EA023499B1 - Синтетические аналоги природного легочного сурфактантного белка sp-b и их применение - Google Patents
Синтетические аналоги природного легочного сурфактантного белка sp-b и их применение Download PDFInfo
- Publication number
- EA023499B1 EA023499B1 EA201000161A EA201000161A EA023499B1 EA 023499 B1 EA023499 B1 EA 023499B1 EA 201000161 A EA201000161 A EA 201000161A EA 201000161 A EA201000161 A EA 201000161A EA 023499 B1 EA023499 B1 EA 023499B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- bie
- agd
- suz
- surfactant
- aba
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/785—Alveolar surfactant peptides; Pulmonary surfactant peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Изобретение относится к аналогам природного легочного сурфактантного белка SP-B для создания реконструированного сурфактанта в смеси с липидным носителем. Также изобретение относится к применению аналогов белка SP-B для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения респираторного дистресс-синдрома (RDS) у недоношенных детей или взрослых (ARDS), синдрома мекониевой аспирации (MAS) и бронхолегочной дисплазии (BPD).
Description
Настоящее изобретение относится к аналогам пептидов природного сурфактантного белка 8Р-В и их применению в получении препаратов для профилактики и/или лечения респираторного дистресссиндрома (ΚΌ8) и других респираторных расстройств.
Предшествующий уровень техники
Человеческое легкое состоит из большого числа маленьких воздушных мешочков, называемых альвеолами, в которых происходит газообмен между кровью и воздушными пространствами в легких. У здоровых индивидуумов этот обмен опосредуется присутствием белоксодержащего сурфактантного комплекса, который предохраняет легкие от коллапса в конце выдоха.
Комплекс легочного сурфактанта состоит, главным образом, из липида и содержит незначительные количества различных белков. Отсутствие достаточных уровней этого комплекса приводит к дисфункции легкого. Этот синдром называется респираторным дистресс-синдромом (ΚΌ8 от англ. РехриаЮгу Όίδίτθδδ 8уибгоше) и обычно поражает недоношенных младенцев.
Указанный синдром эффективно лечат препаратами модифицированного природного сурфактанта, экстрагированного из легких животных.
Основными компонентами этих препаратов сурфактанта являются фосфолипиды, такие как 1,2дипальмитоил-8и-глицеро-3-фосфохолин, широко известный как дипальмитоилфосфатидилхолин (ΌΡΡΟ), фосфотидилглицерин (РС) и сурфактантные гидрофобные белки В и С (8Р-В и 8Р-С), которые, как известно, способны воздействовать на поверхностную активность указанных препаратов.
Вследствие недостатков препаратов сурфактанта из животных тканей, таких как сложные процессы производства и стерилизации и возможная индукция иммунных реакций, были разработаны синтетические сурфактанты, имитирующие состав модифицированных природных сурфактантов.
Указанные синтетические сурфактанты известны как реконструированные сурфактанты.
Однако оказалось, что разработка клинически активных реконструированных сурфактантов является сложной, поскольку выделение значительных количеств природных гидрофобных белков 8Р-В и 8Р-С является дорогостоящим и трудоемким.
Более того, производство этих белков методами рекомбинантных ДНК требует значительных усилий в плане конструирования и получения оптимальных экспрессирующих систем хозяин/вектор. В дополнение к этому, требуются значительные усилия для разработки эффективных стратегий выделения для разделения и очистки интересующего экспрессируемого белка от нежелательного материала.
В частности, белок 8Р-В характеризуется высокой молекулярной массой, чрезвычайной гидрофобностью и большим количеством остатков цистеина, которые значительно осложняют его промышленное производство посредством выделения из природных материалов или его экспрессию посредством стратегий рекомбинантных ДНК.
Поэтому медицинское сообщество нуждается в простых, легких в получении синтетических аналогах белка 8Р-В, способных имитировать все свойства природного белка.
Более конкретно, существует потребность в синтетических аналогах белка 8Р-В, которые, при смешивании с синтетическими аналогами природного белка 8Р-С и с липидным носителем, увеличивают способность препаратов реконструированного сурфактанта эффективно поддерживать раскрытое состояние альвеол в конце выдоха.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к полипептиду для получения синтетического легочного сурфактанта, являющемуся аналогом природного сурфактантного белка 8Р-В и имеющему аминокислотную последовательность С\УБСВЛБ11<В-8ЕО-РОБУСВБУБВС. который отличается тем, что петлевой мотив 8ЕО имеет аминокислотную последовательность ΡΝΚ.ΥΕΤ или ΥΝΟΚ.
В одном воплощении полипептида по изобретению петлевой мотив имеет аминокислотную последовательность ΡΝΕΥΣΤ.
В более конкретном воплощении полипептида по изобретению указанный полипептид содержит внутримолекулярную дисульфидную связь между двумя остатками цистеина в положениях 1 и 27 и/или между двумя остатками цистеина в положениях 4 и 21.
В другом воплощении полипептида по изобретению петлевой мотив имеет аминокислотную последовательность ΥΝΟΚ.
В более конкретном воплощении полипептида по изобретению указанный полипептид содержит внутримолекулярную дисульфидную связь между двумя остатками цистеина в положениях 1 и 25 и/или между двумя остатками цистеина в положениях 4 и 19.
Кроме того, настоящее изобретение относится к реконструированному сурфактанту, содержащему полипептид по изобретению в смеси с липидным носителем.
В одном воплощении реконструированный сурфактант по изобретению дополнительно содержит синтетический пептидный аналог природного сурфактантного белка 8Р-С.
В частности, в реконструированном сурфактанте по изобретению липидный носитель содержит смесь фосфолипидов.
Настоящее изобретение также относится к применению полипептида по изобретению для изготов- 1 023499 ления лекарственного средства для профилактики и/или лечения респираторного дистресс-синдрома (КН8) у недоношенных детей.
