег | О1п | О1п | ТЬг | Уа1 | 11е | Рго | Азп | 11е | О1у | Бег | Агд | Рго | Тгр | Уа1 | Агд |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| О1у | Уа1 | Бег | Бег | 11е | 11е | Бег | 11е | Туг | Тгр | ТЬг | 11е | Уа1 | Ьуз | Рго | О1у |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Азр | 11е | Ьеи | Ьеи | 11е | Азп | Бег | ТЬг | О1у | Азп | Ьеи | 11е | А1а | Рго | Агд | О1у |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Туг | РЬе | Ьуз | 11е | О1п | Бег | О1у | Ьуз | Бег | Бег | 11е | МеЬ | Агд | Бег | Азр | А1а |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Н1з | 11е | Азр | О1и | Суз | Азп | Бег | О1и | Суз | 11е | ТЬг | Рго | Азп | О1у | Бег | 11е |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| Рго | Азп | Азр | Ьуз | Рго | РЬе | О1п | Азп | Уа1 | Азп | Ьуз | 11е | ТЬг | Туг | О1у | А1а |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Суз | Рго | Агд | Туг | Уа1 | Ьуз | О1п | Азп | ТЬг | Ьеи | Ьуз | Ьеи | А1а | ТЬг | О1у | МеЬ |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| Агд | Азп | Уа1 | Рго | О1и | Ьуз | О1п | ТЬг | Агд | О1у | 11е | РЬе | О1у | А1а | 11е | А1а |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| О1у | РЬе | 11е | О1и | Азп | О1у | Тгр | О1и | О1у | МеЬ | Уа1 | Азр | О1у | Тгр | Туг | О1у |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| РЬе | Агд | Нгз | О1п | Азп | Бег | О1и | О1у | ТЬг | О1у | О1п | А1а | А1а | Азр | Ьеи | Ьуз |
- 16 030004
| 370 | 375 | 380 | |||||||||||||
| Бег | ТЬг | О1п | А1а | А1а | 11е | Азп | О1п | 11е | ТЬг | О1у | Ьуз | Ьеи | Азп | Агд | Уа1 |
| 385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
| 11е | Ьуз | Ьуз | ТЬг | Азп | О1и | Ьуз | РЬе | Н1з | О1п | 11е | О1и | Ьуз | О1и | РЬе | Бег |
| 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
| О1и | Уа1 | О1и | О1у | Агд | 11е | О1п | Азр | Ьеи | О1и | Ьуз | Туг | Уа1 | О1и | Азр | ТЬг |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| Ьуз | 11е | Азр | Ьеи | Тгр | Бег | Туг | Азп | А1а | О1и | Ьеи | Ьеи | Уа1 | А1а | Ьеи | О1и |
| 435 | 440 | 445 | |||||||||||||
| Азп | О1п | Н1з | ТЬг | 11е | Азр | Ьеи | ТЬг | Азр | Бег | О1и | МеЬ | Бег | Ьуз | Ьеи | РЬе |
| 450 | 455 | 460 | |||||||||||||
| О1и | Агд | ТЬг | Агд | Агд | О1п | Ьеи | Агд | О1и | Азп | А1а | О1и | Азр | МеЬ | О1у | Азп |
| 465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
| О1у | Суз | РЬе | Ьуз | 11е | Туг | Н1з | Ьуз | Суз | Азр | Азп | А1а | Суз | 11е | О1у | Бег |
| 485 | 490 | 495 | |||||||||||||
| 11е | Агд | Азп | О1у | ТЬг | Туг | Азр | Н1з | Азр | 11е | Туг | Агд | Азп | О1и | А1а | Ьеи |
| 500 | 505 | 510 | |||||||||||||
| Азп | Азп | Агд | РЬе | О1п | 11е | Ьуз | С1у | Уа1 | О1п | Ьеи | Ьуз | Бег | О1у | Туг | Ьуз |
| 515 | 520 | 525 | |||||||||||||
| Азр | Тгр | 11е | Ьеи | Тгр | 11е | Бег | РЬе | А1а | 11е | Бег | Суз | РЬе | Ьеи | Ьеи | Суз |
| 530 | 535 | 540 | |||||||||||||
| Уа1 | Уа1 | Ьеи | Ьеи | О1у | РЬе | 11е | МеЬ | Тгр | А1а | Суз | О1п | Ьуз | О1у | Азп | 11е |
| 545 | 550 | 555 | 560 | ||||||||||||
| Агд | Суз | Азп | 11е | Суз | 11е |
565
<210> 14
<211> 562
<212> БЕЛОК
<213> Вирус гриппа А
<220>
<223> Гемагглютинин вируса гриппа А/Н2
<400> 14
| МеЬ | А1а | 11е | 11е | Туг | Ьеи | 11е | Ьеи | Ьеи | РЬе | ТЬг | А1а | Уа1 | Агд | О1у | Азр |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| О1п | 11е | Суз | 11е | О1у | Туг | Н1з | А1а | Азп | Азп | Бег | ТЬг | О1и | Ьуз | Уа1 | Азр |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| ТЬг | Азп | Ьеи | О1и | Агд | Азп | Уа1 | ТЬг | Уа1 | ТЬг | Н1з | А1а | Ьуз | Азр | 11е | Ьеи |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| О1и | Ьуз | ТЬг | Н1з | Азп | О1у | Ьуз | Ьеи | Суз | Ьуз | Ьеи | Азп | О1у | 11е | Рго | Рго |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Ьеи | О1и | Ьеи | О1у | Азр | Суз | Бег | 11е | А1а | О1у | Тгр | Ьеи | Ьеи | О1у | Азп | Рго |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| О1и | Суз | Азр | Агд | Ьеи | Ьеи | Бег | Уа1 | Рго | О1и | Тгр | Бег | Туг | 11е | МеЬ | О1и |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| Ьуз | О1и | Азп | Рго | Агд | Азр | О1у | Ьеи | Суз | Туг | Рго | О1у | Бег | РЬе | Азп | Азр |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Туг | О1и | О1и | Ьеи | Ьуз | Н1з | Ьеи | Ьеи | Бег | Бег | Уа1 | Ьуз | Н1з | РЬе | О1и | Ьуз |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Уа1 | Ьуз | 11е | Ьеи | Рго | Ьуз | Азр | Агд | Тгр | ТЬг | О1п | Н1з | ТЬг | ТЬг | ТЬг | О1у |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| О1у | Бег | Агд | А1а | Суз | А1а | Уа1 | Бег | О1у | Азп | Рго | Бег | РЬе | РЬе | Агд | Азп |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| МеЬ | Уа1 | Тгр | Ьеи | ТЬг | Ьуз | О1и | О1у | Бег | Азр | Туг | Рго | Уа1 | А1а | Ьуз | О1у |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Бег | Туг | Азп | Азп | ТЬг | Бег | О1у | О1и | О1п | МеЬ | Ьеи | 11е | 11е | Тгр | О1у | Уа1 |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Н1з | Н1з | Рго | 11е | Азр | О1и | ТЬг | О1и | О1п | Агд | ТЬг | Ьеи | Туг | О1п | Азп | Уа1 |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| О1у | ТЬг | Туг | Уа1 | Бег | Уа1 | О1у | ТЬг | Бег | ТЬг | Ьеи | Азп | Ьуз | Агд | Бег | ТЬг |
