EA021890B1

EA021890B1 - Способ предотвращения и/или лечения болезни воспаленного кишечника, язвенного колита и болезни крона

Info

Publication number: EA021890B1
Application number: EA201200689A
Authority: EA
Inventors: Патрик Веига; Изабель Шамбо; Артём Хлебников; Лори Х. Глимчер; Венди С. Гарретт
Original assignee: Компани Жервэ Данон; Президент Энд Фэллоуз Оф Харвард Коллидж
Priority date: 2009-11-02
Filing date: 2009-11-02
Publication date: 2015-09-30
Also published as: PL2496241T3; EP2496241B1; ES2436620T3; EA201200689A1; US8685388B2; US20120308523A1; CN102711778B; EP2496241A1; WO2011051760A1; CN102711778A; BR112012010398A2

Abstract

Изобретение относится к способу предотвращения и/или лечения болезни воспаленного кишечника, язвенного колита и болезни Крона путем введения субъекту, нуждающегося в этом, специальных Bifidobacterium бактерий, в том числе кисломолочного продукта, содержащего упомянутые специальные Bifidobacterium.

Description

Настоящее изобретение относится к способу профилактики, лечения и уменьшения желудочнокишечного воспаления у лица путем введения специфического штамма ВШйоЪаОейит, в частности кисломолочного продукта, содержащего упомянутый специфический штамм ВШйоЪаОейит, для профилактики, лечения и уменьшения желудочно-кишечного воспаления, в том числе для профилактики и лечения воспалительного заболевания кишечника (ΙΒΌ), язвенного колита (ИС) и/или болезни Крона (СЮ) и для профилактики и лечения синдрома раздраженной толстой кишки (ΙΒδ).

Уровень техники

Желудочно-кишечный просвет интенсивно заселен бактериями, и для большинства многоклеточных это явление взаимовыгодно. Барьер, образованный эпителиальными клетками, существенен для симбиоза прокариотов и эукариотов, поскольку он создает границу, необходимую для их сосуществования, препятствуя воспалению слизистой оболочки под действием бактерий или других люминальных стимулов. Однако у некоторых особей этот баланс нарушается, приводя к постоянному желудочнокишечному воспалению (ΙΒΌ), которое проявляется в виде двух основных заболеваний, болезни Крона и язвенного колита (ИС), и может также вносить вклад в синдром раздраженной толстой кишки (ΙΒδ).

Сатгей е1 а1. (СоттишсаЫе и1сегайуе соййк шйисей Ъу Т-Ье1 йейтепсу ίη 1йе тпа1е 1ттиие кук1ет. Се11, 131, 33-45 (2007)) разработали надежную мышиную модель язвенного колита, в которой патологические характеристики и реакция на анти-ΤΝΡ лечение близко напоминают заболевание у человека. Было показано, что врожденный дефицит особого регуляторного гена в иммунной системе (возникающий в результате двойного нок-аута генов Т-Ъе1 и КЛС2; именуемых ТКНС для Т-Ъе1 КЛС2 язвенного колита) приводит к агрессивному, спонтанному и передающемуся ИС и увеличивает чувствительность к колиту у иммунологически интактных организмов. Патогенез этого заболевания проявляется в избыточном образовании провоспалительного цитокина ТХР-а в дендритных клетках толстой кишки. Иммунная система слизистой оболочки проявляет гиперактивную реакцию благодаря избыточному образованию в дендритных клетках толстой кишки ΤNΡ-α, который токсичен для желудочно-кишечных эпителиальных клеток. Возникающее повреждение эпителиального барьера толстой кишки приводит к сдвигу симбиотической бактериальной популяции в направлении колитогенной флоры. Эта колитогенная флора может затем быть перенесена как вертикально, так и горизонтально к генетически интактным хозяевам.

Раскрытие изобретения

Неожиданно при использовании описанной выше надежной мышиной модели было показано, что желудочно-кишечное воспаление у субъекта может быть уменьшено путем введения кисломолочного продукта, содержащего пробиотический штамм ВШйоЪайейит аттайк подвид 1асйк ΌΝ 173010, в особенности коммерчески доступный (ех Эапопе δ.Α.) молочнокислый пробиотический продукт, названный ЛсЙУ1а®, содержащий упомянутый штамм ВШйоЪаОейит аттайк подвид 1асйк ΌΝ 173010.