Наконец, изобретение относится к применению полипептида по изобретению для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболевания, связанного с дефицитом или дисфункцией сурфактанта, выбранного из группы, состоящей из КН8 у взрослых (АКЭ8), синдрома мекониевой аспирации (МА8) и бронхолегочной дисплазии (ΒΡΌ).
Описание графических материалов
На чертеже представлена аминокислотная последовательность человеческого белка 8Ρ-Β. Определения
Респираторную функцию после обработки ίη νίνο экзогенными сурфактантными препаратами определяют путем измерения двух параметров:
1) дыхательного объема, который является показателем растяжимости легкого и
2) объема газа в легких, который является показателем расширения воздушного пространства или раскрытого состояния альвеол в конце выдоха и вследствие этого способности образовывать стабильную фосфолипидную пленку в альвеолах в конце выдоха.
Белок 8Ρ-Β, который также был определен как 8Ρ18, представляет собой димерный белок 17 кДа, в котором мономерная цепь представляет собой полипептид из 79 остатков и имеет три внутрицепьевые дисульфидные связи, соединяющие Су§8 с Су§77, Су§11 с Су§71, и Су§35 с Су§46. В своей природной форме человеческая субъединица 8Ρ-Β существует в виде гомодимера с дисульфидной связью, имеющего внутрицепьевую дисульфидную связь по Су8 48. Последовательность мономерной цепи человеческого 8Ρ-Β представлена на фигуре.
Используемый в данной заявке термин реконструированный сурфактант означает липидный носитель, к которому были добавлены полипептидные аналоги сурфактантных белков, полученные с использованием рекомбинантной технологии или способов синтеза.
Термин липидный носитель означает смесь фосфолипидов и возможно другие липидные компоненты, например нейтральные липиды, такие как триацилглицерины, свободные жирные кислоты и/или холестерин.
Термины полипептид и пептид используются в данной заявке взаимозаменяемо для обозначения линейного ряда из не более чем примерно 60 аминокислотных остатков, связанных друг с другом посредством пептидных связей между альфа-амино- и карбоксильной группами соседних остатков.
Термин полипептидные аналоги природного сурфактантного белка 8Ρ-Β включает пептиды, имеющие аминокислотную последовательность, в которой по сравнению с природными белками одна или более аминокислот отсутствуют или заменены другими аминокислотами, при условии, что полипептиды в смеси с липидным носителем демонстрируют активность легочного сурфактанта.
Термин полипептидные аналоги природного сурфактантного белка 8Ρ-Ο' включает полипептиды, имеющие аминокислотную последовательность, в которой по сравнению с природными белками одна или более аминокислот отсутствуют или заменены другими аминокислотами, при условии, что полипептиды в смеси с липидным носителем демонстрируют активность легочного сурфактанта.
Полипептиды, демонстрирующие консервативные замены, представляют собой полипептиды, в которых один аминокислотный остаток заменен другим, биологически подобным остатком. Примеры консервативных замен включают замену одного гидрофобного остатка, такого как изолейцин, валин, лейцин или метионин, другим, или замену одного полярного остатка другим, таким как между аргинином и лизином или между глутаминовой и аспарагиновой кислотами.
Термин консервативная замена также включает использование замещенной аминокислоты вместо незамещенной родительской аминокислоты, при условии, что полученный полипептид также демонстрирует необходимую активность сурфактанта.
Кроме того, термин консервативная замена включает замены, отличные от предыдущих замен, при условии, что полученный полипептид сохраняет вторичную структуру, а также необходимую активность сурфактанта родительского полипептида.
Аминокислотные последовательности представлены в соответствии с трехбуквенным кодом аминокислотой, которая несет свободную аминогруппу на левом конце (аминоконец), и аминокислотой, которая несет свободную карбоксильную группу на правом конце (карбоксильный конец).
Все аминокислотные остатки, идентифицированные в данной заявке, имеют природную Ьконфигурацию, и последовательности, идентифицированные в данной заявке, представлены в соответствии со стандартными аббревиатурами аминокислотных остатков, как показано в последующей Таблице соответствия.
- 2 023499
Таблица соответствия
| АМИНОКИСЛОТА | СИМВОЛ | |
| Однобуквенный | Трехбуквенный | |
| Глицин | Θ | О1у |
| ί-пролин | Р | Рго |
| 1-изолейцин | 1 | Не |
| ί-лейцин | ί | 1еи |
| ί-тирозин | Υ | туг |
| 1-цистеин | С | Суз |
| 1-триптофан | νν | Тгр |
| ί-аланин | А | А1а |
| ί-лизин | К | 1уз |
| ί-аргинин | В | Агд |
| ί-глутамин | О | С1п |
| ί-метионин | М | Мег |
| ί-серин | 5 | Вег |
| ί-валин | V | Уа) |
| ί-аспарагин | N | Азп |
| ί-аспарагиновая кислота | ϋ | Азр |
| ί-глутаминовая кислота | Е | ΘΙυ |
| ί-гистидин | Н | Н)з |
| ί-треонин | т | ТЬг |
| ί-фенилаланин | Р | РКе |
| 1-норлейцин | - | п!еи |
| ί-орнитин | - | Огп |
Подробное описание изобретения
Полипептиды по изобретению включают Ν-концевую последовательность 8-17 и С-концевую последовательность 67-78 белка 8Р-В, связанных через аминокислотную последовательность, способную образовывать петлевой мотив (1иги той!), выбранный из группы, состоящей из ΡΝΡΥίΤ и ΥΝΟΚ.
Указанные полипептиды также включают модификации, например, где некоторые из аминокислотных остатков последовательностей природного белка 8Р-В были заменены и/или отсутствуют.
В другом случае они могут также включать дополнительные аминокислотные остатки на аминоили карбоксильном конце. Указанные модификации могут служить для усиления экспрессии полипептида или могут служить в качестве линкерной последовательности, но предпочтительно не уменьшают или не влияют каким-либо иным образом на биологическую активность полипептида по настоящему изобретению.
