EA026930B1 - Способ получения диосцинина из якорцев стелющихся - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к технологии получения лекарственных препаратов фармации и способу получения диосцинина из якорцев стелющихся, являющегося основным действующим веществом лекарственного препарата полиспонина, широко применяемого для лечения и профилактики атеросклероза. Сущность изобретения состоит в разработке нового способа получения диосцинина, включающего в себя использование в качестве исходного сырья якорцев стелющихся Tribulus terrestris, измельчение высушенных надземных частей, их обезжиривание петролейным эфиром, удаление менее полярных гликозидов последовательной экстракцией 95%-ным этанолом, последовательную экстракцию полярных гликозидов 50%-ным этанолом, объединение всех экстрактов, полученных 50%-ным этанолом, упаривание этанола, фильтрацию водного остатка, экстракцию гликозидов из водного раствора н-бутанолом (бутанол), промывание н-бутанольного экстракта 10%-ным раствором аммиака, отгонку н-бутанола полностью, разбавление остатка водой, добавление ацетона, отделение осадка, упаривание водно-ацетонового раствора досуха, высушивание, получение целевого продукта в виде белого порошка слегка с желтоватым оттенком.

Description

Изобретение относится к технологии получения лекарственных препаратов фармации и способу получения диосцинина из якорцев стелющихся, являющегося основным действующим веществом лекарственного препарата полиспонина, широко применяемого для лечения и профилактики атеросклероза [1, 2].

Диосцинин представляет собой стероидный гликозид спиростанового ряда, полученный впервые из растения диоскорея Эюксогеа [3] и являющийся главным действующим веществом лекарственного препарата полиспонина, полученного также из указанного растения и обладающего противосклеротическим действием. По химическому строению диосцинин является тетраозидом стероидного сапогенина диосгенина, в состав углеводной цепи которого входят по две молекулы Ь-рамнозы и Э-глюкозы.

Следует отметить, что истощение сырьевой базы Эюксогеа в виду уничтожения корней и корневищ этого растения явилось причиной некоторых проблем в производстве вышеназванного лекарственного препарата, а также полной остановки производства первого аналогичного препарата диоспонина [4, 5].

Изыскание нового растительного сырья, содержащего диосцинин, а также разработка способа его получения являются актуальной задачей фармации.

Известен способ получения стероидных сапонинов ряда спиростана [6] из корней растения стручкового перца Сар81сит аппиит путем экстрагирования 70% метиловым спиртом (5 раз), упаривания, многократного хроматографирования на силикагеле в трех системах (смеси хлороформа с метанолом), ацетилирования индивидуальных фракций уксусным ангидридом в присутствии пиридина, экстрагирования хлороформом, хроматографирования ацетатов на силикагеле, элюирования смесью хлороформа с ацетоном, омыления перацетатов 5%-ным раствором гидроксида калия в метаноле и выделения индивидуального стероидного гликозида.

Недостатками способа являются применение в качестве экстрагента метилового спирта, а также хлороформа, уксусного ангидрида, пиридина, являющихся высокотоксичными, труднодоступными и дорогими растворителями, а уксусный ангидрид - прекурсор;

использование сложных, длительных и трудоемких процессов, таких как многократное хроматографирование на силикагеле в трех системах, элюирование, ацетилирование, омыление.

Наиболее близким способом (прототипом) получения диосцинина является способ получения диосцинина из воздушно-сухих измельченных и обезжиренных хлороформом корневищ Эюксогеа ро1у51асНуа [3], включающий экстракцию сырья 80%-ным метанолом в аппарате Сокслета 3 дня, отгонку метанола, удаление осадка - водно-нерастворимых сапонинов, извлечение сапонинов из водного аммиачного раствора бутанолом, промывание аммиачной водой бутанольной вытяжки, концентрирование бутанола, отделение гигроскопического осадка с последующим промыванием смесью бутанола с эфиром (1:1), растворение осадка в безводном спирте, фильтрование от примеси неорганических солей, осаждение воднорастворимых сапонинов эфиром, которое повторяли дважды, высушивание сапонинов, ацетилиривание уксусным ангидридом в пиридине в течение 48 ч при комнатной температуре, растворение ацетатов в метаноле, фильтрование от парафинообразного вещества, отгонка метанола досуха, обработка бензолом для обезвоживания, растворение ацетатов в четыреххлористом углероде, внесение в колонку с трисиликатом магния, последовательное элюирование сперва четыреххлористым углеродом, затем смесью его с бензолом (1:1), омыление элюатов, промывание бензолом, а затем смесью бензола и хлористого метилена (1:1), растворение индивидуального сапонина в безводном спирте, осаждение вещества смесью эфира с 10%-ным ацетоном, промывание осадка петролейным эфиром и высушивание продукта - диосцинина в пистолете при 137°С в течение 16 ч.

