BRPI0813450B1

BRPI0813450B1 - Composto, formulação farmacêutica, e, usos do composto

Info

Publication number: BRPI0813450B1
Application number: BRPI0813450-2A
Authority: BR
Inventors: Stephen J. Baker; Vincent S. Hernandez; Rashmi Sharma; James A. Nieman; Tsutoma Akama; Yong-Kang Zhang; Jacob J. Plattner; Michael Richard Kevin Alley; Rajeshwar Singh; Minh Ha; Xiaosong Lu; El Mehdi Keramane; Huchen Zhou; Yi Xia; James G. Philips; Rahim Mohammad
Original assignee: Anacor Pharmaceuticals, Inc.
Priority date: 2007-06-20
Filing date: 2008-06-19
Publication date: 2019-05-07
Also published as: JO3396B1; CN101772302B; CN101772302A; JP2016040275A; US7816344B2; CN104017008A; JP2014148531A; BRPI0813450B8; EA020530B1; CO6251209A2; NZ582706A; WO2008157726A1; US20150133402A1; MY162692A; ZA200909003B; CL2008001855A1; MX347688B; JP5530923B2; KR101685656B1; KR101578351B1

Abstract

método para reciclagem de energia em uma máquina de moldagem por sopro, para recipientes produzidos por moldagem por sopro a presente invenção se refere a um método para reciclagem de energia e uma máquina correlata de moldagem por sopro, para moldagem por sopro de recipientes de material plástico, incluindo um sistema de reciclagem para reciclar a energia pneumática do ar de descarga proveniente das cavidades de sopro da dita máquina, capaz de reciclar o ar de descarga e o tornando disponível a uma determinada pressão para um subseqüente sopramento numa cavidade.

Description

“COMPOSTO, FORMULAÇÃO FARMACÊUTICA, E, USOS DO

COMPOSTO”

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

O crescimento global de bactérias e microorganismos resistentes a antibióticos e antimicrobianos em geral, apresenta uma grande ameaça. A aplicação de massivas quantidades de agentes antimicrobianos na ecosfera durante os últimos 60 anos introduziu uma pressão seletiva potente para a emersão e propagação de patógenos resistentes a antimicrobianos. Dessa forma, existe uma necessidade de descobrir um novo e amplo espectro de antimicrobianos, tais como antibióticos, úteis no combate de microorganismos, especialmente aqueles com resistência a multidrogas.

Moléculas contendo boro, tais como oxaboróis, úteis como antimicrobianos, foram previamente descritas, como nas publicações de patentes US 20060234981 e US 20070155699. Em geral, um oxaborol possui a seguinte estrutura e sistema de numeração substituinte:

Descobriu-se que certas classes de oxaboróis, os quais são mono-substituídos na posição 3-, 6- ou 7-, ou dissubstituídos nas posições

3-/6- ou 3-/7- são, surpreendentemente, eficazes antibacterianos . Este e outros usos destes oxaboróis são aqui descritos.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Esta invenção disponibiliza, entre outras coisas, novos compostos úteis para o tratamento de infecções bacterianas, composições farmacêuticas contendo tais compostos, bem como combinações destes

Petição 870190001728, de 07/01/2019, pág. 6/12 compostos com pelo menos um agente adicional terapeuticamente eficaz.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A figura 1 mostra dados MIC para compostos representativos da invenção.

A figura 2 mostra dados IC50 para compostos representativos da invenção.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

I. Definições e Abreviações

As abreviações aqui utilizadas possuem seu significado convencional geralmente compreendido pelo estado da técnica da química e da biologia.

Foram utilizadas as seguintes abreviações: aq.-aquoso; HATUO-(7-azabenzotriazol-1 -il)-N,N,N’ ,N ’ -tetrametilurônio hexaflúorfosfato;

EDCI-N-(3-dimetilaminopropil)-N’-etilcarbodiimida cloridrato; m-CPBA-3ácido cloroperoxibenzóico; equiv.- equivalente; DIAD- diisopropil azodicarboxilato; DMF-N,N-dimetilformamida; DMSO- dimetilsulfóxido; AcOH- ácido acético; NaCNBH3- cianoborohidreto de sódio; Rt- temperatura ambiente; THF- tetra-hidrofuran; Boc2O-di-tert-butil dicarbonato; MeOHmetanol; EtOH- etanol; TFA- ácido triflúoracético; DIPEA-N,Ndiisopropiletilamina; PrOH-l-propanol; i-PrOH-2-propanol; p.f.-ponto de fusão; NMM-N-metilmorfolina; B2pin2-bis(pinacolato)diboro; O/N- durante a noite; BzOOH- peróxido de benzoil; THP- tetra-hidropiranil; Ac- acetil; PTSA- ácido -para-tolueno sulfônico; Pyr.- piridina; Cbz- benziloxicarbonil; MPM-p-metoxibenzil; DHP- dihidropiran; CSA- ácido cânfora sulfônico; CTAB- cetiltrimetilamônio bromide, sat.- saturado; Cy- ciclo-hexila.

“Composto da invenção”, conforme utilizado nesta, refere-se aos compostos aqui discutidos, sais (por exemplo, sais farmaceuticamente aceitáveis), pró-drogas, solvatos e hidratos destes compostos.

MIC, ou concentração inibitória mínima, é o ponto em que o composto cessa mais do que 50% do crescimento celular, preferencialmente 60% do crescimento celular, preferencialmente 70% do crescimento celular, preferencialmente 80% do crescimento celular, relativamente a um controle sem tratamento.

Aonde grupos substituintes são especificados por suas fórmulas químicas convencionais, escritas da esquerda para a direita, estas abrangem igualmente os substituintes químicos idênticos, os quais resultariam da escrita da estrutura da direita para a esquerda, por exemplo, -CH₂Ointenciona referir-se igualmente a -OCH₂-.

O termo “poli” aqui utilizado significa pelo menos 2. Por exemplo, um íon metálico polivalente é um íon metálico possuidor de valência de pelo menos 2.

“Fração” refere-se a um radical de uma molécula unido ao restante da molécula.

O símbolo ww' _{? S}e utilizado como uma ligação ou mostrado perpendicularmente a uma ligação, indica o ponto no qual a fração mostrada é unida ao restante da molécula.

O termo “alquil”, por si próprio ou como parte de outro substituinte, significa, exceto caso determinado em contrário, um radical hidrocarboneto de cadeia reta ou ramificada, ou cíclico, ou uma combinação destas, que podem ser inteiramente saturado, mono ou poliinsaturado e pode incluir radicais bivalentes e multivalentes, possuindo o número de átomos de carbono designados (por exemplo, Ci-Ci₀ significa um a dez carbonos). Em algumas modalidades, o termo “alquil” significa uma cadeia reta ou ramificada, ou a combinação destas, as quais podem estar completamente saturadas, mono ou poliinsaturadas e podem incluir radicais bivalentes ou multivalentes. Exemplos de radicais de hidrocarbonetos saturados incluem, mas não se limitam a, grupos como metila, etila, n-propila, isopropila, nbutila, t-butila, isobutila, sec-butila, ciclo-hexila, (ciclo-hexil)metila, homólogos e isômeros de, por exemplo, n-pentila, n-hexila, n-heptila, n-octila e similares. Um grupo alquila insaturado é um grupo possuindo uma ou mais ligações duplas ou ligações triplas. Exemplos de grupos alquila insaturados incluem, mas não se limitam a, vinila, 2-propenila, crotila, 2-isopentenila, 2(butadienila), 2,4-pentadienila, etinila, 1- e 3-propinila, 3-butinila e os homólogos e isômeros maiores.

O termo “alquileno”, por si próprio ou como parte de outro substituinte, significa um radical bivalente derivado de um alcano, como exemplificado, mas não limitado a, por -CH2CH₂CH₂CH₂-, e, adicionalmente, inclui tais grupos descritos abaixo como “hetero alquilenos”. Tipicamente, um grupo alquila (ou alquileno) possuirá de 1 a 24 átomos de carbono, sendo preferido, na presente invenção, que tais grupos possuam 10 ou menos átomos de carbono. Uma “alquila inferior” ou “alquileno inferior” é um grupo alquila ou alquileno de cadeia mais curta, geralmente possuindo oito carbonos ou menos.

Os termos “alcóxi”, “alquilamino” e “alquiltio” (ou tioalcóxi), são usados em seu sentido convencional e referem-se aos grupos alquila unidos ao restante da molécula através de um átomo de oxigênio, um grupo amino, ou um átomo de enxofre, respectivamente.

O termo “heteroalquila”, por si próprio ou em combinação com outro termo, significa, exceto caso determinado em contrário, um radical hidrocarboneto estável de cadeia reta ou ramificada ou cíclico ou uma combinação destas, consistindo no número declarado de átomos de carbono e pelo menos um heteroátomo. Em algumas modalidades, o termo “heteroalquil”, por si próprio ou em combinação com outro termo, significa uma cadeia reta ou ramificada estável, ou combinação destas, consistindo no número declarado de átomos de carbono e pelo menos um heteroátomo. Em uma modalidade exemplar, os heteroátomos podem ser selecionados do grupo consistindo em B, O, N e S, e onde os átomos de nitrogênio e enxofre podem opcionalmente é oxidados e o heteroátomo de nitrogênio pode opcionalmente é quatemizado. O(s) heteroátomo(s) Β, O, N e S podem ser posicionados em qualquer posição interior do grupo heteroalquila, ou na posição na qual o grupo alquila está unido ao resto da molécula. Exemplos incluem, mas não são limitados a, -CH₂-CH₂-O-CH₃, -CH₂-CH₂-NH-CH₃, -CH₂-CH₂-N(CH₃)CH₃, -CH₂-S-CH₂-CH₃, -CH₂-CH₂,-S(O)-CH₃, -CH₂-CH₂-S(O)₂-CH₃, CH=CH-O-CH₃, -CH₂-CH=N-OCH₃, e -CH=CH-N(CH₃)-CH₃. Até dois heteroátomos podem ser consecutivos, tais como, por exemplo, -CH₂-NHOCH₃. Similarmente, o termo “heteroalquileno”, por si próprio ou como parte de outro substituinte, significa um radical divalente derivado de heteroalquila, como exemplificado, mas não limitado por, -CH₂-CH₂-S-CH₂-CH₂- e -CH₂-SCH₂-CH₂-NH-CH₂-. Para grupos heteroalquilenos, heteroátomos podem igualmente ocupar qualquer das duas terminações da cadeia (por exemplo, alquilenoxi, alquilenodioxi, alquilenoamino, alquilenodiamino e similares). Adicionalmente ainda, para grupos de ligação alquileno e heteroalquileno nenhuma orientação do grupo de ligação é implicada pela direção na qual a fórmula do grupo de ligação é escrita. Por exemplo, a fórmula -C(O)₂R’representa ambos -C(O)₂R’- e -R’C(O)₂-.

Os termos “cicloalquil” e “heterocicloalquil”, por si próprios ou em combinação com outros termos, representam, exceto caso determinado em contrário, versões cíclicas de “alquil” e “heteroalquil”, respectivamente. Adicionalmente, para heterocicloalquila, um heteroátomo pode ocupar a posição na qual o heterocíclico está unido ao restante da molécula. Exemplos de cicloalquila incluem, mas não se limitam a, ciclopentila, ciclo-hexila, 1ciclo-hexenila, 3-ciclo-hexenila, ciclopentila e similares. Exemplos de heterocicloalquila incluem, mas não se limitam a, 1-(1,2,5,6-tetrahidropiridila), 1-piperidinila, 2- piperidinila, 3-piperidinila, 4- morfolinila, 3morfolinila, tetra-hidrofuran-2-yl, tetra-hidrofuran-3-ila, tetra-hidrotieno-2ila, tetra-hidrotieno-3-il, 1-piperazinila, 2-piperazinila e similares.

Os termos “halo” ou “halogênio”, por si próprios ou como parte de outro substituinte, significam, exceto caso determinado em contrário, um átomo de flúor, cloro, bromo ou iodo. Adicionalmente, termos como “haloalquil” destinam-se a incluir mono-haloalquila e poli-haloalquila. Por exemplo, o termo “halo(Cl-C4)alquil” destina-se a incluir, mas não se limitando a, triflúormetila, 2,2,2-triflúormetila, 3-bromopropila e similares.

O termo “aril” significa, exceto caso determinado em contrário, um substituinte poliinsaturado aromático que podem ser um único anel ou múltiplos anéis (preferencialmente de 1 a 3 anéis), os quais são fundidos juntos ou ligados covalentemente. O termo “heteroaril” refere-se a grupos arila (ou anéis) que contêm de um a quatro heteroátomos. Em uma modalidade exemplar, o heteroátomo é selecionado de Β, N, O e S, em que os átomos de nitrogênio e enxofre são opcionalmente oxidados e o(s) átomo(s) de nitrogênio é(são) opcionalmente quartenizado(s). Um grupo heteroarila podem ser ligado ao restante da molécula através de um heteroátomo. Exemplos não limitantes de grupos arila e heteroarila incluem fenila, 1naftila, 2-naftila, 3-naftila, 4-bifenila, 1-pirrolila, 2-pirrolila, 3-pirrolila, 3pirazolila, 2-imidazolila, 4-imidazolila, pirazinila, 2-oxazolila, 4-oxazolila, 2fenil-4-oxazolila, 5-oxazolila, 3-isoxazolila, 4-isoxazolila, 5-isoxazolila, 2tiazolila, 4-tiazolila, 5-tiazolila, 2-furila, 3-furila, 2-tienila, 3-tienila, 2piridila, 3-piridila, 4-piridila, 2-pirimidila, 4-pirimidila, 5-benzotiazolila, purinila, 2-benzimidazolila, 5-indolila, 1-isoquinolila, 5-isoquinolila, 2quinoxalinila, 5-quinoxalinila, 3-quinolila, 6-quinolila, dioxaborolano, dioxaborinano e dioxaboropano. Substituintes para cada um dos acima relacionados sistemas de anéis arila e heteroarila, são selecionados do grupo de substituintes aceitáveis descrito abaixo.

Por brevidade, o termo “arila’ quando usado em combinação com outros termos (por exemplo, arilóxi, ariltioxi, arilalquila) inclui aqueles radicais nos quais um grupo arila é ligado através da fração seguinte ao resto da molécula. Assim, o temo “arilalquil” destina-se a incluir aqueles radicais nos quais um grupo arila é ligado a um grupo alquila (por exemplo, benzila, l-(3-nitrofenil)etila e similares). Um substituinte tal como benzila ou l-(3nitrofenil)etila pode também é representado por “alquila substituído”, onde o radical etila é substituído com uma fração 3-nitrofenila. O termo “arilóxi” destina-se a incluir aqueles radicais nos quais um grupo arila é ligado a um átomo de oxigênio. O termo “ariloxialquil” destina-se a incluir aqueles radicais nos quais um grupo arila é ligado a um átomo de oxigênio. O temo “ariloxialquil” destina-se a incluir aqueles radicais nos quais um grupo arila é ligado a um átomo de oxigênio o qual é então ligado a um grupo alquila (por exemplo, fenoximetila, 3-(l-naftiloxi)propila e similares.

Por brevidade, o termo “heteroaril”, quando usado em combinação com outros termos (por exemplo, heteroariloxi, heteroariltioxi, heteroarilalquila), inclui aqueles radicais nos quais um grupo heteroarila é ligado através da fração seguinte ao resto da molécula. Assim, o termo “heteroaril” destina-se a incluir aqueles radicais nos quais um grupo heteroarila é ligado a um grupo alquila (por exemplo, piridilmetila e similares). O termo “heteroariloxi” destina-se a incluir os radicais nos quais um grupo heteroarila é ligado a um átomo de oxigênio. O termo “heteroariloxialquil” destina-se a incluir os radicais nos quais um grupo arila é ligado a um átomo de oxigênio, o qual é então ligado a um grupo alquila (por exemplo, 2-piridiloximetila e similares).

Cada um dos termos acima (por exemplo, “alquil”, “heteroalquil”, “aril” e “heteroaril”) destina-se a incluir tanto formas substituídas quanto não-substituídas do radical indicado. Substituintes preferidos para cada tipo de radical são fornecidos abaixo.

Substituintes para os radicais alquila e heteroalquila (incluindo os grupos muitas vezes chamados de alquileno, alquenila, heteroalquileno, heteroalquenila, alquinila, cicloalquila, heterocicloalquila, cicloalquenila e heterocicloalquenila) são genericamente chamados de “substituintes de grupo alquila”, e podem ser um ou mais de uma variedade selecionada de, mas não se limitando a: -R’, -OR’, =O, =NR’, =N-OR’> -NR’R”, -SR’, -halógeno, SiR’R”R’”, -OC(O)R’, -C(O)R’, -CO₂R’, -CONR’R”, -OC(O)NR’R”, NR”C(O)R’, -NR’-C(O)NR”R’”, -NR”C(O)₂R’, -NR””’C(NR’R”R’”)=NR””, -NR””-C(NR’R”)=NR”’, -S(O)R’, -S(O)₂R’, S(O)₂NR’R”, -NR”SO₂R’, -CN, -NO₂, -N₃, -CH(Ph)₂, fluor(C_rC₄)alcóxi, e flúor(Ci-C₄)alquila, em um número na faixa de zero a (2m’+l), em que m’ é o número total de átomos de carbono em tal radical. R’, R”, R”’, R”” e R””’, cada um, preferencialmente, referindo-se independentemente a hidrogênio, heteroalquila substituído ou não-substituido, arila substituído ou nãosubstituido, por exemplo, arila substituído com 1-3 halogênios, alquila substituído ou não-substituido, grupos alcóxi ou trialcóxi ou grupos arilalquila. Quando um composto da invenção inclui mais do que um grupo R, cada um dos grupos R é independentemente selecionado, assim como são os grupos R’, R”, R”’, R”” e R’”” quando um ou mais destes grupos está presente. Quando R’ e R” estão ligados ao mesmo átomo de nitrogênio, eles são combinados com o átomo de nitrogênio para formar anéis com 5, 6 ou 7 elementos. Por exemplo, -NR’R’ ’ é destinado a incluir, mas não se limitando a, 1-pirrolídinila e 4-morfonila. Da discussão sobre substituintes acima, uma pessoa versada na técnica entenderá que o termo “alquil” é destinado a incluir grupos incluindo átomos de carbono ligados a grupos outros que grupos de hidrogênio, tais como haloalquila (por exemplo, -CF₃ e -CH₂CF₃) e acila (por ex., -C(O)CH₃, -C(O)CF₃, -C(O)CH₂OCH₃, e similares).

Similar aos substituintes descritos para o radical alquila, substituintes para os grupos arila e heteroarila são genericamente conhecidos como “substituintes do grupo aril”. Os substituintes são selecionados de, por exemplo: -R’, -OR’, =O, =NR’, =N-OR’, -NR’R”, -SR’, -halógeno, SiR’R”R’”, -OC(O)R’, -C(O)R’, -CO₂R’, -CONR’R”, -OC(O)NR’R”,

NR”C(O)R’, -NR’-C(O)NR”R”’, -NR”C(O)₂R’, -NR’””C(NR’R”R’”>NR””, -NR””-C(NR’R”)=NR’”, -S(O)R’, -S(O)₂R’, S(O)₂NR’R”, -NR”SO₂R’, -CN, -NO₂, -N₃, -CH(Ph)₂, flúor(Ci-C₄)alcóxi e flúor(Ci-C₄)alquila, em um número da faixa de zero ao numero total de valências abertas no sistema da anéis aromáticos; em que R’, R”, R’”, R”” e R””’ são, preferencialmente, selecionados independentemente do hidrogênio, alquila substituído ou não-substituido, heteroalquila substituído ou nãosubstituido, arila substituído ou não-substituido ou heteroarila substituído ou não-substituido. Quando um composto da invenção inclui mais de um grupo R, por exemplo, cada um dos grupos R é independentemente selecionado assim como são os grupos R’, R”, R”’, R”” e R””’, quando mais de um destes grupos está presente.

Dois dos substituintes em átomos adjacentes ao anel arila ou heteroarila, podem, opcionalmente, é substituídos com um substituinte da fórmula -T-C(O)-(CRR’)_q-U-, em que T e U são independentemente -NR-, -O-, -CRR’ ou uma ligação simples, e q é um número inteiro de 0 a 3. Altemativamente, dois dos substituintes em átomos adjacentes ao anel arila ou heteroarila podem, opcionalmente, é substituídos com um substituinte da fórmula -A-(CH₂)_r-B-, em que A e B são independentemente -CRR’-, -O-, NR-, -S-, -S(O)-, -S(O)₂-, -S(O)₂NR’- ou uma ligação simples, e r é um numero inteiro de 1 a 4. Uma das ligações simples do novo anel assim formado pode, opcionalmente, é substituído com uma ligação dupla. Altemativamente, dois dos substituintes em átomos adjacentes ao anel arila ou heteroarila podem, opcionalmente é substituídos com o substituinte da fórmula -(CRR’)_s-X-(CR”R’”)_d-, em que s e d são independentemente números inteiros de 0 a 3 e X é -O-, -NR’-, -S-, -S(O)-, -S(O)₂-, ou S(O)₂NR’-. Os substituintes R, R’, R” e R”’ são, preferencialmente, selecionados independentemente do hidrogênio e (Ci-Cgjalquila substituído ou não-substituído.

“Anel”, conforme usado nesta, significa cicloalquila substituído ou não-substituído, heterocicloalquila substituído ou nãosubstituído, arila substituído ou não-substituído ou heteroarila substituído ou não-substituído. Um anel inclui frações anelares fundidas. O número de átomos em um anel é tipicamente definido pelo número de elementos no anel. Por exemplo, um anel com 5 a 7 elementos significa que há 5 a 7 átomos no arranjo anelar. Exceto se especificado de outra forma, o anel, opcionalmente, inclui um heteroátomo. Assim, o termo “anel com 5 a 7 elementos” inclui, por exemplo, fenila, piridinila e piperidinila. O termo “anel com 5 a 7 elementos”, por outro lado, incluiria piridinila e piperidinila, mas não fenila. O termo “anel” adicionalmente inclui um sistema anelar compreendendo mais do que um “anel”, em que cada “anel” é independentemente definido conforme acima.

Conforme usado nesta, o termo “heteroátomo” inclui átomos exceto carbono (C) e hidrogênio (H). Exemplos incluem oxigênio (O), nitrogênio (N), enxofre (S). silicone (Si), germânio (Ge), alumínio (Al) e boro (B).

O termo “grupo de saída” significa um grupo funcional ou átomo que podem ser deslocado por outro grupo funcional ou átomo em uma reação de substituição, como uma reação de substituição nucleofílica. Para fins de exemplo, grupos de saída representativos incluem grupos triflato, cloro, bromo e iodo; grupos éster sulfônicos, tais como mesilato, tosilato, brosilato, nosilato e similares; e grupos acilóxi, como acetóxi, triflúoracetóxi e similares.

O termo “grupo amino protetor” significa um grupo protetor apropriado para prevenir reações indesejadas em um nitrogênio amino. Grupos amino protetores representativos incluem, mas não se limitando a, grupos formila, acila, por exemplo, grupos alcanoila, tais como acetila, tricloroacetila ou triflúoracetil; grupos alcoxicarbonila, tais como terc butoxicarbonila (Boc); grupos aril-metoxicarbonila, tais como benziloxicarbonila (Cbz) e 9-fuorenil-metoxicarbonila (Fmoc); grupos arilmetila, tais como benzila (Bn), tritila (Tr) e l,l-di-(4’-metoxifenil)metil; grupos silila, tais como trimetilsilila (TMS) e terc-butildimetilsilila (TBS); e similares.

O termo “grupo hidróxi protetor” significa um grupo protetor apropriado para prevenir reações indesejadas em um grupo hidróxi. Grupos hidróxi protetores representativos incluem, mas não se limitando a, grupos alquila, tais como metila, etila, e terc-butil; grupos acila, por exemplo, grupos alcanoila, tais como grupos acetila, arilmetila, tais como benzila (Bn), pmetoxibenzila (PMB), 9-flúorenilmetila (Fn) e difenilmetil(benzidrila, DPM); grupos silila, tais como trimetilsilila (TMS) e terc-butildimetilsililaz (TBS); e similares.

O símbolo “R” é a abreviação geral que representa um grupo substituinte selecionado de grupos alquila substituídos ou não-substituídos, heteroalquila substituídos ou não-substituídos, arila substituídos ou nãosubstituídos, heteroarila substituídos ou não-substituídos, cicloalquila substituídos ou não-substituídos ou heterocicloalquila substituídos ou nãosubstituídos.

O termo “derivado de” inclui a linguagem objetiva, significando, e também referindo-se, a uma molécula que é 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 75%, 70%, 65%, ou 60% homóloga a uma molécula referenciada. As moléculas às quais se refere nesta definição, incluem cadeias de RNA ou DNA, oligonucleotídeos, polipeptídeos ou proteínas de qualquer comprimento e composição.

O termo “não-cognato” destina-se a englobar tanto as formas no singular quanto no plural da palavra, isto é, a frase “aminoácido nãocognato” compreende um ou mais aminoácidos.

Por quantidade “efetiva” de uma droga, formulação ou permeante, entende-se a quantidade suficiente de um agente ativo para prover o efeito local ou sistêmico desejado. Uma quantidade “topicamente efetiva”, “cosmeticamente efetiva”, “farmaceuticamente efetiva” ou “terapeuticamente efetiva”, refere-se à quantidade de droga necessária para efetivar o resultado terapêutico desejado.

“Topicamente efetivo”, refere-se a um material que, quando aplicado à pele, unha, cabelo, mãos ou pés, produz um resultado farmacológico desejado, tanto localmente no local da aplicação quanto sistemicamente como resultado de uma passagem transdérmica de um ingrediente ativo no material.

“Cosmeticamente efetivo”, refere-se a um material que, quando aplicado à pele, unha, cabelo, mãos ou pés, produz um resultado cosmético desejado, localmente no local da aplicação de um ingrediente ativo no material

O termo “sal farmaceuticamente aceitável”, destina-se a incluir sais dos compostos da invenção, os quais são preparados com ácidos ou bases relativamente atóxicas, dependendo dos particulares substituintes encontrados nos compostos aqui descritos. Quando compostos da presente invenção contém funcionalidades relativamente acidíferas, sais aditivos básicos podem ser obtidos através da colocação da forma neutra de tais compostos em contato com uma quantidade suficiente da base desejada, tanto pura quanto em um solvente inerte apropriado. Exemplos de sais aditivos básicos farmaceuticamente aceitáveis, incluem sais de sódio, potássio, cálcio, amônio, aminorgânicos, magnésio ou um sal similar. Quando compostos da presente invenção contêm funcionalidades relativamente básicas, sais aditivos de ácido podem ser obtidos através da colocação da forma neutra de tais compostos em contato com uma quantidade suficiente do ácido desejado, tanto pura quanto em um solvente inerte apropriado. Exemplos de sais aditivos ácidos farmaceuticamente aceitáveis, incluem os derivados de ácidos inorgânicos, como o clorídrico, bromídico, nítrico, carbônico, monohidrogeniocarbônico, fosfórico, monohidrogeniofosfórico, dihidrogeniofosfórico, sulfurico, monohidrogeniosulfúrico, hidriódico, ou ácidos fosforosos e similares, bem como os sais derivados de ácidos orgânicos relativamente atóxicos, como o acético, propiônico, isobutírico, maléico, malônico, benzóico, sucínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, ftálico, benzeno sulfônico, p-tolilsulfônico, cítrico, tartárico, metanosulfônico e similares. Igualmente incluídos estão os sais de aminoácidos tais como arginato e similares, e sais de ácidos orgânicos como ácidos glucurônico ou galacturônico e similares (ver, por exemplo, Berge et al., Pharmaceutical Salts, Joumal of Pharmaceutical Science 66: 1-19 (1977)). Certos compostos específicos da presente invenção contêm ambas as funcionalidades, básica e acidíca, que permite aos compostos serem convertidos em sais aditivos, tanto básicos quanto ácidos.

As formas neutras dos compostos são preferencialmente regeneradas através da colocação do sal em contato com uma base ou ácido e isolando-se os compostos de origem da maneira convencional. A forma originária do composto difere das várias formas de sais em certas propriedades físicas, tais como a solubilidade em solventes polares.

Em adição às formas de sais, a presente invenção fornece compostos que estão em forma de pró-drogas. Pró-drogas dos compostos ou complexos aqui descritos, literalmente, passam por mudanças químicas sob condições fisiológicas para fornecer os compostos da presente invenção. Adicionalmente, pró-drogas podem ser convertidas nos compostos da presente invenção através de métodos químicos ou bioquímicos em um ambiente ex vivo.

Certos compostos da presente invenção podem existir em formas não-solvatadas, bem como em formas solvatadas, incluindo formas hidratadas. Em geral, as formas solvatadas são equivalentes às formas não solvatadas e são englobadas pelo escopo da presente invenção. Certos compostos da presente invenção, podem existir em múltiplas formas cristalinas ou amorfas. Em geral, todas as formas físicas são equivalentes para os usos contemplados pela presente invenção e são destinadas a estar dentro do escopo da presente invenção.

Certos compostos da presente invenção possuem átomos assimétricos de carbono (centros ópticos) ou ligações duplas; os racematos, diasterômeros, isômeros geométricos e isômeros individuais são englobados pelo escopo da presente invenção. A representação gráfica de compostos racêmicos, ambiscalêmicos e escalêmicos ou enantiomericamente puros aqui usados se origina de Maehr, J. Chem. Ed. 1985, 62: 114-120. Cunhas sólidas e quebradas são usadas para denotar a configuração absoluta de um estereocentro, exceto se apontado de outra forma. Quando os compostos aqui descritos contém ligações oleofínicas duplas ou outros centros de assimetria geométrica, e exceto se especificado de outra forma, é pretendido que os compostos incluam tanto isômeros geométricos E quanto Z. Da mesma forma, todas as formas tautoméricas estão inclusas.

Compostos da invenção podem existir em formas geométricas ou estereoisoméricas particulares. A invenção contempla todos os compostos deste gênero, incluindo isômeros cis-trans, enantiômeros (-) e (+), enantiômeros (R) e (S), diasterômeros, isômeros (D), isômeros (L), as misturas racêmicas destes, e outras misturas destes, tais como misturas enriquecidas enantiomericamente ou diasteromericamente, como compreendidas pelo escopo da invenção. Átomos assimétricos de carbono adicionais podem estar presentes em um substituinte tal como um grupo alquila. Todos estes isômeros, bem como misturas destes, são destinados à inclusão nesta invenção.

Isômeros (R) e (S) opticamente ativos e isômeros d e /, podem ser preparados utilizando-se sintons quirais ou reagentes quirais, ou resolvidos usando técnicas convencionais. Se, por exemplo, é desejado um particular enanciômero de um composto da presente invenção, este podem ser preparado por síntese assimétrica ou por derivação com um auxiliar quiral, aonde a mistura diastereomérica resultante é separada e o grupo auxiliar partido para fornecer os enantiômeros puros desejados. Altemativamente, aonde a molécula contém um grupo funcional básico, tal como um grupo amino, ou um grupo funcional acidífero, tal como um grupo carboxila, podem ser formados sais diastereoméricos com um ácido ou base opticamente ativo apropriado, seguido da resolução dos diasterômeros assim formados por cristalização fracionada ou meios cromatográficos conhecidos do estado da técnica, e a subseqüente recuperação dos enantiômeros puros. Adicionalmente, a separação dos enantiômeros e diasterômeros é atingida freqüentemente usando-se cromatografia, empregando fases quirais, estacionárias, opcionalmente em combinação com derivatização química (por exemplo, formação de carbamatos a partir de aminas).

Os compostos da presente invenção, podem também conter proporções não naturais de isótopos atômicos em um ou mais átomos que constituem tais compostos. Por exemplo, os compostos podem ser marcados radiativamente com isótopos radioativos, tais como trítio (³H), iodo-125 (¹²⁵I) ou carbono-14 (¹⁴C). Todas as variações isotópicas dos compostos da presente invenção, radioativos ou não, são destinados a é englobados pelo escopo da presente invenção.

O termo “transportador farmaceuticamente aceitável” ou “veículo farmaceuticamente aceitável” refere-se a qualquer formulação, ou meio de transporte, que proporcione a administração apropriada de uma quantidade efetiva de um agente ativo conforme definido nesta, não interfira na eficiência da atividade biológica do agente ativo e que seja suficientemente atóxico para o hospedeiro ou paciente. Transportadores representativos incluem água, óleos, ambos vegetais e minerais, bases de creme, bases de loção, bases de pomada e similares. Estas bases incluem agentes de suspensão, espessantes, intensificações de penetração e similares. Sua formulação é bem conhecida aos versados da técnica em cosméticos e farmacêutica tópica. Informações adicionais a respeito de transportadores podem ser encontradas em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21 st Ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2005), que está incorporado nesta por referência.

“Transportador tópico farmaceuticamente aceitável” e termos equivalentes refere-se a transportadores farmaceuticamente aceitáveis, conforme descritos anteriormente nesta, apropriados para a aplicaçao tópica. Um veículo inativo líquido ou cremoso, capaz de suspender ou dissolver o(s) agente(s) ativo(s), e possuindo as propriedades de é atóxico e não inflamatório quando aplicado à pele, unha, mãos ou pés, é um exemplo de transportador tópico farmaceuticamente aceitável. Este termo é especificamente destinado a englobar materiais transportadores aprovados para o uso em cosméticos tópicos também.

O termo “aditivo farmaceuticamente aceitável”, refere-se a preservativos, antioxidantes, fragrâncias, emulsificadores, corantes e excipientes conhecidos ou usados no campo da formulação medicamentosa, e que não interferem indevidamente na eficiência da atividade biológica do agente ativo, e que sejam suficientemente atóxicos para o hospedeiro ou paciente. Aditivos para formulações tópicas são bem conhecidos no estado da técnica, e podem ser adicionados à composição tópica, enquanto forem farmaceuticamente aceitáveis e não danosos às células epiteliais ou à sua função. Além disso, eles não deveríam causar deterioração da estabilidade da composição. Por exemplo, filtros inertes, anti-irritantes, intensificações, excipientes, fragrâncias, opacificantes, antioxidantes, agentes gelificantes, estabilizadores, surfactantes, emolientes, agentes colorantes, preservativos, agentes tampão, outros intensificações de permeação, e outros componentes convencionais de formulações de administração tópica ou transdérmica, como são conhecidas no estado da técnica.

Os termos “intensificação”, “intensificação de penetração” ou “intensificação de permeação”, relacionam-se a um incremento na permeabilidade da pele, unhas, cabelo, mãos ou pés a uma droga, assim como a incrementar a taxa pela qual a droga permeia através da pele, unhas, cabelo, mãos ou pés. A permeação melhorada efetivada através do uso de tais intensificadores podem ser observada, por exemplo, medindo-se a taxa de difusão da droga através pele, unhas, cabelo, mãos ou pés de animais, usando um aparelho de difusão celular. Uma célula de difusão é descrita por Merritt et al. Diffusion Apparatus for Skin Penetration, J of Controlled Release, 1 (1984) pp. 161-162. O termo “intensificação de permeação” ou “intensificação de penetração” destina-se a um agente ou a uma mistura de agentes, os quais, isolados ou em combinação, agem para incrementar a permeabilidade da pele, unhas, cabelo, mãos ou pés a uma droga.

O termo “excipientes” é convencionalmente conhecido por designar transportadores e/ou veículos usados na formulação de composições de drogas efetivas para o uso desejado.

O termo “administração tópica” refere-se à aplicação de um agente farmacêutico a uma superfície externa da pele, unhas, cabelo, mãos ou pés, de modo que o agente atravesse a superfície externa da pele, pele, unhas, cabelo, mãos ou pés e entre tecidos subjacentes. Administração tópica inclui aplícaçao da composição a pele, pele, unhas, cabelo, mãos ou pés intactos ou a pele, unhas, cabelo, mãos ou pés quebrados, despelados ou com feridas abertas. A administração tópica de um agente farmacêutico pode resultar em uma distribuição limitada do agente na pele e tecidos circundantes ou, quando o agente é removido da área em tratamento pela corrente sangüínea, pode resultar em distribuição sistêmica do agente.

O termo “administração transdérmica” refere-se à difusão de um agente através da barreira da pele, unhas, cabelo, mãos ou pés, resultante de administração tópica ou outra aplicaçao de uma composição. O estrato córneo age como uma barreira e alguns agentes farmacêuticos são capazes de penetrar pele intacta. Em contraste, a epiderme e a derme são permeáveis a vários solutos e a absorção de drogas, portanto, ocorre mais facilmente através da pele, unhas, cabelo, mãos ou pés que foram raspados ou de outra maneira destituídos do estrato córneo e assim exposta a epiderme. Administração transdérmica inclui injeção ou outra administração através que qualquer porção da pele, unhas, cabelo, mãos ou pés ou membrana mucosa e absorção ou permeação através de porção remanescente. Absorção através de pele, unhas, cabelo, mãos ou pés intactos podem ser melhorada posicionandose o agente ativo em um veículo farmaceuticamente aceitável antes da aplicaçao na pele, unhas, cabelo, mãos ou pés. Administração tópica passiva pode consistir em aplicar o agente ativo diretamente ao local do tratamento em combinação com emolientes ou intensificadores de penetração. Como aqui utilizada, a administração transdérmica é destinada a incluir administração por permeação por ou através do tegumento, isto é, pele, unhas, cabelo, mãos ou pés.

O termo “infecção microbiana” ou “infecção por um microorganismo” refere-se a qualquer infecção de um tecido hospedeiro por um agente infeccioso incluindo, mas não se limitando a, vírus, bactérias, micobactérias, fungos ou parasitas (ver, por exemplo, Harrison's Principies of Internai Medicine, pp. 93-98 (Wilson et al., eds., 12th ed. 1991); Williams et al., J. of Medicinal Chem. 42:1481-1485 (1999), cada qual aqui incorporado, em sua integridade, por referência).

“Meio biológico” é aqui utilizado referindo-se a ambientes tanto in vitro quanto in vivo. Exemplos de “meios biológicos” in vitro incluem, mas não se limitam a, culturas celulares, cultura de tecidos, homogeneizados, plasma e sangue. Aplicações in vivo são geralmente executadas em mamíferos, preferencialmente humanos.

“Inibindo” ou “bloqueando” são utilizados aqui de modo intercambiável para referir-se ao bloqueio total de enzimas. Em uma modalidade exemplar, a enzima é um domínio editado de uma tRNA sintetase.

Uma “unidade de unha humana” podem ser a lâmina ungueal, leito da unha, prega proximal da unha, prega lateral da unha e combinações destas.

Boro é capaz de formar ligações dativas com oxigênio ou nitrogênio, nesta invenção, sob algumas circunstâncias. Ligações dativas são usualmente mais fracas do que ligações covalentes. Em situações em que o boro é ligado de forma covalente a pelo menos um oxigênio ou nitrogênio, e é, ao mesmo, ligado de forma dativa a um oxigênio ou nitrogênio, respectivamente, a ligação dativa e a ligação covalente entre o boro e os dois heteroátomos idênticos, pode interconverter-se ou estar na forma de um híbrido de ressonância. Existe, neste caso, uma incerteza potencial circundando a exata natureza e extensão do compartilhamento de elétrons. As estruturas fornecidas não são destinadas a incluir qualquer e todos os possíveis cenários de ligações entre o boro e o átomo ao qual está ligado. Exemplos não limitantes destas ligações são os seguintes:

δ*

Os compostos compreendendo um boro ligado a um carbono e três heteroátomos (tais como três oxigênios descritos nesta seção), podem, opcionalmente, conter um boro totalmente carregado negativamente ou um boro parcialmente carregado negativamente, devido à natureza da ligação dativa entre o boro e um dos oxigênios. Devido à carga negativa, um contraíon carregado positivamente, pode associar-se a este composto, assim formando um sal. Exemplos de contra-íons carregados positivamente incluem 5 Ηζ H₃O⁺, cálcio, sódio, amônio, potássio. Os sais destes compostos estão implicitamente contidos nas descrições destes compostos.

A presente invenção também engloba compostos que são espécies poli ou multivalentes, incluindo, por exemplo, espécies como dímeros, trímeros, tetrâmeros e homólogos maiores dos compostos de 10 utilização na invenção ou análogos reativos destes. Por exemplo, dímeros de (Al) podem formar-se nas seguintes condições:

Em outro exemplo, dímeros de (A46) podem formar-se nas seguintes condições:

OH

A presente invenção também engloba compostos que são anidridos dos ésteres cíclicos de boro sintetizados por sujeição destes compostos a condições desidratantes. Exemplos destes anidridos são fornecidos abaixo:

e

Também são produzidos trímeros dos compostos da invenção.

Por exemplo, trímeros de ésteres acíclicos de boro podem ser formados como segue:

OH

Polímeros dos compostos da invenção também são produzidos através da remoção de certos grupos protetores em ácido forte. Por exemplo, trímeros de ésteres acíclicos de boro podem ser formados como segue:

OH

Também são de utilização, na presente invenção, compostos de espécies poli ou multivalentes, incluindo, por exemplo, espécies como dímeros, trímeros, tetrâmeros e homólogos maiores dos compostos de uso na invenção ou análogos reativos destes. As espécies poli ou multivalentes 5 podem ser ajuntadas de uma única espécie ou mais de uma espécie da invenção. Por exemplo, um construto dimérico, podem ser “homodimérico” ou “heterodimérico”. Além disso, construtos poli e multivalentes nos quais um composto da invenção, ou um análogo deste, estão ligados a uma estrutura oligomérica ou polimérica (por exemplo, polilisina, dextrano, hidróxietila 10 amido e similares), fazem parte do escopo da presente invenção. A estrutura é, preferencialmente, polifuncional (isto é, possuindo um arranjo de sítios reativos para ligar compostos de uso na invenção). Além disso, a estrutura podem ser derivatizada com uma única espécie da invenção ou mais de uma espécie da invenção.

Além disso, a presente invenção inclui o uso de compostos compreendidos pela idéia principal demonstrada nas fórmulas aqui contidas, as quais são funcionalizadas para proporcionar compostos possuindo solubilidade em água, a qual é melhorada com relação a compostos análogos que não são similarmente funcionalizados. Dessa forma, qualquer um dos substituintes aqui demonstrados podem ser substituído com radicais análogos que possuam melhorada solubilidade em água. Faz parte do escopo da invenção, por exemplo, repor um grupo hidroxila com um diol, ou uma amina com uma amina quaternária, hidróxi- amina ou fração similar mais solúvel em água. Em uma modalidade preferencial, solubilidade adicional em água é dada por substituição em um sítio não essencial para a atividade em direção ao domínio editado dos compostos aqui demonstrados com uma fração que melhore a solubilidade em água dos compostos originários. Métodos para o melhoramento da solubilidade em água de compostos orgânicos são conhecidos no estado da técnica. Tais métodos incluem, mas não são limitados a, funcionalizar um núcleo orgânico com uma fração permanentemente carregada, por exemplo, amônia quaternária, ou um grupo o qual está carregado a um pH fisiologicamente relevante, por exemplo, ácido carboxílico, amina. Outros métodos incluem, anexar aos núcleos orgânicos grupos contendo hidroxila ou amina, por exemplo, álcoois, polióis, poliéteres e similares. Exemplos representativos incluem, mas não se limitam a, polilisina, polietilenoimina, poli(etilenoglicol) e poli(propilenoglicol). Quimicias apropriadas de funcionalização e estratégias para estes compostos são conhecidos no estado da técnica. Ver, por exemplo, Dunn, R. L., et al., Eds. POLYMERIC DRUGS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS, ACS Symposium Series Vol. 469, American Chemical Society, Washington, D.C. 1991.

II. Introdução

A presente invenção fornece novos compostos de boro.

III. Os Compostos

IlI.a) Esteres Borônicos Cíclicos

Em uma modalidade exemplar, o composto da invenção possui uma estrutura que é um elemento selecionado de:

(Iac), com a condição de que o composto não seja OR*

I h₂n

R^z, R^y, R^x and R^w são elementos independentemente selecionados de um elemento selecionado de H, alquila substituído ou nãosubstituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não-substituído, heterocicloalquila substituído ou nãosubstituído, arila substituído ou não-substituído e heteroarila substituído ou não-substituído. R* é um elemento selecionado de H e uma carga negativa.

Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com

R*

(Iaa) em que R* é como descrito nesta, R^z é H e R^y é um elemento selecionado de um aminoalquila substituído ou não-substituído, hidroxialquila /

substituído ou não-substituído, carboxialquila substituído ou não-substituído.

Em outra modalidade exemplar, o composto possua a estrutura

(Iaa) em que R* é como descrito nesta. Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado de:

em que R* é como descrito nesta.

Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura:

Em outra modalidade exemplar, R* é H.

Em outro aspecto, a invenção fornece um composto possuindo a estrutura conforme a fórmula:

o^a

H R³ em que R* é um elemento selecionado de H e uma carga negativa. R³ é um elemento selecionado de H, cianureto, nitroalquila substituído ou não-substituído e aminoalquila substituído ou não-substituído. R^a é um elemento selecionado de H e YR⁵, em que Y é um elemento selecionado de O e S. R⁵ é um elemento selecionado independentemente de H, alquila substituído ou não-substituído e heteroalquila substituído ou nãosubstituído; com a condição de que R^a e R³ não poderem srr ambos H; com a condição de R^a e R*, juntamente com os átomos aos quais estão ligados, são opcionalmente combinados para formar anéis de heterocicloalquila de 6 a 10 elementos, substituídos ou não-substituídos, ou um sal, pró-droga, hidrato ou solvato deste, ou uma combinação destes. Em uma modalidade preferencial, a invenção fornece um composto da invenção, ou sal, pró-droga, hidrato ou solvato deste.

Em uma modalidade exemplar, existe a condição de que, quando R³ é H, R^a não possui a estrutura que é um elemento selecionado de:

benziloxi-OCH₂COOH não-substituído, metóxi, etóxi. Em uma modalidade exemplar, existe a condição de que, quando R³ é H, R^a não é benziloxi substituído. Em uma modalidade exemplar, existe a condição de que, quando R³ é H, R^a não é alcóxi não-substituído. Em uma modalidade exemplar, existe a condição de que, quando R³ é H, R^a não é alquiltio substituído não substituído. Em uma modalidade exemplar, existe a condição de que, quando R³ é H, R^a não compreende uma fração de ácido carboxílico.

Em uma modalidade exemplar, existe a condição de que, quando R^a é H, R³ não é cianureto.

Em uma modalidade exemplar, o composto possui a estrutura de acordo com a seguinte fórmula:

em que R^a, R* e R³ são como aqui descritos, e C* é um átomo de carbono, e com a condição de que, quando R³ não é H, C* é um estereocentro que possui uma configuração que é um elemento selecionado de (R) e (S).

Em uma modalidade exemplar, Y é O. Em uma modalidade exemplar, Y é S.

Em outro aspecto, a invenção fornece um composto possuindo uma estrutura de acordo com a fórmula que é um elemento selecionado de:

em aue R* um elemento selecionado de H e uma carga negativa. R^q é um elemento selecionado de H e -SO2-R^b. R^b é um elemento selecionado de fenila não-substituído e piridinila não-substituído. R é um elemento selecionado de H, cianureto, nitroalquila substituído ou não28 substituído e aminoalquila substituído ou não-substituído.

Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula:

em que R^a, R* e R³ são como aqui descritos e C* é um átomo de carbono, e com a condição de que, quando R³ não é H, C* é um estereocentro que possui a configuração que é um elemento selecionado de (R) e (S). Em uma modalidade exemplar, R³ é um elemento selecionado de H, -CH₂NH₂ e -CH₂NO₂. Em outra modalidade exemplar, a invenção possui a seguinte estrutura:

Em uma modalidade preferencial, R³ é -(CR²⁰R²¹)_nNR²²R²³, em que o índice n é um número inteiro selecionado de 1 a 10; cada R²⁰ e cada R²¹ é um elemento selecionado independentemente de H, R²⁶,OR²⁶, NR²⁶R²⁷,

SR²⁶, -S(O)R²⁶, -S(O)2R²⁶, -S(O)2NR²⁶R²⁷, -C(O)R²⁷, -C(O)OR²⁷,

27 22 23

-C(O)NR R , R^zz e IV’ são elementos selecionados independentemente de

H, -S(O)R²⁸, -S(O)2R²⁸, -S(O)2NR²⁸R²⁹, -C(O)R²⁸, -C(O)OR²⁸, -C(O)NR²⁸R²⁹, nitro, halógeno, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não-substituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou nãosubstituído ou heteroarila substituído ou não-substituído, em que cada R²⁶, cada R , cada R e cada R é um elemento selecionado independentemente de H, nitro, halógeno, cianureto, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não substituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não-substituído e heteroarila substituído ou não-substituído. Em uma modalidade exemplar, n é um número inteiro selecionado de 1 a 5. Em uma modalidade exemplar, n é 1. Em uma modalidade exemplar, R²⁰ é alquila substituído ou não-substituído. Em uma modalidade exemplar, R²⁰ é alquila não-substituído. Em uma modalidade exemplar, R²⁰ é alquila C1-C4 nãosubstituído. Em uma modalidade exemplar, R é metila. Em uma modalidade exemplar, R²¹ é H. Em uma modalidade exemplar, R²³ é H. Em uma modalidade exemplar, R³ é um elemento selecionado de cianureto e CH2NO2. Em uma modalidade exemplar, R²² é um elemento selecionado de C(O)R²⁸ e -C(O)OR²⁸. Em uma modalidade exemplar, R²⁸ é um elemento selecionado de um alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído e arila substituído ou não-substituído. Em uma modalidade exemplar, R é um elemento selecionado de -(CR R )_mR , em que R é um elemento selecionado de arila substituído ou não-substituído, NR³³R³⁴ e OR³³, em que o índice m é um número inteiro selecionado de 1 a 10; cada R³³ e cada R³⁴ é um elemento selecionado independentemente de H, nitro, halógeno, cianureto, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou nãosubstituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não-substituído e heteroarila substituído ou não-substituído. Em uma modalidade preferencial, R é um elemento selecionado de

:-O-(CH₃)₃

Em uma modalidade exemplar, R⁵ é

em que o índice a é um elemento selecionado de 1 a 10. Cada R¹⁰ é cada R¹¹ é um elemento selecionado de H, alquila substituído ou nãosubstituído, OH e NH2. R é um elemento selecionado de H, R , halógeno, cianureto, amidino, OR⁷, NR⁷R⁸, SR⁷, -N(R⁷)S(O)2R⁸, -C(O)R⁷, -C(O)OR⁷, C(O)NR R Cada R e cada R é um elemento selecionado independentemente de H, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou nãosubstituído, cicloalquila substituído ou não-substituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não-substituído e heteroarila substituído ou não-substituído. Em uma modalidade exemplar, o índice a é um número inteiro selecionado de 1 a 8. Em uma modalidade exemplar, o índice a é um número inteiro selecionado de 2 a 4. Em uma modalidade exemplar, cada R¹⁰ e cada R¹¹ é um elemento selecionado de H, alquila substituído ou não-substituído, OH e NH2. Em uma modalidade exemplar, cada R¹⁰ e cada R¹¹ é um elemento selecionado de H, hidroxialquila e NH2. Em uma modalidade exemplar, pelo menos um R¹⁰ ou R¹¹ é um elemento selecionado de hidroxialquila e NH2. Em uma modalidade exemplar, cada R¹⁰ e cada R¹¹ é H. Em uma modalidade exemplar, R¹² é um elemento selecionado de H, cianureto, amidino, -N(R⁷)S(O)2R⁸, OR⁷, NR⁷R⁸, -C(O)OR⁷, -C(O)NR⁷R⁸, cada R⁷ e cada R⁸ é um elemento selecionado independentemente de H, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não-substituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou nãosubstituído e heteroarila substituído ou não-substituído. Em uma modalidade exemplar, cada R e cada R é um elemento selecionado independentemente de H, -C(O)R⁹, -C(O)NHR⁹, alquila C1-C4 substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou nãosubstituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não-substituído e heteroarila substituído ou não-substituído, em que R⁹ é um alquila C]-C4 substituído ou não-substituído. Em uma modalidade exemplar, pelo menos um elemento selecionado de R e R é um elemento selecionado independentemente de -C(O)R⁹ e -C(O)NHR⁹, em que R⁹ é um alquila CrC4 substituído ou não-substituído. Em uma modalidade exemplar, R é um elemento selecionado de OH, NH₂, metila, etila, -NHS(O)₂CH₃, cianureto, -NHC(O)CH₃, -NHC(O)NHCH₂CH₃, -C(O)NH₂, -C(O)OH, 4(metóxi)fenila, benzila, -NHC(O)OCH₂Ph, -C(O)NHCH₂CH₂OH e C(NH₂)(NH). Em uma modalidade exemplar, quando R¹² compreende OR⁷, o R⁷ compreende um grupo hidróxi protetor; e quando R¹² compreende NR⁷R⁸, pelo menos um dos R ou R compreende um grupo amino protetor.

Em outra modalidade exemplar, o composto possui a estrutura que é um elemento selecionado de:

em que o índice a é um número inteiro selecionado de 1 a 20 e f '

R é um elemento selecionado de H, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou nãosubstituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não-substituído e heteroarila substituído ou não-substituído. Em outra modalidade exemplar, o índice a é um elemento selecionado de 1 a 10. Em outra modalidade exemplar, a é um elemento selecionado de 1 a 5. Em outra modalidade exemplar, R* é H, R éHeaé um número inteiro selecionado de 2, 3 e 4.

Em outra modalidade preferencial, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado de:

em que a é um número inteiro selecionado de 1 a 20 e R^f é um elemento selecionado de H, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou nãosubstituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído 5 ou não-substituído e heteroarila substituído ou não-substituído. Em outra modalidade exemplar, a é um elemento selecionado de 1 a 10. Em outra modalidade exemplar, a é um elemento selecionado de 1 a 5. Em outra modalidade exemplar, R* é H, R éHeaé um número inteiro selecionado de 2, 3 e4.

Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com

em que R* é como aqui descrito e R^x é um elemento selecionado de um aminoalquila substituído ou não-substituído, hidroxialquila substituído ou não-substituído, carboxialquila substituído ou não-substituído. 15 Em uma modalidade exemplar, R^x é um elemento selecionado de alquila substituído ou não-substituído e heteroalquila substituído ou não-substituído. Em uma modalidade exemplar, R^x é hidroxialquila substituído ou nãosubstituído. Em uma modalidade exemplar, o composto é:

Em outra modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado de:

em que a é um número inteiro selecionado de 1 a 20 e R^f é um elemento selecionado de H, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou nãosubstituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não-substituído e heteroarila substituído ou não-substituído. Em outra modalidade exemplar, a é um elemento selecionado de 1 a 10. Em outra modalidade exemplar, a é um elemento selecionado de 1 a 5. Em outra modalidade exemplar, R* é H, R éHeaé um número inteiro selecionado de

2, 3 e 4.

em que a é um número inteiro selecionado de 1 a 20 e R^f é um elemento selecionado de H, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou nãosubstituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não-substituído e heteroarila substituído ou não-substituído. Em outra modalidade preferencial, a é um elemento selecionado de 1 a 10. Em outra modalidade preferencial, a é um elemento selecionado de 1 a 5. Em outra modalidade exemplar, R* é H, R^f é H e a é um número inteiro selecionado de

2, 3 e 4.

Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura de acordo com

em que R* é como aqui descrito e R^w é um elemento selecionado de aminoalquila substituído ou não-substituído, hidroxialquila substituído ou não-substituído, carboxialquila substituído ou não-substituído. Em uma modalidade exemplar, R^w é um elemento selecionado de alquila substituído ou não-substituído e heteroalquila substituído ou não-substituído. Em uma modalidade exemplar, R^w é hidroxialquila substituído ou nãosubstituído.

9 £

em que a é um número inteiro selecionado de 1 a 20 e R é um elemento selecionado de H, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou nãosubstituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não-substituído e heteroarila substituído ou não-substituído. Em outra modalidade exemplar, a é um elemento selecionado de 1 a 10. Em outra modalidade exemplar, a é um elemento selecionado de 1 a 5. Em outra modalidade exemplar, R* é H, R éHeaé um número inteiro selecionado de 2, 3 e 4.

em que a é um número inteiro selecionado de 1 a 20 e R é um elemento selecionado de H, alquila substituído ou não-substituído, 5 heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou nãosubstituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não-substituído e heteroarila substituído ou não-substituído. Em outra modalidade exemplar, a é um elemento selecionado de 1 a 10. Em outra modalidade exemplar, a é um elemento selecionado de 1 a 5. Em outra 10 modalidade exemplar, R* é H, R éHeaé um número inteiro selecionado de 2, 3 e 4.

R^z
A ?^R*		OR* Q	^/S\	OR* 1
R³	(Ha),	R³ (Ilb),		R³ (IIc)
em	que R^z, R^y, R^x	and R^w são	elementos	selecionados

independentemente de alquila substituído ou não-substituído e heteroalquila o

substituído ou não-substituído. R* e R são como aqui descritos. Em uma modalidade exemplar, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado de:

em que R* é como aqui definido, R^x e R^w são elementos selecionados independentemente de um elemento selecionado de alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não-substituído, heterocicloalquila substituído ou 5 não-substituído, arila substituído ou não-substituído e heteroarila substituído ou não-substituído. Em outra modalidade exemplar, R^x e R^w são elementos selecionados independentemente de alquila substituído ou não-substituído e heteroalquila substituído ou não-substituído. Em outra modalidade exemplar, R^x e R^w são elementos selecionados independentemente de hidroxialquila 10 substituído ou não-substituído. Em outra modalidade exemplar, o composto é:

nh₂ em que R* é como aqui definido.

R^z

em que R* é como aqui definido, R³ é aminoalquíla substituído ou não substituído; R^z, R^y, R^x and R^w são elementos selecionados independentemente de um elemento selecionado de H, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não-substituído, heterocicloalquila substituído ou nãosubstituído, arila substituído ou não-substituído e heteroarila substituído ou não-substituído. Em outra modalidade exemplar, o composto da invenção possui uma estrutura que é um elemento selecionado de

R²

onde R* é conforme aqui definido, b é um número inteiro selecionado entre 1 a 20 e R^z, R^y, R^x, R^w, R^J e R^k é um elemento selecionado a partir de H, alquila substituído ou insubstituído, heteroalquila substituído ou insubstituído, cicloalquila substituído ou insubstituído, heterocicloalquila substituído ou insubstituído, arila substituído ou insubstituído e heteroarila substituído ou insubstituído. Em outra modalidade ilustrativa, b é um elemento selecionado de 1 a 10. Em outra modalidade ilustrativa, b é um elemento selecionado de 1 a 5. Em outra modalidade ilustrativa, B é 1, R^J e R^ké H. Em outra modalidade ilustrativa, pelo menos um elemento selecionado a partir de R^J e R^K é um grupo de proteção amino.

Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui a seguinte estrutura:

onde R*, b, R^j e R^k são como aqui descritos, R^z e R^y são cada elemento independentemente selecionados, a partir de aminoalquila substituído ou insubstituído, hidroxialquila substituído ou insubstituído, carboxialquila substituído ou insubstituído. Em outra modalidade ilustrativa, b 10 é 1, R' e R^k é H. Em outra modalidade ilustrativa, pelo menos um elemento selecionado a partir de R^J e R^k é um grupo de proteção amino. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de

onde R* é como aqui descrito, R^y é H e R^z é um elemento selecionado a partir de aminoalquila substituído ou insubstituído, hidroxialquila substituído ou insubstituído, carboxialquila substituído ou insubstituído. Em uma modalidade ilustrativa, b é 1, R^j e R^k é H. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui a seguinte estrutura:

onde R*, b, R^J e R^k são conforme aqui definido. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de:

NH onde R* é conforme aqui definido. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de:

(CH2)_a
/ ^NH ^H0	Ç)R* O	(CH2)_a / ^NH H₂N	Ç)R* O	(CH₂)_a o/ '	NH	Ç)R* -B_x
				OR^f	w-	O
	ήη₂ 5			>		^NH_:

onde R* é conforme aqui definido, a é um número inteiro selecionado a partir de 1 a 20 e R é um elemento selecionado a partir de H, alquila substituído ou insubstituído, heteroalquila substituído ou insubstituído, cicloalquila substituído ou insubstituído, heterocicloalquila substituído ou 5 insubstituído, arila substituído ou insubstituído e heteroarila substituído ou insubstituído. Em outra modalidade ilustrativa, o índice a é um elemento selecionado a partir de 1 a 10. Em outra modalidade ilustrativa, o índice a é um elemento selecionado a partir de 1 a 5. Em outra modalidade ilustrativa, o composto é um elemento selecionado a partir de

onde R* é conforme aqui definido. Em outra modalidade ilustrativa, o composto é um elemento selecionado a partir de

onde R* é conforme aqui definido. .

Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de:

HO

onde R* é conforme aqui definido. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de:

onde R* é conforme aqui definido, a é um número inteiro selecionado entre 1 a 20 e R é um elemento selecionado a partir de H, alquila substituído ou insubstituído, heteroalquila substituído ou insubstituído, cicloalquila substituído ou insubstituído, heterocicloalquila substituído ou insubstituído, arila substituído ou insubstituído e heteroarila substituído ou insubstituído. Em outra modalidade ilustrativa, a é um elemento selecionado a partir de 1 a 10. Em outra modalidade ilustrativa, a é um elemento f selecionado a partir de 1 a 5. Em outra modalidade ilustrativa, R* é H, R é H e a é um número inteiro selecionado a partir de 2, 3 e 4.

onde R* é conforme aqui definido. . Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de:

onde R* é conforme aqui definido. .

Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de

onde R*, b, R^x, R^j e R^k são conforme aqui definido. Em outra modalidade ilustrativa, pelo menos um elemento selecionado a partir de R^J e 15 R^k é um grupo de proteção amino. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de onde R*, b, R^x, R’ e R^k são como aqui descrito, R^x é um elemento selecionado a partir de aminoalquila substituído ou insubstituído, hidroxialquila substituído ou insubstituído, carboxialquila substituído ou insubstituído. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de:

£

R*, R e a são conforme aqui definido. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de:

	~nh₂ . 5	^nh₂ . 5	''NH.
(CH₂)_a / HO	ÇR* ι o	(CH2)_a / X^ Π₂Ν	T °= 0	(CH₂)_a < OR^f	ÇR* O
	5		nh₂ . 5		ΉΗ

onde R* é conforme aqui definido, a é um número inteiro selecionado entre 1 a 20 e R é um elemento selecionado a partir de H, alquila substituído ou insubstituído, heteroalquila substituído ou insubstituído, cicloalquila substituído ou insubstituído, heterocicloalquila substituído ou insubstituído, arila substituído ou insubstituído e heteroarila substituído ou insubstituído. Em outra modalidade ilustrativa, a é um elemento selecionado a partir de 1 a 10. Em outra modalidade ilustrativa, a é um elemento selecionado a partir de 1 a 5. Em outra modalidade ilustrativa, R* é EI, R^f é H e a é um número inteiro selecionado a partir de 2, 3 e 4.

Onde R* e R^a são conforme aqui descrito. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de:

(CH₂)_a----0	ÇR*	(CH2)_a—-	9 Ç)R*	(CH,)^	~Q Ç>R*
HO		h₂n	^O=
O	O			OR^f
	nh₂. ·>		''NHz. 5		^v~nh₂

onde R* é conforme aqui definido, e a é um número inteiro selecionado entre 1 a 20 e R^fé um elemento selecionado a partir de H, alquila substituído ou insubstituído, cicloalquila substituído ou insubstituído, heterocicloalquila substituído ou insubstituído, arila substituído ou 5 insubstituído e heteroarila substituído ou insubstituído. Em outra modalidade ilustrativa, a é um elemento selecionado a partir de 1 a 10. Em outra modalidade ilustrativa, a é um elemento selecionado a partir de 1 a 5. Em outra modalidade ilustrativa, R é H, R éHeaé um número inteiro selecionado a partir de 2, 3 e 4.

Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui a seguinte estrutura:

onde a e R* são conforme aqui definido, R⁷ é um elemento selecionado a partir de H e um grupo de proteção hidroxi e R^j e R^k são elementos independentemente selecionados a partir de H e um grupo de 15 proteção amino. Em outra modalidade ilustrativa, pelo menos um elemento selecionado a partir de R^J eR^k é um grupo de proteção amino. Em uma modalidade ilustrativa, a é um elemento selecionado a partir de 2, 3 e 4. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui a seguinte estrutura:

R^k onde a e R* são conforme aqui definido, R⁷ é um elemento selecionado a partir de H e um grupo de proteção hidróxi e R’ e R^k são elementos independentemente selecionados a partir de H e um grupo de proteção amino. Em outra modalidade ilustrativa, pelo menos um elemento 5 selecionado a partir de R^J e R^k é um grupo de proteção amino. Em outra modalidade ilustrativa, o índice a é um elemento selecionado a partir de 2, 3 e

4.

Em uma modalidade ilustrativa, o composto é

onde R* é conforme aqui descrito. Em outra modalidade ilustrativa, R* é H. Em uma modalidade ilustrativa, o composto é

onde R* é conforme aqui descrito. Em outra modalidade ilustrativa, R* é H.

Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui a seguinte estrutura:

onde R*, b, R^w, R^j e R^k são conforme aqui definido. Em outra modalidade ilustrativa, pelo menos um elemento selecionado a partir de R^J e R^k é um grupo de proteção amino. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de:

onde R*, b, R' e R^k são como aqui descrito e R^w é um elemento selecionado a partir de aminoalquila substituído ou insubstituído, hidroxialquila substituído ou insubstituído, carboxialquila substituído ou insubstituído. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma 5 estrutura que é um elemento selecionado a partir de:

£ onde R* e R são conforme aqui descrito. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de:

onde R* é conforme descrito aqui, a é um número inteiro selecionado a partir de 1 a 20 e R é um elemento selecionado a partir de H, alquila substituído ou insubstituído, heteroalquila substituído ou insubstituído, cicloalquila substituído ou insubstituído, heterocicloalquila substituído ou insubstituído, arila substituído ou insubstituído e heteroarila substituído ou insubstituído. Em outra modalidade ilustrativa, a é um elemento selecionado a partir de 1 a 10. Em outra modalidade ilustrativa, a é um elemento selecionado a partir de 1 a 5. Em outra modalidade ilustrativa, R* é H, R^f é H e a é um número inteiro selecionado a partir de 2, 3 e 4.

> 5 p

onde R*, R e a são conforme aqui definido. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de:

onde R* é conforme aqui definido, a é um número inteiro selecionado entre 1 a 20 e Rf é um elemento selecionado a partir de H, alquila substituído ou insubstituído, heteroalquila substituído ou insubstituído, cicloalquila substituído ou insubstituído, heterocicloalquila substituído ou insubstituído, arila substituído ou insubstituído e heteroarila substituído ou insubstituído. Em outra modalidade ilustrativa, a é um elemento selecionado a partir de 1 a 10. Em outra modalidade ilustrativa, a é um elemento selecionado a partir de 1 a 5. Em outra modalidade ilustrativa, R* é H, R é H e a é um número inteiro selecionado a partir de 2, 3 e 4.

Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui a seguinte estrutura:

OR*

I

onde R* é conforme aqui definido, e R^J e R^k são elementos independentemente selecionados a partir de H e um grupo de proteção amino. Em outra modalidade ilustrativa, pelo menos um elemento selecionado a partir de R^J e R^k é um grupo de proteção amino.

Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui a seguinte estrutura:

onde R* é conforme aqui descrito. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui a seguinte estrutura:

onde R* é conforme aqui descrito. Em uma modalidade ilustrativa, R* é H. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui a seguinte estrutura:

onde R* é conforme aqui descrito. Em outra modalidade ilustrativa, R* é H.

o onde R* é conforme aqui descrito, R

R^x e R^w substituído ou insubstituído; R^z, R^y, independentemente selecionados a partir insubstituído, heteroalquila substituído é aminoalquila são elementos substituído ou de H, alquila ou insubstituído, cicloalquila substituído ou insubstituído, heterocicloalquila substituído ou insubstituído, arila substituído ou insubstituído e heteroarila substituído ou insubstituído.

onde R* é conforme aqui definido, R^x e R^w são elementos independentemente selecionados a partir de um elemento entre alquila substituído ou insubstituído, heteroalquila substituído ou insubstituído, cicloalquila substituído ou insubstituído, heterocicloalquila substituído ou insubstituído, arila substituído ou insubstituído e heteroarila substituído ou 10 insubstituído. Em uma modalidade ilustrativa, R^x e R^w são elementos independentemente selecionados a partir de alquila substituído ou insubstituído e heteroalquila substituído ou insubstituído. Em uma modalidade ilustrativa, R^x e R^w são elementos independentemente selecionados a partir de hidroxialquila substituído ou insubstituído. Em uma 15 modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de:

Em uma modalidade ilustrativa, R³ é um elemento selecionado • 10 a partir de H, -CH₂NH₂ e -CH₂NO₂; e R é um elemento selecionado a partir de OH, NH₂, metila, etila, -NHS(O)₂CH₃, ciano, -NHC(O)CH₃, 20 NHC(O)NHCH₂CH₃, -C(O)NH₂, -C(O)OH, 4-(trifluorometil)fenila, 4(metoxi)fenila, benzila, -NHC(O)OCH₂Ph, -C(O)NHCH₂CH₂OH e C(NH₂)(NH). Em uma modalidade ilustrativa, R é um elemento selecionado a partir de H, -CH₂NH₂ e -CH₂NO₂; e R^a é um elemento selecionado a partir de H, -O(CH₂)₃NH₂, -O(CH₂)₃OH, -OCH₂CH₃, -O(CH₂)₃NHS(O)₂CH₃, O(CH₂)₃CN, -O(CH₂)₃NHC(O)CH₃, -O(CH₂)₃NHCH₃, -O(CH₂)₃OCH₃, O(CH₂)₄OH, -OCH₃, -O(CH₂)₃NHC(O)NHCH₂CH₃, -O(CH₂)₃C(O)NH₂, O(CH₂)₃C(O)OH, -C(O)NHCH₂Ph(4-CF₃), -O(CH₂)₄NH₂, -O(CH₂)₂NH₂, 5 OCH₂CH₂CH(NH₂)CH₂OH, -OCH₂Ph(4-metoxi), -O(CH₂)₄OCH₂Ph, O(CH₂)₃NHC(O)OCH₂Ph, -OCH₂C(O)NH(CH₂)₂OH, -O(CH₂)₃NHC(O)CH₃, -O(CH₂)₃C(NH₂)(NH), -C(O)OCH₃, -OCH₂C(O)OH e OCH₂CH(CH₂OH)(CH₂)OH.

Em uma modalidade ilustrativa, quando R³ é H, R^a é um elemento selecionado a partir de -O(CH₂)₃NH₂, -O(CH₂)₃NHS(O)₂CH₃, O(CH₂)₃CN, -O(CH₂)₃NHC(O)CH₃, -O(CH₂)₃NHCH₃, -O(CH₂)₄OH, O(CH₂)₃NHC(O)NHCH₂CH₃, -O(CH₂)₃C(O)NH₂, -O(CH₂)₃C(O)OH, O(CH₂)₄NH₂, -O(CH₂)₂NH₂, -OCH₂CH₂CH(NH₂)CH₂OH, -OCH₂Ph(4metoxi), -O(CH₂)₄OCH₂Ph, -OCH₂C(O)NH(CH₂)₂OH e

OCH₂CH(CH₂OH)(CH₂)OH. Em uma modalidade ilustrativa, onde R³ é CH2NH2, R^a é um elemento selecionado a partir de H, -O(CH2)₃OH, OCH₂CH₃, -O(CH₂)₃OCH₃, -OCH₃, -O(CH₂)₄NH₂, -O(CH₂)₃NHS(O)₂CH₃, O(CH₂)₃NHC(O)OCH₂Ph, -O(CH₂)₃NHC(O)CH₃, -O(CH₂)₃NH₂. Em uma modalidade ilustrativa, quando R³ é -CH2NO2, R^a é um elemento selecionado 20 a partir de -O(CH2)₃CN e -OCH₂CH₃. uma modalidade ilustrativa, quando R³é H, R^a é um elemento selecionado a partir de -O(CH₂)₃NH₂, O(CH₂)₃NHS(O)₂CH₃, -O(CH₂)₃CN, -O(CH₂)₃NHC(O)CH₃, O(CH₂)₃NHCH₃, -O(CH₂)₄OH, -O(CH₂)₃NHC(O)NHCH₂CH₃, O(CH₂)₃C(O)NH₂, -O(CH₂)₃C(O)OH, -O(CH₂)₄NH₂, -O(CH₂)₂NH₂, 25 OCH₂CH₂CH(NH₂)CH₂OH. Em uma modalidade ilustrativa, quando R³ é CH2NH2, R^a é um elemento selecionado a partir de H, -O(CH2)₃OH, OCH₂CH₃, -O(CH₂)₃OCH₃, -OCH₃. Em uma modalidade ilustrativa, quando

R³ é H, R^a é um elemento selecionado a partir de -O(CH₂)₃NH₂, -O(CH₂)₃CN,

-O(CH₂)₃NHC(O)CH₃, -O(CH₂)₃NHCH₃. Em uma modalidade ilustrativa, quando R³ é -CH2NH2, R^a é um elemento selecionado a partir de H, O(CH2)₃OH e -OCH₂CH₃.

Em uma modalidade ilustrativa, o composto é

onde R* é conforme aqui descrito. Em outra modalidade ilustrativa, o composto é um elemento selecionado a partir de

onde R* é conforme aqui descrito.

Em uma modalidade ilustrativa, o composto é

onde R* é conforme aqui descrito.

Em outra modalidade ilustrativa, o composto é um elemento selecionado a partir de

onde R* é conforme aqui descrito.

Em uma modalidade ilustrativa, R* é H. Em uma modalidade ilustrativa, o estereocentro C* está em uma configuração em que é um elemento selecionado a partir de (R) e (S). Em uma modalidade ilustrativa, o estereocentro C* está em uma configuração (S). Em uma modalidade ilustrativa, o estereocentro C* está em uma configuração (S) e R³ é -CH₂NH₂. Em uma modalidade ilustrativa, o estereocentro C* está em uma configuração (S), R³ é -CH2NH2 e R^a é um elemento selecionado a partir de H e O(CH2)₃OH.

Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito aqui ou seu sal, hidrato ou solvato ou sua combinação. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito aqui ou seu sal, hidrato ou solvato. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito aqui ou seu sal. Em uma modalidade ilustrativa, o sal é um sal farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito aqui ou seu hidrato. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito aqui ou seu solvato. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito aqui ou sua pró-droga. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um sal de um composto descrito aqui. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um sal farmaceuticamente aceitável de um composto descrito aqui. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um hidrato de um composto descrito aqui. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um solvato de um composto descrito aqui. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta uma pródroga de um composto descrito aqui. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito na Figura 1 ou Figura 2.

Em uma modalidade ilustrativa, alquila é um elemento selecionado a partir de alquila linear e ramificada. Em uma modalidade ilustrativa, heteroalquila é um elemento selecionado a partir de heteroalquila linear e heteroalquila ramificada.

III. b) Composições que envolvem estereoisômeros

Conforme utilizado aqui, o termo “quiral, enantiomericamente enriquecido ou diastereomericamente enriquecido se referem a uma composição com um excesso enantiomérico (ee) ou um excesso diastereomérico superior a cerca de 50%, de preferência superior a cerca de 70% e mais preferencialmente superior a cerca de 90%. Em geral, é preferido mais de 90% de excesso enantiomérico ou diastereomérico, por exemplo, aquelas composições com mais de cerca de 95%, mais de cerca de 97% e mais de cerca de 99% ee ou de.

Os termos “excesso enantiomérico” e “excesso diastereomérico” são usados aqui de forma intercambiável. Os compostos com um único estereocentro são referidos como presentes em excesso enantiomérico, aqueles com pelo menos dois estereocentros são referidos como presentes em excesso diastereomérico”.

O termo “excesso enantiomérico” é bem conhecido na técnica e é definido como:

ee_a ' conc. of a conc. of 4 yonc. of a + conc. of b_y

100

O termo “excesso enantiomérico” está relacionado ao termo anterior “pureza óptica” em que ambos são medidas do mesmo fenômeno. O valor de ee será um número entre 0 a 100, zero sendo racêmico e 100 sendo enantiomericamente puro. Uma composição que no passado seria 98% opticamente pura é agora caracterizada mais precisamente por 96% ee. 90% ee mostra a presença de 95% de um enantiômero e 5% de outro(s) no material em questão.

Portanto, em uma modalidade, a invenção apresenta uma composição incluindo um primeiro estereoisômero e, pelo menos, um estereoisômero adicional de um composto da invenção. O primeiro estereoisômeri pode estar presente em um excesso diastereomérico ou enantiomérico de pelo menos cerca de 80% ou, pelo menos, cerca de 90%, ou pelo menos cerca de 92% ou pelo menos cerca de 95%. Em outra modalidade ilustrativa, o primeiro estereoisômeri pode estar presente em um excesso diastereomérico ou enantiomérico de pelo menos cerca de 96% ou, pelo menos, cerca de 97%, ou pelo menos cerca de 98% ou pelo menos cerca de 99% ou pelo menos cerca de 99,5%. Em outra modalidade, o composto da invenção é enatiomericamente ou diastereomericamente puro (excesso diastereomérico ou enantiomérico é cerca de 100%). O excesso enantiomérico ou diastereomérico podem ser determinado com relação à outro estereoisômero ou podem ser determinado com relação à soma de, pelo menos, dois outros estereoisômeros. Em uma modalidade ilustrativa, o excesso enantiomérico ou diastereomérico é determinado com relação a todos os outros estereoisômeros detectáveis que estão presentes na mistura. Os estereoisômeros são detectáveis se uma concentração de tal estereoisômero na mistura analisada possa é determinada usando os métodos de análise comum, tais como HPLC quiral.

Como aqui utilizado, e salvo indicação em contrário, uma composição que é substancialmente livre de um composto significa que a composição contém menos que cerca de 20%, em peso, menos que cerca de 15% em peso, menos que cerca de 10% em peso, ou menos que cerca de 5% em peso, menos que cerca de 3% em peso, ou menos que cerca de 2% em peso, ou menos que cerca de 1% em peso do composto.

Conforme utilizado aqui, o termo substancialmente livre de (ou seu) enantiômero significa que a composição contendo um composto da invenção é composto por uma proporção significativamente maior de um enantiômero do que do seu antípoda óptico. Em uma modalidade da invenção, o termo substancialmente livre do enantiômero significa que o composto é feito de pelo menos cerca de 90% em peso do enantiômero (S) e cerca de 10% em peso ou menos de estereoisômero (R). Em uma modalidade preferida da invenção, o termo substancialmente livre do enantiômero significa que o composto é feito de pelo menos cerca de 95% em peso do enantiômero (S) e cerca de 5% em peso ou menos de estereoisômero (R). Em uma modalidade preferida da invenção, o termo substancialmente livre do enantiômero significa que o composto é feito de pelo menos cerca de 98% em peso do enantiômero (S) e cerca de 2% em peso ou menos de estereoisômero (R). Em uma modalidade preferida da invenção, o termo substancialmente livre do enantiômero significa que o composto é feito de pelo menos cerca de 99% em peso do enantiômero (S) e cerca de 1% em peso ou menos de estereoisômero (R).

Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta uma composição que compreende a) um primeiro estereoisômero de um composto descrito aqui, onde R não é H; b) pelo menos um estereoisômero adicional do primeiro estereoisômero, onde o primeiro estereoisômero está presente em um excesso enantiômero de pelo menos 80% em relação a pelo menos um estereoisômero adicional. Em uma modalidade ilustrativa, o excesso enantiomérico é, pelo menos, 92%. Em uma modalidade ilustrativa, o estereocentro C* do primeiro estereoisômero está em uma configuração (S). Em uma modalidade ilustrativa, o estereocentro C* do primeiro estereoisômero está em uma configuração (S) e R³ está -CH₂NH₂.

Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta uma composição que compreende um composto da invenção, onde R não é H e o estereocentro C* está em uma configuração (S) e tal composição é substancialmente livre de enantiômero do composto. Em uma modalidade ilustrativa, a composição compreende A2, A49 ou suas combinações, onde a composição é substancialmente livre do enantiômero de A2 ou A49. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta uma composição que compreende um composto aqui descrito, onde R³ não é H e o estereocentro C* está em uma configuração (R).

III.c) Combinações que compreendem agentes terapêuticos adicionais

Os compostos da invenção também podem ser utilizados em combinação com os agentes terapêuticos adicionais. Portanto, a invenção apresenta, em outro aspecto, uma combinação que compreende um composto descrito aqui, ou seu sal farmaceuticamente aceitável, juntamente com pelo menos um agente terapêutico adicional. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um composto da invenção. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional inclui um átomo de boro. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional não contém um átomo de boro. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um composto descrito na seção III c).

Quando um composto da invenção é utilizado em combinação com um segundo agente terapêutico ativo contra o mesmo estado de doença, a dose de cada composto pode diferir daquele quando o composto é usado sozinho. São consideradas as doses apropriadas por aqueles versados na técnica. Será considerado que a quantidade de um composto da invenção requerida para uso em tratamento varia de acordo com a natureza da patologia a é tratada e a idade e a doença do paciente e ficará, por fim, a critério do médico assistente ou veterinário. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um antibiótico. Exemplos de classes de antibióticos que podem ser utilizados na aplicação incluem um aminoglicosídeo, um ansamicina, um carbacefeno, um carbapenem, uma cefalosporina de primeira geração, uma cefalosporina de segunda geração, uma cefalosporina de terceira geração, uma cefalosporina de quarta geração, um cefalosporina de quinta geração, um glicopeptídeo, um macrolídeo, quinolona, uma sulfonamida e tetraciclina. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um elemento selecionado a partir de amicacina, gentamicina, canamicina, neomicina, netilmicina, estreptomicina, tobramicina, paromomicina. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um elemento selecionado a partir de geldanamicina e herbimicina. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é loracarbef. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um elemento selecionado a partir de ertapenem, doripenem, imipenem, cilastatina e meropenem. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um elemento selecionado a partir de cefadroxila, cefazolina, cefalotina e cefalexina. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um elemento selecionado a partir de cefaclor, cefamandol, cefoxitina, cefprozila e cefuroxima. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um elemento selecionado a partir de cefixima, cefdinir, cefditoren, cefoperazona, cefotaxima, cefpodoxima, ceftazidima, ceftibuten, ceftizoxima e ceftriaxona. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é cefepima. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é ceftobiprola. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um elemento selecionado a partir de teicoplanina e vancomicina. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um elemento selecionado a partir de azitromicina, claritromicina, diritromicina, eritromicina, roxitromicina, troleandomicina, telitromicina e espectinomicina. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é aztreonam. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é amoxicilina, ampicilina, azlocilina, carbenicilina, cloxacilina, dicloxacilina, flucloxacilina, mezlocilina, meticilina, nafcilina, oxacilina, penicilina, piperacilina e ticarcilina. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um elemento selecionado a partir de bacitracin, colistina e polimixina B. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um elemento selecionado a partir de ciprofloxacina, enoxacina, gatifloxacina, levofloxacina, lomefloxacina, moxifloxacina, norfloxacina, ofloxacina e trovafloxacina. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um elemento selecionado a partir de mafenida, prontosila, sulfacetamida, sulfametizol, sulfanilimida, sulfasalazina, sulfisoxazol, trimetoprim e sulfametoxazol. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um elemento selecionado a partir de demeclociclina, doxiciclina, minociclina, oxitetraciclina e tetraciclina. Em uma modalidade ilustrativa, o agente terapêutico adicional é um elemento selecionado a partir de arsfenamina, cloramfenicol, lincomicina, etambutol, fosfomicina, ácido fusídico, furazolidona, isoniazid, linezolid, metronidazol, mupirocin, nitrofurantoin, platensimicina, pirazinamida, quinupristin, rifampin e tinidazol.

Os compostos da invenção ou suas formulações farmacêuticas podem também é utilizadas em combinação com outros agentes terapêuticos, por exemplo, as terapias imunes [por exemplo, interferon, tais como interferon alfa-2a (ROFERON®-A; Hoffmann-La Roche), interferon alfa-2b (INTRON®-A; Schering-Plough), interferon alfacon-1 (INFERGEN®; Intermune), peginterferon alfa-2b (PEGINTRON™; Schering-Plough) ou peginterferon alfa-2a (PEGASYS®; Hoffmann-La Roche)], vacinas terapêuticas, agentes antifibróticos, agentes anti-inflamatórios [tais como corticosteróides ou NSAIDs], broncodilatadores [tais como beta-2 agonistas adrenérgicos e xantinas (por exemplo, teofilina)], agentes mucolíticos, antimuscarínicos, anti-leucotrienos, inibidores de adesão celular [por exemplo, antagonistas de ICAM], anti-oxidantes [por exemplo, N-acetilcisteína], agonistas citocinas, antagonistas citocinas, surfactantes pulmonares e/ou antimicrobiais. As composições de acordo com a invenção podem também é utilizadas em combinação com a terapia de substituição de gene.

Os componentes individuais de tais combinações podem ser administrados seja simultaneamente ou sequencialmente em uma forma de dosagem unitária. A forma de dosagem unitária podem ser uma forma de dosagem unitária simples ou múltipla. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta uma combinação em uma forma de dosagem unitária simples. Um exemplo de uma forma de dosagem unitária é uma cápsula onde tanto o composto da invenção e o agente terapêutico adicional estão contidos na mesma cápsula. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta uma combinação de duas formas de dosagem unitárias. Um exemplo de duas formas de dosagem unitárias é uma primeira cápsula que contém o composto da invenção e uma segunda cápsula que contém o agente terapêutico adicional. Portanto, o termo ‘unidade simples’ ou ‘duas unidades’ ou ‘unidade múltipla’ se refere ao objeto em que o paciente ingere, não para os componentes do interior do objeto. São consideradas as doses apropriadas de agentes terapêuticos conhecidos por aqueles versados na técnica.

As combinações aqui citadas podem ser convenientemente apresentadas para uso sob a forma de uma formulação farmacêutica. Assim, uma modalidade ilustrativa da invenção é uma formulação farmacêutica compreendendo a) um composto da invenção; b) um agente terapêutico adicional e c) um excipiente farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade ilustrativa, a formulação farmacêutica é uma forma de dosagem unitária. Em uma modalidade ilustrativa, a formulação farmacêutica é uma forma de dosagem unitária simples. Em uma modalidade ilustrativa, a formulação farmacêutica é uma forma de dosagem com duas unidades. Em uma modalidade ilustrativa, a formulação farmacêutica é uma forma de dosagem com duas unidades que compreendem uma primeira forma de dosagem unitária e segunda forma de dosagem unitária, onde a primeira forma de dosagem unitária inclui a) um composto da invenção e, b) um primeiro excipiente farmaceuticamente aceitável, e uma segunda forma de dosagem unitária inclui c) um agente terapêutico adicional e d) um segundo excipiente farmaceuticamente aceitável.

III. d) Compostos adicionais da invenção

Os compostos adicionais da invenção incluem aquelas formadas entre 2'-3'-diol do anel ribose de um ácido nucléico, nucleosídeos ou nucleotídeos, e um composto descrito aqui ou de acordo com uma fórmula descrita aqui. Em uma modalidade ilustrativa, o composto é um éster cíclico ou acíclico tais como aqueles descritos aqui. Estes compostos podem ser usados em um animal para exterminar ou inibir o crescimento de um microorganismo aqui descrito, bem como para tratar as doenças aqui descritas. Esses compostos podem ser formados in vitro e in vivo. Os métodos 5 de preparação desses compostos são apresentados na seção Exemplos.

Em outro aspecto, a invenção fornece um composto de uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula:

onde R^a e R³ são conforme aqui descrito. L é um elemento selecionado a partir de OR⁷, purina substituído ou insubstituído, pirimidina 10 substituído ou insubstituído, piridina substituído ou insubstituído e imidazol substituído ou insubstituído. R⁷ é um elemento selecionado a partir de H, alquila substituído ou insubstituído, heteroalquila substituído ou insubstituído, cicloalquila substituído ou insubstituído, arila substituído ou insubstituído e heteroarila substituído ou insubstituído. A é um elemento selecionado a partir de OH, monofosfato substituído ou insubstituído, difosfato substituído ou insubstituído, trifosfato substituído ou insubstituído, o

A*--o--Po o-;e o oo

II IIII

A*---O---P---O---citidina —o---P---O---citidina---O---PO.

I IIV o oo

A* é uma sequência de ácido nucléico que compreende entre 1 e 100 nucleotídeos.

Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui a seguinte estrutura de acordo com a fórmula:

onde L e A são conforme aqui descrito. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de

onde L e A são conforme aqui descrito.

III. e) Formulações com queratina

Quando um composto da invenção é aplicado a um

componente de unha de um é humano, o composto absorve ou penetra na unha. A unha humana é essencialmente composta por queratina (ou seja, queratina de cabelo ou α-queratina), bem como quantidades de traços de componentes lipídicos. Portanto, no processo de tratamento de uma doença da unha ou para exterminar ou inibir o crescimento de um microorganismo, uma formulação que inclui uma unidade da unha humana e um composto da invenção é formada.

Em outro aspecto, a invenção apresenta uma formulação que compreende: (a) um composto da invenção (b) uma queratina contendo um componente de um animal. Em uma modalidade ilustrativa, o composto da invenção é um composto aqui descrito ou um sal farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade ilustrativa, o composto da invenção apresenta um composto descrito em uma fórmula aqui apresentada. Em uma modalidade ilustrativa, o composto da invenção é um composto descrito aqui. Em uma modalidade ilustrativa, a queratina que contém um componente de um animal é um elemento selecionado a partir de uma unidade da unha de um animal, pele e cabelo. Em uma modalidade ilustrativa, o composto da peça (a) entra em contato com o componente da peça (b). Em uma modalidade ilustrativa, o animal é um humano. Em uma modalidade ilustrativa, a queratina que contém componente é a lâmina ungueal da unidade da unha de um humano. Em uma modalidade ilustrativa, a queratina que contém componente é um leito ungueal da unidade da unha de um humano. Em uma modalidade ilustrativa, a queratina que contém componente é uma cutícula da unidade da unha de um humano. Em uma modalidade ilustrativa, a queratina que contém o componente é a paroníquia da unidade da unha de um humano. Em uma modalidade ilustrativa, a unidade da unha humana compreende um elemento selecionado a partir da queratina e lipídio. Em uma modalidade ilustrativa, a queratina é um elemento selecionado a partir da queratina da pele e queratina do cabelo/unha. Em uma modalidade ilustrativa, o lipídio é um elemento selecionado a partir de sulfato de colesterol, cerebrosídio, ceramida, esterol livre, ácidos graxos livres, triglicerídeos, ésteres esteróis, ésteres de cera e esqualeno.

Em uma modalidade ilustrativa, o composto está presente na formulação a uma concentração que é um elemento selecionado a partir de 0,001%, cerca de 0,01%, cerca de 0,05%, cerca de 0,1%, cerca de 0,5%, cerca de 1%, cerca de 1,5%, cerca de 2%, cerca de 2,5%, cerca de 3%. Em uma modalidade ilustrativa, a queratina está presente na formulação a uma concentração que é um elemento selecionado a partir de 99,99%, cerca de 99,95%, cerca de 99,90%, cerca de 99,5%, cerca de 99,0%, cerca de 98.,5%, cerca de 98,0%, cerca de 97,5% e cerca de 97%. Em uma modalidade ilustrativa, o composto da invenção é um composto aqui descrito ou um sal farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade ilustrativa, o composto é conforme aqui descrito. Em outra modalidade ilustrativa, o composto que é um elemento selecionado a partir de

é apresentado e tal formulação em uma concentração que é um elemento selecionado a partir de 0,001%, cerca de 0,01%, cerca de 0,05%, cerca de 0,1%, cerca de 0,5%, cerca de 1% e cerca de 1,5%.

Em outro aspecto, a invenção fornece um método de elaboração desta formulação, onde o referido método compreende aplicar tal composto a uma formulação que compreende queratina, formando tal formulação. Em uma modalidade ilustrativa, a formulação que compreende queratina é uma unidade de unha humana. Em uma modalidade ilustrativa, a formulação que compreende queratina é um elemento selecionado a partir de lâmina ungueal, leito ungueal, cutícula e paroníquia. Os métodos de preparação dessas formulações são descritos nas seções Exemplos.

E preciso entender que a presente invenção abrange todas as combinações de elementos e/ou modalidades, bem como grupos adequados, convenientes e preferidos aqui descritos.

III-f) Preparação de Inibidores de domínio de edição que contém boro

Os compostos de utilização na presente invenção podem ser preparados com matérias-primas disponíveis comercialmente, intermediários conhecidos, ou usando os métodos de síntese publicados em referências descritas e incorporadas por referência neste documento, como Publicações de Patente U.S. US20060234981, US20070155699 e US20070293457.

Os seguintes procedimentos gerais foram utilizados como indicados na geração de exemplos e podem ser aplicados, utilizando o conhecimento daquele versado na técnica, a outros compostos adequados para obter análogos adicionais.

Procedimento geral 1: Sulfonilação de Amino 3H-benzo[c] Γ12 loxaborol-l-óis

Através das condições de sulfonilação, o composto 1* podem ser convertido em composto 2*.

Em algumas aplicações deste procedimento geral, fenila insubstituído ou cloreto de sulfonila piridinila insubstituído (1-1,2 equiv) e uma base (tais como NMM, K₂CO₃ ou piridina 3-4 equiv) foram adicionadas seqüencialmente a uma solução da amina em MeCN (20 mL/g) a rt. Após a conclusão (duração normal O/N) os voláteis foram removidos in vácuo. H₂O foram adicionados ao resíduo e a mistura ajustada a ~ pH 6 com HCl diluído.

de etila) e as frações orgânicas secas combinadas com um de ssecante, como Na₂SO₄ e MgSO₄, filtrada e concentrada sob vácuo. O produto é geralmente purificado por recristalização de H₂O, trituração com CH₂C1₂ ou EtOAc, ou cromatografia rápida.

Procedimento geral 2: Desproteção de Alcoóis ou Tióis protegidos por benzila

R⁵YBn

3*

Pd(OH)₂/C, AcOH

H₂ (276-345 kPa), t.a.

r⁵yh

4*

Através das condições de desproteção, o composto 3* podem ser convertido em composto 4*.

A mistura de álcool benzilado ou tiol (equiv. a 1) e 20% Pd (OH)₂ sobre carbono (50% de peso molhado, 1:2 p/p de substrato para catalisador) em AcOH glacial (10 mL/g) foi agitada sob uma atmosfera de H₂(40-50 psi) em um agitador Parr. Uma vez que a reação foi concluída (TLC), a mistura foi filtrada por Celite. O filtrado foi concentrado in vácuo e o AcOH remanescente foi removido por co-evaporação com tolueno (3 x) para produzir o álcool. Foi realizada ainda purificação por cromatografia rápida ou HPLC preparativo, conforme requerido.

Procedimento geral 3: Alquilação de Fenol ou Tiofenol utilizando as condições de Mitsunobu

Y=OouS

Br

6*

CHO

Através das condições de Mitsunobu, o composto 5* podem ser convertido em composto 6*.

DIAD (1 equiv) foi adicionado a uma solução de fenol ou tiofenol (1 equiv) e PPh₃ (1 equiv) em THF anidro (200 mL/7 g fenol). A mistura foi agitada a rt até que a reação fosse concluída (conforme determinado por TLC). A mistura foi então concentrada a vácuo. Foi adicionado Et₂O ao resíduo e a mistura foi então concentrada a vácuo. Foi adicionado Et₂O novamente e o precipitado formado foi removido por filtração. O filtrado foi extraído com 2 N NaOH e H₂O. A camada orgânica foi seca (Na₂SC>4) e concentrada a vácuo. O resíduo foi ainda purificado por cromatografia rápida.

Procedimento geral 4: Alquilação de fenol ou tiofenol com brometo de alquila e mesilato de alquila

r⁵ch₂x,z₂co₃

DMF, 50-80 °C

X= Br, O Ms Y - O ou S

Z= K,Cs

Uma solução de haleto ou mesilato de alquila (equiv. 1-1.5), 2bromo-3-hidroxi-benzaldeído ou 2-bromo-3-mercapto-benzaldeído (equiv. 1), e uma base, como K₂CC>3 (1-1,2 equiv) ou Cs2CC>3 (equiv. 1.5-2), em um solvente aprótico como DMF foi agitada a 50-80° C (temperatura de banho) até que a reação fosse concluída (normalmente O/N). A mistura da reação foi resfriada a rt, diluída com H₂O e extraída com um solvente tal como EtOAc.

As frações orgânicas foram lavadas com H₂O e, em seguida, com salmoura, secas com dessecante tal como MgSOq e concentradas a vácuo. Foi realizada outra purificação por cromatografia rápida, se necessário.

Procedimento Geral 5: Borilação de haleto e triflato de arila

B₂Pin₂, KOAc, PdCI₂(dppf)*CH₂CI₂dioxano,desgaseificado, 80-1 00 °C

X = Br ou OTf

Através das condições de borilação, o composto 7* podem ser convertido em composto 8*.

Uma solução de brometo ou triflato de arila em 1-4-dioxano (20 mL/ 1 g) foi adicionado B₂pin₂ (equiv. 2) e KOAc (equiv. 3) a RT, em seguida, desgaseificada com N₂ por 10 a 40 min. Foi adicionado PdCl₂(dppf)*CH₂Cl₂ (4-8 mol%) e a solução resultante foi agitada a 80-100 °C até que a reação fosse concluída (2 a 16 h). A solução foi resfriada a rt e diluída com EtOAc. A camada orgânica foi então lavada com H₂O e, em seguida, com salmoura, seca (Na₂SO₄), filtrada e concentrada a vácuo. O produto foi purificado por cromatografia rápida.

Procedimento geral 6: Borilação de Fenóis ou Tiofenóis através de Triflatos de arila

1. Tf20, pyr., CH₂CI₂

2. PdCI₂(dppf)*CH₂CI₂B₂Pin_2l KOAc, dioxano desgaseificado, 80-100 ° C

Através das condições de borilação, o composto 9* podem ser convertido em composto 8*.

Foi adicionado anidrido trifluorometanosulfónico (equiv. a

1,2) gota a gota a uma solução de piridina (equiv. a 1,2) e o fenol em CFI₂C1₂(40 mL/8,6 g) a 0^o C (temperatura de banho). A mistura da reação podem ser então aquecida a rt e agitada até o consumo completo de material de partida (como determinado por TLC). Em seguida, foram adicionados Et₂O e 2 N

HC1. A camada orgânica foi separada e lavada com sal. NaHCO₃ e salmoura.

A camada orgânica foi seca (Na₂SO₄) e filtrada por plug em gel sílica curto, lavada com Et₂O. O filtrado foi concentrado a vácuo para produzir o triflato desejado que foi usado diretamente no procedimento geral 5.

Procedimento geral 7: Anel de fechamento de 2-(4-4-5-5Tetrametil-[ 1-3-2] dioxaborolan-2-U)-benzaldeídos substituído

NaBH₄, EtOH, 0 °C

Através das condições de anel de fechamento, o composto 8* podem ser convertido em composto 10*.

Foi adicionado NaBEU (1.5 equiv) porção por porção a uma solução de gelo de aldeído em álcool (em geral, EtOH absoluta ou anidro MeOH (c = 0.1 Μ). A reação podem ser aquecida a rt e monitorada por TLC. A mistura foi então acidificada a ~ pH 3 utilizando 1 N NaHSO4 ou 2 M HC1 e agitada O/N. O precipitado foi coletado por filtração, lavado repetidamente com H₂O e seco a vácuo. Foi realizada outra purificação por cromatografia rápida, quando necessário.

Procedimento geral 8: Reação de Henry de 2-(4-4-5-5Tetrametil-[ 1-3-21 dioxaborolan-2il)-benzaldeídos substituído

MeNO₂, NaOH, H₂O

Através das condições de reação de Henry, o composto 8* podem ser convertido em composto 11*.

Foi adicionado NaOH aq. (1.0 equiv) ao aldeído (seja em H₂O ou THF) a rt e a mistura da reação foi agitada a rt por 5 min. Foi adicionado MeNO₂ (3 equiv) gota a gota e a mistura foi agitada a rt por 16 h. A mistura da reação foi acidificada com 2 N HC1 e extraída com EtOAc. A fração orgânica foi lavada com H₂O e, em seguida, com salmoura, seca (MgSO₄) e concentrada a vácuo. A purificação foi, em geral, realizada por cromatografia rápida ou precipitação da mistura da reação acidificada.

Procedimento geral 9: Reação de Henry utilizando Catalisador de transferência de fase de 2-(4-4-5-5-Tetrametil-fl-372

]dioxaborolan-2il)-benzaldeídos substituído

MeNO₂, NaOH CTAB ou CTACI

THF. H₂O, t.a.

Foi adicionado CTAB ou CTACI (5 mol%) à mistura de MeNO₂ e aldeído, em NaOH aq. e THF (1 mL/300 mg aldeído) a rt. A reação foi monitorada por TLC. Após a conclusão (em geral, 1-1,5 h), a mistura foi ajustada para pH 2-3 utilizando 2 N HC1 ou 1 M NaHSO4 e a mistura foi então agitada durante 30 min. O sólido foi filtrado e seco para produzir o composto nitro desejado que foi utilizado diretamente na próxima etapa. Se não houver precipitação, o material orgânico foi extraído a partir da mistura de reação com EtOAc. A camada orgânica foi seca (MgSO4) e concentrada a vácuo. O resíduo foi ainda purificado por cromatografia rápida.

Procedimento geral 10: Redução de compostos de Nitro alquila e/ou Nitrila alquila para aminas protegidas por N-Boc.

NíCI₂, NaBH₄

Boc₂0, MeOH

RNO₂ouRCN -------------* RNHBoc

12* 13*

Através das condições de redução, o composto 12* podem ser convertido em composto 13*.

Foram adicionados Boc₂O (2 equiv) e NiCl₂»6H₂O (1 equiv) a uma solução agitada de nitro alquila ou nitrila alquila em MeOH anidro (3 mL/mmol) a rt. A agitação permaneceu até que a maioria de NiCl₂ fosse dissolvida em MeOH (em geral, -10 min). A mistura da reação foi então resfriada a 0 °C (temperatura de banho) e foi adicionado NaBEfi (6 equiv) porção por porção durante 10 min. A reação foi exotérmica, efervescente e resultou na formação de um precipitado preto dividido finamente. A mistura da reação podem ser aquecida a rt e deixada para agitação O/N. A mistura foi então concentrada a vácuo e o resíduo foi diluído com EtOAc. A suspensão resultante foi filtrada através de Celite e o filtrado foi concentrado a vácuo. O resíduo foi ainda purificado por cromatografia rápida, quando necessário.

Procedimento geral 11: Desproteção de aminas protegidas por Boc

1M HCI/Et₂O ou

4M HCI/dioxano

R-NHBoc ------------R-NH₂HCI

13* 14*

Através das condições de desproteção, o composto 13* podem ser convertido em composto 14*.

A mistura de amina protegida A-Boc e foi agitado 1 M HC1 em Et₂O ou 4 M HC1 em dioxano (2 mL/mmol) a rt. Após o consumo completo de material de partida (monitorado por TLC, em geral, 3-16 h), a mistura foi concentrada a vácuo e o resíduo cru foi triturado com Et₂O e filtrado. Se necessário, o produto final foi purificado por HPLC preparativo.

Procedimento geral 12: Redução de Nitro alquila e/ou Nitrila alquila usando níquel de Raney

Raney Ni, H₂(276-345 kPa)

M NH₃ em EtOH, EtOH

RN0₂ou RCN ------------------- RNH₂

12* 15*

Através das condições de redução, o composto 12* podem ser convertido em composto 15*.

Uma mistura de 3-nitromctil-3/7-benzo[c][l-2]oxaborol-l-ol, Ni Raney (2 equiv w/w), 2.0 M NH₃ em EtOH (5 mL/Ι g), e EtOH absoluto (20 mL/Ι g) foi agitado sob uma atmosfera de H₂ (40-50 psi) para 3 h a rt. A mistura resultante foi filtrada através de um caminho de Celite e lavada com EtOH. O filtrado foi concentrado a vácuo para produzir a amina livre.

Procedimento geral 13: Redução de 3-nitrometil-3Hbenzo[c] [1-2] oxaborol-l-óis substituído utilizando Catalisador Pearlman.

R^a	OH	1^a ,^0H
	Pd (0 HJa/C. H₂ (276-345 kPa), AcOH	[I Ι,ο

11*	no₂	16* MMH

Através das condições de redução, o composto 11 * podem ser convertido em composto 16*.

A mistura de 3-nitrometil-3//-benzo[c][l-2]oxaborol-l-ol (equiv. a 1) e 20% em Pd(OH)₂ sobre carbono (50% de peso molhado, 1:2 p/p de substrato para catalisador) em AcOH glacial (10 mL/g) foi agitada sob uma atmosfera de H₂ (45-50 psi) em um agitador Parr. Uma vez que a reação foi concluída (TLC), a mistura foi filtrada por Celite. O filtrado foi concentrado a vácuo para produzir um material pastoso. O AcOH remanescente foi removido por co-evaporação com tolueno (3 x) para produzir a amina, em geral, um sólido leve. A purificação foi realizada pelo HPLC preparado.

Procedimento geral 14: Síntese de (S)-3-(aminometil)-3metilbenzo[cll~l-2]oxaborol-l(3H)-ol hidrocloreto (A??) substituído

Para uma suspensão de brometo de fosfônio metiltrifenila (1.2eq) em THF a temperatura ambiente é adicionado KOtBu (1.2eq) em porções. Após é agitado durante 5min, a mistura da reação é tratada com

2’bromoacetofenona (leq). A mistura da reação é agitada por 3hrs a temperatura ambiente, depois resfriada bruscamente com cloreto de amônia saturado. A mistura resfriada é então extraída com Et₂O e as camadas orgânicas combinadas são lavadas com salmoura, secas com MgSO₄ e evaporadas a vácuo. As camadas são então purificadas por cromatografia em gel de sílica para produzir l-bromo-2-(prop-l-en-2-il)benzeno substituído.

A mistura é então dissolvida em uma mistura bifásica de água e tBuOH e resfriada a 0°C. E adicionado l-bromo-2-(prop-l-en-2-il)benzeno substituído e a mistura heterogênea é agitada a 0°C durante 18hrs, resfriada bruscamente com sulfato de sódio, aquecido a temperatura ambiente e agitado por uma hora adicional. A mistura resfriada é então extraída com 5x com DCM as camadas orgânicas combinadas são lavadas e secas com MgSO₄ e evaporada a vácuo. Purificada por cromatografia em gel sílica para produzir (S)-2-(2-bromofenil)propano-1 -2-diol substituído.

(S)-2-(2-bromofenil)propano-l-2-diol substituído é dissolvido em piridina (leq) e resfriado a 0°C antes da adição de cloreto de metanosulfonila (leq). A mistura da reação podem ser aquecida a temperatura ambiente e agitada por 2hrs. A piridina é removida a vácuo e o resíduo repartido entre DCM e NaHCO;, aquoso. A camada orgânica é seca com MgSO₄ e evaporada a vácuo para produzir o mesilato cru. Este material é combinado com NaN₃ (4.5eq), dissolvido em DMF e aquecido a 80°C por 18hrs. E adicionado água e extraído 3X com Et₂O. As camadas orgânicas combinadas são lavadas com salmoura, secas com MgSO₄ e evaporadas a vácuo. Em seguida, a mistura é purificada por cromatografia em gel sílica para produzir (S)-l-azido-2-(2-bromofenil)propan-2-ol substituído.

O (S)-l-azido-2-(2-bromofenil)propan-2-ol (leq) e triisopropila borato (1.2eq) são dissolvidos em 20eq de tolueno. A mistura da reação passa por refluxo com um aparelho Dean/Stark para remover o tolueno e o resíduo é dissolvido em 17eq de THF seco. Esta solução é resfriada a 78°C e é adicionado BuLi (25M em Hexanos, 1.15eq) gota a gota e agitada por 30 min. A mistura da reação é aquecida a temperatura ambiente e pode-se agitar por 3hrs antes de é resfriada bruscamente 6M HC1 e concentrada a vácuo. Depois é extraído 3X com DCM. As camadas orgânicas combinadas são secas com MgSO₄ e evaporadas a vácuo. Em seguida, a mistura é purificada por cromatografia em gel sílica para produzir (S)-3-(azidometil)-3metilbenzofc] [ 1 -2]oxaborol-1 (3H)-ol substituído.

(S)-3-(azidometil)-3-metilbenzo[c] [1 -2]oxaborol-1 (3H)-ol (leq) substituído e trifenila fosfina (2eq) são dissolvidos em acetonitrila.

Após 5min, é adicionado ácido clorídrico concentrado (2eq) e a reação da mistura agitada por 24 horas a temperatura ambiente antes de é concentrado sob vácuo. O resíduo é retomado em DCM e lavado 3X com 2M HC1. As camadas aquosas combinadas são evaporadas até a secura a vácuo. O sólido resultante é lavado com EtOH e filtrado para remover subprodutos, concentrados e cristalizados de acetonitrila para produzir (S)-3-(aminometil)3-metilbenzo[c] [l-2]oxaborol-l(3H)-ol cloridrato substituído como um sólido branco.

Procedimento geral para Separação HPLC quiral de enantiômero

Através das condições de separação HPLC quiral, o composto

17* podem ser separado em enantiômeros 18* e 19*.

A separação dos dois enantiômero foi atingida por dissolução do material em um solvente apropriado e aplicação de uma coluna quiral adequada e sistema eluente. As amostras separadas de enantiômero coletadas então foram concentradas e usadas na próxima etapa sem purificação adicional. Usando esta técnica, é possível obter uma série de excessos enantiômeros de enantiômeros separados.