В одном воплощении полипептиды по изобретению могут находиться в форме молекулы с дисульфидной связью, где внутримолекулярная дисульфидная связь находится между остатком Сук в положении 4 и остатком Сук в С-концевой части.
Предпочтительно, указанные полипептиды могут находиться в форме молекулы с дисульфидной связью, где внутримолекулярная дисульфидная связь находится между двумя остатками Сук в положениях 1 и 27 и/или между двумя остатками Сук в положениях 4 и 21.
Предпочтительно, указанные полипептиды могут находиться в форме молекулы с дисульфидной связью, где внутримолекулярная дисульфидная связь находится между двумя остатками Сук в положениях 1 и 25 и/или между двумя остатками Сук в положениях 4 и 19.
Предпочтительные полипептиды представлены ниже:
ΟννίΟΡΑίΙΚΒΡΝΡΥίΤΡΟίνΟΡίνίΡΟ ()с)
ΟννίΟΒΑίΙΚΚΥΝΘΚΡΟίνΟΒίνίΚΟ (М)
Полипептиды (1с) и (И) в форме молекул с дисульфидной связью, где внутримолекулярные дисульфидные связи находятся между остатками Сук, ниже обозначены как полипептиды ох-(1с) и ох-(И).
Полипептиды по изобретению при смешивании с липидным носителем, содержащим фосфолипиды, образуют реконструированный сурфактант, способный уменьшать поверхностное натяжение до значений, близких к нулю.
Авторы изобретения также обнаружили, что в модели ΡΌδ, где недоношенного новорожденного лечили без применения положительного давления в конце выдоха (РЕЕР), полипептиды по изобретению при смешивании с конкретными синтетическими аналогами белка δР-С и с подходящим липидным носи- 3 023499 телем, улучшают респираторную функцию, выраженную посредством дыхательных объемов, в степени, сопоставимой с той, которая достигается после введения модифицированного природного сурфактанта.
Более того, оказалось, что указанный препарат реконструированного сурфактанта увеличивает объем газа в легких, что является показателем раскрытого состояния альвеол в конце выдоха.
Полипептиды по изобретению могут быть синтезированы любыми способами, известными специалистам в области полипептидов.
Многие доступные способы можно найти в ЕМ. 81е\\лгб апб !И. Уоипд, 8оЬб РЬаке Рерббе 8уп!Ьеык, \ν.Η. Ргеешап Со., 8ап Ргапс1ксо, 1969, и 1. Ме1епЬо£ег, Ногтопа1 Рго1ешк апб Рерббек, Уо1.2, р. 46, Асабет1с Ргекк Уогк), 1983, для твердофазного пептидного синтеза и Е. 8сйгобег апб К. КиЬке, ТЬе Рерббек, Уо1. 1, Асабетю Ргекк (Νρ» Уогк), 1965, для классического синтеза в растворе. Полипептиды по изобретению также могут быть получены с использованием способа твердофазного синтеза, первоначально описанного Мегббе1б в 1. Ат. СЬет. 8ос. 85: 2149-2154 (1963). Другие способы синтеза полипептида можно найти, например, в М. Вобапк/ку е! а1., Рерббе 8уп1Ьек1к, 1оЬп \νίΚ\· & 8опк, 2б Еб., (1976), а также в других справочниках, известных специалистам в данной области техники.
Соответствующие защитные группы для использования в таких синтезах можно найти в вышеупомянутых руководствах, а также в ΕΡ.ν. МсОт1е, Рго1есбуе Сгоирк ш Огдатс СЬет1к1гу, Р1епит Ргекк, \е\\ Уогк, ΝΥ (1973).
В целом, эти способы включают последовательное добавление одного или более аминокислотных остатков или соответствующим образом защищенных аминокислотных остатков к растущей пептидной цепи.
Используя твердофазный синтез в качестве примера, защищенную или дериватизированную аминокислоту присоединяют к инертной твердой подложке через ее незащищенную карбоксильную или аминогруппу. Защитные группы для амино- или карбоксильной группы затем избирательно удаляют и добавляют следующую аминокислоту в последовательности, имеющую комплементарную (амино- или карбоксильную) группу, соответствующим образом защищенную, и подвергают взаимодействию в условиях, подходящих для образования амидной связи с остатком, уже присоединенным к твердой подложке. Защитную группу для амино- или карбоксильной группы затем удаляют из вновь добавленного аминокислотного остатка и затем добавляют следующую аминокислоту (соответствующим образом защищенную) и т.д.
После того, как все желаемые аминокислоты были соединены в соответствующей последовательности, оставшиеся защитные группы для концевых и боковых групп (и твердую подложку) удаляют последовательно или одновременно с получением конечного полипептида.
Неочищенный полипептид, как правило, очищают с помощью ВЭЖХ и выделяют с помощью лиофилизации.
Полипептид может быть получен в форме фармацевтически приемлемой соли. Возможно, полученная соль может быть превращена в другой тип соли с помощью колонки, упакованной подходящей ионообменной смолой в соответствии с методикой, хорошо известной специалисту.
Полипептиды по изобретению также могут быть получены с использованием методов рекомбинантных нуклеиновых кислот, хорошо известных в данной области техники.
Поэтому последовательности ДНК, кодирующие полипептиды по изобретению, рекомбинантные экспрессирующие векторы, способные экспрессировать их, и соответствующие способы включены в настоящее изобретение.
Последовательность ДНК, кодирующая полипептид по изобретению, может быть синтезирована химическими способами, хорошо известными специалисту. Затем сегмент ДНК может быть лигирован в экспрессирующий вектор, и хозяин, трансформированный им, может быть использован для производства полипептида.
При химическом синтезе кодирующей последовательности, любые желаемые модификации могут быть получены просто путем замены соответствующих оснований на основания, кодирующие природную аминокислотную последовательность.
Рекомбинантные экспрессирующие векторы, способные экспрессировать полипептид по изобретению, и способы их применения для производства полипептидов по изобретению включены в настоящее изобретение.