По одному воплощению изобретение относится к уменьшению желудочно-кишечного воспаления у субъекта путем введения упомянутому субъекту эффективного количества штамма ВШйоЪас1егЫт аттайк подвид 1асйк ΌΝ 173010. Штамм ВШйоЬасЮпит аттайк подвид 1асйк ΌΝ 173010 обозначен номером 1-2494 в СNСΜ от 20 июня 2000 г. Этот штамм известен под показателем ΌΝ 173010 и защищен европейским патентом ЕР 1297176 как модулятор гликозилирования поверхности клеток желудочно-кишечного тракта.

ВШйоЪаОейит аттайк - это грамм-положительная анаэробная палочкообразная бактерия, находящаяся в толстом кишечнике большинства млекопитающих, включая человека. Штамм ВШйоЪаОейит аттайк был ранее описан как два разных вида. В настоящее время оба вида относят к ВШйоЪаОейит аттайк с двумя подвидами аттайк и 1асйк соответственно. Оба старых наименования ВШйоЬасЮпит аттайк и ВШйоЪаОейит 1асйк до сих пор применяют на товарных этикетках, поскольку этот вид часто используют в качестве пробиотика. В контексте данного изобретения наименования ВШйоЪаОейит 1асйк и В|ПйоЬас1ег1нт аттайк подвид 1асйк могут быть использованы как взаимозаменяемые.

По другому воплощению изобретение относится к уменьшению желудочно-кишечного воспаления у субъекта путем введения упомянутому субъекту эффективного количества кисломолочного продукта, содержащего упомянутый штамм ВШйоЪаОейиш аттайк подвид 1асйк ΌΝ 173010. Согласно специфическому воплощению упомянутый кисломолочный продукт содержит две классические йогуртовые закваски, кисломолочные бактерии δйеρΐососсик (йегторййик и БасЮЬасШнк Ъи1дайсик. Хотя термин Лсй\та® - это собственная торговая марка Эапопе δ.Α., этот термин будет использован в настоящем описании для обозначения кисломолочного продукта, содержащего пробиотический штамм ВШйоЪас1ейит аттайк подвид 1ас1тк ΌΝ173010 вместе со штаммом δ.ίйе^тоρй^1ик и штаммом Ь.ЪЫдайсик.

Согласно одному воплощению штамм ВШйоЪаОейит аштайк подвид 1асйк ΌΝ 173010, обозначенный номером СЫСМ 1-2494, или кисломолочный продукт по настоящему изобретению вводят в течение по меньшей мере 14 дней, предпочтительно по меньшей мере в течение 21 дня, более предпочтительно в течение по меньшей мере 28 дней.

Согласно одному воплощению штамм ВШйоЪаОейит аттайк подвид 1асйк ΌΝ 173010, обозначенный номером СЫСМ 1-2494, или кисломолочный продукт по настоящему изобретению вводят в количе- 1 021890 стве по меньшей мере 10³ КОЕ за прием, предпочтительно между 10³ и 10¹² КОЕ за прием, более предпочтительно между 10⁶ и 10¹¹ за прием, наиболее предпочтительно в количестве около 10¹⁰ КОЕ за прием.

Согласно одному воплощению штамм ВШйоЪас1егшт аттайк подвид 1асПк ΏΝ 173010, обозначенный номером 0Ν0Μ 1-2494, или кисломолочный продукт по настоящему изобретению вводят в количестве по меньшей мере 10³ КОЕ за прием, предпочтительно между 10³ и 10¹² КОЕ за прием, более предпочтительно между 10⁶ и 10¹¹ за прием, наиболее предпочтительно в количестве около 10¹⁰ КОЕ за прием, два раза в день, по меньшей мере 14 дней, предпочтительно по меньшей мере 21 день, более предпочтительно по меньшей мере 28 дней.

Согласно одному воплощению штамм ВШйоЪас1егшт аттайк подвид 1асПк ΌΝ 173010, обозначенный номером 0Ν0Μ 1-2494, или кисломолочный продукт по настоящему изобретению вводят в количестве по меньшей мере 10³ КОЕ за прием, предпочтительно между 10³ и 10¹² КОЕ за прием, более предпочтительно между 10⁶ и 10¹¹ КОЕ за прием, наиболее предпочтительно в количестве около 10¹⁰ КОЕ за прием.

Согласно одному воплощению штамм ВШйоЪас1егшт аттайк подвид 1асйк ΌΝ 173010, обозначенный номером 0Ν0Μ 1-2494, вводят в виде фармацевтической композиции, в комбинации с фармацевтически приемлемым переносчиком, который может содержать наполнители.

Согласно одному воплощению фармацевтическая композиция содержит также по меньшей мере еще один агент, обладающий активностью против ΙΒΌ или 1В§.

Термин фармацевтическая композиция предназначен для обозначения лекарства или ОТС (препарат, отпускаемый без рецепта). Согласно другому воплощению кисломолочный продукт, содержащий упомянутый штамм ВШйоЪас1егшт аттайк подвид 1асйк ΌΝ 173010, обозначаемый номером 0Ν0Μ 1-2494, вводят в виде йогурта.

Согласно одному воплощению изобретение относится к способу профилактики, лечения и уменьшения желудочно-кишечного воспаления у субъекта путем введения упомянутого штамма ВйтйоЪас1егшт аштайки подвид 1асйк ΌΝ 173010, обозначенного номером 0Ν0Μ 1-2494, в частности кисломолочного продукта, содержащего упомянутый штамм ВШйоЬасЮгшт аштайк подвид 1ас4тк ΌΝ 173010, обозначенного номером 0Ν0Μ 1-2494, для профилактики, лечения и уменьшения желудочно-кишечного воспаления, язвенного колита (ИС) и/или болезни Крона (СО).

Согласно одному воплощению уменьшение желудочно-кишечного воспаления определено как уменьшение провоспалительного цитокина ΤΝΕ-α в толстой кишке. Следовательно, согласно одному воплощению изобретение относится к способу уменьшения провоспалительного цитокина ΤΝΕ-α в толстой кишке, включающему этап введения упомянутому субъекту эффективного количества штамма ВШйоЪас!егшт аттайк подвид 1асйк ΏΝ 173010, обозначенного номером СNСΜ 1-2494, или эффективного количества кисломолочного продукта, содержащего штамм ВгййоЪас1егшт аттайк подвид 1ас4тк ΏΝ 173010, обозначенного номером СNСΜ 1-2494, в частности продукта ЛсЙУ1а®.

Термин введение предназначен означать пероральное введение, т.е. субъект будет перорально принимать бактерии по настоящему изобретению или композицию, содержащую бактерии по настоящему изобретению, или предназначен означать непосредственное введение, т.е. что бактерии по настоящему изобретению или композиция, содержащая бактерии по настоящему изобретению, будут непосредственно вводиться ίη кйи, в частности с помощью колоноскопии или ректально через суппозитории.

Пероральное введение композиции, содержащей бактерии по настоящему изобретению, может быть в форме желатиновых капсул, капсул, таблеток, порошков, гранул или оральных растворов или суспензий.

В предпочтительном воплощении изобретения упомянутая композиция является пищевой композицией, которая может быть использована в производстве новых пищевых продуктов или пищевых ингредиентов, как определено в ЕС Кеди1айоп №. 258/97, и, в частности, в производстве функциональных пищевых продуктов. Пищу можно считать функциональной, если удовлетворительно показано, что она оказывает благотворный эффект на одну или несколько таргет-функций организма, кроме обычных эффектов питания, улучшая состояние здоровья и благополучия и/или снижая риск заболевания.

В предпочтительном воплощении изобретения упомянутые бактерии вводят в форме молочного продукта. Конкретно, молочный продукт - это кисломолочный продукт и, более конкретно, кисломолочный продукт - это йогурт.

Упомянутая композиция может, в частности, состоять из пробиотической упаковки, например в форме капсулы или желатиновой капсулы.

Термин пробиотики предназначен для обозначения диетических добавок, содержащих потенциально полезные бактерии или дрожжи. Согласно определениям, принятым в настоящее время ΕΆΟ/ΑΗΟ, пробиотики - это Живые микроорганизмы, которые при введении в адекватных количествах способствуют улучшению здоровья организма хозяина. Наиболее распространенный тип применяемых микробов - кисломолочные бактерии. Кисломолочные бактерии используют в пищевой промышленности уже много лет, поскольку они способны превращать сахара (включая лактозу) и другие углеводы в молочную

- 2 021890 кислоту. Это не только обеспечивает характерный кисловатый вкус кисломолочных продуктов, таких как йогурт, но также снижая рН, могут создавать худшие условия для роста гнилостных организмов, оказывая значительное преимущество для предотвращения желудочно-кишечных инфекций. Штаммы родов Ьас1оЬасШи8 и ВШБоЬаеЮгшт - наиболее широко используемые пробиотические бактерии.

Пробиотические бактериальные культуры предназначены для того, чтобы помочь восстанавливаться натуральной кишечной флоре. Их иногда рекомендуют врачи и чаще диетологи после курса антибиотиков или как часть лечения при кишечном кандидозе. Утверждается, что пробиотики усиливают иммунную систему, чтобы бороться с аллергией и другими иммунологическими заболеваниями.

Согласно одному воплощению субъект - это млекопитающее, предпочтительно ребенок, взрослый человек или пожилой человек, наиболее предпочтительно взрослый человек.

Согласно одному воплощению изобретение касается способа профилактики и лечения синдрома раздраженной кишки (ΙΒδ). В гастроэнтерологии синдром раздраженной кишки (ΙΒδ) или спастическая толстая кишка - это функциональное раздражение, характеризующееся болями в животе и изменениями ритма дефекации, не связанными с аномалиями при обычном клиническом тестировании. Он встречается очень часто и составляет 20-50% посещений гастроэнтеролога. Наиболее часто встречающиеся симптомы - боли в нижней части живота и вздутие, связанное с изменением ритма дефекации, и дискомфорт в области живота, проходящий при дефекации. Для понимания настоящего изобретения следует иметь в виду, что ΙΒδ - это синдром и что это выражение объединяет несколько симптомов, наблюдаемых у пациентов, страдающих от нарушений в желудочно-кишечной области. Таким образом, следует лечить не одну болезнь (ΙΒδ), но несколько типов болезней и чаще всего лечить или ослаблять один или несколько симптомов. Согласно одному воплощению настоящего изобретения способ по настоящему изобретению используют для профилактики и лечения синдрома раздраженной кишки (ΙΒδ), где ΙΒδ относится к, возникает вследствие и/или связан с желудочно-кишечным воспалением, в том числе с желудочнокишечным микровоспалением.

Что касается нескольких типов ΙΒδ, характер болей в животе обычно описывают как связанный с преобладанием запора (ΙΒδ-С) или с преобладанием диареи (ΙΒδ-Ό) или их сочетания (ΙΒδ-Μ) или с отсутствием этих трех характеристик (ΙΒδ-υ; и означает Ии субтип).

Предпочтительно способ по настоящему изобретению относится к лечению ΙΒδ-Ό (с преобладанием диареи). Наиболее предпочтительно способ по настоящему изобретению относится к уменьшению желудочно-кишечного воспаления у пациентов с диагнозом ΙΒδ-Ό.

Предпочтительно способ по настоящему изобретению предназначен для лечения лиц с диагнозом по критерию КОМЕ ΙΙΙ. Наиболее предпочтительно способ по настоящему изобретению предназначен для уменьшения желудочно-кишечного воспаления у пациентов с диагнозом ΙΒδ-Ό согласно критерию КОМЕ ΙΙΙ.

КОМЕ - это процесс, разработанный для классификации функциональных желудочно-кишечных нарушений, основанный на клинических симптомах. Термин критерий КОМЕ ΙΙΙ* предназначен для обозначения следующих критериев синдрома раздраженной кишки: рекуррентные боли в животе или дискомфорт по меньшей мере 3 дня в месяц за последние месяцы, связанные с 2 или большим числом следующих симптомов:

1) облегчение при дефекации;

2) начало, связанное с изменением частоты стула;

3) начало, связанное с изменением формы (внешнего вида) стула.

* Критерии, выполненные за последние 3 месяца с началом проявления симптомов по меньшей мере за 6 месяцев до установления диагноза.

** Дискомфорт означает некомфортабельные неболевые ощущения.

Другие симптомы, которые не существенны, но подтверждают диагноз ΙΒδ:

аномальная частота стула (больше чем 3 движения кишечника в день или меньше чем 3 движения кишечника в неделю);

аномальная форма стула (комковатый/твердый или жидкий/водянистый стул);

аномальное прохождение стула (напряжение, безотлагательность или чувство неполного движения кишечника);

выход слизи;

вздутие или чувство растяжения в животе.

Некоторые или все симптомы ΙΒδ могут наблюдаться в одно и то же время - некоторые симптомы могут быть более выражены, чем другие.

Все критерии, необходимые для диагноза ΙΒδ-Ό, описаны в критерии Коте ΙΙΙ (ЬопдкБеШ с1 а1., 2006).

В дальнейшем изобретение будет объяснено несколькими примерами, не ограничиваясь ими.

Понятно, что заявленные способы могут быть альтернативно сформулированы как вторая заявка на медицинское применение (композиция для применения), в частности, в тех случаях, когда заявки на способ не могут быть юридически использованы для гранта или патента; поэтому такие заявки не явно раскрыты в данном тексте.

- 3 021890

Краткое описания фигур

Фиг. 1. Действие 4-недельного приема продуктов ΛοΙίνία. плацебо и воды на показатель колита у мышей ТРИС и сравнение с контрольной группой (РАС2^-/-).

Фиг. 2. Действие 4-недельного приема продуктов ΛοΙίνία. плацебо и воды на показатель колита у мышей ТРИС.

Фиг. 3. Действие 4-недельного введения живой культуры В, 1асОк различного возраста (4, 8 и 12 недель) и сравнение с введением одной культуральной среды (МР8).

Фиг. 4. Действие 4-недельного введения продуктов Лс1Ма и плацебо на провоспалительный цитокин ΤΝΡ-α в толстой кишке.

Примеры

Пример 1. Прием композиции Лс1Ма® улучшает состояние при колите у мышей ТРИС (фиг. 1).

Продукты.

Исследуемый продукт - кисломолочный продукт (ΛΠίνία. Эапопе Рекеагсй, РаЫкеаи), содержащий пробиотический штамм ВШдоЪас1егшт аштайк подвид 1асйк ΌΝ 173010 (1,25х 10¹⁰ колонии образующих единиц (КОЕ) на порцию) вместе с двумя классическими йогуртовыми штаммами-заквасками, 81гер1ососсик 1йегторЫ1ик и Ьас1оЪасШик Ъи1даг1сик (1,2x10 КОЕ/порцию). Исследуемый продукт был без аромата.

В качестве контроля использовали не заквашенный молочный продукт на основе молока без пробиотиков и с низким содержанием лактозы <4 г/порцию, как и в исследуемом продукте (подкисленное молоко).

Продуктовое вмешательство.

Мышей ТРИС (п= 20) в возрасте 4 недели кормили либо исследуемым продуктом (п=10), либо контрольным продуктом (не заквашенным подкисленным молоком) (п=10) ежедневно в течение четырех недель.

Микробный анализ.

Собирали экскременты у мышей ТРИС до и после кормления (в возрасте 4 и 8 недель соответственно), а также у 10 контрольных мышей (РЛС2^-/-). Экстрагировали фекальные ΌΝΆ или РNΑ и выполняли полимеразную цепную реакцию с|РСР для количественного определения различных бактериальных таксономических групп.

Гистологический показатель колита.

Воспаление толстой кишки оценивали с помощью гистологического анализа в конце кормления (возраст 8 недель) патоморфологом, не осведомленным о генотипе и лечебном вмешательстве.

Результаты.

Показано, что ЛсО\аа® улучшает состояние при ТРИС колите.

Пример 2. Небактериальные продукты ЛсО\аа улучшают состояние при ТРИС колите (фиг. 2).

Эксперименты: см. выше - Мера выхода: гистологический показатель колита.

Пример 3. ВШдоЪас1егшт аштайк подвид 1асйк 173010В улучшают состояние при ТРИС колите (фиг. 3).

Эксперименты: ВШдоЪас1егшт аштайк 1асйк 173010 выращивали в течение ночи в среде МР8 и бактериальную популяцию 4-5х10⁸ КОЕ собирали из этой культуры и затем вводили ежедневно в течение 4 недель ВЛЬВ/с ТРИС мышам в возрасте 4 (п=10), 8 (п=15) или 12 (п=15) недель. В качестве контроля вводили такой же объем одной среды МР8 таким же образом, как в случае живой культуры.

Гистологический показатель колита.

Воспаление толстой кишки оценивали с помощью гистологического анализа в конце кормления патоморфологом, не осведомленным о генотипе и лечебном вмешательстве.

Результаты.

Пробиотический штамм ЛсООа®® В.аштайк 1асйк ΌΝ 173010В влияет на тяжесть колита ТРИС, но не в такой степени, как АсО\аа®® Эффект штамма 173010В виден в ходе болезни ТРИС либо на начальных, либо на поздних этапах. Эти результаты позволяют предположить, что действие АсЙУ1а® на течение ТРИС колита не может быть снижено по сравнению с действием одного штамма 173010В. Другие компоненты /характеристики этого молочного продукта также влияют на течение ТРИС колита.

Пример 4. Прием АсЙУ1а® снижает воспаление у мышей ТРИС; АсЙУ1а® снижает избыточное образование провоспалительного цитокина ТЫР-а в толстой кишке (фиг. 4).

Эксперименты: см. выше - Мера выхода: уровень ТЫР-α в толстой кишке (пг/мл)

Заключение

Микрофлора кишечника существенна для возникновения язвенного колита (ИС), который спонтанно проявляется у Т-Ье1 РАС2-дефицитных мышей (Саггей е1 а1.). В этой модели воспаления кишечника модуляция микрофлоры при терапии антибиотиками приводит к улучшению показателей ИС. Это повышает вероятность того, что другие способы манипуляции микрофлорой также могут влиять на воспаление в этой модели. Целью данного исследования было определить микробную структуру микрофлоры кишечника мышей ТРИС и проверить влияние пищи, содержащей живые бактерии, на хроническое же- 4 021890 лудочно-кишечное воспаление. Влияние пищевого воздействия оценивали с помощью ί) гистологии толстой кишки и ίί) количественного анализа микрофлоры кишечника.

Картирование микрофлоры кишечника в реальном времени с помощью цРСК образцов стула ТКиС и КАО2^-/- (контрольных) мышей продемонстрировало значительные различия в бактериальных популяциях, включающие существенное снижение бифидобактерии в ТКиС. Чтобы проверить, улучшит ли заквашенное молоко, содержащее живые бифидобактерий, состояние колита в этой модели, мышей ТКиС кормили заквашенным молоком, содержащим ВйМоЪас1епиш ашшайз подвид 1асЧз ΌΝ 17301 ОВ или контрольным продуктом (не заквашенным подкисленным молоком) в течение 4 недель. Интересно, что при приеме исследуемого продукта наблюдается значительное уменьшение воспаления кишечника, что видно по показателям гистологии и очевидно совпадает с изменениями микрофлоры кишечника. Результаты показывают, что прием заквашенного молока, содержащего ВйМоЪас1епиш ашшайз подвид 1асЧз ΌΝ 173010, может уменьшить иС, потенциально с помощью непосредственных иммунных эффектов или создания неблагоприятных условий для предполагаемых патогенных бактерий, что может влиять на прогрессирование болезни в данной животной модели.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ предотвращения и лечения болезни воспаленного кишечника (ΙΒΌ), язвенного колита (иС) и болезни Крона (СО) путем уменьшения желудочно-кишечного воспаления у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение упомянутому субъекту штамма ВйМоЪас1епиш ашшайз подвид 1асйз ΏΝ 173010, депонированного под номером СNСΜ 1-2494, в количестве от 10³ до 10¹² КОЕ в течение по меньшей мере 14 дней, причем упомянутый субъект является млекопитающим, включая взрослого человека.
2. Способ предотвращения и лечения болезни воспаленного кишечника (ΙΒΏ), язвенного колита (иС) и болезни Крона (СО) путем уменьшения желудочно-кишечного воспаления у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение упомянутому субъекту кисломолочного продукта, содержащего штамм ВйМоЪас1епиш ашшайз подвид 1асЧз ΟΝ 173010, депонированного под номером С’Ж'.’М 1-2494, в количестве от 10³ до 10¹² КОЕ в течение по меньшей мере 14 дней, причем упомянутый субъект является млекопитающим, включая взрослого человека.
3. Способ по п.2, в котором продукт, кроме того, включает кисломолочные бактерии 31гср1ососсиз Шегшорййиз и Бас1оЪасз11из Ъи1§апсиз.
4. Способ по п.2, характеризующийся тем, что кисломолочный продукт представляет собой йогурт.