JP2015516401A - Dr5リガンド薬物コンジュゲート - Google Patents
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Abstract
様々な癌の処置に有効な治療剤に連結基および/またはスペーサーを介して結合されたDR5結合部分を有するリガンド薬物コンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態において、リガンド薬物コンジュゲートは、式:L−(LU−D)p(式中、Lは、リガンドユニットであり、LUは、リンカーユニットであり、Dは、薬物ユニット(または細胞傷害剤)である)を有する。下付き文字pは、1〜20の整数である。したがって、前記リガンド薬物コンジュゲートは、少なくとも1つの薬物ユニットに共有結合したリガンドユニットを含む。薬物ユニットは、直接またはリンカーユニット(−LU−)を介して共有結合され得る。リガンドユニットは、DR5結合剤、例えば、抗DR5抗体である。
Description
関連出願への相互参照
本出願は、2012年4月24日に出願された米国仮特許出願第61/637,808号の優先権の利益を主張し、この出願の内容は本明細書においてその全体がすべての目的のために参照として援用される。
本出願は、2012年4月24日に出願された米国仮特許出願第61/637,808号の優先権の利益を主張し、この出願の内容は本明細書においてその全体がすべての目的のために参照として援用される。
連邦支援の研究および開発の下でなされた発明に対する権利についての陳述
適用なし。
適用なし。
ASCIIテキストファイルとして提出された「配列表」、表またはコンピュータープログラムリストの添付物についての言及
ファイル(−75−1PC.TXT、2013年4月22日作成、20,480バイト、マシンフォーマットIBM−PC、MS−Windows(登録商標)オペレーティングシステム)に記載されている配列表は、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
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発明の背景
アポトーシス誘導に関与する細胞表面受容体(例えば、デスドメイン含有受容体)は、リガンド結合により細胞膜上でマルチマー化し、細胞におけるアポトーシスシグナルの誘導を生物学的に引き起こす(Cell Death and Differentiation,10:66−75(2003))。このような細胞表面受容体の例としては、腫瘍壊死因子(本明細書では以下、TNFと称される)関連アポトーシス誘導リガンド(本明細書では以下、TRAILと称される)受容体ファミリーが挙げられる。TRAILは、FasリガンドおよびTNF−αを含むTNFタンパク質ファミリーのメンバーである(Wiley SRら、Immunity 1995 Dec;3(6):673−82)。これらのタンパク質は、強力なアポトーシス誘導因子である。
アポトーシス誘導に関与する細胞表面受容体(例えば、デスドメイン含有受容体)は、リガンド結合により細胞膜上でマルチマー化し、細胞におけるアポトーシスシグナルの誘導を生物学的に引き起こす(Cell Death and Differentiation,10:66−75(2003))。このような細胞表面受容体の例としては、腫瘍壊死因子(本明細書では以下、TNFと称される)関連アポトーシス誘導リガンド(本明細書では以下、TRAILと称される)受容体ファミリーが挙げられる。TRAILは、FasリガンドおよびTNF−αを含むTNFタンパク質ファミリーのメンバーである(Wiley SRら、Immunity 1995 Dec;3(6):673−82)。これらのタンパク質は、強力なアポトーシス誘導因子である。
TNFタンパク質ファミリーの受容体は、細胞外ドメインにおけるシステインリッチ反復配列を特徴とする。これらの中で、Fasリガンドの受容体であるFas、およびTNF−αの受容体であるTNF受容体I(本明細書では以下、TNFRIと称される)は、デスドメイン含有受容体と総称される。これらの受容体はアポトーシスシグナル伝達に必須の細胞内ドメインを有しており、これはデスドメインと称され、Drosophila自殺遺伝子であるreaperに相同である(Golstein,P.ら、(1995)Cell.81,185−186,White,Kら、(1994)Science 264,677−683)。
5個のTRAIL受容体が同定されており、それらのうちの2個(DR4[TRAIL−R1]およびDR5[TRAIL−R2])はアポトーシスシグナル伝達を誘導し得るが、他の3個(DcR1[TRAIL−R3]、DcR2[TRAIL−R4]、およびオステオプロテゲリン[OPG])はアポトーシスシグナル伝達を誘導しない。FasおよびTNFRIのように、DR4およびDR5の両方の細胞内セグメントはデスドメインを含有し、Fas関連デスドメインタンパク質(本明細書では以下、FADDと称される)およびカスパーゼ−8を含む経路によって、アポトーシスシグナル伝達を誘導する(Chaudhary PMら、Immunity 1997 Dec;7(6):821−30;Schneider Pら、Immunity 1997 Dec;7(6):831−36)。
上記Fas、TNFRI、DR4、およびDR5に関して、これらの分子に対してそれぞれ結合するアゴニスト抗体は、表面上に標的分子を有する細胞に対してアポトーシス誘導活性を有する(Journal of Cellular Physiology,209:1021−1028(2006);Leukemia,Apl;21(4):805−812(2007);Blood,99:1666−1675(2002);Cellular Immunology,Jan;153(1):184−193(1994))。これらのアゴニスト抗体の有効性は、二次抗体またはエフェクター細胞との架橋によって増強される(Journal of Immunology,149:3166−3173(1992);European Journal of Immunology,Oct;23(10):2676−2681(1993))。
アポトーシス誘導に関与する細胞表面受容体に結合する能力を有する抗DR5抗体は、現在、治療剤として臨床開発中であり、治療効果を示し、受容体を発現する細胞(癌細胞および免疫疾患関連細胞)を特異的かつ作動的に死滅させることが期待されている。この抗体の作用機構は、抗体分子を一緒に架橋して、抗体が受容体に結合する前または後にマルチマーを形成することによって媒介されると提唱されている。続いて、抗体のこのようなマルチマー化は、抗原受容体のマルチマー化(すなわち、アポトーシス誘導)を引き起こす。インビトロ実験では、抗体に対する二次抗体の追加による人工的な架橋が、抗体の活性を増強するのに必要とされ、インビボでは、免疫エフェクター細胞上のFc受容体による架橋が、抗体の活性を生じさせるのに必要な作用機構であるようである。近年、抗体の構造を変化させることによって、抗体の元の機能をさらに増強しようとする試みがなされている。例えば、抗体上の特定の炭水化物構造を除去することにより、Fc受容体に対する親和性が改善されることが報告されている。このような作用機構は、細胞表面受容体に対する非インターナリゼーション抗体が好ましいことを示唆している。
しかしながら、DR5発現癌を処置する方法が依然として必要である。
しかしながら、DR5発現癌を処置する方法が依然として必要である。
Cell Death and Differentiation,10:66−75(2003)
Wiley SRら、Immunity 1995 Dec;3(6):673−82
Golstein,P.ら、(1995)Cell.81,185−186
White,Kら、(1994)Science 264,677−683
Chaudhary PMら、Immunity 1997 Dec;7(6):821−30
Schneider Pら、Immunity 1997 Dec;7(6):831−36
Journal of Cellular Physiology,209:1021−1028(2006)
Leukemia,Apl;21(4):805−812(2007)
Blood,99:1666−1675(2002)
Cellular Immunology,Jan;153(1):184−193(1994)
Journal of Immunology,149:3166−3173(1992)
European Journal of Immunology,Oct;23(10):2676−2681(1993)
発明の概要
本発明は、とりわけ、薬物をDR5発現細胞に標的化送達するためのリガンド薬物コンジュゲートを提供する。本発明者らは広範囲な研究を行ったところ、細胞においてアポトーシスを誘導し得る抗体を含有する抗体−薬物コンジュゲートが、このような抗体単独よりも有意な癌治療効果を有することを見出した。本発明にしたがって抗体−薬物コンジュゲートを使用することによって、抗体それ自体がアポトーシス誘導効果を示し、抗体にコンジュゲートした薬物も治療効果を示す。これらの理由で、抗体−薬物コンジュゲートは、抗体単独では有効に処置できない患者に対して有効な治療効果を有する。本明細書に記載されるリガンド薬物コンジュゲートは、DR5を発現する細胞(例えば、DR5発現癌細胞)に対する強力な細胞傷害活性および/または細胞増殖抑制活性を有する。いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、式:
L−(LU−D)p (I)
(式中、Lは、リガンドユニットであり、LUは、リンカーユニットであり、Dは、薬物ユニット(または細胞傷害剤)である)を有する。下付き文字pは、1〜20の整数である。したがって、リガンド薬物コンジュゲートは、少なくとも1個の薬物ユニットに共有結合したリガンドユニットを含む。薬物ユニットは、直接的に、またはリンカーユニット(−LU−)を介して共有結合され得る。以下により詳細に記載されるリガンドユニットは、DR5結合剤(例えば、抗DR5抗体)である。したがって、本発明はまた、例えば、様々な癌の処置のための方法を提供する。これらの方法は、リガンドユニットが、DR5に特異的に結合する抗DR5結合剤であるリガンド薬物コンジュゲートの使用を包含する。DR5結合剤は、例えば、抗DR5抗体、抗DR5抗原結合断片、またはヒト化抗体重鎖および/もしくは軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む他のDR5結合剤、またはそれらの誘導体であり得る。
本発明は、とりわけ、薬物をDR5発現細胞に標的化送達するためのリガンド薬物コンジュゲートを提供する。本発明者らは広範囲な研究を行ったところ、細胞においてアポトーシスを誘導し得る抗体を含有する抗体−薬物コンジュゲートが、このような抗体単独よりも有意な癌治療効果を有することを見出した。本発明にしたがって抗体−薬物コンジュゲートを使用することによって、抗体それ自体がアポトーシス誘導効果を示し、抗体にコンジュゲートした薬物も治療効果を示す。これらの理由で、抗体−薬物コンジュゲートは、抗体単独では有効に処置できない患者に対して有効な治療効果を有する。本明細書に記載されるリガンド薬物コンジュゲートは、DR5を発現する細胞(例えば、DR5発現癌細胞)に対する強力な細胞傷害活性および/または細胞増殖抑制活性を有する。いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、式:
L−(LU−D)p (I)
(式中、Lは、リガンドユニットであり、LUは、リンカーユニットであり、Dは、薬物ユニット(または細胞傷害剤)である)を有する。下付き文字pは、1〜20の整数である。したがって、リガンド薬物コンジュゲートは、少なくとも1個の薬物ユニットに共有結合したリガンドユニットを含む。薬物ユニットは、直接的に、またはリンカーユニット(−LU−)を介して共有結合され得る。以下により詳細に記載されるリガンドユニットは、DR5結合剤(例えば、抗DR5抗体)である。したがって、本発明はまた、例えば、様々な癌の処置のための方法を提供する。これらの方法は、リガンドユニットが、DR5に特異的に結合する抗DR5結合剤であるリガンド薬物コンジュゲートの使用を包含する。DR5結合剤は、例えば、抗DR5抗体、抗DR5抗原結合断片、またはヒト化抗体重鎖および/もしくは軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む他のDR5結合剤、またはそれらの誘導体であり得る。
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、細胞傷害剤に共有結合したDR5結合剤を含む。いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、DR5を発現する標的細胞に対する特異性を有する式:
L−(LU−D)p (I)
(式中、
Lは、DR5結合剤であるリガンドユニットであり;および
(LU−D)は、リンカーユニット−薬物ユニット部分であり、ここで、LUは、リンカーユニットであり、Dは、前記標的細胞に対する細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物ユニットであり;および
下付き文字pは、1〜20の整数である)またはその薬学的に許容され得る塩を有する。
L−(LU−D)p (I)
(式中、
Lは、DR5結合剤であるリガンドユニットであり;および
(LU−D)は、リンカーユニット−薬物ユニット部分であり、ここで、LUは、リンカーユニットであり、Dは、前記標的細胞に対する細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物ユニットであり;および
下付き文字pは、1〜20の整数である)またはその薬学的に許容され得る塩を有する。
いくつかの実施形態では、式(I)を有するリガンド薬物コンジュゲートは、式DEまたはDF:
(式中、各位置で独立して、
波線は、リガンド薬物コンジュゲートの残りの部分に対する結合点を示し;
R2は、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R3は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、炭素環、−C1−C20アルキレン(炭素環)、−C2−C20アルケニレン(炭素環)、−C2−C20アルキニレン(炭素環)、−アリール、−C1−C20アルキレン(アリール)、−C2−C20アルケニレン(アリール)、−C2−C20アルキニレン(アリール)、−複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)であり;
R4は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、炭素環、−C1−C20アルキレン(炭素環)、−C2−C20アルケニレン(炭素環)、−C2−C20アルキニレン(炭素環)、−アリール、−C1−C20アルキレン(アリール)、−C2−C20アルケニレン(アリール)、−C2−C20アルキニレン(アリール)、−複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)であり;
R5は、−Hまたは−C1−C8アルキルであり;
またはR4およびR5は一緒になって炭素環を形成し、式−(CRaRb)s−(式中、RaおよびRbは独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニルまたは−炭素環であり、sは、2、3、4、5または6である)を有し;
R6は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R7は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−炭素環、−C1−C20アルキレン(炭素環)、−C2−C20アルケニレン(炭素環)、−C2−C20アルキニレン(炭素環)、−アリール、−C1−C20アルキレン(アリール)、−C2−C20アルケニレン(アリール)、−C2−C20アルキニレン(アリール)、複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)であり;
各R8は独立して、−H、−OH、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−O−(C1−C20アルキル)、−O−(C2−C20アルケニル)、−O−(C2−C20アルキニル)または−炭素環であり;
R9は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R19は、−アリール、−複素環または−炭素環であり;
R20は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−炭素環、−O−(C1−C20アルキル)、−O−(C2−C20アルケニル)、−O−(C2−C20アルキニル)またはOR18であり、ここで、R18は、−H、ヒドロキシル保護基であるか、またはOR18が=Oを表す場合には直接結合であり;
R21は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、または−C2−C20アルキニル、−アリール、−複素環または−炭素環であり;
R10は、−アリールまたは−複素環であり;
Zは、−O−、−S−、−NH−または−NR12−であり、ここで、R12は、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R11は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−アリール、−複素環、−(R13O)m−R14または−(R13O)m−CH(R15)2であり;
mは、0〜1000の範囲の整数であり;
R13は、−C2−C20アルキレン、−C2−C20アルケニレンまたは−C2−C20アルキニレンであり;
R14は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
出現する各R15は独立して、−H、−COOH、−(CH2)n−N(R16)2、−(CH2)n−SO3H、−(CH2)n−SO3−C1−C20アルキル、−(CH2)n−SO3−C2−C20アルケニルまたは−(CH2)n−SO3−C2−C20アルキニルであり;
出現する各R16は独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニルまたは−(CH2)n−COOHであり;および
nは、0〜6の範囲の整数であり;ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン(alkynyklene)、アリール、炭素環(carbocyle)および複素環原子団(radical)は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される)を有する薬物ユニットまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
波線は、リガンド薬物コンジュゲートの残りの部分に対する結合点を示し;
R2は、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R3は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、炭素環、−C1−C20アルキレン(炭素環)、−C2−C20アルケニレン(炭素環)、−C2−C20アルキニレン(炭素環)、−アリール、−C1−C20アルキレン(アリール)、−C2−C20アルケニレン(アリール)、−C2−C20アルキニレン(アリール)、−複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)であり;
R4は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、炭素環、−C1−C20アルキレン(炭素環)、−C2−C20アルケニレン(炭素環)、−C2−C20アルキニレン(炭素環)、−アリール、−C1−C20アルキレン(アリール)、−C2−C20アルケニレン(アリール)、−C2−C20アルキニレン(アリール)、−複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)であり;
R5は、−Hまたは−C1−C8アルキルであり;
またはR4およびR5は一緒になって炭素環を形成し、式−(CRaRb)s−(式中、RaおよびRbは独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニルまたは−炭素環であり、sは、2、3、4、5または6である)を有し;
R6は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R7は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−炭素環、−C1−C20アルキレン(炭素環)、−C2−C20アルケニレン(炭素環)、−C2−C20アルキニレン(炭素環)、−アリール、−C1−C20アルキレン(アリール)、−C2−C20アルケニレン(アリール)、−C2−C20アルキニレン(アリール)、複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)であり;
各R8は独立して、−H、−OH、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−O−(C1−C20アルキル)、−O−(C2−C20アルケニル)、−O−(C2−C20アルキニル)または−炭素環であり;
R9は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R19は、−アリール、−複素環または−炭素環であり;
R20は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−炭素環、−O−(C1−C20アルキル)、−O−(C2−C20アルケニル)、−O−(C2−C20アルキニル)またはOR18であり、ここで、R18は、−H、ヒドロキシル保護基であるか、またはOR18が=Oを表す場合には直接結合であり;
R21は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、または−C2−C20アルキニル、−アリール、−複素環または−炭素環であり;
R10は、−アリールまたは−複素環であり;
Zは、−O−、−S−、−NH−または−NR12−であり、ここで、R12は、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R11は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−アリール、−複素環、−(R13O)m−R14または−(R13O)m−CH(R15)2であり;
mは、0〜1000の範囲の整数であり;
R13は、−C2−C20アルキレン、−C2−C20アルケニレンまたは−C2−C20アルキニレンであり;
R14は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
出現する各R15は独立して、−H、−COOH、−(CH2)n−N(R16)2、−(CH2)n−SO3H、−(CH2)n−SO3−C1−C20アルキル、−(CH2)n−SO3−C2−C20アルケニルまたは−(CH2)n−SO3−C2−C20アルキニルであり;
出現する各R16は独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニルまたは−(CH2)n−COOHであり;および
nは、0〜6の範囲の整数であり;ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン(alkynyklene)、アリール、炭素環(carbocyle)および複素環原子団(radical)は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される)を有する薬物ユニットまたはその薬学的に許容され得る塩を含む。
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、式DEまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。いくつかの実施形態では、Dは、DEである。いくつかの実施形態では、Dは、DFである。いくつかの実施形態では、
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、式:を有する。
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、式:
またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有し;DR5結合剤は、抗体の硫黄原子を介してリンカーユニットに結合した抗DR5抗体であり;リンカーユニットは、−Val−Cit−部分を含み;下付き文字pは、1〜8の整数である。
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、式:
またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有し;DR5結合剤は、抗体の硫黄原子を介してリンカーユニットに結合した抗DR5抗体であり;リンカーユニットは、−Val−Cit−部分を含み;下付き文字pは、1〜8の整数である。
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、式:
またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有し;DR5結合剤は、抗体の硫黄原子を介してリンカーユニットに結合した抗DR5抗体であり;リンカーユニットは、−スクシンイミド−カプロン酸部分を含み;下付き文字pは、1〜8の整数である。
いくつかの実施形態では、式(I)を有するリガンド薬物コンジュゲートは、式:
−Aa−Ww−Yy−
(式中、
−A−は、ストレッチャーユニットであり;
下付き文字aは、0または1であり;
各Wは独立して、アミノ酸ユニットであり;
下付き文字wは、0〜12の整数であり;
−Y−は、スペーサーユニットであり;および
下付き文字yは、0、1または2である)を有するLUまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
−Aa−Ww−Yy−
(式中、
−A−は、ストレッチャーユニットであり;
下付き文字aは、0または1であり;
各Wは独立して、アミノ酸ユニットであり;
下付き文字wは、0〜12の整数であり;
−Y−は、スペーサーユニットであり;および
下付き文字yは、0、1または2である)を有するLUまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
いくつかの実施形態では、式−Aa−Ww−Yy−を有するLUを含むリガンド薬物コンジュゲートは、式:
(式中、
R17は、−C1−C10アルキレン−、−C2−C10アルケニレン−、−C2−C10アルキニレン−、−カルボシクロ−、−O−(C1−C8アルキレン)−、O−(C2−C8アルケニレン)−、−O−(C2−C8アルキニレン)−、−アリーレン−、−C1−C10アルキレン−アリーレン−、−C2−C10アルケニレン−アリーレン、−C2−C10アルキニレン−アリーレン、−アリーレン−C1−C10アルキレン−、−アリーレン−C2−C10アルケニレン−、−アリーレン−C2−C10アルキニレン−、−C1−C10アルキレン−(カルボシクロ)−、−C2−C10アルケニレン−(カルボシクロ)−、−C2−C10アルキニレン−(カルボシクロ)、−(カルボシクロ)−C1−C10アルキレン−、−(カルボシクロ)−C2−C10アルケニレン−、−(カルボシクロ)−C2−C10アルキニレン、ヘテロシクロ−、−C1−C10アルキレン−(ヘテロシクロ)−、−C2−C10アルケニレン−(ヘテロシクロ)−、−C2−C10アルキニレン−(ヘテロシクロ)−、−(ヘテロシクロ)−C1−C10アルキレン−、−(ヘテロシクロ)−C2−C10アルケニレン−、−(ヘテロシクロ)−C2−C10アルキニレン−、−(CH2CH2O)r−および−(CH2CH2O)r−CH2−からなる群より選択されるメンバーであり、ここで、rは、1〜10の整数であり、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン(alkynyklene)、アリール、炭素環(carbocyle)、カルボシクロ、ヘテロシクロおよびアリーレン原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される)またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。