Рибонуклеиновокислотные (РНК) эквиваленты описанных выше сегментов ДНК также включены в данное изобретение.
Важной и хорошо известной особенностью генетического кода является его избыточность. То есть, для большинства аминокислот, используемых для получения белков, более чем один кодирующий нуклеотидный триплет (кодон) может кодировать или обозначать конкретный аминокислотный остаток. Поэтому множество различных нуклеотидных последовательностей может кодировать конкретную аминокислотную последовательность. Такие нуклеотидные последовательности рассматриваются функционально эквивалентными, поскольку они могут привести к продуцированию одной и той же аминокислотной последовательности во всех организмах.
Полипептиды по изобретению могут быть смешаны с фармацевтически приемлемым липидным но- 4 023499 сителем с образованием реконструированного сурфактанта.
Предпочтительно массовые соотношения между полипептидом и липидным носителем находятся в диапазоне от около 1:5 до около 1:5000, предпочтительно от около 1:10 до около 1:2000 и более предпочтительно от около 1:50 до около 1:1000. В более предпочтительном воплощении массовое соотношение полипептид : липидный носитель находится в диапазоне от около 1:5 до около 1:1000, предпочтительно от около 1:7 до около 1:500 и более предпочтительно от около 1:10 до около 100.
Предпочтительно липидный носитель включает фосфолипиды, которые содержатся в препаратах природного легочного сурфактанта, например фосфатидилхолины (РС), такие как дипальмитоилфосфатидилхолин (ЭРРС) и пальмитоилолеоилфосфатидилхолин (РОРС), и фосфатидилглицерины (РС), такие как пальмитоилолеоилфосфатидилглицерин (РОРС) и дипальмитоилфосфатидилглицерин (ЭРРС).
Другие фосфолипиды, которые могут быть предпочтительно использованы, представляют собой фосфатидилинозитолы (Р1), фосфатидилэтаноламины (РЕ), фосфатидилсерины и сфингомиелины (8М).
В конкретном воплощении липидный носитель может содержать дополнительные компоненты, например, нейтральные липиды, такие как триацилглицерины, свободные жирные кислоты и/или холестерин.
Реконструированный сурфактант может содержать один или более полипептидов по изобретению или может дополнительно содержать синтетический пептидный аналог природного сурфактантного белка 8Р-С, такого, как раскрытые в \УО 95/32992, \УО 00/47623 и \УО 03/097695.
Реконструированные сурфактанты, содержащие полипептид по изобретению, могут быть получены смешиванием раствора или суспензии указанного полипептида, возможно раствора или суспензии другого пептида и липидного носителя, затем последующей сушкой смеси.
В других случаях они могут быть получены лиофилизацией или сушкой распылением в соответствии со способами, известными в данной области техники.
Введение указанного препарата реконструированного сурфактанта может быть осуществлено способом, известным специалисту в данной области техники, предпочтительно посредством интратрахеальной инстилляции (инфузия или болюс). В другом случае введение может быть осуществлено посредством аэрозолизации или распыления.
Препараты предпочтительно вводят в форме раствора, дисперсии, суспензии или сухого порошка. Предпочтительно, препараты содержат реконструированный сурфактант, растворенный или суспендированный в подходящем растворителе или среде для ресуспендирования.
Предпочтительно препараты поставляют в виде суспензии в забуференном физиологическом растворе в одноразовых стеклянных флаконах. Предпочтительно концентрация реконструированного сурфактанта (выраженная в виде содержания фосфолипида) варьирует от примерно 2 до примерно 160 мг сурфактанта на мл, предпочтительно от 10 до 100 мг/мл, более предпочтительно от 20 до 80 мг/мл.
Указанные препараты могут дополнительно содержать электролиты, такие как соли кальция, магния и/или натрия (например, хлорид кальция или хлорид натрия).
Препараты в форме водной суспензии можно также вводить посредством распыления.
В случае использования аэрозольного введения, реконструированный сурфактант поставляют в мелкодисперсной форме вместе с пропеллентом. Полезные пропелленты, такие как гидрофторалканы, типично представляют собой газы в условиях окружающей среды, которые конденсируются при давлении.
Аэрозоль упакован в контейнер, снабженный подходящим клапаном, чтобы ингредиенты могли быть сохранены под давлением до высвобождения.
Препараты, полученные с полипептидами по изобретению, применимы для лечения или профилактики респираторного дистресс-синдрома (ΡΌ8) у недоношенных детей или при лечении или профилактики других заболеваний, связанных с дефицитом или дисфункцией сурфактанта, включая ΚΌ8 у взрослых (ΑΚΌ8), синдром мекониевой аспирации (МА8) и бронхолегочную дисплазию (ВРЭ).
Они также могут быть полезны для профилактики и/или лечения других респираторных расстройств, таких как пневмония, бронхит, СОРЭ (хроническая обструктивная болезнь легких), астма и кистозный фиброз, а также для лечения серозного среднего отита (экссудативного отита).
Следующий пример иллюстрирует изобретение более подробно.
Пример 1. Синтез и очистка полипептида ох-(1с).
Полипептид ох-(1с) получали стандартными способами 8РР8 (твердофазный пептидный синтез), основанными на Ртос-химии, в соответствии со схемой 1, описанной ниже.
