EA020530B1 - Борсодержащие молекулы небольшого размера - Google Patents

Abstract

В настоящем изобретении предложены новые соединения формулыгде С* является стереоцентром, имеющим конфигурацию, выбранную из (R) или (S); и Rвыбран из Н и -O(CRR)R, где R, R, а и Rимеют значения, определенные в описании изобретения; фармацевтические композиции для лечения заболевания, связанного с инфекцией, вызванной грамотрицательными бактериями, содержащие указанные соединения; а также способы ингибирования лейцил-тРНК-синтетазы, предотвращения роста бактерии и уничтожения бактерии с использованием указанных соединений.

Description

Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки на патент США 60/945294, поданной 20 июня 2007 г., и предварительной заявки на патент США 61/041178, поданной 13 марта 2008 г., содержание каждой из которых в полном объеме включено в настоящее описание посредством ссылки для всех целей.

Уровень техники

Повсеместное увеличение устойчивости бактерий и других микроорганизмов к антибиотикам и противомикробным препаратам представляет собой, в целом, значительную угрозу. Поступление огромных количеств противомикробных препаратов в экосферу на протяжении последних 60 лет оказывало мощное селективное воздействие и привело к появлению и распространению патогенных микроорганизмов, устойчивых к противомикробным средствам. Соответственно, существует потребность в обнаружении новых противомикробных препаратов широкого спектра действия, таких как антибиотики, которые можно применять для борьбы с микроорганизмами, особенно теми, которые обладают множественной лекарственной устойчивостью.

Борсодержащие молекулы, такие как оксаборолы, применяемые в качестве противомикробных препаратов, были ранее предложены, например, в публикациях патентов США И8 20060234981 и 20070155699. В целом, оксаборол имеет следующую структуру и систему нумерации заместителей:

Неожиданно было обнаружено, что некоторые классы оксаборолов, которые являются монозамещенными в 3-, 6- или 7-положении, или дизамещенными в 3-/6- или 3-/7-положениях, представляют собой эффективные противобактериальные средства. Это и другие применения таких оксаборолов предложены в настоящем изобретении.

Краткое изложение сущности изобретения

В настоящем изобретении предложено соединение формулы

где С* является стереоцентром, имеющим конфигурацию, выбранную из (К) или (8);

К^а выбран из Н и -О(СК¹⁰К¹¹)_аК¹²;

где а представляет собой значение, выбранное из 1-10;

каждый из К¹⁰ и К¹¹ выбран из Н, (С1-Сю)алкила, который может быть разветвленным или циклическим, ОН, гидрокси(С₁-С₁₀)алкила и ΝΗ₂;

К¹² представляет собой К⁷, ОК⁷, ΝΗ₂, -С(О)К⁷, -С(О)ОК⁷;

при этом К⁷ выбран из Н; (С₁-С₁₀)алкила, который может быть разветвленным или циклическим и может быть замещен гидрокси;

при условии, что К^а и ОН совместно с атомами, к которым они присоединены, могут образовывать 6-10-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее вплоть до двух атомов кислорода в качестве кольцевых атомов;

или его фармацевтически приемлемая соль, гидрат, сольват или ангидрид.

В одном воплощении соединений по изобретению стереоцентр С* находится в (8)-конфигурации.

В другом воплощении соединений по изобретению а представляет собой значение, выбранное из 18.

В конкретном воплощении а представляет собой значение, выбранное из 2-4.

В еще одном воплощении соединений по изобретению каждый из К¹⁰ и К¹¹ выбран из Н, (С₁Сю)алкила, который может быть разветвленным или циклическим, ОН и ΝΗ₂.

В еще одном воплощении соединений по изобретению каждый из К¹⁰ и К¹¹ выбран из Н, гидрокси(С₁-С₁₀)алкила и ΝΗ₂.

В еще одном воплощении соединений по изобретению по меньшей мере один из К¹⁰ или К¹¹ выбран из гидрокси(С₁-С₁₀)алкила и ΝΗ₂.

В еще одном воплощении соединений по изобретению К¹² выбран из Н и -ОК⁷; где К⁷ выбран из Н, С₁-С₄алкила, которые могут быть замещены заместителями в количестве от 1 до 3, выбранными из (С₁С₄)алкила и -ОСН₃.

В еще одном воплощении соединений по изобретению К¹² выбран из ОН, ΝΗ₂, -СН₃, -СН₂СН₃ и С(О)ОН.

В конкретном воплощении К¹² выбран из ОН, ΝΗ₂, -СН₃ и -СН₂СН₃.

- 1 020530

В еще одном воплощении соединений по изобретению К^а выбран из -О(СН₂)₃1МН₂, -О(СН₂)₃ОН, ОСН₂СН₃, -О(СН2)3ОСН3, -СХСН.УОН. -ОСН3, -О(СН2)3С(О)ОН, -СХСНТМЕ. -О(СН;);\Н_;. ОСН₂СН;СН(\Н;)СН;ОН. -ОСН₂С(О)ОН и -ОСН₂СН(СН₂ОН)(СН₂)ОН.

В конкретном воплощении соединений по изобретению К³ выбран из -О(СН₂)₃ОН, -ОСН₂СН₃, О(СН₂)₃ОСН₃, -ОСН₃, -О(СН₂)₄МН₂ и -О(СН₂)₃ЫН₂.

В еще одном воплощении соединений по изобретению К^а выбран из Н, -О(СН₂)₃ОН, -ОСН₂СН₃, О(СН2)3ОСН3 и -ОСН3.

В еще более конкретном воплощении К^а выбран из -О(СН₂)₃ОН, -ОСН₃ и -ОСН₂СН₃.

В другом воплощении соединение по изобретению выбрано из

или их солей.

Кроме того, в настоящем изобретении предложено соединение формулы

где С* представляет собой стереоцентр, или его фармацевтически приемлемая соль.

В одном воплощении указанного соединения по изобретению С* находится в (§)-конфигурации. В еще одном воплощении соединение по изобретению представляет собой

или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват или ангидрид. В конкретном воплощении соединение по изобретению представляет собой

или его фармацевтически приемлемую соль.

В еще одном воплощении соединений по изобретению каждый К¹⁰ и каждый К¹¹ представляет собой

Н.

В еще одном воплощении соединений по изобретению К¹² представляет собой Н, и а представляет собой значение, выбранное из 2-4.

В еще одном воплощении соединений по изобретению К^а представляет собой Н.

В еще одном воплощении соединений по изобретению К^а представляет собой ОСН₃.

В еще одном воплощении соединений по изобретению К^а представляет собой ОСН₂СН₃.

В еще одном воплощении соединений по изобретению К^а представляет собой О(СН₂)₃ОСН₃.

В еще одном воплощении соединений по изобретению К^а представляет собой О(СН₂)₄ОН.

В еще одном воплощении соединений по изобретению К^а представляет собой

О(СН2)СН[(СН2)ОН]2.

В еще одном воплощении соединений по изобретению К¹⁰ представляет собой Н, К¹¹ представляет собой Н, и К¹² представляет собой незамещенный циклоалкил.

В еще одном воплощении соединений по изобретению К^а представляет собой -О(СН₂)₃ОН.

В конкретном воплощении соединений по изобретению С* находится в (^-конфигурации.

- 2 020530

В еще одном воплощении предложено соединение по изобретению, имеющее структуру

где а представляет собой значение, выбранное из 2-4, или его соль. В еще одном воплощении предложено соединение по изобретению, имеющее структуру

где а представляет собой значение, выбранное из 2-4, или его соль.

В настоящем изобретении также предложена фармацевтическая композиция для лечения заболевания, связанного с инфекцией, вызванной грамотрицательными бактериями, содержащая в качестве активного компонента

а) первый стереоизомер соединения по изобретению или его соль, гидрат или сольват;

б) второй стереоизомер указанного соединения;

при этом указанный первый стереоизомер присутствует в энантиомерном избытке, составляющем по меньшей мере 80% относительно указанного второго стереоизомера, и

в) фармацевтически приемлемый наполнитель.

В одном воплощении фармацевтической композиции стереоцентр С* указанного первого стереоизомера находится в (^-конфигурации.

В настоящем изобретении также предложена фармацевтическая композиция для лечения заболевания, связанного с инфекцией, вызванной грамотрицательными бактериями, содержащая

а) соединение по изобретению или его соли и

б) фармацевтически приемлемый наполнитель.

В настоящем изобретении также предложен способ ингибирования лейцил-тРНК-синтетазы, включающий приведение лейцил-тРНК-синтетазы в контакт с соединением по изобретению или его солью.

Кроме того, в настоящем изобретении также предложен способ предотвращения роста бактерии, включающий приведение указанного микроорганизма в контакт с эффективным количеством соединения по изобретению или его соли.

В настоящем изобретении также предложен способ уничтожения бактерии, включающий приведение указанного микроорганизма в контакт с эффективным количеством соединения по изобретению или его соли.

Краткое описание графических материалов

На фиг. 1 представлены данные минимальной ингибирующей концентрации (М1С) для репрезентативных соединений согласно изобретению.

На фиг. 2 представлены данные концентрации, ингибирующей 50% активности (1С50), для репрезентативных соединений согласно изобретению.

Подробное описание изобретения

I. Определения и сокращения

Сокращения, применяемые в настоящем документе, в целом, имеют значения, общепринятые в области химии и биологии.

Применяют следующие сокращения: вод. - водный; НАТИ - О-(7-азабензотриазол-1-ил)-М,М,М,Мтетраметилуроний эксафторфосфат; ΕΌΤΊ - Ы-(3-диметиламинопропил)-№-этилкарбодиимид гидрохлорид; т-СРВА - 3-хлорпероксибензойная кислота; экв. - эквивалент; ΌΙΑΌ - диизопропилазодикарбоксилат; ДМФ - Ν,Ν-диметилформамид; ДМСО - диметилсульфоксид; АсОН - уксусная кислота; Ναί'.’ΝΒΗ₃ цианоборогидрид натрия; ком. темп. - комнатная температура; ТГФ - тетрагидрофуран; Вос₂О - ди-третбутилдикарбонат; МеОН - метанол; ЕЮН - этанол; ТФК - трифторуксусная кислота; ΌΙΡΕΑ - Ν,Νдиизопропилэтиламин; РгОН - 1-пропанол; ί-ΡτΟΗ - 2-пропанол; т. пл. - температура плавления; ΝΜΜ Ν-метилморфолин; Β₂ρίη₂ - бис(пинаколато)дибор; в/н - в течение ночи; ΒζΟΟΗ - бензоилпероксид; ТНР - тетрагидропиранил; Ас - ацетил; РТ8А - пара-толуолсульфокислота; Руг. - пиридин; ί'Τζ - бензилоксикарбонил; МРМ - п-метоксибензил; ΌΗΡ - дигидропиран; С8А - камфорсульфокислота; СТАВ - бромидцетилтриметиламмония; нас. - насыщенный; Су - циклогексил.

В настоящем описании соединение согласно изобретению относится к соединениям, предложенным в настоящем изобретении, солям (например, фармацевтически приемлемым солям), пролекарствам, сольватам и гидратам этих соединений.

МКИ, или минимальная концентрация ингибирования, представляет собой концентрацию, при которой соединение обеспечивает прекращение роста клеток более чем на 50%, предпочтительно более чем

- 3 020530 на 60%, предпочтительно более чем на 70%, предпочтительно более чем на 80%, предпочтительно более чем на 90%, относительно контрольной группы, не подвергаемой обработке.

При обозначении заместителей с помощью соответствующих общепринятых химических формул, записанных слева направо, указанные заместители в равной степени включают химически идентичные заместители, полученные при написании структуры справа налево; например, подразумевают, что СН₂О- также включает -ОСН₂-.

В настоящем описании термин поли означает по меньшей мере 2. Например, поливалентный ион металла представляет собой ион металла, имеющий валентность по меньшей мере 2.

Группа относится к радикалу молекулы, который присоединен к оставшейся части молекулы.

Символ *ллл/у применяемый в качестве связи или изображенный перпендикулярно к связи, указывает на место присоединения данной группы к остальной части молекулы.

Термин алкил, взятый в отдельности или как часть другого заместителя, означает, если не указано иное, прямую или разветвленную цепь, или циклический углеводородный радикал или их комбинацию, которая может быть полностью насыщенной, моно- или полиненасыщенной и может включать двух- и многовалентные радикалы, имеющие обозначенное количество углеродных атомов (т.е. С4-С10 означает от одного до десяти атомов углерода). Согласно некоторым вариантам реализации термин алкил означает прямую или разветвленную цепь или их комбинации, которые могут быть полностью насыщенными, моно- или полиненасыщенными и могут включать двух- и многовалентные радикалы. Примеры насыщенных углеводородных радикалов включают, но не ограничиваются ими, такие группы как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, т-бутил, изобутил, втор-бутил, циклогексил, (циклогексил)метил, циклопропилметил, гомологи и изомеры, например, н-пентила, н-гексила, н-гептила, н-октила и т. п. Ненасыщенная алкильная группа представляет собой группу, содержащую одну или более двойных связей или тройных связей. Примеры ненасыщенных алкильных групп включают, но не ограничиваются ими, винил, 2-пропенил, кротил, 2-изопентенил, 2-(бутадиенил), 2,4-пентадиенил, 3-(1,4-пентадиенил), этинил, 1- и 3-пропинил, 3-бутинил и последующие высшие гомологи и изомеры.

Термин алкилен, взятый в отдельности или как часть другого заместителя, означает двухвалентный радикал, образованный из алкана, например, помимо прочего, -СН₂СН₂СН₂СН₂-, и также включает те группы, которые описаны ниже как гетероалкилен. Обычно, алкильная (или алкиленовая) группа содержит от 1 до 24 углеродных атомов, при этом согласно настоящему изобретению группы с 10 или менее углеродными атомами являются предпочтительными. Низший алкил или низший алкилен представляет собой алкильную или алкиленовую группу с более короткой цепью, в общем случае содержащую восемь или менее углеродных атомов.

Термины алкокси, алкиламино и алкилтио (или тиоалкокси) применяются в их общепринятом смысле и относятся к тем алкильным группам, которые присоединены к оставшейся части молекулы через кислородный атом, аминогруппу или атом серы, соответственно.

Термин гетероалкил, взятый в отдельности или в комбинации с другим термином, означает, если не указано иное, стабильный углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, или циклический углеводородный радикал, или их комбинации, содержащий указанное количество углеродных атомов и по меньшей мере один гетероатом. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения термин гетероалкил, взятый в отдельности или в комбинации с другим термином, означает стабильную прямую или разветвленную цепь, или их комбинации, состоящую из указанного количества углеродных атомов и по меньшей мере одного гетероатома. Согласно типичному варианту реализации изобретения гетероатомы можно выбрать из группы, включающей В, О, N и 8, при этом атомы азота и серы могут быть окисленными, и гетероатом азота может быть четвертичным. Гетероатом (гетероатомы) В, О, N и 8 могут размещаться в любом положении внутри гетероалкильной группы или в положении, в котором алкильная группа присоединена к оставшейся части молекулы. Примеры включают, но не ограничиваются ими, -СН2-СН2-О-СН3, -СН;-СН;-\Н-СН_;. -С1 1;-СН;-\(СН_;)-СН_;. -СН2-8-СН2-СН3, -СН2-СН2,-8(О)СНз, -СН2-СН2-8(О)2-СНэ, -СН=СН-О-СНэ, -СЩ-СЮ^ОСН и -СН=СНХ(СН₃)-СН₃. До двух гетероатомов могут следовать друг за другом, как, например, в -СН₂-кН-ОСН₃. Аналогичным образом, термин гетероалкилен, взятый в отдельности или как часть другого заместителя, означает двухвалентный радикал, образованный из гетероалкила, например, помимо прочего, -СН2-СН2-8-СН2-СН2- и -СН2-8-СН2СН₂-кН-СН₂-. Что касается гетероалкиленовых групп, гетероатомы также могут занимать одно или оба положения на концах цепи (например, алкиленокси, алкилендиокси, алкиленамино, алкилендиамино и т.п.). Кроме того, в отношении алкиленовых и гетероалкиленовых связывающих групп не принимают во внимание ориентацию связывающей группы по направлению, в котором записана формула связывающей группы. Например, формула -С(О)₂К'- включает как -С(О)₂К'-, так и -К'С(О)₂-.

Термины циклоалкил и гетероциклоалкил, взятые в отдельности или в комбинации с другими терминами, представляют собой, если не указано иное, циклические модификации алкила и гетероалкила, соответственно. Дополнительно, что касается гетероциклоалкила, гетероатом может занимать положение, по которому гетероцикл присоединен к оставшейся части молекулы. Примеры циклоалкила включают, но не ограничиваются ими, циклопентил, циклогексил, 1-циклогексенил, 3-циклогексенил, циклогептил и т.п. Примеры гетероциклоалкила включают, но не ограничиваются ими, 1-(1,2,5,6- 4 020530 тетрагидропиридил), 1-пиперидинил, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил, 4-морфолинил, 3-морфолинил, тетрагидрофуран-2-ил, тетрагидрофуран-3-ил, тетрагидротиен-2-ил, тетрагидротиен-3-ил, 1-пиперазинил, 2пиперазинил и т.п.

Термины гало или галоген, сами по себе или как часть другого заместителя, означают, если не указано иное, атом фтора, хлора, брома или йода. Кроме того, предполагают, что такие термины, как галоалкил, включают моногалоалкил и полигалоалкил. Например, предполагают, что термин гало(С₁С₄)алкил включает, но не ограничивается ими, трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, 4-хлорбутил, 3бромпропил и т.п.

Термин арил означает, если не указано иное, полиненасыщенный ароматический заместитель, который может представлять собой одно кольцо или несколько колец (предпочтительно от 1 до 3 колец), которые сконденсированы вместе или связаны ковалентной связью. Термин гетероарил относится к арильным группам (или кольцам), которые содержат от одного до четырех гетероатомов. Согласно типичному варианту реализации изобретения гетероатом выбирают из В, Ν, О и 8, при этом атомы азота и серы возможно являются окисленными, и атом (атомы) азота возможно является четвертичным. Гетероарильная группа может быть присоединена к оставшейся части молекулы через гетероатом. Неограничивающие примеры арильных и гетероарильных групп включают фенил, 1-нафтил, 2-нафтил, 4-бифенил, 1пирролил, 2-пирролил, 3-пирролил, 3-пиразолил, 2-имидазолил, 4-имидазолил, пиразинил, 2-оксазолил, 4-оксазолил, 2-фенил-4-оксазолил, 5-оксазолил, 3-изоксазолил, 4-изоксазолил, 5-изоксазолил, 2тиазолил, 4-тиазолил, 5-тиазолил, 2-фурил, 3-фурил, 2-тиенил 3-тиенил, 2-пиридил, 3-пиридил, 4пиридил, 2-пиримидил, 4-пиримидил, 5-бензотиазолил, пуринил, 2-бензимидазолил, 5-индолил, 1изохинолил, 5-изохинолил, 2-хиноксалинил, 5-хиноксалинил, 3-хинолил, 6-хинолил, диоксаборолан, диоксаборинан и диоксаборепан. Заместители в каждой из указанных арильных и гетероарильных кольцевых систем выбирают из группы приемлемых заместителей, описанных ниже.

Для краткости, термин арил при использовании в комбинации с другими терминами (например, арилокси, арилтиокси, арилалкил) включает те радикалы, в которых арильная группа присоединена к остальной части молекулы через ближайшую группу. Таким образом, подразумевают, что термин арилалкил включает те радикалы, в которых арильная группа присоединена к алкильной группе (например, бензил, 1-(3-нитрофенил)этил и т.п.). Такой заместитель, как бензил или 1-(3-нитрофенил)этил, также может быть представлен как замещенный алкил, при этом этиловый радикал содержит 3нитрофенильную группу. Подразумевают, что термин арилокси включает те радикалы, в которых арильная группа присоединена к кислородному атому. Подразумевают, что термин арилоксиалкил включает те радикалы, в которых арильная группа присоединена к кислородному атому, который, в свою очередь, присоединен к алкильной группе (например, феноксиметил, 3-(1-нафтилокси)пропил и т.п.).

Для краткости, термин гетероарил при использовании в комбинации с другими терминами (например, гетероарилокси, гетероарилтиокси, гетероарилалкил) включает те радикалы, в которых гетероарильная группа присоединена к остальной чти молекулы через ближайшую группу. Таким образом, подразумевают, что термин гетероарилалкил включает те радикалы, в которых гетероарильная группа присоединена к алкильной группе (например, пиридилметил и т.п.). Подразумевают, что термин гетероарилокси включает те радикалы, в которых гетероарильная группа присоединена к кислородному атому. Подразумевают, что термин гетероарилоксиалкил включает те радикалы, в которых арильная группа присоединена к кислородному атому, который затем присоединяется к алкильной группе (например, 2-пиридилоксиметил и т.п.).

Подразумевают, что каждый из вышеуказанных терминов (например, алкил, гетероалкил, арил и гетероарил) включает как замещенные, так и незамещенные формы указанного радикала. Предпочтительные заместители для каждого вида радикалов приведены ниже.

Заместители для алкильных и гетероалкильных радикалов (в том числе группы, упоминаемые как алкилен, алкенил, гетероалкилен, гетероалкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, циклоалкенил и гетероциклоалкенил) в общем случае относятся к заместителям алкильной группы, при этом они могут представлять собой одну или более из различных групп, выбранных из, помимо прочего: -К', -ΘΚ', =0, =ΝΚ', =Ν-ΟΚ', -ΝΚ'Κ, -8К', -галогена, -81К'КК', -ОС(О)К', -С(О)К', -СО₂К', -СС)\К'К. ΘΟ(Θ)ΝΚ'Κ, -ΝΚ^Ο)Κ', -ΝΚ'-^Ο)ΝΚΚ', -ΝΚ.'Ό(Ο)₂Κ.', -ΝΚ -СЩК'КК')=МК, -ΝΚС(МК'К)=МК', -8(Θ)Κ', -8(Ο)₂Κ', -8(Ο)₂ΝΚ'Κ, -ΝΚ8Ο₂Κ', -€Ν, -ΝΘ₂, -Ν₃, -СН(РЬ)₂, фторЩ-СДалкокси и фтор(С1-С₄)алкила, в количестве, варьирующемся от нуля до (2т'+1), где т' представляет собой суммарное количество углеродных атомов в таком радикале. Предпочтительно, если каждый К', К, К', К и К.....независимо относится к водороду, замещенному или незамещенному гетероалкилу, замещенному или незамещенному арилу, например, арилу, содержащему 1-3 галогена, замещенному или незамещенному алкилу, алкокси или тиоалкокси-группам, или арилалкильным группам. Если соединение согласно изобретению, например, содержит более чем одну К группу, каждую из К групп выбирают независимо, также как и каждые К', К, К', К и К.....группы, когда присутствует более чем одна из этих групп. Если

К' и К присоединены к одному и тому же атому азота, они могут объединяться с атомом азота с образованием 5-, 6- или 7-членного кольца. Например, подразумевают, что -МК'К включает, но не ограничиваются ими, 1-пирролидинил и 4-морфолинил. Из вышеуказанного описания заместителей для специали- 5 020530 ста в данной области техники очевидно, что термин алкил включает группы, в том числе углеродные атомы, связанные с группами, отличными от водородных групп, таких как галоалкил (например, -СР₃ и СН₂СР₃) и ацил (например, -С(О)СН₃, -С(О)СР₃, -С(О)СН₂оСн₃ и т.п.).

Подобно заместителям, описанным для алкильного радикала, заместители для арильных и гетероарильных групп, в общем случае, относятся к заместителям арильной группы. Заместители выбирают, например, из -К', -ОК', =О, =МК', =Ν-ΟΚ', -МК'К, -8К', -галогена, -8Ж.'КК, -ОС(О)К', -С(О)К', -СО₂К', СОМК'К, -ОС(О)МК'К, -МКС(О)К', -МК'-С(О)МКК', -МКС(О)₂К', -ΝΚ.....-С(МК'КК')=МК, -ΝΚС(МК'К)=МК', -8(О)К', -8(О)₂К', -8(О)₂Ж'К, -Ж8О₂К', -€Ν, -\О₂. -Ν₃, -СН(РЬ)₂, фторД-СДалкокси и фтор(С₁-С₄)алкила, в количестве, варьирующемся от нуля до суммарного количества свободных валентностей в системе ароматических колец; и где К', К, К', К и К.....предпочтительно независимо выбирают из водорода, замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного гетероалкила, замещенного или незамещенного арила и замещенного или незамещенного гетероарила. Если соединение согласно изобретению включает, например, более чем одну К группу, каждую из К групп выбирают независимо, также как и каждые К', К, К', К и К.....группы, когда присутствует более чем одна из этих групп.

Два из заместителей у соседних атомов арильного или гетероарильного кольца могут быть заменены на заместитель формулы -Т-С(О)-(СКК')_ч-и-, где Т и и независимо представляют собой -ИК-, -О-, СКК'- или одинарную связь, и с| представляет собой целое число от 0 до 3. Альтернативным образом, два из заместителей в соседних атомах арильного или гетероарильного кольца могут быть заменены на заместитель формулы -А-(СН₂)_Г-В-, где А и В независимо представляют собой -СКК'-, -О-, -ЛК-, -8-, -8(О), -8(О)₂-, -8(О)₂МК'- или одинарную связь, и г представляет собой целое число от 1 до 4. Одна из одинарных связей таким образом образованного нового кольца может быть заменена на двойную связь. Альтернативным образом, два заместителя в соседних атомах арильного или гетероарильного кольца могут быть заменены на заместитель формулы -(СКК')₈-Х-(СКК')_<1-, где 8 и ά независимо представляют собой целые числа от 0 до 3, и X представляет собой -О-, -МК'-, -8-, -8(О)-, -8(О)₂- или -8(О)₂МК'-. Предпочтительно, если заместители К, К', К и К' независимо выбирают из водорода или замещенного или незамещенного (С₁-С₆)алкила.

В настоящем описании кольцо означает замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный гетероциклоалкил, замещенный или незамещенный арил, или замещенный или незамещенный гетероарил. Кольцо включает конденсированные кольцевые группы. Количество атомов в кольце обычно определяется количеством членов в кольце. Например, 5-7-членное кольцо означает, что кольцевая система содержит от 5 до 7 атомов. Если не указано специально, кольцо возможно включает гетероатом. Таким образом, термин 5-7-членное кольцо включает, например фенил, пиридинил и пиперидинил. С другой стороны, термин 5-7-членное гетероциклоалкильное кольцо скорее включает пиридинил и пиперидинил, но не фенил. Термин кольцо также включает кольцевую систему, содержащую более чем одно кольцо, при этом каждое кольцо независимо определено, как указано выше.

В настоящем описании термин гетероатом включает атомы, отличные от углерода (С) и водорода (Н). Примеры включают кислород (О), азот (Ν), серу (8), кремний (8ί), германий (Се), алюминий (А1) и бор (В).

Термин уходящая группа означает функциональную группу или атом, который может быть заменен другой функциональной группой или атомом в ходе реакции замещения, такой как реакция нуклеофильного замещения. В качестве примера, типичные уходящие группы включают группы трифлат, хлор, бром и йод; группы сульфоэфиров, такие как мезилат, тозилат, брозилат, нозилат и т.п.; и ацилоксигруппы, такие как ацетокси, трифторацетокси и т.п.

Термин аминозащитная группа обозначает защитную группу, подходящую для предотвращения нежелательных реакций азота аминогруппы. Типичные аминозащитные группы включают, но не ограничиваются ими, формил; ацильные группы, например алканоильные группы, такие как ацетил, трихлорацетил или трифторацетил; алкоксикарбонильные группы, такие как трет-бутоксикарбонил (Вое); арилметоксикарбонильные группы, такие как бензилоксикарбонил (СЬ/) и 9-флуоренилметоксикарбонил (Ршое); арилметильные группы, такие как бензил (Вп), тритил (Тг) и 1,1-2-(4'-метоксифенил)метил; силильные группы, такие как триметилсилил (ТМ8) и трет-бутилдиметилсилил (ТВ8) и т.п.

Термин гидроксизащитная группа означает защитную группу, подходящую для предотвращения нежелательных реакций гидроксигруппы. Типичные гидроксизащитные группы включают, но не ограничиваются ими, алкильные группы, такие как метил, этил и трет-бутил; ацильные группы, например алканоильные группы, такие как ацетил; арилметильные группы, такие как бензил (Вп), п-метоксибензил (РМВ), 9-флуоренилметил (Рт) и дифенилметил (бензгидрил, ΌΡΜ); силильные группы, такие как триметилсилил (ТМ8) и трет-бутилдиметилсилил (ТВ8) и т.п.

Символ К является общепринятым сокращением, которое означает замещающую группу, которую выбирают из замещенных или незамещенных алкильных, замещенных или незамещенных гетероалкильных, замещенных или незамещенных арильных, замещенных или незамещенных гетероарильных, замещенных или незамещенных циклоалкильных и замещенных или незамещенных гетероциклоалкильных групп.

- 6 020530

Термин образованный из имеет общеупотребимое значение и также относится к молекуле, которая является на 99-80%, 75%, 70%, 65%, или 60% гомологичной относительно рассматриваемой молекулы. Молекулы, имеющие отношение к этому определению, включают цепи РНК или ДНК, олигонуклеотиды, полипептиды или белки любой длины и состава.

Подразумевают, что термин неродственный охватывает как единственную, так и множественную формы слова, т.е. фраза неродственная аминокислота включает одну или более аминокислот.

Под эффективным количеством лекарственного препарата, композиции или проникающего вещества подразумевают количество активного вещества, достаточное для обеспечения требуемого локального или системного эффекта. Топически эффективное, косметически эффективное, фармацевтически эффективное или терапевтически эффективное количество относится к количеству лекарственного препарата, необходимому для достижения требуемого терапевтического результата.

Топически эффективный относится к материалу, который при нанесении на кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто обеспечивает требуемый фармакологический результат локально по месту нанесения или системно в результате трансдермального переноса активного ингредиента в материале.

Косметически эффективный относится к материалу, который при нанесении на кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто приводит к требуемому косметическому результату локально по месту нанесения активного ингредиента в материале.

Подразумевают, что термин фармацевтически приемлемые соли включает соли соединений согласно изобретению, которые получены с помощью относительно нетоксичных кислот или оснований, в зависимости от конкретных заместителей в соединениях, описанных в настоящем документе. Если соединения согласно настоящему изобретению содержат сравнительно кислотные функциональные группировки, соли присоединения основания можно получить путем приведения в контакт нейтральной формы таких соединений с достаточным количеством требуемого основания, неразбавленного или в подходящем инертном растворителе. Примеры фармацевтически приемлемых солей присоединения основания включают соль натрия, калия, кальция, аммония, органического амина или магния, или аналогичную соль. Если соединения согласно настоящему изобретению содержат сравнительно основные функциональные группы, соли присоединения кислоты можно получить путем приведения в контакт нейтральной формы таких соединений с достаточным количеством требуемой кислоты, неразбавленной или в подходящем инертном растворителе. Примеры фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты включают соли, образованные неорганическими кислотами подобно соляной, бромистоводородной, азотной, угольной кислотам, моногидрокарбонату, фосфорной кислоте, моногидрофосфату, дигидрофосфату, серной кислоте, моногидросульфату, йодисто-водородной или фосфористой кислотам и т.п., а также соли, образованные из относительно нетоксичных органических кислот, подобно уксусной, пропионовой, изомасляной, малеиновой, малоновой, бензойной, янтарной, пробковой, фумаровой, молочной, миндальной, фталевой, бензолсульфоновой, п-толилсульфоновой, лимонной, винной, метансульфоновой и т.п. В изобретение также включены соли аминокислот, такие как аргинат и т.п., и соли органических кислот подобно глюкуроновой или галактуроновой кислотам и т.п. (см., например, Вегде с1 а1., РЬагтасеи1юа1 δαίΐδ, 1оигпа1 о£ РЬагтасеийса1 8с1епсе 66: 1-19 (1977)). Некоторые конкретные соединения согласно настоящему изобретению содержат как основные, так и кислотные функциональные группы, что позволяет превращать эти соединения в соли присоединения основания или кислоты.

Нейтральные формы соединений предпочтительно восстанавливают путем приведения в контакт соли с основанием или кислотой и выделения исходных соединений обычным способом. Исходная форма соединения отличается от различных солевых форм некоторыми физическими свойствами, такими как растворимость в полярных растворителях.

Помимо солевых форм в настоящем изобретении предлагают соединения, которые находятся в форме пролекарства. Пролекарства соединений или комплексов, описанных в настоящем документе, легко подвергаются химическим изменениям в физиологических условиях с образованием соединений согласно настоящему изобретению. Кроме того, пролекарства могут превращаться в соединения согласно настоящему изобретению посредством химических или биохимических способов в окружающей среде ех νίνο.

Некоторые соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в несольватированных формах, а также сольватированных формах, в том числе, гидратированных формах. В общем случае, сольватированные формы эквивалентны несольватированным формам и включены в настоящее изобретение. Некоторые соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в разнообразных кристаллических или аморфных формах. В общем случае, все физические формы эквивалентны для применений согласно настоящему изобретению и, как подразумевают, находятся в рамках настоящего изобретения.

Некоторые соединения согласно настоящему изобретению содержат асимметричные углеродные атомы (оптические центры) или двойные связи; рацематы, диастереоизомеры, геометрические изомеры и отдельные изомеры входят в объем настоящего изобретения. Графические изображения рацемических, амбискалемических и скалемических или энантиомерно чистых соединений согласно настоящему изобретению взяты из (МаеЬг, 1. СЬет. Еб. 1985, 62: 114-120). Сплошные и прерывистые клинья применяют

- 7 020530 для обозначения абсолютной конфигурации стереоцентра, если не указано иное. Если соединения, описанные в настоящем документе, содержат олефиновые двойные связи или другие центры геометрической асимметрии, и если не указано иное, подразумевают, что соединения включают как Е, так и Ζ геометрические изомеры. Подобным образом, включены все таутомерные формы.

Соединения согласно изобретению могут существовать в виде конкретных геометрических или стереоизомерных форм. Изобретение включает все такие соединения, в том числе цис- и транс-изомеры, (-)и (+)-энантиомеры, (К)- и (8)-энантиомеры, диастереоизомеры, (И)-изомеры, (Ь)-изомеры, их рацемические смеси и другие их смеси, такие как энантиомерно или диастереоизомерно обогащенные смеси, которые находятся в рамках изобретения. В заместителе, таком как алкильная группа, могут присутствовать дополнительные асимметричные углеродные атомы. Подразумевают, что все указанные изомеры, а также их смеси включены в настоящее изобретение.

Оптически активные (К)- и (8)-изомеры и й и 1 изомеры можно получить путем применения хиральных синтонов или хиральных реагентов, или разделить с применением общепринятых способов. Если, например, требуется конкретный энантиомер соединения согласно настоящему изобретению, его можно получить посредством асимметричного синтеза или путем получения производных с применением хирального вспомогательного вещества, при этом образовавшуюся диастереоизомерную смесь разделяют и вспомогательную группу расщепляют с получением чистых требуемых энантиомеров. Альтернативным образом, если молекула содержит основную функциональную группу, такую как аминогруппа, или кислотную функциональную группу, такую как карбоксильная группа, диастереоизомерные соли можно получить, применяя подходящую оптически активную кислоту или основание, с последующим повторным разделением полученных таким образом диастереоизомеров с помощью фракционной кристаллизации или хроматографических методов, известных в данной области техники, и последующим выделением чистых энантиомеров. Кроме того, разделение энантиомеров и диастереоизомеров, что осуществляют посредством хроматографии с применением хиральных неподвижных фаз, возможно в комбинации с химическим получением производных (например, получением карбаматов из аминов).

Соединения согласно настоящему изобретению могут также содержать не встречающиеся в природе соотношения атомных изотопов по одному или более атомов, входящих в состав указанных соединений. Например, соединения могут быть мечены радиоактивными изотопами, такими как, например, тритий (³Н), йод-125 (¹²⁵1) или углерод-14 (¹⁴С). Подразумевают, что все изотопные модификации соединений согласно настоящему изобретению, радиоактивные или нет, находятся в рамках настоящего изобретения.

Термин фармацевтически приемлемый носитель или фармацевтически приемлемая среда относится к любому составу или носителю, который обеспечивает подходящее введение эффективного количества активного вещества, определенного в настоящем документе, не препятствует эффективной биологической активности активного вещества и является достаточно нетоксичным по отношению к хозяину или пациенту. Типичные носители включают воду, масла, как растительные, так и минеральные, основы для кремов, основы для лосьонов, основы для мазей и т.п. Эти основы включают суспендирующие вещества, загустители, усилители проникновения и т.п. Их состав хорошо известен специалистам в области косметических и топических фармацевтических препаратов. Дополнительную информацию относительно носителей можно найти в монографии (Кепйпфоп: ТЬе 8аепсе и РгасЬсе о£ РЬагтасу, 2181 Ей., ЫрршсоЬ, ^ИЬатк & \νί11<ίη$ (2005)), содержание которой включено в настоящее описание посредством ссылки.

Фармацевтически приемлемый топический носитель и эквивалентные термины относятся к фармацевтически приемлемым носителям, описанным выше в настоящем документе, подходящим для топического применения. Неактивная жидкая или кремовая среда, способная суспендировать или растворять активное вещество (вещества) и имеющая свойства, которые делают ее нетоксичной и не вызывающей воспаление при нанесении на кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто, является примером фармацевтически приемлемого топического носителя. Подразумевают, что этот термин, в частности, включает материалы для носителей, также одобренные для применения в топических косметических средствах.

Термин фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество относится к консервантам, антиоксидантам, ароматизаторам, эмульгаторам, красителям и наполнителям, известным или применяемым при получении лекарственных препаратов, которые чрезмерно не препятствуют эффективной биологической активности активного вещества и являются достаточно нетоксичными по отношению к хозяину или пациенту. Вспомогательные вещества для топических композиций хорошо известны в данной области техники и могут быть добавлены к топической композиции при условии, что они являются фармацевтически приемлемыми и не оказывают вредного воздействия на эпителиальные клетки или их функцию. Более того, они не должны вызывать ухудшения стабильности композиции. Например, инертные наполнители, вещества, снимающие раздражение, вещества для повышения клейкости, наполнители, ароматизаторы, замутнители, антиоксиданты, гелеобразующие вещества, стабилизаторы, поверхностно-активные вещества, смягчающие вещества, красящие вещества, консерванты, буферные вещества, другие усилители проникновения и другие обычные компоненты композиций для топического или трансдермального введения хорошо известны в данной области техники.

- 8 020530

Термины усиление, усиление проникновения или усиление всасывания относятся к увеличению проницаемости кожи, ногтя, волос, когтя или копыта для лекарственного препарата с целью увеличения скорости, с которой лекарственный препарат проникает через кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто. Усиление проникновения, возникающее благодаря применению таких усилителей, можно наблюдать, например, путем измерения скорости диффузии лекарственного препарата через кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто животного с помощью диффузионного аппарата. Диффузор описан в статье (Метй е! а1. ЭйГикюп ЛрратаШк Гог δ1<ίιτ Репейабоп, 1 оГ Соп1то11еб Ке1еа8е, 1 (1984) рр. 161-162). Термин усилитель всасывания или усилитель проникновения обозначает вещество или смесь веществ, которое, отдельно или в комбинации, увеличивает проницаемость кожи, ногтя, волос или копыта для лекарственного препарата.

Как известно, термин наполнители условно означает носители, разбавители и/или среды, применяемые при получении лекарственных композиций, эффективных для заданного применения.

Термин топическое введение относится к нанесению фармацевтического вещества на наружную поверхность кожи, ногтя, волос, когтя или копыта таким образом, что вещество проходит через наружную поверхность кожи, ногтя, волос, когтя или копыта и поступает в нижележащие ткани. Топическое введение включает нанесение композиции на неповрежденную кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто, или на рваную, необработанную или открытую рану кожи, ногтя, волос, когтя или копыта. Топическое введение фармацевтического вещества может привести к ограниченному распределению вещества в кожу и окружающие ткани или, если вещество удаляется с места лечения кровотоком, может обеспечивать системное распределение вещества.

Термин трансдермальное введение относится к диффузии вещества через барьер кожи, ногтя, волос, когтя или копыта, имеющей место в результате топического введения или другого применения композиции. Роговой слой действует как барьер, и немногие фармацевтические вещества способны проникать через неповрежденную кожу. Напротив, эпидермис и дерма являются проницаемыми для многих растворенных веществ и, следовательно, абсорбция лекарственных препаратов происходит более легко через кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто, которые имеют царапины, или у которых иным образом поврежден роговой слой и обнажен эпидермис. Трансдермальное введение включает инъекцию или другое введение через любую чть кожи, ногтя, волос, когтя или копыта или слизистую оболочку и абсорбцию или проникновение через оставшуюся часть. Абсорбцию через нетронутую кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто можно увеличить путем размещения активного вещества в подходящей фармацевтически приемлемой среде перед наложением на кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто. Пассивное топическое введение может состоять из наложения активного вещества непосредственно на место лечения в комбинации со смягчающими веществами или усилителями проникновения. В настоящем описании подразумевают, что трансдермальное введение включает введение путем обеспечения проникновения через наружный покров, т.е. кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто.

Термин микробная инфекция или инфекция, вызванная микроорганизмом относится к любой инфекции ткани хозяина, вызванной возбудителем инфекции, в том числе, но не ограничиваясь ими, вирусами, бактериями, микобактериями, грибами и паразитами (см., например, публикации Наткоп'к ΡτίηС1р1ек оГ 1п1етпа1 Мебюше, рр. 93-98 (ХУПкоп е! а1., ебк., 121Н еб. 1991); ХУППатк е! а1., 1. оГ Мебюша1 Сйеш. 42:1481-1485 (1999), содержание каждой из которых в полном объеме включено в настоящее описание посредством ссылки).

В настоящем описании биологическая среда относится к биологическим средам ш νίΙΐΌ и ш νί\Ό. Типичные биологические среды ш уйго включают, но не ограничиваются ими, культуру клеток, культуру ткани, гомогенаты, плазму и кровь. Применение ш γί\Ό, в целом, осуществляют в организме млекопитающих, предпочтительно людей.

В настоящем описании термины ингибирование и блокирование применяются взаимозаменяемо и относятся к частичной или полной блокаде фермента. Согласно типичному варианту реализации изобретения фермент представляет собой редактирующий домен синтетазы тРНК.

В настоящем описании элемент человеческого ногтя может представлять собой ногтевую пластинку, ногтевое ложе, борозду ногтя, боковой ногтевой валик и их комбинации.

Согласно настоящему изобретению бор при некоторых условиях способен образовывать донорноакцепторные связи с кислородом или азотом. Донорно-акцепторные связи обычно более слабые, чем ковалентные связи. В тех случаях, когда бор связан ковалентной связью по меньшей мере с одним кислородом или азотом и в то же самое время образует донорно-акцепторную связь с кислородом или азотом, соответственно, донорно-акцепторная связь и ковалентная связь между бором и двумя идентичными гетероатомами могут взаимопревращаться или находиться в форме резонансного гибрида. Существует потенциальная неопределенность, касающаяся точной природы и степени обобщения электронов в этих случаях. Подразумевают, что образуемые структуры не включают все или часть возможных механизмов связывания между бором и атомом, с которым он связан. Неограничивающие примеры этих связей приведены ниже.

- 9 020530

Соединения, содержащие бор, связанный с углеродом и тремя гетероатомами (такими как три кислорода, как указано в этом разделе), могут содержать полностью отрицательно заряженный бор или частично отрицательно заряженный бор, вследствие природы донорно-акцепторной связи между бором и одним из атомов кислорода. Благодаря отрицательному заряду, положительно заряженный противоион может соединиться с указанным соединением, образуя, таким образом, соль. Примеры положительно заряженных противоионов включают Н+, Н₃О⁺, кальций, натрий, аммоний, калий. Соли этих соединений неявно включены в описании этих соединений.

Настоящее изобретение также включает соединения, которые представляют собой поли- или многовалентные соединения, в том числе, например, такие соединения, как димеры, тримеры, тетрамеры и более высокие гомологи соединений, применяемых согласно изобретению, или их реакционно-

В еще одном примере димеры (А46) могут образоваться при следующих условиях:

- 10 020530

Настоящее изобретение также включает соединения, которые являются ангидридами циклических бороновых эфиров и образуются в условиях дегидрирования. Примеры этих ангидридов приведены ниже.

Также получают тримеры соединений согласно изобретению. Например, тримеры ациклических бороновых эфиров можно получить следующим образом:

- 11 020530

Полимеры соединений согласно изобретению также получают путем удаления некоторых защитных групп в сильных кислотах. Например, тримеры ациклических бороновых эфиров можно получить следующим образом:

В настоящем изобретении также применяют соединения, которые являются поли- или многовалентными, в том числе, например, такие соединения, как димеры, тримеры, тетрамеры и более высокие гомологи соединений, применяемых в изобретении, или их реакционно-способные аналоги. Поли- и многовалентные соединения можно получить из одного соединения или более чем одного соединения согласно изобретению. Например, димерная конструкция может быть гомодимерной или гетеродимерной. Более того, в рамках объема настоящего изобретения находятся поли- и многовалентные конструкции, в которых соединение согласно изобретению или его реакционно-способный аналог присоединен к олигомерному или полимерному каркасу (например, полилизину, декстрану, гидроксиэтилкрахмалу и т.п.). Предпочтительно, если каркас является полифункциональным (т.е. содержит несколько реакционно-способных мест присоединения соединений, применяемых в изобретении). Более того, каркас может образовывать производные с одним соединением согласно изобретению или более чем одним соединением согласно изобретению.

Кроме того, настоящее изобретение включает применение соединений в рамках основной структуры, представленной формулами, приведенными в настоящем описании, в которые введены функциональные группы с целью получения соединений с повышенной водорастворимостью относительно аналогичных соединений, которые не функционализированы подобным образом. Таким образом, любые из заместителей, перечисленных в настоящем описании, можно заменить аналогичными радикалами, которые увеличивают водорастворимость. Например, в рамках изобретения можно заменить гидроксильную группу диолом, или амин - четвертичным амином, гидроксиамином или похожей более водорастворимой группой. Согласно предпочтительному варианту реализации изобретения дополнительную водорастворимость придает замещение по положению, не существенному для активности по отношению к редактирующему домену соединений согласно настоящему изобретению, на группу, которая усиливает водорастворимость исходных соединений. Способы усиления водорастворимости органических соединений известны в данной области техники. Такие способы включают, но не ограничиваются ими, функционализирование органических центров с помощью группы с постоянным зарядом, например, четвертичного аммония, или с помощью группы, которая приобретает заряд при физиологически релевантном рН, например, карбоновой кислоты, амина. Другие способы включают прикрепление к органическому центру

- 12 020530 гидроксильных или аминосодержащих групп, например, спиртов, полиолов, полиэфиров и т.п. Типичные примеры включают, но не ограничиваются ими, полилизин, полиэтиленимин, поли(этиленгликоль) и поли(пропиленгликоль). Подходящий химизм и стратегии функционализации этих соединений известны в данной области техники (см., например, Эиии, К. Ь., с1 а1., Ейк. РОЬУМЕК1С ΌΚΠΟδ ΛΝΌ ЭКИС ΌΕЬГУЕКУ δΥδΤΕΜδ, ЛС8 8утрокшт 8епе5. Уо1. 469, Атепсап СЬетюа1 5>ос1е1у, ХУаПипЦоп, Э.С. 1991).

II. Введение

Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или его соль, гидрат или сольват, или их комбинацию. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или соль, гидрат или сольват указанного соединения. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или его соль. Согласно типичному варианту реализации изобретения указанная соль представляет собой фармацевтически приемлемую соль. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или его гидрат. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или его сольват. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или его пролекарство. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соль соединения, описанного в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают фармацевтически приемлемую соль соединения, описанного в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают гидрат соединения, описанного в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают сольват соединения, описанного в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают пролекарство соединения, описанного в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, изображенное на фиг. 1 или 2.

Согласно типичному варианту реализации изобретения алкил представляет собой группу, выбранную из линейного алкила и разветвленного алкила. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения гетероалкил представляет собой группу, выбранную из линейного гетероалкила и разветвленного гетероалкила.

III. Ь) Композиции, содержащие стереоизомеры

В настоящем описании термин хиральный, энантиомерно обогащенный или диастереоизомерно обогащенный относится к композиции, имеющей энантиомерный избыток (ее) или диастереоизомерный избыток (йе) больше чем примерно 50%, предпочтительно больше чем примерно 70% и более предпочтительно больше чем примерно 90%. В общем случае, особенно предпочтительным является энантиомерный или диастереоизомерный избыток более примерно 90%, например, указанные композиции с больше чем примерно 95%, больше чем примерно 97% и больше чем примерно 99% ее или йе.

В настоящем описании термины энантиомерный избыток и диастереоизомерный избыток применяют взаимозаменяемо. Считают, что соединения с одним стереоцентром присутствуют в энантиомерном избытке, соединения по меньшей мере с двумя стереоцентрами присутствуют в диастереоизомерном избытке.

Термин энантиомерный избыток хорошо известен в данной области и определяется как \ кони .а - конц Ь ) , „ „ ее А-Ί-4 хЮО \конц.а + конц.Ь )

Термин энантиомерный избыток связан с более старым термином оптическая чистота, при этом оба термина являются мерами одного и того же явления. Величина ее будет составлять число от 0 до 100, при этом ноль обозначает рацемически, а 100 - энантиомерно чистый. Композиции, которые в прошлом можно было назвать оптически чистыми на 98%, теперь более точно описываются величиной 96% ее. 90% ее свидетельствует о присутствии 95% одного энантиомера и 5% другого (других) энантиомеров в рассматриваемом веществе.

Поэтому согласно одному варианту реализации в изобретении предлагают композицию, содержащую первый стереоизомер и по меньшей мере один дополнительный стереоизомер соединения согласно изобретению. Первый стереоизомер может присутствовать в диастереоизомерном или энантиомерном избытке, составляющем по меньшей мере примерно 80%, или по меньшей мере примерно 90%, или по меньшей мере примерно 92%, или по меньшей мере примерно 95%. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения первый стереоизомер присутствует в диастереоизомерном или энантиомерном избытке, составляющем по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98%, по меньшей мере примерно 99% или по меньшей мере примерно 99.5%. Согласно еще одному варианту реализации изобретения соединение, предлагаемое в изобретении, является энантиомерно или диастереоизомерно чистым (диастереоизомерный или энантиомерный избыток составляет примерно 100%). Энантиомерный или диастереоизомерный избыток может определяться относительно только одного другого стереоизомера, или может определяться относительно суммы по меньшей мере двух других стереоизомеров. Согласно типичному варианту реализации изобретения

- 13 020530 энантиомерный или диастереоизомерный избыток определяют относительно всех других поддающихся обнаружению стереоизомеров, которые присутствуют в смеси. Стереоизомеры поддаются обнаружению, если концентрацию указанного стереоизомера в анализируемой смеси можно определить с применением обычных аналитических способов, таких как хиральная ВЭЖХ.

В настоящем описании, и если не указано иное, композиция, которая по существу, не содержит соединения, означает, что эта композиция содержит менее чем примерно 20 мас.%, или менее чем примерно 15 мас.%, или менее чем примерно 10 мас.%, или менее чем примерно 5 мас.%, или менее чем примерно 3 мас.%, или менее чем примерно 2 мас.%, или менее чем примерно 1 мас.% соединения.

В настоящем описании термин по существу, не содержит этот (или его) энантиомер означает, что композиция, содержащая соединение согласно изобретению, содержит значительно большее количество одного энантиомера, чем его оптического антипода. Согласно одному варианту реализации изобретения термин по существу, не содержит энантиомер означает, что соединение состоит по меньшей мере из примерно 90 мас.% (8) энантиомера и примерно 10 мас.% или менее (К) стереоизомера. Согласно более предпочтительному варианту реализации изобретения термин по существу, не содержит энантиомер означает, что соединение состоит по меньшей мере из примерно 95 мас.% (8) энантиомера и примерно 5 мас.% или менее (К) стереоизомера. Согласно еще более предпочтительному варианту реализации изобретения термин по существу, не содержит энантиомер означает, что соединение состоит по меньшей мере из примерно 98 мас.% (8) энантиомера и примерно 2% или менее (К) стереоизомера. Согласно еще более предпочтительному варианту реализации изобретения термин по существу, не содержит энантиомер означает, что соединение состоит по меньшей мере из примерно 99 мас.% (8) энантиомера и примерно 1% или менее (К) стереоизомера.

Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают композицию, содержащую а) первый стереоизомер соединения, описанного в настоящем документе, при этом К³ не является Н; Ь) по меньшей мере один дополнительный стереоизомер первого стереоизомера, при этом первый стереоизомер присутствует в энантиомерном избытке, составляющем по меньшей мере 80% относительно вышеуказанного по меньшей мере одного дополнительного стереоизомера. Согласно типичному варианту реализации изобретения энантиомерный избыток составляет по меньшей мере 92%. Согласно типичному варианту реализации изобретения стереоцентр С* первого стереоизомера находится в (8)-конфигурации. Согласно типичному варианту реализации изобретения стереоцентр С* первого стереоизомера находится в (8)-конфигурации, и К³ представляет собой -ΤΉ₂ΝΗ₂.

Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают композицию, содержащую соединение согласно изобретению, при этом К³ не является Н и стереоцентр С* находится в (8)конфигурации, а вышеуказанная композиция, по существу, не содержит энантиомера соединения. Согласно типичному варианту реализации изобретения композиция содержит А2, А49 или их комбинации, при этом композиция, по существу, не содержит энантиомер А2 или А49. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают композицию, содержащую соединение, описанное в настоящем документе, при этом К³ не является Н и стереоцентр С* находится в (К) конфигурации.

Ш.с) Комбинации, содержащие дополнительные терапевтические вещества

Соединения согласно изобретению можно также применять в комбинации с дополнительными терапевтическими веществами. Таким образом, в дополнительном аспекте в изобретении предлагают комбинацию, содержащую соединение, описанное в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемую соль вместе по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим веществом. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой соединение согласно изобретению. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество содержит атом бора. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество не содержит атом бора. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой соединение, описанное в разделе III.с).