R17は、−C1−C10アルキレン−、−C2−C10アルケニレン−、−C2−C10アルキニレン−、−カルボシクロ−、−O−(C1−C8アルキレン)−、O−(C2−C8アルケニレン)−、−O−(C2−C8アルキニレン)−、−アリーレン−、−C1−C10アルキレン−アリーレン−、−C2−C10アルケニレン−アリーレン、−C2−C10アルキニレン−アリーレン、−アリーレン−C1−C10アルキレン−、−アリーレン−C2−C10アルケニレン−、−アリーレン−C2−C10アルキニレン−、−C1−C10アルキレン−(カルボシクロ)−、−C2−C10アルケニレン−(カルボシクロ)−、−C2−C10アルキニレン−(カルボシクロ)、−(カルボシクロ)−C1−C10アルキレン−、−(カルボシクロ)−C2−C10アルケニレン−、−(カルボシクロ)−C2−C10アルキニレン、ヘテロシクロ−、−C1−C10アルキレン−(ヘテロシクロ)−、−C2−C10アルケニレン−(ヘテロシクロ)−、−C2−C10アルキニレン−(ヘテロシクロ)−、−(ヘテロシクロ)−C1−C10アルキレン−、−(ヘテロシクロ)−C2−C10アルケニレン−、−(ヘテロシクロ)−C2−C10アルキニレン−、−(CH2CH2O)r−および−(CH2CH2O)r−CH2−からなる群より選択されるメンバーであり、ここで、rは、1〜10の整数であり、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン(alkynyklene)、アリール、炭素環(carbocyle)、カルボシクロ、ヘテロシクロおよびアリーレン原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される)またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。
いくつかの実施形態では、式−Aa−Ww−Yy−を有するLUを含むリガンド薬物コンジュゲートは、式:
(式中、Sは、リガンドユニット(L)によって提供される硫黄原子である)またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。
いくつかの実施形態では、式−Aa−Ww−Yy−を有するLUを含むリガンド薬物コンジュゲートは、式:
(式中、Sは、リガンドユニット(L)によって提供される硫黄原子である)またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。
いくつかの実施形態では、式−Aa−Ww−Yy−を有するLUを含むリガンド薬物コンジュゲートについて、wは、2〜12の範囲の整数であり、yは、1または2である。いくつかの実施形態では、wは、2であり、yは、1または2である。いくつかの実施形態では、Wwは、−バリン−シトルリン−であり、yは、1または2である。
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、式(I)(式中、Lは、抗DR5抗体である)の式を有する。いくつかの実施形態では、抗DR5抗体は、(a)配列番号11のアミノ残基(amino residues)1〜5からなるCDR1、配列番号12のアミノ酸残基1〜17からなるCDR2、および配列番号13のアミノ酸残基1〜13からなるCDR3を有する重鎖免疫グロブリンと;(b)配列番号14のアミノ残基1〜16からなるCDR1、配列番号15のアミノ酸残基1〜7からなるCDR2、および配列番号16のアミノ酸残基1〜9からなるCDR3を有する軽鎖免疫グロブリンとを含む。
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、DR5を発現する標的細胞に対する特異性を有する式:
L−(LU−D)p (I)
(式中、
Lは、(a)配列番号11のアミノ残基1〜5からなるCDR1、配列番号12のアミノ酸残基1〜17からなるCDR2、および配列番号13のアミノ酸残基1〜13からなるCDR3を有する重鎖免疫グロブリンと;(b)配列番号14のアミノ残基1〜16からなるCDR1、配列番号15のアミノ酸残基1〜7からなるCDR2、および配列番号16のアミノ酸残基1〜9からなるCDR3を有する軽鎖免疫グロブリンとを含む抗DR5抗体であるリガンドユニットであり;および
(LU−D)は、リンカーユニット−薬物ユニット部分であり、ここで、LUは、リンカーユニットであり、Dは、薬物ユニットであり、ここで、該薬物ユニットは、オーリスタチンであり;および
下付き文字pは、1〜20の整数である)またはその薬学的に許容され得る塩を有する。
L−(LU−D)p (I)
(式中、
Lは、(a)配列番号11のアミノ残基1〜5からなるCDR1、配列番号12のアミノ酸残基1〜17からなるCDR2、および配列番号13のアミノ酸残基1〜13からなるCDR3を有する重鎖免疫グロブリンと;(b)配列番号14のアミノ残基1〜16からなるCDR1、配列番号15のアミノ酸残基1〜7からなるCDR2、および配列番号16のアミノ酸残基1〜9からなるCDR3を有する軽鎖免疫グロブリンとを含む抗DR5抗体であるリガンドユニットであり;および
(LU−D)は、リンカーユニット−薬物ユニット部分であり、ここで、LUは、リンカーユニットであり、Dは、薬物ユニットであり、ここで、該薬物ユニットは、オーリスタチンであり;および
下付き文字pは、1〜20の整数である)またはその薬学的に許容され得る塩を有する。
いくつかの実施形態では、オーリスタチンは、オーリスタチンE、AEB、AEVB、AFP、MMAFまたはMMAEである。いくつかの実施形態では、オーリスタチンは、MMAFである。いくつかの実施形態では、オーリスタチンは、MMAEである。
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、式:
(式中、
Lは、(a)配列番号11のアミノ残基1〜5からなるCDR1、配列番号12のアミノ酸残基1〜17からなるCDR2、および配列番号13のアミノ酸残基1〜13からなるCDR3を有する重鎖免疫グロブリンと;(b)配列番号14のアミノ残基1〜16からなるCDR1、配列番号15のアミノ酸残基1〜7からなるCDR2、および配列番号16のアミノ酸残基1〜9からなるCDR3を有する軽鎖免疫グロブリンとを含む抗DR5抗体であるリガンドユニットであり;
Sは、該リガンドユニットの硫黄原子であり;
各Wは独立して、アミノ酸ユニットであり;
下付き文字wは、0〜12の整数であり;
Yは、スペーサーユニットであり;および
下付き文字yは、0、1または2である)またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。
Lは、(a)配列番号11のアミノ残基1〜5からなるCDR1、配列番号12のアミノ酸残基1〜17からなるCDR2、および配列番号13のアミノ酸残基1〜13からなるCDR3を有する重鎖免疫グロブリンと;(b)配列番号14のアミノ残基1〜16からなるCDR1、配列番号15のアミノ酸残基1〜7からなるCDR2、および配列番号16のアミノ酸残基1〜9からなるCDR3を有する軽鎖免疫グロブリンとを含む抗DR5抗体であるリガンドユニットであり;
Sは、該リガンドユニットの硫黄原子であり;
各Wは独立して、アミノ酸ユニットであり;
下付き文字wは、0〜12の整数であり;
Yは、スペーサーユニットであり;および
下付き文字yは、0、1または2である)またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。
いくつかの実施形態では、Wwは、バリン−シトルリンである。いくつかの実施形態では、アミノ酸ユニットは存在しない。いくつかの実施形態では、スペーサーユニットは存在しない。
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、1〜20のp値を有する。いくつかの実施形態では、p値は、2、4、6、8、10、12、14、16、18または20である。いくつかの実施形態では、p値は、1〜8である。いくつかの実施形態では、p値は、2〜8である。いくつかの実施形態では、p値は、2、4、6または8である。
いくつかの実施形態では、抗DR5抗体は、配列番号9のアミノ酸残基1〜122を含む重鎖可変領域と、配列番号10のアミノ酸残基1〜114を含む軽鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態では、抗DR5抗体は、配列番号9のアミノ残基1〜452からなる重鎖と、配列番号10のアミノ酸残基1〜219からなる軽鎖とを含む。いくつかの実施形態では、抗DR5抗体は、配列番号9のアミノ残基1〜451からなる重鎖と、配列番号10のアミノ酸残基1〜219からなる軽鎖とを含む。
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、式:
(式中、mAbは、本明細書に記載される抗DR5抗体であり、Sは、該抗体の硫黄原子であり、pは、1〜8の整数である)またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。いくつかの実施形態では、pは、3〜5である。いくつかの実施形態では、pは、1〜3である。
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、式:
(式中、mAbは、本明細書に記載される抗DR5抗体であり、Sは、該抗体の硫黄原子であり、pは、1〜8の整数である)またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。いくつかの実施形態では、pは、3〜5である。いくつかの実施形態では、pは、1〜3である。
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、式:
(式中、mAbは、本明細書に記載される抗DR5抗体であり、Sは、該抗体の硫黄原子であり、pは、1〜8の整数である)またはその薬学的に許容され得る塩の形態を有する。いくつかの実施形態では、pは、3〜5である。いくつかの実施形態では、pは、1〜3である。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載されるリガンド薬物コンジュゲートの混合物を含む組成物を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、1〜20の平均p値を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、1〜10の平均p値を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、約3.5〜約4.5の平均p値を有する。
別の態様では、本発明は、薬学的に許容され得る賦形剤と混合された本明細書に記載されるリガンド薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、本明細書に記載されるリガンド薬物コンジュゲートを有効成分として含む抗腫瘍剤を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、DR5タンパク質を発現するかまたはDR5陽性癌である癌を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態では、この方法は、有効量の本明細書に記載されるリガンド薬物コンジュゲートを、それを必要とする被験体に投与することを含む。いくつかの実施形態では、DR5陽性またはDR5発現癌は、メラノーマ、膠芽腫、結腸直腸癌、非小細胞肺癌腫、子宮癌、膵臓癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌および血液癌からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、癌は、膵臓癌である。いくつかの実施形態では、癌は、メラノーマである。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌である。いくつかの実施形態では、癌は、卵巣癌である。いくつかの実施形態では、癌は、結腸直腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は、腎臓癌である。いくつかの実施形態では、癌は、膠芽腫である。
発明の詳細な説明
定義および略語
商標名が本明細書で使用される場合、商標名についての言及は、特に文脈上示されない限り、商標製品の製品製剤、ジェネリック薬、および活性薬剤成分を指す。
定義および略語
商標名が本明細書で使用される場合、商標名についての言及は、特に文脈上示されない限り、商標製品の製品製剤、ジェネリック薬、および活性薬剤成分を指す。
用語「DR5結合剤」および「抗DR5結合剤」は、本明細書で使用される場合、DR5に特異的に結合する分子(例えば、タンパク質)を指す。例としては、全長抗DR5抗体、全長抗DR5抗体の断片、または抗体重鎖および/もしくは軽鎖可変領域を含む他の作用物質、ならびにそれらの誘導体が挙げられ得る。
用語「阻害する」または「の阻害」は、本明細書で使用される場合、測定可能な量だけ減少させるか、または完全に妨げることを意味する。
用語「激減させる」は、DR5発現細胞に対するDR5結合剤の効果との関連では、DR5発現細胞の数の減少またはDR5発現細胞の排除を指す。
用語「化合物」は、化学化合物それ自体を指しかつこれを包含し、明示されているか否かにかかわらず、以下のものが除外されることが文脈上明らかではない限り、以下のものを指しかつこれを包含する:化合物の非晶形および結晶形、例えば多形体(この場合、これらの形態は混合物の一部でもよいし、または単離された状態でもよい);化合物の遊離酸または遊離塩基形態(これは、典型的には、本明細書で提供される構造で示される形態である);化合物の異性体(これは、光学異性体および互変異性体を指し、この場合、光学異性体としては、エナンチオマーおよびジアステレオマー、キラル異性体および非キラル異性体が挙げられ、光学異性体としては、単離された光学異性体および光学異性体の混合物、例えばラセミ混合物および非ラセミ混合物が挙げられる);この場合、異性体は単離された形態でもよいし、または1つ以上の他の異性体との混合物でもよい;化合物の同位体、例えばジュウテリウムおよびトリチウム含有化合物、ならびに例えば放射性同位体(例えば、治療上および診断上有効な放射性同位体)含有化合物;化合物のマルチマー形態、例えばダイマー形態、トリマー形態など;化合物の塩、好ましくは薬学的に許容され得る塩、例えば酸付加塩および塩基付加塩、例えば有機対イオンおよび無機対イオンを有する塩、および例えば双極性イオン形態(この場合、化合物が2つ以上の対イオンと会合する場合には2つ以上の対イオンは同じものでもよいし、または異なるものでもよい);ならびに化合物の溶媒和物、例えば半溶媒和物、一溶媒和物、二溶媒和物など、例えば有機溶媒和物および無機溶媒和物、水和物を含む前記無機溶媒和物(この場合、化合物が2つ以上の溶媒分子と会合する場合には2つ以上の溶媒分子は同じものでもよいし、または異なるものでもよい)。いくつかの場合において、本発明の化合物についての本明細書でなされる言及は、上記形態(例えば、塩および/または溶媒和物)のうちの1つ以上についての明確な言及を含むが、この言及は強調のためのものに過ぎず、上で特定した上記形態の他のものを排除すると解釈されるべきではない。
特に注記がない限り、用語「アルキル」は、約1〜約20個の炭素原子(ならびにその中の範囲および特定数の炭素原子のすべての組み合わせおよび下位組み合わせ)、好ましくは約1〜約8個の炭素原子を有する飽和直鎖状または分枝状炭化水素を指す。アルキル基の例は、メチル、エチル、n−プロピル、イソプロピル、n−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、n−ペンチル、2−ペンチル、3−ペンチル、2−メチル−2−ブチル、n−ヘキシル、n−ヘプチル、n−オクチル、n−ノニル、n−デシル、3−メチル−2−ブチル、3−メチル−1−ブチル、2−メチル−1−ブチル、1−ヘキシル、2−ヘキシル、3−ヘキシル、2−メチル−2−ペンチル、3−メチル−2−ペンチル、4−メチル−2−ペンチル、3−メチル−3−ペンチル、2−メチル−3−ペンチル、2,3−ジメチル−2−ブチルおよび3,3−ジメチル−2−ブチルである。本明細書における構造では、当技術分野における従来のプラクティスにしたがって、標識のない結合をメチル基であるとする。
アルキル基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、「置換された」と言及され得る。置換されたアルキル基は、1個以上の基、好ましくは1〜3個の基(およびハロゲンから選択される任意のさらなる置換基)、例えば限定されないが、−ハロゲン、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C(O)R’、−OC(O)R’、−C(O)OR’、−C(O)NH2、−C(O)NHR’、−C(O)N(R’)2、−NHC(O)R’、−SR’、−SO3R’、−S(O)2R’、−S(O)R’、−OH、=O、−N3、−NH2、−NH(R’)、−N(R’)2および−CNで置換されたアルキル基であり、ここで、各R’は独立して、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニルまたは−アリールから選択され、前記−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニルおよび−C2−C8アルキニル基は、1個以上の基、例えば限定されないが、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−ハロゲン、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C(O)R”、−OC(O)R”、−C(O)OR”、−C(O)NH2、−C(O)NHR”、−C(O)N(R”)2、−NHC(O)R”、−SR”、−SO3R”、−S(O)2R”、−S(O)R”、−OH、−N3、−NH2、−NH(R”)、−N(R”)2および−CNで場合によりさらに置換されていてもよく、ここで、各R”は独立して、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニルまたは−アリールから選択される。
特に注記がない限り、用語「アルケニル」および「アルキニル」は、約2〜約20個の炭素原子(ならびにその中の範囲および特定数の炭素原子のすべての組み合わせおよび下位組み合わせ)、好ましくは約2〜約8個の炭素原子を有する直鎖状および分枝状炭素鎖を指す。アルケニル鎖は、鎖の中に少なくとも1個の二重結合を有し、アルキニル鎖は、鎖の中に少なくとも1個の三重結合を有する。アルケニル基の例としては、限定されないが、エチレンまたはビニル、アリル、−1−ブテニル、−2−ブテニル、−イソブチレニル、−1−ペンテニル、−2−ペンテニル、−3−メチル−1−ブテニル、−2−メチル−2−ブテニルおよび−2,3−ジメチル−2−ブテニルが挙げられる。アルキニル基の例としては、限定されないが、アセチレン(acetylenic)、プロパルギル、アセチレニル、プロピニル、−1−ブチニル、−2−ブチニル、−1−ペンチニル、−2−ペンチニルおよび−3−メチル−1ブチニルが挙げられる。
アルキル基と同様に、アルケニルおよびアルキニル基は、置換されていてもよい。「置換された」アルケニルまたはアルキニル基は、1個以上の基、好ましくは1〜3個の基(およびハロゲンから選択される任意のさらなる置換基)、例えば限定されないが、−ハロゲン、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C(O)R’、−OC(O)R’、−C(O)OR’、−C(O)NH2、−C(O)NHR’、−C(O)N(R’)2、−NHC(O)R’、−SR’、−SO3R’、−S(O)2R’、−S(O)R’、−OH、=O、−N3、−NH2、−NH(R’)、−N(R’)2および−CNで置換されたものであり、ここで、各R’は独立して、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル(alkyenl)、−C2−C8アルキニルまたはアリールから選択され、前記−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニルおよび−C2−C8アルキニル基は、1個以上の置換基、例えば限定されないが、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−ハロゲン、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)(−O−(C2C8 alkynyl))、−アリール、−C(O)R”、−OC(O)R”、−C(O)OR”、−C(O)NH2、−C(O)NHR”、−C(O)N(R”)2、−NHC(O)R”、−SR”、−SO3R”、−S(O)2R”、−S(O)R”、−OH、−N3、−NH2、−NH(R”)、−N(R”)2および−CNで場合によりさらに置換されていてもよく、ここで、各R”は独立して、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニルまたは−アリールから選択される。
特に注記がない限り、用語「アルキレン」は、約1〜約20個の炭素原子(ならびにその中の範囲および特定数の炭素原子のすべての組み合わせおよび下位組み合わせ)、好ましくは約1〜約8個の炭素原子を有し、親アルカンの同じまたは2個の異なる炭素原子から2個の水素原子を除去することによって生じる2個の一価原子団中心を有する飽和分枝状または直鎖状炭化水素原子団を指す。典型的なアルキレンとしては、限定されないが、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン、デカレンおよび1,4−シクロヘキシレンなどが挙げられる。アルキレン基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、1個以上の基、好ましくは1〜3個の基(およびハロゲンから選択される任意のさらなる基)、例えば限定されないが、−ハロゲン、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C(O)R’、−OC(O)R’、−C(O)OR’、−C(O)NH2、−C(O)NHR’、−C(O)N(R’)2、−NHC(O)R’、−SR’、−SO3R’、−S(O)2R’、−S(O)R’、−OH、=O、−N3、−NH2、−NH(R’)、−N(R’)2および−CNで場合により置換されていてもよく、ここで、各R’は独立して、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニルまたは−アリールから選択され、前記−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニルおよび−C2−C8アルキニル基は、1個以上の置換基、例えば限定されないが、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−ハロゲン、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C(O)R”、−OC(O)R”、−C(O)OR”、−C(O)NH2、−C(O)NHR”、−C(O)N(R”)2、−NHC(O)R”、−SR”、−SO3R”、−S(O)2R”、−S(O)R”、−OH、−N3、―NH2、−NH(R”)、−N(R”)2および−CNで場合によりさらに置換されていてもよく、ここで、各R”は独立して、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニルまたは−アリールから選択される。
特に注記がない限り、用語「アルケニレン」は、少なくとも1個の炭素−炭素二重結合を含有する場合により置換されたアルキレン基を指す。例示的なアルケニレン基としては、例えば、エテニレン(−CH=CH−)およびプロペニレン(−CH=CHCH2−)が挙げられる。
特に注記がない限り、用語「アルキニレン」は、少なくとも1個の炭素−炭素三重結合を含有する場合により置換されたアルキレン基を指す。例示的なアルキニレン基としては、例えば、アセチレン(−C≡C−)、プロパルギル(−CH2C≡C−)および4−ペンチニル(−CH2CH2CH2C≡CH−)が挙げられる。
特に注記がない限り、用語「アリール」は、親芳香族環系の単一の炭素原子から1個の炭素原子を除去することによって生じる6〜20個の炭素原子(ならびにその中の範囲および特定数の炭素原子のすべての組み合わせおよび下位組み合わせ)の一価芳香族炭化水素原子団を指す。いくつかのアリール基は、例示的な構造中で「Ar」として表される。典型的なアリール基としては、限定されないが、ベンゼン、置換されたベンゼン、フェニル、ナフタレン、アントラセン、ビフェニルなどから生じる原子団が挙げられる。
アリール基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、1個以上、好ましくは1〜5個またはさらに1〜2個の基、例えば限定されないが、−ハロゲン、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C(O)R’、−OC(O)R’、−C(O)OR’、−C(O)NH2、−C(O)NHR’、−C(O)N(R’)2、−NHC(O)R’、−SR’、−SO3R’、−S(O)2R’、−S(O)R’、−OH、−NO2、−N3、−NH2、−NH(R’)、−N(R’)2および−CNで場合により置換されていてもよく、ここで、各R’は独立して、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニルまたはアリールから選択され、前記−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)および−アリール基は、1個以上の置換基、例えば限定されないが、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−ハロゲン、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C(O)R”、−OC(O)R”、−C(O)OR”、−C(O)NH2、−C(O)NHR”、−C(O)N(R”)2、−NHC(O)R”、−SR”、−SO3R”、−S(O)2R”、−S(O)R”、−OH、−N3、−NH2、−NH(R”)、−N(R”)2および−CNで場合によりさらに置換されていてもよく、ここで、各R”は独立して、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニルまたは−アリールから選択される。
特に注記がない限り、用語「アリーレン」は、二価の(すなわち、親芳香族環系の同じまたは2個の異なる炭素原子から2個の水素原子を除去することによって生じる)場合により置換されたアリール基であって、例示的なアリール基としてフェニルを用いて以下の構造:
(式中、アリール基(例えば、フェニル基)は置換されていなくてもよいし、または置換されていてもよい)において示されるように、オルト、メタまたはパラの配置をとり得る場合により置換されたアリール基を指す。いくつかの実施形態では、アリーレンは、限定されないが、最大4個の基、例えば限定されないが、−C1−C8アルキル、−O−(C1−C8アルキル)、−アリール、−C(O)R’、−OC(O)R’、−C(O)OR’、−C(O)NH2、−C(O)NHR’、−C(O)N(R’)2、−NHC(O)R’、−S(O)2R’、−S(O)R’、−OH、−ハロゲン、−N3、−NH2、−NH(R’)、−N(R’)2および−CNで置換された置換アリーレンであり;ここで、各R’は独立して、H、−C1−C8アルキルおよびアリールから選択される。
特に注記がない限り、用語「複素環」は、3〜14個の環原子(環員とも称される)を有する単環式、二環式または多環式環系であって、少なくとも1個の環の中の少なくとも1個の環原子が、N、O、PまたはSから選択されるヘテロ原子(ならびにその中の範囲および特定数の炭素原子およびヘテロ原子のすべての組み合わせおよび下位組み合わせ)である単環式、二環式または多環式環系を指す。複素環は、N、O、PまたはSから独立して選択される1〜4個の環ヘテロ原子を有し得る。複素環の中の1個以上のN、CまたはS原子は、酸化され得る。単環式複素環は、好ましくは、3〜7個の環員(例えば、2〜6個の炭素原子およびN、O、PまたはSから独立して選択される1〜3個のヘテロ原子)を有し、二環式複素環は、好ましくは、5〜10個の環員(例えば、4〜9個の炭素原子およびN、O、PまたはSから独立して選択される1〜3個のヘテロ原子)を有する。ヘテロ原子を含む環は芳香族でもよいし、または非芳香族でもよい。特に注記がない限り、複素環は、安定な構造をもたらす任意のヘテロ原子または炭素原子においてそのペンダント基に結合している。
複素環は、Paquette,“Principles of Modern Heterocyclic Chemistry”(W.A.Benjamin,New York,1968)、特に第1章、第3章、第4章、第6章、第7章および第9章;“The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of Monographs”(John Wiley&Sons,New York,1950〜最新版)、特に、第13巻、第14巻、第16巻、第19巻および第28巻;ならびにJ.Am.Chem.Soc.82:5566(1960)に記載されている。
特に注記がない限り、用語「ヘテロシクロ」は、二価の(すなわち、親複素環式環系の同じまたは2個の異なる炭素原子から2個の水素原子を除去することによって生じる)上で定義した場合により置換された複素環基を指す。
「複素環」基の例としては、例えば限定されないが、ピリジル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリジル(ピペリジル)、チアゾリル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾイミダゾリル、ピペリジニル、4−ピペリドニル、ピロリジニル、2−ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ビス−テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル、トリアジニル、6H−1,2,5−チアジアジニル、2H,6H−1,5,2−ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル、2H−ピロリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、3H−インドリル、1H−インダゾリル、プリニル、4H−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、4H−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、オキシインドリル、ベンゾオキサゾリニルおよびイサチノイルが挙げられる。好ましい「複素環」基としては、限定されないが、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリルおよびテトラゾリルが挙げられる。
複素環基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、1個以上の基、好ましくは1〜2個の基、例えば限定されないが、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−ハロゲン、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C(O)R’、−OC(O)R’、−C(O)OR’、−C(O)NH2、−C(O)NHR’、−C(O)N(R’)2、−NHC(O)R’、−SR’、−SO3R’、−S(O)2R’、−S(O)R’、−OH、−N3、−NH2、−NH(R’)、−N(R’)2および−CNで場合により置換されていてもよく、ここで、各R’は独立して、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニルまたは−アリールから選択され、前記−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニルおよび−アリール基は、1個以上の置換基、例えば限定されないが、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−ハロゲン、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C(O)R”、−OC(O)R”、−C(O)OR”、−C(O)NH2、−C(O)NHR”、−C(O)N(R”)2、−NHC(O)R”、−SR”、−SO3R”、−S(O)2R”、−S(O)R”、−OH、−N3、−NH2、−NH(R”)、−N(R”)2および−CNで場合によりさらに置換されていてもよく、ここで、各R”は独立して、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニルまたはアリールから選択される。
例として、限定されないが、炭素結合複素環は、以下の位置で結合され得る:ピリジンの2位、3位、4位、5位もしくは6位;ピリダジンの3位、4位、5位もしくは6位;ピリミジンの2位、4位、5位もしくは6位;ピラジンの2位、3位、5位もしくは6位;フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロールもしくはテトラヒドロピロールの2位、3位、4位もしくは5位;オキサゾール、イミダゾールもしくはチアゾールの2位、4位もしくは5位;イソオキサゾール、ピラゾールもしくはイソチアゾールの3位、4位もしくは5位;アジリジンの2位もしくは3位;アゼチジンの2位、3位もしくは4位;キノリンの2位、3位、4位、5位、6位、7位もしくは8位;またはイソキノリンの1位、3位、4位、5位、6位、7位もしくは8位。さらにより典型的には、炭素結合複素環としては、2−ピリジル、3−ピリジル、4−ピリジル、5−ピリジル、6−ピリジル、3−ピリダジニル、4−ピリダジニル、5−ピリダジニル、6−ピリダジニル、2−ピリミジニル、4−ピリミジニル、5−ピリミジニル、6−ピリミジニル、2−ピラジニル、3−ピラジニル、5−ピラジニル、6−ピラジニル、2−チアゾリル、4−チアゾリルまたは5−チアゾリルが挙げられる。
例として、限定されないが、窒素結合複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、2−ピロリン、3−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、2−イミダゾリン、3−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、2−ピラゾリン、3−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリンまたは1H−インダゾールの1位;イソインドールまたはイソインドリンの2位;モルホリンの4位;およびカルバゾールまたはβ−カルボリンの9位で結合され得る。さらにより典型的には、窒素結合複素環としては、1−アジリジル、1−アゼテジル、1−ピロリル、1−イミダゾリル、1−ピラゾリルおよび1−ピペリジニルが挙げられる。
特に注記がない限り、用語「炭素環」は、3〜14個の環原子(ならびにその中の範囲および特定数の炭素原子のすべての組み合わせおよび下位組み合わせ)を有し、環原子のすべてが炭素原子である飽和または不飽和非芳香族単環式、二環式または多環式環系を指す。単環式炭素環は、好ましくは、3〜6個の環原子、さらにより好ましくは5個または6個の環原子を有する。二環式炭素環は、好ましくは、例えば、ビシクロ[4,5]、[5,5]、[5,6]もしくは[6,6]系として配置される7〜12個の環原子、またはビシクロ[5,6]もしくは[6,6]系として配置される9個もしくは10個の環原子を有する。用語「炭素環」は、例えば、アリール環に縮合された単環式炭素環(例えば、ベンゼン環に縮合された単環式炭素環)を含む。炭素環は、好ましくは、3〜8個の炭素環原子を有する。
炭素環基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、例えば、1個以上の基、好ましくは1個または2個の基(およびハロゲンから選択される任意のさらなる置換基)、例えば限定されないが、−ハロゲン、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C(O)R’、−OC(O)R’、−C(O)OR’、−C(O)NH2、−C(O)NHR’、−C(O)N(R’)2、−NHC(O)R’、−SR’、−SO3R’、−S(O)2R’、−S(O)R’、−OH、=O、−N3、−NH2、−NH(R’)、−N(R’)2および−CNで場合により置換されていてもよく、ここで、各R’は独立して、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニルまたは−アリールから選択され、前記−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)および−アリール基は、1個以上の置換基、例えば限定されないが、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−ハロゲン、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−アリール、−C(O)R”、−OC(O)R”、−C(O)OR”、−C(O)NH2、−C(O)NHR”、−C(O)N(R”)2、−NHC(O)R”、−SR”、−SO3R”、−S(O)2R”、−S(O)R”、−OH、−N3、−NH2、−NH(R”)、−N(R”)2および−CNで場合によりさらに置換されていてもよく、ここで、各R”は独立して、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニルまたは−アリールから選択される。
単環式炭素環置換基の例としては、−シクロプロピル、−シクロブチル、−シクロペンチル、−1−シクロペンタ−1−エニル、−1−シクロペンタ−2−エニル、−1−シクロペンタ−3−エニル、シクロヘキシル、−1−シクロヘキサ−1−エニル、−1−シクロヘキサ−2−エニル、−1−シクロヘキサ−3−エニル、−シクロヘプチル、−シクロオクチル、−1,3−シクロヘキサジエニル、−1,4−シクロヘキサジエニル、−1,3−シクロヘプタジエニル、−1,3,5−シクロヘプタトリエニルおよび−シクロオクタジエニルが挙げられる。
「カルボシクロ」は、単独でまたは別の基の一部として使用されるかにかかわらず、二価の(すなわち、親炭素環式環系の同じまたは2個の異なる炭素原子から2個の水素原子を除去することによって生じる)上で定義した場合により置換された炭素環基を指す。
特に文脈上示されない限り、ハイフン(−)は、ペンダント分子への結合点を示す。したがって、用語「−(C1−C8アルキレン)アリール」または「−C1−C8アルキレン(アリール)」は、本明細書で定義されるC1−C8アルキレン原子団であって、アルキレン原子団が、アルキレン原子団の炭素原子のいずれかにおいてペンダント分子に結合しており、アルキレン原子団の炭素原子に結合した水素原子の1個が、本明細書で定義されるアリール原子団で置き換えられたものを指す。典型的な「−(C1−C8アルキレン)アリール」、「−(C2−C8アルケニレン)アリール」および「−(C2−C8アルキニレン)アリール」基としては、限定されないが、ベンジル、2−フェニルエタン−1−イル、2−フェニルエテン−1−イル、ナフチルメチル、2−ナフチルエタン−1−イル、2−ナフチルエテン−1−イル、ナフトベンジル、2−ナフトフェニルエタン−1−イルなどが挙げられる。
特定の基が「置換されている」場合、その基は、置換基のリストから独立して選択される1個以上の置換基、好ましくは1〜5個の置換基、より好ましくは1〜3個の置換基、最も好ましくは1〜2個の置換基を有し得る。しかしながら、基は、一般に、ハロゲンから選択される任意の数の置換基を有し得る。置換される基は、そのように示される。
ある分子の特定の位置における任意の置換基または変数の定義は、その分子における他の場所におけるその定義とは無関係であることが意図される。当業者であれば、化学的に安定であり、当技術分野で公知の技術ならびに本明細書に記載される方法によって容易に合成され得る化合物を提供するために、本発明の化合物上の置換基および置換パターンを選択し得ると理解される。
保護基は、本明細書で使用される場合、多官能性化合物における1つの反応性部位を、一時的にまたは永久に、選択的に遮断する基を指す。本発明に使用するのに適切なヒドロキシ保護基は薬学的に許容され得るものであり、化合物が活性であるためには被験体への投与後に親化合物から切断される必要があるものでもよいし、またはその必要がないものでもよい。切断は、体内の通常の代謝プロセスを介するものである。ヒドロキシ保護基は、当技術分野で周知であり(PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS by T.W.Greene and P.G.M.Wuts(John Wiley&sons,3rdEdition)(これは、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる)を参照のこと)、例えば、エーテル(例えば、アルキルエーテルおよびシリルエーテル(例えば、ジアルキルシリルエーテル、トリアルキルシリルエーテル、ジアルキルアルコキシシリルエーテル))、エステル、カーボネート、カルバメート、スルホネートおよびホスフェート保護基が挙げられる。ヒドロキシ保護基の例としては、限定されないが、メチルエーテル;メトキシメチルエーテル、メチルチオメチルエーテル、(フェニルジメチルシリル)メトキシメチルエーテル、ベンジルオキシメチルエーテル、p−メトキシベンジルオキシメチルエーテル、p−ニトロベンジルオキシメチルエーテル、o−ニトロベンジルオキシメチルエーテル、(4−メトキシフェノキシ)メチルエーテル、グアヤコールメチルエーテル、t−ブトキシメチルエーテル、4−ペンテニルオキシメチルエーテル、シロキシメチルエーテル、2−メトキシエトキシメチルエーテル、2,2,2−トリクロロエトキシメチルエーテル、ビス(2−クロロエトキシ)メチルエーテル、2−(トリメチルシリル)エトキシメチルエーテル、メトキシ(menthoxy)メチルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、1−メトキシシクロヘキシルエーテル、4−メトキシテトラヒドロチオピラニルエーテル、4−メトキシテトラヒドロチオピラニルエーテルS,S−ジオキシド、1−[(2−クロロ(choro)−4−メチル)フェニル]−4−メトキシピペリジン−4−イルエーテル、1−(2−フルオロフェニル(fluorophneyl))−4−メトキシピペリジン−4−イルエーテル、1,4−ジオキサン−2−イルエーテル、テトラヒドロフラニルエーテル、テトラヒドロチオフラニルエーテル;置換されたエチルエーテル、例えば、1−エトキシエチルエーテル、1−(2−クロロエトキシ)エチルエーテル、1−[2−(トリメチルシリル)エトキシ]エチルエーテル、1−メチル−1−メトキシエチルエーテル、1−メチル−1−ベンジルオキシエチルエーテル、1−メチル−1−ベンジルオキシ−2−フルオロエチルエーテル、1−メチル−1フェノキシエチルエーテル、2−トリメチルシリルエーテル、t−ブチルエーテル、アリルエーテル、プロパルギルエーテル、p−クロロフェニルエーテル、p−メトキシフェニルエーテル、ベンジルエーテル、p−メトキシベンジルエーテル、3,4−ジメトキシベンジルエーテル、トリメチルシリルエーテル、トリエチルシリルエーテル、トリプロピルシリルエーテル、ジメチルイソプロピルシリルエーテル、ジエチルイソプロピルシリルエーテル、ジメチルヘキシルシリルエーテル、t−ブチルジメチルシリルエーテル、ジフェニルメチルシリルエーテル、ベンゾイルホルメートエステル、アセテートエステル、クロロアセテートエステル、ジクロロアセテートエステル、トリクロロアセテートエステル、トリフルオロアセテートエステル、メトキシアセテートエステル、トリフェニルメトキシアセテートエステル、フェニルアセテートエステル、ベンゾエートエステル、アルキルメチルカーボネート、アルキル9−フルオレニルメチルカーボネート、アルキルエチルカーボネート、アルキル2,2,2,−トリクロロエチルカーボネート、1,1,−ジメチル−2,2,2−トリクロロエチルカーボネート、アルキルスルホネート、メタンスルホネート、ベンジルスルホネート、トシレート、メチレンアセタール、エチリデンアセタールおよびt−ブチルメチリデンケタールが挙げられる。好ましい保護基は、式−R、−Si(R)(R)(R)、−C(O)R、−C(O)OR、−C(O)NH(R)、−S(O)2R、−S(O)2OH、P(O)(OH)2および−P(O)(OH)OR(式中、Rは、C1−C20アルキル、C2−C20アルケニル、C2−C20アルキニル、−C1−C20アルキレン(炭素環)、−C2−C20アルケニレン(炭素環)、−C2−C20アルキニレン(炭素環)、−C6−C10アリール、−C1−C20アルキレン(アリール)、−C2−C20アルケニレン(アリール)、−C2−C20アルキニレン(アリール)、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)であり、ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環および複素環原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される)によって表される。
略語「AFP」は、ジメチルバリン−バリン−ドライソロイイン(dolaisoleuine)−ドラプロイン(dolaproine)−フェニルアラニン−p−フェニレンジアミンを指す(以下の式XVIIIを参照のこと)。
略語「MMAE」は、モノメチルオーリスタチンEを指す(以下の式XIIIを参照のこと)。
略語「AEB」は、オーリスタチンEと、パラアセチル安息香酸とを反応させることによって生成されるエステルを指す(以下の式XXIIを参照のこと)。
略語「AEVB」は、オーリスタチンEと、ベンゾイル吉草酸とを反応させることによって生成されるエステルを指す(以下の式XXIIIを参照のこと)。
略語「MMAF」は、ドバリン−バリン−ドライソロイイン−ドラプロイン−フェニルアラニンを指す(以下の式XXIを参照のこと)。
用語「薬学的に許容され得る」は、動物、より具体的にはヒトにおける使用について、連邦政府もしくは州政府の規制当局によって承認されていること、または米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に列挙されていることを意味する。用語「薬学的に適合性の成分」は、薬学的に許容され得る希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルであって、抗体または抗体誘導体と共に投与されるものを指す。
用語「動物」は、ヒト、非ヒト哺乳動物(例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、シカなど)および非哺乳動物(例えば、トリなど)を指す。
全般
本明細書に記載される方法は、リガンドユニットが、DR5に特異的に結合する抗DR5結合剤であるリガンド薬物コンジュゲートの使用を包含する。DR5結合剤は、例えば、抗DR5抗体、抗DR5抗原結合断片、またはヒト化抗体重鎖および/もしくは軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む他のDR5結合剤、またはそれらの誘導体であり得る。
本明細書に記載される方法は、リガンドユニットが、DR5に特異的に結合する抗DR5結合剤であるリガンド薬物コンジュゲートの使用を包含する。DR5結合剤は、例えば、抗DR5抗体、抗DR5抗原結合断片、またはヒト化抗体重鎖および/もしくは軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む他のDR5結合剤、またはそれらの誘導体であり得る。
リガンド薬物コンジュゲート
本発明は、とりわけ、薬物の標的化送達のためのリガンド薬物コンジュゲートを提供する。本発明者らは、リガンド薬物コンジュゲートが、DR5を発現する細胞に対する強力な細胞傷害活性および/または細胞増殖抑制活性を有することを発見した。リガンド薬物コンジュゲートは、少なくとも1個の薬物ユニットに共有結合したリガンドユニットを含む。薬物ユニットは、直接的に、またはリンカーユニット(−LU−)を介して共有結合され得る。
本発明は、とりわけ、薬物の標的化送達のためのリガンド薬物コンジュゲートを提供する。本発明者らは、リガンド薬物コンジュゲートが、DR5を発現する細胞に対する強力な細胞傷害活性および/または細胞増殖抑制活性を有することを発見した。リガンド薬物コンジュゲートは、少なくとも1個の薬物ユニットに共有結合したリガンドユニットを含む。薬物ユニットは、直接的に、またはリンカーユニット(−LU−)を介して共有結合され得る。
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、以下の式:
L−(LU−D)p (I)
(式中、
Lは、リガンドユニット(すなわち、本発明のDR5結合剤)であり、および
(LU−D)は、リンカーユニット−薬物ユニット部分であり、ここで:
LU−は、リンカーユニットであり、および
−Dは、標的細胞に対する細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物ユニットであり;および
pは、1〜20である)またはその薬学的に許容され得る塩を有する。
L−(LU−D)p (I)
(式中、
Lは、リガンドユニット(すなわち、本発明のDR5結合剤)であり、および
(LU−D)は、リンカーユニット−薬物ユニット部分であり、ここで:
LU−は、リンカーユニットであり、および
−Dは、標的細胞に対する細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物ユニットであり;および
pは、1〜20である)またはその薬学的に許容され得る塩を有する。
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、1〜20のp値(リガンド1個当たりの負荷される薬物ユニット数)を有する。いくつかの実施形態では、pは、1〜10、1〜9、1〜8、1〜7、1〜6、1〜5、1〜4、1〜3または1〜2の範囲である。いくつかの実施形態では、pは、2〜10、2〜9、2〜8、2〜7、2〜6、2〜5、2〜4または2〜3の範囲である。いくつかの実施形態では、p値は、2、4、6または8である。他の実施形態では、pは、1、2、3、4、5または6である。
いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、以下の式:
L−(Aa−Ww−Yy−D)p (II)
(式中、
Lは、リガンドユニット(すなわち、DR5結合剤)であり;および
−Aa−Ww−Yy−は、リンカーユニット(LU)であり、ここで:
−A−は、ストレッチャーユニットであり、
aは、0または1であり、
各−W−は独立して、アミノ酸ユニットであり、
wは、0〜12の範囲の整数であり、
−Y−は、自壊性スペーサーユニットであり、
yは、0、1または2であり;
−Dは、標的細胞に対する細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物ユニットであり;および
pは、1〜20である)またはその薬学的に許容され得る塩を有する。
L−(Aa−Ww−Yy−D)p (II)
(式中、
Lは、リガンドユニット(すなわち、DR5結合剤)であり;および
−Aa−Ww−Yy−は、リンカーユニット(LU)であり、ここで:
−A−は、ストレッチャーユニットであり、
aは、0または1であり、
各−W−は独立して、アミノ酸ユニットであり、
wは、0〜12の範囲の整数であり、
−Y−は、自壊性スペーサーユニットであり、
yは、0、1または2であり;
−Dは、標的細胞に対する細胞増殖抑制活性または細胞傷害活性を有する薬物ユニットであり;および
pは、1〜20である)またはその薬学的に許容され得る塩を有する。
いくつかの実施形態では、aは、0または1であり、wは、0または1であり、yは、0、1または2である。いくつかの実施形態では、aは、0または1であり、wは、0または1であり、yは、0または1である。いくつかの実施形態では、pは、1〜10、1〜9、1〜8、1〜7、1〜6、1〜5、1〜4、1〜3または1〜2の範囲である。いくつかの実施形態では、pは、2〜10、2〜9、2〜8、2〜7、2〜6、2〜5、2〜4または2〜3の範囲である。他の実施形態では、pは、1、2、3、4、5または6である。いくつかの実施形態では、wが0ではない場合、yは、1または2である。いくつかの実施形態では、wが1〜12である場合、yは、1または2である。いくつかの実施形態では、wは、2〜12であり、yは、1または2である。いくつかの実施形態では、aは、1であり、wおよびyは、0である。
複数のリガンド薬物コンジュゲートを含む組成物において、pは、リガンド1個当たりの薬物分子の平均数(平均薬物負荷とも称される)である。平均薬物負荷は、薬物(D)1〜約20個/リガンドの範囲であり得る。いくつかの実施形態では、平均p値(リガンド1個当たりの平均薬物負荷)は、約2〜約8である。いくつかの実施形態では、平均p値(リガンド1個当たりの平均薬物負荷)は、約3.5〜約4.5である。いくつかの実施形態では、平均p値(リガンド1個当たりの平均薬物負荷)は、約1、約2、約3、約4、約5または約6である。コンジュゲーション反応の準備におけるリガンド1個当たりの薬物の平均数は、質量分析、ELISAアッセイおよびHPLCなどの従来の手段によって特性決定され得る。pに関するリガンド薬物コンジュゲートの量的分布も決定され得る。いくつかの場合において、pが、他の薬物負荷を有するリガンド薬物コンジュゲートからの特定値である均質なリガンド薬物コンジュゲートの分離、精製および特性決定は、逆相HPLCまたは電気泳動などの手段によって達成され得る。
リガンド薬物コンジュゲートの作製は、当業者に公知の任意の技術によって達成され得る。簡潔に言えば、リガンド薬物コンジュゲートは、リガンドユニットとしてのDR5結合剤、薬物、および場合により薬物と結合剤とを連結するリンカーを含む。多くの様々な反応が、結合剤への薬物および/またはリンカーの共有結合に利用可能である。これは、結合剤(例えば、抗体分子)のアミノ酸残基(リジンのアミン基、グルタミン酸およびアスパラギン酸の遊離カルボン酸基、システインのスルフヒドリル基、ならびに芳香族アミノ酸の様々な部分を含む)の反応によって達成されることが多い。最も一般に使用される非特異的な共有結合法のうちの1つは、化合物のカルボキシ(またはアミノ)基を、抗体のアミノ(またはカルボキシ)基に連結するためのカルボジイミド反応である。さらに、ジアルデヒドまたはイミドエステルなどの二官能性薬剤は、化合物のアミノ基を、抗体分子のアミノ基に連結するのに使用されている。シッフ塩基反応は、結合剤への薬物の結合にも利用可能である。この方法は、グリコールまたはヒドロキシル基を含有する薬物を過ヨウ素酸酸化してアルデヒドを形成し、次いで、これを結合剤と反応させることを含む。結合は、結合剤のアミノ基によるシッフ塩基の形成を介して起こる。イソチオシアネートはまた、結合剤に薬物を共有結合させるためのカップリング剤として使用され得る。他の技術は当業者に公知であり、本発明の範囲内である。
特定の実施形態では、リンカー前駆体である中間体を適切な条件下で薬物と反応させる。特定の実施形態では、反応性基は、薬物および/または中間体に対して使用される。続いて、薬物と中間体との間の反応の生成物または誘導体化薬物を適切な条件下でDR5結合剤と反応させる。
リガンド薬物コンジュゲートの特定のユニットはそれぞれ、本明細書でより詳細に記載される。例示的なリンカーユニット、ストレッチャーユニット、アミノ酸ユニット、自壊性スペーサーユニットおよび薬物ユニットの合成および構造はまた、米国特許出願公開第2003−0083263号、米国特許出願公開第2005−0238649号、米国特許出願公開第2005−0009751号、米国特許出願公開第2006−0074008号および米国特許出願公開第2009−0010945号(これらはそれぞれ、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている。
リンカーユニット
典型的には、リガンド薬物コンジュゲートは、薬物ユニットとリガンドユニットとの間にリンカー領域を含む。いくつかの実施形態では、リンカーが切断されると、細胞内環境においてリガンドから薬物ユニットを放出するように、リンカーは細胞内条件下で切断可能である。さらに他の実施形態では、リンカーユニットは切断可能ではなく、薬物は、例えば、抗体分解によって放出される。
典型的には、リガンド薬物コンジュゲートは、薬物ユニットとリガンドユニットとの間にリンカー領域を含む。いくつかの実施形態では、リンカーが切断されると、細胞内環境においてリガンドから薬物ユニットを放出するように、リンカーは細胞内条件下で切断可能である。さらに他の実施形態では、リンカーユニットは切断可能ではなく、薬物は、例えば、抗体分解によって放出される。
いくつかの実施形態では、リンカーは、細胞内環境中(例えば、リソソームまたはエンドソームまたはカベオラ(caveolea)内)に存在する切断剤によって切断可能である。リンカーは、例えば、細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素、例えば限定されないが、リソソームプロテアーゼまたはエンドソームプロテアーゼによって切断されるペプチジルリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、ペプチジルリンカーは、少なくとも2アミノ酸長または少なくとも3アミノ酸長である。切断剤としては、カテプシンBおよびカテプシンDならびにプラスミンが挙げられ得、これらはすべて、ジペプチド薬物誘導体を加水分解して標的細胞内で活性薬物を放出させることが公知である(例えば、Dubowchik and Walker,1999,Pharm.Therapeutics 83:67−123を参照のこと)。DR5発現細胞中に存在する酵素によって切断可能なペプチジルリンカーが、最も典型的である。例えば、チオール依存性プロテアーゼであるカテプシン−B(これは、癌組織において高発現している)によって切断可能なペプチジルリンカーが使用され得る(例えば、Phe−LeuまたはGly−Phe−Leu−Gly(配列番号21)リンカー)。このようなリンカーの他の例は、例えば、米国特許第6,214,345号(これは、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている。具体的な実施形態では、細胞内プロテアーゼによって切断可能なペプチジルリンカーは、Val−CitリンカーまたはPhe−Lysリンカーである(例えば、Val−Citリンカーによるドキソルビシン合成が記載されている米国特許第6,214,345号を参照のこと)。治療剤の細胞内タンパク質分解性放出を使用することの1つの利点は、薬剤がコンジュゲートされると通常は弱力化され、コンジュゲートの血清安定性が通常は高いことである。
他の実施形態では、切断可能なリンカーは、pH感受性(すなわち、特定のpH値で加水分解感受性)である。典型的には、pH感受性リンカーは、酸性条件下で加水分解可能である。例えば、リソソームにおいて加水分解可能な酸不安定性リンカー(例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、cis−アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど)が使用され得る(例えば、米国特許第5,122,368号;米国特許第5,824,805号;米国特許第5,622,929号;Dubowchik and Walker,1999,Pharm.Therapeutics 83:67−123;Nevilleら、1989,Biol.Chem.264:14653−14661を参照のこと)。このようなリンカーは、中性pH条件(例えば、血液中のpH条件)下で比較的安定であるが、pH5.5または5.0未満(おおよそ、リソソームのpH)では不安定である。特定の実施形態では、加水分解可能なリンカーは、チオエーテルリンカー(例えば、アシルヒドラゾン結合を介して治療剤に結合したチオエーテル)である(例えば、米国特許第5,622,929号を参照のこと)。