- 5 023499
Схема 1
Ртос-Су5(Тг1)-Смола Ванга
Ртос-расщепление: 20% пиперидин β ОМР Сометание;Ртос-АА-ОН/ТВТи/О1РЕА=3/2,Т/4,5 в ОМР
Вас*Сух(Тг()-Тгр(Вое)4.еи*Су5(Ае[л)Агд(РЬ?)А1я4-еи-ие-4.у5(Ваб)Агд(РЬЛ‘ РКе-А5п(№)Агд(РЬГ)-Туг<ГВи)-1»и-ТЬг(1Ви)-Рго-а1п(Т«)-1-ви-Уа1-Сук(Аст)Агд(РЬ04.еи-Уа1-Ьеи<Агд(РЬГ)-Су5(ТН)*Смола Ванга
ТРА ί ΕϋΤ !ΤΙΡ5 ί Н2О = ВО / 10 / 5 ί5
Н-С71-Тгр*1еи-Су5(Ав1П)-Агд+А1аЧ.еи'11в-1рВ'Агд-РКачАвп-Аг|г-ТугЧ.аи-Т11Г-РгеО1л*1аи-Уа1-Су2(Аст)-Агр-1аи*Уа1-1еи’А|д*Су|-ОН (восстановленный)
1. Н20/диоксан=1/1, рН 7,5, воздух
2. Преп. ВЭЖХ, РР-С18, градиент АСЫ в 0,1% ТРА
3. Лиофилизация
Н*Су5-Тгр-кеи-Су$САегп)-Агд-Л1а-1.еи41в*1.у1*Агд*РМе-А9П*Агд-Туг-ке11-Т1тг*Рго(ЗпАеи-Уа1-Су5(Аегп]-АгдЧ.еи-¥1[-1.еи-Агд-Су5-0Н (Дисульфидная связь между Суз1 и Суз27)
1. Н2О/АсОН, 1г в МеОН
2. Преп. ВЭЖХ, КР-С18, градиент ΑΟΝ в 0,1% ТРА 11 3. Лиофилизация
Н-Су5-Тгр-кеи-Су8-Агд-А1а-1еи4[е-1у5-Агд-РКв-Азп-Агд-Ту^еи-ТКгРга-С1пиеи-Уа1-Оу8-АгдЧ.еи-УаИеи-Агв'Су$-ОН(трифторацетатнаясоль) (Дисульфидная связь между Суз1 и Суз27/Суз4 и Суз21)
После твердофазного синтеза неочищенный пептид без дисульфидных мостиков отщепляли от смолы стандартными способами, затем дисульфидные мостики формировали селективно посредством двух различных стадий окисления.
Для селективного образования дисульфидных мостиков выбрали определенный тип защиты для боковых групп четырех цистеинов в процессе синтеза. В способе, показанном на схеме 1, Сук1 и Сук27 вводили в виде Ртос-Сук(Тг1)-ОН во время δΡΡδ, в то время как Сук4 и Сук21 связывали в виде соответствующих Аст-производных.
Первый дисульфидный мостик формировали посредством окисления воздухом, и пептид, имеющий один мостик, очищали с помощью систем ВЭЖХ и выделяли лиофилизацией. Второй дисульфидный мостик формировали посредством окисления йодом, и конечный пептид очищали с помощью системы ВЭЖХ и выделяли лиофилизацией.
Чистоту конечного полипептида проверяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с обращенной фазой, используя колонку С18, и она оказалась равной 92%.
Его молекулярную массу определили с помощью ИЭР-МС.
Выход: 1,73 г (2,4%).
Пример 2. Синтез и очистка полипептида ох-(И).
Полипептид ох-(И) получали сходным образом в соответствии со схемой 2, изложенной ниже. Схема 2
Рт об-Су5(Тге}-Смола Ванга
Ртос-расщепление: 20% пиперидин в ОМР Сочетание:Ртос-АА-ОН/ТВТи/01РЕА=3/2,7/4,5 в ОМР
Вое-Суз(ТП)-Тгр(Вое)-1.аи-Суз{Ает]-Лгд{РМ)-А1а-кеи-Не-1-уз(Во«3-Агя(РМ)Ту^Ви)-А5п(ТП)-С1у-1уз(Вос)-Рго-С1п(ТЛ)-кеиАа1-Суз(Аст)Агд(РЬЗгш-УаНеи-Агд(РЫ)-Су5(Тг1) -Смола Ванга
ТРА / ЕОТ / ΤΙΡ5 / Н2О = 30 /10 / 5 Ζ 5
Н-Су5-Тгр*(.еи-Сук£Аегл)5Агд'А1а*1.еи*1!е-1.у5-Агд-ТугА5П-6[у*ку5-РгобГп-Ьеи-йа) *Су 5{Ает)-Агд-1_еи-УгМ-еи-Агд-Су5-ОН (восстановленный)
1. Н2О/диоксан=1/1, рН 7,5, воздух
2. Преп. ВЭЖХ. РР-С18. градиент ΑΟΝ в 0.1% ТРА
3. Лиофилизация
Н*Су5-Тгу4.ви-Су5[Ает)-Агд-А1а-[_еи-!1е-Ьу5-Агд-ТугА5П-С1у-1.у5-Рго(31л4_еи-Уа1>-Сух(Асп1)Агд4_еиЛ,аМеи-Агд-Су$-ОН (Дисульфидная связь между Суз1 и Суз25)
1. Н2О/АсОН, ЬвМеОН
2. Преп. ВЭЖХ, РР-С18, градиент АСИ в НгО, содержащей №СЮ*
3. Прел. ВЭЖХ, ЯР-С18, градиент ΑΟΝ в 0,1% ТРА ’ ( 4. Лиофилизация
Н-Су>-Тгр-1_аи-Суж-Агд-А1а-1еи-11е-[-у5-Агд-Туг-А5Л-С1у-1.у5-Рго-С1п1еи-УШ-Оу5тАгд-1.еи-УхЬ1.еи-Ага-Су5-ОН(трифторацетатнаясоль) (Дисульфидная связь между Сузт и Су825/Суз4 и Суз19)
- 6 023499
Введение дисульфидных мостиков между Суз1 и Суз27 и между Суз4 и Суз21, очистку и выделение осуществляли, как изложено в примере 1.
Чистоту конечного полипептида проверяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с обращенной фазой, используя колонку С18, и она оказалась равной 86%.
Его молекулярную массу определили с помощью ИЭР-МС.
Выход: 0,81 г (2,4%).