Procedimento geral para Síntese Quiral de 3-

DMF

OH

2) nBuLi, THF

MeOH HCI

HCI

A síntese estereoespecífico direta de 3aminometilbenzoxaboróis podem ser alcançada a partir de 5- ou 6- 2bromoacetofenona substituído. E adicionado brometo (1,0 eq) lentamente à 2'bromoacetofenona substituído (1,0 eq) apropriadamente em éter dietílico a temperatura ambiente e agitado por 2 horas. E adicionado água e a mistura da reação agitada até desbotar as cores. As fases são separadas e a camada aquosa extraída com éter dietílico. As fases orgânicas combinadas são lavadas com salmoura, secas com MgSO₄, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para produzir 2-bromo-l-(2-bromofenil) etanona substituído. É adicionado (R)-(+)-2-metil-CBS-oxazaborolidina [Para R-isômero] ou (S)-(-)-

2-metil-CBS-oxazaborolidina [Para S-isômero] (0,11 eq) a uma solução agitada de 2-bromo-l-(2-bromofenil)etanona substituído (1,0 eq) em THF. A mistura da reação é resfriada a -10°C onde BH₃THF (1.0 M em THF, 1,20 eq) é adicionado durante 4 horas. A mistura da reação é agitada por mais 45 minutos a -10°C antes da adição de metanol (130 mL). A mistura da reação é concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante é sujeito a cromatografia em coluna rápida para fornecer um 2-bromo-l-(2-bromofenil) etanol quiral substituído. Para uma solução deste álcool (1,00 eq) em DMF é adicionado o azida de sódio em temperatura ambiente. A mistura da reação é então aquecida a 80°C por 24 horas. E adicionado água (150 mL) e esta solução é extraída com éter dietílico. As fases orgânicas combinadas são lavadas com salmoura (50 mL), secas com MgSO₄, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo está sujeito a cromatografia em coluna rápida para produzir 2-azido-l-(2-bromofenil) etanol substituído. Para a solução deste material (1.00 eq) em tolueno, é adicionado triisopropila borato (1.50 eq). O frasco de reação está equipado com um condensador Dean e Stark anexado e a mistura da reação passa por refluxo para remover aproximadamente % do volume de solvente. A reação da mistura preta é resfriada a temperatura ambiente onde THF é adicionado e, em seguida, resfriado a -78 °. E adicionado n-butila lítio (2.5 M em hexanos, 1,15 eq) gota a gota para a mistura da reação a -78°C e depois agitado por 30 minutos a esta temperatura. A mistura da reação pode então é aquecida a temperatura ambiente onde é agitada por 3 horas antes de é resfriada bruscamente 6 M HCl (30 mL). A mistura da reação é concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante está sujeito a cromatografia rápida em coluna para produzir

3-(azidometil)benzo[c][l-2] oxaborol-l(3H)-ol substituído.

Para uma solução deste composto (1,0 eq) em metanol, é adicionado trifenilfosfina (1,0 eq), e este é agitado por 3 horas em temperatura ambiente. E adicionado HCl concentrado e a reação da mistura agitada por mais 2 horas antes de é concentrada até a secura sob pressão reduzida. E adicionado diclorometano e extraído com 2 M HCl. As camadas aquosas combinadas são lavadas com diclorometano antes de serem contratados sob pressão reduzida. O resíduo é então recristalizados de água quente/acetonitrila (3 mL água/ 50-80 mL de acetonitrila por grama de composto) para produzir (R ou S) 3-(aminometil)benzo[c] [l-2]oxaborol-l(3H)-ol quiral substituído como o sal de cloridrato.

Os compostos aqui descritos podem ser convertidos em hidratos e solvatos por métodos similares àqueles descritos aqui.

IV. Ensaios para Inibidores de Domínios de edição de tRNA sintetase

Técnicas reconhecidas pela técnica de genética e biologia molecular são úteis para identificar os compostos que se ligam e/ou inibem o domínio de edição de um tRNA sintetase. Além disso, essas técnicas são de uso para distinguir se um composto se ligam e/ou inibem o domínio sintético, o domínio de edição ou ambos os domínios sintéticos e de edição.

Em uma modalidade ilustrativa, a atividade de um composto representativo em um domínio de edição foi confirmada. Para identificar o alvo do novo composto antibacteriano contendo boro (Al), os mutantes em E. coli que mostram resistência ao composto (Al) foram isolados. A caracterização de mutantes mostra que eles têm um aumento 32-256 vezes na resistência a (Al) durante o tipo silvestre. Os mutantes se mostraram também sensíveis a vários agentes antibacterianos com modos de ação conhecidos, sugerindo que a meta celular de (Al) é distinta da meta de outros agentes antibacterianos. O gene leuS dos mutantes foi clonado em um plasmídeo e sua resistência foi confirmada por MIC. O domínio de edição a partir desses mutantes foi seqüenciado e as mutações estavam todas localizadas no domínio de edição desta enzima.

Os testes para determinar se e como efetivamente, um composto específico se liga e/ou inibe o domínio de edição de um tRNA sintetase selecionado também estão aqui estabelecidos, e os ensaios adicionais estão disponíveis para aqueles versados na técnica. Resumidamente, em um ensaio ilustrativo, um tRNA carregado inapropriadamente e tRNA sintetase que seja capaz de editar o tRNA carregado inapropriadamente são combinados. A mistura resultante entra em contato com um inibidor putativo e o grau de inibição de edição é observado.

Outro ensaio usa a genética para mostrar que a droga funciona através do domínio de edição. Neste ensaio, o composto é primeiro testado contra um grupo de células que sobre-expressam cópias do gene tRNA sintetase. O efeito do composto sobre o excesso de tensão expressa é comparado com um grupo de controle que determina se o composto é ativo contra a sintetase. Se a concentração inibitória mínima (MIC) é 2 vezes maior no grupo com cópias extras do gene da sintetase do que o MIC do inibidor contra uma célula do tipo selvagem, outra triagem genética é realizada para determinar se o aumento da resistência é devido a mutações no domínio de edição. Nesta segunda triagem, o grupo de controle é desafiado a uma alta concentração de inibidores. As colônias sobreviventes ao desafio são isoladas e o DNA dessas células é isolado. O domínio de edição é amplificado utilizando uma enzima PCR de comprovação e os primers apropriados. O produto PCR podem ser purificado utilizando procedimentos padrões. O DNA mutante amplificado da sequência é comparado a um tipo selvagem. Se o DNA mutante carrega mutações no domínio da edição, esses resultados sugerem que o composto se liga ao domínio de edição e afeta a função de edição da molécula através deste domínio.

Os ensaios acima mencionados são úteis em qualquer sistema essencialmente microbiano, por exemplo, bactérias, fungos, parasitas, vírus e afins.

Geralmente, os compostos a serem testados estão presentes nos ensaios em intervalos de cerca de lpM a cerca de 100 μΜ, de preferência de cerca de 1 pM a cerca de 1 μΜ. Outros compostos variam de cerca de 1 nM a cerca de 100 nM, preferencialmente de cerca de 1 nM a cerca de 1 μΜ.

Os efeitos dos compostos de ensaio sobre a função das enzimas também podem ser medidos por qualquer alteração fisiológica adequada. Quando as conseqüências funcionais são determinadas utilizando células intactas ou animais, também se pode medir uma variedade de efeitos como liberação do transmissor, a liberação de hormônio, as mudanças transcricionais para marcadores genéticos conhecidos e descaracterizados, alterações no metabolismo celular, tais como o crescimento de células ou de alterações de pH, e mudanças nos segundos mensageiros intracelulares, como Ca ou nucleotídeos cíclicos.

A triagem de alto desempenho (HTS) é também de uso na identificação de possíveis candidatos da invenção.

Ao utilizar os ensaios aqui estabelecidos e outros disponíveis na técnica, aqueles versados na técnica serão capazes de determinar rotineiramente e prontamente outros compostos e classes de compostos que funcionam para ligar e/ou inibir o domínio de edição de tRNA sintetase .

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de identificação de um composto que se liga a um domínio de edição de um tRNA sintetase que compreende:

a) entrar em contato com tal domínio de edição com um composto de teste sob condições adequadas para a ligação, e b) detecção de ligação do composto de ensaio para tal domínio de edição. Em uma modalidade ilustrativa, ao detectar a ligação de tal composto compreende uso de pelo menos um elemento detectável, isótopo, rótulo químico anexado ao referido composto. Em uma modalidade ilustrativa, o elemento, isótopo ou rótulo químico é detectado por uma etapa de leitura fluorescente, luminescente, radioativa ou absorvente. Em uma modalidade ilustrativa, o contato de tal composto de teste com tal domínio edição também inclui outro contato com o composto de teste e tal domínio de edição com um elemento selecionado a partir de AMP e uma molécula com um terminal de adenosina. Em uma modalidade ilustrativa, tal tRNA sintetase é derivado de um elemento selecionado a partir de alanil-tRNA sintetase, isoleucil-tRNA sintetase, leucil-tRNA sintetase, metionil-tRNA sintetase, lisil-tRNA sintetase, fenilalanil-tRNA sintetase, prolil-tRNA sintetase, treonil-tRNA sintetase e valil-tRNA sintetase. Em uma modalidade ilustrativa, a tRNA sintetase é derivada de leucil-tRNA sintetase. Em uma modalidade ilustrativa, a tRNA sintetase é derivada de tRNA sintetase mudada, onde tal tRNA sintetase mudada compreende mutações de aminoácido em um domínio de edição. Em uma modalidade ilustrativa, onde tal domínio de edição de tRNA sintetase compreende a sequência de aminoácidos de uma sequência de peptídeos aqui descrita.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de identificação de um composto que se liga a um domínio de edição de um sintetase tRNA, tal ensaio compreende: a) entrar em contato com tal domínio de edição de um tRNA sintetase com tal composto em condições adequadas para a ligação de tal composto com tal domínio de edição de um tRNA sintetase; b) comparar uma atividade biológica do domínio de edição de um tRNA sintetase que entra em contato com tal composto para esta atividade biológica quando não entrar em contato com o composto, e c) a identificação de tal composto como ligação a esse domínio de edição de um tRNA sintetase se tal atividade biológica do domínio de edição de um tRNA sintetase é reduzido quando entra em contato com o composto. Em uma modalidade ilustrativa, a atividade biológica é hidrólise de não-cognato de aminoácido. Em uma modalidade ilustrativa, a hidrólise de tal não-cognato de aminoácido é detectada através do uso de um ou mais rótulos. Em uma modalidade ilustrativa, os rótulos incluem rótulo de rádio, marcador fluorescente, um anticorpo ou sua combinação. Em uma modalidade ilustrativa, tais rótulos podem ser detectados utilizando espectroscopia. Em uma modalidade ilustrativa, o domínio de edição de um tRNA sintetase é derivado de um elemento selecionado a partir de alanil-tRNA sintetase, isoleucil-tRNA sintetase, leucil-tRNA sintetase, metionil-tRNA sintetase, lisil-tRNA sintetase, fenilalanil-tRNA sintetase, prolil-tRNA sintetase, treonil-tRNA sintetase e valil-tRNA sintetase. Em uma modalidade ilustrativa, tal domínio de edição de um tRNA sintetase é derivado de leucil-tRNA sintetase.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de geração de moléculas de tRNA com não-cognato de aminoácido que compreende: a) criação ou isolamento de um tRNA sintetase mutante com domínios de edição de aminoácidos alterados e; b) entrar em contato com uma molécula de tRNA com tal tRNA sintetase mutante e um não-cognato de aminoácido. Em uma modalidade ilustrativa, o tRNA sintetase mutante contém uma ou mais mutações de aminoácidos em um domínio de edição. Em uma modalidade ilustrativa, o tRNA sintetase mutante é incapaz de se ligar com um composto da invenção. Em uma modalidade ilustrativa, o tRNA sintetase mutante é incapaz de se ligar a um composto descritos aqui ou um sal farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade ilustrativa, o tRNA sintetase mutante é incapaz de se ligar a um composto de acordo com uma fórmula aqui descrita ou um sal farmaceuticamente aceitável. Em outra modalidade ilustrativa, o composto da invenção é um elemento selecionado a partir de

Em uma modalidade ilustrativa, o composto é um elemento selecionado a partir de

Em outra modalidade ilustrativa, R* é H.

Em outro aspecto, a invenção fornece uma composição que compreende uma ou mais moléculas de tRNA ligadas a um não-cognato de aminoácidos, onde as moléculas de tRNA são sintetizadas usando um ou mais tRNA sintetases mutantes isolados de um microrganismo ou de uma linha de células derivadas de uma microorganismo. Em uma modalidade ilustrativa, o microorganismo é uma bactéria. Em uma modalidade ilustrativa, o tRNA sintetase mutante contém mutações de aminoácidos em seus domínios de edição.

V. Sequências de aminoácidos e nucleotídeos usadas nos ensaios

Sequências de tRNA que interagem com tRNA sintetasecomposto da invenção-AMP complexo

RNAs de transferência (tRNAs) traduzem o mRNA em uma proteína em um ribossomo. Cada RNA de transferência contém uma região anti-códon, que cruza com mRNA, e um aminoácido que podem ser anexado ao peptídeo crescente. O gene estrutural de tRNA tem cerca de 72 a 90 nucleotídeos longos e se desdobram em uma estrutura em forma de trevo (Sharp S. J., Schaack J., Coolen L., Burke D. J. and Soll D., Structure and transcription of eukaryotic tRNA genes, Crit. Rev. Biochem, 19:107 144 (1985); Geiduschek E. O., and Tocchini-Valentini, Transcription by RNA polymerase III, Annu. Rev. Biochem. 57:873 914 (1988)).

Em uma modalidade, um composto aqui descrito contém AMP e tRNA sintetase e o tRNA sintetase, por sua vez, entra em contato com uma molécula de tRNA. Em uma modalidade, um composto aqui descrito contém AMP de moléculas de tRNA e o tRNA sintetase. A sequência de nucleotídeo da molécula de tRNA podem ser determinada pela identificação de tRNA sintetase envolvida. Por exemplo, para leucila tRNA sintetase, a ligação do cognato da molécula de tRNA será tRNA-leucina (SEQ ID NO: 1), mas um não-cognato tRNA, tais como isoleucina, (SEQ ID NO: 2) podem ser ligar sob certas condições. Em outra modalidade, a molécula de tRNA é uma leucil-t-RNA. Em outra modalidade, a molécula de tRNA é representada por um SEQ ID aqui descrito. Em outra modalidade, a molécula de tRNA é representada por um SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ED NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23 e SEQ ID NO:24. Nesta e em outras modalidades, o termo “não-cognato” se destina a abranger tanto as formas singulares e plurais da palavra, isto é, a frase não-cognato de aminoácido compreende um ou mais aminoácidos. Nas seguintes sequências; s4U = s⁴U;

4-tiouridina; Gm = metilguanina; Y = pirimidina; ms2i6A = ms²i⁶A; 2metiltio-A-6-isopentenila adenosina e D = dihidrouridina.

SEQ ID NO: 1 corresponde à sequência de nucleotídeo de gene tRNA-Leu de Saccharomyces cerevisiae:

gggagtttgg ccgagtggtt taaggcgtca gatttaggct ctgatatctt cggatgcaagggttcgaatc ccttagctct cacca

SEQ ID NO: 2 corresponde à sequência de nucleotídeo de gene tRNA-Ile de Saccharomyces cerevisiae:

gaaactataa ttcaattggt tagaatagta ttttgataag gtacaaatat aggttcaatc cctgttagtt tcatcca

SEQ ID NO: 14 corresponde à sequência de nucleotídeo de gene tRNA-Leu de E. coli: gcgaaggtggcggaattggtagacgcgctagcttcaggtgttagtgtccttacggacgtgggggttcaagtcc cccccctcgcacca

SEQ ID NO: 15 corresponde à sequência de nucleotídeo de gene tRNA-Leu de E. coli:

gcgggagtggcgaaattggtagacgcaccagatttaggttctggcgccgcaaggtgtgcgagttcaagtctcg cctcccgcacca

SEQ ID NO: 16 corresponde à sequência de nucleotídeo de gene tRNA-Leu de E. coli: gccgaagtggcgaaatcggtagacgcagttgattcaaaatcaaccgtagaaatacgtgccggttcgagtccgg ccttcggcacca

SEQ ID NO: 17 corresponde à sequência de nucleotídeo de gene tRNA-Leu de E. coli:

gccgaggtggtggaattggtagacacgctaccttgaggtggtagtgcccaatagggcttacgggttcaagtcc cgtcctcggtacca

SEQ ID NO: 18 corresponde à sequência de nucleotídeo de gene tRNA-Leu de E. coli:

gcccggatggtggaatcggtagacacaagggatttaaaatccctcggcgttcgcgctgtgcgggttcaagtcc cgctccgggtacca

SEQ ID NO: 19 corresponde à sequência de nucleotídeo de gene tRNA-Leu de E. coli: GCCCGGAs4UGGUGGAADCGmGDAGACACAAGGGAYUunkAAAms2 Í6AAYCCCUCGGCGUUCGCGCUGUGCGGGTYCAAGUCCCGCUCCG GGUACCA

SEQ ID NO: 20 corresponde à sequência de nucleotídeo de gene tRNA-Leu de E. coli: GCGAAGGUGGCGGAADDGmGDAGACGCGCUAGCUUCAGunkGYG YUAGUGUCCUUACGGACGUGGGGGTYCAAGUCCCCCCCCUCGCA CCA

SEQ ID NO: 21 corresponde à sequência de nucleotídeo de gene tRNA-Leu de E. coli:

GCCGAGGUGGUGGAADDGmGDAGACACGCUACCU UGAGunkGYGGUAGUGCCCAAUAGGGCUUACGGGTYCAAGUCCCG UCCUCGGUACCA

SEQ ID NO: 22 corresponde à sequência de nucleotídeo de gene tRNA-Leu de Pseudomonas aeruginosa: gcggacgtggtggaattggtagacacactggatttaggttccagcgccgcaaggcgtgagagttcgagtctct ccgtccgcacca

SEQ ID NO: 23 corresponde à sequência de nucleotídeo de gene tRNA-Leu de Staphylococcus aureus: gccggggtggcggaactggcagacgcacaggacttaaaatcctgcggtgagagatcaccgtaccggttcgat tccggtcctcggcacca

SEQ ID NO: 24 corresponde à sequência de nucleotídeo de gene tRNA-Leu de Staphylococcus aureus: gccggggtggcggaactggcagacgcacaggacttaaaatcctgcggtgagtgatcaccgtaccggttcgat tccggtcctcggcacca

Polipeptídeos utilizados nos ensaios de inibição e ligação

Em alguns ensaios de ligação e inibição, é mais eficaz a utilização de uma porção de uma molécula de tRNA sintetase ao invés da proteína total. Em tais ensaios, os polipeptídios derivados de tRNA sintetases 5 são utilizados no experimento.

Em uma modalidade preferida, os fragmentos de polipeptídios correspondente ao domínio de edição de molécula de tRNA sintetase são utilizados em experimentos de ligação e ensaios. Tais fragmentos são representados por SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID 10 NO:6 e SEQ ID NO:7. Em uma modalidade ilustrativa, os fragmentos são representados por SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6 e SEQ ID NO:7.

SEQ ID NO 3:

TPQEYIGVKIEALEFADDAAKIIDSSSDLDKSKKFYFVAATLRPETMYG QTCCFVSPTIEYGIFDAGDSYFITTERAFKNMSYQKLTPKRGFYKPIVT VPGKAFIGTKIHAPQSVYPELRILPMETVIATKGTGVVTCVPSNSPDDY ITTKDLLHKPEYYGIKPEWIDHEIVPIMHTEKYGDLTAKAIVEEKKIQS PKDKNLLAEAKKIAYKEDYYTGTMIYGPYKGEKVEQAKNKVKADMI AAGEAFVYNEPESQDP

SEQ ID NO 4:

MTPQEYIGVKIEALEFADDAAKIIDSSSDLDKSKKFYFVAATLRPETM YGQTCCFVSPTIEYGIFDAGDSYFITTERAFKNMSYQKLTPKRGFYKPI VTVPGKAFIGTKIHAPQSVYPELRILPMETVIATKGTGWTCVPSNSPD DYITTKDLLHKPEYYGIKPEWIDHEIVPIMHTEKYGDLTAKAIVEEKKI QSPKDKNLLAEAKKIAYKEDYYTGTMIYGPYKGEKVEQAKNKVKAD MIAAGEAFVYNEPESQDPQDPNSSSVDKLAAALEHHHHH

SEQ ID NO 5:

TCTPEYYRWEQKFFTELYKKGLVYKKTSAVNWCPNDQTVLANEQVI DGCCWRCDTKVERKEIPQWFIKITAYADELLNDLDKLDHWPDTVKT MQRNWIGRSEGVEITFNVNDYDNTLTVYTTRPDTFMGCTYLAVAAG

HPLAQKAAENNPELAAFIDECRNTKVAEAEMATMEKKGVDTGFKAV

HPLTGEEIPVWAANFVLMEYGTGAVMAVPGHDQRDYEFASKYGLNI

KPVILAADGSEPDLSQQALTEKGVLFNSGEFNGLDHEAAFNAIADKLT

AMGVGERKVNYRLRDWGVSRQRYWG

SEQ ID NO 6:

TCKPDYYRWEQWLFTRLFEKGVIYRKNGTVNWDPADQTVLANEQVI DGRGWRSGALIEKREIPMYYFRITDYADELLESLDELPGWPEQVKTM QRNWIGKSRGMEVQFPYDQASIGHEGTLKVFTTRPDTLMGATYVAV AAEHPLATQAAQGNAALQAFIDECKSGSVAEADMATQEKKGMATSL FVEHPLTGEKLPVWVANYVLMHYGDGAVMAVPAHDERDFEFAHKY NLPVKAVVRTSAGDDVGSEWLAAYGEHGQLINSGEFDGLDFQGAFD AIEAALIRKDLGKSRTQFRLRDWGISRQRYWG

SEQ ID NO 7:

TTDPEYYKWTQWIFIQLYNKGLAYVDEVAVNWCPALGTVLSNEEVID GVSERGGHPVYRKPMKQWVLKITEYADQLLADLDDLDWPESLKDM QRNWIGRSEGAKVSFDVDNTEGKVEVFTTRPDTIYGASFLVLSPEHAL VNSITTDEYKEKVKAYQTEASKKSDLERTDLAKDKSGVFTGAYAINP LSGEKVQIWIADYVLSTYGTGAIMAVPAHDDRDYEFAKKFDLLIIEVI EGGNVEEAAYTGEGKFUNSGELDGLENEAAITKAIQLLEQKGAGEKK VYKLRDWLFSRQRYWG

SEQ ID NO 8 corresponde a uma sequência de peptídeos para leu-tRNA sintetase do domínio de edição de Escherichia coli GRSEGVEITFNVNDYDNTLTVYTTRPDTFMGCTYLAVAAGHPLAQK AAENNPELAAFIDECRNTKVAEAEMATMEKKGVDTGFKAVHPLTGE EIPVWAANFVLMEYGTGAVMAVPGHDQRDYEFASKYGLNIKPVILA ADGSEPDLSQQALTEKGVLFNSGEFNGLDHEAAFNAIADKLTAMGVG ERKVNYR

SEQ ID NO 9 corresponde a uma sequência de peptídeos para leu-tRNA sintetase do domínio de edição de Pseudomonas

GKSRGMEVQFPYDQASIGHEGTLKVFTTRPDTLMGATYVAVAAEHP LATQAAQGNAALQAFIDECKSGSVAEADMATQEKKGMATSLFVEHP LTGEKLPVWVANYVLMHYGDGAVMAVPAHDERDFEFAHKYNLPVK AWRTSAGDDVGSEWLAAYGEHGQLINSGEFDGLDFQGAFDAIEAAL IRKDLGKSRTQFR

SEQ ID NO 10 corresponde a uma sequência de peptideos para leu-tRNA sintetase do domínio de edição de Staphylococcus aureus GRSEGAKVSFDVDNTEGKVEVFTTRPDTIYGASFLVLSPEHALVNSIT TDEYKEKVKAYQTEASKKSDLERTDLAKDKSGVFTGAYAINPLSGEK VQIWIADYVLSTYGTGAIMAVPAHDDRDYEFAKKFDLLIIEVIEGGNV EEAAYTGEGKHINSGELDGLENEAAITKAIQLLEQKGAGEKKVYK

Em uma modalidade preferida, os fragmentos de polipeptídios correspondentes à molécula de tRNA sintetase são utilizados em 5 experimentos de ligação e ensaios. Tais polipeptídios são representados por SEQ ID NO:11, SEQ ID NO: 12 e SEQ ID NO: 13.

SEQ ID NO 11 corresponde a uma sequência de peptideos para leu-tRNA sintetase para Escherichia coli MQEQYRPEEIESKVQLHWDEKRTFEVTEDESKEKYYCLSMLPYPSGR LHMGHVRNYTIGDVIARYQRMLGKNVLQPIGWDAFGLPAEGAAVKN NTAPAPWTYDNIAYMKNQLKMLGFGYDWSRELATCTPEYYRWEQK FFTELYKKGLVYKKTSAVNWCPNDQTVLANEQVIDGCCWRCDTKVE RKEIPQWFIKITAYADELLNDLDKLDHWPDTVKTMQRNWIGRSEGVE ITFNVNDYDNTLTVYTTRPDTFMGCTYLAVAAGHPLAQKAAENNPEL AAFIDECRNTKVAEAEMATMEKKGVDTGFKAVHPLTGEEIPVWAAN FVLMEYGTGAVMAVPGHDQRDYEFASKYGLNIKPVILAADGSEPDLS QQALTEKGVLFNSGEFNGLDHEAAFNAIADKLTAMGVGERKVNYRL RDWGVSRQRYWGAPIPMVTLEDGTVMPTPDDQLPVILPEDWMDGI TSPIKADPEWAKTTVNGMPALRETDTFDTFMESSWYYARYTCPQYKE GMLDSEAANYWLPVDIYIGGIEHAIMHLLYFRFFHKLMRDAGMVNS

DEPAKQLLCQGMVLADAFYYVGENGERNWVSPVDAIVERDEKGRIV KAKDAAGHELVYTGMSKMSKSKNNGIDPQVMVERYGADTVRLFMM FASPADMTLEWQESGVEGANRFLKRVWKLVYEHTAKGDVAALNVD ALTENQKALRRDVHKTIAKVTDDIGRRQTFNTAIAAIMELMNKLAKA PTDGEQDRALMQEALLAWRMLNPFTPHICFTLWQELKGEGDIDNAP WPVADEKAMVEDSTLVVVQVNGKVRAKITVPVDATEEQVRERAGQ EHLVAKYLDGVTVRKVIYVPGKLLNLWG

SEQ ID NO 12 corresponde a uma sequência de peptídeos para leu-tRNA sintetase para Pseudomonas MHEQYTPRDVEAAAQNAWDEQQSFAVTEQPGKETYYCLSMFPYPSG KLHMGHVRNYTIGDVIARYQRMLGKNVLQPMGWDAFGMP ΑΕΝΑΑ MKNNVAPAKWTYENIDYMKTQLKSLGLAIDWSREVTTCKPDYYRW EQWLFTRLFEKGVIYRKNGTVNWDPADQTVLANEQVIDGRGWRSGA LIEKREIPMYYFRITDYADELLESLDELPGWPEQVKTMQRNWIGKSRG MEVQFPYDQASIGHEGTLKVFTTRPDTLMGATYVAVAAEHPLATQA AQGNAALQAFIDECKSGSVAEADMATQEKKGMATSLFVEHPLTGEK LPVWVANYVLMHYGDGAVMAVPAHDERDFEFAHKYNLPVKAVVR TSAGDDVGSEWLAAYGEHGQLINSGEFDGLDFQGAFDAIEAALIRKD LGKSRTQFRLRDWGISRQRYWGCPIPIIHCPSCGDVPVPEDQLPVTLPE NWPDGAGSPLARMPEFYECTCPKCGTAAKRETDTMDTFVESSWYF ARYASPNYDKGLVDPKAANHWLPVDQYIGGIEHAILHLLYARFFHKL MRDEGLVTSNEPFKNLLTQGMVVAETYYRVASNGGKDWFNPADVEI ERDAKAKIIGARLKTDGLPVEIGGTEKMSKSKNNGVDPQSMIEQYGA DTCRLFMMFASPPDMSLEWSDSGVEGASRFLRRVWRLAQAHVAQGL PGQLDIAALSDEQKVIRRAIHAAIKQASTDVGQFHKFNTAIAQVMTV MNVLEKAPQVTAQDRALLQEGLEAVTLLLAPITPHISHELWKQLGHE QAVIDATWPSVDESALVQDTVTLWQVNGKLRGQVEMPAAASREEI EAAARNNENVLRFTDGLTIRKVIVVPGKLVNIVAN

SEQ ID NO 13 corresponde a uma sequência de peptídeos para leu-tRNA sintetase para Stapnylococcus aureus

MNYNHNQIEKKWQDYWDENKTFKTNDNLGQKKFYALDMFPYPSGA GLHVGHPEGYTATDIISRYKRMQGYNVLHPMGWDAFGLPAEQYALD TGNDPREFTKKNIQTFKRQIKELGFSYDWDREVNTTDPEYYKWTQWI FIQLYNKGLAYVDEVAVNWCPALGTVLSNEEVIDGVSERGGHPVYR KPMKQWVLKITEYADQLLADLDDLDWPESLKDMQRNWIGRSEGAK VSFDVDNTEGKVEVFTIRPDTIYGASFLVLSPEHALVNSITTDEYKEK VKAYQTEASKKSDLERTDLAKDKSGVFTGAYAINPLSGEKVQIWIAD YVLSTYGTGAIMAVPAHDDRDYEFAKKFDLLIIEVIEGGNVEEAAYTG EGKHINSGELDGLENEAAITKAIQLLEQKGAGEKKVNYKLRDWLFSR QRYWGEPIPVIHWEDGTMTTVPEEELPLLLPETDEIKPSGTGESPLANI DSFVNVVDEKTGMKGRRETNTMPQWAGSCWYYLRYIDPKNENMLA DPEKLKHWLPVDLYIGGVEHAVLHLLYARFWHKVLYDLGIVPTKEPF QKLFNQGMILGEGNEKMSKSKGNVINPDDIVQSHGADTLRLYEMFM GPLDAAIAWSEKGLDGSRRFLDRVWRLIVNEDGTLSSKIVTTNNKSLD KVYNQTVKKVTDDFETLGFNTAISQLMVFINECYKVDEVYKPYIEGF VKMLAPIAPHIGEELWSKLGHEESITYQPWPTYDEALLVDDEVEIVVQ VNGKLRAKIKIAKDTSKEEMQEIALSNDNVKASIEGKDIMKVIAVPQK LVNIVAK

VI. Métodos para inibição de uma enzima

Os compostos da invenção podem ser utilizados para inibir uma enzima. Em uma modalidade ilustrativa, os compostos da invenção 5 exibem a capacidade de inibir o domínio de edição de tRNA sintetases, como o leucila tRNA sintetase, de microorganismos, como bactérias e, portanto, têm potencial para serem utilizados como inibidores de domínio de edição de microorganismo tRNA sintetase.

De acordo com outro aspecto da invenção, um método para a ligação e/ou inibição de domínio de edição de um tRNA sintetase é fornecido que compreende entrar em contato com um tRNA sintetase com um composto da invenção que inibe o domínio de edição sob condições em que o tRNA sintetase interage com seu substrato para formar um aminoacil-adenilato intermediário e, de preferência, para formar um tRNA cobrado. Tais condições são conhecidas por aqueles versados na técnica. Em uma modalidade ilustrativa, o composto é descrito aqui ou seu sal, hidrato ou solvato ou sua combinação. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito aqui ou seu sal, hidrato ou solvato. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito aqui ou seu sal. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito aqui ou seu sal. O tRNA sintetase entra em contato com uma quantidade de compostos da invenção suficiente para resultar em uma quantidade detectável de inibição tRNA sintetase. Este método podem ser realizado em um tRNA sintetase que está contido dentro de um organismo ou que está fora de um organismo. Em uma modalidade ilustrativa, o método é realizado em um tRNA sintetase que está contido dentro de um microorganismo ou uma célula microbiana que está dentro, ou na superfície de um animal. Em uma modalidade ilustrativa, o animal é um humano. O método resulta na diminuição na quantidade de tRNA carregado produzido pelo tRNA sintetase que possui um domínio de edição inibido. Em uma modalidade ilustrativa, a inibição é realizada em uma célula, tais como uma célula microbial. Em uma modalidade ilustrativa, a célula microbiana é uma bactéria, fungo, levedura ou parasita. Em uma modalidade ilustrativa, o tRNA sintetase é um tRNA sintetase mitocondrial ou tRNA sintetase citoplásmica. Em uma modalidade ilustrativa, o tRNA sintetase é um elemento selecionado a partir de alanil-tRNA sintetase, isoleucil-tRNA sintetase, leucil-tRNA sintetase, metionil-tRNA sintetase, lisil-tRNA sintetase, fenilalanil-tRNA sintetase, prolil-tRNA sintetase, treonil-tRNA sintetase e valil-tRNA sintetase. Em uma modalidade ilustrativa, a tRNA sintetase é leucil-tRNA sintetase.

Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um método de inibição de conversão de uma molécula de tRNA em uma molécula de tRNA carregada. O método envolve entrar em contato com um tRNA sintetase com um composto da invenção eficaz para inibir a atividade de um domínio de edição de tal tRNA sintetase, sob condições suficientes para inibir essa atividade, inibindo assim a conversão. Em uma modalidade ilustrativa, o composto da invenção é um composto aqui descrito ou um sal farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade ilustrativa, a inibição ocorre dentro de uma célula e a célula é uma célula microbial. Em uma modalidade ilustrativa, a célula microbial é um elemento selecionado a partir de bactéria, fungo, levedura ou parasita. Em uma modalidade ilustrativa, o tRNA sintetase é um elemento selecionado a partir de tRNA sintetase mitocondrial ou tRNA sintetase citoplásmica. Em uma modalidade ilustrativa, o tRNA sintetase é um elemento selecionado a partir de alanil-tRNA sintetase, isoleucil-tRNA sintetase, leucil-tRNA sintetase, metionil-tRNA sintetase, lisil-tRNA sintetase, fenilalanil-tRNA sintetase, prolil-tRNA sintetase, treonil-tRNA sintetase e valil-tRNA sintetase. Em uma modalidade ilustrativa, a tRNA sintetase é leucil-tRNA sintetase. Em uma modalidade ilustrativa, o composto possui um K_{Dj síntese} superior a 100 μΜ em um domínio sintético de tal tRNA sintetase.

Em certas modalidades, o mecanismo de ação de um composto da invenção é para inibir a conversão de uma molécula de tRNA para uma molécula de tRNA carregada pela ligação e/ou inibição de, pelo menos, o domínio edição da sintetase. Os compostos de uso deste método também pode inibir ou interagir com o domínio sintético (por exemplo, o local ativo do domínio sintético). Em uma modalidade preferida presente, o domínio de edição é inibido seletivamente na presença do domínio sintético. Em uma modalidade preferida, o domínio sintético é essencialmente desinibido, enquanto o domínio de edição é inibido pelo menos 50%, de preferência, pelo menos 60%, mais preferivelmente, pelo menos 70%, ainda mais preferivelmente, pelo menos 80%, e ainda mais preferivelmente pelo menos 90% da atividade de tRNA sintetase. Em outra modalidade preferida, o domínio sintético é inibido por no máximo 50%, de preferência, no máximo, 30%, de preferência, no máximo, 20%, 10%, de preferência, no máximo, 8%, mais preferivelmente, no máximo, 5%, ainda mais, de preferência, no máximo 3% ou até mais ainda, de preferência, no máximo, 1%. A inibição do domínio de edição produz uma diminuição na quantidade de tRNA carregado corretamente o que resulta em atraso ou interrupção do crescimento e divisão celular.

Em uma modalidade ilustrativa, a relação entre uma concentração mínima de compostos que inibem tal domínio de edição para uma concentração mínima de inibição de composto de tal domínio sintético de tRNA sintetase, representado como K_D, editar·/ K_D, síntese, é inferior a um. Em uma modalidade ilustrativa, o K_{D> editar} /Kd, síntese do composto é um elemento selecionado a partir de menos que 0,5, menos que 0,1 e menos que 0,05.

VII. Métodos de Inibição de Crescimento de microorganismo ou morte de Microorganismos

Os compostos da presente invenção exibem potência contra microorganismos, como bactérias e, portanto, têm o potencial de exterminar e / ou inibir o crescimento de microorganismos.

Em um outro aspecto, a invenção fornece um método para exterminar e/ou inibir o crescimento de um microorganismo, tal método compreende: entrar em contato com tal microorganismo com uma quantidade eficaz de um composto da invenção, assim, exterminando e/ou inibindo o crescimento do microorganismo. Em uma modalidade ilustrativa, o microorganismo é um elemento selecionado a partir de bactéria, fungos, vírus, levedura ou parasita. Em uma modalidade ilustrativa, o composto é descrito aqui ou seu sal, pró-droga, hidrato ou solvato ou sua combinação. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto aqui descrito ou seu sal, hidrato ou solvato. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito aqui ou sua pró-droga. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito aqui ou seu sal. Em uma modalidade ilustrativa, o composto da invenção é um composto aqui descrito ou um sal farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade ilustrativa, o composto é descrito pela fórmula aqui listada ou um sal farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade ilustrativa, o composto é parte de uma formulação farmacêutica aqui descrita. Em uma modalidade ilustrativa, o contato ocorre sob condições que permitam a entrada do composto no organismo. Em uma modalidade ilustrativa, o composto inibe o tRNA através do domínio edição da sintetase. Tais condições são conhecidas por aqueles versados na técnica e condições específicas são definidas nos Exemplos anexos. Este método envolve entrar em contato com uma célula microbiana com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de domínio de edição para inibir tRNA sintetase in vivo ou in vitro. Em outra modalidade ilustrativa, o composto é um elemento selecionado a partir de

Em outra modalidade ilustrativa, R* é H.

Em outro aspecto, o microorganismo está no interior ou na superfície de um animal. Em uma modalidade ilustrativa, o animal é um elemento selecionado a partir humanos, gado, veados, renas, cabras, abelhas, porcos, carneiros, cavalos, vacas, bois, cães, porquinhos-da-índia, hamster, coelhos, gatos, camelos, iaques, elefantes, emas, lontras, galinhas, patos, gansos, galinhas d'angola, pombos, cisnes e perus. Em uma modalidade ilustrativa, o animal é um humano.

Em uma modalidade ilustrativa, o microorganismo é morto ou seu crescimento é inibido pela administração oral dos compostos da invenção. Em uma modalidade ilustrativa, o microorganismo é morto ou seu crescimento é inibido pela administração intravenosa dos compostos da invenção.

Em uma modalidade ilustrativa, o microorganismo é uma bactéria. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é uma bactéria gram positiva. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria gram positiva é um elemento selecionado a partir de espécies Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus, Mycobacterium, Corynebacterium {Propionibacterium), Clostridium, Actinomyces, Enterococcus e Streptomyces. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria gram positiva é um elemento selecionado a partir de Propionibacterium acnes; Staphylococcus aureus; Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus; Staphylococcus haemolyticus; Streptococcus pyogenes; Streptococcus agalactiae; Streptococcus pneumoniae; Enterococcus faecalis; Enterococcus faecium; Bacillus anthracis', Mycobacterium avium-intracellulare; Mycobacterium tuberculosis, Acinetobacter baumanii; Corynebacterium diphtheria; Clostridium perfringens; Clostridium botulinum; Clostridium tetani', Clostridium difficile. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria gram positiva é um elemento selecionado a partir de Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Clostridium difficile e Propionibacter acnes. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é uma bactéria gram negativa. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria gram positiva é um elemento selecionado a partir de espécies Acinetobacter, Neisseria, Pseudomonas, Brucella, Agrobacterium, Bordetella, Escherichia, Shigelia, Yersinia, Salmonella, Klebsiella, Enterobacter, Haemophílus, Pasteurella, Streptobacillus, spirochetal, Campylobacter, Vibrio, Helicobacter, Bacteroides, Citrobacter, Proteus, Providencia, Serratia, Stenotrophomonas e Burkholderia. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria gram negativa é um elemento selecionado a partir de espécies Acinetobacter, Pseudomonas, Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Bacteroides, Citrobacter, Proteus, Providencia, Serratia, Stenotrophomonas e Burkholderia. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria gram negativa é um elemento selecionado a partir de Neisseria gonorrhoeae·, Neisseria meningitidis', Pseudomonas aeruginosa', Legionella pneumophila', Escherichia coli', Yersinia pestis', Haemophilus Ínfluenzae', Helicobacter pylori', Campylobacter fetus', Campylobacter jejuni', Vibrio cholerae; Vibrio parahemolyticus; Trepomena pallidum', Actinomyces israelii', Rickettsia prowazekii', Rickettsia rickettsii', Chlamydia trachomatis', Chlamydia psittaci', Brucella abortus', Agrobacterium tumefaciens', Francisella tularensis, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae, Acinetobacter baumannii, Bacteroides fragilis, Citrobacter freundii, Proteus mirabilis, Providencia stuartii, Serratia marcescens, Stenotrophomonas maltophilia e Burkholderia cepacia. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria gram negativa é um elemento selecionado a partir de Pseudomonas aeruginosa', Escherichia coli', Haemophilus Ínfluenzae, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae, Acinetobacter baumannii, Bacteroides fragilis, Citrobacter freundii, Proteus mirabilis, Providencia stuartii, Serratia marcescens, Stenotrophomonas maltophilia e Burkholderia cepacia.

Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria de espécies Pseudomonas. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é Pseudomonas aeruginosa. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é um elemento selecionado a partir de Pseudomonas aeruginosa', Acinetobacter baumannii, Stenotrophomonas maltophilia e Burkholderia cepacia. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é da espécie Acinetobacter. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é Acinetobacter anitratus. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é um elemento selecionado a partir de Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterobacter sakazakii, E. coli, K. pneumoniae, P. mirabilis, Serratia marcescens, Citrobacter freundii e Providencia spp. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é um elemento selecionado a partir de Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterobacter sakazakii, E. coli, K. pneumoniae, P. mirabilis, Serratia marcescens, Citrobacter freundii, Providencia spp., S. aureus, S. pneumonia, S. pyogenes, E. faecalis e E. faecium. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é um elemento selecionado a partir de Viridans group Strep.. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é um elemento selecionado a partir de Strep. mitis, Strep. mutans, Strep. oralis, Strep. sanguis, Strep. sobrinus e Strep. millari. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é um elemento selecionado a partir de S. pneumonia, H influenzae, S. aureus, M. catarrhalis, M. pneumoniae, L. pneumoniae e C. pneumoniae. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é 5”. aureus. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é um anaeróbio. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é uma espécie Alcaligenes. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é um B. cepacia. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é um elemento selecionado a partir de Enterobacter cloacae, Escherichia coli', Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Providencia stuartii, Serratia marcescens, and Citrobacter freundii. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é resistente à meticilina. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é staphylococcus aureus resistente à meticilina. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é um elemento selecionado a partir de Streptococcus pneumoniae', Haemophilus influenzae',

Staphylococcus aureus; Mycobacterium catarrhalis; Mycobacterium pneumoniae; Legionella pneumophila e Chlamydia pneumoniae. Em uma modalidade ilustrativa, a bactéria é um elemento selecionado a partir de Enterobacter cloacae, Escherichia coli; Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Serratia marcescens, Citrobacter freundii, Providencia stuartii, Pseudomonas aeruginosa; Acinetobacter baumannii, Stenotrophomonas maltophilia, Burkholderia cepacia, Staphylococcus aureus; Streptococcus pneumoniae; Streptococcus pyogenes; Enterococcus faecalis; e Enterococcus faecium.

Em uma modalidade ilustrativa, os microorganismos são uma bactéria, que é um elemento selecionado a partir de bactérias ácidoresistentes, incluindo espécies Mycobacterium; bacilli, incluindo espécies Bacillus, Corynebacterium (também Propionibacterium) e Clostridium; bactéria filamentosa, incluindo Actinomyces e Streptomyces; bacilli, tais como espécies Pseudomonas, Brucella, Agrobacterium, Bordetella, Escherichia, Shigella, Yersinia, Salmonella, Klebsiella, Enterobacter, Haemophilus, Pasteurella e Streptobacillus; espécies espirotecais, Campylobacter, Vibrio; e bactéria intracelular incluindo espécies Rickettsiae e Chlamydia. Em uma modalidade ilustrativa, o microorganismo é descrito em uma Figura aqui apresentada.

Em uma modalidade ilustrativa, o microorganismo é um elemento selecionado a partir de fungos e levedura. Em uma modalidade ilustrativa, o fungos ou levedura é um elemento selecionado a partir de espécies Candida, Trichophyton, Microsporium, Aspergillus, Cryptococcus, Blastomyces, Cocciodiodes, Histoplasma, Paracoccidiodes, Phycomycetes, Malassezia, Fusarium, Epidermophyton, Scytalidium, Scopulariopsis, Alternaria, Penicillium, Phialophora, Rhizopus, Scedosporium e classe Zygomycetes. Em uma modalidade ilustrativa, o fungos ou levedura é um elemento selecionado a partir de Aspergilus fumigatus (A. fumigatus),

100

Blastomyces dermatitidis, Candida Albicans (C. albicans, ambos fluconazol sensitive e resistant strains), Condida glabrata (C. glabrata), Candida krusei (C. krusei), Cryptococcus neoformans (C. neoformans), Candida parapsilosis (C. parapsilosis), Candida tropicalis (C. tropicalis), Cocciodiodes immitis, Epidermophyton floccosum (E. floccosum), Fusarium solani (F. solani), Histoplasma capsulatum, Malassezia furfur (M. furfur), Malassezia pachydermatis (M. pachydermatis), Malassezia sympodialis (M sympodialis), Microsporum audouinii (M. audouinii), Microsporum canis (M canis), Microsporum gypseum (M gypseum), Paracoccidiodes brasiliensis and Phycomycetes spp, Trichophyton mentagrophytes (T. mentagrophytes), Trichophyton rubrum (T. rubrum), Trichophyton tonsurans (T. tonsurans). Em uma modalidade ilustrativa, o fungos ou levedura é um elemento selecionado a partir de Trichophyton concentricum, T. violaceum, T. schoenleinii, T verrucosum, T. soudanense, Microsporum gypseum, M. equinum, Candida guilliermondii, Malassezia globosa, M. obtuse, M. restricta, M. slooffiae e Aspergillus flavus. Em uma modalidade ilustrativa, o fungos ou levedura é um elemento selecionado a partir de dermatófitos, Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton e fungos semelhantes a levedura. Em uma modalidade ilustrativa, o fungos ou levedura é Candida Albicans.

Em uma modalidade ilustrativa, o microorganismo é um vírus. Em uma modalidade ilustrativa, o vírus é um elemento selecionado a partir de hepatite A-B, rinovírus humanos, o vírus da febre amarela, coronavírus respiratório humano, síndrome respiratória aguda grave (SARS), o vírus sincicial respiratório, vírus da influenza, vírus parainfluenza 1-4, vírus da imunodeficiência humana 1 (HIV-1), vírus da imunodeficiência humana 2 (HIV-2 ), Herpes simplex virus 1 (HSV-1), Herpes simplex virus 2 (HSV-2), citomegalovírus humano (HCMV), vírus varicela zoster, Epstein-Barr (EBV), o poliovírus, coxsackievirus, ecovírus, vírus da rubéola, vírus trópico

101 neuroderm, vírus da varíola, papovírus, vírus da raiva, vírus da dengue, vírus do Oeste do Nilo e do vírus da SARS. Em uma modalidade ilustrativa, o vírus é um elemento selecionado a partir de picornaviridae, flaviviridae, coronaviridae, paramyxoviridae, orthomyxoviridae, retroviridae, 5 herpesviridae e hepadnaviridae. Em uma modalidade ilustrativa, o vírus é um elemento selecionado a partir de vírus incluído na tabela a seguir:

Tabela A. Vírus

Categoria vírus	Infecções Humanas Pertinentes
Vírus RNA
Picornaviridae	Polio Hepatite A Humana Rinovírus Humano
Togaviridae e Flaviviridae	Rubéola - Sarampo Febre amarela
Coronaviridae Rhabdoviridae	Coronavírus respiratório humano (HCV) Síndrome respiratória aguda grave(SAR) Lyssavirus - Raiva
Paramyxoviridae Orthomyxoviridae	Paramyxovirus - Caxumba Morbillvirus - Sarampo Pneumovirus - vírus sincicial respiratório Influenza A-C
Bunyaviridae	Bunyavirus - Bunyamwera (BUN) Hantavirus - Hantaan (HTN) Nairevirus - Febre Hemorrágica Crimea-Congo (CCHF) Phlebovirus - Febre de Sandfly (SFN) Uukuvirus - Uukuniemi (UUK) Febre do Vale do Rift (RVFN)
Arenaviridae	Junin - Febre Hemorrágica da Argentina Machupo - Febre Hemorrágica Boliviana Lassa - Febre de Lassa LCM - Coriomeningite Linfócita Asséptica
Reoviridae	Rotavírus Reovírus Orbivírus
Retroviridae	Vírus da imunodeficiência humana 1 (HIV-1) Vírus da imunodeficiência humana 2 (HIV-2) Vírus da imunodeficiência símia (SIV)
Papovaviridae Adenoviridae Parvoviridae	Vírus DNA Vírus pediátrico que se localiza no rim Infecções oculares profundas e desconforto respiratório humano Doença gastrointestinal humana (Vírus Norwalk)
Herpesviridae	Herpes simplex vírus 1 (HSV-1) Herpes simplex vírus 2 (HSV-2) Human citomegalovírus (HCMV) Vírus varicella zoster (VZV)

102

Categoria vírus Infecções Humanas Pertinentes___________________________________

Vírus Epstein-Barr (EBV)

Vírus herpes humano 6 (HHV6)

Poxviridae_________Orthopoxvirus é sub-gênero para varíola___________________________

Hepadnaviridae Vírus Hepatite B (HBV)

Vírus Hepatite C (HBV)

Em uma modalidade ilustrativa, o microorganismo é um parasita. Em uma modalidade ilustrativa, o parasita é um elemento selecionado a partir de Plasmodium falciparum, P. vivax, P. ovale P. malariae, P. berghei, Leishmania donovani, L. infantum, L. chagasi, L. mexicana, L. amazonensis, L. venezuelensis, L. tropics, L. major, L. minor, L. aethiopica, L. Biana braziliensis, L. (V.) guyanensis, L. (V.) panamensis, L. (V.) peruviana, Trypanosoma brucei rhodesiense, T. brucei gambiense, T. cruzi, Giardia intestinalis, G. lambda, Toxoplasma gondii, Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis, Pneumocystis carinii, e Cryptosporidium parvum.

VIII. Métodos para tratamento e/ou prevenção de doença

Os compostos da presente invenção exibem potência contra microorganismos, como bactérias e, portanto, têm o potencial para atingir o efeito terapêutico nos animais descritos aqui.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de tratamento e/ou prevenção de doença. O método inclui a administração ao animal de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto da invenção, suficiente para tratar e/ou prevenir a doença. Em uma modalidade ilustrativa, os compostos da invenção podem ser usados em tratamento em humanos ou veterinária, particularmente no tratamento ou profilaxia de infecções bacterianas associadas à doença. Em uma modalidade ilustrativa, o composto é descrito aqui ou seu sal, pró-droga, hidrato ou solvato ou sua combinação. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito aqui ou sua pró-droga. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto aqui descrito, ou seu sal, hidrato ou solvato. Em uma modalidade ilustrativa, a invenção apresenta um composto descrito aqui ou

103 seu sal. Em uma modalidade ilustrativa, o composto da invenção é um composto aqui descrito ou um sal farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade ilustrativa, o composto da invenção é um composto aqui descrito ou um sal farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade ilustrativa, o composto está de acordo com uma fórmula aqui descrita ou um sal farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade ilustrativa, o composto é parte de uma formulação farmacêutica aqui descrita. Em uma modalidade ilustrativa, o animal é um elemento selecionado a partir de humanos, gado, veados, renas, cabras, abelhas, porcos, carneiros, cavalos, vacas, bois, cães, porquinhos-da-índia, coelhos, gatos, camelos, iaques, elefantes, emas, lontras, galinhas, patos, gansos, galinhas d'angola, pombos, cisnes e perus. Em uma modalidade ilustrativa, o animal é um humano. Em uma modalidade ilustrativa, o animal é um elemento selecionado a partir de humanos, gado, veados, porcos, carneiros, cavalos, vacas, bois, cães, porquinhos-da-índia, coelhos, gatos, galinhas e perus. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de uma doença sistêmica, uma doença cutânea, e uma doença ungueal, periungueal ou subungueal. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é uma doença sistêmica. Em outra modalidade ilustrativa, o composto é um elemento selecionado a partir de

OR*

HO’

104

Em outra modalidade ilustrativa, R* é H.

Em uma modalidade ilustrativa, o tratamento de uma desordem ou condição ocorre através da inibição de um domínio de edição de um aminoacil-tRNA sintetase. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é tratada através da administração oral do composto da invenção. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é tratada através da administração intravenosa do composto da invenção.

VIII. a)Métodos para tratamento de doenças sistêmicas

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de tratamento de doença sistêmica. O método envolve o contato de um animal com um composto da invenção.

Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado da candidíase, aspergilose, coccidioidomicose, criptococose, histoplasmose, blastomicose, paracoccidioidomicose, feohifomicose zigomicose, e rinosporidiose.

Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada a uma infecção por um microorganismo descrito aqui. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada a uma infecção por uma bactéria descrita aqui.

Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada a uma infecção por uma bactéria gram positiva. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada a espécie Staphylococcus. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de pneumonia, gastroenterite, síndrome de choque tóxico, CAP, meningite, artrite séptica, infecções do trato urinário, bacteremia, endocardite, osteomilite, infecções da pele e estrutura da pele. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada a espécie Staphylococcus. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir da infecção da garganta, infecções cutâneas, fasciíte necrotizante, síndrome de choque tóxico, pneumonia, otite

105 média e sinusite. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada a espécie Actinomyce. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é actinomicose. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Norcardia. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é pneumonia. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Corynebacterium. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é difteria. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Listeria. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é meningite. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Bacillus. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de antraz e intoxicação alimentar. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Clostridium. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de botulismo, tétano, gangrena gasosa e diarréia. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Mycobacterium. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de tuberculose e lepro.

Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada a uma infecção por uma bactéria gram negativa. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Neisseria. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de meningite, gonorréia, otite extrema e foliculite. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Escherichia. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de diarréia, infecções do trato urinário, meningite, septicemia e HAP. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Shigella. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de diarréia, bacteremia, endocardite, meningite e gastroenterite. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Salmonella. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de febre tifóide, sepsis, gastroenterite, endocardite,

106 sinusite e meningite. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Yersinia. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de febre tifóide, peste bubônica, febre tifóide e gastroenterite. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Klebsiella. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de sepsis e infecções do trato urinário. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Proteus . Em uma modalidade ilustrativa, a doença é uma infecção no trato urinário. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Enterobacter. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é uma infecção hospitalar. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Serratia. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de infecção do trato urinário, infecção da pele e estrutura da pele e pneumonia. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Vibrio. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de cólera e gastrenterite. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Campylobacter. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é gastroenterite. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Helicobacter. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é gastrite crônica. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Pseudomonas. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir da pneumonia, osteomilite, infecções de feridas, sepsis, infecções do trato urinário, endocardite, otite, infecções da córnea. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Bacteroides. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de doença periodontal e pneumonia aspirativa. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Haemophilus. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de meningite, epiglotite, artrite séptica, sepse, cancróide e vaginite. Em uma modalidade

107 ilustrativa, a doença está associada à espécie Bordetella. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é tosse convulsa. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Legionella . Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de pneumonia e febre de Pontiac. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Francisella. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é tularemia. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Brucella. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é brucelose. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Pasteurella. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é uma infecção na pele. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Gardnerella. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é vaginite. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Spirochetes. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é sífilis e doença de Lyme. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Chlamydia. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é clamídia. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à espécie Rickettsiae. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de febre maculosa e tifo.

Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada a Mycoplasma pneumoniae. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é um elemento selecionado a partir de traqueobronquite e pneumonia em organização. Em uma modalidade ilustrativa, a doença está associada à Ureaplasma urealyticum. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é uretrite. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é pielonefrite. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é uma infecção intra-abdominal Em uma modalidade ilustrativa, a doença é neutropenia febrila. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é uma infecção pélvica. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é bacteremia. Em uma modalidade ilustrativa, a doença é septicemia.

Em outra modalidade ilustrativa, o composto administrado

108 possui uma estrutura que é um elemento selecionado a partir de

OR* OR* OR*

Em outra modalidade ilustrativa, R* é H.

VIII. b) Métodos para tratamento de prevenção de doenças ungueais e/ou periungueais

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de tratamento e/ou prevenção de doença ungueal e/ou periungueal. O método inclui a administração ao animal de uma quantidade terapeuticamente eficaz 10 do composto ou formulação farmacêutica da invenção suficiente para tratar e/ou prevenir a doença. Em uma modalidade ilustrativa, o método inclui a administração de composto ou formulação farmacêutica da invenção em um local que é um elemento selecionado a partir da pele, unha, cabelo, pata, garra e pele ao redor da unha, cabelo, pata e garra. Em outra modalidade ilustrativa, 15 o composto é um elemento selecionado a partir de

OR* OR* OR*

109

~~nh₂ e nh₂.

Em outra modalidade ilustrativa, R* é H.

VIII. b) DOnicomicose

Onicomicose é uma doença da unha causada por leveduras, dermatófitos, ou outros fungos, e representa cerca de 50% de todas as alterações nas unhas. As infecções nas unhas dos pés representam cerca de 80 de incidência de onicomicoses, quando as unhas das mãos são afetadas em cerca de 20% dos casos. Os dermatófitos são a causa mais freqüente de invasão da lâmina ungueal, em especial onicomicose da unha do pé. A onicomicose causada por dermatófitos é chamada Tinea unguium. Trichophyton rubrum é de longe o dermatófito mais isolado, seguido por T. mentagrophytes. A onicomicose distai subungueal é a apresentação mais comum da tinea unguium, com o principal local de entrada através do hiponíquio (epiderme grossa por baixo da extremidade livre distai de uma unha) progride no tempo para envolver o leito e a lâmina ungueal. Caracterizam a doença: descoloração, onicólise e acúmulo de detritos subungueal e distrofia da lâmina ungueal. A doença afeta negativamente a qualidade de vida das suas vítimas, sujeito à queixas que vão desde unhas feias e desconforto com o calçado, a complicações mais graves, incluindo infecções bacterianas secundárias.

Muitos métodos são conhecidos pelo tratamento de infecções fúngicas, incluindo, o uso oral e tópica de antibióticos (por exemplo, nistatina e anfotericina B), agentes anti-fungicos imidazol, como miconazol, clotrimazol, fluconazol, econazol e sulconazol e agentes fungicos nãoimidazólicos como a terbinafina derivados e nafitifina e o butenafina

110 benzilamina.

No entanto, a onicomicose parece é resistente à maioria dos tratamentos. As infecções fungicas da unha residem em uma área de difícila acesso aos tratamentos tópicos convencionais e medicamentos anti-fungicos não pode facilmente penetrar a lâmina ungueal para alcançar os locais de infecção sob a unha. Portanto, a onicomicose tem sido tradicionalmente tratada pela administração oral de medicamentos anti-fungicos, no entanto, é indesejável, devido ao potencial de efeitos colaterais dessas drogas, em especial as causadas pelos mais potentes drogas anti-fóngicas, tais como o itraconazol e cetoconazol. Um método alternativo de tratamento de onicomicose é pela retirada das unhas antes de tratar com um agente antifungico ativo topicamente; esse método de tratamento é igualmente indesejável. Os agentes anti-micóticos sintêmicos exigem uso prolongado e possuem o potencial para efeitos colaterais significativos. Os agentes tópicos têm tido geralmente pouco beneficio, principalmente por causa da baixa penetração de agentes anti-fungicos em e através da massa da unha.

Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um método para tratar ou prevenir a onimicose. O método inclui a administração a um animal de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção, suficiente para tratar ou prevenir a onimicose. Em outra modalidade exemplar, o método inclui a administração do composto da invenção em um local que é um elemento selecionado da pele, unhas, cabelo, casco, garra e da pele que envolve as unhas, cabelo, casco e garras. Em outra modalidade exemplar, o animal é um humano. Em outra modalidade exemplar, o composto da invenção é um composto descrito neste documento. Em outra modalidade exempla, o composto é um elemento selecionado de

111

Em uma modalidade exemplar, o composto é um elemento selecionado de

VIII. b) 2) Outras doenças ungueais e periungueais

Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um método para tratar ou prevenir uma doença ungueal ou periungueal em um animal.

Este método compreende a administração ao animal de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção, assim tratando ou prevenindo a doença ungueal ou periungueal. Em uma modalidade exemplar, a doença ungueal ou periungueal é um elemento selecionado de: síndrome da 10 unha verde, paroníquia, erisipelóide, onicorrexe, gonorréia, granuloma de piscina, larva migrans, hanseníase, nódulo Orf, nódulos dos ordenhadores, panarício herpético, perionixe bacteriana aguda, perionixe crônica, esporotricose, sífilis, tuberculose verrucosa cutis, tularemia, tungíase, verrugas peri e subungueais, zona, distrofia ungueal (traquioníquia), e 15 doenças dermatológicas com um efeito nas unhas, tais como psoríase, psoríase pustulosa, alopécia areata, paraceratose pustulosa, dermatose de contato, síndrome de Reiter, dermatite acral psoriasiforme, líquen plano, atrofia idiopática nas unhas, líquen nítido, líquen estriado, nevo epidérmico verrucoso inflamatório linear (NEVIL), alopécia, pênfigo, penfigóide

112 bolhoso, epidermólise bolhosa adquirida, doença de Darier, pitiríase rubra pilar, hiperqueratose palmoplantar, eczema de contato, eritema polimorfo, sarna, síndrome de Bazex, esclerodermia, lúpus eritematoso sistêmico, lúpus eritematoso crônico e dermatomiosite.

Os compostos e formulações farmacêuticas da invenção úteis para aplicações ungueais e periungueais também encontram aplicação no campo dos cosméticos, em particular para o tratamento de irregularidades das unhas, coiloníquias, linhas de Beau, sulcos longitudinais, unhas encravadas.

Em uma modalidade exemplar, a doença é uma doença de pele, unhas, cabelo, garras ou cascos, cabelo, orelhas e olhos e é um elemento selecionado de Esporotricose, ceratite micótica, oculomicose de extensão, oculomicose endógena, lobomicose, micetoma, piedra, pitiríase versicolor, tinea corporis, tinea cruris, tinea pedis, tinea barbae, tinea capitis, tinea nigra, otomicose, favosa, cromomicose e tinea imbricada. Em uma modalidade exemplar, o composto útila para tratamento destas doenças é um composto da invenção. Em outra modalidade exemplar, o composto da invenção tem uma estrutura que é um elemento selecionado de

Em outra modalidade exemplar, R* é H.

VIII. c) Métodos para tratar doenças envolvendo vírus

Os compostos da invenção são úteis para tratar doenças de animais (como humanos), envolvendo vírus. Em uma modalidade exemplar, a doença é um elemento selecionado da hepatite A, B, C, febre amarela, sincicial respiratório, gripe, AIDS, herpes simples, varicela, varicella zoster, e

113 doença de Epstein-Barr. Em outra modalidade exemplar, o composto é um elemento selecionado de

Em uma modalidade exemplar, o composto é um elemento selecionado de

Em outra modalidade exemplar, R* é H.

VIII. d) Métodos para tratar doenças envolvendo parasitas

Os compostos da invenção são úteis para tratar de doenças de animais (como humanos), envolvendo parasitas. Em uma modalidade exemplar, a doença é um elemento selecionado da malária, doença de Chagas, leishmaniose, doença do sono africana (tripanossomíase humana africana), giardíase, toxoplasmose, amebíase e criptosporidiose.

Em qualquer dos métodos de acordo com a presente invenção estabelecidos acima, é preferível que a sintetase aminoacila tRNA seja uma sintetase aminoacila tRNA compreendendo um domínio de edição. O domínio de edição é codificado por uma porção da sintetase aminoacila tRNA envolvida prova de leitura. O domínio de edição é preferivelmente codificado por uma porção de DNA possuindo ao menos resíduos conservados em comparação após alinhamento com o local de edição da sintetase leuciltRNA, sintetase valil-tRNA e sintetase isoleucil-tRNA. Mais preferivelmente a sintetase é selecionada do grupo consistindo da sintetase valil-tRNA, sintetase isoleucil-tRNA, sintetase leucil-tRNA, sintetase alanil-tRNA, sintetase prolil-tRNA, sintetase treonil-tRNA, sintetase fenil-tRNA e sintetase lisil-tRNA que são conhecidas por ter um local ou domínio de edição (veja Ile RS Baldwin, A. N. e Berg, P. (1966) J. Biol. Chem. 241, 839-845 e Eldred, E. W. e Schimmel, P. R. (1972) J. Biol. Chem. 247, 2961-2964; para Vai RS, Fersht, A. R. e Kaethner, Μ. M. (1976) Biochemistry. 15 (15), 3342-3346;

114 para Leu RS, English, S. e outros, (1986) Nucleic Acids Research. 14 (19), 7529-7539; para Ala RS, Tsui, W. C. e Fersht, A. R. (1981) Nucleic Acids Research. 9, 7529-7539; para Pro RS, Beuning, P. J. e Musier-Forsyth, K. (2000) PNAS. 97 (16), 8916-8920; para Thr RS, Sankaranarayanan, R. e 5 outros (2000) Nat. Struct. Biol. 7, 461-465 e Musier-Foryth, K. e Beuning, P.

J. (2000) Nat. Struct. Biol. 7, 435-436; para PheRS, Yarus, M. (1972) PNAS.

69, 1915-1919 e para LysRS, Jakubowski, H. (1997) Biochemistry. 36,

11077-11085). Em outra modalidade exemplar, o composto da invenção é um elemento selecionado de

Em uma modalidade exemplar, o composto é um elemento selecionado de

Em outra modalidade exemplar, R* é H.

IX. Métodos de penetração da unha

Acredita-se que a penetração ruim do agente ativo através do casco ou lâmina ungueal e/ou excessiva vinculação à queratina (a principal proteína nas unhas e cabelo) são as razões para a eficiência ruim de 8% de ciclopirox p/p em laquês comerciais e outros tratamentos tópicos que falharam em testes clínicos. Nos casos leves de onicomicose, o fungo patogênico reside apenas na lâmina ungueal. Em casos moderados a severos o

115 fungo patogênico estabelece uma presença na lâmina ungueal e no leito ungueal. Se é infecção é limpa da lâmina ungueal, mas não do leito ungueal, o fungo patogênico pode reinfectar a lâmina ungueal. Assim, para tratar efetivamente a onicomicose, a infecção deve é eliminada da lâmina ungueal e do leito ungueal. Para fazer isso, o agente ativo deve penetrar e se disseminar substancialmente através da lâmina ungueal e do leito ungueal.

Acredita-se que para um agente ativo é efetivo uma vez disseminado através da área infectada, deve é biodisponível ao patógeno fungico e não podem ser tão ligado à queratina que a droga não iniba o crescimento ou elimine os fungos infectantes.

Uma compreensão da morfologia da lâmina ungueal sugere certas propriedades físico-químicas de um agente ativo que facilitariam a penetração da lâmina ungueal. As propriedades físico-químicas desejadas são descritas por completo. Os compostos testados da presente invenção são capazes de penetrar a lâmina ungueal e também são ativos contra Trichophyton rubrum e mentagrofites outras espécies. Além disso, os componentes testados também são ativos contra Trichophyton rubrum na presença de pó de queratina a 5%.

Em uma modalidade exemplar a invenção fornece um método para exterminar ou prevenir o crescimento de um microorganismo presente em uma unidade de unha humana, onde a dita unidade de unha humana compreende uma lâmina ungueal. O método compreende contatar a camada dorsal da lâmina ungueal com um composto da invenção capaz de penetrar a lâmina ungueal, viajando através da lâmina ungueal a um leito ungueal subjacente à dita lâmina ungueal, e contatar o dito microorganismo, sob condições suficientes para o dito composto penetrar a dita lâmina ungueal. Nesta modalidade, o composto tem um peso molecular entre cerca de 100 Da a cerca de 200 Da, um valor log P entre cerca de 1.0 e cerca de 2,6, uma solubilidade em água maior que cerca de 0,1 mg/mL octanol/água saturada, e

116 um MIC de menos de 16 pg/mL, contra o dito microorganismo, assim exterminando ou inibindo o crescimento do dito microorganismo. Em outra modalidade exemplar, o composto da invenção tem uma estrutura que é um elemento selecionado de

Em uma modalidade exemplar, o composto é um elemento selecionado de

Em outra modalidade exemplar, R* é H.

Em outra modalidade exemplar, a invenção fornece um método para tratar uma doença causada por um microorganismo presente em 10 uma unidade de unha humana, onde a dita unidade de unha humana compreende uma lâmina ungueal, o dito método compreendendo: o contato de uma camada dorsal da lâmina ungueal com um composto da invenção capaz de penetrar a lâmina ungueal, viajar através da lâmina ungueal a um leito ungueal subjacente à dita lâmina ungueal, e contatar o dito microorganismo, 15 sob condições suficientes para o dito composto penetrar a dita lâmina ungueal e tratar a dita doença. Nesta modalidade, o composto tem um peso molecular entre cerca de 100 Da e cerca de 200 Da, um valor log P entre cerca de 1,0 e cerca de 2,6; uma solubilidade em água maior que cerca de 0,1 mg/mL

117 octanol/água saturada, e um MIC de menos que 16 pg/mL contra os ditos microorganismos, assim tratando a dita doença. Em uma modalidade exemplar, o composto é descrito neste documento.

Em outro aspecto, a invenção fornece um método para entrega de um composto da camada dorsal da lâmina ungueal para o leito ungueal. Este método compreende contatar a célula com um composto da invenção capaz de penetrar a lâmina ungueal, sob condições suficientes para penetrar a unha. O composto tem um peso molecular entre cerca de 100 e cerca de 200 Da. O composto também tem um valor log P entre cerca de 1,0 e cerca de 2,6. O composto adicionalmente tem uma solubilidade em água entre cerca de 0,1 mg/mL e cerca de 1 g/mL octanol/água saturada, assim entregando o dito composto.

Em uma modalidade preferida, as propriedades físico-químicas do composto da invenção, descrito pelas quantidades de previsão para a migração do composto através da lâmina ungueal, incluem, mas não são limitadas ao, peso molecular, log P e solubilidade em água, e semelhantes, são efetivas para fornecer uma penetração substancial da lâmina ungueal.

Os compostos com um peso molecular menor que 200 Da penetram a lâmina ungueal em um modo melhor que os tratamentos comercialmente disponíveis para onicomicose. Em uma modalidade da presente invenção o composto tem um peso molecular entre 130 e 200. Em outra modalidade desta invenção, o composto tem um peso molecular de cerca de 140 a cerca de 200 Da. Em outra modalidade desta invenção, o composto tem peso molecular de cerca de 170 a cerca de 200 Da. Em outra modalidade desta invenção, o composto tem um peso molecular de cerca de 155 a cerca de 190 Da. Em outra modalidade desta invenção, o composto tem um peso molecular de cerca de 165 a cerca de 185 Da. Em outra modalidade desta invenção, o composto tem um peso molecular de cerca de 145 a cerca de 170 Da. Em ainda outra modalidade o peso molecular ou é 151,93 ou é

118

168,39 Da.

Em uma modalidade da presente invenção o composto tem um valor log P entre cerca de -3,5 a cerca de 2,5. Em outra modalidade exemplar, o composto tem um valor log P entre cerca de -1,0 a cerca de 2,5. Em outra modalidade exemplar, o composto tem um valor log P entre cerca de 1,0 a cerca de 2,0. Em outra modalidade exemplar, o composto tem um valor log P entre cerca de -0,5 a cerca de 2,5. Em outra modalidade exemplar, o composto tem um valor log P entre cerca de -0,5 a cerca de 1,5. Em outra modalidade exemplar, o composto tem um valor log P entre cerca de 0,5 a cerca de 2,5. Em outra modalidade exemplar, o composto tem um valor log P entre cerca de 1,0 a cerca de 2,5. Em ainda outra modalidade exemplar, o composto tem um valor log P de 1,9 ou 2,3.

Também está contemplado pela presente invenção um composto com um valor log P menor que 2,5, com um peso molecular menor que 200 Da, que ainda é capaz de penetrar a lâmina ungueal.

Em uma modalidade da presente invenção o composto tem uma solubilidade em água entre cerca de 0,1 mg/mL a 1 g/mL em água saturada por octanol. Em uma modalidade da presente invenção o composto tem uma solubilidade em água entre cerca de 0,1 mg/mL e 100 mg/mL. Em outra modalidade desta invenção, o composto tem uma solubilidade em água entre cerca de 0,1 mg/mL e 10 mg/mL. Em outra modalidade desta invenção, o composto tem uma solubilidade em água entre cerca de 0,1 mg/mL e 1 mg/mL. Em outra modalidade desta invenção, o composto tem uma solubilidade em água entre cerca de 5 mg/mL e 1 g/mL. Em outra modalidade desta invenção, o composto tem uma solubilidade em água entre cerca de 10 mg/mL e 500 mg/mL. Em outra modalidade desta invenção, o composto tem uma solubilidade em água entre cerca de 80 mg/mL e 250 mg/mL.

Em uma modalidade exemplar, a presente invenção fornece um composto com um valor log P selecionado de uma faixa acima, com um

119 peso molecular selecionado de uma faixa acima, e que ainda é capaz de penetrar a lâmina ungueal.

Em uma modalidade exemplar, a presente invenção fornece um composto com um peso molecular selecionado de uma faixa acima, com uma solubilidade em água selecionada de uma faixa acima, que ainda é capaz de penetrar a lâmina ungueal.

Em uma modalidade exemplar, a presente invenção fornece um composto com um log P selecionado de uma faixa acima, com uma solubilidade em água selecionada de uma faixa acima, que ainda é capaz de penetrar a lâmina ungueal.

Em uma modalidade exemplar, a presente invenção fornece um composto com um peso molecular selecionado de uma faixa acima, com um log P selecionado de uma faixa acima, e com uma solubilidade em água selecionada de uma faixa acima, que ainda é capaz de penetrar a lâmina ungueal.

A penetração da unha pelo ingrediente ativo podem ser afetada pela polaridade da formulação. Entretanto, não se espera que a polaridade da formulação tenha tanta influência na penetração da usa quanto alguns dos outros fatores, como o peso molecular ou o log P do ingrediente ativo. A presença de agentes de reforço de penetração na formulação é desejável para aumentar a penetração do agente ativo quando comparada com formulações similares não contendo um agente de reforço de penetração.

Alguns exemplos de moléculas com propriedades físicoquímicas ótimas são dados na tabela abaixo.

Estrutura:	OH (composto 1)	OH i Lo (composto 2)
Fórmula:	C₇H₆BFO₂	c₇h₆bcio₂
Peso Molecular (Da):	151,93	168,39
Ligação às proteínas plasmáticas (%):	66	83
LogP:	1,9	2,3
Solubilidade em água (pg/mL):	>100	>100

120

O composto 3 abaixo é um exemplo de um composto similar em peso molecular ao ciclopirox, e como o ciclopirox, penetra a lâmina ungueal de maneira ruim.

Estrutura:	9 (composto 3)
Fórmula:	C13H10BFO
Peso Molecular (Da):	212,03
Ligação às proteínas plasmáticas (%):	100
cLogP:	3,55
Solubilidade em água (pg/mL):	não determinado

Em uma modalidade preferida as formulações típicas incluem um composto da invenção que tem um peso molecular total menor que 200 Da, tem um Log P menor que 2,5, e uma concentração inibitória mínima contra Trichophyton rubrum que é substancialmente imutável na presença de queratina 5%.

O coeficiente de eficácia (definido como fluxo sobre MIC) de um composto também informa uma habilidade se o composto podem ser efetivo em exterminar um microorganismo, inibir o crescimento de um microorganismo, ou tratar uma doença que é causada por um microorganismo presente em uma unidade de unha humana, onde a dita unidade de unha humana compreende uma lâmina ungueal. O método compreende: o contato da camada dorsal da lâmina ungueal com um composto da invenção capaz de penetrar a lâmina ungueal, viajar através da lâmina ungueal a um leito ungueal subjacente à dita lâmina ungueal, e contatar o dito microorganismo, sob condições suficientes para o composto penetrar a dita lâmina ungueal e tratar a dita doença, onde o composto tem um coeficiente de eficácia acima de

10.

Em uma modalidade exemplar, o composto tem um coeficiente de eficácia entre cerca de 10 e cerca de 1000. Em uma modalidade exemplar, o composto tem um coeficiente de eficácia entre cerca de 30 e cerca de 100.

121

Em uma modalidade exemplar, o composto tem um coeficiente de eficácia entre cerca de 100 e cerca de 500. Em uma modalidade exemplar, o composto tem um coeficiente de eficácia entre cerca de 25 e cerca de 200.

O método fornecido neste aspecto da invenção é útila na penetração de unhas e cascos, bem como no tratamento de condições ungueais e periungueais.

IX. Formulações farmacêuticas

Em outro aspecto, a invenção é uma formulação farmacêutica que inclui: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um composto da invenção. Em outro aspecto, a formulação farmacêutica inclui: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um composto de acordo com uma fórmula descrita neste documento. Em outro aspecto, a formulação farmacêutica inclui: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um composto descrito neste documento, ou um sal, pró-droga, hidrato ou solvato deste, ou uma combinação destes. Em outro aspecto, a formulação farmacêutica inclui: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um composto descrito neste documento, ou um sal, hidrato ou solvato deste, ou uma combinação destes. Em outro aspecto, a formulação farmacêutica inclui:

(a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um composto descrito neste documento, ou um sal, hidrato ou solvato deste. Em outro aspecto, a formulação farmacêutica inclui: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um sal de um composto descrito neste documento. Em uma modalidade exemplar, o sal é um sal farmaceuticamente aceitável. Em outro aspecto, a formulação farmacêutica inclui: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) uma pró-droga de um composto descrito neste documento. Em outro aspecto, a formulação farmacêutica inclui: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um composto descrito neste documento. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica é uma forma de dosagem unitária. Em uma modalidade exemplar, a formulação

122 farmacêutica é uma única forma de dosagem unitária.

Em outra modalidade exemplar, a invenção é uma formulação farmacêutica compreendendo: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um composto possuindo uma estrutura que é um elemento selecionado 5 de:

Em outra modalidade exemplar, a invenção é uma formulação farmacêutica compreendendo: (a) um excipiente farmaceuticamente aceitável; e (b) um composto possuindo uma estrutura que é um elemento selecionado de

OR* OR* OR*

Em uma modalidade exemplar, o composto é um elemento selecionado de

Em uma outra modalidade, R* é El.

As formulações farmacêuticas da invenção pode tomar uma variedade de formas adaptadas à rota escolhida de administração. Os técnicos 15 na arte irão reconhecer várias metodologias sintéticas que podem ser

123 empregadas no preparo de formulações farmacêuticas não-tóxicas incorporando os compostos descritos neste documento. Os técnicos na arte irão reconhecer uma ampla variedade de solventes farmaceuticamente aceitáveis não-tóxicos que podem ser usados para preparar solvatos dos componentes da invenção, tais como água, etanol, propileno glicol, óleo mineral, óleo vegetal e dimetilsulfóxido (DMSO).

A formulação farmacêutica da invenção podem ser administrada via oral, tópica, parenteral, por inalação ou spray ou via retal em formas de dosagem unitária contendo portadores, adjuvantes e veículos farmaceuticamente aceitáveis não-tóxicos convencionais. E ainda compreendido que o melhor método de administração podem ser uma combinação de métodos. Administração oral na forma de uma pílula, cápsula, elixir, xarope, pastilha, trocisco ou semelhantes é particularmente preferida. O termo parenteral é usado neste documento incluindo injeções subcutâneas, intradermais, intravasculares (intravenosas), intramusculares, espinais, injeção intratecal ou técnicas de injeção ou infusão semelhantes. Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica da invenção é administrada por via intravenosa.

As formulações farmacêuticas contendo compostos da invenção preferivelmente estão em uma forma adequada para uso oral, por exemplo, como comprimidos, trociscos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós ou grânulos dispersíveis, cápsulas moles ou duras, ou xaropes ou elixires.

Composições destinadas a uso oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na arte para a fabricação de formulações farmacêuticas, e tais composições podem conter um ou mais agentes selecionados de um grupo consistindo de edulcorantes, aromatizantes, corantes e conservantes a fim de fornecer preparações farmaceuticamente elegantes e saborosas. Comprimidos podem conter o ingrediente ativo em

124 mistura com excipientes não-tóxicos farmaceuticamente aceitáveis que são adequados para a fabricação de comprimidos. Estes excipientes podem ser, por exemplo, diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, por exemplo, amido de milho ou ácido algínico; aglutinantes, por exemplo, amido, gelatina ou acácia; lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimentos podem ser nãorevestidos ou podem ser revestidos com técnicas conhecidas para desintegração com retardo e absorção no trato gastrintestinal e assim fornecer uma ação sustentada ao longo de um longo período. Por exemplo, um material de retardo de tempo tal como monostearato de glicerol ou distearato de glicerol podem ser empregado.

Formulações para uso oral também podem ser apresentadas como cápsulas duras de gelatina, onde o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caolina, ou como cápsulas moles de gelatina, onde o ingrediente ativo é misturado com água ou um meio oleoso, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida ou óleo de oliva.

Suspensões aquosas contêm os materiais ativos misturado com excipientes adequados para a fabricação de suspensões aquosas. Tais excipientes são agentes de suspensão, por exemplo, carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidropropilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto e goma aacacia; e dispersantes ou umectantes, que podem ser um fosfatido de ocorrência natural, por exemplo, lecitina, ou produtos de condensação de um óxido alquileno com ácidos graxos, por exemplo, estearato de polioxietileno, ou produtos de condensação de óxido etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo, heptadecaetilenoxicetanol, ou produtos de condensação do oxide etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e um hexitol como monooleato de

125 polioxietileno sorbitano. As suspensões aquosas podem também conter um ou mais conservantes, por exemplo, etila, ou n-propila p-hidroxibenzoato, um ou mais corantes, um ou mais aromatizantes, e um ou mais edulcorantes, como a sucrose e a sacarina.

Suspensões oleosas podem ser formuladas pela suspensão dos ingredientes ativos em um óleo vegetal, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de oliva, óleo de gergelim ou óleo de coco, ou em um óleo mineral como parafina líquida. As suspensões oleosas podem conter um espessante, por exemplo, cera de abelha, parafina sólida ou álcool cetila. Edulcorantes como os estabelecidos acima, e aromatizantes pode se adicionada para fornecer preparações orais palatáveis. Estas composições podem ser conservadas com a adição de um anti-oxidante como o ácido ascórbico.

Pós e grânulos dispersíveis adequados para a preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água fornecem o ingrediente ativo em mistura com um dispersante ou umectante, agente de suspensão e um ou mais conservantes. Dispersantes ou umectantes e agentes de suspensão adequados são exemplificados por aqueles já mencionados acima. Excipientes adicionais, por exemplo, edulcorantes, aromatizantes e corantes, podem também estar presentes.

Formulações farmacêuticas da invenção também podem estar na forma de emulsões óleo-em-água ou emulsões água-em-óleo. A fase oleosa podem ser um óleo vegetal, por exemplo, óleo de oliva ou óleo de amendoim, ou um óleo mineral, por exemplo, parafina líquida ou uma mistura desta. Emulsionantes adequados podem ser gomas de ocorrência natural, por exemplo, goma acácia e goma tragacanto, fosfatidos de ocorrência natural, por exemplo, soja, lecitina, e ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos graxos e hexitol; anidridos, por exemplo, monooleato de sorbitano, e produtos de condensação dos ditos ésteres parciais com óxido etileno, por exemplo, monooleato de polioxietileno sorbitano. As emulsões também

126 podem conter edulcorantes e aromatizantes.

Xaropes e elixires podem ser formulados com edulcorantes, por exemplo, glicerol, propileno glicol, sorbitol ou sucrose. Tais formulações também podem contem um demulcente, um conservante, e aromatizantes e corantes. As formulações farmacêuticas podem estar na forma de uma suspensão aquosa injetável estérila ou oleaginosa. Esta suspensão podem ser formulada de acordo com o estado da arte usando aqueles dispersantes ou umectantes e agentes de suspensão adequados, que foram mencionados acima. A preparação injetável estérila pode também é uma solução injetável estérila ou uma suspensão em um solvente ou diluente não-tóxico parenteralmente aceitável, por exemplo, como uma solução de 1,3-butanediol. Dentro os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão a água, a solução de Ringer e a solução de cloreto de sódio isotônica. Além disso, óleos fixos, estéreis, são empregados usualmente como um solvente ou meio de suspensão. Para este propósito qualquer óleo fixo suave podem ser empregado, incluindo mono ou diglicerídios sintéticos. Além disso, ácidos graxos tais como ácido oléico encontram uso na preparação de injetáveis.

A composição da invenção também podem ser administrada na forma de supositórios, por exemplo, para administração retal da droga. Estas composições podem ser preparadas pela mistura da droga com um excipiente não-irritante adequado que é sólido a temperaturas comuns, mas líquido à temperatura retal e irá assim derreter no reto para liberar a droga. Tais materiais são manteiga de cacau e polietilenos glicóis.

Altemativamente, as composições podem ser administradas parentalmente em um meio estéreo. A droga, dependendo do veículo e concentrações usadas, podem ser tanto suspensa ou dissolvida no veículo. Vantajosamente, adjuvantes tais como anestésicos locais, conservantes e agentes de tamponamento podem ser dissolvidos no veículo.

Para a administração em animais não-humanos, a composição

127 contendo o composto terapêutico podem ser adicionada à alimentação ou água do animal. Também, será conveniente formular produções de alimentação e consumo de água do animal de forma que o animal tome uma quantidade apropriada do composto em sua dieta. Será ainda mais conveniente apresentar o composto em uma composição como uma pré-mistura para adição à alimentação ou água. A composição pode também se adicionada como um suplemento alimentar ou líquido para humanos.

Níveis de dosagem da ordem de cerca de 5 mg até cerca de 250 mg por quilograma de peso corporal por dia e, mais preferivelmente de cerca de 25 mg até cerca de 150 mg por quilograma de peso corporal por dia, são úteis no tratamento das condições indicadas acima. A quantidade do ingrediente ativo que podem ser combinada com os materiais de transporte para produzir uma forma de dosagem unitária irá variar dependendo das condições sendo tratadas e do modo particular de administração. Formas de dosagem unitária geralmente contém entre cerca de 1 mg a cerca de 500 mg de um ingrediente ativo.

A frequência da dosagem pode também variar dependendo do composto usado e da doença em particular sendo tratada. Entretanto, para o tratamento da maioria dos distúrbios, um regime de dosagem de 4 vezes diárias ou menos é preferível. Será entendido, entretanto, que o nível de dosagem específico para qualquer doente em particular irá depender de uma variedade de fatores, incluindo a atividade do composto específico empregado, a idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, hora da administração, rota da administração e taxa de excreção, combinação da droga e severidade da doença em particular em terapia.

Compostos preferidos da invenção irão ter propriedades farmacêuticas desejáveis que incluem, mas não são limitadas a, biodisponibilidade oral, baixa toxidade, baixa ligação às proteínas séricas e meia-vidas in vitro e in vivo desejáveis. A penetração da barreira

128 hematoencefálica para os compostos usados no tratamento de distúrbios do sistema nervoso central é necessária, enquanto baixos níveis cerebrais dos compostos usados para tratar distúrbios periféricos são muitas vezes preferidos.

Ensaios podem ser usados para predizer estas propriedades farmacológicas desejadas. Ensaios usados para predizer a biodisponibilidade incluem transporte através monocamada de células intestinais humanas, incluindo monocamadas de células Caco-2. A toxicidade para hepatócítos cultivados podem ser utilizada para prever a toxicidade do composto. A penetração da barreira hematoencefálica de um composto em humanos podem ser predita a partir dos níveis cerebrais de animais de laboratório que recebem o composto de forma intravenosa.

A ligação às proteínas séricas podem ser predita a partir de ensaios de ligação de albumina. Tais ensaios são descritos em uma análise por Oravcova, e outros (Joumal of Chromatography B (1996) volume 677, páginas 1-27).

A meia-vida do composto é inversamente proporcional a frequência de dosagem de um composto. As meia-vidas in vitro dos compostos podem ser preditas a partir de ensaios de meia-via microsomal como descritos por Kuhnz e Gieschen (Drug Metabolism and Disposition, (1998) volume 26, páginas 1120-1127).

A quantidade da composição necessária para uso em tratamento irá variar não apenas com o composto em particular selecionado, mas também com a rota de administração, a natureza da condição sendo tratada e a idade e condição do paciente, e acabará por é a critério do médico assistente ou clínico.

Em uma modalidade exemplar, o excipiente da formulação farmacêutica compreende etanol e o composto da formulação farmacêutica é um elemento selecionado de

129

Em uma modalidade exemplar, o composto é um elemento selecionado de

Em outra modalidade exemplar, R* é H. Em outra modalidade exemplar, o excipiente da formulação farmacêutica compreende propileno 5 glicol e o composto da formulação farmacêutica é um elemento selecionado de

nh_{2 e}

Em uma modalidade exemplar, o composto é um elemento selecionado de

130

Em outra modalidade exemplar, R* é H. Em uma modalidade exemplar a formulação farmacêutica compreende: cerca de 1:4 de propileno glicol: etanol, com 1:10 wt/volume de um composto que é um elemento selecionado de

Em uma modalidade exemplar, o composto é um elemento selecionado de

Em outra modalidade exemplar, R* é H. Em uma modalidade exemplar a formulação farmacêutica compreende: cerca de 70% de etanol, cerca de 20% de poli (vinila metila éter / éster monobutílico de ácido maléico), cerca de 10% de um composto que é um elemento selecionado de

Em uma modalidade exemplar, o composto é um elemento selecionado de

131

Em outra modalidade exemplar, R* é H. Em uma modalidade exemplar a formulação farmacêutica compreende: cerca de 56% de etanol, cerca de 14% de água, cerca de 15% poli(2-hidroxietila metacrilato), cerca de

5% de sebacato de dibutila, cerca de 10% de um composto que é um elemento selecionado de

Em uma modalidade exemplar, o composto é um elemento selecionado de

Em outra modalidade exemplar, R* é H. Em uma modalidade exemplar a formulação farmacêutica compreende: cerca de 55% de etanol, cerca de 15% de acetato etílico, cerca de 15% de poli(acetato de vinila), cerca de 5% sebacato de dibutila, cerca de 10% de um composto que é um elemento selecionado de

132

Em uma modalidade exemplar, o composto é um elemento selecionado de

Em outra modalidade exemplar, R* é H. Em outra modalidade exemplar, um composto que é um elemento selecionado de

está presente em uma formulação farmacêutica em uma concentração que é um elemento selecionado de 1%, 2,5%, 5%, 7,5%, 10% e 15% p/v. Em outra modalidade exemplar, a formulação farmacêutica é um laquê.

Em uma modalidade exemplar, o excipiente da formulação farmacêutica compreende etanol e o composto da formulação farmacêutica é um composto descrito neste documento. Em outra modalidade exemplar, o excipiente da formulação farmacêutica compreende propileno glicol e o composto da formulação farmacêutica é um composto descrito neste

133 documento. Em uma modalidade exemplar a formulação farmacêutica compreende: cerca de 20% de propileno glicol, cerca de 70% etanol, cerca de 10% de um composto descrito neste documento. Em uma modalidade exemplar a formulação farmacêutica compreende: cerca de 70% de etanol, cerca de 20% poli (metil-vinil-eter/ácido maléico monobutila éster), cerca de 10% de um composto descrito neste documento. Em uma modalidade exemplar a formulação farmacêutica compreende: cerca de 56% de etanol, cerca de 14% de água, cerca de 15% de poli(2-hidroxietila metacrilato), cerca de 5% de sebacato de dibutila, cerca de 10% de um composto descrito neste documento. Em uma modalidade exemplar a formulação farmacêutica compreende: cerca de 55% de etanol, cerca de 15% de acetato etílico, cerca de 15% de poli (vinila acetato), cerca de 5% de sebacato de dibutila, cerca de 10% de um composto descrito neste documento. Em uma modalidade exemplar, um composto descrito neste documento está presente em uma formulação farmacêutica em uma concentração que é um elemento selecionado de 1%, 2,5%, 5%, 7,5%, 10% e 15% p/v. Em outra modalidade exemplar, a formulação farmacêutica é um laquê.

X. a) Formulações tópicas

Em uma modalidade preferida, os métodos da invenção podem ser empregados através da aplicação tópica dos componentes descritos neste documento. Em outra modalidade exemplar, o composto é um elemento selecionado de

^mh_{2 e} ^nh₂ .

Em uma modalidade exemplar, o composto é um elemento

134

selecionado de

Em outra modalidade exemplar, R* é H.

As composições da presente invenção compreendem veículos fluídos ou semi-sólidos que podem incluir, mas não são limitados a, polímeros, espessantes, tampões, neutralizadores, quelantes, conservantes, surfactantes ou emulsionantes, antioxidantes, ceras ou óleos, emolientes, filtros solares, e um solvente ou um sistema solvente misto. O solvente ou sistema solvente misto é importante para a formação porque é primariamente responsável pela dissolução da droga. O melhor solvente ou sistema solvente misto é também capaz de manter níveis clinicamente relevantes da droga na solução apesar da adição de um solvente fraco à formulação. As composições tópicas úteis na invenção podem ser feitas em uma ampla variedade de tipos de produtos. Estes incluem, mas não são limitados a, loções, cremes, géis, bastões, sprays, pomadas, pastas, espumas, mousses, e produtos de limpeza. Estes tipos de produto podem compreender vários tipos de sistemas de transporte incluindo, mas não limitadas a, partículas, nanopartículas, e liposomas. Se desejado, agentes de desintegração podem ser adicionados, tal como a polivinilpirrolidona reticulada, ácido agar ou algínico ou um sal destes tal como o alginato de sódio. Técnicas para formulação e administração podem ser encontradas em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, supra. A formulação podem ser selecionada para maximizar a entrega a um local alvo desejado no corpo.

Loções, que são preparações que são para serem aplicadas à pele, unhas, cabelo, garra ou superfície do casco sem fricção, são tipicamente preparações líquidas ou semi-líquidas nas quais um sólido finamente dividido, cera, ou líquido são dispersos. Loções tipicamente conterão agentes de

135 suspensão para produzir melhor dispersão bem como compostos úteis para localizar e manter o agente ativo em contato com a pele, unha, cabelo, garra ou casco, por exemplo, metilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, ou semelhantes.

Cremes contendo o agente ativo para entrega de acordo com a presente invenção são emulsões de líquido viscoso ou semi-sólidas, tanto óleo-em-água como água-em-óleo. As bases de creme são laváveis em água, e contém uma fase oleosa, um emulsificante e uma fase aquosa. A fase oleosa é geralmente composta de petrolato ou um álcool graxo, como o álcool cetila ou estearil; a fase aquosa usualmente, mas não necessariamente, excede a fase oleosa em volume, e geralmente contém um umectante. O emulsificador em uma formulação de creme, como explicado em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, supra, é geralmente um surfactante não-iônico, aniônico, catiônico ou anfótero.

As formulações em gel também podem ser usadas em conexão com a presente invenção. Como será apreciado por aqueles que trabalham no campo da formulação de drogas tópicas, géis são semi-sólidos. Géis de fase única contêm macromoléculas orgânicas distribuídas substancialmente uniforme através do transporte líquido, que é tipicamente aquoso, mas também podem ser um solvente ou uma mistura de solventes.

Pomadas, que são preparações semi-sólidas, são tipicamente baseadas em petrolatum ou outros derivados de petróleo. Como será apreciado pelos técnicos, a base de pomada específica a é usada é uma que forneça uma entrega ótima para o agente ativo escolhido para uma dada formulação, e, preferivelmente, forneça outras características desejadas, por exemplo, emoliência ou semelhantes. Como outros transportes ou veículos, uma base de pomada deve é inerte, estável, não irritante e não sensibilizante. Como explicado em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th Ed. (Easton, Pa.: Mack Publishing Co., 1995), nas páginas 1399-1404, as

136 bases de pomadas podem ser agrupadas em quatro classes: bases oleaginosas, bases emulsionáveis, bases de emulsão, e bases solúveis em água. As bases de pomada oleaginosas incluem, por exemplo, óleos vegetais, gordura animal, e hidrocarbonetos semi-sólidos obtidos de petróleo. As bases de pomada emulsionáveis, também conhecidas como bases de pomada absorventes, contém pouca ou nenhuma água e incluem, por exemplo, sulfato de hidroxistearina, lanolina anidra e petrolatum hidrofílico. Bases de pomada de emulsão são tanto emulsões água-em-óleo (A/O) ou emulsões óleo-em-água (O/A), e incluem, por exemplo, álcool cetila, monoestearato de glicerila, lanolina e ácido esteárico. Bases de pomada solúveis em água preferidas são preparadas a partir de polietileno glicóis de vários pesos moleculares; novamente, referência podem ser feita a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, supra, para mais informações.

Formulações úteis da invenção também englobam sprays. Sprays geralmente fornecem o agente ativo em uma solução aquosa e/ou alcoólica que é aspergida na pele, unhas, cabelos, garra ou casco para entrega. Tais sprays incluem os formulados para fornecer concentração da solução do agente ativo no local da administração após a entrega, por exemplo, a solução spray podem ser primariamente composta de álcool ou outro líquido volátila semelhante no qual a droga ou agente ativo podem ser dissolvida. Após a entrega na pele, unha, cabelos, garra ou caso, o transporte evapora, deixando o agente ativo concentrado no local da administração.

As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender transportes de fase sólida ou gel apropriados. Exemplos de tais transportes incluem, mais não são limitados a, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vários açúcares, amidos, derivados da celulose, gelatina, e polímeros tais como polietileno glicol.

As composições farmacêuticas tópicas podem também compreender um emulsificante adequado que se refere a um agente que

137 aumenta ou facilita a mistura e suspensão óleo-em-água ou água-em-óleo. O emulsificante usado aqui pode consistir de um único emulsificante ou podem ser um surfactante não-iônico, aniônico, catiônico ou anfotérico ou uma mistura de dois ou mais de tais surfactantes; preferivelmente para uso aqui são os emulsificantes não-iônicos e aniônicos. Tais agentes ativos de superfície são descritos em “McCutcheon’s Detergent and Emulsifiers,” edição norteamericana, 1980 Annual publicado por McCutcheon Division, MC Publishing Company, 175 RockRoad, Glen Rock, N.J. 07452, USA.

Preferivelmente para uso aqui são álcoois de alto peso molecular tais como álcool cetearila, álcool cetila, álcool estearila, cera emulsificante, monoestearato de glicerila. Outros exemplos são o diestearato de etileno glicol, triestearato de sorbitan, monoestearato de propileno glicol, monooleato de sorbitan, monoestearato de sorbitano (SPAN 60), monolaurato de dietileno glicol, monopalmitato de sorbitano, dioleato de sucrose, estearato de sucrose (CRODESTA F-60), polioxietileno laurila éter (BRIJ 30), polioxietileno (2) estearila éter (BRIJ 72), polioxietileno (21) estearila éter (BRIJ 721), monoestearato de polioxietileno (Myrj 45), monoestearato de polioxietileno sorbitano (TWEEN 60), monooleato de polioxietileno sorbitano (TWEEN 80), monolaurato de polioxietileno sorbitano (TWEEN 20) e oleato de sódio. Colesterol e derivados de colesterol pode também é empregados em emulsões de uso externo e promover emulsões água/óleo.

Emulsificantes não-iônicos especialmente adequados são aqueles com balanço hidrófilo/lipófilo (HLB) de cerca de 3 a 6 por sistemas a/o e de 8 a 18 para sistemas o/a como determinado pelo método descrito por Paul L. Lindner em “Emulsions and Emulsion”, editado por Kenneth Lissant, publicado por Dekker, New York, N.Y., 1974, páginas 188-190. Mais preferível para uso aqui são um ou mais surfactantes não-iônicos que produzem um sistema possuindo HLB de cerca de 8 a cerca de 18.

Exemplos de tais emulsificantes não-iônicos incluem, mas não

138 são limitados a, “BRIJ 72”, nome registrado para um polioxietileno (2) esterarila éter possuindo um HLB de 4,9; “BRIJ 721”, o nome registrado para um polioxietileno (21) estearila éter possuindo um HLB de 15,5; “Brij 30”, o nome registrado para polioxietileno laurila éter possuindo um HLB de 9,7; “Polawax”, o nome registrado para cera emulsificante possuindo um HLB de 8,0; “Span 60”, o nome registrado para monoestearato de sorbitano possuindo um HLB de 4,7; “Crodesta F-160”, o nome registrado para estearato de sucrose possuindo um HLB de 14,5. Todos estes materiais estão disponíveis de Ruger Chemicals Inc.; Croda; ICI Américas, Inc.; Spectrum Chemicals; e BASF. Quando as formulações tópicas da presente invenção contém ao menos um emulsificante, cada emulsificante está presente em uma quantidade de cerca de 0,5 a cerca de 2,5 pt%, preferivelmente 0,5 a 2,0%, mais preferivelmente 1,0% ou 1,8%. Preferivelmente o emulsificante compreende uma mistura de esteareto 21 (de cerca de 1,8%) e estearato 2 (de cerca de 1,0%).

As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender emolientes adequados. Emolientes são materiais usados para prevenção ou alívio da secura, bem como para a proteção da pele, unha, cabelos, garra ou casco. Emolientes úteis incluem, mas não são limitados a, álcool cetila, miristato de isopropila, álcool estearila, e semelhantes. Uma ampla variedade de emolientes adequados são conhecidos e podem ser usados aqui. Veja, por exemplo, Sagarin, Cosmetics, Science and Technology, segunda edição, Vol. 1, páginas. 32-43 (1972), e a patente U.S. 4.919.934 de Deckner e outros, publicada em 24 de abrila de 1990, ambas as quais são incorporadas neste documento por referência em sua totalidade. Estes materiais são disponíveis de Ruger Chemical Co, (Irvington, NJ).

Quando as formulações tópicas da presente invenção contêm pelo menos um emoliente, cada emoliente está presente em uma quantidade de cerca de 0,1 a 15%, preferivelmente 0,1 a cerca de 3,0, e mais

139 preferivelmente 0,5, 1,0 ou 2,5 % em peso. Preferivelmente o emoliente é uma mistura de álcool cetila, miristato de isopropila e álcool estearila em uma razão 1/5/2. O emoliente também podem ser uma mistura de álcool cetila e álcool estearila em uma razão 1/2.

As composições farmacêuticas tópicas podem também compreender antioxidantes adequados, substâncias conhecidas por inibir a oxidação. Antioxidantes adequados para uso de acordo com a presente invenção incluem, mas não são limitados a, hidroxitolueno butilado, ácido ascórbico, ascorbato de sódio, ascorbato de cálcio, palmitato de ascorbila, hidroxianisol butilado, 2,4,5-trihidroxibutirofenona, 4-hidroximetil-2,6-ditert-butilfenol, ácido eritórbico, goma de guaiac, propila gaiato, ácido tiodipropriônico, dilaurila tiodipropionato, tert-butilhidroquinona e tocoferois como a vitamina E, e semelhantes, incluindo sais e ésteres farmaceuticamente aceitáveis destes componentes. Preferivelmente, o antioxidante é hidroxitolueno butilado, hidroxianisol butilado, propila gaiato, ácido ascórbico, sais ou ésteres farmaceuticamente aceitáveis destes, ou misturas destes. Mais preferivelmente, o antioxidante é hidroxitolueno butilado. Estes materiais estão disponíveis de Ruger Chemical Co, (Irvington, NJ).

Quando as formulações tópicas da presente invenção contêm pelo menos um antioxidante, a quantidade total de antioxidante presente é de cerca de 0,001 a 0,5 % em peso, preferivelmente 0,05 a cerca de 0,5 % em peso, mais preferivelmente 0,1%.

As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender conservantes adequados. Conservantes são compostos adicionados a uma formulação farmacêutica para agir como um agente antimicrobial. Dentre os conservantes conhecidos na arte efetivos e aceitáveis nas formulações parenterais estão o cloreto de benzalcônio, benzalcônio, cloroexidina, fenol, m-cresol, álcool benzila, metilparabeno, propilparabeno, clorobutanol, o-cresol, p-cresol, clorocresol, nitrato de fenilmercúrio,

140 timerosal, ácido benzóico, e várias misturas destes. Veja, por exemplo, Wallhausser, K.-H., Develop. Biol. Standard, 24:9-28 (1974) (S. Krager, Basel). Preferivelmente o conservante é selecionado de metilparabeno, propilparabeno e uma mistura destes. Estes materiais estão disponíveis de Inolex Chemical Co (Philadelphia, PA) ou Spectrum Chemicals.

Quando as formulações tópicas da presente invenção contêm pelo menos um conservante, a quantidade total de conservante presente e de cerca de 0,01 a cerca de 0,5 % em peso, preferivelmente de cerca de 0,1 a 0,5%, mais preferivelmente de cerca de 0,03 a cerca de 0,15. Preferivelmente o conservante é uma mistura de metilparabeno e propilparabeno em uma razão 5/1. Quando álcool é usado como conservante, a quantidade é usualmente de 15 a 20%.

As composições farmacêuticas tópicas também podem compreender quelantes para formar complexos com cátions metálicos que não cruzam uma bicamada lipídica. Exemplos de quelantes adequados incluem ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), ácido etilenoglicol-bis(betaaminoetila éter)-N,N,N’,N’-tetracético (EGTA) e ácido 8-Amino-2-[(2amino-5-metilfenoxi)metil]-6-metoxiquinolino-N,N,N’,N’-tetracético, sal de tetrapotásio (QUIN-2). Preferivelmente os quelantes são EDTA e ácido cítrico. Estes materiais estão disponíveis de Spectrum Chemicals.

Quando as formulações tópicas da presente invenção contêm pelo menos um quelante, a quantidade total de quelante presente é de cerca de 0,005% a 2,0% por peso, preferivelmente de cerca de 0,05% a cerca de 0,5 % em peso, mais preferivelmente cerca de 0,1% por peso.

As composições farmacêuticas tópicas podem também compreender neutralizantes adequados para ajustar o pH da formulação dentro de uma faixa farmaceuticamente adequada. Exemplos de neutralizantes incluem, mas não são limitados a, trolamina, trometamina, hidróxido de sódio, ácido clorídrico, ácido cítrico e ácido acético. Tais materiais estão

141 disponíveis de Spectrum Chemicals (Gardena, CA).

Quando as formulações tópicas da presente invenção contêm pelo menos um neutralizante, a quantidade total do neutralizante presente é de cerca de 0,1 % em peso a cerca de 10 % em peso, preferivelmente 0,1% em peso a cerca de 5,0 % em peso, e mais preferivelmente de cerca de 1,0 % em peso, O neutralizante é geralmente adicionado em qualquer quantidade requerida para trazer a formulação ao pH desejado.

As composições farmacêuticas tópicas também podem conter agentes aumentadores de viscosidade adequados. Estes componentes são compostos difusíveis capazes de aumentar a viscosidade da solução contendo polímero através da interação do agente com o polímero. CARBOPOL ULTREZ 10 podem ser utilizado como um agente aumentador de viscosidade. Estes materiais estão disponíveis de Noveon Chemicals, Cleveland, OH.

Quando as formulações tópicas da presente invenção contêm pelo menos um agente aumentador de viscosidade, a quantidade total do agente aumentador de viscosidade presente é de cerca de 0,25% a cerca de 5,0% em peso, preferivelmente de cerca de 0,25% a cerca de 1,0 % em peso, e mais preferivelmente de cerca de 0,4% a cerca de 0,6% em peso.

As composições farmacêuticas tópicos também podem conter intensificadores de penetração de unha adequados. Exemplos de intensificadores de penetração de unha incluem compostos mercaptano, sulfitos e bisulfitos, agentes queratolíticos e surfactantes. Intensificadores de penetração de unha adequados para uso na invenção são descritos em mais detalhes em Malhotra et al., J. Pharm. Sei., 91:2, 312-323 (2002), que é incorporado neste documento em sua totalidade.

As composições farmacêuticas tópicas podem também compreender um ou mais solventes adequados. A habilidade de qualquer substância sólida (soluto) de se dissolver em qualquer substância líquida

142 (solvente) é dependente das propriedades físicas do soluto e do solvente. Quando os solutos e solventes tem propriedades físicas similares a solubilidade do soluto no solvente será a maior. Isso dá origem ao entendimento tradicional que “semelhante dissolve semelhante”. Solventes podem ser caracterizados em um extremo como óleos lipofílicos, não-polares, enquanto no outro extremo como solventes hidrofílicos polares. Solventes oleosos dissolvem outras substâncias não-polares pela interação Van der Wals enquanto a água e outros solventes hidrofílicos dissolvem substâncias polares através de interações de ligação iônica, dipolo ou de hidrogênio. Todos os solventes podem ser listados ao longo de um continuum do menos polar, isto é, hidrocarbonetos tais como o decano, ao mais polar solvente, sendo a água. Um soluto terá sua maior solubilidade em solventes possuindo polaridade equivalente. Assim, para drogas possuindo solubilidade mínima em água, solventes menos polares fornecerão solubilidade melhorada com o solvente possuindo polaridade praticamente equivalente ao soluto, fornecendo máxima solubilidade. A maioria das drogas tem polaridade intermediária, e assim experimentam máxima solubilidade em solventes como propileno glicol ou etano, que tem polaridade significamente menor que a água. Se a droga tem solubilidade maior em propileno glicol (por exemplo, 8% p/p) do que em água (por exemplo, 0,1% p/p), então a adição de água ao propileno glicol deverá diminuir a solubilidade máxima da quantidade da droga para a mistura de solvente em comparação com propileno glicol puro. A adição de um solvente ruim a um excelente solvente irá diminuir a solubilidade máxima para a mistura comparada com a solubilidade máxima do excelente solvente.