さらに他の実施形態では、リンカーは、還元条件下で切断可能である(例えば、ジスルフィドリンカー)。様々なジスルフィドリンカーが当技術分野で公知であり、例えば、SATA(N−スクシンイミジル−S−アセチルチオアセテート)、SPDP(N−スクシンイミジル−3−(2−ピリジルジチオ)プロピオネート)、SPDB(N−スクシンイミジル−3−(2−ピリジルジチオ)ブチレート)およびSMPT(N−スクシンイミジル−オキシカルボニル−α−メチル−α−(2−ピリジル−ジチオ)トルエン)、SPDBおよびSMPTを使用して形成され得るものが挙げられる(例えば、Thorpeら、1987,Cancer Res.47:5924−5931;Wawrzynczakら、In Immunoconjugates:Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer(C.W.Vogel ed.,Oxford U.Press,1987を参照のこと。米国特許第4,880,935号も参照のこと)。
さらに他の具体的な実施形態では、リンカーは、マロネートリンカー(Johnsonら、1995,Anticancer Res.15:1387−93)、マレイミドベンゾイルリンカー(Lauら、1995,Bioorg−Med−Chem.3(10):1299−1304)、マレイミドカプロイル(「mc」)リンカー(Doroninaら、2006,Bioconjug Chem.17:114−24)または3’−N−アミドアナログ(Lauら、1995,Bioorg−Med−Chem.3(10):1305−12)である。
さらに他の実施形態では、リンカーユニットは切断可能ではなく、薬物は、抗体分解によって放出される(例えば、米国特許出願公開第20050238649号(これは、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる)を参照のこと)。
典型的には、リンカーは、細胞外環境に対して実質的に感受性ではない。本明細書で使用される場合、リンカーとの関連で「細胞外環境に対して実質的に感受性ではない」は、リガンド薬物コンジュゲートが細胞外環境に(例えば、血漿中に)存在する場合に、リガンド薬物コンジュゲートの試料におけるリンカーの約20%以下、典型的には約15%以下、より典型的には約10%以下、さらにより典型的には約5%以下、約3%以下または約1%以下が切断されることを意味する。リンカーが細胞外環境に対して実質的に感受性ではないかは、例えば、リガンド薬物コンジュゲートを血漿と共に所定の期間(例えば、2時間、4時間、8時間、16時間または24時間)インキュベートし、次いで、血漿中に存在する遊離薬物の量を定量することによって決定され得る。
他の非相互排他的な実施形態では、リンカーは、細胞インターナリゼーションを促進する。特定の実施形態では、リンカーは、治療剤にコンジュゲートされると(すなわち、本明細書に記載されるリガンド薬物コンジュゲートのリンカー−治療剤部分の状況で)細胞インターナリゼーションを促進する。さらに他の実施形態では、リンカーは、オーリスタチン化合物および抗DR5抗体の両方にコンジュゲートされると細胞インターナリゼーションを促進する。
本組成物および方法と共に使用され得る様々な例示的なリンカーは、国際公開第2004/010957号、米国特許出願公開第2006/0074008号、米国特許出願公開第2005/0238649号および米国特許出願公開第2006/0024317号(これらはそれぞれ、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている。
「リンカーユニット」(LU)は、薬物ユニットおよびリガンドユニットを連結して、リガンド薬物コンジュゲートを形成するのに使用され得る二官能性化合物である。いくつかの実施形態では、リンカーユニットは、以下の式:
−Aa−Ww−Yy−
(式中、−A−は、ストレッチャーユニットであり、
aは、0または1であり、
各−W−は独立して、アミノ酸ユニットであり、
wは、0〜12の範囲の整数であり、
−Y−は、自壊性スペーサーユニットであり、および
yは、0、1または2である)を有する。
−Aa−Ww−Yy−
(式中、−A−は、ストレッチャーユニットであり、
aは、0または1であり、
各−W−は独立して、アミノ酸ユニットであり、
wは、0〜12の範囲の整数であり、
−Y−は、自壊性スペーサーユニットであり、および
yは、0、1または2である)を有する。
いくつかの実施形態では、aは、0または1であり、wは、0または1であり、yは、0、1または2である。いくつかの実施形態では、aは、0または1であり、wは、0または1であり、yは、0または1である。いくつかの実施形態では、wが1〜12である場合、yは、1または2である。いくつかの実施形態では、wは、2〜12であり、yは、1または2である。いくつかの実施形態では、aは、1であり、wおよびyは、0である。
ストレッチャーユニット
ストレッチャーユニット(A)は、存在する場合、リガンドユニットをアミノ酸ユニット(−W−)(存在する場合);スペーサーユニット(−Y−)(存在する場合);または薬物ユニット(−D)に連結し得る。DR5結合剤上に存在し得る有用な官能基(天然によるものまたは化学的操作によるもののいずれか)としては、限定されないが、スルフヒドリル、アミノ、ヒドロキシル、炭水化物のアノマーヒドロキシル基およびカルボキシルが挙げられる。適切な官能基は、スルフヒドリルおよびアミノである。一例において、スルフヒドリル基は、抗DR5抗体の分子内ジスルフィド結合の還元によって生成され得る。別の実施形態では、スルフヒドリル基は、抗DR5抗体のリジン部分のアミノ基と、2−イミノチオラン(トラウト試薬)または他のスルフヒドリル生成試薬との反応によって生成され得る。特定の実施形態では、抗DR5抗体は組換え抗体であり、1個以上のリジンを有するように改変される。特定の他の実施形態では、組換え抗DR5抗体は、さらなるスルフヒドリル基(例えば、さらなるシステイン)を有するように改変される。
ストレッチャーユニット(A)は、存在する場合、リガンドユニットをアミノ酸ユニット(−W−)(存在する場合);スペーサーユニット(−Y−)(存在する場合);または薬物ユニット(−D)に連結し得る。DR5結合剤上に存在し得る有用な官能基(天然によるものまたは化学的操作によるもののいずれか)としては、限定されないが、スルフヒドリル、アミノ、ヒドロキシル、炭水化物のアノマーヒドロキシル基およびカルボキシルが挙げられる。適切な官能基は、スルフヒドリルおよびアミノである。一例において、スルフヒドリル基は、抗DR5抗体の分子内ジスルフィド結合の還元によって生成され得る。別の実施形態では、スルフヒドリル基は、抗DR5抗体のリジン部分のアミノ基と、2−イミノチオラン(トラウト試薬)または他のスルフヒドリル生成試薬との反応によって生成され得る。特定の実施形態では、抗DR5抗体は組換え抗体であり、1個以上のリジンを有するように改変される。特定の他の実施形態では、組換え抗DR5抗体は、さらなるスルフヒドリル基(例えば、さらなるシステイン)を有するように改変される。
一実施形態では、ストレッチャーユニットは、リガンドユニットの硫黄原子と結合を形成する。硫黄原子は、リガンドのスルフヒドリル基に由来し得る。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは、式IIIaおよび式IIIb(式中、L−、−W−、−Y−、−D、wおよびyは、上で定義したとおりであり、
Raは、−C1−C10アルキレン−、−C2−C10アルケニレン−、−C2−C10アルキニレン−、−カルボシクロ−、−O−(C1−C8アルキレン)−、O−(C2−C8アルケニレン)−、−O−(C2−C8アルキニレン)−、−アリーレン−、−C1−C10アルキレン−アリーレン−、−C2−C10アルケニレン−アリーレン、−C2−C10アルキニレン−アリーレン、−アリーレン−C1−C10アルキレン−、−アリーレン−C2−C10アルケニレン−、−アリーレン−C2−C10アルキニレン−、−C1−C10アルキレン−(カルボシクロ)−、−C2−C10アルケニレン−(カルボシクロ)−、−C2−C10アルキニレン−(カルボシクロ)−、−(カルボシクロ)−C1−C10アルキレン−、−(カルボシクロ)−C2−C10アルケニレン−、−(カルボシクロ)−C2−C10アルキニレン、ヘテロシクロ−、−C1−C10アルキレン−(ヘテロシクロ)−、−C2−C10アルケニレン−(ヘテロシクロ)−、−C2−C10アルキニレン−(ヘテロシクロ)−、−(ヘテロシクロ)−C1−C10アルキレン−、−(ヘテロシクロ)−C2−C10アルケニレン−、−(ヘテロシクロ)−C2−C10アルキニレン−、−(CH2CH2O)r−または−(CH2CH2O)r−CH2−から選択され、rは、1〜10の範囲の整数であり、ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環(carbocyle)、カルボシクロ、ヘテロシクロおよびアリーレン原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される)の大括弧内に示される。いくつかの実施形態では、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環(carbocyle)、カルボシクロ、ヘテロシクロおよびアリーレン原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、置換されていない。いくつかの実施形態では、Raは、−C1−C10アルキレン−、−カルボシクロ−、−O−(C1−C8アルキレン)−、−アリーレン−、−C1−C10アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−C1−C10アルキレン−、−C1−C10アルキレン−(カルボシクロ)−、−(カルボシクロ)−C1−C10アルキレン−、−C3−C8ヘテロシクロ−、−C1−C10アルキレン−(ヘテロシクロ)−、−(ヘテロシクロ)−C1−C10アルキレン−、−(CH2CH2O)r−および−(CH2CH2O)r−CH2−から選択され;rは、1〜10の範囲の整数であり、ここで、前記アルキレン基は置換されておらず、基の残りの部分は、場合により置換される。
Raは、−C1−C10アルキレン−、−C2−C10アルケニレン−、−C2−C10アルキニレン−、−カルボシクロ−、−O−(C1−C8アルキレン)−、O−(C2−C8アルケニレン)−、−O−(C2−C8アルキニレン)−、−アリーレン−、−C1−C10アルキレン−アリーレン−、−C2−C10アルケニレン−アリーレン、−C2−C10アルキニレン−アリーレン、−アリーレン−C1−C10アルキレン−、−アリーレン−C2−C10アルケニレン−、−アリーレン−C2−C10アルキニレン−、−C1−C10アルキレン−(カルボシクロ)−、−C2−C10アルケニレン−(カルボシクロ)−、−C2−C10アルキニレン−(カルボシクロ)−、−(カルボシクロ)−C1−C10アルキレン−、−(カルボシクロ)−C2−C10アルケニレン−、−(カルボシクロ)−C2−C10アルキニレン、ヘテロシクロ−、−C1−C10アルキレン−(ヘテロシクロ)−、−C2−C10アルケニレン−(ヘテロシクロ)−、−C2−C10アルキニレン−(ヘテロシクロ)−、−(ヘテロシクロ)−C1−C10アルキレン−、−(ヘテロシクロ)−C2−C10アルケニレン−、−(ヘテロシクロ)−C2−C10アルキニレン−、−(CH2CH2O)r−または−(CH2CH2O)r−CH2−から選択され、rは、1〜10の範囲の整数であり、ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環(carbocyle)、カルボシクロ、ヘテロシクロおよびアリーレン原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される)の大括弧内に示される。いくつかの実施形態では、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリール、炭素環(carbocyle)、カルボシクロ、ヘテロシクロおよびアリーレン原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、置換されていない。いくつかの実施形態では、Raは、−C1−C10アルキレン−、−カルボシクロ−、−O−(C1−C8アルキレン)−、−アリーレン−、−C1−C10アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−C1−C10アルキレン−、−C1−C10アルキレン−(カルボシクロ)−、−(カルボシクロ)−C1−C10アルキレン−、−C3−C8ヘテロシクロ−、−C1−C10アルキレン−(ヘテロシクロ)−、−(ヘテロシクロ)−C1−C10アルキレン−、−(CH2CH2O)r−および−(CH2CH2O)r−CH2−から選択され;rは、1〜10の範囲の整数であり、ここで、前記アルキレン基は置換されておらず、基の残りの部分は、場合により置換される。
明記されていない場合でも、1〜20個の薬物部分がリガンドに連結され得る(p=1〜20)ことを、すべての例示的な実施形態から理解するべきである。いくつかの実施形態では、2個、4個、6個または8個の薬物部分がリガンドに連結される(p=2、4、6または8)。
例示的なストレッチャーユニットは、式IIIa(式中、Raは、−アリーレン−またはアリーレン−C1−C10アルキレン−である)のものである。いくつかの実施形態では、アリール基は、置換されていないフェニル基である。
特定の実施形態では、ストレッチャーユニットは、リガンドユニットの硫黄原子と、ストレッチャーユニットの硫黄原子との間のジスルフィド結合を介して、リガンドユニットに連結される。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは、式IV(式中、Ra、L−、−W−、−Y−、−D、wおよびyは、上で定義したとおりである)の大括弧内に示される。
さらに他の実施形態では、ストレッチャーは、Lに結合する前に、リガンドの一級アミノ基または二級アミノ基との結合を形成し得る反応性部位を含有する。これらの反応性部位の例としては、限定されないが、活性化エステル、例えば、スクシンイミドエステル、4ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、無水物、酸塩化物、スルホニルクロリド、イソシアネートおよびイソチオシアネートが挙げられる。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは、式Vaおよび式Vb(式中、−Ra−、L−、−W−、−Y−、−D、wおよびyは、上で定義したとおりである)の大括弧内に示される;
いくつかの実施形態では、ストレッチャーは、リガンド上に存在し得る改変された炭水化物(−CHO)基に対して反応性である反応性部位を含有する。例えば、過ヨウ素酸ナトリウムなどの試薬を使用して炭水化物を穏やかに酸化し得、酸化炭水化物の得られた(−CHO)ユニットを、官能基、例えばヒドラジド、オキシム、一級アミンまたは二級アミン、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレートおよびアリールヒドラジド、例えばKanekoら、1991,Bioconjugate Chem.2:133−41によって記載されているものを含有するストレッチャーと縮合し得る。この実施形態の代表的なストレッチャーユニットは、式VIa、式VIbおよび式VIc(式中、−Ra−、L−、−W−、−Y−、−D、wおよびyは、上で定義したとおりである)の大括弧内に示される。
アミノ酸ユニット
アミノ酸ユニット(−W−)は、存在する場合、ストレッチャーユニットをスペーサーユニットに連結し(スペーサーユニットが存在する場合)、ストレッチャーユニットを薬物部分に連結し(スペーサーユニットが存在しない場合)、リガンドユニットを薬物ユニットに連結する(ストレッチャーユニットおよびスペーサーユニットが存在しない場合)。
アミノ酸ユニット(−W−)は、存在する場合、ストレッチャーユニットをスペーサーユニットに連結し(スペーサーユニットが存在する場合)、ストレッチャーユニットを薬物部分に連結し(スペーサーユニットが存在しない場合)、リガンドユニットを薬物ユニットに連結する(ストレッチャーユニットおよびスペーサーユニットが存在しない場合)。
Ww−は、例えば、モノペプチド、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチドまたはドデカペプチドユニットであり得る。各−W−ユニットは独立して、以下の大括弧内に示される式を有し、wは、0〜12の範囲の整数である:
(式中、Rbは、水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、sec−ブチル、ベンジル、p−ヒドロキシベンジル、−CH2OH、−CH(OH)CH3、−CH2CH2SCH3、−CH2CONH2、−CH2COOH、−CH2CH2CONH2、−CH2CH2COOH、−(CH2)3NHC(=NH)NH2、−(CH2)3NH2、−(CH2)3NHCOCH3、−(CH2)3NHCHO、−(CH2)4NHC(=NH)NH2、−(CH2)4NH2、−(CH2)4NHCOCH3、−(CH2)4NHCHO、−(CH2)3NHCONH2、−(CH2)4NHCONH2、−CH2CH2CH(OH)CH2NH2、2−ピリジルメチル−、3−ピリジルメチル−、4−ピリジルメチル−、フェニル、シクロヘキシル、
である)。
いくつかの実施形態では、癌または腫瘍関連プロテアーゼを含む1つ以上の酵素によってアミノ酸ユニットが酵素的に切断されて薬物ユニット(−D)が遊離され得、一実施形態では、これが放出のときにインビボでプロトン化されて薬物(D)が提供される。
特定の実施形態では、アミノ酸ユニットは、天然アミノ酸を含み得る。他の実施形態では、アミノ酸ユニットは、非天然アミノ酸を含み得る。例示的なWwユニットは、式(VII)〜(IX)によって表される:
(式中、RcおよびRdは、以下のとおりである):
(式中、Rc、RdおよびReは、以下のとおりである):
(式中、Rc、Rd、ReおよびRfは、以下のとおりである):
例示的なアミノ酸ユニットとしては、限定されないが、式VII(式中、Rcは、ベンジルであり、Rdは、−(CH2)4NH2であるか;Rcは、イソプロピルであり、Rdは、−(CH2)4NH2であるか;またはRcはイソプロピルであり、Rdは、−(CH2)3NHCONH2である)のユニットが挙げられる。別の例示的なアミノ酸ユニットは、式VIII(式中、Rcは、ベンジルであり、Rdは、ベンジルであり、Reは、−(CH2)4NH2である)のユニットである。
有用な−Ww−ユニットを設計して、特定の酵素(例えば、腫瘍関連プロテアーゼ)による酵素的切断に対するそれらの選択性を最適化し得る。一実施形態では、−Ww−ユニットは、その切断が、カテプシンB、CおよびDまたはプラスミンプロテアーゼによって触媒されるものである。
一実施形態では、−Ww−は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドである。Rb、Rc、Rd、ReまたはRfが水素以外である場合、Rb、Rc、Rd、ReまたはRfが結合した炭素原子は、キラルである。
Rb、Rc、Rd、ReまたはRfが結合した各炭素原子は独立して、(S)または(R)配置にある。
アミノ酸ユニットの一態様では、アミノ酸ユニットは、バリン−シトルリン(vcまたはval−cit)である。別の態様では、アミノ酸ユニットは、フェニルアラニン−リジン(すなわち、fk)である。アミノ酸ユニットのさらに別の態様では、アミノ酸ユニットは、N−メチルバリン−シトルリンである。さらに別の態様では、アミノ酸ユニットは、5−アミノ吉草酸、ホモフェニルアラニン−リジン、テトライソキノリンカルボキシレート−リジン、シクロヘキシルアラニン−リジン、イソニペコチン酸(isonepecotic acid)−リジン、β−アラニン−リジンまたはグリシン−セリン−バリン−グルタミン−イソニペコチン酸である。
スペーサーユニット
スペーサーユニット(−Y−)は、存在する場合、アミノ酸ユニットを薬物ユニットに連結する(アミノ酸ユニットが存在する場合)。あるいは、スペーサーユニットは、ストレッチャーユニットを薬物ユニットに連結する(アミノ酸ユニットが存在しない場合)。スペーサーユニットはまた、薬物ユニットをリガンドユニットに連結する(アミノ酸ユニットおよびストレッチャーユニットの両方が存在しない場合)。
スペーサーユニット(−Y−)は、存在する場合、アミノ酸ユニットを薬物ユニットに連結する(アミノ酸ユニットが存在する場合)。あるいは、スペーサーユニットは、ストレッチャーユニットを薬物ユニットに連結する(アミノ酸ユニットが存在しない場合)。スペーサーユニットはまた、薬物ユニットをリガンドユニットに連結する(アミノ酸ユニットおよびストレッチャーユニットの両方が存在しない場合)。
スペーサーユニットは、一般的な2種類がある:非自壊性または自壊性。非自壊性スペーサーユニットは、リガンド−薬物コンジュゲートからアミノ酸ユニットが(特に、酵素的に)切断された後に、スペーサーユニットの一部または全部が薬物部分に依然として結合しているものである。非自壊性スペーサーユニットの例としては、限定されないが、(グリシン−グリシン)スペーサーユニットおよびグリシンスペーサーユニット(両方ともスキーム1に示される)(以下)が挙げられる。グリシン−グリシンスペーサーユニットまたはグリシンスペーサーユニットを含有するコンジュゲートが、酵素(例えば、腫瘍細胞関連プロテアーゼ、癌細胞関連プロテアーゼまたはリンパ球関連プロテアーゼ)による酵素的切断を受けると、グリシン−グリシン−薬物部分またはグリシン−薬物部分がL−Aa−Ww−から切断される。一実施形態では、独立した加水分解反応が標的細胞内で起こり、グリシン−薬物部分結合が切断されて薬物が遊離する。
スキーム1
スキーム1
いくつかの実施形態では、非自壊性スペーサーユニット(−Y−)は、−Gly−である。いくつかの実施形態では、非自壊性スペーサーユニット(−Y−)は、−Gly−Gly−である。
一実施形態では、スペーサーユニットが存在しない(y=0)薬物−リンカーコンジュゲートまたはその薬学的に許容され得る塩が提供される。
あるいは、自壊性スペーサーユニットを含有するコンジュゲートは、−Dを放出し得る。本明細書で使用される場合、用語「自壊性スペーサー」は、離れた2個の化学部分を安定な3部分分子(stable tripartite molecule)に一緒になって共有結合し得る二官能性化学部分を指す。それは、第1の部分への結合が切断されると、第2の化学部分から自然発生的に分離する。
いくつかの実施形態では、−Yy−は、そのフェニレン部分がQmで置換されたp−アミノベンジルアルコール(PAB)ユニット(スキーム2およびスキーム3を参照のこと)であり、ここで、Qは、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり;mは、0〜4の範囲の整数である。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されていてもよい。
いくつかの実施形態では、−Y−は、PAB基であり、PAB基は、PAB基のアミノ窒素原子を介して−Ww−に連結され、カーボネート、カルバメートまたはエーテル基を介して−Dに直接結合される。いかなる特定の理論にも機構にも拘束されないが、スキーム2は、Tokiら、2002,J.Org.Chem.67:1866−1872によって記載されるように、カルバメートまたはカーボネート基を介して−Dに直接結合したPAB基についての考えられる薬物放出機構を示す。
スキーム2
スキーム2
スキーム2において、Qは、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり;mは、0〜4の範囲の整数であり;pは、1〜約20の範囲である。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されていてもよい。
いかなる特定の理論にも機構にも拘束されないが、スキーム3は、エーテルまたはアミン結合を介して−Dに直接結合したPAB基についての考えられる薬物放出機構を示し、ここで、Dは、薬物ユニットの一部である酸素基または窒素基を含む:
スキーム3
スキーム3
スキーム3において、Qは、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり;mは、0〜4の範囲の整数であり;pは、1〜約20の範囲である。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されていてもよい。
自壊性スペーサーの他の例としては、限定されないが、PAB基に電子的に類似している芳香族化合物、例えば、2−アミノイミダゾール−5−メタノール誘導体(Hayら、1999,Bioorg.Med.Chem.Lett.9:2237)およびオルトまたはパラ−アミノベンジルアセタールが挙げられる。アミド結合加水分解の際に環化を受けるスペーサー、例えば、置換されたおよび置換されていない4−アミノ酪酸アミド(Rodriguesら、1995,Chemistry Biology 2:223)、適切に置換されたビシクロ[2.2.1]およびビシクロ[2.2.2]環系(Stormら、1972,J.Amer.Chem.Soc.94:5815)ならびに2−アミノフェニルプロピオン酸アミド(Amsberryら、1990,J.Org.Chem.55:5867)が使用され得る。グリシンのα位で置換されたアミン含有薬物の脱離(Kingsburyら、1984,J.Med.Chem.27:1447)はまた、自壊性スペーサーの例である。
スキーム4において、Qは、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり;mは、0〜4の範囲の整数であり;nは、0または1であり;pは、1〜約20の整数である。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されていてもよい。
いくつかの実施形態では、−D部分は同じものである。さらに別の実施形態では、−D部分は異なるものである。
一態様では、スペーサーユニット(−Yy−)は、式(X)〜(XII):
(式中、Qは、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、−O−(C1−C8アルキル)、−O−(C2−C8アルケニル)、−O−(C2−C8アルキニル)、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり;mは、0〜4の範囲の整数である)によって表される。アルキル、アルケニルおよびアルキニル基は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されていてもよい。
および
一群の選択された実施形態では、式IおよびIIのコンジュゲートは、以下のものである:
(式中、wおよびyはそれぞれ、0、1または2である)
および
(式中、wおよびyはそれぞれ、0である)
(式中、Aa、Ww、Yy、DおよびLは、上に示されている意味を有する)。
および
薬物ユニット
薬物部分(D)は、任意の細胞傷害剤もしくは薬物、細胞増殖抑制剤もしくは薬物または免疫調節(例えば、免疫抑制)剤もしくは薬物であり得る。Dは、スペーサーユニットと、またはアミノ酸ユニットと、またはストレッチャーユニットと、またはリガンドユニットと結合を形成し得る原子を有する薬物ユニット(部分)である。いくつかの実施形態では、薬物ユニットDは、スペーサーユニットと結合を形成し得る窒素原子を有する。本明細書で使用される場合、用語「薬物ユニット」および「薬物部分」は同義であり、互換的に使用される。
薬物部分(D)は、任意の細胞傷害剤もしくは薬物、細胞増殖抑制剤もしくは薬物または免疫調節(例えば、免疫抑制)剤もしくは薬物であり得る。Dは、スペーサーユニットと、またはアミノ酸ユニットと、またはストレッチャーユニットと、またはリガンドユニットと結合を形成し得る原子を有する薬物ユニット(部分)である。いくつかの実施形態では、薬物ユニットDは、スペーサーユニットと結合を形成し得る窒素原子を有する。本明細書で使用される場合、用語「薬物ユニット」および「薬物部分」は同義であり、互換的に使用される。
有用なクラスの細胞傷害剤または免疫調節剤としては、例えば、抗チューブリン剤、DNA副溝結合剤、DNA複製阻害剤およびアルキル化剤が挙げられる。
いくつかの実施形態では、薬物は、オーリスタチン、例えば、オーリスタチンE(当技術分野ではドラスタチン−10の誘導体として公知である)またはその誘導体である。オーリスタチンは、例えば、オーリスタチンEとケト酸との間に形成されたエステルであり得る。例えば、オーリスタチンEをパラアセチル安息香酸またはベンゾイル吉草酸と反応させて、それぞれAEBおよびAEVBを生成し得る。他の典型的なオーリスタチンとしては、AFP、MMAFおよびMMAEが挙げられる。例示的なオーリスタチンの合成および構造は、米国特許出願公開第2003−0083263号、米国特許出願公開第2005−0238649号および米国特許出願公開第2005−0009751号;国際公開第04/010957号、国際公開第02/088172号および米国特許第6,323,315号;米国特許第6,239,104号;米国特許第6,034,065号;米国特許第5,780,588号;米国特許第5,665,860号;米国特許第5,663,149号;米国特許第5,635,483号;米国特許第5,599,902号;米国特許第5,554,725号;米国特許第5,530,097号;米国特許第5,521,284号;米国特許第5,504,191号;米国特許第5,410,024号;米国特許第5,138,036号;米国特許第5,076,973号;米国特許第4,986,988号;米国特許第4,978,744号;米国特許第4,879,278号;米国特許第4,816,444号;および米国特許第4,486,414号(これらはそれぞれ、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる)に記載されていている。
オーリスタチンは、微小管動態ならびに核分裂および細胞分裂に干渉し、抗癌活性を有することが示されている。本発明のオーリスタチンはチューブリンに結合し、DR5発現細胞系に対する細胞傷害効果または細胞増殖抑制効果を発揮し得る。当技術分野で公知の多くの様々なアッセイが存在し、これらは、オーリスタチンまたは得られた抗体−薬物コンジュゲートが、所望の細胞系に対する細胞増殖抑制効果または細胞傷害効果を発揮するかを決定するのに使用され得る。
化合物がチューブリンに結合するかを決定するための方法は、当技術分野で公知である。例えば、Mullerら、Anal.Chem 2006,78,4390−4397;Hamelら、Molecular Pharmacology,1995 47:965−976;およびHamelら、The Journal of Biological Chemistry,1990 265:28,17141−17149を参照のこと。本発明の目的のために、チューブリンに対する化合物の相対的親和性が決定され得る。いくつかの好ましい本発明のオーリスタチンは、チューブリンに対するMMAEの結合親和性より10倍低い(より弱い親和性)から、チューブリンに対するMMAEの結合親和性より10倍高い、20倍高いまたはさらに100倍高い(より高い親和性)までの範囲の親和性で、チューブリンに結合する。
いくつかの実施形態では、−Dは、式DEまたは式DF:
(式中、各位置で独立して:
波線は、結合を示し;
R2は、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R3は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、炭素環、−C1−C20アルキレン(炭素環)、−C2−C20アルケニレン(炭素環)、−C2−C20アルキニレン(炭素環)、−アリール、−C1−C20アルキレン(アリール)、−C2−C20アルケニレン(アリール)、−C2−C20アルキニレン(アリール)、−複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)であり;
R4は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、炭素環、−C1−C20アルキレン(炭素環)、−C2−C20アルケニレン(炭素環)、−C2−C20アルキニレン(炭素環)、−アリール、−C1−C20アルキレン(アリール)、−C2−C20アルケニレン(アリール)、−C2−C20アルキニレン(アリール)、−複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)であり;
R5は、−Hまたは−C1−C8アルキルであり;
またはR4およびR5は一緒になって炭素環式環を形成し、式−(CRaRb)s−(式中、RaおよびRbは独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニルまたは−炭素環であり、sは、2、3、4、5または6である)を有し、
R6は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R7は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−炭素環、−C1−C20アルキレン(炭素環)、−C2−C20アルケニレン(炭素環)、−C2−C20アルキニレン(炭素環)、−アリール、−C1−C20アルキレン(アリール)、−C2−C20アルケニレン(アリール)、−C2−C20アルキニレン(アリール)、複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)であり;
各R8は独立して、−H、−OH、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−O−(C1−C20アルキル)、−O−(C2−C20アルケニル)、−O−(C1−C20アルキニル)または−炭素環であり;
R9は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R19は、−アリール、−複素環または−炭素環であり;
R20は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−炭素環、−O−(C1−C20アルキル)、−O−(C2−C20アルケニル)、−O−(C2−C20アルキニル)またはOR18であり、ここで、R18は、−H、ヒドロキシル保護基であるか、またはOR18が=Oを表す場合には直接結合であり;
R21は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニル、−アリール、−複素環または−炭素環であり;
R10は、−アリールまたは−複素環であり;
Zは、−O−、−S−、−NH−または−NR12−であり、ここで、R12は、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;および
R11は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−アリール、−複素環、−(R13O)m−R14または−(R13O)m−CH(R15)2であり、ここで、
mは、1〜1000の範囲の整数であり;
R13は、−C2−C20アルキレン、−C2−C20アルケニレンまたは−C2−C20アルキニレンであり;
R14は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
出現する各R15は独立して、−H、−COOH、−(CH2)n−N(R16)2、−(CH2)n−SO3H、−(CH2)n−SO3−C1−C20アルキル、−(CH2)n−SO3−C2−C20アルケニルまたは−(CH2)n−SO3−C2−C20アルキニルであり;
出現する各R16は独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニルまたは−(CH2)n−COOHであり;および
nは、0〜6の範囲の整数であり;ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン(alkynyklene)、アリール、炭素環(carbocyle)および複素環原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される)のオーリスタチンまたはその薬学的に許容され得る塩の形態である。
波線は、結合を示し;
R2は、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R3は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、炭素環、−C1−C20アルキレン(炭素環)、−C2−C20アルケニレン(炭素環)、−C2−C20アルキニレン(炭素環)、−アリール、−C1−C20アルキレン(アリール)、−C2−C20アルケニレン(アリール)、−C2−C20アルキニレン(アリール)、−複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)であり;
R4は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、炭素環、−C1−C20アルキレン(炭素環)、−C2−C20アルケニレン(炭素環)、−C2−C20アルキニレン(炭素環)、−アリール、−C1−C20アルキレン(アリール)、−C2−C20アルケニレン(アリール)、−C2−C20アルキニレン(アリール)、−複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)であり;
R5は、−Hまたは−C1−C8アルキルであり;
またはR4およびR5は一緒になって炭素環式環を形成し、式−(CRaRb)s−(式中、RaおよびRbは独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニルまたは−炭素環であり、sは、2、3、4、5または6である)を有し、
R6は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R7は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−炭素環、−C1−C20アルキレン(炭素環)、−C2−C20アルケニレン(炭素環)、−C2−C20アルキニレン(炭素環)、−アリール、−C1−C20アルキレン(アリール)、−C2−C20アルケニレン(アリール)、−C2−C20アルキニレン(アリール)、複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)であり;
各R8は独立して、−H、−OH、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−O−(C1−C20アルキル)、−O−(C2−C20アルケニル)、−O−(C1−C20アルキニル)または−炭素環であり;
R9は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
R19は、−アリール、−複素環または−炭素環であり;
R20は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−炭素環、−O−(C1−C20アルキル)、−O−(C2−C20アルケニル)、−O−(C2−C20アルキニル)またはOR18であり、ここで、R18は、−H、ヒドロキシル保護基であるか、またはOR18が=Oを表す場合には直接結合であり;
R21は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニル、−アリール、−複素環または−炭素環であり;
R10は、−アリールまたは−複素環であり;
Zは、−O−、−S−、−NH−または−NR12−であり、ここで、R12は、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;および
R11は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−アリール、−複素環、−(R13O)m−R14または−(R13O)m−CH(R15)2であり、ここで、
mは、1〜1000の範囲の整数であり;
R13は、−C2−C20アルキレン、−C2−C20アルケニレンまたは−C2−C20アルキニレンであり;
R14は、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;
出現する各R15は独立して、−H、−COOH、−(CH2)n−N(R16)2、−(CH2)n−SO3H、−(CH2)n−SO3−C1−C20アルキル、−(CH2)n−SO3−C2−C20アルケニルまたは−(CH2)n−SO3−C2−C20アルキニルであり;
出現する各R16は独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニルまたは−(CH2)n−COOHであり;および
nは、0〜6の範囲の整数であり;ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン(alkynyklene)、アリール、炭素環(carbocyle)および複素環原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換される)のオーリスタチンまたはその薬学的に許容され得る塩の形態である。
式DEのオーリスタチンは、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン(alkynyklene)、アリール、炭素環(carbocyle)および複素環原子団が置換されていないものを含む。
式DEのオーリスタチンは、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8およびR9の基が置換されておらず、R19、R20およびR21の基が本明細書に記載されるように場合により置換されているものを含む。
式DEのオーリスタチンは、
R2が、−C1−C8アルキルであり;
R3、R4およびR7が独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、単環式C3−C6炭素環、−C1−C20アルキレン(単環式C3−C6炭素環)、−C2−C20アルケニレン(単環式C3−C6炭素環)、−C2−C20アルキニレン(単環式C3−C6炭素環)、−C6−C10アリール、−C1−C20アルキレン(C6−C10アリール)、−C2−C20アルケニレン(C6−C10アリール)、−C2−C20アルキニレン(C6−C10アリール)、−複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)から選択され;ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、炭素環、アリールおよび複素環原子団は、場合により置換されており;
R5が、−水素であり;
R6が、−C1−C8アルキルであり;
各R8が独立して、−OH、−O−(C1−C20アルキル)、−O−(C2−C20アルケニル)または−O−(C2−C20アルキニル)から選択され、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており;
R9が、−水素または−C1−C8アルキルであり;
R19が、場合により置換されたフェニルであり;
R20が、OR18であり;ここで、R18は、H、ヒドロキシル保護基であるか、またはOR18が=Oを表す場合には直接結合であり;
R21が、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニルまたは−炭素環から選択され;ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニルおよび炭素環原子団は、場合により置換されているものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
R2が、−C1−C8アルキルであり;
R3、R4およびR7が独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、単環式C3−C6炭素環、−C1−C20アルキレン(単環式C3−C6炭素環)、−C2−C20アルケニレン(単環式C3−C6炭素環)、−C2−C20アルキニレン(単環式C3−C6炭素環)、−C6−C10アリール、−C1−C20アルキレン(C6−C10アリール)、−C2−C20アルケニレン(C6−C10アリール)、−C2−C20アルキニレン(C6−C10アリール)、−複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)から選択され;ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、炭素環、アリールおよび複素環原子団は、場合により置換されており;
R5が、−水素であり;
R6が、−C1−C8アルキルであり;
各R8が独立して、−OH、−O−(C1−C20アルキル)、−O−(C2−C20アルケニル)または−O−(C2−C20アルキニル)から選択され、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており;
R9が、−水素または−C1−C8アルキルであり;
R19が、場合により置換されたフェニルであり;
R20が、OR18であり;ここで、R18は、H、ヒドロキシル保護基であるか、またはOR18が=Oを表す場合には直接結合であり;
R21が、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニルまたは−炭素環から選択され;ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニルおよび炭素環原子団は、場合により置換されているものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
式DEのオーリスタチンは、
R2が、メチルであり;
R3が、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニルまたは−C2−C8アルキニルであり、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており;
R4が、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、単環式C3−C6炭素環、−C6−C10アリール、−C1−C8アルキレン(C6−C10アリール)、−C2−C8アルケニレン(C6−C10アリール)、−C2−C8アルキニレン(C6−C10アリール)、−C1−C8アルキレン(単環式C3−C6炭素環)、−C2−C8アルケニレン(単環式C3−C6炭素環)、−C2−C8アルキニレン(単環式C3−C6炭素環)であり;ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリールおよび炭素環原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されており;
R5が、Hであり;
R6が、メチルであり;
R7が、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニルまたは−C2−C8アルキニルであり;
各R8が、メトキシであり;
R9が、−水素または−C1−C8アルキルであり;
R19が、フェニルであり;
R20が、OR18であり;ここで、R18は、−H、ヒドロキシル保護基であるか、またはOR18が=Oを表す場合には直接結合であり;
R21が、メチルであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
R2が、メチルであり;
R3が、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニルまたは−C2−C8アルキニルであり、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており;
R4が、−H、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニル、−C2−C8アルキニル、単環式C3−C6炭素環、−C6−C10アリール、−C1−C8アルキレン(C6−C10アリール)、−C2−C8アルケニレン(C6−C10アリール)、−C2−C8アルキニレン(C6−C10アリール)、−C1−C8アルキレン(単環式C3−C6炭素環)、−C2−C8アルケニレン(単環式C3−C6炭素環)、−C2−C8アルキニレン(単環式C3−C6炭素環)であり;ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、アリールおよび炭素環原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されており;
R5が、Hであり;
R6が、メチルであり;
R7が、−C1−C8アルキル、−C2−C8アルケニルまたは−C2−C8アルキニルであり;
各R8が、メトキシであり;
R9が、−水素または−C1−C8アルキルであり;
R19が、フェニルであり;
R20が、OR18であり;ここで、R18は、−H、ヒドロキシル保護基であるか、またはOR18が=Oを表す場合には直接結合であり;
R21が、メチルであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
式DEのオーリスタチンは、
R2が、メチルであり;R3が、HまたはC1−C3アルキルであり;R4が、C1−C5アルキルであり;R5が、Hであり;R6が、メチルであり;R7が、イソプロピルまたはsec−ブチルであり;R8が、メトキシであり;R9が、水素またはC1−C8アルキルであり;R19が、フェニルであり;R20が、OR18であり;ここで、R18は、H、ヒドロキシル保護基であるか、またはOR18が=Oを表す場合には直接結合であり;R21が、メチルであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
R2が、メチルであり;R3が、HまたはC1−C3アルキルであり;R4が、C1−C5アルキルであり;R5が、Hであり;R6が、メチルであり;R7が、イソプロピルまたはsec−ブチルであり;R8が、メトキシであり;R9が、水素またはC1−C8アルキルであり;R19が、フェニルであり;R20が、OR18であり;ここで、R18は、H、ヒドロキシル保護基であるか、またはOR18が=Oを表す場合には直接結合であり;R21が、メチルであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
式DEのオーリスタチンは、R2が、メチルまたはC1−C3アルキルであり;R3が、HまたはC1−C3アルキルであり;R4が、C1−C5アルキルであり;R5が、Hであり;R6が、C1−C3アルキルであり;R7が、C1−C5アルキルであり;R8が、C1−C3アルコキシであり;R9が、水素またはC1−C8アルキルであり;R19が、フェニルであり;R20が、OR18であり;ここで、R18は、H、ヒドロキシル保護基であるか、またはOR18が=Oを表す場合には直接結合であり;R21が、C1−C3アルキルであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
式DFのオーリスタチンは、
R2が、メチルであり;
R3、R4およびR7が独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、単環式C3−C6炭素環、−C1−C20アルキレン(単環式C3−C6炭素環)、−C2−C20アルケニレン(単環式C3−C6炭素環)、−C2−C20アルキニレン(単環式C3−C6炭素環)、−C6−C10アリール、−C1−C20アルキレン(C6−C10アリール)、−C2−C20アルケニレン(C6−C10アリール)、−C2−C20アルキニレン(C6−C10アリール)、−複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)から選択され;ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、炭素環(carbocyle)、アリールおよび複素環原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されており;
R5が、−Hであり;
R6が、メチルであり;
各R8が、メトキシであり;
R9が、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており;
R10が、場合により置換されたアリールまたは場合により置換された複素環であり;
Zが、−O−、−S−、−NH−または−NR12−であり、ここで、R12は、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり、これらはそれぞれ、場合により置換されており;および
R11が、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−アリール、−複素環、−(R13O)m−R14または−(R13O)m−CH(R15)2であり、ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル(alkyny)、アリールおよび複素環原子団は、場合により置換されており;
mが、1〜1000の範囲の整数であり;
R13が、−C2−C20アルキレン、−C2−C20アルケニレンまたは−C2−C20アルキニレンであり、これらはそれぞれ、場合により置換されており;
R14が、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており;
出現する各R15が独立して、−H、−COOH、−(CH2)n−N(R16)2、−(CH2)n−SO3H、−(CH2)n−SO3−C1−C20アルキル、−(CH2)n−SO3−C2−C20アルケニルまたは−(CH2)n−SO3−C2−C20アルキニルであり、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており;
出現する各R16が独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニルまたは−(CH2)n−COOHであり、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団が、場合により置換されており;および
nが、0〜6の範囲の整数であるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
R2が、メチルであり;
R3、R4およびR7が独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、単環式C3−C6炭素環、−C1−C20アルキレン(単環式C3−C6炭素環)、−C2−C20アルケニレン(単環式C3−C6炭素環)、−C2−C20アルキニレン(単環式C3−C6炭素環)、−C6−C10アリール、−C1−C20アルキレン(C6−C10アリール)、−C2−C20アルケニレン(C6−C10アリール)、−C2−C20アルキニレン(C6−C10アリール)、−複素環、−C1−C20アルキレン(複素環)、−C2−C20アルケニレン(複素環)または−C2−C20アルキニレン(複素環)から選択され;ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、炭素環(carbocyle)、アリールおよび複素環原子団は、単独かまたは別の基の一部かにかかわらず、場合により置換されており;
R5が、−Hであり;
R6が、メチルであり;
各R8が、メトキシであり;
R9が、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり;ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており;
R10が、場合により置換されたアリールまたは場合により置換された複素環であり;
Zが、−O−、−S−、−NH−または−NR12−であり、ここで、R12は、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり、これらはそれぞれ、場合により置換されており;および
R11が、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニル、−アリール、−複素環、−(R13O)m−R14または−(R13O)m−CH(R15)2であり、ここで、前記アルキル、アルケニル、アルキニル(alkyny)、アリールおよび複素環原子団は、場合により置換されており;
mが、1〜1000の範囲の整数であり;
R13が、−C2−C20アルキレン、−C2−C20アルケニレンまたは−C2−C20アルキニレンであり、これらはそれぞれ、場合により置換されており;
R14が、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニルまたは−C2−C20アルキニルであり、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており;
出現する各R15が独立して、−H、−COOH、−(CH2)n−N(R16)2、−(CH2)n−SO3H、−(CH2)n−SO3−C1−C20アルキル、−(CH2)n−SO3−C2−C20アルケニルまたは−(CH2)n−SO3−C2−C20アルキニルであり、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団は、場合により置換されており;
出現する各R16が独立して、−H、−C1−C20アルキル、−C2−C20アルケニル、−C2−C20アルキニルまたは−(CH2)n−COOHであり、ここで、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニル原子団が、場合により置換されており;および
nが、0〜6の範囲の整数であるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
特定のこれらの実施形態では、R10は、場合により置換されたフェニルである。
式DFのオーリスタチンは、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8およびR9の基が置換されておらず、R10およびR11の基が本明細書に記載されるとおりであるものを含む。
式DFのオーリスタチンは、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン(alkynyklene)、アリール、炭素環(carbocyle)および複素環原子団が置換されていないものを含む。
式DFのオーリスタチンは、
R2が、C1−C3アルキルであり;R3が、HまたはC1−C3アルキルであり;R4が、C1−C5アルキルであり;R5が、Hであり;R6が、C1−C3アルキルであり;R7が、C1−C5アルキルであり;R8が、C1−C3アルコキシであり;R9が、水素またはC1−C8アルキルであり;R10が、場合により置換されたフェニルであり;Zが、O、SまたはNHであり;R11が、本明細書で定義されるとおりであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
R2が、C1−C3アルキルであり;R3が、HまたはC1−C3アルキルであり;R4が、C1−C5アルキルであり;R5が、Hであり;R6が、C1−C3アルキルであり;R7が、C1−C5アルキルであり;R8が、C1−C3アルコキシであり;R9が、水素またはC1−C8アルキルであり;R10が、場合により置換されたフェニルであり;Zが、O、SまたはNHであり;R11が、本明細書で定義されるとおりであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
式DFのオーリスタチンは、
R2が、メチルであり;R3が、HまたはC1−C3アルキルであり;R4が、C1−C5アルキルであり;R5が、Hであり;R6が、メチルであり;R7が、イソプロピルまたはsec−ブチルであり;R8が、メトキシであり;R9が、水素またはC1−C8アルキルであり;R10が、場合により置換されたフェニルであり;Zが、O、SまたはNHであり;R11が、本明細書で定義されるとおりであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
R2が、メチルであり;R3が、HまたはC1−C3アルキルであり;R4が、C1−C5アルキルであり;R5が、Hであり;R6が、メチルであり;R7が、イソプロピルまたはsec−ブチルであり;R8が、メトキシであり;R9が、水素またはC1−C8アルキルであり;R10が、場合により置換されたフェニルであり;Zが、O、SまたはNHであり;R11が、本明細書で定義されるとおりであるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
式DFのオーリスタチンは、
R2が、メチルであり;R3が、HまたはC1−C3アルキルであり;R4が、C1−C5アルキルであり;R5が、Hであり;R6が、メチルであり;R7が、イソプロピルまたはsec−ブチルであり;R8が、メトキシであり;R9が、水素またはC1−C8アルキルであり;R10が、フェニルであり;Zが、OまたはNHであり、R11が、本明細書で定義されるとおりであり、好ましくは水素であるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
R2が、メチルであり;R3が、HまたはC1−C3アルキルであり;R4が、C1−C5アルキルであり;R5が、Hであり;R6が、メチルであり;R7が、イソプロピルまたはsec−ブチルであり;R8が、メトキシであり;R9が、水素またはC1−C8アルキルであり;R10が、フェニルであり;Zが、OまたはNHであり、R11が、本明細書で定義されるとおりであり、好ましくは水素であるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
式DFのオーリスタチンは、
R2が、C1−C3アルキルであり;R3が、HまたはC1−C3アルキルであり;R4が、C1−C5アルキルであり;R5が、Hであり;R6が、C1−C3アルキルであり;R7が、C1−C5アルキルであり;R8が、C1−C3アルコキシであり;R9が、水素またはC1−C8アルキルであり;R10が、フェニルであり;Zが、OまたはNHであり、R11が、本明細書で定義されるとおりであり、好ましくは水素であるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
R2が、C1−C3アルキルであり;R3が、HまたはC1−C3アルキルであり;R4が、C1−C5アルキルであり;R5が、Hであり;R6が、C1−C3アルキルであり;R7が、C1−C5アルキルであり;R8が、C1−C3アルコキシであり;R9が、水素またはC1−C8アルキルであり;R10が、フェニルであり;Zが、OまたはNHであり、R11が、本明細書で定義されるとおりであり、好ましくは水素であるものまたはその薬学的に許容され得る塩の形態を含む。
式DEまたは式DFのオーリスタチンは、R3、R4およびR7が独立して、イソプロピルまたはsec−ブチルであり、R5が−Hであるものを含む。例示的な実施形態では、R3およびR4はそれぞれ、イソプロピルであり、R5は、Hであり、R7は、sec−ブチルである。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
式DEまたは式DFのオーリスタチンは、R2およびR6がそれぞれ、メチルであり、R9がHであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
式DEまたは式DFのオーリスタチンは、出現する各R8が−OCH3であるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
式DEまたは式DFのオーリスタチンは、R3およびR4がそれぞれ、イソプロピルであり、R2およびR6がそれぞれ、メチルであり、R5がHであり、R7がsec−ブチルであり、出現する各R8が−OCH3であり、R9がHであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
式DFのオーリスタチンは、Zが−O−または−NH−であるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
式DFのオーリスタチンは、R10がアリールであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
式DFのオーリスタチンは、R10が−フェニルであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
式DFのオーリスタチンは、Zが−O−であり、R11がH、メチルまたはt−ブチルであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
式DFのオーリスタチンは、Zが−NHである場合、R11が、−(R13O)m−CH(R15)2であり、ここで、R15は、−(CH2)n−N(R16)2であり、R16は、−C1−C8アルキルまたは−(CH2)n−COOHであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
式DFのオーリスタチンは、Zが−NHである場合、R11が−(R13O)m−CH(R15)2であり、ここで、R15は、−(CH2)n−SO3Hであるものを含む。置換基の残りの部分は、本明細書で定義されるとおりである。
好ましい実施形態では、Dが式DEのオーリスタチンである場合、wは、1〜12、好ましくは2〜12の範囲の整数であり、yは、1または2であり、aは、好ましくは1である。
いくつかの実施形態では、Dが式DFのオーリスタチンである場合、aは、1であり、wおよびyは、0である。
一態様では、親水性基、例えば限定されないが、トリエチレングリコールエステル(TEG)は、R11において薬物ユニットに結合され得る。理論に拘束されないが、親水性基は、薬物ユニットのインターナリゼーションおよび非凝集形成を補助する。
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、TZT−1027ではない。いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、オーリスタチンEでも、ドラスタチン10でも、オーリスタチンPEでもない。
例示的なリガンド薬物コンジュゲートは、以下の構造(式中、「mAb」は、抗DR5抗体を表し、Sは、抗体の硫黄原子である)を有する。下付き文字pは、1〜約20、好ましくは1〜約5の整数である。
またはその薬学的に許容され得る塩。
いくつかの実施形態では、薬物ユニットは、カリチアマイシン、カンプトテシン、マイタンシノイドまたはアントラサイクリンである。いくつかの実施形態では、薬物は、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイドなどである。
いくつかの典型的な実施形態では、適切な細胞傷害剤としては、例えば、DNA副溝結合剤(例えば、エンジインおよびレキシトロプシン、CBI化合物;米国特許第6,130,237号も参照のこと)、デュオカルマイシン、タキサン(例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル)、ピューロマイシンおよびビンカアルカロイドが挙げられる。他の細胞傷害剤としては、例えば、CC−1065、SN−38、トポテカン、モルホリノ−ドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、エキノマイシン、コンブレタスタチン、ネトロプシン、エポチロンAおよびB、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、マイタンシノイド、ディスコデルモリド、エリュテロビンおよびミトキサントロンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、薬物は、抗チューブリン剤である。抗チューブリン剤の例としては、オーリスタチン、タキサン(例えば、Taxol(登録商標)(パクリタキセル)、Taxotere(登録商標)(ドセタキセル))、T67(Tularik)およびビンカアルカロイド(例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビン)が挙げられる。他の抗チューブリン剤としては、例えば、バッカチン誘導体、タキサンアナログ(例えば、エポチロンAおよびエポチロンB)、ノコダゾール、コルヒチンおよびコルセミド(colcimid)、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、マイタンシノイド、コンブレタスタチン、ディスコデルモリドおよびエリュテロビンが挙げられる。
特定の実施形態では、細胞傷害剤は、マイタンシノイド(別の群の抗チューブリン剤)である。例えば、具体的な実施形態では、マイタンシノイドは、マイタンシンまたはDM−1(ImmunoGen,Inc.;Chariら、1992,Cancer Res.52:127−131も参照のこと)である。
特定の実施形態では、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、ドラスタチンである。特定の実施形態では、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、オーリスタチンクラスのものである。したがって、具体的な実施形態では、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、MMAE(式XIII)である。別の具体的な実施形態では、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤は、AFP(式XVIII)である。
リガンドユニット
本発明において、リガンド薬物コンジュゲートにおけるリガンドユニット(例えば、抗体)はDR5に特異的に結合し、インターナリゼーションを介して細胞傷害活性を示す。リガンド薬物コンジュゲートは、リガンドユニット(例えば、抗体)がその標的として特異的に結合するDR5を発現する癌組織に達する。その結果として、抗体にコンジュゲートした薬物ユニットは、標的細胞に対して選択的に作用することが可能になり得る。したがって、抗体−薬物コンジュゲートの有効性は、抗体単独のものより大いに増強され得る。デスドメイン含有受容体に結合する抗体(特に、抗DR5抗体)は、本発明の抗体−薬物コンジュゲートに含まれ得る抗体として選択され得る。
本発明において、リガンド薬物コンジュゲートにおけるリガンドユニット(例えば、抗体)はDR5に特異的に結合し、インターナリゼーションを介して細胞傷害活性を示す。リガンド薬物コンジュゲートは、リガンドユニット(例えば、抗体)がその標的として特異的に結合するDR5を発現する癌組織に達する。その結果として、抗体にコンジュゲートした薬物ユニットは、標的細胞に対して選択的に作用することが可能になり得る。したがって、抗体−薬物コンジュゲートの有効性は、抗体単独のものより大いに増強され得る。デスドメイン含有受容体に結合する抗体(特に、抗DR5抗体)は、本発明の抗体−薬物コンジュゲートに含まれ得る抗体として選択され得る。
DR5に結合する抗体
(1)DR5遺伝子
ヒトデス受容体5(DR5)遺伝子のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、GenBankにおいてGI:22547118(アクセッション番号NM_147187)として登録されている。DR5アミノ酸配列において1個以上のアミノ酸が置き換え、欠失または付加されたアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であって、DR5の生物活性と同等の生物活性を有するヌクレオチド配列もDR5遺伝子のヌクレオチド配列に含まれる。さらに、DR5アミノ酸配列において1個以上のアミノ酸が置き換え、欠失または付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質であって、DR5の生物活性と同等の生物活性を有するタンパク質もDR5に含まれる。
(1)DR5遺伝子
ヒトデス受容体5(DR5)遺伝子のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、GenBankにおいてGI:22547118(アクセッション番号NM_147187)として登録されている。DR5アミノ酸配列において1個以上のアミノ酸が置き換え、欠失または付加されたアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であって、DR5の生物活性と同等の生物活性を有するヌクレオチド配列もDR5遺伝子のヌクレオチド配列に含まれる。さらに、DR5アミノ酸配列において1個以上のアミノ酸が置き換え、欠失または付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質であって、DR5の生物活性と同等の生物活性を有するタンパク質もDR5に含まれる。
(2)DR5に対する抗体
本発明のDR5に対する抗体は、通常の方法でDR5またはDR5アミノ酸配列から選択される任意のポリペプチドで動物を免疫することによって得られ得る。生体において産生されるこのような抗体を収集して精製し得る。
本発明のDR5に対する抗体は、通常の方法でDR5またはDR5アミノ酸配列から選択される任意のポリペプチドで動物を免疫することによって得られ得る。生体において産生されるこのような抗体を収集して精製し得る。
さらに、モノクローナル抗体はまた、公知の方法(例えば、Kohler and Milstein,Nature(1975)256,p.495−497;Kennet,R.ed.,Monoclonal Antibody,p.365−367,Prenum Press,N.Y.(1980))にしたがって、DR5に対する抗体を産生する抗体産生細胞を骨髄腫細胞と融合することによって樹立されたハイブリドーマから得られ得る。
抗原としてのDR5は、DR5遺伝子を発現する遺伝子操作された宿主細胞から得られ得る。
より具体的には、DR5は、DR5遺伝子を発現し得るベクターを調製し、ベクターを宿主細胞に導入して遺伝子を発現させ、発現したDR5を精製することによって得られ得る。
さらに、DR5の細胞外領域を抗体の定常領域と融合した人工遺伝子を構築した後に、適切な遺伝子発現系において調製されたタンパク質を免疫原として使用することもできる。
(3)他の抗体
上記DR5に対するモノクローナル抗体に加えて、本発明の抗体は、ヒトに対する異種抗原性を低下させるように人工的に改変された組換え抗体、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体を含む。これらの抗体は、公知の方法によって生産され得る。
上記DR5に対するモノクローナル抗体に加えて、本発明の抗体は、ヒトに対する異種抗原性を低下させるように人工的に改変された組換え抗体、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体を含む。これらの抗体は、公知の方法によって生産され得る。
このようなキメラ抗体としては、可変領域および定常領域が互いに異種である抗体が挙げられ、その例は、マウス由来の抗体の可変領域遺伝子を、ヒト定常領域遺伝子に結合することによって作製されるキメラ抗体である(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,81,6851−6855(1984))。
このようなヒト化抗体の例としては、相補性決定領域(CDR)のみがヒト抗体に移入された抗体(Nature(1986)321,p.522−525)、ならびにCDR配列およびフレームワークの一部のアミノ酸残基がCDR移植によってヒト抗体に移植された抗体(国際公開第90/07861号)が挙げられる。
さらに、ヒト抗体がある。用語「抗ヒトDR5抗体」は、ヒト染色体由来の抗体の遺伝子配列をのみを有するヒト抗体を指す。抗ヒトDR5抗体は、ヒト抗体のHおよびL鎖遺伝子を含有する染色体断片を有するヒト抗体産生マウスを使用する方法によって得られ得る(Tomizuka,Kら、Nature Genetics(1997)16,p.133−143;Kuroiwa,Yら、Nuc.Acids Res.(1998)26,p.3447−3448;Yoshida,Hら、Animal Cell Technology:Basic and Applied Aspects vol.10,p.69−73(Kitagawa,Y.,Matuda,T.and Iijima,S.eds.),Kluwer Academic Publishers,1999;Tomizuka,Kら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2000)97,p.722−727)。
このようなトランスジェニック動物、またはより具体的には、非ヒト哺乳動物における内因性免疫グロブリン重鎖および軽鎖の遺伝子座が破壊されて代わりにヒト免疫グロブリン重鎖および軽鎖の遺伝子座が、酵母人工染色体(YAC)ベクターなどを介してこのノックアウト動物に導入された遺伝子改変動物は、上記のようにノックアウト動物およびトランスジェニック動物を調製し、これらの動物を交配することによって生産することができる。
抗体はまた、組換えDNA技術によってcDNA(好ましくは、ヒト化抗体重鎖および軽鎖のそれぞれをコードするcDNAを含有するベクター)で真核細胞を形質転換し、組換えヒトモノクローナル抗体を産生する形質転換細胞を培養することによって生産される培養上清から得られ得る。
ここで、宿主として使用され得る細胞の例としては、真核細胞、好ましくは哺乳動物細胞、例えば、CHO細胞、リンパ球および骨髄腫が挙げられる。
さらに、ヒト抗体ライブラリーからスクリーニングされたファージディスプレイ由来のヒト抗体を得る方法(Wormstone,I.Mら、Investigative Ophthalmology&Visual Science(2002)43(7),p.2301−2308;Carmen,Sら、Briefings in Functional Genomics and Proteomics(2002),1(2),p.189−203;Siriwardena,Dら、Opthalmology(2002)109(3),p.427−431)も公知である。
例えば、ヒト抗体重鎖および軽鎖可変領域を一本鎖抗体(scFv)としてファージ表面にディスプレイし、次いで、抗原結合ファージを選択する(Nature Biotechnology(2005),23,(9),p.1105−1116)。
抗原結合ヒト抗体の可変領域をコードするDNA配列は、抗原結合によって選択されるファージの遺伝子を分析することによって決定され得る。
抗原結合scFVのDNA配列が明らかになったら、その配列を有する発現ベクターを調製し、ベクターを適切な発現用宿主に導入することによって、ヒト抗体が得られ得る(例えば、国際公開第92/01047号、国際公開第92/20791号、国際公開第93/06213号、国際公開第93/11236号、国際公開第93/19172号、国際公開第95/01438号、国際公開第95/15388号;Annu.Rev.Immunol(1994)12,p.433−455;Nature Biotechnology(2005)23(9),p.1105−1116を参照のこと)。
抗体遺伝子を単離し、適切な宿主に導入して抗体を調製する場合、宿主および発現ベクターの適切な組み合わせが使用され得る。
真核細胞を宿主として使用する場合、動物細胞、植物細胞または真核微生物が使用され得る。
このような動物細胞の例としては、シミアンCOS細胞(Gluzman,Y.,Cell(1981)23,p.175−182,ATCC CRL−1650)、マウス線維芽細胞NIH3T3(ATCC No.CRL−1658)およびチャイニーズハムスター卵巣細胞のジヒドロ葉酸レダクターゼ欠損株(CHO細胞、ATCC CCL−61)(Urlaub,G.and Chasin,L.A.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1980)77,p.4216−4220)が挙げられる。
使用され得る原核細胞の例としては、大腸菌および枯草菌が挙げられる。
形質転換によって目的の抗体遺伝子をこれらの細胞に導入し、形質転換細胞をインビトロで培養することによって、抗体が得られ得る。
本発明の抗体のアイソタイプは、任意のアイソタイプであり得る。その例としては、IgG(IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4)、IgM、IgA(IgA1およびIgA2)、IgDおよびIgEが挙げられるが、IgGおよびIgMが好ましい。
さらに、本発明の抗体は、抗体の抗原結合部位を有する抗体断片、またはそれが抗原結合を維持している場合にはその改変バージョンであり得る。
このような抗体の機能的断片の例としては、Fab、F(ab’)2、F(ab’)2を還元することによって得られる一価可変領域断片Fab’、Fv、適切なリンカーによって重鎖および軽鎖Fvを連結することによって得られる一本鎖Fv(scFv)、ダイアボディ(複数のダイアボディ)、線状の抗体、および抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、断片は、それらが抗原結合を維持している場合には上記断片に限定されない。上記抗体断片は、パパインまたはペプシンなどの酵素で全長抗体分子を処理することによって得られ得る。上記抗体断片はまた、上記抗体断片の重鎖および軽鎖をコードする核酸配列を使用して、適切な遺伝子発現系が対応するタンパク質を生成することを可能にすることによって得られ得る。
これらの抗体断片は、上記と同じ方法で遺伝子を入手および発現させて、対応するタンパク質を宿主に産生させることによって生産することができる。
本発明の抗体は、ポリクローナル抗体(異なるアミノ酸配列を有するいくつかの抗DR5抗体の混合物)であり得る。このようなポリクローナル抗体の例は、異なるCDRを有するいくつかの抗体の混合物である。このようなポリクローナル抗体として、異なる抗体を産生する細胞の混合物を培養し、培養物を精製することによって得られる抗体が使用され得る(国際公開第2004/061104号)。
得られた抗体を均一に精製し得る。抗体の分離および精製は、通常のタンパク質に使用される分離および精製方法によって行われ得る。
例えば、抗体は、クロマトグラフィーカラム、フィルタ、限外ろ過、塩析、透析、分取ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動などを適切に選択および組み合わせることによって分離および精製され得る(Strategies for Protein Purification and Charcterization:A Laboratoy Course Manual,Daniel R.Marshakら、Cold Spring Harbor Laboratory Press(1996);Antibodies:A Laboratory Manual. Ed Harlow and David Lane,Cold Spring Harbor Laboratory(1988))が、分離および精製方法はこれらに限定されない。
クロマトグラフィーの例としては、アフィニティクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲルろ過、逆相クロマトグラフィーおよび吸着クロマトグラフィーが挙げられる。これらの種類のクロマトグラフィーは、HPLCおよびFPLCなどの液相クロマトグラフィーを使用することによって実施され得る。
アフィニティクロマトグラフィーにおいて使用されるカラムの例としては、プロテインAカラムおよびプロテインGカラムが挙げられる。
プロテインAカラムの例としては、Hyper D、POROSおよびSepharose F.F.(Pharmacia)が挙げられる。
さらに、抗体はまた、担体上に固定化された抗原へのその結合によって精製され得る。
(4)抗DR5抗体の例
例えば、国際公開第98/51793号、国際公開第2001/83560号、国際公開第2002/94880号、国際公開第2003/54216号、国際公開第2004/50895号、国際公開第2006/83971号、国際公開第2007/22157および国際公開第2011/038159号に記載されているDR5発現細胞でアポトーシスを誘導する抗DR5抗体は、本発明の抗体−薬物コンジュゲートの成分として使用され得る。さらに、レクサツムマブ、HGS−TR2J、アポマブ(Apomab)、ドロジツマブ、コナツムマブ(Conatumumab)およびLBY135と称される抗DR5抗体ならびにそれらの変異体もまた、本発明の抗体−薬物コンジュゲートの成分として使用され得る。しかしながら、このような成分として使用され得る抗体は、このような抗体がDR5タンパク質に対する結合能を有する場合には上記例に限定されない。
例えば、国際公開第98/51793号、国際公開第2001/83560号、国際公開第2002/94880号、国際公開第2003/54216号、国際公開第2004/50895号、国際公開第2006/83971号、国際公開第2007/22157および国際公開第2011/038159号に記載されているDR5発現細胞でアポトーシスを誘導する抗DR5抗体は、本発明の抗体−薬物コンジュゲートの成分として使用され得る。さらに、レクサツムマブ、HGS−TR2J、アポマブ(Apomab)、ドロジツマブ、コナツムマブ(Conatumumab)およびLBY135と称される抗DR5抗体ならびにそれらの変異体もまた、本発明の抗体−薬物コンジュゲートの成分として使用され得る。しかしながら、このような成分として使用され得る抗体は、このような抗体がDR5タンパク質に対する結合能を有する場合には上記例に限定されない。
本発明のリガンドユニットは、典型的には、DR5結合剤である。一群の実施形態では、リガンドユニットは、ヒト化B273に対応する重鎖アミノ酸配列(配列番号9)を含む。本明細書では、ヒト化B273は、hB273と略記される。hB273を生産する方法は、2011年10月27日に出願された(国際公開第2012/057288号として公開された)「A new anti−DR5 antibody」という標題の国際特許出願第PCT/JP2011/074866号(これは、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている。別の群の実施形態では、リガンドユニットは、カルボキシ末端リジン残基を欠くヒト化B273に対応する重鎖アミノ酸配列(すなわち、配列番号9のアミノ酸残基1〜451のアミノ酸配列を有する重鎖)を含む。カルボキシ末端からリジンまたはアルギニン残基を除去する翻訳後タンパク質プロセシングが、例えば、Harris,J.Chromatography(1995),705:129−134によって報告されている。別の群の実施形態では、リガンドユニットは、ヒト化B273に対応する軽鎖アミノ酸配列(配列番号10)を含む。さらに別の実施形態では、リガンドユニットは、配列番号9および10の重鎖および軽鎖アミノ酸配列の両方を含む。さらに別の実施形態では、リガンドユニットは、配列番号9のアミノ酸残基1〜451の重鎖アミノ酸配列および配列番号10の軽鎖アミノ酸配列の両方を含む。さらに別の実施形態では、リガンドユニットは、(a)配列番号11のアミノ残基1〜5からなるCDR1、配列番号12のアミノ酸残基1〜17からなるCDR2、および配列番号13のアミノ酸残基1〜13からなるCDR3を有する重鎖免疫グロブリンと;(b)配列番号14のアミノ残基1〜16からなるCDR1、配列番号15のアミノ酸残基1〜7からなるCDR2、および配列番号16のアミノ酸残基1〜9からなるCDR3を有する軽鎖免疫グロブリンとを含む。別の実施形態では、リガンドユニットは、配列番号9のアミノ酸残基1〜122を含むhB273の重鎖可変領域と、配列番号10のアミノ酸残基1〜114を含むhB273の軽鎖可変領域とを含む。
さらに、リガンドユニット(L)は、リンカーユニットの官能基と結合を形成し得る少なくとも1個の官能基を有する。天然に、化学的操作によって、または人為的操作によってリガンドユニットに存在し得る有用な官能基としては、限定されないが、スルフヒドリル(−SH)、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシ、炭水化物のアノマーヒドロキシル基およびカルボキシルが挙げられる。いくつかの実施形態では、リガンドユニットの官能基は、スルフヒドリル基である。スルフヒドリル基は、典型的には、溶媒接触可能スルフヒドリル基、例えば、システイン残基上の溶媒接触可能スルフヒドリル基である。スルフヒドリル基は、リガンドの分子内または分子間ジスルフィド結合の還元によって生成され得る。スルフヒドリル基はまた、2−イミノチオラン(トラウト試薬)または別のスルフヒドリル生成試薬を使用して、リガンドのリジン部分のアミノ基の反応によって生成され得る。
いくつかの実施形態では、1個以上のスルフヒドリル基が、例えば、アミノ酸置換によってリガンドユニット内に人為的に作製される。例えば、スルフヒドリル基をリガンドユニット内に導入し得る。いくつかの実施形態では、セリンもしくはスレオニンをシステイン残基にアミノ酸置換することによって、および/またはシステイン残基をリガンドユニット内に付加することによって(人為的なシステイン残基)、スルフヒドリル基を導入する。いくつかの実施形態では、システイン残基は、内部システイン残基である(すなわち、リガンド部分のN末端にもC末端にも位置しない)。
例示的な実施形態では、アミノ酸置換によって、システイン残基を(例えば、ダイアボディなどの抗体断片の)抗体重鎖可変領域または抗体軽鎖可変領域内に人為的に作製し得る。アミノ酸置換は、典型的には、フレームワーク領域内に導入され、可変領域のエピトープ結合面に対して遠位に位置する。例えば、アミノ酸置換は、エピトープ結合面またはCDRから少なくとも10Å、少なくとも20Åまたは少なくとも25Åであり得る。システイン残基の置換に適切な位置は、抗体可変領域の公知のまたは推定上の三次元構造物に基づいて決定され得る(一般には、Holliger and Hudson,2005,Nature BioTechnology 23(9):1126−1136を参照のこと)。例示的な実施形態では、セリンからシステインへのアミノ酸置換は、VH領域のアミノ酸84位および/またはVL領域のアミノ酸14位(Kabatら、Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th edition,(Bethesda,MD,NIH)1991のナンバリングシステムに従う)に導入される。
リガンドユニットに結合される薬物またはリンカーユニット−薬物ユニットの数を制御するために、アミノ酸置換によって、1個以上のシステイン残基を排除し得る。例えば、システインからセリン残基にアミノ酸置換することによって、免疫グロブリンヒンジ領域における溶媒接触可能システイン残基の数を減少させ得る。
いくつかの実施形態では、リガンドユニットは、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個または8個の、溶媒接触可能システイン残基を含有する。いくつかの実施形態では、リガンドユニットは、2個または4個の、溶媒接触可能システイン残基を含有する。
アッセイ
薬物またはリガンド薬物コンジュゲートが、細胞に対する細胞増殖抑制効果および/または細胞傷害効果を発揮するかを決定するための方法は公知である。一般に、リガンド薬物コンジュゲートの細胞傷害活性または細胞増殖抑制活性は、リガンド薬物コンジュゲートの標的タンパク質を発現する哺乳動物細胞を細胞培養培地中に曝露すること;細胞を約6時間〜約5日間培養すること;および細胞生存率を測定することによって測定され得る。細胞ベースのインビトロアッセイは、リガンド薬物コンジュゲートに関する生存率(増殖)、細胞傷害性およびアポトーシスの誘導(カスパーゼ活性化)を測定するのに使用され得る。
薬物またはリガンド薬物コンジュゲートが、細胞に対する細胞増殖抑制効果および/または細胞傷害効果を発揮するかを決定するための方法は公知である。一般に、リガンド薬物コンジュゲートの細胞傷害活性または細胞増殖抑制活性は、リガンド薬物コンジュゲートの標的タンパク質を発現する哺乳動物細胞を細胞培養培地中に曝露すること;細胞を約6時間〜約5日間培養すること;および細胞生存率を測定することによって測定され得る。細胞ベースのインビトロアッセイは、リガンド薬物コンジュゲートに関する生存率(増殖)、細胞傷害性およびアポトーシスの誘導(カスパーゼ活性化)を測定するのに使用され得る。
リガンド薬物コンジュゲートが細胞増殖抑制効果を発揮するかを決定するために、チミジン組み込みアッセイを使用してもよい。例えば、標的抗原を発現する癌細胞を、96ウェルプレートの1ウェル当たり細胞5,000個の密度で72時間培養し、72時間のうちの最後8時間の間に0.5μCiの3H−チミジンに曝露し得る。培養物の細胞への3H−チミジンの組み込みを、リガンド薬物コンジュゲートの存在または非存在下で測定する。
細胞傷害性を決定するために、壊死またはアポトーシス(プログラムされた細胞死)を測定し得る。壊死は、典型的には、原形質膜透過性の増加;細胞の膨張、および原形質膜の破裂を伴う。アポトーシスは、典型的には、膜小胞化(membrane blebbing)、細胞質の凝集、および内因性エンドヌクレアーゼの活性化を特徴とする。癌細胞に対するこれらの効果のいずれかの決定は、リガンド薬物コンジュゲートが癌の処置に有用であることを示す。
細胞生存率は、ニュートラルレッド、トリパンブルーまたはALAMAR(商標)ブルーなどの色素の細胞内取り込みを決定することによって測定され得る(例えば、Pageら、1993,Intl.J.Oncology 3:473−476を参照のこと)。このようなアッセイでは、色素を含有する培地中で細胞をインキュベートし、細胞を洗浄し、残った色素(これは、色素の細胞取り込みを示す)を分光測光法で測定する。タンパク質結合色素であるスルホローダミンB(SRB)もまた、細胞傷害性を測定するのに使用され得る(Skehanら、1990,J.Natl.Cancer Inst.82:1107−12)。
あるいは、死細胞ではなく生細胞を検出することによる哺乳動物細胞の生存および増殖についての定量的比色アッセイでは、MTTなどのテトラゾリウム塩を使用する(例えば、Mosmann,1983,J.Immunol.Methods 65:55−63を参照のこと)。
アポトーシスは、例えば、DNA断片化を測定することによって定量され得る。DNA断片化をインビトロで定量的に決定するための市販の測光法が利用可能である。TUNEL(これは、断片化されたDNAにおける標識ヌクレオチドの組み込みを検出する)およびELISAベースのアッセイを含むこのようなアッセイの例は、Biochemica,1999,no.2,pp.34−37(Roche Molecular Biochemicals)に記載されている。
アポトーシスはまた、細胞における形態的変化を測定することによって決定され得る。例えば、壊死と同様に、原形質膜の完全性の喪失は、特定の色素(例えば、蛍光色素、例えば、アクリジンオレンジまたはエチジウムブロミドなど)の取り込みを測定することによって決定され得る。アポトーシス細胞数を測定するための方法は、Duke and Cohen,Current Protocols in Immunology(Coliganら、eds.,1992,pp.3.17.1−3.17.16)によって記載されている。また、DNA色素(例えば、アクリジンオレンジ、エチジウムブロミドまたはヨウ化プロピジウム)で細胞を標識し、核内膜に沿ったクロマチン凝縮および辺縁化について細胞を観察し得る。アポトーシスを決定するために測定され得る他の形態的変化としては、例えば、細胞質凝集、膜小胞化の増大および細胞収縮が挙げられる。
アポトーシス細胞の存在は、培養物の結合した区画および「浮遊」区画の両方で測定され得る。例えば、上清を除去し、結合した細胞をトリプシン処理し、遠心分離洗浄工程(例えば、2000rpmで10分間)後に調製物を合わせ、(例えば、DNA断片化を測定することによって)アポトーシスを検出することによって、両区画を収集し得る(例えば、Piazzaら、1995,Cancer Research 55:3110−16を参照のこと)。
リガンド薬物コンジュゲートの効果は、動物モデルにおいて試験または確認され得る。癌の多くの確立された動物モデルは当業者に公知であり、これらのいずれかを使用して、リガンド薬物コンジュゲートの有効性をアッセイし得る。このようなモデルの非限定的な例は、以下に記載される。さらに、リガンド薬物コンジュゲートのインビボ有効性を試験するための小動物モデルは、ヒト腫瘍細胞系を適切な免疫欠損齧歯類系統(例えば、無胸腺ヌードマウスまたはSCIDマウス)に移植することによって作製され得る。
組成物および投与方法
様々な送達システムが公知であり、リガンド−薬物コンジュゲートを投与するのに使用され得る。導入方法としては、限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下の経路が挙げられる。投与は、例えば、注入またはボーラス注射によるものであり得る。特定の好ましい実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートの投与は、注入によるものである。非経口的投与は、好ましい投与経路である。
様々な送達システムが公知であり、リガンド−薬物コンジュゲートを投与するのに使用され得る。導入方法としては、限定されないが、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下の経路が挙げられる。投与は、例えば、注入またはボーラス注射によるものであり得る。特定の好ましい実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートの投与は、注入によるものである。非経口的投与は、好ましい投与経路である。
リガンド薬物コンジュゲートは、1つ以上の薬学的に適合性の成分を含む医薬組成物として投与され得る。例えば、医薬組成物は、典型的には、1つ以上の薬学的担体(例えば、滅菌液体、例えば、水および油、例えば、石油、動物、植物または合成起源の油、例えば、ラッカセイ油、大豆油、鉱油、ごま油など)を含む。医薬組成物が静脈内投与される場合、水がより典型的な担体である。食塩水溶液ならびにデキストロース水溶液およびグリセロール水溶液もまた、特に注射用溶液の液体担体として用いられ得る。適切な薬学的賦形剤は、当技術分野で公知である。組成物はまた、所望であれば、微量の湿潤剤もしくは乳化剤またはpH緩衝剤を含有し得る。適切な薬学的担体の例は、“Remington’s Pharmaceutical Sciences”by E.W.Martinに記載されている。製剤化は、投与様式に対応する。
典型的な実施形態では、医薬組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合した医薬組成物として、ルーチンな手順にしたがって製剤化される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張水性緩衝液の溶液である。必要である場合、医薬はまた、可溶化剤および注射部位での疼痛を和らげるための局所麻酔剤、例えば、リグノカインを含み得る。一般に、これらの成分は別個にまたは一緒に混合して、単位剤形、例えば、凍結乾燥粉末または無水濃縮物として、活性剤の量を示す密閉容器、例えば、アンプルまたはサシェで供給される。医薬が注入によって投与されるべきである場合、例えば、製薬グレードの滅菌水または滅菌食塩水を含有する注入ボトルで投薬され得る。医薬が注射によって投与される場合、注射用滅菌水または食塩水のアンプルは、例えば、成分が投与前に混合され得るように提供され得る。
特定の障害または症状の処置に有効な化合物の量は、障害または症状の性質に依存し、標準的な臨床技術によって決定され得る。さらに、最適な投与量範囲を同定するのを支援するために、インビトロアッセイまたはインビボアッセイが場合により用いられ得る。組成物に用いられるべき正確な用量はまた、投与経路および疾患または障害の重症度に依存し、施術者の判断および各患者の状況にしたがって決定されるべきである。
組成物は、適切な投与量が得られるように、有効量の化合物を含む。典型的には、この量は、組成物の重量に対して少なくとも約0.01%の化合物である。
静脈内投与のために、組成物は、動物の体重1kg当たり約0.01〜約100mgの化合物を含み得る。一態様では、組成物は、動物の体重1kg当たり約1〜約100mgの化合物を含み得る。別の態様では、投与される量は、体重1kg当たり約0.1〜約25mgの化合物の範囲である。
一般に、患者に投与される化合物の投与量は、典型的には、被験体の体重1kg当たり約0.01mg〜約100mgである。いくつかの実施形態では、患者に投与される投与量は、被験体の体重1kg当たり約0.01mg〜約15mgである。いくつかの実施形態では、患者に投与される投与量は、被験体の体重1kg当たり約0.1mg〜約15mgである。いくつかの実施形態では、患者に投与される投与量は、被験体の体重1kg当たり約0.1mg〜約20mgである。いくつかの実施形態では、投与される投与量は、被験体の体重1kg当たり約0.1mg〜約5mgまたは約0.1mg〜約10mgである。いくつかの実施形態では、投与される投与量は、被験体の体重1kg当たり約1mg〜約15mgである。いくつかの実施形態では、投与される投与量は、被験体の体重1kg当たり約1mg〜約10mgである。
医薬組成物は、一般に、米国食品医薬品局のすべての製造管理および品質管理に関する基準(GMP)の規制に全面的に遵守した実質的に等張性の滅菌物として製剤化される。
リガンド薬物コンジュゲートを使用する治療方法
リガンド薬物コンジュゲートは、腫瘍細胞もしくは癌細胞の増大を阻害するために、または動物における癌を処置するために有用である。リガンド薬物コンジュゲートは、動物の癌を処置するために様々な状況に応じて使用され得る。
リガンド薬物コンジュゲートは、腫瘍細胞もしくは癌細胞の増大を阻害するために、または動物における癌を処置するために有用である。リガンド薬物コンジュゲートは、動物の癌を処置するために様々な状況に応じて使用され得る。
リガンド薬物コンジュゲートで処置され得る特定の種類の癌としては、限定されないが、(1)固形腫瘍、例えば限定されないが、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫(endotheliosarcoma)、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、膵臓癌、骨癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、食道癌、胃癌、口腔癌、鼻癌、咽喉癌、扁平上皮癌腫、基底細胞癌腫、腺癌、汗腺癌腫、脂腺癌腫、乳頭状癌腫、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、肝癌、胆管癌腫、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、子宮癌、精巣癌、小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、肺癌、上皮癌腫、神経膠腫、膠芽腫、多形性星細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、希突起神経膠腫、髄膜腫、皮膚癌、メラノーマ、神経芽細胞腫および網膜芽腫;(2)血液由来の癌、例えば限定されないが、急性リンパ芽球性白血病「ALL」、急性リンパ芽球性B細胞白血病、急性リンパ芽球性T細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病「AML」、急性前骨髄球性白血病「APL」、急性単芽球性白血病、急性赤白血病性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ性白血病、急性未分化型白血病、慢性骨髄性白血病「CML」、慢性リンパ性白血病「CLL」、ヘアリー細胞白血病、多発性骨髄腫、急性および慢性の白血病、例えば、リンパ芽球性骨髄性白血病およびリンパ性骨髄性白血病;ならびに(3)リンパ腫、例えば、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病および真性多血症挙げられる。いくつかの実施形態では、癌は、DR5陽性癌またはDR5発現癌である。
いくつかの実施形態では、本発明は、癌を処置する方法であって、細胞傷害剤に共有結合したDR5結合剤を含む有効量のリガンド薬物コンジュゲートまたはその医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、リガンド薬物コンジュゲートは、上記式Iを含む。有効量のリガンド薬物コンジュゲートは、処置される被験体、苦痛の重症度および投与様式に依存する。有効量の決定は、特に、本明細書で提供される詳細な開示に鑑みれば、当業者の能力の十分に範囲内である。一般に、低用量または少量を最初に投与し、次いで、毒性副作用が最小であるかまたは毒性副作用を伴わずに所望の治療効果が処置被験体で観察されるまで、投与される用量または投与量を徐々に増加させることによって、リガンド薬物コンジュゲートの効果的な量または有効量を決定する。本発明の投与に適切な用量および投与スケジュールを決定するための適用可能な方法は、例えば、Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics,11th Ed.,Brunton,Lazo and Parker,Eds.,McGraw−Hill(2006)、およびRemington:The Science and Practice of Pharmacy,21st Ed.,Gennaro,Ed.,Lippencott Williams&Wilkins(2003)(これらは両方とも、参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている。
DR5抗体薬物コンジュゲートのコンジュゲーション
hB273抗体薬物コンジュゲートを以下のように調製した。配列番号9のアミノ酸配列、またはカルボキシ末端リジン残基を欠く配列番号9のアミノ酸配列(すなわち、配列番号9のアミノ酸残基1〜451のアミノ酸配列)に対応する重鎖を含み、配列番号10のアミノ酸配列に対応する軽鎖を含むhB273抗体をリガンドユニットとして使用した。濃度範囲5〜25mg/mLのhB273抗体溶液を37℃で前平衡化し、次いで、5〜15%(v/v)1Mリン酸カリウム(pH7.4)を追加してpHを7.5〜8.0に上げた。また、最終濃度1mMでDTPAを追加した。抗体1モル当たり2〜3モル当量のTCEPを追加することによって、抗体を部分的に還元した。平均4個の遊離チオールを有する抗体を得るのに必要なTCEPの量は、グラムスケールの還元およびコンジュゲーションの前にスモールスケールの還元およびコンジュゲーション反応を数回行うことによって経験的に決定した。1〜2時間の還元期間の後、抗体溶液を22℃に冷却し、次いで、10〜20mMのDMSO原液からの4〜6モル当量の薬物リンカー(例えば、mc−vc−MMAFまたはmc−vc−MMAEまたはmc−MMAF)で処置した。薬物−リンカーストックを15分間追加した。さらなるDMSOを入れて、混合物の総DMSOを体積で15%にした。薬物−リンカーの追加が終了した後、反応混合物をさらに30分間撹拌してから、追加した薬物−リンカー1モル当たり5倍モル過剰のN−アセチルシステインで処置した。クエンチした後、10ダイアボリューム(diavolumes)のPBSを使用する一定体積のダイアフィルトレーションによって、残った遊離薬物および他の工程不純物を除去した。以下の抗体薬物コンジュゲートを作製した:hB273にmc−vc−MMAEがコンジュゲートした抗体薬物コンジュゲート(「hB273−vc−MMAE」)およびhB273にmc−MMAFがコンジュゲートした抗体薬物コンジュゲート(「hB273−mc−MMAF」)。得られた抗体薬物コンジュゲートは、抗体1個当たり約3.5〜4.5個の薬物−リンカーユニットの平均薬物負荷を有していた(すなわち、約3.5〜4.5の平均p値を有していた)。平均薬物負荷または平均p値は、当技術分野で公知の方法にしたがって測定することができる。非限定的な例として、p値は、Hamblettら、Clinical Cancer Research 10:7063−7070(2004)(これは、参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている方法にしたがって測定することができる。一方法では、疎水性相互作用クロマトグラフィー−高速液体クロマトグラフィーは、例えば、エーテル−5PWカラム(Tosoh Bioscience,Montgomeryville,PA)を使用して、抗体薬物コンジュゲートを含む試料に対して実施される。抗体および薬物は異なる最大吸光度を有するので、ピークスペクトルを重ね合わせて平均薬物負荷を決定することによって、抗体1個当たりの薬物ユニット数を特定および定量することが可能である。別の方法では、抗体および薬物が異なる最大吸光度(λmax)を有する場合、p値は、紫外可視吸収分光法(UV−VIS)によって測定される。測定された全吸光度(薬物および抗体の吸光度)と、抗体および薬物の吸光係数とを使用することによって、抗体および薬物の濃度を決定することができ、この濃度から薬物と抗体とのモル比を計算することができる。
hB273抗体薬物コンジュゲートを以下のように調製した。配列番号9のアミノ酸配列、またはカルボキシ末端リジン残基を欠く配列番号9のアミノ酸配列(すなわち、配列番号9のアミノ酸残基1〜451のアミノ酸配列)に対応する重鎖を含み、配列番号10のアミノ酸配列に対応する軽鎖を含むhB273抗体をリガンドユニットとして使用した。濃度範囲5〜25mg/mLのhB273抗体溶液を37℃で前平衡化し、次いで、5〜15%(v/v)1Mリン酸カリウム(pH7.4)を追加してpHを7.5〜8.0に上げた。また、最終濃度1mMでDTPAを追加した。抗体1モル当たり2〜3モル当量のTCEPを追加することによって、抗体を部分的に還元した。平均4個の遊離チオールを有する抗体を得るのに必要なTCEPの量は、グラムスケールの還元およびコンジュゲーションの前にスモールスケールの還元およびコンジュゲーション反応を数回行うことによって経験的に決定した。1〜2時間の還元期間の後、抗体溶液を22℃に冷却し、次いで、10〜20mMのDMSO原液からの4〜6モル当量の薬物リンカー(例えば、mc−vc−MMAFまたはmc−vc−MMAEまたはmc−MMAF)で処置した。薬物−リンカーストックを15分間追加した。さらなるDMSOを入れて、混合物の総DMSOを体積で15%にした。薬物−リンカーの追加が終了した後、反応混合物をさらに30分間撹拌してから、追加した薬物−リンカー1モル当たり5倍モル過剰のN−アセチルシステインで処置した。クエンチした後、10ダイアボリューム(diavolumes)のPBSを使用する一定体積のダイアフィルトレーションによって、残った遊離薬物および他の工程不純物を除去した。以下の抗体薬物コンジュゲートを作製した:hB273にmc−vc−MMAEがコンジュゲートした抗体薬物コンジュゲート(「hB273−vc−MMAE」)およびhB273にmc−MMAFがコンジュゲートした抗体薬物コンジュゲート(「hB273−mc−MMAF」)。得られた抗体薬物コンジュゲートは、抗体1個当たり約3.5〜4.5個の薬物−リンカーユニットの平均薬物負荷を有していた(すなわち、約3.5〜4.5の平均p値を有していた)。平均薬物負荷または平均p値は、当技術分野で公知の方法にしたがって測定することができる。非限定的な例として、p値は、Hamblettら、Clinical Cancer Research 10:7063−7070(2004)(これは、参照により本明細書に組み込まれる)に記載されている方法にしたがって測定することができる。一方法では、疎水性相互作用クロマトグラフィー−高速液体クロマトグラフィーは、例えば、エーテル−5PWカラム(Tosoh Bioscience,Montgomeryville,PA)を使用して、抗体薬物コンジュゲートを含む試料に対して実施される。抗体および薬物は異なる最大吸光度を有するので、ピークスペクトルを重ね合わせて平均薬物負荷を決定することによって、抗体1個当たりの薬物ユニット数を特定および定量することが可能である。別の方法では、抗体および薬物が異なる最大吸光度(λmax)を有する場合、p値は、紫外可視吸収分光法(UV−VIS)によって測定される。測定された全吸光度(薬物および抗体の吸光度)と、抗体および薬物の吸光係数とを使用することによって、抗体および薬物の濃度を決定することができ、この濃度から薬物と抗体とのモル比を計算することができる。
上記プロトコールはまた、hB273にmc−vc−MMAFがコンジュゲートした抗体薬物コンジュゲート(「hB273−vc−MMAF」)を作製するのに使用することができる。抗体1個当たり約2個の薬物−リンカーユニットの平均薬物負荷を有する(すなわち、約2の平均p値を有する)抗体薬物コンジュゲートを調製するためには、TCEPの量を50%減少させることによって、上記プロトコールを修正する。薬物リンカーの量も50%減少させる。対応する抗体薬物コンジュゲートをhB273−vc−MMAE(2)、hB273−mc−MMAF(2)またはhB273−vc−MMAF(2)と略記する。
hTRA−8にmc−MMAFがコンジュゲートした抗体薬物コンジュゲート(「hTRA−8−mc−MMAF」)を以下のように調製した。配列番号1のアミノ酸配列、またはカルボキシ末端リジン残基を欠く配列番号1のアミノ酸配列(すなわち、配列番号1のアミノ酸残基1〜448のアミノ酸配列)に対応する重鎖を含み、配列番号2のアミノ酸配列に対応する軽鎖を含むhTRA−8抗体をリガンドユニットとして使用した。このhTRA−8抗体は、ティガツズマブと称される。7.6mg/mLのhTRA−8抗体溶液を37℃で前平衡化し、次いで、15%体積の500mMホウ酸ナトリウム(pH8.0)を追加して、pHを7.5〜8.0に上げる。この溶液はまた、1mM DTPAを含有する。抗体1モル当たり2.6当量のTCEPを追加し、37℃で撹拌することによって、抗体を部分的に還元する。28分後、還元した抗体の溶液を氷上に置き、次いで、20.5mM DMSO溶液として4.8〜4.9モル当量(抗体に対して)の薬物リンカー(例えば、mc−vc−MMAFまたはmc−vc−MMAEまたはmc−MMAF)で迅速に処置する。さらなるDMSOを入れて、混合物のDMSOを体積で10%にする。反応混合物を氷上で約90分間撹拌してから、5倍モル過剰のN−アセチルシステイン(mc−vc−MMAFに対して)で処置する。タンジェント流ろ過(最初に約10mg/mLに濃縮し、次いで、約10ダイアボリュームのPBSでダイアフィルトレーションする)によって、コンジュゲートを単離する。得られた抗体薬物コンジュゲートは、抗体1個当たり約4個の薬物−リンカーユニットの平均薬物負荷を有していた。
いくつかの腫瘍細胞系に対するhB273 ADCのインビトロ細胞傷害活性
hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを培養培地で希釈して2000ng/mLとし、これに4000ng/mLのヤギ抗ヒトIgG Fc抗体(MP Biomedicals)を入れた。これらの溶液を培養培地で系列希釈し、50μL/ウェルで96ウェルマイクロプレートに二連で追加した。インビトロ研究で使用した細胞系は、A375(ヒトメラノーマ)、NCI−H2122(ヒト肺腺癌)、HCT15(ヒト結腸直腸腺癌)、SK−OV−3(ヒト卵巣腺癌)、LoVo(ヒト結腸直腸腺癌)、A2780(ヒト卵巣癌腫)、A549(ヒト肺腺癌)Caki−2(ヒト腎細胞癌腫)、HCT116(ヒト結腸直腸腺癌)、NCI−H1975(ヒト肺腺癌)、MDA−MB−231(ヒト乳腺癌)およびU−87MG(ヒト膠芽腫)であった。培養培地を用いて、細胞懸濁液を生細胞4.0×104個/mLに調整し、50μL/ウェル(=生細胞2×103個/ウェル)でウェルに追加した。ブランクウェルには細胞を播種しなかった。CO2インキュベーターで72時間インキュベートした後、製造業者の説明書にしたがってCellTiter Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega)によって、ATPの量を検出した。マイクロプレートリーダー(Mithras LB940,Berthold Technologies)によって、発光を測定した。以下の式:
生存率(%)=100×(T−B)/(C−B)
T:試験ウェルの発光
C:未処置細胞を含むウェルの平均発光
B:ブランクウェルの平均発光
にしたがって、各ウェルの細胞生存率を計算した。
hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを培養培地で希釈して2000ng/mLとし、これに4000ng/mLのヤギ抗ヒトIgG Fc抗体(MP Biomedicals)を入れた。これらの溶液を培養培地で系列希釈し、50μL/ウェルで96ウェルマイクロプレートに二連で追加した。インビトロ研究で使用した細胞系は、A375(ヒトメラノーマ)、NCI−H2122(ヒト肺腺癌)、HCT15(ヒト結腸直腸腺癌)、SK−OV−3(ヒト卵巣腺癌)、LoVo(ヒト結腸直腸腺癌)、A2780(ヒト卵巣癌腫)、A549(ヒト肺腺癌)Caki−2(ヒト腎細胞癌腫)、HCT116(ヒト結腸直腸腺癌)、NCI−H1975(ヒト肺腺癌)、MDA−MB−231(ヒト乳腺癌)およびU−87MG(ヒト膠芽腫)であった。培養培地を用いて、細胞懸濁液を生細胞4.0×104個/mLに調整し、50μL/ウェル(=生細胞2×103個/ウェル)でウェルに追加した。ブランクウェルには細胞を播種しなかった。CO2インキュベーターで72時間インキュベートした後、製造業者の説明書にしたがってCellTiter Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega)によって、ATPの量を検出した。マイクロプレートリーダー(Mithras LB940,Berthold Technologies)によって、発光を測定した。以下の式:
生存率(%)=100×(T−B)/(C−B)
T:試験ウェルの発光
C:未処置細胞を含むウェルの平均発光
B:ブランクウェルの平均発光
にしたがって、各ウェルの細胞生存率を計算した。
図1〜12は、本発明のhB273リガンド薬物コンジュゲートを用いて評価した12種の細胞系の結果を示す。図に示されているように、hB273−vcMMAEおよびhB273−mcMMAFは、LoVo(図5)、A549(図7)およびCaki−2(図8)などのいくつかのヒト腫瘍細胞系に対してhB273よりも強力な細胞傷害活性を示した。さらに、hB273−vcMMAEおよびhB273−mcMMAFは、このアッセイに使用したすべての腫瘍細胞系に対してhTRA−8−mcMMAFよりも強力な細胞傷害活性を示した。
BIACoreによる抗DR5 ADCの結合親和性の決定
DR5細胞外ドメインタンパク質発現ベクターの生産:配列番号17のヒトDR5配列のアミノ酸残基1〜130からなるDR5の領域を発現するベクター(本明細書では以下、「sDR5」と称される)を構築するために、sDR5を増幅するためのプライマーセット:
DR5 Ndefw:5’−gtggcatatggctctgatcacccaacaa−3’(配列番号18)および
DR5 Xhorv:5’−cgcctcgagtgattctttgtggacaca−3’(配列番号19)
を使用して、ヒトDR5細胞外ドメインをコードするcDNAを鋳型として使用して、PCR反応を実施した。得られたPCR産物をNdeIおよびXhoIで切断し、pET21b(+)(Novagen,Inc.製)のNdeI/XhoI部位にクローニングした(本明細書では以下、「pET21b(+)−sDR5」と略記する)。「pET21b(+)−sDR5」によって発現された組換えDR5タンパク質は、本明細書では「rsDR5」(配列番号20)と称される。
DR5細胞外ドメインタンパク質発現ベクターの生産:配列番号17のヒトDR5配列のアミノ酸残基1〜130からなるDR5の領域を発現するベクター(本明細書では以下、「sDR5」と称される)を構築するために、sDR5を増幅するためのプライマーセット:
DR5 Ndefw:5’−gtggcatatggctctgatcacccaacaa−3’(配列番号18)および
DR5 Xhorv:5’−cgcctcgagtgattctttgtggacaca−3’(配列番号19)
を使用して、ヒトDR5細胞外ドメインをコードするcDNAを鋳型として使用して、PCR反応を実施した。得られたPCR産物をNdeIおよびXhoIで切断し、pET21b(+)(Novagen,Inc.製)のNdeI/XhoI部位にクローニングした(本明細書では以下、「pET21b(+)−sDR5」と略記する)。「pET21b(+)−sDR5」によって発現された組換えDR5タンパク質は、本明細書では「rsDR5」(配列番号20)と称される。
DR5細胞外ドメインタンパク質(rsDR5)の生産:発現プラスミドpET21b(+)−sDR5でEscherichia coli Origami B(DE3)(Novagen,Inc.製)を形質転換し、100μg/mlアンピシリン(Sigma Co.,Ltd.製)および15μg/mlカナマイシン(Wako Pure Chemical Industries,Ltd.製)を補充した2−YT培地中で培養し、0.5mM IPTGを追加することによってDR5の部分タンパク質の発現を誘導した。6000rpmで20分間遠心分離することによって細胞を収集し、結合緩衝液(50mMトリス−HCl pH7.5、300mM NaCl)に懸濁し、続いて氷上で超音波均質化した。得られたホモジネートを25,000rpmで20分間遠心分離した。上清を回収し、Ni−NTA(Invitrogen,Inc.製)に適用した。結合緩衝液で試料を洗浄した後、溶出緩衝液(50mMトリス−HCl pH7.5、300mM NaClおよび300mMイミダゾール)を用いて、溶出を実施した。透析緩衝液(50mMトリス−HCl pH8.0、20mM NaCl)を用いて溶出試料を透析し、MONO Qに適用し、溶出緩衝液(50mMトリス−HCl pH8.0、1M NaCl)を用いて勾配溶出を実施した。PBSを溶媒として使用してゲルろ過カラムクロマトグラフィー(GE Healthcare Bio−Sciences Co.,Ltd.製のSuperdex75 16/60)によって、溶出試料をさらに精製した。この方法によって得られた組換えタンパク質の濃度をUV280nmで測定した(モル吸光定数:14855)。
Biacoreを使用した結合活性の測定:BIAcore3000機器(Biacore)を使用して、捕捉hB273、hB273−vc−MMAEまたはhB273−mc−MMAFに結合する系列希釈の組換え可溶性DR5タンパク質(rsDR5)を用いて、速度定数konおよびkoffを決定した。ヒト抗体捕捉キット(GE Healthcare Bio−Sciences AB)を使用して、標準的なEDC−NHSアミンカップリング化学反応によってCM5センサーチップ(Biacore)上に共有結合的に固定化された抗ヒトIgG(Fc)抗体によって、hB273、hB273−vc−MMAEまたはhB273−mc−MMAFを捕捉した。抗ヒトIgG(Fc)を直接カップリングする場合、約1500〜2000RUのHBS−EP+(10mM HEPES緩衝液、pH7.4、0.15M NaCl、3mM EDTAおよび0.05%界面活性剤P20)を用いて、CM5センサーチップおよび参照フローセルをコーティングした。hB273、hB273−vc−MMAEまたはhB273−mc−MMAF(0.5〜1μg/ml)を流量10μl/分で1分間ロードし、次いで、濃度範囲0.3〜85nMのrsDR5を使用して流量30μl/分で5分間、続いて5分間の解離期を行うことによって、反応速度測定を実施した。再生のために、3M MgCl2を流量10μl/分で30秒間ロードした。BIA評価ソフトウェア3.1(Biacore)を使用してすべてのセンサーグラム(sensogram)をグローバルフィッティングして、解離定数KD(KD=koff/kon)を決定した。結果を以下の表1に示す:
インビボ抗腫瘍効果−方法
5〜6週齢の特定病原体不在雌性および雄性CAnN.Cg−Foxn1nu/CrlCrljマウス(ヌードマウス)をCharles River Laboratories Japan Inc.から購入し、それらが6〜8週齢に達したら使用した。4〜6匹のマウスを滅菌ケージに一緒に収容し、特定病原体不在条件下で維持した。実験室において、環境条件を人工照明12時間(8:00〜20:00)の温度23℃および湿度55%に設定した。FR−2飼料(Funabashi Farm Co.,Ltd.)をマウスに給餌し、塩素(5〜15ppm)を含む水を自由に摂取させた。
5〜6週齢の特定病原体不在雌性および雄性CAnN.Cg−Foxn1nu/CrlCrljマウス(ヌードマウス)をCharles River Laboratories Japan Inc.から購入し、それらが6〜8週齢に達したら使用した。4〜6匹のマウスを滅菌ケージに一緒に収容し、特定病原体不在条件下で維持した。実験室において、環境条件を人工照明12時間(8:00〜20:00)の温度23℃および湿度55%に設定した。FR−2飼料(Funabashi Farm Co.,Ltd.)をマウスに給餌し、塩素(5〜15ppm)を含む水を自由に摂取させた。
すべての研究において、担腫瘍マウスを選択し、腫瘍体積に基づいて実験群に分けた。ヌードマウスで腫瘍を確立した後、デジタルキャリパー(CD15−CX,Mitutoyo Corp.)を用いて、すべての担腫瘍マウスにおける腫瘍の長さおよび幅(mm)を小数第二位まで測定した。動物実験データのためのSankyoマネジメントシステム(SMAD,JMACSOFT Corp.)において、データを自動的に記録した。以下の式にしたがって、SMADにおいて各マウスの腫瘍体積を自動的に計算した。
腫瘍体積(mm3)=1/2×長さ×幅2
腫瘍体積(mm3)=1/2×長さ×幅2
腫瘍体積を丸めて整数にし、丸めた腫瘍体積をさらなる分析に使用した。腫瘍体積に基づいて、スチューデント化残差が絶対値で最大のマウスを除外することによって、一定数の担腫瘍マウスを選択した。腫瘍体積を使用した乱塊法によるSMADを用いて、選択したマウスを実験群に分けた。グルーピングの後、デジタルキャリパーを用いて、各マウスにおける腫瘍の長さおよび幅を週1回または2回測定した。各群の平均腫瘍体積および標準誤差(SE)を計算し、丸めて整数にし、各マウスの丸めた腫瘍体積をSMADで使用した。また、丸めた腫瘍体積を使用したSMADでは、以下の式にしたがって各測定日の腫瘍成長阻害(TGI、%)を計算し、丸めて整数にした。
TGI(%)=(1−T/C)×100
T:薬物処置群の平均腫瘍体積(mm3)
C:未処置群の平均腫瘍体積(mm3)
TGI(%)=(1−T/C)×100
T:薬物処置群の平均腫瘍体積(mm3)
C:未処置群の平均腫瘍体積(mm3)
hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを食塩水で希釈し、マウスの体重1kg当たり10mLの体積で担腫瘍ヌードマウスに投与した。
各ヒト腫瘍異種移植研究の詳細な手順は以下のとおりである:
A375
ヒトメラノーマ細胞系A375は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、5×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。14日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。14日目、21日目および28日目に、3mg/kgのhB273および1mg/kgのhB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFをマウスに静脈内投与した。
ヒトメラノーマ細胞系A375は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、5×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。14日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。14日目、21日目および28日目に、3mg/kgのhB273および1mg/kgのhB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFをマウスに静脈内投与した。
A2780
ヒト卵巣癌腫細胞系A2780は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、5×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。11日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。11日目、18日目および25日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
ヒト卵巣癌腫細胞系A2780は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、5×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。11日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。11日目、18日目および25日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
Caki−2
ヒト腎細胞癌腫細胞系Caki−2は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、固形腫瘍片(5×5×5mm3)を雄性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。18日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=8)。18日目、25日目および32日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
ヒト腎細胞癌腫細胞系Caki−2は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、固形腫瘍片(5×5×5mm3)を雄性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。18日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=8)。18日目、25日目および32日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
HCT−116
ヒト結腸直腸腺癌細胞系HCT−116は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、6×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。11日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。11日目、18日目および25日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
ヒト結腸直腸腺癌細胞系HCT−116は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、6×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。11日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。11日目、18日目および25日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
HCT−15
ヒト結腸直腸腺癌細胞系HCT−15は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、6×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。9日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。9日目、16日目および23日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
ヒト結腸直腸腺癌細胞系HCT−15は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、6×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。9日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。9日目、16日目および23日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
LoVo
ヒト結腸直腸腺癌細胞系LoVoは、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、固形腫瘍片(5×5×5mm3)を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。10日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=8)。10日目、17日目および24日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
ヒト結腸直腸腺癌細胞系LoVoは、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、固形腫瘍片(5×5×5mm3)を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。10日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=8)。10日目、17日目および24日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
NCI−H1299
ヒト肺癌腫細胞系NCI−H1299は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、4×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。14日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。14日目、21日目および28日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
ヒト肺癌腫細胞系NCI−H1299は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、4×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。14日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。14日目、21日目および28日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
NCI−H1975
ヒト肺腺癌細胞系NCI−H975は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、3×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。13日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。13日目、20日目および27日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
ヒト肺腺癌細胞系NCI−H975は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、3×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。13日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。13日目、20日目および27日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
NCI−H2122
ヒト肺腺癌細胞系NCI−H2122は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、3×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。15日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。15日目、22日目および29日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを1mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
ヒト肺腺癌細胞系NCI−H2122は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、3×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。15日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6)。15日目、22日目および29日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを1mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
SK−OV−3
ヒト卵巣腺癌細胞系SK−OV−3は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、固形腫瘍片(5×5×5mm3)を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。14日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=10)。14日目、21日目および28日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
ヒト卵巣腺癌細胞系SK−OV−3は、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、固形腫瘍片(5×5×5mm3)を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。14日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=10)。14日目、21日目および28日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
U−87MG
ヒト膠芽腫細胞系U−87MGは、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、5×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。7日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6または7)。7日目、14日目および21日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
ヒト膠芽腫細胞系U−87MGは、American Type Cell Collection(ATCC)から購入した。0日目に、5×106個の細胞を雌性ヌードマウスの右脇腹に皮下接種した。7日目に、担腫瘍ヌードマウスを実験群に分けた(n=6または7)。7日目、14日目および21日目に、hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAFを3mg/kgの用量でマウスに静脈内投与した。
インビボ抗腫瘍効果−結果
Caki−2異種移植モデル(図15)では、抗体(hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAF)はいずれも、いかなる抗腫瘍活性も示さなかった。A375(図13)、A2780(図14)、HCT116(図16)、LoVo(図18)、NCI−H1299(図19)、NCI−H1975(図20)、SK−OV−3(図22)およびU−87MG(図23)の異種移植モデルでは、hB273−vcMMAEおよびhB273−mcMMAFの両方が、hB273よりも強力な抗腫瘍効果を示した。HCT−15(図17)およびNCI−H2122(図21)異種移植モデルでは、hB273−mcMMAFの抗腫瘍活性はhB273のものと同程度に有効であったのに対して、これらのモデルでは、hB273−vcMMAEの抗腫瘍活性はhB273のものよりも有効性が低かった。これらの結果は、hB273リガンド薬物コンジュゲートがhB273よりも強力な抗腫瘍効果を有することを実証している。
Caki−2異種移植モデル(図15)では、抗体(hB273、hB273−vcMMAE、hB273−mcMMAFおよびhTRA−8−mcMMAF)はいずれも、いかなる抗腫瘍活性も示さなかった。A375(図13)、A2780(図14)、HCT116(図16)、LoVo(図18)、NCI−H1299(図19)、NCI−H1975(図20)、SK−OV−3(図22)およびU−87MG(図23)の異種移植モデルでは、hB273−vcMMAEおよびhB273−mcMMAFの両方が、hB273よりも強力な抗腫瘍効果を示した。HCT−15(図17)およびNCI−H2122(図21)異種移植モデルでは、hB273−mcMMAFの抗腫瘍活性はhB273のものと同程度に有効であったのに対して、これらのモデルでは、hB273−vcMMAEの抗腫瘍活性はhB273のものよりも有効性が低かった。これらの結果は、hB273リガンド薬物コンジュゲートがhB273よりも強力な抗腫瘍効果を有することを実証している。
A2780(図14)、HCT116(図16)、LoVo(図18)、NCI−H1299(図19)、NCI−H1975(図20)、NCI−H2122(図21)、SK−OV−3(図22)およびU−87MG(図23)の異種移植モデルでは、hB273−vcMMAEおよびhB273−mcMMAFの両方が、hTRA−8−mcMMAFよりも強力な抗腫瘍効果を示した。A375(図13)およびHCT−15(図17)異種移植モデルでは、hB273−mcMMAFはhTRA−8−mcMMAFよりも有効であった。A375異種移植モデル(図13)では、hTRA−8−mcMMAFで処置した6匹のマウスうちの1匹が48日目において触知可能な腫瘍を有していなかったのに対して、hB273−mcMMAFで処置したマウスはすべて(n=6)48日目において触知可能な腫瘍を有していなかった。これらの結果は、hB273リガンド薬物コンジュゲートがhTRA−8リガンド薬物コンジュゲートよりも強力な抗腫瘍効果を有することを実証している。
本発明は、本明細書に記載される具体的な実施形態によって範囲が限定されるものではない。当業者であれば、本明細書に記載したものに加えて本発明の様々な改変が前述の説明および添付の図面から明らかになる。このような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることを意図する。特に文脈上明らかではない限り、本発明の任意の工程、要素、実施形態、特徴または態様を任意の他のものと組み合わせて使用することができる。本出願で言及されているすべての特許出願、科学刊行物、アクセッション番号などは、まるで個々に示されているのと同程度に、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
Claims (22)
- DR5を発現する標的細胞に対する特異性を有する式:
L−(LU−D)p (I)
(式中、
Lは、(a)配列番号11のアミノ残基1〜5からなるCDR1、配列番号12のアミノ酸残基1〜17からなるCDR2、および配列番号13のアミノ酸残基1〜13からなるCDR3を有する重鎖免疫グロブリンと;(b)配列番号14のアミノ残基1〜16からなるCDR1、配列番号15のアミノ酸残基1〜7からなるCDR2、および配列番号16のアミノ酸残基1〜9からなるCDR3を有する軽鎖免疫グロブリンとを含む抗DR5抗体であるリガンドユニットであり;および
(LU−D)は、リンカーユニット−薬物ユニット部分であり、ここで、
LUは、リンカーユニットであり、および
Dは、薬物ユニットであり、ここで、該薬物ユニットは、オーリスタチンであり;および
下付き文字pは、1〜20の整数である)またはその薬学的に許容され得る塩を有するリガンド薬物コンジュゲート。 - 前記オーリスタチンが、オーリスタチンE、AEB、AEVB、AFP、MMAFまたはMMAEである、請求項1に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
- Wwがバリン−シトルリンである、請求項3に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
- 前記抗DR5抗体が、配列番号9のアミノ酸残基1〜122を含む重鎖可変領域と、配列番号10のアミノ酸残基1〜114を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項1に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
- 前記抗DR5抗体が、配列番号9のアミノ残基1〜452からなる重鎖と、配列番号10のアミノ酸残基1〜219からなる軽鎖とを含む、請求項1に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
- 前記抗DR5抗体が、配列番号9のアミノ残基1〜451からなる重鎖と、配列番号10のアミノ酸残基1〜219からなる軽鎖とを含む、請求項1に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
- pが1〜8である、請求項1に記載のリガンド薬物コンジュゲート。
- 薬学的に許容され得る賦形剤と混合された請求項1〜9のいずれかに記載のリガンド薬物コンジュゲートを含む、医薬組成物。
- 平均p値が1〜20である請求項1〜9のいずれかに記載のリガンド薬物コンジュゲートの混合物を含む、組成物。
- 前記平均p値が約3.5〜約4.5である、請求項11に記載の組成物。
- 請求項1〜9のいずれかに記載のリガンド薬物コンジュゲートを有効成分として含む、抗腫瘍剤。
- DR5タンパク質を発現する癌を処置する方法であって、有効量の請求項1〜9のいずれかに記載のリガンド薬物コンジュゲートを、癌の処置を必要とする被験体に投与することを含む、方法。
- DR5タンパク質を発現する前記癌が、メラノーマ、結腸直腸癌、非小細胞肺癌腫、子宮癌、膵臓癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌および血液癌からなる群より選択される、請求項14に記載の方法。
- DR5タンパク質を発現する前記癌が膵臓癌である、請求項15に記載の方法。
- DR5タンパク質を発現する前記癌がメラノーマである、請求項15に記載の方法。
- DR5タンパク質を発現する前記癌が乳癌である、請求項15に記載の方法。
- DR5タンパク質を発現する前記癌が卵巣癌である、請求項15に記載の方法。
- DR5タンパク質を発現する前記癌が結腸直腸癌である、請求項15に記載の方法。
- DR5タンパク質を発現する前記癌が腎臓癌である、請求項15に記載の方法。
- DR5タンパク質を発現する前記癌が膠芽腫である、請求項15に記載の方法。
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