Обозначения
АА-ОН - аминокислота;
АСА - ацетонитрил;
АсОЕ! - этилацетат;
АсОН - уксусная кислота;
Аст - ацетамидометил;
Вос - трет-бутилоксикарбонил; п-ВиОН - н-бутанол;
!Ви - трет-бутил;
Э1РЕА - Ν,Ν-диизопропилэтиламин;
ΌΜΕ - Ν,Ν-диметилформамид;
ЕЭТ - 1,2-этандитиол;
ИЭР-МС - масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением;
Етос - 9-флуоренилметилоксикарбонил;
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография;
Еуо - лиофилизация;
Ми - петилтритил;
РВЕ - 2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-сульфонил;
8РР8 - твердофазный пептидный синтез;
ТВТи - 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония тетрафторборат;
ТЕА - трифторуксусная кислота;
Т1Р8 - триизопропилсилил;
ΊΊ1 - тритил.
Перечень последовательностей <110> Кьези Фармачеутичи С.п.А.
<120> СИНТЕТИЧЕСКИЕ ПОВЕРХОСТНО-АКТИВНЫЕ ПЕПТИДЫ ЛЕГКИХ <130> 1849еиг <160> 8 <170> РаРепЫп νβΓ5ίοη 3.3 <210> 1 <211> 27 <212> ПРТ <213> искусственная последовательность <220>
<223> синтетический пептид <400> 1
Суз Ьей Ьей Суз Агд А1а Ьей Не Ьуз Агд РЬе Азп Агд Туг Ьей ТЬг 15 10 15
Рго С1п Ьей Уа1 Суз Агд Ьей Уа1 Ьей Агд Суз 20 25 <210> 2 <211> 25 <212> ПРТ <213> искусственная последовательность <220>
<223> синтетический пептид <400> 2
Суз Ьей Ьей Суз Агд А1а Ьей Не Ьуз Агд Туг Азп С1у Ьуз Рго С1п 15 10 15
Ьей Уа1 Суз Агд Ьей \7а1 Ьей Агд Суз 20 25 <210> 3 <211> 27 <212> ПРТ <213> искусственная последовательность <220>
<223> синтетический пептид <400> 3 ’
Суз Тгр Ьей Суз Агд А1а Ьей Не Ьуз Агд РЬе Азп Агд Туг Ьей ТЬг 15 10 15
Рго С1п Ьей Уа1 Суз Агд Ьей Уа1 Ьей Агд Суз 20 25
- 7 023499 <210> 4 <211> 27 <212> ПРТ <213> искусственная последовательность <220>
<223> синтетический пептид <400> 4
| Суз Тгр Ьеи Суз Агд А1а Ьеи | Не | Ьуз Агд Туг Азп С1у Ьуз 10 | Рго С1п 15 | |||||||
| 1 | 5 | |||||||||
| Ьеи | Уа1 | Суз | Агд | Ьеи | Уа1 | Ьеи | Агд | Суз | ||
| 20 | 25 |
<210> 5 <211> 28 <212> ПРТ <213> искусственная последовательность <220>
<223> синтетический пептид <400> 5
| А1а | Ьеи | Ьеи | Суз | Агд | А1а | Ьеи | 11е | Ьуз | Агд | РЬе | Азп Агд | Туг Ьеи ТЬг |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||
| Рго | С1п | Ьеи | Уа1 | Суз | Агд | Ьеи | Уа1 | Ьеи | Агд | А1а | А1а | |
| 20 | 25 |
<210> б <211> 26 <212> ПРТ <213> искусственная последовательность <220>
<223> синтетический пептид <400> 6
| А1а 1 | Ьеи Ьеи | Суз | Агд А1а 5 | Ьеи | 11е Ьуз | Агд Туг Азп С1у Ьуз 10 | Рго С1п 15 | |||
| Ьеи | Уа1 | Суз | Агд | Ьеи | Уа1 | Ьеи | Агд | А1а | А1а | |
| 20 | 25 |
<210> 7 <211> 28 <212> ПРТ <213> искусственный пептид <220>
<223> синтетический пептид <400> 7
| С1у Ьеи Ьеи Суз Агд А1а Ьеи 11е Ьуз Агд РЬе Азп Агд Туг Ьеи ТЬг | ||||||||||
| 1 Рго С1п Ьеи | 5 | 10 | 15 | |||||||
| \7а1 Суз Агд Ьеи 20 | Уа1 | Ьеи Агд 25 | С1у С1у | |||||||
| <210> <211> <212> <213> | 8 26 ПРТ искусственная последовательность | |||||||||
| <220> <223> | синтетический пептид | |||||||||
| <400> | 8 | |||||||||
| С1у Ьеи 1 | . Ьеи | Суз Агд А1а Ьеи 5 | 11е | Ьуз | Агд 10 | Туг | Азп | С1у | Ьуз | Рго С1п 15 |
| Ьеи Уа1 | Суз | Агд Ьеи Уа1 Ьеи 20 | Агд | С1у 25 | С1у |
- 8 023499
Claims (10)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Полипептид для получения синтетического легочного сурфактанта, являющийся аналогом природного сурфактантного белка ЗР-В и имеющий аминокислотную последовательность С^БСКАБЖКЗЕО-РОБУСКБУБКС, который отличается тем, что петлевой мотив ЗЕО имеет аминокислотную последовательность ΕΝΚΥΕΤ или ΥΝΟΚ.
- 2. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что петлевой мотив имеет аминокислотную последовательность ΕΝΚΥΕΤ.
- 3. Полипептид по п.2, содержащий внутримолекулярную дисульфидную связь между двумя остатками цистеина в положениях 1 и 27 и/или между двумя остатками цистеина в положениях 4 и 21.
- 4. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что петлевой мотив имеет аминокислотную последовательность ΥΝΟΚ.
- 5. Полипептид по п.4, содержащий внутримолекулярную дисульфидную связь между двумя остатками цистеина в положениях 1 и 25 и/или между двумя остатками цистеина в положениях 4 и 19.