Quando compostos são incorporados nas formulações tópicas a concentração do ingrediente ativo na formulação podem ser limitada pela solubilidade do ingrediente ativo no solvente e/ou transporte escolhido. Drogas não-lipofílicas tipicamente mostram solubilidade muito baixa em solventes e/ou transportes farmaceuticamente aceitáveis. Por exemplo, a

143 solubilidade de alguns compostos da invenção em água é menor que 0,00025% porcentagem / porcentagem. A solubilidade do mesmo composto da invenção podem ser menos que 2% porcentagem / porcentagem tanto em propileno glicol como miristato de isopropila. Em uma modalidade da presente invenção dietileno glicol monoetila éter (DGME) é o solvente usado para dissolver os compostos da invenção. Acredita-se que os compostos da invenção úteis na presente formulação tenham uma solubilidade de cerca de 10% porcentagem / porcentagem a cerca de 25% porcentagem / porcentagem em DGME. Em outra modalidade um sistema co-solvente DGME/água é usado para dissolver os compostos da invenção. A capacidade solvente do DGME cai quando água é adicionada; entretanto, o sistema co-solvente DGME/água podem ser projetado para manter a concentração desejada de cerca de 0,1% a cerca de 0,5% porcentagem / porcentagem do ingrediente ativo. Preferivelmente o ingrediente ativo está presente de cerca de 0,5% a cerca de 3% porcentagem / porcentagem, e mais preferivelmente em cerca de 1 % porcentagem / porcentagem, nas formulações de aplicação tópica. Porque o DGME é menos volátila que água, como a formulação tópica evapora após a aplicação, o agente ativo toma-se mais solúvel na formulação em creme. Esta solubilidade aumentada reduz a probabilidade de biodisponibilidade reduzida causada pela precipitação da droga na superfície da pele, unha, cabelos, garra ou casco.

Formas líquidas, tais como loções adequadas para administração tópica ou adequadas para aplicações cosméticas, podem incluir um veículo aquoso ou não-aquoso adequado com agentes de amortecimento, suspensão e distribuição, espessantes, intensificadores de penetração, e semelhantes. As formas sólidas tais como cremes ou pastas e semelhantes podem incluir, por exemplo, quaisquer dos seguintes ingredientes, água, óleo, álcool ou graxa como um substrato com surfactante, polímeros como polietileno glicol, espessantes, sólidos e semelhantes. Formulações líquidas

144 ou sólidas podem incluir tecnologias intensificadoras de entrega tal como liposomas, microsomas, microesponjas e semelhantes.

Adicionalmente, os compostos podem ser entregues usando um sistema de liberação sustentada, tal como matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos contendo o agente terapêutico. Vários materiais de liberação sustentada foram estabelecidos e são bem conhecidos pelos técnicos na arte.

Regimes de tratamento tópico de acordo com a prática da invenção compreendem aplicar a composição diretamente na pele, unha, cabelos, garra ou casco no local de aplicação, de uma a várias vezes ao dia.

Formulações da presente invenção podem ser usadas para tratar, melhorar ou prevenir condições ou sintomas associados com infecções bacterianas, acne, inflamações e semelhantes.

Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica inclui uma solução simples. Em uma modalidade exemplar, a solução simples inclui um álcool. Em uma modalidade exemplar, a solução simples inclui álcool e água. Em uma modalidade exemplar, o álcool é etanol, etileno glicol, propanol, polipropileno glicol, isopropanol ou butanol. Em outra modalidade exemplar, a solução simples é um elemento selecionado de cerca de 10% polipropileno glicol e cerca de 90% etanol; de cerca de 20% % polipropileno glicol e cerca de 80% etanol; de cerca de 30% % polipropileno glicol e cerca de 70% etanol; de cerca de 40% % polipropileno glicol e cerca de 60% etanol; de cerca de 50% polipropileno glicol e cerca de 50% etanol; de cerca de 60% polipropileno glicol e cerca de 40% etanol; de cerca de 70% polipropileno glicol e cerca de 30% etanol; de cerca de 80% polipropileno glicol e cerca de 20% etanol; de cerca de 90% polipropileno glicol e cerca de 10% etanol.

Em uma modalidade exemplar, a formulação farmacêutica é um laquê. Por favor veja Remington, supra, para mais informações na produção de laquês.

145

Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na dita formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 0,5% a cerca de 15%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na dita formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 0,1% a cerca de 12,5%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na dita formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 1% a cerca de 10%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na dita formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 1% a cerca de 5%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na dita formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 0,5% a cerca de 5%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na dita formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 0,5% a cerca de 7,5%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na dita formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 5% a cerca de 7,5%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na dita formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 2% a cerca de 8%. Em uma modalidade exemplar, o composto está presente na dita formulação farmacêutica em uma concentração de cerca de 4% a cerca de 9%.

X. b) Agentes ativos adicionais

A seguir estão exemplos de cosméticos e agentes farmacêuticos que podem ser adicionados às formulações farmacêuticas tópicas da presente invenção. Os agentes a seguir são compostos conhecidos e prontamente disponíveis comercialmente.

Os agentes anti-inflamatórios incluem, mas não são limitados a, bisabolol, mentolato, dapsona, aloe, hidrocortisona, e semelhantes.

As vitaminas incluem, mas não são limitadas a, vitamina B, vitamina E, vitamina A, vitamina D, e semelhantes e derivados de vitaminas como tazarotena, calcipotriena, tretinoína, adapalena e semelhantes.

Agentes anti-envelhecimento incluem, mas não são limitados

146 a, niacinamida, retinol e derivados do retinol, AHA, ácido ascórbido, ácido lipoíco, coenzima Q10, ácidos betahídróxicos, ácido salicilíco, peptídeos de cobre, dimetilaminoetila (DAEA), e semelhantes.

Os filtros solares e/ou agentes de alivio de queimaduras de sol incluem, mas não são limitados a, PABA, jojoba, aloé, padimato-O, metoxicinamatos, proxamina HC1, lidocaina e semelhantes. Agentes bronzeadores incluem, mas não são limitados a, didroxiacetona (DHA).

Agentes para tratamento de psoríase e/ou agentes para tratamento de acne incluem, mas não são limitados a, ácido salicilíco, peróxido de benzoila, alcatrão de carvão, sulfeto de selênio, óxido de zinco, piritiona (zinco e/ou sódio), tazarotena, calcipotriena, tretinoína, adapaleno e semelhantes.

Agentes que são efetivos no controle ou modificação da queratinização, incluindo sem limitações: tretinoína, tazarotena, e adapaleno.

As composições compreendendo um composto/agente ativo da invenção, e opcionalmente pelo menos um destes agentes adicionais, são de administração tópica. Em uma aplicação primária, isto leva aos compostos da invenção e qualquer outro agente ativo trabalhando sobre e tratando a pele, unha, cabelos, garra ou casco. Altemativamente, qualquer um dos agentes ativos aplicados topicamente também podem ser entregue sistemicamente por rotas transdermais.

Em tais composições um agente cosmeticamente ou farmaceuticamente efetivo adicional, tal como um agente anti-inflamatório, vitamina, agente anti-envelhecimento, filtro solar, e/ou agente de tratamento de acne, por exemplo, é usualmente um componente menor (de cerca de 0,001% a cerca de 20% por peso ou preferivelmente de cerca de 0,01% a cerca de 10% por peso) com o restante sendo vários veículos ou transportes e auxílios de processamento úteis para a formação da forma de dosagem desejada.

147

X.c) Testes

Compostos preferidos para uso nas formulações farmacêuticas descritas aqui terão certas propriedades farmacológicas. Tais propriedades incluem, mas não são limitadas a, baixa toxidade, baixa ligação às proteínas séricas e meia-vidas in vitro e in vivo desejáveis. Ensaios podem ser usados para predizer estas propriedades farmacológicas desejadas. Os ensaios usados para predizer a biodisponibilidade incluem transporte através monocamada de células intestinais humanas, incluindo monocamadas de células Caco-2. A ligação às proteínas séricas podem ser predita dos ensaios de ligação de albumina. Tais ensaios são descritos em uma análise por Oravcova, e outros (1996, J. Chromat. B677: 1-27). A meia-vida do composto é inversamente proporcional à frequência da dosagem de um composto. Meia-vida in vitro de compostos podem ser preditas a partir de ensaios de meia-vida microsomal como descrito por Kuhnz e Gleschen (Drug Metabolism and Disposition, (1998) volume 26, páginas 1120-1127).

A toxicidade e eficácia terapêutica de tais compostos podem ser determinada por procedimentos farmacêuticos padrão em cultura de células ou animais experimentais, por exemplo, para determinação da LD₅₀ (a dose letal a 50% da população) e da ED₅₀ (a dose terapeuticamente eficaz em 50% da população). A razão da dose entre toxicidade e efeitos terapêuticos é o índice terapêutico e podem ser expresso como a razão entre LD₅₀ e ED₅₀. Compostos que exibem altos índices terapêuticos são preferidos. Os dados obtidos destes ensaios de cultura de células e estudos de animais podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagem para uso em humanos. A dosagem de tais componentes reside preferencialmente dentro da faixa de concentrações de circulação que inclui o ED₅₀ com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar dentro desta faixa dependendo da forma de dosagem unitária empregada e da rota de administração utilizada. A formulação exata, rota de administração e dosagem podem ser escolhidas pelo

148 médico individual, tem em vista a condição do paciente (veja, por exemplo. Fingí e outros, 1975, em “The Pharmacological Basis of Therapeutics”, capítulo 1, página 1).

X.d) Administração

Para qualquer composto usado no método da invenção, a dose terapeuticamente efetiva podem ser estimada inicialmente dos ensaios de cultura de células, como divulgado neste documento. Por exemplo, uma dose podem ser formulada em modelos animais para alcançar uma faixa de concentração de circulação que inclui o EC₅o (dose efetiva para aumento de 50%) como determinado em cultura de células, isto é, a concentração do composto de teste que alcança uma meia-máxima inibição de crescimento de células bacterianas. Tal informação podem ser usada para determinar mais precisamente doses úteis em humanos.

Em geral, os compostos preparados pelos métodos, e a partir dos intermediários, descritos neste documento serão administrados em uma quantidade terapeuticamente ou cosmeticamente efetivas por qualquer dos modos aceitáveis de administração para agentes que servem utilitários semelhantes. Será entendido, entretanto, que o nível de dosagem específico para qualquer paciente irá depender de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico empregado, a idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, hora da administração, rota da administração, e taxa de excreção, combinação da droga, a severidade da doença em particular sendo tratada e o julgamento do médico que prescreve. A droga podem ser administrada a partir de uma ou duas vezes ao dia, ou até 3 ou 4 vezes ao dia.

A quantidade da dosagem e o intervalo podem ser ajustados individualmente para fornecer níveis de plasma da fração ativa que sejam suficientes para manter os efeitos inibitórios de crescimento celular bacteriano. Dosagens de paciente usuais para administração sistêmica variam de 0,1 a 1000 mg/dia, preferivelmente, 1-500 mg/dia, mais preferivelmente 10

149

- 200 mg/dia, ainda mais preferivelmente 100 - 200 mg/dia. Expressos em termos de áreas de superfície corporal do paciente, as doses usuais variam de

50-91 mg/ m²/dia.

A quantidade do composto em uma formulação pode variar dentro de toda a faixa empregada pelos técnicos na arte. Tipicamente, a formulação irá conter, em uma base de percentagem de peso (pt%), de cerca de 0,01-10 pt% da droga baseada na formulação total, com o balanço sendo um ou mais excipientes farmacêuticos. Preferivelmente, o composto está presente em um nível de cerca de 0,1-3,0 pt%, mais preferivelmente, cerca de 1,0 pt%.

Modalidades exemplares são sumarizadas abaixo.

Em uma modalidade exemplar, a invenção fornece um composto possuindo uma estrutura de acordo com a fórmula:

onde R* é um elemento selecionado de H e tem uma carga negativa, R³ é um elemento selecionado de H, ciano, nitroalquila substituído ou não-substituído, e aminoalquila substituído ou não-substituído; R^a é um elemento selecionado de H e -YR⁵; onde Y é um elemento selecionado de O e S; R⁵ é um elemento selecionado de H, alquila substituído ou não-substituído e heteroalquila substituído ou não-substituído; com a ressalva que R^a e R³ não podem ser ambos H; com a ressalva que R^a e R*, juntamente com os átomos aos quais eles estão ligados, são opcionalmente combinados para formar um anel heterocicloalquila substituído ou não-substituído de 6 a 10 elementos; e com a ressalva que quando R é H, Ra não tem uma estrutura que é um elemento selecionado de benziloxi não-substituído, OCH₂COOH, metóxi, etóxi, com a ressalva que quando R^a é H, R³ não é ciano, ou um sal deste.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com o parágrafo

150 acima, possui uma estrutura de acordo com a seguinte fórmula:

^{Z X} 3

H R³ quando C* é um átomo de carbono com a ressalva que quando

R³ não é H, C* é um estereocentro que tem uma configuração que é um elemento selecionado de (R) e (S).

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos

A ΑΛ -A 1 <A<A -A-A parágrafos acima, R é -(CR R )nNR R onde n é um inteiro selecionado de 1 a 10, cada R e cada R é um elemento independentemente selecionado de H, R²⁶,OR²⁶, NR²⁶R²⁷, SR²⁶, -S(O)R²⁶, -S(O)2R²⁶, -S(O)2NR²⁶R²⁷, C(O)R²⁷, -C(O)OR²⁷, -C(O)NR²⁶R²⁷; R²² e R²³ são elementos independentemente selecionados de H, -S(O)R²⁸, -S(O) ²⁸, -S(O)₂NR²⁸R²⁹, C(O)R²⁸, -C(O)OR²⁸, -C(O) ²⁸ R²⁹, nitro, halogênio, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não-substituído, heterocicloalquila substituído ou nãosubstituído, arila substituído ou não-substituído, e heteroarila substituído ou __ 'A/' 'íQ 20 não-substituído; onde cada R , cada R , cada R e cada R é um elemento independentemente selecionado de H, nitro, halogênio, ciano, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não-substituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não-substituído, e heteroarila substituído ou não-substituído.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, n é um inteiro selecionado entre 1 a 5.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, n é 1.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R é alquila substituído ou não-substituído.

151

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R é alquila Cl-C4substituído ou não-substituído.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R²⁰ é metila.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R é H.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R é um elemento selecionado de ciano e -CH2NO2.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R²² é um elemento selecionado de -C(O)R²⁸ e -C(O)OR²⁸.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R é um elemento selecionado de alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído e arila substituído ou não-substituído.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R é um elemento selecionado de -(CR R )mR , onde R é um elemento selecionado do arila substituído ou não-substituído, NR R e OR onde m é um inteiro selecionado de 0 a 10; cada R e cada R³⁴ é um elemento independentemente selecionado de from H, nitro, halogênio, ciano, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não-substituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou nãosubstituído, e heteroarila substituído ou não-substituído.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R é um elemento selecionado de

152

Ό~(CH₃)₃

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R⁵ é:

onde a é um elemento selecionado de 1 a 10 cada R¹⁰ e cada R¹¹ é um elemento selecionado de H, alquila substituído ou não-substituído, OH e NH2; R é um elemento selecionado de H, R , halogênio, ciano, amidino, OR⁷, NR⁷R⁸, SR⁷, -N(R⁷)S(O)2R⁸, -C(O)R⁷, -C(O)OR⁷, C(O)NR R ; onde cada R e cada R é um elemento independentemente selecionado de H, alquila substituído ou não-substituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não-substituído, heterocicloalquila substituído ou não-substituído, arila substituído ou nãosubstituído, e heteroarila substituído ou não-substituído.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a é um inteiro selecionado de 1 a 5.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a é um inteiro selecionado de 2 a 4.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, cada R¹⁰ e cada R¹¹ é um elemento selecionado de H, alquila substituído ou não-substituído, OH e NH₂.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, cada R¹⁰ e cada R¹¹ é um elemento selecionado de H, hidroxialquila e NH₂.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos

153 parágrafos acima, cada R¹⁰ e cada R¹¹ é um elemento selecionado de hidroxialquila e NH₂.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, cada R¹⁰ e cada R¹¹ é H.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R é um elemento selecionado de H, ciano, amidino, N(R⁷)S(O)₂R⁸, OR⁷, NR⁷R⁸, -C(O)OR⁷, -C(O)NR⁷R⁸; cada R⁷ e cada R⁸ é um elemento independentemente selecionado de H, alquila substituído ou nãosubstituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila 10 substituído ou não-substituído, heterocicloalquila substituído ou nãosubstituído, arila substituído ou não-substituído, e heteroarila substituído ou não-substituído.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, cada R e cada R é um elemento independentemente 15 selecionado de H, C(O)R⁹, -C(O)NHR⁹, alquila C1-C4 substituído ou nãosubstituído, heteroalquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não-substituído, heterocicloalquila substituído ou nãosubstituído, arila substituído ou não-substituído, e heteroarila substituído ou não-substituído; onde R⁹é alquila C1-C4 substituído ou não-substituído.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, pelo menos um elemento selecionado de R e R é um elemento independentemente selecionado de C(O)R⁹ e -C(O)NHR⁹; onde R⁹is alquila C1-C4 substituído ou não-substituído.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R é um elemento selecionado de OH, NH₂, metila, etila, NHS(O)₂CH₃, ciano, -NHC(O)CH₃, -NHC(O)NHCH₂CH₃, -C(O)NH₂, C(O)OH, 4-(metoxi)fenila, benzila, -NHC(O)OCH₂Ph, -C(O)NHCH₂CH₂OH e -C(NH₂)(NH).

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos

154 parágrafos acima, quando R¹² compreende OR⁷, o dito R⁷ compreende um grupo protetor hidroxi, e quando R¹² compreende NR⁷R⁸, pelo menos um dos ditos R ou R compreende um grupo protetor amino.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R é um elemento selecionado de H, -CH₂NH₂ e -CH₂NO₂;

e R é um elemento selecionado de OH, NH₂, metila, etila, -NHS(O)₂CH₃, ciano, -NHC(O)CH₃, -NHC(O)NHCH₂CH₃, -C(O)NH₂, -C(O)OH, 4(metoxi)fenila, benzila, -NHC(O)OCH₂Ph, -C(O)NHCH₂CH₂OH e C(NH₂)(NH).

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R³ é um elemento selecionado de H, -CH2NH2 e -CH2NO2; e R^a é um elemento selecionado de H, -O(CH2)₃NH₂, -O(CH₂)₃OH, OCH₂CH₃, -O(CH₂)₃NHS(O)₂CH₃, -O(CH₂)₃CN, -O(CH₂)₃NHC(O)CH₃, O(CH₂)₃NHCH₃, -O(CH₂)₃OCH₃, -O(CH₂)₄OH, -och₃,

O(CH₂)₃NHC(O)NHCH₂CH₃, -O(CH₂)₃C(O)NH₂, -O(CH₂)₃C(O)OH, O(CH₂)₄NH₂, -O(CH₂)₂NH₂, -OCH₂CH₂CH(NH₂)CH₂OH, -OCH₂Ph(4metoxi), -O(CH₂)₄OCH₂Ph, -O(CH₂)₃NHC(O)OCH₂Ph, OCH₂C(O)NH(CH₂)₂OH, -O(CH₂)₃NHC(O)CH₃, -O(CH₂)₃C(NH₂)(NH), C(O)OCH₃, -OCH₂C(O)OH e -OCH₂CH(CH₂OH)(CH₂)OH.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, quando R³ é H, R^a é um elemento selecionado de O(CH2)3NH2, -O(CH2)3NHS(O)2CH3, -O(CH2)3CN, -O(CH2)3NHC(O)CH3, O(CH2)3NHCH3, -O(CH2)4OH, -O(CH2)3NHC(O)NHCH2CH3, O(CH2)3C(O)NH2, -O(CH2)3C(O)OH, -O(CH2)4NH2, -O(CH2)2NH2, OCH2CH2CH(NH2)CH2OH, -OCH2Ph(4-metoxi), -O(CH2)4OCH2Ph, OCH2C(O)NH(CH2)2OH e -OCH2CH(CH2OH)(CH2)OH; quando R³ é CH2NH₂, R^a é um elemento selecionado de H, -O(CH₂)₃OH, -OCH₂CH₃, O(CH₂)₃OCH₃, -OCH₃, -O(CH₂)₄NH₂, -O(CH₂)₃NHS(O)₂CH₃, O(CH₂)₃NHC(O)OCH₂Ph, -O(CH₂)₃NHC(O)CH₃, -O(CH₂)₃NH₂; e quando R³

155 é -CH₂NO₂, R^a é um elemento selecionado de -O(CH₂)₃CN e -OCH₂CH₃.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, quando R³ é H, R^a é um elemento selecionado de O(CH2)3NH2, -O(CH2)3NHS(O)2CH3, -O(CH2)3CN, -O(CH2)3NHC(O)CH3, O(CH2)3NHCH3, -O(CH2)4OH, -O(CH2)3NHC(O)NHCH2CH3, O(CH2)3C(O)NH2, -O(CH2)3C(O)OH, -O(CH2)4NH2, -O(CH2)2NH2, OCH2CH2CH(NH2)CH2OH; quando R³ é -CEE2NH₂, R^a é um elemento selecionado de H, -O(CH₂)₃OH, -OCH₂CH₃, -O(CH₂)₃OCH₃, -OCH₃.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, quando R³ é H, R^a é um elemento selecionado de O(CH2)3NH2, -O(CH2)3CN, -O(CH2)3NHC(O)CH3, -O(CH2)3NHCH3; e quando R³ é -CH2NH₂, R^a é um elemento selecionado de H, -O(CH₂)₃OH, e OCH₂CH₃.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a estrutura a é um elemento selecionado de

^nh₂

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a invenção fornece um composto possuindo uma estrutura de acordo com uma fórmula que é um elemento selecionado de

R* é um elemento selecionado de H e tem uma carga negativa;

R^q é um elemento selecionado de H e SO₂-R^b; R^b é um elemento selecionado de fenila não-substituído e piridinila não-substituído; R³ é um elemento

156 selecionado de H, ciano, nitroalquila substituído ou não-substituído e aminoalquila substituído ou não-substituído; ou um sal destes.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, possuindo uma estrutura de acordo com uma fórmula que é um elemento selecionado de:

onde C* é um átomo de carbono, com a ressalva que quando R não é H, C* é um estereocentro que tem uma configuração que é um elemento selecionado de (R) e (S).

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R é um elemento selecionado de H, -CH₂NH₂ e-CH₂NO₂.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R* é H.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos o parágrafos acima, quando R não é H, e o estereocentro C* está em uma configuração (S)

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, onde R³ é -CH₂NH₂.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a dita alquila é um elemento selecionado de alquila reta e alquila ramificada, e onde a dita heteroalquila é um elemento selecionado de heteroalquila reta e heteroalquila ramificada.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a invenção fornece uma composição compreendendo: a) um primeiro estereoisômero do composto descrito neste documento, onde R não é H; b) pelo menos um estereoisômero adicional do primeiro estereoisômero,

157 onde o primeiro estereoisômero está presente em um excesso enantiomérico é pelo menos 80% em relação ao dito ao menos um estereoisômero.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, o dito um excesso enantiomérico é pelo menos 92%.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, o estereocentro C* do primeiro estereoisômero está em uma configuração (S).

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, R é -CH₂NH₂.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a invenção fornece uma composição compreendendo um composto descrito neste documento, onde R³ não é H e o estereocentro C* está em uma configuração (S), e a dita composição é substancialmente livre do enantiômero do composto.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a invenção fornece uma composição compreendendo um composto descrito neste documento, onde a composição é substancialmente livre do enantiômero do composto.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a invenção fornece uma composição compreendendo um composto descrito neste documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, juntamente com pelo menos um outro agente farmaceuticamente ativo.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a combinação é uma forma de dosagem unitária.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a invenção fornece uma formulação farmacêutica compreendendo: a) o composto descrito neste documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; e b) um excipiente farmaceuticamente aceitável.

158

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a formulação farmacêutica é uma forma de dosagem unitária.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a invenção fornece um método para inibir uma enzima, compreendendo: contactar a enzima com o composto descrito neste documento, assim inibindo a enzima.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a invenção fornece um método para inibir uma enzima, compreendendo: contatar a enzima com a formulação farmacêutica descrita neste documento, assim inibindo a enzima.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a enzima é uma sintetase t-RNA que compreende um domínio de edição.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a enzima é uma sintetase t-RNA leucila.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a invenção fornece um método para exterminar e/ou prevenir o crescimento de um microorganismo, compreendendo: contatar o microorganismo com uma quantidade eficaz do composto descrito neste documento, assim exterminando e/ou prevenindo o crescimento do microorganismo.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a invenção fornece um método para exterminar e/ou prevenir o crescimento de um microorganismo, compreendendo: contatar o microorganismo com uma quantidade eficaz da formulação farmacêutica descrita, assim exterminando e/ou prevenindo o crescimento do microorganismo.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos

159 parágrafos acima, o microorganismo é uma bactéria.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a invenção fornece um método para tratamento e/ou prevenção de uma doença em um animal, compreendendo: a administração ao animal de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto descrito neste documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, assim tratando e/ou prevenindo a doença.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a invenção fornece um método para tratamento e/ou prevenção de uma doença em um animal, compreendendo: a administração ao animal de uma quantidade terapeuticamente eficaz da formulação farmacêutica descrita neste documento, ou um sal farmaceuticamente aceitável desta, assim tratando e/ou prevenindo a doença.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, a doença é pneumonia.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, o animal é um humano.

Em uma modalidade exemplar, de acordo com quaisquer dos parágrafos acima, o sal é um sal farmaceuticamente aceitável.

A invenção é ainda ilustrada pelos Exemplos abaixo. Os Exemplos não se destinam a definir ou limitar o escopo da invenção.

EXEMPLOS

Todos os solventes usados estavam disponíveis comercialmente e foram usados sem purificação adicional. As reações foram tipicamente executadas usando solventes anidros e sob uma atmosfera inerte de N₂.

Espectros de 'H, ¹³C, e ¹⁹F RMN foram gravados a 400 MHz para próton, 100 MHz para carbono-13, e 376 MHz para fluorine-19 em uma estação Varian 300 MercuryPlus com um espectrometro Oxford AS400

160 equipado com uma sonda Varian 400 ATB PFG. Todos os solventes deuterados tipicamente continham 0,03% a 0,05% v/v tetrametilsilana, que foi usada como sinal de referência (ajustado a δ 0.00 para ambos ³H e ¹³C).

Os compostos são nomeados usando ChemDraw 7.0 ou seu nome de catálogo se comercialmente disponível.

O espectro de massa foi gravado em um Waters MS consistindo de um Alliance 2795 (LC) e detector Waters Micromass ZQ a 120 °C. O espectrômetro de massa estava equipado com uma fonte de íon eletrospray (ESI) operada em um modo positivo ou negativo. O espectrômetro foi varrido entre m/z — 100-1000 com um tempo de varredura de 0,3 s.

A análise elemental para as composições de C, H e N foi executada usando um Costech Instrument Elemental Combustion System ECS4010 com um fluxo de hélio de 100 mL/min (0,9 kgf/cm²), oxigênio 20 mL/mim (0,7 kgf/cm²), ar 1,8 kgf/cm² e expurgo de 50 mL/mim. A análise reportada foi uma média de duas execuções.

A análise HPLC foi executada em um sistema Water 600 Controller com um autoamostrador Waters 717 Plus e um detector de arranjos de fotodiodo Waters 2996. A coluna usada foi um ACE Cis, 5 pm, 4.6 x 150 mm. Um gradiente linear foi aplicado, começando a 95% A (A: 0.1% H3PO4 em água) e terminando em 90% B (B: MeCN) por 6 minutos e então mantido a 90% B até o marco de 10 minutos. A coluna foi então re-equilibrada por 3 minutos para 95:5 com um tempo total de execução de 20 minutos. A temperatura da coluna estava a temperatura ambiente com uma taxa de fluxo de 1,0 mL/min. O detector de arranjos de diodo foi varrido de 200-400 nm. Para amostras de alta pureza requerendo subtração de base, um gradiente linear foi aplicado, começando a 99% A (A: 0.1% H3PO4 em água) e terminando em 90% B (B: MeCN) por 15 minutos. A coluna foi então reequilibrada por 3 minutos para 99% A com um tempo total de execução de 23 minutos. A temperatura da coluna estava a temperatura ambiente com uma

161 taxa de fluxo de 1,0 mL/min. O detector de arranjos de diodo foi varrido de 200-400 nm. Uma amostra MeOH em branco foi imediatamente executada antes da amostra da qual a pureza era para é determinada: isto foi então subtraído para obter o cromatograma subtraído da base.

Cromatografia em camada fina (TLC) foi executada em Alugram® (Sílica gel 60 F254) de Mancherey-Nagel e UV foi tipicamente usada para visualizar as manchas. Métodos de visualização adicionais foram também empregados em alguns casos. Nestes casos a placa TLC foi desenvolvida com iodo (gerado pela adição de aproximadamente lg de 12 a 10 g sílica gel e misturando completamente), vanilina (gerada pela dissolução de cerca de um lg de vanilina em 100 mL a 10% H2SO4), permanganato de potássio (gerado pela dissolução de .5 g KMnO4 e 10 g K2CO3 em 1.25 mL NaOH e 200 mL H2O), ninidrina (disponível comercialmente de Aldrich), ou Magic Stain (gerada pela mistura completa de 25 g (ΝΗ4)6Μο7Ο24·4Η2Ο, 5 g (NH4)2Ce(IV)(NO3)6 em 450 mL H2O e 50 mL conc H2SO4) para visualizar o composto. Cromatografia instantânea foi executada usando tipicamente 40-63 pm (malha 230-400 sílica gel de Silicycle seguida de técnicas analógicas como divulgadas por Still e outros. Solventes típicos usados para a cromatografia instantânea ou a cromatografia em camada fina (TLC) foram misturas de CHC13/MeOH, CH2C12/MeOH, EtOAc/MeOH e hexane/EtOAc. Cromatografia instantânea de fase reversa foi executada em um Biotage® usando um cartucho Biotage Cl8 e um gradiente H2O/MeOH (tipicamente eluído de 5% MeOH/H2O a 90% MeOHZH2O).

Cromatografia preparativa foi executada tanto em um sistema Waters Prep LC 4000 usando um conjunto de diodos Waters 2487 ou em um Waters LC Module 1 plus. A coluna usada era tanto uma Waters x Terra Prep Cig, 5 pm, 30 x 100 mm, Phenomenex Luna Ci», 5 pm, 21.6 x 250 mm, ou uma Phenomenex Gemini Cis, 5 pm, 100 x 30 mm. Gradientes estreitos com MeCN/H₂O (água contendo tanto 0.1% TFA, 0.1% AcOH, 0.1% IICO₂H ou

162

0.1% NEflOAc) foram usados para eluir o composto a uma taxa de fluxo de aproximadamente 20 mL/min e um tempo total de execução entre 20-30 min.

Para determinação de excesso enantiomérico, por exemplo, A2 e A49, análise HPLC quiral foi executada em um controle e sistema de entrega multissolvente Waters 600 usando um autoamostrador Waters 717+ e um detector de conjunto de fotodiodos Waters 996 com uma coluna Crownpak CR(+), eluindo com 85:15 ácido perclórico pH 1 em uma fase móvel in H₂O/MeOH. O ácido perclórico pH 1 foi gerado pela adição de 16,3g de ácido perclórico a 70% a 1L de H₂O destilada.

Os materiais de inicialização usados estavam tanto disponíveis de fontes comerciais ou preparados de acordo com os procedimentos da literatura e possuem dados experimentais de acordo com aqueles reportados. Por exemplo, 6-aminobenzo[c][l,2]oxaborol-l(3H)-ol (C50), podem ser sintetizado de acordo com os métodos descritos nas publicações de patentes US20060234981 e US20070155699.

EXEMPLO 1

3-Aminometil-3H-benzo(c] (l,21oxaborol-l-ol) cloridrato (Al) 3-Nitrometil-3H-benzo[c] [1,2]oxaborol-l-ol

MeNO₂, NaOH ,^OH xx/BCOHJj 0até12 ’C, 5 h

CHO no₂

Ácido 2-formilfenilborônico (3 g, 20,0 mmol) foi adicionado à solução de hidróxido de sódio (850mg, l,05eq) em 10 mL de água a 10 °C. À esta suspensão foi adicionado nitrometano (l,lmL, leq) e então aquecido à temperatura ambiente com agitação. Após 30 minutos, a reação foi esfriada em banho de gelo e acificada com HCl 3M. Um precipitado branco foi filtrado e seco a ar para 3,2g (82,9%) de 3-(nitrometil)benzo[c][l,2]oxaboroll(3H)-ol.

p.f. 122-127 °C, Ή RMN 300 MHz (DMSO-d₆) δ 9,48 (s,

163

1Η), 7,71-7,74 (d, >6,9 Hz, 1H), 7,47-7,54 (m, 2H) 7,39 (t, >7,65 Hz, 1H)

5,73-7,78 (dd, J=2,7, >9,0 Hz, 1H), 5,30-5,35 (dd, >3,0, >13,5 Hz, 1H),

4,52-4,59 (dd, >13,5, >9,3 Hz, 1H), MS ESI (-) 192 [M-H].

cloridrato (Al) usando 10%paládio em carbono

3-(nitrometil)benzo[c][l,2]oxaborol-l(3H)-ol (0,5g, 2.59 mmol) foi dissolvido em etano absoluto e lavado com N₂. Uma quantidade catalítica de 10% paládio em carbono foi adicionada e a mistura de reação lavada com H₂ 3X via balão. Agitada sob uma atmosfera de H₂ por 24 horas e então filtrada através de celite, adicionada 2mL de água e concentrada em vácuo a um sólido cinza. Este material foi dissolvido em uma quantidade mínima de etanol absoluto, neutralizado com ácido clorídrico concentrado, então éter foi adicionado ao precipitado o composto título era um sólido branco. Seco a ar a 295 mg (57,1%).

p.f. 201-205 °C, Ή RMN 300 MHz (DMSO-d₆) δ 9,59 (bs, 1H), 8,33 (bs, 3H), 7,81-7,83 (d, >7,5 Hz, 1H), 7,35-7,50 (m, 3H), 5,34-5,37 (d, >10,2 Hz, 1H), 3,46 (m, 1H), 2,71 (m, 1H), MS ESI (-) 162 [M-H], ESI (+) 164 [M+H].

Síntese de 3-Aminometil-3H-benzol~cl fl,21oxaborol-l-ol) cloridrato (Al) usando níquelRaney

A uma solução de 3-(nitrometil)benzo[c][l,2]oxaborol-l(3H)ol (965 mg, 5 mmol) em etanol (30 mL) foi adicionada amônia (solução 2M em etanol, 18mL, 36 mmol) e níquel Raney 2800 (1/3 colher de chá de uma mistura em água). A mistura de reação foi sujeitada a hidrogenação a 45 atmosferas por 2 horas em temperatura ambiente. A mistura resultante foi filtrada com Celite e o filtrado foi concentrado em vácuo rendendo a amina

164 bruta. A amina foi dissolvida em dioxanos (lOml) e HC1 (4M em diaxanos, 5ml, 20 mmol) foi adicionado. Após uma hora, a suspensão foi concentrada e o sólido resultante foi lavado com hexanos seguido de éter rendendo 3(aminometil) benzo[c][l,2]oxaborol-l(3H)-ol cloridrato (917 mg, 4.6 mmol, 92% rendimento) como um sólido branco.

Recristalização do 3-(aminometil)benzo(c] [l,21oxaboroll(3H)-ol cloridrato

-(aminometil)benzo [c] [ 1,2] oxaborol-1 (3 H)-ol hidroclorido(l,Og) foi retomado em água quente (3 mL) e então acetronitrila quente (cerca de 25 a 30 mL) foi adicionado até que restasse uma suspensão leitosa. A solução leitosa foi permitida esfriar à temperatura ambiente onde um adicional de 70-80 mL de acetronitrila foi adicionado. Após 30 minutos, a suspensão leve branca foi filtrada e levada com CH₂C1₂ para render 680 mg limpas de 3-(aminometil)benzo[c][ 1,2]oxaborol-1 (3H)-ol cloridrato.

Síntese de 3-Aminometil-3H-benzo(cl (1,2/oxaborol-I-ol) cloridrato (Al) usando hidróxido de paládio

3-(nitrometil)benzo[c][l,2]oxaborol-l(3H)-ol (25g, 130 mmol) foi dissolvido em ácido acético e colocado em um frasco Parr de 500mL. 4g de 20 pt% hidróxido de paládio em carbono foi adicionado e a mistura de reação lavada 3X com gás H₂. Carregada a 50 psi H₂ e agitada por 36 horas então filtrada livre de catalisador e evaporada em vácuo. Este resíduo foi dissolvido em lOOmL de diclorometano e acificado com 50mL HC1 4M em dioxano para precipitar um sal cloridrato bruto. A adição de 30mL de metila tert-butileter precipita um produto residual. O bruto foi recristalizado pela dissolução em 1:2 H₂O/ACN a 60 °C e então adicionado ACN até que o ponto de saturação seja atingido. Esfriado à temperatura ambiente rendeu 13g de of 3-(aminometil)benzo[c][l,2]oxaborol-l(3H)-ol cloridrato como cristais finos brancos (50,3%).

Considerações para escolha do catalisador

165

A síntese de 3-(nitrometil)benzo[c][l,2]oxaborol-l(3H)-ol podem ser alcançada sob uma variedade de condições de hidrogenação. A hidrogenação catalítica com 10% Pd/C sob balão é altamente variável e em alguns casos foi mal sucedida. Geralmente, pressões mais altas de hidrogênio são necessárias para conduzir a redução para conclusão. Foi descoberto que as formas de fração de nitro formam um complexo com o átomo de boro e especula-se que isto complica a redução à amina. Usando amônia como um co-solvente perturba este complexo e facilita a redução em pressões atmosféricas ou elevadas. Usar níquel Raney como o catalisador tema vantagem de acelerar dramaticamente o tempo de reação, mais é altamente pirofórico e necessita é mantido úmido para previner perigo de fogo. Reduções de larga escala (25g) foram alcançadas em um aparelho Parr com catalisador hidróxido de paládio e ácido acético como solvente. Esta metodologia fornece bons rendimentos e atinge um balanço entre a velocidade do níquel Raney e a facilidade de uso do paládio em carbono.

(R)-3-Aminometil-3H-benzorc][l,2]oxaborol-l-ol) cloridrato (A60)

2-Bromo-l-(2-bromofenil)etanono

o

Ref - Chem. Pharm. Bull., 1992, 40(5), 1170-1176. Bromo (12,6 mL, 0,246 mol, 1,0 eq) foi adicionado lentamente a 2’bromoacetofenona (48,9 g, 0,246 mol, 1,0 eq) em éter dietílico (250 mL) a temperatura ambiente e agitado por 2 horas. Água (500 mL) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada até que a cor laranja desvaneceu. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com éter dietílico (3 x 250 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (250 mL), secas com MgSCL, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar (1) como

166 um óleo laranja (65g, 95%).

TLC, (20% Et₂O : gasolina) R_f = 0.61; δ_Η (300 MHz, CDC1₃)

7,62 (1H, dd, J= 7,7, 1,2 Hz), 7,49-7,31 (3H, m), 4,49 (2H, s).

(R) -2-Bromo- l-(2-bromofenil) etanol

OH (Ã)-(+)-2-Metil-CBS-oxazaborolidina (10,3 mL, 1,0 M em tolueno, 10,3 mmol, 0,11 eq) foi adicionado a uma solução agitada de (1) (26,0 g, 93,5 mmol, 1,0 eq) em THF (250 mL). A mistura de reação foi esfriada a -10°C onde BH₃ THF (112 mL, 1,0 M emTHF, 112,3 mmol, 1,20 eq) foi adicionado por 4 horas. A mistura de reação foi agitada por mais 45 minutos a -10°C antes da adição de metanol (130 mL). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi sujeitado a cromatografía instantânea de coluna (10 % Et₂O : éter de gasolina) para fornecer (2) como um óleo amarelo pálido (25,lg, 96%).

TLC, (10% Et₂O : gasolina) R_f = 0,20; δ_Η (300 MHz, CDC1₃) 7,40 (1H, d, J = 7,78 Hz), 7,32 (1H, d, J = 7,9 Hz), 7,15 (1H, t, J = 7,5 Hz), 6,97 (1H, t, J = 7,6 Hz), 5,05 (1H, td, J = 8,6, 3,0 Hz), 3,56 (1H, dd, J = 10,5,

2,6 Hz), 3,20 (1H, dd, J = 10,5, 8,8 Hz), 3,01-2,92 (1H, m).

(R)-2-Azido-l-(2-bromofenil)etanol

OL.

OH

Ref - Tetra-hedron: Asymmetry 2005, 16, 3633-3639. Azido de sódio (3,5 g, 54,4 mmol, 1,05 eq) foi adicionada a uma solução de (2) (14,5g, 51,8 mmol, 1,00 eq) em DMF (55mL) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi então aquecida a 80°C por 24 horas. Água (150 mL) foi adicionada e esta solução foi então extraída com éter dietílico (3 x 150 mL).

167

As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas com MgSO₄, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi sujeitado a cromatografia instantânea de coluna (15 % Et₂O : éter de gasolina) para render (4) como um óleo amarelo (9,5 g, 76%).

TLC, (15% Et₂O : gasolina) R_f = 0,36; δ_Η (300 MEíz, CDC1₃)

7,64 (1H, dd, J = 7,8, 1,4 Hz,), 7,56 (1H, dd, J = 7,9, 1,1 Hz), 7,40 (1H, dt, J = 7,6, 0,8 Hz), 7,21 (1H, dt, J = 7,7, 1,7 Hz), 5,28 (1H, d, J = 8,0 Hz), 3,60 (1H, dd, J = 12,7, 2,8 Hz), 3,37 (1H, dd, J= 12,7, 8,2 Hz), 2,68 (1H, bs).

A uma solução de (4) 9,3 g, 38,4 mmol, 1,00 eq) em tolueno (300 mL) foi adicionado borato trisopropílico (13,3 mL, 57,6 mmol, 1,50 eq). O frasco de reação tinha um condensador Dean and Stark anexado e a mistura de reação foi refluída para remover aproximadamente 300 mL de líquido. A mistura de reação escura foi esfriada à temperatura ambiente onde THF (250 mL) foi adicionado e então esfriada a -78°C. lítio n-Butila (17,7 mL, 2,5 M em hexanos, 44,2 mmol, 1,15 eq) foi adicionado em gotas à mistura de reação e então permitida aquecer a temperatura ambiente onde foi agitada por 3 horas antes de é arrefecida com 6 M HC1 (30 mL). A mistura de reação foi concentrada sob pressões reduzidas e o resíduo resultante foi sujeitado à cromatrografia flash de coluna (20 % Et₂O : éter petrol a 30 % Et₂O : éter de gasolina) para dar o produto (5) como um óleo amarelo viscoso (4,9 g, 67%).

TLC, (40% Et2O : gasolina) Rf = 0,47; δΗ (300 MHz, DMSO)

9,39 (1H, s), 7,74 (1H, d, J = 7,1 Hz), 7,47 (2H, s), 7,43-7,33 (1H, m), 5,35 (1H, dd, J - 5,8, 2,8 Hz), 3,83 (1H, dd, J = 13,1, 2,9 Hz), 3,49 (1H, dd, J = 13,1, 6,2 Hz).

168

A uma solução de (5) (2,75 g, 14,6 mmol, 1,0 eq) em metanol (150 mL) foi adicionado trifenilfosfina (3,82 g, 14,6 mmol, 1,0 eq) e isto foi agitado por 3 horas à temperatura ambiente. HC1 concentrado (7,0 mL) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada por mais 2 horas antes de é concentrada a um seco sob pressão reduzida. Diclorometano foi adicionado e isto foi extraído com HC1 2M (5x10 mL). As camadas aquosas combinadas foram lavadas com diclorometano (10 mL) antes de serem concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi então re-cristalizado de água quente/ acetonitrila (3 mL água / 50-80 mL acetonitrila por grama do composto) para dar o produto (6) como um sólido branco (1,2 g, 41%).

p.f. 224-228°C; [a]_D ²⁷ = - 47,5° (c 1,9, H₂O); δ_Η (300 MHz, DMSO + D₂O) 7,76 (1H, d, J = 7,0 Hz), 7,58-7,36 (3H, m), 5,31 (1H, d, J = 9,0 Hz), 3,47 (1H, d, J = 13,2 Hz), 2,73 (1H, dd, J = 12,8, 10,0 Hz); ó_c (75,5 MHz, CDC1₃) 131,67, 131,22, 128,63, 122,05, 77,06, 44,11; HRMS (ESI): calcd, for C₉Hi₃BNO₂ [M + CH₂]⁺ 178,1039, encontrado 178,1036.

(S)-3-Aminometil-3H-benzo[cl/1,2]oxaborol-l-ol) cloridrato (A2) (S)-2-Bromo-l-(2-bromofenil)etanol

OH (5)-(-)-2-Metil-CBS-oxazaborolidina (15,8 mL, 1,0 M em tolueno, 15,8 mmol, 0,11 eq) foi adicionado a uma solução agitada de (1) (40,0 g, 143 mmol, 1,0 eq) em THF (400 mL). A mistura de reação foi esfriada a -10°C onde BH₃THF (172 mL, 1,0 M em THF, 172 mmol, 1,20 eq) foi adicionado por 4 horas. A mistura de reação foi agitada por mais 45

169 minutos a -10°C antes da adição de metanol (180 mL). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi sujeitado à cromatografia instantânea de coluna (10 % Et₂O : éter de gasolina) para fornecer o produto (7) como um óleo incolor (37,3 g, 93%).

TLC, (10% Et₂O : gasolina) R_f = 0,25; δ_Η (300 MHz, CDC1₃)

7,62 (1H, dd, J = 7,8, 1,4 Hz), 7,54 (1H, dd, J = 7,9, 1,0 Hz), 7,37 (1H, dt, J = 7,6, 0,9 Hz), 7,19 (1H, dt, J = 7,7, 1,5 Hz), 5,26 (1H, td, J = 8,8, 3,0 Hz),

3,80 (1H, dd, J = 10,5, 2,8 Hz), 3,42 (1H, dd, J = 10,5, 8,9 Hz), 2,89-2,84 (1H, m).

(S)-2-Azido-1 -(2-bromofenil)etanol

OH

Ref - Tetra-hedron: Asymmetry 2005, 16, 3633-3639. Azido de sódio (9,7 g, 149,5 mmol, 1,2 eq) foi adicionada a uma solução de (7) (35,0 g, 124,5 mmol, 1,0 eq) em DMF (140 mL) à temperatura ambiente. A mistura de reação foi então aquecida a 80°C por 24 horas. Água (450 mL) foi adicionada e esta solução foi então extraída com éter dietílico (3 x 500 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL), secas com MgSO₄, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia instantânea de coluna (15 % Et₂O : éter de gasolina) para render (8) como um óleo laranja (24,3 g, 80%).

TLC, (10% Et2O : gasolina) Rf = 0,18; δΗ (300 MHz, CDC13)

7,60 (1H, dd, J = 7,8, 1,4 Hz,), 7,52 (1H, dd, J = 7,9, 1,1 Hz), 7,36 (1H, dt, J = 7,6, 0,8 Hz), 7,17 (1H, dt, J = 7,7, 1,7 Hz), 5,28-5,19 (1H, m), 3,55 (1H, dd, J = 12,7, 2,8 Hz), 3,33 (1H, dd, J = 12,7, 8,2 Hz), 2,94 (1H d, J = 3,5 Hz).

170

A uma solução de (8) (23 g, 94.,6 mmol, 1,00 eq) em tolueno (460 mL) foi adicionado borato trisopropílico (32 mL, 142,0 mmol, 1,50 eq). O frasco de reação tinha um condensador Dean and Stark anexado e a mistura de reação foi refluída para remover aproximadamente 450 mL de líquido. A mistura de reação escura foi esfriada à temperatura ambiente onde THF (400 mL) foi adicionado e então resfriada a -78°C. Lítio n-Butila (43,5 mL, 2,5 M em hexanos, 108,8 mmol, 1,15 eq) foi adicionado em gotas a mistura de reação a -78°C e então agitada por 30 minutos nesta temperatura. A mistura de reação foi então permitida aquecer à temperatura ambiente onde foi agitada por 3 horas antes de é arrefecida com 6 M HC1 (70 mL). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi sujeitado à cromatografia instantânea de coluna (20 % Et₂O : éter de gasolina a 30 % Et₂O : éter petrol) para dar o produto (9) como um óleo laranja viscoso (6,1 g, 34%).

TLC, (30% Et₂O : gasolina) R_f = 0,34; δ_Η (300 MHz, DMSO)

9,39 (1H, s), 7,74 (1H, d, J= 7,1 Hz), 7,52-7,43 (2H, m), 7,43-7,33 (1H, m),

5,35 (1H, dd, J= 5,8, 2,8 Hz), 3,83 (1H, dd, J= 13,1, 2,8 Hz), 3,49 (1H, dd, J = 13,1, 6,2 Hz).

OH

NH₂ hci

A uma solução de azido (9) (1,0 g, 5,3 mmol, 1,0 eq) em acetonitrila (50 mL) foi adicionado trifenilfosfina (2,7 g, 10,5 mmol, 2,0 eq) e então HCI concentrado (1 mL, 10,5 mmol, 2,0 eq). A solução laranja foi agitada por 18 horas e então filtrada. O precipitado foi lavado com

171 diclorometano para render o produto (10) como um sólido branco (680 mg,

65%).

p.f. 227-23 0°C; [a]_D ²⁷ = + 48,6° (c 2,0, H₂O); δ_Η (300 MHz, DMSO + D₂O) 7,76 (1H, d, J = 6,9 Hz), 7,57-7,35 (3H, m), 5,31 (1H, d, J =

8,1 Hz), 3,47 (1H, d, J = 13,4 Hz), 2,72 (1H, dd, J = 12,8, 9,9 Hz); ô_c (75,5 MHz, CDC1₃) 152,39, 131,63, 131,23, 128,59, 122,07, 77,09, 44,11; HRMS (ESI): calcd, for C₈HhBNO₂ [M + H]⁺ 164,0882, encontrado 164,0868.

Síntese_____alternative_____para_____(S)-3-Aminometil-3Hbenzo[c] [l,2]oxaborol-l-ol) cloridrato (Α2)

3-Nitrometil-3H-benzo[c] [1,2]oxaborol-l-ol

Ácido 2-Formilfenilborônico (25 g, 0,167 mol) foi adicionado a uma solução resfriada de hidróxido de sódio (7,0 g, 0,175 mol, 1,05 eq) em 83 mL de água a 10 °C. Nitrometano (10,17 g, 1 eq) foi adicionado a esta solução e então aquecida à temperatura ambiente com agitação. A mistura foi agitada por 3,5 horas. A reação foi então esfriada em um banho de gelo e acificada com HC1 3M a um pH de 2. Um precipitado branco foi coletado e filtrado, lavado com água e seco a ar para obter 28 g (87%) de 3(nitrometil)benzo[c][l,2]oxaborol-l(3H)-ol (sólido branco opaco).

Síntese de 3-Aminometil-3H-benzo[c] [l,2]oxaborol-l-ol)

cloridrato (Al) usando hidróxido de paládio
OH	OH
	íTV^b'
[I Ίο -------------	HCI
no₂	nh₂

3-(Nitrometil)benzo[c][l,2]oxaborol-l(3H)-ol (20g, 103 mmol) foi dissolvido em ácido acético glacial (200 mL) e colocado em um frasco Parr de 500 mL. O frasco foi purgado com N₂ por 20 minutos. 4,2 g de

172 pt% de hidróxido de paládio em carbono (catalisador de Pearlman) foi adicionado e a mistura de reação foi lavada com hidrogênio 3X e hidrogenada a 45-55 psi por 36 horas. A mistura foi filtrada por Celite para remover o catalisador. O solvente ácido acético foi então evaporado sob vácuo a 4050°C, deixando um óleo bruto. O óleo bruto foi dissolvido em 250 mL de diclorometano e esfriado a 0-5°C. Gás HC1 foi então borbulhado através da solução por 25 minutos. Éter (150 mL) foi adicionado para precipitar ainda mais um sólido amarelo que foi subseqüentemente filtrado, lavado com éter e seco. 7,8 g de um sólido amarelo (37%) foi obtido.

Acido (1 -Hidroxi-l,3-didro-benzoTc][1,2loxaborol-3-ilmetil)carbâmico tert-butila ester (Boc-Al)

Amina bruta (7,4 gramas, 0,037 moles) foi suspendida em 40 ml de tert-butanol à temperatura ambiente. Foi adicionado KOH (5,4 gramas, 0,82 moles) em 50 mL de água. A suspensão foi resfriado com um banho de gelo e então BOC₂O sólido (8,51 gramas, 0,039 moles) por adicionado em porções por 10 minutos. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 24 horas. 150 mL de diclorometano foram então adicionados. A camada orgânica que formou-se foi então separada e a camada aquosa foi extraída duas vezes com 100 mL de diclorometano. Os extratos foram combinados, secos com MgSO₄, filtrados e evaporados. Purificação por cromatografia instantânea com sílica gel usando diclorometano/metano 95:5 rendeu 4,4 gramas (45% rendimento).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-^j) δ (ppm): 9,20 (s, 1H), 7,72 (d, J= 7,0 Hz, 1H), 7,46 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 7,42-7,31 (m, 2H), 7,00 (t, J= 5,5 Hz, 1H), 5,13 (dd, J= 6,8, 4,5 Hz, 1H), 3,45-3,29 (m, 1H), 3,05 (ddd, J = 13,7, 6,6, 6,2 Hz, 1H), 1,37 (s, 9H); MS (ESI): m/z = 262 (M-l, negative);

173

HPLC purity: 99,20% (MaxPlot 200-400 nm); Anal, Calcd for CbHisBNCL: C 59,35%; H 6,90%; N 5,32%, Encontrado %: C 59,37%; H 7,14%; N 5,58%.