Данный способ имеет следующие недостатки:

1) истощение сырьевых ресурсов - корней и корневищ растения Эюбсогеа. необходимых для получения диосцинина и лекарственного препарата полиспонина;

2) способ очень сложный и многоэтапный, так как используется ацетилиривание, омыление, колоночная хроматография, многократное элюирование и т.д., все эти операции очень трудоемкие;

3) способ дорогостоящий, опасный, вредный для человека, так как используется много различных растворителей, таких как метиловый спирт, хлороформ, эфир, уксусный ангидрид, бензол, четыреххлористый углерод, хлористый метилен, пиридин, которые являются ядовитыми, канцерогенными, опасными, труднодоступными, а уксусный ангидрид и эфир - прекурсоры, реализация которых ограничена.

Задача изобретения состоит в целенаправленном подборе нового, более подходящего растительного сырья, имеющего богатую сырьевую базу, для получения диосцинина, упрощении, удешевлении, уменьшении длительности процесса, устранении токсичности, вредности и опасности способа, повышении степени чистоты целевого продукта.

Поставленная задача решается тем, что в способе получения диосцинина, включающем обезжиривание хлороформом измельченного сырья, удаление менее полярных гликозидов последовательной экстракцией 80%-ным метанолом, отгонку метанола, удаление осадка, промывание аммиачной водой бутанольной вытяжки, концентрирование бутанола, растворение осадка в безводной спирте, осаждение водно-растворимых сапонинов эфиром, предусмотрены следующие отличия: в качестве исходного сырья используют отличающийся от ранее используемого свойственного рода растения Эюксогеа, совершенно

- 1 026930 новый род и вид - якорцы стелющиеся ТпЪи1и8 1сггс51г15. высушенные надземные части которого измельчают, обезжиривают петролейным эфиром, удаляют менее полярные гликозиды последовательной экстракцией 95%-ным этанолом, полярные гликозиды последовательно экстрагируют 50%-ным этанолом, все экстракты, полученные 50%-ным этанолом, объединяют, этанол упаривают, фильтруют водный остаток, гликозиды экстрагируют из водного раствора н-бутанолом (бутанол), промывают н-бутанольный экстракт 10%-ным раствором аммиака, отгоняют н-бутанол полностью, остаток разбавляют водой, добавляют ацетон, осадок отделяют, водно-ацетоновый раствор упаривают досуха и высушивают. Получают хроматографически однородный целевой продукт в виде белого порошка слегка с желтоватым оттенком, представляющего собой диосцинин С₅₁Н₈₂О2₁ мол. масса 1030, температура плавления 208-210°С, |α|²°υ - 86,2 (с 0,5; 50%-ный этанол). Выход целевого продукта составляет 2,08 г (0,42%). Чистоту целевого продукта и отсутствие посторонних примесей устанавливали методом хроматографии на тонких слоях сорбента.