Если соединение согласно изобретению применяют в комбинации со вторым терапевтическим веществом, обладающим активностью против того же болезненного состояния, доза каждого соединения может отличаться от дозы, в которой соединение применяют по отдельности. Подходящие дозы легко могут быть определены специалистом в данной области техники. Очевидно, что количество соединения согласно изобретению, необходимое для лечения, будет варьироваться в зависимости от природы заболевания, подвергаемого лечению, возраста и состояния пациента и, в конечном счете, будет определено по усмотрению лечащего врача или ветеринара. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой антибиотик. Примеры классов антибиотиков, которые можно применять согласно изобретению, включают аминогликозид, ансамицин, карбацефен, карбапенем, цефалоспорин первого поколения, цефалоспорин второго поколения, цефалоспорин третьего поколения, цефалоспорин четвертого поколения, цефалоспорин пятого поколения, гликопептид, макролид, хинолон, сульфонамид и тетрациклин. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный из амикацина, гентамицина, канамицина, неомицина, нетилмицина, стрептомицина, тобрамицина, паромомицина. Соглас- 14 020530 но типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный из гелданамицина и гербимицина. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой лоракарбеф. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный из эртапенема, дорипенема, имипенема, силастатина и меропенема. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный из цефадроксила, цефазолина, цефалотина и цефалексина. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный из цефаклора, цефамандола, цефокситина, цефпрозила и цефуроксима. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный цефиксима, цефдинира, цефдиторена, цефоперазона, цефотаксима, цефподоксима, цефтазидима, цефтибутена, цефтизоксима и цефтриаксона. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой цефепим. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой цефтобипрол. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный из теикопланина и ванкомицина. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный из азитромицина, кларитромицина, диритромицина, эритромицина, рокситромицина, тролеандомицина, телитромицина и спектиномицина. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой азтреонам. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный из амоксициллина, ампициллина, азлоциллина, карбенициллина, клоксациллина, диклоксациллина, флуклоксациллина, мезлоциллина, метициллина, нафциллина, оксациллина, пенициллина, пиперациллина и тикарциллина. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный из бацитрацина, колистина и полимиксина В. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный из ципрофлоксацина, эноксацина, гатифлоксацина, левофлоксацина, ломефлоксацина, моксифлоксацина, норфлоксацина, офлоксацина и тровафлоксацина. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный из мафенида, пронтисила, сульфацетамида, сульфаметизола, сульфанилимида, сульфазалацина, сульфизоксазола, триметоприма и сульфаметоксазола. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный из демеклоциклина, доксициклина, миноциклина, окситетрациклина и тетрациклина. Согласно типичному варианту реализации изобретения дополнительное терапевтическое вещество представляет собой препарат, выбранный из арсфенамина, хлорамфеникола, линкомицина, этамбутола, фосфомицина, фусидовой кислоты, фуразолидона, изониазида, линезолида, метронидазола, мупироцина, нитрофурантоина, платензимицина, пиразинамида, хинупристина, рифампина и тинидазола.

Соединения согласно изобретению или их фармацевтические композиции можно также применять в комбинации с другими терапевтическими препаратами, например иммунными терапевтическими препаратами [например, интерфероном, таким как интерферон альфа-2а (ΚΟΡΕΚΟΝ®-Α; Нойтапп-Ьа КосЬе), интерферон альфа-2Ъ (ΙΝΤΚΟΝ®-Ά; §сЬеттд-Р1оидЬ), интерферон альфакон-1 (ΙΝΡΕΚΟΕΝ®; 1п(еттипе), пегинтерферон альфа-2Ъ (ΡΕΟΙΝΤΚΟΝ™; §сЬеттд-Р1оидЬ) или пегинтерферон альфа-2а (ΡΕΟΑδΥδ®; Нойтапп-Ьа КосЬе)], терапевтическими вакцинами, противофиброзными препаратами, противовоспалительными препаратами [такими как кортикостероиды или нестероидные противовоспалительные препараты], бронхолитическими средствами [такими как бета-2 адренергические агонисты и ксантины (например, теофиллин)], муколитическими препаратами, противомускариновыми препаратами, антилейкотриеновыми препаратами, ингибиторами неспецифической адгезии клеток [например, антагонистами фактора межклеточной адгезии], антиоксидантами [например, Ν-ацетилцистеином], агонистами цитокина, антагонистами цитокина, легочными поверхностно-активными средствами и/или противомикробными препаратами. Композиции согласно изобретению можно также применять в комбинации с генной заместительной терапией.

Отдельные компоненты таких комбинаций можно вводить одновременно или последовательно в дозированной лекарственной форме. Дозированная лекарственная форма может представлять собой единую дозированную форму или несколько дозированных лекарственных форм. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают комбинацию в виде единой дозированной формы. Примером единой дозированной лекарственной формы является капсула, где и соединение согласно изобретению, и дополнительное терапевтическое вещество содержатся в одной и той же капсуле. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают комбинацию в виде двух дозированных лекарственных форм. Примером двух дозированных лекарственных форм является первая капсула, которая содержит соединение согласно изобретению, и вторая капсула, которая содержит дополнительное терапевтическое

- 15 020530 вещество. Таким образом, термин единая дозированная форма или две дозированных формы или несколько дозированных форм относится к предмету, который проглатывает пациент, а не к находящимся внутри компонентам предмета. Специалист в данной области техники легко определит подходящие дозы известных терапевтических препаратов.

Комбинации, упоминаемые в настоящем документе, легко можно приготовить для применения в форме фармацевтического композиции. Таким образом, типичный вариант реализации изобретения представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую а) соединение согласно изобретению; Ь) дополнительный терапевтический препарат и с) фармацевтически приемлемый наполнитель. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция представляет собой дозированную лекарственную форму. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция представляет собой единую дозированную лекарственную форму. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция представляет собой две дозированные лекарственные формы. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция представляет собой две дозированные лекарственные формы, включающие первую дозированную лекарственную форму и вторую дозированную лекарственную форму, при этом в настоящем описании первая дозированная лекарственная форма содержит а) соединение согласно изобретению и Ь) первый фармацевтически приемлемый наполнитель; а вторая дозированная лекарственная форма содержит с) дополнительный терапевтический препарат и ά) второй фармацевтически приемлемый наполнитель.

Ш.е) Составы с кератином

Если соединение согласно изобретению накладывают на компонент ногтя человека, соединение абсорбируется или проникает в ноготь. Человеческий ноготь в основном состоит из кератина (т.е. кератина волос или α-кератина), а также следовых количеств липидных компонентов. Поэтому в процессе лечения заболевания ногтя или уничтожения или ингибирования роста микроорганизма образуется состав, содержащий элемент человеческого ногтя и соединение согласно изобретению.

Согласно еще одному аспекту в изобретении предлагают состав, содержащий (а) соединение согласно изобретению; и (Ь) кератин-содержащий компонент животного. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение, предлагаемое в изобретении, представляет собой соединение, описанное в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемую соль. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение, предлагаемое в изобретении, представляет собой соединение, описанное формулой, приведенной в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение, предлагаемое в изобретении, представляет собой соединение, описанное в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации изобретения кератин-содержащий компонент животного представляет собой компонент, выбранный из элемента ногтя животного, кожи и волос. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение из части (а) вступает в контакт с компонентом из части (Ь). Согласно типичному варианту реализации изобретения животное является человеком. Согласно типичному варианту реализации изобретения кератин-содержащий компонент представляет собой ногтевую пластину элемента человеческого ногтя. Согласно типичному варианту реализации изобретения кератин-содержащий компонент представляет собой ногтевое ложе элемента человеческого ногтя. Согласно типичному варианту реализации изобретения кератин-содержащий компонент представляет собой борозду ногтя элемента человеческого ногтя. Согласно типичному варианту реализации изобретения кератин-содержащий компонент представляет собой боковой ногтевой валик элемента человеческого ногтя. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения элемент человеческого ногтя включает компонент, выбранный из кератина и липида. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения кератин представляет собой компонент, выбранный из кератина кожи и кератина ногтя/волос. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения липид представляет собой компонент, выбранный из сульфата холестерина, цереброзида, керамида, свободного стерола, свободных жирных кислот, триглицеридов, стероловых эфиров, восковых эфиров и сквалена.

- 16 020530

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение присутствует в составе в концентрации, выбранной из примерно 0.001%, примерно 0.01%, примерно 0.05%, примерно 0.1%, примерно 0.5%, примерно 1%, примерно 1.5%, примерно 2%, примерно 2.5%, примерно 3%. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения кератин присутствует в указанном составе в концентрации, выбранной из примерно 99.99%, примерно 99.95%, примерно 99.90%, примерно 99.5%, примерно 99.0%, примерно 98.5%, примерно 98.0%, примерно 97.5% и примерно 97%. Согласно еще одному типичному варианту реализации соединение согласно изобретению представляет собой соединение, описанное в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемую соль. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение описано в настоящем документе. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение, которое представляет собой вещество, выбранное из

и

присутствует в указанном составе в концентрации, выбранной из примерно 0.001%, примерно 0.01%, примерно 0.05%, примерно 0.1%, примерно 0.5%, примерно 1% и примерно 1.5%.

Согласно еще одному аспекту в изобретении предлагают способ получения этого состава, при этом указанный способ включает нанесение указанного соединения на состав, содержащий кератин, и, тем самым, формирование указанного состава. Согласно типичному варианту реализации изобретения состав, содержащий кератин, представляет собой элемент человеческого ногтя. Согласно типичному варианту реализации изобретения состав, содержащий кератин, представляет собой элемент, выбранный из ногтевой пластины, ногтевого ложа, борозды ногтя, бокового ногтевого валика. Способы получения таких составов описаны в разделе примеров.

Следует иметь в виду, что настоящее изобретение включает все комбинации аспектов и/или вариантов реализации изобретения, а также подходящие, пригодные и предпочтительные группы, описанные в настоящем документе.

ΙΙΙ.ί) Получение борсодержащих ингибиторов редактирующего домена

Соединения, применяемые в настоящем изобретении, можно получить, применяя коммерчески доступные исходные материалы, известные промежуточные вещества или с помощью синтетических способов, описанных и опубликованных в литературе, включенной в настоящий документ посредством ссылок, такой как публикации патентов США И8 20060234981, И8 20070155699 и И8 20070293457.

Нижеследующие общие методы применялись в соответствии с указаниями, приведенными при описании синтеза соединений-примеров, и могут быть применены на основе знаний специалистов в данной области техники при синтезе других подходящих соединений с целью получения дополнительных аналогов.

Общий способ 1. Сульфонилирование амино-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-олов

Соединение 1* можно превратить в соединение 2* в условиях сульфонилирования.

При применении этого общего метода незамещенный фенил или незамещенный пиридинилсульфонилхлорид (1-1.2 экв.) и основание (такое как ΝΜΜ, К₂СО₃, или пиридин, 3-4 экв.) последовательно добавляли к раствору амина в ΜеСN (20 мл/г) при комнатной температуре. После завершения (обычная продолжительность в/н) летучие вещества удаляли в вакууме. К остатку добавляли Н₂О и устанавливали рН смеси ~ 6, применяя разбавленную НС1. Затем водную фазу экстрагировали органическим растворителем (таким как ЕЮАс) и объединенные органические фракции высушивали с применением осушителя, такого как Να₂δΟ₄ или Мд§О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Продукт обычно очищали посредством перекристаллизации из Н₂О, путем растирания в порошок с СН₂С1₂ или ЕЮАс. или способом испарительной хроматографии.

- 17 020530

Общий способ 2. Удаление защитных групп бензил-защищенных спиртов или тиолов

РсКОН)₂/С,АсОН

Η_Ξ (40-50 ρ5ΐ), Ь

ΡΓΥΒη

Υ = О ог 3

Ρ’ΥΗ

Соединение 3* можно превратить в соединение 4* в условиях удаления защитных групп.

Смесь бензилированного спирта или тиола (1 экв.) и 20% Рй(ОИ)₂ на углероде (50 вес.% во влажном состоянии, соотношение 1:2 по весу подложки к катализатору) в ледяном АсОН (10 мл/г) встряхивали в атмосфере Н₂ (40-50 ρκί) в аппарате для встряхивания Парра. После завершения реакции (ТСХ) смесь фильтровали через слой целита. Фильтрат концентрировали в вакууме и оставшийся АсОН удаляли посредством совместного испарения с толуолом (3х) с получением спирта. Дальнейшую очистку выполняли способом испарительной хроматографии или препаративной ВЭЖХ, при необходимости.

Общий способ 3. Алкилирование фенола или тиофенола в условиях реакции Мицунобу

Соединение 5* можно превратить в соединение 6* в условиях реакции Мицунобу.

ΌΙΑΌ (1 экв.) добавляли к раствору фенола или тиофенола (1 экв.) и РР1₃ (1 экв.) в безводном ТГФ (200 мл/7 г фенола). Смесь перемешивали при комнатной температуре до завершения реакции (которое определяли способом ТСХ). Затем смесь концентрировали в вакууме. К остатку добавляли ЕеО и после этого смесь концентрировали в вакууме. Опять добавляли ЕеО и образовавшийся осадок удаляли посредством фильтрации. Фильтрат экстрагировали 2 Ν ЫаОИ и Н₂О. Органическую фазу высушивали (Ыа₂8О₄) и концентрировали в вакууме. Остаток дополнительно очищали способом испарительной хроматографии.

Общий способ 4. Алкилирование фенола или тиофенола алкилбромидами и алкилмезилатами

Раствор алкилгалогенида или мезилата (1-1.5 экв.), 2-бром-3-гидроксибензальдегида или 2-бром-3меркаптобензальдегида (1 экв.) и основания, такого как К₂СО₃ (1-1.2 экв.) или Ск₂СО₃ (1.5-2 экв.), в апротонном растворителе, таком как ДМФ, перемешивали при 50-80°С (темп. бани) до завершения реакции (обычно всю ночь). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли Н₂О и экстрагировали растворителем, таким как ЕЮАс. Органические фракции промывали Н₂О, затем соляным раствором, высушивали с применением осушителя, такого как Мд8О₄, и концентрировали в вакууме. Дальнейшую очистку осуществляли, при необходимости, способом испарительной хроматографии.

Общий способ 5. Борилирование арилгалогенидов и трифлатов

Соединение 7* можно превратить в соединение 8* в условиях борилирования.

В раствор арилбромида или трифлата в безводном 1,4-диоксане (20 мл/1 г) добавляли Β₂ρίη₂ (2 экв.) и КОАс (3 экв.) при комнатной температуре, затем дегазировали Ν₂ в течение 10-40 мин. Добавляли РйС1₂(йррГ)-СИ₂С1₂ (4-8 мол.%) и образовавшийся раствор перемешивали при 80-100°С до завершения реакции (2-16 ч). Раствор охлаждали до комнатной температуры и разбавляли ЕЮАс. Затем органическую фазу промывали Н₂О, затем соляным раствором, высушивали (Ыа₂8О₄), фильтровали и концентрировали в вакууме. Как правило, продукт очищали способом испарительной хроматографии.

Общий способ 6. Борилирование фенолов или тиофенолов с помощью их арилтрифлатов Ι,Τί^Ο, руг., СНгС1₂ р _а 2. ра С1₂ (а р ро *с н₂с ь

В₂Р«п₂, КОАс, сНохапе ¹ с!едаэ5ей, 80-100 °С

Соединение 9* можно превратить в соединение 8* в условиях борилирования.

- 18 020530

Трифторметансульфоновый ангидрид (1.2 экв.) добавляли по каплям к раствору пиридина (1.2 экв.) и фенола в СН₂С1₂ (40 мл/8,6 г) при 0°С (темп. бани). Затем реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали до полного потребления исходного материала (которое определяли способом ТСХ). Затем добавляли ЕьО и 2 N НС1. Органическую фазу отделяли и промывали насыщ. ЫаНСОз, затем соляным раствором. Органическую фазу высушивали (№₂8О₄) и фильтровали через короткий силикагелевый тампон, промывая ЕьО. Фильтрат концентрировали в вакууме и получали требуемый трифлат, который применяли непосредственно в общем методе 5.

Общий способ 7. Замыкание кольца замещенных 2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил) бензальдегидов

Соединение 8* можно превратить в соединение 10* в условиях замыкания кольца.

NаΒН₄ (1.5 экв.) добавляли порциями в холодный как лед раствор альдегида в спирте (обычно абсолютном ЕЮН или безводном МеОН (с=0.1 М). Реакцию оставляли нагреваться до комнатной температуры и контролировали способом ТСХ. Затем смесь подкисляли до ~ рН 3, применяя 1 N NаН§Ο₄ или 2 М НС1, и перемешивали всю ночь. Осадок собирали посредством фильтрации, многократно промывали Н2О и высушивали в вакууме. Дальнейшую очистку, при необходимости, выполняли способом испарительной хроматографии.

Общий способ 8. Реакция Генри замещенных 2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил) бензальдегидов

Соединение 8* можно превратить в соединение 11* в условиях реакции Генри.

№ОН вод. (1.0 экв.) добавляли к альдегиду (в Н₂О или ТГФ) при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Добавляли по каплям МеNΟ₂ (3 экв.) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь подкисляли 2 N НС1 и экстрагировали ЕЮЛс. Органическую фракцию промывали Н₂О, затем соляным раствором, высушивали (Мд§О₄) и концентрировали в вакууме. Очистку обычно осуществляли способом испарительной хроматографии или осаждением из подкисленной реакционной смеси.

Общий способ 9. Реакция Генри замещенных 2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил) бензальдегидов с применением катализатора фазового переноса

СТАВ или СТАС1 (5 мол.%) добавляли к смеси МеNΟ₂ и альдегида в вод. №ЮН и ТГФ (1 мл/300 мг альдегида) при комнатной температуре. Реакцию контролировали способом ТСХ. После завершения (обычно 1-1.5 ч) рН смеси устанавливали 2-3 с помощью 2 N НС1 или 1 М NаН§Ο₄ и затем смесь перемешивали в течение 30 мин. Твердое вещество фильтровали и высушивали с получением требуемого нитросоединения, которое применяли непосредственно на следующей стадии. Если осаждение не происходило, органическое вещество экстрагировали из реакционной смеси посредством ЕЮАс. Затем органическую фракцию высушивали (Мд§О₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали способом испарительной хроматографии.

Общий способ 10. Восстановление алкилнитро- и/или алкилнитрильных соединений с получением ^Вос-защищенных аминов

ΝίΟΙ₂. №ВН₄ В0С2О, МеОН

ΒΝΟ₂ΟΓΚΟΝ -* ΚΝΗΒοο

12* 13*

Соединение 12* можно превратить в соединение 13* в условиях восстановления.

Вос₂О (2 экв.) и №С1-6Н₂О (1 экв.) добавляли при перемешивании к раствору алкилнитро- или алкилнитрил в безводном МеОН (3 мл/ммоль) при комнатной температурею Перемешивание продолжали до тех пор, пока большая часть №С1₂ не растворилась в МеОН (обычно ~ 10 мин). Затем реакционную

- 19 020530 смесь охлаждали до 0°С (темп. бани) и порциями добавляли ЫаВНд (6 экв.) в течение 10 мин. Реакция была экзотермической, шипучей и приводила к образованию высокодисперсного черного осадка. Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и оставляли перемешиваться всю ночь. Затем смесь концентрировали в вакууме и остаток разбавляли ЕЮАс. Образовавшуюся суспензию фильтровали через слой целита и фильтрат концентрировали в вакууме. Затем остаток, при необходимости, дополнительно очищали способом испарительной хроматографии.

Общий способ 11. Удаление защитных групп Вос-защищенных аминов

1М НС1/Е1₂О ог 4М нс1/йюхапе

Κ-ΝΗΒοο -·* Ρ-ΝΗ₂ΗΟΙ

13* 14*

Соединение 13* можно превратить в соединение 14* в условиях удаления защитных групп.

Смесь Ν-Вос-защищенного амина и 1 М НС1 в Е1₂О или 4 М НС1 в диоксане (2 мл/ммоль) перемешивали при комнатной температуре. После полного потребления исходного материала (контролировали способом ТСХ, обычно 3-16 ч) смесь концентрировали в вакууме и неочищенный остаток растирали в порошок с Е1₂О и фильтровали. При необходимости, конечный продукт очищали способом препаративной ВЭЖХ.

Общий способ 12. Восстановление алкилнитро и/или алкилнитрила с применением никеля Ренея

Рапеу Νί, Н₂ (40-50 ρδί)

Μ ΝΗ₃ ίη ЕЮН, ЕЮН

ΡΝΟ₂ о г ΡΟΝ-» ΡΝΗ₂

12* 15*

Соединение 12* можно превратить в соединение 15* в условиях восстановления.

Смесь 3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ола, Νί Ренея (2 экв. по весу), 2.0 М ΝΗ₃ в ЕЮН (5 мл/1 г) и абсолютного ЕЮН (20 мл/1 г) встряхивали в атмосфере Н₂ (40-50 ρδί) в течение 3 ч при комнатной температуре. Образовавшуюся смесь фильтровали через прокладку целита и промывали ЕЮН. Фильтрат концентрировали в вакууме и получали свободный амин.

Общий способ 13. Восстановление замещенных 3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-олов с применением катализатора Перлмана

Соединение 11* можно превратить в соединение 16* в условиях восстановления.

Смесь 3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ола (1 экв.) и 20% Рй(ОН)₂ на углероде (50 вес.% во влажном состоянии, соотношение 1:2 по весу подложки к катализатору) в ледяном АсОН (10 мл/г) встряхивали в атмосфере Н₂ (45-50 ρδί) в аппарате для встряхивания Парра. После завершения реакции (ТСХ) смесь фильтровали через слой целита. Фильтрат концентрировали в вакууме и получали вязкий материал. Оставшийся АсОН удаляли путем совместного испарения с толуолом (3х) и получали амин, обычно в виде рыхлого твердого вещества. Очистку осуществляли способом препаративной ВЭЖХ.

Общий способ 14. Синтез замещенного (8)-3-(аминометил)-3-метилбензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)олгидрохлорида (А7)

К суспензии бромида метилтрифенилфосфония (1.2 экв.) в ТГФ при комнатной температуре добавляли порциями КО1Ви (1.2 экв.). После перемешивания в течение 5 мин реакционную смесь обрабатывали подходящим образом замещенным 2'-бромацетофеноном (1 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре, затем гасили насыщенным хлоридом аммония. После этого гашеную смесь экстрагировали 3хЕ1₂О и объединенные органические фазы промывали соляным раствором, высушивали над Мд§О₄ и испаряли под вакуумом. Затем фазы очищали способом силикагелевой хроматографии и получали замещенный 1-бром-2-(проп-1-ен-2-ил)бензол.

Затем смесь растворяли в двухфазной смеси воды и 1ВиОН и охлаждали до 0°С. Добавляли замещенный 1-бром-2-(проп-1-ен-2-ил)бензол и перемешивали гетерогенную смесь при 0°С в течение 18 ч, гасили сульфатом натрия, нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение дополни- 20 020530 тельного часа. Затем гашеную смесь экстрагировали 5χΌΟΜ и объединенные органические фазы высушивали над Μ§δΟ₄ и испаряли под вакуумом. Очищали способом силикагелевой хроматографии и получали замещенный (8)-2-(2-бромфенил)пропан-1,2-диол.

Замещенный (8)-2-(2-бромфенил)пропан-1,2-диол растворяли в пиридине (1 экв.) и охлаждали до 0°С перед добавлением метансульфонилхлорида (1 экв.). Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Пиридин удаляли под вакуумом и остаток распределяли между Ό0Μ и водным ΝαΗί'Ό₃. Органическую фазу высушивали над Μ§δΟ₄ и испаряли под вакуумом с получением неочищенного мезилата. Это вещество объединяли с ΝαΝ₃ (4.5 экв.), растворяли в ДМФ и нагревали до 80°С в течение 18 ч. Добавляли воду и экстрагировали 3χΕΐ₂Ο. Объединенные органические фазы промывали соляным раствором, высушивали над Μ§δΟ₄ и испаряли под вакуумом. Потом смесь очищали способом силикагелевой хроматографии и получали замещенный (8)-1-азидо-2-(2бромфенил)пропан-2-ол.

Замещенный (8)-1-азидо-2-(2-бромфенил)пропан-2-ол (1 экв.) и триизопропил борат (1.2 экв.) растворяли в 20 эк. толуола. Реакционную смесь кипятили с применением аппарата Дина-Старка с целью удаления толуола и остаток растворяли в 17 эк. сухого ТГФ. Этот раствор охлаждали до -78°С и добавляли по каплям ВиЫ (25 М в гексане, 1.15 экв.) и перемешивали в течение 30 мин. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и оставляли перемешиваться в течение 3 ч перед тем, как погасить ее с помощью 6 М НС1, и концентрировали под вакуумом. Смесь экстрагировали 3χΌΟΜ. Объединенные органические фазы высушивали над Μ§δΟ₄ и испаряли под вакуумом. Потом смесь очищали способом силикагелевой хроматографии и получали замещенный (8)-3-(азидометил)-3-метилбензо[с][1,2] оксаборол-1(3Н)-ол.

Замещенный (8)-3-(азидометил)-3-метилбензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ол (1 экв.) и трифенил фосфин (2 экв.) растворяли в ацетонитриле. Через 5 мин добавляли концентрированную соляную кислоту (2 экв.) и реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч при комнатной температуре перед концентрированием под вакуумом. Остаток помещали в Όί'Μ и промывали 3x2 М НС1. Объединенные водные фазы испаряли до сухости под вакуумом. Образовавшееся твердое вещество промывали ЕЮН и фильтровали с целью удаления побочных продуктов, концентрировали и кристаллизовали из ацетонитрила и получали гидрохлорид замещенного (8)-3-(аминометил)-3-метилбензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ола в виде твердого белого вещества.

Общий способ разделения энантиомеров методом хиральной ВЭЖХ

Соединение 17* можно разделить на энантиомеры 18* и 19* с помощью хиральной ВЭЖХ в условиях разделения.

Разделение двух энантиомеров осуществляли путем растворения вещества в подходящем растворителе и применения подходящей хиральной колонки и элюирующей системы. Затем собранные разделенные пробы энантиомеров концентрировали и применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки. Применяя этот способ, можно достичь диапазона энантиомерных избытков разделенных энантиомеров.

Общий способ хирального синтеза 3-аминометилбензоксаборолов

Р^а К^а

- 21 020530

Прямой стереоспецифический синтез 3-аминометилбензоксаборолов можно осуществить, исходя из 5- или 6-замещенного 2-бромацетофенона. Бром (1.0 экв.) медленно добавляют к подходящим образом замещенному 2'-бромацетофенону (1.0 экв.) в диэтиловом эфире при комнатной температуре и перемешивают в течение 2 ч. Добавляют воду и реакционную смесь перемешивают до исчезновения окраски. Фазы разделяют и водную фазу экстрагируют диэтиловым эфиром. Объединенные органические фазы промывают соляным раствором, высушивают над Мд8О₄, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с получением замещенного 2-бром-1-(2-бромфенил)этанона. (К)-(+)-2-Метил-СВ8оксазаборолидин [для К-изомера] или (8)-(-)-2-метил-СВ8-оксазаборолидин [для 8-изомера] (0.11 экв.) добавляют при перемешивании к раствору замещенного 2-бром-1-(2-бромфенил)этанона (1.0 экв.) в ТГФ. Реакционную смесь охлаждают до -10°С, в смесь добавляют ВН₃-ТГФ (1.0 М в ТГФ, 1.20 экв.) в течение 4 ч. Реакционную смесь перемешивают в течение дополнительных 45 мин при -10°С перед добавлением метанола (130 мл). Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Образовавшийся остаток обрабатывают способом испарительной колоночной хроматографии с получением замещенного хирального 2-бром-1-(2-бромфенил)этанола. К раствору этого спирта (1.00 экв.) в ДМФ добавляют азид натрия при комнатной температуре. Затем реакционную смесь нагревают до 80°С в течение 24 ч. Добавляют воду (150 мл) и полученный раствор экстрагируют диэтиловым эфиром. Объединенные органические фазы промывают соляным раствором (50 мл), высушивают над Мд8О₄, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток обрабатывают способом испарительной колоночной хроматографии с получением замещенного 2-азидо-1-(2-бромфенил)этанола. К раствору этого вещества (1.00 экв.) в толуоле добавляют триизопропилборат (1.50 экв.). К реакционной колбе присоединяют холодильник Дина и Старка и орошают реакционную смесь с целью удаления приблизительно 3/4 объема растворителя. Темную реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют в нее ТГФ, затем охлаждают до -78°С. К реакционной смеси при -78°С добавляют по каплям н-бутиллитий (2.5 М в гексане, 1.15 экв.) и затем перемешивают в течение 30 мин при этой температуре. Затем реакционную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры, при которой ее перемешивают в течение 3 ч перед тем, как погасить посредством 6 М НС1 (30 мл). Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и образовавшийся остаток обрабатывают способом испарительной колоночной хроматографии с получением замещенного 3-(азидометил)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ола.

К раствору этого соединения (1.0 экв.) в метаноле добавляют трифенилфосфин (1.0 экв.) и смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре. Добавляют концентрированный НС1 и реакционную смесь перемешивают в течение дополнительных 2 ч перед концентрированием до сухости при пониженном давлении. Добавляют дихлорметан и экстрагируют 2 М НС1. Объединенные водные фазы промывают дихлорметаном перед уменьшением объема при пониженном давлении. Затем остаток перекристаллизовывают из горячей воды/ацетонитрила (3 мл воды/50-80 мл ацетонитрила на г соединения) и получают замещенный хиральный (К или 8) 3-(аминометил)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ол в виде гидрохлоридной соли.

Соединения, описанные в настоящем документе, можно превращать в гидраты и сольваты способами, аналогичными описанным в настоящем документе.

IV. Биологические исследования ингибиторов редактирующих доменов синтетазы тРНК

Принятые в данной области методы генетики и молекулярной биологии применяют для идентификации соединений, которые связывают и/или ингибируют редактирующий домен тРНК-синтетазы. Более того, эти методы применяют, чтобы установить, связывает и/или ингибирует соединение синтетический домен, редактирующий домен или и редактирующий, и синтетический домены.

При типовом биологическом исследовании была подтверждена активность репрезентативного соединения против редактирующего домена. Чтобы идентифицировать мишень нового борсодержащего противобактериального соединения (А1), были выделены генетически модифицированные штаммы Е.соП. демонстрирующие устойчивость к соединению (А1). Исследование генетически модифицированных штаммов показало, что они характеризуются 32-256-кратным увеличением устойчивости к (А1) по сравнению с диким типом. Кроме того, как было показано, генетически модифицированные штаммы являются чувствительными к различным противобактериальным препаратам с известными видами действия, что предполагает, что клеточная мишень (А1) отличается от мишени других противобактериальных веществ. Ген 1еи8, полученный из генетически модифицированных штаммов, был клонирован в плазмиду, и их устойчивость была подтверждена МИК. Редактирующий домен, полученный из этих генетически модифицированных штаммов, образовывал последовательность, и все мутации были локализованы в редактирующем домене этого фермента.

В настоящем изобретении также были проведены исследования с целью определения, связывает и/или ингибирует ли конкретное соединение редактирующий домен выбранной тРНК-синтетазы и насколько эффективно, при этом дополнительные исследования легко могут быть проведены специалистами в данной области техники. Коротко говоря, в типовом исследовании объединяют неправильно заряженную тРНК и тРНК-синтетазу, которая способна редактировать неправильно заряженную тРНК. Образовавшуюся смесь приводят в контакт с предполагаемым ингибитором и оценивают степень редакти- 22 020530 рующего ингибирования.

В еще одном анализе используют генетические методы, чтобы показать, что лекарственный препарат работает посредством редактирующего домена. В этом исследовании сначала исследуют активность соединения против штаммов клеток, избыточно экспрессирующих копии гена тРНК-синтетазы. Действие соединения на сверхэкспрессирующий штамм сравнивают с контрольным штаммом с целью определения, является ли соединение активным против синтетазы. Если минимальная концентрация ингибирования (МИК, М1С) в 2-раза выше в штамме с дополнительными копиями гена синтетазы, чем МИК ингибитора против клетки дикого типа, проводят дополнительный генетический скрининг для определения, обусловлена ли повышенная устойчивость мутациями в редактирующем домене. В этом втором скрининге контрольный штамм провоцируют высокой концентрацией ингибитора. Колонии, пережившие введение провокационной пробы, изолируют и выделяют ДНК из этих клеток. Редактирующий домен усиливают с помощью корректирующего фермента РСК и подходящих затравок. Продукт РСК можно очистить стандартными методами. Последовательную усиленную мутантную ДНК сравнивают с диким типом. Если мутантный ДНК содержит мутации в редактирующем домене, такие результаты означали бы, что соединение связывается с редактирующим доменом и воздействует на редактирующую функцию молекулы посредством этого домена.

Исследования, описанные выше, можно применять, по существу, в любой микробной системе, например бактериальной, грибковой, паразитической, вирусной и т.п.

В целом, в этих исследованиях тестируемые соединения применяют в диапазоне примерно от 1 пМ до примерно 100 мМ, предпочтительно примерно от 1 пМ до примерно 1 мкМ. Концентрации других соединений лежат в интервале примерно от 1 до примерно 100 нМ, предпочтительно примерно от 1 нМ до примерно 1 мкМ.

Воздействие тестируемых соединений на функционирование ферментов можно также измерить на основе любого подходящего физиологического изменения. Когда функциональные последовательности определяют с применением интактных клеток или животных, можно также измерить различные эффекты, такие как выделение медиаторов, выделение гормонов, транскрипционные изменения относительно известных, так и неописанных генетических маркеров, изменения клеточного метаболизма, такие как рост клеток или изменения рН, и изменения внутриклеточных вторичных мессенджеров, таких как Са²+, или циклических нуклеотидов.

Высокопроизводительный скрининг (НТ§) также применяют при идентификации перспективных соединений согласно изобретению.

Применяя описанные в настоящем документе исследования и другие легкодоступные исследования в данной области, опытные специалисты без труда определят другие соединения и классы соединений, которые способны связывать и/или ингибировать редактирующий домен тРНК-синтетазы.

Согласно еще одному аспекту в изобретении предлагают способ идентификации соединения, которое связывается с редактирующим доменом тРНК-синтетазы, включающий а) приведение указанного редактирующего домена в контакт с тестируемым соединением в условиях, подходящих для связывания; и Ь) обнаружение связывания указанного тестируемого соединения с указанным редактирующим доменом. Согласно типичному варианту реализации изобретения обнаружение связывания указанного соединения включает применение по меньшей мере одного поддающегося обнаружению элемента, изотопа или химической метки, присоединенной к вышеуказанному соединению. Согласно типичному варианту реализации изобретения элемент, изотоп или химическую метку обнаруживают с помощью флуоресцентных, люминесцентных, радиоактивных данных или путем измерения оптической плотности. Согласно типичному варианту реализации изобретения приведение указанного тестируемого соединения в контакт с указанным редактирующим доменом также включает дальнейшее приведение в контакт указанного тестируемого соединения и указанного редактирующего домена с группой, выбранной из АМФи молекулы с конечным аденозином. Согласно типичному варианту реализации изобретения указанную тРНК-синтетазу получают из соединения, выбранного из аланил-тРНК-синтетазы, изолейцил-тРНКсинтетазы, лейцил-тРНК-синтетазы, метионил-тРНК-синтетазы, лизил-тРНК-синтетазы, фенилаланилтРНК-синтетазы, пролил-тРНК-синтетазы, треонил-тРНК-синтетазы и валил-тРНК-синтетазы. Согласно типичному варианту реализации изобретения тРНК-синтетазу получают из лейцил-тРНК-синтетазы. Согласно типичному варианту реализации изобретения тРНК-синтетазы получают из генетически модифицированной синтетазы тРНК, при этом в настоящем документе указанная генетически модифицированная тРНК-синтетаза содержит аминокислотные мутации в редактирующем домене. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения при этом в настоящем документе указанный редактирующий домен синтетазы тРНК содержит аминокислотную последовательность пептидной последовательности, описанную в настоящем документе.

Согласно еще одному аспекту в изобретении предлагают способ идентификации соединения, которое связывается с редактирующим доменом тРНК-синтетазы, при этом указанное исследование включает а) приведение указанного редактирующего домена тРНК-синтетазы в контакт с указанным соединением в условиях, подходящих для связывания указанного соединения с указанным редактирующим доменом тРНК-синтетазы; Ь) сравнение биологической активности указанного редактирующего домена тРНК- 23 020530 синтетазы, приведенного в контакт с указанным соединением, с указанной биологической активностью в случае отсутствия контакта с указанным соединением; и с) идентификацию указанного соединения как связанного с указанным редактирующим доменом тРНК-синтетазы, если указанная биологическая активность указанного редактирующего домена тРНК-синтетазы уменьшается при приведении в контакт с указанным соединением. Согласно типичному варианту реализации изобретения биологическая активность представляет собой гидролиз неродственной аминокислоты. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения гидролиз указанной неродственной аминокислоты обнаруживают путем применения одной или более меток. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения метки включают радиометку, флуоресцентный маркер, антитело или их комбинацию. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения указанную метку можно обнаружить с помощью спектроскопии. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения редактирующий домен тРНК-синтетазы получают из соединений, выбранных из аланил-тРНК-синтетазы, изолейцил-тРНКсинтетазы, лейцил-тРНК-синтетазы, метионил-тРНК-синтетазы, лизил-тРНК-синтетазы, фенилаланилтРНК-синтетазы, пролил-тРНК-синтетазы, треонил-тРНК-синтетазы и валил-тРНК-синтетазы. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения указанный редактирующий домен тРНКсинтетазы получают из лейцил-тРНК-синтетазы.

Согласно еще одному аспекту в изобретении предлагают способ получения тРНК молекул с помощью неродственных аминокислот, включающий а) создание или выделение мутированной тРНКсинтетазы посредством измененных аминокислотных редактирующих доменов, и Ь) приведение в контакт тРНК молекулы с указанной мутированной тРНК-синтетазой и неродственной аминокислотой. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения генетически модифицированная тРНКсинтетаза содержит одну или более аминокислотных мутаций в редактирующем домене. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения генетически модифицированная тРНК-синтетаза неспособна связаться с соединением согласно изобретению. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения генетически модифицированная тРНК-синтетаза неспособна связаться с соединением, описанным в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемой солью. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения генетически модифицированная тРНК-синтетаза неспособна связаться с соединением согласно формуле, описанной в настоящем документе, или фармацевтически приемлемой солью указанного соединения. Согласно еще одному типичному варианту реализации соединение согласно изобретению представляет собой соединение, выбранное из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой соединение, выбранное из

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н.

Согласно еще одному аспекту в изобретении предлагают композицию, которая содержит одну или более молекул тРНК, присоединенных к неродственным аминокислотам, при этом в настоящем документе указанные молекулы тРНК синтезируют с применением одной или более мутированных тРНКсинтетаз, выделенных из микроорганизма или клеточной линии, полученной из микроорганизма. Согласно типичному варианту реализации изобретения микроорганизм представляет собой бактерии. Согласно типичному варианту реализации изобретения при этом указанные генетически модифицированные тРНК-синтетазы содержат аминокислотные мутации в редактирующих доменах.

V. Аминокислотные и нуклеотидпые последовательности, применяемые в исследованиях тРНК последовательности, которые взаимодействуют с комплексом тРНК-синтетаза-соединение согласно изобретению-АМФ

Транспортные РНК (тРНК) переносят мРНК в белок на рибосоме. Каждая транспортная РНК содержит антикодоновый участок, который создает гибрид с мРНК, и аминокислоту, которая может быть присоединена к растущему пептиду. Структурный ген тРНК имеет длину примерно от 72 до 90 нуклео- 24 020530 тид и складывается в структуру клеверного листа (8Ьагр 8.1. 8сНааск 1.. Соо1еп Ь., Вигке Ό.Ι и 8о11 Ό. 81гис1игс апб (гашспрбоп о£ еикагуобс (ΒΝΛ депез, Сгй. Кеу. ВюсЬет, 19 107 144 (1985), Се1би5сЬек Е.О. и ТоссЫт-Уа1епбт, Тгапкотрбоп Ьу КNΑ ро1утега5е III, Аппи Кеу. ВюсНет 57:873 914 (1988)).

Согласно одному варианту реализации изобретения соединение, описанное в настоящем документе, приводят в контакт с АМФ и тРНК-синтетазой, и тРНК-синтетазу, в свою очередь, приводят в контакт с молекулой тРНК. Согласно еще одному варианту реализации изобретения соединение, описанное в настоящем документе, приводят в контакт с АМФ из молекулы тРНК и тРНК-синтетазой. Нуклеотидную последовательность молекулы тРНК можно определить путем идентификации участвующей тРНКсинтетазы. Например, для лейцил-тРНК-синтетазы родственная связанная молекула тРНК будет представлять собой тРНК-лейцин (8ЕЦ ГО N0 1), а неродственная тРНК, такая как изолейцин, (8ЕЦ ГО N0 2) может быть связана при некоторых условиях. Согласно еще одному варианту реализации изобретения молекула тРНК представляет собой лейцил ΐ-ΡΗΚ. Согласно еще одному варианту реализации изобретения молекулу тРНК изображают как 8ЕЦ ГО, описанную в настоящем документе. Согласно еще одному варианту реализации изобретения молекулу тРНК изображают как 8ЕЦ ГО N0 14, 8ЕЦ ГО N0 15, 8ЕЦ ГО N0 16, 811) ГО N0 17, 811) ГО N0 18, 811) ГО N0 19, 811) ГО N0 20, 811) ГО N0 21, 811) ГО N0 22, 811) ГО N0 23 и 8ЕЦ ГО N0 24. Согласно этому и другим вариантам реализации изобретения подразумевают, что термин неродственный включает как единственную, так и множественную форму слова, т.е. фраза неродственная аминокислота включает одну или более аминокислот. В нижеследующих последовательностях 54Ц=5⁴и; 4-тиоуридин; Ст=метилгуанин; У=пиримидин; т5216А=т5²1⁶А; 2-метилтиоЫ-6изопентенил аденозин и О=дигидроуридин.

ЗЕО ГО ΝΟ: 1 соответствует нуклеотидной последовательности гена тРНК-Ьеи из ЗассЕаготусех сеге\чыае'. дддадШдд ссдадглдЦ 1ааддсд1са даШаддст с1да(а(с(1 сдаа(дсаадддйсдаа(с ссйаассй сасса

ЗЕО ГО ΝΟ: 2 соответствует нуклеотидной последовательности гена тРНК-Пе из 8асс1кп-отусе& сегеу/яае. дааасШаа НсааНдд! 1адаа1а§(а 1Н1да(аад «1.асааа1а1 аддНсагНс ссЛдИааП 1са(сса

ЗЕО ГО N0: 14 соответствует нуклеотидной последовательности гена тРНК-Ьеи из Е. соН: §сдаа§д1§§сддааид§1адасдсдс1адсиса§д1дма81ё1ссизс8§асд1д䧧дйсаадгсссссссс1:с£сасса

ЗЕО ГО N0: 15 соответствует нуклеотидной последовательности гена тРНК-Ьеи из Е. соН. §с8ддад1ддсдааацдд1адасдсассада111аддц(л:ддсдссдсаадд(д(дсда§псаад1с(с8сс1сссдсасса

ЗЕО ГО N0: 16 соответствует нуклеотидной последовательности гена тРНК-Ьеи из Е. соН: дссдаа^ддсдаааюд^адасдсадЦдайсааааЮаассдидаааисдХдссддйсдадтсддссйсддсасса

ЗЕО ГО N0: 17 соответствует нуклеотидной последовательности гена тРНК-Ьеи из Е. соН: дссдад§1дд1§даанд81адасасдс(асс11дад§1дд(ад1дсссаа(адд8с(1асдд§11саад1ссс§(сс(сдд1асса

ЗЕО ГО ΝΟ: 18 соответствует нуклеотидной последовательности гена тРНК-Ьеи из Е. соН осссдда1дд1ддаа1сде,1а”асасаадддаи1аааа(сссгсддсд(1сдсдс(д(дсд8дЦсаад1сссдс(ссддд1асса

ЗЕО ГО ΝΟ: 19 соответствует нуклеотидной последовательности гена тРНК-Ьеи из Е.

соН:

ССССССА54иООиОСААПСОтООАОАСАСААОООАУиипкАААт£21бАА¥СССиСООС оиисосссиоиосооотусААоисссссиссоооиАссА

8Е0 ГО ΝΟ: 20 соответствует нуклеотидной последовательности гена тРНК-Ьеи из Е.

соН:

ссоААосиоосооААопотООАаАСососиАосиисАОипкОУОУиАоиоиссииАС ооАСоиооооотусААсиссссссссисосАССА

ЗЕО ГО N0: 21 соответствует нуклеотидной последовательности гена тРНК-Ьеи из Е.

со1г.

ОССОАООиООиООААООСгтООАОАСАСОСиАССииОАОипкОУООиАОиОСССААиА ооосиилсооотуСААоисссоиссисооиАССА

- 25 020530

8Е0 ΙΒ ΝΟ: 22 соответствует нуклеотидной последовательности гена тРНК-Ьеи из

Рзеийотопаз аегид!поза §сд§асд1§д1§дааИ§§1а§асасас1§§аИ১11ссадс§сс§саа§дс§Тда8адИс§ад1с1с1ссд1ссдсасса

8Е<? ГО ΝΟ: 23 соответствует нуклеотидной последовательности гена тРНК-Ьеи из

5(арЬу!ососси5 аигеиз §сс§§§§1§§сддаас(§§са§ас§саса§дас1иааа1сс(§с§д1§а§а§а1сасс§1асс§дПс§а11сс§д(сс1с§§сасса

8Е(} Ιϋ ΝΟ: 24 соответствует нуклеотидной последовательности гена тРНК-Ьеи из

81арЬу1ососсиз аигеиз §сс§д§ё1§вс§§аас(§§са§ас§сасад§асНаааа1сс1§сд§1§адС§а1сасс81асс§^1с§аисс§д1сс1с§§сасса

Полипептиды, применяемые при биологических исследованиях связывания и ингибирования

В некоторых исследованиях связывания и ингибирования более эффективно применять часть молекулы тРНК-синтетазы, а не сам весь белок. В таких исследованиях в эксперименте применяют полипептиды, полученные из тРНК-синтетазы.

Согласно одному предпочтительному варианту реализации в биологических исследованиях и экспериментах по изучению связывания применяют полипептидные фрагменты, соответствующие редактирующему домену молекулы тРНК-синтетазы. Такие фрагменты изображают как 8ЕЦ ГО N0:3, 8ЕЦ ГО N0:4, 8Е0 ГО N0:5, 8ЕЦ ГО N0:6 и 8ЕЦ ГО N0:7. Согласно типичному варианту реализации изобретения фрагменты изображают как 8ЕЦ ГО N0:5, 8ЕЦ ГО N0:6 и 8ЕЦ ГО N0:7.

8Е<? ГО ΝΟ 3:

ТРЦЕУЮУКШАЕЕРАООААКНОЗЗЗОЕОКЗККРУРУААТЕКРЕТМУОрТССРУЗРТШУСН

ΡΟΑΟΟ8ΥΡΙΤΤΕΚΑΡΚΝΜ3Υ0ΚΕΤΡΚΚΟΡΥΚΡΐντνΡΟΚΑΡΙΟΤΚΙΗΑΡΩ3νΥΡΕΕΚΙΕΡΜΕΤ

У1АТКОТСУУТСУРЗМЗРПОУ1ТТКОЬЕНКРЕУ¥01КРЕГСГОНЕ1УР1МНТЕКУООЬТАКА] νΕΕΚΚΙ95ΡΚϋΚΝΕΕΑΕΑΚΚΙΑΥΚΕΕ>ΥΥΤΟΤΜΙΥΟΡΥΚΟΕΚνΕ(2ΑΚΝΚνΚΑΟΜ]ΑΑΟΕΑ

Ρ\·Ύ\ΕΡΕ8()0Ρ

8Ε<2 ГО ΝΟ 4:

МТР0ЕУ1ОУК1ЕАЕЕРАООААК1ГО335ОЕОК8ККРУРУААТЕКРЕТМУО9ТССРУ8РТ1ЕУ ϋΙΓΰΛ(3ϋ3ΥΙΤΠΈΚΛΡΚΝΜ8ΥΕ)ΚΙ.ΤΡΚΚ(_ιΓΥΚΡ1 νΤνΡΕΐΚΆΓΙΟΤΚΠ ΙΑΡΟ$νΥΡΕΕΚΙΙ_ΡΜ ΕΤνΐΑΤΚΟΤθννΤ(:νΡ8Ν5ΡΟΟΥΙΤΤΚΟΕΕΗΚΡΕΥΥΟΙΚΡΕ\νΐΟΗΕΐνΡΙΜΗΤΕΚΥ60ΕΤΑΚ ΑΐνΕΕΚΚΙ05ΡΚΕ>ΚΝΕΕΑΕΑΚΚΙΑΥΚΕΟΥΥΤΟΤΜΙΥθΡΥΚΟΕΚνΕ<5ΑΚΝΚνΚΑΟΜΙΑΑΟΕ АР V ΥΝΕΡΕ30ΟΡ0ΟΡΝ8 53 ΥϋΚΕΑ ΑΑΙΈΗΗΗΗΗ

8Ε<5 ГО ΝΟ 5:

Τ€ΤΡΕΥΥΚ.\νΕΩΚΡΡΤΕΕΥΚΚΟΕνΥΚΚΤ5ΑνΝλνΰΡΝΟ9ΤνΕΑΝΕ0νΐΟΟ0ΰ\νΚΕϋΤΚνΕΚ

ΚΕΙΡρ\νΡΙΚΙΤΑΥΑΕ)ΕΕΕΝϋΕΟΚΕΟΗ\νΡΟΤνΚΤΜΩΚΝ\νΐΟΚ5ΕθνΕΙΤΡΝνΝΏΥΟΝΤΕΤν

- 26 020530

ΥΤΤΚΡϋΤΡΜΟϋΤΥΕΑνΑΑΟΗΡΕΑΟΚΑΑΕΝΝΡΕΕΑΑΡΙΟΕΰΚΝΤΚνΑΕΑΕΜΑΤΜΕΚΚΟνϋ

ΤΟΡΚΑνΗΡΕΤΟΕΕΙΡνχνΑΑΝΡνΕΜΕΥΟΤΟΑνΜΑνΡΟΗϋφΚΟΥΕΡΑδΚΥΟΕΝΙΚΡνίΕΑΑΟ

05>ΕΡ0Ε8()Γ)ΑΕΤΕΚ0νΈΡΝ50ΕΡΝ0Ε0ΗΕΑΑΡΝΑΙΑΟΚΕΤΑΜ0ν<ΐΕΚΚνΝΥΚΕΚϋ\ν(ΐν3 κοργ\νο δΕΟ Ш ΝΟ 6:

Τ0ΚΡΟΥΥΚ\νΕ0ΐνΕΡΤΙ^ΡΕΚθνΐΥΚΚΝΟΤν№\Τ>ΡΑΟ0ΤνΕΑΝΕ0νΐΟΟΚΟ\νΚ.5ΟΑΕΙΕΚ

ΚΕΙΡΜΥΥΡΚΐτθΥΑΟΕΕΕΕ5ΕΟΕΕΡΟ\νΡΕ0νΚΤΜ0ΚΝ\νΐΟΚδΚΟΜΕν0ΡΡΥΟ0ΑδΙΟΗΕΟ

ТЕКУГТТКРОТЕМОАТУУАУААЕНРЕАТОААООКААЕОАРГОЕСКЗОЗУАЕАОМАТОЕК

ΚΟΜΑΤδΕΡνΕΗΡΕΤΟΕΚΕΡνχννΑΝΥνΕΜΗΥΟΟΟΑνΜΑνΡΑΗϋΕΚΌΡΕΡΑΗΚΥΝΕΡνΚΑ

УУВ.Т5АОООУО8Е1УЕААУОЕНО0ЕПЧ5СЕРООЕОР0ОАРОА1ЕААЕ1К.КПЕОК8КТ0РКЕ κοννΰΐδΡΟΡΥΗΌ δΕΟ ΙΟ ΝΟ 7:

ΠΟΡΕ Υ ννΤΟλΥΙΡΙΟΙ, ΥΝΕΟί ΑΥ ΥΟΕΥ А ΥΝΥ/ΟΡ ΛΕΟΤΥΈδΝΕΕ УГОО νδΕΚΟΟΗΡνΥΚ

ΚΡΜΚΟλννΕΚΙΤΕΥΑΟΟΕΕΑϋΕϋΏΕΏλνΡΕδΕΚϋΜΟΙΪΝλνίΟΚδΕΟΑΚνδΡΟνΏΝΤΕΟΚνΕ νΡΤΤΚΡΟΤΙΥΟΑδΡΕνΕδΡΕΗΑΕνΝδΙΤΤΟΕΥΚΕΚνΚΑΥΟΤΕΑδΚΚδϋΕΕΚ.ΤϋΕΑΚΟΚδθν

ΡΤΟΑΥΑΙΝΡΕδΟΕΚνοηνίΑΟΥνΕδΤΥΟΤΟΑΙΜΑνΡΑΗϋΟΚΟΥΈΡΑΚΚΡϋΕΕΙΙΕνίΕΟΟΝν

ΕΕΑΑΥΤΟΕΟΚΗΙΝδΟΕΕΟΟΕΕΝΕΑΑΙΤΚΑΙΟΕΕΕΟΚΟΑΟΕΚΚνΥΚΕΚΟν/ΕΡδΚΟΚΥλνΟ

8ΕΟ ГО ΝΟ 8 соответствует пептидной последовательности для редактирующего домена 1еи-тРНК-синтетазы для ЕзсНеосИа соН

ΟΚδΕΟνΕΙΤΡΝνΝϋΥΟΝΤΕΤνΥΤΤΚΡΟΤΡΜΟϋΤΥΕΑνΑΑΟΗΡΕΑΟΚΑΑΕΝΝΡΕΕΑΑΡΙϋΕ

СК.КТКУАЕАЕМАТМЕККОУОТОРКАУНРЕТОЕЕ1Р\АУААЧРУЕМЕУОТОАУМАУРОНП

ΟΡΟΥΕΡΑδΚΥΟΕΝΙΚΡνίΕΑΑϋΟδΕΡΟΕδΟΟΑΕΤΕΚΟνΕΡΝδΟΕΡΝΟΕΟΗΕΑΑΓΝΑΙΑΟΚΕ

ΤΑΜΟνΟΕΚΚνΝΥΚ

8ΕΟ ГО ΝΟ 9 соответствует пептидной последовательности для редактирующего домена 1еи-тРНК-синтетазы для Рзеибогтюпаз

ΟΚδΚΟΜΕνΟΡΡΥΟΟΑδΙΟΗΕΟΤΕΚνΡΤΤΚΡϋΤΕΜΟΑΤΥνΑνΑΑΕΗΡΕΑΤΟΑΑΟΟΝΑΑΕΟ

ΑΠΟΕΟΚδΟδνΑΕΑΟΜΑΤΟΕΚΚΟΜΑΤδΕΡνΕΗΡΕΤΟΕΚΕΡνχννΑΝΥνΕΜΗΥΟϋΟΑνΜΑ νΡΑΗϋΕΡΟΡΕΡΑΗΚΥΝΕΡνΚΑννΚΤδΑΟΟϋνΟδΕλνΕΑΑΥΟΕΗΟΟΕΙΝδΟΕΡϋΟΕΟΡΟΟΑ

ΡΏΑΙΕΑΑΕΙΚΚϋΕΟΚδΡΤΟΡΚ

5ΕΟ Π) ΝΟ 10 соответствует пептидной последовательности для редактирующего домена 1еи-тРНК-синтегазы для 81арЬу1ососсиз аигеиз

ΟΚδΕΟΑΚνδΡϋνΟΝΤΕΟΚνΕνΡΤΤΚΡΟΤΙΥΟΑδΡΕνΕδΡΕΗΑΕνΝδΙΤΤΟΕΥΚΕΚνΚΑΥΟΤ

ΕΑδΚΚδΟΕΕΚΤΟΕΑΚΟΚδΟνΡΤΟΑΥΑΙΝΡΕδΟΕΚνΟηνίΑΟΥνΕδΤΥΟΤΟΑΜΑνΡΑΗΟΟ

ΚϋΥΕΡΑΚΚΡϋΕΕΙΙΕνίΕΟΟΝνΕΕΑΑΥΤΟΕΟΚΗΙΝδΟΕΕϋΟΕΕΝΕΑΑΙΤΚΑΙΟΕΕΕΟΚΟΑΟΕ κκνγκ

Согласно одному предпочтительному варианту реализации в биологических исследованиях и экспериментах по изучению связывания применяют полипептиды, соответствующие молекуле тРНКсинтетазы. Такие полипептиды изображают как 8Е0 ГО N0:11, 8Е0 ГО N0:12 и 8Е0 ГО N0:13.

- 27 020530

5Εζ> Ιϋ ΝΟ 11 соответствует пептидной последовательности для 1еи-тРНК-синтетазы для ЕксЬепсЫа соП

М0Е2УКРЕЕ1Е5КУ0ЬНТОЕККТЕЕУТЕОЕ5КЕКУУСЬ5МЬРУРЗСКЬНМСНУКН¥Т1СОУ1А1Щ)

ВМЬеКЫУЬ0Р1С№ОАГСЬРАЕейАУКШТАРАРИТ¥ПЫ1АУМК№ЬКМЬСРСУПК5КЕЬАТСТРЕУ

УКИЕ0КЕГТЕЬУККСЬУ¥ККТ5АУЫИСРЫР0ТУЬАНЕ0У1РСССНКСРТКУЕККЕ1Р0ИР1К1ТАУ ΑΡΕΕΡΝΡΕΟΚΕΌΗίίΡϋΤνΚΤΜ0ΡΝΜΙΰΡ5ΕθνΕΙΤΓΝνΝΡΥΡΝΤΕΤνΥΤΤΡΡΡΤΕΜ6σΤΥΕΑνΑΑ5 НРЬАОКААЕ NN РЕ ЬААГIРЕСКИТКУАЕАЕМАТМЕККСУР ТС ГКАУНР Ь Т СЕ ΕIРУГСААМЕУЬМЕΥ СТСАУМАУРСНР0РРУЕЕАЗК¥СЬ111КРУ1ЬААРСЗЕРРЬ52<2АЬТЕКСУЬЕЫ5СЕРЫСЬРНЕААЕ ЫА1АРКЬТАМСУСЕЕКУЫ¥КЬКШСУ5К0КУТССАР1РМУТЬЕГ)СТУМРТРОП2ЬРУ1ЬРЕРУУМГ)6 ΙΤ3ΡΙΚΑΌΡΕ№ΑΚΤΤνΝ5ΜΡΑΕΗΕΤΌΤΕΟΤΕΜΕ33ΜΥΥΑΡΥΤαΡΟΥΚΕ6ΜΕΡ3ΕΑΑΝΥΜΕΡνθΙΥΙ СС1ЕНА1МНЬЬУЕВ.ЕЕНКЬМР.ОАСМУЫ5ПЕРАК0ЬЬС0СМУЬАОАЕУ¥УСЕЫСЕКНИУ5РУОА1УЕ ΚΟΕΚΟΚΐνΚΑΚΟΑΑΰΗΕΣνΥΊΌΜ5ΚΜ5Κ5ΚΝΝΕΙϋΡ<2νΜνΕΡΥ6ΑϋΤνΚΕΕΜΜΕΑ5ΡΑΟΜΤΕΕ«ι2Ε ЗСУЕСАЫРГЬККУИКЬУ¥ЕНТАКСОУААЬМУРАЬТЕЫ0КАЬККОУНКТ1АКУТОР1СКК2ТГНТА1 АА1МЕЬМЫКЬАКАРТОСЕ0ПКАЬМ2ЕАЬЬАУУКМЬМРЕТРН1СЕТЬИ0ЕЬКСЕСР1ДНКРИРУАРЕ ΚΑΜνΕϋ3ΤΕνννθνΝι3ΚνΚΑΚΙΤνΡνϋΑΤΕΕθνΡΕΡΑΘΟΕΗΕνΑΚΥΕΡ6ντνΡΚνΐ УУРОКЬЬНЬУ νο

5Е<2 Ш ΝΟ 12 соответствует пептидной последовательности для 1еи-тРНК-синтетазы для Ркеиботопак

ΜΗΕΟΎΤΡΚΡνΕΑΑΑΟΝΑΗΌΕΟβΞΕΑνΤΕΟΡΟΚΕΤΥΥΟΙ,δΜΕΡΥΡΞαΚΕΗΜΟΗνΡΝΥΤίαϋνίΑΚΥΟ КМЬСКОТЕсРИСКϋΑΕΘΜΡΑΕΝΑΑΜΚΝΝνΑΡΑΚΜТΥΞΝIΌΥΜΚΤ□ЬК3ЕСЬΑΙΌΜ3КЕντТСКΡϋΥ ΥΚΜΕ2ΜΡΡΤΚΕΕΕΚ6νΐΥΚΚΝατνΝΗΌΡΑΡ2ΤνΕΑΝΕ0νΐΟΟΡΘΜΚ3ΰΑΡΙΞΚΚΕΙΡΜΥΥΕΚΙΤΟΥ АРЕЬЬЕЗЬ0ЕЬРСМРЕ2УКТМ2ЕИИ1СК5КСМЕУ2ГРУО2А31СНЕСТЬКУЕТТКРОТЬМСАТУУА УААЕНРЬАТОААОСЫААЬОАГГОЕСКЗСЗУАЕАРМАТОЕККСМАТЗЬГУЕНРЬТСЕКЬРУИУАЛУУ ЬМНУСРСАУМАУРАНВЕКРЕЕЕАНКУЫЬРУКАУУКТЗАСРРУСЗЕИЬААУСЕНеОЬТНЗСЕЕОСЬП Е0САГРА1ЕААЫККРЬСКЗКТ2ГКЬРРИС13Р0КУИССР1Р11НСР5ССОУРУРЕ00ЬРУТЬРЕМ УУРРСАСЗРЬАКМРЕГУЕСТСРКССТААККЕТРТМРТГУЕЗЗИУГАРУАЗРМУРКСЬУРРКААННИ ЬРУР0У1е0ГЕНА1ЬНЬЬ¥АКГГНКЬМКРЕСЬУТ5МЕРГКМЬЬТ2СМУУАЕТ¥УКУА5ЫС01ФМГК РАРУЕ1ЕКРАКАК11САРЬКТРСЬРУЕ1ССТЕКМ5К$КЫМСУРР23М1Е<ЛСАГ>ТСКЬГММЕА5РР

- 28 020530

ОМ 3 ЬЕИ 5 ϋ 5 ОТЕ САЗ Н ЕЬКНУИКЬАОАНУАОСЬ РС РЬ ОIААЬ ЗОЕ ОКУ IΚΡΑΙΗΑΑΙ КСАЗ ТОУ-ЗЕ ЕНКЕМТА1А0УМТУМЫУЬЕКАР2УТА0ОКАЬЬ0ЕСЬЕАУТЬЬЬАР1ТРН13НЕЪИК0ЬСНЕ<2АУ1О АТИРЗУБЕЗАЬУОБТУТЬУУОУЫСКЬРСОУЕМРАААЗКЕЕ 1ЕАААКНЫЕЫУЬР,ГТОСЬТ I ΡΚν: νν ΡΟΚΙΛΓΝίνΑΝ $Е<3 ΙΟ ΝΟ 13 соответствует пептидной последовательности для 1еи-тРНК-синтетазы для 81арЬу1ососси5 аигеиз

ΜΝΥΝΗΝ01ΕΚΚΜ0ΟΥΝΏΕΝΚΤΓΚΤΝϋΝΕ(50ΚΚΓΥΑΒηΜΦΡΥΡ5ΟΑΟΕΗν6ΗΡΕΟΥΤΑΤϋΙΙ5Ρ.ΥΚΚ

МССУМУЬНРМ6ИОАЕСЬРАЕОУАЬОТСМОРКЕЕТККЫ10ТЕКР121КЕЬСЕ5УОИОКЕУМТТОРЕУУ

КИТОИТПОЬУНКСЬАУУОЕУАУЫИСРАЬСТУЬЗЫЕЕУЮбУЗЕКССНРУУККРМКОИУЬКТТЕУА

ОСЬЬАОЬООЬОИРЕЗЬКОМОКМШСВЗЕОАКУЗЕОУОЫТЕСКУЕУЕТТВРОТЬУеАЗЕЪУЬЗРЕНА

ЬУЕ151ТТОЕУКЕКУКАУ<2ТЕАЗККЗОЬЕВТОЬАКОКЗСУЕТСА¥А1МРЬ5СЕКУ<21И1АО¥УЬ5ТУ СТСАЬМАУРАНБОЕОУЕЕАККГБЬЫ1ЕУ1ЕССМУЕЕАА¥ТСЕСКН1Ы5СЕЬОСЬЕЫЕАА1ТКА10 ЬЬЕОКСАСЕККУКУКЬКЬИЬГ5КОКУИеЕР1РУ1НИЕОеТМТТУРЕЕЕЬРЬЬЬРЕТОЕ1КР5еТСЕ ЗРЬАЫЮЗΕνΝννϋΕΚΤΟΜΚΰΒΒΕΤΝΤΜΡΟΗΑαΕΟΜΥΥΙΚΥIОРКЫЕЫМЬАОРЕКЬКНИЬРУОЪУ1 6ОУЕНАУЬНЬЬУАКЕИНКУЬУОЬС1УРТКЕРЕ0КЬЕ№6М1ЬСЕ6КЕКМ5К5КСМУ1МРО01УОЗН САОТЬКЬ¥ЕМЕМСРЬОАА1АИЗЕКСЬО63ККЕЬОРУИКЫУЫЕОСТЬЗЗК1УТТМЫКЗЬОКУУЫСТ УККУТООЕЕТЫЗЕЫТА130ЬМУЕ1КЕСУКУОЕУУКР¥1ЕеЕУКМЬАР1АРН1еЕЕЬИЗКЬеНЕЕ51 ТУОРИРТУБЕАЬЬУБОЕУЕ1УУОУЫеКЬЮ\К1К1 ΆΚΌΤ5ΚΕΕΜ£)ΕΙ АЬ,5ЫОЫУКА51ЕСКБ1МКУ1 АУРОКЬУЕПУАК

VI. Способы ингибирования фермента

Соединения согласно изобретению можно использовать для ингибирования фермента. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединения согласно изобретению проявляют способность ингибировать редактирующий домен тРНК-синтетаз, таких как лейцил-тРНК-синтетаза, микроорганизмов, таких как бактерии, и, следовательно, имеют потенциал для применения в качестве ингибиторов редактирующего домена тРНК-синтетаз у микроорганизмов.

Согласно еще одному аспекту изобретения предложен способ связывания и/или ингибирования редактирующего домена тРНК-синтетазы, который включает приведение в контакт тРНК-синтетазы с соединением согласно изобретению, ингибирующим редактирующий домен в условиях, при которых тРНК-синтетаза взаимодействует со своим субстратом с образованием промежуточного соединения аминоациладенилата и предпочтительно с образованием заряженной тРНК. Специалистам в данной области известны такие условия. Согласно типичному варианту реализации изобретения в настоящем документе описано соединение или его соль, гидрат или сольват или их комбинации. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или его соль, гидрат или сольват. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или соль указанного соединения. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или соль указанного соединения. тРНК-синтетазу приводят в контакт с соединением согласно изобретению в количестве, достаточном для достижения поддающегося обнаружению ингибирования тРНК-синтетазы. Этот способ можно осуществить на тРНК-синтетазе, которая содержится в организме или которая находится вне организма. Согласно типичному варианту реализации изобретения способ реализуют на тРНК-синтетазе, которая содержится в микроорганизме или микробной клетке, то есть в животном или на поверхности животного. Согласно типичному варианту реализации изобретения животное является человеком. Этот способ приводит к уменьшению количества заряженной тРНК, произведенной тРНК-синтетазой, которая содержит ингибированный редактирующий домен. Согласно типичному варианту реализации изобретения ингибирование происходит в клетке, такой как клетка микроба. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения микробная клетка представляет собой бактерии, грибы, дрожжи или паразита. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения тРНК-синтетаза представляет собой митохондральную тРНК-синтетазу или цитоплазматическую тРНК-синтетазу. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения тРНК-синтетаза представляет собой группу, выбранную из аланил-тРНК-синтетазы, изолейцил-тРНК-синтетазы, лейцил-тРНК-синтетазы, метионилтРНК-синтетазы, лизил-тРНК-синтетазы, фенилаланил-тРНК-синтетазы, пролил-тРНК-синтетазы, треонил-тРНК-синтетазы и валил-тРНК-синтетазы. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения тРНК-синтетаза представляет собой лейцил-тРНК-синтетазу.

Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают способ ингибирования кон- 29 020530 версии молекулы тРНК в заряженную молекулу тРНК. Этот способ включает приведение в контакт тРНК-синтетазы с соединением согласно изобретению, достаточно эффективным для ингибирования активности редактирующего домена указанной тРНК-синтетазы, в условиях, достаточных для ингибирования указанной активности и, тем самым, ингибирования указанной конверсии. Согласно типичному варианту реализации соединение согласно изобретению представляет собой соединение, описанное в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемую соль. Согласно типичному варианту реализации изобретения ингибирование происходит внутри клетки, а клетка представляет собой микробную клетку. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения микробная клетка представляет собой клетку, выбранную из бактерий, грибов, дрожжей и паразита. Согласно типичному варианту реализации изобретения тРНК-синтетаза представляет собой соединение, выбранное из митохондральной тРНК-синтетазы и цитоплазматической тРНК-синтетазы. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения тРНК-синтетаза представляет собой соединение, выбранное из аланил-тРНКсинтетазы, изолейцил-тРНК-синтетазы, лейцил-тРНК-синтетазы, метионил-тРНК-синтетазы, лизилтРНК-синтетазы, фенилаланил-тРНК-синтетазы, пролил-тРНК-синтетазы, треонил-тРНК-синтетазы и валил-тРНК-синтетазы. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения тРНКсинтетаза представляет собой лейцил-тРНК-синтетазу. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение имеет К_с, _синтез больше чем 100 мкМ по отношению к синтетическому домену указанной тРНК-синтетазы.

Согласно некоторым вариантам реализации изобретения механизм действия соединения согласно изобретению состоит в том, чтобы ингибировать конверсию молекулы тРНК в заряженную молекулу тРНК путем связывания и/или ингибирования, по меньшей мере, редактирующего домена синтетазы. Соединения, применяемые в этом способе, могут также ингибировать или иным образом взаимодействовать с синтетическим доменом (например, активным участком синтетического домена). Согласно недавнему предпочтительному варианту реализации изобретения редактирующий домен селективно ингибируется в присутствии синтетического домена. Согласно предпочтительному варианту реализации изобретения синтетический домен, по существу, не ингибируется, тогда как редактирующий домен ингибируется по меньшей мере на 50%, предпочтительно по меньшей мере на 60%, более предпочтительно по меньшей мере на 70%, еще более предпочтительно по меньшей мере на 80% и даже еще более предпочтительно по меньшей мере на 90% относительно активности тРНК-синтетазы. Согласно еще одному предпочтительному варианту реализации изобретения синтетический домен ингибируется не менее чем на 50%, предпочтительно не менее чем на 30%, предпочтительно не менее чем на 20%, 10%, предпочтительно не менее чем на 8%, более предпочтительно не менее чем на 5%, еще более предпочтительно не менее чем на 3% и даже еще более предпочтительно не менее чем на 1%. Ингибирование редактирующего домена вызывает уменьшение количества собственно заряженной тРНК, что приводит к замедлению или прекращению клеточного роста и деления.

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения отношение минимальной концентрации указанного соединения, ингибирующего указанный редактирующий домен, к минимальной концентрации указанного соединения, ингибирующего указанный синтетический домен указанной тРНК-синтетазы, представленное как К_с, _еЙ11/К_с, _синтез, составляет менее единицы. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения отношение К_с, _еЙ1 /К_с, _синтез соединения представляет собой величину, выбранную из менее чем 0.5, менее чем 0.1 и менее чем 0.05.

VII. Способы ингибирования роста микроорганизмов или уничтожения микроорганизмов

Соединения согласно настоящему изобретению проявляют активность против микроорганизмов, таких как бактерии, и, следовательно, имеют потенциал для уничтожения и/или ингибирования роста микроорганизмов.

В дополнительном аспекте, в изобретении предлагают способ уничтожения и/или ингибирования роста микроорганизма, при этом указанный способ включает приведение в контакт указанного микроорганизма с эффективным количеством соединения согласно изобретению и, тем самым, уничтожение и/или ингибирование роста микроорганизма. Согласно типичному варианту реализации изобретения микроорганизм представляет собой организм, выбранный из бактерий, грибов, вируса, дрожжей или паразита. Согласно типичному варианту реализации изобретения в настоящем документе описывают соединение или его соль, пролекарство, гидрат или сольват или их комбинацию. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или его соль, гидрат или сольват. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или его пролекарство. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или его соль. Согласно еще одному типичному варианту реализации соединение согласно изобретению представляет собой вещество, описанное в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемую соль. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение описывают с помощью формулы, приведенной в настоящем документе, или представляет собой его фармацевтически приемлемую соль. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение является частью фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе. Согласно еще одному типичному варианту реализации изо- 30 020530 бретения приведение в контакт осуществляют в условиях, которые дают возможность соединению проникнуть в организм. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение ингибирует тРНК-синтетазу посредством редактирующего домена синтетазы. Такие условия известны специалистам, опытным в данной области, а конкретные условия приведены в примерах, прилагаемых к настоящей заявке. Этот способ включает приведение в контакт микробной клетки с терапевтически эффективным количеством ингибитора редактирующего домена с целью ингибирования тРНК-синтетазы ίη νίνο или ίη νίίτο. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н.

Согласно еще одному аспекту микроорганизм находится внутри или на поверхности животного. Согласно типичному варианту реализации изобретения животное представляет собой субъект, выбранный из человека, крупного рогатого скота, оленя, северного оленя, козы, медоносной пчелы, свиньи, овцы, лошади, коровы, быка, собаки, морской свинки, песчанки, кролика, кошки, верблюда, яка, слона, страуса, выдры, курицы, утки, гуся, цесарки, голубя, лебедя и индейки. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения животное является человеком.

Согласно типичному варианту реализации изобретения микроорганизм уничтожают или его рост ингибируют путем перорального введения соединения согласно изобретению. Согласно типичному варианту реализации изобретения микроорганизм уничтожают или его рост ингибируют путем внутривенного введения соединения согласно изобретению.

Согласно типичному варианту реализации изобретения микроорганизм представляет собой бактерию. Согласно типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой грамположительную бактерию. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения грамположительная бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из вида 81арЬу1ососсик, вида 81гер1ососсик, вида ВасШик, вида МусоЬас1егшт, вида СогупеЬас1епит (вида РгорютЬас1егшт), вида С1ок1г1Йшт, вида Лсйпотусек, вида Етегососсик и вида 81гер1отусек. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения грамположительная бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из РгорютЬас1егшт аспек; 81арЬу1ососсик аигеик; 81арЬу1ососспк ер1Йегт1Й18, 81арЬу1ососсик каргорЬуйсик; 81арЬу1ососсик Ьаето1уйсик; 81герЮсосспк руодепек; 81герЮсосспк ада1асЬае; 81герЮсосспк рпеитошае; Етегососсик ГаесаПк; Етегососсик Гаесшт; ВасШик апШгасге; МусоЬас1егшт аушт-т1гасе11и1аге; МусоЬас1епит 1иЬегси1ок1к, Лсте1оЬас1ег Ьаитапл; СогупеЬас1егшт ШрЬШепа; С1ок1пйтт регГгшдепк; С1ок1пЙшт ЬоШНпит; С1ок1пЙтт 1е1ат; С1ок1пЙтт ЙГГйсПе. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения грамположительная бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из 81арЬу1ососсик аигеик, 81арЬу1ососсик ерШепшШк, 81гер1ососсик рпеитошае, 81герЮсосспк руодепек, Еп(егососсик ГаесаПк, Етегососсик Гаесшт, С1ок1пЙтт ЙГГйсПе и РгорютЬас1ег аспек. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой грамотрицательную бактерию. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения грамотрицательная бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из вида Лсте1оЬас1ег, вида №ткепа, вида РкеиЙотопак, вида Вгисе11а, вида ЛдгоЬас1егшт, вида ВогЙе(е11а, вида ЕксЬепсЫа, вида 81йдеПа, вида УегкПйа, вида

- 31 020530

8а1топе11а, вида К1еЪ51е11а, вида Εпΐе^оЪасΐе^, вида НаеторЫ1п5, вида Ра51еиге11а, вида 81гер!оЪасй1и5, спирохетозного вида, вида Сатру1оЪас!ег, вида УЛпо, вида НейсоЬатег, вида Вас1егоИе5, вида СйгоЪас1ег. вида Рго1еи8, вида Ргслайепта, вида 8етгайа, вида 81епо!торЬотопа5 и вида ВшкЬоМепа. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения грамотрицательная бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из вида Асте1оЬас1ег, вида Р5еийотопа5, вида ΕδсЬе^^сЬ^а, вида К1еЪ51е11а, вида Εпΐе^оЪасΐе^, вида Вас1егспйе5, вида СйгоЪас!ег, вида Рго1еп5, вида Ргслайепта, вида 8етгайа, вида 5>1епо1гор1ютопа5 и вида ВшкЬоМепа. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения грамотрицательная бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из №155епа допоггЬоеае; №155епа тетпдйЙ15; Рзеиботопаз аегидпоза; Ьедопейа рпеиторййа; Ε5сЬе^^сЬ^а сой; Υе^51та ре5Й5; Наеторййи5 тЛиеп/ае; НейсоЬатег ру1оп, Сатру1оЪас!ег Ге1п5, Сатру1оЪас!ег _)е.)ит; У1Ьпо сЬо1егае, УЛпо рагаЬето1уйси5; Тгеротепа раШйпт; Асйпотусе5 15гае1н; К1ске1151а рго\уа/екй; Кткейта пскей5п; СЫатуЛа 1гасйотаЙ5; СЫатуЛа р51йас1; ВгисеЙа аЪойи5; АдоЪас!етшт 1итеГас1еп5; Ргапс15е11а 1и1агеп515, К1еЪ51е11а рпеитотае, Εпΐе^оЪасΐе^ с1оасае, Асте1оЬас1ег Ъаитаппи, Вас1егсййе5 ГгадЙ5, СйгоЪас!ег Ггеипйи, Рго1еи5 тйаЪШ5, РгоуИепта 51паг1й, 8етгайа тагсе5сеп5, 81епо!горЬотопа5 таЙорЫйа и ВшкЬоМепа серата. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения грамотрицательная бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из Р5епйотопа5 аетидпо5а; Ε5сЬе^^сЬ^а сой, Наеторййи5 тЛиеп/ае, К1еЪ51е11а рпеитотае, Εпΐе^оЪасΐе^ с1оасае, Атпе1оЬас1ег Ъаитаппи, Вас1егоИе5 ГгадЙ5, СйтоЪас!ет Гтеипйн, Рго1еи5 т1гаЪЙ15, Ргслайепта 51паг1й, 8етгайа тагсе5сеп5, 81епойорйотопа5 таЙорЫйа и ВшкЬоМепа серата.

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой вид Р5еийотопа5. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой Р5еийотопа5 аетидпо5а. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из Р5еийотопа5 аетидпо5а, Атпе1оЬас1ег Ъаитаппи, 81епойорйотопа5 таЙорЫйа и ВшкЬоМепа серата. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой вид Атпе1оЬас1ег. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой Атпе1оЬас1ег апйта1и5. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из Εпΐе^оЪасΐе^ аегодепе5, Εпΐе^оЪасΐе^ с1оасае, Εпΐе^оЪасΐе^ 5ака/акй, Ε. сой, К. рпеитотае, Р. т1гаЪЙ15, 8етгайа тагсе5сеп5, СйтоЪас!ет Гтеипйн и РгоуИепша 5рр. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из Εηΐе^оЪасΐе^ аегодепе5, Εпΐе^оЪасΐе^ с1оасае, Εпΐе^оЪасΐе^ 5ака/акй, Ε. сой, К. рпеитотае, Р. т1гаЪЙ15, 8етгайа тагсе5сеп5, СйтоЪас!ет Ггеипйн, Ргслайепта 5рр., 8. аигеи5, 8. рпеитоша, 8. руодепе5, Ε. ГаесаЙ5 и Е. Гаесшт. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из Ушйап5 группы 81гер. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из 8йер. тЙ15, 81гер. тп1ап5, 81гер. огаЙ5, 81гер. 5апдш5, 81гер. 5оЪтти5 и 81гер. тй1атк Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из 8. рпеитота, Н. тЛиеп/ае, 8. аигеи5, М. са!атгЬаЙ5, М. рпеитотае, Ь. рпеитотае и С. рпеитотае. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой 8. аигеи5. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой анаэроб. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой вид А1сайдепе5. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой В. серата. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из Εηΐе^оЪасΐе^ с1оасае, Ε5сЬе^^сй^а сой, К1еЪ51е11а рпеитотае, Рго1еи5 т1гаЫЙ5, Ргслайепта 51паг1й, 8етгайа тагсе5сеп5 и СйтоЪас!ет Ггеипйн. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия является устойчивой к метициллину. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой метициллин-устойчивую 51арйу1ососсп5 аигеи5. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из 81гер1ососси5 рпеитотае; Наеторййи5 тЛиеп/ае; 8!арЬу1ососси5 аигеи5; МусоЬатегтт са!аггЬаЙ5; МусоЪас!етшт рпеитотае; Ьедопейа рпеиторййа и СЫатуФа рпеитотае. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения бактерия представляет собой микроорганизм, выбранный из Εпΐе^оЪасΐе^ с1оасае, Ε5сЬе^^сй^а сой, К1еЪ51ейа рпеитотае, Рго1еп5 т1гаЪЙ15, 8етгайа тагсе5сеп5, СйтоЪас1ет Гтеипйн, РгоуДепша 51паг1й, Р5епйотопа5 аегидпо5а, Атпе1оЬас1ег Ъаитаппи, 81епо1горйотопа5 таЙорЫйа, ВшкЬоМепа серата, 81арйу1ососсп5 аигеи5, 81гер1ососсп5 рпеитотае, 81гер1ососси5 руодепе5, Εпΐе^ососси5 ГаесаЙ5 и Εпΐе^ососси5 Гаесшт.

Согласно типичному варианту реализации изобретения микроорганизм представляет собой бактерию, выбранную из кислотоустойчивых бактерий, в том числе, вида МусоЪас!етшт; бацилл, в том числе вида Васй1и5, вида СогупеЬас1егшт (также РгорюшЬатепшп) и вида С1о5йтйтт; нитчатых бактерий, в том числе вида Асйпотусе5 и вида 8йер1отусе5; бацилл, таких как вид Р5епйотопа5, вид Вгисе11а, вид АдоЪаДетшт, вид Вогйе1е11а, вид Ε5сЬе^^сй^а, вид 8Ыде11а, вид Υе^5^п^а, вид 8а1топе11а, вид К1еЪ51е11а, вид Επ^ιόΕκ^γ, вид Наеторййи5, вид Ра51епге11а и вид 81гер1оЬасй1п5; спирохетозного вида, вида Сатру1оЬас1ег, вида У1Ьпо; и внутриклеточных бактерий, в том числе, вида Кюкейыае и вида СЫатуФа. Со- 32 020530 гласно типичному варианту реализации изобретения микроорганизм изображен на чертеже, представленном в настоящем документе.

Согласно типичному варианту реализации изобретения микроорганизм представляет собой организм, выбранный из грибов и дрожжей. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения грибы или дрожжи представляет собой микроорганизм, выбранный из вида Сапйка, вида ТгкНорНу1оп, вида Мкгозрогшш, вида АзрегдШиз, вида Сгур1ососсиз, вида В1азЮтусез, вида Соссюйюйез, вида Щ8Юр1а8та, вида Рагасосскюйез, вида РНусотусе1ез, вида Ма1аззе/1а, вида Ризагшт, вида ЕркегторНуЮп, вида 8су1аНШит, вида 8сори1агюрз1з, вида АНетапа, вида РепкШшт, вида РЫа1орЬога, вида РЮ/орпз, вида 8сейозройит и класса 2удотусе1ез. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения грибы или дрожжи представляют собой микроорганизм, выбранный из АзрегдПиз Γιιιηίда!из (А. Гит1да1из), В1аз1отусез йегтайНФз, СапФйа А1Ысап8 (С. а1Ысап8, оба чувствительных к флуконазолу и устойчивых штамма), СапФйа д1аЬга1а (С. д1аЬга1а), СапФйа кгизе1 (С. кгизе1), Сгур1ососсиз пеоГогтапз (С. пеоГогтапз), СапФйа рагарзНоз1з (С. рагарзйоз1з), СапФйа ЧоркаНз (С. ЧоркаНз), Соссюйюйез пптЮз, ЕркегторНуЮп Г1оссозит (Е. Г1оссозит), Ризапит зо1ат (Р. зо1ат), ШзЮр1азта сарзи1а1ит, Ма1аззе/1а ГигГиг (М. ГигГиг), Ма1аззе/1а расНуйегтаЧз (М. расНуйегтаНз), Ма1аззе/1а зутроФаНз (М. зутрой1аНз), Мкгозрогит аийошпл (М. аийошпл), Мкгозрогит сате (М. сатз), Мкгозрогит дурзеит (М. дурзеит), Рагасосскюйез ЬгазШепз1з и РНусотусе1ез зрр., ТгкНорНуЮп теп1адгорНу1ез (Т. теп1адгорНу1ез), ТгкНорНуЮп гиЬгит (Т. гиЬгит), ТгкНорНуЮп Юпзпгапз (Т. Юпзпгстз). Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения грибы или дрожжи представляют собой микроорганизм, выбранный из ТгкНорНуЮп сопсепЧкит, Т. уЮ1асеит, Т. зсНоеп1е1пи, Т. уеггисозит, Т. зоийапепзе, М1сгозрогит дурзеит, М. есцппит, СапЙ1Йа дшШегтопйп, Ма1аззе/1а д1оЬоза, М. оЫизе, М. гез1г1с1а, М. з1ооГйае и АзрегдШиз йауиз. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения грибы или дрожжи представляют собой микроорганизм, выбранный из дерматомицетов, ТгкНорНуЮп, Мкгозрогит, ЕркегторНуЮп и дрожжеподобных грибов. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения гриб или дрожжи представляют собой Сапйка а1Ькапз.

Согласно типичному варианту реализации изобретения микроорганизм представляет собой вирус. Согласно типичному варианту реализации изобретения вирус представляет собой микроорганизм, выбранный из гепатита А-В, человеческих риновирусов, вируса желтой лихорадки, человеческих респираторных коронавирусов, тяжелого острого респираторного синдрома (8АК8), респираторносинцитиального вируса, вирусов гриппа, вирусов парагриппа 1-4, человеческого вируса иммунодефицита 1 (ВИЧ-1), человеческого вируса иммунодефицита 2 (ВИЧ-2), вируса простого герпеса 1 (И8У-1), вируса простого герпеса 2 (И8У-2), человеческого цитомегаловируса (ИСМУ), вируса ветряной оспы, вируса Эпштейна-Барра (ЕВУ), полиовирусов, вирусов коксаки, ЕСНО-вирусов, вируса краснухи, нейродерматропического вируса, вируса натуральной оспы, паповавирусов, вируса бешенства, вируса денге, вируса Западного Нила и вируса САРС. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения вирус представляет собой микроорганизм, выбранный из ркогпаушйае, ЛасауЧкае, согопаушйае, рагатухоушйае, ойНотухоутйае, геЧоушйае, Негрезушйае и Нерайпаутйае. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения вирус представляет собой микроорганизм, выбранный из вируса, приведенного в следующей таблице:

- 33 020530

Категория

Вирусы

Подходящие человеческие инфекции

Вирусы РНК
	Полиомиелит
РкотстпБае	Человеческий гепатит А
	Человеческий риновирус
Тоуахи'Лае анд	КиЬеНа - коревая краснуха
ΡΙανινιηάαί
	Желтая лихорадка
СагопсмпБае	Человеческий респираторный коронавирус
	(НСУ)
	Тяжелый острый респираторный синдром
	(ЗАК.)
КЬаЪсктпВае	Ьуяяапгиз - бешенство
	Рагатухоуггиз - эпидемический паротит
Рагатухо утБае	МогЪБЬлгиз - корь
	Рпеитоутт - респираторно-
	синцитиальный вирус
ОгЛотухоутБае	Грипп А-С

Буньявирус - Випуат’л-ега (ΒΤΓΝ) Напктгих — хантавирус (ΗΤΝ)

ВипутппФае Ναπβνιηα - конго-крымская геморрагическая лихорадка (ССНР) РЫеЪттш - флеботомная лихорадка (8ΡΝ)

Никтн-иь - иикигпеггй (1ЛЖ) _Лихорадка долины Рифт (ΚΥΡΝ)_

Лпт - аргентинская геморрагическая лихорадка

Агепа\>)пс1ае Мас!тро - боливийская геморрагическая лихорадка

Гах>а - лихорадка Ласса

ЬСМ- асептический лимфоцитарный

РеоутБае	Ротовирус Реовирус Орбивирус
	Человеческий вирус иммунодефицита 1
	(Н1У-1)
РеггтчпБае	Человеческий вирус иммунодефицита 2
	(Н1У-2)
	Обезьяний вирус иммунодефицита (31У)

Ραροναντηώκ

АЛепо\чпс1ае

Рапхтпскге

Вирусы ДНК

Детские вирусы которые размещаются в почке

Респираторное расстройство у человека и некоторые бессимптомные глазные инфекции

Желудочно-кишечное расстройство у человека (вирус Норуолка)

НегрехутВае

РохутЛае

Вирус простого герпеса 1 (НЗУ-1)

Вирус простого герпеса 2 (НЗУ-2) Человеческий цитомегаловирус (НСМУ) Вирус ветряной оспы (νζν)

Вирус Эпштейна - Барра (ЕВУ) Человеческий вирус герпеса 6 (ННУ6) Ортолоксвирус представляет собой подрод для оспы

Нерас/паутсРк Вирус гепатита В (НВУ)

Вирус гепатита С (НСУ)

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения микроорганизм представляет собой паразит. Согласно типичному варианту реализации изобретения паразит представляет собой микроорганизм, выбранный из Р1а8тойшт ГаШрагииг Ρ. νίναχ, Р. оуа1е, Р. та1апае, Р. ЬегдНег Ье18Ьтата

- 34 020530 άοηοναηί. Ь. ίηΓαηΙιιιη. Ь. сЬада81, Ь. тсхюапа, Ь. ата/опспП, Ь. успс/искпП. Ь. 1горю8, Ь. та)ог, Ь. тшог, Ь. ас1Ыор1са, Ь. В1апа Ьга/Шстб, Ь. (V.) диуапсп818, Ь. (V.) рапатспП, Ь. (V.) рсгтлапа, Тгурапо8ота Ьгисс1 гНобсысп^с, Т. Ьгисс1 датЫспкс, Т. сги/ί, О1агб1а тккбпаПк, О. 1атЬба, Тохор1а§та допбп, Еп1атосЬа Ы81о1убса, ТпсНотопаз уадшаПк, РпситосукШ саппн и СгурЮзропбшт рагуит.

VIII. Способы лечения и/или предотвращения заболеваний

Соединения согласно настоящему изобретению проявляют активность против микроорганизмов, таких как бактерии, и, следовательно, имеют потенциал для достижения терапевтической эффективности при введении животным, как указано в настоящем описании.

Согласно еще одному аспекту в изобретении предлагают способ лечения и/или предотвращения заболевания. Способ включает введение животному терапевтически эффективного количества соединения согласно изобретению, достаточного для лечения и/или предотвращения заболевания. Согласно типичному варианту реализации соединение согласно изобретению можно применять при лечении человека или в ветеринарии, особенно, при лечении или профилактике связанного с бактериальным заражением заболевания. Согласно типичному варианту реализации изобретения в настоящем описании предложено соединение или его соль, пролекарство, гидрат или сольват или их комбинации. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или его пролекарство. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или его соль, гидрат или сольват. Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают соединение, описанное в настоящем документе, или его соль. Согласно еще одному типичному варианту реализации соединение согласно изобретению представляет собой соединение, описанное в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемую соль. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой соединение, описанное в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемую соль. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой соединение согласно формуле, приведенной в настоящем документе, или его фармацевтически приемлемую соль. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение является частью фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения животное представляет собой субъект, выбранный из человека, крупного рогатого скота, оленя, северного оленя, козы, медоносной пчелы, свиньи, овцы, лошади, коровы, быка, собаки, морской свинки, песчанки, кролика, кошки, верблюда, яка, слона, страуса, выдры, курицы, утки, гуся, цесарки, голубя, лебедя и индейки. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения животное является человеком. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения животное представляет собой субъект, выбранный из человека, крупного рогатого скота, козы, свиньи, овцы, лошади, коровы, быка, собаки, морской свинки, песчанки, кролика, кошки, курицы и индейки. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из системного заболевания, кожного заболевания и ногтевого, околоногтевого или подногтевого заболевания. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой системное заболевание. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

- 35 020530

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н.

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения лечение заболевания или состояния осуществляют посредством ингибирования редактирующего домена аминоацил-тРНКсинтетазы. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание лечат путем перорального введения соединения согласно изобретению. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание лечат путем внутривенного введения соединения согласно изобретению.

VIII. а) Способы лечения системного заболевания

Согласно еще одному аспекту в изобретении предлагают способ лечения системного заболевания. Способ включает приведение животного в контакт с соединением согласно изобретению.

Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из кандидамикоза, аспергиллёза, кокцидиоидомикоза, криптококкоза, гистоплазмоза, бластомикоза, паракокцидиоидомикоза, цигомикоза, феогифомикоза и риноспоридиоза.

Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с инфекцией, вызванной микроорганизмом, описанным в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с инфекцией, вызванной бактерией, описанной в настоящем документе.

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с инфекцией, вызванной грамположительной бактериями. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом §1арбу1ососсик. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из пневмонии, гастроэнтерита, синдрома токсического шока, САР, менингита, септического артрита, инфекций мочевых путей, бактериемии, эндокардита, остеомиелита, инфекций кожи и кожных структур. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом §бер1ососси5. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из стрептококкового воспаления горла, кожных инфекций, некротизирующего фасцита, синдрома токсического шока, пневмонии, среднего отита и синусита. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Лсбиотусек. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой актиномикоз. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом ШгсагШа. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой пневмонию. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом СогупеЬасбпиш. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой дифтерию. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Ыбепа. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой менингит. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом ВасШик. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из сибирской язвы и пищевого отравления. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Оокбтбшт. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из ботулизма, столбняка, газовой гангрены и диареи. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из туберкулеза и проказы.

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с инфекцией, вызванной грамотрицательными бактериями. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом №155е1та. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из менингита, гонореи, отита наружного уха и фолликулита. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом ЕксбебсЫа. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из диареи, инфекций мочевых путей, менингита, сепсиса и пневмонии, приобретенной в больнице. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом §Ыде11а. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из диареи, бактериемии, эндокардита, менингита и гастроэнтерита. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом 8а1шопе11а. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из брюшного тифа, сепсиса, гастроэнтерита, эндокардита, синусита и менингита. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Уегкииа. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из брюшного тифа, бубонной чумы, брюшного тифа и гастроэнтерита. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом К1еЬк1е11а. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из сепсиса и инфекции мочевых путей. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Рго1еик. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой инфекцию мочевых путей. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с

- 36 020530 видом Еп1егоЬас1ег. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой внутрибольничную инфекцию. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом 8еггайа. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из инфекции мочевых путей, инфекции кожи и кожных структур и пневмонии. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом νΦτίο. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из холеры и гастроэнтерита. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Сатру1оЬас1ег. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой гастроэнтерит. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом НеНсоЬас1ег. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой хронический гастрит. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Ркеийотоиак. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из пневмонии, остеомиелита, инфекций, связанных с ожоговыми ранами, сепсиса, инфекций мочевых путей, эндокардита, отита, роговичных инфекций. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Вас1егоИе8. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из пародонтоза и аспирационной пневмонии. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом НаеторЫ1и8. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из менингита, эпиглоттита, септического артрита, сепсиса, шанкроида и вагинита. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Вогйе1е11а. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой коклюш. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Ьедюпе11а. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из пневмонии и понтиакской лихорадки. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Ргаис18е11а. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой туляремию. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Вгисе11а. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой бруцеллёз. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом РаЧешеПа. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой кожную инфекцию. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Оагйпегейа. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой вагинит. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом 8р1госйе1е8. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой сифилис и болезнь Лайма. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом СЫатуФа. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой хламидии. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с видом Ктскейыае. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из пятнистой лихорадки Скалистых гор и сыпного тифа.

Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано видом Мусор1а§та рпеитотае. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из трахеобронхита и атипичной пневмонии. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание связано с Игеар1а8та игеа1уйсит. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой уретрит. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой пиелонефрит. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой внутрибрюшную инфекцию. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой лихорадочную нейтропению. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой тазовую инфекцию. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой бактериемию. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой заражение крови.

- 37 020530

Согласно типичному варианту реализации изобретения вводимое соединение имеет структуру, которая представляет собой группу, выбранную из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н.

VIII. Ь) Способы лечения или предотвращения ногтевых и/или околоногтевых заболеваний Согласно еще одному аспекту в изобретении предлагают способ лечения или предотвращения ногтевых и/или околоногтевых заболеваний. Способ включает введение животному терапевтически эффективного количества соединения или фармацевтической композиции согласно изобретению, достаточного для лечения или предотвращения указанного заболевания. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения способ включает введение соединения или фармацевтической композиции согласно изобретению в участок, который представляет собой место, выбранное из кожи, ногтя, волос, копыта, когтя и кожи, окружающей ноготь, волосы, копыто и коготь. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н.

VIII. а) 1) Онихомикоз

Онихомикоз является заболеванием ногтя, вызванным дрожжами, дерматофитами или другими плесневыми грибами, и составляет приблизительно 50% от всех ногтевых болезней. Инфекция ногтей на пальце ноги является причиной приблизительно 80% случаев онихомикоза, тогда как ногти пальца руки поражаются примерно в 20% случаев. Дерматофиты являются наиболее частой причиной инвазии ногтевой пластинки, особенно, при онихомикозе ногтя на пальце ноги. Онихомикоз, вызванный дерматофи- 38 020530 том, называют Тшеа ипдшит. ТпсНорНуЮп гиЬгит представляет собой гораздо более часто выделяемый дерматофит, за ним следует Т. теШадгорНу^. Дистальный подногтевой онихомикоз является наиболее распространенной формой йпеа ипдшит, при этом основной участок проникновения через гипонихий (утолщенный эпидермис ниже свободного дистального конца ногтя) со временем разрастается и включает ногтевое ложе и ногтевую пластинку. Это заболевание характеризуется изменением цвета, онихолизисом и аккумуляцией подногтевого дебриса и дистрофией ногтевой пластинки. Заболевание неблагоприятно воздействует на качество жизни своих жертв, при этом жалобы субъекта варьируются от жалоб на внешний вид ногтей и дискомфорта при ношении обуви до более серьезных осложнений, в том числе, вторичных бактериальных инфекций.

Известно много способов лечения грибковых инфекций, в том числе пероральное и топическое применение антибиотиков (например, нистатина и амфотерицина В), имидазольных противогрибковых препаратов, таких как миконазол, клотримазол, флуконазол, эконазол и сульконазол, и неимидазольных грибковых препаратов, таких как производные аллиламина, тербинафин и нафтифин и бензиламинбутенафин.

Однако, как оказалось, онихомикоз является устойчивым к большинству способов лечения. Ногтевые грибковые инфекции находятся в области, в которую затруднен доступ обычных топических средств, и противогрибковые лекарственные препараты не могут легко проникать через ногтевую пластинку и достигать инфицированных участков под ногтем. Соответственно, онихомикоз традиционно лечили путем перорального введения противогрибковых препаратов; однако, несомненно, такое лечение является нежелательным вследствие возможности возникновения побочных эффектов из-за приема указанных лекарственных препаратов, в особенности, эффектов, вызываемых более сильнодействующими противогрибковыми препаратами, такими как итраконазол и кетоконазол. Альтернативный способ лечения онихомикоза состоит в удалении ногтя перед лечением посредством топически активного противогрибкового препарата; такой способ является нежелательным в равной степени. Системные противогрибковые препараты требуют длительного применения и могут вызывать существенные побочные эффекты. Топические препараты обычно приносят мало пользы, главным образом, из-за плохого проникновения противогрибковых препаратов в ногтевую массу и через нее.

Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают способ лечения или предотвращения онихомикоза. Способ включает введение животному терапевтически эффективного количества соединения согласно изобретению, достаточного для лечения или предотвращения онихомикоза. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения способ включает введение соединения согласно изобретению в участок, который представляет собой место, выбранное из кожи, ногтя, волос, копыта, когтя и кожи, окружающей ноготь, волосы, копыто и коготь. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения животное представляет собой человека. Согласно еще одному типичному варианту реализации, соединение согласно изобретению представляет собой соединение, описанное в настоящем документе. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

VIII. Ь) 2) Другие ногтевые и околоногтевые заболевания

Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают способ лечения или предот- 39 020530 вращения ногтевого или околоногтевого заболевания у животного. Этот способ включает введение животному терапевтически эффективного количества соединения согласно изобретению и, тем самым, лечение или предотвращение ногтевого или околоногтевого заболевания. Согласно типичному варианту реализации изобретения ногтевое или околоногтевое заболевание представляет собой болезнь, выбранную из клоронихоза, паранихии, эризипелоида, онихорексиса, гонореи, гранулёмы пловцов, синдрома блуждающей личинки, проказы, контагиозного пустулезного дерматита, ложной коровьей оспы, герпетического панариция, острого бактериального периониксиса, хронического периониксиса, споротрихоза, сифилиса, бородавчатого туберкулёза кожи, туляремии, тунгиоза, околоногтевых и подногтевых бородавок, опоясывающего лишая, дистрофии ногтей (трахионихии) и дерматологических заболеваний, оказывающих воздействие на ногти, таких как псориаз, пустулезный псориаз, очаговая алопеция, пустулезный паракератоз, контактный дерматоз, синдром Рейтера, псориазиформный ушной дерматин, красный плоский лишай, идиопатическая атрофия ногтей, блестящий лишай, линейный лихен, воспалительный линейный веррукозный эпидермальный невус (ΣΕνΕΝ), алопеция, пемфигус, буллезный пемфигоид, приобретённый буллезный эпидермолиз, болезнь Дарье, красный волосистый питириаз, ладонно-подошвенная кератодермия, контактная экзема, полиморфная эритема, чесотка, синдром Базекса, системная склеродермия, системная красная волчанка, хроническая красная волчанка и дерматомиозит.

Соединения и фармацевтические композиции согласно изобретению, используемые для лечения ногтевого и околоногтевого заболевания, также находят применение в косметической области, в частности для лечения неровностей ногтей, койлонихий, поперечных углубленных полос (Веаи'8 1ше8), продольных вмятин, вросших ногтей.

Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание является болезнью кожи, ногтя, волос, когтя или копыта, волос, уха и глаза и представляет собой заболевание, выбранное из споротрихоза, грибкового кератита, распространенного окуломикоза, эндогенного окуломикоза, лобомикоза, мицетомы, трихоспории, отрубевидного лишая, трихофитии гладкой кожи, окаймленной экземы, эпидермофитии стоп, дерматомикоза бороды и усов, стригущего лишая, черного лишая, отомикоза, хронической трихофитии, хромобластомикоза и черепицеобразного лишая. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение, применяемое для лечения этих заболеваний, представляет собой соединение согласно изобретению. Согласно еще одному типичному варианту реализации соединение согласно изобретению имеет структуру, которая представляет собой вещество, выбранное из

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н.

VIII. с) Способы лечения заболеваний, вызванных вирусами

Соединения согласно изобретению можно применять для лечения заболеваний животных (таких как люди), вызванных вирусами. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из гепатита А-В-С, желтой лихорадки, респираторного синцитиального заболевания, гриппа, СПИД, герпетической лихорадки, опоясывающего лишая и заболевания Эпштейна-Барра. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

- 40 020530

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К представляет собой Н

VIII. й) Способы лечения заболеваний, вызванных паразитами

Соединения согласно изобретению можно применять для лечения заболеваний животных (таких как люди), вызванных паразитами. Согласно типичному варианту реализации изобретения заболевание представляет собой болезнь, выбранную из малярии, болезни Шагаса, лейшманиоза, сонной африканской болезни (африканского трипаносомоза), лямблиоза, токсоплазмоза, амебиаза и криптоспоридиоза.

В любом из способов согласно настоящему изобретению, представленному выше, предпочтительно, если аминоацил-тРНК-синтетаза является аминоацил-тРНК-синтетазой, содержащей редактирующий домен. Редактирующий домен кодируют частью аминоацил-тРНК-синтетазы, участвующей в исправлении ошибок. Предпочтительно, если редактирующий домен кодирован частью ДНК, имеющей, по меньшей мере, консервативные остатки, сравнимые после выравнивания с редактирующим участком лейцилтРНК-синтетазы, валил-тРНК-синтетазы и изолейцил-тРНК-синтетазы. Более предпочтительно, если синтетазу выбирают из группы, включающей валил-тРНК-синтетазу, изолейцил-тРНК-синтетазу, лейцил-тРНК-синтетазу, аланил-тРНК-синтетазу, пролил-тРНК-синтетазу, треонил-тРНК-синтетазу, фенилтРНК-синтетазу и лизил-тРНК-синтетазу, которые, как известно, имеют редактирующий участок или домен (см. Не К.8. Ва1й\ут, Α.Ν. и Вегд, Р. (1966) 1. Вю1. СЬет. 241, 839-845 и Е1йгей, Е.У. и 8с1йтте1, Р.К. (1972) 1. Вю1. СЬет. 247, 2961-2964, ν^ К.8., РегкЫ, А.К. и Кае1Ьиег, М.М. (1976) ВюсЬеткНу. 15 (15), 3342-3346, Ьеи К8, ЕидЬкЬ, 8 е! а1., (1986) №с1ек Аийк КекеагсЬ 14 (19), 7529-7539, для А1а К.8., Ткш, \У.С. и РегкЫ, А.К. (1981) №с1ек Аийк КекеагсЬ 9, 7529-7539, Рго К8, Веитид, Р.1. и Ми51егРогкуШ, К. (2000) РNА8 97 (16), 8916-8920, ТЬг К.8., 8апкагапагауапап, К. е! а1., (2000) №·ιΙ 81гис1 Вю1 7, 461-465 и Ми51ег-Рогу1Ь, К. и Веиптд, Р.1. (2000) №·ιΙ. 81гис1. Вю1. 7, 435-436, РЬеК8, Υат5, М. (1972) РNА8 69, 1915-1919 и Ьу5К8, 1акиЬо№5к1, Н. (1997) ВюсЬет151гу. 36, 11077-11085). Согласно еще одному типичному варианту реализации соединение согласно изобретению представляет собой вещество, выбранное из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н.

IX. Способы проникновения в ноготь

Полагают, что плохое проникновение активного вещества через копыто или ногтевую пластинку и/или чрезмерное связывание с кератином (основной белок в ногтях и волосах) являются причинами низкой эффективности 8 мас.% циклопирокса в коммерческом лаке и других топических препаратах,

- 41 020530 которые показали неудачные результаты в клинических испытаниях. При легких формах онихомикоза патогенные грибы находятся только в ногтевой пластинке. При средних-тяжелых формах патогенные грибы присутствуют в ногтевой пластинке и в ногтевом ложе. Если инфекцию устраняют из ногтевой пластинки, но не из ногтевого ложа, грибковый патоген может повторно инфицировать ногтевую пластинку. Следовательно, для эффективного лечения онихомикоза инфекция должна быть удалена из ногтевой пластинки и ногтевого ложа. С этой целью, активное вещество должно приникнуть и распределиться, по существу, по всей ногтевой пластинке и ногтевому ложу.

Полагают, что для того, чтобы активное вещество эффективно распределилось по всему инфицированному участку, оно должно быть биодоступным для грибкового патогена и не должно так сильно связываться с кератином, что лекарственный препарат не может ингибировать рост или уничтожать инфицирующие грибы.

Понимание морфологии ногтевой пластинки подсказывает некоторые физико-химические свойства активного вещества, которые способствовали бы проникновению через ногтевую пластинку. Требуемые физико-химические свойства описаны в настоящем документе. Тестируемые соединения согласно настоящему изобретению способны проникать через ногтевую пластинку и также проявляли активность против ТпсНорНуЮп гиЬгит и тепΐад^оρЬуΐеδ и других видов. Кроме того, тестируемые соединения также проявляют активность против ТпсНорНуЮп гиЬгит в присутствии 5% порошка кератина.

Согласно типичному варианту реализации в изобретении предлагают способ уничтожения или ингибирования роста микроорганизма, присутствующего в элементе человеческого ногтя, при этом в настоящем документе указанный элемент человеческого ногтя включает ногтевую пластинку. Способ включает приведение в контакт дорсального слоя ногтевой пластинки с соединением согласно изобретению, способным проникать в ногтевую пластинку, перемещаться через ногтевую пластинку к ногтевому ложу, лежащему ниже указанной ногтевой пластинки, и контактировать с указанным микроорганизмом в условиях, достаточных для проникновения указанного соединения в указанную ногтевую пластинку. Согласно этому варианту реализации изобретения соединение имеет молекулярную массу от примерно 100 до примерно 200 Да, величину 1од Р от примерно 1.0 до примерно 2.6, водорастворимость больше чем примерно 0.1 мг/мл в смеси октанол/насыщенная вода и МИК менее чем 16 мкг/мл по отношению к указанному микроорганизму и, тем самым, уничтожает или ингибирует рост указанного микроорганизма. Согласно еще одному типичному варианту реализации соединение согласно изобретению имеет структуру, которая представляет собой вещество, выбранное из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н. Согласно еще одному типичному варианту реализации в изобретении предлагают способ лечения заболевания, вызванного микроорганизмом, присутствующим в элементе человеческого ногтя, при этом в настоящем документе указанный элемент человеческого ногтя включает ногтевую пластинку, а указанный способ включает приведение в контакт дорсального слоя ногтевой пластинки с соединением согласно изобретению, способным проникать в ногтевую пластинку, перемещаться через ногтевую пластинку к ногтевому ложу, лежащему ниже указанной ногтевой пластинки, и контактировать с указанным микроорганизмом в условиях, достаточных для проникновения указанного соединения в указанную ногтевую пластинку и лечения указанного заболевания. Согласно этому варианту реализации изобретения соединение имеет молекулярную массу между примерно 100 и примерно 200 Да; величину 1од Р между примерно 1.0 и примерно 2.6; водорастворимость больше чем примерно 0.1 мг/мл в смеси окта- 42 020530 нол/насыщенная вода и МИК менее чем 16 мкг/мл по отношению к указанному микроорганизму и, тем самым, лечит указанное заболевание. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение описывают в настоящем документе.

Согласно еще одному аспекту в изобретении предлагают способ доставки соединения от дорсального слоя ногтевой пластинки к ногтевому ложу. Этот способ включает приведение в контакт клетки с соединением согласно изобретению, способным проникать через ногтевую пластинку, в условиях, достаточных для проникновения через ноготь. Соединение имеет молекулярную массу примерно между 100 и примерно 200 Да. Соединение также имеет величину 1од Р между примерно 1.0 и примерно 2.6. Кроме того, соединение имеет водорастворимость между примерно 0.1 мг/мл и 1 г/мл в смеси октанол/насыщенная вода и, тем самым, осуществляет доставку указанного соединения.

Согласно предпочтительному варианту реализации изобретения физико-химические свойства соединения согласно изобретению, имеющие значения, предсказывающие перемещение соединения через ногтевую пластинку, в том числе, но не ограничиваясь ими, молекулярная масса, 1од Р и водорастворимость и т.п., являются достаточно эффективными для обеспечения значительного проникновения через ногтевую пластинку.

Соединения с молекулярной массой менее чем 200 Да проникают через ногтевую пластинку гораздо эффективнее, чем коммерчески доступные лекарственные препараты, применяемые для лечения онихомикоза. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения соединение имеет молекулярную массу между 130 и 200. Согласно еще одному варианту реализации этого изобретения соединение имеет молекулярную массу примерно от 140 до примерно 200 Да. Согласно еще одному варианту реализации этого изобретения соединение имеет молекулярную массу примерно от 170 до примерно 200 Да. Согласно еще одному варианту реализации этого изобретения соединение имеет молекулярную массу примерно от 155 до примерно 190 Да. Согласно еще одному варианту реализации этого изобретения соединение имеет молекулярную массу примерно от 165 до примерно 185 Да. Согласно еще одному варианту реализации изобретения этого изобретения соединение имеет молекулярную массу примерно от 145 до примерно 170 Да. Согласно еще одному варианту реализации изобретения молекулярная масса составляет 151.93 или 168.39 Да.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения соединение имеет величину 1од Р между примерно -3.5 и примерно 2.5. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение имеет величину 1од Р примерно от -1.0 до примерно 2.5. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение имеет величину 1од Р примерно от -1.0 до примерно 2.0. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение имеет величину 1од Р примерно от -0.5 до примерно 2.5. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение имеет величину 1од Р примерно от -0.5 до примерно 1.5. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение имеет величину 1од Р примерно от 0.5 до примерно 2.5. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение имеет величину 1од Р примерно от 1.0 до примерно 2.5. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение имеет величину 1од Р 1.9 или 2.3.

Настоящее изобретение также охватывает соединение с величиной 1од Р менее чем 2.5, с молекулярной массой менее чем 200 Да, которые тем не менее способны проникать через ногтевую пластинку.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения соединение имеет водорастворимость между примерно 0.1 мг/мл и 1 г/мл в воде, насыщенной октанолом. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения соединение имеет водорастворимость между 0.1 и 100 мг/мл. Согласно еще одному варианту реализации этого изобретения соединение имеет водорастворимость примерно от 0.1 до 10 мг/мл. Согласно еще одному варианту реализации этого изобретения соединение имеет водорастворимость примерно от 0.1 до 1 мг/мл. Согласно еще одному варианту реализации этого изобретения соединение имеет водорастворимость примерно от 5 мг/мл до 1 г/мл. Согласно еще одному варианту реализации этого изобретения соединение имеет водорастворимость примерно от 10 мг/мл до 500 г/мл. Согласно еще одному варианту реализации этого изобретения соединение имеет водорастворимость примерно от 80 до 250 мг/мл.

Согласно типичному варианту реализации в настоящем изобретении предлагают соединение с величиной 1од Р, выбранной из вышеуказанного диапазона, с молекулярным весом, выбранным из вышеуказанного диапазона, которые все еще способны проникать через ногтевую пластинку.

Согласно типичному варианту реализации в настоящем изобретении предлагают соединение с молекулярным весом, выбранным из вышеуказанного диапазона, с растворимостью в воде, выбранной из вышеуказанного диапазона, которые все еще способны проникать через ногтевую пластинку.

Согласно типичному варианту реализации в настоящем изобретении предлагают соединение с 1од Р, выбранным из вышеуказанного диапазона, с растворимостью в воде, выбранной из вышеуказанного диапазона, которые все еще способны проникать через ногтевую пластинку.

Согласно типичному варианту реализации в настоящем изобретении предлагают соединение с молекулярным весом, выбранным из вышеуказанного диапазона, с 1од Р, выбранным из вышеуказанного диапазона, и с растворимостью в воде, выбранной из вышеуказанного диапазона, которые все еще спо- 43 020530 собны проникать через ногтевую пластинку.

Проникновение активного ингредиента через ноготь можно осуществить за счет полярности состава. Однако, как предполагают, полярность состава не оказывает такого большого влияния на проникновение через ноготь, как некоторые другие факторы, такие как молекулярная масса или 1од Р активного ингредиента. Присутствие в композиции веществ, усиливающих проникновение, вероятно, увеличивает проникновение активного вещества по сравнению с аналогичными композициями, не содержащими вещество, усиливающее проникновение.

Некоторые примеры молекул с оптимальными физико-химическими свойствами приведены ниже в таблице.

Структура:	ОН |Г'Т'во р--..------ (соединение 1)	ОН ПЛ С1 ' ' · (соединение 2)
Формула:	С7Н6ВРО2	С7НбВСЮ2
Молекулярная масса (Да):	151.93	168.39
Связвание белка в плазме (%):	66	83
Ьо£Р:	1.9	2.3
Водорастворимость (мкг/мл):	>100	>100

Соединение 3, приведенное ниже, является примером соединения, которое похоже по молекулярной массе на циклопирокс и, подобно циклопироксу, плохо проникает через ногтевую пластину.

Структура:	9 (соединение 3)
Формула:	СвНюВРО
Молекулярная масса (Да):	21203
Связвание белка в плазме (%):	100
сЬодР:	3.55
Водорастворимость (мкг/мл):	не определяли

Согласно предпочтительному варианту реализации изобретения топические композиции, включающие соединение согласно изобретению, имеют суммарную молекулярную массу менее чем 200 Да, имеют 1од Р менее чем 2.5 и минимальную ингибирующую концентрацию по отношению к ТпсНорНуЗоп гиЬгит, которая, по существу, не изменяется в присутствии 5% кератина.

Коэффициент эффективности (определяемый как поступление сверх МИК) соединения также информирует опытного специалиста относительно того, может ли данное соединение эффективно уничтожать микроорганизм, ингибировать рост микроорганизма или лечить заболевание, которое вызвано микроорганизмом, присутствующим в элементе человеческого ногтя, при этом в настоящем документе указанный элемент человеческого ногтя включает ногтевую пластинку. Способ включает приведение в контакт дорсального слоя ногтевой пластинки с соединением согласно изобретению, способным проникать в ногтевую пластинку, перемещаться через ногтевую пластинку к ногтевому ложу, лежащему ниже указанной ногтевой пластинки, и контактировать с указанным микроорганизмом в условиях, достаточных для проникновения указанного соединения в указанную ногтевую пластинку и лечения указанного заболевания, при этом в настоящем документе соединение имеет коэффициент эффективности выше 10.

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение имеет коэффициент эффективности примерно между 10 и примерно 1000. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение имеет коэффициент эффективности примерно между 30 и примерно 100. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение имеет коэффициент эффективности примерно между 100 и примерно 500. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение имеет коэффициент эффективности примерно между 25 и примерно 200.

Способы, предлагаемые в этом аспекте изобретения, можно применять для проникновения в ногти

- 44 020530 и копыта, а также при лечении ногтевых и околоногтевых заболеваний.

X. Фармацевтические композиции

Согласно еще одному аспекту изобретение представляет собой фармацевтическую композицию, которая включает (а) фармацевтически приемлемый наполнитель и (Ь) соединение согласно изобретению. Согласно еще одному аспекту фармацевтическая композиция включает (а) фармацевтически приемлемый наполнитель и (Ь) соединение согласно формуле, описанной в настоящем документе. Согласно еще одному аспекту фармацевтическая композиция включает (а) фармацевтически приемлемый наполнитель и (Ь) соединение, описанное в настоящем документе, или его соль, пролекарство, гидрат или сольват или их комбинацию. Согласно еще одному аспекту фармацевтическая композиция включает (а) фармацевтически приемлемый наполнитель и (Ь) соединение, описанное в настоящем документе, или его соль, гидрат или сольват или их комбинацию. Согласно еще одному аспекту фармацевтическая композиция включает (а) фармацевтически приемлемый наполнитель и (Ь) соединение, описанное в настоящем документе, или соль, гидрат или сольват указанного соединения. Согласно еще одному аспекту фармацевтическая композиция включает (а) фармацевтически приемлемый наполнитель и (Ь) соль соединения, описанного в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации изобретения соль представляет собой фармацевтически приемлемую соль. Согласно еще одному аспекту фармацевтическая композиция включает (а) фармацевтически приемлемый наполнитель и (Ь) пролекарство соединения, описанного в настоящем документе. Согласно еще одному аспекту фармацевтическая композиция включает (а) фармацевтически приемлемый наполнитель и (Ь) соединение, описанное в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция представляет собой стандартную дозируемую лекарственную форму. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция представляет собой однократную стандартную дозируемую лекарственную форму.

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретение представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую (а) фармацевтически приемлемый наполнитель и (Ь) соединение со структурой, выбранной из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н.

Фармацевтические композиции согласно изобретению могут принимать различные формы, адаптированные к выбранному пути введения. Специалисту в данной области техники известны различные способы синтеза, которые можно применять для получения нетоксичных фармацевтических композиций, содержащих соединения, описанные в настоящем документе. Специалисту в данной области техники известны самые различные нетоксичные фармацевтически приемлемые растворители, которые можно применять для получения сольватов соединений согласно изобретению, такие как вода, этанол, пропиленгликоль, минеральное масло, растительное масло и диметилсульфоксид (ДМСО).

Фармацевтическую композицию согласно изобретению можно вводить перорально, топически, парентерально, посредством ингаляции или спрея или ректально в стандартных дозируемых лекарственных формах, содержащих обычные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные вещества и среды. Также понятно, что наилучший способ введения может представлять собой комбинацию способов. Особенно предпочтительным является пероральное введение в форме пилюли, капсулы, эликсира, сиропа, лепешки, пастилки или т.п. В настоящем документе термин парентеральное введение

- 45 020530 включает подкожные инъекции, интрадермальную, внутрисосудистую (например, внутривенную), внутримышечную, спинномозговую, интратекальную инъекцию или аналогичные методы инъекции или инфузии. Согласно типичному варианту реализации фармацевтическую композицию согласно изобретению вводят перорально. Согласно типичному варианту реализации фармацевтическую композицию согласно изобретению вводят внутривенно.

Предпочтительно, если фармацевтические композиции, содержащие соединения согласно изобретению, находятся в форме, подходящей для перорального применения, например, в виде таблеток, пастилок, лепешек, водных или масляных суспензий, диспергируемых порошков или гранул, эмульсии, твердых или мягких капсул, или сиропов или эликсиров.

Композиции, предназначенные для перорального применения, можно приготовить согласно любому способу, используемому в данной области для производства фармацевтических композиций, и такие композиции могут содержать одно или более веществ, выбранных из группы, включающей подсластители, ароматизаторы, красители и консерванты, с целью обеспечения фармацевтически изысканных и аппетитных препаратов. Таблетки могут содержать активный ингредиент в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми наполнителями, которые являются подходящими для производства таблеток. Такие наполнители могут представлять собой, например, инертные разбавители, такие как карбонат кальция, карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; гранулирующие и дезинтегрирующие вещества, например, кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связывающие вещества, например крахмал, желатин или гуммиарабик; и смазывающие вещества, например, стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут не иметь покрытие, или они могут быть покрыты с помощью известных способов с целью замедления дезинтеграции и абсорбции в желудочно-кишечном тракте и, тем самым, обеспечения продолжительного воздействия в течение более длительного периода времени. Например, можно применять материал, задерживающий высвобождение, такой как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат.

Композиции для перорального применения можно также приготовить в виде твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешивают с инертным твердым разбавителем, например карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с водной или масляной средой, например арахисовым маслом, жидким парафином или оливковым маслом.

Водные суспензии содержат активные вещества в смеси с наполнителями, подходящими для производства водных суспензий. Такие наполнители представляют собой суспендирующие вещества, например натрий карбоксиметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовую камедь и гуммиарабик; и диспергирующие или увлажняющие вещества, которые могут представлять собой природный фосфатид, например, лецитин, или продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами, например полиоксиэтиленстеарат, или продукты конденсации этиленоксида с алифатическими спиртами с длинной цепью, например гептадекаэтиленоксицетанол, или продукты конденсации этиленоксида с неполными эфирами, полученными из жирных кислот и гексита, такие как полиоксиэтиленсорбитолмоноолеат, или продукты конденсации этиленоксида с неполными эфирами, полученными из жирных кислот и ангидридов гексита, например полиэтиленсорбитмоноолеат. Водные суспензии также могут содержать один или более консервантов, например этил- или н-пропил-п-гидроксибензоат, один или более красителей, один или более ароматизаторов и один или более подсластителей, таких как сахароза или сахарин.

Масляные суспензии можно приготовить путем суспендирования активных ингредиентов в растительном масле, например арахисовом масле, оливковом масле, кунжутном масле или кокосовом масле, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Масляные суспензии могут содержать загуститель, например пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Подсластители, такие как вещества, упомянутые выше, и ароматизаторы можно добавлять для получения приятных на вкус пероральных препаратов. Такие композиции можно сохранять путем добавления антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота.

Диспергируемые порошки и гранулы, подходящие для приготовления водной суспензии путем добавления воды, обеспечивают активный ингредиент в смеси с диспергирующим или увлажняющим веществом, суспендирующим веществом и одним или более консервантов. Подходящие диспергирующие или увлажняющие вещества и суспендирующие вещества уже приведены выше в качестве примера. Могут также присутствовать дополнительные наполнители, например подсластители, ароматизаторы и красители.

Фармацевтические композиции согласно изобретению могут также находиться в форме эмульсий масло-в-воде и эмульсий вода-в-масле. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, например оливковое масло или арахисовое масло, или минеральное масло, например, жидкий парафин, или их смеси. Подходящие эмульгаторы могут представлять собой природную смолу, например, гуммиарабик или трагакантовую камедь; природные фосфатиды, например, соевый боб, лецитин, и эфиры или неполные эфиры, полученные из жирных кислот и гексита; ангидриды, например сорбитмоноолеат; и продукты конденсации указанных неполных эфиров с этиленоксидом, например, полиоксиэтиленсор- 46 020530 битмоноолеат. Эмульсии могут также содержать подсластители и ароматизаторы.

Сиропы и эликсиры можно приготовить с подсластителями, например глицерином, пропиленгликолем, сорбитолом или сахарозой. Такие композиции могут также содержать успокоительное средство, консервант и ароматизаторы и красители. Фармацевтические композиции могут находиться в форме стерильной инъецируемой водной или масляной суспензии. Такую суспензию можно приготовить согласно известным в данной области способам, применяя эти подходящие диспергирующие или увлажняющие вещества и суспендирующие вещества, которые упоминались выше. Стерильный инъецируемый препарат может также представлять собой стерильный инъецируемый раствор или суспензию в нетоксичном приемлемом для парентерального введения разбавителе или растворителе, например, в виде раствора в 1,3-бутандиоле. К числу приемлемых сред и растворителей, которые могут быть применены, относятся вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные, нелетучие масла обычно применяют в качестве растворителя или суспендирующей среды. С этой целью можно применять любое мягкое нелетучее масло, в том числе, синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, при приготовлении инъецируемых препаратов находят применение жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.

Композицию согласно изобретению можно также вводить в форме суппозиториев, например, для ректального введения лекарственного препарата. Такие композиции можно приготовить путем смешивания лекарственного препарата с подходящим нераздражающим наполнителем, который является твердым веществом при обычных температурах, но становится жидким при ректальной температуре и, следовательно, будет плавиться в прямой кишке и выделять лекарственный препарат. К таким веществам относятся масло какао и полиэтиленгликоли.

Альтернативным образом, композиции можно вводить парентерально в стерильной среде. Лекарственный препарат, в зависимости от применяемой среды и концентрации, может суспендироваться или растворяться в среде. Преимущественно, если вспомогательные вещества, такие как местные анестетики, консерванты и буферные вещества, могут растворяться в среде.

Для введения в животных, не относящихся к человеку, композицию, содержащую терапевтическое соединение, можно добавлять животному в пищу или питьевую воду. Таким образом, удобно приготавливать продукты, применяемые в качестве корма и питьевой воды для животного, таким образом, чтобы животное при питании получало подходящее количество соединения. Будет также удобно, если соединение присутствует в композиции в виде заранее подготовленной смеси для добавления к корму или питьевой воде. Для людей композицию можно также добавлять в виде пищевой добавки или добавки к питью.

При лечении вышеуказанных состояний можно применять уровни дозирования порядка примерно от 5 до примерно 250 мг на кг массы тела в день и более предпочтительно примерно от 25 до примерно 150 мг на кг массы тела в день. Количество активного ингредиента, которое можно комбинировать с веществами носителя для получения стандартной дозируемой лекарственной формы, будет варьировать в зависимости от состояния, подвергаемого лечению, и конкретного способа введения. В целом, стандартные дозируемые лекарственные формы будут содержать примерно от 1 до примерно 500 мг активного ингредиента.

Частота дозирования может также варьировать в зависимости от применяемого соединения и конкретного заболевания, подвергаемого лечению. Однако, для лечения большинства заболеваний, предпочтительным является режим дозирования ежедневно 4 раза или менее. Однако, очевидно, что уровень индивидуальной дозы для какого-либо конкретного пациента будет зависеть от различных факторов, в том числе, активности конкретного применяемого соединения, возраста, массы тела, общего состояния здоровья, пола, диеты, времени введения, пути введения и скорости выделения, комбинации лекарственных препаратов и серьезности конкретного заболевания, подвергаемого терапевтическому лечению.

Предпочтительные соединения согласно изобретению будут иметь требуемые фармакологические свойства, которые включают, но не ограничиваются ими, пероральную биодоступность, низкую токсичность, низкое связывание протеина сыворотки и необходимые периоды полураспада ш νίΙΐΌ и ш νί\Ό. Для соединений, применяемых для лечения заболеваний ЦНС, является необходимым проникновение через гематоэнцефалитический барьер, тогда как низкие уровни в мозге соединений, применяемых для лечения периферических заболеваний, часто являются предпочтительными.

Для предсказания указанных требуемых фармакологических свойств можно применять биологические исследования. Исследования, применяемые для предсказания биодоступности, включают перенос через интестинальные клеточные мономолекулярные слои у человека, в том числе, мономолекулярные слои клеток Сасо-2. Для предсказания токсичности соединений можно применять токсичность по отношению к культивированным гепатоцитам. У человека проникновение соединения через гематоэнцефалитический барьер можно предсказать на основании его уровней в мозгу у лабораторных животных, которые получают это соединение внутривенно.

Связывание протеина сыворотки можно предсказать на основе анализа связывания альбуминов. Такие анализы описаны в обзоре Огаусоуа, е( а1. Цоигпа1 оГ СНготаЮдгарНу В (1996), νο1. 677, р. 1-27).

Период полувыведения соединения обратно пропорционален частоте дозирования соединения. Периоды полувыведения соединений ш νίΙΐΌ можно предсказать на основании исследований микросомаль- 47 020530 ного периода полувыведения, как описано КиНп/ и С^еδсНеη (Эгид Ме1аЬоХт апй ^^δρоδ^ι^оп. (1998), уо1. 26, р. 1120-1127).

Количество композиции, необходимое для лечения, будет варьироваться не только в зависимости от конкретного выбранного соединения, но также от пути введения, природы заболевания, подвергаемого лечению, и возраста и состояния пациента, и, в конечном счете, будет определяться лечащим врачом или клиницистом.

Согласно типичному варианту реализации изобретения наполнитель для фармацевтической композиции содержит этанол, и соединение для фармацевтической композиции представляет собой вещество, выбранное из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения наполнитель для фармацевтической композиции содержит пропиленгликоль, и соединение для фармацевтической композиции представляет собой вещество, выбранное из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

- 48 020530

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция содержит примерно пропиленгликоль:этанол 1:4, при 1:10 мас./об. соединения, которое представляет собой вещество, выбранное из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция содержит примерно 70% этанола, примерно 20% поли(винилметилового эфира-а11-монобутилового эфира малеиновой кислоты), примерно 10% соединения, которое представляет собой вещество, выбранное из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

- 49 020530

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция содержит примерно 56% этанола, примерно 14% воды, примерно 15% поли(2-гидроксиэтилметакрилата), примерно 5% дибутилсебацината, примерно 10% соединения, которое представляет собой вещество, выбранное из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция содержит примерно 55% этанола; примерно 15% этилацетата; примерно 15% поли(винилацетата); примерно 5% дибутилсебацината; примерно 10% соединения, которое представляет собой вещество, выбранное из

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой вещество, выбранное из

- 50 020530

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение, которое представляет собой вещество, выбранное из

присутствует в фармацевтической композиции в концентрации, которая представляет собой значение, выбранное из 1%, 2.5%, 5%, 7.5%, 10% и 15% мас./об. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция представляет собой лак.

Согласно типичному варианту реализации изобретения наполнитель для фармацевтической композиции содержит этанол, и соединение для фармацевтической композиции представляет собой соединение, описанное в настоящем документе. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения наполнитель для фармацевтической композиции содержит пропиленгликоль, и соединение для фармацевтической композиции представляет собой соединение, описанное в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция содержит примерно 20% пропиленгликоля; примерно 70% этанола; примерно 10% соединения, описанного в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция содержит примерно 70% этанола, примерно 20% поли(винилметилового эфира-ак-монобутилового эфира малеиновой кислоты); примерно 10% соединения, описанного в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция содержит примерно 56% этанола; примерно 14% воды; примерно 15% поли(2-гидроксиэтилметакрилата); примерно 5% дибутилсебацината; примерно 10% соединения, описанного в настоящем документе. Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция содержит примерно 55% этанола; примерно 15% этилацетата; примерно 15% поли(винилацетата); примерно 5% дибутилсебацината; примерно 10% соединения, описанного в настоящем документе. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение, описанное в настоящем документе, присутствует в фармацевтической композиции в концентрации, которая представляет собой значение, выбранное из 1%, 2.5%, 5%, 7.5%, 10% и 15% мас./об. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция представляет собой лак.

X. а) Топические композиции

Согласно предпочтительному варианту реализации способы согласно изобретению можно применять путем топического наложения соединений, описанных в настоящем документе. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой соединение, выбранное из

- 51 020530

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение представляет собой соединение, выбранное из

Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения К* представляет собой Н.

Композиции согласно настоящему изобретению содержат жидкие или полутвердые среды, которые могут включать, но не ограничиваются ими, полимеры, загустители, буферные вещества, нейтрализаторы, хелатообразующие вещества, консерванты, поверхностно-активные вещества или эмульгаторы, антиоксиданты, воски или масла, смягчающие вещества, солнцезащитные кремы и смесь растворителей или смешанных растворителей. Смесь растворителей или смешанных растворителей является важной для приготовления композиции, поскольку она главным образом несет ответственность за растворение лекарственного препарата. Наилучшие смеси растворителей или смешанных растворителей также способны поддерживать клинически релевантные уровни лекарственного препарата в растворе несмотря на добавление к составу плохого растворителя. Топические композиции, применяемые для лечения субъекта согласно изобретению, можно сделать в виде самых разнообразных видов продуктов. Они включают, но не ограничиваются ими, лосьоны, кремы, гели, помады, спреи, мази, пасты, пены, муссы и очищающие средства. Эти виды продуктов могут содержать несколько видов смесей носителей, в том числе, но не ограничиваясь ими, частицы, наночастицы и липосомы. При необходимости, можно добавлять дезинтеграторы, такие как поперечно-сшитый поливинилпирролидон, агар или альгиновая кислота или их соль, такую как альгинат натрия. Способы приготовления композиции и введения можно найти в (КеттЦоп: ТЬе 8аепсе и РгасЬсе о£ РЬагтасу, кирга). Можно выбрать композицию с целью максимизирования доставки к требуемому участку-мишени в теле.

Лосьоны, представляющие собой препараты, которые можно наложить на поверхность кожи, ногтя, волос, когтя или копыта без растирания, обычно являются жидкими или полужидкими препаратами, в которых диспергируют мелкоизмельченное твердое вещество, воск или жидкость. Лосьоны обычно содержат суспендирующие вещества для получения более качественных суспензий, а также соединения, применяемые для локализации и удерживания активного вещества в контакте с кожей, ногтем, волосами, когтем или копытом, например, метилцеллюлозу, натрий карбоксиметилцеллюлозу или т.п.

Кремы, содержащие активное вещество для введения согласно настоящему изобретению, представляют собой вязкие жидкие или полутвердые эмульсии, или эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле. Основы для кремов являются водосмываемыми и содержат масляную фазу, эмульгатор и водную фазу. Масляная фаза, в целом, состоит из вазелина или жирного спирта, такого как цетиловый или стеариловый спирт; водная фаза обычно, хотя не обязательно, превышает масляную фазу по объему и, в целом, содержит смачивающее вещество. Эмульгатор в составе крема, как указано (в РепипЦоп: ТЬе 8с1епсе и РгасЬсе о£ РЬагтасу, карга), в целом, представляет собой неионное, анионное, катионное или амфотерное поверхностно-активное вещество.

Гелевые композиции также можно применять в связи с настоящим изобретением. Как очевидно специалистам, работающим в области производства топических лекарственных композиций, гели представляют собой полутвердое вещество. Однофазные гели содержат органические макромолекулы, распределенные, по существу, равномерно по всему жидкому носителю, который обычно является водным, но также может представлять собой растворитель или смесь растворителей.

Мази, которые являются полутвердыми препаратами, обычно основаны на вазелине или других нефтепродуктах. Как очевидно обычному специалисту, конкретная применяемая мазевая основа представляет собой основу, которая обеспечивает оптимальное введение активного вещества, выбранного для применения в данной композиции, и предпочтительно также обеспечивает другие требуемые характеристики, например, смягчение или т.п. Как и в случае других носителей или сред, мазевые основы должны быть инертными, стабильными, нераздражающими и несенсибилизирующими. Как описано в (РепипЦоп: ТЬе 8с1епсе и РгасЬсе о£ РЬагтасу, 19!Ь Ей. (ЕакЮп, Ра.: Маск РиЬЬкЬтд Со., 1995), на с. 1399-1404), мазевые основы можно сгруппировать в четыре класса: масляные основы; эмульгируемые основы; эмульсионные основы и водорастворимые основы. Масляные мазевые основы включают, например, растительные масла, жиры, полученные из животных, и полутвердые углеводороды, полученные из нефти. Эмульгируемые мазевые основы, также известные как абсорбирующие мазевые основы, содержат небольшие количества воды или не содержат воду и включают, например, гидроксистеарин сульфат, безводный ланолин и гидрофильный вазелин. Эмульсионные мазевые основы представляют

- 52 020530 собой эмульсии вода-в-масле (в/м) или эмульсии масло-в-воде (м/в) и включают, например, цетиловый спирт, глицерилмоностеарат, ланолин и стеариновую кислоту. Предпочтительные водорастворимые мазевые основания приготавливают из полиэтиленгликолей с варьирующей молекулярной массой; опять, для получения дальнейшей информации можно дать ссылку на (Кстшдки: ТЬс Зсюпсс апб РгасЬсс оГ РЬагтасу, кирга).

Применяемые композиции согласно изобретению также включают спреи. Спреи, в целом, обеспечивают активное вещество в водном и/или спиртовом растворе, которое с целью введения можно нанести в виде аэрозоля на кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто. Такие спреи включают составы, приготовленные для обеспечения концентрации раствора активного вещества на месте введения после доставки, например, раствор спрея в основном может состоять из спирта или другой подобной летучей жидкости, в которой может быть растворен лекарственный препарат или активное вещество. После доставки на кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто носитель испаряется, оставляя концентрированное активное вещество на месте введения.

Топические фармацевтические композиции могут также содержать подходящие твердые или гелевые носители. Примеры таких носителей включают, но не ограничиваются ими, карбонат кальция, фосфат кальция, различные сахара, крахмалы, производные целлюлозы, желатин и полимеры, такие как полиэтиленгликоли.

Топические фармацевтические композиции также могут содержать подходящий эмульгатор, который относится к веществу, усиливающему или облегчающему смешивание и суспендирование масла-вводе или воды-в-масле. Эмульгатор, применяемый в настоящем изобретении, может состоять из одного эмульгатора или может представлять собой неионное, анионное, катионное или амфотерное поверхностно-активное вещество или смесь двух или более указанных поверхностно-активных веществ; предпочтительными для применения в настоящем изобретении являются неионные или анионные эмульгаторы. Такие поверхностно-активные вещества описаны в (МсСтНсЬсопА ОсЮгдсШ апб ЕтиШйсге, ЫоЬЬ Лтспсап Ебйоп, 1980 Αпииа1 риЬЬкЬсб Ьу 1Ьс МсСгПсЬсоп ОЬ'бюп, МС РиЬЬкЬйд Сотрапу, 175 Коск Коаб, О1сп Коск, Ν.Ι 07452, И8А).

Предпочтительными для применения в настоящем изобретении являются высокомолекулярные спирты, такие как цетеариловый спирт, цетиловый спирт, стеариловый спирт, эмульгирующийся воск, глицерилмоностеарат. Другими примерами являются этиленгликоль дистеарат, сорбит тристеарат, пропиленгликоль моностеарат, сорбит моноолеат, сорбит моностеарат (8РАИ 60), диэтиленгликоль монолаурат, сорбит монопальмитат, сахароза диолеат, сахароза стеарат (СΚΟ^Е8ТА Р-160), полиоксиэтиленлауриловый эфир (ВКВ 30), полиоксиэтилен (2) стеариловый эфир (ВКВ 72), полиоксиэтилен (21) стеариновый эфир (ВКП 721), полиоксиэтиленмоностеарат (Муц 45), полиоксиэтиленсорбит моностеарат (ΠνΕΕΝ 60), полиоксиэтиленсорбит моноолеат (ΠνΕΕΝ 80), полиоксиэтиленсорбит монолаурат (ΠνΕΕΝ 20) и олеат натрия. Холестерин и производные холестерина также могут использоваться в наружно применяемых эмульсиях и содействовать образованию эмульсий вода/масло.

Особенно подходящими неионными эмульгаторами являются соединения с гидрофильнымлипофильным равновесием (НЬВ) примерно от 3 до 6 для систем вода/масло и от 8 до 18 для систем масло/вода, как установлено способом, описанным (Раи1 Ь. Ейбпсг в монографии ЕтнЫопк апб ЕпшЫоп, изданной КсппсЙ Ыккай, опубликованной Эскксг, Ысте Уогк, Ν.Υ., 1974, стр. 188-190). Более предпочтительными для применения в настоящем изобретении являются одно или более неионных поверхностно-активных веществ, которые образуют систему с НЬВ примерно от 8 до примерно 18.

Примеры таких неионных эмульгаторов включают, но не ограничиваются ими, ВРИ 72, торговое название полноксиэтилен (2) стеарилового эфира с НЬВ 4.9, ВКП 721, торговое название полиоксиэтилен (21) стеарилового эфира с НЬВ 15.5, Вгу 30, торговое название полиоксиэтилен лаурилового эфира с НЬВ 9.7, Ро1а\уах, торговое название эмульгирующегося воска с НЬВ 8.0, 8рап 60, торговое название сорбитмоностеарата с НЬВ 4.7, Сгобск!а Р-160, торговое название стеарата сахарозы с НЬВ 14.5 Все эти материалы можно приобрести в компаниях Кидсг СЬсшюаб 1пс.; Сгоба, 1С1 Атспсак, 1пс.; 8рсс1гит СНсткай и ВА8Р. Если топические композиции согласно настоящему изобретению содержат по меньшей мере один эмульгатор, каждый эмульгатор присутствует в количестве примерно от 0.5 до примерно 2.5 мас.%, предпочтительно от 0.5 до 2.0%, более предпочтительно 1.0 или 1.8%. Предпочтительно, если эмульгатор содержит смесь стеарета 21 (при примерно 1.8%) и стеарета 2 (при примерно 1.0%).

Топические фармацевтические композиции могут также содержать подходящие смягчающие вещества. Смягчающие вещества представляют собой материалы, применяемые для предохранения от сухости или ее уменьшения, а также для защиты кожи, ногтя, волос, когтя или копыта. Полезные смягчающие вещества включают, но не ограничиваются ими, цетиловый спирт, изопропилмиристат, стеариловый спирт и т.п. Известны самые разнообразные подходящие смягчающие вещества, которые можно применять в настоящем изобретении (см., например, 8адагш, СоктсЬск, Зсюпсс апб ТссЬпокду, 2-ое издание, уо1. 1, рр. 32-43 (1972), и патент США № 4919934, Эсскпсг с! а1., опубл. 24 апреля 1990 г., которые оба в полном объеме включены в настоящий документ посредством ссылки). Эти материалы можно приобрести в компании Кидсг СЬстюа1 Со. (Ирвингтон, Нью-Джерси).

Если топические композиции согласно настоящему изобретению содержат по меньшей мере одно

- 53 020530 смягчающее вещество, каждое смягчающее вещество присутствует в количестве примерно от 0.1 до 1.5%, предпочтительно от 0.1 до примерно 3.0, более предпочтительно 0.5, 1.0, или 2.5 мас.%. Предпочтительно, если смягчающее вещество представляет собой смесь цетилового спирта, изопропилмиристата и стеарилового спирта в соотношении 1/5/2. Смягчающее вещество может также представлять собой смесь цетилового спирта и стеарилового спирта в соотношении 1/2.

Топические фармацевтические композиции могут также содержать подходящие антиоксиданты, вещества, известные как ингибирующие окисление. Антиоксиданты, подходящие для применения в соответствии с настоящим изобретением, включают, но не ограничиваются ими, бутилированный гидрокситолуол, аскорбиновую кислоту, аскорбат натрия, аскорбат кальция, аскорбиновый пальмитат, бутилированнгидроксианизол, 2,4,5-тригидроксибутирофенон, 4-гидроксиметил-2,6-ди-трет-бутилфенол, изоаскорбиновую кислоту, гваяковую смолу, пропилгаллат, тиодипропионовую кислоту, дилаурил тиодипропионат, трет-бутилгидрохинон и токоферолы, такие как витамин Е, и т.п., в том числе, фармацевтически приемлемые соли и эфиры этих соединений. Предпочтительно, если антиоксидант представляет собой бутилированный гидрокситолуол, бутилированный гидроксианизол, пропил галлат, аскорбиновую кислоту, их фармацевтически приемлемые соли или эфиры, или их смеси. Наиболее предпочтительно, если антиоксидант представляет собой бутилированный гидрокситолуол. Указанные материалы можно приобрести в компании Кидег СНетка1 Со. (Ирвингтон, Нью-Джерси).

Если топические композиции согласно настоящему изобретению содержат по меньшей мере один антиоксидант, суммарное количество присутствующего антиоксиданта составляет примерно от 0.001 до 0.5 мас.%, предпочтительно от 0.05 до примерно 0.5 мас.%, более предпочтительно 0.1%.

Топические фармацевтические композиции могут также содержать подходящие консерванты. Консерванты представляют собой соединения, добавляемые к фармацевтической композиции в качестве противомикробных препаратов. К числу консервантов, известных в данной области как эффективные и приемлемые в парентеральных композициях, относятся бензалкониум хлорид, бензетоний, хлоргексидин, фенол, м-крезол, бензиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен, хлорбутанол, о-крезол, п-крезол, хлоркрезол, нитрат фенилртути, тимеросал, бензойная кислота и их различные смеси (см., например, ^аННаиззег, К-Н., Эеуе1ор. Вю1. 81апйагй, 24:9-28 (1974) (8. Кгадег, Вазе1)). Предпочтительно, если консервант выбирают из метилпарабена, пропилпарабена и их смесей. Указанные материалы можно приобрести в компаниях 1по1ех СНетка1 Со. (Филадельфия, Пенсильвания) или 8рес1гит СНетка1з.

Если топические композиции согласно настоящему изобретению содержат по меньшей мере один консервант, суммарное количество присутствующего консерванта составляет примерно от 0.01 до примерно 0.5 мас.%, предпочтительно примерно от 0.1 до 0.5%, более предпочтительно примерно от 0.03 до примерно 0.15. Предпочтительно, если консервант представляет собой смесь метилпарабена и проплибарбена в соотношении 5/1. Если в качестве консерванта применяют спирт, его количество обычно составляет от 15 до 20%.

Топические фармацевтические композиции могут также содержать подходящие хелотообразующие вещества для образования комплексов с катионами металлов, которые не переходят через липидный двойной слой. Примеры подходящих хелотообразующих веществ включают этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЕИТА), этиленгликоль-бис(бета-аминоэтиловый эфир)-Н,Ы,№,№-тетрауксусную кислоту (ЕОТА) и 8-амино-2-[(2-амино-5-метилфенокси)метил]-6-метоксихинолин-Н,Ы,№,№-тетрауксусную кислоту, соль тетракалия (ΟυΐΝ-2). Предпочтительно, если хелотообразующие вещества представляют собой ЕИТА и лимонную кислоту. Указанные материалы можно приобрести в компании 8рес1гит СНеписа1з.

Если топические композиции согласно настоящему изобретению содержат по меньшей мере одно хелотообразующее вещество, суммарное количество присутствующего хелотообразующего вещества составляет примерно от 0.005 до 2.0 мас.%, предпочтительно примерно от 0.05 до примерно 0.5 мас.%, более предпочтительно примерно 0.1 мас.%.

Топические фармацевтические композиции могут также содержать подходящие нейтрализующие вещества, применяемые для регулирования рН композиции в пределах фармацевтически приемлемого диапазона. Примеры нейтрализующих веществ включают, но не ограничиваются ими, троламин, трометамин, гидроксид натрия, соляную кислоту, лимонную кислоту и уксусную кислоту. Указанные материалы можно приобрести в компании 8рес1гит СНетка1з (Гардена, Калифорния).

Если топические композиции согласно настоящему изобретению содержат по меньшей мере одно нейтрализующее вещество, суммарное количество присутствующего нейтрализующего вещества составляет примерно от 0.1 мас.% до примерно 10 вес.%, предпочтительно от 0.1 вес.% до примерно 5.0 мас.%, и более предпочтительно примерно 1.0 вес.%. Нейтрализующее вещество, в целом, добавляют в любом количестве, необходимом для достижения требуемого рН композиции.

Топические фармацевтические композиции могут также содержать подходящие вещества, увеличивающие вязкость. Эти компоненты представляют собой диффундирующие соединения, способные увеличивать вязкость полимерсодержащего раствора за счет взаимодействия вещества с полимером. В качестве вещества, увеличивающего вязкость, можно применять САКВОРОЬ ИЬТКЕ2 10. Указанные материалы можно приобрести в компании Ыоуеоп СНеткаМ Кливленд, Огайо.

- 54 020530

Если топические композиции согласно настоящему изобретению содержат по меньшей мере одно вещество, увеличивающее вязкость, суммарное количество присутствующего вещества, увеличивающего вязкость, составляет примерно от 0.25 до примерно 5.0 мас.%, предпочтительно примерно от 0.25 до примерно 1.0 мас.% и более предпочтительно примерно от 0.4 до примерно 0.6 мас.%.

Топические фармацевтические композиции могут также содержать подходящие усилители проникновения в ноготь. Примеры усилителей проникновения в ноготь включают меркаптановые соединения, сульфиты и бисульфиты, кератолитические вещества и поверхностно-активные вещества. Усилители проникновения в ноготь, подходящие для применения в изобретении, более подробно описаны в статье МаШойа е1 а1., 1. РЬагт. 8с1., 91 2, 312-323 (2002), которая в полном объеме включена в настоящий документ посредством ссылки.

Топические фармацевтические композиции могут также содержать один или более подходящих растворителей. Способность любого твердого вещества (растворяемого вещества) растворяться в какомлибо жидком веществе (растворителе) зависит от физических свойств растворяемого вещества и растворителя. Когда растворяемые вещества и растворители имеют сходные физические свойства, растворимость растворяемого вещества в растворителе будет наибольшей. Отсюда возникает традиционное мнение, что подобное растворяет подобное. Растворители можно описать в одной крайности как неполярные, липофильные масла, тогда как в другой крайности как полярные гидрофильные растворители. Масляные растворители растворяют другие неполярные вещества за счет взаимодействий Ван-дер-Ваальса, тогда как вода и другие гидрофильные растворители растворяют полярные вещества за счет ионных, дипольных взаимодействий или образования водородных связей. Все растворители можно распределить в соответствии с континуумом от минимально полярных, т.е. углеводородов, таких как декан, до наиболее полярного растворителя, который представляет собой воду. Растворяемые вещества будут иметь наибольшую растворимость в растворителях с эквивалентной полярностью. Таким образом, для лекарственных препаратов, имеющих минимальную водорастворимость, менее полярные растворители обеспечат улучшенную растворимость, при этом растворитель с полярностью, почти эквивалентной растворяемому веществу, обеспечит максимальную растворимость. Большинство лекарственных препаратов имеют промежуточную полярность и, таким образом, проявляют максимальную растворимость в таких растворителях, как пропиленгликоль или этанол, которые являются существенно менее полярными, чем вода. Если лекарственный препарат имеет большую растворимость в пропиленгликоле (например, 8 мас.%), чем в воде (например, 0.1 мас.%), то добавление воды к пропиленгликолю должно уменьшить максимальную величину растворимости лекарственного препарата в смеси растворителей по сравнению с чистым пропиленгликолем. Добавление слабого растворителя к отличному растворителю уменьшит максимальную растворимость смеси по сравнению с максимальной растворимостью в отличном растворителе.

Когда соединения вводят в топические композиции, концентрация активного ингредиента в композиции может быть ограничена растворимостью активного ингредиента в выбранном растворителе и/или носителе. Нелипофильные лекарственные препараты обычно проявляют очень низкую растворимость в фармацевтически приемлемых растворителях и/или носителях. Например, растворимость некоторых соединений, предлагаемых в изобретении, в воде составляет менее чем 0.00025 мас.%. Растворимость этих же соединений согласно изобретению может быть менее чем примерно 2 мас.% в пропиленгликоле или изопропилмиристате. Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения моноэтиловый эфир диэтиленгликоля (ЭСМЕ) является растворителем, применяемым для растворения соединений согласно изобретению. Как полагают, соединения согласно изобретению, применяемые в настоящей композиции, имеют растворимость примерно от 10 до примерно 25 мас.% в ЭСМЕ. Согласно еще одному варианту реализации изобретения для растворения соединения согласно изобретению применяют систему сорастворителей ЭСМЕ-вода. Растворяющая способность ЭСМЕ падает при добавлении воды, однако, можно разработать смесь сорастворителей ЭСМЕ/вода для поддержания требуемой концентрации активного ингредиента примерно от 0.1% до примерно 5 мас.%. Предпочтительно, если активный ингредиент присутствует в топических композициях после применения в концентрации примерно от 0.5% до примерно 3 мас.%, более предпочтительно при примерно 1 мас.%. Поскольку ЭСМЕ является менее летучим, чем вода, когда топический состав после наложения испаряется, активное вещество в кремовой композиции становится более растворимым. Эта повышенная растворимость уменьшает вероятность снижения биодоступности, вызванного осаждением лекарственного препарата на поверхность кожи, ногтя, волос, когтя или копыта.

Жидкие формы, такие как лосьоны, подходящие для топического введения или подходящие для косметического применения, могут включать подходящую водную или неводную среду с буферными веществами, суспендирующими и диспергирующими веществами, загустителями, усилителями проникновения и т.п. Твердые формы, такие как кремы или пасты или т.п., могут включать, например, любые из нижеследующих ингредиентов, воду, масло, спирт или жир в качестве основы с поверхностно-активным веществом, полимеры, такие как полиэтиленгликоль, загустители, твердые вещества и т.п.

Жидкие или твердые композиции могут включать средства, улучшающие введение, такие как липосомы, микросомы, микрогубки и т.п.

Кроме того, соединения можно вводить с применением системы с замедленным высвобождением,

- 55 020530 такой как полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие терапевтический препарат. Различные материалы с замедленным высвобождением были разработаны и хорошо известны специалистам, опытным в данной области.

Схемы топического лечения согласно практике этого изобретения включают наложение композиции непосредственно на кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто в место применения, от одного до нескольких раз ежедневно.

Композиции согласно настоящему изобретению можно применять для лечения, улучшения или предотвращения состояний или симптомов, связанных с бактериальными инфекциями, угревой сыпью, воспалением и т.п.

Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция включает простой раствор. Согласно типичному варианту реализации изобретения простой раствор содержит спирт. Согласно типичному варианту реализации изобретения простой раствор содержит спирт и воду. Согласно типичному варианту реализации изобретения спирт представляет собой этанол, этиленгликоль, пропанол, полипропиленгликоль, изоопропанол или бутанол. Согласно еще одному типичному варианту реализации изобретения простой раствор представляет собой смесь, выбранную из примерно 10% полипропиленгликоля и примерно 90% этанола; примерно 20% полипропиленгликоля и примерно 80% этанола; примерно 30% полипропиленгликоля и примерно 70% этанола; примерно 40% полипропиленгликоля и примерно 60% этанола; примерно 50% полипропиленгликоля и примерно 50% этанола; примерно 60% полипропиленгликоля и примерно 40% этанола; примерно 70% полипропиленгликоля и примерно 30% этанола; примерно 80% полипропиленгликоля и примерно 20% этанола; примерно 90% полипропиленгликоля и примерно 10% этанола.

Согласно типичному варианту реализации изобретения фармацевтическая композиция представляет собой лак (для получения большей информации о производстве лаков см. КетшдХоп'к, 8ирта).

Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение присутствует в указанной фармацевтической композиции в концентрации примерно от 0.5 до примерно 15%. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение присутствует в указанной фармацевтической композиции в концентрации примерно от 0.1 до примерно 12.5%. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение присутствует в указанной фармацевтической композиции в концентрации примерно от 1 до примерно 10%. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение присутствует в указанной фармацевтической композиции в концентрации примерно от 1 до примерно 5%. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение присутствует в указанной фармацевтической композиции в концентрации примерно от 0.5 до примерно 5%. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение присутствует в указанной фармацевтической композиции в концентрации примерно от 0.5 до примерно 7.5%. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение присутствует в указанной фармацевтической композиции в концентрации примерно от 5 до примерно 7.5%. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение присутствует в указанной фармацевтической композиции в концентрации примерно от 2 до примерно 8%. Согласно типичному варианту реализации изобретения соединение присутствует в указанной фармацевтической композиции в концентрации примерно от 4 до примерно 9%.

X. Ь) Дополнительные активные вещества

Ниже приведены примеры косметических и фармацевтических веществ, которые можно добавлять к топическим фармацевтическим композициям согласно настоящему изобретению. Нижеприведенные вещества являются известными и коммерчески легкодоступными соединениями.

Противовоспалительные вещества включают, но не ограничиваются ими, бисаболол, ментолатум, дапсон, алоэ, гидрокортизон и т.п.

Витамины включают, но не ограничиваются ими, витамин В, витамин Е, витамин А, витамин Ό и т.п. и производные витаминов, такие как тазаротен, кальципотриен, третиноин, адапален и т.п.

Препараты против старения включают, но не ограничиваются ими, ниацинамид, ретинол и смолоподобные производные, АНА, аскорбиновую кислоту, липоевую кислоту, кофермент О 10, бетаоксикислоты, салициловую кислоту, пептиды, связывающие медь, диметиламиноэтил (ΌΑΕΑ) и т.п.

Солнцезащитные кремы и/или средства, уменьшающие солнечные ожоги, включают, но не ограничиваются ими, РАВА, жожоба, алое, падимат-О, метоксициннаматы, проксамин НС1, лидокаин и т.п. Средства для загара искусственного включают, но не ограничиваются им, дигидроксиацетон (ОНА).

Препараты для лечения псориаза и/или угревой сыпи включают, но не ограничиваются ими, салициловую кислоту, бензоилпероксид, каменноугольную смолу, сульфид селена, оксид цинка, пиритион (цинка и/или натрия), тазаротен, кальципотриен, третиноин, адапален и т.п.

Препараты, которые являются эффективными при регулировании или модифицировании кератинизации, включают, без ограничения третиноин, тазаротен и адапален.

Композиции, содержащие соединение/активное вещество согласно изобретению и, возможно, по меньшей мере один из этих дополнительных препаратов, следует вводить топически. При первоначально применении это приводит к тому, что соединения согласно изобретению и какое-либо другое активное вещество воздействуют на кожу, ноготь, волосы, коготь или копыто и лечат их. Альтернативным обра- 56 020530 зом, любое из применяемых топически активных веществ можно также вводить системно трансдермальными путями.

В указанных композициях дополнительный косметически или фармацевтически эффективный препарат, такой как противовоспалительный препарат, витамин, препарат против старения, солнцезащитный крем и/или препарат для лечения угревой сыпи, например, обычно является второстепенным компонентом (примерно от 0.001 до примерно 20 мас.% или предпочтительно примерно от 0.01 до примерно 10 мас.%), при этом оставшаяся часть представляет собой различные среды или носители и технологические добавки, полезные для формирования требуемой лекарственной формы.

X. с) Тестирование

Предпочтительные соединения для применения в фармацевтических композициях, описанных в настоящем документе, будут иметь некоторые фармакологические свойства. Такие свойства включают, но не ограничиваются ими, низкую токсичность, низкое связывание протеина сыворотки и требуемый период полураспада ίη νΐίΓΟ и ίη νίνο. Для предсказания указанных требуемых фармакологических свойств можно применять биологические анализы. Биологические анализы, применяемые для предсказания биодоступности, включают перемещение через человеческие интестинальные клеточные мономолекулярные слои, в том числе, клеточные мономолекулярные слои Сасо-2. Связывание протеина сыворотки можно предсказать с помощью анализов связывания альбумина. Такие анализа описаны в обзоре 0гаусоуа с! а1. (1996, 1. СЬгоша! В677:1-27). Период полувыведения соединений обратно пропорционален частоте дозирования соединения. Период полувыведения соединений ίη νίίτο можно предсказать с помощью исследований микросомального периода полувыведения, как описано Κιιΐιηζ и С1с5сНсп (Эгид МсШЬоПзт апй Όίδροδίίίοη, (1998), νοί. 26, ρ. 1120-1127).

Токсичность и терапевтическую эффективность указанных соединений можно определить с помощью стандартных фармацевтических методов в клеточных культурах или на лабораторных животных, например, путем определения ЬО₅₀ (дозы, летальной для 50% популяции) и ЕО₅₀ (дозы, терапевтически эффективной для 50% популяции). Соотношение доз между токсичным и терапевтическим эффектами называют терапевтическим индексом и его можно выразить как соотношение между ΒΩ₅₀ и ЕЭ₅₀. Соединения, которые имеют высокие терапевтические индексы, являются предпочтительными. Данные, полученные из этих исследований клеточных культур и животных, можно применять для определения диапазона дозирования у людей. Предпочтительно, если доза указанных соединений лежит в диапазоне циркулирующих концентраций, которые включают ЕЭ₅₀. при малой токсичности или ее отсутствии. Доза может варьировать в пределах этого диапазона в зависимости от применяемой стандартной дозируемой лекарственной форме и используемого пути введения. Точный состав, путь введения и дозировка могут быть выбраны лечащим врачом в зависимости от состояния пациента (см., например, Ρίη§1 е! а1., 1975, в ТЬе Ρ1ι;·ιπη;κο^Κ;·ι1 Ваз15 οί ТЬегареиЬсз. СЬ. 1, ρ. 1).

X. й) Введение

Для любого соединения, применяемого согласно способу, предложенному в изобретении, терапевтически эффективную дозу можно вначале оценить на основе исследования клеточных культур, как описано в настоящем документе. Например, дозу можно установить на животных моделях с целью достижения диапазона циркулирующих концентраций, который включает ЕС₅₀ (эффективную дозу для 50% увеличения), определенную в клеточной культуре, т.е. концентрацию тестируемого соединения, которая позволяет достичь полумаксимальное ингибирование роста бактериальных клеток. Такую информацию можно использовать для более точного определения доз, применяемых для людей.

В общем, соединения, полученные указанными способами и из промежуточных соединений, описанных в настоящем документе, будут вводить в терапевтически или косметически эффективном количестве посредством любых приемлемых путей введения веществ, которые служат аналогичным целям. Однако, очевидно, что точный уровень доз для какого-либо конкретного пациента будет зависеть от различных факторов, в том числе, активности индивидуального применяемого соединения, возраста, массы тела, общего состояния здоровья, пола, питания, времени введения, пути введения и скорости выделения, комбинации лекарственных препаратов, серьезности конкретного заболевания, подвергаемого лечению, и мнения лечащего врача. Лекарственный препарат можно вводить от 1 или 2 раз в день, или до 3 или 4 раз в день.

Дозируемое количество и интервал можно устанавливать индивидуально с целью обеспечения уровней в плазме активных веществ, которые являются достаточными для поддержания эффектов ингибирования роста бактериальных клеток. Обычные дозы для пациентов при системном введении лежат в диапазоне от 0.1-1000 мг/день, предпочтительно 1-500 мг/день, более предпочтительно 10-200 мг/день, еще более предпочтительно 100-200 мг/день. Выраженные в пересчете на площадь поверхности тела пациента обычные дозы лежат и диапазоне 50-91 мг/м²/день.

Количество соединения в композиции может варьировать в пределах всего диапазона, применяемого специалистами в данной области. Обычно, композиция будет содержать, на весовой процент (мас.%) основы, примерно 0.01-10 мас.% лекарственного вещества в пересчете на суммарный состав, при этом баланс представляет собой одно или более подходящих фармацевтических наполнителей. Предпочтительно, если соединение присутствует на уровне примерно 0.1-3.0 мас.%, более предпочтительно при- 57 020530 мерно 1.0 мас.%.

Далее изобретение проиллюстрировано нижеследующими примерами. Предполагают, что примеры не ограничивают настоящее изобретение.

Примеры

Все применяемые растворители были коммерчески доступны и использовались без дополнительной очистки. Реакции, как правило, проводили при применении безводных растворителей в инертной атмосфере Ν₂.

'И, ¹³С и ¹⁹Р ЯМР спектры регистрировали при 400 МН/ для протона, 100 МН/ для углерода-13 и 376 МН/ для фтора-19 на приборе ν;·ιπ;·ιπ 300 МегсигуР1и8 ЧаПоп со спектрометром ОхГогй А8400, оборудованным датчиком ν;·ιπ;·ιπ 400 АТВ РРС. Все дейтерированные растворители обычно содержали 0.030.05 об.% тетраметилсилан, который применяли в качестве эталонного сигнала (установленного при δ 0.00 для ^!Н и ¹³С).

Соединения называли, используя СПетЭга^ 7.0 или названия из каталога, если их приобретали на рынке.

Масс-спектры регистрировали на спектрометре \Уа1ег5 М8, состоящем из АШапсе 2795 (ЬС) и детектора \Уа1ег5 М1сгота88 ΖΡ при 120°С. Масс-спектрометр был оборудован ионным источником с электрораспылением (Е81), работающим в режиме определения положительных или отрицательных ионов. Масс-спектрометр сканировали между т//=100-1000 при времени считывания 0.3 с.

Элементный анализ композиции С, Н и N осуществляли с применением СойесЬ ПъйитеШ Е1етеп!а1 СотЬикйоп 8ук!ет ЕС84010 при потоке гелия 100 мл/мин (14 р81), кислорода 20 мл/мин (10 р81), воздуха 25 р§1 и продувке 50 мл/мин. Приведенные результаты анализа относятся к среднему значению из двух серий измерений.

ВЭЖХ анализы осуществляли на приборе \Уа1ег 600 СойгоИег ууЧет с \Уа1ег5 717 Р1ик Аи1о§атр1ег и детектором \Уа1ег5 2996 РНоЮШойе Аггау. В качестве колонки использовали АСЕ С₁₈, 5 мкм, 4.6 х 150 мм. Применяли линейный градиент, начиная при 95% А (А: 0.1% Н₃РО₄ в воде) и заканчивая при 90% В (В: МеСХ) на протяжении 6 мин и затем поддерживали при 90% В до 10 мин отметки. Затем колонку повторно уравновешивали в течение 3 мин до 95:5 при суммарном времени эксперимента 20 мин. Колонку применяли при комнатной температуре при скорости потока 1.0 мл/мин. Детектор Эюйе Аггау сканировали от 200 до 400 нм. Для высокочистых проб, требующих вычитание базовой линии, применяли линейный градиент, начиная от 99% А (А: 0.1% Н₃РО₄ в воде) и кончая при 90% В (В: МеСХ) на протяжении 15 мин. Затем колонку повторно уравновешивали в течение 3 мин до 99% А при суммарном времени эксперимента 23 мин. Колонку применяли при комнатной температуре при скорости потока 1.0 мл/мин. Детектор Эюйе Аггау Эе1ес1ог сканировали от 200 до 400 нм. Пустую МеОН пробу прогоняли сразу же до пробы, чистоту которой должны были определить, затем ее вычитали для получения хроматограммы с вычтенной базовой линией.

Анализ способом тонкослойной хроматографии (ТСХ) выполняли на А1идгат® (силикагель 60 Р₂₅₄) от компании МапсЬегеу-Ыаде1 и, как правило, применяли УФ для визуального отображения пятен. В некоторых случаях также применяли дополнительный способ визуализации. В этих случаях с целью визуализации соединения ТСХ пластину проявляли с помощью йода (осуществляли путем добавления приблизительно 1 г 1₂ к 10 г силикагеля и тщательного перемешивания), ванилина (осуществляли путем растворения примерно 1 г ванилин в 100 мл 10% Н₂8О₄), перманганата калия (осуществляли путем растворения 1.5 г КМпС₄ и 10 г К₂СО₃ в 1.25 мл №ЮН и 200 мл Н₂О), нингидрина (можно приобрести в компании А1ййсЬ) или Мадю 81а1п (осуществляли путем тщательного перемешивания 25 г (NН₄)₆Мο7О₂₄·4Н₂О, 5 г (NН₄)₂Се(IV)(NО₃)₆ в 450 мл Н₂О и 50 мл конц. Н₂8О₄). Анализ способом испарительной хроматографии, как правило, осуществляли с применением 40-63 мкм (230-400 меш) силикагеля, приобретенного в компании 8т1тсус1е, следуя методам, аналогичным способам, описанным 8ίί11 е! а1. Типичные растворители, применяемые для испарительной хроматографии или тонкослойной хроматографии (ТСХ), представляли собой смеси СНС1₃/МеОН, СН₂С1₂/МеОН, ЕЮАс/МеОН и гексан/ЕЮАс. Анализ способом испарительной хроматографии с обращенными фазами осуществляли на Вю1аде® с применением кассет Вю1аде С₁₈ и градиента Н₂О/МеОН (обычно элюируя от 5% МеОН/Н₂О до 90% МеОН/Н₂О).

Анализ способом препаративной хроматографии выполняли на приборе \Уа1ег5 Ргер ЬС 4000 8ук!ет с применением \Уа1ег5 2487 Эюйе Аггау или на \Уа1ег5 ЬС Мойи1е 1 р1и8. Применяемая колонка представляла собой \Уа1ег5хТегга Ргер С₁₈, 5 мкм, 30x100 мм, РЬепотепех Ьипа С18, 5 мкм, 21.6x250 мм, или РЬепотепех Сетий С₁₈, 5 мкм, 100x30 мм. Узкие градиенты с МеСНЩО (водосодержащий 0.1% ТФК, 0.1% АсОН, 0.1% НСО₂Н или 0.1% ΝΉ/ЮАс) применяли с целью элюирования соединения при скорости потока приблизительно 20 мл/мин и суммарном времени эксперимента между 20-30 мин.

Для определения энантиомерного избытка, например, А2 и А49, осуществляли хиральный ВЭЖХ анализ на оборудовании \Уа1ег5 600 Сойго11ег и МиПкокеШ ЭеВуегу 8ук!ет с применением \Уа1ег5 717+ Аи1о8атр1ег и \Уа1ег5 996 РНоЮФойе Аггау Эе1ес1ог с колонкой Сго^прак СК(+), элюируя посредством 85:15 хлорной кислотой (рН 1) в подвижной фазе Н₂О/МеОН. Хлорную кислоту (рН 1) получали путем добавления 16.3 г 70% хлорной кислоты к 1 л дистиллированной Н₂О.

- 58 020530

Применяемые исходные материалы были доступны из коммерческих источников или получены согласно процедурам, описанным в литературе, при этом экспериментальные данные представлены в соответствующих ссылках. 6-Аминобензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ол (С50), например, можно синтезировать согласно способам, описанным в публикациях патентов США И820060234981 и И820070155699.

Пример 1.

3-Аминометип-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А1)

-Нитрометил-3Н-бензо [с][1,2] оксаборол- 1-ол

2-Формилфенилбороновую кислоту (3 г, 20.0 ммоль) добавляли к раствору гидроксида натрия (850 мг, 1.05 экв.) в 10 мл воды при 10°С. К этой суспензии добавляли нитрометан (1.1 мл, 1 экв.) и затем нагревали до комнатной температуры при перемешивании. Через 30 мин реакцию охлаждали в ледяной бане и подкисляли 3М НС1. Белый осадок фильтровали и высушивали на воздухе с получением 3.2 г (82.9%) 3-(нитрометил)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ола.

Т. пл. 122-127°С. Ή ЯМР 300 Μ№: (ДМСО-б₆) δ 9.48 (к, 1Н), 7.71-7.74 (б, 1=6.9 Ш, 1Н), 7.47-7.54 (т, 2Н), 7.39 (ΐ, 1=7.65 Н, 1Н), 5.73-7.78 (бб, 1=2.7, 1=9.0 Н, 1Н), 5.30-5.35 (бб, 6=3.0, 1=13.5 Н, 1Н), 4.52-4.59 (бб, 1=13.5, 1=9.3 Нг, 1Н). Μ8 Ε8Ι (-) 192 [Μ-Н].

Синтез гидрохлорида 3-аминометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ола (А1) с применением 10% палладия на углероде

3-(Нитрометил)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ол (0.5 г, 2.59 ммоль) растворяли в абсолютном этаноле и продували струей Ν₂. Добавляли каталитическое количество 10% палладия на углероде и реакционную смесь продували струей Н₂ 3х через баллон. Перемешивали в атмосфере Н₂ в течение 24 ч, затем фильтровали через слой целита, добавляли 2 мл воды и концентрировали в вакууме с образованием серого твердого вещества. Это вещество растворяли в минимальном количестве абсолютного этанола, нейтрализовали концентрированной соляной кислотой, затем добавляли эфир и осаждали вышеназванное соединение в виде твердого белого вещества. Высушивали на воздухе с получением 295 мг (57.1%).

Т. пл. 201-205°С. 'Н ЯМР 300 Μ№: (ДМСО-б₆) δ 9.59 (Ьк, 1Н), 8.33 (Ьк, 3Н), 7.81-7.83 (б, 1=7.5 Нг, 1Н), 7.35-7.50 (т, 3Н), 5.34-5.37 (б, 1=10.2 Нг, 1Н), 3.46 (т, 1Н), 2.71 (т, 1Н). Μ8 Ε8Ι (-) 162 [Μ-Н], Ε8Ι (+) 164 [Μ+Н].

Синтез гидрохлорида 3-аминометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ола (А1) с применением никеля Ренея

К раствору 3-(нитрометил)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ола (965 мг, 5 ммоль) в этаноле (30 мл) добавляли аммиак (2 М раствор в этаноле, 18 мл, 36 ммоль) и никель Ренея 2800 (1/3 чайной ложки суспензии в воде). Реакционную смесь подвергали гидрированию при 45 атмосфер в течение 2 ч при комнатной температуре. Образовавшуюся смесь фильтровали через слой целита и фильтрат концентрировали в вакууме, получая неочищенный амин. Амин растворяли в диоксане (10 мл) и добавляли НС1 (4М в диоксане, 5 мл, 20 ммоль). Через 1 ч суспензию концентрировали и образовавшееся твердое вещество промывали гексаном, а затем эфиром, получая гидрохлорид 3-(аминометил)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ола (917 мг, 4.6 ммоль, 92% выход) в виде твердого белого вещества.

Перекристаллизация гидрохлорида 3-(аминометил)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ола

Гидрохлорид 3-(аминометил)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ола (1.0 г) помещали в горячую воду (3 мл), затем добавляли горячий ацетонитрил (примерно 25-30 мл) до тех пор, пока не образовалась молочная суспензия. Молочный раствор оставляли охлаждаться до комнатной температуры, потом в него добавляли дополнительные 70-80 мл ацетонитрила. Через 30 мин рыхлую белую суспензию фильтровали и промывали СН₂С1₂ с получением 680 мг чистого гидрохлорида 3-(аминометил)бензо[с][1,2]оксаборол1(3Н)-ола.

Синтез гидрохлорида 3-аминометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ола (А1) с применением гидроксида палладия

3-(Нитрометил)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ол (25 г, 130 ммоль) растворяли в уксусной кислоте и помещали в 500 мл колбу Парра. Добавляли 4 г 20 мас.% гидроксида палладия на углероде и реакционную смесь продували струей 3х газа Н₂. Наполняли Н₂ до 50 ρκί и встряхивали в течение 36 ч, затем фильтровали, чтобы избавиться от катализатора, и испаряли в вакууме. Этот остаток растворяли в 100 мл дихлорметана и подкисляли 50 мл 4М НС1 в диоксане и осаждали неочищенный гидрохлорид. При добавлении 30 мл метил-трет-бутилового эфира осаждался остаточный продукт. Неочищенное вещество

- 59 020530 перекристаллизовывали путем растворения в 1:2 Η₂0/АСN при 60°С, а затем добавляли АСN до достижения точки насыщения. При охлаждении до комнатной температуры получали 13 г гидрохлорида 3(аминометил)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ола в виде мелких белых кристаллов (50.3%).

Соображения при выборе катализатора

Синтез 3-(нитрометил)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ола можно осуществить при различных условиях гидрирования. Каталитическое гидрирование посредством 10% Рб/С под баллоном является весьма неустойчивым и в некоторых случаях было неуспешным. В целом, более высокое давление водорода является необходимым для успешного завершения восстановления. Было обнаружено, что нитрогруппы образуют комплекс с атомом бора и полагают, что это затрудняет восстановление до амина. Применение аммиака в виде совместного растворителя разрушает этот комплекс и способствует восстановлению при атмосферном или повышенном давлении. Применение никеля Ренея в качестве катализатора имеет преимущество с точки зрения резкого ускорения времени реакции, но этот катализатор является сильно самовоспламеняющимся и должен храниться во влажном состоянии, чтобы избежать опасности возникновения пожара. Крупномасштабное (25 г) восстановление выполняли в аппарате Парра с применением гидроксида палладия в качестве катализатора и уксусной кислоты в качестве растворителя. Эта методология обеспечивает хорошие выходы и позволяет установить баланс между скоростью никеля Ренея и простотой применения палладия на углероде (К)-3-Аминометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол), гидрохлорид (А60)

2-Бром-1-(2-бромфенил)этанон

Ссылка - СНет. РНагт. Ви11., 1992, 40(5), 1170-1176. Бром (12.6 мл, 0.246 моль, 10 экв.) медленно добавляли к 2'-бромацетофенону (48.9 г, 0.246 моль, 10 экв.) в диэтиловом эфире (250 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение 2 ч. Добавляли воду (500 мл) и реакционную смесь перемешивали до исчезновения оранжевого окраса. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали диэтиловым эфиром (3x250 мл). Объединенные органические фазы промывали соляным раствором (250 мл), высушивали над Мд80₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением (1) в виде оранжевого масла (65 г, 95%).

ТСХ (20% Е1₂0:петролейный эфир) К(=0.61; 5_Н (300 ΜΗζ, СОСЫ 7.62 (1Н, бб, 1=7.7, 1.2 Ηζ), 7.497.31 (3Η, т), 4.49 (2Η, ₈).

(К)-2-Бром-1-(2-бромфвнил)этанол

он (К)-(+)-2-Метил-СВ8-оксазаборолидин (10.3 мл, 1.0 М в толуоле, 10.3 ммоль, 0.11 экв.) добавляли при перемешивании к раствору (1) (26.0 г, 93.5 ммоль, 1.0 экв.) в ТГФ (250 мл). Реакционную смесь охлаждали до -10°С, затем добавляли ВН₃-ТГФ (112 мл, 10 М в ТГФ, 112.3 ммоль, 1.20 экв.) в течение 4 ч. Перед добавлением метанола (130 мл) реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 45 мин при -10°С. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Образовавшийся остаток обрабатывали способом испарительной колоночной хроматографии (10% Е1₂0:петролейный эфир) и получали продукт (2) в виде бледно-желтого масла (25.1 г, 96%).

ТСХ (10% Е1₂0:петролейный эфир) К(=0.20; 5_Н (300 ΜΗζ, СОСГ) 7.40 (1Η, б, 1=7.78 Ηζ), 7.32 (1Η, б, 1=7.9 Ηζ), 7.15 (1Η, ΐ, 1=7.5 Ηζ), 6.97 (1Η, ΐ, 1=7.6 Ηζ), 5.05 (1Η, ϊ6, 1=8.6, 3.0 Ηζ), 3.56 (1Η, бб, 1=10.5, 2.6 Ηζ), 3.20 (1Η, бб, 1=10.5, 8.8 Ηζ), 3.01-2.92 (1Η, т).

(К)-2-Азидо-1-(2-бромфенил)этанол

Ссылка - ТетраЬебгоп: АкуттеЬу 2005, 16, 3633-3639. Натрия азид (3.5 г, 54.4 ммоль, 1.05 экв.) добавляли к раствору (2) (14.5 г, 51.8 ммоль, 1.00 экв.) в ДМФ (55 мл) при комнатной температуре. Затем реакционную смесь нагревали до 80°С в течение 24 ч. Добавляли воду (150 мл) и затем этот раствор экстрагировали диэтиловым эфиром (3x150 мл). Объединенные органические фазы промывали соляным раствором (50 мл), высушивали над Мд80₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток обрабатывали способом испарительной колоночной хроматографии (15% Е+0:петролейный эфир) с получением (4) в виде желтого масла (9.5 г, 76%).

- 60 020530

ТСХ (15% Е1₂О:петролейный эфир) К(=0.36; 5_Н (300 МН/, 7.64 (1Н, йй, 1=7.8, 1.4 Нг), 7.56 (1Н, йй, 1=1.9, 1.1 Нг), 7.40 (1Н, Л, 1=7.6, 0.8 Нг), 7.21 (1Н, Л, 1=7.7, 1.7 Нг), 5.28 (1Н, й, 1=8.0 Н), 3.60 (1Н, йй, 1=12.7, 2.8 Нг), 3.37 (1Н, йй, 1=12.7, 8.2 Нг), 2.68 (1Н, Ьз).

К раствору (4) (9.3 г, 38.4 ммоль, 1.00 экв.) в толуоле (300 мл) добавляли триизопропилборат (13.3 мл, 57.6 ммоль, 1.50 экв.). К реакционной колбе присоединяли холодильник Дина и Старка и реакционную смесь кипятили с целью удаления приблизительно 300 мл жидкости. Темную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли в нее ТГФ (250 мл) и затем охлаждали до -78°С. К реакционной смеси при -78°С добавляли по каплям н-бутиллитий (17.7 мл, 2.5 М в гексане, 44.2 ммоль, 1.15 экв.) и затем перемешивали в течение 30 мин при этой температуре. Затем реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры, при которой ее перемешивали в течение 3 ч перед тем, как погасить посредством 6 М НС1 (30 мл).

Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и образовавшийся остаток обрабатывали способом испарительной колоночной хроматографии (20% Е1₂О:петролейный эфир-30% Е1₂О:петролейный эфир) с получением продукта (5) в виде вязкого желтого масла (4.9 г, 67%).

ТСХ (40% Е1₂О:петролейный эфир) К=0.47; 5_Н (300 МН/, ДМСО) 9.39 (1Н, δ), 7.74 (1Н, й, 1=7.1 Н), 7.47 (2Н, δ), 7.43-7.33 (1Н, т), 5.35 (1Н, йй, 1=5.8, 2.8 Нг), 3.83 (1Н, йй, 1=13.1, 2.9 Нг), 3.49 (1Н, йй, 1=13.1, 6.2 Нг)

К раствору (5) (2.75 г, 14.6 ммоль, 1.0 экв.) в метаноле (150 мл) добавляли трифенилфосфин (3.82 г, 14.6 ммоль, 1.0 экв.) и смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Добавляли концентрированную НС1 (7.0 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 2 ч перед концентрированием до сухости при пониженном давлении. Добавляли дихлорметан и смесь экстрагировали 2 М НС1 (5х 10 мл). Перед концентрированием при пониженном давлении объединенные водные фазы промывали дихлорметаном (10 мл). Затем остаток перекристаллизовывали из горячей смеси вода/ацетонитрил (3 мл воды/50-80 мл ацетонитрила на г соединения) и получали продукт (6) в виде твердого белого вещества (1.2 г, 41%).

Т. пл. 224-228°С; [α]_η ²⁷=-47.5° (с 1.9, Н₂О); 5_Н (300 МН/, ДМСО + 1ТО) 7.76 (1Н, й, 1=7.0 Нг), 7.587.36 (3Н, т), 5.31 (1Н, й, 1=9.0 Нг), 3.47 (1Н, й, 1=13.2 Нг), 2.73 (1Н, йй, 1=12.8, 10.0 Нг); 5_С (75.5 МН/, СОСТ) 131.67, 131.22, 128.63, 122.05, 77.06, 44.11; НКМ8 (Е81): расчетн. для С₉Н₁₃В^₂ [М+СН₂]+ 178.1039, экспер. 178.1036.

(8)-3-Аминометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол), гидрохлорид (А2) (8)-2-Бром-1-(2-бромфенил)этанол

(8)-(-)-2-Метил-СВ8-оксазаборолидин (15.8 мл, 1.0 М в толуоле, 15.8 ммоль, 0.11 экв.) добавляли при перемешивании к раствору (1) (40.0 г, 143 ммоль, 1.0 экв.) в ТГФ (400 мл). Реакционную смесь охлаждали до -10°С, затем в нее добавляли ВН₃-ТГФ (172 мл, 1.0 М в ТГФ, 172 ммоль, 1.20 экв.) в течение 4 ч. Перед добавлением метанола (180 мл) реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 45 мин при -10°С. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Образовавшийся остаток обрабатывали способом испарительной колоночной хроматографии (10% Е1₂О:петролейный эфир) с получением продукта (7) в виде бесцветного масла (37.3 г, 93%).

ТСХ (10% Е1₂О:петролейный эфир) К(=0.25; 5_Н (300 МН/, 7.62 (1Н, йй, 1=7.8, 1.4 Нг), 7.54 (1Н, йй, 1=7.9, 1.0 Нг), 7.37 (1Н, Л, 1=7.6, 0.9 Нг), 7.19 (1Н, Л, 1=7.7, 1.5 Нг), 5.26 (1Н, 1й, 1=8.8, 3.0 Н), 3.80 (1Н, йй, 1=10.5, 2.8 Нг), 3.42 (1Н, йй, 1=10.5, 8.9 Н), 2.89-2.84 (1Н, т).

- 61 020530 (8)-2-Азидо-1-(2-бромфенил)этанол

Ссылка - ТетраЬеЙгоп: ЛкуттеЬу 2005, 76, 3633-3639. Азид натрия (9.7 г, 149.5 ммоль, 1.2 экв.) добавляли к раствору (7) (35.0 г, 124.5 ммоль, 1.0 экв.) в ДМФ (140 мл) при комнатной температуре. Затем реакционную смесь нагревали до 80°С в течение 24 ч. Добавляли воду (450 мл) и затем этот раствор экстрагировали диэтиловым эфиром (3x500 мл). Объединенные органические фазы промывали соляным раствором (100 мл), высушивали над Мд8О₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток обрабатывали способом испарительной колоночной хроматографии (15% Е1₂О:петролейный эфир) с получением (8) в виде оранжевого масла (24.3 г, 80%).

ТСХ (10% Е1₂О:петролейный эфир) К_Г=0.18; 5_Н (300 ΜΗζ, СОС1_;) 7.60 (1Н, йй, 1=7.8, 1.4 Ηζ,), 7.52 (1Н, йй, 1=7.9, 1.1 Ηζ), 7.36 (1Η, Й1, 1=7.6, 0.8 Ηζ), 7.17 (1Η, Й1, 1=7.7, 1.7 Ηζ), 5.28-5.19 (1Η, т), 3.55 (1Η, йй, 1=12.7, 2.8 Ηζ), 3.33 (1Η, йй, 1=12.7, 8.2 Ηζ), 2.94 (1Η й, 1=3.5 Ηζ)

К раствору (8) (23 г, 94.6 ммоль, 1.00 экв.) в толуоле (460 мл) добавляли триизопропилборат (32 мл, 142.0 ммоль, 1.50 экв.). К реакционной колбе присоединяли холодильник Дина и Старка и реакционную смесь кипятили с целью удаления приблизительно 450 мл жидкости. Темную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, при которой добавляли ТГФ (400 мл), и затем охлаждали до -78°С. К реакционной смеси при -78°С добавляли по каплям н-бутиллитий (43.5 мл, 2.5 М в гексане, 108.8 ммоль, 1.15 экв.) и затем перемешивали в течение 30 мин при этой температуре. Затем реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры, при которой ее перемешивали в течение 3 ч перед тем, как погасить посредством 6 М ИС1 (70 мл). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и образовавшийся остаток обрабатывали способом испарительной колоночной хроматографии (20% Е1₂О:петролейный эфир-30% Е1₂О:петролейный эфир) с получением продукта (9) в виде вязкого оранжевого масла (6.1 г, 34%).

ТСХ (30% Е1₂О:петролейный эфир) К=0.34; 5_Н (300 ΜΗζ, ДМСО) 9.39 (1Η, к), 7.74 (1Н, й, 1=7.1 Ηζ), 7.52-7.43 (2Н, т), 7.43-7.33 (1Н, т), 5.35 (1Η, йй, 1=5.8, 2.8 Ηζ), 3.83 (1Η, йй, 1=13.1, 2.8 Ηζ), 3.49 (1Η, йй, 1=13.1, 6.2 Ηζ)

К раствору азида (9) (1.0 г, 5.3 ммоль, 1.0 экв.) в ацетонитриле (50 мл) добавляли трифенилфосфин (2.7 г, 10 5 ммоль, 2.0 экв. ) и затем концентрировали ΗΟ (1 мл, 10.5 ммоль, 2.0 экв.). Оранжевый раствор перемешивали в течение 18 ч и затем фильтровали. Осадок промывали дихлорметаном с получением продукта (10) в виде твердого белого вещества (680 мг, 65%).

Т. пл. 227-230°С; [ 5]_п ²⁷=+48.6° (с 2.0, Н₂О); 5_Н (300 ΜΗζ, ДМСО + 1>О) 7.76 (1Н, й, 1=6.9 Ηζ), 7.577.35 (3Н, т), 5.31 (1Η, й, 1=8.1 Ηζ), 3.47 (1Η, й, 1=13.4 Ηζ), 2.72 (1Η, йй, 1=12.8, 9.9 Ηζ); 5_С (75.5 ΜΗζ, СОСН) 152.39, 131.63, 131.23, 128.59, 122.07, 77.09, 44.11; ΗΚΜ8(Β8Ι): расчетн. для ΟΗ,ιΒΝΘζ [М + Η]+164.0882, экспер. 164.0868.

Альтернативный синтез гидрохлорида (8)-3-аминометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ола (А2)

-Нитрометил-3Н-бензо [с][1,2] оксаборол- 1-ол

ΜβΝΟ,, ΝβΟΗ

2-Формилфенилбороновую кислоту (25 г, 0.167 моль) добавляли к охлажденному раствору гидроксида натрия (7.0 г, 0.175 моль, 1.05 экв.) в 83 мл воды при 10°С. К этому раствору добавляли нитрометан (10.17 г, 1 экв.) и затем нагревали до комнатной температуры при перемешивании. Эту смесь перемешивали в течение 3.5 ч. Затем реакцию охлаждали в ледяной бане и подкисляли 3М ΗΟ до рН 2. Собирали белый осадок и фильтровали, промывали водой и высушивали на воздухе с получением 28 г (87%) 3-(нитрометил)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ола (грязнобелое твердое вещество).

- 62 020530

Синтез гидрохлорида 3-аминометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ола (А1) с применением гидроксида палладия

3-(Нитрометил)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ол (20 г, 103 ммоль) растворяли в ледяной уксусной кислоте (200 мл) и помещали в 500 мл колбу Парра. Колбу промывали струей Ν2 в течение 20 мин. Добавляли 4.2 г 20 мас.% гидроксида палладия на углероде (катализатор Перлмана) и реакционную смесь продували струей водорода 3х и гидрировали при 45-55 ρκί в течение 36 ч. Смесь фильтровали через слой целита с целью удаления катализатора. Затем растворитель (уксусная кислота) испаряли под вакуумом при 40-50°С, получая неочищенное масло. Неочищенное масло растворяли в 250 мл дихлорметана и охлаждали до 0-5°С. Затем барботировали газ НС1 через раствор в течение 25 мин. Добавляли эфир (150 мл) с целью дополнительного осаждения желтого твердого вещества, которое впоследствии фильтровали, промывали эфиром и выпаривали на роторном испарителе до сухости. Получали 7.8 г желтого твердого вещества (37%).

Трет-бутиловый эфир (1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-3-илметил)карбаминовой кислоты (Вос-А1)

Неочищенный амин (7.4 г, 0.037 моль) суспендировали в 40 мл трет-бутанола при комнатной температуре. Добавляли КОН (5.4 г, 0.82 моль) в 50 мл воды. Суспензию охлаждали с помощью ледяной бани и затем порциями добавляли твердый ВОС₂О (8.51 г, 0.039 моль) в течение 10 мин. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Затем добавляли 150 мл дихлорметана. Затем образовавшуюся органическую фазу разделяли и водную фазу экстрагировали дважды посредством 100 мл дихлорметана. Экстракты объединяли, высушивали над М§8О₄, фильтровали и испаряли. Очистка способом испарительной силикагелевой хроматографии с применением смеси дихлорметан/метанол 95.5 позволила получить 4.4 г (45% выход).

Ή ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆) δ (ррт): 9.20 (к, 1Н), 7.72 (й, 1=7.0 Нг, 1Н), 7.46 (!, 1=7.2 Нг, 1Н), 7.427.31 (т, 2Н), 7.00 (!, 1=5.5 Ш, 1Н), 5.13 (йй, 1=6.8, 4.5 Ш, 1Н), 3.45-3.29 (т, 1Н), 3.05 (ййй, 1=1.7, 6.6, 6.2 Нг, 1Н), 1.37 (к, 9Н); М8 (Е8Ц: т'/=262 (М-1, отрицательн.); ВЭЖХ чистота 99.20% (МахР1о! 200-400 нм), Анал. расч. для С₁₃Н₁₈В^₄: С 59.35%, Н 6.90%, N 5.32%. Экспер.,%: С 59.37%, Н 7.14%, N 5.58%.

Трет-бупиловый эфир (8)-(1 -гидрокси-1,3-бигидро-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-3 -илметил)карбаминовой кислоты (ВосА2)

-ΝΗΒοο — ΝΗΒοο

2.1 г ВосА1 разделяли посредством хиральной ВЭЖХ с применением колонки СШКАЬРАК ΑΥ и смеси 10% этанол/гексан в качестве элюента @ 25°С УФ-обнаружение осуществляли при 265 нм. Вещества, дающие два пика (ВосА2 и ВосА60), собирали и испаряли с образованием желтого масла. Анализ объединенных фракций с применением аналитической колонки СШКАЬРАК ΑΥ 4.6 мм ГОх250 мм и этой же подвижной фазы показал ВосА2 [910 мг (86.7% выход)] со временем удерживания 3.998 мин и 99.8% ее. ВосА60 [600 мг (57.1% выход)] имел время удерживания 4.889 мин и 97.5% ее.

(8)-3-Аминометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А2)

ВосА2 (910 мг) растворяли в ЕЮАс (200 мл), обрабатывали конц НС1 и подвергали воздействию ультразвуком в течение 3 ч до тех пор, пока не начал образовываться осадок. Реакцию охлаждали до 10°С всю ночь и затем фильтровали. Грязно-белое твердое вещество собирали и высушивали на воздухе с получением 340 мг. Это вещество перекристаллизовывали из водного ацетонитрила с получением 242 мг твердого белого вещества после высушивания.

МР 214-216°С; Ή ЯМР 300 МН/ (ДМСО-й₆) δ 9.59 (Ьк, 1Н), 8.33 (Ьк, 3Н), 7.81-7.83 (й, 1=7.5 Н, 1Н), 7.35-7.50 (т, 3Н), 5.34-5.37 (й, 1=10.2 Н, 1Н), 3.46 (т, 1Н), 2.71 (т, 1Н); М8 Ε8I (-) 162 [М-Н], Ε8I (+) 164 [М+Н], [α]Ό31=+71.0° (с 2.0, Н₂О) [абсолютная конфигурация (8)].

- 63 020530

4-(3 - Аминометил-1 -гидрокси-1,3 -дигидро -бензо [с][1,2] оксаборол-7 -илокси)бутирамидацетат (А5)

Этиловый эфир 4-[2-(5,5-диметил[1,3,2]диоккаборинан-2-ил)-3-формил-фенокси]масляной кислоты

Смесь этилового эфира 4-(2-бром-3-формил-фенокси)масляной кислоты (5.50 г, 17.5 ммоль), бис(неопентилглюколато)дибора (6.80 г, 30.1 ммоль), РбС1₂(брр1)-СН₂С1₂ (1.30 г, 1.79 ммоль) и КОАс (5.30 г, 54.1 ммоль) в безводном ТГФ (600 мл) нагревали всю ночь при перемешивании при 80°С (темп. бани) в атмосфере N2. Затем смесь фильтровали через слой целита и концентрировали в вакууме до приблизительно одной четверти от первоначального объема. Образовавшийся осадок выделяли посредством фильтрации. Осадок промывали ТГФ и ЕЮАс и объединенный фильтрат концентрировали в вакууме с получением маслянистого остатка, который применяли непосредственно на следующей реакции без дополнительной очистки.

'II ЯМР (400 МН/, СОСЪ) δ (ррт): 9.95 (5, 1Н), 7.47-7.39 (т, 2Н), 7.09-7.07 (т, 1Н), 4.14 (φ 1=7.2 Нг, 2Н), 4.09-4.01 (т, 2Н), 3.83 (5, 3Н), 3.66 (5, 3Н), 2.53 (ΐ, 1=8.0 Нг, 2Н), 2.19-2.07 (т, 2Н), 1.32-1.22 (т, 3Н), 0.98 (5, 6Н).

Этиловый эфир 4-(1-гидрокси-3-нитрометил-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси)масляной кислоты

МеNΟ₂ (1.3 мл, 25 ммоль) добавляли по каплям при перемешивании к раствору неочищенного метилового эфира 4-[2-(5,5-диметил[1,3,2]диоккаборинан-2-ил)-3-формил-фенокси]масляной кислоты (9.4 г), №ЮН (1.0 г, 25 ммоль) и Н₂О (35 мл) в МеСN (90 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре всю ночь и затем подкисляли (рН 2) с применением 4 М НС1. ТГФ удаляли в вакууме и водную фазу экстрагировали ЕЮАс. Органическую фазу промывали соляным раствором, высушивали (М§8О₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали способом испарительной хроматографии (10-30% ЕЮАс в гексане) и получали вышеназванное соединение в виде желтого масла: выход 2.52 г (45% суммарно в 2 стадиях).

'Н ЯМР (400 МНг, ДМСО-б₆) δ (ррт): 9.04 (5, 1Н), 7.46-7.42 (т, 1Н), 7.07-7.05 (т, 1Н), 6.88-6.86 (т, 1Н), 5.87 (б, 1=8.2 Нг, 1Н), 5.69 (бб, 1=9.2, 2.5 Нг, 1Н), 5.29 (бб, 6=13.3, 2.7 Нг, 1Н), 4.14-3.94 (т, 5Н), 2.55-2.44 (т, 2Н), 2.02-1.88 (т, 2Н), 1.16 (ΐ, 1=7.2 Нг, 3Н); М8 (Е81): т/г=322 (М-1, отрицательн.).

4-(1-Г идрокси-3 -нитрометил- 1,3-дигидро-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-7-илокси)масляная кислота

Смесь этилового эфира 4-(1-гидрокси-3-нитрометил-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси) масляной кислоты (2.51 г, 7.78 ммоль), 10% №ОН (17 мл) и 1:1 МеОН/Н₂О (70 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. МеОН удаляли в вакууме и оставшуюся водную фазу подкисляли до рН 1 с применением 2 М НС1. Затем водную фазу экстрагировали ЕЮАс. Органические фракции промывали соляным раствором, высушивали (М§8О₄) и концентрировали в вакууме с получением вышеназванного соединения в виде бледно-желтой пены: выход 1.85 г (81%).

'Н ЯМР (400 МНг, ДМСО-б₆) δ (ррт): 12.08 (Ъ5, 1Н), 9.01 (Ъз, 1Н), 7.46-7.41 (т, 1Н), 7.06-7.04 (т,

- 64 020530

1Н), 6.89-6.87 (т, 1Н), 5.70 (άά, 1=7.0, 2.3 Нг, 1Н), 5.30 (άά, 1=13.3, 2.3 Нг, 1Н), 4.55 (άά, 1=13.6, 4.2 Нг, 1Н), 4.03 (ΐ, 1=6.6 Нг, 2Н), 2.40 (ΐ, 1=7.5 Нг, 2Н), 1.95-1.89 (т, 2Н); М8 (Ε8Ι): т/г=296 (М+1, положительн.).

4-(1-Г идрокси-3 -нитрометил- 1,3-дигидро-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-7-илокси)бутирамид

Этилхлорформиат (80 мкл, 0.83 ммоль) добавляли по каплям к раствору Εΐ₃Ν (0.35 мл, 4.7 ммоль) и 4-(1 -гидрокси-3 -нитрометил- 1,3-дигидро-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-7-илокси)масляной кислоты (111 мг, 0.38 ммоль) в ТГФ (4 мл) при 0°С (темп. бани). Смесь перемешивали при 0°С (темп. бани) в течение 15 мин и затем по каплям добавляли 28% ХН₄ОН (0.5 мл) при 0°С (темп. бани). Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение 20 мин. Осадок выделяли посредством фильтрации и промывали ТГФ и Н₂О с получением вышеназванного соединения в виде светло-желтого твердого вещества: выход 52 мг (45%).

Ή ЯМР (400 МНг, ДМСОД₆) δ (ррт): 7.43-7.39 (т, 1Н), 7.33 (Ь8, 1Н), 7.04-7.02 (т, 1Н), 6.86-6.84 (т, 1Н), 6.61 (Ь8, 1Н), 5.67 (ά, 1=9.0 Нг, 1Н), 5.26 (άά, 1=13.7, 2.7 Нг, 1Н), 4.52 (άά, 1=13.5, 9.2 Нг, 1Н), 4.00 (ΐ, 1=6.2 Нг, 2Н), 2.22 (ΐ, 1=7.0 Нг, 2Н), 1.93-1.90 (т, 2Н); М8 (Ε8Ι): т/г=295 (М+1, положительн.).

4-(3 - Аминометил-1 -гидрокси-1,3 -дигидро -бензо [с] [1,2] оксаборол-7 -илокси)бутирамид, ацетат (А5)

Смесь 4-(1-гидрокси-3-нитрометил-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси)бутирамида (50 мг, 0.17 ммоль), Νί Ренея (~20 мг), 2 М ХН₃ в ЕЮН (1 мл) и ЕЮН (100 мл) встряхивали в атмосфере Н₂ (42 ρ8ΐ) в течение 4.5 ч при комнатной температуре. Смесь фильтровали через прокладку целита и фильтрат концентрировали в вакууме. К остатку сразу же добавляли 3 Ν НС1 в МеОН (1 мл) и образовавшуюся смесь концентрировали в вакууме. Затем остаток очищали способом препаративной ВЭЖХ (АсОН). Вышеназванное соединение выделяли в виде белого лиофилизата: выход 5 мг (11%).

Ή ЯМР (400 МНг, ДМСОД₆ + 1+О + НС1) δ (ррт): 8.14 (Ь8, 1Н), 7.49-7.45 (т, 1Н), 7.06-7.04 (т, 1Н), 6.90-6.88 (т, 1Н), 5.27 (ά, 1=8.2 Нг, 1Н), 4.04-4.01 (т, 2Н), 2.81-2.76 (т, 1Н), 2.25 (ΐ, 1=7.0 Нг, 2Н), 1.98-1.94 (т, 2Н); М8 (Ε8Ι): т/г=265 (М+1, положительн.).

(1-Гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси)уксусная кислота (А6)

(2-Бром-3-формил-фенокси)ацетонитрил

Общий способ 4: 2-бром-3-гидрокси-бензальдегид (20.1 г, 0.10 моль), ВгСН₂СН (8.7 мл, 0.13 моль), К₂СО₃ (20.73 г, 0.15 моль) и ДМФ (60 мл). Очистка: осаждение из ΕΐΟΑс с получением вышеназванного соединения в виде белых кристаллов (16.2 г), фильтрат концентрировали и остаток очищали способом испарительной хроматографии (ЕЮАс/гексан 1:3) с получением дополнительных 3.68 г: выход 19.88 г (83%).

Ή ЯМР (400 МНг, СИСЬ) δ (ррт): 10.41 (8, 1Н), 7.77-7.60 (т, 1Н), 7.47 (ΐ, 1=7.6 Нг, 1Н), 7.34-7.19 (т, 1Н), 4.91 (8, 2Н).

- 65 020530

3-Формил-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенокси]ацетонитрил

Общий способ 5: (2-бром-3-формил-фенокси)ацетонитрил (14.4 г, 60.0 ммоль), Β₂ρίη₂ (30.47 г, 0.12 моль), КОАс (17.68 г, 0.18 моль), РйС1₂(йрр1)-СН₂С1₂ (3.51 г, 4.8 ммоль) и диоксан (150 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (20%, затем 40% ЕЮАс в гексане) с получением вышеназванного соединения в виде светло-желтого твердого вещества: выход 11.38 г (66%).

'Н ЯМР (400 МН/, СПС1₃) δ (ррт): 9.97 (5, 1Н), 7.60-7.56 (т, 2Н), 7.22-7.17 (т, 1Н), 4.78 (5, 2Н), 1.47 (5, 12Н).

-Г идрокси-1,3-дигидро-бензо [с] [1,2]оксаборол-7-илокси)ацетонитрил

Общий способ 7: 3-формил-2-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенокси]ацетонитрил (1.02 г, 4.0 ммоль), ЫаВН₄ (182 мг, 4.8 ммоль) и МеОН (10 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (2% МеОН в СН₂С1₂). Вышеназванное соединение выделяли в виде твердого белого вещества: выход 260 мг (34%).

'II ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆) δ (ррт): 9.11 (5, 1Н), 7.51 (ί, 1=7.8 Н/, 1Н), 7.11 (й, 1=7.4 Н/, 1Н), 6.97 (й, 1=8.2 Н/, 1Н), 5.25 (5, 2Н), 4.97 (5, 2Н); М8 (ЕЗР): т//=188 (М-1, отрицательн.).

(1-Г идрокси-1,3 -дигидро-бензо [с] [1,2] оксаборол-7-илокси)уксусная кислота (А6)

НС1 (газ) барботировали через раствор 1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси) ацетонитрила (132 мг, 0.67 ммоль) в смеси 4:1 МеОН/Н₂О (25 мл) при 0°С (темп. бани) в течение 5 мин. Реакционную смесь перемешивали при 0°С (темп. бани) в течение 10 мин и затем при комнатной температуре в течение 1 ч. МеОН удаляли в вакууме и устанавливали рН водной фазы 6 путем применения насыщ. ЫаНСО₃. Образовавшийся осадок выделяли посредством фильтрации и промывали ЕьО с получением 6 в виде твердого белого вещества: выход 105 мг (76%).

Т. пл. 258-260°С; 'Н ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆) δ (ррт): 7.35 (ί, 1=7.6 Н/, 1Н), 6.97 (й, 1=7.0 Н/, 1Н), 6.77 (й, 1=7.8 Н/, 1Н), 5.10 (5, 2Н), 4.70-4.50 (т, 1Н), 4.40-4.00 (т, 3Н); М8 (Е8Ц: т// 207 (М-1, отрицательн.); ВЭЖХ чистота 95.52% (МахР1о1) и 92.77% (220 нм).

2-(1-Г идрокси- 1,3-дигидро-бензо [с] [1,2]оксаборол-7-илокси)-Ы-(2-гидрокси-этил)ацетамид (А7)

Ы-(2-Бензилокси-этил)-2-( 1 -гидрокси-1,3 -дигидро -бензо [с][1,2] оксаборол-7 -илокси)ацетамид

Изобутилхлорформиат (250 мг, 1.83 ммоль) добавляли к раствору МММ (184 мг, 1.82 ммоль) и А6 (190 мг, 0.91 ммоль) в безводном ТГФ (10 мл) при 0°С (темп. бани) в атмосфере Ν₂. Реакционную смесь перемешивали при 0°С (темп. бани) в течение 40 мин. Добавляли смесь гидрохлорида 2бензилоксиэтиламина (171 мг, 0.91 ммоль) и ЯММ (92 мг, 0.91 ммоль) в ДМФ (5 мл). Смесь перемешивали при 0°С (темп. бани) в течение 20 мин и затем при комнатной температуре всю ночь. Смесь концентрировали в вакууме и остаток растворяли в ЕЮАс (100 мл). Органическую фазу промывали Н₂О (2x30 мл), затем соляным раствором, высушивали (№₂8О₄) и концентрировали в вакууме с получением вышеназванного соединения: выход 260 мг (84%).

'II ЯМР (400 МН/, δ (ррт): 7.44 (т, 1Н), 7.37-7.18 (т, 5Н), 7.06-6.94 (т, 1Н), 6.78-6.66 (т,

1Н), 5.28 (Ь5, 1Н), 5.03 (Ь5, 2Н), 4.60 (Ь5, 2Н), 4.49 (Ь5, 2Н), 3.60 (Ь5, 4Н).

- 66 020530

2-(1-Г идрокси- 1,3-дигидро-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-7-илокси)^-(2-гидрокси-этил)ацетамид (А7)

Общий способ 2: ^(2-бензилокси-этил)-2-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7илокси)ацетамид (0.26 г, 0.76 ммоль), ледяной АсОН (20 мл) и 20% Рб^Н^/С (50 вес.% во влажном состоянии) (50 мг). Очистка: способом препаративной ВЭЖХ (0.1% АсОН) с последующим растворением в смеси Н2О (5 мл), МеОН (1 мл) и 2 Ν НС1 (2 капли), фильтрацией и лиофилизацией фильтрата: выход 55 мг (29%).

Т.пл. 248-249°С; Ή ЯМР {400 Μ^ ДМСО-б₆ + Ό₂Ο (0.01 мл)} δ (ррт): 9.00 (к, 1Н), 7.96 (Ьк, 1Н), 7.43 (ΐ, 1=7.8 Нг, 1Н), 7.02 (б, 1=7.6 Нг, 1Н), 6.84 (б, 1=8.2 Нг, 1Н), 4.95 (к, 2Н), 4.73 (ΐ, 1=5.3 Нг, 1Н), 4.56 (к, 2Н), 3.44 (ΐ, 1=5.9 Нг, 2Н), 3.23 (ΐ, 1=6.1 Нг, 2Н); Μ8 (Ε8Ι): т/ζ 250 (Μ-1, отрицательн.); ВЭЖХ чистота 98.14% ^ахРШО и 96.08% (220 нм).

7,8-Дигидро-2Н-1,6,9-триокса-9а-бора-бензо[сб]азулен (А8)

2-Бром-3-[2-(тетрагидро-пиран-2-илокси)этокси]бензальдегид

Общий способ 3: 2-бром-3-гидрокси-бензальдегид (7.04 г, 35 ммоль), 2-(тетрагидро-пиран-2илокси)этанол (5.0 мл, 35 ммоль), РРб₃ (9.18 г, 35 ммоль), безводный ТГФ (200 мл) и ΌΙΑΌ (6.9 мл, 35 ммоль). Очистка: способом испарительной хроматографии (гексан, затем 5% ΕΐΟΑс/гексан): выход 7.22 г (66%).

Ή ЯМР (400 ΜΉΖ, ДМСО-б₆) δ (ррт): 10.41 (к, 1Н), 7.49 (б, 1=7.2 Нг, 1Н), 7.32-7.25 (т, 6Н), 7.08 (б, 1=8.0 Нг, 1Н), 4.54 (к, 2Н), 4.16 (ΐ, 1=6.0 Нг, 2Н), 3.74 (ΐ, 1=5.8 Нг, 2Н), 2.19-2.14 (т, 2Н).

3-[2-(Тетрагидро-пиран-2-илокси)этокси]-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид

Общий способ 5: 2-бром-3-[2-(тетрагидро-пиран-2-илокси)этокси]бензальдегид (6.0 г, 19 ммоль), КΟΑс (5.65 г, 57.5 ммоль), В₂рш₂ (6.35 г, 25 ммоль), РбС1₂(брр£)-СН₂С1₂ (0.70 г, 0.96 ммоль) и безводный ДМФ (70 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (гексан, затем 30% ΕΐΟΑс/гексан): выход 2.07 г (29%).

Ή ЯМР (400 ΜΉζ, СВС1_;) δ (ррт): 9.92 (к, 1Н), 7.53-7.33 (т, 2Н), 7.11 (б, 1=7.9 Нг, 1Н), 4.65 (Ьк, 1Н), 4.17-3.71 (т, 2Н), 3.59-3.38 (т, 1Н), 1.90-1.40 (т, 6Н), 1.43 (к, 12Н), 1.40-1.29 (т, 2Н).

7,8-Дигидро-2Н-1,6,9-триокса-9а-бора-бензо[сб]азулен (А8)

Общий способ 7: 3-[2-(тетрагидро-пиран-2-илокси)этокси]-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2ил)бензальдегид (0.93 г, 2.58 ммоль), №-1ВН₄ (195 мг, 5.16 ммоль) и безводный МеОН (5 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (20% ΕΐΟΑс/гексан): выход 230 мг (51%).

Ή ЯМР (400 ΜΉζ, СВС1_;) δ (ррт): 7.40 (ΐ, 1=7.8 Нг, 1Н), 6.96 (б, 1=7.3 Нг, 1Н), 6.84 (б, 1=8.2 Нг, 1Н), 5.15 (б, 1=3.5 Нг, 2Н), 4.62 (б, 1=12.9 Нг, 1Н), 4.38 (Ьк, 2Н), 4.21 (б, 1=9.7 Нг, 1Н); Μ8 (Ε8Ι): т/г=177 (Μ+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 99.36% (ΜаxР1оΐ) и 95.84% (220 нм).

- 67 020530

4-(1-Г идрокси- 1,3-дигидро-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-7-илокси)масляная кислота (А9)

Этиловый эфир 4-(2-бром-3-формил-фенокси)масляной кислоты

Общий способ 1: 2-бром-3-гидрокси-бензальдегид (0.30 г, 1.5 ммоль), этил-4-бромбутират (0.30 г, 1.5 ммоль), К₂СО₃ (0.42 г, 3.0 ммоль) и ДМФ (5 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (2.8 ЕЮАс/гексан). Вышеназванное соединение выделяли в виде красной жидкости: выход 0.23 г (50%).

^!Н ЯМР (400 ММ, СПС1₃) δ (ррт): 10.44 (з, 1Η), 7.52 (й, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 7.36 (1, 1=8.0 Ηζ, 1Η), 7.12 (й, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 4.20-4.02 (т, 4Η), 2.61 (т, 2Η), 2.2 (йф 1=6.8, 6.6 Ηζ, 2Η), 1.27 (ΐ, 1=7.2 Ηζ, 3Η); М8 (Ε8Ι): πι/ζ=317 (М+1, положительн.).

Этиловый эфир 3-[3-формил-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенокси]пропионовой кислоты

Общий способ 5: этиловый эфир 4-(2-бром-3-формил-фенокси)масляной кислоты (0.20 г, 6.3 ммоль), В₂рш₂ (0.177 г, 6.9 ммоль), РйОДйррГНС^СЕ (0.025 г, 0.25 ммоль), КОАс (0.185 г, 18.9 ммоль) и 1,4-диоксан (5 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (1.5 ЕЮАс/гексан). Вышеназванное соединение выделяли в виде твердого белого вещества: выход 0.13 г (57%).

ЯМР (400 \'1Ηζ, СИСЬ) δ (ррт): 9.94 (з, 1Η), 7.56-7.33 (т, 2Η), 7.07 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Η), 4.14 (ф 1=7.2 Ηζ, 2Η), 4.04 (ΐ, 1=6.1 Ηζ, 2Η), 2.55 (ΐ, 1=7.4 Ηζ, 2Η), 2.24-1.96 (т, 2Η), 1.46 (з, 12Η), 1.25 (ΐ, 1=7.0 Ηζ, 3Η); М8 (Ε8Ι): т^=361 (М-1, отрицательн.).

Этиловый эфир 3-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси-пропионовоп кислоты

Общий способ 7: этиловый эфир 3-[3-формил-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил) фенокси]пропионовой кислоты (2.2 г, 6.0 ммоль), ИаВ^ (0.40 г, 10 ммоль) и МеОН (25 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (1:10 ЕЮАс/гексан). Вышеназванное соединение выделяли в виде желтой жидкости: выход 0.6 г (40%).

^!Н ЯМР (400 \'1Ηζ, СИСЬ) δ (ррт): 8.7 (з, 1Н), 7.44-7.40 (т, 1Η), 6.90 (й, 1=7.6 Ηζ, 1Η), 6.78 (й, 1=7.2 Ηζ, 1Η), 4.91 (з, 2Η), 4.11 (1, 1=6.7 Ηζ, 4Η), 2.46 (ΐ, 1=7.3 Ηζ, 2Η), 2.10-1.96 (т, 2Η), 1.22 (ΐ, 1=7.1 Ηζ, 3Η); М8 (Ε8Ι): т//=296 (М+1, положительн.).

3-(1-Г идрокси-1,3 -дигидро-бензо [с][1,2] оксаборол-7 -илокси-пропионовая кислота (А9)

10% NаОИ (2 мл) добавляли по каплям к раствору этилового эфира 3-(1-гидрокси-1,3-дигидробензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси-пропионовой кислоты (0.20 г, 0.75 ммоль) в 1:1 МеОН/Н₂О (4 мл) при 0°С. Затем смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Потом удаляли МеОН в вакууме и добавляли Н₂О (3 мл). Устанавливали рН смеси 3 и затем экстрагировали Е1ОАс. Органическую фазу промывали Н₂О (5 мл), потом соляным раствором (5 мл), высушивали и кон- 68 020530 центрировали с получением 9 в виде белого порошка: выход 0.15 г (85%).

'ΐ I ЯМР (400 ΜΗζ, СПС1₃) δ (ррт): 11.35 (5, 1Η), 9.08 (5, 1Η), 7.44 (ΐ, 1=7.1 Ηζ, 1Η), 6.96 (б, 1=7.1 Ηζ,

1Η), 6.85 (б, 1=7.2 Ηζ, 1Η), 4.92 (5, 2Η), 4.12 (ΐ, 1=7.0 Ηζ, 2Η), 2.36 (ΐ, 1=7.0 Ηζ, 2Η), 1.95-1.86 (т, 2Η); Μ8 (Е8^: т//=237 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 95.81% (Ма\Р1о1 200-400 нм), 95.20% (220 нм).

4-(1-Г идрокси- 1,3-дигидро-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-7-илокси)бутирамид (А10)

Этилхлорформиат (80 мкл, 0.84 ммоль) добавляли по каплям к раствору А9 (105 мг, 0.44 ммоль) и (0.32 мл, 2.3 ммоль) в безводном ТГФ (4 мл) при 0°С (темп. бани). Раствор перемешивали при 0°С (темп. бани) в течение 15 мин и затем добавляли 28% ΜΗ₄0Η (0.5 мл), что привело к образованию белого осадка. Суспензию перемешивали в течение дополнительных 20 мин при комнатной температуре. Твердое вещество выделяли посредством фильтрации и затем растворяли в Н2О и лиофилизировали с получением 10 (48 мг, 46%) в виде твердого белого вещества.

'Н ЯМР (400 МШ, ДМСО-б₆) δ (ррт): 7.40-7.36 (т, 3Н), 7.26 (5, 1Η), 7.13 (5, 1Η), 6.92-6.90 (т, 1Η), 6.79-6.77 (т, 1Η), 4.89 (5, 2Η), 4.01 (ΐ, 1=6.3 Ηζ, 2Η), 2.22 (ΐ, 1=7.0 Ηζ, 2Η), 1.92-1.88 (т, 2Η); М8 (Е8Т): т^=236 (М+1, положительн); ВЭЖХ чистота 95.14% (Ма\Р1о1 200-400 нм), 95.19% (220 нм).

7-(3-Амино-пропокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, ацетат (А11)

2-Бром-3-[3 -(1,3-диоксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил)пропокси] бензальдегид

Общий способ 4: 2-бром-3-гидрокси-бензальдегид (10.05 г, 50.0 ммоль), 2-(3-бром-пропил)изоиндоле1,3-дион (16.1 г, 60.0 ммоль), С8₂С0₃ (40.7 г, 0.125 моль) и ДМФ (100 мл), выход 13.93 г (72%).

'Η ЯМР (400 МШ, ДМСО-б₆) δ (ррт): 10.22 (5, 1Η), 7.89-7.73 (т, 4Н), 7.46 (ΐ, 1=7.8 Ηζ, 1Н), 7.407.33 (т, 2Н), 4.16 ( ΐ, 1=5.7 Ηζ, 2Η), 3.81 (ΐ, 1=6.4 Ηζ, 2Η), 2.11 (цит, 1=6.1 Ηζ, 2Η); М8 (Е8Т): т/ζ 388 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота: 94.74% (Ма\Р1о1 200-400 нм), 95.36% (220 нм), 94.50% (254 нм).

3-[3-(1,3-Диоксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил)пропокси]-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан2-ил)бензальдегид

Общий способ 5: 2-бром-3-[3-(1,3-диоксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил)пропокси]бензальдегид (2.42 г, 6.23 ммоль), В₂рш₂ (3.16 г, 12.5 ммоль), К0Ас (1.85 г, 18.7 ммоль), РбС1₂(бррГ)-СИ₂С1₂ (0.137 г, 0.187 ммоль) и ДМСО (25 мл). Очистка способом испарительной хроматографии [3:1-2:1 гексан/ЕЮАс (проба, предварительно абсорбированная на 51 г кварца)]: выход 1.43 г (53%) - небольшое загрязнение пинаколом. Соединение применяли без дополнительной очистки.

'Н ЯМР (400 МШ, ДМСО-б₆) δ (ррт): 9.90 (5, 1Η), 7.89-7.76 (т, 4Н), 7.63-7.46 (т, 2Н), 7.24 (б, 1=7.9 Ηζ, 1Η), 4.03 (ΐ, 1=6.0 Ηζ, 2Η), 3.74 (ΐ, 1=7.0 Ηζ, 2Η), 2.15-1.93 (т, 2Η), 1.34 (5, 12Η); М8 (Е8Т): т^=436 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 97.71% (Ма\Р1о1 200-400 нм), 97.49% (220 нм), 98.20% (254 нм).

- 69 020530

7-(3-Амино-пропокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, ацетат (А11) АсОН

Общий способ 7: 3-[3-(1,3-диоксо-1,3-дигидро-изоиндол-2-ил)пропокси]-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид (1.77 г, 4.07 ммоль), ΝπΒΗ₄ (0.769 г, 20.3 ммоль), ί-ΡιΌΗ (37 мл) и Н₂О (6.2 мл). Через 16 ч медленно добавляли АсОН (4.3 мл) и смесь нагревали до 80°С (темп. бани) в течение 5 ч. После охлаждения до комнатной температуры летучие вещества удаляли в вакууме. Добавляли Β1ОΗ и Е1₂О и смесь фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток растворяли в Н₂О. Водную фазу промывали Е1₂О и затем лиофилизировали. Очистка способом препаративной ВЭЖХ (0 1% АсОН) позволила получить А11 в виде белого лиофилизата: выход 0.140 г (13%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 7.22 (1, 1=7.6 Ηζ, 1Н), 6.80 (й, 1=7.0 Ηζ, 1Η), 6.66 (й, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 4.81 (к, 2Η), 4.31 (Ьк, 2Η), 2.79 (1, 1=5.9 Ηζ, 2Η), 1.91-1.82 (т, 2Η), 1.80 (к, 3Η); Μ8 (Е81): т^=208 (Μ+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 99.19% ^ахРШ 200-400 нм), 98.46% (220 нм).

7-(3-Амино-пропокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А11)

Трет-бутиловый эфир [3-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси)пропил] карбаминовой кислоты

Общий способ 7: трет-бутиловый эфир {3-[3-формил-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2ил)фенокси]пропил}карбаминовой кислоты (3.38 г, 8.33 ммоль), абсолютный Β1ОΗ (65 мл) и NаВΗ₄ (0.451 г, 11.9 ммоль). Очистка: кристаллизация (1:2 Β1ОΗ/Η₂О). Вышеназванное соединение выделяли в виде твердого белого вещества: выход 1.18 г (46%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 8.65 (к, 1Η), 7.40 (1, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 6.9 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Η), 6.906.84 (т, 1Η), 6.8 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Η), 4.91 (к, 2Η), 4.04 (1, 1=6.3 Ηζ, 2Η), 3.16-3.01 (т, 2Η), 1.83 (1, 1=6.5 Ηζ, 2Η), 1.37 (к, 9Η).

7-(3-Амино-пропокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А11)

Общий способ 11: трет-бутиловый эфир [3-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7илокси)пропил]карбаминовой кислоты (0.50 г, 1.6 ммоль) и 4 N ИС1 в диоксане (10 мл) перемешивали при комнатной температуре всю ночь. Очистка: растирание в порошок с Е1ОАс. А11 выделяли в виде твердого белого вещества: выход 0.39 г (98%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 7.83 (Ьк, 1Η), 7.44 (1, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 6.98 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Η), 6.83 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Η), 4.94 (к, 2Η), 4.15 (1, 1=5.7 Ηζ, 2Η), 3.03 (1, 1=6.8 Ηζ, 2Η), 2.14-1.92 (т, 2Η).

Ν-[3-(1-Γ идрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси)пропил]ацетамид (А12)

ΝΜΜ (0.114 мл, 1.04 ммоль) добавляли к раствору А11 (0.120 г, 0.493 ммоль) в ДМФ (1.0 мл) при 0°С (темп. бани). Через 1 ч добавляли Ас₂О (56 мкл, 0.59 ммоль) и смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 6 ч. Добавляли Н2О (5 мл) и смесь экстрагировали Е1ОАс (50 мл). Водную фазу подкисляли до рН 5 с применением 2 Ν ΗΟ и экстрагировали Е1ОАс (50 мл). Объединенные органические фракции промывали соляным раствором (10 мл), высушивали (№₂8О₄) и концентрировали в вакууме. Остаток осаждали из смеси 1:1 Β1ОΗ/Н₂О с получением вышеназванного соединения в виде твердого белого вещества: выход 45 мг (37%).

- 70 020530 'ΐ I ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 8.75 (Ьз, 1Н), 7.84 (Ьз, 1Н), 7.39 (ί, 1=7.8 Ηζ, 1Н), 6.93 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Н), 6.79 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Н), 4.91 (з, 2Н), 4.03 (ί, 1=5.9 Ηζ, 2Н), 3.20 (ф 1=6.2 Ηζ, 3Н), 1.90-1.80 (т, 2Н), 1.79 (з, 3Н); Μ8 (Е81): μ/ζ=248 (Μ-1, отрицательн.); ВЭЖХ чистота: 99.12% (МахРЫ 200-400 нм), 97.88% (220 нм).

7-(3-Метиламино-пропокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А13)

Трет-бутиловый эфир [3-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси)пропил] метилкарбаминовой кислоты ''’ывос

NаΗ (60% дисперсия в минеральном масле, 0.082 г, 2.05 ммоль) добавляли порциями к раствору третбутилового эфира [3-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси)пропил]карбаминовой кислоты (0.212 г, 0.690 ммоль) и Ме1 (1.03 мл, 2.07 ммоль) в безводном ДМФ (5 мл) при 0°С. Затем реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь охлаждали до 0°С, подкисляли до рН 6 с применением насыщ. МН₄С1 и затем экстрагировали ЕЮАс. Органические фракции высушивали (№₂80₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали способом испарительной хроматографии (40% ЕЮАс/гексан) с получением вышеназванного соединения в виде бесцветного масла: выход 0.17 г (77%).

¹1 ЯМР (400 ΜΗζ, С1)С1_;) (смесь ротомеров) δ (ррт): 7.40 (ί, 1=7.6 Ηζ, 1Н), 6.93 (й, 1=7.0 Ηζ, 1Н), 7.40 (ί, 1=7.6 Ηζ, 1Η), 6.93 (й, 1=7.0 Ηζ, 1Η), 6.72 (й, 1=8.2 Ηζ, 0.5Η), 6.64 (й, 1=7.4 Ηζ, 0.5Η), 5.10 (з, 1Η), 5.04 (з, 1Н), 4.07 (Ьз, 1Н), 3.75 (ί, 1=6.5 Ηζ, 1Н), 3.46 (Ьз, 1Н), 3.06 (Ьз, 1Н), 2.88 (з, 1.5Н), 2.66 (Ьз, 1.5Н), 2.00 (Ьз, 1Н), 1.44 (й, 1=17.6 Ηζ, 12Н); Μ8 (Е81): т^=322 (Μ+1, положительн.).

7-(3-Метиламино-пропокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А13)

ΝΗΜβ

Общий способ 11: трет-бутиловый эфир [3-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7илокси)пропил]метилкарбаминовой кислоты (0.160 г, 0.498 ммоль) и 4 N НС1 в диоксане (10 мл) А13 выделяли в виде твердого белого лиофилизата: выход 90 мг (70%).

ΊI ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 8.74 (Ьз, 2Н), 7.44 (ί, 1=7.8 Ηζ, 1Н), 6.99 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Н), 6.84 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Н), 4.95 (з, 2Н), 4.15 (ί, 1=5.5 Ηζ, 2Н), 3.11 (ί, 1=6.4 Ηζ, 2Η), 2.57 (з, 3Η), 2.10 (ί, 1=6.1 Ηζ, 2Н); Μ8 (Е81): μ/ζ=222 (Μ+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 99.52% ^χΡ1οί 200-400 нм), 98.59% (220 нм).

-Этил-3-[3 -(1 -гидрокси- 1,3-дигидро-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-7-илокси)пропил]мочевина (А14)

Этилизоцианат (0.081 мл, 1.04 ммоль) добавляли к суспензии ΜΜΜ (0.170 мл, 1.56 ммоль) и А11 (0.126 г, 0.518 ммоль) в ТГФ (5 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали всю ночь и затем добавляли ДМФ (3 мл). Затем мутный раствор перемешивали в течение дополнительных 24 ч. Смесь подкисляли до ~ рН 4 с применением 2 N НС1 и затем экстрагировали ЕЮАс. Органическую фазу высушивали (№₂80₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали способом препаративной ВЭЖХ с получением А14 в виде светло-желтого твердого вещества: выход 45 мг (31%).

ΊI ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 8.80 (з, 1Н), 7.41 (ί, 1=7.8 Ηζ, 1Н), 6.94 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Н), 6.81 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Н), 6.01-5.80 (т, 1Н), 5.80-5.58 (т, 1Н), 4.04 (ί, 1=6.1 Ηζ, 2Н), 3.16 (φ 1=6.2 Ηζ, 2Η), 3.072.91 (т, 2Η), 1.91-1.72 (т, 2Н), 0.97 (ί, 1=7.0 Ηζ, 3Н); Μ8 (Е81): т/ζ 279 (Μ+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 95.99% ^χΡ1οί 200-400 нм), 94.68% (220 нм).

- 71 020530

4-(1-Г идрокси- 1,3-дигидро-бензо [с][1,2] оксаборол-7 -илокси)бутиронитрил (А16)

4-(2-Бром-3-формил-фенокси)бутиронитрил

Общий способ 4: 2-бром-3-гидрокси-бензальдегид (5.0 г, 25 ммоль), 4-бром-бутиронитрил (2.95 мл, 29.8 ммоль), С8₂СО₃ (12.15 г, 37.30 ммоль) и ДМФ (50 мл): выход 3.94 г (59%).

'Н ЯМР (400 МНг, СОСЪ) δ (ррт): 10.43 (5, 1Н), 7.56 (бб, 1=7.8, 1.6 Нг, 1Н), 7.39 (ΐ, 1=8.0 Нг, 1Н), 7.16-7.10 (т, 1Н), 4.20 (ΐ, 1=5.5 Нг, 2Н), 2.73 (ΐ, 1=7.0 Нг, 2Н), 2.30-2.21 (т, 2Н).

4-[3-Формил-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенокси]бутиронитрил

Общий способ 5: 4-(2-бром-3-формил-фенокси)бутиронитрил (3.94 г, 14.69 ммоль), В₂рш₂ (4.47 г, 17.63 ммоль), КОАс (5.76 г, 58.76 ммоль), РбС1₂(брр£)-СН₂С1₂ (0.537 г, 0.73 ммоль) и диоксан (100 мл) Очистка: способом испарительной хроматографии (20% ЕЮАс в гексане). Вышеназванное соединение выделяли в виде белой пены: выход 1.4 г (30%).

'Н ЯМР (400 МНг, СОСЪ) δ (ррт): 9.96 (5, 1Н), 7.54-7.47 (т, 1Н), 7.46-7.41 (т, 1Н), 7.09 (б, 1=7.0 Нг, 1Н), 4.13 (ΐ, 1=5.7 Нг, 2Н), 2.63 (ΐ, 1=7.2 Нг, 2Н), 2.20-2.11 (т, 2Н), 1.49-1.40 (т, 12Н).

4-(1-Г идрокси- 1,3-дигидро-бензо [с][1,2] оксаборол-7 -илокси)бутиронитрил (А16)

Общий способ 7: 4-[3-формил-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенокси]бутиронитрил (1.40 г, 4.44 ммоль), NаВН₄ (219 мг, 5.77 ммоль) и МеОН (10 мл). А16 выделяли в виде светло-оранжевого твердого вещества: выход 600 мг (62%).

'Н ЯМР (400 МНг, ДМСО-б₆) δ (ррт): 8.69 (5, 1Н), 7.39 (бб, 1=7.4 Нг, 1Н), 6.95 (б, 1=7.4 Нг, 1Н), 6.82 (б, 1=8.2 Нг, 1Н), 4.90 (5, 2Н), 4.08 (ΐ, 1=5.9 Нг, 2Н), 2.68 (ΐ, 1=7.2 Нг, 2Н), 2.13-1.91 (т, 2Н); М8 (Е81): т/г=216 (М-1, отрицательн.); ВЭЖХ чистота: 99.37% (Ма.хР1о1 200-400 нм), 98.27% (220 нм).

7-(4-Амино-бутокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А17)

Трет-бутиловый эфир [4-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси)бутил] карбаминовой кислоты

Общий способ 10: А16 (600 мг, 2.76 ммоль), №С1₂-6Н₂О (65 мг, 0.276 ммоль), NаВН₄ (540 мг, 19.32 ммоль) и Вос₂О (1.20 г, 5.52 ммоль) в МеОН (50 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (30% ЕЮАс в гексане). Вышеназванное соединение выделяли в виде белой пены: выход 200 мг (22%).

- 72 020530

Ή ЯМР (400 МН/, СЭС1₃) δ (ррт): 7.51-7.34 (т, 1Н), 7.02-6.84 (т, 1Н), 6.73 (й, 1=8.2 Н/, 1Н), 5.05 (к, 2Н), 4.13-3.99 (т, 2Н), 3.30-3.12 (т, 2Н), 1.97-1.77 (т, 2Н), 1.77-1.61 (т, 2Н), 1.45 (к, 9Н); М8 (ЕЯ): т//=320 (М-1, отрицательн.).

7-(4-Амино-бутокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А17)

Общий способ 11: трет-бутиловый эфир [4-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7илокси)бутил]карбаминовой кислоты (200 мг, 0.62 ммоль) и 1 М НС1 в Е!₂О (4 мл). А17 выделяли в виде твердого белого вещества: выход 72 мг (45%).

Т. пл. 140-141°С; 'Н ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆) δ (ррт): 8.74 (к, 1Н), 7.80 (Ьк, 3Н), 7.41 (!, 1=7.8 Н/, 1Н), 6.95 (й, 1=7.8 Н/, 1Н), 6.82 (й, 1=8.2 Н/, 1Н), 4.93 (к, 2Н), 4.11-3.99 (т, 2Н), 2.97-2.78 (т, 2Н), 1.951.52 (т, 4Н); М8 (ЕЯ): т// 222 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота: 97.72% (МахР1о! 200-400 нм), 96.62% (220 нм).

7-(2-Амино-этокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А18)

Трет-бутиловый эфир [2-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси)этил] карбаминовой кислоты

Общий способ 10: (1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси)ацетонитрил (360 мг, 1.90 ммоль), №С1₂-6Н₂О (90 мг, 0.38 ммоль), NаВН₄ (505 мг, 13.3 ммоль) и Вос₂О (829 мг, 3.8 ммоль) в МеОН (20 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (30% ЕЮАс в гексане). Вышеназванное соединение выделяли в виде белой пены: выход 100 мг (18%).

Ή ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆) δ (ррт): 8.32 (к, 1Н), 7.39 (!, 1=7.8 Н/, 1Н), 7.14 (Ьк, 1Н), 6.94 (й, 1=7.4 Н/, 1Н), 6.79 (й, 1=8.2 Н/, 1Н), 4.90 (к, 2Н), 3.99-3.82 (т, 2Н).

7-(2-Амино-этокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А18)

Общий способ 11: трет-бутиловый эфир [2-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7илокси)этил]карбаминовой кислоты (100 мг, 0.34 ммоль), 1 М НС1 в Е!₂О (2 мл) и СН₂С1₂ (2 мл). А18 выделяли в виде твердого белого вещества: выход 58 мг (74%).

Т.пл. 217-218°С; Ή ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆) δ (ррт): 8.65 (Ьк, 1Н), 8.08-7.97 (т, 3Н), 7.44 (!, 1=7.8 Н/, 1Н), 7.01 (й, 1=7.4 Н/, 1Н), 6.86 (й, 1=8.2 Н/, 1Н), 4.92 (к, 2Н), 4.20 (!, 1=3.90 Н/, 2Н), 3.26-3.20 (т, 2Н); М8 (Е8Ю т//=194 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 97.69% (МахР1о! 200-400 нм), 96.84% (220 нм).

7-(3 -Г идроксипропокси)бензо [с] [1,2]оксаборол-1(3Н)-ол (А20) нсЮ^о р_Н

СО

К раствору 2-бром-3-гидроксибензальдегида (5.18 г, 25.0 ммоль) и 2-(3-бромпропокси)тетрагидро2Н-пирана (5.1 мл, 30 ммоль) в ДМФ (60 мл) добавляли гидрид натрия (1.20 г, 30.0 ммоль) при 0°С в атмосфере азота и смесь перемешивали при комнатной температуре всю ночь. Реакцию гасили водой и смесь экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промывали дважды водой и соляным раствором, и высушивали на безводном сульфате натрия. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток очищали способом силикагелевой колоночной хроматографии (9:1-3:1 гексан/этилацетат) с получением 2-бром-3-[3-(тетрагидропиран-2-илокси)пропокси]бензальдегида (8.75 г, количественный).

К раствору полученного выше соединения (8.75 г, 25.0 ммоль) в метаноле (60 мл) добавляли борогидрид натрия (475 мг, 12.5 ммоль) при 0°С и смесь перемешивали в течение 15 мин. Реакцию гасили ацетоном и водой и смесь экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу промывали соляным раствором, и высушивали на безводном сульфате натрия Растворитель удаляли при пониженном давлении. К раствору остатка в дихлорметане (100 мл) добавляли 3,4-дигидро-2Н-пиран (3.40 мл, 37. 5 ммоль) и камфорсульфоновую кислоту (116 мг, 2 мол.%) и смесь перемешивали при комнатной температуре всю ночь. Добавляли карбонат натрия

- 73 020530 (1 г) и смесь выливали в хлороформ и воду. Органическую фазу промывали соляным раствором и высушивали на безводном сульфате натрия. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток очищали способом силикагелевой колоночной хроматографии (9:1 гексан/этил ацетат) с получением 2-(2-(2-бром-3((тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)метил)фенокси)этокси)тетрагидро-2Н-пирана (9.98 г, 93%).

К раствору полученного выше соединения (9.98 г, 23.3 ммоль) в тетрагидрофуране (50 мл) добавляли н-бутиллитий (1.6 моль/л в гексане, 18 мл) и триизопропилборат (8.0 мл, 35 ммоль) при -78°С в атмосфере азота, и смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали всю ночь. Затем добавляли соляную кислоту (6 моль/л, 10 мл) и смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Смесь выливали в этилацетат и воду. Органическую фазу промывали соляным раствором и высушивали на безводном сульфате натрия. Растворитель удаляли при пониженном давлении и остаток очищали способом силикагелевой колоночной хроматографии (7:3-6:4 гексан/этилацетат) с получением 7-(3-гидроксипропокси)бензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ола (2.06 г, 43%).

' ΙΙ-ЯМР (300 МН/, ДМСО-Е>₆ + 1+О) δ (ррт): 1.84 (дшй, 1=6.2 Нг, 2Н), 3.55 (ΐ, 1=6.2 Н, 2Н), 4.07 (ΐ, 1=6.2 Н, 2Н), 4.89 (δ, 2Н), 6.79 (й, 1=8.2 Нг, 1Н), 6.91 (й, 1=7.3, 1Н), 7.38 (ΐ, 1=7.8 Нг, 1Н).

7-(4-Бензилокси-бутокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1 -ол (А21)

4-Бензилокси-бутиловый эфир метансульфоновой кислоты

ВпОл0ЮМ5

МδС1 (2.48 мл, 32.1 ммоль) медленно добавляли к раствору 4-бензилокси-бутан-1-ола (5.26 г, 29.2 ммоль) и ЕΐзN (6.1 мл, 43 ммоль) в СН₂С1₂ (100 мл) при 0°С (темп. бани). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и затем гасили Н₂О (100 мл). Водную фазу экстрагировали СН₂С1₂, высушивали (Мд8О₄) и концентрировали в вакууме с получением вышеназванного соединения в виде бесцветной жидкости: выход 7.5 г (99%).

'Н ЯМР (400 МН/, СОСР) δ (ррт): 7.39-7.25 (т, 5Н), 4.50 (δ, 2Н), 4.26 (ΐ, 1=6.5 Нг, 2Н), 3.52 (ΐ, 1=6.1 Нг, 2Н), 2.98 (δ, 3Н), 1.92-1.84 (т, 2Н), 1.78-1.69 (т, 2Н).

3-(4-Бензилокси-бутокси)-2-бром-бензальдегид

Общий способ 4: 2-бром-3-гидрокси-бензальдегид (4.86 г, 24.2 ммоль), 4-бензилокси-бутиловый эфир метансульфоновой кислоты (7.5 г, 29 ммоль), С8₂СО₃ (11.82 г, 36.3 ммоль) и ДМФ (100 мл). Вышеназванное соединение выделяли в виде вязкой жидкости: выход 6.4 г (73%).

'II ЯМР (400 МН/, СОСР) δ (ррт): 10.44 (δ, 1Н), 7.51 (й, 1=7.8 Нг, 1Н), 7.38-7.24 (т, 6Н), 7.09 (й, 1=8.2 Н, 1Н), 4.53 (δ, 2Н), 4.09 (ΐ, 1=6.1 Н, 2Н), 3.59 (ΐ, 1=6.2 Н, 2Н), 2.03-1.95 (т, 2Н), 1.93-1.82 (т,2Н).

3-(4-Бензилокси-бутокси)-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид

Общий способ 5: 3-(4-бензилокси-бутокси)-2-бром-бензальдегид (6.4 г, 17 ммоль), В₂рш₂ (8.94 г, 35.2 ммоль), КОАс (6.91 г, 70.4 ммоль), РйС1₂(йрр£)-СН₂С1₂ (0.64 г, 0.88 ммоль) и диоксан (200 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (20% ЕЮАс в гексане). Вышеназванное соединение выделяли в виде белой пены: выход 4.0 г (55%).

'Н ЯМР (400 МН/, СОСР) δ (ррт): 9.92 (δ, 1Н), 7.44 (ΐ, 1=7.8 Н, 1Н), 7.39-7.24 (т, 6Н), 7.04 (й, 1=8.2 Н, 1Н), 4.50 (δ, 2Н), 3.99 (ΐ, 1=6.2 Н, 2Н), 3.52 (ΐ, 1=6.1 Н, 2Н), 1.96-1.75 (т, 4Н), 1.44 (δ, 12Н).

- 74 020530

7-(4-Бензилокси-бутокси)-3 Н-бензо [с][1,2] оксаборол- 1-ол (А21) ОВп

Общий способ 7: 3-(4-бензилокси-бутокси)-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил) бензальдегид (2.0 г, 4.8 ммоль), №1ВН.-| (239 мг, 6.3 ммоль) и МеОН (10 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (30% ΕΐΟΑс в гексане): выход 650 мг (43%).

Ή ЯМР (400 МНг, ДМСОД₆) δ (ррт): 8.66 (8, 1Н), 7.43-7.22 (т, 6Н), 6.91 (ά, 1=7.4 Нг, 1Н), 6.77 (ά, 1=8.2 Нг, 1Н), 4.89 (8, 2Н), 4.44 (8, 2Н), 4.03 (ΐ, 1=6.3 Нг, 2Н), 3.48 (ΐ, 1=6.1 Нг, 2Н), 1.85-1.61 (т, 4Н); М8 (Ε8Ι): т/г=313 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота: 93.49% (Ма\Р1о1 200-400 нм), 92.07% (220 нм).

7-(4-Г идрокси-бутокси) -3Н-бензо [с][1,2] оксаборол- 1-ол (А22)

Общий способ 2: Н₂ (50 р81), А21 (600 мг, 1.92 ммоль), Ρά(ΟН)₂ (600 мг) и АсОН (20 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (50% ΕΐΟΑс в гексане). А22 выделяли в виде твердого белого вещества: выход 90 мг (21%).

Т. пл. 141-142°С; Ή ЯМР (400 МНг, ДМСОД₆) δ (ррт): 8.68 (Ь8, 1Н), 7.52-7.29 (т, 1Н), 6.92 (ά, 1=7.4 Нг, 1Н), 6.80 (ά, 1=7.4 Нг, 1Н), 4.91 (8, 2Н), 4.55-4.35 (т, 1Н), 4.12-3.95 (т, 2Н), 3.54-3.54 (т, 2Н), 1.91-1.67 (т, 2Н), 1.63-1.50 (т, 2Н); М8 (Ε8Ι): т/г=221 (М-1, отрицательн.); ВЭЖХ чистота: 95.71% (Ма\Р1о1 200-400 нм), 93.02% (220 нм).

(3 8)-7-(3 -Амино-4-гидрокси-бутокси)-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1 -ол, гидрохлорид (А23)

Гидробромид метилового эфира (28)-2-амино-4-бром-масляной кислоты М еО₂С-.^/\^· Вг

ΝΗ_Ζ НВг

8ОС1₂ (7.0 мл) медленно добавляли к МеОН (100 мл) при -20°С (темп. бани) и перемешивали в течение 30 мин. Затем добавляли гидробромид 2-амино-4-бром-масляной кислоты (5.0 г, 19 ммоль) и реакционную смесь перемешивали всю ночь при комнатной температуре. Концентрирование в вакууме позволяло получить вышеназванное соединение в виде вязкой жидкости, которая становилась твердой при стоянии: выход 5.2 г (99%).

Ή ЯМР (400 МНг, ДМСОД₆) δ (ррт): 8.57 (Ь8, 3Н), 4.11 (ΐ, 1=6.2 Нг, 1Н), 3.75 (8, 3Н), 3.71-3.53 (т, 2Н), 2.40-2.22 (т, 2Н).

Метиловый эфир (28)-4-бром-2-трет-бутоксикарбониламино-масляной кислоты

Ме О₂С Вг

ЙНВос

Εΐ₃Ν (6.5 мл, 47 ммоль), а затем Вос₂О (4.09 г, 18.8 ммоль) добавляли к раствору гидробромида метилового эфира 2-амино-4-бром-масляной кислоты (5.2 г, 19 ммоль) в СН₂С1₂ (100 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали всю ночь при комнатной температуре и затем гасили Н₂О (100 мл). Водную фазу экстрагировали СН₂С1₂, высушивали (Мд8О₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали способом испарительной хроматографии (20% ΕΐΟΑс в гексане) с получением вышеназванного соединения в виде бесцветной жидкости: выход 3.1 г (56%).

- 75 020530 'ΐ I ЯМР (400 МН/, СОСВ) δ (ррт): 5.19-5.00 (т, 1Н), 4.51-4.37 (т, 1Н), 3.77 (к, 3Н), 3.44 (!, 1=7.0 Нг, 2Н), 2.47-2.32 (т, 1Н), 2.27-2.13 (т, 1Н), 1.45 (к, 9Н).

Метиловый эфир (28)-4-(2-бром-3-формил-фенокси)-2-трет-бутоксикарбониламино-масляной кислоты

Общий способ 4: 2-бром-3-гидрокси-бензальдегид (2.31 г, 11.5 ммоль), метиловый эфир 4-бром-2трет-бутоксикарбониламино-масляной кислоты (3.1 г, 10 ммоль), &^Ο₃ (5.11 г, 15.7 ммоль) и ДМФ (100 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (20% ЕЮАс в гексане). Вышеназванное соединение выделяли в виде вязкой жидкости: выход 3.01 г (69%).

'Н ЯМР (400 МНг, СОСВ) δ (ррт): 10.43 (к, 1Н), 7.54 (б, 1=8.2 Нг, 1Н), 7.37 (!, 1=7.8 Нг, 1Н), 7.10 (б, 1=8.2 Нг, 1Н), 5.74-5.60 (т, 1Н), 4.58 (!, 1=8.6 Нг, 1Н), 4.25-4.03 (т, 2Н), 3.77 (к, 3Н), 2.53-2.26 (т, 2Н), 1.44 (к, 9Н).

Метиловый эфир (28)-2-трет-бутоксикарбониламино-4-[3-формил-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2] диоксаборолан-2-ил)фенокси]масляной кислоты

Общий способ 5: метиловый эфир (28)-4-(2-бром-3-формил-фенокси)-2-трет-бутоксикарбониламиномасляной кислоты (3.01 г, 7.23 ммоль), В₂рш₂ (3.67 г, 14.5 ммоль), КЮАс (2.83 г, 28.9 ммоль), РбС1₂(бррГ)-СН₂С1₂ (0.37 г, 0.51 ммоль) в диоксане (50 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (10% ЕЮАс в гексане). Вышеназванное соединение выделяли в виде белой пены: выход 1.2 г (35%).

'II ЯМР (400 МНг, СПС'Ь) δ (ррт): 9.96 (к, 1Н), 7.51-7.39 (т, 2Н), 7.09 (б, 1=7.8 Нг, 1Н), 5.32 (б, 1=9.4 Нг, 1Н), 4.49-4.39 (т, 1Н), 4.17-3.99 (т, 2Н), 3.75 (к, 3Н), 2.45-2.31 (т, 1Н), 2.21-2.10 (т, 1Н), 1.45 (к, 12Н), 1.42 (к, 9Н).

Трет-бутиловый эфир (38)-[3-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси)-1гидрокси-метил-пропил]карбаминовой кислоты

Общий способ 7: метиловый эфир (2,8)-2-трет-бутоксикарбониламино-4-[3-формил-2-(4,4,5,5тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенокси]масляной кислоты (1.10 г, 2.3 ммоль), ЫаВН₄ (113 мг, 2 99 ммоль) и МеОН (25 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (10-50% ЕЮАс/гексан): выход 70 мг (9%).

'Н ЯМР (400 МНг, ДМСО-б₆) δ (ррт): 8.59 (Ьк, 1Н), 7.38 (!, 1=7.6 Нг, 1Н), 6.91 (б, 1=7.4 Нг, 1Н), 6.77 (б, 1=7.8 Нг, 1Н), 6.63 (б, 1=8.2 Нг, 1Н), 4.89 (к, 2Н), 4.70 (!, 1=4.9 Нг, 1Н), 4.10-3.96 (т, 2Н), 3.64-3.52 (т, 1Н), 3.41-3.35 (т, 1Н), 2.02-1.90 (т, 1Н), 1.82-1.67 (т, 1Н), 1.33 (к, 9Н); М8 (Е81): т/г=336 (М-1, отрицательн.).

(3 8)-7-(3 -Амино-4-гидрокси-бутокси)-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1 -ол, гидрохлорид (А23)

Общий способ 11: трет-бутиловый эфир (38)-[3-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7илокси)-1-гидрокси-метил-пропил]карбаминовой кислоты (70 мг, 0.21 ммоль) в 4 Ν НС1 диоксане (2 мл) А23 выделяли в виде твердого белого лиофилизата: выход 35 мг (61%).

'Н ЯМР (400 МНг, ДМСО-б₆) δ (ррт): 8.89 (к, 1Н), 7.90 (Ьк, 3Н), 7.42 (!, 1=7.8 Нг, 1Н), 6.96 (б, 1=7.4 Нг, 1Н), 6.82 (б, 1=8.2 Нг, 1Н), 5.34 (Ьк, 1Н), 4.92 (к, 2Н), 4.24-4.03 (т, 2Н), 3.70-3.60 (т, 1Н), 3.57-3.47 (т, 1Н), 2.06-1.94 (т, 2Н); М8 (Е81): т/г=238 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 94.91% (МахР1о! 200-400 нм), 94.63% (220 нм).

- 76 020530

7-(2-Бензилокси-этокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол (А24)

3-(3-Бензилокси-этокси)-2-бром-бензальдегид

ОВг

Общий способ 3: 2-бром-3-гидрокси-бензальдегид (7.0 г, 35 ммоль), 2-бензилоксиэтанол (5.0 мл, 35 ммоль), РРЬ₃ (9.2 г, 35 ммоль), безводный ТГФ (200 мл) и ΌΙΆΌ (6.9 мл, 35 ммоль). Очистка: способом испарительной хроматографии (гексан, затем 5% ЕЮАс/гексан): выход 7.6 г (65%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, СЭСГ) δ (ррт): 10.44 (5, 1Н), 7.53 (б, 1=7.9 Ηζ, 1Н), 7.44-7.26 (т, 6Н), 7.15 (б, 1=7.9 Ηζ, 1Н), 4.70 (5, 2Н), 4.26 (1, 1=4.7 Ηζ, 2Н), 3.93 (1, 1=4.7 Ηζ, 2Н).

-(3 -Бензилокси-этокси)-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид

Общий способ 5: 3-(3-бензилокси-этокси)-2-бромбензальдегид (7.2 г, 23 ммоль), КОАс (6.3 г, 64 ммоль), Β₂ρίη₂ (10.9 г, 43 ммоль), РбС1₂(брр£)-СН₂С1₂ (0.79 г, 1.1 ммоль) и безводный ДМФ (50 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (гексан, затем 30% ЕЮАс/гексан): выход 4.93 г (60%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, СЭСГ) δ (ррт): 9.91 (5, 1Н), 7.49-7.24 (т, 7Н), 7.09 (б, 1=8.20 Ηζ, 1Н), 4.57 (5, 2Н), 4.18 (ΐ, 1=5.0 Ηζ, 2Н), 3.84 (ΐ, 1=5.0 Ηζ, 2Η), 1.43 (5, 12Η).

7-(2-Бензилокси-этокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол (А24)

ΟΒη

Общий способ 7: 3-(3-бензилокси-этокси)-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил) бензальдегид (0.76 г, 2.0 ммоль), ΝαΒΗ·ι (38 мг, 1.0 ммоль) и МеОН (5 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (30% ЕЮАс в гексане): выход 0.55 г (96%).

Ή ЯМР {400 ΜΗζ, ДМСО-б₆ + Ό₂0 (0.01 мл)} δ (ррт): 8.80 (5, 1Н), 7.40-7.20 (т, 6Н), 6.97 (б, 1=7.4 Ηζ, 1Н), 6.80 (б, 1=7.4 Ηζ, 1Н), 4.85 (5, 2Н), 4.60 (5, 2Н), 4.25-4.18 (т, 2Н), 3.80-3.72 (т, 2Н); Μ8 (Ε8Ι): т//=283 (Μ-1, отрицательн.); ВЭЖХ чистота 96.23% (Μ;·ι\Ρ1οΙ) и 95.11% (220 нм).

7-(4-Метокси-бензилокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол (А25)

- 77 020530

2-Бром-3-(4-метокси-бензилокси)бензальдегид

Общий способ 4: 2-бром-3-гидрокси-бензальдегид (1.0 г, 7.2 ммоль), К₂С0₃ (1.09 г, 7.95 ммоль), 1хлорметил-4-метокси-бензол (1.03 мл, 7.95 ммоль) и ДМСО (14 мл) при 500°С (темп. бани) всю ночь. Очистка: способом испарительной хроматографии (25% ЕЮАс в гексане). Вышеназванное соединение выделяли в виде твердого белого вещества: выход 1.59 г (96%).

'Η ЯМР (400 МШ, СПС1₃) δ (ррт): 10.42 (5, 1Н), 7.49 (б, 1=1.6 Ηζ, 1Η), 7.39 (б, 1=9.0 Ηζ, 2Η), 7.16 (5, 1Η), 7.02-6.84 (т, 3Η), 5.11 (5, 2Η), 3.80 (5, 3Η); М8 (Е8Т): т^=323 (М+1, положительн.).

[2-Бром-3-(4-метокси-бензилокси)фенил]метанол

NаВΗ₄ (0.38 г, 10 ммоль) добавляли к раствору 2-бром-3-(4-метокси-бензилокси)бензальдегида (1.59 г, 4.95 ммоль) в Еΐ0Η (15 мл) при 0°С (темп. бани). Смесь перемешивали при 0°С (темп. бани) в течение 1.5 ч и затем концентрировали в вакууме. Добавляли Η₂0 (10 мл) и водную фазу экстрагировали ЕЮАс (2x50 мл). Органические фракции промывали соляным раствором (20 мл), высушивали (№₂80₄) и концентрировали в вакууме с получением вышеназванного соединения в виде твердого белого вещества: выход 1.50 г (94%).

'II ЯМР (400 МИл ОХЪ) δ (ррт): 7.40 (б, 1=8.6 Ηζ, 2Η), 7.26 (5, 1Η), 7.10 (б, 1=9.0 Ηζ, 1Η), 6.986.84 (т, 3Η), 5.10 (5, 2Η), 4.78 (б, 1=6.6 Ηζ, 2Η), 3.83 (Ь5, 3Η).

2-[2-Бром-3-(4-метокси-бензилокси)бензилокси]тетрагидропиран

ΌΗΡ (0.67 мл, 7.4 ммоль) и С8А (30 мг, 0.12 ммоль) добавляли к раствору [2-бром-3-(4-метоксибензилокси)фенил]метанола (2.0 г, 6.1 ммоль) в СИ₂С1₂ (15 мл). Образовавшуюся смесь перемешивали при комнатной температуре всю ночь. Добавляли молекулярные сита 4 А (10 г) и смесь перемешивали в течение 1 ч. Добавляли насыщ NаΗС0₃ и смесь экстрагировали СИС1 (2x50 мл). Органические фракции промывали Н₂О (2x25 мл), затем соляным раствором (50 мл), высушивали (№₂80₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали способом испарительной хроматографии (25% ЕЮАс в гексане) с получением вышеназванного соединения в виде желтого масла: выход 1.30 г (96%).

'II ЯМР (400 МШ, СПС'Ь) δ (ррт): 7.40 (б, 1=9.0 Ηζ, 2Η), 7.32-7.19 (т, 1Η), 7.15 (бб, 1 =7.8, 1.2 Ηζ, 1Η), 6.96-6.81 (т, 3Η), 5.08 (5, 2Η), 4.94-4.73 (т, 2Η), 4.62 (б, 1=13.3 Ηζ, 1Η), 4.12-3.86 (т, 1Η), 3.81 (5, 3Η), 3.65-3.42 (т, 1Η), 1.99-1.44 (т, 6Η).

7-(4-Метокси-бензилокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол (А25)

2.5 М н-ВиЫ в гексане (1.53 мл, 3.83 ммоль) добавляли по каплям к раствору 2-[2-бром-3-(4метокси-бензилокси)бензилокси]тетрагидропирана (1.3 г, 3.2 ммоль) в ТГФ (14 мл) в атмосфере N при 78°С (темп. бани). Смесь перемешивали при -78°С (темп. бани) в течение 2 ч, затем медленно добавляли триизопропилборат (0.90 мл, 3.8 ммоль) и перемешивали при -78°С (темп. бани) в течение 4 ч. Смесь оставляли нагреваться до 0°С (темп. бани) и затем подкисляли 3 М ΗΟ до рН 5. Смесь перемешивали в течение 3 ч и выделяли образовавшийся осадок посредством фильтрации и промывали 1:9 СИ₂С1₂/Е10 с получением 25 в виде желтого твердого вещества: выход 0.10 г (12%).

'Н ЯМР 400 МШ (ДМСО-б₆) δ (ррт): 8.81 (5, 1Η), 7.48-7.28 (т, 3Н), 6.96-6.91 (т, 3Н), 6.87 (б, 1=8.2 Ηζ, 1Η), 5.12 (5, 2Н), 4.93 (5, 2Н), 3.75 (5, 3Н); М8 (Β8Σ): т^=271 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 97.79% (220 нм).

3Н-Бензо [с][1,2] оксаборол- 1,7-диол (А26)

Смесь А25 (0.65 г, 2.40 ммоль), 10% Рб/С (1:1 по весу) и 2:1 Еΐ0Ас/Еΐ0Η (30 мл) встряхивали в атмосфере Н₂ (40 р51) всю ночь. Смесь фильтровали через слой целита и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали способом препаративной ВЭЖХ с обращением фаз и лиофилизировали с полу- 78 020530 чением вышеназванного соединения в виде твердого белого вещества: выход 20 мг (6%).

Ή ЯМР (400 ΜΚζ, ДМСО-б₆) δ (ррт): 9.39 (Ьк, 1Н), 8.69 (Ьк, 1Н), 7.25 (ΐ, 1=8.2 Нг, 1Н), 6.77 (б,

1=6.2 Нг, 1Н), 6.63 (б, 1=6.6 Нг, 1Н), 4.85 (Ьк, 2Н); Μ8 (Ε8Ι): т/г=149 (Μ-1, отрицательн.); ВЭЖХ чистота 94.82% (220 нм), (254 нм).

Ν-[3-(3 - Аминометил-1 -гидрокси-1,3 -дигидро-бензо [с][1,2] оксаборол-7-илокси)пропил] ацетамид, гидрохлорид (А35)

3-Трет-бутоксикарбониламино-пропиловый эфир метансульфоновой кислоты

ΒοεΗΝ^ΟΜε

У

ЫкС1 (6.5 мл, 84 ммоль) медленно добавляли к раствору Εΐ₃Ν (16.0 мл, 114 ммоль) и третбутилового эфира (3-гидрокси-пропил)карбаминовой кислоты (13.4 г, 76.5 ммоль) в СН₂С1₂ (200 мл) при 0°С (темп. бани). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и затем гасили Н₂О (100 мл). Водную фазу экстрагировали СН₂С1₂ и затем органические фракции высушивали (Μ§8Ο₄) и концентрировали в вакууме. Вышеназванное соединение выделяли в виде бесцветного масла: выход 18.9 г (98%).

Ή ЯМР (400 ΜΚζ, С1)С1_;) δ (ррт): 4.73 (Ьк, 1Н), 4.30 (ΐ, 1=5.9 Нг, 2Н), 3.31-3.24 (т, 2Н), 3.04 (к, 3Н), 1.94 (ΐ, Л 6.1 Нг, 2Н), 1.44 (к, 9Н).

Трет-бутиловый эфир [3-(2-бром-3-формил-фенокси)пропил]карбаминовой кислоты

1ЧНВос

Общий способ 4: 2-бром-3-гидрокси-бензальдегид (15.0 г, 74.6 ммоль), 3-третбутоксикарбониламино-пропиловый эфир метансульфоновой кислоты (18.9 г, 74.6 ммоль), ίγί'Ότ (36.5 г, 112 ммоль) и ДМФ (300 мл). Вышеназванное соединение выделяли в виде вязкой жидкости выход 22.0 г (82%).

Ή ЯМР (400 ΜΚζ, СОСЪ) δ (ррт): 10.43 (к, 1Н), 7.53 (бб, 1=7.8, 1.6 Нг, 1Н), 7.37 (ΐ, 1=7.8 Нг, 1Н), 7.12 (бб, 1=8.2, 1.6 Нг, 1Н), 5.16 (Ьк, 1Н), 4.15 (ΐ, 1=5.9 Нг, 2Н), 3.42 (ц, 1=6.1 Нг, 2Н), 2.13-2.05 (т, 2Н), 1.44 (к, 9Н).

Бензиловый эфир {3-[3-формил-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенокси]пропил} карбаминовой кислоты

Общий способ 5: трет-бутиловый эфир [3-(2-бром-3-формил-фенокси)пропил]карбаминовой кислоты (22.0 г, 61.4 ммоль), В₂рш₂ (31.2 г, 12.3 ммоль), КΟΑс (24.1 г, 246 ммоль), РбС1₂(брр£)-СН₂С1₂ (6.73 г, 9.21 ммоль) и диоксан (300 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (20% ΕΐΟΑс в гексане). Вышеназванное соединение выделяли в виде белой пены: выход 11.0 г (44%).

Ή ЯМР (400 ΜΙ Ιζ. СОС1_;) δ (ррт): 9.95 (к, 1Н), 7.48 (ΐ, 1=7.8 Нг, 1Н), 7.43-7.39 (т, 1Н), 7.09 (б, 1=8.2 Нг, 1Н), 4.76 (Ьк, 1Н), 4.05 (ΐ, 1=6.3 Нг, 2Н), 3.32 (ц, 1=6.0 Нг, 2Н), 2.03-1.95 (т, 2Н), 1.45 (к, 12Н), 1.43 (к, 9Н).

Трет-бутиловый эфир [3-(1-гидрокси-3-нитрометил-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси)

- 79 020530 пропил]карбаминовой кислоты

Общий способ 9: бензиловый эфир {3-[3-формил-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2ил)фенокси]пропил}карбаминовой кислоты (11.0 г, 27.1 ммоль), ΜеNО₂ (2.9 мл, 54 ммоль), СТАВ (494 мг, 1.35 ммоль), 25 мМ NаОΗ (100 мл) и ТГФ (5 мл). Смесь подкисляли с применением 1 М NаΗ8ОзΗС1 (100 мл): выход 6.0 г (60%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 9.05 (к, 1Η), 7.46 (1, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 7.07 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Η), 6.946.85 (т, 2Η), 5.71 (йй, 1=9.0, 2.7 Ηζ, 1Η), 5.31 (йй, 1=13.3, 2.7 Ηζ, 1Η), 4.55 (йй, 1=13.3, 9.4 Ηζ, 1Η), 4.05 (1, 1=6.3 Ηζ, 2Η), 3.09 (ц, 1=6.6 Ηζ, 2Η), 1.83 (цит, 1=6.6 Ηζ, 2Η), 1.37 (к, 9Η).

7-(3 -Амино-пропокси) -3 -нитрометил-3Н-бензо [с][1,2] оксаборол-1 -ол, гидрохлорид

Общий способ 11: трет-бутиловый эфир [3-(1-гидрокси-3-нитрометил-1,3-дигидро-бензо[с][1,2] оксаборол-7-илокси)пропил]карбаминовой кислоты (3.0 г, 8.2 ммоль) и 4 М ИС1 в диоксане (20 мл). Очистка: растирание в порошок с Е12О. Вышеназванное соединение выделяли в виде твердого белого вещества

2.32 г (93%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 9.24 (Ьк, 1Η), 7.91 (Ьк, 3Η), 7.47 (1, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 7.10 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Η), 6.90 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Η), 5.72 (йй, 1=9.2, 2.5 Ηζ, 1Η), 5.31 (йй, 1=13.5, 2.9 Ηζ, 1Η), 4.54 (йй, 1=13.5, 9.2 Ηζ, 1Η), 4.13 (1, 1=5.9 Ηζ, 2Η), 3.06-2.94 (т, 2Η), 2.02 (цшп, 1=5.9 Ηζ, 2Η).

Ν-[3-(1-Γ идрокси-3 -нитрометил- 1,3-дигидро-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-7-илокси)пропил]ацетамид

1МНАс

Ас₂О (1.16 мл, 12.3 ммоль) медленно добавляли к раствору Β1зN (2.33 мл, 16.5 ммоль) и гидрохлориду 7-(3-амино-пропокси)-3-нитрометил-3Η-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ола (1.69 г, 76.5 ммоль) в СШСЕ (50 мл) при 0°С (темп. бани). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем гасили Н₂О (50 мл). Смесь экстрагировали СИ₂С1₂ и органическую фракцию высушивали ^д8О₄) и концентрировали в вакууме с получением вышеназванного соединения в виде вязкой жидкости: выход 1.29 г (75%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 9.13 (к, 1Н), 7.89-7.78 (т, 1Η), 7.45 (1, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 7.06 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Η), 6.88 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Η), 5.70 (йй, 1=9.6, 2.5 Ηζ, 1Η), 5.29 (йй, 1=13.3, 2.7 Ηζ, 1Η), 4.54 (йй, 1=13.7, 9.4 Ηζ, 1Η), 4.04 (1, 1=6.6 Ηζ, 2Η), 3.23-3.15 (т, 2Η), 2.20 (к, 3Η), 1.82 (1, 1=6.5 Ηζ, 2Η); Μ8 (Е81): т//=307 (Μ-1, отрицательн.).

Трет-бутиловый эфир 7-(3-ацетиламино-пропокси)-1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол3-илметил]карбаминовой кислоты

Общий способ 10: Ю[3-(1-гидрокси-3-нитрометил-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси) пропил]ацетамид (1.29 г, 4.18 ммоль), №С1₂-6Н₂О (995 мг, 4.18 ммоль), ШВИ·, (953 мг, 25.2 ммоль), Вос₂О (1.82 г, 8.36 ммоль) и МеОН (100 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (5% МеОН в СИ₂С1₂). Вышеназванное соединение выделяли в виде белой пены: выход 600 мг (38%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 8.81 (к, 1Н), 7.86 (1, 1=5.5 Ηζ, 1Η), 7.40 (1, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 7.016.90 (т,2И), 6.84 (й,1=8.2 Ηζ, 1Η), 5.11-5.04 (т, 1Η), 4.05 (1, 1=6.1 Ηζ, 2Η), 3.22 (ц, 1=6.4 Ηζ, 2Η), 3.10-2.96 (т, 1Η), 1.88-1.81 (т, 2Η), 1.80 (к, 3Η), 1.37 (к, 9Η); Μ8 (Е81): т^=377 (Μ-1, отрицательн.).

Ν-[3-(3 - Аминометил-1 -гидрокси-1,3 -дигидро-бензо [с][1,2] оксаборол-7-илокси)пропил] ацетамид,

- 80 020530 гидрохлорид (А35)

Общий способ 11: трет-бутиловый эфир [7-(3-ацетиламино-пропокси)-1-гидрокси-1,3-дигидробензо[с][1,2]оксаборол-3-илметил]карбаминовой кислоты (600 мг, 1.58 ммоль), 1 М ΗΟ в Е1₂О (3 мл) и ΟΗ₂0₂ (5 мл). Очистка: растирание в порошок с Е1₂О с последующим применением препаративной ВЭЖХ. А35 выделяли в виде твердого белого вещества: выход 35 мг (7%).

^!Н ЯМР (400 \^;1Ηζ, ДМСО-й₆ + 1 капля конц. Ηϋ1) δ (ррт): 8.32 (Ьз, 3Н), 7.42 (ΐ, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 7.01 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Η), 6.85 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Η), 5.28 (йй, 1=9.0, 2.3 Ηζ, 1Η), 4.01 (ΐ, 1=6.3 Ηζ, 2Η), 3.45-3.32 (т, 1Η), 3.18 (ΐ, 1=5.8 Ηζ, 2Η), 2.78-2.63 (т, 1Η), 1.84-1.76 (т, 5Η); М8 (Ε8Ι): т^=279 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота: 99.03% (МахР1о1 200-400 нм), 97.82% (220 нм).

3-Аминометил-7-(3-амино-пропокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, трифторацетат (А36)

Трет-бутиловый эфир [3-(3 -аминометил-1 -гидрокси-1,3 -дигидро-бензо [с] [1,2]оксаборол-7-илокси) пропил]карбаминовой кислоты

Общий способ 12: трет-бутиловый эфир [3-(1-гидрокси-3-нитрометил-1,3-дигидро-бензо[с][1,2] оксаборол-7-илокси)пропил]карбаминовой кислоты (1.0 г, 2.7 ммоль), Νί Ренея (2.0 г, 2 экв. по весу), 2 М ΝΗ в ΕΏΗ (5 мл) и абсолютный ΕΏΗ (20 мл): выход 800 мг (88%).

М8 (Ε8Ι): т^=337 (М+1, положительн.).

3-Аминометил-7-(3-амино-пропокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, соль ТФК (А36)

Общий способ 11: трет-бутиловый эфир [3-(3-аминометил-1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2] оксаборол-7-илокси)пропил]карбаминовой кислоты (700 мг, 2.08 ммоль) и 4Ν ΗΟ в 1,4-диоксане (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Очистка: способом препаративной ВЭЖХ (ТФК): выход 159 мг (14%).

Т.пл. 136-138°С, ^!Н ЯМР (400 МШ, ДМСО-й6) δ (ррт): 9.11 (Ьз, 1Η), 8.13 (Ьз, 3Н), 7.90 (Ьз, 3Н), 7.50 (ΐ, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 7.09 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Η), 6.92 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Η), 5.28 (й, 1=7.0 Ηζ, 1Η), 4.26-4.04 (т, 2Η), 3.04 (й, 1=5.1 Ηζ, 2Η), 2.82 (Ьз, 1Η), 2.17-1.94 (т, 2Η); ¹⁹Р ЯМР (376 МШ, ДМСО-й6) δ (ррт): -74.08 (з); М8 (Ε8Ι): т^=237 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 98.44% (МахР1о1 200-400 нм), 94.39% (220 нм).

3-Аминометил-7-(3-метокси-пропокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А38)

- 81 020530

2-Бром-3 -(3 -метокси-пропокси)бензальдегид

ОМе

Общий способ 4: 2-бром-3-гидрокси-бензальдегид (10.0 г, 49.7 ммоль), С5₂СО₃ (32.41 г, 99.42 ммоль), 1-бром-3-метокси пропан (7.61 г, 49.7 ммоль) и безводный ДМФ (100 мл). Условия реакции 60°С (темп. бани) в течение 20 ч. Вышеназванное соединение выделяли в виде бесцветной жидкости: выход 10.5 г (77%).

'Н ЯМР (400 МНг, СОСЪ) δ (ррт): 10.54 (5, 1Н), 7.51 (б, 1=6.2 Нг, 1Н), 7.35 (ΐ, 1=7.8 Нг, 1Н), 7.14 (б, 1=8.2 Нг, 1Н), 4.17 (ΐ, 1=6.1 Нг, 2Н), 3.64 (ΐ, 1=6.1 Нг, 2Н), 3.37 (5, 3Н), 2.13 (дб, 1=6.1, 5.9 Нг, 2Н).

3-(3-Метокси-пропокси)-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид

Общий способ 5: 2-бром-3-(3-метокси-пропокси)бензальдегид (13.44 г, 49.22 ммоль), В₂рш₂ (18.74 г, 73.83 ммоль), КОАс (14.49 г, 147.66 ммоль), РбС1₂(брр£)-СН₂С1₂ (2.88 г, 8 мол.%) и безводный 1,4диоксан (130 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (гексан-20% ЕЮАс). Вышеназванное соединение выделяли в виде твердого белого вещества: выход 7.04 г (50%).

'Н ЯМР (400 МНг, СОСЪ) δ (ррт): 9.94 (5, 1Н), 7.59-7.45 (т, 1Н), 7.45-7.32 (т, 1Н), 7.09 (б, 1=8.2 Нг, 1Н), 4.08 (ΐ, 1=6.2 Нг, 2Н), 3.56 (ΐ, 1=6.2 Нг, 2Н), 3.34 (5, 3Н), 2.06 (дб, 1=6.2 Нг, 2Н), 1.45 (5, 12Н).

7-(3 -Метокси-пропокси)-3 -нитрометил-3Н-бензо [с][1,2] оксаборол- 1-ол

Общий способ 8: 3-(3-метокси-пропокси)-2-(4,4,5,5-тетраметил [1,3,2]диоксаборолан-2-ил) бензальдегид (7.04 г, 22.0 ммоль), МеNΟ₂ (4.03 г, 66.0 ммоль), №ЮН (880 мг, 22.1 ммоль) и Н₂О (30 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (гексан-20% ЕЮАс/гексан): выход 4.8 г (78%).

'Н ЯМР (400 МНг, ДМСО-б₆) δ (ррт): 9.03 (5, 1Н), 7.44 (ΐ, 1=7.8 Нг, 1Н), 7.05 (б, 1=7.4 Нг, 1Н), 6.87 (б, 1=8.2 Нг, 1Н), 5.69 (бб, 1=9.2, 2.5 Нг, 1Н), 5.28 (бб, 1=13.3, 2.7 Нг, 1Н), 4.54 (бб, 1=13.5, 9.2 Нг, 1Н), 4.06 (ΐ, 1=6.2 Нг, 2Н), 3.47 (ΐ, 1=6.2 Нг, 2Н), 3.22 (5, 3Н), 2.04-1.86 (т, 2Н); М8 (Е81): т/г=280 (М-1, отрицательн.).

Трет-бутиловый эфир [ 1 -гидрокси-7 -(3 -метокси-пропокси)-1,3 -дигидро-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-3 илметил]карбаминовой кислоты

Общий способ 10: 7-(3-метокси-пропокси)-3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол (1.30 г, 4.62 ммоль), Вос₂О (2.01 г, 9.25 ммоль), №С1₂-6Н₂О (1.32 г, 5.55 ммоль), NаВН₄ (1.04 г, 27.5 ммоль) и безводный МеОН (10 мл). Неочищенный остаток применяли непосредственно в следующей реакции без дополнительной очистки.

3-Аминометил-7-(3-метокси-пропокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А38)

Общий способ 11: трет-бутиловый эфир [1-гидрокси-7-(3-метокси-прокси)-1,3-дигидробензо[с][1,2]оксаборол-3-илметил]карбаминовой кислоты (2.0 г, 5.5 ммоль) и 4 N НС1 в 1,4-диоксан (20

- 82 020530 мл). Очистка: способом препаративной ВЭЖХ: выход 540 мг (37% суммарно в 2 стадиях).

^!Н ЯМР (400 МН/, ДМСО-а₆) δ (ррт): 8.85 (к, 1Н), 8.29 (Ьк, 3Н), 7.44 (!, 1=7.8 Н/, 1Н), 7.03 (ά, 1=7.8

Н/, 1Н), 6.87 (ά, 1=7.8 Н/, 1Н), 5.30 (άά, 1=8.6, 2.3 Н/, 1Н), 4.06 (!, 1=6.2 Н/, 2Н), 3.48 (!, 1=6.2 Н/, 2Н), 3.22 (к, 3Н), 2.76-2.74 (т, 1Н), 1.94 (ф 1=6.2 Н/, 2Н); М8 (Е81): т// 252 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 98.90% (МахР1о! 200-400 нм), 97.04 (220 нм). Анал. расч. для С₁₂Н₁₉ВСШО₄: С 50.12%, Н 6.66%, N 4.87%. Экспер.: С 50.30%, Н 6.63%, N 5.21%.

С-(7.8-Дигидро-2Н-1,6,9-триокса-9а-бора-бензо^]азулен-2-ил)метиламинацетат (А39)

-(3 -Бензилокси-этокси)-3 -нитрометил-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол- 1-ол

Общий способ 8: 3-(2-бензилокси-этокси)-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил) бензальдегид (1.15 г, 30 ммоль), МеNО₂ (0.39 мг, 6 ммоль), №ЮН (50 мг, 0.15 ммоль), ТГФ (5 мл) и Н₂О (50 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (10% ЕЮАс/гексан-30% ЕЮАс/гексан): выход 3.7 г (61%).

^!Н ЯМР {400 МН/, ДМСОШ₆+ 1+О (0.01 мл)} δ (ррт): 7.49 (!, 1=7. 8 Н/, 1Н), 7.34-7.25 (т, 5Н), 7.08 (ά, 1=7.6 Н/, 1Н), 6.92 (ά, 1=8.0 Н/, 1Н), 5.71 (ά, 1=6.4 Н/, 1Н), 5.30 (ά, 1=6.4 Н/, 1Н), 4.58-4.53 (т, 1Н), 4.47 (к, 2Н), 4.21 (!, 1=6.2 Н/, 2Н), 3.80 (!, 1=6.0 Н/, 2Н); М8 (Е81): т//=342 (М-1, отрицательн.); М8 (Е81): ВЭЖХ чистота 97.89% (МахР1о!) и 95.57% (220 нм).

С-(7,8-Дигидро-2Н-1,6,9-триокса-9а-бора-бензо^]азулен-2-ил)метиламинацетат (А39)

Общий способ 13: 7-(3-бензилокси-пропокси)-3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол (0.45 г, 0.013 моль), 20% Рά(ОН)₂/С (50 вес.% во влажном состоянии) (50 мг) и ледяной АсОН (30 мл). Очистка: способом препаративной ВЭЖХ (0.1% АсОН). А39 выделяли в виде серого твердого вещества, содержащего 0.75 мол.% АсОН: выход 0.1 г (34%).

Т.пл. 69-71°С, ^!Н ЯМР {400 МН/, ДМСОШ₆ + 1ТО (0.01 мл)} δ (ррт): 7.43 (!, 1=7.6 Н/, 1Н), 7.05 (ά, 1=7.3 Н/, 1Н), 6.84 (ά, 1=8.2 Н/, 1Н), 5.19 (Ьк, 1Н), 4.65 (Ьк, 1Н), 4.40-4.10 (т, 3Н), 3.05-2.90 (т, 1Н), 2.802.60 (т, 1Н); М8 (Е81): т//=206 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 99.26% (МахР1о!) и 98.26% (220 нм).

4-(1-Г идрокси-3 -нитрометил-1.3 -дигидро-бензо [с][1,2] оксаборол-7-илокси)бутиронитрил (А40)

Общий способ 9: 4-[3-формил-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенокси] бутиронитрил (2.0 г, 6.3 ммоль), МеNО₂ (0.68 мл, 12 ммоль), СТАВ (116 мг, 0.32 ммоль), 0.025 М №ЮН (20 мл) и ТГФ (5 мл). Очистка: осаждение: выход 560 мг (32%).

^!Н ЯМР (400 МН/, ДМСОШ₆) δ (ррт): 9.08 (к, 1Н), 7.48 (!, 1=7.8 Н/, 1Н), 7.11 (ά, 1=7.4 Н/, 1Н), 6.93 (ά, 1=8.2 Н/, 1Н), 5.72 (άά, 1=9.4, 2.7 Н/, 1Н), 5.31 (άά, 1=13.2, 2.7 Н/, 1Н), 4.65-4.48 (т, 1Н), 4.10 (!, 1=5.5 Н/, 2Н), 2.69 (!, 17.4 Н/, 2Н), 2.04 (ψώ, 2Н); М8 (Е81): т//=275 (М-1, отрицательн.); ВЭЖХ чистота: 97.72% (МахР1о! 200-400 нм), 96.62% (220 нм).

- 83 020530

7-(4-Амино-бутокси) -3 -аминометил-3Н-бензо [с][1,2] оксаборол-1 -ол, гидрохлорид (А41)

Трет-бутиловый эфир {4-[3 -(трет-бутоксикарбониламино-метил)-1 -гидрокси-1,3 -дигидро-бензо [с] [1,2]оксаборол-7-илокси]бутил}карбаминовой кислоты

Общий способ 10: А40 (490 мг, 1.77 ммоль), №С1₂-6Н₂О (632 мг, 2.66 ммоль), ШВИ·! (807 мг, 21.3 ммоль), Вос₂О (1.54 г, 7.08 ммоль) и МеОН (20 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (30% ЕЮАс в гексане). Вышеназванное соединение выделяли в виде белой пены: выход 420 мг (53%).

'Н ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆) δ (ррт): 8.76 (5, 1Н), 8.73-8.66 (т, 1Н), 8.82-8.65 (т, 2Н), 7.42-7.33 (т, 1Н), 7.43-7.32 (т, 1Н), 6.92 (йй, 1=17.8, 7.2 Н/, 1Н), 6.85-6.76 (т, 1Н), 5.21-4.99 (т, 1Н), 3.99 (ί, 1=6.1 Н/, 2Н), 3.01-2.89 (т, 2Н), 1.73-1.61 (т, 2Н), 1.57-1.46 (т, 2Н), 1.39-1.29 (т, 18Н); М8 (Е8Ц: т//=449 (М-1, отрицательн.).

7-(4-Амино-бутокси)-3 -аминометил-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1 -ол, гидрохлорид (А41)

Общий способ 11: трет-бутиловый эфир {4-[3-(трет-бутоксикарбониламино-метил)-1-гидрокси-1,3дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси]бутил}карбаминовой кислоты (420 мг, 0.93 ммоль) и 1 М НС1 в ЕьО (5 мл). Очистка: способом препаративной ВЭЖХ. А41 выделяли в виде твердого белого вещества: выход 260 мг (86%).

Т. пл. 145-146°С; 'Н ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆) δ (ррт): 8.93 (Ь5, 1Н), 8.23 (Ь5, 3Н), 8.01 (Ь5, 3Н), 7.48 (ί, 1=7.6 Н/, 1Н), 7.07 (й, 1=7.4 Н/, 1Н), 6.92 (й, 1=7.8 Н/, 1Н), 5.30 (й, 1=7.8 Н/, 1Н), 4.21-3.95 (т, 2Н), 2.95-2.72 (т, 2Н), 1.92-1.60 (т, 4Н); М8 (Е8Ц: т//=251 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота: 87.79% (МахР1о1 200-400 нм), 85.7% (220 нм).

3-Аминометил-7-(4-гидрокси-бутокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, ацетат (А42)

7-(4-Бензилокси-бутокси)-3 -нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол

Общий способ 9: 3-(4-бензилокси-бутокси)-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил) бензальдегид (2.0 г, 4.8 ммоль), ΜеNΟ₂ (0.51 мл, 9.6 ммоль), СТАВ (87 мг, 0.24 ммоль), 0.025 М №ЮН (20 мл) и ТГФ (5 мл). Очистка: осаждение с получением твердого белого вещества: выход 1.2 г (67%).

'Н ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆) δ (ррт): 9.07 (5, 1Н), 7.45 (ί, 1=7.8 Н/, 1Н), 7.38-7.24 (т, 5Н), 7.06 (й, 1=7.4 Н/, 1Н), 6.88 (й, 1=8.2 Н/, 1Н), 5.71 (йй, 1=9.6, 2.5 Н/, 1Н), 5.31 (йй, 1=13.3, 2.7 Н/, 1Н), 4.55 (йй, 1=13.5, 9.6 Н/, 1Н), 4.46 (5, 2Н), 4.13-3.97 (т, 2Н), 3.56-3.45 (т, 2Н), 1.85-1.65 (т, 4Н); М8 (Е8Р): т//=370 (М-1, отрицательн.).

- 84 020530

3-Аминометил-7-(4-гидрокси-бутокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, ацетат (А42)

Общий способ 13: 7-(4-бензилокси-бутокси)-3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол (1.0 г, 2.7 ммоль), Ра(ОН)₂ (1.0 г) и АсОН (20 мл). Очистка: способом препаративной ВЭЖХ (0.1% АсОН). А42 выделяли в виде твердого белого вещества: выход 250 мг (33%).

Ή ЯМР (400 МН/, ДМСО-а₆+ 1 капля конц. НС1) δ (ррт): 8.38 (Ъ5, 2Н), 7.47 (ΐ, 1=7.8 Н, 1Н), 7.06 (а, 1=7.4 Н, 1Н), 6.90 (а, 1=8.2 Нг, 1Н), 5.33 (а, 1=9.0 Н, 1Н), 4.05 (ΐ, 1=6.2 Нг, 1Н), 3.49-3.46 (т, 1=6.4 Нг, 4Н), 2.77-2.62 (т, 1Н), 1.98 (5, 3Н), 1.78-1.70 (т, 2Н), 1.65-1.45 (т, 2Н); М8 (Ε8Ι): т//=252 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 98.13% (МахР1о1 200-400 нм), 96.65% (220 нм).

Бензиловый эфир [3-(3-аминометил-1-гидрокси-1,3-дигибробензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси) пропил]карбаминовой кислоты, гидрохлорид (А43)

3-Бензилоксикарбониламино-пропиловый эфир метансульфоновой кислоты СЬгНЫ< >ОМ8 ч

М5С1 (2.03 мл, 26.3 ммоль) медленно добавляли к раствору Εΐ₃Ν (4.9 мл, 36 ммоль) и 4-бензилоксибутан-1-ола (5.0 г, 24 ммоль) в СН₂С1₂ (100 мл) при 0°С (темп. бани). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и затем гасили Н2О (100 мл). Смесь экстрагировали СН2С12 и органическую фазу высушивали (М§8О₄) и концентрировали в вакууме с получением вышеназванного соединения в виде бесцветной жидкости: выход 6.58 г (96%).

Ή ЯМР (400 МН/, СЭС1₃) δ (ррт): 7.43-7.24 (т, 5Н), 5.36 (Ъ5, 1Н), 5.09 (5, 2Н), 4.29 (ΐ, 1=5.9 Нг, 2Н), 3.39-3.26 (т, 2Н), 3.01 (5, 3Н), 2.01-1.89 (т, 2Н).

Бензиновый эфир [3-(2-бром-3-формил-фенокси)пропил]карбаминовой кислоты

Общий способ 4: 2-бром-3-гидрокси-бензальдегид (3.81 г, 19 ммоль), 3-бензилоксикарбониламинопропиловый эфир метансульфоновой кислоты (6.55 г, 22.8 ммоль), С5₂СО₃ (9.28 г, 28.5 ммоль) и ДМФ (100 мл). Вышеназванное соединение выделяли в виде вязкой жидкости: выход 6.93 г (93%).

Ή ЯМР (400 МН/, СЭС1₃) δ (ррт): 10.41 (5, 1Н), 7.52 (а, 1=8.6 Нг, 1Н), 7.41-7.30 (т, 6Н), 7.12 (а, 1=7.8 Н, 1Н), 5.56 (Ъ5, 1Н), 5.11 (5, 2Н), 4.20-4.12 (т, 2Н), 3.54-3.46 (т, 2Н), 2.17-2.07 (т, 2Н).

Бензиловый эфир {3-[3-формил-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)фенокси]пропил} карбаминовой кислоты

Общий способ 5: бензиловый эфир [3-(2-бром-3-формил-фенокси)пропил]карбаминовой кислоты (6.9 г, 18 ммоль), В₂рш₂ (8.93 г, 35.2 ммоль), КОАс (6.90 г, 70.4 ммоль), РаС1₂(аррГ)-СН₂С1₂ (0.64 г, 0.87

- 85 020530 ммоль) и диоксан (200 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (20% ЕЮЛс в гексане). Вышеназванное соединение выделяли в виде белой пены: выход 1.98 г (26%).

^!Н ЯМР (400 ΜΗζ, С1Х+) δ (ррт): 9.94 (к, 1Н), 7.52-7.31 (т, 7Н), 7.07 (б, 1=7.8 Ηζ, 1Н), 5.13-5.04 (т, 3Н), 4.06 (!, 1=5.7 Ηζ, 2Н), 3.41 (φ 1=5.9 Ηζ, 2Н), 2.07-2.01 (т, 2Н), 1.43 (к, 12Н).

Бензиловый эфир [3-(1-гидрокси-3-нитрометил-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси) пропил]карбаминовой кислоты

Общий способ 9: бензиловый эфир {3-[3-формил-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2ил)фенокси]пропил}карбаминовой кислоты (1.98 г, 4.50 ммоль), МеЫО₂ (0.48 мл, 9.0 ммоль), СТАВ (82 мг, 0.32 ммоль), 0.025 М ЫаОН (20 мл) и ТГФ (5 мл). Очистка: осаждение с получением твердого белого вещества: выход 1.3 г (75%).

^!Н ЯМР (400 МШ, ДМСО-б₆) δ (ррт): 9.06 (к, 1Н), 7.50-7.42 (т, 1Н), 7.40-7.25 (т, 6Н), 7.07 (б, 1=7.4 Щ 1Н), 6.88 (б, 1=9.4 Н, 1Н), 5.71 (б, 1=8.2 Щ 1Н), 5.36-5.25 (т, 1Н), 5.01 (к, 2Н), 4.61-4.46 (т, 1Н), 4.11-3.99 (т, 2Н), 3.24-3.14 (т, 2Н), 1.93-1.80 (т, 2Н).

Бензиловый эфир {3-[3-(трет-бутоксикарбониламино-метил)-1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2] оксаборол-7-илокси] пропил}карбаминовой кислоты

Общий способ 10: бензиловый эфир [3-(1-гидрокси-3-нитрометил-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7илокси)пропил]карбаминовой кислоты (1.3 г, 3.4 ммоль), №С1₂-6Н₂О (804 мг, 3 38 ммоль), ЫаВН₄ (770 мг, 20.3 ммоль), Вос₂О (1.47 г, 6.76 ммоль) и МеОН (20 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (30% ЕЮЛс в гексане). Вышеназванное соединение выделяли в виде белой пены: выход 300 мг (19%).

^!Н ЯМР (400 МШ, ДМСО-б₆) δ (ррт): 8.73 (к, 1Н), 7.43-7.24 (т, 7Н), 7.02-6.94 (т, 1Н), 6.90 (б, 1=7.4 Щ 1Н), 6.80 (б, 1=8.6 Н, 1Н), 5.09-5.01 (т, 1Н), 4.99 (к, 2Н), 4.02 (!, 1=5.9 Щ 2Н), 3.20-3.11 (т, 3Н), 3.05-2.93 (т, 1Н), 1.89-1.78 (т, 2Н), 1.35 (к, 9Н); М8 (Е81): т^=469 (М-1, отрицательн.).

Бензиловый эфир [3-(3-аминометил-1-гидрокси-1,3-дигидробензо[с][1,2]оксаборол-7-этокси) пропил]карбаминовой кислоты, гидрохлорид (А43)

Общий способ 11: бензиловый эфир {3-[3-(трет-бутоксикарбониламино-метил)-1-гидрокси-1,3дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси]пропил}карбаминовой кислоты (300 мг, 0.63 ммоль), 1 М НС1 в Е!₂О (2 мл) и СН₂С1₂ (2 мл). Очистка: способом препаративной ВЭЖХ. А43 выделяли в виде твердого белого вещества 70 мг (29%).

^!Н ЯМР (400 МШ, ДМСО-б₆) δ (ррт): 7.40-7.22 (т, 9Н), 7.04 (б, 1=7.4 Н, 1Н), 6.87 (б, 1=7.8 Щ 1Н), 5.02-4.96 (т, 3Н), 4.08-3.98 (т, 2Н), 3.23-3.12 (т, 2Н), 3.06-2.92 (т, 1Н), 2.71-2.60 (т, 1Н), 1.92-1.82 (т, 3Н); М8 (Е81): т^=371 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота: 97.01% (МахР1о! 200-400 нм), 95.99% (220 нм).

- 86 020530

Ν-[3-(3 - Аминометил-1 -гидрокси-1,3 -дигидро-бензо [с][1,2] оксаборол-7-илокси)пропил] метансульфонамид, гидрохлорид (А44)

Ν-[3-(1-Τ идрокси-3 -нитрометил- 1,3-дигидро-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-7-илокси)пропил]метансульфонамид

М8С1 (0.99 мл, 13 ммоль) медленно добавляли к раствору Εΐ₃Ν (2.85 мл, 20.5 ммоль) и гидрохлориду 7-(3-амино-пропокси)-3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ола (1.55 г, 5.12 ммоль) в СН₂С1₂ (50 мл) при 0°С (темп. бани). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем гасили Н₂О (50 мл). Смесь экстрагировали СН₂С1₂ и органические фракции высушивали (Мд8О₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали способом испарительной хроматографии (30% ΕΐΟΑс в гексане) с получением вышеназванного соединения в виде вязкой жидкости: выход 500 мг (28%).

Ή ЯМР (400 МНг, ДМСОО δ (ррт): 7.47 (ΐ, 1=7.8 Нг, 1Н), 7.12-7.05 (т, 1Н), 7.05-6.97 (т, 1Н), 6.91 (ά, 1=7.8 Нг, 1Н), 5.71 (άά, 1=9.4, 2.7 Нг, 1Н), 5.31 (άά, 1=13.7, 2.7 Нг, 1Н), 4.56 (άά, 1=13.5, 9.2 Нг, 1Н), 4.10 (ΐ, 1=6.1 Нг, 2Н), 3.16-3.08 (т, 2Н), 2.88 (8, 3Н), 1.99-1.86 (т, 2Н); М8 (Ε8Ι): т/г=343 (М-1, отрицательн.).

Трет-бутиловый эфир [ 1 -гидрокси-7-(3 -метансульфониламино-пропокси)-1,3-дигидро-бензо [с] [1,2] оксаборол-3 -илметил] карбаминовой кислоты

Общий способ 10: N-[3-(1-гидрокси-3-нитрометил-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-7-илокси) пропил]метансульфонамид (500 мг, 1.45 ммоль), №С1₂-6Н₂О (345 мг, 1.45 ммоль), ШВИ, (330 мг, 8.7 ммоль), Вос2О (632 мг, 2.90 ммоль) и МеОН (50 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (5% МеОН в СН2С12). Вышеназванное соединение выделяли в виде белой пены: выход 140 мг (23%).

Ή ЯМР (400 МНг, ДМСОД₆) δ (ррт): 8.77 (8, 1Н), 7.40 (ΐ, 1=7.6 Нг, 1Н), 7.07-6.80 (т, 4Н), 5.13-5.00 (т, 1Н), 4.13-4.03 (т, 2Н), 3.21-2.97 (т, 3Н), 2.88 (8, 3Н), 1.97-1.87 (т, 2Н), 1.37 (8, 9Н); М8 (Ε8Ι): т/г=413 (М-1, отрицательн.).

Ν-[3-(3 - Аминометил-1 -гидрокси-1,3 -дигидро-бензо [с][1,2] оксаборол-7-илокси)пропил] метансульфонамид, гидрохлорид (А44)

Общий способ 11: трет-бутиловый эфир [1-гидрокси-7-(3-метансульфониламино-пропокси)-1,3дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-3-илметил]карбаминовой кислоты (140 мг, 0.33 ммоль), 1 М НС1 в Εΐ^ (2 мл) и СН₂С1₂ (2 мл). Очистка: растирание в порошок с Εΐ^ с последующим применением препаративной ВЭЖХ. А44 выделяли в виде твердого белого вещества: выход 30 мг (25%).

Ή ЯМР (400 МНг, ДМСОД₆ + 1 капля конц. НС1) δ (ррт): 8.13 (Ь8, 3Н), 7.46 (ΐ, 1=7.6 Нг, 1Н), 7.04 (ά, 1=7.4 Нг, 1Н), 6.90 (ά, 1=8.6 Нг, 1Н), 5.26 (ά, 1=8.6 Нг, 1Н), 4.08 (ΐ, 1=5.5 Нг, 2Н), 3.16-3.07 (т, 3Н), 2.87 (8, 3Н), 2.84-2.74 (т, 1Н), 1.95-1.86 (т, 2Н); М8 (Ε8Ι): т/г=315 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота:

- 87 020530

84.60% (Μα\Ρ1ο1 200-400 нм), 82.29% (220 нм).

2-(3 - Аминометил-1 -гидрокси-1,3 -дигидро -бензо [с][1,2] оксаборол-7 -ил-оксиметил)пропан- 1,3-диол, гидрохлорид (А45)

(2,2-Диметил[1,3]диоксан-5-ил)метанол

Раствор 2,2-диметоксипропана (5.88 г, 56.5 ммоль), 2-метил-пропан-1,3-диола (5.0 г, 47 ммоль) и моногидрата РТ8А (0.48 г, 2.3 ммоль) в ТГФ (100 мл) перемешивали всю ночь при комнатной температуре. Смесь концентрировали в вакууме с получением вышеназванного соединения в виде бесцветной жидкости: выход 6.87 г (99%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, СОС1_;) δ (ррт): 4.03 (бб, 1=11.7, 3.5 Ηζ, 2Н), 3.84-3.73 (т, 4Н), 2.49-2.39 (т, 1Н), 1.90-1.80 (т, 1Н), 1.45 (5, 3Н), 1.40 (5, 3Н).

2,2-Диметил[1,3]диоксан-5-илметиловый эфир метансульфоновой кислоты

Μ50 (4.4 мл, 56 ммоль) медленно добавляли к раствору Εΐ₃Ν (9.8 мл, 71 ммоль) и (2,2-диметил[1,3]диоксан-5-ил)метанола (6.87 г, 47.0 ммоль) в СН₂С1₂ (100 мл) при 0°С (темп. бани). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч и затем гасили Н₂О (100 мл). Смесь экстрагировали СН₂С1₂ и органические фракции высушивали (Μ§§0₄) и концентрировали в вакууме с получением вышеназванного соединения в виде бесцветной жидкости: выход 10.02 г (95%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, С1)С1_;) δ (ррт): 4.42 (б, 1=7.4 Ηζ, 2Н), 4.13-4.04 (т, 2Н), 3.82-3.74 (т, 2Н), 3.05 (5, 3Н), 2.05-1.95 (т, 1Н), 1.46 (5, 3Н), 1.40 (5, 3Н).

2-Бром-3 -(2,2-диметил[ 1,3]диоксан-5 -илметокси)бензальдегид

Общий способ 4: 2-бром-3-гидрокси-бензальдегид (8.98 г, 44.7 ммоль), 2,2-диметил[1,3]диоксан-5илметиловый эфир метансульфоновой кислоты (10.02 г, 44.68 ммоль), С5₂С0₃ (21.8 г, 67.0 ммоль) и ДМФ (100 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (20% ЕЮАс в гексане). Вышеназванное соединение выделяли в виде вязкой жидкости: выход 4.20 г (29%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, СОС1_;) δ (ррт): 10.43 (5, 1Н), 7.53 (б, 1=7.4 Ηζ, 1Н), 7.38 (ΐ, 1=7.6 Ηζ, 1Н), 7.15 (б, 1=8.2 Ηζ, 1Н), 4.26-4.08 (т, 4Н), 4.01 (бб, 1=11.5, 4.5 Ηζ, 2Н), 2.22 (б1, 1=11.2, 5.5 Ηζ, 1Н), 1.50 (5, 3Н), 1.45 (5, 3Н).

- 88 020530

3-(2,2-Диметил[1,3]диоксан-5-илметокси)-2-(4-метил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид

Общий способ 5: 2-бром-3-(2,2-диметил[1,3]диоксан-5-илметокси)бензальдегид (4.10 г, 12.5 ммоль), В₂рш₂ (6.34 г, 25.0 ммоль), К0Ас (4.90 г, 50.0 ммоль), РйС1₂(йрр£)-СН₂С1₂ (0.91 г, 1.3 ммоль) и диоксан (200 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (30% ЕЮАс в гексане). Вышеназванное соединение выделяли в виде белой пены: выход 2.0 г (42%) 'II ЯМР (400 ΜΗζ, С1)С1_;) δ (ррт): 9.95 (з, 1Н), 7.49 (ί, 1=7.8 Ηζ, 1Н), 7.44-7.38 (т, 1Н), 7.13 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Н), 4.17-4.06 (т, 4Н), 3.86 (йй, 1=11.9, 4.5 Ηζ, 2Н), 2.12 (й, 1Н), 1.27 (з, 15Н), 1.24 (з, 3Н); Μ8 (Е81): т//=377 (Μ+1, положительн.).

7-(2,2-Диметил[1,3]диоксан-5-илметокси)-3 -нитрометил-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1-ол

Общий способ 9: 3-(2,2-диметил[1,3]диоксан-5-илметокси)-2-(4-метил[1,3,2]диоксаборолан-2ил)бензальдегид (2.0 г, 5.3 ммоль), ΜеN0₂ (0.57 мл, 11 ммоль), СТАВ (97 мг, 0.26 ммоль), 0.025 М №ЮН (50 мл) и ТГФ (5 мл). Очистка: осаждение: выход 0.45 г (25%).

'Н ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 9.09 (з, 1Н), 7.47 (ί, 1=7.8 Ηζ, 1Н), 7.09 (й 1=7.4 Ηζ, 1Н), 6.92 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Н), 5.71 (й, 1=9.0 Ηζ, 1Н), 5.31 (й, 1=13.3 Ηζ, 1Н), 4.57 (йй, 1=13.7, 9.4 Ηζ, 1Н), 4.07 (й, 1=6.6 Ηζ, 2Н), 4.01-3.91 (т, 2Н), 3.86-3.75 (т, 2Н), 2.08 (т, 1Н), 1.35 (з, 3Н), 1.33 (з, 3Н); Μ8 (Е81) т^=336 (Μ1, отрицательн.).

Трет-бутиловый эфир [7-(2,2-диметил[ 1,3]диоксан-5 -илметокси)-1 -гидрокси- 1,3-дигидро-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-3 -илметил]карбаминовой кислоты

Общий способ 10: 7-(2,2-диметил[1,3]диоксан-5-илметокси)-3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2] оксаборол-1-ол (0.45 г, 1.3 ммоль), №С1₂-6Н₂О (317 мг, 1.33 ммоль), NаВΗ₄ (271 мг, 7.98 ммоль), Вос₂О (580 мг, 2.66 ммоль) и МеОН (30 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (5% МеОН в СН₂С1₂). Вышеназванное соединение выделяли в виде белой пены: выход 150 мг (28%).

'Н ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 8.75 (з, 1Н), 7.45-7.36 (т, 1Н), 6.98-6.91 (т, 2Н), 6.85 (й, 1=7.8 Ηζ, 1Н), 5.10-5.04 (т, 1Н), 4.08-3.93 (т, 4Н), 3.80 (йй, 1=12.1, 6.6 Ηζ, 2Н), 3.09-2.98 (т, 1Н), 2.12-2.06 (т, 1Н), 1.37 (з, 9Н), 1.35-1.31 (т, 6Н).

2-(3 - Аминометил-1 -гидрокси-1,3 -дигидро -бензо [с] [1,2] оксаборол-7 -илоксиметил)пропан-1,3 -диол, гидрохлорид (А45)

Общий способ 11: трет-бутиловый эфир [7-(2,2-диметил[1,3]диоксан-5-илметокси)-1-гидрокси-1,3дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-3-илметил]карбаминовой кислоты (150 мг, 0.37 ммоль), 2 N НС1 (10 мл) и МеОН (5.0 мл). Очистка: способом препаративной ВЭЖХ. А45 выделяли в виде твердого белого вещества: выход 80 мг (71%).

'Н ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 8.29 (Ьз, 3Н), 7.39 (ί, 1=7.8 Ηζ, 1Н), 6.99 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Н), 6.83 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Н), 6.15 (й, 1=10.9 Ηζ, 1Н), 5.30-5.23 (т, 1Н), 4.01-3.95 (т, 2Н), 3.53-3.50 (т, 5Н), 2.74-2.63

- 89 020530 (т, 1Н), 2.01-1.93 (т, 1Н); М8 (Е81): т/г=250 (М-18, положительн.); ВЭЖХ чистота: 96.01% (МахР1о1 200-400 нм), 95.07% (220 нм).

3-Аминометил-7-(3-гидрокси-пропокси)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол- 1-ол, гидрохлорид (А46)

Синтез 3-(3-бензилокси-пропокси)-2-бром-бензальдегида (С)

К раствору с температурой 5°С соединения А (15.0 г, 0.075 моль), В (12.0 мл, 0.075 моль) и трифенилфосфина (19.6 г, 0.075 моль) в 200 мл безводного ТГФ по каплям добавляли ΌΙΛΌ (14.8 мл, 0.075 моль) в течение 15 мин. Образовавшийся раствор нагревали до комнатной температуры в течение 5 ч и испаряли растворитель в вакууме. Остаток растворяли в 150 мл ЕЮАс и органическую фазу промывали водой, соляным раствором и высушивали в течение №₂8О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Продукт очищали способом силикагелевой колоночной хроматографии (градиент гексана-5% ЕЮАс/гексан), получая 13.0 г (50% выход) С [3-(3-бензилокси-пропокси)-2-бром-бензальдегид].

'Н ЯМР (400 МНг, ДМСО-б₆) δ (ррт): 10.41 (5, 1Н), 7.49 (б, 1=7.2 Нг, 1Н), 7.32-7.25 (т, 6Н), 7.08 (б, 1=8.0 Нг, 1Н), 4.54 (5, 2Н), 4.16 (ΐ, 1=6.0 Нг, 2Н), 3.74 (ΐ, 1=5.8 Нг, 2Н), 2.19-2.14 (т, 2Н).

3-(3-Бензилокси-пропокси)-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид (Ό)

Соединение С (8.9 г, 0.025 моль), КОАс (7.5 г, 0.076 моль) и бис(пинаколато)дибор (12.9 г, 0.051 моль) растворяли в 50 мл сухого ДМФ и дегазировали в течение 30 мин. К смеси добавляли РбС1₂(бррГ)-ЭСМ (0.56 г, 0.76 ммоль) и содержимое опять дегазировали в течение 10 мин и затем нагревали до 90°С в течение 4 ч. Добавляли дополнительное количество РбС1₂(брр£)-ОСМ (0.2 г, 0.27 ммоль) и продолжали нагревание в течение дополнительных 2 ч. Реакцию охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через слой целита и испаряли растворитель в вакууме. Остаток растворяли в ЭСМ. промывали соляным раствором и органическую фазу высушивали в течение №₂8О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Продукт очищали способом силикагелевой колоночной хроматографии (градиент гексан-5% ЕЮАс/гексан), получая 5.4 г (53% выход) Ό [3-(3-бензилокси-пропокси)-2-(4,4,5,5-тетраметил[ 1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид].

'Н ЯМР (400 МНг, ДМСО-б₆) δ (ррт): 9.91 (5, 1Н), 7.43 (ΐ, 1=7.8 Нг, 1Н), 7.36 (б, 1=7.2 Нг, 1Н), 7.327.27 (т, 5Н), 7.06 (б, 1=8.4 Нг, 1Н), 4.49 (5, 2Н), 4.08 (ΐ, 1=6.0 Нг, 2Н), 3.67 (ΐ, 1=6.2 Нг, 2Н), 2.11-2.08 (т, 2Н), 1.44 (5, 12Н). Е81+М8 т/ζ, 397 (М+Н)+.

7-(3 -Бензилокси-пропокси)-3 -нитрометил-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1-ол (Е)

К холодному, как лед, раствору №ЮН (0.68 г, 0.017 моль) в 10 мл воды добавляли раствор соединения Ό (6.8 г, 0.017 моль), растворенного в 5 мл ТГФ. Через 15 мин по каплям добавляли нитрометан (0.93

- 90 020530 мл, 0.017 моль), содержимое перемешивали при комнатной температуре всю ночь. ТГФ испаряли при пониженном давлении и содержимое подкисляли до рН 3 посредством 2Ν ΗΟ. Водную фазу экстрагировали Е1ОАс несколько раз и объединенную этилацетатную фазу промывали соляным раствором, высушивали над Ыа₂8О₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Продукт очищали способом силикагелевой колоночной хроматографии (градиент от 10% ЕЮАс/гексан до 30% ЕЮАс/гексан), получая 3.7 г (55% выход) Е [7-(3-бензилокси-пропокси)-3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол] 3.7 г.

^!Η ЯМР (400 \'1Ηζ, ДМСО-й₆ + 1ГО (0.01 мл)) δ (ррт): 7.49 (ΐ, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 7.34-7.25 (т, 5Η), 7.08 (й, 1=7.6 Ηζ, 1Η), 6.92 (й, 1=8.0 Ηζ, 1Η), 5.71 (й, 1=6.4 Ηζ, 1Η), 5.23 (йй, 1=13.2, 2.4 Ηζ, 1Η), 4.58-4.53 (т, 1Η), 4.47 (з, 2Η), 4.12 (ΐ, 1=6.2 Ηζ, 2Η), 3.63 (ΐ, 1=6.0 Ηζ, 2Η), 2.04-2.00 (т, 2Η). Е8ММ8 т/ζ, 356 [М-Η]^-. ВЭЖХ чистота 97.12% (МахР1о1 200-400 нм).

3-Аминометил-7-(3-гидрокси-пропокси)-3Н-бензо[с][1,2] оксаборол-1-ол (А46)

Соединение Е (6.0 г, 0.016 моль) растворяли в 50 мл ледяной уксусной кислоты и добавляли к нему Рй(ОЩ₂ на углероде (содержание металла 20, 50 вес.% во влажном состоянии) (5.2 г) и помещали содержимое с целью гидрирования в аппарат для встряхивания Парра при 45 рз1 на 2 ч. Реакцию контролировали на завершение и содержимое фильтровали через слой целита. Растворитель испаряли при пониженном давлении при температуре окружающей среды и получали вязкое вещество. К полученному веществу три раза добавляли 15 мл сухого толуола и испаряли, получая рыхлое твердое вещество. Очистку осуществляли способом препаративной ВЭЖХ (колонка С18, с применением ацетонитрила и раствора 0.1% АсОН/вода), получая 1.5 г (45% выход) соединения А46 [3-аминометил-7-(3-гидрокси-пропокси)3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол], содержащего 0.33 мол.% уксусной кислоты (согласно Н ЯМР).

^!Н ЯМР (400 \'1Ηζ, ДМСО-й₆ + ПЮ (0.01 мл)) δ (ррт): 7.52 (ΐ, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 7.05 (й, 1=7.2 Ηζ, 1Η), 6.95 (й, 1=8.4 Ηζ, 1Η), 5.29 (йй, 1=9.2, 2.4, 1Η), 4.12 (ΐ, 1=6.2 Ηζ, 2Η), 3.62 (ΐ, 1=6.2 Ηζ, 2Η), 3.48 (йй, 1=13.2, 2.8 Ηζ, 1Η), 2.80-2.74 (т, 1Η), 1.92 (ΐ, 1=6.2 Ηζ, 2Η). Е8НМ8 т/ζ, 238 [М+Η]⁷. ВЭЖХ чистота 95.67% (МахР1о1 200-400 нм) и 96.22% (220 фиксированная длина волны).

7-(3 -Бензилокси-пропокси)-3 -нитрометил-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1-ол (А47)

-(3 -Бензилокси-пропокси)-2-гидроксибензальдегид

ОВп

NаΗ (2.95 г, 72.4 ммоль) добавляли к холодному, как лед, раствору 2,3-дигидроксибензальдегида (5.0 г, 36 ммоль) в безводном ДМСО (45 мл). Затем добавляли бензил-3-бромпропиловый эфир (6.45 мл, 36.2 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. Смесь нейтрализовали с применением 1 Ν ΗΟ и затем экстрагировали Е1ОАс. Органическую фракцию промывали Н₂О и концентрировали в вакууме. Остаток очищали способом испарительной хроматографии (8:2 гексан/ЕЮАс) с получением вышеназванного соединения в виде коричневого масла: выход 8.40 г (81%).

^!Н ЯМР (400 \^;1Ηζ, СИС1₃) δ (ррт): 9.93 (з, 1Η), 7.36-7.23 (т, 6Η), 7.20-7.16 (т, 2Η), 6.98-6.91 (т, 1Η), 4.53 (з, 2Η), 4.19 (ΐ, 1=6.2 Ηζ, 2Η), 3.70 (ΐ, 1=6.1 Ηζ, 2Η), 2.19-2.16 (т, 2Η).

3-(3-Бензилокси-пропокси)-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид

Общий способ 6: 3-(3-бензилокси-пропокси)-2-гидроксибензальдегид (7.6 г, 26 ммоль), пиридин (3.42 мл, 42.5 ммоль), ТГ₂О (4.60 мл, 27.9 ммоль) и 0Η₂Ο₂ (200 мл): выход 8.60 г (77%).

- 91 020530

Ή ЯМР (400 МН/, СЭС1₃) δ (ррт): 10.23 (к, 1Н), 7.54-7.47 (т, 1Н), 7.43 (!, 1=8.0 Н/, 1Н), 7.36-7.22 (т, 6Н), 4.52 (к, 2Н), 4.23 (!, 1=6.3 Н/, 2Н), 3.71 (!, 1=6.1 Н/, 2Н), 2.21-2.17 (т, 2Н).

Общий способ 5: 2-(3-бензилокси-пропокси)-6-формилфениловый эфир трифторметансульфоновой кислоты (8.0 г, 19 ммоль), В₂рш₂ (9.71 г, 38.2 ммоль), КОАс (5.71 г, 57.4 ммоль), РйС1₂(йрр£)-СН₂С1₂ (1.39 г, 1.89 ммоль) и безводный диоксан (160 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (9:1 гексан/ЕЮАс): выход 4.80 г (43%) - небольшое загрязнение пинаколом, применяли без дополнительной очистки.

Ή ЯМР (400 МН/, СЭС1₃) δ (ррт): 9.93 (к, 1Н), 7.46 (!, 1=7.8 Н/, 1Н), 7.41-7.36 (т, 1Н), 7.35-7.24 (т, 5Н), 7.08 (й, 1=7.8 Н/, 1Н), 4.50 (к, 2Н), 4.10 (!, 1=6.3 Н/, 2Н), 3.67 (!, 1=6.3 Н/, 2Н), 2.11 (цшп 1=6.2 Н/, 2Н), 1.43 (к, 12Н).

7-(3 -Бензилокси-пропокси)-3 -нитрометил-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1-ол (А47)

Общий способ 8: 3-(3-бензилокси-пропокси)-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил) бензальдегид (36 г, 91 ммоль), МеNО₂ (16.6 г, 273 ммоль), №ОН (3.64 г, 83 ммоль), Н₂О (180 мл) и ТГФ (50 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (1:1 гексан/ЕЮАс). А47 выделяли в виде светложелтого масла: выход 15.9 г (50%).

Ή ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆) δ (ррт): 9.05 (к, 1Н), 7.44 (!, 1=7.8 Н/, 1Н), 7.35-7.20 (т, 5Н), 7.06 (й, 1=7.4 Н/, 1Н), 6.88 (й, 1=8.2 Н/, 1Н), 5.70 (йй, 1=9.4, 2.3 Н/, 1Н), 5.29 (йй, 1=13.7, 2.7 Н/, 1Н), 4.53 (йй, 1=13.3, 9.4 Н/, 1Н), 4.45 (к, 2Н), 4.11 (!, 1=6.1 Н/, 2Н), 3.60 (!, 1=6.3 Н/, 2Н), 2.04-1.91 (т, 2Н); М8 (Е8Ц: т//=356 (М-1, отрицательн.); ВЭЖХ чистота: 99.35% (МахР1о! 200-400 нм), 97.32% (220 нм).

Альтернативный синтез гидрохлорида 3-аминометил-7-(3-гидрокси-пропокси)-3Н-бензо[с][1,2] оксаборол-1-ола (А46)

Общий способ 13: А47 (0.50 г, 1.4 ммоль), 20% Рй(ОН)₂/С (0.5 г, 1:1 по весу), АсОН (20 мл) и Н₂О (0.24 мл). Фильтрат концентрировали и обрабатывали 4 N НС1 с получением вышеназванного соединения в виде бесцветного твердого вещества: выход 0.22 г (47%).

Ή ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆) δ (ррт): 7.42 (!, 1=7.8 Н/, 1Н), 6.97-6.90 (т, 1Н), 6.86 (й, 1=8.2 Н/, 1Н), 5.20 (йй, 1=9.2, 2.5 Н/, 1Н), 4.02 (!, 1=6.2 Н/, 2Н), 3.54 (!, 1=6.2 Н/, 2Н), 3.40 (йй, 1= 13.3, 2.7 Н/, 1Н), 2.68 (йй, 1=13.1, 9.2 Н/, 1Н), 1.88-1.78 (т, 2Н); М8 (Е8Ц: т//=238 (М+1, положительн.).

Трет-бутиловый эфир [1-гидрокси-7-(3-гидрокси-пропокси)-1,3-дигидро-бензо[с][1,2] оксаборол-3илметил]карбаминовой кислоты (А48)

Раствор №ОН (0.13 г, 3.2 ммоль) в Н₂О (3.0 мл) добавляли к раствору А46 (0.40 г, 1.5 ммоль) в трет-бутаноле (2.0 мл) при 5-10°С (темп. бани) и затем перемешивали в течение 20 мин. Добавляли Вос₂О (0.31 г, 1.4 ммоль) при 5-10°С (темп. бани) и затем смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 5 ч. Реакционную смесь разбавляли соляным раствором (50 мл) и экстрагировали СН₂С1₂ (2x50 мл). Органические фракции объединяли, промывали Н₂О (2x50 мл), затем соляным раствором (50 мл), высушивали (№₂8О₄) и концентрировали в вакууме. Коричневый клейкий остаток очищали способом препаративной ВЭЖХ с обращением фаз (АсОН) с получением (после лиофилизации) А48 в виде белого лиофилизата: выход 151 мг (65%).

Ή ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆) δ (ррт): 7.47-7.26 (т, 1Н), 6.88 (й, 1=7.4 Н/, 1Н), 6.79 (й, 1=7.8 Н/, 1Н), 5.00 (Ьк, 1Н), 4.01 (!, 1=6.1 Н/, 2Н), 3.55 (!, 1=6.1 Н/, 2Н), 3.65-3.47 (т, 2Н), 3.38 (й, 1=13.7 Н/, 1Н), 3.02 (йй, 1=13.1, 6.1 Н/, 1Н), 1.24 (к, 9Н); М8 (Е8Ц: т//=336 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота: 98.48% (МахР1о! 200-400 нм), 98.01% (220 нм).

(8)-3 -Аминометил-7-(3 -гидрокси-пропокси)-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А49)

- 92 020530 (3-Бензилокси)-1-бром-пропан (2)

Вп

Раствор 1 (160 г, 962.58 ммоль) и трифенилфосфина (277.72 г, 1.1 эк., 1058.83 ммоль) растворяли в дихлорметане (800 мл) и охлаждали до 0°С (лед/вода). Добавляли по каплям раствор тетрабромида углерода (351.16 г, 1.1 эк., 1058.83 ммоль) в дихлорметане (200 мл) и смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 18 ч. Растворитель дихлорметан испаряли с получением твердого белого вещества. Твердое вещество обрабатывали избытком гексана, перемешивали в течение 1 ч, отфильтровывали и испаряли растворитель с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали способом силикагелевой колоночной хроматографии с применением 5-10% этилацетата и гексана и получали 2 (199 г, 91%) в виде бесцветной жидкости.

-(3 -Бензилокси-пропокси)-2-гидрокси-бензальдегид (4)

К раствору альдегида 3 (27.47 г, 1 эк., 198.88 ммоль) в 0.5 л безводном ДМСО добавляли порциями трет-бутоксид натрия (42.3 г, 2.2 эк., 440.31 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Получали раствор коричневого цвета. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и по каплям добавляли бромид (56 г, 1.2 эк., 244.41 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре всю ночь. 90% альдегида 3 превращалось в продукт. Реакционную смесь подкисляли до рН~3 и затем экстрагировали в ΕΐΟΑс и промывали водой. Органическую фазу концентрировали, продукт очищали на силикагелевой колонке (ΕΐΟΑс:гексан 80:20) с получением соединения 4 (48 г, 84.31% выход) (вязкое масло).

2-(3-Бензилокси-пропокси)-6-формилфениловый эфир трифторметансульфоновой кислоты (5)

К холодному, как лед, раствору 4 (48 г, 1.0 эк., 167.72 ммоль) в 200 мл сухого Όί'Μ добавляли пиридин (22 мл, 1.62 эк., 272.11 ммоль). К реакционной смеси по каплям добавляли трифторметансульфоновый ангидрид (33 мл, 1.16 эк., 196.14 моль). Смесь перемешивали в течение 3 ч при 0°С. Смесь гасили 500 мл 1Ν НС1. Затем соединение экстрагировали в ΌΟΜ (300 мл) и пропускали через маленькую силикагелевую колонку и концентрировали с получением соединения 5 (57 г, 82% выход) в виде бледножелтого густого масла.

3-(3-Бензилокси-пропокси)-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид (6)

Соединение 5 (65 г, 1.0 эк., 155.5 ммоль), бис(пинаколато)дибор (86.9 г, 2.2 эк., 342.11 ммоль), КΟΑс (45.7 г, 3.0 эк., 466.5 ммоль) смешивали вместе и добавляли 600 мл диоксана. Смесь дегазировали Ν₂ в течение 30 мин и добавляли РбС1₂(бρρ£)·^СΜ (5.7 г, 0.05 эк., 7.77 ммоль). Образовавшуюся суспензию нагревали до 90°С всю ночь. Растворитель испаряли, добавляли ΕΐΟΑс и затем фильтровали через прокладку целита. Затем органическую фазу промывали водой (2x150 мл) и растворитель испаряли. Колоночная хроматография с применением смеси 15% ΕΐΟΑс/гексан позволяла получить соединение 6 (37.1 г, 61% выход).

- 93 020530

7-(3 -Бензилокси-пропокси)-3 -нитрометил-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1-ол (А47)

Раствор соединения 6 (36 г, 1.0 эк., 90.91 ммоль) в 50 мл ТГФ охлаждали до 0°С. Добавляли нитрометан (16.6 г, 3.0 эк., 272.72 ммоль), а затем водный раствор ЫаОН (3.64 г в 180 мл Н₂О). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре всю ночь. Исходное вещество исчезало. Циклизация протекала при добавлении 1 N НС1 до тех пор, пока раствор не становился кислым и затем экстрагировался в ЕЮАс. ЕЮАс испаряли и смесь растирали в порошок с водой и декантировали. Колоночная хроматография с применением смеси 50% ЕЮАс/гексан позволяла получить соединение А47 (15.9 г, 50% выход).

(К) и (8) 7-(3-Бензилокси-пропокси)-3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол

4.82 г (А47) разделяли посредством хиральной ВЭЖХ с применением колонки СШКАЬРАК ЛЭН и смеси СО₂:метанол (86:14) в качестве элюента при 25°С. УФ определение осуществляли при 230 нм. Два пика, (8)-7-(3-бензилокси-пропокси)-3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол и (К)-7-(3бензилокси-пропокси)-3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, собирали и испаряли до образования желтого масла. Анализ объединенных фракций с применением аналитической колонки СШКАЬРАК АИН 4.6 мм ГОх250 мм и это же подвижной фазы позволил получить (8) энантиомер [0.7 г (29% выход)] со временем удерживания 6.11 мин и 98.2% ее. (К) энантиомер [1.0 г (41% выход)] имел время удерживания 8.86 мин и 99.6% ее.

(8)-3 -Амипометил-7-(3 -гидрокси-пропокси)-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1-ол (А49)

(А47) (550 мг, 1.57 ммоль) растворяли в 15 мл ледяной уксусной кислоты. Добавляли 280 мг 20 мас.% гидроксида палладия на углероде (катализатор Перлмана) и реакционную смесь продували струей водорода 3х и гидрировали при 55 ]ΐδί в течение 3.5 ч. Смесь фильтровали через слой целита для удаления катализатора и промывали метанолом. Уксусную кислоту испаряли с получением неочищенного продукта. ВЭЖХ очистка позволяла получить 128 мг ацетата (А49). Ацетат обрабатывали 10 мл 2Ν НС1 и перемешивали в течение 3 ч. Вещество лиофилизировали всю ночь с получением 93 мг гидрохлорида (А49) (выход 22%).

'Н ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆) δ (ррт): 7.48 (ΐ, 1=7.8 Н, 1Н), 7.05 (й, 1=7.4 Ш, 1Н), 6.92 (й, 1=8.2 Н, 1Н), 5.27 (й, 1=9.4 Ш, 1Н), 4.11 (ΐ, 1=6.3 Н, 2Н), 3.58 (ΐ, 1=5.9 Н, 2Н), 2.82 (йй, 1=13.3, 9.0 Ш, 1Н), 1.951.83 (т, 2Н); М8 (Е81): т/ζ 238 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 98.74% (МахР1о1 200-400 нм), 98.38% (220 нм), хиральная ВЭЖХ=95.14% ее.

(К)-3 -Аминометил-7 -(3 -гидрокси-пропокси)-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1-ол (А50)

(К)-7-(3-бензилокси-пропокси)-3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол (0.70 г, 2.0 ммоль) растворяли в 20 мл ледяной уксусной кислоты. Добавляли 350 мг 20 мас.% гидроксида палладия на углероде (катализатор Перлмана) и реакционную смесь продували струей водорода 3х и гидрировали при 55 ]ΐδί в течение 3.5 ч. Смесь фильтровали через слой целита для удаления катализатора и промывали метанолом. Уксусную кислоту испаряли с получением неочищенного продукта. ВЭЖХ очистка позволяла

- 94 020530 получить 65 мг чистого соединения. После очистки эту ацетатную соль объединяли с веществом из другой реакции. Этот продукт обрабатывали 2 N ИС1 (10 мл) и перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Вещество лиофилизировали всю ночь с получением 74 мг гидрохлорида (А50) (выход 14%).

'Н ЯМР (400 МЫ ДМСО-б₆) δ (ррт): 7.48 (ΐ, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 7.05 (б, 1=7.4 Ηζ, 1Η), 6.92 (б, 1=8.2 Ηζ, 1Η), 5.27 (б, 1=9.4 Ηζ, 1Η), 4.11 (ΐ, 1=6.3 Ηζ, 2Η), 3.58 (ΐ, 1=5.9 Ηζ, 2Η), 2.83 (бб, 1=13.3, 8.6 Ηζ, 1Η), 1.941.82 (т, 2Η); М8 (Е8Т): тЫ=238 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 99.12% (Ма\Р1о1 200-400 нм), 98.74% (220 нм), хиральная ВЭЖХ=98.82% ее.

7-Этокси-3 -нитрометил-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1 -ол (А51)

3-Этокси-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид

юно

Общий способ 5: 2-этокси-6-формил-фениловый эфир трифтор-метансульфоновой кислоты (2.0 г,

6.7 ммоль), В₂рт₂ (5.11 г, 20.1 ммоль), ΡбС1₂(бррί)·СΗ₂С1₂ (0.98 г, 1.3 ммоль), К0Ас (1.97 г, 20.1 ммоль) и диоксан (100 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (10% ЕЮАс/гексан): выход 1.05 г (57%).

'Н ЯМР (400 МШ, СЭС1₃) δ (ррт): 9.93 (5, 1Η), 7.46 (ΐ, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 7.40-7.36 (т, 1Η), 7.07 (б, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 4.05 (ц, 1=7.0 Ηζ, 2Η), 1.46 (5, 12Η), 1.42 (ΐ, 3Η).

7-Этокси-3 -нитрометил-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1 -ол (А51)

Общий способ 9: 3-этокси-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид (1.05 г, 3.8 ммоль), ΜеN0₂ (0.26 г, 4.2 ммоль), 0.5% №ГОИ (2 ммоль) и СТАС1 (8 мг). Реакцию перемешивали при комнатной температуре всю ночь. Добавляли соляной раствор (20 мл) и полученный раствор экстрагировали ЕЮАс (3x20 мл). Объединенные органические фракции промывали 1 М ΗΟ (3x10 мл). Органическую фазу высушивали, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 51: выход 0.6 г (67%).

'Н ЯМР (400 МЫ ДМСО-б₆) δ (ррт): 9.08 (5, 1Н), 7.45 (ΐ, 1=7.6 Ηζ, 1Η), 7.07 (б, 1=7.4 Ηζ, 1Η), 6.89 (б, 1=8.2 Ηζ, 1Η), 5.71 (бб, 1=9.4, 2.7 Ηζ, 1Η), 5.31 (бб, 1=13.3, 2.7 Ηζ, 1Η), 4.55 (бб, 1=13.7, 9.4 Ηζ, 1Η), 4.16-4.05 (т, 2Η), 1,33 (ΐ, 1=7,0 Ηζ, 3Η); М8 (Е8Т): тЫ=236 (М+1, положительн.); ВЭЖХ 99.14% (Ма\Р1о1), 98.05% (220 нм).

3-Аминометил-7-этокси-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А52)

Общий способ 13: А51 (1.0 г, 4.2 ммоль) Ρ6(0Η)₂ (0.3 г) и АсОН (20 мл). Очистка: способом препаративной ВЭЖХ: выход 103 мг (10%).

'Н ЯМР (400 МЫ, ДМСО-б₆) δ (ррт): 8.86 (Ь5, 1Н), 7.59 (Ь5, 1Η), 7.46 (ΐ, 1=7.8 Ηζ, 1Η), 7.03 (б, 1=7.4 Ηζ, 1Η), 6.89 (б, 1=8.2 Ηζ, 1Η), 5.23 (бб, 1=8.2, 2.7 Ηζ, 1Η), 4.14-4.07 (т, 2Н), 2.80 (бб, 1=13.3, 8.6 Ηζ, 1Η), 1.34 (ΐ, 1=6.8 Ηζ, 3Η); М8 (Β8Σ): тЫ=208 (М+1, положительн.); ВЭЖХ: 97.28% (Ма\Р1о1), 97.88% (220 нм).

3-Аминометил-7-метокси-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А53)

- 95 020530

3-Метокси-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид

Общий способ 6: 2-гидрокси-3-метокси-бензальдегид (20 г, 0.13 моль), ТГ₂О (33.2 мл, 0.20 моль), пиридин (21 мл, 0.26 моль) и СН₂С1₂ (300 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (2.5% ЕЮАс/гексан): выход 10.3 г (28%).

'II ЯМР (400 МН/, СПС1₃) δ (ррт): 10.26 (5, 1Н), 7.56-7.51 (т, 1Н), 7.47 (ί, 1=7.6 Н/, 1Н), 7.31 (йй, 1=8.2, 1.6 Н/, 1Н), 3.97 (5, 3Н).

Общий способ 5: 2-формил-6-метокси-фениловый эфир трифторметансульфоновой кислоты (5.75 г, 20.2 ммоль), В₂рш₂ (15.4 г, 60.7 ммоль), РйС1₂(йррГ)-СН₂С1₂ (2.96 г, 4.05 ммоль), КОАс (5.96 г, 60.7 ммоль) и 1,4-диоксан (200 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (10% ЕЮАс/гексан): выход 4.5 г (85%).

'Н ЯМР (400 МН/, СПС1₃) δ (ррт): 9.97 (5, 1Н), 7.48 (ί, .1=7.6 Н/, 1Н), 7.40 (й, 1=7.6 Н/, 1Н), 7.08 (й, 1=7.9 Н/, 1Н), 3.92 (5, 3Н), 1.42 (5, 12Н).

-Метокси-3 -нитрометил-3Н-бензо [с][1,2] оксаборол- 1-ол

Общий способ 9: 3-метокси-2-(4,4,5,5-тетраметил[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)бензальдегид (4.5 г, 17 ммоль), ΜеNΟ₂ (1.36 г, 22.3 ммоль), 0.5% №ЮН (0.2 ммоль) и СТАС1 (8 мг). Реакцию перемешивали при комнатной температуре всю ночь и затем добавляли соляной раствор (20 мл). Раствор экстрагировали ЕЮАс (3x20 мл). Объединенную органическую фазу промывали 1 М НС1 (3x10 мл). Органическую фазу высушивали, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением вышеназванного соединения: выход 2.5 г (61%).

'II ЯМР (400 МН/, δ (ррт): 7.51 (ί, 1=8.0 Н/, 1Н), 6.91 (й, 1=7.8 Н/, 1Н), 6.85 (й, 1=8.2 Н/,

1Н), 5.86 (йй, 1=9.8, 3.1 Н/, 1Н), 5.10 (5, 1Н), 4.75 (йй, 1=13.5, 3.3 Н/, 1Н), 4.46 (йй, 1=12.9, 8.9 Н/, 1Н), 3.9 (5, 3Н).

3-Аминометил-7-метокси-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А53)

Общий способ 13: 7-метокси-3-нитрометил-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол (1.0 г, 4.5 ммоль), Рй(ОН)₂ (0.3 г) и АсОН (20 мл). Очистка: способом препаративной ВЭЖХ. А53 выделяли в виде твердого белого вещества: выход 86 мг (10%).

'II ЯМР (400 МН/, ДМСО-й₆ δ (ррт): 8.99 (Ь5, 1Н), 8.12 (Ь5, 1Н), 7.49 (ί, 1Н), 7.08 (й, 1Н), 6.92 (й, 1Н), 5.23 (йй, 1Н), 3.80 (5, 3Н), 3.50-3.39 (т, 1Н), 2.85-2.75 (т, 1Н); М8 (Е8Ц: т//=194 (М+1, положительн.); ВЭЖХ: 95.13% (220 нм), 98.79% (МахР1о1).

3-(1 -Аминоэтил)-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1-ол (А54)

Раствор №ЮН (1.6 г, 41 ммоль) в Н₂О (20 мл) добавляли к 2-формилфенилбороновой кислоте (5.1 г, 34 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение 15 мин, затем по каплям добавляли нитроэтан (2.9 мл, 41 ммоль). Смесь перемешивали в течение 30 мин и затем прозрачный реакционный раствор подкисляли 2 Ν НС1 и добавляли ЕЮАс. Органическую фазу отделяли, промывали Н₂О, затем соляным раствором, высушивали (№₂8О₄) и концентрировали в вакууме. Очистка: способом испарительной хроматографии (2:1 гексан/ЕЮАс), позволяла получить вышеназванное соединение в виде бесцветного масла: выход 6.72 г (количественный).

- 96 020530 ^!Н ЯМР (400 МНг, С1)С1_;) δ (ррт): 7.78 (бб, 1=7.2, 2.9 Нг, 1Н), 7.58-7.49 (т, 1Н), 7.45 (ΐ, 1=7.2 Нг, 1Н), 7.33 (бб, 1= 18.2, 7.6 Нг, 1Н), 5.89 и 5.60 (б, 1=6.6 Нг и 1=3.5 Нг, 1Н), 5.14 и 5.11 (к, 1Н), 4.83 и 4.70 (ΐ, 1=6.8 Нг, 1Н), 1.74-1.59 (т, 3Н); М8 (Е81): ш/ζ 207 (М-1, отрицательн.).

3-(1 -Амино-этил)-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1-ол (А54)

Общий способ 12: 3-(1-нитро-этил)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол (3.2 г, 15 ммоль), Νΐ Ренея (30 вес.%, 1.0 г), 2 М ΝΉ₃ в ЕЮН (40 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (10:10:1 СНС1₃/МсΟН/NН₄ΟН). А54 выделяли в виде твердого белого вещества: выход 0.25 г (27%).

Т.пл. 118-119°С, ^!Н ЯМР (400 МНг, ДМСО-б₆) δ (ррт): определены 2 изомера; 9.13 (Ьк, 2Н), 7.70 (б, 1=7.0 Нг, 1Н), 7.54-7.39 (т, 2Н), 7.39-7.24 (т, 1Н), 5.05-4.88 (т, 1Н), 3.16 и 3.09-2.93 (т, 1Н), 0.99 и 0.75 (б, 1=10.2, 6.6 Нг, 3Н); М8 (Е81): т/г=178 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота: 97.77% (2 изомера, 30.61% и 67.16%) (МахР1о! 200-400 нм), 98.07% (2 изомера, 28.39% и 69.68%) (220 нм). Анал. расч. для С₉Н₁₂ВNΟ₂·0.1Н₂О: С 60.30%, Н 6.89%, Ν 7.81%. Экспер.: С 60.27%, Н 6.88%, Ν 8.25%.

Трет-бутиловый эфир [1-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-3-ил)этил]карбаминовой кислоты (ВосА54)

КЮН (0.5 г, 8.8 ммоль) в Н₂О добавляли к суспензии А54 (1.3 г, 6.8 ммоль) в ΐ-ВиΟН (20 мл). Смесь перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре и затем охлаждали до 0°С (темп. бани). Порциями добавляли Вос₂О (1.5 г, 7.1 ммоль) и образовавшийся раствор оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали всю ночь. Потом смесь частично концентрировали в вакууме и затем экстрагировали СН₂С1₂ (4x80 мл). Органические фракции объединяли, промывали Н₂О, высушивали (Νη₂8Ο₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали способом испарительной хроматографии (100:1 СН₂С1₂/МеОН) с получением вышеназванного соединения в виде красного клейкого геля: выход

1.7 г (93%).

^!Н ЯМР (400 МНг, ДМСО-б₆) δ ррт 9.22 и 9.13 (к, 1Н), 7.71-7.61 (т, 1Н), 7.47-7.27 (т, 2Н), 7.01 и 6.66 (б, 1=7.8, 1=8.6 Нг, 1Н), 5.12 и 5.05 (б, 1=3.1 Нг, 1=5.1 Нг, 1Н), 4.12-4.00 (т, 1Н), 3.70-3.62 (т, 1Н), 1.38 и 1.23 (к, 9Н), 0.95 и 0.78 (б, 1=6.6 Нг, 1=6.6 Нг 3Н); М8 (Е81): т/г=211 (М-1, отрицательн.); ВЭЖХ чистота: 98.35% (2 изомера 31.05 и 67.30%) (МахР1о! 200-400 нм), 97.43% (2 изомера, 32.72% и 64.71%) (220 нм). Анал. расч. для САДО* С 60.68%; Н 7.27%; Ν 5.05%. Экспер.: С 60.86%; Н 7.75%; Ν 5.08%.

Разделение диастереоизомеров А55 и А56 трет-бутилового эфира [1-(1-гидрокси-1,3-дигидробензо[с][1,2]оксаборол-3-ил)этил]карбаминовой кислоты

Смесь 2:1 диастереоизомеров трет-бутилового эфира [1-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2] оксаборол-3-ил)этил]карбаминовой кислоты (1.0 г) разделяли с помощью ВЭЖХ с обращенными фазами (МсС^НЮ, Н₂О содержала 0.1% АсОН) с получением более быстро элюирующего А55 (0.275 г) и А56 (0.468 г), оба в виде белых лиофилизатов.

Трет-бутиловый эфир [1-(1-гидрокси-1,3-дигидро-бензо[с][1,2]оксаборол-3-ил)этил]карбаминовой кислоты (А55)

^!Н ЯМР (400 МНг, ДМСО-б₆) δ (ррт): 9.11 (к, 1Н), 7.65 (б, 1=7.4 Нг, 1Н), 7.41-7.36 (т, 2Н), 7.29 (ΐ, 1=7.0 Нг, 1Н), 6.63 (Ьб, 1=8.2 Нг, 1Н), 5.12 (к, 1Н), 4.03 (Ьк, 1Н), 1.24 (к, 9Н), 0.96 (б, 1=6.2 Нг, 3Н); М8 (Е81): т//=216 (М-1, отрицательн.); ВЭЖХ чистота: 98.82% (МахР1о! 200-400 нм), 96.11% (220 нм).

- 97 020530

Трет-бутиловый эфир кислоты (А56) [1-(1 -гидрокси-1,3 -дигидро-бензо [с][1,2] оксаборол-3 -ил)этил] карбаминовой

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 9.24 (к, 1Н), 7.70 (й, 1=7.0 Ηζ, 1Η), 7.43 (1, 1=7.2 Ηζ, 1Η), 7.377.30 (т, 2Η), 7.01 (й, 1=8.2 Ηζ, 1Η), 5.05 (й, 1=4.7 Ηζ, 1Η), 3.68-3.63 (т, 1Η), 1.38 (к, 9Η), 0.78 (й, 1=6.6 Ηζ, 3Η); Μ8 (Е81): т^=276 (Μ-1, отрицательн.); ВЭЖХ чистота: 99.37% ^ахР1о1 200-400 нм), 98.65% (220 нм). Анал. расч. для С₁₄И2оВШ₄-Н₂О: С 60.24%; Н 7.30%; Ν 5.02%. Экспер.: С 59.92%; Н 7.34%; Ν

5.23%.

3-(1-Амино-этил)-3Н-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол, гидрохлорид (А57)

Общий способ 11: А55 (0.238 г, 0.860 ммоль), 4 Ν ΗΟ в диоксане (8 мл) и диоксан (8 мл). Очистка: способом препаративной ВЭЖХ (АсОН). А57 выделяли в виде белого лиофилизата: выход 56 мг (30%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 9.57 (Ьк, 1Η), 7.81 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Η), 7.78 (Ьк, 3Η), 7.51 (й, 1=3.5 Ηζ, 2Η), 7.43-7.38 (т, 1Η), 5.15 (й, 1=5.1 Ηζ, 1Η), 3.47-3.42 (т, 1Η), 1.38 (й, 1=6.6 Ηζ, 3Η); Μ8 (Е81): ^^=178 (Μ+1, положительн.); ВЭЖХ чистота: 96.55% ^ахРШ 200-400 нм), 98.30% (220 нм).

3-(1 -Амино-этил)-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1-ол (А58)

Общий способ 11: А56 (0.406 г, 1.47 ммоль), 4 Ν ΗΟ в диоксане (14 мл) и диоксан (10 мл). Очистка: способом препаративной ВЭЖХ с обращенными фазами (0.1% АсОН). А58 выделяли в виде белого лиофилизата: выход 124 мг (40%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, ДМСО-й₆) δ (ррт): 9.66 (Ьк, 1Η), 8.45 (Ьк, 3Η), 7.84 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Η), 7.52-7.47 (т, 2Η), 7.38 (1й, 1=7.0, 1.2 Ηζ, 1Η), 5.48 (й, 1=2.3 Ηζ, 1Η), 3.86-3.79 (т, 1Η), 0.65 (й, 1=7.0 Ηζ, 3Η); Μ8 (Е81): т/ζ=178 (Μ+1, положительн.); ВЭЖХ чистота: 98.23% ^ахРШ 200-400 нм), 98.60% (220 нм).

3-(1 -Амино-пропил)-3Н-бензо [с] [1,2]оксаборол-1-ол (А59)

3-(1 -Нитро-пропил)-3Н-бензо [с] [ 1,2]оксаборол-1 -ол

Раствор NаОΗ (2.2 г, 56 ммоль) в Н₂О (30 мл) добавляли к альдегиду (7.0 г, 47 ммоль) при комнатной температуре и реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин. По каплям добавляли нитропропан (5.0 мл, 56 ммоль) и смесь перемешивали в течение 40 мин. Прозрачный реакционный раствор подкисляли 2 Ν ΗΟ и добавляли Е1ОАс. Органическую фазу отделяли, промывали ШО, затем соляным раствором, высушивали (№₂8О₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали способом испарительной хроматографии (2:1 гексан/Е1ОАс) с получением вышеназванного соединения в виде бесцветного масла: выход 8.8 г (85%).

Ή ЯМР (400 ΜΗζ, СПС1₃) δ (ррт): установлены 2 изомера 7.77 (й, 1=7.4 Ηζ, 1Η), 7.59-7.34 (т, 3Η), 5.64 и 5.53 (й, 1=7.02 Ηζ и 1=5.1 Ηζ, 1Η), 5.03-5.17 (Ьк, 1Η), 4.51 (ййй, 1=10.6, 6.9, 3.9 Ηζ, 1Η), 2.34-2.06 (т, 2Η), 1.05-0.94 (1, 1=7.4 Ηζ, 3Η).

3-(1 -Амино-пропил)-3Н-бензо [с] [1,2]оксаборол-1-ол (А59)

Общий способ 12: 3-(1-ниτро-пропил)-3Η-бензо[с][1,2]оксаборол-1-ол (4.7 г, 21 ммоль), Νί Ренея

- 98 020530 (30 вес.%, 1.0 г) и 2 М ΝΉ₃ в ΕΐΟН (50 мл). Очистка: способом испарительной хроматографии (10:10:1 СНС1₃/МеОН/ЛН₄ОН). А59 выделяли в виде светло-розового твердого вещества: выход 0.25 г (20%).

Т.пл. 96-97°С; 'Н ЯМР (400 МН/, ДМСО-а₆ δ (ррт): установлены 2 изомера; 8.43 (Ъ5, 3Н), 7.89-7.69 (т, 2Н), 7.60-7.47 и 7.47-7.35 (т, 2Н), 5.54 и 5.34 (5, 1Н), 3.65 и 3.47 (Ъ5, 1Н), 1.71 и 1.25 (аа, 1=15.0, 7.6 Нг, 2Н), 1.08 и 0.72 (ΐ, 1=7.6 Нг, 3Н); М8 (Ε8Ι): т//=192 (М+1, положительн.); ВЭЖХ чистота 91.65% (2 изомера 41.87% и 49.78%) (Ма.хР1о1 200-400 нм), 98.07% (2 изомера, 43.34% и 49.16%) (220 нм). Анал. расч. для С₁₀Н₁₄ВКО₂-0.2Н₂О: С 61.71%, Н 7.46%, Ν 7.20%. Экспер.: С 61.75%, Н 7.34%, Ν 7.33%.

(8)-3 -(Аминометил)-3 -метилбензо [с] [ 1,2]оксаборол-1 (3Н)-ол, гидрохлорид (А61)

К суспензии бромида метилтрифенилфосфония (108 г, 303 ммоль) в ТГФ (750 мл) при комнатной температуре порциями добавляли КО(Вн (112.24 г, 303 ммоль). После перемешивания в течение 5 мин реакционную смесь обрабатывали 2'-бромацетофеноном (50.3 г, 253 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре, затем гасили насыщенным хлоридом аммония. Экстрагировали 3xΕΐ₂Ο и объединенные органические фазы промывали соляным раствором, высушивали над М§8О₄ и испаряли под вакуумом. Очищали способом силикагелевой хроматографии (100% петролейный эфир) с получением 43.8 г (88%) 1-бром-2-(проп-1-ен-2-ил)бензола в виде бесцветного масла.

АО смесь-α (153.4г) растворяли в двухфазной смеси воды (550 мл) и ΐ-ВиОН (550мл) и охлаждали до 0°С. Добавляли 1-бром-2-(проп-1-ен-2-ил)бензол (21.6 г, 109 ммоль) и перемешивали гетерогенную смесь при 0°С в течение 18 ч, гасили сульфатом натрия (164 г), нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительного часа. Экстрагировали 5х посредством ОСМ и объединенные органические фазы высушивали над М§8О₄ и испаряли под вакуумом. Очищали способом силикагелевой хроматографии (50% петролейный эфирЖ^О) с получением 19.2 г (76%) (8)-2-(2-бромфенил)пропан-1,2диола в виде бледно-желтого масла.

(8)-2-(2-бромфенил)пропан-1,2-диол (12.1 г, 52.4 ммоль) растворяли в пиридине (250 мл) и охлаждали до 0°С перед добавлением метансульфонилхлорида (4.0 мл, 52.4 ммоль). Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Пиридин удаляли под вакуумом и остаток распределяли между ОСМ и водным NаНСΟ₃. Органическую фазу высушивали над М§8О₄ и испаряли под вакуумом с получением неочищенного мезилата. Это вещество смешивали с NаN₃ (15.3 г, 235.6 ммоль), растворяли в ДМФ (140 мл) и нагревали до 80°С в течение 18 ч. Добавляли воду (450 мл) и экстрагировали 3х посредством 500 мл Εΐ^. Объединенные органические фазы промывали соляным раствором, высушивали над М§8О₄ и испаряли под вакуумом.

Очищали способом силикагелевой хроматографии (10-20% Εΐ₂Ο/петролейный эфир) с получением

8.7 г (65%) (8)-1-азидо-2-(2-бромфенил)пропан-2-ола в виде оранжевого масла.

(8)-1-Азидо-2-(2-бромфенил)пропан-2-ол (8.7 г, 34.0 ммоль) и триизопропилборат (9.4 мл, 40.8 ммоль) растворяли в 170 мл толуола. Реакционную смесь кипятили с применением устройства ДинаСтарка с целью удаления толуола и остаток растворяли в 150 мл сухого ТГФ. Этот раствор охлаждали до -78°С и по каплям добавляли ВиЫ (25 М в гексане, 15.6 мл, 39.1 ммоль) и перемешивали в течение 30 мин. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и оставляли перемешиваться в течение 3 ч перед тем, как погасить посредством 50 мл 6М НС1, и концентрировали под вакуумом. Образовавшуюся смесь экстрагировали 3х посредством 100 мл ОСМ. Объединенные органические фазы высушивали над М§8О₄ и испаряли под вакуумом. Очищали способом силикагелевой хроматографии (20-30% Εΐ₂Ο/петролейный эфир) с получением 2.1 г (30%) (8)-3-(азидометил)-3-метилбензо[с][1,2]оксаборол1(3Н)-ола в виде темно-желтого масла.

(8)-3-(азидометил)-3-метилбензо[с][1,2]оксаборол-1(3Н)-ол (700 мг, 3.45 ммоль) и трифенилфосфин (1.8 г, 6.9 ммоль) растворяли в 35 мл ацетонитрила. Через 5 мин добавляли концентрированную соляную кислоту (6.9 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч при комнатной температуре перед концентрированием под вакуумом. Остаток помещали в ОСМ и промывали 3х посредством 20 мл 2 М НС1. Объединенные водные фазы испаряли до сухости под вакуумом. Образовавшееся твердое вещество промывали ΕΐΟН и фильтровали с целью удаления побочных продуктов, концентрировали и кристаллизовали из ацетонитрила с получением 160 мг (20%) гидрохлорида (8)-3-(аминометил)-3-метилбензо[с] [1,2]оксаборол-1(3Н)-ола в виде твердого белого вещества.

Ή ЯМР (300 МН/, ДМСО-а₆) δ (ррт): 9.35 (5, 1Н), 8.08 (Ъ5, 3Н), 7.85-7.83 (а, 1=6.9 Нг, 1Н), 7.567.23 (т, 3Н), 3.40-3.33 (т, 1Н), 3.07-3.03 (т, 1Н), 1.52 (5, 3Н).

- 99 020530 (8)-3 -(аминометил)-7-(3 -гидроксипропокси)-3 -метилбензо [с] [1,2]оксаборол-1 (3Н)-ол, гидрохлорид (А62)

Пример 2.

Противогрибковое и противобактериальное исследование МИК

Все исследования воздействия МИК на бактерии осуществляли в соответствии с рекомендациями Института клинических и лабораторных стандартов (СЬ81) по противомикробному исследованию аэробных бактерий (Μο11ιο65 Γογ Ωί1υ1ίοη Ап1шисгоЫа1 БтсерНЬИНу Те515 Гэг Вас1епа ТЬа1 Ого\у АегоЫса11у; Арргоуеб 81апбагб-8еуеп1Ь ЕбПгоп) (Μ07-Ά7) и анаэробных бактерий (ΜеΐЬοб5 Γογ Ап11ткгоЫа1 8и5серйЬШ1у Те511пд οΓ АпаегоЫс Вас1епа; Арргоуеб 81апбагб-8еуепШ ЕбПюп) ^11^7).

Исследования воздействия МИК на дрожжи и мицелиальные грибы можно осуществить согласно рекомендациям Национального комитета по клиническим и лабораторным стандартам (Νί'ΈΈδ) по противомикробному исследованию дрожжей (М27-А2 Νί’ί'Έδ) и мицелиальных грибов (РГа11ег е1 а1., Νί’ί'Έδ риЬПса1юп Μ38-Ά-ΚеΓе^еηсе ΜеΐЬοб Γογ ВгоШ Ωί1υ1ίοη АпйГипда1 БтсерНЬИНу Те51тд οΓ ЕПатепГОт Еип§ί; Арргоуеб 81апбагб. \Уаупе. РА: Νί’ί'Έδ; 2002 (νο1. 22, Νο. 16).

Пример 3.

Кератиновое биологическое исследование

Сродство соединений к кератиновому порошку можно определить способом, описанным в публикации (Та15ит1, Άη1^т^с^οЬ^а1 Адеп15 апб СΗетο1Ηе^аρу. 46(12):3797-3801 (2002)).

Пример 4.

Биологическое исследование с целью определения, ингибирует ли соединение редактирующий домен тРНК-синтетазы в бактериях

В этом примере описано типичное биологическое исследование с целью определения, ингибирует ли конкретное соединение редактирующий домен АК8 в бактерии.

[³Н]-изолейцин-незаряженную ГРНК1еи синтезировали путем инкубирования 1 мкМ редактирующего дефектного Сбс60р 8ассЬаготусе5 сеге\л51ае (С326Е) в 500 мкл 50 мМ ТП5-НС1 (рН 8.0), 60 мМ Μ§0₂, 4 мМ АТР, 1 мМ ИТТ, 0.02% (вес./об.) В8А, 4 мг/мл неочищенного Е.^П тРНК тРНК (Κο^), 0.1 мМ изолейцина и 5 ηιί'ι Ь-[4,5-3Н]изолейцина (100 О/ммоль, ОЕ НеаИЬсаге) и 20 об.% ДМСО в течение 1 ч при 30°С. Реакцию останавливали путем добавления 10 мкл 10 об.% уксусной кислоты с последующими двумя экстракциями кислым фенолом (81дта). Незаряженную тРНК в верхней водной фазе удаляли и осаждали путем добавления двух объемов 96 об.% этанола и инкубирования при -20°С в течение 30 мин. Осадок гранулировали путем центрифугирования при 13,200х§ в течение 30 мин и осадок незаряженной тРНК промывали дважды посредством 70 об.% этанола и затем повторно суспендировали в 50 мМ калий-фосфатном буфере с рН 5.2.

Реакцию завершали после 2 ч инкубирования при 30°С путем добавления уксусной кислоты до 0.17 об.%. Содержащую изолейцин неочищенную ГРНКЕеи очищали, экстрагируя дважды кислым феноломхлорформом (рН 4.3), с последующим осаждением этанолом тРНК гранулу промывали два раза 70% этанолом, высушивали и затем повторно суспендировали в 50 мМ фосфате калия (рН 5.0) и хранили при 20°С. Осаждали аликвоту посредством 10% (мас./об.) ТСА и определяли количество 11е-ГРНК^Ьеи'

Исследования посттрансферного редактирования при гидролизе выполняли при 30°С в 50 мМ Нере5 (рН 8), 10 мМ Μ§0₂, 30 мМ КС1, с неочищенной ³Н-изолейцин-тРНК (~0.3 мкСРмл). Каждую реакцию инициировали путем добавления 150 нМ фермента. В каждый момент времени к 200 мкл 10% (мас./об.) ТСА в миллипоровой фильтровальной пластине добавляли три 20 мкл аликвоты реакционной смеси и осаждали в течение 20 мин при 4°С. Осадок фильтровали и промывали три раза 200 мкл 5% (мас./об.) ТСА, затем высушивали и добавляли 20 мкл коктейля для сцинтилляционного счета 8ирегт1\. Миллипоровые фильтровальные пластины считали в Μ^с^οΒе1а Тп1и\. 1С₅₀ определяли по количеству ингибитора, которое ингибировало 50% активности, 100% посттрансферное редактирование рассчитывали, вычитая активность контрольного теста без фермента из активности фермента дикого типа.

Сравнивали минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) штамма Ш1С Е5сНепс1на сο1^· содержащего рИС-полученную плазмиду с генной ставкой 1еи8 и без нее.

Если МИК штамма, содержащего дополнительные копии 1еи8, была более чем в 2 раза выше, чем в

- 100 020530 случае контрольного штамма, то заливали ЬВ агаровые пластинки 4-кратной концентрацией МИК соединения.

Высевали 1х10¹⁰ Е. сой на десять пластинок, содержащих 4хМИК соединения. Инкубировали в течение 1-2 дней при 37°С и собирали десять колоний и повторно делали посев штрихом на 4хМИК ЬВ агаровые пластинки с целью подтверждения устойчивости.

Отбирали одну большую колонию от каждого из десяти устойчивых генетически модифицированных штаммов Е. сой и повторно суспендировали в 50 мкл РСК буфера.

Усиливали редактирующий домен СОС60. применяя корректирующий РСК фермент и следующие затравки, ддсассд!ддасд!асдасааса!сдс и дддааасассссад!сдсдсаддсдд.

Очищали 980 Ьр РСК продукт, применяя наборы для очистки 01адеп или Рготеда РСК.

Последовательно усиливали генетически модифицированную ДНК и сравнивали ее с диким типом. Если модифицированная ДНК несет мутации в редактирующем домене, ингибитор воздействует на лейцил-тРНК-синтетазу через редактирующий домен.

Пример 5.

Биологическое исследование с целью определения, ингибирует ли соединение редактирующий домен тРНК-синтетазы в грибах

В этом примере подробно описано типичное исследование для определения, ингибирует ли выбранное соединение редактирующий домен АК8 в грибе.

[³Н]-изолейцин-незаряженную !РНК1еи можно синтезировать путем инкубирования 1 мкМ редактирующего дефектного Сάс60р (С326Р) 8ассйаготусек сегеуыае в 500 мкл 50 мМ Тпк-НС1 (рН 8.0), 60 мМ МдС1₂, 4 мМ АТР, 1 мМ ЭТТ, 0.02% (мас./об.) В8А, 16 мкМ тРНК пивных дрожжей (Косйе), 0.1 мМ изолейцина и 5 МС1 Ь-[4,5-3Н]изолейцина (100 Сл/ммоль, СЕ Неаййсаге) и 20 об.% ДМСО в течение 1 ч при 30°С. Реакцию можно остановить путем добавления 10 мкл 10 об.% уксусной кислоты с последующими двумя экстракциями кислым фенолом (81дта). Незаряженную тРНК в верхней водной фазе удаляли и осаждали путем добавления двух объемом 96 об.% этанола и инкубирования при -20°С в течение 30 мин. Осадок гранулировали путем центрифугирования при 13,200х д в течение 30 мин и осадок незаряженной тРНК промывали дважды посредством 70 об.% этанола и затем повторно суспендировали в 50 мМ калий-фосфатном буфере с рН 5.2.

Реакцию можно завершить после 2 ч инкубирования при 30°С путем добавления уксусной кислоты до 0.17 об.%. Содержащую изолейцин-неочищенную £КЫА^ЬЕиочищали, экстрагируя дважды кислым фенолом-хлорформом (рН 4.3), с последующим осаждением этанолом тРНК гранулу промывали два раза 70% этанолом, высушивали и затем повторно суспендировали в 50 мМ фосфате калия (рН 5.0) и хранили при -20°С. Осаждали аликвоту посредством 10% (мас./об.) ТСА и определяли количество 11е-1РНК^Ъеи.

Исследования посттрансферного редактирования при гидролизе выполняли при 25°С в 50 мМ Нерек (рН 7,5), 10 мМ МдС1₂, 30 мМ КС1, с неочищенной ³Н-изолейцин-тРНК (~0.3 мкО/мл) Каждую реакцию можно инициировать путем добавления 150 нМ фермента. В каждый момент времени к 200 мкл 10% (мас./об.) ТСА в миллипоровой фильтровальной пластине добавляли три 20 мкл аликвоты реакционной смеси и осаждали в течение 20 мин при 4°С. Осадок фильтровали и промывали три раза 200 мкл 5% (мас./об.) ТСА, затем высушивали и добавляли 20 мкл коктейля для сцинтилляционного счета 8ирегт1х. Миллипоровые фильтровальные пластины можно считать в М1сгоВе1а Тгйих. 1С₅₀ можно определить по количеству ингибитора, которое ингибировало 50% активности, 100% активность рассчитывали, вычитая активность контрольного теста без фермента из посттрансферной редактирующей активности фермента дикого типа.

Пример 6.

Равновесный диализ

Исследования равновесного диализа можно осуществить в 1х ААК8 буфере, содержащем 50 мМ Нерек-КОН (рН 8 0), 30 мМ МдС1₂ и 30 мМ КС1. Эксперименты можно выполнить с применением диализатора 5к М\УСО ОкроЕсцйНЬпит (НагуаМ АррагаФк, НоШкЮп, Массачусетс). На одну сторону диализной мембраны (сторона А), [метилен-¹⁴С] помещали соединение согласно изобретению, 2.04 Гбеккерель/ммоль (Атегкйат) при концентрациях, варьирующих от 1 до 200 мкМ в 20 мкл. На противоположную сторону мембраны (сторона В) помещали 30 мкМ рекомбинантный Сάс60р (8ассйаготусек сегеУ1кте цитоплазматический ЬеиК8) и 10 мМ АМФ (аденозин 5'-монофосфат, 81дта) в 20 мкл. Пробы инкубировали при комнатной температуре (21°С) при встряхивании в течение 4.5 ч, чтобы установить равновесие при перемещении соединения согласно изобретению через мембрану. При равновесии определяли количество соединения согласно изобретению на каждой стороне диализной мембраны с помощью сцинтилляционных измерений с применением сцинтилляционного счетчика \Уа11ас М1сгоВе1а Тгйих модель 1450. Количество соединения согласно изобретению, связанного с Сάс60р, определяли путем вычитания [соединения согласно изобретению]_А из [соединения согласно изобретению]_В.

- 101 020530

Исследование обмена РР1

Исследование обмена РР1 можно осуществить в буфере 1х ААК8, содержащем 50 мМ Неρек-КΟН (рН 8.0), 30 мМ Ы§С1₂ и 30 мМ КС1, дополненного 2 мМ АТР и [³²Р] РР1 (10⁵ срт/цмоль), 2 мМ лейцином и 7 нМ рекомбинантным Сбс60р. Эксперименты также можно выполнить в присутствии или отсутствие соединения согласно изобретению (15 мкМ) и тРНК (16 мкМ). После 20-минутного инкубирования при 30°С реакции можно инициировать путем добавления АТР. Через различные интервалы времени можно добавить 45 мкл реакционной смеси к 100 мкл 2% хлорной кислоты и 0.1 М Νη.-^Ο- с целью гашения реакции. Затем радиоактивный АТР можно абсорбировать на активированный древесный уголь путем добавления 30 мкл 5% суспензии промытого кислотой №гП А. Эту смесь можно отфильтровать через стеклянные фильтры ОР/С и промыть 2x200 мкл дистиллированной воды, затем 1x200 мкл 95% этанола. Фильтры можно высушить и провести сцинтилляционные измерения, применяя сцинтилляционный счетчик \Уа11ас Μ^с^оВеΐа ТгПп.х модель 1450.

Синтез меченой тритием незаряженной 1РНК_1еи [³Н]-изолейцин-незаряженную 1РНК_1еи можно синтезировать путем инкубирования 1 мкМ редактирующего дефектного Сбс60р (С326Р) 8ассНаготусек сетеу1к1ае в 500 мкл 50 мМ Тпк-НС1 (рН 8.0), 60 мМ Ы§С1₂, 4 мМ АТР, 1 мМ ΌΤΤ, 0.02% (мас./об.) В8А, 16 мкМ 1РНК пивных дрожжей (КосНе), 0.1 мМ изолейцина и 5 мС1 Ь-[4,5-3Н]изолейцина (100 СРммоль, ΟΕ Неаббсате) и 20 об.% ДМСО в течение 1 ч при 30°С. Реакцию можно остановить путем добавления 10 мкл 10 об.% уксусной кислоты с последующими двумя экстракциями кислым фенолом (81дта). Незаряженную тРНК в верхней водной фазе можно удалить и осадить путем добавления двух объемом 96 об.% этанола и инкубирования при -20°С в течение 30 мин. Осадок можно гранулировать путем центрифугирования при 13.200х д в течение 30 мин и осадок незаряженной тРНК можно промыть дважды посредством 70 об.% этанола и затем повторно суспендировать в 50 мМ калий-фосфатном буфере с рН 5.2.

Исследование посттрансферного редактирования

Субстрат [³Н]-изолейцин-незаряженной 1РНК1_еи, 40 нМ, можно добавить к 50 мМ Нерек-КОН рН 8 0.30 мМ КС1, 30 мМ Μ§01₂, 0.02% (мас./об.) В8А, 1 мМ ΌΤΤ, 2.4 нМ 8 сегеу1к1ае Сбс60р при 30°С для того, чтобы начать реакцию, и 20 мкл аликвоты, взятые в определенные моменты времени, добавляли к 200 мкл ледяной 10% (мас./об.) трихлоруксусной кислоте (ТСА). Осадок ТСА дважды промывали 200 мкл ледяной 5% (мас./об.) ТСА и фильтровали через фильтр Μи1ΐ^кс^ееη НТ8 НА (^ПИроге). Можно добавить к фильтрам коктейль для сцинтилляционного счета Ορΐ^ρбаке (Реткш Ε1ιικγ) и посчитать осадок ТСА в сцинтилляционном счётчике \Уа11ас Μ^с^оВеίа Тпбтх модель 1450.

Пример 7.

Биологическое исследование с целью определения, ингибируют ли соединения активность синтеза ААК8.

Исследования аминоацилирования можно осуществить с целью определения скорости чистого синтеза лейцинаЛРНК^Ъеи с помощью лейцил-тРНК-синтетазы. Эксперименты можно выполнить в 500 мкл реакционных смесях, содержащих 1х буфер ААК8 (50 мМ Неρек-КΟН (рН 8.0), 30 мМ Μ§Ο₂ и 30 мМ КС1), с добавлением 20 мкМ [14С]-лейцина (Регкт^тег, 11.32 Гбеккерель/ммоль), 16 мкМ 1РНК неочищенных дрожжей, 0.02% В8А, 1 мМ дитиотреитола, 2 нМ рекомбинантного дрожжевого ЬеиК8 (СЭС60) и 2 мМ АТР. Реакции можно выполнить при 30°С. При нулевом времени реакции можно инициировать путем добавления АТР. Через различные интервалы времени можно добавить 20 мкл аликвоты в 150 мкл 10% трихлоруксусной кислоты (ТСА) в отдельной лунке 96-луночной нитроцеллюлозной мембранной фильтровальной пластины ^ПИроте Μи1ΐ^кс^ееη НТ8, Μ8НΑN4В50). Каждую лунку можно промыть 3x100 мкл 5% ТСА. Затем фильтровальные пластины высушивали под инфракрасной лампой и определяли количество осажденных комплексов [14С]-лейцинЛРНК^Ъеи с помощью сцинтилляционных измерений с применением сцинтилляционного счётчика \Уа11ас Μ^с^оВеίа Тпбтх модель 1450. Ингибирующие эффекты соединений согласно изобретению можно определить путем добавления до 100 мкМ соединения в реакционную смесь в течение 20 мин до добавления АТР.

Следует иметь в виду, что настоящее изобретение охватывает все комбинации аспектов со всеми другими подходящими аспектами и/или типичными вариантами реализации изобретения, описанными в настоящем документе. Следует иметь в виду, что настоящее изобретение также охватывает все комбинации типичных вариантов реализации изобретения со всеми другими подходящими аспектами и/или типичными вариантами реализации изобретения, описанными в настоящем документе.

Следует иметь в виду, что примеры и варианты реализации изобретения описаны в настоящем документе только с иллюстративными целями и что с учетом этого специалистам в данной области будут предложены различные модификации или изменения, которые должны быть включены в сущность и содержание этой заявки и в объем прилагаемой формулы изобретения. Все публикации, патенты и патентные заявки, процитированные в настоящем документе, включены посредством ссылки.

Claims (38)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы где С* является стереоцентром, имеющим конфигурацию, выбранную из (К) или (8);

   К³ выбран из Н и -О(СК¹⁰К^!1)_аК¹²; где а представляет собой значение, выбранное из 1-10;

   каждый из К¹⁰ и К¹¹ выбран из Н, (С1-Сю)алкила, который может быть разветвленным или циклическим, ОН, гидрокси(С1-С1₀)алкила и ИН₂;

   К¹² представляет собой К⁷, ОК⁷, ИН₂, -С(О)К⁷, -С(О)ОК⁷; при этом К⁷ выбран из Н;

   (С1-С1₀)алкила, который может быть разветвленным или циклическим и может быть замещен гидрокси;

   при условии, что К^а и ОН совместно с атомами, к которым они присоединены, могут образовывать 6-10-членное гетероциклоалкильное кольцо, содержащее вплоть до двух атомов кислорода в качестве кольцевых атомов;

   или его фармацевтически приемлемая соль, гидрат, сольват или ангидрид.
2. 2. Соединение по п.1, где стереоцентр С* находится в (8)-конфигурации, или его соль.
3. 3. Соединение по любому из пп.1-2, где а представляет собой значение, выбранное из 1-8, или его соль.
4. 4. Соединение по п.3, где а представляет собой значение, выбранное из 2-4, или его соль.
5. 5. Соединение по любому из пп.1-4, где каждый из К¹⁰ и К¹¹ выбран из Н, (С1-Сю)алкила, который может быть разветвленным или циклическим, ОН и ИН₂, или его соль.
6. 6. Соединение по любому из пп.1-4, где каждый из К¹⁰ и К¹¹ выбран из Н, гидрокси(С1-Сю)алкила и ИН₂, или его соль.
7. 7. Соединение по любому из пп.1-4, где по меньшей мере один из К¹⁰ или К¹¹ выбран из гидрокси(С1-Сю)алкила и ИН₂, или его соль.
8. 8. Соединение по любому из пп.4-7, где

   К¹² выбран из Н и -ОК⁷;

   К⁷ выбран из Н, С1-С₄алкила, которые могут быть замещены заместителями в количестве от 1 до 3, выбранными из (С1-С₄)алкила и -ОСН₃, или его соль.
9. 9. Соединение по любому из пп.1-8, где К¹² выбран из ОН, ИН₂, -СН₃, -СН₂СН₃ и -С(О)ОН, или его соль.
10. 10. Соединение по любому из пп.1-9, где К¹² выбран из ОН, ИН₂, -СН₃ и -СН₂СН₃, или его соль.
11. 11. Соединение по любому из пп.1-10, где К^а выбран из -О(СН₂)₃ИН₂, -О(СН₂)₃ОН, -ОСН₂СН₃, О(СН₂)₃ОСН₃, -О(СН₂)₄ОН, -ОСН₃, -О(СН₂)₃С(О)ОН, -О(СН₂)₄ИН₂, -О(СН₂)₂ИН₂, ОСН₂СН₂СН(ИН₂)СН₂ОН, -ОСН₂С(О)ОН и -ОСН₂СН(СН₂ОН)(СН₂)ОН, или его соль.
12. 12. Соединение по любому из пп.1-10, где К^а выбран из -О(СН₂)₃ОН, -ОСН₂СН₃, -О(СН₂)₃ОСН₃, ОСН₃, -О(СН₂)₄ИН₂ и -О(СН₂)₃ИН₂, или его соль.
13. 13. Соединение по любому из пп.1-10, где К^а выбран из Н, -О(СН₂)₃ОН, -ОСН₂СН₃, -О(СН₂)₃ОСН₃ и -ОСН3, или его соль.
14. 14. Соединение по п.13, где К^а выбран из -О(СН₂)₃ОН, -ОСН₃ и -ОСН₂СН₃, или его соль.
15. 15. Соединение по п.1, выбранное из или его соль.
16. 16. Соединение формулы где С* представляет собой стереоцентр, или его фармацевтически приемлемая соль.

    - 103 020530
17. 17. Соединение по п.16, где С* находится в (8)-конфигурации, или его соль.
18. 18. Соединение по п.1, представляющее собой или его фармацевтически приемлемая соль, гидрат, сольват или ангидрид.
19. 19. Соединение по п.18, представляющее собой или его фармацевтически приемлемая соль.
20. 20. Соединение по п.1, где каждый К¹⁰ и каждый К¹¹ представляет собой Н, или его соль.
21. 21. Соединение по п.20, где К¹² представляет собой Н, и а представляет собой значение, выбранное из 2-4, или его соль.
22. 22. Соединение по п.1, где К^а представляет собой Н, или его соль.

    Соединение по п.1, где К^а представляет собой ОСН₃, или его соль.

    Соединение по п.1, где К^а представляет собой ОСН₂СН₃, или его соль.

    Соединение по п.1, где К^а представляет собой О(СН₂)₃ОСН₃, или его соль.

    Соединение по п.1, где К^а представляет собой О(СН₂)₄ОН, или его соль.

    Соединение по п.1, где К^а представляет собой О(СН₂)СН[(СН₂)ОН]₂, или его соль.
23. 23.
24. 24.
25. 25.
26. 26.
27. 27.
28. 28.

    Соединение по п.3 или 4, где К¹⁰ представляет собой Н; К¹¹ представляет собой Н; и К¹² представляет собой незамещенный циклоалкил, или его соль.
29. 29. Соединение по п.1, где К^а представляет собой -О(СН₂)₃ОН, или его соль.
30. 30. Соединение по любому из пп.21-29, где С* находится в (8)-конфигурации.
31. 31. Соединение по п.1, имеющее структуру где а представляет собой значение, выбранное из 2-4, или его соль.
32. 32. Соединение по п.31, имеющее структуру где а представляет собой значение, выбранное из 2-4, или его соль.
33. 33. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, связанного с инфекцией, вызванной грамотрицательными бактериями, содержащая в качестве активного компонента

    а) первый стереоизомер соединения по любому из пп.1-32, или его соль, гидрат или сольват,

    б) второй стереоизомер указанного соединения, при этом указанный первый стереоизомер присутствует в энантиомерном избытке, составляющем по меньшей мере 80% относительно указанного второго стереоизомера, и

    в) фармацевтически приемлемый наполнитель.
34. 34. Фармацевтическая композиция по п.33, где стереоцентр С* первого стереоизомера находится в (8)-конфигурации.
35. 35. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, связанного с инфекцией, вызванной грамотрицательными бактериями, содержащая

    а) соединение по любому из пп.1-32 или его соли, и

    б) фармацевтически приемлемый наполнитель.
36. 36. Способ ингибирования лейцил-тРНК-синтетазы, включающий приведение лейцил-тРНКсинтетазы в контакт с соединением по любому из пп. 1-32 или его солью.
37. 37. Способ предотвращения роста бактерии, включающий приведение указанного микроорганизма в контакт с эффективным количеством соединения по любому из пп.1-32 или его соли.
38. 38. Способ уничтожения бактерии, включающий приведение указанного микроорганизма в контакт с эффективным количеством соединения по любому из пп.1-32 или его соли.