Acido______(S)-(l -Hidroxi-1,3-didro-benzofd [1,2] oxaborol-3 ilmetil)-carbâmico terc-butila ester (BocA2)

Separação HPLC quiral

2,1 g de BocAl foi resolvido via HPLV quiral usando coluna

CHIRALPAK AY e 10% etanol/hexano como eluente a 25°C. A detecção

UV foi monitorada a 265 nm. Dois picos (BocA2 e BocA60) foram coletados e evaporados para render óleos. A análise das frações minadas usando, uma coluna analítica CHIRALPAK AY 4.6mm ID x 250mm e mesma fase móvel mostrou BocA2 [910mg (86.7% rendimento)] com um tempo de retenção de 3,998 minutos e um 99,8% ee. BocA60 [600mg (57.1% rendimento)] teve um tempo de retenção de 4,889 minutos e um 97,5% ee.

(S)-3-Aminometil-3H-benzo[c] [l,2]oxaborol-l-ol) cloridrato (A2)

BocA2 (910mg) foi dissolvido em EtOAc (200 mL), tratado com HC1 concentrado e sonicado por 3 horas até começar a formar um precipitado. A reação foi resfriada a -10 °C durante a noite e então filtrada. Um sólido branco opaco foi coletado e seco a ar a 340 mg. Este material foi re-cristalizado de acetonitrila aquosa para render 242 mg de um sólido branco após secar.

P.F. 214-216°C; *H RMN 300 MHz (DMSO-d₆) Ç9,59 (bs,

174

1Η), 8,33 (bs, 3H), 7,81-7,83 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,35-7,50 (m, 3H), 5,34-5,37 (d, J=10,2 Hz, 1H), 3,46 (m, 1H), 2,71 (m, 1H); MS ESI (-) 162 [M-H], ESI (+) 164 [M+H]; [a]D31 = +71,0° (c 2,0, H₂O) [Configuração Absoluta (S)]

Acido_______Piridina-2-sulfônico________(1 -hidroxi-1,3-didrobenzo[cl[l,2]oxaborol-6-il)-amida (A3)

Procedimento Geral 1

Procedimento Geral 1: C50 (0,843 g, 5,66 mmol), MeCN (20 mL), K₂CO₃ (3,13 g, 22,6 mmol), e cloreto de piridina-2-sulfonila (1,21 g, 5,66 mmol). A reação foi recomeçada com NMM (0,249 mL, 22,6 mmol) para consumir todo o C50. Purificação: precipitação de H₂O acídica. A3 foi isolado como um sólido levemente cremoso: rendimento 462 mg (28%).

p.f. 252-255 °C; Ή RMN (400 MHz, DMSO-J₆) δ (ppm):

10,50 (s, 1H), 9,18 (s, 1H), 8,70 (ddd, J= 4,7, 2,0, 1,2 Hz, 1H), 8,03 (td, J= 7,8, 1,6 Hz, 1H), 7,91 (dt, J= 7,8, 1,2 Hz, 1H), 7,62 (ddd, 7,8, 4,7, 1,2 Hz, 1H), 7,50 (bs, 1H), 7,26-7,20 (m, 2H), 4,87 (s, 2H); MS (ESI) m/z = 291 (M+l, positivo); pureza HPLC: 95,63% (MaxPlot 200-400 nm), 95,50% (220 nm), 95,02% (254 nm); Anal, Calcd para Ci₂HnBN₂O₄S: C 49,68%; H 3,82%; N 9,66%, Encontrado: C 50,13%; H 3,89%; N 9,88%.

Acido_______Piridina-3-sulfônico________(1 -hidroxi-1,3-didrobenzo/c][l,21oxaborol-6-il)-amida (A4)

Procedimento Geral 1: C50 (0,800 g, 5,37 mmol), MeCN (30 mL), K₂CO₃ (3,13 g, 22,6 mmol), e cloreto de piridina-3-sulfonila (1,21 g,

175

5,66 mmol). A reação foi recomeçada com NMM (0,249 mL, 22,6 mmol) para consumir todo o C50. Purificação: precipitação de H₂O, cromatografia instantânea (95:5 CH₂Cl₂/MeOH), então precipitação de H₂O. A4 foi isolado como um sólido amarelo claro: rendimento 343 mg (22%).

p.f. 197-199 °C; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm):

10,46 (s, 1H), 9,22 (s, 1H), 8,56 (dd, J - 2,3, 0,8 Hz, 1H), 8,77 (dd, J = 5,1,

1,6 Hz, 1H), 8,07 (ddd, J = 8,2, 2,3, 1,6 Hz, 1H), 7,59 (ddd, J = 8,2, 5,1, 0,8 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 8,2, 0,8 Hz, 1H), 7,18 (dd, J = 8,2, 2,3 Hz, 1H), 4,89 (s, 2H); MS (ESI) m/z = 291 (M+l, positive); pureza 10 HPLC: 98,87% (MaxPlot 200-400 nm), 98,30% (220 nm), 97,33% (254 nm);

Anal, Calcd para C12H11BN204S»0,33H20: C 48,68%; H 3,97%; N 9,46%, Encontrado: C 48,76%; H 3,83%; N 9,89%.

Sal_______acetato_______4-(3-Aminometil-1 -hidroxi-1,3-didrobenzoíg 7/7,2 loxaborol- 7-iloxi)-butiramida .(AS)

Ácido 4-[2-(5,5-Dimetil-[1,3,2]dioxaborinan-2-il)-3-formilfenoxi]-butiricoetila ester

Uma mistura de éster etílico de ácido 4-(2-bromo-3-formilfenoxi)-butírico (5,50 g, 17,5 mmol), bis(neopentila glucolato)diborona (6,80 g, 30,1 mmol), PdCl₂(dppf)*CH₂Cl₂ (1,30 g, 1,79 mmol), e KOAc (5,30 g,

176

54,1 mmol) em THF anidro (600 mL) foi aquecida com agitação a 80 °C (temperatura de banho) durante a noite sob uma atmosfera de N₂. A mistura foi então filtrada com Celite e concentrada em vácuo a aproximadamente um quarto do volume original. O precipitado resultante foi isolado por filtragem. O precipitado foi lavado com THF e EtOAc e o filtrado combinado foi concentrado em vácuo para dar um resíduo oleoso que foi usado diretamente na próxima reação sem purificação.

*H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 9,95 (s, 1H), 7,47-7,39 (m, 2H), 7,09-7,07 (m, 1H), 4,14 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 4,09-4,01 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,66 (s, 3H), 2,53 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 2,19-2,07 (m, 2H), 1,32-1,22 (m, 3H), 0,98 (s, 6H).

r

Ester etílico de ácido 4-(l-Hidroxi-3-nitrometil-l,3-didrobenzo[c][1,2joxaborol- 7-iloxi)-butirico

COoEt J)

O -j ni-i

NO₂

MeNO₂ (1,3 mL, 25 mmol) foi adicionado em gotas a uma solução agitada de éster metílico de ácido 4-[2-(5,5-dimetil- [l,3,2]dioxaborinan-2-il)-3-formil-fenoxi]-butírico bruto (9,4 g), NaOH (1,0 g, 25 mmol) eH₂O (35 mL) em MeCN (90 mL) à temperatura ambiente. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite e então acidificada (pH 2) usando HCI 4M. O THF foi removido sob vácuo e a camada aquosa foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (MgSO₄), e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (10% a 30% EtOAc em hexano) para dar o composto título como um óleo amarelo: rendimento 2,52 gramas (45% sobre

etapas).

¹ LI RMN (400 MHz, DMSO~ó/₆) δ (ppm): 9,04 (s, 1H), 7,46

177

7,42 (m, 1H), 7,07-7,05 (m, 1H), 6,88-6,86 (m, 1H), 5,87 (d, J= 8,2 Hz, 1H), 5,69 (dd, J = 9,2, 2,5 Hz, 1H), 5,29 (dd, J = 13,3, 2,7 Hz, 1H), 4,14-3,94 (m, 5H), 2,55-2,44 (m, 2H), 2,02-1,88 (m, 2H), 1,16 (t, J= 7,2 Hz, 3H); MS (ESI) m/z = 322 (M-l, negativo).

Acido 4-(l -Hidroxi-3-nitrometil-l, 3-didro-benzo[c] [1,2] oxaborol- 7-iloxi)-butírico

CO₂h U -a nu

NO₂

Uma mistura de éster etílico de ácido 4-(l-hidroxi-3nitrometil-l,3-didro-benzo[c][l,2]oxaborol-7-iloxi)-butírico (2,51 g, 7,78 mmol), 10% NaOH (17 mL), e 1:1 MeOH/H₂O (70 mL) foi agitada à temperatura ambiente por 5 horas. O MeOH foi removido sob vácuo e a camada aquosa restante foi acidificada ao pH 1 usando HC1 2M. A cada aquosa foi então extraída com EtOAc. As frações orgânicas foram lavadas com salmoura, secas (MgSO.j), e concentradas sob vácuo para dar o composto título como uma espuma amarela pálida: rendimento 1,85 g (81%).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 12,08 (bs, 1H), 9,01 (bs, 1H), 7,46-7,41 (m, 1H), 7,06-7,04 (m, 1H) 6,89-6,87 (m, 1H), 5,70 (dd, J = 7,0, 2,3 Hz, 1H), 5,30 (dd, J = 13,3, 2,3 Hz, 1H), 4,55 (dd, J = 13,6, 4,2 Hz, 1H), 4,03 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 2,40 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 1,95-1,89 (m, 2H); MS (ESI) m/z = 296 (M+l, positivo).

4-(l -Hidroxy-3-nitrometil-l, 3-didro-benzo[c][l,2] oxaborol- 7iloxi)-butiramida

178

Etila cloroformato (80 pL, 0,83 mmol) foi adicionado em gotas a uma solução de Et₃N (0,35 mL, 4,7 mmol) e ácido 4-(l-hidroxi-3nitrometil-l,3-didro-benzo[c][l,2]oxaborol-7-iloxi)-butírico (111 mg, 0,38 mmol) em THF (4 mL) a 0 °C (temperatura de banho). A mistura foi agitada a 0 °C (temperatura de banho) por 15 minutos e então 28% NH4OH (0,5 mL) foi adicionado em gotas a 0 °C (temperatura de banho). A mistura foi permitida aquecer à temperatura ambiente por 20 minutos. O precipitado foi isolado por filtragem e lavado por THF e H₂O para dar o composto título como um sólido amarelo claro: rendimento 52 mg (45%).

*U RMN (400 MHz, DMSCMj) δ (ppm): 7,43-7,39 (m, 1H),

7,33 (bs, 1H), 7,04-7,02 (m, 1H), 6,86-6,84 (m, 1H), 6,61 (bs, 1H), 5,67 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 5,26 (dd, J= 13,7, 2,7 Hz, 1H), 4,52 (dd, J= 13,5, 9,2 Hz, 1H), 4,00 (t, 6,2 Hz, 2H), 2,22 (t, J= 7,0 Hz, 2H), 1,93-1,90 (m, 2H); MS (ESI) m/z = 295 (M+l, positivo).

4-(3-Aminometil-l-hidroxi-l, 3-didro-benzo[c][l,2Joxaborol7-iloxi)-butiramida, sal acetato (A5)

Uma mistura de 4-(l-hidroxi-3-nitrometil-l,3-didrobenzo[c][l,2]oxaborol-7-iloxi)-butiramida (50 mg, 0,17 mmol), Ni Raney (~20 mg), NH₃ 2M em EtOH (1 mL), e EtOH (100 mL) foi agitada sob uma atmosfera de H₂ (2,9 kgf/cm²) por 4,5 horas à temperatura ambiente. A mistura foi filtrada por um leito de Celite e o filtrado foi concentrado sob vácuo. HC1 3N em MeOH (1 mL) foi adicionado imediatamente ao resíduo e a mistura resultante foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi então purificado por preparativa HPLC (AcOH). O composto título foi isolado como um liofilizado branco: rendimento 5 mg (11%).

179

Ή RMN (400 MHz, DMSO-J₆ + D₂O + HCl) δ (ppm): 8,14 (bs, 1H), 7,49-7,45 (m, 1H), 7,06-7,04 (m, 1H), 6,90-6,88 (m, 1H), 5,27 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,04-4,01 (m, 2H), 2,81-2,76 (m, 1H), 2,25 (t, J= 7,0 Hz, 2H), 1,98-1,94 (m, 2H); MS (ESI) m/z = 265 (M+l, positivo).

Acido (1-Hidroxi-l G-didro-benzoíc] Γ1,2]oxaborol-7-iloxi)acético (A6)

(2-Bromo-3-formil-fenoxi)-acetonitrila

Br

CHO

Procedimento geral 4: 2-bromo-3-hidroxi-benzaldeido (20,1 g, 0,10 mol), BrCH₂CN (8,7 mL, 0,13 mol), K₂CO₃ (20,73 g, 0,15 mol), e DMF (60 mL). Purificação: precipitação de EtOAc para dar o composto título como cristais broncos (16,2 g), o filtrado foi concentrado e o resíduo purificado por cromatografia instantânea EtOAc/hexano 1:3) para dar 3,68 gramas adicionais: rendimento 19,88 g (83%).

1H RMN (400 MHz, CDC13) δ (ppm): 10,41 (s, 1H), 7,77-

7,60 (m, 1H), 7,47 (t, J - 7,6 Hz, 1H), 7,34-7,19 (m, 1H), 4,91 (s, 2H).

3-Formil-2-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)fenoxi]-acetonitrila

Procedimento geral 5: (2-bromo-3-formil-fenoxi)-acetonitrila

180 (14,4 g, 60,0 mmol), B₂pin₂ (30,47 g, 0,12 mol), KOAc (17,68 g, 0.,18 mol), PdCl₂(dppf)*CH₂Cl₂ (3,51 g, 4,8 mmol), e dioxane (150 mL). Purificação: cromatografia instantânea (20% e então 40% EtOAc em hexano) para dar o composto título como um sólido amarelo claro: rendimento 1 l,38g (66%).

1H RMN (400 MHz, CDC13) δ (ppm): 9,97 (s, 1H), 7,60-7,56 (m, 2H), 7,22-7,17 (m, 1H), 4,78 (s, 2H), 1,47 (s, 12H).

1-Hidróxi-1,3-dihidro-benzo[c] [l,2]oxaborol- 7-iloxi)acetonitrila

Procedimento geral 7: 3-formil-2-(4,4,5,5-tetrametil- [l,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenoxi]-acetonitrila (1,02 g, 4,0 mmol), NaBH₄ (182 mg, 4,8 mmol), e MeOH (10 mL). Purificação: cromatografia instantânea (2% MeOH em CH₂C1₂). O composto título foi isolado como um sólido branco: rendimento 260 mg (34%).

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 9,11 (s, 1H), 7,51 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,25 (s, 2H), 4,97 (s, 2H); MS (ESI): m/z = 188 (M-l, negativo).

Acido (1 -Hidróxi-1,3-didro-benzo[c] [1,2]oxaborol-7-iloxi)~ acético (A6)

HC1 (g) foi borbulhado através de uma solução de 1-hidroxi- l,3-dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-7-iloxi)-acetonitrila (132 mg, 0,67 mmol) em 4:1 MeOH/H₂O (25 mL) a 0 °C (temperatura de banho) por 5 min. A mistura de reação foi agitada a 0 °C (temperatura de banho) por 10 min e então à temperatura ambiente por 1 hora. O MeOH foi removido sob vácuo e a camada aquosa foi ajustada ao pH 6 usando NaHCO₃ saturado. O

181 precipitado resultante foi isolado por filtragem e lavado com Et₂O para dar A6 como um sólido branco: rendimento 105 mg (76%).

p.f. 258-260 °C; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm):

7,35 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 7,8 Hz, 1H),

5,10 (s, 2H), 4,70-4,50 (m, 1H), 4,40-4,00 (m, 3H); MS (ESI): m/z = 207 (ΜΙ, negativo); pureza HPLC 95,52% (MaxPlot) e 92,77% (220 nm).

2-(l-Hidroxi-1,3-dihidro-benzo[c] [l,21oxaborol- 7-iloxi)-N-(2hidroxi-etil)-acetamida (A7)

1. CICOjf-Pr. NMM THF.O -C.40 min

2. BnO(C Hj)jN HjH Cl NMM.DMF, t.a.,OZN

N-(2-Benziloxy-etil)-2-(l-hidroxi-1,3-dihidrobenzofc] [1,2Joxaborol- 7-iloxi)-acetamida

Isobutilcloroformato (250 mg, 1,83 mmol) foi adicionado a uma solução de of NMM (184 mg, 1,82 mmol) e A6 (190 mg, 0,91 mmol) em THF anidro (10 mL) a 0 °C (temperatura de banho) sob N₂. A mistura de reação foi agitada a 0 °C (temperatura de banho) por 40 minutos. Uma mistura de cloridrato de 2-benziloxietilamina (171 mg, 0,91 mmol) e NMM (92 mg, 0,91 mmol) em DMF (5 mL) foi adicionada. A mistura foi agitada a 0 °C (temperatura de banho) por 20 minutos e então à temperatura ambiente ao longo da noite. A mistura foi concentrada em vácuo e o resíduo foi dissolvido em EtOAc (100 mL). A camada orgânica foi lavada com H₂O (2 x 30 mL) e então salmoura, seca (Na₂SO₄), e concentrada sob vácuo para dar o composto título: rendimento 160 mg (84%).

*H RMN (400 MHz, CDC13) δ (ppm): 7,44 (m, 1H), 7,37-7,18 (m, 5H), 7,06-6,94 (m, 1H), 6,78-6,66 (m, 1H), 5,28 (bs, 1H), 5,03 (bs, 2H),

182

4,60 (bs, 2H), 4,49 (bs, 2H), 3,60 (bs, 4H).

2-(l-Hidroxi-l, 3-dihidro-benzo[c][l,2Joxaborol- 7-iloxi)-N-(2hidroxi-etil)-acetamida (A7)

Procedimento geral 2: 2V-(2-benziloxi-etil)-2-(l-hidroxi-l,3dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-7-iloxi)-acetamida (0,26 g, 0,76 mmol), AcOH glacial (20 mL), e 20% Pd(OH)₂/C (50% peso úmido) (50 mg). Purificação

HPLC preparativa (0.1% AcOH) seguida por dissolução em uma mistura de H₂O (5 mL), MeOH (1 mL), e 2 N HC1 (2 gotas), filtragem e liofilização do filtrado: rendimento 55 mg (29%).

p.f. 248-249 °C; ’H RMN {400 MHz, DMSO-d6 + D2O (0,01 mL)} δ (ppm): 9,00 (s, 1H), 7,96 (bs, 1H), 7,43 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,95 (s, 2H), 4,73 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 4,56 (s, 2H), 3,44 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 3,23 (t, J = 6,1 Hz, 2H); MS (ESI) m/z = 250 (M-l, negativo); pureza HPLC: 98,14% (MaxPlot) e 96,08% (220 nm).

7,8-Dihydro-2H-l,6,9-trioxa-9a-bora-benzo[cd/azulene (A8)

Procedí mento Geral 2

THP0(CH₂)₂0H

OTHP

Procedí mento Geral 7

2-Bromo-3-[2-(tetraidro-piran-2-iloxi)-etoxi]-benzaldeido

OTHP />2

Br

CHO

183

Procedimento geral 3: 2-bromo-3-hidroxi-benzaldeido (7,04 g; 35 mmol), 2-(tetraidro-piran-2-iloxi)-etanol (5,0 mL; 35 mmol), PPh3 (9,18 g; 35 mmol), THF anidro (200 mL), e DIAD (6,9 mL; 35 mmol). Purificação: cromatografia instantânea (hexano e então 5% EtOAc/hexano): rendimento

7,22 g (66%).

'Η RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 10,41 (s, 1H), 7,49 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,32-7,25 (m, 6H), 7,08 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,54 (s, 2H),

4,16 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,74 (t, J = 5,8 Hz, 2H), 2,19-2,14 (m, 2H).

3-[2-(Tetraidro-piran-2-iloxi) -etóxi]-2-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2] dioxaborolan-2-il)-benzaldeido

Procedimento geral 5: -bromo-3-[2-(tetraidro-piran-2-iloxi)etoxy]-benzaldeido (6,0 g, 19 mmol), KOAc (5,65 g, 57,5 mmol), B₂pin₂(6,35 g, 25 mmol), PdCl₂(dppf)*CH₂Cl₂ (0,70g, 0,96 mmol), e DMF anidro (70 mL). Purificação: cromatografia instantânea (hexano e então 30% EtOAc/hexano): rendimento 2,07 g (29%).

'11 RMN (400 MHz, CDC13) δ (ppm): 9,92 (s, 1H), 7,53-7,33 (m, 2H), 7,11 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 4,65 (bs, 1H), 4,17-3,71 (m, 2H), 3,59-3,38 (m, 1H), 1,90-1,40 (m, 6H), 1,43 (s, 12H), 1,40-1,29 (m, 2H).

7,8-Didro-2H-l, 6,9-trioxa-9a-bora-benzo[cd]azuleno (A8) ~~~ o

Procedimento geral 7: 3-[2-(tetraidro-piran-2-iloxi)-etoxi]-2(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeido (0,93 g, 2,58 mmol), NaBHt (195 mg, 5,16 mmol), e MeOH anidro (5 mL). Purificação: cromatografia instantânea (20% EtOAc/hexano): rendimento 230 mg (51%).

184 *H RMN (400 MHz, CDC13) δ (ppm): 7,40 (t, J = 7,8 Hz, 1H),

6,96 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,15 (d, J = 3,5 Hz, 2H),

4,62 (d, J = 12,9 Hz, 1H), 4,38 (bs, 2H), 4,21 (d, J = 9,7 Hz, 1H); MS (ESI) m/z =177 (M+l, positivo); pureza HPLC 99,36% (MaxPlot) e 95,84% (220 5 nm).

Acido______4-(l-hidroxi-1,3-dihidro-benzo Γd [1,2 loxaborol- 7iloxi)-butírico (A9)

Procedimento geral 7

CC^Me

Procedimento geral 5

NaOH.MeOH

H₂O,t.a. ,2 h

Éster de etila de ácido 4-(2-bromo-3-formil-fenoxi)-butírico

Procedimento geral 1: 2-bromo-3-hidroxi-benzaldeído (0.30 g,

1.5 mmol), 4-bromobutirato de etila (0.30 g, 1.5 mmol), K₂CO₃ (0.42 g, 3.0 mmol), e DMF (5 mL). Purificação: cromatografia instantânea (2:8 EtOAc/hexano). O composto de título foi isolado como um líquido vermelho: rendimento 0.23 g (50%).

¹II RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.44 (s, 1H) 7.52 (d, J = 7.8 Hz, 1H) 7.36 (t, J= 8.0 Hz, 1H) 7.12 (d, J= 7.8 Hz, 1H) 4.20-4.02 (m,

4H) 2.61 (m, 2H) 2.2 (dq, J= 6.8, 6.6 Hz, 2H) 1.27 (t, J = 7.2 Hz, 3H); MS (ESI) m/z = 317 (M+l, positivo).

Éster de etila de ácido 3-[3-formil-2-(4,4,5,5-tetrametil185

[1,3,2] dioxaborolan-2-il) -fenoxi] -propiônico

Procedimento geral 5: éster de etila de ácido 4-(2-bromo-3formil-fenoxi)-butírico (0.20 g, 6.3 mmol), B₂pin₂ (0.177 g, 6.9 mmol), PdCl₂(dppf)«CH₂Cl₂ (0.025 g, 0.25 mmol), KOAc (0.185 g, 18.9 mmol), e

1,4-dioxano (5 mL). Purificação: cromatografia instantânea (1:5 EtOAc/hexano). O composto de título foi isolado como um sólido branco: rendimento 0.13 g (57%).

HRMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 9.94 (s, 1H), 7.56-7.33 (m, 2H), 7.07 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.14 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 4.04 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 2.55 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 2.24-1.96 (m, 2H), 1.46 (s, 12H), 1.25 (t, J= 7.0 Hz, 3H); MS (ESI) m/z = 361 (M-l, negativo).

Éster de etila de ácido 3-(l-hidroxi-l,3-dihidrobenzo[c][1,2[oxaborol- 7-iloxi-propiônico

CO₂Me

Procedimento geral 7: éster de etila de ácido 3-[3-formil-2(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenoxi]-propiônico (2.2 g, 6.0 mmol), NaBEL (0.40 g, 10 mmol) e MeOH (25 mL). Purificação: cromatografia instantânea (1:10 EtOAc/hexano). O composto de título foi isolado como um líquido amarelo: rendimento 0.6 g (40%).

H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 8.7 (s, 1H), 7.44-7.40 (m, 1H), 6.90 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.91 (s, 2H), 4.11 (t, J= 6.7 Hz, 4H), 2.46 (t, J= 7.3 Hz, 2H), 2.10-1.96 (m, 2H), 1.22 (t, .7= 7.1

Hz, 3H); MS (ESI) m/z = 296 (M+l, positivo).

Acido 3-(l-Hidroxi-l,3-dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-7186 iloxi-propiônico (A9)

CO₂h

10% NaOH (2 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de éster de etila de ácido 3-(l-hidroxi-l,3-dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-7iloxi-propiônico (0.20 g, 0.75 mmol) in 1:1 MeOH/H₂O (4 mL) a 0 °C. Permitiu-se então que a mistura fosse aquecida a rt e agitada por 2 h. O MeOH foi então removido a vácuo e H₂O (3 mL) foi adicionada. A mistura foi ajustada para o pH 3 e então extraída com EtOAc. A fase orgânica foi lavada com H₂O (5 mL) depois salmoura (5 mL), seca e concentrada para produzir A9 como um pó branco: rendimento 0.15 g (85%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 11. 35 (s, 1H), 9.08 (s, 1H), 7.44 (t, J= 7.1 Hz, 1H), 6.96 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.12 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.36 (t, J = 7.0 Hz, 2H) 1.95-1.86 (m, 2H); MS (ESI) m/z = 237 (M+l, positivo); HPLC pureza: 95.81% (MaxPlot 200-400 nm), 95.20% (220 nm).

4-(l -Hidroxi-1,3-dihidro-benzo[c] [1,2] oxaborol- 7-iloxi) butiramida (A 10)

1. CICO₂Et,Et₃N

THF, 15 min, 0 °C

2. NH₄0H ,t.a.. 20 min

Cloroformato de etila (80 pL, 0.84 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de A9 (105 mg, 0.44 mmol) e Et₃N (0.32 mL, 2.3 mmol) em THF anidro (4 mL) a 0 °C (temp. banho). A solução foi agitada a 0 °C (temp. banho) por 15 min e então 28% NH4OH (0.5 mL) foi adicionado resultando na formação de um precipitado branco. A suspensão foi agitada por mais 20 min a rt. O sólido foi isolado por filtragem e depois dissolvido em H₂O e liofilizado para produzir A10 (48 mg, 46%) como um sólido branco. ’H

187

RMN (400 MHz, DMSO-J₅) δ (ppm): 7.40-7.36 (m, 3H), 7.26 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.92-6.90 (m, 1H), 6.79-6.77 (m, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.01 (t, J= 6.3

Hz, 2H), 2.22 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 1.92-1.88 (m, 2H); MS (ESI) m/z = 236 (M+l, positivo); HPLC pureza: 95.14% (MaxPlot 200-400 nm), 95.19% (220 5 nm).

7-(3-Amino-propoxi)-3H-benzo[cl [l,2]oxaborol-l -ol______sal acetato (All)

2-Bromo-3-[3-(l, 3-dioxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il)-propoxi]~ benzaldeído

Procedimento geral 4: 2-bromo-3-hidroxi-benzaldeído (10.05 g, 50.0 mmol), 2-(3-bromo-propil)-isoindol-l,3-diona (16.1 g, 60.0 mmol),

Cs₂CO₃ (40.7 g, 0.125 mol) e DMF (100 mL): rendimento 13.93 g (72%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-J₆) δ (ppm): 10.22 (s, 1H), 7.89-

7.73 (m, 4H), 7.46 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.40-7.33 (m, 2H), 4.16 ( t, J = 5.7 Hz,

2H), 3.81 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.11 (quin, J = 6.1 Hz, 2H); MS (ESI): m/z =

388 (M+l, positivo); HPLC pureza: 94.74% (MaxPlot 200-400 nm), 95.36%

188 (220 nm), 94.50% (254 nm).

3-[3-(l,3-Dioxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il)-propoxi]-2-(4,4,5,5tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeído

Procedimento geral 5: 2-bromo-3-[3-(1,3-dioxo-1,3-dihidroisoindol-2-il)-propoxi]-benzaldeído (2.42 g, 6.23 mmol), B₂pin₂(3.16 g, 12.5 mmol), KOAc (1.85 g, 18.7 mmol), PdCl₂(dppf)*CH₂Cl₂ (0.137 g, 0.187 mmol), e DMSO (25 mL). Purificação: cromatografia instantânea [3:1 to 2:1 hexano/EtOAc (amostra pré-absorvida sobre sílica 51 g)]: rendimento 1.43 g (53%) - alguma contaminação com pinacol. O composto foi usado sem purificação adicional.

'Η RMN (400 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 9.90 (s, 1H), 7.89-

7.76 (m, 4H), 7.63-7.46 (m, 2H), 7.24 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 4.03 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.74 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.15-1.93 (m, 2H), 1.34 (s, 12H); MS (ESI): m/z = 436 (M+l, positivo); HPLC pureza: 97.71% (MaxPlot 200-400 nm), 97.49% (220 nm), 98.20% (254 nm).

Sal acetato de 7-(3-Amino-propoxi)-3Hbenzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (All)

Procedimento geral 7: 3-[3-(l,3-dioxo-l,3-dihidro-isoindol-2il)-propoxi]-2-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (1.77 g, 4.07 mmol), NaBEL (0.769 g, 20.3 mmol), z-PrOH (37 mL) e H₂O (6.2 mL). Após 16 h, AcOH (4.3 mL) foi adicionado devagar e a mistura foi

189 aquecida a 80°C (temp. banho) por 5 h. Após o resfriamento a rt os voláteis foram removidos a vácuo. EtOH e Et₂O foram adicionados e a mistura filtrada. O filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo dissolvido em H₂O. A camada aquosa foi lavada com Et₂O e depois liofilizada. A purificação por HPLC preparativa (0.1% AcOH) resultou em All como um liofilizado branco: rendimento 0.140 g (13%).

*H RMN (400 MHz, DMSO-7_Ó) δ (ppm): 7.22 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.80 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 6.66 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 4.81 (s, 2H), 4.31 (bs, 2H), 2.79 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 1.91-1.82 (m, 2H), 1.80 (s, 3H); MS (ESI): m/z = 208 (M+l, positivo); HPLC pureza: 99.19% (MaxPlot 200-400 nm), 98.46% (220 nm).

Cloridrato de 7-(3-Amino-propoxi)-3H-benzo[cl [1,2] oxaborol-l-ol (All)

Procedimento geral 7

NHBoc

Procedimento geral 11

NH₂ ^HCI

Éster tert-butílico do ácido [3-(l-Hidroxi-l,3-dihidrobenzo[c] [1,2]oxaborol- 7-iloxi)-propil]-carbâmico

NHBoc

Procedimento geral 7: éster tert-butílico do ácido {3-[3-formil-

2-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenoxi]-propil}-carbâmico (3.38 g, 8.33 mmol), EtOH absoluto (65 mL) e NaBHi (0.451 g, 11.9 mmol). Purificação: cristalização (1:2 EtOH/H₂O). O composto de título foi isolado como um sólido branco: rendimento 1.18 g (46%).

'll RMN (400 MHz, DMSO-7₆) δ (ppm): 8.65 (s, 1H), 7.40 (t,

7-7.8 Hz, 1H), 6.9 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.90-6.84 (m, 1H), 6.8 (d, 7- 8.2 Hz,

1H), 4.91 (s, 2H), 4.04 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 3.16-3.01 (m, 2H), 1.83 (t, J= 6.5

190

Hz, 2H), 1.37 (s, 9H).

Cloridrato oxaborol-l-ol (All) de 7-(3-Amino-propoxi)-3H-benzo[c][l,2]

Procedimento geral 11: éster tert-butílico do ácido [3-(lhidroxi-1,3 -dihi dro-benzo[c] [ 1,2] oxaborol-7-iloxi)-propil] -carbâmico (0.50 g,

1.6 mmol) e 4 N HCI em dioxano (10 mL) foi agitado a rt O/N. Purificação: trituração com EtOAc. All foi isolado como um sólido branco: rendimento

0.39 g (98%).

^TH RMN (400 MHz, DMSO-íZ₆) δ (ppm): 7.83 (bs, 1H), 7.44 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 6.98 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.83 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.94 (s, 2H), 4.15 (t, J= 5.7 Hz, 2H), 3.03 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.14-1.92 (m, 2H).

N-[3-(l -Hidroxi-1,3-dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-7-iloxi)~ propil]-acetamida (A12) imh₂

A ^HCI

Ac₂O, NMM.DMF t.a.,6 h

NHAc

NMM (0.114 mL, 1.04 mmol) foi adicionado a uma solução de All (0.120 g, 0.493 mmol) em DMF (1.0 mL) a 0 °C (temp. banho). Após 1 h, Ac₂O (56 pL, 0.59 mmol) foi adicionado e a mistura aquecida a rt e agitada por 6 h. H₂O (5 mL) foi adicionada e a mistura extraída com EtOAc (50 mL). A camada aquosa foi acidificada para o pH 5 uando um 2 N HCI e extraída com EtOAc (50 mL). As frações orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL), secas (Na₂SO₄) e concentradas a vácuo. O resíduo foi precipitado a partir de 1:1 EtOH/H₂O para resultar no composto de título como um sólido branco: rendimento 45 mg (37%).

’H RMN (400 MHz, DMSO-í/_ó) δ (ppm): 8.75 (bs, 1H), 7.84

191 (bs, 1H), 7.39 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 6.93 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.91 (s, 2H), 4.03 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.20 (q, J= 6.2 Hz, 3H), 1.90-

1.80 (m, 2H), 1.79 (s, 3H); MS (ESI): m/z = 248 (M-l, negativo); HPLC pureza: 99.12% (MaxPlot 200-400 nm), 97.88% (220 nm).

Cloridrato________de_________7-/3 -Metilam ino-propoxi)-3Hbenzofc][l,21oxaborol-l-ol (A13)

o

Éster tert-butílico do ácido [3-(l-Hidroxi-l,3-dihidrobenzo[c][l,2]oxaborol-7-iloxi)-propil]-metil-carbâmico

NBoc

p

NaH (60% dispersão em óleo mineral, 0.082 g, 2.05 mmol) foi adicionado porção a porção a uma solução de éster tert-butílico do ácido [3(1 -hidroxi-1,3-dihidro-benzo[c] [ 1,2]oxaborol-7-iloxi)-propil]-carbâmico (0.212 g, 0.690 mmol) e Mel (1.03 mL, 2.07 mmol) em DMF anidro (5 mL) a 0 °C. A reação foi então agitada a rt por 2h. A mistura foi resfriada para 0 °C, acidificada para o pH 6 usando um NH₄C1 sat., e então extraída com EtOAc. As frações orgânicas foram secas (Na₂SO₄) e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (40% EtOAc/hexano) para resultar no composto de título como um óleo incolor: rendimento 0.17 g (77%).

H RMN (400 MHz, CDCI3) (mistura de rotomers) δ (ppm):

7.40 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 6.93 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.6 Hz, 1H),

6.93 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 8.2 Hz, 0.5H), 6.64 (d, J = 7.4 Hz,

0.5H), 5.10 (s, 1H),5.O4 (s, 1H), 4.07 (bs, 1H), 3.75 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 3.46

192 (bs, 1H), 3.06 (bs, 1H), 2.88 (s, 1.5H), 2.66 (bs, 1.5H), 2.00 (bs, 1H), 1.44 (d,

J= 17.6 Hz, 12H); MS (ESI): m/z = 322 (M+l, positivo).

NHMe ^HCU benzo[c][1,2joxaborol-l-ol (Al3)

O s ni-|

Procedimento geral 11: éster tert-butílico do ácido [3-(lhidroxi-l,3-dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-7-iloxi)-propil]-metil-carbâmico (0.160 g, 0.498 mmol) e 4 N HC1 em dioxano (10 mL). A13 foi isolado como um sólido branco liofilizado: rendimento 90 mg (70%).

H RMN (400 MHz, DMSO-ó/_ó) δ (ppm): 8.74 (bs, 2H), 7.44 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 6.99 (d, 7.4 Hz, 1H), 6.84 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.95 (s,

2H), 4.15 (t, J= 5.5 Hz, 2H), 3.11 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.57 (s, 3H), 2.10 (t, J=

6.1 Hz, 2H); MS (ESI): m/z = 222 (M+l, positivo); HPLC pureza: 99.52% (MaxPlot 200-400 nm), 98.59% (220 nm).

l-Etil-3-[3-(l -hidroxi-1,3-dihidro-benzo[c][1,2 loxaborol- 7iloxi)-propil]-uréia (A14)

HCI

EtNCO.NMM

THF.t.a. ,24 h

OH

Isocianato de etila (0.081 mL, 1.04 mmol) foi adicionado a uma suspensão de NMM (0.170 mL, 1.56 mmol) e All (0.126 g, 0.518 mmol) em THF (5 mL) a rt. A mistura foi agitada O/N e então DMF (3 mL) foi adicionado. A solução turva foi então agitada por mais 24 h. A mistura foi acidificada a ~ pH 4 usando 2 N HCI e então extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca (Na₂SO₄) e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado pela HPLC preparativa para resultar no Al4 como um sólido amarelo claro: rendimento 45 mg (31%).

193

Ή RMN (400 MHz, DMSO>₆) δ (ppm): 8.80 (s, 1H), 7.41 (t,

J= 7.8 Hz, 1H), 6.94 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.81 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.01-5.80 (m, 1H), 5.80-5.58 (m, 1H), 4.04 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 3.16 (q, 6.2 Hz, 2H),

3.07-2.91 (m, 2H), 1.91-1.72 (m, 2H), 0.97 (t, J= 7.0 Hz, 3H); MS (ESI): m/z = 279 (M+l, positivo); HPLC pureza: 95.99% (MaxPlot 200-400 nm), 94.68% (220 nm).

N-[3-(l-Hidroxi-l,3-dihidro-benzo[cl [l,21oxaborol-7-iloxi)propil /-metanosulfonamida (Al5)

MsCI, NMM

DMF.t.a.O/N

NMM (0.190 mL, 1.75 mmol) foi adicionado a uma solução de cloreto de metanosulfonila (0.081 mL, 1.05 mmol) e All (0.170 g, 0.700 mmol) em DMF (3 mL) a rt. A mistura foi agitada O/N depois H₂O foi adicionada e a mistura extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca (Na₂SO₄), e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (50% EtOAc/hexano, depois 5% MeOH/EtOAc). O resíduo foi cristalizado de EtOAc e lavado com Et₂O para resultar no Al5 como cristais brancos: rendimento 60 mg (30%).

p.f. 135-140 °C; Ή RMN (400 MHz, DMSO>_Ó) δ (ppm):

8.74 (s, 1H), 7.41 (t, 7.6 Hz, 1H), 7.01 (bs, 1H), 6.95 (d, J= 7.4 Hz, 1H),

6.82 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.09 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 3.14 (d, J= 5.5 Hz, 2H), 2.89 (s, 3H), 1.99-1.84 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 284 (M-l, negativo); HPLC pureza: 98.27% (MaxPlot 200-400 nm), 98.37% (220 nm).

4-(l -Hidroxi-l,3-dihidro-benzo[cl [1,2 /oxaborol- 7-iloxi)butironitrila (A 16)

194

Procedimento Geral 4

Procedimento Geral 5

Procedimento Geral 7

4-(2-Bromo-3-formil-fenoxi)-butironitrila

Procedimento geral 4: 2-bromo-3-hidroxi-benzaldeído (5.0 g, mmol), 4-bromo-butironitrila (2.95 mL, 29.8 mmol), CS2CO3 (12.15 g, 37.30 mmol) e DMF (50 mL): rendimento 3.94 g (59%).

’H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.43 (s, 1H), 7.56 (dd, J= 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.39 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.16-7.10 (m, 1H), 4.20 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.73 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.30-2.21 (m, 2H).

4-[3-Formil-2-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)~ fenoxi]-butironitrila

Procedimento

4-(2-bromo-3 -formil-fenoxi)butironitrila (3.94 g, 14.69 mmol), B₂pin₂(4.47 g, 17.63 mmol), KOAc (5.76 g, 58.76 mmol), PdCl₂(dppf)*CH₂Cl₂ (0.537 g, 0.73 mmol), e dioxano (100 mL). Purificação: cromatografia instantânea (20% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como uma espuma branca: rendimento 1.4 g (30%).

^!H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 9.96 (s, 1H), 7.54-7.47

195 (m, 1H), 7.46-7.41 (m, 1H), 7.09 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 4.13 (t, J= 5.7 Hz, 2H),

2.63 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 2.20-2.11 (m, 2H), 1.49-1.40 (m, 12H).

4-(l -Hidroxi-1,3-dihidro-benzo[c][1,2Joxaborol- 7-iloxi)butironitrila (A 16)

CN

Procedimento geral 7: 4-[3-formil-2-(4,4,5,5-tetrametil- [l,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenoxi]-butironitrila (1.40 g, 4.44 mmol), NaBEf (219 mg, 5.77 mmol) e MeOH (10 mL). Al6 foi isolado como um sólido laranja claro: rendimento 600 mg (62%).

'11 RMN (400 MHz, DMSO-éÇ) Ç(ppm): 8.69 (s, 1H), 7.39 (dd, J= 7.4 Hz, 1H), 6.95 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.90 (s, 2H), 4.08 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 2.68 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 2.13-1.91 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 216 (M-l, negativo); HPLC pureza: 99.37% (MaxPlot 200400 nm), 98.27% (220 nm).

Cloridrato de 7-(4-Amino-butoxi)-3H-benzo[c][l,2]oxaboroll-ol (Al7)

CIM NHBoc NH₂ ur-i /h 0) ^HC qh Procedimento Geral 10 CU'4 q|_| Procedimento Geral 11 0+q q|_|

Ò3 03 Ôò

Ester tert-butílico do ácido [4-(l-Hidroxi-l,3-dihidrobenzofc][1,2Joxaborol- 7-iloxi)-butil]-carbâmico

NHBoc

Procedimento geral 10: Al 6 (600 mg, 2.76 mmol),

NiCl₂*6H₂O (65 mg, 0.276 mmol), NaBlf (540 mg, 19.32 mmol) e Boc₂O (1.20 g, 5.52 mmol) em MeOH (50 mL). Purificação: cromatografia

196 instantânea (30% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como uma espuma branca: rendimento 200 mg (22%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 7.51-7.34 (m, 1H), 7.026.84 (m, 1H), 6.73 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.13-3.99 (m, 2H), 3.30-

3.12 (m, 2H), 1.97-1.77 (m, 2H), 1.77-1.61 (m, 2H), 1.45 (s, 9H); MS (ESI): m/z = 320 (M-l, negativo).

Cloridrato de 7-(4-Amino-butoxi)-3H-benzo[c][l,2]oxaboroll-ol (A17)

Procedimento geral 11: éster tert-butílico do ácido [4-(lhidroxi-l,3-dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-7-iloxi)-butil]-carbâmico (200 mg, 0.62 mmol) e 1 M HC1 em Et₂O (4 mL). Al7 foi isolado como um sólido branco: rendimento 72 mg (45%).

p.f. 140-141 °C; *H RMN (400 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm):

8.74 (s, 1H), 7.80 (bs, 3H), 7.41 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 6.95 (d, J= 7.8 Hz, 1H),

6.82 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.93 (s, 2H), 4.11-3.99 (m, 2H), 2.97-2.78 (m, 2H), 1.95-1.52 (m, 4H); MS (ESI): m/z = 222 (M+l, positivo); HPLC pureza: 97.72% (MaxPlot 200-400 nm), 96.62% (220 nm).

Cloridrato de 7-(2-Amino-etoxi)-3H-benzo[cl [1,2loxaborol-lol (A 18)

éster tert-butílico do ácido benzo [c][1,2]oxaborol- 7-iloxi)-etil]-carbâmico

Procedimento

Geral 11

[2-(1 -Hidroxi-1,3-dihidroBocHN

197

Procedimento geral 10: (l-hidroxi-l,3-dihidrobenzo[c][l,2]oxaborol-7-iloxi)-acetonitrile (360 mg, 1.90 mmol), NiCl₂*6H₂O (90 mg, 0.38 mmol), NaBIfi (505 mg, 13.3 mmol), e Boc₂O (829 mg, 3.8 mmol) em MeOH (20 mL). Purificação: cromatografia instantânea (30% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como uma espuma branca: rendimento 100 mg (18%).

Ή RMN (400 MHz, DMSCMQ δ (ppm): 8.32 (s, 1H), 7.39 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.14 (bs, 1H), 6.94 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.90 (s, 2H), 3.99-3.82 (m, 2H).

Cloridrato de 7-(2-Amino-etoxi)-3H-benzo[c][1,2]oxaborol-Ιοί (Al 8)

Procedimento geral 11: éster tert-butílico do ácido [2-(lhidroxi-1,3-dihidro-benzo[c] [ 1,2]oxaborol-7-iloxi)-etil]-carbâmico (100 mg, 0.34 mmoL), 1 M HCl em Et₂O (2 mL) e CH₂C1₂ (2 mL). Al8 foi isolado como um sólido branco: rendimento 58 mg (74%).

p.f. 217-218 °C; *H RMN (400 MHz, DMSO-J_tf) δ (ppm):

8.65 (bs, 1H), 8.08-7.97 (m, 3H), 7.44 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.01 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.86 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.20 (t, J= 3.90 Hz, 2H), 3.263.20 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 194 (M+l, positivo); HPLC pureza: 97.69% (MaxPlot 200-400 nm), 96.84% (220 nm).

4-(l -Hidroxi-l,3-dihidro-benzo[c][1,2 (oxaborol- 7-iloxi)butiramidina (A 19)

1. HCl (g), Et₂0

MeOH.t.a..O/Ν

2. 7 N NH₃/MeOH °C,1.5 h

HCl (g) borbulhado através de uma solução de 4-(l-hidroxi

198 l,3-dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-7-iloxi)-butironitrila (300 mg, 1.38 mmol) em MeOH (20 mL) e Et₂O (10 mL) por lh a 0 °C (temp. banho). A mistura foi deixada O/N em um sistema fechado e foi então concentrada a vácuo para resultar no composto de título como um sólido branco: rendimento 310 mg. Esre foi usado na próxima etapa sem purificação adicional ou caracterização.

Uma mistura de cloridrato de éster de metila do ácido 4-(lhidroxi-l,3-dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-7-iloxi)-butirimídico (310 mg cru), 7 M NH₃ em MeOH (10 mL) e MeOH (5 mL) foi aquecida a 50 °C (temp. banho) em um tubo selado por 1.5 h. A mistura foi resfriada e concentrada a vácuo. A purificação por HPLC preparativa (0.1% NH4OH) rendeu A19: rendimento 35 mg (11% em 2 etapas).

Ή RMN (400 MHz, CD3ODA4) δ (ppm): 7.08 (t, J= 1.6 Hz, 1H), 6.70 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 6.62 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 4.81 (s, 2H), 4.04 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.73 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.13 (quin, J= 6.2 Hz, 2H); MS (ESI): m/z = 235 (M+l, positivo); HPLC pureza: 86.89% (MaxPlot 200-400 nm), 86.19% (220 nm).

7-(3-Hidroxipropoxi)benzo[c] [1,2]oxaborol-l (3H)-ol [A20] ΗΟ'^^^Ο nu

A uma solução de 2-bromo-3-hidroxibenzaldeído (5.18 g, 25.0 mmol) e 2-(3-bromopropoxi)tetra-hidro-2H-pirano (5.1 mL, 30 mmol) em DMF (60 mL) foi adicionado hidreto de sódio (1.20 g, 30.0 mmol) a 0°C sob atmosfera de nitrogênio, e a mistura foi agitado a temperatura ambiente durante a noite. A reação foi resfriada rapidamente com água, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água duas vezes e salmoura, e seca sobre sulfato de sódio anidro. O solvente foi removido sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado pela cromatografia em coluna de gel de sílica (9:1 a 3:1 hexano/acetato de etila) para resultar no 2-bromo-3 - [3 -(tetra-hidropiran-2-iloxi)propoxi]benzaldeí do (8.75 g,

199 quantitativo).

A uma solução do composto obtido acima (8.75 g, 25.0 mmol) em metanol (60 mL) foi adicionado borohidreto de sódio (475 mg, 12.5 mmol) a 0°C, e a mistura agitada por 15 min. A reação foi resfriada rapidamente com acetona e água, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura, e seca sobre sulfato de sódio anidro. O solvente foi removido sob pressão reduzida. A uma solução do resíduo em diclorometano (100 mL) foram adicionados 3,4-dihidro-2H-piran (3.40 mL, 37.5 mmol) e ácido canforsulfônico (116 mg, 2 mol%), e a mistura foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. Carbonato de sódio (1 g) foi adicionado e a mistura foi derramada sobre clorofórmio e água. A camada orgânica foi lavada com salmoura, e seca sobre sulfato de sódio anidro. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado pela cromatografia em coluna de gel de sílica (9:1 hexano/acetato de etila) para resultar no 2-(2-(2-bromo-3-((tetra-hidro-2H-piran-2-iloxi)metil)fenoxi)etoxi) tetra-hidro-2H-piran (9.98 g, 93%).

A uma solução do composto obtido acima (9.98 g, 23.3 mmol) em tetra-hidrofurano (50 mL) foram adicionados «-butilitio (1.6 mol/L em hexanos; 18 mL) e borato de triisopropila (8.0 mL, 35 mmol) a - 78°C sob atmosfera de nitrogênio, e permitiu-se que a mistura fosse aquecida a temperatura ambiente e agitada durante a noite. Então o ácido hidroclorídrico (6 mol/L, 10 mL) foi adicionado, e a mistura agitada por 30 min a temperatura ambiente. A mistura foi derramada sobre acetato de etila e água. A camada orgânica foi lavada com salmoura, e seca sobre sulfato de sódio anidro. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica (7:3 a 6:4 hexano/acetato de etila) para resultar no 7-(3-Hidroxipropoxi)benzo[c][l,2]oxaborol-l(3H)-ol (2.06 g, 43%).

'H-RMN (300 MHz, DMSO-^ + D₂O)Ô (ppm) 1.84 (quint, J

200 = 6.2 Hz, 2H), 3.55 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 4.07 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 4.89 (s, 2H),

6.79 (d, 8.2 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 7.3, 1H), 7.38 (t, J= 7.8 Hz, 1H).

7-(4-Benziloxi-butoxi)-3H-benzo[c] [ 1,2] oxaborol-l-ol (A21)

BnO

MsCI,Et₃N

CH₂CI₂,0 °C até t.a., 2 h

BnO

Procedimento Geral 4

OBn

Procedimento Geral 5

Procedimento Geral 7

OBn

Éster 4-benziloxi~butila ácido metanosulfônico

BnO

OMs

MsCl (2.48 mL, 32.1 mmol) foi adicionado devagar a uma solução de 4-benziloxi-butan-l-ol (5.26 g, 29.2 mmol) e Et₃N (6.1 mL, 43 mmol) em CH₂C1₂ (100 mL) a 0 °C (temp. banho). A mistura da reação foi agitada a rt por 2h e depois resfriada rapidamente com H₂O (100 mL). A camada aquosa foi extraída com CH₂C1₂, seca (MgSO₄), e concentrada a 10 vácuo para resultar no composto de título como um líquido incolor: rendimento 7.5 g (99%).

^TH RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 7.39-7.25 (m, 5H), 4.50 (s, 2H), 4.26 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 3.52 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 2.98 (s, 3H), 1.921.84 (m, 2H), 1.78-1.69 (m, 2H).

3-(4-Benziloxi-butoxi)-2-bromo-benzaldeido

OBn

Procedimento geral 4: 2-bromo-3-hidroxi-benzaldeído (4.86 g,

24.2 mmol), éster 4-benziloxi-butila ácido metanosulfônico (7.5 g, 29 mmol),

201

Cs₂CO₃ (11.82 g, 36.3 mmol) e DMF (100 mL). O composto de título foi isolado como um líquido viscoso: rendimento 6.4 g (73%).

‘li RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.44 (s, 1H), 7.51 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.38-7.24 (m, 6H), 7.09 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.53 (s, 2H), 4.09 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 3.59 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 2.03-1.95 (m, 2H), 1.93-1.82 (m, 2H).

3-(4-Benziloxi-butoxi)-2-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2] dioxaborolan-2-il)-benzaldeído

Procedimento geral 5: 3-(4-benziloxi-butoxi)-2-bromobenzaldeído (6.4 g, 17 mmol), B₂pin₂ (8.94 g, 35.2 mmol), KOAc (6.91 g,

70.4 mmol), PdCl₂(dppf)*CH₂Cl₂ (0.64 g, 0.88 mmol), e dioxano (200 mL). Purificação: cromatografia instantânea (20% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como uma espuma branca: rendimento 4.0 g (55%).

ΪΙ RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 9.92 (s, 1H), 7.44 (t, J=

7.8 Hz, 1H), 7.39-7.24 (m, 6H), 7.04 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.50 (s, 2H), 3.99 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.52 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 1.96-1.75 (m, 4H), 1.44 (s, 12H).

7-(4-Benziloxi-butoxi)-3H-benzo[c][1,2]oxaborol-l-ol (A21) OBn _o9)

Procedimento geral 7: 3-(4-benziloxi-butoxi)-2-(4,4,5,5tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (2.0 g, 4.8 mmol), NaBEL (239 mg, 6.3 mmol), e MeOH (10 mL). Purificação: cromatografia instantânea (30% EtOAc em hexano): rendimento 650 mg (43%).

’l·! RMN (400 MHz, DMSCM_Ó) δ (ppm): 8.66 (s, 1H), 7.43-

7.22 (m, 6H), 6.91 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.89 (s, 2H),

202

4.44 (s, 2H), 4.03 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.48 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 1.85-1.61 (m, 4H); MS (ESI): m/z = 313 (M+l, positivo); HPLC pureza: 93.49% (MaxPlot 200-400 nm), 92.07% (220 nm).

7-(4-Hidroxi-butoxi)-3H-benzo[c][1,2loxaborol-1 -ol (A22)

Procedimento Geral 2

Procedimento geral 2: H₂ (50 psi), A21 (600 mg, 1.92 mmol),

Pd(OH)₂ (600 mg), e AcOH (20 mL). Purificação: cromatografia instantânea (50% EtOAc em hexano). A22 foi isolado como um sólido branco:

rendimento 90 mg (21%).

p.f. 141-142 °C; 'H RMN (400 MHz, DMSO-40 δ (ppm):

8.68 (bs, 1H), 7.52-7.29 (m, 1H), 6.92 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.80 (d, J= 7.4 Hz,

1H), 4.91 (s, 2H), 4.55-4.35 (m, 1H), 4.12-3.95 (m, 2H), 3.54-3.54 (m, 2H), 1.91-1.67 (m, 2H), 1.63-1.50 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 221 (M-l, negativo); HPLC pureza: 95.71% (MaxPlot 200-400 nm), 93.02% (220 nm).