- 6. Реконструированный сурфактант, содержащий полипептид по любому из пп.1-5 в смеси с липидным носителем.
- 7. Реконструированный сурфактант по п.6, дополнительно содержащий синтетический пептидный аналог природного сурфактантного белка ЗР-С.
- 8. Реконструированный сурфактант по п.6 или 7, где липидный носитель содержит смесь фосфолипидов.
- 9. Применение полипептида по пп.1-5 для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения респираторного дистресс-синдрома (КОЗ) у недоношенных детей.
- 10. Применение полипептида по пп.1-5 для изготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения заболевания, связанного с дефицитом или дисфункцией сурфактанта, выбранного из группы, состоящей из КОЗ у взрослых (АКОЗ), синдрома мекониевой аспирации (МАЗ) и бронхолегочной дисплазии (БРО).
РЬе 1 Рго Не Рго Ьеи 5 Рго Туг Суз Тгр Ьеи ЬО Суз Агд АЬа Ьеи ЬЬе Ь5 Ьуз Агд Не СЬп АЬа 20 МеЬ ЬЬе Рго Ьуз СЬу 25 АЬа Ьеи АЬа УаЬ АЬа 30 УаЬ АЬа СЬп УаЬ Суз 35 Агд УаЬ УаЬ Рго Ьеи 40 УаЬ АЬа СЬу СЬу ЬЬе 45 Суз СЬп Суз Ьеи АЬа 50 СЬи Агд Туг Зег УаЬ 55 ЬЬе Ьеи Ьеи Азр ТЬг 60 Ьеи Ьеи СЬу Агд Мер 65 Ьеи Рго СЬп Ьеи УаЬ 70 Суз Агд Ьеи УаЬ Ьеи 75 Агд Суз Зег Мер
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP07114083A EP2022798A1 (en) | 2007-08-09 | 2007-08-09 | Synthetic pulmonary surfactant peptides |
| PCT/EP2008/005842 WO2009018908A1 (en) | 2007-08-09 | 2008-07-17 | Synthetic pulmonary surfactant peptides |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201000161A1 EA201000161A1 (ru) | 2010-08-30 |
| EA023499B1 true EA023499B1 (ru) | 2016-06-30 |
Family
ID=39207936
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201000161A EA023499B1 (ru) | 2007-08-09 | 2008-07-17 | Синтетические аналоги природного легочного сурфактантного белка sp-b и их применение |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8148492B2 (ru) |
| EP (2) | EP2022798A1 (ru) |
| JP (1) | JP5441904B2 (ru) |
| KR (1) | KR101516451B1 (ru) |
| CN (2) | CN108676088A (ru) |
| AT (1) | ATE503768T1 (ru) |
| AU (1) | AU2008286026B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0813619B1 (ru) |
| CA (1) | CA2695805C (ru) |
| DE (1) | DE602008005901D1 (ru) |
| EA (1) | EA023499B1 (ru) |
| ES (1) | ES2360976T3 (ru) |
| MX (1) | MX2010001543A (ru) |
| WO (1) | WO2009018908A1 (ru) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITMI20021058A1 (it) | 2002-05-17 | 2003-11-17 | Chiesi Farma Spa | Miscele di lipidi sintetici ottimizzate per la preparazione di un surfattante ricostituito |
| ZA200902481B (en) | 2006-10-13 | 2010-07-28 | Chiesi Farma Spa | Reconstituted surfactants having improved properties |
| EP1997502A1 (en) * | 2007-06-01 | 2008-12-03 | CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. | Reconstituted surfactants having improved properties |
| EP3459556A1 (en) | 2012-02-09 | 2019-03-27 | Los Angeles Biomedical Research Institute at Harbor-UCLA Medical Center | Synthetic analogs of lung surfactant protein sp-c and their use |
| US20130303726A1 (en) * | 2012-04-17 | 2013-11-14 | Chiesi Farmaceutici S.P.A. | Method for the preparation of surfactant peptides |
| BR112015009486B1 (pt) | 2012-11-21 | 2022-06-14 | Chiesi Farmaceutici S.P.A | Surfactante reconstituído, formulação farmacêutica, kit e uso de surfactante reconstituído |
| CN114437233A (zh) * | 2020-11-06 | 2022-05-06 | 湖北健翔生物制药有限公司 | 一种多肽二聚体的定向合成方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000047623A1 (en) * | 1999-02-12 | 2000-08-17 | Chiesi Farmaceutici S.P.A. | Artificial peptides having surface activity and the use thereof in the preparation of artificial surfactant |
| WO2008011559A2 (en) * | 2006-07-20 | 2008-01-24 | University Of Rochester | Synthetic lung surfactant and use thereof |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ277095A (en) * | 1993-12-08 | 1997-09-22 | Tokyo Tanabe Co | Peptide that exhibits potent surface activity, lung surfactant containing such and its use in treating respiratory distress syndrome |
| DE4434629C1 (de) * | 1994-09-28 | 1996-06-27 | Byk Gulden Lomberg Chem Fab | Zusammensetzungen zur Behandlung von IRDS und ARDS |
| DE19602332A1 (de) * | 1996-01-24 | 1997-07-31 | Byk Gulden Lomberg Chem Fab | Verfahren zur Herstellung von pulverförmigen Lungensurfactant-Zubereitungen |
| AU3844201A (en) * | 2000-02-16 | 2001-08-27 | Univ Northwestern | Polypeptoid pulmonary surfactants |
| FI20002177A0 (fi) | 2000-10-02 | 2000-10-02 | Orion Yhtymae Oyj | Uusi yhdistelmä astman hoitoon |
| FI20002216A0 (fi) | 2000-10-06 | 2000-10-06 | Orion Yhtymae Oyj | Yhdistelmäpartikkelit astman hoitoon |
| FI20002215A0 (fi) | 2000-10-06 | 2000-10-06 | Orion Yhtymae Oyj | Yhdistelmäpartikkelit |