- 17 030004
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Рго | О1и | 11е | А1а | ТЬг | Агд | Рго | Ьуз | Уа1 | Азп | О1у | О1п | О1у | О1у | Агд | МеЬ |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| О1и | РЬе | Бег | Тгр | ТЬг | Ьеи | Ьеи | Азр | МеЬ | Тгр | Азр | ТЬг | 11е | Азп | РЬе | О1и |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Бег | ТЬг | О1у | Азп | Ьеи | 11е | А1а | Рго | О1и | Туг | О1у | РЬе | Ьуз | 11е | Бег | Ьуз |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Агд | О1у | Бег | Бег | О1у | 11е | МеЬ | Ьуз | ТЬг | О1и | О1у | ТЬг | Ьеи | О1и | Азп | Суз |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| О1и | ТЬг | Ьуз | Суз | О1п | ТЬг | Рго | Ьеи | О1у | А1а | 11е | Азп | ТЬг | ТЬг | Ьеи | Рго |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| РЬе | Н1з | Азп | Уа1 | Н1з | Рго | Ьеи | ТЬг | 11е | О1у | О1и | Суз | Рго | Ьуз | Туг | Уа1 |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Ьуз | Бег | О1и | Ьуз | Ьеи | Уа1 | Ьеи | А1а | ТЬг | О1у | Ьеи | Агд | Азп | Уа1 | Рго | О1п |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| 11е | О1и | Бег | Агд | О1у | Ьеи | РЬе | О1у | А1а | 11е | А1а | О1у | РЬе | 11е | О1и | О1у |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| О1у | Тгр | О1п | О1у | МеЬ | Уа1 | Азр | О1у | Тгр | Туг | О1у | Туг | Н1з | Н1з | Бег | Азп |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| Азр | О1п | О1у | Бег | О1у | Туг | А1а | А1а | Азр | Ьуз | О1и | Бег | ТЬг | О1п | Ьуз | А1а |
| 370 | 375 | 380 | |||||||||||||
| РЬе | Азр | О1у | 11е | ТЬг | Азп | Ьуз | Уа1 | Азп | Бег | Уа1 | 11е | О1и | Ьуз | МеЬ | Азп |
| 385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
| ТЬг | О1п | РЬе | О1и | А1а | Уа1 | О1у | Ьуз | О1и | РЬе | О1у | Азп | Ьеи | О1и | Агд | Агд |
| 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
| Ьеи | О1и | Азп | Ьеи | Азп | Ьуз | Агд | МеЬ | О1и | Азр | О1у | РЬе | Ьеи | Азр | Уа1 | Тгр |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| ТЬг | Туг | Азп | А1а | О1и | Ьеи | Ьеи | Уа1 | Ьеи | МеЬ | О1и | Азп | О1и | Агд | ТЬг | Ьеи |
| 435 | 440 | 445 | |||||||||||||
| Азр | РЬе | Н1з | Азр | Бег | Азп | Уа1 | Ьуз | Азп | Ьеи | Туг | Азр | Ьуз | Уа1 | Агд | МеЬ |
| 450 | 455 | 460 | |||||||||||||
| О1п | Ьеи | Агд | Азр | Азп | Уа1 | Ьуз | О1и | Ьеи | О1у | Азп | О1у | Суз | РЬе | О1и | РЬе |
| 465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
| Туг | Н1з | Ьуз | Суз | Азр | Азр | О1и | Суз | МеЬ | Азп | Бег | Уа1 | Ьуз | Азп | О1у | ТЬг |
| 485 | 490 | 495 | |||||||||||||
| Туг | Азр | Туг | Рго | Ьуз | Туг | О1и | О1и | О1и | Бег | Ьуз | Ьеи | Азп | Агд | Азп | О1и |
| 500 | 505 | 510 | |||||||||||||
| 11е | Ьуз | О1у | Уа1 | Ьуз | Ьеи | Бег | Бег | МеЬ | О1у | Уа1 | Туг | О1п | 11е | Ьеи | А1а |
| 515 | 520 | 525 | |||||||||||||
| 11е | Туг | А1а | ТЬг | Уа1 | А1а | О1у | Бег | Ьеи | Бег | Ьеи | А1а | 11е | МеЬ | МеЬ | А1а |
| 530 | 535 | 540 | |||||||||||||
| О1у | 11е | Бег | РЬе | Тгр | МеЬ | Суз | Бег | Азп | О1у | Бег | Ьеи | О1п | Суз | Агд | 11е |
| 545 | 550 | 555 | 560 |
Суз 11е
<210> 15
<211> 566
<212> БЕЛОК
<213> Вирус гриппа А
<220>
<223> Гемагглютинин вируса гриппа А/Н3
<400> 15
| МеЬ 1 | О1и | А1а | Ьуз | Ьеи 5 | РЬе | Уа1 | Ьеи | РЬе | Суз 10 | ТЬг | РЬе | ТЬг | Уа1 | Ьеи 15 | Ьуз |
| А1а | Азр | ТЬг | 11е | Суз | Уа1 | О1у | Туг | Н1з | А1а | Азп | Азп | Бег | ТЬг | Азр | ТЬг |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Уа1 | Азр | ТЬг | Уа1 | Ьеи | О1и | Ьуз | Азп | Уа1 | ТЬг | Уа1 | ТЬг | Н1з | Бег | Уа1 | Азп |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Ьеи | Ьеи | О1и | Азр | Бег | Нгз | Азп | О1у | Ьуз | Ьеи | Суз | Бег | Ьеи | Азп | О1у | 11е |
- 18 030004