Cloridrato_____de_____(3S)-7- (3-Amino-4-hidroxi-butoxi)-3H15 benzo[c]/1,21 oxaborol-l-ol (A23)

SOCI₂, MeOH

HO₂C -20 C atét.a.,O/N

BoçjO, EtjN

CH₂CI₂, atét.a,, O/N

NHBoc

NH₂ HBr

BocHN, I	^CO₂Me
Procedimento Geral 4 o *
λ	c
	vHO

BocHN, CO₂Me

Bromidrato do éster de metila do ácido (2S)-2-amino-4203 bromo-butírico

M eO₂ c -w θ^rNH₂ HBr

SOC1₂ (7.0 mL) foi adicionado devagar ao MeOH (100 mL) a 20 °C (temp. banho), e agitado por 30 min. O bromidrato do ácido 2-Amino-

4-bromo-butírico (5.0 g, 19 mmol) foi então adicionado e a mistura da reação foi agitada O/N a rt. A concentração a vácuo resultou no composto de título como um líquido viscoso que se tomou sólido em repouso: rendimento 5.2 g (99%).

^lH RMN (400 MHz, DMSO-ri₆) δ (ppm): 8.57 (bs, 3H), 4.11 (t, J= 6.2 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.71-3.53 (m, 2H), 2.40-2.22 (m, 2H).

Ester de metila do ácido (2S)-4-Bromo-2-tertbutoxicarbonilamino-butírico

MeO₂C^^\^Br

NHBoc

Et₃N (6.5 mL, 47 mmol) seguido por Boc₂O (4.09 g, 18.8 mmol) foram adicionados a uma solução de bromidrato do éster de metila do ácido 2-amino-4-bromo-butírico (5.2 g, 19 mmol) em CH₂C1₂ (100 mL) a rt. A mistura da reação foi agitada O/N a rt e depois resfriada rapidamente com H₂O (100 mL). A camada aquosa foi extraída com CH₂C1₂, seca (MgSO₄), e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado pela cromatografia instantânea (20% EtOAc em hexano) para resultar no composto de título como um líquido incolor: rendimento 3.1 g (56%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 5.19-5.00 (m, 1H), 4.51-

4.37 (m, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.44 (t, J= 7.0 Hz, 2H), 2.47-2.32 (m, 1H), 2.27-

2.13 (m, 1H), 1.45 (s, 9H).

Ester de metila do ácido (2S)-4-(2-Bromo-3-formil-fenoxi)-2tert-butoxicarbonilamino-butírico

204

Procedimento geral 4: 2-bromo-3-hidroxi-benzaldeído (2.31 g,

11.5 mmol), éster de metila do ácido 4-bromo-2-tert-butoxicarbonilaminobutírico (3.1 g, 10 mmol), Cs₂CO₃ (5.11 g, 15.7 mmol) e DMF (100 mL). Purificação: cromatografia instantânea (20% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como um líquido viscoso: rendimento 3.01 g (69%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.43 (s, 1H), 7.54 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.37 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.10 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.74-5.60 (m, 1H), 4.58 (t, J= 8.6 Hz, 1H), 4.25-4.03 (m, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.53-2.26 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).

Ester de metila do ácido (2S)-2-tert-Butoxicarbonilamino-4[3-formil-2-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]-dioxaborolan-2-il)-fenoxi]-butírico CO₂Me

Ç

B

CHO

Procedimento geral 5: éster de metila do ácido (25)-4-(2bromo-3-formil-fenoxi)-2-tert-butoxicarbonilamino-butírico (3.01 g, 7.23 mmol), B₂pin₂ (3.67 g, 14.5 mmol), KOAc (2.83 g, 28.9 mmol), PdCl₂(dppf)»CH₂Cl₂ (0.37 g, 0.51 mmol) em dioxano (50 mL). Purificação: cromatografia instantânea (10% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como uma espuma branca: rendimento 1.2 g (35%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 9.96 (s, 1H), 7.51-7.39 (m, 2H), 7.09 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.32 (d, J= 9.4 Hz, 1H), 4.49-4.39 (m, 1H), 4.17-3.99 (m, 2H), 3.75 (s, 3H), 2.45-2.31 (m, 1H), 2.21-2.10 (m, 1H), 1.45 (s, 12H), 1.42 (s, 9H).

Ester tert-butílico do ácido (3S)-[3-(l-Hidroxi-l,3-dihidro

205 benzo [c][1,2Joxaborol- 7-iloxi)-l-hidroxi-metil-propil]-carbâmico

Procedimento geral 7: Éster de metila do ácido (2ó)-2-tertbutoxicarbonilamino-4-[3-formil-2-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]-dioxaborolan-2il)-fenoxi]-butírico (1.10 g, 2.3 mmol), NaBH₄ (113 mg, 2.99 mmol) e MeOH (25 mL). Purificação: cromatografia instantânea (10%-50% EtOAc/hexano): rendimento 70 mg (9%).

'Η RMN (400 MHz, DMSCM_Ó) δ (ppm): 8.59 (bs, 1H), 7.38 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.77 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.70 (t, J= 4.9 Hz, 1H), 4.10-3.96 (m, 2H), 3.64-3.52 (m, 1H), 3.41-3.35 (m, 1H), 2.02-1.90 (m, 1H), 1.82-1.67 (m, 1H),

1.33 (s, 9H); MS (ESI): m/z = 336 (M-l, negativo).

Cloridrato de (3S)-7-(3-Amino-4-hidroxi-butoxi)-3Hbenzo[c][l,2]oxaborol-l-ol; (A23)

Procedimento geral 11: Éster tert-butílico do ácido (3A)-[3-(lhidroxi-1,3-dihidro-benzo[c] [ 1,2]oxaborol-7-iloxi)-1 -hidroxi-metil-propil]carbâmico (70 mg, 0.21 mmol) em 4 N HC1 dioxano (2 mL). A23 foi isolado como um sólido branco liofilizado: rendimento 35 mg (61%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-4) δ (ppm): 8.89 (s, 1H), 7.90 (bs, 3H), 7.42 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 6.96 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.82 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.34 (bs, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.24-4.03 (m, 2H), 3.70-3.60 (m, 1H), 3.57-3.47 (m, 1H), 2.06-1.94 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 238 (M+l, positivo); HPLC pureza: 94.91% (MaxPlot 200-400 nm), 94.63% (220 nm).

206

7-(2-benziloxi-etoxi)-3H-benzo[c][1,2]oxaborol-l-ol (A24)

3-(3-Benziloxi-etoxi)-2-bromo-benzaldeído

OBn

Procedimento

Geral 5

OBn

OH

Procedimento geral 3: 2-bromo-3-hidroxi-benzaldeído (7.0 g, 35 mmol), 2-benziloxi-etanol (5.0 mL, 35 mmol), PPh₃ (9.2 g, 35 mmol),

THF anidro (200 mL), e DIAD (6.9 mL, 35 mmol). Purificação: cromatografia instantânea (hexano depois 5% EtOAc/hexano): rendimento 7.6 g (65%).

'Η RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.44 (s, 1H), 7.53 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44-7.26 (m, 6H), 7.15 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.26 10 (t, J = 4.7 Hz, 2H), 3.93 (t, J = 4.7 Hz, 2H).

3-(3-Benziloxi-etoxi)-2-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2] dioxaborolan-2-il)-benzaldeído

Procedimento geral 5: 3-(3-benziloxi-etoxi)-2-bromobenzaldeído (7.2 g, 23 mmol), KOAc (6.3 g, 64 mmol), B₂pin₂ (10.9 g, 43 15 mmol), PdCl₂(dppf)*CH₂Cl₂ (0.79 g, 1.1 mmol), e DMF anidro (50 mL).

Purificação: cromatografia instantânea (hexano depois 30% EtOAc/hexano):

207 rendimento 4.93 g (60%).

^!H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 9.91 (s, 1H), 7.49-7.24 (m, 7H), 7.09 (d, 7- 8.20 Hz, 1H), 4.57 (s, 2H), 4.18 (t, J= 5.0 Hz, 2H), 3.84 (t, J= 5.0 Hz, 2H), 1.43 (s, 12H)

7-(2-Benziloxi-etoxi)-3H-benzo[c] [1,2]oxaborol-l-ol (A24)

OBn

Procedimento geral 7: 3-(3-benziloxi-etoxi)-2-(4,4,5,5tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (0.76 g, 2.0 mmol), NaBHr (38 mg, 1.0 mmol), e MeOH (5 mL). Purificação: cromatografia instantânea (30 % EtOAc em hexano): rendimento 0.55 g (96%).

*H RMN {400 MHz, DMSO-7₆ + D₂O (0.01 mL)} δ (ppm):

8.80 (s, 1H), 7.40-7.20 (m, 6H), 6.97 (d, 7- 7.4 Hz, 1H), 6.80 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 4.85 (s, 2H), 4.60 (s, 2H), 4.25-4.18 (m, 2H), 3.80-3.72 (m, 2H); MS (ESI) m/z = 283 (M-l, negativo); HPLC pureza 96.23% (MaxPlot) e 95.11% (220 nm).

7-(4-Metoxi-benziloxi)-3H-benzo[c][1,2]oxaborol-l-ol (A25)

MPMCI

OMPM

Procedimento Geral 4

CSA.DHP

CH₂CI₂,t.a.,O/N

OMPM

OTHP

1. n-BuLi,

-78 °C,

2. (APrO)

3.3MHC

2-Bromo-3-(4-metoxi-benziloxi)-benzaldeído

OMPM

Procedimento geral 4: 2-bromo-3-hidroxi-benzaldeído (1.0 g,

208

7.2 mmol) K₂CO₃ (1.09 g, 7.95 mmol), l-clorometil-4-metoxi-benzeno (1.03 mL, 7.95 mmol), e DMSO (14 mL) a 50 °C (temp. banho) O/N. Purificação: cromatografia instantânea (25% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como um sólido branco: rendimento 1.59 g (96%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.42 (s, 1H), 7.49 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 7.16 (s, 1H), 7.02-6.84 (m, 3H), 5.11 (s, 2H), 3.80 (s, 3H); MS (ESI) m/z = 323 (M+l, positivo).

[2-Bromo-3-(4-metoxi-benziloxi)-fenil]-metanol

OMPM

NaBEL (0.38 g, 10 mmol) foi adicionado a uma solução de 2bromo-3-(4-metoxi-benziloxi)-benzaldeído (1.59 g, 4.95 mmol) em EtOH (15 mL) a 0 °C (temp. banho). A mistura foi agitada a 0°C (temp. banho) por 1.5 h e então concentrada a vácuo. H₂O (10 mL) foi adicionada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2Π50 mL). As frações orgânicas foram lavadas com salmoura (20 mL), seca (Na₂SO₄), e concentrada a vácuo para resultar no composto de título como um sólido branco: rendimento 1.50 g (94%).

'll RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 7.40 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 7.26 (s, 1H), 7.10 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.98-6.84 (m, 3H), 5.10 (s, 2H), 4.78 (d, J= 6.6 Hz, 2H), 3.83 (bs, 3H).

2-[2-Bromo-3-(4-metoxi-benziloxi)-benziloxi]-tetra-hidropirano

OMPM

Af^Br

DHP (0.67 mL, 7.4 mmol) e CSA (30 mg, 0.12 mmol) foram adicionados a uma solução de [2-bromo-3-(4-metoxi-benziloxi)-fenil]metanol (2.0 g, 6.1 mmol) em CH₂C1₂ (15 mL). A mistura resultante foi agitado a rt O/N. Peneiras moleculares 4Â (1.0 g) foram adicionadas e a

209

mistura agitada por 1 h. NaHCO₃ Sat. foi adicionado e a mistura foi extraída com CHC1₃ (2Ç50 mL). As frações orgânicas foram lavadas com H₂O (2D25 mL) depois salmoura (50 mL), secas (Na₂SO₄), e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (25% EtOAc em hexano) para resultar no composto de título como um óleo amarelo: rendimento 1.30 g (96%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 7.40 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 7.32-7.19 (m, 1H), 7.15 (dd, J= 7.8, 1.2 Hz, 1H), 6.96-6.81 (m, 3H), 5.08 (s, 2H), 4.94-4.73 (m, 2H), 4.62 (d, J= 13.3 Hz, 1H), 4.12-3.86 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.65-3.42 (m, 1H), 1.99-1.44 (m, 6H).

7-(4-Metoxi-benziloxi)-3H-benzo[c] [1,2loxaborol-l-ol (A25) OMPMnu

2.5 M n-BuLi em hexano (1.53 mL, 3.83 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de 2-[2-bromo-3-(4-metoxi-benziloxi)-benziloxi]tetra-hidro-pirano (1.3 g, 3.2 mmol) em THF (14 mL) sob N₂ a -78 °C (temp. banho). A mistura foi agitada a -78°C (temp. banho) por 2h depois o borato de triisopropila (0.90 mL, 3.8 mmol) foi adicionado devagar e agitada a -78 °C (temp. banho) por 4 h. Permitiu-se que a mistura fosse aquecida a 0 °C (temp. banho) e depois acidificada com 3 M HC1 para o pH 5. A mistura foi agitada por 3 h e o precipitado resultante foi isolado pela filtragem e lavado com 1:9 CH₂Cl₂/Et₂O para resultar no A25 como um sólido amarelo: rendimento 0.10 g (12%).

¹II RMN 400 MHz (DMSO-J_Ó) δ (ppm): 8.81 (s, 1H), 7.48-

7.28 (m, 3H), 6.96-6.91 (m, 3H), 6.87 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.93 (s, 2H), 3.75 (s, 3H); MS (ESI) m/z = 271 (M+l, positivo); HPLC pureza: 97.79% (220 nm).

3H-Benzo[c][l,21oxaborol-l, 7-diol (A26)

210

10% Pd/C, EtOH, EtOAc

H₂ 276 kPa, t.a.,O/N

A mistura de A25 (0.65 g, 2.40 mmol) 10% Pd/C (1:1 p/p) e

2:1 EtOAc/EtOH (30 mL) foi sacudida sob uma atmosfera de H₂ (40 psi)

O/N. A mistura foi filtrada através de Celite e o filtrado foi concentrado a vácuo. O resíduo foi purificado pela HPLC preparativa de fase reversa e liofilizado para render o composto de título como um sólido branco: rendimento 20 mg, (6%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-c/₆) δ (ppm): 9.39 (bs, 1H), 8.69 (bs, 1H), 7.25 (t, J= 8.2 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 6.63 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.85 (bs, 2H); MS (ESI) m/z = 149 (M-l, negativo); HPLC pureza: 94.82% (220 nm), (254 nm).

Acido 2,6-Diamino-hexanóico_____(1 -hidroxi-1,3-dihidrobenzo[c] [l,2]oxaborol-3-ilmetil)-cloridrato de amida (A27)

éster tert-butílico do ácido {5-tert-butoxicarbonilamino-5-[(lhidroxi-1,3-dihidro-benzo[c] [1,2] oxaborol-3-ilmetil)-carbamoil]-pentil}carbâmico

DIPEA (0.96 mL, 5.5 mmol), HATU (1.05 g, 2.76 mmol) e Al (0.50 g, 2.5 mmol) foram adicionados sequencialmente a uma solução de ácido 2,6-bis-tert-butoxicarbonilamino-hexanóico (0.79 g, 2.3 mmol) em DMF (10 mL) a rt. O banho foi removido e a solução foi agitada a rt O/N. A mistura foi concentrada a vácuo e o resíduo foi pego em EtOAc, lavado com

211

H₂O (3D30 mL), seco (Na₂SO₄), e concentrado a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (2% MeOH em EtOAc) para resultar no composto de título: rendimento 0.67 g (55%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-J₆) δ (ppm): 9.24 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.95 (q, J= 6.8 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 7.50-7.28 (m, 3H), 6.89-6.60 (m, 2H), 5.23-5.06 (m, 1H), 3.94-3.73 (m, 2H), 3.60-3.47 (m, 1H), 3.47-3.37 (m, 1H), 2.85 (dd, J= 15.4, 5.7 Hz, 3H), 1.37 (s, 18H).

Acido 2,6-Diamino-hexanóico (l-hidroxi-l,3-dihidrobenzo[c][ 1,2]oxaborol-3-ilmetil)-cloridrato de amida (A27)

Procedimento geral 11: éster tert-butílico do ácido (5-tertbutoxicarbonilamino-5-[(l -hidroxi-1,3-dihidro-benzo[c][ 1,2]oxaborol-3ilmetil)-carbamoil]-pentil)-carbâmico (0.66 g, 1.3 mmol) e 1 M HCI em Et₂O (25 mL). A27 foi isolado como um sólido branco: rendimento 0.33 g (69%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-^) δ (ppm): 9.36 (bs, 1H), 8.68-

8.50 (m, 1H), 8.13 (bs, 6H), 7.81 (dd, J= 7.2, 4.1 Hz, 1H), 7.55-7.29 (m, 3H), 5.30-5.13 (m, 1H), 3.90-3.61 (m, 2H), 3.54-3.43 (m, 1H), 3.13 (dd, J= 18.4, 7.0 Hz, 1H), 2.75 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 2.63 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 1.81-1.47 (m, 2H), 1.46-1.25 (m, 3H); MS (ESI): m/z - 292 (M+l, positivo); HPLC pureza: 97.80% (MaxPlot 200-400 nm), 97.62% (220 nm).

Ester de ácido acético 2-(2-[(l-hidroxi-l,3-dihidrobenzo [c! [ 1,2] oxaborol-3-ilmetil)-carbamoill -1, l-dimetil-etil}-3,5-dimetilfenila (A27a)

1. (COCI)₂, ch₂ci₂t.a.,1 h

2. DIPEA.t.a., O/N

212

Cloreto de oxalila (0.50 mL, 5.7 mmol) foi adicionado a uma solução gelada de ácido 3-(2-acetoxi-4,6-dimetil-fenil)-3-metil-butírico (1.00 g, 3.60 mmol) (produzida de acordo com o procedimento em Kent, L.; Amsberry, A.; Gerstenberger, E.; Borchardt, R. T.; Pharm. Res., 1991, 8, 455460 e Michalis, G.; Nicolaou, C.-S. Y.; Borchardt, R. T.; J. Org. Chem., 1996, 61, 8636-8641) em CH₂C1₂ anidro (15 mL) a rt. A mistura foi agitada por 1 h e depois o excesso de cloreto de oxalila foi removido a vácuo. O resíduo foi dissolvido em CH₂C1₂ anidro (15 mL) e resfriado a 0 °C (temp. banho). DIPEA (2.0 mL, 10 mmol) e Al (0.70 g, 3.6 mmol) foram adicionados e a mistura da reação foi agitado a rt por 12 h. A mistura foi então diluída com salmoura (50 mL) e extraída com CH₂C1₂ (2x50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com H₂O depois salmoura, secas (NaSO₄), e concentradas a vácuo. O produto foi purificado por cromatografia instantânea (EtOAc/MeOH) para resultar no (A27a) rendimento 0.50 g (24%).

*H RMN (400 MHz, DMSO-óZ₆) δ (ppm): 9.22 (s, 1H), 7.88 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 7.73-7.69 (m, 1H), 7.47-7.41 (m, 1H), 7.38-7.31 (m, 4H),

6.77 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.57 (d, 2.0 Hz, 1H), 5.09 (dd, J= 6.8, 4.1 Hz,

1H), 3.50-3.41 (m, 1H), 3.19 (m, 1H), 2.53 (s, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.25 (s, 3H),

2.16 (s, 3H), 1.36 (d, J= 5.1 Hz, 6H); MS (ESI) m/z = 410 (M+l, positivo); HPLC pureza: 97.73% (MaxPlot 200-400 nm), 96.90% (220 nm); Anal. Calcd para C₂₃H₂₈BNO₅: C 67.50%; H 6.90%; N 3.42 %. Encontrado: C 67.65 %; H 6.91%; N 3.28%.

Ester do ácido acético 3-[(l-hidroxi-l,3-dihidrobenzo/c][l,2]oxaborol-3-ilmetil)-carbamoil]- propila (A28)

213

<>OAc

1. NaOH, MeUH,65 ’C, 19 n

2. Ac₂O,65 °C,O/N

H0₂C

Ácido 4-acetoxi-butírico ho₂c

A mistura de dihidro-furan-2-ona (5.2 g, 60 mmol) e NaOH (2.9 g, 73 mmol) em MeOH (50 mL) foi refluxada por 19 h. A solução foi resfriada e concentrada para produzir um pó vítreo que foi usado na próxima 5 etapa sem purificação. A massa crua foi dissolvida no excesso de Ac₂O (100 mL) e aquecida a 65 °C (temp. banho) O/N. A mistura foi concentrada a vácuo e o resíduo dissolvido em Et₂O. A camada orgânica foi lavada com H₂O e concentrada a vácuo para resultar no composto de título como um óleo incolor: rendimento 0.92 g (11%).

^lH RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 4.14 (t, J= 6.1 Hz, 2H),

2.69-2.37 (m, 2H), 2.06 (s, 3H), 2.05-1.97 (m, 2H).

Ester de ácido acético 3-[(l-hidroxi-l,3-dihidrobenzo[c][1,2]oxaborol-3-ilmetil)-carbamoil]-propila (A28)

DIPEA (1.27 mL, 7.28 mmol), HATU (1.32 g, 3.48 mmol) e

Al (0.63 g, 3.2 mmol) foram adicionados a uma solução de ácido 4-acetoxibutírico (0.38 g, 2.6 mmol) em DMF (10 mL) a 0 °C. O banho de resfriamento foi removido e a solução foi agitada a rt por 19 h. A mistura foi concentrada a vácuo e o resíduo foi dissolvido em EtOAc. A camada orgânica

214 foi lavada sequencialmente com 1 N NaHSO₄ (2 x 20 mL), H₂O, e salmoura. A camada orgânica foi então seca (Na₂SO₄), e concentrada a vácuo. O resíduo branco pegajoso foi purificado por cromatografia instantânea (EtOAc) para resultar no A28 como um sólido: rendimento 0.39 g (42%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-í/₆) Dpprn): 9.23 (s, 1H), 8.09 (t, J- 5.5 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.54-7.16 (m, 3H), 5.19-4.98 (m, 1H), 3.90 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.62-3.45 (m, 1H), 3.24-3.05 (m, 1H), 2.13 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.97 (s, 3H), 1.71 (qd, J= 7.1, 6.8 Hz, 2H); MS (ESI): m/z = 292 (M+l, positivo); HPLC pureza: 99.28% (MaxPlot 200-400 nm), 98.21% (220 nm).

Ester fenila do ácido_____(1 -hidroxi-1,3-dihidrobenzofc][l,2]oxaborol-3-ilmetil)-carbâmico (K29)

A mistura de Al (0.50 g, 2.5 mmol), DIPEA (0.50 mL, 2.5 mmol) e cloroformiato de fenila (0.50 mL, 2.5 mmol) em THF anidro foi agitado a rt por 12 h. A mistura foi então diluída com salmoura (50 mL) e extraída com EtOAc (2 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com H₂O depois salmoura, secas (Na₂SO₄), e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (8:2 hexano/EtOAc) para resultar no A29: rendimento 0.27 g (20%).

’H RMN (400 MHz, DMSO-J_d)D(ppm): 9.25 (s, 1H), 7.98 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 7.73 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.53-7.29 (m, 5H), 7.18 (t, J= 7.4 Hz, 1H), 7.02 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 5.28-5.15 (m, 1H), 3.59-3.45 (m, 1H), 3.27-

3.13 (m, 1H); MS (ESI) m/z = 284 (M+l, positivo); HPLC pureza: 99.31% (MaxPlot 200-400 nm), 99.31% (220 nm).

Sal acetato de 3-aminometil-6-(2-hidroxi-etoxi)-3H215

Procedimento Geral 5

Benzo ]clf 1,21 oxaborol-l-ol, (A30)

BnOtCH^OH

Ne2CO_2l DMSO

130 C, 18 h

Procedimento Geral 12 ^Bn0

10% Pd/C

Pb (50 psi)

AcOH.t.a., 3 h

4-(2-Benziloxi etóxi)-2-bromobenzaldeído

ΒηΟχθχΟ Br

CHO

A mistura de 2-bromo-4-flúor-benzaldeído (32.0 g, 157 mmol), Na₂CO₃ (85.5 g, 788 mmol) e 2-benziloxi etanol (24.0 g, 158 mmol) em DMSO anidro (300 mL) foi aquecido sob N₂ a 130 °C (temp. banho) por 18 h. A mistura da reação foi resfriada a rt, diluída com H₂O (100 mL) e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com H₂O depois salmoura, seca (MgSO₄), e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (hexano to 10% EtOAc em hexano) para resultar no composto de título como um líquido viscoso: rendimento 11.8 g (22%).

^!H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.22 (s, 1H), 7.88 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.45-7.29 (m, 5H), 7.17 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 6.96 (dd, J = 8.8,

2.2 Hz, 1H), 4.63 (s, 2H), 4.32-4.14 (m, 2H), 3.92-3.78 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 334 (M+l, positivo).

4-(2-Benziloxi-etoxi)-2-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2] dioxaborolan-2-il)-benzaldeído

CHO

216

Procedimento geral 5: 4-(2-benziloxi etoxi)-2bromobenzaldeído (1.37 g, 4.10 mmol) B₂pin₂ (1.56 g, 6.15 mmol), KOAc (1.20 g, 12.3 mmol), PdCl₂(dppf)«CH₂Cl₂ (240 mg, 8 mol%) e 1,4-dioxano anidro (13 mL). Purificação: cromatografia instantânea (hexano para 20% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como um sólido branco: rendimento 900 mg (70%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.37 (s, 1H), 7.93 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.47-7.28 (m, 6H), 7.05 (dd, J= 8.6, 2.3 Hz, 1H), 4.64 (s, 2H), 4.25 (t, J= 4.7 Hz, 2H), 3.85 (t, J= 4.7 Hz, 2H), 1.39 (s, 12H); MS (ESI): m/z = 383 (M+l, positivo).

6-(2-Benziloxi-etoxi) 3-nitrometil-3H-Benzo [c] [1,2Joxaboroll-ol no₂

-(2-benziloxi-etoxi)-2-(4,4,5,5 tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (900 mg, 2.35 mmol), MeNO₂ (172 mg, 2.82 mmol), NaOH (113 mg, 2.82 mmol) e H₂O (3 mL). Purificação: cromatografia instantânea (10% EtOAc/hexano para 40% EtOAc). O composto de título foi isolado como um líquido marrom: rendimento 300 mg (38%).

*H RMN (400 MHz, DMSO-d_ó) δ (ppm): 9.45 (bs, 1H), 7.43 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.38-7.18 (m, 6H), 7.10 (dd, J= 8.6, 2.3 Hz, 1H), 5.70 (dd, J= 9.2, 2.5 Hz, 1H), 5.29 (dd, J= 13.5, 2.5 Hz, 1H), 4.61-4.38 (m, 3H), 4.23-4.06 (m, 2H), 3.88-3.68 (m, 3H) MS (ESI): m/z = 342 (M-l, negativo).

3-Aminometil-6-(2-benziloxi-etoxi)-3HBenzo/c] [1,2] oxaborol-l-ol

217

Procedimento geral 12: 6-(2-benziloxi-etoxi)3-nitromctil-3//benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (500 mg, 16.0 mmol), Raney Ni (1.1 g, 2 equiv p/p) e 2 M NH₃ EtOH (12 mL): rendimento 438 mg (96%).

^lH RMN (400 MHz, DMSO-^₆) δ (ppm): 8.28 (bs, 3H), 7.44-

7.33 (m, 2H), 7.33-7.17 (m, 5H), 7.07 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 5.27 (d, 7.4 Hz,

1H), 4.51 (s, 2H), 4.18-4.02 (m, 2H), 3.81-3.63 (m, 2H), 2.64-2.60 (m, 1H); MS (ESI): m/z = 314 (M+l, positivo).

Sal	acetado de	3-Aminometil-6- (2-hidroxi-etoxi)-3H-
benzo[c][1,2]bxaborol-l-ol (A30)
	hojvo ^v2 11	OH / o AcOH
		'=NH₂
A	mistura de	3-aminometil-6-(2-benziloxi-etoxi)-3Z/-

benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (334 mg, 1.06 mmol), 10% Pd/C (330 mg, 1 equiv p/p) e AcOH (15 mL) foi sacudida sob uma atmosfera de H₂ (50 psi) a rt por 3 h. A mistura foi filtrada através de uma almofada de Celite e lavada com EtOH. O filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo foi triturado com Et₂O. O sólido foi purificado por HPLC preparativa (AcOH) para resultar no A30 como um sólido branco: rendimento 50 mg (17%).

'H RMN (400 MHz, DMSO-40 δ (ppm): 7.30 (bs, 1H), 7.22 (bs, 1H), 7.02 (bs, 1H), 4.98 (bs, 1H), 3.98 (bs, 2H), 3.71 (bs, 2H), 2.98-2.96 (m, 1H), 2.65-2.63 (m, 1H), 1.87 (s, 3H); MS (ESI): m/z = 224 (M+l, positivo); HPLC pureza: 98.29% (MaxPlot 200-400 nm), 96.81% (220 nm).

Sal acetato de 3-Aminometil-6-(2-hidroxi-propoxi)-3HBenzo[c] [l,2]oxaborol-l-ol (A31)

218

Procedimento

Geral 5

BnOfCHjJjOH

NajCOa, DMSO ^Fv^v^{Br 130} °^c,18h —+x;ho

CHO

Procedimento

Geral 12

Procedimento

Geral 8

4-(2-Benziloxi propoxi-2-bromobenzaldeído

BnO^O

Br

CHO

A mistura de 2-bromo-4-flúor-benzaldeído (30.0 g, 148 mmol), Na2CO3 (78.31 g, 738.8 mmol) e 2-benziloxi propanol (24.56 g,

147.8 mmol) em DMSO anidro (300 mL) foi aquecida com agitação a 130 °C (temp. banho) por 72 h sob N₂. A mistura da reação foi resfriada a rt e diluída com H₂O e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com H₂O depois salmoura, seca (MgSO₄) e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (hexano to 30% EtOAc em hexano) para resultar no composto de título: rendimento 3.84 g (7%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.22 (s, 1H), 7.88 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.42-7.20 (m, 5H), 7.12 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 6.92 (dd, J= 8.8,

2.2 Hz, 1H), 4.52 (s, 2H), 4.16 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.65 (t, J= 6.1 Hz, 2H),

2.10 (q, J= 6.2 Hz, 2H).

4-(2-Benziloxi-propoxi)-2~(4,4,5,5-tetrametil15 [1,3,2[dioxaborolan-2-il)-benzaldeído

Procedimento geral 5: 4-(2-benziloxi propoxi-2bromobenzaldeído (4.84 g, 13.9 mmol), B₂pin₂ (5.27 g, 20.8 mmol), KOAc (4.08 g, 41.6 mmol), PdCl₂(dppf)*CH₂Cl₂ (811 mg, 8 mol%) e 1,4-dioxano (50 mL). Purificação: Biotage (gradiente de 2% EtOAc/hexano a 20%

219

EtOAc/hexano): rendimento 4.0 g (70%).

*H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.36 (s, 1H), 7.93 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.43-7.14 (m, 6H), 7.01 (dd, J= 8.6, 2.7 Hz, 1H), 4.53 (s, 2H), 4.18 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.66 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.11 (q, 7- 6.1 Hz, 2H),

1.40 (s, 12H).

6-(2-Benziloxi-propoxi)-3-nitrometil-3H-benzo[c] [1,2] oxaborol-l-ol

Procedimento geral

4-(2-benziloxi-propoxi)-2-(4,4,5,5tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (3.0 g, 7.6 mmol), MeNO₂(924 mg, 15.1 mmol), NaOH (605 mg, 15.1 mmol) e H₂O (10 mL). Purificação: cromatografia instantânea (10% EtOAc/hexano a 40% EtOAc): rendimento 820 mg (30%).

*H RMN (400 MHz, DMSC)-7_Ó) δ (ppm): 9.46 (bs, 1H), 7.45 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.41-7.18 (m, 6H), 7.09 (dd, J= 8.6, 2.3 Hz, 1H), 5.71 (dd, J= 9.2, 2.5 Hz, 1H), 5.31 (dd, J= 13.3, 2.7 Hz, 1H), 4.58-4.40 (m, 3H), 4.08 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.60 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 2.08-1.94 (m, 2H).

Sal acetato de 3-Aminometil-6-(2-hidroxi-propoxi)-3Hbenzo[c] [l,2]oxaborol-l-ol(A31)

OH

HO

nh₂

Procedimento geral 13: 6-(2-benziloxi-propoxi)-3-nitrometil377-benzo[c][ 1,2]oxaborol-l-ol (820 mg, 2.29 mmol), 20% Pd(OH)₂ (850 mg, 1 equiv p/p), e AcOH (40 mL). Purificação: HPLC preparativa: rendimento 120 mg (22%).

Ί1 RMN (400 MHz, DMSO-7_Ó) δ (ppm): 7.32 (d, J= 8.2 Hz,

1H), 7.22 (s, 1H), 7.02 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 4.98 (bs, 1H), 4.04 (t, J= 6.2 Hz,

220

2Η), 3.56 (t, 6.2 Hz, 2H), 3.03-2.85 (m, 1H), 2.61 (dd, J= 12.9, 7.0 Hz,

1H), 1.89 (s, 3H), 1.97-1.67 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 238 (M+l, positivo); HPLC pureza: 97.44% (MaxPlot 200-400 nm), 97.77% (220 nm).

Cloridrato__________de__________6-Amino-3-aminometil-3Hbenzo[c] [1,2] oxaborol-l-ol (A32)

10% Pd/C, H₂ (50 psi)

EtOAc, t.a., 2 h

BocHN

Procedimento Geral 12

HCl

6-Nitro-3-mtrometil-3H-benzo[c] [1,2]oxaborol-1 -ol

-Nitrometil-3/f-benzo[c][ 1,2] oxaborol- l-ol (20.0 g, 104 mmol) foi adicionado em pequenas porções com agitação por 2 h ao HNO₃fumegante (200 mL) a -45 °C (temp. banho). A mistura fria da reação foi então derramada sobre gelo triturado e aquecida a rt. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. A fase de EtOAc foi concentrada a vácuo e o resíduo foi derramado sobre gelo triturado. O precipitado foi filtrado e lavado com H₂O. O sólido foi dissolvido em EtOAc, seco (Na₂SO4) e concentrado a vácuo para render o composto de título: rendimento (14.3 g, 58%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-t/₆): δ 9.87 (bs, 1H), 8.57 (s, 1H),

8.40 (dd, J= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.85 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.92 (dd, J= 8.0, 2.8 Hz, 1H), 5.42 (dd, J= 13.6, 2.8 Hz, 1H), 4.82 (dd, 13.6, 8.0 Hz, 1H); MS (ESI) m/z = 237 (M-l, negativo).

(1 -Hidroxi-3-nitrometil-l, 3-dihidro-benzo[c] [1,2] oxaborol-6il)-carbâmico éster tert-butílico do ácido

221

BocHN

^ΝΟ₂

A mistura de 6-nitro-3-nitrometil-37/-benzo[c][1,2]oxaborol-Ιοί (2.38 g, 10 mmol), 10% Pd/C (250 mg), e (Boc)₂0 (10.9 g, 50 mmol) em EtOAc (50 mL) foi sacudida sob uma atmosfera de H₂ (50 psi) a rt por 1 h. A mistura da reação foi filtrada através de Celite e o filtrado foi concentrado a vácuo. O produto cru foi purificado por cromatografia instantânea Biotage (gradiente de MeOH em aumento em CH₂C1₂): rendimento 2.0 g (65%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-ó/_ó): δ 9.47 (s, 1H), 9.43 (s, 1H),

7.88 (s, 1H), 7.49 (dd, J= 8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.69 (dd, J= 8.8, 2.8 Hz, 1H), 5.26 (dd, J= 14.0, 3.2 Hz, 1H), 4.49 (dd, J= 13.6, 9.2 Hz, 1H), 1.44 (s, 9H); MS (ESI) m/z = 307 (M-1, negativo).

Cloridrato de 6-Amino-3-aminometil-3H-benzo[c] [1,2] oxaborol-l-ol (Α32)

OH

HCI ^NH₂

Procedimento geral 12: éster tert-butílico do ácido (1-hidroxi3-nitrometil-l,3-dihidro-benzo[e][l,2]oxaborol-6-il)-carbâmico (1.25 g, 4.06 mmol), pasta Raney Ni em H₂O (1 colher de chá), 2 M NH₃ em EtOH (14.21 mL, 28.42 mmol), e EtOH (20 mL). O resíduo foi dissolvido na mistura de dioxano (30 mL) e MeOH (poucas gotas) e 4 N HCI em dioxano (10 mL, 40 mmol) foi adicionado e agitado por 16 h a rt. O precipitado foi filtrado e lavado com CH₂C1₂, seco para render 900 mg do composto cru. O cru foi dissolvido em H₂O quente e MeCN foi adicionado. Durante a adição a solução foi separada em duas camadas. MeOH foi adicionado à solução para fazer uma solução clara e o excesso de CH₃CN foi adicionado. Permitiu-se que o precipitado se estabilizasse e o líquido foi decantado e MeCN puro foi adicionado e o mesmo procedimento foi repetido para resultar no A32 como

222 um sólido amarelo pálido: rendimento 400 mg (39%).

p.f. 190-200 °C (dec.); ^!H RMN (400 MHz, DMSO>_Ó) δ .(ppm) 8.29 (bs, 3H), 7.79 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.62 (d, 8.4 Hz, 1H), 7.49 (dd, ./ = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 5.40 (dd, J= 8.8, 2.8 Hz, 1H), 3.51-3.49 (m, 1H), 5 2.84-2.77 (m, 1H); MS (ESI) m/z = 163 (M+l, positivo); HPLC 93.40% (MaxPlot 200-400 nm), 96% (220 nm).

Cloridrato de N-(3-Amiriometil-l-hidroxi-l,3-díhidrobenzo[cl [1,2loxaborol-6-il)-benzenosulfonamida (A33)

6-Nitro-3-nitrometil-3H-benzo[c][1,2] oxaborol-1 -ol

3-Nitrometil-3H-benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (20.0 g, 104 mmol) foi adicionado em pequenas porções com agitação por 2 h ao HNO₃fumegante (200 mL) a -45 °C (temp. banho). A mistura fria da reação foi então derramada sobre gelo triturado e aquecida a rt. A fase aquosa foi extraída com EtOAc. A fase de EtOAc foi concentrada a vácuo e o resíduo foi derramado sobre gelo triturado. O precipitado foi filtrado e lavado com H₂O.

O sólido foi dissolvido em EtOAc, seco (Na₂SO₄) e concentrado a vácuo para

223 render o composto de título: rendimento (14.3 g, 58%).

’H RMN (400 MHz, DMSO-A): δ 9.87 (bs, 1H), 8.57 (s, 1H),

8.40 (dd, J= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.92 (dd, J= 8.0, 2.8 Hz, 1H), 5.42 (dd, J= 13.6, 2.8 Hz, 1H), 4.82 (dd, J= 13.6, 8.0 Hz, 1H); MS (ESI) m/z = 237 (M-l, negativo).

Ester tert-butílico do ácido (l-Hidroxi-3-nitrometil-l,3dihidro-benzo[c] [1,2]oxaborol-6-il)-carbâmico p^HBocHNx/^^b η ίΓ ^x[I J/° no₂

A mistura de 6-nitro-3-nitromctil-3/7-benzo[c][1,2]oxaborol-Ιοί (2.38 g, 10 mmol), 10% Pd/C (250 mg), e (Boc)₂O (10.9 g, 50 mmol) em EtOAc (50 mL) foi sacudida sob uma atmosfera de H₂ (50 psi) a rt por 1 h. A mistura da reação foi filtrada através de Celite e o filtrado foi concentrado a vácuo. O produto cru foi purificado pela Biotage cromatografia instantânea (gradiente de MeOH em aumento em CH₂C1₂): rendimento 2.0 g (65%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-úQ: δ 9.47 (s, 1H), 9.43 (s, 1H),

7.88 (s, 1H), 7.49 (dd, J= 8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.69 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 5.26 (dd, J= 14.0, 3.2 Hz, 1H), 4.49 (dd, J = 13.6, 9.2 Hz, 1H), 1.44 (s, 9H); MS (ESI) m/z = 307 (M-l, negativo).

6-Amino-3-nitrometil-3H-benzo[c] [1,2] oxaborol-l-ol

Procedimento geral 11: éster tert-butílico do ácido (1-hidroxi3-nitrometil-l,3-dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-6-il)-carbâmico (2.0 g, 6.5 mmol) e 4 N HC1 em dioxano (16 mL). A mistura da reação foi concentrada a vácuo e o resíduo foi neutralizado (pH 7) com NaHCO₃ sat.. A mistura da reação foi extraída com EtOAc, e a fase orgânica combinada foi seca

224 (Na₂SO₄) e concentrada para produzir o composto de título: rendimento 1.06 g (78%).

*H RMN (400 MHz, DMSO-7Q: δ 9.25 (s, 1H), 7.13 (d, 7 = 8.0 Hz, 1H), 6.85 (d,J= 1.6 Hz, 1H), 6.68 (dd, J= 8.0, 1.6 Hz, 1H), 5.58 (dd, J= 9.2, 2.4 Hz, 1H), 5.21-5.16 (m, 3H), 4.36 (dd, J= 13.2, 9.6 Hz, 1H); MS (ESI) m/z = 309 (M+l, positivo).

N-(l -Hidroxi-3-nitrometil-l, 3-dihidro-benzo[c][1,2foxaborol6- il)-benzenos ulfonam ida

Procedimento geral 1: 6-amino-3-nitrometil-3+/benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (1.06 g, 5.1 mmol), cloreto de fenilsulfonila (0.64 mL, 5.1 mmol), piridina (1.23 mL, 15.3 mmol), e MeCN (50 mL): rendimento

1.6 g (90%).

'H RMN (400 MHz, DMSO-7₆): δ 10.40 (s, 1H), 9.52 (s, 1H),

7.75 (d, 7 = 8.0 Hz, 2H), 7.61-7.50 (m, 3H), 7.47 (d, 7 = 2.0 Hz, 1H), 7.37 (d, 7= 8.0 Hz, 1H), 7.19 (dd, 7= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 5.66 (dd, 7= 8.8, 2.8 Hz, 1H),

5.23 (dd, 7= 13.2, 2.8 Hz, 1H), 4.48 (dd, 7= 13.2, 8.8 Hz, 1H); MS (ESI) m/z = 347 (M-l, negativo).

Cloridrato de N-(3-Aminometil-l-hidroxi-l,3-dihidrobenzo[c][ 1,2]oxaborol-6-il)-benzenosulfonamida (A33)

Procedimento geral 12: 7V-(l-hidroxi-3-nitrometil-l,3-dihidrobenzo[c][l,2]oxaborol-6-il)-benzenosulfonamida (1.6 g, 4.6 mmol) pasta fraca Raney Ni em H₂O (1.5 colher de chá), 2 M NH₃/EtOH (16.1 mL, 32.2 mmol), e EtOH (50 mL). Purificação: o resíduo foi dissolvido na mistura de dioxano (30 mL) e MeOH (poucas gotas), e 4 N HCI em dioxano (5.6 mL,

225

22.4 mmol) foi adicionado e agitado por 16 h a rt. A mistura foi concentrada e o resíduo dissolvido em MeOH. A solução foi adicionada gota a gota a Et₂O e o precipitado isolado por decantação. O sólido foi então parcialmente dissolvido em H₂O e a mistura foi filtrada. O filtrado foi liofilizado para 5 produzir A33 como um sólido amarelo pálido: rendimento 150 mg (9%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-ώ,) δ 10.48 (s, 1H), 9.58 (s, 1H),

8.17 (bs, 3H), 7.79 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.63-7.53 (m, 4H), 7.38 (d, J= 8.0 Hz,

1H), 7.21 (dd, J= 8.0, 2.0 Hz, 1H), 5.25 (dd, J = 8.8, 1.6 Hz, 1H), 3.42-3.35 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 1H); MS (ESI) m/z 319 (M+l); HPLC pureza: 90% 10 (220 nm).

Cloridrato de ácido piridina-2-sulfônico (3-aminometil-lhidroxi-l,3-dihidro-benzo[c] [1,2] oxaborol-6-il)-amida (A34)

Acido piridina-2-sulfônico (1 -hidroxi-3-nitrometil-1,3-dihidrobenzo[c][1,2]oxaborol-6-il)-amida

Procedimento geral 1: A solução de cloridrato de cloreto de 2piridinasulfonila (905 mg, 4.23 mmol) e piridina (0.34 mL, 4.23 mmol) em MeCN (3 mL) foi adicionado a 6-amino-3-nitrometil-3//benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (0.88 g, 4.23 mmol), piridina (1.03 mL, 12.7 mmol), e MeCN (50 mL): rendimento 380 mg (26%).

226 ’Η RMN (400 MHz, DMSO-<4): □ 10.67 (s, 1H), 9.53 (s, 1H), 8.71 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.05 (td, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66-7.63 (m, 1H), 7.51 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 (dd, J= 8.0, 2.0 Hz, 1H), 5.68 (dd, J= 9.2, 2.4 Hz, 1H), 5.25 (dd, J = 13.6, 2.8 Hz, 1H), 4.51 (dd, J= 13.6, 9.6 Hz, 1H); MS (ESI) m/z = 350 (M-l, negativo).

Cloridrato do ácido piridina-2-sulfônico (3-aminometil-lhidroxi-1,3-dihidro-benzo[c] [1,2]oxaborol-6-il)-amida (A34)

Procedimento geral 12: ácido piridina-2-sulfônico (1-hidroxi3-nitrometil-l,3-dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-6-il)-amida (349 mg, 1.0 mmol), Mistura fraca Raney Ni em H₂O (0.5 colher de chá), 2 M NH₃ em EtOH (3.5 mL, 7.0 mmol), e EtOH (10 mL). Purificação: o resíduo foi dissolvido na mistura de dioxano (30 mL) e MeOH (poucas gotas) e 4 N HC1 em dioxano (5.6 mL, 22.4 mmol) foi adicionado e agitado por 16 h a rt. A mistura foi concentrada e o resíduo cru dissolvido em MeOH. Esta solução foi adicionada gota a gota a Et₂O e o precipitado resultante foi isolado por decantação. O sólido foi parcialmente dissolvido em H₂O e a mistura filtrada. O filtrado foi liofilizado para produzir A34 como um sólido amarelo pálido: rendimento 100 mg (31%).

^!H RMN (400 MHz, DMSO-^MD 10.68 (s, 1H), 9.58 (bs, 1H), 8.71 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 8.10-8.04 (m, 4H), 7.98 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.67-7.63 (m, 1H), 7.59 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 5.24 (dd, J = 9.2, 2.4 Hz, 1H), 3.50-3.25 (m, 1H), 2.78-2.68 (m, 1H); MS (ESI) m/z = 320 (M+l, positivo); HPLC pureza: 88.76% (220 nm).

Cloridrato de N-[3-(3-Aminometil-l-hidroxi-l,3-dihidroProcedimento

227 benzo[c](l,2loxaborol-7-iloxi)-propil]-acetamida (A35)

BocHN

MsCI,Et₃N

CH₂CI₂,t.a.,2 h

Procedimento

Geral 5

NHBoi

CHO

Procedimento uerai y

BocHN .OMs ^3

NHBoc

Ac₂O_tEt₃N,

CH₂CI_2lt.a.,1 h

Procedimento

Geral 10

3-tert-butoxicarbonilamino-propila

Acido metanosulfônico ester

BocHN

OMs

MsCl (6.5 mL, 84 mmol) foi adicionado devagar a uma solução de Et₃N (16.0 mL, 114 mmol) e éster tert-butílico do ácido (3hidroxi-propil)-carbâmico (13.4 g, 76.5 mmol) em CH₂C1₂ (200 mL) a 0 °C (temp. banho). A mistura da reação foi agitado a rt por 2 h e depois resfriada rapidamente com H₂O (100 mL). A camada aquosa foi extraída com CH₂C1₂ e as frações orgânicas foram então secas (MgSO₄) e concentradas a vácuo. O composto de título foi isolado como um óleo incolor: rendimento 18.9 g (98%).

^!H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 4.73 (bs, 1H), 4.30 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.31-3.24 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 1.94 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H).

Ester tert-butílico do ácido [3-(2-Bromo-3-formil-fenoxi)~ propil]-carbâmico

228

NHBoc

Procedimento geral 4: 2-bromo-3-hidroxi-benzaldeído (15.0 g,

74.6 mmol), ácido metanosulfônico 3-tert-butoxicarbonilamino-propila ester (18.9 g, 74.6 mmol), Cs₂CO₃ (36.5 g, 112 mmol), e DMF (300 mL). O composto de título foi isolado como um líquido viscoso: rendimento 22.0 g (82%).

H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.43 (s, 1H), 7.53 (dd,

J = 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.37 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.12 (dd, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H),

5.16 (bs, 1H), 4.15 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.42 (q, J= 6.1 Hz, 2H), 2.13-2.05 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).

Éster benzílico do ácido [3-[3-Formil-2-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2] dioxaborolan-2-il)-fenoxi] -propil}-carbâmico

NHBoc

CHO

Procedimento geral 5: éster tert-butílico do ácido [3-(2-bromo3-formil-fenoxi)-propil]-carbâmico (22.0 g, 61.4 mmol), B₂pin₂(31.2 g, 123 mmol), KOAc (24.1 g, 246 mmol), PdCl₂(dppf)*CH₂Cl₂ (6.73 g, 9.21 mmol), e dioxano (300 mL). Purificação: cromatografia instantânea (20% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como uma espuma branca: rendimento 11.0 g (44%).

H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 9.95 (s, 1H), 7.48 (t, J =

7.8 Hz, 1H), 7.43-7.39 (m, 1H), 7.09 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.76 (bs, 1H), 4.05 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 3.32 (q, J= 6.0 Hz, 2H), 2.03-1.95 (m, 2H), 1.45 (s, 12H), 1.43 (s, 9H).

Éster tert-butílico do ácido [3-(l-Hidroxi-3-nitrometil-l,3dihidro-benzo[c] [1,2foxaborol- 7-iloxi)-propil]-carbâmico

229

NHBoc oA O 3 nu

NO₂

Procedimento geral 9: éster benzílico do ácido {3-[3-formil-2(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenoxi]-propil}-carbâmico (11.0 g, 27.1 mmol), MeNO₂ (2.9 mL, 54 mmol), CTAB (494 mg, 1.35 mmol), 25 mM NaOH (100 mL), e THF (5 mL). A mistura foi acidifícada usando 1 M NaHSChHCl (100 mL): rendimento 6.0 g (60%).

'fl RMN (400 MHz, DMSO-úk) δ (ppm): 9.05 (s, 1H), 7.46 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.07 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.94-6.85 (m, 2H), 5.71 (dd, J= 9.0, 2.7 Hz, 1H), 5.31 (dd, J= 13.3, 2.7 Hz, 1H), 4.55 (dd, J= 13.3, 9.4 Hz, 1H), 4.05 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 3.09 (q, J= 6.6 Hz, 2H), 1.83 (quin, J= 6.6 Hz, 2H),

1.37 (s, 9H).

Cloridrato	de 7-(3-Amino-propoxi)-3-nitrometil-3H-
benzo [c][l,2] oxaborol-l-ol	nh₂ Λ 1 ³ P^HrA^B, HCI no₂

Procedimento geral 11: éster tert-butílico do ácido [3-(lhidroxi-3-nitrometil-1,3-dihidro-benzo[c] [ 1,2]oxaborol-7-iloxi)-propil]carbâmico (3.0 g, 8.2 mmol) e 4 M HC1 em dioxano (20 mL). Purificação: trituração com Et₂O. O composto de título foi isolado como um sólido branco

2.32 g (93%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-J₆) δ (ppm): 9.24 (bs, 1H), 7.91 (bs, 3H), 7.47 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.10 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.72 (dd, J= 9.2, 2.5 Hz, 1H), 5.31 (dd, J= 13.5, 2.9 Hz, 1H), 4.54 (dd, J= 13.5, 9.2 Hz, 1H), 4.13 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.06-2.94 (m, 2H), 2.02 (quin, J= 5.9 Hz, 2H).

230

Ν-[3-(1 -Hidroxi-3-nitrometil-l, 3-dihidrobenzo[c][1,2] oxaborol- 7-iloxi)-propil]-acetamida

NHAc no₂

Ac₂O (1.16 mL, 12.3 mmol) foi adicionado devagar a uma solução de Et₃N (2.33 mL, 16.5 mmol) e cloridrato de 7-(3-amino-propoxi)-3nitrometil-3//-benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (1.69 g, 76.5 mmol) em CH₂C1₂ (50 mL) a 0°C (temp. banho). A mistura da reação foi agitada a rt por lhe depois resfriada rapidamente com H₂O (50 mL). A mistura foi extraída com CH₂C1₂e a fração orgânica foi seca (MgSO₄) e concentrada a vácuo para resultar no composto de título como um líquido viscoso: rendimento 1.29 g (75%).

'Η RMN (400 MHz, DMSO-4) δ (ppm): 9.13 (s, 1H), 7.89-

7.78 (m, 1H), 7.45 (t, 7- 7.8 Hz, 1H), 7.06 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J =

8.2 Hz, 1H), 5.70 (dd, J= 9.6, 2.5 Hz, 1H), 5.29 (dd, J= 13.3, 2.7 Hz, 1H), 4.54 (dd, J= 13.7, 9.4 Hz, 1H), 4.04 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.23-3.15 (m, 2H), 2.20 (s, 3H), 1.82 (t, J= 6.5 Hz, 2H); MS (ESI): m/z = 307 (M-l, negativo).

Ester tert-butílico do ácido 7-(3-acetilamino-propoxi)-lhidroxi-1,3-dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-3-ilmetil]-carbâmico

NHAc

NHBoc

Procedimento geral 10: 7V-[3-(l-hidroxi-3-nitrometil-l,3dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-7-iloxi)-propil]-acetamida (1.29 g, 4.18 mmol), NiCl₂*6H₂O (995 mg, 4.18 mmol), NaBH₄ (953 mg, 25.2 mmol), Boc₂O (1.82 g, 8.36 mmol), e MeOH (100 mL). Purificação: cromatografia instantânea (5% MeOH in CH₂C1₂). O composto de título foi isolado como

231 uma espuma branca: rendimento 600 mg (38%).

*H RMN (400 MHz, DMSO-<4) δ (ppm): 8.81 (s, 1H), 7.86 (t, J= 5.5 Hz, 1H), 7.40 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.01-6.90 (m, 2H), 6.84 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.11-5.04 (m, 1H), 4.05 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 3.22 (q, J= 6A Hz, 2H), 3.10-2.96 (m, 1H), 1.88-1.81 (m, 2H), 1.80 (s, 3H), 1.37 (s, 9H); MS (ESI): m/z — 377 (M-1, negativo).