Преимуществом данного способа является то, что в качестве исходного сырья для получения диосцинина в отличие от свойственного рода растения Эюксогеа, сырьевая база которого истощена, предлагается совершенно другой новый род и вид растения - якорцы стелющиеся ТпЪи1и8 ЮггеЧгщ имеющий широкие ареалы распространения и богатые сырьевые ресурсы. Последовательная экстракция сырья петролейным эфиром и 95% этанолом, а также экстракция гликозидов из водного раствора н-бутанолом и промывание н-бутанольного извлечения 10%-ным раствором аммиака позволяют полностью освободиться от жировых, красящих и пектиновых веществ, менее полярных гликозидов (водонерастворимых сапонинов) и других сопутствующих примесей, тем самым обеспечивается высокая степень чистоты целевого вещества. Осаждение более полярных гликозидов (водорастворимых сапонинов) из водного раствора ацетоном значительно ускоряет способ получения диосцинина в индивидуальном чистом виде без применения сложных, трудоемких и длительных процессов, таких как колоночное хроматографическое разделение с последующим элюированием, соответствующее химическое превращение вещества с последующим разложением продукта и т.д., которые могут быть причиной частичной или значительной потери целевого продукта.

Другим преимуществом способа является то, что не используются ядовитые, канцерогенные, опасные, дорогие и труднодоступные растворители.

Между совокупностью существенных признаков и достигаемым техническим результатом существует причинно-следственная связь: использование в качестве сырья якорцев стелющихся ТпЪи1и8 1егге81г18 имеет экологическое значение и не истощает природные ресурсы, так как заявляемое сырье имеет широкие ареалы распространения и богатые сырьевые ресурсы; последовательная экстракция сырья петролейным эфиром и 95% этанолом, а также экстракция гликозидов из водного раствора н-бутанолом и промывание н-бутанольного извлечения 10%-ным раствором аммиака позволяют полностью освободиться от жировых, красящих и пектиновых веществ, менее полярных гликозидов (водонерастворимых сапонинов) и других сопутствующих примесей, чем обеспечивается высокая степень чистоты целевого вещества. Осаждение более полярных гликозидов (водорастворимых сапонинов) из водного раствора ацетоном значительно ускоряет способ получения диосцинина в индивидуальном чистом виде без применения сложных, трудоемких и длительных процессов.

Возможность осуществления заявляемого изобретения показана на следующем примере.

Пример.

500 г высушенной и измельченной надземной части якорцев стелющихся помещали в стеклянную посуду (банку) емкостью 3 л. Для обезжиривания добавляли петролейный эфир до полного покрытия сырья и оставляли на сутки. Через день дополнительно до прежнего уровня добавляли петролейный эфир (чтобы дополнить поглощенную сырьем долю растворителя) и оставляли в течение суток. На следующий день органический растворитель сливали, сырье заливали новой порцией петролейного эфира до полного покрытия сырья и оставляли на сутки. Обезжиривание петролейным эфиром проводили всего 4 раза.

После отделения органического растворителя оставшееся сырье высушивали в обычной комнатной температуре в расстеленном виде до полного удаления растворителя, а затем высушивали в сушильном шкафу при температуре 80°С в течение 10 ч.

Для удаления менее полярных гликозидов обезжиренное сырье помещали в такую же стеклянную посуду, заливали 95%-ным этанолом до полного покрытия и оставляли на сутки. На следующий день спиртовое извлечение сливали и сырье заливали новой порцией 95%-ного этанола. Экстракцию 95%-ным спиртом проводили 3 раза. Для изолирования полярных гликозидов сырье экстрагировали 50%-ным этанолом в указанных условиях четыре раза. Все извлечения, полученные 50%-ным этанолом, объединяли, этанол отгоняли на водяной бане с помощью водоструйного насоса до водного остатка. Водный раствор оставляли на сутки. Выпавший осадок отделяли через бумажный фильтр. Водный фильтрат помещали в делительную воронку, добавляли 150 мл н-бутанола, смесь взбалтывали в течение 15 мин и оставляли для расслоения фаз. н-Бутанольную фазу отделяли от водной. К водной фазе добавляли новую порцию нбутанола (150 мл), взбалтывали, оставляли и н-бутанольную фазу отделяли. Таким образом, экстракцию н-бутанолом проводили 4 раза. Все н-бутанольные извлечения объединяли и трижды промывали 10%ным раствором аммиака (по 150 мл). Из органического экстракта н-бутанол отгоняли полностью. Вод- 2 026930 ный остаток разбавляли водой до 100 мл. К водному раствору добавляли 600 мл ацетона и оставляли на 3

ч. Выпавший осадок отделяли через бумажный фильтр. Водно-ацетоновый фильтрат упаривали досуха и высушивали в сушильном шкафу при 70-80°С до постоянной массы. Выход: 2,08 г (0,42%). Получили белый слегка с желтоватым оттенком хроматографически однородный порошок, представляющий собой дио-сцинин С₅₁Н₈₂О₂₁, мол. масса 1030, температура плавления 208-210°С, [α]²% - 86,2 (с 0,5; 50%-ный этанол). Чистоту целевого продукта и отсутствие посторонних примесей устанавливали методом хроматографии на тонких слоях сорбента.

Литература

1. Машковский М.Д. Лекарственные средства, 15-е издание, Москва 2005, с. 474.

2. Соколова Л.Н., Турова А.Д., Шретер А.И. Диоскорея ниппонская - источник сырья для получения полиспонина - препарата противосклеротического действия. // Растительные ресурсы, 1968, № 1, с. 4345.

3. Мадаева О.С., Рыжкова В.К., Панина В.В. Сапонины Июксогеа ро1у81асйуа XIV. Диосцинин. // Химия природных соединений, 1967, № 3, с. 155-158.

4. Соколова Л.Н., Киченко В.И., Ростоцкий Б.К., Губина Г.П. Диоспонин - новое лекарственное средство для лечения больных атеросклерозом. // Медицинская промышленность СССР, 1961, № 7, с. 4345.

5. Шретер А.И., Задорожный А.М. Итоги работ ВИЛР по созданию новых лечебных препаратов растительного происхождения. // Растительные ресурсы, 1982, № 4, с. 539-547.

6. Гуцу Е.В., Кинтя П.К., Швец С.А., Лазуревский Г.В. Стероидные гликозиды корней Саркюит аппиит. // Химия природных соединений, 1986, № 6, с. 708-712.

Использованные материалы и устройства

1. Колбы различной вместимости: 2 л (1аЬ^аге 8&Н ΌΙΝ|Ι8Ο|Α|Βοτο 3.3, 29/32), 1 л (ОО-17, 29/32).

2. Стеклянная воронка.

3. Делительная воронка.

4. Пульверизатор.

5. Стеклянный баллон (емкотью 3 л).

6. Фарфоровые чашки.

7. Сушильный шкаф (ООБИТЕРМ Р-40).

8. Пластинки для тонкослойной хроматографии ЗйиТоГ' (Чехия), ЗотЬй1 (Ки881а, Кгакпобаг 350072).

9. Водяная баня (НН-8).

10. Установка для перегонки.

11. Петролейный эфир (1_кип=70-100°С).

12. Надземные части якорцев стелющихся Тг1Ьи1и8 ЮггеЧгй (0,5 кг).

Claims (1)

1. Способ получения диосцинина из якорцев стелющихся, включающий обезжиривание измельченного сырья, удаление менее полярных гликозидов последовательной экстракцией, отгонку, удаление осадка, промывание аммиачной водой бутанольной вытяжки, концентрирование бутанола, растворение осадка, осаждение водно-растворимых сапонинов, отличающийся тем, что в качестве исходного сырья используют якорцы стелющиеся Тг1Ьи1и8 1егге81г18, высушенные надземные части которого измельчают, обезжиривают петролейным эфиром, удаляют менее полярные гликозиды последовательной экстракцией 95%-ным этанолом, полярные гликозиды последовательно экстрагируют 50%-ным этанолом, все экстракты, полученные 50%-ным этанолом, объединяют, этанол упаривают, фильтруют водный остаток, гликозиды экстрагируют из водного раствора н-бутанолом, промывают н-бутанольный экстракт 10%ным раствором аммиака, отгоняют н-бутанол полностью, остаток разбавляют водой, добавляют ацетон, осадок отделяют, водно-ацетоновый раствор упаривают досуха и высушивают, получают целевой продукт в виде белого порошка слегка с желтоватым оттенком.