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| А1а | Рго | Ьеи | О1п | Ьеи | О1у | Ьуз | Суз | Азп | Уа1 | А1а | О1у | Тгр | Ьеи | Ьеи | О1у |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Азп | Рго | О1и | Суз | Азр | Ьеи | Ьеи | Ьеи | Тйг | А1а | Азп | Зег | Тгр | Зег | Туг | 11е |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| 11е | О1и | Тйг | Зег | Азп | Зег | О1и | Азп | О1у | Тйг | Суз | Туг | Рго | О1у | О1и | Рйе |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| 11е | Азр | Туг | О1и | О1и | Ьеи | Агд | О1и | О1п | Ьеи | Зег | Зег | Уа1 | Зег | Зег | Рйе |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| О1и | Ьуз | Рйе | О1и | 11е | Рйе | Рго | Ьуз | А1а | Зег | Зег | Тгр | Рго | Азп | Нгз | О1и |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Тйг | Тйг | Ьуз | О1у | Уа1 | Тйг | А1а | А1а | Суз | Зег | Туг | Зег | О1у | А1а | Зег | Зег |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Рйе | Туг | Агд | Азп | Ьеи | Ьеи | Тгр | 11е | Тйг | Ьуз | Ьуз | О1у | Тйг | Зег | Туг | Рго |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Тйг | Ьеи | Зег | Ьуз | Зег | Туг | Тйг | Азп | Азп | Ьуз | О1у | Ьуз | О1и | Уа1 | Ьеи | Уа1 |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Ьеи | Тгр | О1у | Уа1 | Нгз | Нгз | Рго | Рго | Тйг | Уа1 | Азп | О1и | О1п | О1п | Зег | Ьеи |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Туг | О1п | Азп | А1а | Азр | А1а | Туг | Уа1 | Зег | Уа1 | О1у | Зег | Зег | Ьуз | Туг | Азп |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Агд | Агд | Рйе | Тйг | Рго | О1и | 11е | А1а | А1а | Агд | Рго | Ьуз | Уа1 | Агд | О1у | О1п |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| А1а | О1у | Агд | Меб | Азп | Туг | Нгз | Тгр | Тйг | Ьеи | Ьеи | Азр | О1п | О1у | Азр | Тйг |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| 11е | Тйг | Рйе | О1и | А1а | Тйг | О1у | Азп | Ьеи | 11е | А1а | Рго | Тгр | Туг | А1а | Рйе |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| А1а | Ьеи | Азп | Ьуз | О1у | Зег | Азр | Зег | О1у | 11е | 11е | Тйг | Зег | Азр | А1а | Рго |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Уа1 | Нгз | Азп | Суз | Азр | Тйг | Агд | Суз | О1п | Тйг | Рго | Нгз | О1у | А1а | Ьеи | Азп |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| Зег | Зег | Ьеи | Рго | Рйе | О1п | Азп | Уа1 | Нгз | Рго | 11е | Тйг | 11е | О1у | О1и | Суз |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Рго | Ьуз | Туг | Уа1 | Ьуз | Зег | Тйг | Ьуз | Ьеи | Агд | Меб | А1а | Тйг | О1у | Ьеи | Агд |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| Азп | Уа1 | Рго | Зег | 11е | О1п | Зег | Агд | О1у | Ьеи | Рйе | О1у | А1а | 11е | А1а | О1у |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| Рйе | 11е | О1и | О1у | О1у | Тгр | Тйг | О1у | Меб | 11е | Азр | О1у | Тгр | Туг | О1у | Туг |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| Ηΐ3 | Нгз | О1п | Азп | О1и | О1п | О1у | Зег | О1у | Туг | А1а | А1а | Азр | О1п | Ьуз | Зег |
| 370 | 375 | 380 | |||||||||||||
| Тйг | О1п | Азп | А1а | 11е | Азр | О1у | 11е | Тйг | Азп | Ьуз | Уа1 | Азп | Зег | Уа1 | 11е |
| 385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
| О1и | Ьуз | Меб | Азп | Тйг | Ьуз | Рйе | Тйг | А1а | Уа1 | О1у | Ьуз | О1и | Рйе | Азп | Азп |
| 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
| Ьеи | О1и | Агд | Агд | 11е | О1и | Азп | Ьеи | Азп | Ьуз | Ьуз | Уа1 | Азр | Азр | О1у | Рйе |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| Ьеи | Азр | Уа1 | Тгр | Тйг | Туг | Азп | А1а | О1и | Ьеи | Ьеи | Уа1 | Ьеи | Ьеи | О1и | Азп |
| 435 | 440 | 445 | |||||||||||||
| О1и | Агд | Тйг | Ьеи | Азр | Рйе | Нгз | Азр | Зег | Азп | Уа1 | Агд | Азп | Ьеи | Туг | О1и |
| 450 | 455 | 460 | |||||||||||||
| Ьуз | Уа1 | Ьуз | Зег | О1п | Ьеи | Агд | Азп | Азп | А1а | Ьуз | О1и | Ьеи | О1у | Азп | О1у |
| 465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
| Суз | Рйе | О1и | Рйе | Туг | Нгз | Ьуз | Суз | Азр | Азр | О1и | Суз | 11е | О1и | Зег | Уа1 |
| 485 | 490 | 495 | |||||||||||||
| Ьуз | Азп | О1у | Тйг | Туг | Азр | Туг | Рго | Ьуз | Туг | Зег | О1и | О1и | Зег | Ьуз | Ьеи |
| 500 | 505 | 510 | |||||||||||||
| Азп | Агд | О1и | О1и | 11е | Азр | О1у | Уа1 | Ьуз | Ьеи | О1и | Зег | Меб | О1у | Уа1 | Туг |
| 515 | 520 | 525 | |||||||||||||
| О1п | 11е | Ьеи | А1а | 11е | Туг | Зег | Тйг | Уа1 | А1а | Зег | Зег | Ьеи | Уа1 | Ьеи | Ьеи |
| 530 | 535 | 540 | |||||||||||||
| Уа1 | Зег | Ьеи | О1у | А1а | 11е | Зег | Рйе | Тгр | Меб | Суз | Зег | Азп | О1у | Зег | Ьеи |
| 545 | 550 | 555 | 560 |
- 19 030004
Ο1η Суз Агд 11е Суз 11е 565
<210> 16
<211> 568
<212> БЕЛОК
<213> Вирус гриппа А
<220>
<223> Гемагглютинин вируса гриппа А/Н5
<400> 16
| МеЬ 1 | О1и | Ьуз | 11е | Уа1 5 | Ьеи | Ьеи | Ьеи | А1а | 11е 10 | Уа1 | Бег | Ьеи | Уа1 | Ьуз 15 | Бег |
| Азр | Ο1η | 11е | Суз | 11е | О1у | Туг | Н1з | А1а | Азп | Азп | Бег | ТЬг | О1и | Ьеи | Уа1 |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Азр | ТЬг | 11е | МеЬ | О1и | Ьуз | Азп | Уа1 | ТЬг | Уа1 | ТЬг | Н1з | А1а | Ο1η | Азр | 11е |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| Ьеи | О1и | Ьуз | ТЬг | Н1з | Азп | О1у | Ьуз | Ьеи | Суз | Азр | Ьеи | Азр | О1у | Уа1 | Ьуз |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Рго | Ьеи | 11е | Ьеи | Агд | Азр | Суз | Бег | Уа1 | А1а | О1у | Тгр | Ьеи | Ьеи | О1у | Азп |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Рго | МеЬ | Суз | Азр | О1и | РЬе | 11е | Азп | Уа1 | Рго | О1и | Тгр | Бег | Туг | 11е | Уа1 |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| О1и | Ьуз | А1а | Азп | Рго | А1а | Азп | Азр | Ьеи | Суз | Туг | Рго | О1у | Азр | РЬе | Азп |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| Азр | Туг | О1и | О1и | Ьеи | Ьуз | Н1з | Ьеи | Ьеи | Бег | Агд | 11е | Азп | Н1з | РЬе | О1и |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| Ьуз | 11е | Ο1η | 11е | 11е | Рго | Ьуз | Бег | Бег | Тгр | Бег | Азп | Н1з | О1и | А1а | Бег |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Бег | О1у | Уа1 | Бег | Бег | А1а | Суз | Рго | Туг | Ο1η | О1у | Ьуз | Бег | Бег | РЬе | РЬе |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Агд | Азп | Уа1 | Уа1 | Тгр | Ьеи | 11е | Ьуз | Ьуз | Азп | Бег | А1а | Туг | Рго | ТЬг | 11е |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Ьуз | Агд | Бег | Туг | Азп | Азп | ТЬг | Азп | Ο1η | О1и | Азр | Ьеи | Ьеи | Уа1 | Ьеи | Тгр |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| О1у | 11е | Н1з | Н1з | Рго | Азп | Азр | А1а | А1а | О1и | Ο1η | ТЬг | Ьуз | Ьеи | Туг | Ο1η |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Азп | Рго | ТЬг | ТЬг | Туг | 11е | Бег | Уа1 | О1у | ТЬг | Бег | ТЬг | Ьеи | Азп | Ο1η | Агд |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Ьеи | Уа1 | Рго | Ьуз | 11е | А1а | ТЬг | Агд | Бег | Ьуз | Уа1 | Азп | О1у | Ο1η | Бег | О1у |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Агд | МеЬ | О1и | РЬе | РЬе | Тгр | ТЬг | 11е | Ьеи | Ьуз | Рго | Азп | Азр | А1а | 11е | Азп |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| РЬе | О1и | Бег | Азп | О1у | Азп | РЬе | 11е | А1а | Рго | О1и | Туг | А1а | Туг | Ьуз | 11е |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Уа1 | Ьуз | Ьуз | О1у | Азр | Бег | А1а | 11е | МеЬ | Ьуз | Бег | О1и | Ьеи | О1и | Туг | О1у |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Азп | Суз | Азп | ТЬг | Ьуз | Суз | Ο1η | ТЬг | Рго | Ьеи | О1у | А1а | 11е | Азп | Бег | Бег |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| МеЬ | Рго | РЬе | Н1з | Азп | 11е | Н1з | Рго | Ьеи | ТЬг | 11е | О1у | О1и | Суз | Рго | Ьуз |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Туг | Уа1 | Ьуз | Бег | Азп | Агд | Ьеи | Уа1 | Ьеи | А1а | ТЬг | О1у | Ьеи | Агд | Азп | ТЬг |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| Рго | Ο1η | Агд | О1и | Агд | Агд | Агд | Ьуз | Ьуз | Агд | О1у | Ьеи | РЬе | О1у | А1а | 11е |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| А1а | О1у | РЬе | 11е | О1и | О1у | О1у | Тгр | Ο1η | О1у | МеЬ | Уа1 | Азр | О1у | Тгр | Туг |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| О1у | Туг | Н1з | Н1з | Бег | Азп | О1и | Ο1η | О1у | Бег | О1у | Туг | А1а | А1а | Азр | Ьуз |
| 370 | 375 | 380 | |||||||||||||
| О1и | Бег | ТЬг | Ο1η | Ьуз | А1а | 11е | Азр | О1у | Уа1 | ТЬг | Азп | Ьуз | Уа1 | Азп | Бег |
| 385 | 390 | 395 | 400 |
- 20 030004
| 11е | 11е | Азр | Ьуз | МеЬ 405 | Азп ТЬг О1п | РЬе | О1и 410 | А1а Уа1 | О1у Агд | О1и 415 | РЬе | ||||
| Азп | Азп | Ьеи | О1и | Агд | Агд | 11е | О1и | Азп | Ьеи | Азп | Ьуз | Ьуз | МеЬ | О1и | Азр |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| О1у | РЬе | Ьеи | Азр | Уа1 | Тгр | ТЬг | Туг | Азп | А1а | О1и | Ьеи | Ьеи | Уа1 | Ьеи | МеЬ |
| 435 | 440 | 445 | |||||||||||||
| О1и | Азп | О1и | Агд | ТЬг | Ьеи | Азр | РЬе | Н1з | Азр | Бег | Азп | Уа1 | Ьуз | Азп | Ьеи |
| 450 | 455 | 460 | |||||||||||||
| Туг | Азр | Ьуз | Уа1 | Агд | Ьеи | О1п | Ьеи | Агд | Азр | Азп | А1а | Ьуз | О1у | Ьеи | О1у |
| 465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
| Азп | О1у | Суз | РЬе | О1и | РЬе | Туг | Н1з | Ьуз | Суз | Азр | Азп | О1и | Суз | МеЬ | О1и |
| 485 | 490 | 495 | |||||||||||||
| Бег | Уа1 | Ьуз | Азп | О1у | ТЬг | Туг | Азр | Туг | Рго | О1п | Туг | Бег | О1и | О1и | А1а |
| 500 | 505 | 510 | |||||||||||||
| Агд | Ьеи | Азп | Агд | О1и | О1и | 11е | Бег | О1у | Уа1 | Ьуз | Ьеи | О1и | Бег | МеЬ | О1у |
| 515 | 520 | 525 | |||||||||||||
| ТЬг | Туг | О1п | 11е | Ьеи | Бег | 11е | Туг | Бег | ТЬг | Уа1 | А1а | Бег | Бег | Ьеи | А1а |
| 530 | 535 | 540 | |||||||||||||
| Ьеи | А1а | 11е | МеЬ | Уа1 | А1а | О1у | Ьеи | Бег | Ьеи | Тгр | МеЬ | Суз | Бег | Азп | О1у |
| 545 | 550 | 555 | 560 | ||||||||||||
| Бег | Ьеи | О1п | Суз | Агд | 11е | Суз | 11е |
565
<210> 17
<211> 560
<212> БЕЛОК
<213> Вирус гриппа А
<220>
<223> Гемагглютинин вируса гриппа А/Н7
<400> 17
| МеЬ | Азп | ТЬг О1п | 11е | Ьеи | Уа1 | РЬе | А1а | Ьеи | Уа1 | А1а | 11е | 11е | Рго | ТЬг | |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Азп | А1а | Азр | Ьуз | 11е | Суз | Ьеи | О1у | Н1з | Н1з | А1а | Уа1 | Бег | Азп | О1у | ТЬг |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Ьуз | Уа1 | Азп | ТЬг | Ьеи | ТЬг | О1и | Агд | О1у | Уа1 | О1и | Уа1 | Уа1 | Азп | А1а | ТЬг |
| 35 | 40 | 45 | |||||||||||||
| О1и | ТЬг | Уа1 | О1и | Агд | ТЬг | Азп | Уа1 | Рго | Агд | 11е | Суз | Бег | Ьуз | О1у | Ьуз |
| 50 | 55 | 60 | |||||||||||||
| Агд | ТЬг | Уа1 | Азр | Ьеи | О1у | О1п | Суз | О1у | Ьеи | Ьеи | О1у | ТЬг | 11е | ТЬг | О1у |
| 65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
| Рго | Рго | О1п | Суз | Азр | О1п | РЬе | Ьеи | О1и | РЬе | Бег | А1а | Азр | Ьеи | 11е | 11е |
| 85 | 90 | 95 | |||||||||||||
| О1и | Агд | Агд | О1и | О1у | Бег | Азр | Уа1 | Суз | Туг | Рго | О1у | Ьуз | РЬе | Уа1 | Азп |
| 100 | 105 | 110 | |||||||||||||
| О1и | О1и | А1а | Ьеи | Агд | О1п | 11е | Ьеи | Агд | О1и | Бег | О1у | О1у | 11е | Азр | Ьуз |
| 115 | 120 | 125 | |||||||||||||
| О1и | ТЬг | МеЬ | О1у | РЬе | ТЬг | Туг | Бег | О1у | 11е | Агд | ТЬг | Азп | О1у | А1а | ТЬг |
| 130 | 135 | 140 | |||||||||||||
| Бег | А1а | Суз | Агд | Агд | Бег | О1у | Бег | Бег | РЬе | Туг | А1а | О1и | МеЬ | Ьуз | Тгр |
| 145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
| Ьеи | Ьеи | Бег | Азп | ТЬг | Азр | Азп | А1а | А1а | РЬе | Рго | О1п | МеЬ | ТЬг | Ьуз | Бег |
| 165 | 170 | 175 | |||||||||||||
| Туг | Ьуз | Азп | ТЬг | Агд | Ьуз | Азр | Рго | А1а | Ьеи | 11е | 11е | Тгр | О1у | 11е | Н1з |
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Н1з | Бег | О1у | Бег | ТЬг | ТЬг | О1и | О1п | ТЬг | Ьуз | Ьеи | Туг | О1у | Бег | О1у | Азп |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Ьуз | Ьеи | 11е | ТЬг | Уа1 | О1у | Бег | Бег | Азп | Туг | О1п | О1п | Бег | РЬе | Уа1 | Рго |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Бег | Рго | О1и | А1а | Агд | Рго | О1п | Уа1 | Азп | О1у | О1п | Бег | О1у | Агд | 11е | Азр |
| 225 | 230 | 235 | 240 |
- 21 030004
| РЬе | Н1з | Тгр | Ьеи | Меб 245 | Ьеи Азп | Рго | Азп | Азр 250 | ТЬг | Уа1 | ТЬг | РЬе | Зег 255 | РЬе | |
| Азп | О1у | А1а | РЬе | 11е | А1а | Рго | Азр | Агд | А1а | Зег | РЬе | Ьеи | Агд | О1у | Ьуз |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Зег | Меб | О1у | 11е | О1п | Зег | О1у | Уа1 | О1п | Уа1 | Азр | А1а | Азп | Суз | О1и | О1у |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| Азр | Суз | Туг | Н1з | Зег | О1у | О1у | ТЬг | 11е | 11е | Зег | Азп | Ьеи | Рго | РЬе | О1п |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| Азп | 11е | Азп | Зег | Агд | А1а | Уа1 | О1у | Ьуз | Суз | Рго | Агд | Туг | Уа1 | Ьуз | О1п |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| О1и | Зег | Ьеи | Ьеи | Ьеи | А1а | ТЬг | О1у | Меб | Ьуз | Азп | Уа1 | Рго | О1и | 11е | Рго |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| Ьуз | О1у | Агд | О1у | Ьеи | РЬе | О1у | А1а | 11е | А1а | О1у | РЬе | 11е | О1и | Азп | О1у |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| Тгр | О1и | О1у | Ьеи | 11е | Азр | О1у | Тгр | Туг | О1у | РЬе | Агд | Н1з | О1п | Азп | А1а |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| О1п | О1у | О1и | О1у | ТЬг | А1а | А1а | Азр | Туг | Ьуз | Зег | ТЬг | О1п | Зег | А1а | 11е |
| 370 | 375 | 380 | |||||||||||||
| Азр | О1п | Уа1 | ТЬг | О1у | Ьуз | Ьеи | Азп | Агд | Ьеи | 11е | О1и | Ьуз | ТЬг | Азп | О1п |
| 385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
| С1п | РЬе | Ьуз | Ьеи | 11е | Азр | Азп | О1и | РЬе | ТЬг | О1и | Уа1 | О1и | Ьуз | О1п | 11е |
| 405 | 410 | 415 | |||||||||||||
| О1у | Азп | Уа1 | 11е | Азп | Тгр | ТЬг | Агд | Азр | Зег | Меб | ТЬг | О1и | Уа1 | Тгр | Зег |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| Туг | Азп | А1а | О1и | Ьеи | Ьеи | Уа1 | А1а | Меб | О1и | Азп | О1п | Н1з | ТЬг | 11е | Азр |
| 435 | 440 | 445 | |||||||||||||
| Ьеи | А1а | Азр | Зег | О1и | Меб | Азп | Ьуз | Ьеи | Туг | О1и | Агд | Уа1 | Ьуз | Агд | О1п |
| 450 | 455 | 460 | |||||||||||||
| Ьеи | Агд | О1и | Азп | А1а | О1и | О1и | Азр | О1у | ТЬг | О1у | Суз | РЬе | О1и | 11е | РЬе |
| 465 | 470 | 475 | 480 | ||||||||||||
| Нтз | Ьуз | Суз | Азр | Азр | Азр | Суз | Меб | А1а | Зег | 11е | Агд | Азп | Азп | ТЬг | Туг |
| 485 | 490 | 495 | |||||||||||||
| Азр | Н1з | Зег | Ьуз | Туг | Агд | О1и | О1и | А1а | Меб | О1п | Азп | Агд | 11е | О1п | 11е |
| 500 | 505 | 510 | |||||||||||||
| Азр | Рго | Уа1 | Ьуз | Ьеи | Зег | Зег | О1у | Туг | Ьуз | Азр | Уа1 | 11е | Ьеи | Тгр | РЬе |
| 515 | 520 | 525 | |||||||||||||
| Зег | РЬе | О1у | А1а | Зег | Суз | РЬе | 11е | Ьеи | Ьеи | А1а | 11е | А1а | Меб | О1у | Ьеи |
| 530 | 535 | 540 | |||||||||||||
| Уа1 | РЬе | 11е | Суз | Уа1 | Ьуз | Азп | О1у | Азп | Меб | Агд | Суз | ТЬг | 11е | Суз | 11е |
| 545 | 550 | 555 | 560 |
| <210> | 18 | |
| <211> | 9 | |
| <212> | БЕЛОК | |
| <213> | Искусственная | последовательность |
| <220> | ||
| <223> | Синтетический | пептидный линкер |
| <400> | 18 | |
| Азр Туг Ьуз Ьуз Азр | Азр Азр Азр Ьуз | |
| 1 | 5 | |
| <210> | 19 | |
| <211> | 17 | |
| <212> | БЕЛОК | |
| <213> | Искусственная | последовательность |
| <220> | ||
| <223> | Синтетический | пептид ПК, соединенный |
с Суз
- 22 030004
<400> 19
Суз Уа1 С1и Азр ТЬг Ьуз 11е Азр Ьеи Тгр Зег Туг Азп А1а С1и Ьеи 1 5 10 15
Ьеи
Claims (20)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Иммуногенный пептидный конъюгат, содержащий пептид области инициации слияния (ΕΙΚ) гемагглютинина (НА) или его вариант, конъюгированный с белком-носителем посредством линкерной группы; где пептид ΕΙΚ НА состоит из не более чем 50 аминокислотных остатков и содержит сегмент белка гемагглютинина 2 вируса гриппа, включающий аминокислотную последовательность δΡ(9 ГО ΝΟ: 1 или вариант δΕΡ ГО ΝΟ: 1, имеющий по меньшей мере 50% идентичности последовательности по отношению к ней и отличающийся от δΡ(9 ГО ΝΟ: 1 одной или несколькими заменами аминокислот, выбранными из группы, состоящей из УН, У1Ь, У1А, У1С, У1Т, У18, У1М, Ε2Ώ, Е2К, Ε2Κ, Ώ3Ε, Т4О, Τ4δ, Т4(Э, Т4А, К5Е, К5М, К5Д К5У, К5Р, К5А, Ι6Ε, КУ, Ι6Α, Ι6Τ, Ι6δ, Ι69, Ι6Ν, Ώ7Ε, Ε8Ι, Ρ8Υ, Р8А, Ю9У, 810т, 8100, δ10Α, δ10Μ и Е14К.
- 2. Иммуногенный пептидный конъюгат по п.1, где сегмент белка гемагглютинина 2 вируса гриппа включает до 25 дополнительных аминокислотных остатков из белка гемагглютинина 2 вируса гриппа А подтипа, выбранного из группы, состоящей из Η1, Н2, Η3, Н4, Н5, Н6, Н7, Н8, Н9, Н10, Н11, Н12, Н13, Н14, Η15, Η16 и Η17, где дополнительные остатки являются смежными с δΡ(9 ΙΌ ΝΟ: 1 или его вариантом в аминокислотной последовательности белка гемагглютинина 2 выбранного подтипа вируса гриппа А.
- 3. Иммуногенный пептидный конъюгат по п.1 или 2, где пептид ΕΙΚ НА включает одну или несколько пептидных последовательностей не из белка гемагглютинина 2 вируса гриппа А.
- 4. Иммуногенный пептидный конъюгат по любому из пп.1-3, где пептид ΕΙΚ гемагглютинина имеет аминокислотную последовательность, состоящую из δΡ(9 ГО ΝΟ: 1 или варианта δΡ(9 ГО ΝΟ: 1, имеющего по меньшей мере 50% идентичности последовательности по отношению к ней и отличающегося от δΡ(9 ГО ΝΟ: 1 одной или несколькими заменами аминокислот, выбранными из группы, состоящей из УН, У1Ь, У1А, У1О, У1Т, У18, У1М, Ε2Ώ, Е2К, Ε2Κ, Ώ3Ε, Т4О, Τ4δ, Т4(Э, Т4А, К5Е, К5М, К5Д К5У, К5Р, К5А, КЬ, КУ, Ι6Α, Ι6Τ, Ι6δ, Ι69, Ι6Ν, Ώ7Ε, Ε8Ι, Ρ8Υ, Р8А, А'9¥, 810т, δ100, δ10Α, δ10Μ и Е14К.
- 5. Иммуногенный пептидный конъюгат по любому из пп.1-4, где белок-носитель выбран из группы, состоящей из комплекса белков внешней мембраны Хеаегпа тешпцтсРз (С)¥1РС), белка столбнячного токсина, производного дифтерийного токсина СКМ197, бычьего сывороточного альбумина (ΒδΑ), катионизированного ΒδΑ, гемоцианина СопсЕо1ераз сопсЕо1ераз (СС11), поверхностного антигена вируса гепатит В (ΗΒУ) (ИНзАц), белка корового антигена ΗΒУ, гемоцианина морского блюдца (КР11), белка капсида ротавируса, белка Р1 вируса папилломы крупного рогатого скота (ΒΡ¥), белка Р1 вируса папилломы человека ЩРУ), овальбумина и полноразмерного белка гемагглютинина вируса гриппа.
- 6. Иммуногенный пептидный конъюгат по любому из пп.1-5, где белок-носитель является полноразмерным белком гемагглютинина вируса гриппа.
- 7. Иммуногенный пептидный конъюгат по п.6, где полноразмерный белок гемагглютинина вируса гриппа является гемагглютинином из подтипа вируса гриппа А, выбранного из группы, состоящей из Η1, Н2, Η3, Н4, Н5, Н6, Н7, Н8, Н9, Н10, Η11, Η12, Η13, Η14, Η15, Η16 и Н17.
- 8. Иммуногенный пептидный конъюгат по п.6, где полноразмерный белок гемагглютинина вируса гриппа является белком гемагглютинина вируса гриппа В.
- 9. Иммуногенный пептидный конъюгат по любому из пп.1-8, где линкерная группа содержит сульфидную связь.
- 10. Иммуногенный пептидный конъюгат по любому из пп.1-8, где линкерная группа содержит пептидный конъюгат по любому из вариантов осуществления 1-6, где линкерная группа является 4-(Ν-где остаток Суз в формуле (Ι) связан с сукцинимидным остатком через его сульфгидрильную группу и связан с Ν-концом пептида ΕΙΚ с помощью пептидной связи, необязательно, с дополнительным спейсерным пептидом из 1-5 остатков между Суз и пептидом ΕΙΚ, и 1-карбонильная группа на циклогексильном остатке в формуле (Ι) связана с первичным амином на белке-носителе с помощью амидной связи.
- 11. Иммуногенный пептидный конъюгат по любому из пп.1-10, содержащий пептид ΕΙΚ гемагглютинина 2, имеющий аминокислотную последовательность, состоящую из δΡ(9 ГО ΝΟ: 1, конъюгирован- 23 030004ную с белком-носителем посредством линкерной группы.
- 12. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики инфекции гриппа, содержащая иммуногенный пептидный конъюгат по любому из пп.1-11 в фармацевтически приемлемом носителе.
- 13. Способ лечения или профилактики инфекции гриппа, включающий введение терапевтически эффективного количества иммуногенного пептидного конъюгата по любому из пп.1-11 индивидууму, страдающему гриппом или имеющему риск заражения гриппом.
- 14. Способ индуцирования специфичного терапевтического гуморального ответа на вирус гриппа у индивидуума, включающий введение индивидууму иммуногенного пептидного конъюгата по любому из пп.1-11.
- 15. Способ по п.14, где специфичный терапевтический гуморальный ответ ингибирует слияние вируса гриппа с мембраной клетки-хозяина.
- 16. Терапевтическое моноклональное антитело, способное специфически связываться с областью ИК гемагглютинина вируса гриппа, содержащее определяющие комплементарность области (СОК) из антитела, продуцируемого в организме-хозяине после введения иммуногенного пептидного конъюгата по любому из пп.1-11, специфически связывающегося с областью ИК белка гемагглютинина вируса гриппа.
- 17. Терапевтическое моноклональное антитело по п.16, где терапевтическое моноклональное антитело является человеческим, гуманизированным или химерным моноклональным антителом.
- 18. Применение терапевтического моноклонального антитела по п.16 или 17 для лечения или профилактики инфекции гриппа.
- 19. Применение иммуногенного пептидного конъюгата по любому из пп.1-11 для лечения или профилактики инфекции гриппа.
- 20. Применение иммуногенного пептидного конъюгата по любому из пп.1-11 для индуцирования специфического терапевтического гуморального ответа на вирус гриппа у индивидуума.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US13/828,988 US9649375B2 (en) | 2013-03-14 | 2013-03-14 | Immunogenic peptide conjugate and method for inducing an anti-influenza therapeutic antibody response therewith |
| PCT/US2014/025968 WO2014160171A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-03-13 | Immunogenic peptide conjugate and method for inducing an anti-influenza therapeutic antibody response therewith |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201591747A1 EA201591747A1 (ru) | 2016-02-29 |
| EA030004B1 true EA030004B1 (ru) | 2018-06-29 |
Family
ID=51527967
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201591747A EA030004B1 (ru) | 2013-03-14 | 2014-03-13 | Иммуногенный пептидный конъюгат и способ индуцирования терапевтического гуморального ответа против вируса гриппа с его применением |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US9649375B2 (ru) |
| EP (1) | EP2970386A4 (ru) |
| JP (1) | JP2016519061A (ru) |
| CN (1) | CN105377876A (ru) |
| AR (1) | AR095367A1 (ru) |
| AU (2) | AU2014244071B2 (ru) |
| CA (1) | CA2906519A1 (ru) |
| EA (1) | EA030004B1 (ru) |
| HK (1) | HK1222184A1 (ru) |
| MX (1) | MX2015012399A (ru) |
| TW (2) | TWI654205B (ru) |
| WO (1) | WO2014160171A2 (ru) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20190343951A1 (en) * | 2017-01-13 | 2019-11-14 | National Research Council Of Canada | Method of optimizing peptide immuno-epitope by glycosylation, optimized peptide thereof and its use for conjugate vaccines |
| WO2018237010A2 (en) | 2017-06-20 | 2018-12-27 | The Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | VACCINE COMPOSITIONS AGAINST STREPTOCOCCUS AND THEIR METHODS OF USE |
| CN114516907B (zh) * | 2020-11-20 | 2024-03-29 | 中国科学技术大学 | 一种植物抗逆性相关基因atagl70及其编码蛋白与应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6068973A (en) * | 1993-06-07 | 2000-05-30 | Trimeris, Inc. | Methods for inhibition of membrane fusion-associated events, including influenza virus |
| US20030180328A1 (en) * | 2001-03-27 | 2003-09-25 | Samuel Bogoch | Replikin peptides in rapid replication of glioma cells and in influenza epidemics |
| US20090234096A1 (en) * | 2006-05-03 | 2009-09-17 | Garry Robert F | Influenza inhibiting compositions and methods |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2047073A1 (en) | 1990-07-19 | 1992-01-20 | William J. Leanza | Coconjugate vaccines comprising immunogenic protein, hiv related peptides, and anionic moieties |
| US6277969B1 (en) | 1991-03-18 | 2001-08-21 | New York University | Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor |
| US6800738B1 (en) | 1991-06-14 | 2004-10-05 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
| US5824307A (en) | 1991-12-23 | 1998-10-20 | Medimmune, Inc. | Human-murine chimeric antibodies against respiratory syncytial virus |
| US5589174A (en) * | 1992-09-17 | 1996-12-31 | Takara Shuzo Co., Ltd. | Anti-human influenza virus antibody |
| DK1034298T3 (da) | 1997-12-05 | 2012-01-30 | Scripps Research Inst | Humanisering af murint antistof |
| DE60041335D1 (de) * | 1999-08-19 | 2009-02-26 | Dynavax Tech Corp | Methode zur modulierung eines immunantwortes mit immunstimulierenden sequencen und zusammensetzungen dafür |
| AU2003243651B2 (en) | 2002-06-17 | 2008-10-16 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Specificity grafting of a murine antibody onto a human framework |
| EP2261380B1 (en) * | 2003-11-04 | 2013-07-17 | The Administrators of the Tulane Educational Fund | Method of preventing virus:cell fusion by inhibiting the function of the fusion initiation region in rna viruses having class I membrane fusogenic envelope proteins |
| HUE026136T2 (en) * | 2005-10-18 | 2016-05-30 | Novavax Inc | Functional influenza virus-like particles (VLP-K) |
| US20090169576A1 (en) | 2005-10-26 | 2009-07-02 | Roberto Crea | Influenza combinatorial antigen vaccine |
| MX2008015309A (es) | 2006-05-31 | 2009-03-02 | Astellas Pharma Inc | Anticuerpo humanizado de osteopontina anti-humana. |
| MX363240B (es) * | 2007-06-25 | 2019-03-15 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Composiciones que inhiben la influenza y métodos. |
| US8669046B2 (en) * | 2008-03-12 | 2014-03-11 | Xuguang (Sean) Li | Reagents and methods for detecting influenza virus proteins |
| JP2012521786A (ja) | 2009-03-30 | 2012-09-20 | モウント シナイ スクール オフ メディシネ | インフルエンザウイルスワクチン及びその使用 |
| EP2424879A4 (en) | 2009-04-29 | 2013-06-05 | Ca Minister Health & Welfare | INFLUENZA VACCINE |
| WO2010124393A1 (en) | 2009-04-30 | 2010-11-04 | National Research Council Of Canada | Anticancer agent comprising a yatapoxvirus mutant and uses thereof |
| WO2010130636A1 (en) | 2009-05-11 | 2010-11-18 | Crucell Holland B.V. | Human binding molecules capable of neutralizing influenza virus h3n2 and uses thereof |
| CN102939101A (zh) * | 2010-01-26 | 2013-02-20 | 科罗拉多大学董事会，法人 | 用于通用疫苗的流感病毒组合物和方法 |
| MX346206B (es) | 2011-07-14 | 2017-03-09 | Crucell Holland Bv | Moleculas de enlace humanas capaces de neutralizar los virus de la influenza a del grupo filogenetico 1 y grupo filogenetico 2 y virus de la influenza b. |
-
2013
- 2013-03-14 US US13/828,988 patent/US9649375B2/en active Active
-
2014
- 2014-03-12 AR ARP140100906A patent/AR095367A1/es unknown
- 2014-03-13 WO PCT/US2014/025968 patent/WO2014160171A2/en active Application Filing
- 2014-03-13 TW TW103109171A patent/TWI654205B/zh not_active IP Right Cessation
- 2014-03-13 EA EA201591747A patent/EA030004B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2014-03-13 AU AU2014244071A patent/AU2014244071B2/en not_active Ceased
- 2014-03-13 EP EP14776544.0A patent/EP2970386A4/en not_active Withdrawn
- 2014-03-13 MX MX2015012399A patent/MX2015012399A/es unknown
- 2014-03-13 CN CN201480028403.5A patent/CN105377876A/zh active Pending
- 2014-03-13 JP JP2016502011A patent/JP2016519061A/ja active Pending
- 2014-03-13 TW TW107137751A patent/TW201925238A/zh unknown
- 2014-03-13 CA CA2906519A patent/CA2906519A1/en not_active Abandoned
-
2016
- 2016-08-31 HK HK16110325.7A patent/HK1222184A1/zh unknown
-
2017
- 2017-05-10 US US15/591,386 patent/US10137194B2/en active Active - Reinstated
-
2018
- 2018-10-04 AU AU2018241125A patent/AU2018241125A1/en not_active Abandoned
- 2018-10-31 US US16/176,743 patent/US10537634B2/en active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6068973A (en) * | 1993-06-07 | 2000-05-30 | Trimeris, Inc. | Methods for inhibition of membrane fusion-associated events, including influenza virus |
| US20030180328A1 (en) * | 2001-03-27 | 2003-09-25 | Samuel Bogoch | Replikin peptides in rapid replication of glioma cells and in influenza epidemics |
| US20090234096A1 (en) * | 2006-05-03 | 2009-09-17 | Garry Robert F | Influenza inhibiting compositions and methods |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2014244071A1 (en) | 2015-10-29 |
| US10537634B2 (en) | 2020-01-21 |
| TW201514208A (zh) | 2015-04-16 |
| HK1222184A1 (zh) | 2017-06-23 |
| EP2970386A2 (en) | 2016-01-20 |
| TWI654205B (zh) | 2019-03-21 |
| US20190054168A1 (en) | 2019-02-21 |
| WO2014160171A3 (en) | 2015-04-23 |
| TW201925238A (zh) | 2019-07-01 |
| CA2906519A1 (en) | 2014-10-02 |
| US20140271650A1 (en) | 2014-09-18 |
| US10137194B2 (en) | 2018-11-27 |
| CN105377876A (zh) | 2016-03-02 |
| AU2018241125A1 (en) | 2018-10-25 |
| WO2014160171A2 (en) | 2014-10-02 |
| JP2016519061A (ja) | 2016-06-30 |
| EP2970386A4 (en) | 2016-10-26 |
| AU2014244071B2 (en) | 2018-07-05 |
| US9649375B2 (en) | 2017-05-16 |
| US20170258902A1 (en) | 2017-09-14 |
| EA201591747A1 (ru) | 2016-02-29 |
| MX2015012399A (es) | 2016-03-03 |
| AR095367A1 (es) | 2015-10-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11679151B2 (en) | Stabilized influenza hemagglutinin stem region trimers and uses thereof | |
| US20220288189A1 (en) | Influenza hemagglutinin proteins and methods of use thereof | |
| KR20190056382A (ko) | 안정화된 그룹 2 인플루엔자 헤마글루티닌 줄기 영역 삼량체 및 그의 용도 | |
| US10537634B2 (en) | Immunogenic peptide composition and method | |
| ES2528109T3 (es) | Compuestos inmunogénicos que comprenden péptido gp41 de VIH acoplado a proteína portadora CRM197 | |
| EP4313138A1 (en) | Sars-cov-2 subunit vaccine | |
| CN110003314B (zh) | H1n1流感病毒血凝素可诱发广谱保护性抗体的表位肽及其应用 | |
| TW201029663A (en) | Human M2e peptide immunogens | |
| EP1704167B1 (en) | A method to make a peptide-carrier conjugate with a high immunogenicity | |
| BR112020023466A2 (pt) | Tratamento e prevenção de alergias aos ácaros da poeira doméstica | |
| JP2020500169A (ja) | インフルエンザウイルスを中和する化合物 | |
| JP2018154572A (ja) | ペプチドワクチン及び当該ペプチドに対する特異抗体を有効成分とする医薬 | |
| WO2021260176A1 (en) | Synthetic epitopes of betacoronaviruses |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM RU |