| ITMI20021058A1 (it) | 2002-05-17 | 2003-11-17 | Chiesi Farma Spa | Miscele di lipidi sintetici ottimizzate per la preparazione di un surfattante ricostituito |
| EP1481665A1 (en) * | 2003-05-30 | 2004-12-01 | CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. | Novel lipid mixtures for synthetic surfactants |
| EP1997502A1 (en) | 2007-06-01 | 2008-12-03 | CHIESI FARMACEUTICI S.p.A. | Reconstituted surfactants having improved properties |
-
2007
- 2007-08-09 EP EP07114083A patent/EP2022798A1/en not_active Withdrawn
-
2008
- 2008-07-17 DE DE602008005901T patent/DE602008005901D1/de active Active
- 2008-07-17 JP JP2010519350A patent/JP5441904B2/ja active Active
- 2008-07-17 AT AT08784826T patent/ATE503768T1/de active
- 2008-07-17 MX MX2010001543A patent/MX2010001543A/es active IP Right Grant
- 2008-07-17 CA CA2695805A patent/CA2695805C/en active Active
- 2008-07-17 CN CN201810566180.8A patent/CN108676088A/zh active Pending
- 2008-07-17 WO PCT/EP2008/005842 patent/WO2009018908A1/en active Application Filing
- 2008-07-17 KR KR1020107002968A patent/KR101516451B1/ko active IP Right Grant
- 2008-07-17 AU AU2008286026A patent/AU2008286026B2/en active Active
- 2008-07-17 EA EA201000161A patent/EA023499B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2008-07-17 EP EP08784826A patent/EP2185588B9/en active Active
- 2008-07-17 BR BRPI0813619-0A patent/BRPI0813619B1/pt active IP Right Grant
- 2008-07-17 ES ES08784826T patent/ES2360976T3/es active Active
- 2008-07-17 CN CN200880102684A patent/CN101827861A/zh active Pending
- 2008-08-11 US US12/222,517 patent/US8148492B2/en active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000047623A1 (en) * | 1999-02-12 | 2000-08-17 | Chiesi Farmaceutici S.P.A. | Artificial peptides having surface activity and the use thereof in the preparation of artificial surfactant |
| WO2008011559A2 (en) * | 2006-07-20 | 2008-01-24 | University Of Rochester | Synthetic lung surfactant and use thereof |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| WALTHER F. J. ET AL.: "SURFACTANT PROTEIN B AND C ANALOGUES" MOLECULAR GENETICS AND METABOLISM, ACADEMIC PRESS, SAN DIEGO, CA, US, vol. 71, no. 1/2, 2000, pages 342-351, XP000971669 ISSN: 1096-7192 the whole document * |
| WALTHER FRANS J. ET AL.: "Hydrophobic surfactant proteins and their analogues" NEONATOLOGY, KARGER, BASEL, CH, vol. 91, no. 4, 7 July 2007 (2007-07-07), pages 303-310, XP009096497 ISSN: 1661-7800 The whole document, in particular Mini-B construct (Table 1) * |
| WARING A. J. ET AL.: "Synthesis, secondary structure and folding of the bend region of lung surfactant protein B" PEPTIDE RESEARCH, vol. 9, no. 1, 1996, pages 28-39, XP009097961 ISSN: 1040-5704 the whole document * |
| WARING A. J. ET AL.: "The role of charged amphipathic helices in the structure and function of surfactant protein B" JOURNAL OF PEPTIDE RESEARCH, BLACKWELL PUBLISHING LTD., OXFORD, GB, vol. 66, no. 6, December 2005 (2005-12), pages 364-374, XP002470804 ISSN: 1397-002X The whole document, in particular Mini-B construct * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2185588A1 (en) | 2010-05-19 |
| CN101827861A (zh) | 2010-09-08 |
| AU2008286026A1 (en) | 2009-02-12 |
| BRPI0813619A2 (pt) | 2020-01-14 |
| EP2185588B9 (en) | 2012-03-21 |
| KR101516451B1 (ko) | 2015-04-30 |
| CA2695805C (en) | 2016-11-22 |
| US8148492B2 (en) | 2012-04-03 |
| US20090075892A1 (en) | 2009-03-19 |
| EP2185588B1 (en) | 2011-03-30 |
| JP2010535721A (ja) | 2010-11-25 |
| CA2695805A1 (en) | 2009-02-12 |
| CN108676088A (zh) | 2018-10-19 |
| ES2360976T3 (es) | 2011-06-10 |
| DE602008005901D1 (de) | 2011-05-12 |
| ATE503768T1 (de) | 2011-04-15 |
| KR20100053551A (ko) | 2010-05-20 |
| BRPI0813619B1 (pt) | 2021-06-22 |
| WO2009018908A1 (en) | 2009-02-12 |
| AU2008286026B2 (en) | 2013-11-21 |
| EP2022798A1 (en) | 2009-02-11 |
| JP5441904B2 (ja) | 2014-03-12 |
| EA201000161A1 (ru) | 2010-08-30 |
| MX2010001543A (es) | 2010-03-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4754073B2 (ja) | 表面活性をもつ人工ペプチドおよび人工のサーファクタントの製造におけるその使用 | |
| AU2001238442B2 (en) | Polypeptoid pulmonary surfactants | |
| CA2666344C (en) | Reconstituted surfactants having improved properties | |
| EA023499B1 (ru) | Синтетические аналоги природного легочного сурфактантного белка sp-b и их применение | |
| EP0733645B1 (en) | Novel synthetic peptide, lung surfactant containing the same, and remedy for respiratory distress syndrome | |
| EP0538273A1 (en) | Alveolar surfactant proteins | |
| JPH07509714A (ja) | ペプチド肺表面活性剤及び治療用組合せ | |
| RU2144925C1 (ru) | Новые синтетические пептиды, легочная поверхностно-активная композиция, лекарственный препарат для лечения респираторного дистресс-синдрома |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |