EA020696B1 - Способ лечения лимфомы ходжкина с использованием комбинации гемцитабина и конъюгата антитела против cd30 с ауристатином - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к медицине, в частности к способу лечения лимфомы Ходжкина. Способ предусматривает введение гемцитабина и конъюгата антитела против CD30 с соединением ауристатина. Изобретение позволяет увеличить эффективность лечения лимфомы Ходжкина.

Description

Настоящее изобретение относится, в числе прочего, к способам лечения лимфомы Ходжкина, включающим назначение нуждающемуся в этом субъекту как схемы химиотерапевтического лечения, так и соединения конъюгата антитело-лекарственное средство.

Предпосылки создания изобретения

Лимфома Ходжкина (НЬ) является опухолью лимфоидной ткани, которая гистопатологически определяется по присутствию злокачественных клеток Ходжкина-Рида-Штернберга (НК§).

Характерным поверхностным антигеном, экспрессируемым на клетках НК§, является СЭ30. По оценке 8000 новых случаев НЬ диагностируется ежегодно в Соединенных Штатах и Канаде. Успехи в использовании комбинированной терапии и лучевой терапии при НЬ в течение последнего полувека привели к степени длительной ремиссии, составляющей приблизительно 70%. Однако эти схемы назначения множества средств вызывают у пациентов значительное число клинических проявлений, включающих вторичные злокачественные опухоли, болезни сердца и бесплодие. Кроме того, приблизительно 30% пациентов, имеющих НЬ, становятся нечувствительными к первоначальной терапии или переносят рецидив. Схемы химиотерапии спасения (резервной химиотерапии) и трансплантация аутологичных стволовых клеток (А8СТ) представляют собой дополнительные возможности для этих пациентов, но и эти схемы, и трансплантация сопровождаются значительным числом клинических проявлений и ограниченным контролем длительного заболевания. Пациенты, которые переносят рецидив после А8СТ или непригодны для терапии спасения, имеют очень плохой прогноз. В настоящее время отсутствуют хорошо переносимые, эффективные возможности лечения этих пациентов.

Гемцитабин, отдельно или в комбинации с другой химиотерапией, был изучен в ситуации до и после А8СТ. В случае не подвергавшихся трансплантации пациентов с НЬ, перенесших рецидив или не поддающихся лечению, которые были подвергнуты лечению гемцитабином, доли ответных реакций достигают 39% (§ап!ого е! а1., 1. СИп. Опсо1. 2000 18(13): 2615-2619). В случае перенесших рецидив/не поддающихся лечению пациентов, когда большинство пациентов были подвергнуты предшествующей аутологичной или аллогенной трансплантации, доли ответных реакций на гемцитабин снижены (22%), и гематологическая токсичность схемы вызывает необходимость в уменьшении дозы до 1000 мг/м² (Уепка!е§й е! а1., СНп. ЬутрЕота 2004 5(2): 110-115). Для схемы комбинированного лечения, в которой используется гемцитабин, винорелбин и пегилированный липосомальный доксорубицин, (ОУЭ) показана многообещающая эффективность при рецидивирующей/не поддающейся лечению НЬ. В совместном анализе пациентов до и после А8СТ наблюдались доли всех ответных реакций, составляющие 70%, однако при этом в популяции до А8СТ наблюдались ограничивающие дозу токсичности, состоящие из мукозита, а в популяции после А8СТ наблюдалась лихорадочная нейтропения (ВаШей е! а1., САЬОВ 59804 Апп. Опсоо, 2007, 18(6): 1071-1079). Только 32 и 26% пациентов, которые не подвергались трансплантации и после А8СТ, соответственно, смогли получить все дозы по схеме в полной дозе. Для пациентов, не отвечающих на стандартную химиотерапию или перенесших рецидив, единственной потенциально лечебной терапией является высокодозовая химиотерапия в комбинации с трансплантацией стволовых клеток. Это лечение также сопровождается значительным числом клинических проявлений и значительной смертностью, и долей выживания в течение 5 лет, составляющей 50%. Следовательно, сохраняется неудовлетворенная терапевтическая потребность для пациентов, страдающих НЬ. Настоящее изобретение направлено на эту и другие потребности.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1А. Противоопухолевая активность сАС10-усММАЕ отдельно или в комбинации с АВУЭ в отношении подкожных опухолей НЬ Ь540су у мышей 8СГО. Мышам 8СГО имплантировали клетки НЬ Ь540су в правый бок. Группы мышей (9-10/группа) не подвергались лечению или получали сАС10усММАЕ (1 мг/кг, с.]4б/3 (раз в 4 дня х3), внутрибрюшинно) и/или АВУЭ: адриамицин (1 мг/кг, с]4б/3. внутривенно), блеомицин (7,5 мк/кг, ц4б/3, внутрибрюшинно), винбластин (0,015 мг/кг, ц4б/3, внутрибрюшинно) и дакарбазин (20 мг/кг, ц3б/4, внутрибрюшинно), когда размеры опухолей колебались около среднего размера, составляющего приблизительно 100 мм³.

Фиг. 1В. Противоопухолевая активность сАС10-усММАЕ отдельно или в комбинации с АВУЭ в отношении подкожных опухолей НЬ Ь540су у мышей 8СГО. Мышам 8СГО имплантировали клетки НЬ Ь540су в правый бок. Группы мышей (9-10/группа) не подвергались лечению или получали сАС10усММАЕ (1 мг/кг, ц4б/3, внутрибрюшинно) и/или АВУЭ: адриамицин (0,75 мг/кг, ц4б/3, внутривенно), блеомицин (6 мк/кг, ц4б/3, внутрибрюшинно), винбластин (0,01 мг/кг, ц4б/3, внутрибрюшинно) и дакарбазин (15 мг/кг, ц3б/4, внутрибрюшинно), когда размеры опухолей колебались около среднего размера, составляющего приблизительно 300 мм³.

- 1 020696

Фиг. 2А. Противоопухолевая активность сАС10-усММАЕ отдельно или в комбинации с гемцитабином в отношении подкожных опухолей НЬ Ь540су у мышей §СГО. Мышам §СГО имплантировали клетки НЬ Ь540су в правый бок. Группы мышей (5-10/группа) не подвергались лечению или получали сАС10усММАЕ (1 мг/кг, с|4'/3. внутрибрюшинно) отдельно, гемцитабин (120 мг/кг, с|4'/3. внутрибрюшинно) отдельно или комбинированное лечение с использованием сАС10-усММАЕ и гемцитабина, когда размеры опухолей колебались около среднего размера, составляющего приблизительно 100 мм³.

Фиг. 2В. Противоопухолевая активность сАС10-усММАЕ отдельно или в комбинации с гемцитабином в отношении подкожных опухолей НЬ Ь540су у мышей §СГО. Мышам §СГО имплантировали клетки НЬ Ь540су в правый бок. Группы мышей (5-10/группа) не подвергались лечению или получали сАС10усММАЕ (1 мг/кг, ς4'/3, внутрибрюшинно) отдельно, гемцитабин (120 мкг/кг, ς4'/3, внутрибрюшинно) отдельно или комбинированное лечение с использованием сАС10-усММАЕ и гемцитабина, когда размеры опухолей колебались около среднего размера, составляющего приблизительно 300 мм³.

Фиг. ЗА. Противоопухолевая активность сАС10-усММАЕ отдельно или в комбинации с СУЭ в отношении подкожных опухолей НЬ Ь540су у мышей §СГО. Мышам §СГО имплантировали клетки НЬ Ь540су в правый бок. Группы мышей (8-10/группа) не подвергались лечению или получали сАС10усММАЕ (1 мг/кг, д4'/3, внутрибрюшинно) отдельно, СУЭ отдельно или комбинированное лечение с использованием сАС10-усММАЕ и СУЭ, когда размеры опухолей колебались около среднего размера, составляющего приблизительно 100 мм³. Схема лечения СУЭ включала гемцитабин в дозе 60 мг/кг, д4'/3, внутрибрюшинно, винорелбин в дозе 2 мг/кг, д5'/3, внутрибрюшинно и доксорубицин в дозе 1,5 мг/кг, д4'/3, внутривенно.

Фиг. 3В. Противоопухолевая активность сАС10-усММАЕ отдельно или в комбинации с СУЭ в отношении подкожных опухолей НЬ Ь540су у мышей §СГО. Мышам §СГО имплантировали клетки НЬ Ь540су в правый бок. Группы мышей (8-10/группа) не подвергались лечению или получали сАС10усММАЕ (1 мг/кг, д4'/3, внутрибрюшинно) отдельно, СУЭ отдельно или комбинированное лечение с использованием сАС10-усММАЕ и СУЭ, когда размеры опухолей колебались около среднего размера, составляющего приблизительно 100 мм³. Схема лечения СУЭ включала гемцитабин в дозе 60 мг/кг, д4'/3, внутрибрюшинно, винорелбин в дозе 2 мг/кг, д5'/3, внутрибрюшинно и доксорубицин в дозе 1,5 мг/кг, д4'/3, внутривенно.

Фиг. 4А. Противоопухолевая активность сАС10-усММАЕ отдельно или в комбинации с винорелбином в отношении подкожных опухолей НЬ Ь540су у мышей §СГО. Мышам §СГО имплантировали клетки НЬ Ь540су в правый бок. Группы мышей (5-10/группа) не подвергались лечению или получали сАС10-усММАЕ (1 мг/кг, д4'/3, внутрибрюшинно) отдельно, винорелбин (4 мг/кг, с.]5'/3) отдельно или комбинированное лечение с использованием сАС10-усММАЕ и винорелбина, когда размеры опухолей колебались около среднего размера, составляющего приблизительно 100 мм³.

Фиг. 4В. Противоопухолевая активность сАС10-усММАЕ отдельно или в комбинации с винорелбином в отношении подкожных опухолей НЬ Ь540су у мышей §СГО. Мышам §СГО имплантировали клетки НЬ Ь540су в правый бок. Группы мышей (5-10/группа) не подвергались лечению или получали сАС10усММАЕ (1 мг/кг, д4'/3, внутрибрюшинно) отдельно, винорелбин (4 мг/кг, с|5'/3) отдельно или комбинированное лечение с использованием сАС10-усММАЕ и винорелбина, когда размеры опухолей колебались около среднего размера, составляющего приблизительно 100 мм³.

Фиг. 5А. Противоопухолевая активность сАС10-усММАЕ отдельно или в комбинации с доксорубицином в отношении подкожных опухолей НЬ Ь540су у мышей §СГО. Мышам §СГО имплантировали клетки НЬ Ь540су в правый бок. Группы мышей (5-10/группа) не подвергались лечению или получали сАС10-усММАЕ (1 мг/кг, д4'/3, внутрибрюшинно) отдельно, доксорубицин (3 мг/кг, с.]4'/3) отдельно или комбинированное лечение с использованием сАС10-усММАЕ и доксорубицина, когда размеры опухолей колебались около среднего размера, составляющего приблизительно 100 мм³.

Фиг. 5В. Противоопухолевая активность сАС10-усММАЕ отдельно или в комбинации с доксорубицином в отношении подкожных опухолей НЬ Ь540су у мышей §СГО. Мышам §СГО имплантировали клетки НЬ Ь540су в правый бок. Группы мышей (5-10/группа) не подвергались лечению или получали сАС10-усММАЕ (1 мг/кг, д4'/3, внутрибрюшинно) отдельно, доксорубицин (1,5 мг/кг, с.]4'/3) отдельно или комбинированное лечение с использованием сАС10-усММАЕ и доксорубицина, когда размеры опухолей колебались около среднего размера, составляющего приблизительно 100 мм³.

Фиг. 6. Противоопухолевая активность сАС10-усММАЕ отдельно или в комбинации с винбластином в отношении подкожных опухолей НЬ Ь540су у мышей §СГО. Мышам §СГО имплантировали клетки НЬ Ь540су в правый бок. Группы мышей (7-10/группа) не подвергались лечению или получали сАС10усММАЕ (1 мг/кг, д4'/3, внутрибрюшинно) отдельно, винбластином (0,1 мг/кг, с|4'/3) отдельно или комбинированное лечение с использованием сАС10-усММАЕ и винбластина, когда размеры опухолей колебались около среднего размера, составляющего приблизительно 300 мм³.

Фиг. 7. Противоопухолевая активность сАС10-усММАЕ отдельно или в комбинации с гемцитабином в отношении подкожных опухолей НЬ Ь540су у мышей §СГО. Мышам §СГО имплантировали клетки НЬ Ь540су в правый бок. Группы мышей (6-8/группа) не подвергались лечению или получали сАС10- 2 020696 усММЛЕ (1 мг/кг, ц4йх3, внутрибрюшинно) отдельно, гемцитабин (120 мг/кг, ц4йх3, внутрибрюшинно) отдельно или комбинированное лечение с использованием сЛС10-усММЛБ и гемцитабина, когда размеры опухолей колебались около среднего размера, составляющего приблизительно 100 мм³.

Фиг. 8. Противоопухолевая активность сЛС10-тсММЛР отдельно или в комбинации с гемцитабином в отношении подкожных опухолей НЬ Ь540су у мышей 8СГО. Мышам 8СГО имплантировали клетки НЬ Ь540су в правый бок. Группы мышей (10/группа) не подвергались лечению или получали сАС10тсММАР (1 мг/кг, ц4йх3, внутрибрюшинно) отдельно, гемцитабин (120 мг/кг, ц4йх3, внутрибрюшинно) отдельно или комбинированное лечение с использованием сАС10-тсММАР и гемцитабина, когда размеры опухолей колебались около среднего размера, составляющего приблизительно 100 мм³.

Фиг. 9. Измененная схема назначения доз сАС10-усММАЕ. Общее количество сАС10-усММАЕ сохраняли постоянным на уровне 3 мг/кг, и дозу дробили в различных схемах.

Подробное описание иллюстративных вариантов осуществления изобретения

A. Общее введение.

Настоящим изобретением предоставляются, в числе прочего, способы лечения лимфомы Ходжкина. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что комбинированная терапия с использованием двух различных классов противораковых соединений, соединений конъюгатов антитело-лекарственное средство и химиотерапевтических средств, может увеличить терапевтическую пользу для субъектов, страдающих НЬ. В частности, авторы настоящего изобретения установили, что комбинированная терапия с использованием гемцитабина и антитела против СЭ30, конъюгированного с соединением ауристатином, обеспечивает синергетические терапевтические эффекты при лечении НЬ. До создания настоящего изобретения нельзя было ожидать, что химиотерапевтическое средство и антитело против СЭ30, конъюгированное с соединением ауристатином, могут иметь синергетический эффект при лечении НЬ.

В целях ясности описания, но не в качестве ограничения, подробное описание настоящего изобретения разделено на следующие подразделы.

B. Краткое изложение.

Настоящее изобретение основано, среди прочего, на обнаружении того, что комбинированная терапия с использованием гемцитабина, и антитела против СЭ30. конъюгированного с соединением ауристатином, обеспечивает синергетические терапевтические эффекты при лечении НЬ.

В одном варианте осуществления предоставляются способы лечения лимфомы Ходжкина. Способы включают введение нуждающемуся в этом субъекту гемцитабина и соединения конъюгата антителолекарственное средство. Введение соединения конъюгата антитело-лекарственное средство и гемцитабина обеспечивает синергетический эффект при лечении лимфомы Ходжкина у пациента. Соединением конъюгата антитело-лекарственное средство является антитело против СЭ30, конъюгированное с соединением ауристатином.

В другом варианте осуществления способы лечения лимфомы Ходжкина у субъекта, по существу, состоят из введения нуждающемуся в этом субъекту гемцитабина и соединения конъюгата антителолекарственное средство. Введение соединения конъюгата антитело-лекарственное средство и гемцитабина обеспечивает синергетический эффект при лечении лимфомы Ходжкина у пациента. Соединением конъюгата антитело-лекарственное средство является антитело против СЭ30, конъюгированное с соединением ауристатином.

Доставку соединения конъюгата антитело-лекарственное средство обычно осуществляют в течение цикла лечения. Цикл лечения может быть любой подходящей продолжительности по времени. В одном аспекте он составляет три или четыре недели.

Настоящим изобретением также предоставляется применение соединения конъюгата антителолекарственное средство для производства лекарственного средства, вводимого при комбинированной терапии с использованием гемцитабина для лечения лимфомы Ходжкина у субъекта. Введение соединения конъюгата антитело-лекарственное средство и гемцитабина обеспечивает синергетический эффект при лечении лимфомы Ходжкина у пациента. Соединением конъюгата антитело-лекарственное средство является антитело против СЭ30, конъюгированное с соединением ауристатином.

C. Определения и сокращения.

Кроме случаев, оговоренных особо, все используемые в настоящем документе технические и научные термины имеют то же значение, что и значение, в котором они обычно понимаются специалистом со средним уровнем компетентности в области техники, имеющей отношение к описанным в настоящем документе способам и композициям. Используемые в настоящем документе следующие термины и выражения имеют приписанные им значения, кроме особо оговоренных случаев.

Используемый в настоящем документе термин ингибирует или ингибирование означает уменьшение на измеряемое количество или полное предотвращение.

Используемое в настоящем документе промежуточное выражение по существу, состоящий из огранивает объем притязания до точно определенных активных агентов или стадий и тех дополнительных активных агентов и стадий, которые не оказывают существенное влияние на свойства точно определенных активных агентов.

- 3 020696

Используемый в настоящем документе термин агент (средство) означает элемент, соединение или молекулярную сущность, в том числе, например, фармацевтическое, терапевтическое или фармакологическое соединение. Агенты могут быть природными или синтетическими или их комбинацией. Терапевтическим противораковым средством является средство, оказывающее терапевтический (например, положительный) эффект на раковые клетки или отдельно или в комбинации с другим агентом. Как правило, терапевтическими противораковыми средствами, используемыми в соответствии со способами и композициями, описанными в настоящем документе, являются средства, проявляющие цитотоксический и/или цитостатический эффект на клетки-мишени.

В применении к эффекту агента на клетку цитотоксический эффект означает уничтожение клетки. Цитотоксический эффект означает ингибирование пролиферации клеток. Под цитотоксическим агентом подразумевается агент, который оказывает цитотоксический или цитостатический эффект на клетку, тем самым сокращая или ингибируя рост, соответственно, клеток в популяции клеток.

В контексте эффекта конъюгата антитело против СИ30-лекарственное средство, термин истощает относится к снижению или ликвидации СЭ30-экспрессирующих клеток.

Термины специфическое связывание или специфически связывается означают, что антитело против СИЗО будет взаимодействовать высоко избирательным образом с соответствующей ему мишенью, СИЗО, но не с множеством других антигенов. Как правило, антитело против СИЗО связывается с аффинностью, составляющей по крайней мере приблизительно 1 χ 10^-7 М и предпочтительно от 10^-8 М до 10^-9 М, 10^-10 М, 10^-11 М или 10^-12 М.

Используемый в настоящем документе термин антитело относится к (а) полипептидам иммуноглобулинам или иммунологически активным частям полипептидов иммуноглобулинов, т.е. полипептидам семейства иммуноглобулинов или их фрагментам, которые содержат антигенсвязывающий сайт, который иммуноспецифически связывается с конкретным антителом (например, С.П30). или (Ь) консервативно замещенным производным таких полипептидов иммуноглобулинов или фрагментов, которые иммуноспецифически связываются с антителом (например, С.П30). Антитела в общих чертах описываются, например, Нат1оэт & Ьапе в АпйЬоФез: А ЬаЬогаЮгу Мапиа1 (СоМ 8рттд НагЬог ЬаЬотаФгу Рте88, 1988). Используемый в настоящем документе термин антитело включает антитела, которые были модифицированы путем ковалентного присоединения гетерологичной молекулы, такого как, например, присоединение гетерологичного полипептида, или путем гликозилирования, ацетилирования или фосфорилирования, обычно не ассоциированных с антителом, и подобного.

Термин моноклональное антитело относится к антителу, которое происходит из клона одной клетки, в том числе клона любой эукариотической или прокариотической клетки, или фагового клона, а не к способу, с помощью которого его получают. Следовательно, используемый в настоящем документе термин моноклональное антитело не ограничивается антителами, полученными благодаря гибридомной технологии.

Термины идентичные или идентичность в процентах, в контексте двух или более последовательностей нуклеиновых кислот или полипептидных последовательностей, относятся к двум или более последовательностям или подпоследовательностям, которые являются одинаковыми или имеют точно определенный процент нуклеотидов или аминокислотных остатков, которые являются одинаковыми, при сравнении и выравнивании для максимального соответствия. Для определения идентичности в процентах последовательности выравнивают в целях оптимального сравнения (например, в первую аминокислотную или нуклеотидную последовательность для оптимального выравнивания со второй аминокислотной или нуклеотидной последовательностью могут быть введены разрывы (дар)). Затем сравнивают аминокислотные остатки или нуклеотиды в соответствующих положениях аминокислот или нуклеотидов. Когда положение в первой последовательности и соответствующее положение во второй последовательности занимает один и тот же аминокислотный остаток или нуклеотид, молекулы являются идентичными по этому положению. Идентичность в процентах между двумя последовательностями зависит от числа идентичных положений, общих для последовательностей (т.е. идентичность в % = # идентичных положений/общее # положений (например, перекрывающихся положений)χ 100). В некоторых вариантах осуществления длины двух последовательностей являются одинаковыми.

Термин в значительной степени идентичные, в контексте двух нуклеиновых кислот или полипептидов, относится к двум или более последовательностям или подпоследовательностям, которые идентичны по крайней мере на 70% или по крайней мере 75%, обычнее по крайней мере 80% или по крайней мере 85% и даже обычнее по крайней мере 90%, по крайней мере 95% или по крайней мере 98% (как определено с использованием одного из изложенных способов).

Сходство или сходство в процентах, в контексте двух или более полипептидных последовательностей, относится к двум или более последовательностям или подпоследовательностям, которые имеют точно определенный процент аминокислотных остатков, которые являются одинаковыми или консервативно замещены после сравнения и выравнивания для максимального соответствия, определяемый, используя один из изложенных ниже способов. В качестве примера первая аминокислотная последовательность считается сходной со второй аминокислотной последовательностью, когда первая аминокислотная

- 4 020696 последовательность идентична или консервативно замещена по крайней мере на 50, 60, 70, 75, 80, 90 или даже 95% второй аминокислотной последовательности после сравнения с числом аминокислот, равным числу аминокислот, содержащихся в первой последовательности, или после сравнения с выравниванием полипептидов, которое было осуществлено с помощью известной в данной области техники компьютерной программы для определения сходства.

Термин значительное сходство, в контексте полипептидных последовательностей, означает, что область полипептида имеет последовательность по крайней мере с 70%, обычно по крайней мере 80%, обычнее по крайней мере 85% или даже обычнее по крайней мере 90% или по крайней мере 95% сходством с контрольной последовательностью. Например, полипептид в значительной степени сходен со вторым полипептидом, например, когда два пептида отличаются одной или более консервативными заменами.

Определение идентичности или сходства в процентах между двумя последовательностями можно успешно выполнить, используя математический алгоритм. Предпочтительным, не ограничивающим примером математического алгоритма, используемого для сравнения двух последовательностей, является алгоритм Кагйи и Л1!8сЬи1, 1990, Ргос. №Й. Асай. δα. И8А 87: 2264-2268, модифицированный, как описано Кагйи и А118сЬи1, 1993, в Ргос. №11. Асай. δα. υδΑ 90: 5873-5877. Такой алгоритм включен в программы NΒ^ΑδТ и XΒ^ΑδТ, созданные А118сЬи1 и др., 1990, 1. Мо1. Βίο1. 215: 403-410. Поиски нуклеотидных последовательностей-гомологов Β^ΑδТ можно выполнить с использованием программы NΒ^ΑδТ, при оценке в баллах = 100, размере слова = 12, для получения нуклеотидных последовательностей, гомологичных нуклеиновой кислоте, кодирующей представляющий интерес белок. Поиски белковгомологов Β^ΑδТ можно выполнить с использованием программы XΒ^ΑδТ, при оценке в баллах = 50, размере слова = 3, для получения аминокислотных последовательностей, гомологичных представляющему интерес белку. Для выполнения в целях сравнения выравниваний с использованием пропусков можно использовать Β^ΑδТ с введением разрывов, описанную А118сЬи1 и др., 1997, №с1ею Аайк Кек. 25: 3389-3402. В альтернативном случае можно использовать ΡδΙ-ΒΗδΙ для выполнения повторяющегося поиска, с помощью которого выявляется дальнее родство между молекулами (1й.). При использовании программ Β^ΑδТ, Β^ΑδТ с введением пропусков и ΡδI-Β^ΑδТ можно использовать параметры по умолчанию соответствующих программ (например, XΒ^ΑδТ и NΒ^ΑδТ) (см., например, по адресу Интернет-сервера: №№№.исЫ.п1т.и1Ь.§оу). Другим предпочтительным, не ограничивающим примером математического алгоритма, используемого для сравнения последовательностей, является алгоритм Муегк и МШег, СΑΒIΟδ (1989). Такой алгоритм включен в программу Α^IСN (версии 2.0), которая является частью пакета программ для выравнивания последовательностей ССС. При использовании программы Α^IСN для сравнения аминокислотных последовательностей можно использовать таблицу остатков в соответствии с массой РАМ120, штраф за размер пропуска - 12 и штраф за пропуск в последовательности - 4. Дополнительные алгоритмы для анализа последовательностей известны в данной области техники и включают АОУАЖ’Е и АИАМ, описанные ТогеШк и КоЬоЮ, 1994, в Согари1. Арр1. Вюкст 10: 3-5, и ΡΑδТΑ, описанный Реагхоп и Ыртап, 1988, в Ргос. №11. Асай. δα. 85: 2444-2448. В ΡΑδТΑ к1ир является регулировочной опцией, устанавливающей дискретность и скорость поиска. Если к1ир = 2, сходные области в двух сравниваемых последовательностях обнаруживают при проверке пар выравненных остатков; если к1ир = 1, проверяют одиночные выравненные аминокислоты. Можно установить к1ир = 2 или 1 для последовательностей белков или от 1 до 6 для последовательностей ДНК. К1ир по умолчанию, в случае отсутствия оговорки, равняется 2 для последовательностей белков или от 1 до 6 для последовательностей ДНК. В отношении дополнительного описания параметров ΡΑδТΑ см., например, Ью№еЬ.ра51еиг.£г/йос5/таи/таи/£а51а.1.Ыт1#5ес12, содержание которого включено сюда посредством ссылки.

В альтернативном случае выравнивание последовательностей белков можно выполнить, используя алгоритм СЬГОТАЬ описанный Ηί§§ίηκ и др., 1996, в Мейюйх Еп/уто1. 266: 383-402.

Используемые в настоящем документе термины лечение или подвергаться лечению относится к замедлению, остановке или реверсированию развития НЬ у субъекта, что подтверждается уменьшением или устранением клинического или диагностического симптома заболевания. Лечение может включать, например, уменьшение тяжести симптома, числа симптомов или частоты рецидива, например, ингибирование роста опухоли, остановку роста опухоли или регрессию уже существующих опухолей.

Используемый в настоящем документе термин противораковое средство относится к любому средству, которое замедляет, останавливает или вызывает реверсию развития рака у субъекта. Например, противораковым средством является средство, которое ингибирует рост опухоли, останавливает рост опухоли и/или вызывает регрессию уже существующих опухолей.

Противовоспалительные средства или другие агенты, назначаемые страдающему раком субъекту для лечения сопровождающих рак симптомов, включающих, например, воспаление, потерю веса и общее недомогание, не считаются противораковыми средствами.

Используемый в настоящем документе термин фармацевтически приемлемый относится к таким соединениям, материалам, композициям и/или лекарственным формам, которые, в рамках тщательной медицинской оценки, подходят для приведения в контакт с тканями людей и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений, которые соот- 5 020696 ветствуют приемлемому отношению польза/риск. Термин фармацевтически совместимый ингредиент относится к фармацевтически приемлемому разбавителю, адъюванту, наполнителю или носителю, с которым вводится соединение конъюгата антитело-лекарственное средство.

Используемый в настоящем документе при упоминании комбинированной терапии термин терапевтически эффективное количество означает такое количество комбинации взятых вместе агентов, что их комбинированное действие вызывает требуемую биологическую или терапевтическую реакцию, т.е. ингибирует возникновение или уменьшает интенсивность одного или более клинических или диагностических симптомов лимфомы Ходжкина. Например, используемый в настоящем документе при упоминании комбинированной терапии термин терапевтически эффективное количество мог бы быть количеством соединения конъюгата антитело-лекарственное средство или количеством химиотерапевтического средства (средств), которые после введения вместе, либо последовательно, либо одновременно, в одни и те же или различные дни во время цикла лечения, имеют суммарный эффект, который является терапевтически эффективным и синергетическим. Кроме того, квалифицированному в данной области техники специалисту будет понятно, что в случае комбинированной терапии с использованием терапевтически эффективного количества, как в приведенном выше примере, количество соединения конъюгата антитело-лекарственное средство и/или количество химиотерапевтического средства (средств) индивидуально может быть или может не быть терапевтически эффективным.

Сокращение ММАЕ относится к монометилауристатину Е.

Сокращение ММАЕ означает довалин-валин-долаизолейцин-долапроин-фенилаланин.

Сокращение £к и рйе-1ук относится к дипептиду фенилаланин-лизин.

Сокращение ус и уа1-сй относится к дипептиду валин-цитруллин.

Термин соединение относится и включает само химическое соединение, а также, указано ли явно или нет, и кроме случаев, когда контекст разъясняет, что должно быть исключено следующее: аморфные и кристаллические формы соединения, включающие полиморфные формы, причем эти формы могут быть частью смеси или в выделенной форме; формы соединений в виде свободных кислот и свободных оснований, которые обычно являются формами, продемонстрированными в предоставленных в настоящем документе структурах; изомеры соединения, которое относится к оптическим изомерам, и таутомерные изомеры, причем оптические изомеры включают энантиомеры и диастереомеры, хиральные изомеры и нехиральные изомеры, и оптические изомеры включают выделенные оптические изомеры, а также смеси оптических изомеров, включающие рацемические и нерацемические смеси; причем изомер может быть в выделенной форме или в смеси с одним или более другими изомерами; изотопы соединения, включающие содержащие дейтерий и тритий соединения, и включающие соединения, содержащие радиоизотопы, в том числе терапевтически и диагностически эффективные радиоизотопы; мультимерные формы соединения, включающие димерные, тримерные и т.п. формы; соли соединения, предпочтительно фармацевтически приемлемые соли, включающие соли присоединения кислоты и соли присоединения основания, включающие соли, имеющие органические противоионы и неорганические противоионы, и включающие цвитер-ионные формы, причем, если соединение сопровождается двумя или более противоионами, два или более противоиона могут быть одинаковыми или различными; и сольваты соединения, включающие полусольваты, моносольваты, дисольваты и т.п., включающие органические сольваты и неорганические сольваты, при этом указанные неорганические сольваты включают гидраты; причем, если соединение сопровождается двумя или более молекулами сольвента, две или более молекулы сольвента могут быть одинаковыми или различными. В некоторых случаях приведенная в настоящем документе ссылка на соединение настоящего изобретения будет включать прямую ссылку на одну или более из вышеуказанных форм, например соли и/или сольваты; однако эта ссылка приведена только для акцента и не должна быть истолкована как исключение других форм, идентифицированных выше.

В настоящем документе фармацевтически приемлемые соли относятся к производным описанных в настоящем документе соединений, причем исходное соединение модифицируют путем получения его соли присоединения кислоты или основания. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но без ограничения, соли, полученные взаимодействием основных остатков, таких как амины, с минеральными или органическими кислотами; соли, полученные взаимодействием кислотных остатков, таких как карбоновые кислоты, с щелочами или органическими основаниями; и т.п. Фармацевтически приемлемые соли включают общепринятые нетоксичные соли или четвертичные аммонийные соли исходного соединения, образованные, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Например, такие общепринятые нетоксичные соли включают соли, получаемые из неорганических кислот, таких как хлористо-водородная, бромисто-водородная, серная, сульфаминовая, фосфорная, азотная и т.п.; и соли, приготовленные из органических кислот, таких как уксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, стеариновая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, памовая, малеиновая, гидроксималеиновая, фенилуксусная, глутаминовая, бензойная, салициловая, сульфаниловая, 2-ацетоксибензойная, фумаровая кислота, толуолсульфокислота, метансульфокислота, этандисульфокислота, щавелевая, изэтионовая кислота и т.п. Эти физиологически приемлемые соли готовят известными в данной области техники способами, например растворением оснований в виде свободных аминов с избытком кислоты в водном спирте или нейтрализацией свободной карбоновой кислоты основанием в виде щелочного метал- 6 020696 ла, таким как гидроксид, или амином.

Кроме особо оговоренных случаев, термин алкил относится к насыщенному неразветвленному или разветвленному углеводороду, имеющему от приблизительно 1 до приблизительно 20 атомов углерода (и все комбинации и субкомбинации диапазонов и конкретных чисел атомов углерода в нем), при этом предпочтительным является диапазон от приблизительно 1 до приблизительно 8 атомов углерода. Примерами алкильных групп являются метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, 2-пентил, 3-пентил, 2-метил-2-бутил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил, ндецил, 3-метил-2-бутил, 3-метил-1-бутил, 2-метил-1-бутил, 1-гексил, 2-гексил, 3-гексил, 2-метил-2пентил, 3-метил-2-петил, 4-метил-2-пентил, 3-метил-3-пентил, 2-метил-3-пентил, 2,3-диметил-2-бутил и 3,3-диметил-2-бутил.

Алкильные группы, отдельно или в виде части другой группы, могут быть необязательно замещены одной или более группами, предпочтительно 1 -3 группами (и любыми дополнительными заместителями, выбираемыми из галогена), включающими, но без ограничения, -галоген, -О-(С1-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈алкенил), -О-(С2-С8-алкинил), -арил, -С(О)К', -ОС(О)К', -С(О)ОК', -С(О)МН₂ -С(О)КНК', -С(О)Ы(К')2, -КНС(О)К', -8К', -8О₃К', -8(О)₂К', -8(О)К', -ОН, =О, -Ν₃, -ΝΗ₂, -КН(К'), -Ν(Κ')₂ и -СЫ, где каждый К' независимо выбирают из -Н, -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или -арила, и где указанные группы -О-(С₁-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О-(С₂-С₈-алкинил), -арил, -С1-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил и -С₂-С₈-алкинил могут быть необязательно дополнительно замещены одной или более группами, включающими, но без ограничения, -С1-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -галоген, -О-(С1-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О-(С₂-С₈-алкинил), -арил, -С(О)К, -ОС(О)К, -С(О)ОК'', -С(О)ЫН₂, -С(О)КНК, -С(О)Ы(К)₂ -ЫНС(О)К, -8К, -8О₃К, -5(О)₂К, -8(О)К, -ОН, -Ν₃, -ЫН₂, -КН(К), -Ν(Β)₂ и -СЫ, где каждый К'' независимо выбирают из -Н, -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или -арила.

Кроме особо оговоренных случаев, термины алкенил и алкинил относятся к неразветвленным и разветвленным углеводородным цепям, имеющим от приблизительно 2 до приблизительно 20 атомов углерода (и все комбинации и субкомбинации диапазонов и конкретных чисел атомов углерода в нем), при этом предпочтительным является диапазон от приблизительно 2 до приблизительно 8 атомов углерода. Алкенильная цепь имеет по крайней мере одну двойную связь в цепи, а алкинильная цепь имеет по крайней мере одну тройную связь в цепи. Примеры алкенильных групп включают, но без ограничения, этилен или винил, аллил, -1-бутенил, -2-бутенил, -изобутиленил, -1-пентенил, -2-пентенил, -3-метил-1бутенил, -2-метил-2-бутенил и -2,3-диметил-2-бутенил. Примеры алкинильных групп включают, но без ограничения, ацетиленовую группу, пропаргил, ацетиленил, пропинил, -1-бутинил, -2-бутинил, -1пентинил, -2-петинил и -3-метил-1-бутинил.

Алкенильные или алкинильные группы, отдельно или в виде части другой группы, могут быть необязательно замещены одной или более группами, предпочтительно 1-3 группами (и любыми дополнительными заместителями, выбираемыми из галогена), включающими, но без ограничения, -галоген, -О(С1-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О-(С₂-С₈-алкинил), -арил, -С(О)К', -ОС(О)К', -С(О)ОК', -С(О)КН₂, -С(О)КНК', -€(Θ)Ν(Κ^,)₂, -КНС(О)К', -8К', -8О₃К', -8(О)₂К', -8(О)К', -ОН, =О, -Ν₃, -ΝΠ₂, -ΝΉ (К'), -Ν(Κ)₂ и -ΟΝ, где каждый К' независимо выбирают из -Н, -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или -арила, и где указанные группы -О-(С₁-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О-(С₂-С₈-алкинил), -арил, -С₁-С₈алкил, -С₂-С₈-алкенил и -С₂-С₈-алкинил могут быть необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, включающими, но без ограничения, -С₁-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -галоген, -О-(С1-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О-(С₂-С₈-алкинил), -арил, -С(О)К'', -ОС(О)К'', -С(О)ОК, -С(О)КН2, -С(О)КНК, -С(О)К(К)₂, -КНС(О)К, -8К, -8О₃К, -8(О)2К, -8(О)К, -ОН, -Ν₃, -КН2, -КН(К), -Ν(Κ)₂ и -СК, где каждый К'' независимо выбирают из -Н, -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂С₈-алкинила или -арила.

Кроме особо оговоренных случаев, термин алкилен относится к насыщенному углеводородному радикалу с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющему от приблизительно 1 до приблизительно 20 атомов углерода (и все комбинации и субкомбинации диапазонов и конкретных чисел атомов углерода в нем), при этом предпочтительным является диапазон от приблизительно 1 до приблизительно 8 атомов углерода, и имеющему два одновалентных радикальных центра, возникающих при удалении двух атомов водорода от одного и того же или двух различных атомов углерода исходного алкана. Типичные алкилены включают, но без ограничения, метилен, этилен, пропилен, бутилен, пентилен, гексилен, гептилен, окситилен, нонилен, декален, 1,4-циклогексилен и т.п. Алкиленовые группы, отдельно или в виде части другой группы, могут быть необязательно замещены одной или более группами, предпочтительно 1-3 группами (и любыми дополнительными заместителями, выбираемыми из галогена), включающими, но без ограничения, -галоген, -О-(С1-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О-(С₂-С₈-алкинил), -арил, -С(О)К', -ОС(О)К', -С(О)ОК', -С(О)КН2, -С(О)КНК', -φ)^ -КНС(О)К', -8К', -8О₃К', -8(О)2К', -8(О)К', -ОН, =О, -Ν₃, -КН₂, -КН(К'), -Л(К')₂ и -СЛ, где каждый К' независимо выбирают из -Н, -С_р-С₈алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или -арила, и где указанные группы -О-(С1-С₈-алкил), -О-(С₂С₈-алкенил), -О-(С₂-С₈-алкинил), -арил, -С1-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил и -С₂-С₈-алкинил могут быть необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, включающими, но без ограничения, -С₁-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -галоген, -О-(С₁-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О-(С₂-С₈- 7 020696 алкинил), -арил, -С(О)К'', -ОС(О)К, -С(О)ОК, -С(О)ИН₂, -С(О)МНК, -С(О)Ы(К)₂, -МНС(О)К, -8К, -8О₃К, -8(О)₂К, -8(О)К, -ОН, -Ν₃, -ΝΗ₂, -ΝΗ(Κ), -Ν(Κ'')₂ и -СИ, где каждый К независимо выбирают из -Н, -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или -арила.

Кроме особо оговоренных случаев, термин алкенилен относится к необязательно замещенной алкиленовой группе, содержащей по крайней мере одну углерод-углеродную двойную связь. Приводимые в качестве примеров алкениленовые группы включают, например, этенилен (-СН=СН-) и пропенилен (-СН=СНСН₂-).

Кроме особо оговоренных случаев, термин алкинилен относится к необязательно замещенной алкиленовой группе, содержащей по крайней мере одну углерод-углеродную тройную связь. Приводимые в качестве примеров алкиниленовые группы включают, например, ацетилен (-С^С-), пропаргил (-СН₂С С-) и 4-пентинил (-СН₂СН₂СН₂С=СН-).

Кроме особо оговоренных случаев, термин арил относится к одновалентному ароматическому углеводородному радикалу, имеющему 6-20 атомов углерода (и все комбинации и субкомбинации диапазонов и конкретных чисел атомов углерода в нем), возникающему при удалении одного атома водорода от одного атома углерода исходной ароматической кольцевой системы. Некоторые арильные группы представлены в приводимых в качестве примеров структурах как Аг. Типичные арильные группы включают, но без ограничения, радикалы, возникающие из бензола, замещенного бензола, фенила, нафталина, антрацена, бифенила и т.п.

Арильная группа, отдельно или в виде части другой группы, может быть необязательно замещена одной или более, предпочтительно 1-5 или даже 1-2 группами, включающими, но без ограничения, -галоген, -С₁-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -О-(С₁-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О-(С₂-С₈алкинил), -арил, -С(О)К', -ОС(О)К', -С(О)ОК', -С(О)МН₂, С(О)МНК', -С(ОЖК')₂, ^НС(О)К', -8К', -8О₃К', -8(О)₂К', -8(О)К', -ОН, -ЫО₂, -Ν₃, -Ν4₂, -ЯН(К'), -Ν(Κ')₂ и -СИ, где каждый К' независимо выбирают из -Н, -С₁-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или -арила, и где указанные группы -С₁-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -О-(С₁-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О-(С₂-С₈-алкинил) и -арил могут быть необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, включающими, но без ограничения, -С₁-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -галоген, -О-(С₁-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈алкенил), -О-(С2-С8-алкинил), -арил, -С(О)К, -ОС(О)К, -С(О)ОК, -С(О)ИН₂, -С(О)ИНК^И, -С(О)Ы(К^И)₂, -МНС(О)К, -8К, -8О₃К, -8(О)₂К, -8(О)К, -ОН, -Ν₃, -ИН₂, -МН(К), -Ν (К)₂ и -ΌΝ, где каждый К'' независимо выбирают из -Н, -С₁-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или -арила.

Кроме особо оговоренных случаев, термин арилен относится к необязательно замещенной арильной группе, которая является двухвалентной (т.е. возникающей при удалении двух атомов водорода от одного и того же или двух различных атомов углерода исходной ароматической кольцевой системы), и заместители которой могут находиться в орто-, мета- или пара-положениях, как продемонстрировано в следующих структурах, при этом фенил является приводимой в качестве примера арильной группой:

Типичные группы -(С₁-С₈-алкилен)арил, -(С₂-С₈-алкенилен)арил и -(С₂-С₈-алкинилен)арил включают, но без ограничения, бензил, 2-фенилэтан-1-ил, 2-фенилэтен-1-ил, нафтилметил, 2нафтилэтан-1-ил, 2-нафтилэтен-1-ил, нафтобензил, 2-нафтофенилэтан-1-ил и т.п.

Кроме особо оговоренных случаев, термин гетероцикл относится к моноциклической, бициклической или полициклической системе, имеющей от 3 до 14 кольцевых атомов (также называемых членами кольца(ец)), причем по крайней мере один кольцевой атом в по крайней мере одном кольце является гетероатомом, выбираемым из Ν, О, Р или 8 (и все комбинации и субкомбинации диапазонов и конкретных чисел атомов углерода и гетероатомов в нем). Гетероцикл может иметь от 1 до 4 гетероатомов, независимо выбираемых из Ν, О, Р или 8. Один или более атомов Ν, С или 8 в гетероцикле могут быть оксидированными. Моноциклический гетероцикл предпочтительно имеет 3-7 членов кольца (например, 2-6 атомов углерода и 1-3 гетероатомов, независимо выбираемых из Ν, О, Р или 8), а бициклический гетероцикл предпочтительно имеет 5-10 членов колец (например, 4-9 атомов углерода и 1-3 гетероатомов, независимо выбираемых из Ν, О, Р или 8). Кольцо, которое включает гетероатом, может быть ароматическим или неароматическим. Кроме особо оговоренных случаев, гетероцикл присоединен к боковой группе при любом гетероатоме или атоме углерода, который дает стабильную структуру.

Гетероциклы описаны в Радиейе, Ρτίηοίρίβδ οί Мойеги Не1егосусНс СЬетГйу (\ν.Λ. Веп)ат1п, Νο\ν Уогк, 1968), особенно главах 1, 3, 4, 6, 7 и 9; СЬетШгу οί НеЮгосусЬс Сотроиийк, А 5епе5 οί МоиодгарЬз (.Гойи \УПеу & 8оиз, Уогк, 1950 до настоящего времени), особенно тома 13, 14, 16, 19 и 28; и ί. Ат. СЬет. 8ос. 82: 5566 (1960).

Кроме особо оговоренных случаев, термин гетероцикло относится к необязательно замещенной гетероциклической группе, определенной выше, которая является двухвалентной (т.е. возникающей при удалении двух атомов водорода от одного и того же или двух различных атомов углерода исходной гете- 8 020696 роциклической кольцевой системы).

Примеры гетероциклических групп включают, в качестве неограничивающего примера, пиридил, дигидропиридил, тетрагидропиридил (пиперидил), тиазолил, пиримидинил, фуранил, тиенил, пирролил, пиразолил, имидазолил, тетразолил, бензофуранил, тианафталенил, индолил, индоленил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, пиперидинил, 4-пиперидонил, пирролидинил, 2-пирролидонил, пирролинил, тетрагидрофуранил, бис-тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, бис-тетрагидропиранил, тетрагидрохинолинил, тетрагидроизохинолинил, декагидрохинолинил, октагидроизохинолинил, азоцинил, триазинил, 6Н-1,2,5-тиадиазинил, 2Н,6Н-1,5,2-дитиазинил, тиенил, тиантренил, пиранил, изобензофуранил, хроменил, ксантенил, феноксатинил, 2Н-пирролил, изотиазолил, изоксазолил, пиразинил, пиридазинил, индолизинил, изоиндолил, 3Н-индолил, 1Н-индазолил, пиринил, 4Н-хинолизинил, фталазинил, нафтиридинил, хиноксалинил, хиназолинил, циннолинил, птеридинил, 4Н-карбазолил, карбазолил, βкарболинил, фенантридинил, акридинил, пиримидинил, фенантролинил, феназинил, фенотиазинил, фуразанил, феноксазинил, изохроманил, хроманил, имидазолидинил, имидазолинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиперазинил, индолинил, изоиндолинил, хинуклидинил, морфолинил, оксазолидинил, бензотриазолил, бензизоксазолил, оксиндолил, бензоксазолинил и изатиноил. Предпочтительные гетероциклические группы включают, но без ограничения, бензофуранил, бензотиофенил, индолил, бензопиразолил, кумаринил, изохинолинил, пирролил, тиофенил, фуранил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, триазолил, хинолинил, пиримидинил, пиридинил, пиридонил, пиразинил, пиридазинил, изотиазолил, изоксазолил и тетразолил.

Гетероциклическая группа, отдельно или в виде части другой группы, может быть необязательно замещена одной или более группами, предпочтительно 1-2 группами, включающими, но без ограничения, -С₁-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, галоген, -О-(С₁-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О-(С₂С₈-алкинил), -арил, -С(О)К', -ОС(О)К', -С(О)ОК', «Ο)ΝΗ₂, -С(О)]ЧНК', -С(О)Ы(К')2, -]ЧНС(О)К', -5К', -8О₃К', -§(О)₂К', -8(О)К', -ОН, -Ν₃, -ΝΗ₂, -ΝΗ(Κ'), -Ν(Κ')₂ и -СЫ, где каждый К' независимо выбирают из -Н, -С₁-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или -арила, и где указанные группы -О-(С₁-С₈алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О-(С₂-С₈-алкинил), -С₁-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил и -арил могут быть необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, включающими, но без ограничения, -С₁-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -галоген, -О-(С₁-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈алкенил), -О-(С₂-С₈-алкинил), -арил, -С(О)К, -ОС(О)К, -С(О)ОК'', -С(О)ЫН₂, -С(О)ЫНК, -С(О)Ы(К)₂, -ЫНС(О)К, -8К, -8О₃К, -8(О)₂К, -8(О)К, -ОН, -Ν₃, -ΝΗ₂, -ΝΗ(Κ), -Ν(Κ)₂ и -СЫ, где каждый К'' независимо выбирают из -Н, -С₁-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или арила.

В качестве неограничивающего примера гетероциклы со связью при атоме углерода могут быть связаны в следующих положениях: в положении 2, 3, 4, 5 или 6 пиридина; в положении 3, 4, 5 или 6 пиридазина; в положении 2, 4, 5 или 6 пиримидина; в положении 2, 3, 5 или 6 пиразина; в положении 2, 3, 4 или 5 фурана, тетрагидрофурана, тиофурана, тиофена, пиррола или тетрагидропиррола; в положении 2, 4 или 5 оксазола, имидазола или тиазола; положении 3, 4 или 5 изоксазола, пиразола или изотиазола; в положении 2 или 3 азиридина; в положении 2, 3 или 4 азетидина; в положении 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 хинолина или в положении 1, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 изохинолина. Тем не менее, обычнее гетероциклы со связью при атоме углерода включают 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил, 5-пиридил, 6-пиридил, 3-пиридазинил, 4пиридазинил, 5-пиридазинил, 6-пиридазинил, 2-пиримидинил, 4-пиримидинил, 5-пиримидинил, 6пиримидинил, 2-пиразинил, 3-пиразинил, 5-пиразинил, 6-пиразинил, 2-тиазолил, 4-тиазолил или 5тиазолил.

В качестве примера, а не ограничения, гетероциклы со связью при атоме азота могут быть связаны в положении 1 азиридина, азетидина, пиррола, пирролидина, 2-пирролина, 3-пирролина, имидазола, имидазолидина, 2-имидазолина, 3-имидазолина, пиразола, пиразолина, 2-пиразолина, 3-пиразолина, пиперидина, пиперазина, индола, индолина или 1Н-индазола; в положении 2 изоиндола или изоиндолина; в положении 4 морфолина и в положении 9 карбазола или β-карболина. Тем не менее, обычнее гетероциклы со связью при атоме азота включают 1-азиридил, 1-азетедил, 1-пирролил, 1-имидазолил, 1-пиразолил и 1-пиперидинил.

Кроме особо оговоренных случаев, термин карбоцикл относится к насыщенной или ненасыщенной неароматической моноциклической, бициклической или полициклической системе, имеющей от 3 до 14 кольцевых атомов (и все комбинации и субкомбинации диапазонов и конкретных чисел атомов углерода в нем), причем все кольцевые атомы являются атомами углерода. Моноциклические карбоциклы предпочтительно имеют 3-6 кольцевых атомов, тем не менее, предпочтительнее 5 или 6 кольцевых атомов. Бициклические карбоциклы предпочтительно имеют 7-12 кольцевых атомов, например, с расположением в виде бицикло[4,5], [5,5], [5,6] или [6,6] системы, или 9 или 10 кольцевых атомов с расположением в виде [5,6] или [6,6] системы. Термин карбоцикл включает, например, моноциклическое карбоциклическое кольцо, слитое с арильным кольцом (например, моноциклическое карбоциклическое кольцо, слитое с бензольным кольцом). Предпочтительно, карбоциклы имеют 3-8 кольцевых атомов углерода.

Карбоциклические группы, отдельно или в виде части другой группы, могут быть необязательно

- 9 020696 замещены, например, одной или более группами, предпочтительно 1 или 2 группами (и любыми дополнительными заместителями, выбираемыми из галогена), включающими, но без ограничения, -галоген, -С₁-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -О-(С₁-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О-(С₂-С₈-алкинил), -арил, -С(О)К’, -ОС(О)К’, -С(О)ОК’, -С(О)МН₂, -С(О)МНК', -С(О)Ы(К')₂, -МНС(О)К', -8К’, -8О₃К’, -8(О)₂К’, -8(О)К’, -ОН, =О, -Ν₃, -ΝΗ₂, -ΝΗ(Κ’), -Ν(Κ’)₂ и -ΟΝ, где каждый К’ независимо выбирают из -Н, -С₁-С₈алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или -арила, и где указанные группы -С₁-С₈-алкил, -С₂-С₈алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -О-(С₁-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О-(С₂-С₈-алкинил) и -арил могут быть необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, включающими, но без ограничения, -С₁-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -галоген, -О-(С₁-С₈-алкил), -О-(С₂-С₈-алкенил), -О(С2-С8-алкинил), -арил, -С(О)К, -ОС(О)К, -С(О)ОК, -С(О)1МН2, -ОДОДК, -€(Θ)Ν(Ε)2, -]МНС(О)К, -8К, -8О₃К, -8(О)₂К, -8(О)К, -ОН, -Ν₃, -ΝΜ₂. -ЯН (К), -Ν(Κ)₂ и -СН где каждый К’’ независимо выбирают из -Н, -С₁-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или -арила.

Примеры моноциклических карбоциклических заместителей включают -циклопропил, -циклобутил, -циклопентил, -1-циклопент-1-енил, -1-циклопент-2-енил, -1-циклопент-3-енил, циклогексил, -1циклогекс-1-енил, -1-циклогекс-2-енил, -1-циклогекс-3-енил, циклогептил, -циклооктил, -1,3циклогексадиенил, -1,4-циклогексадиенил, -1,3-циклогептадиенил, -1,3,5-циклогептатриенил и -циклооктадиенил.

Карбоцикло, отдельно или в виде части другой группы, относится к необязательно замещенной карбоциклической группе, определенной выше, которая является двухвалентной (т.е. возникающей при удалении двух атомов водорода от одного и того же или двух различных атомов углерода исходной карбоциклической кольцевой системы).

Когда любая переменная встречается более одного раза в любой составляющей или в любой формуле, ее определение в каждом случае не зависит от ее определения в каждом другом случае. Комбинации заместителей и/или переменных допустимы, только если такие комбинации дают в результате стабильные соединения.

Если в контексте не оговорено иное, тире (-) обозначает место присоединения боковой молекулы. Соответственно, термин -(С1-С₈-алкилен)арил или -С1-С₈-алкилен(арил) относится к определенному в настоящем документе С₁-С₈-алкиленовому радикалу, причем алкиленовый радикал присоединен к боковой молекуле при любом из атомов углерода алкиленового радикала, и один из атомов водорода, связанный с атомом углерода алкиленового радикала, замещен арильным радикалом, определенным в настоящем документе.

Когда конкретная группа является замещенной, эта группа может иметь один или более заместителей, предпочтительно от одного до пяти заместителей, более предпочтительно, от одного до трех заместителей, наиболее предпочтительно, от одного до двух заместителей, независимо выбираемых из перечня заместителей. Однако группа может, как правило, иметь любое число заместителей, выбираемых из галогена. Являющиеся замещенными группы, таким образом, указываются.

Предполагается, что определение любого заместителя или переменной в конкретном положении в молекуле не зависит от его определений еще где-нибудь в этой молекуле. Подразумевается, что заместители или наборы заместителей в соединениях этого изобретения могут быть выбраны специалистом со средним уровнем компетентности в данной области техники для обеспечения соединений, которые являются химически стабильными, и которые можно легко синтезировать с помощью методов, известных в данной области техники, а также тех способов, которые в настоящем документе изложены.

Защитные группы в настоящем документе относятся к группам, которые избирательно блокируют, или временно, или постоянно, один реакционноспособный сайт в многофункциональном соединении. Подходящие защитные группы для гидроксигрупп для использования в настоящем изобретении являются фармацевтически приемлемыми и могут нуждаться или могут не нуждаться в отщеплении от исходного соединения после введения субъекту для того, чтобы соединение было активным. Отщепление происходит благодаря нормальному метаболическому процессу в организме. Защитные группы для гидроксигрупп хорошо известны в данной области техники, см. документ РгоЮсИус Сгоирк ίη Огдатс ЗуШЬемк Ьу Т.^. Сгеепе апб Р.С.М. \УШ5 ЦоЬп \УПсу & 8опк, 3¹'¹ Ε6ίίίοη), который включен сюда целиком в качестве ссылки, и включают, например, защитные группы, образующие простой эфир (например, алкиловые эфиры и силиловые эфиры, включающие, например, диалкилсилиловый эфир, триалкилсилиловый эфир, диалкилалкоксисилиловый эфир), сложный эфир, карбонат, карбаматы, сульфонат и фосфат. Примеры защитных группы для гидроксигрупп включают, но без ограничения, группы, образующие метиловый эфир, метоксиметиловый эфир, метилтиометиловый эфир, (фенилдиметилсилил)метоксиметиловый эфир, бензилоксиметиловый эфир, параметоксибензилоксиметиловый эфир, паранитробензилоксиметиловый эфир, ортонитробензилоксиметиловый эфир, (4-метоксифенокси)метиловый эфир, гваяколметиловый эфир, трет-бутоксиметиловый эфир, 4-пентенилоксиметиловый эфир, силоксиметиловый эфир, 2метоксиэтоксиметиловый эфир, 2,2,2-трихлорэтоксиметиловый эфир, бис(2-хлорэтокси)метиловый эфир, 2-(триметилсилил)этоксиметиловый эфир, ментоксиметиловый эфир, тетрагидропираниловый эфир, 1метоксициклогексиловый эфир, 4-метокситетрагидротиопираниловый эфир, 4метокситетрагидротиопираниловый эфир 3,3-диоксид, 1-[(2-хлор-4-метил)фенил]-4-метоксипиперидин- 10 020696

4-иловый эфир, 1-(2-фторфенил)-4-метоксипиперидин-4-иловый эфир, 1,4-диоксан-2-иловый эфир, тетрагидрофураниловый эфир, тетрагидротиофураниловый эфир; замещенные этиловые эфиры, такие как 1этоксиэтиловый эфир, 1-(2-хлорэтокси)этиловый эфир, 1-[2-(триметилсилил)этокси]этиловый эфир, 1метил-1-метоксиэтиловый эфир, 1-метил-1-бензилоксиэтиловый эфир, 1-метил-1-бензилокси-2фторэтиловый эфир, 1-метил-1-феноксиэтиловый эфир, 2-триметилсилиловый эфир, трет-бутиловый эфир, аллиловый эфир, пропаргиловые эфиры, парахлорфениловый эфир, параметоксифениловый эфир, бензиловый эфир, параметоксибензиловый эфир, 3,4-диметоксибензиловый эфир, триметилсилиловый эфир, триэтилсилиловый эфир, трипропилсилиловый эфир, диметилизопропилсилиловый эфир, диэтилизопропилсилиловый эфир, диметилгексилсилиловый эфир, трет-бутилдиметилсилиловый эфир, дифенилметилсилиловый эфир, эфир бензоилмуравьиной кислоты, эфир уксусной кислоты, эфир хлоруксусной кислоты, эфир дихлоруксусной кислоты, эфир трихлоруксусной кислоты, эфир трифторуксусной кислоты, эфир метоксиуксусной кислоты, эфир трифенилметоксиуксусной кислоты, эфир фенилуксусной кислоты, эфир бензойной кислоты, алкилметилкарбонат, алкил-9-флуоренилметилкарбонат, алкилэтилкарбонат, алкил-2,2,2-трихлорэтилкарбонат, 1,1-диметил-2,2,2-трихлорэтилкарбонат, алкилсульфонат, метансульфонат, бензилсульфонат, тозилат, метиленацеталь, этилиденацеталь и третбутилметилиденкеталь. Предпочтительные защитные группы представлены формулами -К^а, 81(К^а)(К^а)(К^а), -С(О)К^а, -С(О)ОК^а, -С(О)ИН(К^а), -3(О)2К^а, 3(О)2ОН, -Р(О)(ОН)₂ и -Р(О)(ОН)ОК^а, где К^а представляет собой -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, -С1-С₂₀-алкилен (карбоцикл), -С₂С₂₀-алкенилен (карбоцикл), -С₂-С₂₀-алкинилен (карбоцикл), -С₆-Сю-арил, -С1-С₂₀-алкилен (арил), -С₂-С₂₀алкенилен (арил), -С₂-С₂₀-алкинилен (арил), -С1-С₂₀-алкилен (гетероцикл),

-С2-С20-алкенилен (гетероцикл) или -С2-С20-алкинилен(гетероцикл), где указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкениленовые и алкиниленовые радикалы, отдельно или в виде части другой молекулы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1, указанные карбоциклические радикалы, отдельно или в виде части другой молекулы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А2, указанные арильные радикалы, отдельно или в виде части другой молекулы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А3, и указанные гетероциклические радикалы, отдельно или в виде части другой молекулы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А4. А1, А2, А3 и А4 имеют определенные в настоящем документе значения.

Ό. Конъюгат антитело-лекарственное средство.

Описанные в настоящем документе способы включают применение соединения конъюгата антитело-лекарственное средство в комбинированной терапии для лечения НЬ. Соединение конъюгата антитело-лекарственное средство для применения в настоящем изобретении включает антитело против ί'Ό30, т.е. антитело, которое специфически связывается с ί'Ό30, связанное с составляющей в виде лекарственного средства. Составляющей в виде лекарственного средства является лекарственное средство типа ауристатина, который, как было установлено, препятствует динамике микротрубочек и ядерному и клеточному делению и обладает противораковой активностью. Ауристатины настоящего изобретения связываются с тубулином и оказывают цитотоксический или цитостатический эффект на линию клеток НЬ, например, линию клеток Ь540су. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения лекарственное средство ауристатин конъюгировано с антителом против СЭ30 посредством линкера, который является расщепляемым во внутриклеточных условиях так, что расщепление линкера приводит к высвобождению соединения ауристатина от антитела во внутриклеточном окружении. В уже других вариантах осуществления единица линкера является не расщепляемой, и лекарственное средство высвобождается посредством деградации антитела.

Существует ряд различных анализов, которые можно использовать для определения того, оказывает ли ауристатин или полученный конъюгат антитело-лекарственное средство цитостатический или цитотоксический эффект на линию клеток НЬ. В одном примере для определения того, оказывает ли ауристатин или полученный конъюгат антитело-лекарственное средство цитотоксический или цитостатический эффект на линию клеток НЬ, используют анализ включения тимидина. Например, клетки НЬ при плотности 5000 клеток/лунка 96-луночного планшета культивируют в течение 72-часового периода времени и подвергают воздействию 0,5 мкКи ³Н-тимидина в течение завершающих 8 ч 72-часового периода времени, и включение ³Н-тимидина в клетки культуры измеряют в присутствии или в отсутствие ауристатина или конъюгата антитело-лекарственное средство. Ауристатин или полученный конъюгат антителолекарственное средство имеют цитостатический или цитотоксический эффект на линию клеток НЬ, если клетки культуры характеризуются уменьшенным включением ³Н-тимидина по сравнению с клетками той же линии клеток, подвергнутыми культивированию в тех же условиях, но не приводимыми в контакт с ауристатином или конъюгатом антитело-лекарственное средство.

Для определения цитотоксичности можно определять некроз или апоптоз (запрограммированную гибель клеток). Некроз обычно сопровождается увеличением проницаемости плазматической мембраны, разбуханием клетки и разрывом плазматической мембраны. Апоптоз обычно характеризуется образованием мембранных везикул, конденсацией цитоплазмы и активацией эндогенных эндонуклеаз. Определение любого из этих эффектов на клетки НЬ указывает на то, что ауристатин или конъюгат антитело- 11 020696 лекарственное средство применимы для лечения или предупреждения НЬ.

В другом примере для определения того, оказывает ли ауристатин или полученный конъюгат антитело-лекарственное средство цитостатический или цитотоксический эффект на линию клеток НЬ, определяют жизнеспособность клеток путем определения внедрения в клетку красителя, такого как нейтральный красный, трипановый синий или АЬАМАК™ синий (см., например, Раде е! а1., 1993, 1пЙ. 1. о£ Опсо1оду 3: 473-476). В таком анализе клетки инкубируют в средах, содержащих краситель, клетки отмывают и спектрофотометрически определяют остающийся краситель, являющийся отражением внедрения красителя в клетку. Для определения цитотоксичности можно также использовать белоксвязывающий краситель сульфородамин В (ЖВ) (8кеЬап е! а1., 1990, 1. Ν;·ιΐ1. Сапсег Ιηδΐ. 82: 1107-1112). Предпочтительные конъюгаты антитело-лекарственное средство включают конъюгаты со значением 1С₅₀ (определяемой как концентрация мАВ, которая дает 50% гибель клеток), составляющим менее 1000 нг/мл, предпочтительно менее 500 нг/мл, более предпочтительно менее 100 нг/мл, наиболее предпочтительно даже менее 50 нг/мл или даже менее 10 нг/мл на линии клеток лимфомы Ходжкина, например линии клеток Ь540су.

Способы определения того, связывается ли соединение с тубулином, известны в данной области техники. См., например, Ми11ег е! а1., Апа1. СЬет. 2006, 78, 4390-4397; Нате1 е! а1., Мо1еси1аг РЬагтасо1оду, 1995, 47: 965-976; и Нате1 е! а1., ТЬе 1оигпа1 о£ Вю1одюа1 СЬетк1гу. 1990, 265: 17141-17149. Для целей настоящего изобретения можно определять относительное сродство соединения с тубулином. Предпочтительные ауристатины настоящего изобретения связываются с тубулином со сродством, находящимся в диапазоне от в 10 раз меньшего (более слабого) сродства связывания ММАЕ с тубулином до в 10 раз, 2 0 раз или даже 100 раз большего (более сильного) сродства связывания ММАЕ с тубулином.

Е. Гемцитабин.

Некоторые способы настоящего изобретения включают введение соединения конъюгата антителолекарственное средство и гемцитабина для лечения лимфомы Ходжкина.

Г емцитабин, 4-амино-1-[(2К,4К,5К)-3,3-дифтор-4-гидрокси-5 -(гидроксиметил)оксолан-2ил]пиримидин-2-он, в настоящее время продается под маркой ΟΕΜΖΑΚ™ ЕЬ Ы11у апй Сотрапу. Гемцитабин, аналог цитарабина, является антиметаболитом пиримидина, который, как установлено, демонстрирует широкий спектр активности при НЬ.

Настоящим изобретением охватывается комбинированная терапия с использованием соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, гемцитабина и необязательно одного или более дополнительных агентов, например, противораковых средств, включающих химиотерапевтические средства. Например, один или более из винорелбина, дексаметазона, цисплатина и доксорубицина, в том числе пегилированного липосомального доксорубицина, можно вводить в качестве части комбинированной терапии (например, схемы СУЭ). В некоторых вариантах осуществления, однако, гемцитабин будет единственным химиотерапевтическим средством, вводимым в качестве части комбинированной терапии с использованием соединения конъюгата антитело-лекарственное средство. Например, в некоторых вариантах осуществления, во время одного или более циклов терапии, гемцитабин будет единственным химиотерапевтическим средством, вводимым в качестве части комбинированной терапии с использованием соединения конъюгата антитело-лекарственное средство. В некоторых вариантах осуществления гемцитабин будет единственным противораковым средством, вводимым в качестве части комбинированной терапии с использованием соединения конъюгата антитело-лекарственное средство. В некоторых вариантах осуществления доксорубицин, или конкретнее пегилированный липосомальный доксорубицин, будет, в частности, исключен из комбинированной терапии. В некоторых вариантах осуществления винорелбин и доксорубицин или винорелбин и пегилированный липосомальный доксорубицин будут исключены из комбинированной терапии.

Р. Синергизм.

В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения терапия с использованием соединения конъюгата антитело-лекарственное средство и химиотерапевтического средства (средств) обеспечивает синергетический эффект при лечении лимфомы Ходжкина у пациента. Используемый в настоящем документе термин синергизм или синергетический эффект при использовании в связи с описанием эффективности комбинации агентов означает любой определяемый эффект комбинации, который превышает эффект, предсказанный на основе суммы эффектов индивидуальных агентов. Соответственно, настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых субъекты, подвергнутые лечению как соединением конъюгата антитело-лекарственное средство, так и химиотерапевтическим средством (средствами), имеют значительно лучшие результаты лечения, чем субъекты, подвергнутые лечению только соединением конъюгата антитело-лекарственное средство или только химиотерапевтическим средством (средствами), с назначением тех же схем введения и дозирования. Настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых субъекты имеют лучшие результаты лечения, чем результаты, которые могли бы ожидаться на основе суммы эффектов лечения только соединением конъюгата антитело-лекарственное средство и только схемы химиотерапевтического лечения, с назначением тех же схем введения и дозирования.

- 12 020696

Способы определения такого синергизма известны в данной области техники. В одном примере сингенные (одной и той же генной линии) опухоли получают от донорных животных, подвергают дезагрегации, определению количества и инъецируют обратно сингенным (одной и той же генной линии) мышам-хозяевам. Противораковые комбинации обычно затем инъецируют в некоторые более поздние моменты (момент) времени, с помощью или внутрибрюшинного, внутривенного пути введения, или перорального пути введения, и определяют скорости роста опухолей и/или выживание по сравнению с не подвергнутыми лечению контролями и контролями, подвергнутыми воздействию только одной из терапий. Скорости роста обычно определяют для опухолей, растущих в передней боковой стороне животного, причем диаметры, перпендикулярные горизонтальному размеру опухоли, переводят в оценку общей массы и объема опухоли. Затем сравнивают время, требуемое для достижения заданной массы (например, время, требуемое для трехкратного увеличения опухоли, или время, требуемое для четырехкратного увеличения опухоли), со временем, требуемым для трехкратного увеличения опухоли, или время, требуемое для четырехкратного увеличения опухоли, со временем, требуемым для равного увеличения опухоли у контрольных животных. Если время, требуемое для достижения заданной массы, для животного, подвергнутого лечению комбинированной терапией, превышает величину, полученную суммированием времени, требуемого для достижения заданной массы, для животного, подвергнутого лечению терапией А, и для животного, подвергнутого лечению терапией В (т.е. отдельно каждой терапией), можно сказать, что комбинированная терапия обеспечивает синергетический эффект. В другом примере время, требуемое для достижения заданной массы, для животного, подвергнутого лечению комбинированной терапией, может не превышать величину, полученную суммированием времени, требуемого для достижения заданной массы, для животного, подвергнутого лечению терапией А, и для животного, подвергнутого лечению терапией В; однако другой определяемый эффект комбинации, который превышает эффект, предсказанный на основе суммы эффектов индивидуальных агентов, является адекватным для идентификации/определения комбинированной терапии как синергетической. Например, если число длительных ответных реакций для животных, подвергнутых лечению комбинированной терапией, превышает сумму числа длительных ответных реакций в каждой группе лечения отдельно, комбинированная терапия обеспечивает синергетический эффект. Длительную ответную реакцию (ΌΚ) определяют как отсутствие пальпируемой опухоли у животного.

С. Введение (назначение).

Конъюгат антитело-лекарственное средство и гемцитабин вводят таким образом, чтобы они обеспечивали синергетический эффект при лечении НЬ у пациента. Введение может быть осуществлено любым подходящим способом при условии, что назначение обеспечивает требуемый терапевтический эффект, т.е. синергизм. В предпочтительных вариантах осуществления соединение конъюгата антителолекарственное средство и гемцитабин вводят во время одного и того же цикла терапии, например во время одного цикла терапии, например периода времени, составляющего три или четыре недели, как соединение конъюгата антитело-лекарственное средство, так и заданное химиотерапевтическое средство(а) вводят субъекту. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения введение соединения конъюгата антитело-лекарственное средство будет осуществлено в такое время, что оно будет сенсибилизировать раковые клетки к лечению гемцитабином, т.е. последовательно, например, непосредственно перед химиотерапевтическим лечением, например менее чем за 2 ч до химиотерапевтического лечения.

Доза соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, вводимая пациенту с НЬ, будет также зависеть от частоты введения. Настоящим изобретением предусматривается доставка соединения конъюгата антитело-лекарственное средство только во время цикла лечения или с помощью дробной доставки.

Настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых соединение конъюгата антитело-лекарственное средство будет вводиться в диапазоне доз, составляющем от 0,1 до 2,7 мг/кг веса тела субъекта в каждом дозе, от 0,2 до 1,8 мг/кг веса тела субъекта в каждом дозе, от 0,2 до 1,2 мг/кг веса тела субъекта в каждом дозе, от 0,4 до 1 мг/кг веса тела субъекта в каждом дозе, от 1 до 1,5 мг/кг веса тела субъекта в каждом дозе и от 0,5 до 1 мг/кг веса тела субъекта в каждом дозе. Настоящим изобретением охватываются другие диапазоны, если они приводят к требуемому результату.

Настоящее изобретение включает схемы лечения, в которых общая доза соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, вводимая пациенту с НЬ, будет составлять, например, от 0,1 до 5 мг/кг, от 0,1 до 4 мг/кг, от 0,1 до 3,2 мг/кг или от 0,1 до 2,7 мг/кг веса тела субъекта в течение цикла лечения, например, периода времени, составляющего 3 или 4 недели. В некоторых вариантах осуществления общая доза соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, вводимая пациенту с НЬ, будет составлять, например, от приблизительно 0,6 до 3,2 мг/кг, от приблизительно 0,6 до приблизительно 2,7 мг/кг или даже от приблизительно 1,5 до приблизительно 3 мг/кг в течение цикла лечения, например, периода времени, составляющего 3 или 4 недели. В некоторых вариантах осуществления доза будет составлять приблизительно 0,6 мг/кг, приблизительно 0,7 мг/кг, приблизительно 0,8 мг/кг, приблизительно 0,9 мг/кг, приблизительно 1,0 мг/кг, приблизительно 1,1 мг/кг, приблизительно 1,2 мг/кг, приблизительно 1,3 мг/кг, приблизительно 1,4 мг/кг, приблизительно 1,5 мг/кг, приблизительно 1,6 мг/кг, приблизительно

1,7 мг/кг, приблизительно 1,8 мг/кг, приблизительно 1,9 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно

- 13 020696

2,1 мг/кг, приблизительно 2,2 мг/кг, приблизительно 2,3 мг/кг, приблизительно 2,4 мг/кг, приблизительно

2.5 мг/кг, приблизительно 2,6 мг/кг, приблизительно 2,7 мг/кг, приблизительно 2,8 мг/кг, приблизительно 2,9 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 3,1 мг/кг, приблизительно 3,2 мг/кг, приблизительно 3,3 мг/кг, приблизительно 3,4 мг/кг, приблизительно 3,5 мг/кг, приблизительно 3,6 мг/кг, приблизительно

3,7 мг/кг или приблизительно 3,8 мг/кг веса тела субъекта в течение цикла лечения, например, периода времени, составляющего 3 или 4 недели. Настоящим изобретением предусматривается введение лекарственного средства в течение одного или более циклов лечения, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более циклов лечения. В некоторых вариантах осуществления между одним или более циклами лечения будут периоды покоя. Например, в некоторых вариантах осуществления период покоя будет между вторым и третьим циклом лечения, но не между первым и вторым циклом лечения. В другом варианте осуществления период покоя мог бы быть между первым и вторым циклом лечения, но не между вторым и третьим циклом лечения. Схемы введения доз включают, например, введение соединения конъюгата антителолекарственное средство один раз во время схемы лечения, например, в день 1 21-дневного цикла, дважды во время цикла лечения, например, в дни 1 и 15 28-дневного цикла и трижды во время цикла лечения, например, в дни 1, 8 и 15 28-дневного цикла. Настоящим изобретением охватываются другие схемы введения доз.

Настоящее изобретение включает схемы лечения, в которых соединение конъюгата антителолекарственное средство вводят один раз во время цикла лечения, например, периода времени, составляющего 3 или 4 недели. Например, в некоторых вариантах осуществления конъюгат антителолекарственное средство будут вводить на третьей недели цикла лечения, составляющего 3 или 4 недели, например, в день 21 цикла, составляющего три или четыре недели. В некоторых вариантах осуществления конъюгат антитело-лекарственное средство будут вводить в день 1 цикла лечения, составляющего 3 или 4 недели, или любой другой день цикла лечения, составляющего три или четыре недели. В некоторых таких вариантах осуществления доза соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, вводимая пациенту с НЬ, будет, как правило, составлять, например, от 0,1 до 5 мг/кг веса тела субъекта в течение цикла лечения, например, периода времени, составляющего 3 или 4 недели. Конкретнее, доза будет составлять от 0,1 до 4 мг/кг, от 0,1 до 3,2 мг/кг, от 0,1 до 2,7 мг/кг, от 1 до 2,7 мг/кг, от 1,5 до 2,7 мг/кг или от 1,5 до 2 мг/кг веса тела субъекта в течение цикла лечения, например, периода времени, составляющего 3 или 4 недели. В некоторых вариантах осуществления общая доза соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, вводимая пациенту с НЬ, будет составлять, например, от приблизительно 0,6 до приблизительно 5 мг/кг, от приблизительно 0,6 до приблизительно 4 мг/кг, от приблизительно 0,6 до 3,2 мг/кг, от приблизительно 0,6 до приблизительно 2,7 мг/кг или даже от приблизительно

1.5 до приблизительно 3 мг/кг в течение цикла лечения, например, периода времени, составляющего 3 или 4 недели. В некоторых вариантах осуществления доза будет составлять приблизительно 0,6 мг/кг, приблизительно 0,7 мг/кг, приблизительно 0,8 мг/кг, приблизительно 0,9 мг/кг, приблизительно 1,0 мг/кг, приблизительно 1,1 мг/кг, приблизительно 1,2 мг/кг, приблизительно 1,3 мг/кг, приблизительно 1,4 мг/кг, приблизительно 1,5 мг/кг, приблизительно 1,6 мг/кг, приблизительно 1,7 мг/кг, приблизительно 1,8 мг/кг, приблизительно 1,9 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 2,1 мг/кг, приблизительно 2,2 мг/кг, приблизительно 2,3 мг/кг, приблизительно 2,4 мг/кг, приблизительно 2,5 мг/кг, приблизительно 2,6 мг/кг, приблизительно 2,7 мг/кг, приблизительно 2,8 мг/кг, приблизительно 2,9 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 3,1 мг/кг, приблизительно 3,2 мг/кг, приблизительно 3,3 мг/кг, приблизительно 3,4 мг/кг, приблизительно 3,5 мг/кг, приблизительно 3,6 мг/кг, приблизительно 3,7 мг/кг или приблизительно 3,8 мг/кг веса тела субъекта в течение цикла лечения.

В других вариантах осуществления соединение конъюгата антитело-лекарственное средство будет вводиться более одного раза во время цикла лечения. Например, в некоторых вариантах осуществления соединение конъюгата антитело-лекарственное средство будет вводиться раз в неделю в течение трех следующих друг за другом недель в цикле лечения, составляющем 3 или 4 недели. Например, в некоторых вариантах осуществления соединение конъюгата антитело-лекарственное средство будет вводиться в дни 1, 8 и 15 каждого цикла лечения, составляющего 28 дней. В некоторых таких вариантах осуществления доза соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, вводимая пациенту с НЬ, может, например, составлять от 0,1 до 5 мг/кг, от 0,1 до 4 мг/кг, от 0,1 до 3,2 мг/кг или от 0,1 до 2,7 мг/кг веса тела субъекта в течение цикла лечения. В некоторых вариантах осуществления общая доза соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, вводимая пациенту с НЬ, будет составлять, например, от приблизительно 0,6 до приблизительно 5 мг/кг, от приблизительно 0,6 до приблизительно 4 мг/кг, от приблизительно 0,6 до 3,2 мг/кг, от приблизительно 0,6 до приблизительно 2,7 мг/кг или даже от приблизительно 1,5 до приблизительно 3 мг/кг в течение цикла лечения. В некоторых вариантах осуществления доза будет составлять приблизительно 0,6 мг/кг, приблизительно 0,7 мг/кг, приблизительно 0,8 мг/кг, приблизительно 0,9 мг/кг, приблизительно 1,0 мг/кг, приблизительно 1,1 мг/кг, приблизительно 1,2 мг/кг, приблизительно 1,3 мг/кг, приблизительно 1,4 мг/кг, приблизительно 1,5 мг/кг, приблизительно 1,6 мг/кг, приблизительно 1,7 мг/кг, приблизительно 1,8 мг/кг, приблизительно 1,9 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 2,1 мг/кг, приблизительно 2,2 мг/кг, приблизительно 2,3 мг/кг, приблизительно 2,4 мг/кг, приблизительно 2,5 мг/кг, приблизительно 2,6 мг/кг, приблизительно 2,7 мг/кг, приблизительно 2,8 мг/кг,

- 14 020696 приблизительно 2,9 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 3,1 мг/кг, приблизительно 3,2 мг/кг, приблизительно 3,3 мг/кг, приблизительно 3,4 мг/кг, приблизительно 3,5 мг/кг, приблизительно 3,6 мг/кг, приблизительно 3,7 мг/кг, приблизительно 3,8 мг/кг, приблизительно 3,9 мг/кг или приблизительно 4,0 мг/кг веса тела субъекта в течение цикла лечения. В некоторых вариантах осуществления доза будет обычно составлять от 0,1 до 5 мг/кг веса тела субъекта, от 0,1 до 3,2 мг/кг веса тела субъекта, даже обычнее от 0,1 до 2,7 мг/кг, от 0,2 до 1,8 мг/кг, от 0,2 до 1,2 мг/кг, от 0,2 до 1 мг/кг, от 0,4 до 1 мг/кг или от 0,4 до 0,8 мг/кг веса тела субъекта в дни 1, 8 и 15 каждого 28-дневного цикла. В некоторых вариантах осуществления доза будет составлять приблизительно 0,2 мг/кг, приблизительно 0,3 мг/кг, приблизительно 0,4 мг/кг, приблизительно 0,5 мг/кг, приблизительно 0,6 мг/кг, приблизительно 0,7 мг/кг, приблизительно 0,8 мг/кг, приблизительно 0,9 мг/кг, приблизительно 1,0 мг/кг, приблизительно 1,1 мг/кг, приблизительно 1,2 мг/кг, приблизительно 1,3 мг/кг, приблизительно 1,4 мг/кг или приблизительно 1,5 мг/кг веса тела субъекта в дни 1, 8 и 15 каждого 28-дневного цикла.

В равных других вариантах осуществления соединение конъюгата антитело-лекарственное средство будет вводиться каждые две недели в цикле лечения, составляющем четыре недели. Например, в некоторых вариантах осуществления соединение конъюгата антитело-лекарственное средство будет вводиться в дни 1 и 15 каждого 28-дневного цикла лечения. В некоторых таких вариантах осуществления доза соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, вводимая пациенту с НЬ, может, например, составлять от 0,1 до 5 мг/кг, от 0,1 до 4 мг/кг, от 0,1 до 3,2 мг/кг или от 0,1 до 2,7 мг/кг веса тела субъекта в течение цикла лечения. В некоторых вариантах осуществления общая доза соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, вводимая пациенту с НЬ, будет составлять, например, от приблизительно 0,6 до приблизительно 5 мг/кг, от приблизительно 0,6 до приблизительно 4 мг/кг, от приблизительно 0,6 до 3,2 мг/кг, от приблизительно 0,6 до приблизительно 2,7 мг/кг или даже от приблизительно 1,5 до приблизительно 3 мг/кг в течение цикла лечения. В некоторых вариантах осуществления доза будет составлять приблизительно 0,6 мг/кг, приблизительно 0,7 мг/кг, приблизительно 0,8 мг/кг, приблизительно 0,9 мг/кг, приблизительно 1,0 мг/кг, приблизительно 1,1 мг/кг, приблизительно 1,2 мг/кг, приблизительно 1,3 мг/кг, приблизительно 1,4 мг/кг, приблизительно 1,5 мг/кг, приблизительно 1,6 мг/кг, приблизительно 1,7 мг/кг, приблизительно 1,8 мг/кг, приблизительно 1,9 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 2,1 мг/кг, приблизительно 2,2 мг/кг, приблизительно 2,3 мг/кг, приблизительно 2,4 мг/кг, приблизительно 2,5 мг/кг, приблизительно 2,6 мг/кг, приблизительно 2,7 мг/кг, приблизительно 2,8 мг/кг, приблизительно 2,9 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 3,1 мг/кг, приблизительно 3,2 мг/кг, приблизительно 3,3 мг/кг, приблизительно 3,4 мг/кг, приблизительно 3,5 мг/кг, приблизительно 3,6 мг/кг, приблизительно 3,7 мг/кг или приблизительно 3,8 мг/кг веса тела субъекта в течение цикла лечения. В некоторых вариантах осуществления доза соединения конъюгата антитело-лекарственное средство будет обычно составлять от 0,1 до 5 мг/кг веса тела субъекта, от 0,1 до 3,2 мг/кг веса тела субъекта, обычнее от 0,1 до 2,7 мг/кг, даже обычнее от 0,2 до 1,8 мг/кг, от 0,2 до 1,2 мг/кг, от 0,2 до 1,5 мг/кг, от 1 до 1,5 мг/кг или от 0,5 до 1,2 мг/кг веса тела субъекта в дни 1 и 15 каждого 28-дневного цикла. В некоторых вариантах осуществления доза будет составлять приблизительно 0,5 мг/кг, приблизительно 0,6 мг/кг, приблизительно 0,7 мг/кг, приблизительно 0,8 мг/кг, приблизительно 0,9 мг/кг, приблизительно 1,0 мг/кг, приблизительно 1,1 мг/кг, приблизительно 1,2 мг/кг, приблизительно 1,3 мг/кг, приблизительно 1,4 мг/кг, приблизительно 1,5 мг/кг, приблизительно 1,6 мг/кг, приблизительно 1,7 мг/кг или приблизительно 1,8 мг/кг веса тела субъекта в дни 1 и 15 каждого 28-дневного цикла.

Квалифицированным в данной области техники специалистам будет абсолютно очевидно, что другие дозы или частоты введения соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, которые обеспечивают требуемый терапевтический эффект, подходят для применения в настоящем изобретении.

Введение соединения конъюгата антитело-лекарственное средство и гемцитабина может осуществляться в одни и те же или различные дни при условии, что введение обеспечивает требуемый терапевтический эффект. Настоящее изобретение включает, например, варианты осуществления, в которых гемцитабин вводят раз в неделю в течение трех следующих друг за другом недель в цикле лечения, составляющем четыре недели, например в дни 1, 8 и 15 28-дневного цикла. Настоящее изобретение включает, например, варианты осуществления, в которых гемцитабин вводят два раза в цикле лечения, составляющем четыре недели, например в дни 1 и 15 28-дневного цикла. Настоящее изобретение включает, например, варианты осуществления, в которых гемцитабин вводят два раза в цикле лечения, составляющем три недели, например в дни 1 и 8 или дни 1 и 15 21-дневного цикла. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения введение соединения конъюгата антитело-лекарственное средство и гемцитабина будет осуществляться в одни и те же дни, например в дни 1, 8 и 15 цикла, составляющего четыре недели, или дни 1 и 15 цикла, составляющего четыре недели. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения введение соединения конъюгата антитело-лекарственное средство и гемцитабина будет осуществляться в одни и те же и/или различные дни, например конъюгат антитело-лекарственное средство будет вводиться в день 1 21-дневного цикла, а гемцитабин будет вводиться в дни 1 и 8 или дни 1 и 15 21-дневного цикла. В некоторых вариантах осуществления соединение конъюгата антителолекарственное средство и гемцитабин будут вводиться в одни и те же дни, и гемцитабин будет вводиться после завершения введения конъюгата антитело-лекарственное средство, например гемцитабин будет

- 15 020696 вводиться менее чем через 2 ч после введения конъюгата антитело-лекарственное средство, например через 30 мин после введения конъюгата антитело-лекарственное средство. Настоящим изобретением охватываются альтернативные схемы лечения, если они приводят к требуемому результату.

В некоторых вариантах осуществления гемцитабин будут назначать на уровнях, в настоящее время предписанных в данной области для лечения НЬ, или на более низких или более высоких уровнях, чем уровни, в настоящее время предписанные в данной области для лечения НЬ, при условии, что такая доза обеспечивает терапевтический эффект. Варианты осуществления настоящего изобретения включают, например, варианты, в которых схему лечения гемцитабином назначают приблизительно в МТБ, максимальной переносимой дозе. Варианты осуществления настоящего изобретения включают варианты, в которых гемцитабин вводят в диапазоне доз, составляющем от приблизительно 100 до приблизительно 2000 мг/м², от приблизительно 500 до приблизительно 1500 мг/м², от приблизительно 500 до приблизительно 1250 мг/м² или от приблизительно 750 до приблизительно 1250 мг/м² на каждое введение. В особенно предпочтительных вариантах осуществления гемцитабин вводится в диапазоне доз, составляющем от приблизительно 750 до приблизительно 1250 мг/м² на каждое введение или от приблизительно 1000 до приблизительно 1250 мг/м² на каждое введение. Например, в некоторых вариантах осуществления гемцитабин будет вводиться в диапазоне доз, составляющем от приблизительно 750 до приблизительно 1250 мг/м² или от приблизительно 1000 до приблизительно 1250 мг/м², в дни 1, 8 и 15 28-дневного цикла лечения. В некоторых вариантах осуществления гемцитабин будет вводиться в диапазоне доз, составляющем от приблизительно 750 до приблизительно 1250 мг/м² или от приблизительно 1000 до приблизительно 1250 мг/м², в дни 1 и 15 28-дневного цикла лечения. В некоторых вариантах осуществления гемцитабин будет вводиться в диапазоне доз, составляющем от приблизительно 750 до приблизительно 1250 мг/м² или от приблизительно 1000 до приблизительно 1250 мг/м², в дни 1 и 8 или дни 1 и 15 21-дневного цикла лечения. Настоящим изобретением предусматривается введение гемцитабина в течение одного или более циклов лечения, например 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более циклов лечения. Варианты осуществления настоящего изобретения включают варианты, в которых гемцитабин вводят с помощью внутривенной инфузии на протяжении 30 мин. В некоторых вариантах осуществления доставку приблизительно 1000 мг/м² осуществляют с помощью внутривенной инфузии на протяжении 30 мин в дни 1, 8 или 15 каждого 28-дневного цикла лечения. Будет понятно, что любой из указанных в настоящем документе диапазонов доз для лечения гемцитабином можно скомбинировать с любым из указанных в настоящем документе диапазонов доз для лечения соединением конъюгата антитело-лекарственное средство при условии, что назначение обеспечивает требуемый терапевтический эффект, т.е. синергизм.

В некоторых особенно предпочтительных примерах настоящего изобретения введение синергетического количества терапевтических средств включает введение соединения конъюгата антителолекарственное средство в диапазоне общей дозы, составляющем от приблизительно 0,5 до приблизительно 5 мг/кг, от приблизительно 0,6 до приблизительно 5 мг/кг, от приблизительно 0,6 до приблизительно 2,7 мг/кг, от приблизительно 0,8 до приблизительно 2,7 мг/кг, от приблизительно 1 до приблизительно 5 мг/кг, от приблизительно 1 до приблизительно 4 мг/кг, от приблизительно 1 до приблизительно

3,5 мг/кг, от приблизительно 1,5 до приблизительно 3,5 мг/кг или даже от приблизительно 1,8 до приблизительно 2,5 мг/кг в течение 21- или 28-дневного цикла, независимо от схемы введения доз, в комбинации с введением гемцитабина в стандартных схемах введения доз, известных в данной области техники, например от приблизительно 800 до приблизительно 1500 мг/м² на каждое введение гемцитабина во время цикла лечения, предпочтительно от приблизительно 1000 до приблизительно 1250 мг/м² на каждое введение гемцитабина во время цикла лечения (например, 1-3 раз во время 21- или 28-дневного цикла лечения).

В некоторых особенно предпочтительных примерах настоящего изобретения введение синергетического количества терапевтических средств включает введение соединения конъюгата антителолекарственное средство один раз во время цикла лечения (например, 21- или 28-дневного цикла лечения) в диапазоне, составляющем от приблизительно 0,5 до приблизительно 2,7 мг/кг, от приблизительно 0,6 до приблизительно 2,7 мг/кг, от приблизительно 0,6 до приблизительно 2 мг/кг, от приблизительно 0,6 до приблизительно 1 мг/кг, от приблизительно 0,8 до приблизительно 2,7 мг/кг, от приблизительно 0,8 до приблизительно 2 мг/кг, от приблизительно 1 до приблизительно 2,7 мг/кг, от приблизительно 1,5 до приблизительно 2,7 мг/кг или даже предпочтительнее от приблизительно 1,0 до приблизительно 2 мг/кг или от приблизительно 1,5 до приблизительно 2 мг/кг веса тела субъекта, в комбинации с введением гемцитабина в стандартных схемах введения доз, известных в данной области техники, например, от приблизительно 800 до приблизительно 1500 мг/м² на каждое введение гемцитабина во время цикла лечения, предпочтительно от приблизительно 1000 до приблизительно 1250 мг/м² на каждое введение гемцитабина во время цикла лечения (например, 1-3 раз во время цикла лечения).

Например, в одном варианте осуществления введение синергетического количества терапевтических средств включает введение соединения конъюгата антитело-лекарственное средство один раз во время 3-недельного цикла лечения (например, в день 1 21-дневного цикла лечения) в диапазоне, составляющем от приблизительно 0,5 до приблизительно 2,7 мг/кг, от приблизительно 0,6 до приблизительно

2,7 мг/кг, от приблизительно 0,8 до приблизительно 2 мг/кг, от приблизительно 1,5 до приблизительно

- 16 020696

2,7 мг/кг или от приблизительно 1,5 до приблизительно 2 мг/кг веса тела субъекта, в комбинации с введением гемцитабина в дни 1 и 8 или дни 1 и 15 21-дневного цикла лечения в диапазоне, составляющем от приблизительно 800 до приблизительно 1500 мг/м², предпочтительно от приблизительно 1000 до приблизительно 1250 мг/м².

В некоторых особенно предпочтительных примерах настоящего изобретения введение синергетического количества терапевтических средств включает введение соединения конъюгата антителолекарственное средство три раза во время цикла лечения (например, 21- или 28-дневного цикла лечения) в диапазоне, составляющем от приблизительно 0,4 до приблизительно 2,0 мг/кг, от приблизительно 0,4 до приблизительно 1,8 мг/кг, от приблизительно 0,4 до приблизительно 1 мг/кг, от приблизительно 0,4 до приблизительно 1,5 мг/кг на каждое введение, в комбинации с введением гемцитабина в стандартных схемах введения доз, известных в данной области техники, например, от приблизительно 800 мг/м² до приблизительно 1500 мг/м² на каждое введение гемцитабина во время цикла лечения, предпочтительно от приблизительно 1000 мг/м² до приблизительно 1250 мг/м² на каждое введение гемцитабина во время цикла лечения (например, 1-3 раз во время цикла лечения). Например, в одном варианте осуществления введение синергетического количества терапевтических средств включает введение соединения конъюгата антитело-лекарственное средство в дни 1, 8 и 15 28-дневного цикла в диапазоне, составляющем от приблизительно 0,4 до приблизительно 2 мг/кг, от приблизительно 0,4 до приблизительно 1,8 мг/кг, от приблизительно 0,4 до приблизительно 1 мг/кг веса тела субъекта, от приблизительно 0,4 до приблизительно 1,5 мг/кг веса тела субъекта на каждое введение, в комбинации с введением гемцитабина в дни 1, 8 и 15 28-дневного цикла в диапазоне, составляющем от приблизительно 800 до приблизительно 1250 мг/м², предпочтительно от приблизительно 1000 до приблизительно 1250 мг/м² на каждое введение.

В некоторых особенно предпочтительных примерах настоящего изобретения введение синергетического количества терапевтических средств включает введение соединения конъюгата антителолекарственное средство два раза во время цикла лечения (например, 21- или 28-дневного цикла лечения) в диапазоне, составляющем от приблизительно 0,4 до приблизительно 2,0 мг/кг, от приблизительно 0,4 до приблизительно 1,8 мг/кг, от приблизительно 0,4 до приблизительно 1 мг/кг, от приблизительно 0,4 до приблизительно 1,5 мг/кг на каждое введение, в комбинации с введением гемцитабина в стандартных схемах введения доз, известных в данной области техники, например, от приблизительно 800 до приблизительно 1500 мг/м² на каждое введение гемцитабина во время цикла лечения, предпочтительно от приблизительно 1000 до приблизительно 1250 мг/м² на каждое введение гемцитабина во время цикла лечения (например, 1-3 раз во время цикла лечения). Например, введение синергетического количества терапевтических средств включает введение соединения конъюгата антитело-лекарственное средство в дни 1 и 15 28-дневного цикла в диапазоне, составляющем от приблизительно 0,4 до приблизительно 2 мг/кг, от приблизительно 0,4 мг/кг до приблизительно 1,8 мг/кг, от приблизительно 0,4 до приблизительно 1 мг/кг веса тела субъекта, от приблизительно 0,4 до приблизительно 1,5 мг/кг веса тела субъекта на каждое введение, в комбинации с введением гемцитабина в дни 1, 8 и 15 28-дневного цикла в диапазоне, составляющем от приблизительно 800 до приблизительно 1250 мг/м², предпочтительно от приблизительно 1000 до приблизительно 1250 мг/м² на каждое введение.

Н. Фармацевтические композиции.

Различные системы доставки известны и могут использоваться для введения соединений конъюгата антитело-лекарственное средство и химиотерапевтических средств. Способы введения включают, но без ограничения, внутрикожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный и подкожный пути введения. Введение может осуществляться, например, с помощью инфузии или болюсной инъекции. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления введение и химиотерапевтического средства, и соединения конъюгата антитело-лекарственное средство осуществляют с помощью инфузии.

Соединение конъюгата антитело-лекарственное средство и химиотерапевтические средства можно вводить в виде фармацевтических композиций, содержащих один или более фармацевтически совместимых ингредиентов. Например, фармацевтическая композиция обычно включает один или более фармацевтических носителей (например, стерильных жидкостей, таких как вода и масла, включающие масла минерального, животного, растительного или синтетического происхождения, например, арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и подобные). Вода является более типичным носителем, когда фармацевтическую композицию вводят внутривенно. Солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина могут также использоваться в качестве жидких носителей, в частности, для инъецируемых растворов. Подходящие фармацевтические наполнители известны в данной области техники.

Композиция, при желании, может также содержать незначительные количества смачивающих агентов или эмульгаторов, или рН-буферных агентов. Примеры подходящих фармацевтических носителей приведены в РепипдЮп'х РЬагтасеи1юа1 δ№ι^χ Ьу Е.^. Магйи. Композиции соответствуют способу введения.

В типичных вариантах осуществления фармацевтическую композицию составляют в соответствии с обычными процедурами в виде фармацевтической композиции, адаптированной для внутривенного введения людям. Как правило, композиции для внутривенного введения представляют собой растворы в

- 17 020696 стерильном изотоническом водном буфере. При необходимости, лекарственное средство может также включать солюбилизирующий агент и местный анестетик, такой как лигнокаин, для ослабления боли в месте инъекции. Как правило, ингредиенты поставляются или по отдельности, или смешанными вместе в форме стандартной дозы, например в виде сухого лиофилизированного порошка или концентрата без воды в герметизированном контейнере, таком как ампула или саше, на котором указывается количество активного агента. Если лекарственное средство должно вводиться с помощью инфузии, его можно диспергировать с использованием, например, бутыли для инфузии, содержащей стерильную воду или солевой раствор фармацевтического класса. Если лекарственное средство вводится с помощью инъекции, может быть предоставлена, например, ампула со стерильной водой для инъекции или солевым раствором при таком условии, что ингредиенты можно смешать до введения.

I. Субъекты.

Способы настоящего изобретения включают назначение субъекту комбинированной терапии для лечения лимфомы Ходжкина.

Субъектами, подвергаемыми лечению способами настоящего изобретения, являются субъекты, у которых диагностирована лимфома Ходжкина, или субъекты с подозрением на наличие лимфомы Ходжкина. Диагностирование может быть осуществлено известными в данной области техники способами, включающими, например, биопсию лимфатических узлов. После диагностирования лимфомы Ходжкина, при желании, заболевание субъекта можно классифицировать в соответствии с его стадией, используя одну из известных схем классификации. Одной такой схемой классификации является схема классификации в соответствии со стадией Со!ктео1б'к. Вкратце, стадия I может характеризоваться поражением одной лимфоузловой области или лимфоидной структуры, стадия II может характеризоваться поражением двух или более лимфоузловых областей или лимфоузловых структур с одной и той же стороны диафрагмы, стадия III может характеризоваться поражением лимфоузловых областей или лимфоузловых структур с обеих сторон диафрагмы, и стадия IV может характеризоваться диффузным или диссеминированным поражением одного или более внеузловых органов или тканей, помимо тех, которые обозначены Е, с поражением лимфатических узлов или без такого поражения. Обозначение Е относится к распространению на соседние внеузловые органы или ткани, которое может быть включено в область облучения, подходящую для болезни лимфатических узлов одинаковой анатомической степени. Субъекты на стадиях I или II могут иметь благоприятный или неблагоприятный прогноз в зависимости от наличия или отсутствия определенных клинических признаков. Для целей настоящего изобретения заболевание ранней стадии у субъектов относят к стадии I или II, в то время как заболевание поздней стадии у субъектов относят к стадии III или IV. Способы настоящего изобретения можно использовать для лечения субъектов, заболевания которых отнесены к одной из четырех стадий заболевания, в том числе субъектов с заболеваний поздней стадии.

Способы настоящего изобретения включают лечение субъекта, у которого недавно диагностирована НЬ и который ранее не подвергался лечению, связанному с НЬ.

Способы настоящего изобретения можно также использовать для лечения субъектов с не поддающейся лечению и/или рецидивирующей лимфомой Ходжкина.

Субъектом с не поддающейся лечению лимфомой Ходжкина является субъект, не отвечающий на терапию для НЬ, т.е. субъект продолжает проявлять развитие заболевание, несмотря на терапию.

Субъектом с рецидивирующей лимфомой Ходжкина является субъект, который имел ответную реакцию на терапию для НЬ в один момент времени, но имел рецидив или дальнейшее развитие заболевания после ответной реакции.

Способы настоящего изобретения также включают лечение субъекта, ранее подвергшегося лечению с использованием схемы химиотерапевтического лечения лимфомы Ходжкина первой линии, или субъекта, подвергшегося лечению с использованием и схемы химиотерапевтического лечения первой линии, и/или схемы химиотерапии спасения. Схемы химиотерапевтического лечения лимфомы Ходжкина первой линии включают, например, схему АВУО (Вопабоппа апб Зап!ого, Сапсег Тгеа! Кеу. 1982; 9: 21-35), схему ВЕАСОРР (О1еЫ е! а1., N. Еп§1. 1. Меб. 2003; 348: 2386-2395), схему ВЕАСОРР с увеличением доз (О1еЫ е! а1., N. Еп§1. 1. Меб. 2003; 348: 2386-2395), схему МОРР (Цеуйа е! а1., Апп. Шег. Меб. 1970; 73: 881-895) и схему ЗГап&гб V (Ногтпд е! а1., 1. С1т. Опсо1. 2000; 18: 972-980). Схемы химиотерапии спасения включают, например, схему Е8НАР (Арапсю е! а1., Апп. Опсо1. 1999; 10: 593-595), модифицированную схему ЗГап&гб V (Аубек е! а1., Меб. Опсо1. 2001; 18: 261-267), схему ОЭР (Вае1/ е! а1., Апп. Опсо1. 2003; 14: 1762-1767), схему МшЕВеат (С?о1\уП1 е! а1., 1. С1ш. Опсо1. 1995; 13: 396-402; Регпапбе/-.Птепе/ е! а1., Наета!о1о0са 1999; 84: 1007-1011), схему МВМЕ (ЕпЫаб е! а1., Еиг 1. Наета!о1. 1998; 60: 166-171), схему МШЕ (Регте е! а1., Апп. Опсо1. 1995; 6: 543-549), схему ШЕ (.Гасккоп е! а1., Ьеик. ЬутрЕота 2000; 37: 561-570), схему ЭНАР (.Токбпд е! а1., Апп. Опсо1. 2002; 13: 1628-1645), схему ШЕ (МоккотеШ е! а1., Зетт. Опсо1. 2004; 31(кирр1): 54-59), схему ПАР (Оуап е! а1., Вю1. В1ооб Магготе ТгапкрФп! 2005; 11: 688697), схему IVЕ (Ргос!ог е! а1., Еиг. к Наета!о1. 2001; 64(кирр1): 28-32), схему ΥΦ (КТЪгад е! а1., Воте Магготе Тгапкр1ап! 1998; 21: 969-974), схему АЗНАР (Робпдие/ е! а1., В1ооб 1999; 93: 3632-3636), схему Эе.хаВЕАМ (ЗсНтП/ е! а1., Ьапсе! 2002; 359: 2065-2071), схему СЕР (З/ап1о е! а1., Опсо1оду 1991; 48: 456-458), схему СИ30Р (^а1етекк! е! а1., Меб. Опсо1. 2000; 17: 195-202) и схему МVС (ЛУ1егшк е! а1., Сапсег к Зск

- 18 020696

Ат. 1998; 4: 254-260).

Способы настоящего изобретения также включают лечение субъекта, который ранее был подвергнут трансплантации стволовых клеток.

I. Антитела против СИЗО.

Антитела против СИЗО, подходящие для применения в соответствии с композициями и способами настоящего изобретения, включают любое антитело, которое специфически связывается с антигеном СИЗО. Антитела против СИЗО являются предпочтительно моноклональными и могут включать, например, химерные (например, имеющие константную область человека и вариабельную область мыши), гуманизированные антитела или антитела человека; одноцепочечные антитела или подобные. Молекулы иммуноглобулинов могут быть любого типа (например, 1§С, 1дЕ, 1дМ, 1§ϋ, 1§А и Ι§Υ), класса (например, 1дС1, 1§С2, 1дС3, 1дС4, 1дА1 и 1дА2) или подкласса молекулы иммуноглобулина.

В некоторых вариантах осуществления антителом является антигенсвязывающий фрагмент антитела, такой как, например, РаЬ, Р(аЬ'), Р(аЬ')₂, Рк-цепь, одноцепочечный Ρν (бсРу), одноцепочечное антитело, дисульфидсвязанный Ρν (8кРУ), фрагмент, включающий или Уь-, или У_н-домен, или фрагменты, полученные с использованием экспрессирующей РаЬ библиотеки, или СИЗО-связывающий фрагмент любого из указанных выше антител. Антигенсвязывающие фрагменты антител, в том числе одноцепочечные антитела, могут включать вариабельную область(и) отдельно или вместе со всей совокупностью или частью следующих доменов: шарнирной области, СН1-, СН2-, СНЗ- и СЬ-доменов. Также антигенсвязывающие фрагменты могут включать любую комбинацию вариабельной области(ей) с шарнирной областью, СН1-, СН2-, СНЗ - и СЬ-доменами. Как правило, антитела являются антителами человека, грызуна (например, мыши и крысы), осла, овцы, кролика, козы, морской свинки, верблюда, лошади или курицы. Как в настоящем документе используются, антитела человека включают антитела, имеющие аминокислотную последовательность иммуноглобулина человека, и включают антитела, выделенные из библиотеки иммуноглобулинов человека, из В-клеток человека или из животных, трансгенных по одному или более иммуноглобулинам человека (см., например, в патентах США № 59З9598 и 6111166).

Антитела могут быть моноспецифическими, биспецифическими, триспецифическими или с большей степенью полиспецифичности (см., например, публикации РСТ-заявок \0 9З/17715, \0 92/О88О2, \\0 91/ООЗ6О и νϋ 92/О579З; Тий е! а1., 1991, I. 1ттипо1. 147: 6О-69; патенты США № 447489З, 4714681, 4925648, 557З92О и 56О1819; Ко§1е1пу е! а1., 1992, I. 1ттипо1. 148: 1547-155З).

Приводимые в качестве примеров антитела против СЭЗО включают, но без ограничения, гуманизированные или химерные антитела АС1О или НеР1-1. Соответственно, приводимое в качестве примера антитело против СГОЗО включает один или более СОК НеР1-1 мыши (8ЕО ГО N0: 2О, 8Е0 ГО N0: 22, 8Е0 ГО N0: 24, 8ЕО ГО N0: 28, 8ЕО ГО N0: ЗО или 8ЕО ГО N0: З2) или АС1О мыши (8ЕО ГО N0: 4, 8ЕО ГО N0: 6, 8ЕС ГО N0: 8, 8ЕС ГО N0: 12, 8ЕС ГО N0: 14 или 8ЕС ГО N0: 16). В некоторых вариантах осуществления антитело против СГОЗО включает одну или более вариабельных областей НеР1-1 мыши (8ЕС ГО N0: 18 или 8ЕС ГО N0: 26) или АС1О мыши (8ЕС ГО N0: 2 или 8ЕС ГО N0: 1О). Ниже приведена таблица, в которой указана область АС1О или НеР1-1, которой соответствует каждый 8ЕС ГО N0.

Молекула	Нуклеотидная или	ЗЕС
	аминокислотная	то
	последовательность	ΝΟ:
Вариабельная область тяжелой	Нуклеотидная	1
цепи АСЮ
Вариабельная область тяжелой	Аминокислотная	2
цепи АСЮ
С0К1 тяжелой цепи (Н1) АСЮ	Нуклеотидная	3
СЦВ1 тяжелой цепи (Н1) АСЮ	Аминокислотная	4
С0Е2 тяжелой цепи <Н2) АСЮ	Нуклеотидная	5
С СЕ, 2 тяжелой цепи (Н2) АСЮ	Аминокислотная	6
СОЕЗ тяжелой цепи (НЗ) АСЮ	Нуклеотидная	7
СРЕЗ тяжелой цепи (НЗ) АСЮ	Аминокислотная	8

- 19 020696

Вариабельная область легкой цепи АСЮ	Нуклеотидная	9
Вариабельная область легкой цели АСЮ	Аминокислотная	10
С0Е1 легкой цепи (Ы) АСЮ	Нуклеотидная	11
СОЕ1 легкой цели (Ы) АСЮ	Аминокислотная	12
С СВ 2 легкой цепи (Ь2) АСЮ	Нуклеотидная	13
ΟϋΚ2 легкой цепи (Ь2) АСЮ	Аминокислотная	14
ССКЗ легкой цепи (ЬЗ) АСЮ	Нуклеотидная	15
СОЕЗ легкой цели (ЬЗ) АСЮ	Аминокислотная	16
Вариабельная область тяжелой цепи НеП-1	Нуклеотидная	17
Вариабельная область тяжелой цепи НеП-1	Аминокислотная	18
СОЕ1 тяжелой цепи (Н1) НеР1-1	Нуклеотидная	19
СОЕ1 тяжелой цепи (Н1) НеР1-1	Аминокислотная	20
СОК2 тяжелой цепи (Н2) ΗβΡί-1	Нуклеотидная	21
СОЕ2 тяжелой цепи (Н2) НеР1-1	Аминокислотная	22
СОЕЗ тяжелой цепи (НЗ) ΗβΡί-1	Нуклеотидная	23
СОЕЗ тяжелой цепи (НЗ) НеР1-1	Аминокислотная	24
Вариабельная область легкой цепи ΗεΡί-1	Нуклеотидная	25
Вариабельная область легкой цепи ΗβΡί-1	Аминокислотная	26
СЭЕ1 легкой цепи (01) НеГ1~1	Нуклеотидная	27
С0Е1 легкой цепи (Ь1) НеП-1	Аминокислотная	28
С0Е2 легкой цепи (Ь2) НеР1-1	Нуклеотидная	29
СОК2 легкой цепи (12) ΗθΡί-1	Аминокислотная	30
СОЕЗ легкой цепи (13) НеРЮ1	Нуклеотидная	31
СОЕЗ легкой цепи (ЪЗ) НеР1-1	Аминокислотная	32
Константная область гамма I человека	Аминокислотная	33
Константная область калла человека	Аминокислотна я	34

Приводимые в качестве примеров антитела против ί'.Ό30 включают функциональные производные или аналоги АС10 или НеРЫ. Используемый в настоящем документе термин функциональный в этом контексте означает, что функциональное производное или аналог АС10 или НеРЫ способны к связыванию с СИ30.

В некоторых вариантах осуществления антитела против СЭ30 не только иммуноспецифически связываются с СИ3О, то также оказывают цитостатический и/или цитотоксический эффект на раковые клетки при НЬ, причем цитостатический или цитотоксический эффект является комплементзависимым и может быть достигнут в отсутствие (ί) конъюгации с цитостатическим или цитотоксическим средством или (ίί) клеток-эффекторов.

Определение или спецификацию антител против СЭ30 можно осуществить по конкретным СЭР, которые они включают. В некоторых вариантах осуществления антитела включают СЭР АС10 и/или НеИ-1. В некоторых вариантах осуществления антитела являются химерными или гуманизироваными формами АС10 или НеРЫ. Настоящим изобретением охватывается антитело, которое включает вариабельный домен тяжелой или легкой цепи, при этом указанный вариабельный домен включает (а) совокупность из трех СИР, которая происходит из мышиного моноклонального антитела АС10 или НеРЫ, и

- 20 020696 (Ь) совокупность из четырех каркасных областей, которая отличается от совокупности каркасных областей в мышином моноклональном антителе АС10 или НеИ-1, и которое иммуноспецифически связывается с СО30.

В конкретном варианте осуществления настоящим изобретением охватывается антитело, которое включает вариабельный домен тяжелой цепи, при этом указанный вариабельный домен включает (а) совокупность из трех СОК, которая включает 8ЕЦ ГО ЫО: 4, 6 или 8 или включает аминокислотные последовательности, которые в значительной степени идентичны аминокислотным последовательностям, представленным в 8ЕЦ ГО ЫО: 4, 6 или 8; (Ь) совокупность из четырех каркасных областей, которая отличается от совокупности каркасных областей в мышином моноклональном антителе АС10, и которое иммуноспецифически связывается с СГО30.

В конкретном варианте осуществления настоящим изобретением охватывается антитело, которое включает вариабельный домен тяжелой цепи, при этом указанный вариабельный домен включает (а) совокупность из трех СОК, которая включает 8ЕЦ ГО ЫО: 20, 22 или 24 или включает аминокислотные последовательности, которые в значительной степени идентичны аминокислотным последовательностям, представленным в 8ЕЦ ГО ЫО: 20, 22 или 28; (Ь) совокупность из четырех каркасных областей, которая отличается от совокупности каркасных областей в мышином моноклональном антителе НеИ-1, которое иммуноспецифически связывается с СГО30.

В конкретном варианте осуществления настоящим изобретением охватывается антитело, которое включает вариабельный домен легкой цепи, при этом указанный вариабельный домен включает (а) совокупность из трех СОК, которая включает 8ЕЦ ГО ЫО: 12, 14 или 16 или включает аминокислотные последовательности, которые в значительной степени идентичны аминокислотным последовательностям, представленным в 8ЕЦ ГО ЫО: 12, 14 или 16; (Ь) совокупность из четырех каркасных областей, которая отличается от совокупности каркасных областей в мышином моноклональном антителе АС10, которое иммуноспецифически связывается с СГО30.

В конкретном варианте осуществления настоящим изобретением охватывается антитело, которое включает вариабельный домен легкой цепи, при этом указанный вариабельный домен включает (а) совокупность из трех СОК, которая включает 8ЕЦ ГО ЫО: 28, 30 или 32 или включает аминокислотные последовательности, которые в значительной степени идентичны аминокислотным последовательностям, представленным в 8ЕЦ ГО ЫО: 28, 30 или 32; (Ь) совокупность из четырех каркасных областей, которая отличается от совокупности каркасных областей в мышином моноклональном антителе НеИ-1, которое иммуноспецифически связывается с СГО30.

Настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых химерное антитело АС10 включает вариабельную область тяжелой цепи, представленную в 8ЕЦ ГО ЫО: 2, вариабельную область легкой цепи, представленную в 8ЕЦ ГО ЫО: 10, константную область гамма I человека, представленную в 8ЕЦ ГО ЫО: 33 или аминокислотами 1-329 8ЕЦ ГО ЫО: 33, и константную область каппа человека, представленную в 8ЕЦ ГО ЫО: 34.

Кроме того, определение или спецификацию антител можно также осуществить по их первичным структурам. Антитела против СЭ30, которые идентичны по крайней мере на 80%, по крайней мере 85%, по крайней мере 90%, по крайней мере 95% и наиболее предпочтительно по крайней мере 98% (что рассчитано, используя способы, известные в данной области техники и описанные в настоящем документе) вариабельным областям АС10 или НеИ-1 мыши, также включены в настоящее изобретение. Определение или спецификацию антител настоящего изобретения можно также осуществить по их аффинности связывания с СЭ30. Предпочтительные аффинности связывания включают те, которые характеризуются константной диссоциации или Кй, составляющей менее 5х10^- М, 10^- М, 5х10^- М, 10^- М, 5х10^- М, 10 М, 5х10^-9 М, 10^-9 М, 5х10^-10 М, 10^-10 М, 5х10^-11 М, 10^-11 М, 5х10^-12 М, 10^-12 М, 5х10^-13 М, 10^-13 М, 5х10^-14 М, 10^-14 М, 5х10^-15 М или 10^-15 М.

Антитела можно очистить, например, с помощью аффинной хроматографии с использованием антигена СГО30. В некоторых вариантах осуществления чистота антитела составляет по крайней мере 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 70% или по крайней мере 80%. В других вариантах осуществления чистота антитела составляет более 85%, более 90%, более 95% или более 99%.

Антитела также включают антитела, которые являются модифицированными, например, путем присоединения к антителу любого типа молекулы так, что присоединение не препятствует связыванию антитела с СГО30. Например, но не в качестве ограничения, термин антитело включает антитела, которые были модифицированы, например, с помощью гликозилирования, дегликозилирования, ацетилирования, пегилирования, фосфорилирования, амидирования, получения производных с использованием известных защитных/блокирующих групп, связывания с клеточным лигандом или другим белком и т.п. Любую из многочисленных химических модификаций можно выполнить с помощью известных методов, включающих, но без ограничения, специфическое химическое расщепление, ацетилирование, введение радикала СНО, метаболический синтез туникамицина и т.п.

Антитела настоящего изобретения можно создать с помощью любого подходящего способа, известного в данной области техники. Поликлональные антитела против СГО30 можно продуцировать с по- 21 020696 мощью различных способов, широко известных в данной области техники. Например, СЭ30 можно ввести различным животным-хозяевам, включающим, но без ограничения, кроликов, мышей, крыс и т.п., для индукции продукции сывороток, содержащих поликлональные антитела, специфичные для этого белка. Различные адъюванты можно использовать для увеличения иммунологической реакции, в зависимости от вида хозяина.

Моноклональные антитела можно приготовить, используя широкий выбор методов, известных в данной области техники, включающих использование гибридомы, рекомбинантных технологий и технологий фагового дисплея или их комбинации. Например, моноклональные антитела можно продуцировать, используя гибридомные технологии, включающие те, которые известны в данной области техники и доступны, например, в Наг1оте е! а1., АиШЬоШек: А ЬаЬота!огу Мапиа1 (Со1б 8ртшд НагЬог ЬаЬота!огу Ргекк, 2'¹ еб., 1998); Наттетйпд е! а1., ίη: Мопос1опа1 АпйЬоб1ек апб Т-Се11 НуЬпботак 563-681 (ШкеШег, Ν.Υ., 1981) (указанные ссылки включены полностью посредством ссылки).

Способы получения и скрининга специфических антител, используя гибридомную технологию, являются обычными и широко известными в данной области техники. В не ограничивающем примере мышей можно иммунизировать ί'.Ό30 или экспрессирующей СЭ30 клеткой, или его фрагментом или производным. После выявления иммунного ответа, например, выявления антител, специфичных для ί'.Ό30, в мышиной сыворотке, получают селезенку мыши, и выделяют спленоциты. Затем спленоциты сливают с помощью широко известных методов с любыми подходящими миеломными клетками, например, клетками линии клеток 8Р20, доступной из Американской коллекции типовых культур, КоскуШе, МО (АТСС).

Гибридомы отбирают и клонируют методом серийных разведений. Затем гибридомные клоны исследуют с помощью известных в данной области техники способов на наличие клеток, которые секретируют антитела, способные к связыванию с СО30. Асцитическую жидкость, которая обычно содержит высокие уровни антител, можно получить путем инъецирования мышам положительных гибридомных клонов.

Соответственно, настоящим изобретением предоставляются способы создания моноклональных антител, а также антител, продуцируемых с помощью способа, включающего культивирование секретирующей антитело гибридомной клетки, причем предпочтительно гибридому создают слиянием спленоцитов, выделенных из иммунизированной антигеном настоящего изобретения мыши, с миеломными клетками и затем скринингом гибридом, являющихся следствием слияния, для получения гибридомных клонов, которые секретируют антитело, способное к связыванию с СО30.

Фрагменты антител, которые распознают специфические эпитопы, можно создать с помощью известных методов. Например, ЕаЬ- и Е(аЬ')₂-фрагменты можно получить при протеолитическом расщеплении молекул иммуноглобулинов, используя такие ферменты, как папаин (для получения ЕаЬфрагментов) или пепсин (для получения Е(аЬ')2-фрагментов). Е(аЬ')2-фрагменты содержат вариабельную область, константную область легкой цепи и СН1-домен тяжелой цепи.

Антитела можно также создать, используя различные способы фагового дисплея, известные в данной области техники. В способах фагового дисплея функциональные домены антител представлены на поверхности фаговых частиц, которые несут кодирующие их последовательности нуклеиновых кислот. В конкретном варианте осуществления такой фаг может использоваться для дисплея антигенсвязывающих доменов, экспрессируемых из репертуарной или комбинаторной библиотеки антител (например, человека или мыши). В частности, последовательности ДНК, кодирующие У_Н- и У_ъ-домены, амплифицируют из библиотек кДНК животного (например, библиотек кДНК из лимфоидных тканей человека или мыши). ДНК, кодирующие У_Н- и Уд-домены, соединяют снова вместе с использованием ксЕу-линкера с помощью ПЦР и клонируют в фагемидный вектор (например, рСАКТАБ 6 или рСотЬ 3 Н88). Вектор подвергают электропорации в Е.сой, и Е.сой инфицируют фагом-помощником. Используемыми в этих способах фагами обычно являются нитевидные фаги Еб и М13, включающие связывающие домены, экспрессируемые с фага в составе ЕаЬ-, Εν-доменов или Εν-домена со стабилизацией дисульфидных связей (бкЕу) антител, рекомбинантно слитых с фаговым белком или гена III, или гена VIII. Фаг, экспрессирующий антигенсвязывающий домен, который связывается с СО30, или вариабельную область АС10 или НеЕ1-1, можно отобрать или идентифицировать с использованием антигена, например, используя меченый антиген или антиген, связанный или зафиксированный на твердой поверхности или шарике. Примеры способов фагового дисплея, которые можно использовать для создания антител настоящего изобретения, включают способы, раскрытые в Вппктап е! а1., 1995, I. Iттиηо1. МеШобк 182: 41-50; Атек е! а1., 1995, I. Iттиηо1. МеШобк 184: 177-186; КеШеЬотоидЬ е! а1., 1994, Еиг. I. Тттипо1. 24: 952-958; Регкю е! а1., 1997, Сепе 187: 9-18; Вийоп е! а1., 1994, Абνаηсек ш Iттиηо1о§у, 191-280; РСТ-заявка № РСТ/СВ91/01134; публикации РСТ-заявок АО 90/02809; АО 91/10737; АО 92/01047; АО 92/18619; АО 93/11236; АО 95/15982; АО 95/20401; и патенты США № 5698426, 5223409, 5403484, 5580717, 5427908, 5750753, 5821047, 5571698, 5427908, 5516637, 5780225, 5658727, 5733743 и 5969108, все включены полностью посредством ссылки.

Как описано в вышеприведенных ссылках, после отбора фагов кодирующие антитела районы можно выделить из фага и использовать для создания цельных антител, в том числе антител человека, или

- 22 020696 любого другого желаемого антигенсвязывающего фрагмента и экспрессировать в любом желаемом хозяине, в том числе клетках млекопитающих, клетках насекомых, клетках растений, дрожжах и бактериях, например, как подробно описано ниже. Например, методы рекомбинантной продукции РаЬ-, РаЬ' и Р(аЬ')₂-фрагментов можно также применять, используя способы, известные в данной области техники, такие как способы, раскрытые в публикации РСТ-заявки АО 92/22324; МиШпах е! а1., ВюТесЬшциек 1992, 12(6): 864-869; 8аиа1 е! а1., 1995, АЖ1 34: 26-34; и Ве!!ег е! а1., 1988, Заепсе 240: 1041-1043 (указанные ссылки включены полностью посредством ссылки).

Примеры методов, которые можно использовать для получения одноцепочечных Ρν и антител, включают методы, описанные в патентах США № 4946778 и 5258498; Ник!оп е! а1., 1991, Ме!Ьобк ίη Еп/уто1оду 203: 46-88; 8Ьи е! а1., 1993, ΡΝΑδ 90: 7995-7999; и 8кегга е! а1., 1988, 8с1епсе 240: 1038-1040. Для некоторых применений, в том числе ш νί\Ό использования антител для людей и ш убго исследования пролиферации и реакции цитотоксичности, предпочтительно использовать химерные, гуманизированные антитела или антитела человека. Химерным антителом является молекула, в которой различные части антитела происходят из различных видов животных, такая как антитела, имеющие вариабельную область, происходящую из мышиного моноклонального антитела и константную область иммуноглобулина человека. Способы продуцирования химерных антител известны в данной области техник. См., например, Моткоп, 8с1епсе, 1985, 229: 1202; О1 е! а1., 1986, ВюТесЬшциек 4: 214; ОбЬек е! а1., 1989, ί. 1ттипо1. Мебюбк 125: 191-202; патенты США № 5807715, 4816567 и 4816397, которые включены сюда в целом путем представления ссылки на них. Гуманизированные антитела представляют собой молекулы антител, происходящие из антитела не являющегося человеком вида, связывающегося с желаемым антигеном, имеющие один или более СОК, происходящих из не являющегося человеком вида, и каркасные и константные области из молекулы иммуноглобулина человека. Часто остатки в каркасных областях человека будут замещены соответствующими остатками из антитела-донора СОК для изменения, предпочтительно увеличения, связывания с антигеном. Эти замены в каркасных областях определяют с помощью способов, широко известных в данной области техники, например, с помощью моделирования взаимодействий остатков СЭР и каркасных областей для идентификации остатков каркасных областей, важных для связывания с антигеном, и сравнения последовательностей для идентификации необычных остатков каркасных областей в конкретных положениях (см., например, Онееп е! а1., патент США № 5585089; ШесЬтапи е! а1., 1988, №1иге 332: 323, которые включены сюда в целом путем представления ссылки на них). Антитела можно гуманизировать, используя ряд известных в данной области техники методов, включающих, например, СЭК-пересадку (ЕР 239400; публикация РСТ-заявки АО 91/09967; патенты США № 5225539, 5530101 и 5585089), венирование или поверхностное изменение (ЕР 592106, ЕР 519596; Раб1ап, Мо1еси1аг 1ттипо1оду, 1991, 28(4/5): 489-498; 8!ибтска е! а1., 1994, Рго!еш Епдтееппд 7(6): 805-814; Кодикка е! а1., 1994, ΡΝΑδ 91: 969-973) и перестановку цепей (патент США № 5565332).

Полностью человеческие антитела особенно желательны для терапевтического лечения являющихся людьми пациентов. Антитела человека можно создать рядом известных в данной области техники способов, включающих способы фагового дисплея, описанные выше, используя библиотеки антител, полученные из последовательностей иммуноглобулинов человека. См. также патенты США № 4444887 и 4716111 и публикации РСТ-заявок АО 98/46645, АО 98/50433, АО 98/24893, АО 98/16654, АО 96/34096, АО 96/33735 и АО 91/10741, все из которых включены сюда в целом путем представления ссылки на них.

Антитела человека можно также продуцировать с использованием трансгенных мышей, которые экспрессируют гены иммуноглобулинов человека. Для обзора этой технологии продуцирования антител человека см. ЬопЬегд апб Ннк/аг. 1995, 1п!. Кеу. 1ттипо1. 13: 65-93. Для подробного обсуждения этой технологии продуцирования антител человека и моноклональных антител человека и протоколов для продукции таких антител см. публикации РСТ-заявок АО 98/24893, АО 92/01047, АО 96/34096, АО 96/33735; Европейский патент № 0598877; патенты США № 5413923, 5625126, 5633425, 5569825, 5661016, 5545896, 5814318, 5885793, 5916771 и 5939598, все включены полностью посредством ссылки. Кроме того, можно привлечь такие компании, как Атдеп (ТЬоикапб Оакк, СА) и Мебагех (Ргшсе!оп, Νί), к предоставлению антител человека, направленных против выбранного антитела, при использовании технологии, схожей с описанной выше технологией.

Полностью человеческие антитела, которые распознают выбранный эпитоп, можно создать, используя технологию, названную управляемым отбором. В этом подходе отобранное нечеловеческое моноклональное антитело, например мышиное антитело, используют для управления отбором полностью человеческого антитела, распознающего тот же эпитоп (1екрегк е! а1., 1994, ВюТесЬпо1оду 12: 899903).

Антитела для использования в настоящем изобретении включают химерное и гуманизированное АС10, а также химерное и гуманизированное НеР1-1. Антитела для использования в настоящем изобретении включают антитела, которые конкурентно ингибируют связывание АС10 или НеР1-1 мыши с СЭ30, что определяют с помощью любого известного в данной области техники способа определения конкурентного связывания. Например, антитело может ингибировать связывание АС10 или НеРЫ с СЭ30 по крайней мере на 50%, по крайней мере 60%, по крайней мере 70%, по крайней мере 80%, по

- 23 020696 крайней мере 85%, по крайней мере 90% или даже по крайней мере 95%. Одним примером анализа конкурентного связывания является радиоиммуноанализ, включающий инкубацию меченого (например, ³Н или ¹²⁵1) СЭ30 с представляющим интерес антителом в присутствии увеличивающихся количеств немеченого СЭ30 и выявление антитела, связавшегося с меченым СЭ30. Аффинность антитела в отношении СЭ30 и скорости диссоциации при связывании можно затем определить на основе данных графика Скэтчарда. Конкуренцию со вторым антителом (таким как АС10 или НеИ-1) можно также определить, используя радиоиммуноанализы. В этом случае СЭ30 инкубируют с представляющим интерес антителом, конъюгированным с меченым соединением (например, ³Н или ¹²⁵1) в присутствии увеличивающихся количеств немеченого второго антитела. Антитела для использования в настоящем изобретении также включают антитела, отличные от химерного или гуманизированного АС10 или НеИ-1, которые специфически связываются с СЭ30.

Один способ, с помощью которого выявляются взаимодействия белков ίη νίνο, двухгибридная система, детально описывается только для иллюстративных целей, а не в качестве ограничения. Один вариант этой системы был описан (С1йеп е! а1., 1991, Ргос. Ναΐΐ. Асаб. 8с1. И8А, 88: 9578-9582), и его можно купить у С1оп!ес1 (Ра1о А1Ю, СА).

После идентификации связывающегося с СЭ30 белка, при желании, можно определить его способность (отдельно или после мультимеризации или слияния с доменом димеризации или мультимеризации) к вызову цитостатического или цитотоксического эффекта на клетки НЬ путем приведения культуры линии клеток НЬ, такой как Ь428, Ь450, НЬЬМ2 или КМ-Н2, в контакт с белком. Условия культивирования наиболее предпочтительно представляют собой приблизительно 5000 клеток на площади культивирования, составляющей приблизительно 0,33 см², и период контактирования, составляющий приблизительно 72 ч. Затем культуру подвергают воздействию 0,5 мкКи ³Н-тимидина в течение завершающих 8 ч 72-часового периода времени и определяют включение ³Н-тимидина в клетки культуры. Белок имеет цитостатический или цитотоксический эффект на линию клеток НЬ, если клетки культуры характеризуются уменьшенным включением ³Н-тимидина по сравнению с клетками той же линий клеток, подвергнутыми культивированию в тех же условиях, но не приводимыми в контакт с белком. Квалифицированным в данной области техники специалистам известно множество других реакций цитотоксичности. В способах настоящего изобретения можно использовать любой из них.

Антитела против ί'Ό30, применимые в способах настоящего изобретения, можно продуцировать с помощью любого известного в данной области техники способа синтеза белков, как правило, например, с помощью методов рекомбинантной экспрессии. Рекомбинантная экспрессия антитела или его производного, которое связывается с СЭ30 и сокращает или ингибирует пролиферацию экспрессирующих СЭ30 клеток, может включать конструирование экспрессионного вектора, содержащего нуклеиновую кислоту, которая кодирует антитело или его производное. После получения нуклеиновой кислоты, кодирующей такой белок, можно получить вектор для продукции молекулы белка с помощью технологии рекомбинантных ДНК, используя широко известные в данной области техники методы. Для способов рекомбинантных нуклеиновых кислот, синтеза нуклеиновых кислот, культивирования клеток, включения трансгенов и экспрессии рекомбинантных белков можно использовать стандартные методы, такие как, например, методы, описанные в 8атЬгоок апб Кикке11, Мо1еси1аг С1отпд: А ЬаЬогакгу Мапиа1 (Со1б 8ргшд НагЬог ЬаЬогакгу Ргекк, Со1б 8ргшд НагЬог, Ν.Υ., 3^гб еб., 2001); 8атЬгоок е! а1., Мо1еси1аг С1отпд: А ЬаЬогаЮгу Мапиа1 (Со1б 8рйпд НагЬог ЬаЬогакгу Ргекк, Со1б 8рйпд НагЬог, Ν.Υ., 2^пб еб., 1989); 81юг! Рго!осо1к ш Мо1еси1аг Вю1оду (АикиЬе1 е! а1., боЬп \УПеу & 8опк, №ν Υο^к, 4'¹' еб., 1999); С1юк & Рак!егпак, Мо1еси1аг Вю!ес1то1оду: Ргшщркк апб Арр11са11опк оГ КесогаЬтай ΌΝΛ (А8М Ргекк, \Уак1йпд!оп, Э.С., 2^пб еб., 1989).

Например, для рекомбинантной экспрессии антитела против СЭ30 экспрессионный вектор может кодировать его тяжелую или легкую цепь или вариабельный домен тяжелой или легкой цепи, функционально связанные с промотором. Экспрессионный вектор может включать, например, нуклеотидную последовательность, кодирующую константную область молекулы антитела (см., например, публикацию РСТ-заявки \УО 86/05807; публикацию РСТ-заявки \УО 89/01036; и патент США № 5122464), и в такой вектор можно клонировать вариабельный домен антитела для экспрессии полной тяжелой или легкой цепи. Экспрессионным вектором трансфицируют клетку-хозяина с помощью общепринятых методов, и трансфицированные клетки затем культивируют с использованием общепринятых методов для продукции антитела против СЭ30. В обычных вариантах осуществления для экспрессии двухцепочечных антител векторы, кодирующие и тяжелую, и легкую цепи, можно коэкспрессировать в клетке-хозяине для экспрессии полной молекулы иммуноглобулина.

Для экспрессии антитела против СЭ30 или его производного можно использовать ряд систем экспрессии с использованием векторов в прокариотических или эукариотических хозяевах. Как правило, для экспрессии рекомбинантного белка, особенно целых молекул рекомбинантного антитела против СЭ30, используют эукариотические клетки. Например, клетки млекопитающих, такие как клетки яичника китайского хомячка (СНО), в соединении с вектором, включающим, например, основной непосредственно ранний промоторный элемент гена из цитомегаловируса, является эффективной экспрессионной системой для продукции антител против СЭ30 (см., например, Роескшд е! а1., 1986, Сепе 45: 101; Соске!! е! а1.,

- 24 020696

1990, Вю/ТесЬио1оду 8: 2). Антитела против СЭ30 можно также экспрессировать, используя систему СНЕР (см., например, патент США № 5888809).

Другие системы экспрессии в хозяевах включают, например, системы экспрессии с использованием векторов на основе плазмид в бактериальных клетках (см., например, Ки!Ьег е! а1., 1983, ЕМВО 1, 2: 1791; 1поиуг & 1поиуг, 1985, Ыис1е1с Аайк Кек. 13: 3101-3109; Уап Нееке & 8сЬик!ег 1989, I. Вю1. СЬет. 24: 5503-5509); системы экспрессии в клетках насекомых, такие как, например, использование экспрессионного вектора на основе вируса ядерного полиэдроза Аи!одгарЬа саПГогшса (АсЛРУ) в клетках 8ройор!ега Ггидьрегйа; и системы экспрессии с использованием векторов на основе вирусов в клетках млекопитающих, такие как, например, системы с использованием векторов на основе аденовирусов (см., например, Ьодап & 8Ьепк, 1984, Ргос. ЫаЙ. Асай. 8ск И8А 81: 355-359; ВШпег е! а1., 1987, Ме!Ьойк ш Еп/уто1. 153: 51-544).

Кроме того, можно выбрать штамм клетки-хозяина, который модулирует экспрессию встроенных последовательностей или модифицирует и подвергает процессингу продукт гена желаемым специфическим образом. Соответствующие линии клеток или системы-хозяев можно выбрать для гарантии правильной модификации и процессинга (например, гликозилирования, фосфорилирования и расщепления) экспрессируемого чужеродного белка. Для этого можно использовать эукариотические клетки-хозяева, которые обладают клеточным аппаратом для правильного процессинга первичного транскрипта и продукта гена. Такие клетки млекопитающих-хозяев включают, например, СНО (например, ΌΟ44 и СНО-8), УЕКО, ВНК, НеЬа, СО8, МОСК, 293, 4Т3 и №138.

Устойчивую экспрессионную систему обычно используют для длительной продукции с высоким выходом рекомбинантного антитела против СО30. Например, линии клеток, которые устойчиво экспрессируют антитело против СО30 или его производное, можно создать путем трансформации клеток-хозяев ДНК, контролируемой соответствующими контролирующими экспрессию элементами (например, промоторными, энхансерными последовательностями, терминаторами транскрипции, сайтами полиаденилирования) и селектируемым маркером, с последующим выращиванием трансформированных клеток в селективных средах. Селектируемый маркер придает устойчивость к селекции и предоставляет клеткам возможность устойчивой интеграции ДНК в свои хромосомы и роста с образованием фокусов, которые, в свою очередь, можно клонировать и нарастить в линии клеток. Можно использовать ряд систем для селекции, включающих, например, гены тимидинкиназы вируса простого герпеса, гипоксантингуанинфосфорибозилтрансферазы и аденин-фосфорибозилтрансферазы, которые можно использовать в !к^-, Ьдрг!^- или арг!^- клетках соответственно. Также можно использовать устойчивость к антиметаболитам в качестве основы селекции для следующих генов: йЬГг, который придает устойчивость к метотрексату; др!, который придает устойчивость к микофеноловой кислоте; пео, который придает устойчивость к аминогликозиду 0-418; и Ьудго, который придает устойчивость к гигромицину. Для отбора желаемого рекомбинантного клона могут обычно применяться способы, общеизвестные в области технологии рекомбинантных ДНК, и такие способы описаны, например, в Сиггеп! Рго!осо1к ш Мо1еси1аг Вю1оду (АикиЬе1 е! а1., ейк., 1оПп №йеу & 8опк, Ν.Υ., 1993); Кпед1ег, 0епе ТгапкГег апй Ехргеккюп, А ЬаЬога!огу Мапиа1 (8!оск!оп Ргекк, Ν.Υ., 1990); Сиггеп! Рго!осо1к ш Нитап ОепеЬск (ЭгасороП е! а1. ейк., 1оПп №йеу & 8опк, Ν.Υ., 1994, СЬар!егк 12 апй 13); Со1Ьегге-0агарш е! а1., 1981, I. Мо1. Вю1. 150: 1.

После продуцирования антитела против СО30 (например, с использованием животного, химического синтеза или рекомбинантной экспрессии) его можно очистить с помощью любого подходящего способа очистки белка, в том числе, например, хроматографии (например, ионообменной или аффинной хроматографии (такой как, например, хроматография с использованием белка А для очистки антител, имеющих интактную Рс-область), центрифугирования, дифференциальной растворимости или с помощью любого другого стандартного метода очистки белков. Антитело против СЭ30 можно, например, слить с последовательностью-маркером, например, пептидом, для облегчения очистки с помощью аффинной хроматографии. Подходящие аминокислотные последовательности-маркеры включают, например, пептид в виде гексагистидина, такой как !ад, предусмотренный в векторе рОЕ (01А0ЕН 1пс., 9259 Е!оп Ауепие, СЬа!кэтог!Ь, СА, 91311), и метку НА, которая соответствует эпитопу, происходящему из белка гемагглютинина вируса гриппа (№йкоп е! а1., 1984, Се11 37: 161), и метку Г1ад.

К. Единицы конъюгата антитело-лекарственное средство.

Описанные в настоящем документе способы включают использование антител, которые (а) специфически связываются с СЭ30 и (Ь) конъюгированы с соединением ауристатином. Соединения конъюгата антитело-лекарственное средство включают антитело против СЭ30, ковалентно связанное с по крайней мере одной единицей лекарственного средства, причем единицей лекарственного средства является соединение ауристатин. Единицы лекарственного средства могут быть ковалентно связаны напрямую или через единицу линкера (-ЬИ-).

В некоторых вариантах осуществления соединение конъюгата антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

или является фармацевтически приемлемой солью или сольватом соединения с такой формулой, где

- 25 020696

Ь представляет собой единицу антитела, т.е. антитела против СЭ30 (включающего фрагменты антитела против СО30);

(ЬИ-Э) представляет собой составляющую в виде единица линкера-единица лекарственного средства, где ЬИ представляет собой единицу линкера;

-Ό представляет собой соединение ауристатин, обладающее цитостатической или цитотоксической активностью в отношении клетки-мишени;

р является целым числом от 1 до приблизительно 20.

В некоторых вариантах осуществления р находится в диапазоне от 1 до приблизительно 10, от 1 до приблизительно 9, от 1 до приблизительно 8, от 1 до приблизительно 7, от 1 до приблизительно 6, от 1 до приблизительно 5, от 1 до приблизительно 4, от 1 до приблизительно 3 или от 1 до 2. В некоторых вариантах осуществления р находится в диапазоне от 2 до приблизительно 10, от 2 до приблизительно 9, от 2 до приблизительно 8, от 2 до приблизительно 7, от 2 до приблизительно 6, от 2 до приблизительно 5, от 2 до приблизительно 4 или от 2 до 3. В других вариантах осуществления р равняется 1, 2, 3, 4, 5 или 6. В некоторых вариантах осуществления р равняется 2 или 4.

В некоторых вариантах осуществления соединение конъюгата антитело-лекарственное средство имеет следующую формулу:

или является фармацевтически приемлемой солью или сольватом соединения с такой формулой, где

Ь представляет собой единицу антитела, т.е. антитела против СЭ30 (включающего фрагменты антитела против ί'.Ό30);

-Ла-^тУу- представляет собой единицу линкера (ЬИ), где

-А- представляет собой единицу удлинителя; а равняется 0 или 1;

каждая -Ψ- независимо представляет собой аминокислотную единицу;

№ является целым числом, находящимся в диапазоне от 0 до 12;

-Υ - является единицей самоуничтожающегося спейсера; у равняется 0, 1 или 2;

-Ό представляет собой соединение ауристатин, обладающее цитостатической или цитотоксической активностью в отношении клетки-мишени;

р является целым числом от 1 до приблизительно 20.

В некоторых вариантах осуществления а равняется 0 или 1, № равняется 0 или 1, у равняется 0, 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления, если № находится в диапазоне от 1 до 12, у равняется 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления № находится в диапазоне от 2 до 12, у равняется 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления № равняется 0, у равняется 0, а равняется 1. В некоторых вариантах осуществления а равняется 0 или 1, № равняется 0 или 1, у равняется 0 или 1. В некоторых вариантах осуществления р находится в диапазоне от 1 до приблизительно 10, от 1 до приблизительно 9, от 1 до приблизительно 8, от 1 до приблизительно 7, от 1 до приблизительно 6, от 1 до приблизительно 5, от 1 до приблизительно 4, от 1 до приблизительно 3 или от 1 до 2. В некоторых вариантах осуществления р находится в диапазоне от 2 до приблизительно 8, от 2 до приблизительно 7, от 2 до приблизительно 6, от 2 до приблизительно 5, от 2 до приблизительно 4 или от 2 до 3. В других вариантах осуществления р равняется 1, 2, 3, 4, 5 или 6. В некоторых вариантах осуществления р равняется 2 или 4.

Загруженность лекарственным средством, среднее число молекул лекарственного средства на каждое антитело в молекуле, представлена р. Загруженность лекарственным средством может находиться в диапазоне, составляющем от 1 до 20 лекарственных средств (Ό) на каждое антитело. Среднее число лекарственных средств на каждое антитело в препарате реакций конъюгации можно определить с помощью общепринятого способа, такого как масс-спектрометрия, анализ ЕЫ8А и НРЬС. Можно также определить количественное распределение конъюгатов антитело-лекарственное средство по показателю р. В некоторых случаях можно успешно выполнить отделение, очистку и определение характеристики гомогенных конъюгатов антитело-лекарственное средство, в которых р представляет собой определенное значение, от конъюгатов антитело-лекарственное средство с другими загруженностями лекарственным средством таким способом, как НРЬС с обращенной фазой или электрофорез. В приводимых в качестве примеров вариантах осуществления р находится в диапазоне от 2 до 8.

Каждая из этих единиц подробнее описывается в настоящем документе.

Единицы линкера.

Как правило, соединения конъюгатов антитело-лекарственное средство включают линкерный район между соединением ауристатин и антителом против ί'.Ό30. Единица линкера (ЬИ) является бифункциональным соединением, которое можно использовать для соединения единицы лекарственного средства и единицы антитела с образованием соединения конъюгата антитело-лекарственное средство. В некоторых вариантах осуществления линкер является расщепляемым во внутриклеточных условиях так, что расщепление линкера отсоединяло соединение ауристатин от антитела во внутриклеточной среде.

Например, в некоторых вариантах осуществления линкер является расщепляемым под действием

- 26 020696 расщепляющего агента, который присутствует во внутриклеточной среде (например, внутри лизосомы, или эндосомы, или кальвеолы). Линкер может быть, например, пептидильным линкером, который является расщепляемым под действием внутриклеточного фермента пептидазы или протеазы, в том числе, но без ограничения, лизосомальной или эндосомальной протеазы. Как правило, длина пептидильного линкера составляет по крайней мере две аминокислоты или по крайней мере три аминокислоты. Расщепляющие агенты могут включать катепсины В и Ό и плазмин, все из которых, как известно, гидролизуют дипептидные производные лекарственного средства, приводя к отсоединению активного лекарственного средства внутри клеток-мишеней (см., например, ОиЬоусЫк апй \Уа1кег. 1999, РЬагт. ТЬегареийск 83: 67123). Самыми обычными являются пептидильные линкеры, которые являются расщепляемыми под действием ферментов, которые присутствуют в экспрессирующих ί'.Ό30 клетках. Например, можно использовать пептидильный линкер, который является расщепляемым под действием тиолзависимой протеазы катепсина-В, который в высокой степени экспрессируется в раковой ткани (например, линкер РЬе-Ьеи или С1у-РЬе-Ьеи-С1у). Другие такие линкеры описаны, например, в патенте США № 6214345. В конкретных вариантах осуществления пептидильным линкером, расщепляемым под действием внутриклеточной протеазы, является линкер Уа1-СЬ или линкер РЬе-Ьук (см., например, патент США № 6214345, в котором описывается синтез доксорубицина с линкером Уа1-СЬ). Одним преимуществом использования внутриклеточного протеолитического отсоединения терапевтического средства является то, что средство обычно является аттенюированным после конъюгирования, и стабильность конъюгатов в сыворотке обычно является высокой.

В других вариантах осуществления расщепляемый линкер является чувствительным к рН, т.е. чувствительным к гидролизу при определенных значениях рН. Как правило, чувствительный к рН линкер является гидролизуемым в кислотных условиях. Например, можно использовать кислотонеустойчивый линкер, который является гидролизуемым в лизосоме (например, гидразон, семикарбазон, тиосемикарбазон, амид цис-аконитовой кислоты, ортоэфир, ацеталь, кеталь или подобные) (см., например, патенты США № 5122368, 5824805, 5622929; ОиЬоусйк апй \\а1кег. 1999, РЬагт. ТЬегареийск 83: 67-123; №уй1е е! а1., 1989, Вю1. СЬет. 264: 14 653-14 661). Такие линкеры относительно устойчивы в нейтральных условиях рН, таких как условия в крови, но являются неустойчивыми при рН ниже 5,5 или 5,0, приблизительном рН в лизосоме. В некоторых вариантах осуществления гидролизуемым линкером является тиоэфирный линкер (такой как, например, тиоэфир, присоединенный к терапевтическому средству через ацилгидразонную связь (см., например, патент США № 5622929)).

В еще одних вариантах осуществления линкер является расщепляемым в восстанавливающих условиях (например, дисульфидный линкер). В данной области техники известен ряд дисульфидных линкеров, включающий, например, линкеры, которые могут быть образованы, используя 8АТА (Νсукцинимидил-8-ацетилгиоацетат), 8РЭР Щ-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат), 8РЭВ (Νсукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)бутират) и 8МРТ (Ν-сукцинимидилоксикарбонил-альфа-метил-альфа(2-пиридилдитио)толуол), 8РЭВ и 8МРТ (см., например, ТЬогре е! а1., 1987, Сапсег Кек. 47: 5924-5931; \Уа\\т/упс/ак е! а1., 1п 1ттипосоп)ида!ек: АпйЬойу Соп)ида!ек ш Кайюшадегу апй ТЬегару о£ Сапсег (С.\У. Уоде1 ей., О.хГогй и. Ргекк, 1987; см. также патент США № 4880935).

В еще одних конкретных вариантах осуществления линкер является малонатным линкером (1оЬпкоп е! а1., 1995, Апйсапсег Кек. 15: 1387-1393), малеимидобензоильным линкером (Ьаи е! а1., 1995, ВюогдМей-СЬет. 3(10): 1299-1304) или 3’-^амидным аналогом (Ьаи е! а1., 1995, Вюогд-Мей-СЬет. 3(10): 13051312).

В еще одних вариантах осуществления единица линкера является нерасщепляемой, и лекарственное средство отсоединяется при деградации антитела (см., публикацию заявки на патент США № 20050238649, которая включена полностью посредством ссылки).

Как правило, линкер является не в значительной степени чувствительным к экстраклеточной среде. Как в настоящем документе используется, не в значительной степени чувствительный к экстраклеточной среде, в контексте линкера, означает, что расщепляемыми являются не более чем приблизительно 20%, обычно не более чем приблизительно 15%, обычнее не более чем приблизительно 10% и даже обычнее не более чем приблизительно 5%, не более чем приблизительно 3% или не более чем приблизительно 1% линкеров в образце соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, когда соединение конъюгата антитело-лекарственное средство присутствует в экстраклеточной среде (например, в плазме). Является ли линкер не в значительной степени чувствительным к экстраклеточной среде, можно определить, например, с помощью инкубации с плазмой соединения конъюгата антитело-лекарственное средство в течение заранее заданного периода времени (например, 2, 4, 8, 16 или 24 ч) и затем определения количества свободного лекарственного средства, присутствующего в плазме.

В других, невзаимоисключающих вариантах осуществления линкер ускоряет интернализацию в клетку. В некоторых вариантах осуществления линкер ускоряет интернализацию в клетку после конъюгирования с терапевтическим средством (т.е. внутри составляющей линкер-терапевтическое средство соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, описанного в настоящем документе). В еще одних вариантах осуществления линкер ускоряет интернализацию в клетку после конъюгирования как с соединением ауристатином, так и с антителом против СЭ30.

- 27 020696

Ряд линкеров, которые можно использовать с композициями и способами настоящего изобретения, описан, например, в \УО 2004-010957, публикациях заявок на патент США № 20060074008, 20050238649 и 20060024317 (все из которых включены сюда в целом путем представления ссылки на них и для всех целей).

В некоторых вариантах осуществления единица линкера имеет формулу

где -А- представляет собой единицу удлинителя; а равняется 0 или 1;

каждая -Ψ- независимо представляет собой аминокислотную единицу;

№ является целым числом, находящимся в диапазоне от 0 до 12;

-Υ - является единицей самоуничтожающегося спейсера; у равняется 0, 1 или 2.

В некоторых вариантах осуществления а равняется 0 или 1, № равняется 0 или 1, у равняется 0, 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления, если № находится в диапазоне от 1 до 12, у равняется 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления № находится в диапазоне от 2 до 12, у равняется 1 или 2. В некоторых вариантах осуществления а равняется 0 или 1, № равняется 0 или 1, у равняется 0 или 1. В некоторых вариантах осуществления р находится в диапазоне от 1 до приблизительно 10, от 1 до приблизительно 9, от 1 до приблизительно 8, от 1 до приблизительно 7, от 1 до приблизительно 6, от 1 до приблизительно 5, от 1 до приблизительно 4, от 1 до приблизительно 3 или от 1 до 2. В некоторых вариантах осуществления р находится в диапазоне от 2 до приблизительно 8, от 2 до приблизительно 7, от 2 до приблизительно 6, от 2 до приблизительно 5, от 2 до приблизительно 4 или от 2 до 3. В других вариантах осуществления р равняется 1, 2, 3, 4, 5 или 6. В некоторых вариантах осуществления р равняется 2 или 4.

Единица удлинителя.

Единица удлинителя (А), когда присутствует, способна к связыванию единицы антитела с аминокислотной единицей (-Ψ-), если присутствует, с единицей спейсера (-Υ-), если присутствует, или с единицей лекарственного средства (-О). Пригодные функциональные группы, которые могут присутствовать на антителе против ί'Ό30, или природно или благодаря химической манипуляции, включают, но без ограничения, сульфгидрильную группу, аминогруппу, гидроксильную, аномерную гидроксильную группу углевода или карбоксил. Подходящими функциональными группами являются сульфгидрильные группы и аминогруппы. Сульфгидрильные группы могут образовываться при восстановлении внутримолекулярных дисульфидных связей антитела против ί'Ό30. В альтернативном случае сульфгидрильные группы могут образовываться при взаимодействии аминогруппы лизиновой составляющей антитела против ί'Ό30 с 2-иминотиоланом (реагентом Трота) или другими создающими сульфгидрильные группы реагентами. В некоторых вариантах осуществления антитело против ί'Ό30 является рекомбинантным антителом и сконструировано так, что оно несет один или более лизинов. В некоторых других вариантах осуществления рекомбинантное антитело против СЭ30 сконструировано так, что оно несет дополнительные сульфгидрильные группы, например, дополнительные цистеины.

В некоторых вариантах осуществления единица удлинителя образует связь с атомом серы единицы антитела. Атом серы может происходить из сульфгидрильной группы антитела.

Репрезентативные единицы удлинителя этого варианта осуществления представлены в квадратных скобках формул 111а и ШЬ, где Ь-, -Ψ-, -Υ-, -Ό, № и у имеют значения, определенные выше, К¹⁷ выбирают из радикалов: -Ц-С^-алкилен-, -Ц-Сю-алкенилен-, -Ц-С^-алкинилен-, -карбоцикло-, -О-(С₁-С₈алкилен)-, -О-(С₄-С₈-алкенилен)-, -О-(С1-С₈-алкинилен)-, -арилен-, -Ц-Сю-алкилен-арилен-, -С₂-0₀алкенилен-арилен-, -С₂-С₄₀-алкинилен-арилен-, -арилен-Ц-Сю-алкилен-, -арилен-С₂-0₀-алкенилен-, арилен-С2-С10-алкинилен-, -С1-С10-алкилен-(карбоцикло)-, -С2-С10-алкенилен-(карбоцикло)-, -С2-С10-алкинилен-(карбоцикло)-, (карбоцикло)-С1-С10-алкилен-, -(карбоцикло)-С2-С10-алкенилен-, -(карбоцикло)-С2С10-алкинилен-, гетероцикло-, -С1-С10-алкилен-(гетероцикло)-, -С2-С10-алкенилен-(гетероцикло)-, -С2-С10алкинилен-(гетероцикло)-, -(гетероцикло)-С1-С10-алкилен-, (гетероцикло)-С2-С10-алкенилен-, -(гетероцикло)-С₂-С1₀-алкинилен-, -(СН₂СН₂О)_Г или -(СН₂СН₂О)_Г-СН₂-, г является целым числом, находящимся в диапазоне от 1 до 10, где указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкениленовые, алкиниленовые, арильные, карбоциклические, гетероциклические и ариленовые радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены. Алкиленовые, алкениленовые, алкиниленовые радикалы, отдельно или в виде части другой группы, могут быть необязательно замещены, например, одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; карбоциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, могут быть необязательно замещены, например, одной или более группами, независимо выбираемыми из А2; ариленовые радикалы, отдельно или в виде части другой группы, могут быть необязательно замещены, например, одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; гетероциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, могут быть необязательно замещены, например, одной или более группами, независимо выбираемыми из А4. А1, А2, А3 и А4 имеют определенные в настоящем документе значения. Исходя из всех приведенных в качестве примеров вариантов осуществления, должно быть понятно, что даже если прямо не отмечено, с антителом может

- 28 020696 быть связано от 1 до 20 составляющих в виде лекарственных средств (р=1-20).

Иллюстративной единицей удлинителя является единица формулы 111а, где К¹' представляет собой -(СН₂)5-

Другой иллюстративной единицей удлинителя является единица формулы 111а, где К¹ собой -(СН₂СН₂О)_Г-СН₂-; г равняется 2 представляет

Иллюстративной единицей удлинителя является единица формулы 111а, где К¹' представляет собой -арилен- или -арилен-С1-С1₀-алкилен-. В некоторых вариантах осуществления арильной группой является незамещенная фенильная группа.

Тем не менее, другой иллюстративной единицей удлинителя является единица формулы НГЬ, где К¹⁷ представляет собой -(СН₂)₅-

В некоторых вариантах осуществления единица удлинителя связана с единицей антитела благодаря дисульфидной связи между атомом серы единицы антитела и атомом серы единицы удлинителя. Репрезентативная единица удлинителя этого варианта осуществления представлена в квадратных скобках формулы IV, где К¹⁷, Ь-, -Ψ-, -Υ-, -И, \ν и у имеют значения, определенные выше.

Следует отметить, что по всему этому изобретению составляющая δ в приведенной ниже формуле относится к атому серы единицы антитела, если в контексте не оговорено иное.

В еще одних вариантах осуществления удлинитель содержит реакционноспособный сайт, который может образовывать связь с первичной или вторичной аминогруппой антитела. Примеры таких реакционноспособных сайтов включают, но без ограничения, активированные сложные эфиры, такие как сукцинимидные эфиры, 4-нитрофенильные эфиры, пентафторфенильные эфиры, тетрафторфенильные эфиры, ангидриды, хлорангидриды, сульфонилхлориды, изоцианаты и изотиоцианаты. Репрезентативные единицы удлинителя этого варианта осуществления представлены в квадратных скобках формул να и V», где -К¹⁷, Ь-, -№-, -Υ-, -И, ν и у имеют значения, определенные выше.

В других вариантах осуществления удлинитель содержит реакционноспособный сайт, который вступает в реакции с группой (-СНО) модифицированного углевода, которая присутствует на антителе. Например, углевод может быть подвергнут окислению в легкой степени, используя такой реагент, как

- 29 020696 периодат натрия, и получаемую в результате единицу (-СНО) окисленного углевода можно конденсировать с удлинителем, который обладает такой функциональностью, как гидразид, оксим, первичный или вторичный амин, гидразин, тиосемикарбазон, гидразина карбоксилат и арилгидразид, которая описана Каиеко е! а1., 1991, В^οсοи^и§аΐе СЬет. 2: 133-141. Репрезентативные единицы удлинителя этого варианта осуществления представлены в квадратных скобках формул У1а, У1Ь и У1с, где -К¹⁷, Ь-, -№-, -Υ-, -ϋ, ν и у имеют значения, определенные выше.

1_

У1с

Аминокислотная единица.

Аминокислотная единица (-№-), когда присутствует, связывает единицу удлинителя с единицей спейсера, если единица спейсера присутствует, связывает единицу удлинителя с составляющей в виде лекарственного средства, если единица спейсера отсутствует, и связывает единицу антитела с единицей лекарственного средства, если единица удлинителя и единица спейсера отсутствуют.

^_те-, когда присутствует, представляет собой монопептидную, дипептидную, трипептидную, тетрапептидную, пентапептидную, гексапептидную, гептапептидную, октапептидную, нонапептидную, декапептидную, ундекапептидную или додекапептидную единицу. Каждая единица -№- независимо имеет формулу, указанную ниже в квадратных скобках, и ν является целым числом, находящимся в диапазоне от 0 до 12:

где К¹⁹ представляет собой водород, метил, изопропил, изобутил, втор-бутил, бензил, парагидроксибензил, -СН₂ОН, СН(ОН)СН₃, -СН₂СН₂8СН₃, -СН₂СОЫН₂, -СН₂СООН, -СН₂СН₂СОЫН₂, -СН₂СН₂СООН, -(СН₂)₃КНС(=КН)КН₂, -(СН₂)₃КН₂, -(СН₂)₃КНСОСН₃, -(СН₂)₃ЫНСНО, -(СΗ₂)4NΗС(=NΗ)NΗ₂, -(СΗ₂)4NΗ₂, -(СΗ₂)4NΗСОСΗ₃, -(СН^ЫНСНО, -(СН₂)₃ЫНСОЫН₂, -(С1 ΕϊιΝΙ ΙίΌΝΙ К -СН₂СН₂СН(ОН)СН₂КН₂, 2-пиридилметил-, 3-пиридилметил-, 4-пиридилметил-, фенил, циклогексил,

В некоторых вариантах осуществления аминокислотную единицу можно ферментативно расщепить с помощью одного или более ферментов, включающих раково- или опухолевоспецифическую протеазу, для отсоединения единицы лекарственного средства (-Б), которая в одном варианте осуществления подвергается протонированию 1и у1уо при отсоединении с обеспечением лекарственного средства (Б).

В некоторых вариантах осуществления аминокислотная единица может включать природные ами- 30 020696 нокислоты. В других вариантах осуществления аминокислотная единица может включать неприродные аминокислоты. Иллюстративные единицы \У\у представлены формулами (νΓΓ)-(ΓΧ)

где К²⁰ и К²¹ имеют следующие значения:

21 22 где К , К и К имеют следующие значения:

21 22 23 где К , К , К и К имеют следующие значения:

К20	К21	Р22	к23
—		—
н	бензил	изобутил	Н; и
метил	изобутил	метил	изобутил

Приводимые в качестве примеров аминокислотные единицы включают, но без ограничения, едини2Б 21 2Б цы формулы νΓΓ, где К представляет собой бензил, а К представляет собой -(СН₂)₄ИН₂; К представляет собой изопропил, а К представляет собой -(СН₂)₄ИН₂; или К представляет собой изопропил, а К представляет собой -(СН₂)₃МНСОМН₂. Другой приводимой в качестве примера аминокислотной единицей является единица формулы νΓΓΓ, где К²⁰ представляет собой бензил, К²¹ представляет собой бензил; а К²² представляет собой -(СН₂)₄ИН₂.

Пригодные единицы можно сконструировать и оптимизировать в отношении их избирательности для ферментативного расщепления конкретным ферментом, например, опухолевоспецифической протеазой. В одном варианте осуществления единицей является единица, расщепление которой катализируется катепсином В, С и Ό или протеазой плазмином.

- 31 020696

В одном варианте осуществления единицей -Ч„- является дипептид, трипептид, тетрапептид или

20 21 22 23 пентапептид. Когда К , К , К , К или К отличен от водорода, атом углерода, к которому присоеди19 20 21 22 23 нен К , К , К , К или К , является хиральным.

20 21 22 23

Каждым атом углерода, к которому присоединен К , К , К , К или К , независимо находится в (8)- или (К)-конфигурации.

В одном аспекте аминокислотной единицы аминокислотная единица представляет собой валинцитруллин (т.е. ус или ναΐ-οίΐ). В другом аспекте аминокислотная единица представляет собой фенилаланин-лизин (т.е. Лк). В еще одном аспекте аминокислотной единицы аминокислотная единица представляет собой Ν-метилвалин-цитруллин. В еще одном аспекте аминокислотная единица представляет собой 5аминопентановую кислоту, гомофенилаланин-лизин, тетраизохинолинкарбоксилат-лизин, циклогексилаланин-лизин, изонипекотиновую кислоту, бета-аланин-лизин, глицин-серин-валин-глутамин и изонипекотиновую кислоту.

Единица спейсера.

Единица спейсера (-Υ-), когда присутствует, соединяет аминокислотную единицу с единицей лекарственного средства, когда аминокислотная единица присутствует. Альтернативно, единица спейсера соединяет единицу удлинителя с единицей лекарственного средства, когда аминокислотная единица отсутствует. Единица спейсера также соединяет единицу лекарственного средства с единицей антитела, когда отсутствуют и аминокислотная единица, и единица удлинителя.

Единицы спейсера являются спейсерами двух основных типов: несамоуничтожающимися или самоуничтожающимися. Единица несамоуничтожающегося спейсера является единицей спейсера, в которой часть и вся единица спейсера остается связанной с составляющей в виде лекарственного средства после отщепления, в частности, ферментативного, аминокислотной единицы от конъюгата антителолекарственное средство. Примеры единицы несамоуничтожающегося спейсера включают, но без ограничения, единицу спейсера (глицин-глицин) и единицу спейсера в виде глицина (обе из которых представлены на схеме 1) (ниже). Когда конъюгат, содержащий единицу спейсера (глицин-глицин) или единицу спейсера в виде глицина, подвергается ферментативному расщеплению посредством фермента (например, специфичной для опухолевых клеток протеазы, специфичной для раковых клеток протеазы или специфичной для лимфоцитов протеазы), составляющая глицин-глицин-лекарственное средство или составляющая глицин-лекарственное средство отщепляется от Ь-Аа-Чзу-. В одном варианте осуществления независимая гидролитическая реакция происходит внутри клетки-мишени, расщепляя связь в составляющей глицин-лекарственное средство и отсоединяя лекарственное средство.

Схема 1

О1у- ϋ] Ь^-Аа-Ч,,—О1у—С1у|-о ферментативное I ферментативное) расщепление I расщепление I

СНу-0 О1у-О1у-О гидролиз | гидролиз | лекарственное средство лекарственное средство

В некоторых вариантах осуществления единицей несамоуничтожающегося спейсера (-Υ -) является -О1у-. В некоторых вариантах осуществления единицей несамоуничтожающегося спейсера (-Υ-) является -С1у-С1у-.

В одном варианте осуществления предоставляется конъюгат лекарственное средство-линкер, в котором единица спейсера отсутствует (у=0), или его фармацевтически приемлемая соль или сольват.

Альтернативно, от конъюгата, содержащего самоуничтожающийся спейсер, может отсоединяться Ό.

Используемый в настоящем документе термин самоуничтожающийся спейсер относится к бифункциональной химической составляющей, которая способна к ковалентному связыванию вместе двух разнесенных химических составляющих в стабильную, состоящую из трех частей молекулу. Он будет самопроизвольно отделяться от второй химической составляющей при расщеплении его связи с первой составляющей.

В некоторых вариантах осуществления А_у- является единицей в виде группы парааминобензилового спирта (РАВ) (см. схемы 2 и 3), фениленовая часть которой замещена О_т. где О представляет собой -С₁-С₈-алкил, -С₁-С₈-алкенил, -С₁-С₈-алкинил, -О-(С₁-С₈-алкил), -О-(С₁-С₈-алкенил), -О-(С₁-С₈-алкинил), -галоген, -нитро или -циано; а т является целым числом, находящимся в диапазоне от 0 до 4.

В некоторых вариантах осуществления -Υ- является группой РАВ, которая соединяется с -Ч„- через атом азота аминогруппы в группе РАВ и соединяется непосредственно с -И через карбонатную, карбаматную или эфирную группу. Без ограничения какой-либо конкретной теорией или механизмом, на схеме 2 приведен возможный механизм отсоединения от лекарственного средства группы РАВ, которая непосредственно присоединена к -Ό через карбаматную или карбонатную группу, как описано ТокЛ и др.,

- 32 020696

2002, в I. Огд. СЬет. 67: 1866-1872.

Схема 2

ферментативное расщепление

От

О

1,6-элиминирование лекарственное средство

На схеме 2 β представляет собой -С₁-С₈-алкил, -С₁-С₈-алкенил, -С₁-С₈-алкинил, -О-(С₁-С₈-алкил), О-(С₁-С₈-алкенил), -О-(С₁-С₈-алкинил), -галоген, -нитро или -циано; т является целым числом, находящимся в диапазоне от 0 до 4; р находится в диапазоне от 1 до приблизительно 20.

Без ограничения какой-либо конкретной теорией или механизмом, на схеме 3 приведен возможный механизм отсоединения от лекарственного средства группы РАВ, которая непосредственно присоединена к -Ό посредством эфирной или аминной связи, причем Ό включает группу кислорода или азота, которая является частью единицы лекарственного средства.

Схема 3

На схеме 3 β представляет собой -С₁-С₈-алкил, -С₁-С₈-алкенил, -С₁-С₈-алкинил, -О-(С₁-С₈-алкил), -О-(С₁-С₈-алкенил), -О-(С₁-С₈-алкинил), -галоген, -нитро или -циано; т является целым числом, находящимся в диапазоне от 0 до 4; р находится в диапазоне от 1 до приблизительно 20.

Другие примеры самоуничтожающихся спейсеров включают, но без ограничения, ароматические соединения, которые в электронном виде схожи с группой РАВ, такие как производные 2аминоимидазол-5-метанола (Нау е! а1., 1999, Вюогд. Меб. СЬет. Ьей. 9: 2237) или орто- или парааминобензилацетали. Могут использоваться спейсеры, которые подвергаются циклизации при гидролизе амидной связи, такие как амиды замещенной или незамещенной 4-аминомасляной кислоты (Кобпдиек е! а1., 1995, СЬетМгу Вю1оду 2: 223), соответствующим образом замещенные бициклические [2.2.1] и [2.2.2] кольцевые системы (81огт е! а1., 1972, I. Атег. СЬет. 8ос. 94: 5815) и амиды 2аминофенилпропионовой кислоты (АткЪепу е! а1., 1990, I. Огд, СЬега. 55: 5867). Примером самоуничтожающихся спейсеров также является элиминирование аминсодержащих лекарственных средств, которые замещены в α-положении глицина (КшдкЪигу е! а1., 1984, I. Меб. СЬет. 27: 1447).

В одном варианте осуществления единица спейсера является единицей разветвленного бис(гидроксиметил)стирола (ВНМ8), представленной на схеме 4, которую можно использовать для

- 33 020696 включения и отсоединения множества лекарственных средств.

Схема 4

На схеме 4 О представляет собой -С1-С₈-алкил, -С1-С₈-алкенил, -С1-С₈-алкинил, -О-(С1-С₈-алкил), -О-(С1-С₈-алкенил), -О-(С1-С₈-алкинил), -галоген, -нитро или -циано; т является целым числом, находящимся в диапазоне от 0 до 4; п равняется 0 или 1; р находится в диапазоне от 1 до приблизительно 20.

В некоторых вариантах осуществления составляющие -Ό являются одинаковыми. В еще одном варианте осуществления составляющие -Ό являются разными.

В одном аспекте единицы спейсера (-Υ^) представлены формулами (Χ)-(ΧΙΙ)

где О представляет собой -С1-С₈-алкил, -С1-С₈-алкенил, -С1-С₈-алкинил, -О-(С1-С₈-алкил), -О-(С₁С₈-алкенил), -О-(С1-С₈-алкинил), -галоген, -нитро или -циано; т является целым числом, находящимся в диапазоне от 0 до 4;

ΗΝ—сНг-СО—] _Х1

ΝΗ0Η₂0(Ο)-ΝΗ0Η₂0(Ο)—[ * * XII.

Варианты формулы Ι и ΙΙ, включающие соединения конъюгата антитело-лекарственное средство, могут включать

- 34 020696

Единица лекарственного средства.

Ό является соединением лекарственного средства ауристатина, имеющим атом, который может образовывать связь с единицей спейсера, с аминокислотной единицей, с единицей удлинителя или с единицей антитела. В некоторых вариантах осуществления единица лекарственного средства Ό имеет Ыконцевой атом азота, который может образовывать связь с единицей спейсера. Используемые в настоящем документе термины единица лекарственного средства и составляющая в виде лекарственного средства являются синонимами и используются взаимозаменяемо, и относятся к единице лекарственного средства ауристатина или составляющей в виде лекарственного средства ауристатина.

В некоторых предпочтительных вариантах осуществления единицей лекарственного средства ауристатина является ауристатин Е или его производное. Соответственно, подразумевается, что используемый в настоящем документе термин ауристатин включает производные ауристатина. Синтез и структура приводимых в качестве примеров производных ауристатина приведены в публикациях заявок на патенты США № 2003-0083263, 2005-0238649 и 2005-0009751; публикации международной заявки на патент № \УО 04/010957, публикации международной заявки на патент № \УО 02/088172 и патентах США № 6323315, 6239104, 6034065, 5780588, 5665860, 5663149, 5635483, 5599902, 5554725, 5530097, 5521284, 5504191, 5410024, 5138036, 5076973, 4986988, 4978744, 4879278, 4816444 и 4486414, все из которых включены полностью посредством ссылки.

В некоторых вариантах осуществления -Ό является ауристатином формулы О_Е или Ό_Ρ:

или является фармацевтически приемлемой солью или сольватом соединения такой формулы, где независимо в каждом положении: волнистая линия означает связь;

К² представляет собой -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил;

К³ представляет собой -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, -карбоцикл, -С1-С20алкилен(карбоцикл), -С2-С20-алкенилен(карбоцикл), -С2-С20-алкинилен(карбоцикл), -арил, -С1-С20алкилен(арил), -С₂-С₂₀-алкенилен(арил), -С₂-С₂₀-алкинилен(арил), -гетероцикл, -С1-С20алкилен(гетероцикл), -С2-С20-алкенилен(гетероцикл) или -С2-С20-алкинилен(гетероцикл);

К⁴ представляет собой -Н, -С1-С20-алкил, -С2-С20-алкенил, -С2-С20-алкинил, карбоцикл, -С1-С20алкилен(карбоцикл), -С2-С20-алкенилен(карбоцикл), -С2-С20-алкинилен(карбоцикл), -арил, -С1-С20алкилен(арил), -С2-С20-алкенилен(арил), -С2-С20-алкинилен(арил), -гетероцикл, -С1-С20алкилен(гетероцикл), -С2-С20-алкенилен(гетероцикл) или -С2-С20-алкинилен(гетероцикл);

К⁵ представляет собой -Н или -С1-С20-алкил или

К⁴ и К⁵ совместно образуют карбоциклическое кольцо и имеют формулу -(СК^аК^Ь)8-, где К^а и К^Ь независимо представляют собой -Н, -С1-С20-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил или карбоцикл, а 8 равно 2, 3, 4, 5 или 6;

К⁶ представляет собой -Н, -С1-С20-алкил, -С2-С20-алкенил или -С2-С20-алкинил;

К⁷ представляет собой -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, -карбоцикл, -С1-С20алкилен(карбоцикл), -С2-С20-алкенилен(карбоцикл), -С2-С20-алкинилен(карбоцикл), арил, -С1-С20- 35 020696 алкилен(арил), -С₂-С₂₀-алкенилен(арил), -С₂-С₂₀-алкинилен(арил), -гетероцикл, -С₁-С₂₀алкилен(гетероцикл), -С₂-С₂₀-алкенилен(гетероцикл) или -С₂-С₂₀-алкинилен(гетероцикл);

каждый Р⁸ независимо представляет собой -Н, -ОН, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, -О-(С₃-С₂₀-алкил), -О-(С₂-С₂₀-алкенил), -О-(С₂-С₂₀-алкинил) или -карбоцикл;

Р⁹ представляет собой -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил;

Р¹⁹ представляет собой -арил, -гетероцикл или -карбоцикл;

Р²⁰ представляет собой -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, -карбоцикл, -О-(С₁-С₂₀алкил), -О-(С₂-С₂₀-алкенил), -О-(С₂-С₂₀-алкинил) или ОР¹⁸, где Р¹⁸ представляет собой -Н, защитную группу для гидроксильных групп, или прямую связь, где ОР¹⁸ представляет =О;

Р²¹ представляет собой -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, -арил, -гетероцикл или -карбоцикл;

Р¹⁰ представляет собой -арил или -гетероцикл;

Ζ представляет собой -О-, -8-, -ЫН- или -НР¹²-, где Р¹² представляет собой -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил;

Р¹¹ представляет собой -Н, -С1-С20-алкил, -С2-С20-алкенил, -С2-С20-алкинил, -арил, -гетероцикл, -(Р¹³О)т-Р¹⁴ или -(Р¹³О)т-СН(Р¹⁵)2;

т является целым числом, находящимся в диапазоне 1-1000;

Р¹³ представляет собой -С₂-С₂₀-алкилен, -С₂-С₂₀-алкенилен или -С₂-С₂₀-алкинилен;

Р¹⁴ представляет собой -Н, -0-С_2О-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил;

каждый случай Р¹⁵ независимо представляет собой -Н, -СООН, -(СН2)п-Ы(Р¹⁶)2, -(СН₂)_п-8О₃Н,

-(СН₂)_п-8О₃-С1-С₂₀-алкил, -(СН₂)_п-8О₃-С₂-С₂₀-алкенил или -(СН₂)_п-8О₃-С₂-С₂₀-алкинил;

каждый случай Р¹⁶ независимо представляет собой -Н, -0-С_2О-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀алкинил или -(СН₂)_п-СООН;

п является целым числом, находящимся в диапазоне 0-6; причем указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкениленовые, алкиниленовые, арильные, карбоциклические и гетероциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены.

Ауристатины формулы Ό_Ε или Ό_Ρ включают соединения, в которых Р² представляет собой -0 -С₂₀алкил, -С₂-С₂₀-алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил, каждый из которых необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

Р³ представляет собой -Н, -0-00-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, моноциклический С₃-С₆карбоцикл, -С1-С₂₀-алкилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С₂₀-алкенилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), С₂-С₂₀-алкинилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₆-Сю-арил, -0-00-алкилен (С₆-Сю-арил), -С₂-С₂₀-алкенилен (С₆-Сю-арил), -С₂-С₂о-алкинилен(С₆-0_о-арил), -гетероцикл, -0-С_2Оалкилен(гетероцикл), -С₂-С₂₀-алкенилен(гетероцикл) или -С₂-С₂₀-алкинилен(гетероцикл); причем указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкениленовые и алкиниленовые радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; указанные карбоциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А2; указанные арильные радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; и указанные гетероциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

Р⁴ представляет собой -Н, -0-00-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, моноциклический С₃-С₆карбоцикл, -С1-С₂₀-алкилен(моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С₂₀-алкенилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С₂₀-алкинилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₆-0_о-арил, -0-00-алкилен (С₆-Сю-арил), -С₂-С₂₀-алкенилен (С₆-Сю-арил), -С₂-С₂о-алкинилен(С₆-0_о-арил), -гетероцикл, -0-С_2Оалкилен(гетероцикл), -С₂-С₂₀-алкенилен(гетероцикл) или -С₂-С₂₀-алкинилен(гетероцикл); причем указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкениленовые и алкиниленовые радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; указанные карбоциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А2; указанные арильные радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; и указанные гетероциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

Р⁵ представляет собой -Н или -0-00-алкил или

Р⁴ и Р⁵ совместно образуют карбоциклическое кольцо и имеют формулу -(СР^аР^ь)8-, где Р^а и Р^ь независимо представляют собой -Н, -0-С8-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил или -карбоцикл, а 8 равно 2, 3, 4, 5 или 6;

Р⁶ представляет собой -Н, -0-00-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил; причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

- 36 020696

К⁷ представляет собой -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, моноциклический С₃-С₆карбоцикл, -С1-С₂₀-алкилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С₂₀-алкенилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С₂₀-алкинилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₆-С1₀-арил, -С1-С₂₀-алкилен (С₆-Сю-арил), -С₂-С₂₀-алкенилен(С₆-С1₀-арил), -С₂-С₂₀-алкинилен (С₆-С1₀-арил), -гетероцикл, -С1-С20алкилен(гетероцикл), -С2-С20-алкенилен(гетероцикл) или -С2-С20-алкинилен(гетероцикл); причем указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкениленовые и алкиниленовые радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; указанные карбоциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А2; указанные арильные радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; и указанные гетероциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

каждый К⁸ независимо представляет собой -Н, -ОН, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, -О-(С1-С₂₀-алкил), -О-(С₂-С₂₀-алкенил), -О-(С₂-С₂₀-алкинил) или карбоцикл; причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; а указанный карбоцикл необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А2;

К⁹ представляет собой -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил; причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К¹⁹ представляет собой -арил, -гетероцикл или -карбоцикл; причем указанный карбоциклический радикал необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А2 ; указанный арильный радикал необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; и указанный гетероциклический радикал необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

К²⁰ выбирают из радикалов -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, -карбоцикл, -ОН, О-(С1-С₂₀-алкил), -О-(С₂-С₂₀-алкенил), -О-(С₂-С₂₀-алкинил) или ОК¹⁸, причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; и указанный карбоцикл необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А2;

К¹⁸ представляет собой -Н, защитную группу для гидроксильных групп, или прямую связь, где ОК¹⁸ представляет =О;

К²¹ выбирают из радикалов -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил или -карбоцикл; причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; и указанный карбоциклический радикал необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А2;

К¹⁰ представляет собой арил, необязательно замещенный одной или более группами, независимо выбираемыми из А3, или гетероцикл, необязательно замещенный одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

Ζ представляет собой -О-, -δ-, -ΝΉ- или -ИК¹², где К¹² представляет собой -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил, каждый из которых необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К¹¹ представляет собой -Н, -С1-С20-алкил, -С2-С20-алкенил, -С2-С20-алкинил, -арил, -гетероцикл, -(К¹³О)т-К¹⁴ или -(К¹³О)т-СН(К¹⁵)2, причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; указанный арильный радикал необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; и указанный гетероцикл необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

т является целым числом, находящимся в диапазоне 1-1000;

К¹³ представляет собой -С₂-С₂₀-алкилен, -С₂-С₂₀-алкенилен или -С₂-С₂₀-алкинилен, каждый из которых необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К¹⁴ представляет собой -Н, -С₁-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил, причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

каждый случай К¹⁵ независимо представляет собой -Н, -СООН, -(СН2)п-И(К¹⁶)2, -(СН₂)_П-§О₃Н, -(СН₂)_п-§О₃-С₁-С₂₀-алкил, -(СН₂)_п-§О₃-С₂-С₂₀-алкенил или -(СН₂)_п-§О₃-С₂-С₂₀-алкинил, причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

каждый случай К¹⁶ независимо представляет собой -Н, -С₁-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀алкинил или -(СН2)п-СООН, причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

п является целым числом, находящимся в диапазоне 0-6;

- 37 020696

А1 представляет собой галоген, -0-(С1-С₈-алкил), -0-(С₂-С₈-алкенил), -0-(С₂-С₈-алкинил), -арил, -С(0)К', -0С(0)К', С(О)0К', -С(0)ЫН2, -С(0)ЫНК', -С(0)Ы(К'0 -ЫНС(0)К', -8К', -50эК', -8(0)2^', -8(0)К', -0Н, =0, -N3, -ЫН₂, -ЫН(К'), -Ы(К')₂ и -СК, где каждый К' независимо выбирают из -Н, -С₁-С₈алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или арила, и где указанные группы -0-(С1-С₈-алкил), -0-(С₂-С₈алкенил), -0-(С₂-С₈-алкинил), -арил, -С1-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил и -С₂-С₈-алкинил могут быть необязательно дополнительно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила, -галогена, -0-(С1-С₈-алкила), -0-(С₂-С₈-алкенила), -0-(С₂-С₈алкинила), -арила, -С(0)К, -0С(0)К, -С(0)0К, -С(0)ЫН₂, -С(0)ЫНК, -С(0)Ы(К)₂, -ЫНС(0)К, -8К, -80_зК, -8(0)₂К, -8(0)К, -0Н, -Ы_з, -ЫН₂, -ЫН(К), -Ы(К)₂ и -СЫ, где каждый К'' независимо выбирают из -Н, -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или -арила;

А2 представляет собой -галоген, -С1-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -0-(С1-С₈-алкил), -0-(С2-С8-алкенил), -О-(С2-С8-алкинил), -арил, -С(0)К', -0С(0)К', -С(0)0К', -С(0)ЫН2, -С(0)ЫНК', -С(0)Ы(К'0 -ЫНС(0)К', -8К', -80зК', -8(0ЬК', -8(0)К', -0Н, =0, -Ыз, -ЫН₂, -ЫН(К'), -Ы(К')2 и -СЫ, где каждый К' независимо выбирают из -Н, -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или -арила, и где указанные группы -0-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -0-(С1-С₈-алкил), -0-(С₂-С₈алкенил), -0-(С₂-С₈-алкинил) и -арил могут быть необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, независимо выбираемыми из -0-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила, -галогена, -0-(С1-С₈-алкила), -0-(С₂-С₈-алкенила), -0-(С₂-С₈-алкинила), -арила, -С(0)К, -0С(0)К, -С(О)0К, -С(0)ЫН2, -С(0)ЫНК, -С(0)Ы(К)2, -ЫНС(0)К, -8К'', -80зК, -8(0)2К, -8(0)К, -0Н, -N3, -ЫН₂, -ЫН(К), -Ы(К)₂ и -СЫ, где каждый К'' независимо выбирают из -Н, -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈алкенила, -С₂-С₈-алкинила или -арила;

АЗ представляет собой -галоген, -С1-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -0-(С1-С₈-алкил), -0-(С2-С8-алкенил), -О-(С2-С8-алкинил), -арил, -С(0)К', -0С(0)К', -С(О)0К', -С(0)ЫН2, -С(0)ЫНК', -С(0)Ы(К')2, -ЫНС(0)К', -8К', -80зК', -8(0ЬК', -8(0)К', -0Н, -N02, -N3, -ЫН₂, -ЫН(К'), -Ы(К')2 и -СЫ, где каждый К' независимо выбирают из -Н, -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или арила, и где указанные группы -С1-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -0-(С1-С₈-алкил), -0-(С₂-С₈-алкенил), -0-(С₂-С₈-алкинил) и -арил могут быть необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, независимо выбираемыми из -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила, -галогена, -0(С1-С₈-алкила), -0-(С₂-С₈-алкенила), -0-(С₂-С₈-алкинила), -арила, -С(0)К'', -0С(0)К'', -С(О)0К'', С(0)ЫН₂, -С(0)ЫНК, -С(0)Ы(К)₂, -ЫНС(0)К'', -8К, -80_зК'', -8(0)₂К, -8(0)К, -0Н, -Ы_з, -ЫН₂, -ЫН(К), -Ы(К)₂ и -СЫ, где каждый К'' независимо выбирают из -Н, -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂С₈-алкинила или арила; и

А4 представляет собой -С1-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, -галоген, -0-(С1-С₈-алкил), -0-(С2-С8-алкенил), -0-(С2-С8-алкинил), -арил, -С(0)К', -0С(0)К', -С(О)0К', -С(0)ЫН2, -С(0)ЫНК', -С(0)Ы(К')2, -ЫНС(0)К', -8К', -80зК', -8(0ЬК', -8(0)К', -0Н, -N3, -ЫН₂, -ЫН(К'), -Ы(К')2 и -СЫ, где каждый К' независимо выбирают из -Н, -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или арила, и где указанные группы -0-(С1-С₈-алкил), -0-(С₂-С₈-алкенил), -0-(С₂-С₈-алкинил), -С1-С₈-алкил, -С₂-С₈алкенил, -С₂-С₈-алкинил и арил могут быть необязательно дополнительно замещены одним или более заместителями, независимо выбираемыми из -0-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила, -галогена, -О-(С1-С₈-алкила), -0-(С₂-С₈-алкенила), -0-(С₂-С₈-алкинила), арила, -С(0)К, -0С(0)К, -С(О)0К, -С(0)ЫН₂, -С(0)ЫНК, -С(0)Ы(К)₂, -ЫНС(0)К, -8К, -80_зК, -8(0)₂К, -8(0)К, -0Н, -Ы_з, -ЫН₂, -ЫН(К), -Ы(К)₂ и -СЫ, где каждый К независимо выбирают из -Н, -С1-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂С₈-алкинила или арила; или их фармацевтически приемлемую соль или сольват.

Ауристатины формулы Ό_Β включают соединения, в которых указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкениленовые, алкиниленовые, арильные, карбоциклические и гетероциклические радикалы не замещены.

Ауристатины формулы Ό_Β включают соединения, в которых группы К², К³, К⁴, К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹ являются незамещенными, а

2О 21 группы К , К и К необязательно замещены, как в настоящем документе описано.

Ауристатины формулы Ό_Β включают соединения, в которых

К² представляет собой -С1-С_2О-алкил, необязательно замещенный одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К³ и К⁷ независимо выбирают из радикалов -Н, -С1-С_2О-алкил, -С₂-С_2О-алкенил, -С₂-С_2О-алкинил, моноциклический С₃-С₆-карбоцикл, -С1-С_2О-алкилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С_2Оалкенилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С_2О-алкинилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₆-Сю-арил, -С1-С_2О-алкилен (С₆-Сю-арил), -С₂-С_2О-алкенилен (С₆-С1_О-арил), -С₂-С_2О-алкинилен(С₆-Сюарил), -гетероцикл, -С1-С_2О-алкилен(гетероцикл), -С₂-С_2О-алкенилен(гетероцикл) или -С₂-С_2Оалкинилен(гетероцикл); причем указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкениленовые и алкиниленовые радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; указанные карбоциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А2; указанные арильные радикалы, отдельно или в виде части другой группы,

- З8 020696 необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; и указанные гетероциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

К⁴ представляет собой -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, моноциклический С₃-С₆карбоцикл, -С1-С₂₀-алкилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С₂₀-алкенилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С₂₀-алкинилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₆-С₂₀-арил, -С1-С₂₀-алкилен (С₆-Сю-арил), -С₂-С₂₀-алкенилен (С₆-С₂₀-арил), -С₂-С₂₀-алкинилен(С₆-С_!0-арил), -гетероцикл, -С₁-С₂₀алкилен(гетероцикл), -С2-С20-алкенилен(гетероцикл) или -С2-С20-алкинилен(гетероцикл); причем указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкениленовые и алкиниленовые радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; указанные карбоциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А2; указанные арильные радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; и указанные гетероциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

К⁵ представляет собой -Н или -С₂-С₈-алкил или

К⁴ и К⁵ совместно образуют карбоциклическое кольцо и имеют формулу -(СК^аК^Ь)к-, где К^а и К^Ь независимо выбирают из -Н, -С2-С₈-алкила, -С₂-С₈-алкенила, -С₂-С₈-алкинила или карбоцикла, а к равно 2, 3, 4, 5 или 6;

К⁶ представляет собой -С1-С20-алкил, необязательно замещенный одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

каждый К⁸ независимо выбирают из радикалов -ОН, -О-(С1-С₂₀-алкил), -О-(С₂-С₂₀-алкенил) или -О(С2-С20-алкинил); причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К⁹ представляет собой водород или -С1-С₂₀-алкил, необязательно замещенный одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К¹⁹ представляет собой арил, гетероцикл или карбоцикл;

причем указанный карбоциклический радикал необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А2; указанный арильный радикал необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; и указанный гетероциклический радикал необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

18 18

К представляет собой ОК , где К представляет собой -Н, защитную группу для гидроксильных групп, или прямую связь, где ОК¹⁸ представляет =О;

К²¹ выбирают из -Н, -С1-С₂₀-алкила, -С₂-С₂₀-алкенила, -С₂-С₂₀-алкинила или -карбоцикла; причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; и указанный карбоциклический радикал необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А2; и

А1, А2, А3 и А4 имеют определенные в настоящем документе значения, или их фармацевтически приемлемую соль или сольват.

Ауристатины формулы О_Е включают соединения, в которых К² представляет собой -Ц-С₈-алкил;

К³, К⁴ и К⁷ независимо выбирают из радикалов -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, моноциклический С₃-С₆-карбоцикл, -С1-С₂₀-алкилен(моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С₂₀алкенилен (моноциклический С3-С6-карбоцикл), -С2-С20-алкинилен (моноциклический С3-С6-карбоцикл), -С6-С10-арил, -С1-С20-алкилен (С6-С10-арил), -С2-С20-алкенилен (С6-С10-арил), -С2-С20-алкинилен(С6-С10арил), -гетероцикл, -С1-С20-алкилен(гетероцикл), -С2-С20-алкенилен(гетероцикл) или -С2-С20алкинилен(гетероцикл); причем указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкениленовые и алкиниленовые радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; указанные карбоциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А2; указанные арильные радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; и указанные гетероциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

К⁵ представляет собой -водород;

К⁶ представляет собой -С1-С8-алкил;

каждый К⁸ независимо выбирают из -ОН, -О-(С1-С20-алкила), -О-(С2-С20-алкенила) или -О-(С2-С20алкинила); причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К⁹ представляет собой водород или -С1-С8-алкил;

К¹⁹ представляет собой фенил, необязательно замещенный одной или более группами, независимо

- 39 020696 выбираемыми из А3;

18 18

К представляет собой ОК , где К представляет собой Н, защитную группу для гидроксильных групп, или прямую связь, где ОК¹⁸ представляет =О;

К²¹ выбирают из -Н, -С1-С₂₀-алкила, -С₂-С₂₀-алкенила, -С₂-С₂₀-алкинила или -карбоцикла; причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; и указанный карбоциклический радикал необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А2; и

А1, А2, А3 и А4 имеют определенные в настоящем документе значения, или их фармацевтически приемлемую соль или сольват.

Ауристатины формулы Ό_Ε включают соединения, в которых К² представляет собой метил;

К³ представляет собой -Н, -С1-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил или -С₂-С₈-алкинил, причем указанные алкильные, алкенильные или алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К⁴ представляет собой -Н, -С1-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил, -С₂-С₈-алкинил, моноциклический С₃-С₆карбоцикл, -С₆-С₄₀-арил, -С1-С₈-алкилен (С₆-С₄₀-арил), -С₂-С₈-алкенилен (С₆-С₄₀-арил), -С₂-С₈алкинилен(С6-С10-арил), -С1-С8-алкилен(моноциклический С3-С6-карбоцикл), -С2-С8алкенилен(моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С₈-алкинилен(моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), причем указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкениленовые и алкиниленовые радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; указанные карбоциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А2; и указанные арильные радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А3;

К⁵ представляет собой -Н;

К⁶ представляет собой метил;

К⁷ представляет собой -0-С₈-алкил, -С₂-С₈-алкенил или -С₂-С₈-алкинил;

каждый К⁸ представляет собой метокси; К⁹ представляет собой -водород или -С1-С₈-алкил;

К¹⁹ представляет собой фенил;

18 18

К представляет собой ОК , где К представляет собой -Н, защитную группу для гидроксильных групп, или прямую связь, где ОК¹⁸ представляет =О;

К²¹ представляет собой метил;

А1, А2 и А3 имеют определенные в настоящем документе значения, или их фармацевтически приемлемую соль или сольват.

Ауристатины формулы Ό_Ε включают соединения, в которых К² представляет собой метил;

К³ представляет собой -Н или -0-С₃-алкил;

К⁴ представляет собой -С1-С₅-алкил;

К⁵ представляет собой Н;

К⁶ представляет собой метил;

К⁷ представляет собой изопропил или втор-бутил;

К⁸ представляет собой метокси;

К⁹ представляет собой водород или -0-С₈-алкил;

К¹⁹ представляет собой фенил;

18 18

К представляет собой ОК , где К представляет собой -Н, защитную группу для гидроксильных групп, или прямую связь, где ОК¹⁸ представляет =О;

К²¹ представляет собой метил, или их фармацевтически приемлемую соль или сольват.

Ауристатины формулы Ό_Ε включают соединения, в которых

К² представляет собой метил или -С₁-С₃-алкил;

К³ представляет собой Н или -0-С₃-алкил;

К⁴ представляет собой -С1-С₅-алкил;

К⁵ представляет собой Н;

К⁶ представляет собой -0-С₃-алкил;

К⁷ представляет собой -0-С₅-алкил;

К⁸ представляет собой -0-С₃-алкокси;

К⁹ представляет собой водород или -0-С₈-алкил;

К¹⁹ представляет собой фенил;

18 18

К²⁰ представляет собой ОК¹⁸, где К¹⁸ представляет собой Н, защитную группу для гидроксильных групп, или прямую связь, где ОК представляет =О;

К²¹ представляет собой -С1-С₃-алкил, или их фармацевтически приемлемую соль или сольват.

- 40 020696

Ауристатины формулы Ό_Ρ включают соединения, в которых

К² представляет собой -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил, каждый из которых необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К³, К⁴ и К⁷ независимо выбирают из радикалов -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, моноциклический С₃-С₆-карбоцикл, -С1-С₂₀-алкилен(моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С₂₀алкенилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С₂₀-алкинилен (моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₆-Сю-арил, -С1-С₂₀-алкилен (С₆-С₁₀-арил), -С₂-С₂₀-алкенилен (С₆-С₁₀-арил), -С₂-С₂₀-алкинилен(С₆-С₁₀арил), -гетероцикл, -С1-С₂₀-алкилен(гетероцикл), -С₂-С₂₀-алкенилен (гетероцикл) или -С₂-С₂₀-алкинилен (гетероцикл); причем указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкениленовые и алкиниленовые радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; указанные карбоциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А2; указанные арильные радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; и указанные гетероциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

К⁵ представляет собой -Н;

К⁶ представляет собой -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил; причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

каждый К⁸ независимо выбирают из радикалов -Н, -ОН, -С₁-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀алкинил, -О-(С₁-С₂₀-алкил), -О-(С₂-С₂₀-алкенил), -О-(С₂-С₂₀-алкинил) или карбоцикл; причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; а указанный карбоцикл необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А2;

К⁹ представляет собой -Н, -С₁-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил; причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К¹⁰ представляет собой фенил, необязательно замещенный одной или более группами, независимо выбираемыми из А3;

Ζ представляет собой -О-, -8-, -ХН- или -Ж¹², где К¹² представляет собой -С₁-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀алкенил или -С2-С20-алкинил, каждый из которых необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К¹¹ представляет собой -Н, -С1-С20-алкил, -С2-С20-алкенил, -С2-С20-алкинил, -арил, -гетероцикл, -(К¹³О)т-К¹⁴ или -(К¹³О)т-СН(К¹⁵)2, причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; указанный арильный радикал необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; и указанный гетероцикл необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

т является целым числом, находящимся в диапазоне 1-1000;

К¹³ представляет собой -С2-С20-алкилен, -С2-С20-алкенилен или -С2-С20-алкинилен, каждый из которых необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К¹⁴ представляет собой -Н, -С₁-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил, причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

каждый случай К¹⁵ независимо представляет собой -Н, -СООН, -(СН2)и-Ы(К¹⁶)2, -(СН₂)_и-8О₃Н, (СН₂)_и-8О₃-С₁-С₂₀-алкил, -(СН₂)_и-8О₃-С₂-С₂₀-алкенил или -(СН₂)_и-8О₃-С₂-С₂₀-алкинил, причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

каждый случай К¹⁶ независимо представляет собой -Н, -С₁-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀алкинил или -(СН₂)_и-СООН, причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

и является целым числом, находящимся в диапазоне 0-6; и А1, А2, А3 и А4 имеют определенные в настоящем документе значения, или их фармацевтически приемлемую соль или сольват.

Ауристатины формулы включают соединения, в которых

К² представляет собой метил;

К³, К⁴ и К⁷ независимо выбирают из радикалов -Н, -С₁-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀-алкинил, моноциклический С₃-С₆-карбоцикл, -С₁-С₂₀-алкилен(моноциклический С₃-С₆-карбоцикл), -С₂-С₂₀алкенилен (моноциклический С3-С6-карбоцикл), -С2-С20-алкинилен (моноциклический С3-С6-карбоцикл), -С₆-С₁₀-арил, -С₁-С₂₀-алкилен (С₆-С₁₀-арил), -С₂-С₂₀-алкенилен (С₆-С₁₀-арил), -С₂-С₂₀-алкинилен(С₆-С₁₀арил), -гетероцикл, -С1-С20-алкилен(гетероцикл), -С2-С20-алкенилен (гетероцикл) или -С2-С20алкинилен(гетероцикл); причем указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкени- 41 020696 леновые и алкиниленовые радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; указанные карбоциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А2; указанные арильные радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; и указанные гетероциклические радикалы, отдельно или в виде части другой группы, необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

К⁵ представляет собой -Н;

К⁶ представляет собой метил; каждый К⁸ представляет собой метокси;

К⁹ представляет собой -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил; причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К¹⁰ представляет собой арил, необязательно замещенный одной или более группами, независимо выбираемыми из А3, или гетероцикл, необязательно замещенный одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

Ζ представляет собой -О-, -8-, -ЫН- или -ΝΚ¹²-, где К¹² представляет собой -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил, каждый из которых необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К¹¹ представляет собой -Н, -С1-С20-алкил, -С2-С20-алкенил, -С2-С20-алкинил, -арил, -гетероцикл, -(К¹³О)т-К¹⁴ или -(К¹³О)т-СН(К¹⁵)2, причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1; указанный арильный радикал необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А3; и указанный гетероцикл необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А4;

т является целым числом, находящимся в диапазоне 1-1000;

К¹³ представляет собой -С2-С20-алкилен, -С2-С20-алкенилен или -С2-С20-алкинилен, каждый из которых необязательно замещен одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

К¹⁴ представляет собой -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил или -С₂-С₂₀-алкинил, причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

каждый случай К¹⁵ независимо представляет собой -Н, -СООН, -(СН2)п-Ы(К¹⁶)2, -(СН₂)_П-8О₃Н, -(СН₂)_п-8О₃-С1-С₂₀-алкил, -(СН₂)_п-8О₃-С₂-С₂₀-алкенил или -(СН₂)_п-8О₃-С₂-С₂₀-алкинил, причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

каждый случай К¹⁶ независимо представляет собой -Н, -С1-С₂₀-алкил, -С₂-С₂₀-алкенил, -С₂-С₂₀алкинил или -(СН2)п-СООН, причем указанные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы необязательно замещены одной или более группами, независимо выбираемыми из А1;

п является целым числом, находящимся в диапазоне 0-6;

А1, А2, А3 и А4 имеют определенные в настоящем документе значения, или их фармацевтически приемлемую соль или сольват.

В некоторых из этих вариантов осуществления К¹⁰ представляет собой фенил, необязательно замещенный одной или более группами, независимо выбираемыми из А3.

Ауристатины формулы включают соединения, в которых группы К², К³, К⁴, К⁵, К⁶, К⁷, К⁸ и К⁹ являются незамещенными, а группы К¹⁰ и К¹¹ имеют определенные в настоящем документе значения.

Ауристатины формулы включают соединения, в которых указанные алкильные, алкенильные, алкинильные, алкиленовые, алкениленовые, алкиниленовые, арильные, карбоциклические и гетероциклические радикалы не замещены.

Ауристатины формулы включают соединения, в которых

К² представляет собой С1-С₃-алкил;

К³ представляет собой Н или С1-С₃-алкил;

К⁴ представляет собой С1-С₅-алкил;

К⁵ представляет собой Н;

К⁶ представляет собой С1-С₃-алкил;

К⁷ представляет собой С1-С₅-алкил;

К⁸ представляет собой С1-С₃-алкокси;

К⁹ представляет собой водород или С1-С₈-алкил;

К¹⁰ представляет собой фенил, необязательно замещенный одной или более группами, независимо выбираемыми из А3;

Ζ представляет собой О, 8 или ΝΉ;

К¹¹ и А3 имеют определенные в настоящем документе значения, или их фармацевтически приемлемую соль или сольват.

Ауристатины формулы включают соединения, в которых

- 42 020696

К² представляет собой метил;

К³ представляет собой Н или Ц-Сз-алкил;

К⁴ представляет собой С1-С₅-алкил;

К⁵ представляет собой Н;

К⁶ представляет собой метил;

К⁷ представляет собой изопропил или втор-бутил;

К⁸ представляет собой метокси;

К⁹ представляет собой водород или С1-С₈-алкил;

К¹⁰ представляет собой фенил, необязательно замещенный одной или более группами, независимо выбираемыми из А3;

Ζ представляет собой О, 8 или МН;

и К¹¹ и А3 имеют определенные в настоящем документе значения, или их фармацевтически приемлемую соль или сольват.

Ауристатины формулы включают соединения, в которых К² представляет собой метил;

К³ представляет собой Н или С1-С₃-алкил;

К⁴ представляет собой С1-С₅-алкил;

К⁵ представляет собой Н;

К⁶ представляет собой метил;

К⁷ представляет собой изопропил или втор-бутил;

К⁸ представляет собой метокси;

К⁹ представляет собой водород или С1-С₈-алкил;

К¹⁰ представляет собой фенил;

Ζ представляет собой О или МН;

и К¹¹ имеет определенное в настоящем документе значение, предпочтительно является водородом, или их фармацевтически приемлемую соль или сольват.

Ауристатины формулы включают соединения, в которых К² представляет собой С1-С₃-алкил;

К³ представляет собой Н или С1-С₃-алкил;

К⁴ представляет собой С1-С₅-алкил;

К⁵ представляет собой Н;

К⁶ представляет собой С1-С₃-алкил;

К⁷ представляет собой С1-С₅-алкил;

К⁸ представляет собой -С1-С₃-алкокси;

К⁹ представляет собой водород или -С1-С₈-алкил;

К¹⁰ представляет собой фенил;

Ζ представляет собой О или ΝΕ;

и К¹¹ имеет определенное в настоящем документе значение, предпочтительно является водородом, или их фармацевтически приемлемую соль или сольват.

Ауристатины формулы Ό_Ε или включают соединения, в которых К³, К⁴ и К⁷ независимо представляют собой изопропил или втор-бутил, а К⁵ представляет собой -Н. В приводимом в качестве примера варианте осуществления каждый из К³ и К⁴ представляет собой изопропил, К⁵ представляет собой Н, а К⁷ представляет собой втор-бутил. Остальные заместители имеют определенные в настоящем документе значения.

Ауристатины формулы Ό_Ε или включают соединения, в которых каждый из К² и К⁶ представляет собой метил, а К⁹ представляет собой Н. Остальные заместители имеют определенные в настоящем документе значения.

Ауристатины формулы Ό_Ε или включают соединения, в которых каждый случай К⁸ представляет собой -ОСН₃. Остальные заместители имеют определенные в настоящем документе значения.

Ауристатины формулы Ό_Ε или включают соединения, в которых каждый из К³ и К⁴ представляет собой изопропил, каждый из К² и К⁶ представляет собой метил, К⁵ представляет собой Н, К⁷ представляет собой втор-бутил, каждый случай К⁸ представляет собой ОСН₃, К⁹ представляет собой Н. Остальные заместители имеют определенные в настоящем документе значения.

Ауристатины формулы включают соединения, в которых Ζ представляет собой -О- или -МΗ-. Остальные заместители имеют определенные в настоящем документе значения.

Ауристатины формулы включают соединения, в которых К¹⁰ представляет собой арил. Остальные заместители имеют определенные в настоящем документе значения.

Ауристатины формулы включают соединения, в которых К¹⁰ представляет собой -фенил. Остальные заместители имеют определенные в настоящем документе значения.

Ауристатины формулы включают соединения, в которых Ζ представляет собой -О-, а К¹¹ представляет собой Н, метил или трет-бутил. Остальные заместители имеют определенные в настоящем документе значения.

- 43 020696

Ауристатины формулы Ό_Ρ включают соединения, в которых Ζ представляет собой -ΝΉ, К¹¹ представляет собой -СН(К¹⁵)2, где К¹⁵ представляет собой -(СН2)_п-^К¹⁶)2, и К¹⁶ представляет собой -С1-С₈алкил или -(СН₂)_п-СООН. Остальные заместители имеют определенные в настоящем документе значения.

Ауристатины формулы Ό_Ρ включают соединения, в которых Ζ представляет собой -ΝΉ, К¹¹ представляет собой -СН(К¹⁵)2, где К¹⁵ представляет собой -(СН2)_п-ЗО₃Н. Остальные заместители имеют определенные в настоящем документе значения.

В предпочтительных вариантах осуществления, когда Ό представляет собой ауристатин формулы Ц_Е, те является целым числом, находящимся в диапазоне от 1 до 12, предпочтительно от 2 до 12, у равняется 1 или 2, и а предпочтительно равняется 1.

В других вариантах осуществления, когда Ό представляет собой ауристатин формулы Ό_Ρ, а равняется 1, а те и у равняются 0.

Иллюстративные единицы лекарственного средства (-Ό) включают единицы лекарственного средства, имеющие следующие структуры:

- 44 020696

В одном аспекте гидрофильные группы, такие как, но без ограничения, эфиры триэтиленгликоля (ТЕО), можно присоединить к К¹¹ в единице лекарственного средства. Без ограничения какой-либо теорией, гидрофильные группы способствуют интернализации и неагломерации единицы лекарственного средства.

В некоторых вариантах осуществления единицей лекарственного средства не является ΤΖΤ-1027. В некоторых вариантах осуществления единицей лекарственного средства не является ауристатин Е, доластатин 10 или ауристатин РЕ.

Приводимые в качестве примеров соединения конъюгатов антитело-лекарственное средство имеют следующие структуры, где тАЬ-δ- представляет антитело против СЭ30

- 45 020696

Единица антитела.

Единица антитела (Ь) имеет по крайней мере одну функциональную группу, которая может образовывать связь с функциональной группой единицы линкера или единицы лекарственного средства. Пригодные функциональные группы, которые могут присутствовать на единице антитела, или природно, посредством химической манипуляции, или посредством конструирования, включают, но без ограничения, сульфгидрильную группу (-8Н), аминогруппу, гидроксильную, карбоксигруппу, аномерную гидроксильную группу углевода и карбоксил. В некоторых вариантах осуществления функциональной группой единицы антитела является сульфгидрильная группа. Обычно сульфгидрильная группа является сульфгидрильной группой, открытой для доступа сольвента, такой как открытая для доступа сольвента сульфгидрильная группа на остатке цистеина. Сульфгидрильные группы можно создать путем восстановления внутримолекулярной или межмолекулярной дисульфидной связи антитела. Сульфгидрильные группы можно также создать с помощью взаимодействия аминогруппы лизиновой составляющей антитела с 2-иминотиоланом (реагентом Трота) или другим, создающим сульфгидрильную группу, реагентом.

В некоторых вариантах осуществления одну или более сульфгидрильных групп можно спроектировать в единице антитела, например, с помощью аминокислотной замены. Например, в единицу антитела можно ввести сульфгидрильную группу. В некоторых вариантах осуществления сульфгидрильную группу вводят с помощью аминокислотной замены серина или треонина на остаток цистеина и/или с помощью добавления остатка цистеина в единицу антитела (сконструированный остаток цистеина). В некоторых вариантах осуществления остаток цистеина является внутренним остатком цистеина, т.е. не находящимся на Ν-конце или С-конце составляющей в виде антитела.

Для контролирования числа единиц лекарственного средства или составляющих в виде единица линкера-единица лекарственного средства можно исключить один или более остатков цистеинов с помощью аминокислотной замены. Например, число открытых для доступа сольвента остатков цистеина в шарнирной области иммуноглобулина можно уменьшить с помощью аминокислотной замены цистеинов

- 46 020696 на остатки серина.

В некоторых вариантах осуществления единица антитела содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 открытых для доступа сольвента остатков цистеина. В некоторых вариантах осуществления единица антитела содержит 2 или 4 открытых для доступа сольвента остатков цистеина.

Настоящим изобретением также предоставляются наборы для лечения НЬ. Набор может включать (а) контейнер, содержащий конъюгат антитело-лекарственное средство, и (Ь) один или более дополнительных контейнеров, содержащих химиотерапевтические средства. Такие наборы могут, кроме того, включать, при желании, один или более из различных общепринятых компонентов фармацевтического набора, таких как, например, контейнеры с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, дополнительные контейнеры и т.п., что будет абсолютно очевидно квалифицированных в данной области техники специалистам. В набор могут быть также включены инструкции в напечатанном виде, или в виде вкладышей, или в виде этикеток, указывающие количества вводимых соединений, принципы введения и/или принципы смешивания соединений.

Объем настоящего изобретения не ограничивается конкретными вариантами осуществления, описанными в настоящем документе. Различные модификации настоящего изобретения, помимо тех, которые в настоящем документе описаны, станут очевидны квалифицированным в данной области техники специалистам, исходя из вышеизложенного описания и сопроводительных фигур. Предполагается, что такие модификации находятся в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.

Все публикации и патентные документы, приведенные выше, включены, тем самым, целиком в качестве ссылки в тех же пределах, как если бы таким образом была указана каждая(ый) из них.

Настоящее изобретение далее описывается в следующих примерах, которые, как предполагается, не ограничивают объем изобретения.

Примеры

Пример 1. Сочетание конъюгата антитело-лекарственное средство сАС10-усММАЕ (сАС10-МС-усРАВ-ММАЕ) со схемами химиотерапевтического лечения для лечения НЬ.

Эффекты комбинирования лечения сАС10-усММАЕ с гемцитабином или АВУЭ или другими схемами химиотерапевтического лечения изучали на модели опухоли Ь540су (Ргапиксо е! а1., В1оой 2003, 102: 1458-146). Для определения максимальной переносимой дозы (МТЭ) АВУЭ и гемцитабина ежедневно определяли веса тел мышей 8СГО, подвергнутых лечению увеличивающимися количествами лекарственных средств. Критериями, определяющими МТЭ, были >20% снижение веса тела или другие признаки клинического проявления во время полного лечения с последующим 2-недельным периодом выздоровления. В качестве времени достижения конечного положения (ТТЕ) было выбрано время, требуемое для четырехкратного или трехкратного увеличения опухоли, которое определяли, используя нелинейный регрессионный анализ данных по экспоненциальному росту каждой индивидуальной опухоли, определенных на основе каждого экспериментального животного. Время, требуемое для четырехкратного увеличения опухоли, рассчитывали на основе объема опухоли в начале лечения. Для животных, которые не достигли конечного положения, устанавливали значение ТТЕ, равное последнему дню изучения. Отсрочка достижения ТТЕ относительно подвергнутых контрольному лечению опухолей является отражением % Т0Э (задержки роста опухоли), который определяли, используя формулу: % Т0Э=[(ТС)/С]х100, где Т и С представляют собой медианы времени в днях достижения ТТЕ для подвергнутых лечению и контрольных групп, используя начало лечения в качестве дня 1. Статистический анализ и графические представления выполняли, используя программное обеспечение Рпкт (ОгарЬРай) для программного обеспечения №тйо\ук 3.03. Кривые среднего роста опухоли демонстрируют зависимость от времени средних для группы объемов опухолей. Тест Ьодгапк использовали для анализа значимости различий между ТТЕ групп с подвергнутыми лечению и контрольными опухолями, при этом различия считались значимыми (*) при 0,01<Р<0,05 и в высокой степени значимыми (**) при Р<0,01. Для сАС10усММАЕ была выбрана схема лечения с использованием 1 мг/кг, С|4йх3 (раз в 4 днях3) на основе предшествующих сообщений, демонстрирующих максимальные терапевтические эффекты при использовании схемы д4йх4.

Назначение поддерживающим опухоли Ь540су мышам отдельно АВУЭ или сАС10-усММАЕ вызывало регрессию опухолей и значительные задержки роста опухолей по сравнению с контрольным лечением (фиг. 1А). Однако, в конечном счете, опухоли развивались. У животных, подвергнутых лечению с использованием монотерапии сАС10-усММАЕ, наблюдалось 4/9 стойких регрессией опухолей, а у животных, подвергнутых лечению с использованием монотерапии АВУЭ, -0/9 стойких регрессией опухолей. Напротив, комбинация сАС10-усММАЕ с АВУЭ приводила у всех экспериментальных животных к стойким регрессиям опухолей (9/9 длительным ответным реакциям) (фиг. 1А) и статистически значимому увеличению задержки роста опухолей относительно каждой группы лечения с использованием монотерапии. Подобным образом, когда лечение начинали при объеме опухоли, составляющем 300 мм³, у животных, подвергнутых лечению с использованием комбинированной терапии, наблюдалось значительное увеличение Т0Э и 50% длительных ответных реакций (5/10 животных) (фиг. 1В), в то время как у животных, подвергнутых лечению с использованием монотерапии сАС10-усММАЕ, наблюдалось 2/10

- 47 020696 длительных ответных реакций, а у животных, подвергнутых лечению с использованием монотерапии АВУО, длительных ответных реакций не наблюдалось. Следует отметить, что дозы в схеме АВУЭ были снижены на 25% в модели опухоли большого размера по сравнению с моделью опухоли небольшого размера. Задержка роста опухоли, вызванная комбинированным лечением, была в высокой степени значимой относительно каждой индивидуальной группы лечения с использованием монотерапии (табл. 1). В группе комбинированного лечения не отмечались значимые различия в потере веса тела или клиническом проявлении, что говорит о соизмеримой переносимости (не представленные данные).

Таблица1

Лечение	Медиана ТСО (фиг. 1А) (дни до четырехкратного увеличения опухоли)	Медиана ТС О (фиг. 1В) (дни до трехкратного увеличения опухоли)	Комбинация в сравнении с одиночным агентом (Р- значение) (А) (В)
САСЮ-УСММАЕ	63	41	р=0,0101 р=0,05
ΑΒνϋ	38,4	22,5	р<0,0001 р=0,001
АВУЦ+сАСЮ- νοΜΜΑΕ	>80,5*	61,5

*Эксперимент прекращали. В этот момент времени у всех животных наблюдались стойкие регрессии опухолей.

Затем изучали эффект комбинирования сАС10-усММАЕ с гемцитабином. Для этой цели мышам имплантировали опухоли Ь540су и подвергали лечению сАС10-усММАЕ и гемцитабином, или отдельно или в комбинации. В то время как лечение одним лекарственным средством приводило к значительным задержкам роста опухоли и одной длительной ответной реакции, комбинация сАС10-усММАЕ с гемцитабином усиливала противоопухолевую ответную реакцию, и длительные ответные реакции были обнаружены у всех животных (5/5, фиг. 2А). Увеличенная эффективность в группе комбинированного лечения также отмечалась, когда назначение лекарственных средств имело место, когда опухоли достигали в значительной степени большего размера (300 мм³, фиг. 2В). В результате иммуногистохимического анализа опухолей не выявлено значительных изменений уровней экспрессии ί.Ό30 в опухолях, подвергнутых лечению с использованием или АВУЭ, или гемцитабина, что исключает внесение лекарственным средством помех в экспрессию гена-мишени (не представленные данные). Подобно эксперименту с использованием АВУЭ, к значительной задержке роста опухоли приводило комбинированное лечение с использованием гемцитабина, которое было более аддитивным (табл. 2) и приводило к длительным ответным реакциям. В группе комбинированного лечения не отмечались значимые различия в потере веса тела или клиническом проявлении, что говорит о соизмеримой переносимости (не представленные данные).

Таблица 2

Лечение	Медиана Τΰϋ (фиг. 2А) (дни до четырехкратного увеличения опухоли)	Медиана ΊΌϋ (фиг. 2В) (дни до трехкратного увеличения опухоли)	Комбинация в сравнении с одиночным агентом (Р-значение) (А) (В)
сАСЮ- усММАЕ	34	39, 5	р-0,3088 р=0,0375
Гемцитабин	5	15, 5	р<0,0024 р=0,0154
Гемцитабин + сАСЮ- νοΜΜΑΕ	>75	>7 5

Во втором исследовании, проиллюстрированном на фиг. 7 и в табл. 3, наблюдали 7/8 длительных ответных реакций при комбинированном лечении с использованием сАС10-усММАЕ и гемцитабина, в то время как при лечении одним сАС10-усММАЕ наблюдали 1/7 длительную ответную реакцию, а при лечении одним гемцитабином наблюдали 1/6 длительную ответную реакцию.

- 48 020696

Таблица 3

Лечение	Медиана ТСО (фиг. 7) (дни до четырехкратного увеличения опухоли)	Комбинация в сравнении с одиночным агентом (Р-значение) (А)
сАСЮ-усММАЕ	78,01	р=0,0037
Гемцитабин	42	Р=0,0021
Гемцитабин + οΑΟΙΟ-νσΜΜΑΕ	>100*

*Эксперимент прекращали. В этот момент времени у 7/8 животных наблюдались стойкие регрессии опухолей.

Изучали эффект комбинирования сАС10-усММАЕ с СУЭ. Для этой цели мышам имплантировали опухоли Ь540су и подвергали лечению сАС10-усММАЕ и СУЭ. или отдельно или в комбинации. Лечение начинали при объеме опухолей, составляющем 100 мм³, для двух отдельных экспериментов, которые были проведены (3А и 3В). В первом эксперименте при комбинированной терапии наблюдали 6/9 длительных ответных реакций, в то время как при лечении только сАС10-усММАЕ наблюдали 4/9 длительных ответных реакции, а при лечении только СУЭ наблюдали 0/9 длительных ответных реакции. Во втором эксперименте при комбинированной терапии наблюдали 7/7 длительных ответных реакций, в то время как при лечении только сАС10-усММАЕ наблюдали 0/7 длительных ответных реакции, а при лечении только СУЭ наблюдали 0/7 длительных ответных реакции.

Таблица 4

Лечение	Медиана ТСЮ (фиг. ЗА) (дни до четырехкратного увеличения опухоли)	Медиана ТОТ (фиг. ЗВ) (дни до трехкратного увеличения опухоли)	Комбинация в сравнении с одиночным агентом (Р-значение) (А) (В)
сАС10- νοΜΜΑΕ	84,6	54,7	р=0,5089 р=0,0004
ονϋ	33,2	34, 4	р<0,0001 р=0,0005
СУЦ + САС10- усММАЕ	>77	>107

Изучали эффект комбинирования сАС10-усММАЕ с винорелбином. Для этой цели мышам имплантировали опухоли Ь540су и подвергали лечению сАС10-усММАЕ и винорелбином, или отдельно или в комбинации. Лечение начинали при объеме опухолей, составляющем 100 мм³, для двух отдельных экспериментов, которые были проведены (4А и 4В). В первом эксперименте при комбинированной терапии наблюдали 1/6 длительную ответную реакцию, в то время как при лечении только сАС10-усММАЕ наблюдали 1/6 длительную ответную реакцию, а при лечении только винорелбином наблюдали 0/6 длительных ответных реакций. Во втором эксперименте при комбинированной терапии наблюдали 6/10 длительных ответных реакций, в то время как при лечении только сАС10-усММАЕ наблюдали 4/10 длительных ответных реакций, а при лечении только винорелбином наблюдали 0/9 длительных ответных реакций.

- 49 020696

Таблица 5

Лечение	Медиана ТСС (фиг. 4А) (дни до четырехкратного увеличения опухоли)	Медиана ТСЦ (фиг. 4В) (дни до трехкратного увеличения опухоли)	Комбинация в сравнении с одиночным агентом (Р-значение) (А) (В)
сАСЮ- УСММАЕ	64	78,8	р=0,4500 р=0,3769
Винорелбин	28	34,4	р<0,0004 р=0,0001
ВинорелСин + сАСЮ- УСММАЕ	71	>78

Изучали эффект комбинирования сАС10-усММАЕ с доксорубицином. Для этой цели мышам имплантировали опухоли Ь540су и подвергали лечению сАС10-усММАЕ и доксорубицином, или отдельно или в комбинации. Лечение начинали при объеме опухолей, составляющем 100 мм³, для двух отдельных экспериментов, которые были проведены (5А и 5В). В первом эксперименте при комбинированной терапии наблюдали 0/4 длительных ответных реакций, в то время как при лечении только сАС10-усММАЕ наблюдали 1/6 длительную ответную реакцию, а при лечении только доксорубицином наблюдали 0/3 стойких ответных реакции. Во втором эксперименте при комбинированной терапии наблюдали 7/10 длительных ответных реакций, в то время как при лечении только сАС10-усММАЕ наблюдали 4/10 длительных ответных реакций, а при лечении только доксорубицином наблюдали 0/9 длительных ответных реакций.

Таблица 6

Лечение	Медиана ТСБ (фиг. 5А) (дни до четырехкратного увеличения опухоли)	Медиана ТСЦ (фиг. 5В) (дни до трехкратного увеличения опухоли)	Комбинация в сравнении с одиночным агентом (Р-значение) (А) (В)
сАСЮ-усММАЕ	64	78,8	р=0,0140 р=0,0762
Доксорубицин	32	27,2	р<0,0067 р=0,0001
Доксорубицин + сАСЮ- УСММАЕ	52	>78

Изучали эффект комбинирования сАС10-усММАЕ с винбластином. Для этой цели мышам имплантировали опухоли Ь540су и подвергали лечению сАС10-усММАЕ и винбластином, или отдельно или в комбинации. Лечение начинали при объеме опухолей, составляющем 300 мм³, (6). При комбинированной терапии наблюдали 0/10 длительных ответных реакций, в то время как при лечении только сАС10усММАЕ наблюдали 1/8 длительную ответную реакцию, а при лечении только винбластином наблюдали 0/10 длительных ответных реакций.

Таблица 7

Лечение	Медиана ΤΟϋ (фиг. 6) (дни до трехкратного увеличения опухоли)	Комбинация в сравнении с одиночным агентом (Р-значение)
САСЮ-УСММАЕ	45, 9	р=0,5970
Винбластин	30,93	р<0,0001
Винбластин + сАСЮ-	55, 7
усММАЕ

Пример 2. Комбинация конъюгата антитело-лекарственное средство сАС10-тсММАР с гемцитаби- 50 020696 ном для лечения НЬ.

Эффекты комбинирования лечения сАС10-усММАР с гемцитабином изучали таким же образом, как и в экспериментах с использованием сАС10-усММАЕ. Для сАС10-тсММАР была выбрана схема лечения с использованием 1 мг/кг, с|4б/3. В день 51 эксперимента при комбинированной терапии наблюдали 9/10 длительных ответных реакций, в то время как при лечении только сАС10-тсММАР наблюдали 0/10 длительных ответных реакций, а при лечении только гемцитабином наблюдали 0/10 длительных ответных реакций. Эксперимент происходит в день 51 и еще не завершен.

Список последовательностей <110> ЗеаДДЬе СепеДисз, 1пс.

СгиуДегз, ЕгодеНп 5ίθνθΓΕ, ЕГ1С СегЬег, Напз-РеДег <120> КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КОНЪЮГАТОВ АНТИТЕЛО-ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО <130> 0030-00513РС <150> из 60/979,594 <151> 2007-10-12 <150> ИЗ 61/027,668 <151> 2008-02-11 <150> из 61/040,641 <151> 2008-03-28 <160> 34 <170> РаДепДШ νετΕίοη 3.5 <210> 1 <211> 351 <212> ДНК <213> Миз шизси1из <220>

<221> Кодирующая белок последовательность <222> (1>..(351) <400> 1

сад С1п 1

аДс Не

сад 61п

сДд Ьеи

сад С1п 5

сад С1п

ДсД Зег

дда С1у

ссд Рго

дад С1и 10

дДд Уа1

ддд Уа1

аад ЬуБ

ССД Рго

ддд С1у 15

дсД А1а

48

^са

дид

аад

аДа

Дсс

Ддс

аад

дсД

ДсД

ддс

Дас

асе

ГЬС

асД

дас

Дас

96

Зег

Уа1

Ьуз

11е

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зед

С1у

Туг

ТЬг

РЬе

ТЬг

Азр

Туг

20

25

30

ЬаЬ

аДа

асе

Ьдд

дбд

аад

сад

аад

ссД

дда

сад

дда

сЬЬ

дад

Ддд

аДД

144

Туг

11е

ТЬг

Тгр

Уа1

Ьуз

С1п

Ьуз

Рго

С1у

С1п

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

11е

35

40

45

дда

5дд

ДаД

ССД

дда

аде

ддД

аад

асД

аад

Дас

ааЬ

дад

аад

ДДс

192

б1у

Тгр

Не

Туг

Рго

С1у

Зег

С1у

Азп

ТЬг

Ьуз

Туг

Азп

61и

Ьуз

РЬе

50

55

60

аад

ддс

аад

дсс

аса

ддд

асД

дда

дас

аса

Дсс

Дсс

аде

аса

дсс

ДДс

240

Ьуз

С1у

Ьуз

А1а

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Уа1

Азр

ТЬг

Зег

Зег

Зег

ТЬг

А1а

РЬе

65

70

75

80

а!д

сад

сЬс

аде

аде

сСд

аса

ДсД

дад

дас

асД

дсД

дЬс

ДаД

ДДС

ддд

288

МеЁ

С1п

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

ТЬг

Зег

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

РЬе

Суз

85

90

95

дед

аае

ЬаЬ

ддЬ

аае

Дас

Ддд

ДДД

дсД

Дас

Ддд

ддс

саа

ддд

асД

сад

336

А1а

Азп

Туг

61у

Азп

Туг

Тгр

РЬе

А1а

Туе

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

С1ь

100

105

110

<210> 4 <211> 5 <212> РНТ <213> Мин тизси1из <400> 4

Азр Туг Туг 11е ТНг 1 5

- 52 020696

<210>	5
<211>	51
<212>	ДНК
<213>	Миз	шизси1из
<4 00 >	5
ЬддаЬЬЬаЬс	сЬддаадсдд ЬааЬасЬаад ЬасааЬдада адЬЬсааддд с	51

<210> 6 <211> 17 <212> РКТ <213> Миз гоизси1из <400> 6

Тгр Не Туг Рго С1у Зег С1у Азп ТЬг Ьуз Туг Азп С1и Ьуз РКе Ьуз 15 10 15

С1у <210> 7 <211> 24 <212> ДНК <213> Миз шизси1из <400> 7

ЬаЬддЬаасЬ асЬддЬЬЬдс ЬЬас 24 <210> 3 <211> 8 <212> РКТ <213> Миз шизеиЬиз <400> 8

Туг 61у Авп Туг Тгр РЬе А1а Туг 1 5 <210> 9 <211> 333 <212> ДНК <213> Миз тизси1из <220>

<221> Кодирующая белок последовательность <222> (1) . .(333) <400> 9

дас Азр 1

аЬЬ 11е

дЬд Уа1

сЬд Ьеи

асе ТЬг 5

саа 61п

ЬсЬ Зег

сса Рго

дсЬ А1а

ьеи 5ег 10

ЬЬд Ьеи

дсЬ А1а

дьд Уа1

ЬсЬ Зег

сна Ьеи 15

ддд С1у

4Θ

сад

адд

дсс

асе

аЬс

Ьсс

Ьдс

аад

дсс

аде

саа

адЬ

дьь

даЬ

гьь

даЬ

96

С1п

Агд

А1а

ТЬг 20

11е

Зег

Суз

Ьуз

А1а 25

Зег

С1п

Зег

Уа1

Азр 30

РЪе

Азр

ддЬ

даЬ

адЬ

ЬаЬ

аЬд

аас

Ьдд

£ас

саа

сад

ааа

сса

дда

сад

сса

ссс

144

СЬу Азр Зег Туг Нес

Азп

Тгр

Туг 40

СЬп

С1л

Ьуз

Рго

С1у 45

СЬп

Рго

Рго

35

ааа

дЬс

сЬс

аЬс

ЬаЬ

дсь

дса

Ссс

ааЬ

сЕа

даа

ЬсЬ

ддд

аЬс

сса

дсс

Ьуз

УаЬ

Ьеи

11е

Туг

АЬа

АЬа

Зег

Азп

Ьеи

С1и

Бег

СЬу

Ые

Рго

АЬа

50

55

60

адд

ЬН

адЬ

ддс

адЬ

ддд

ЬсЬ

ддд

аса

дас

ЕЪс

асе

сЬс

аас

аЬс

саЬ

Агд

РНе

Зег

СЬу

Бег

СЬу

Зег

СЬу

ТНг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Азп

Ые

НЬз

65

70

75

80

ссГ

дгд

дад

дад

дад

дао

дсЬ

дса

асе

ЬаЬ

Ьас

ЬдЬ

сад

саа

адЬ

ааЬ

Рго

УаЬ

СЬи

СЬи

СЬи

Азр

АЬа

АЬа

ТНг

Туг

Туг

Суз

СЬп

СЬп

Бег

Азп

35

90

95

дад

дат

ссд

Гдд

асд

ЬЬе

ддг

дда

ддс

асе

аад

сЬд

даа

аЬс

ааа

СЬи

Азр

Рго

Тгр

ТНг

РЬе

СЬу

С1у

СЬу

ТНг

Ьуз

Ьеи

СЬи

ЬЬе

Ьуз

100

105

НО

<210>

10

<211>

111

<212>

РКТ

<213> 1

Миз тизсиЬиз

<400>

10

Азр

Не

УаЬ

Ьеи

ТЬг

СЬп

Бег

Рго

А1а

Зег

Ьеи

А1а

Уа1

Бег

Ьеи

С1у

1

5

10

15

СЬп

Агд

А1а

ТЬг

Ые

Бег

Суз

Ьуз

АЬа

Бег

СЬп

Бег

УаЬ

Азр

РНе

Азр

20

25

30

СЬу

Азр

Зег

Туг

МеЬ

Азп

Тгр

Туг

СЬп

СЬп

Ьуэ

Рго

СЬу

СЬп

Рго

Рго

35

40

45

Ьуз

УаЬ

Ьеи

Не

Туг

АЬа

АЬа

Зег

АЗП

Ьеи

СЬи

Бег

СЬу

11е

Рго

АЬа

50

55

60

Агд

РНе

Бег

С1у

Зег

СЬу

Бег

сьу

ТНг

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

Азп

Не

НЬз

65

70

75

80

Рго

УаЬ

СЬи

СЬи

СЬи

Азр

АЬа

АЬа

ТЬг

Туг

Туг

Суз

СЬп

СЬп

Зег

Азп

85

90

95

СЬи

Азр

Рго

Тгр

ТНг

РНе

СЬу

СЬу

СЬу

ТНг

Ьуз

Ьеи

СЬи

Не

Ьуз

100

105

но

<210>	11
<211>	45
<212>	ДНК
<213>	Миз	тизсиЬиз
<400>	11
ааддссадсс	ааадЬдЬЬда ьИЬдаЬддЬ даЬадЬЬаЬа Ьдаас	45

- 54 020696 <210> 12 <211> 15 <212> РКТ <213> Миз тизсиЬиз <400> 12

Ьуз А1а Зег С1п Зег Уа1 Азр РНе Азр С1у Азр Зег Туг МеЬ Азп 15 10 15

<210>	13
<211>	21
<212>	ДНК
<213>	Миз	тизсиЬиз
<400>	13
дсЬдсаЬсса	аЬсЬадааю ь	21

<210> 14 <211> 7 <212> РКТ <213> Миз тизси1из <400> 14

А1а А1а Зег Азп Ьеи С1и Зег 1 5

<210>	15
<211>	27
<212>	ДНК
<213>	Миз	тизси1из
<400>	15
садсааадЬа	аНдаддаНсс дЬддасд	27

<210> 16 <211> Э <212> РЕТ <213> Миз гоизси1из <400> 16

С1п С1п Зег Азп С1и Азр Рго Тгр ТНг 1 5 <210> 17 <211> 375 <212> ДНК <213> Миз тизсиЬиз <220>

<221> Кодирующая белок последовательность <222> (1) . . (375) <400> 17 дад дЬд аад сЬд дНд дад ЬсГ дда дда дде Мд дна сад ссЬ ддд ддЬ 48

С1и Уа1 Ьуз Ьеи 7а1 Е1и Зег С1у С1у Е1у Ьеи Уа1 21п Рго С1у Е1у

- 55 020696

10 15

ТсТ сТд ада сТс Тсс ТдТ дса асТ ТсТ ддд ТТс асс ТТс адТ дат Тае 96

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Сун А1а ТЪг Зег 61у РЪе ТЪг РЪе Зег Аэр Туг

25 30

ТаТ Туг

аТд МеТ

аас Азп 35

Тдд Тгр

дтс Уа1

сдс Агд

сад С1п

сст Рго 40

сса Рго

дда С1у

аад Ьуз

дсТ А1а

СТТ Ьеи 45

дад С1и

Едд Тгр

ььд Ьеи

144

ддТ

ТТТ

аТТ

ада

аас

ааа

дсТ

ааТ

ддЕ

Тас

аса

аса

дад

ТТс

адт

дса

192

С1у

РЪе

11е

Агд

Азп

Ьуз

А1а

Азп

С1у

Туг

ТНг

ТЪг

С1и

РЪе

Зег

А1а

50

55

60

ТсТ дТд аТд ддТ сдд ТТс асс аТс Тсс ада дат дат Тсс саа аде аТс 240

Зег \/а1 Нет 61у Агд РЪе ТЪг Не Зег Агд Азр Аэр Зег 61п Зег 11е

70 75 80

СТС ьеи

ТаТ Туг

сы ьеи

сад 61п

аТд Мет 85

аас Азп

асс ты

сТд Ьеи

ада Агд

дсТ А1а 90

дад С1и

дас Азр

адт Зег

дсс А1а

асТ ТЪг 95

Туг

288

Тас

ТдТ

дса

ада

дат

ссс

ссс

ТаТ

дд^

аас

ссс

саЬ

ТаТ

ТаТ

дет

а£д

336

Туг

Суз

А1а

Агд

Азр

Рго

Рго

Туг

С1у

Авп

Рго

ΗΪ3

Туг

Туг

А1 а

МеЬ

100

105

110

дас Тас Тдд ддт саа дда асс Тса дтс асс дТс Тсс Тса 375

Азр Туг Тгр С1у 61п С1у ТЪг Зег Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег

115 120 125 <210> 18 <211> 125 <212> РКТ <213> Миз тиэси1иэ <400> 18

С1и 'Ή Ьуз Ьеи Уа1 С1и Зег О1у С1у С1у Ьеи 1/а1 С1п Рго С1у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суэ А1а ТЪг Зег С1у РЪе ТЪг РЪе Зег Азр Туг 20 25 30

Туг МеТ Аэп Тгр 1/а1 Агд 61п Рго Рго 61у Ьуз А1а Ьеи С1и Тгр Ьеи 35 40 45

С1у РЪе 11е Агд Аэп Ьуэ А1а Азп С1у Туг ТЪг ТЪг С1и РЪе Зег А1а 50 55 60

Зег Уа1 МеТ 61у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Аэр Зег С1п Зег 11е 65 70 75 80

Ьеи Туг Ьеи СЬп МеТ Аэп ТЪг Ьеи Агд А1а С1и Азр Бег А1а ТЪг Туг 85 90 95

Туг Суз А1а Агд Азр Рго Рго Туг С1у Аэп Рго Ньз Туг Туг А1а МеТ 100 105 110

<210>	23
<211>	42
<212>	ДНК
<213>	Μυ 8	тизси1из
<4С0>	23
даЕссссссС	аЬдд£аассс ссаЕСаЫаС дс£а£ддас1 ас	42

<210>	24
<211>	14
<212>	РКТ
<213>	Миз тизсиТиз

- 57 020696 <400> 24

Азр 1

Рго

Рго

Туг

СЬу Азп 5

Рго

Шз

Туг

Туг А1а МеС 10

Азр

Туг

<210>

25

<211>

333

<212>

ДНК

<213>

Миз тизсиЬиз

<220>

<221>

Кодирующая белок

последовательность

<222>

(1) . .

.(333)

<400>

25

дас

аи

дед

сЬд

асе

сад

ьсь

ссС

дсс

Ьсс

Па

дсь.

ды

ЬсН

сЬд

ддд

48

Аар

Ые

νβΐ

Ьеи

ТНг

СЬп

Зег

Рго

А1а

Зег

Ьеи

АЬа

УаЬ

Зег

Ьеи

С1у

1

5

10

15

сад

адд

дсс

асе

аЬс

Оса

Ьдс

адд

дсс

аде

ааа

адЬ

дСс

адЬ

дса

НсЬ

96

СЬп

Агд

А1а

ТНг

11е

Зег

Суз

Агд

А1а

Зег

Ьуз

Зег

УаЬ

Зег

АЬа

Зег

20

25

30

ддс

Нас

ааЬ

£аЬ

а£д

сас

Ьдд

Сас

саа

сад

ааа

дса

ддд

сад

сса

ссс

144

СЬу

Туг

Азп

Туг

мен

НЬз

Тгр

Туг

С1п

СЬп

Ьуз

АЬа

СЬу

СЬп

Рго

Рго

35

40

45

ааа

с£с

сСс

аЬс

сан

сЬЬ

дса

Ссс

аас

сЬа

даа

0сЬ

ддд

дЬс

ссЬ

дсс

192

Ьуз

Ьеи

Ъеи

ЬЬе

Н13

Ъеи

АЬа

Зег

Азп

Ьеи

СЬи

Зег

СЬу

УаЬ

Рго

А1а

50

55

60

адд

Ыс

адН

ддс

адЬ

ддд

ЬсН

ддд

аса

дас

ЬНс

асе

с£с

аас

а£с

саб

240

Агд

РНе

Зег

СЬу

Зег

СЬу

Зег

С1у

ТНг

Азр

РНе

ТНг

Ьеи

Азп

11е

ΗΪ5

65

70

75

80

ссЬ

д1;д

дад

дад

дад

даЬ

дсЬ

Сса

асе

ЬаЬ

Нас

ЬдЬ

сад

сас

адС

ддд

288

Рго

УаЬ

С1и

СЬи

СЬи

Азр

АЬа

Зег

ТНг

Туг

Туг

Суз

СЬп

НЬз

Зег

С1у

85

90

95

дад

СГЬ

сса

Ыс

асд

Ыс

ддс

Ссд

ддд

аса

аад

0Ьд

даа

аСа

ааа

333

СЬи

Ьеи

Рго

РНе

ТНг

РНе

СЬу

Зег

С1у

ТНг

Ьуз

Ьеи

СЬи

Ые

Ъуз

100

105

110

<210>

26

<211>

111

<212>

РКТ

<213>

Миз пшзсиЬиз

<400>

26

Азр

Не

Уа1

Ьеи

ТНг

СЬп

Зег

Рго

А1а

Зег

Ьеи

А1а

УаЬ

Зег

Ъеи

61у

1

5

10

15

СЬп

Агд

А1а

ТНг

Не

Зег

Суз

Агд

А1а

Зег

Ьуз

Зег

УаЬ

Бег

АЬа

Зег

20

25

30

СЬу

Туг

Азп

Туг

МеС

НЁз

Тгр

Туг

О1п

СЬп

Ьуз

АЬа

СЬу

СЬп

Рго

Рго

35

40

45

- 58 020696

<210>	31
<211>	27
<212>	ДНК
<213>	Низ	тизси1из
<400>	31
сздсасадСд	дддадс^Ссс а££сасд	27

- 59 020696 <210> 32 <211> 9 <212> РКТ

<213>

Миг тизси1из

<400>

32

С1п

ΗΪ3

Зег

С1у

СЬи

Ьеи

Рго

РЬе

ТНг

1

5

<210>

33

<211>

330

<212>

РКТ

<213>

Ното

зартепз

<400>

33

А1а

Зег

ТЬг

Ьуз

С1у

Рго

Зег

УаЬ

РНе

Рго

Ьеи

А1э

Рго

Зег

Зег

Ьуз

1

5

10

15

Зег

ТНг

Зег

С1у

СЬу

ТНг

А1а

А1а

Ьеи

СЬу

Суз

Ьеи

УаЬ

Ьуз

Азр

Туг

20

25

30

РЬе

Рго

С1и

Рго

УаЬ

ТНг

УаЬ

Зег

Тгр

Азп

Зег

С1у

А1а

Ьеи

ТЬг

Зег

35

40

45

СЬу

Уа1

ΗΪ5

ТНс

РЬе

Рго

А1а

УаЬ

Ьеи

СЬп

Зег

Зег

СЬу

Ьеи

Туг

Зег

50

55

60

Ьеа

Зег

Зег

Уа1

УаЬ

ТНг

УаЬ

Рго

Зег

Зег

Зег

Ьеи

СЬу

ТНг

СЬп

ТНг

65

70

75

80

Туг

Не

Суз

Азп

УаЬ

Азп

ΗΪΞ

Ьуз

Рго

Зег

Азп

ТНг

Ьуз

УаЬ

Азр

Ьуз

85

90

95

Ьуз

УаЬ

С1и

Рго

Ьуз

Зег

Суз

Азр

Ьуе

ТНг

НЬз

ТНг

Суз

Рго

Рго

Суз

100

10 5

но

Рго

А1а

Рго

СЬи

Ьеи

Ьеи

СЬу

СЬу

Рго

Зег

УаЬ

РНе

Ьеи

РНе

Рго

Рго

115

120

125

Ьуз

Рго

Ьуз

Азр

ТЬг

Ьеи

МеЬ

11е

Зег

Агд

ТНг

Рго

СЬи

УаЬ

ТЬг

Суз

130

135

140

Уа1

Уа1

Уа1

Азр

УаЬ

Зег

НЬз

СЬи

Азр

Рго

СЬи

УаЬ

Ьуз

РЬе

Азп

Тгр

145

150

155

160

Туг

УаЬ

Азр

СЬу

УаЬ

СЬи

УаЬ

НЬз

Азп

АЬа

Ьуз

ТНг

Ьуз

Рго

Агд

СЬи

165

170

175

- 60 020696

С1и С1п Туг	Азп 180	Бег	ТЬг Туг Агд	Уа1 185	Уа1	Бег	УаЬ	Ьеи	ТЬг 190	УаЬ	Ьеи
НЬз СЬп Азр	Тгр	Ьеи	Азп 61 у Ьуз	С1и	Туг	Ьуз	Суз	Ьуз	Уа!	Бег	Азп
195			200					205
Ьуз А1а Ьеи	Рго	А1а	Рго 11е 61и	Ьуз	ТЬг	Не	Бег	Ьуз	А1а	Ьуз	СЬу
210			215				220
СЬп Рго Агд	С1и	Рго	С1п Уа1 Туг	ТЬг	Ьеи	Рго	Рго	Бег	Агд	Азр	СЬи
225			230			235					240
Ьеи ТЬг Ьуз	Азп	С1п	УП Бег Ьеи	ТЬг	Суз	Ьеи	Уа1	Ьуэ	СЬу	РЬе	Туг
		245			250					255
Рго Зег Азр	Не	А1а	ν=1 О1и Тгр	С1и	Бег	Азп	СЬу	61п	Рго	С1и	Азп
	260			265					270
Азп Туг Ьуз	ТЬг	ТЬг	Рго Рго Уа1	Ьеи	Азр	Бег	Азр	СЬу	Бег	РЬе	РЬе
275			280					285
Ьеи Туг Бег	Ьуз	ьеи	ТЬг Уа1 Азр	Ьуз	Зег	Агд	Тгр	СЬп	СЬп	СЬу	Азп
290			295				300
УаЬ РЬе Бег	Суз	Бег	7=1 МеЬ НЬз	С1и	А1а	Ьеи	Шз	Азп	НЬз	Туг	ТЬг
305			310			315					320
С1п Ьуз Бег	Ьеи	Бег	Ьеи Бег Рго	СЬу	Ьуэ
		325			330
<210> 34
<211> 106
<212> РКТ
<213> Ното	зархепз
<400> 34
ТЬг УаЬ А1а	АТа	Рго	Бег УаТ РЬе	11е	РЬе	Рго	Рго	Бег	Азр	СЬи	СЬп
1		5			10					15
Ьеи Ьуз Бег	СЬу	ТЬг	А1а Бег Уа1	Уа1	Суз	Ьеи	Ьеи	Азп	Азп	РЬе	Туг
	20			25					30
Рго Агд С1и	А1а	Ьуз	Уа1 С1п Тгр	Ьуз	Уа1	Азр	Азп	АЬа	Ьеи	С1п	Бег
35			40					45
С1у Азп Зег	СТп	С1и	Зег Уа1 ТЬг	С1и	СЬп	Азр	Бег	Ьуз	Азр	Бег	ТНг
50			55				60
Туг Бег Ьеи	Бег	Бег	ТЬг Ьеи ТЬг	Ьеи	Бег	Ьуз	АЬа	Азр	Туг	СЬи	Ьуз
65			70			75				80

НЬз Ьуз Уа1 Туг А1а Суз С1и Уа1 ТНг НЬз СЬп СЬу Ьеи Зег Бег Рго 85 90 95

УаЬ ТЬг Ьуз Зег РЬе Азп Агд 100

СЬу С1и Суз

Claims (21)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ лечения лимфомы Ходжкина у субъекта, включающий введение гемцитабина и конъюгата антитела против СЭ30 с соединением ауристатина.
2. 2. Способ по п.1, в котором введение указанного соединения конъюгата антитело-лекарственное средство осуществляют в течение цикла лечения, причем общая вводимая доза в течение цикла лечения составляет от 0,1 до 3,2 мг/кг веса тела субъекта.
3. 3. Способ по п.2, в котором общая вводимая доза в течение цикла лечения составляет от приблизительно 0,6 до приблизительно 3,2 мг/кг веса тела субъекта.
4. 4. Способ по п.2 или 3, в котором введение указанного соединения конъюгата антителолекарственное средство осуществляют в виде дробной дозы в течение цикла лечения.
5. 5. Способ по п.2 или 3, в котором введение указанного соединения конъюгата антителолекарственное средство осуществляют в виде однократной дозы в течение цикла лечения.
6. 6. Способ по любому одному из пп.2-5, в котором цикл лечения составляет три недели.
7. 7. Способ по любому одному из пп.2-5, в котором цикл лечения составляет четыре недели.
8. 8. Способ по п.1, где соединение конъюгата антитело-лекарственное средство вводят в интервале доз от 0,4 до 1 мг/кг веса тела субъекта.
9. 9. Способ по любому из пп.1-8, в котором гемцитабин вводят в дозе от 500 до 1500 мг/м²
10. 10. Способ по любому одному из пп.2-9, в котором указанный конъюгат и гемцитабин вводят во время цикла лечения, составляющего три или четыре недели, и при этом во время цикла лечения не вводят дополнительные противораковые средства.
11. 11. Способ по любому из пп.1-10, в котором указанный субъект страдает лимфомой Ходжкина поздней стадии.
12. 12. Способ по любому из пп.1-10, в котором указанный субъект имеет рецидивирующую или не поддающуюся лечению лимфому Ходжкина.
13. 13. Способ по п.1, в котором указанное соединение конъюгата антитело-лекарственное средство вводят в течение двух или более циклов лечения, составляющих три или четыре недели.
14. 14. Способ по любому из пп.1-13, в котором соединение ауристатина конъюгировано с антителом против СО30 посредством линкера, который является расщепляемым во внутриклеточных условиях так, что расщепление линкера высвобождает соединение ауристатина из конъюгата антитело-лекарственное средство во внутриклеточном окружении.
15. 15. Способ по п.14, в котором указанный конъюгат имеет следующую структуру:

    где тАЬ-8 представляет антитело против СЭ30; р составляет примерно от 1 до 10.
16. 16. Способ по любому из пп.1-13, в котором соединение ауристатина конъюгировано с антителом против СО30 посредством линкера, который является не расщепляемым во внутриклеточных условиях, и соединение ауристатина высвобождается из конъюгата посредством деградации антитела.
17. 17. Способ по п.16, в котором указанный конъюгат имеет следующую структуру:
18. 18. Способ по п.15 или 17, в котором с каждым антителом конъюгировано в среднем 4 соединения ауристатина.
19. 19. Способ по любому пп.1-13, в котором указанное антитело против СО30 представляет собой химерное антитело АС10 или конкурирует за связывание с химерным антителом АС10.
20. 20. Способ по п.19, в котором антитело против СО30 представляет собой химерное антитело АС10.
21. 21. Применение гемцитабина и конъюгата антитела против СЭ30 с соединением ауристатина для производства лекарственного средства для лечения лимфомы Ходжкина у субъекта.