Cloridrato de N-[3-(3-aminometil-l-hidroxi-l,3-dihidrobenzo[c] [l,2]oxaborol-7-iloxi)-propil]-acetamida (A35)

NHAc

B HCI

Procedimento geral 11: éster tert-butílico do ácido [7-(3acetilamino-propoxi)-1 -hidroxi-1,3-dihidro-benzo[c][ 1,2]oxaborol-3-ilmetil]carbâmico (600 mg, 1.58 mmol), 1 M HCI em Et₂O (3 mL), e CH₂C1₂ (5 mL). Purificação: trituração com Et₂O seguida pela HPLC preparativa. A35 foi isolado como um sólido branco: rendimento 35 mg (7%).

^!H RMN (400 MHz, DMSO-c/_ó + 1 drop conc. HCI) δ (ppm):

8.32 (bs, 3H), 7.42 (t, 7.8 Hz, 1H), 7.01 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.85 (d, J =

8.2 Hz, 1H), 5.28 (dd, J= 9.0, 2.3 Hz, 1H), 4.01 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 3.45-3.32 (m, 1H), 3.18 (t, J= 5.8 Hz, 2H), 2.78-2.63 (m, 1H), 1.84-1.76 (m, 5H); MS (ESI): m/z = 279 (M+l, positivo); HPLC pureza: 99.03% (MaxPlot 200-400 nm), 97.82% (220 nm).

Sal triflúoracetato de 3-Aminometil-7-(3-amino-propoxi)-3Hbenzo/c]ri,21oxaborol-l-ol (A36)

NHBoc

Procedimento Geral 12 ? ³ OH

Ester tert-butílico do ácido [3-(3-aminometil-l-hidroxi-l,3232 dihidro-benzo[c] [1,2[oxaborol- 7-iloxi) -propil]-carbâmico

Procedimento geral 12: éster tert-butílico do ácido [3-(lhidroxi-3-nitrometil-l ,3-dihidro-benzo[c] [ 1,2]oxaborol-7-iloxi)-propil]carbâmico (1.0 g, 2.7 mmol), Raney Ni (2.0 g, 2 equiv p/p), 2 M NH₃ em

EtOH (5 mL), e EtOH absoluto (20 mL): rendimento 800 mg (88%).

MS (ESI): m/z = 337 (M+l, positivo).

3-Aminometil- 7-(3-amino-propoxi)-3H-benzo[c][1,2] oxaborol-l-ol; sal TFA (A36)

TFA nh₂

Procedimento geral 11: éster tert-butílico do ácido [3-(3aminometil-1 -hidroxi-1,3-dihidro-benzo[c] [ 1,2]oxaborol-7-iloxi)-propil]carbâmico (700 mg, 2.08 mmol) e 4N HCl em 1,4-dioxano (10 mL) foi agitado a rt por 18 h. Purificação: HPLC preparativa (TFA): rendimento 159 mg (14%).

p.f. 136-138 °C; Ti RMN (400 MHz, DMSO-^) δ (ppm):

9.11 (bs, 1H), 8.13 (bs, 3H), 7.90 (bs, 3H), 7.50 (t, 7.8 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.28 (d, J= 7.0 Hz, 1H), 4.26-4.04 (m, 2H), 3.04 (d, J= 5.1 Hz, 2H), 2.82 (bs, 1H), 2.17-1.94 (m, 2H); ¹⁹F RMN (376 MHz, DMSO-J₆) δ (ppm): -74.08 (s); MS (ESI): m/z = 237 (M+l, positivo); HPLC pureza: 98.44% (MaxPlot 200-400 nm), 94.39% (220 nm).

Cloridrato de 3-aminometil-7-(3-metoxi-propoxi)-3Hbenzo[c] [1,2] oxaborol-l-ol (A38)

233

OMe

Procedimento geral 4: 2-bromo-3-hidroxi-benzaldeído (10.0 g,

49.7 mmol), Cs₂CO₃ (32.41 g, 99.42 mmol), l-bromo-3-metoxi propano (7.61 g, 49.7 mmol), e DMF anidro (100 mL). Condições da reação: 60 °C (temp.

banho) por 20 h. O composto de título foi isolado como um líquido incolor: rendimento 10.5 g(77%).

^!H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.54 (s, 1H), 7.51 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 7.35 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.17 (t, J =

6.1 Hz, 2H), 3.64 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 3.37 (s, 3H), 2.13 (qd, J= 6.1, 5.9 Hz, 10 2H).

3-(3-Metoxi-propoxi)-2-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2] dioxaborolan-2-il)-benzaldeído

Procedimento geral 5: 2-bromo-3-(3-metoxi-propoxi)benzaldeído (13.44 g, 49.22 mmol), B₂pin₂ (18.74 g, 73.83 mmol), KOAc 15 (14.49 g, 147.66 mmol), PdCl₂(dppf)*CH₂Cl₂ (2.88 g, 8 mol%), e 1,4-dioxano anidro (130 mL). Purificação: cromatografia instantânea (hexano a 20%

234

EtOAc). O composto de título foi isolado como um sólido branco: rendimento

7.04 g (50%).

Ίΐ RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 9.94 (s, 1H), 7.59-7.45 (m, 1H), 7.45-7.32 (m, 1H), 7.09 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.08 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.56 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.34 (s, 3H), 2.06 (qd, J= 6.2 Hz, 2H), 1.45 (s, 12H).

7-(3-metoxi-propoxi)-3-nitrometil-3EI-Benzo[c] [l,2]oxaboroll-ol ^j)Me

O o nu no₂

Procedimento geral 8: 3-(3-metoxi-propoxi)-2-(4,4,5,5tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (7.04 g, 22.0 mmol), MeNO₂(4.03 g, 66.0 mmol), NaOH (880 mg, 22.1 mmol), e H₂O (30 mL). Purificação: cromatografia instantânea (hexano para 20% EtOAc/hexano): rendimento 4.8 g (78%).

’H RMN (400 MHz, DMSO-J_d) δ (ppm): 9.03 (s, 1H), 7.44 (t,

7.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J= ΊΑ Hz, 1H), 6.87 (d, 8.2 Hz, 1H), 5.69 (dd, J = 9.2, 2.5 Hz, 1H), 5.28 (dd, J= 13.3, 2.7 Hz, 1H), 4.54 (dd, J= 13.5, 9.2 Hz, 1H), 4.06 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.47 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.22 (s, 3H), 2.04-1.86 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 280 (M-l, negativo).

Ester tert-butílico do ácido [l-Hidroxi-7-(3-metoxi-proxi)-l,3dihidro-benzo[c] [l,2]oxaborol-3-ilmetil]-carbâmico

Procedimento geral 10: 7-(3-metoxi-propoxi)-3-nitrometiI-3//benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (1.30 g, 4.62 mmol), Boc₂O (2.01 g, 9.25 mmol),

235

NiCl₂*6H₂O (1.32 g, 5.55 mmol), NaBIfi (1.04 g, 27.5 mmol) e anidro

MeOH (10 mL). O resíduo cru foi usado diretamente na reação seguinte sem purificação adicional.

Cloridrato de 3-aminometil-7-(3-metoxi~propoxi)-3Hbenzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (A38)

Procedimento geral 11: éster tert-butílico do ácido [1-hidroxi7-(3-metoxi-proxi)-1,3-dihidro-benzo[c] [ 1,2]oxaborol-3-ilmetil]-carbâmico (2.0 g, 5.5 mmol) e 4 N HC1 em 1,4-dioxano (20 mL). Purificação: HPLC preparativa: rendimento 540 mg (37% em 2 etapas).

’H RMN (400 MHz, DMSO-óZ₆) δ (ppm): 8.85 (s, 1H), 8.29 (bs, 3H), 7.44 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.03 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.30 (dd, J= 8.6, 2.3 Hz, 1H), 4.06 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.48 (t, J =

6.2 Hz, 2H), 3.22 (s, 3H), 2.76-2.74 (m, 1H), 1.94 (q, J = 6.2 Hz, 2H); MS (ESI): m/z = 252 (M+l, positivo); HPLC pureza: 98.90% (MaxPlot 200-400 nm), 97.04 (220 nm); Anal. Calcd para Ci₂H₁₉BC1NO₄: C 50.12%; H 6.66%; N 4.87% Encontrado: C 50.30%; H 6.63%; N 5.21%.

Sal acetato de C-(7,8-Dihidro-2H-l,6,9-trioxa-9a-borabenzo[cd]azulen-2-il)-metilamina (A39)

7-(3-Benziloxi-etoxi)-3-nitrometil-3H-benzo[c] [1,2[oxaboroll-ol

236

Procedimento geral 8: 3-(2-benziloxi-etoxi)-2-(4,4,5,5tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (1.15 g, 30 mmol), MeNO₂(0.39 mg, 6 mmol), NaOH (50 mg, 0.15 mmol), THF (5 mL) e H₂O (50 mL). Purificação: cromatografia instantânea (10% EtOAc/hexano para 30% EtOAc/hexano): rendimento 3.7 g (61%).

Ή RMN {400 MHz, DMSO-t/_ó + D₂O (0.01 mL)} δ (ppm): 7.49 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.34-7.25 (m, 5H), 7.08 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.92 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.71 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.58-4.53 (m, 1H), 4.47 (s, 2H), 4.21 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.80 (t, J = 6.0 Hz, 2H); MS (ESI) m/z = 342 (M-l, negativo); MS (ESI): HPLC pureza 97.89% (MaxPlot) e 95.57% (220 nm).

Procedimento geral 13: 7-(3-benziloxi-propoxi)-3-nitrometil3H-benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (0.45 g, 0.013 mol), 20% Pd(OH)₂/C (50% peso-úmido) (50 mg), e AcOH glacial (30 mL). Purificação: HPLC preparativa (0.1% AcOH). A39 foi isolado como um sólido cinza com 0.75 mol% AcOH: rendimento 0.1 g (34%).

p.f. 69-71 °C; 'H RMN {400 MHz, DMSO-ó/₆ + D₂O (0.01 mL)} δ (ppm): 7.43 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.05 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.84 (d, J=

8.2 Hz, 1H), 5.19 (bs, 1H), 4.65 (bs, 1H), 4.40-4.10 (m, 3H), 3.05-2.90 (m, 1H), 2.80-2.60 (m, 1H); MS (ESI) m/z = 206 (M+l, positivo); HPLC pureza:

237

99.26% (MaxPlot) e 98.26% (220 nm).

4-(l-Hidroxi-3-nitrometil-l ,3-dihidro-benzo[c] [1,2 loxaborol-

7-iloxi)-butironitrila (A40)

Procedimento geral 9: 4-[3-formil-2-(4,4,5,5-tetrametil5 [l,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenoxi]-butironitrila (2.0 g, 6.3 mmol), MeNO₂(0.68 mL, 12 mmol), CTAB (116 mg, 0.32 mmol), 0.025 M NaOH (20 mL), e THF (5 mL). Purificação: precipitação: rendimento 560 mg (32%).

*H RMN (400 MHz, DMSO-A) δ (ppm): 9.08 (s, 1H), 7.48 (t, J=7.8Hz, 1H), 7.11 (d, J=1A Hz, 1H), 6.93 (d,J=8.2 Hz, 1H), 5.72 (dd,J 10 = 9.4, 2.7 Hz, 1H), 5.31 (dd, J= 13.2, 2.7 Hz, 1H), 4.65-4.48 (m, 1H), 4.10 (t,

J = 5.5 Hz, 2H), 2.69 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 2.04 (quin, 2H); MS (ESI): m/z = 275 (M-l, negativo); HPLC pureza: 97.72% (MaxPlot 200-400 nm), 96.62% (220 nm).

Cloridrato_____de_____7-(4-amino-butoxi)-3-aminometil-3H15 benzo [c] [1,2] oxaborol-l-ol (A41)

éster tert-butílico do ácido {4-[3-(tert-butoxicarbonilaminometil)-l-hidroxi-l ,3-dihidro-benzo[c] [1,2]oxaborol-7-iloxi]-butil}-carbâmico

Procedimento geral 10: A40 (490 mg, 1.77 mmol),

238

NiCl₂*6H₂O (632 mg, 2.66 mmol), NaBHi (807 mg, 21.3 mmol), Boc₂O (1.54 g, 7.08 mmol), e MeOH (20 mL). Purificação: cromatografia instantânea (30% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como uma espuma branca: rendimento 420 mg (53%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-áfc) δ (ppm): 8.76 (s, 1H), 8.73-

8.66 (m, 1H), 8.82-8.65 (m, 2H), 7.42-7.33 (m, 1H), 7.43-7.32 (m, 1H), 6.92 (dd, J= 17.8, 7.2 Hz, 1H), 6.85-6.76 (m, 1H), 5.21-4.99 (m, 1H), 3.99 (t, J =

6.1 Hz, 2H), 3.01-2.89 (m, 2H), 1.73-1.61 (m, 2H), 1.57-1.46 (m, 2H), 1.39-

1.29 (m, 18H); MS (ESI): m/z = 449 (M-l, negativo).

Cloridrato de 7-(4-amino-butoxi)-3-aminometil-3Hbenzo[c][I,2]oxaborol-l-ol (A41)

Procedimento geral 11: éster tert-butílico do ácido {4-[3-(tertbutoxicarbonilamino-metil)-1 -hidroxi-1,3 -dihidro-benzo [c] [1,2] oxaborol-7 iloxi]-butil}-carbâmico (420 mg, 0.93 mmol) e 1 M HC1 em Et₂O (5 mL). Purificação: HPLC preparativa. A41 foi isolado como um sólido branco: rendimento 260 mg (86%).

p.f. 145-146 °C; Ή RMN (400 MHz, DMSCW₆) δ (ppm): 8.93 (bs, 1H), 8.23 (bs, 3H), 8.01 (bs, 3H), 7.48 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.30 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 4.21-3.95 (m, 2H), 2.95-2.72 (m, 2H), 1.92-1.60 (m, 4H); MS (ESI): m/z = 251 (M+l, positivo); HPLC pureza: 87.79% (MaxPlot 200-400 nm), 85.7% (220 nm).

Sal acetato de 3-aminometil-7-(4-hidroxi-butoxi)-3Hbenzofc][l,2]oxaborol-l-ol (A42)

239

benzo [ο] [1,2]oxaborol-l-ol

AcOH

NH₂

Procedimento geral

9: 3-(4-benziloxi-butoxi)-2-(4,4,5,5tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (2.0 g, 4.8 mmol), MeNO₂(0.51 mL, 9.6 mmol), CTAB (87 mg, 0.24 mmol), 0.025M NaOH (20 mL), e THF (5 mL). Purificação: precipitação para resultar no sólido branco: rendimento 1.2 g (67%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-J_tf) δ (ppm): 9.07 (s, 1H), 7.45 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.38-7.24 (m, 5H), 7.06 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.71 (dd, J= 9.6, 2.5 Hz, 1H), 5.31 (dd, J= 13.3, 2.7 Hz, 1H), 4.55 (dd, J= 13.5, 9.6 Hz, 1H), 4.46 (s, 2H), 4.13-3.97 (m, 2H), 3.56-3.45 (m, 2H), 1.85-1.65 (m, 4H); MS (ESI): m/z = 370 (M-l, negativo).

Sal acetato de 3-aminometil-7-(4-hidroxi-butoxi)-3Hbenzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (A42)

Procedimento geral 13: 7-(4-benziloxi-butoxi)-3-nitrometil327-benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (1.0 g, 2.7 mmol), Pd(OH)₂ (1.0 g), e AcOH (20 mL). Purificação: HPLC preparativa (0.1 % AcOH). A42 foi isolado como um sólido branco: rendimento 250 mg (33%).

240

Ή RMN (400 MHz, DMSO>_Ó + 1 drop of conc HC1) δ (ppm):

8.38 (bs, 2H), 7.47 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.06 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J =

8.2 Hz, 1H), 5.33 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.05 (t, J= 6.2 Hz, 1H), 3.49-3.46 (m, J = 6.4 Hz, 4H), 2.77-2.62 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.78-1.70 (m, 2H), 1.65-1.45 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 252 (M+l, positivo); HPLC pureza: 98.13% (MaxPlot 200-400 nm), 96.65% (220 nm).

Cloridrato éster benzílico do ácido [3-(3-Aminometil-lhidroxi-1,3-dihidrobenzo[cl[1,21oxaborol-7-iloxi)-propill-carbâmico (A43)

CbzHN

MsCI,Et₃N, CH₂CI₂ °C até t.a.,2 h

CbzHN

Procedimento Geral 4

NHCbz

Procedimento Geral 5

Procedimento Geral 9

Procedimento Geral 11

NHBoc

Ácido metanosulfônico 3-benziloxicarbonilamino-propila ester CbzHN^OMs

MsCl (2.03 mL, 26.3 mmol) foi adicionado devagar a uma solução de Et₃N (4.9 mL, 36 mmol) e 4-benziloxi-butan-l-ol (5.0 g, 24 mmol) em CH₂C1₂ (100 mL) a 0°C (temp. banho). A mistura da reação foi agitada a rt por 2h e depois resfriada rapidamente com H₂O (100 mL). A mistura foi extraída com CH₂C1₂ e a camada orgânica foi seca (MgSO₄) e concentrada a vácuo para resultar no composto de título como um líquido incolor: rendimento 6.58 g (96%).

^!H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 7.43-7.24 (m, 5H), 5.36

241 (bs, 1H), 5.09 (s, 2H), 4.29 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.39-3.26 (m, 2H), 3.01 (s,

3H), 2.01-1.89 (m, 2H).

Λ

Ester benzílico do ácido [3-(2-Bromo-3-formil-fenoxi)-propilJcarbâmico

NHCbz

CHO

Procedimento geral 4: 2-bromo-3-hidroxi-benzaldeído (3.81 g, 19 mmol), ácido metanosulfônico 3-benziloxicarbonilamino-propila ester (6.55 g, 22.8 mmol), Cs₂CO₃ (9.28 g, 28.5 mmol) e DMF (100 mL). O composto de título foi isolado como um líquido viscoso: rendimento 6.93 g (93%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.41 (s, 1H), 7.52 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.41-7.30 (m, 6H), 7.12 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.56 (bs, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.20-4.12 (m, 2H), 3.54-3.46 (m, 2H), 2.17-2.07 (m, 2H).

Ester benzílico do ácido {3-[3-Formil-2-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il) -fenoxi] -propil/-carbâmico

Procedimento geral 5: éster benzílico do ácido [3-(2-bromo-3formil-fenoxi)-propil]-carbâmico (6.9 g, 18 mmol), B₂pin₂ (8.93 g, 35.2 mmol), KOAc (6.90 g, 70.4 mmol), PdCl₂(dppf)*CH₂Cl₂ (0.64 g, 0.87 mmol), e dioxano (200 mL). Purificação: cromatografia instantânea (20% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como uma espuma branca: rendimento 1.98 g (26%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 9.94 (s, 1H), 7.52-7.31 (m, 7H), 7.07 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.13-5.04 (m, 3H), 4.06 (t, 7= 5.7 Hz, 2H),

242

3.41 (q, J= 5.9 Hz, 2H), 2.07-2.01 (m, 2H), 1.43 (s, 12H).

Ester benzílico do ácido [3-(l-Hidroxi-3-nitrometil-l,3dihidro-benzo[c] [1,2] oxaborol- 7-iloxi)-propil]-carbâmico

NHCbz no₂

Procedimento geral 9: éster benzílico do ácido {3-[3-formil-2(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenoxi]-propil}-carbâmico (1.98 g, 4.50 mmol), MeNO₂ (0.48 mL, 9.0 mmol), CTAB (82 mg, 0.32 mmol), 0.025 M NaOH (20 mL), e THF (5 mL). Purificação: precipitação para resultar no sólido branco: rendimento 1.3 g (75%).

‘Η RMN (400 MHz, DMSO-4) δ (ppm): 9.06 (s, 1H), 7.50-

7.42 (m, 1H), 7.40-7.25 (m, 6H), 7.07 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J= 9.4 Hz, 1H), 5.71 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.36-5.25 (m, 1H), 5.01 (s, 2H), 4.61-4.46 (m, 1H), 4.11-3.99 (m, 2H), 3.24-3.14 (m, 2H), 1.93-1.80 (m, 2H).

éster benzílico do ácido {3-[3-(tert-butoxicarbonilaminometil)-1 -hidróxi-1,3-dihidro-benzo[c] [ 1,2] oxaborol-7-iloxi] -propil}carbâmico

Procedimento geral 10: éster benzílico do ácido [3-(l-hidroxi3-nitrometil-1,3-dihidro-benzo[c] [1,2]oxaborol-7-iloxi)-propil]-carbâmico (1.3 g, 3.4 mmol), NiCl₂*6H₂O (804 mg, 3.38 mmol), NaBLU (770 mg, 20.3 mmol), Boc₂O (1.47 g, 6.76 mmol), e MeOH (20 mL). Purificação: cromatografia instantânea (30% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como uma espuma branca: rendimento 300 mg (19%).

243 ¹H RMN (400 MHz, DMSO-ó/₆) δ (ppm): 8.73 (s, 1H), 7.43-

7.24 (m, 7H), 7.02-6.94 (m, 1H), 6.90 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.80 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 5.09-5.01 (m, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.02 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.20-3.11 (m, 3H), 3.05-2.93 (m, 1H), 1.89-1.78 (m, 2H), 1.35 (s, 9H); MS (ESI): m/z = 469 (M-l, negativo).

Cloridrato do éster benzílico do ácido [3-(3-Aminometil-lhidroxi-1,3-dihidrobenzo[c][1,2[oxaborol-7-iloxi)-propil]-carbâmico (A43)

Procedimento geral 11: éster benzílico do ácido (3-[3-(tertbutoxicarbonilamino-metil)-1 -hidroxi-1,3-dihidro-benzo[c] [ 1,2]oxaborol-7iloxi]-propil}-carbâmico (300 mg, 0.63 mmoL), 1 M HC1 em Et₂O (2 mL), e CH₂C1₂ (2 mL). Purificação: HPLC preparativa. A43 foi isolado como um sólido branco 70 mg (29%).

Ή RMN (400 MHz, DMSCW_Ó) δ (ppm): 7.40-7.22 (m, 9H), 7.04 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.87 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.02-4.96 (m, 3H), 4.083.98 (m, 2H), 3.23-3.12 (m, 2H), 3.06-2.92 (m, 1H), 2.71-2.60 (m, 1H), 1.92-

1.82 (m, 3H); MS (ESI): m/z = 371 (M+l, positivo); HPLC pureza: 97.01% (MaxPlot 200-400 nm), 95.99% (220 nm).

Cloridrato de N-[3-(3-aminometil-l-hidroxi-l,3-dihidrobenzofc][1,2]oxaborol-7-iloxi)-propil]-metanosulfonamida (A44)

244

Procedimento Geral 10

Procedimento Geral 11

N-[3-(l -Hidroxi-3-nitrometil-l,3-dihidrobenzo[c] [1,2] oxaborol- 7-iloxi)-propil]-metanosulfonamida

NHMs

mmol) foi adicionado

MsCl (0.99 mL, 13 devagar a uma solução de Et₃N (2.85 mL, 20.5 mmol) e cloridrato de 7-(3-amino-propoxi)-3nitrometil-37/-benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (1.55 g, 5.12 mmol) em CH₂C1₂ (50 mL) a 0 °C (temp. banho). A mistura da reação foi agitado a rt por lhe depois resfriada rapidamente com H₂O (50 mL). A mistura foi extraída com CH₂C1₂ e as frações orgânicas foram secas (MgSO₄) e concentradas a vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (30% EtOAc em hexano) para resultar no composto de título como um líquido viscoso: rendimento 500 mg (28%).

‘H RMN (400 MHz, DMSO-d_d) δ (ppm): 7.47 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.12-7.05 (m, 1H), 7.05-6.97 (m, 1H), 6.91 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.71 (dd,

J = 9.4, 2.7 Hz, 1H), 5.31 (dd, J= 13.7, 2.7 Hz, 1H), 4.56 (dd, J= 13.5, 9.2 Hz, 1H), 4.10 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 3.16-3.08 (m, 2H), 2.88 (s, 3H), 1.99-1.86 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 343 (M-l, negativo).

Ester tert-butílico do ácido [l-Hidroxi-7-(315

245 metanosulfonilamino-propoxi)-l, 3-dihidro-benzo[c][1,2]oxaborol-3-ilmetil]carbâmico

Procedimento geral

10: /V-[3-(l -hidroxi-3-nitrometil-1,3 dihidro-benzofc] [ 1,2]oxaborol-7-iloxi)-propil]-metanosulfonamida (500 mg, 1.45 mmol), NiCl₂*6H₂O (345 mg, 1.45 mmol), NaBHU (330 mg, 8.7 mmol), Boc₂O (632 mg, 2.90 mmol), e MeOH (50 mL). Purificação: cromatografia instantânea (5% MeOH in CH₂C1₂). O composto de título foi isolado como uma espuma branca: rendimento 140 mg (23%).

Ή RMN (400 MHz, DMS(W_Ó) δ (ppm): 8.77 (s, 1H), 7.40 (t,

J= 7.6 Hz, 1H), 7.07-6.80 (m, 4H), 5.13-5.00 (m, 1H), 4.13-4.03 (m, 2H),

3.21-2.97 (m, 3H), 2.88 (s, 3H), 1.97-1.87 (m, 2H), 1.37 (s, 9H); MS (ESI): m/z = 413 (M-l, negativo).

Cloridrato de N-[3-(3-aminometil-l-hidroxi-l,3-dihidrobenzo[c][l, 2]oxaborol- 7-iloxi)-propil]-metanosulfonamida (A44)

Procedimento geral 11: éster tert-butílico do ácido [1-hidroxi7-(3-metanosulfonilamino-propoxi)-l,3-dihidro-benzo[c][l,2]oxaborol-3ilmetil]-carbâmico (140 mg, 0.33 mmol), 1 M HC1 em Et₂O (2 mL), e CH₂C1₂ (2 mL). Purificação: trituração com Et₂O seguida pela HPLC preparativa.

A44 foi isolado como um sólido branco: rendimento 30 mg (25%).

^!1I RMN (400 MHz, DMSO-t/₆ + 1 drop conc. HC1) δ (ppm):

8.13 (bs, 3H), 7.46 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.90 (d, J =

8.6 Hz, 1H), 5.26 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 4.08 (t, J= 5.5 Hz, 2H), 3.16-3.07 (m,

246

3Η), 2.87 (s, 3H), 2.84-2.74 (m, 1H), 1.95-1.86 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 315 (M+l, positivo); HPLC pureza: 84.60% (MaxPlot 200-400 nm), 82.29% (220 nm).

Cloridrato de 2-(3-Aminometil-l-hidroxi-l,3-dihidrobenzo[c][l,21oxaborol-7-iloximetil)-propano-l,3-diol (A45)

Me₂C(OMe)₂, PTSA

CH₂CI₂, rt, O/N

MsCI, Et₃N, CH₂CI₂0 °C to rt, 2 h

'yietil-[1,3Jdioxan-5 -il)-metanol

OH

A solução de 2,2-dimetoxipropano (5.88 g, 56.5 mmol), 2metil-propano-l,3-diol (5.0 g, 47 mmol), e monohidrato de PTSA (0.48 g, 2.3 mmol) em THF (100 mL) foi agitado O/N a rt. A mistura foi concentrada a vácuo para resultar no composto de título como um líquido incolor: rendimento 6.87 g (99%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 4.03 (dd, J= 11.7, 3.5 Hz, 2H), 3.84-3.73 (m, 4H), 2.49-2.39 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 1H), 1.45 (s, 15 3H), 1.40 (s,3H).

Acido metanosulfônico 2,2-dimetil-[l,3]dioxan-5-ila éster de metila

247

OMs

MsCl (4.4 mL, 56 mmol) foi adicionado devagar a uma solução de Et₃N (9.8 mL, 71 mmol) e (2,2-dimetil-[l,3]dioxan-5-il)-metanol (6.87 g, 47.0 mmol) em CH2CI2 (100 mL) a 0 °C (temp. banho). A mistura da reação foi agitada a rt por 2 h e depois resfriada rapidamente com H₂O (100 mL). A mistura foi extraída com CH₂C1₂ e as frações orgânicas foram secas (MgSO₄) e concentradas a vácuo para resultar no composto de título como um líquido incolor: rendimento 10.02 g (95%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 4.42 (d, J= 7.4 Hz, 2H), 4.13-4.04 (m, 2H), 3.82-3.74 (m, 2H), 3.05 (s, 3H), 2.05-1.95 (m, 1H), 1.46 (s, 3H), 1.40 (s, 3H).

2-Bromo-3~(2,2-dimetil- [1,3] dioxan-5-ilmetoxi)-benzaldeído

Procedimento geral 4: 2-bromo-3-hidroxi-benzaldeído (8.98 g,

44.7 mmol), ácido metanosulfônico 2,2-dimetil-[l,3]dioxan-5-iléster de metila (10.02 g, 44.68 mmol), Cs₂CO₃ (21.8 g, 67.0 mmol), e DMF (100 mL). Purificação: cromatografia instantânea (20% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como um líquido viscoso: rendimento 4.20 g (29%).

*H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.43 (s, 1H), 7.53 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.38 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.26-4.08 (m, 4H), 4.01 (dd, J= 11.5, 4.5 Hz, 2H), 2.22 (dt, J= 11.2, 5.5 Hz, 1H), 1.50 (s, 3H), 1.45 (s, 3H).

3-(2,2-Dimetil-[1,3]dioxan-5-ilmetoxi)-2-(4-metil[1,3,2[ dioxaborolan-2-il)-benzaldeído

248

Procedimento geral 5: 2-bromo-3-(2,2-dimetil-[l,3]dioxan-5ilmetoxi)-benzaldeído (4.10 g, 12.5 mmol), B₂pin₂ (6.34 g, 25.0 mmol), KOAc (4.90 g, 50.0 mmol), PdCl₂(dppf>CH₂Cl₂ (0.91 g, 1.3 mmol), e dioxano (200 mL). Purificação: cromatografia instantânea (30% EtOAc em hexano). O composto de título foi isolado como uma espuma branca: rendimento 2.0 g (42%)

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 9.95 (s, 1H), 7.49 (t, J=

7.8 Hz, 1H), 7.44-7.38 (m, 1H), 7.13 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 4.17-4.06 (m, 4H), 3.86 (dd, J= 11.9, 4.5 Hz, 2H), 2.12 (d, 1H), 1.27 (s, 15H), 1.24 (s, 3H); MS (ESI): m/z = 377 (M+l, positivo).

7-(2,2-Dimetil-[l, 3]dioxan-5-ilmetoxi)-3-nitrometil-3Hbenzo[c] [1,2J-oxaborol- l-ol

Procedimento geral 9: 3-(2,2-dimetil-[l,3]dioxan-5-ilmetoxi)2-(4-metil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (2.0 g, 5.3 mmol), MeNO₂(0.57 mL, 11 mmol), CTAB (97 mg, 0.26 mmol), 0.025 M NaOH (50 mL), e THF (5 mL). Purificação: precipitação: rendimento 0.45 g (25%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-J₆) δ (ppm): 9.09 (s, 1H), 7.47 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.09 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.71 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.31 (d, J= 13.3 Hz, 1H), 4.57 (dd, J= 13.7, 9.4 Hz, 1H), 4.07

249 (d, J= 6.6 Hz, 2H), 4.01-3.91 (m, 2H), 3.86-3.75 (m, 2H), 2.08 (m, 1H), 1.35 (s, 3H), 1.33 (s, 3H); MS (ESI): m/z = 336 (M-l, negativo).

éster tert-butílico do ácido [7-(2,2-dimetil-[l,3]dioxan-5ilmetoxi)-! -hidroxi-1,3-díhidro-benzo[c] [1,2]oxaborol-3-ilmetil]-carbâmico

Procedimento geral 10:7-(2,2-dimetil-[l,3]dioxan-5-ilmetoxi)3-nitrometil-377-benzo[c][ 1,2]-oxaborol-l-ol (0.45 g, 1.3 mmol), NiCl₂*6H₂O (317 mg, 1.33 mmol), NaBFLi (271 mg, 7.98 mmol), Boc₂O (580 mg, 2.66 mmol), e MeOH (30 mL). Purificação: cromatografia instantânea (5% MeOH in CH₂C1₂). O composto de título foi isolado como uma espuma branca: 10 rendimento 150 mg (28%).

’H RMN (400 MHz, DMSO-A_Ó) δ (ppm): 8.75 (s, 1H), 7.45-

7.36 (m, 1H), 6.98-6.91 (m, 2H), 6.85 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.10-5.04 (m, 1H), 4.08-3.93 (m, 4H), 3.80 (dd, J= 12.1, 6.6 Hz, 2H), 3.09-2.98 (m, 1H), 2.122.06 (m, 1H), 1.37 (s, 9H), 1.35-1.31 (m, 6H).

Cloridrato de 2-(3-aminometil-l-hidroxi-l,3-dihidrobenzo[c][l,2]oxaborol-7-iloximetil)-propano-l,3-diol (A45)

HC) nh₂

Procedimento geral 11: éster tert-butílico do ácido [7-(2,2dimetil-[l ,3]dioxan-5-ilmetoxi)-1 -hidroxi-1,3-dihidro-benzo[c][l ,2]oxaborol3-ilmetil]-carbâmico (150 mg, 0.37 mmol), 2 N HC1 (10 mL), e MeOH (5.0

250 mL). Purificação: HPLC preparativa. A45 foi isolado como um sólido branco: rendimento 80 mg (71%).

’H RMN (400 MHz, DMSO-7₆) δ (ppm): 8.29 (bs, 3H), 7.39 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 6.99 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.83 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.15 (d,

J= 10.9 Hz, 1H), 5.30-5.23 (m, 1H), 4.01-3.95 (m, 2H), 3.53-3.50 (m, 5H),

2.74-2.63 (m, 1H), 2.01-1.93 (m, 1H); MS (ESI): m/z = 250 (M-18, positivo); HPLC pureza: 96.01% (MaxPlot 200-400 nm), 95.07% (220 nm).

- Aminometil-7-(3 -hidroxi-propoxi)-3H-

Síntese de 3-(3-Benziloxi-propoxi)-2-bromo-benzaldeído (C)

A uma solução a 5°C do composto A (15,0 g, 0,075 mol), B (12,0 ml., 0,075 mol) e trifenilfosfina (19,6 g, 0,075 mol) em 200 ml de THF anidro foi adicionada DIAD (14,8 ml., 0,075 mol) gota a gota por um período

251 de 15 minutos. A solução resultante foi aquecida até a temperatura ambiente por um período de 5 h e o solvente foi evaporado em vácuo. O resíduo foi dissolvido em 150 ml de EtOAc e a camada orgânica lavada com água, salmoura e secada sobre Na₂SO₄, filtrada e concentrada em vácuo. O produto foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (gradiente de 5% EtOAc / hexano) gerando 13,0 g (50% de rendimento) de C [3-(3-benziloxipropoxí) -2-bromo-benzaldeído].

Ή RMN (400 MHz. DMSO-A) δ (ppm) 10,41 (s, 1H), 7,49 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 7,32-7,25 (m, 6H), 7,08 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 4,54 (s, 2H), 4,16 (t, J= 6,0Hz, 2H), 3,74 (t, J= 5,8 Hz, 2H), 2,19-2,14 (m, 2H),

3-(3 -Benziloxi-propoxi) -2-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2] dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (D)

até 55% Rend.

O composto C (8,9 g, 0,025 mol), KOAc (7,5 g, 0,076 mol) e bis(pinacolato)diboro (12,9 g, 0,051 mol) foram dissolvidos em 50 ml de DMF seco e desgaseificados durante 30 minutos. A isto foi adicionado PdCl₂(dppf) DCM (0,56 g, 0,76 mmol) e o conteúdo foi de novo desgaseificado durante 10 minutos e, então, aquecido a 90°C por 4 h. Uma quantidade adicional de PdCl₂(dppf) .DCM (0,2 g, 0,27 mmol) foi adicionada e o aquecimento foi continuado por um adicional de 2h. A reação foi resfriada até a temperatura ambiente, filtrada por celite e o solvente evaporado em vácuo. O resíduo foi dissolvido em DCM, lavado com salmoura e a camada orgânica secada sobre Na₂SO₄, filtrado e concentrado em vácuo. O produto foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (gradiente de 5% EtOAc / hexano) e forneceu 5,4 g (53% de rendimento) de D [3-(3benziloxi-propoxi)-2-(4,4,5,5-tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)252 benzaldeídoj.

ΪΙ RMN (400 MHz, DMSO-ó/₆) δ (ppm) 9.91 (s, 1H), 7.43 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.32-7.27 (m, 5H), 7.06 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.49 (s, 2H), 4.08 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.67 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 2.112.08 (m, 2H), 1.44 (s, 12H). ESI+MS m/z, 397 (M+H)⁺.

7-(3-Benziloxi-propoxi)-3-nitrometil-3H-

A uma solução resfriada em gelo de NaOH (0,68 g, 0,017 mol) em 10 ml de água foi adicionada uma solução de composto D (6,8 g, 0,017 mol) dissolvida em 5 ml de THF. Após 15 minutos, nitrometano (0,93 ml, 0,017 mol) foi adicionado gota a gota e o conteúdo agitado a temperatura ambiente durante a noite. O THF foi evaporado sob pressão reduzida e o conteúdo acidificado até pH 3 com HCl 2N. A camada aquosa foi extraída com EtOAc várias vezes e a camada de etila acetado combinada foi lavada com salmoura, secada sobre Na₂SO₄, filtrada e concentrada em vácuo. O produto foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel (gradiente de 10% EtOAc/ hexano até 30% EtOAc/ hexano) e forneceu 3,7 g (55% de rendimento) de E [7-(3-Benziloxi-propoxi)-3-nitrometil-3Hbenzofc] [ 1,2] oxaborol-1 -ol] 3.7g.

’H RMN (400 MHz, DMSO-c/₆ + D₂O (0.01 ml)) δ (ppm) 7.49 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.34-7.25 (m, 5H), 7.08 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.71(d, J= 6.4 Hz, 1H), 5.23 (dd, J = 13.2, 2.4 Hz, 1H), 4.584.53 (m, 1H), 4.47 (s, 2H), 4.12 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.63 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 2.04-2.00 (m, 2H). ESI-MS m/z, 356 [M-H]‘. HPLC purity: 97.12% (MaxPlot 200 - 400 nm).

3-Aminometil-7-(3-hidroxi-propoxi)-3H253 benzo[c][l,21oxaborol-l-ol (A46)

Pd(OH)₂ i AcOH

3,18 kgf/cm²/2h

45% Renti.

NH₂ AcOH

O composto E (6,0 g, 0,016 mol) foi dissolvido em 50 ml de ácido acético glacial e a ele foi adicionado Pd(OH)₂ em Carbono (20% de conteúdo de metal, 50% em peso úmido) (5,2 g) e o conteúdo colocado para hidrogenação em um agitador Parr a 3,18 kgf/cm² por 2 h. A reação foi verificada quanto a conclusão e o conteúdo foi filtrado por meio de Celite. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida à temperatura ambiente para render um material viscoso. A este foram adicionados três vezes 15 ml de toluene seco e evaporados rendendo um sólido felpudo. A purificação foi realizada por HPLC preparativa (coluna Cl8, usando acetonitrila e solução a 0.1% de AcOH/água) e forneceu 1.5 g (45% de rendimento) do composto A46 [3-Aminometil-7-(3-hidroxi-propoxi)-3H-benzo[c] [ 1,2]oxaborol-1 -ol] com 0.33 mol% de ácido acético (por HRMN).

'Η RMN (400 MHz, DMSCW₆ + D₂O (0.01 ml)) δ (ppm) 7.52 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.29 (dd, J= 9.2, 2.4, 1H), 4.12 (t, J= 6.2Hz, 2H), 3.62 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.48 (dd, J = 13.2, 2.8 Hz, 1H), 2.80-2.74 (m, 1H), 1.92 (t, J = 6.2 Hz, 2H). ESI+MS m/z, 238 [M+H]⁺. Pureza HPLC: 95.67% (MaxPlot 200 - 400 nm) e 96.22% (220 comprimento de onda simples).

7-(3-Benziloxi-propoxi)-3-nitrometil-3H-benzo[c][1,2] oxaborol-l-ol (A47)

254

3-(3 -Benziloxi-propoxi) -2-hidroxi-benzaldeído

OBn

NaH (2.95 g, 72.4 mmol) foi adicionado a uma solução resfriada em gelo de 2,3-dihidroxibenzaldeído (5.0 g, 36 mmol) em DMSO anidro (45 mL). Benzil-3-bromopropila éter (6.45 mL, 36.2 mmol) foi, então, 5 adicionado e a mistura foi agitada a temperatura ambiente por 12 h. A mistura foi neutralizada usando HCI 1 N e, então, extraída com EtOAc. A fração orgânica foi lavada com H₂O e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea (8:2 hexano/EtOAc) para dar o composto título como um óleo marrom: rendimento de 8.40 g (81%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 9.93 (s, 1H), 7.36-7.23 (m, 6H), 7.20-7.16 (m, 2H), 6.98-6.91 (m, 1H), 4.53 (s, 2H), 4.19 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.70 (t, 7= 6.1 Hz, 2H), 2.19-2.16 (m, 2H).

3-(3 -Benziloxi-propoxi)-2-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2] dioxaborolan-2-il)-benzaldeído

Procedimento geral 6: 3-(3-benziloxi-propoxi)-2-hidroxi255 benzaldeído (7.6 g, 26 mmol), piridina (3.42 mL, 42.5 mmol), Tf₂O (4.60 mL, 27.9 mmol) e CH₂C1₂ (200 mL): rendimento de 8.60 g (77%).

Ή RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.23 (s, 1H), 7.54-7.47 (m, 1H), 7.43 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.36-7.22 (m, 6H), 4.52 (s, 2H), 4.23 (t, J=

6.3 Hz, 2H), 3.71 (t,J= 6.1 Hz, 2H), 2.21-2.17 (m, 2H).

Procedimento geral 5: triflúoro-metanosulfônico ácido 2-(3benziloxi-propoxi)-6-formil-fenila éster (8.0 g, 19 mmol), B₂pin₂(9.71 g, 38.2 mmol), KOAc (5.71 g, 57.4 mmol), PdCl₂(dppf)*CH₂Cl₂ (1.39 g, 1.89 mmol) e dioxano anidro (160 mL). Purificação: cromatografia instantânea (9:1 hexano/EtOAc): rendimento 4.80 g (43%) - alguma contaminação por pinacol, usado sem purificação adicional.

^!H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 9.93 (s, 1H), 7.46 (t, J =

7.8 Hz, 1H), 7.41-7.36 (m, 1H), 7.35-7.24 (m, 5H), 7.08 (d, J= 7.8 Hz, 1H),

4.50 (s, 2H), 4.10 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.67 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 2.11 (quin, J=

6.2 Hz, 2H), 1.43 (s, 12H).

7-(3-Benziloxi-propoxi)-3-nitrometil-3H-berizo[c][1,2] oxaborol-l-ol (A47)

Procedimento geral 8: 3-(3-benziloxi-propoxi)-2-(4,4,5,5tetrametil-[l,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (36 g, 91 mmol), MeNO₂(16.6 g, 273 mmol), NaOH (3.64 g, 83 mmol), H₂O (180 mL) e THF (50 mL). Purificação: cromatografia instantânea (1:1 hexano/EtOAc). A47 foi isolado como um óleo ligeiramente amarelo: rendimento de 15.9 g (50%).

^TH RMN (400 MHz, DMSO-4) Qppm): 9.05 (s, 1H), 7.44 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.35-7.20 (m, 5H), 7.06 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.88 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.70 (dd, J = 9.4, 2.3 Hz, 1H), 5.29 (dd, J= 13.7, 2.7 Hz, 1H), 4.53

256 (dd, J= 13.3, 9.4 Hz, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.11 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 3.60 (t, J =

6.3 Hz, 2H), 2.04-1.91 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 356 (M-l, negativo); pureza HPLC: 99.35% (MaxPlot 200-400 nm), 97.32% (220 nm).

Síntese alternative de cloridrato de 3-Aminometil-7-(3hidroxi-propoxi)-3H-benzo [c] [l,2]oxaborol-l-ol (A46)

OBn OH

Q) D)

Procedimento geral 13: A47 (0.50 g, 1.4 mmol), 20% Pd(OH)₂/C (0.5 g, 1:1 p/p), AcOH (20 mL) e H₂O (0.24 mL). O filtrado foi concentrado e tratado com HC1 4 N para dar o composto título como um sólido incolor: rendimento de 0.22 g (47%).

’11 RMN (400 MHz, DMS(W_Ó) δ (ppm): 7.42 (t, 7.8 Hz,

1H), 6.97-6.90 (m, 1H), 6.86 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.20 (dd, J= 9.2, 2.5 Hz, 1H), 4.02 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.54 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 3.40 (dd, J= 13.3, 2.7 Hz, 1H), 2.68 (dd, J= 13.1, 9.2 Hz, 1H), 1.88-1.78 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 238 (M+l, positivo).

[1-Hidroxi- 7-(3-hidroxi-propoxi)-l, 3-dihidrobenzo[c] [1,2] oxaborol-3-ilmetil]-ácido carbâmico tert-butila éster (A48)

Uma solução de NaOH (0.13 g, 3.2 mmol) em H₂O (3.0 mL) foi adicionada a uma solução de A46 (0.40 g, 1.5 mmol) em fórí-butanol (2.0 mL) a 5-10 °C (temperatura do banho) e, então, agitada por 20 minutos. Boc₂O (0.31 g, 1.4 mmol) foi adicionado a 5-10 °C (temperatura do banho) e, então, a mistura foi deixada aquecer até a temperatura ambiente e agitada por

257

h. A mistura de reação foi diluída com salmoura (50 mL) e extraída com CH₂C1₂ (2 x 50 mL). As frações orgânicas foram combinadas, lavadas com H₂O (2 x 50 mL) depois salmoura (50 mL), secadas (Na₂SO₄) e concentradas em vácuo. O resíduo pegajoso marrom foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (AcOH) para dar (após liofilização) A48 como um liofilizado branco: rendimento 151 mg (65%).

H RMN (400 MHz, DMSO-40 δ (ppm): 7.47-7.26 (m, 1H),

6.88 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.79 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.00 (bs, 1H), 4.01 (t, J =

6.1 Hz, 2H), 3.55 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 3.65-3.47 (m, 2H), 3.38 (d, J= 13.7 Hz, 1H), 3.02 (dd, J= 13.1, 6.1 Hz, 1H), 1.24 (s, 9H); MS (ESI): m/z = 336 (M+l, positiva); pureza HPLC: 98.48% (MaxPlot 200-400 nm), 98.01% (220 nm).

Cloridrato de (S)-3-Aminometil-7-(3-hidroxi-propoxi)-3Hbenzo[cl[l,2]oxaborol-l-ol (A49) (3-Benziloxi)-l-bromo-propano (2)

PPh,. CBr*

Uma solução de 1 (160 g, 962,58 mmol) e trifenilfosfina (277,72 g, 1,1 eq., 1058,83 mmol) foi dissolvida em diclorometano (800 ml.) e esfriada a 0°C (gelo / água). Uma solução de tetrabrometo de carbono (351,16 g, 1,1 eq., 1058,83 mmol) em diclorometano (200 ml.) foi adicionada em gotas e a mistura foi deixada a agitar a temperatura ambiente por 18 h. O solvente de diclorometano foi evaporado para obter um sólido branco. O sólido foi tratado com um excesso de hexanos, agitado por 1 h, filtrado e o solvente foi evaporado para render um produto cru. O produto cru foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel usando 5-10% acetato de etila e hexano para obter 2 (199 g, 91%) como um líquido incolor

3-(3-Benziloxi-propoxi)-2-hidroxi-benzaldeído (4)

258

NatBuO/DMSO

0°C até T.A./ON ^Βη0\^\^^ΒΓ

A uma solução de aldeído 3 (27.47 g, 1 eq, 198.88 mmol) em 0.5 L de DMSO anidro foi adicionado butóxido de sódio terciário (42.3 g, 2.2 eq, 440.31 mmol) em porções. A mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente durante 30 minutos. Uma solução de cor marrom foi formada. A mistura de reação foi esfriada a 0°C e recebeu o acréscimo de brometo (56 g,

1.2 eq., 244.41 mmol) em gotas. A mistura foi agitada a temperatura ambiente O/N. 90% de aldeído 3 foram convertidos a produto. A mistura de reação foi acidificada a pH —3 e, então, extraída em EtOAc e lavada com água. A camada orgânica foi concentrada, o produto foi purificado em coluna de sílica gel (EtOAc:hexano 80:20) para render como composto 4 (48 g, 84,31% de rendimento) (óleo viscoso).

Acido triflúoro-metanesulfônico 2-(3-benziloxi-propoxi)-6formil-fenila éster (5)

A uma solução fria em gelo de 4 (48 g, 1.0 eq, 167.72 mmol) entre 200 mL de DCM seco foi adicionada piridina (22 ml, 1.62 eq, 272.11 mmol). A mistura de reação anidrido triflúorometanosulfônico (33 ml., 1.16 eq, 196.14 mol) foi adicionado gota a gota. A mistura foi agitada por 3 h a 0°C. A mistura foi resfriada repentinamente com 500 mL de HCI IN. O composto foi, então, extraído em DCM (300 mL) e atravessado em uma coluna de sílica gel pequena e concentrado para dar o composto 5 (57 g, 82% de rendimento) como um óleo grosso amarelo pálido.

3-(3 -Benziloxi-propoxi) -2-(4,4,5,5-tetrametil259 [1,3,2] dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (6)

O composto 5 (65 g, 1.0 eq, 155.5 mmol), bis(pinacolato)diboro (86.9 g, 2.2 eq, 342.11 mmol) e KOAc (45.7 g, 3.0 eq, 466.5 mmol) foram misturados juntos e 600 mL de dioxano foram somados. A mistura foi desgaseificada com N₂ por 30 minutos e PdCl₂(dppf)DCM (5.7 g, 0.05 eq, 7.77 mmol) foi adicionado. A pasta resultante foi aquecida durante a noite até 90°C. O solvente foi evaporado, EtOAc foi adicionado e então filtrado por um bloco de Celite. A camada orgânica foi lavada então com água (2X150 mL) e o solvente foi evaporado. Cromatografia de coluna usando 15% de EtOAc / hexanos deu o composto 6 (37.1 g, 61% de rendimento).

7-(3-Benziloxi-propoxi) -3-nitrometil-3H-benzo [c] [1,21 oxaborol-l-ol (A47)

Uma solução de composto 6 (36 g, 1.0 eq, 90.91 mmol) em 50 mL de THF foi esfriada a 0°C. Nitrometano (16.6 g, 3.0 eq, 272.72 mmol) foi adicionado, seguido por uma solução aquosa de NaOH (3.64 g em 180 mL de H2O). A mistura de reação foi agitada durante a noite a temperatura ambiente. O material inicial desapareceu. O ciclização foi proporcionada adicionando HC1 IN até que a solução foi acidificada e então extraída em EtOAc. O EtOAc foi evaporado e a mistura foi triturada com água e

260 decantada. Cromatografia de coluna usando 50% EtOAc / hexanos deu composto A47 (15.9 g, 50% de rendimento).

(R) e (S) 7 - (3-Benziloxi-propoxi) -3-nitrometil-3H-benzo [c] [1,2] oxaborol-l-ol

4.82 g de (A47) foi resolvido por HPLC quiral usando coluna

CHIRALPAK ADH e CO2'.metanol (86:14) como eluente @ 25°C. A detecção de UV foi monitorada a 230nm. Dois picos, (S)-7-(3-Benziloxipropoxi)-3-nitrometil-3H-benzo [c][l,2] oxaborol-l-ol e (R)-7-(3-Benziloxipropoxi)-3-nitrometil-3H-benzo [c][ 1,2] oxaborol-l-ol foram coletados e 10 evaporados a óleos amarelos. Análise das frações agrupadas usando uma coluna analítica CHIRALPAK ADH 4.6mm Dl x 250mm e a mesma fase móvel proveu o enantiômero (S) [0.7 g (29% de rendimento)] com um tempo de retenção de 6.11 min. e um 98.2% ee. O enantiômero (R) [1.0 g (41% de rendimento)] teve um tempo de retenção de 8.86 min. e um 99.6% ee.

(S)-3-Aminometil-7 -(3-hidroxi-propoxi)-3H-benzo[c] [1,2] oxaborol-l-ol (A49)

(A47) (550 mg., 1.57 mmol) foi dissolvido em 15 mL de ácido acético glacial. 280 mg. de hidróxido de paládio 20% em peso em carbono (catalisador de Pearlman) foi adicionado e a mistura de reação foi lavada com

261 hidrogênio 3X e hidrogenada a 3,8 kgf/cm² durante 3,5 horas. A mistura foi filtrada por Celite para remover catalisador e enxaguada com metanol. Ácido acético foi evaporado para obter o produto cru. Purificação de HPLC deu 128 mg. do sal de acetato de (A49). O sal de acetato foi tratado com 10 mL de 5 HC1 2N e agitado durante 3 horas. O material foi liofilizado durante a noite para obter 93 mg do sal cloridrato de (A49) (Rendimento de 22%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 7.48 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.27 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.11 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.58 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.82 (dd, J = 13.3, 9.0 10 Hz, 1H), 1.95-1.83 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 238 (M+l, positivo); Pureza de HPLC: 98.74% (MaxPlot 200-400 nm), 98.38% (220 nm); HPLC Quiral = 95.14% ee.

(R)-3-Aminometil-7-(3-hidroxi-propoxi)-3H-benzo [c][l,2 / oxaborol-l-ol (A50)

(7?)-7-(3-benziloxi-propoxi)-3-nitrometil-3//-benzo[c] [ 1,2] oxaborol-l-ol (0.70 g, 2.0 mmol) foi dissolvido em 20 mL de ácido acético glacial. 350 mg de hidróxido de paládio a 20% em peso em carbono (catalisador de Pearlman) foi adicionado e a mistura de reação foi lavada com hidrogênio 3X e hidrogenada a 3,8 kgf/cm² durante 3,5 horas. A mistura foi filtrada por Celite para remover catalisador e enxaguada com metanol. Ácido acético foi evaporado para obter o produto cru. Purificação de HPLC deu 65 mg. de composto puro. Depois da purificação, este sal de acetato foi combinado com material de outra reação. Este produto foi tratado com HC1 2N (10 mL) e agitado por 3 h a temperatura ambiente. O material foi 25 liofilizado durante a noite para obter 74 mg do sal de cloridrato de (A50) (Rendimento de 14%).

262 ’Η RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 7.48 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.27 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.11 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.58 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.83 (dd, J = 13.3, 8.6 Hz, 1H), 1.94-1.82 (m, 2H); MS (ESI): m/z = 238 (M+l, positivo); Pureza de HPLC: 99.12% (MaxPlot 200. 400 nm), 98.74% (220 nm); HPLC Quiral = 98.82% ee.

7-Etoxi-3-nitrometil-3H-benzo[c] [1,2loxaborol-l-ol (A51)

3-Etoxi-2- (4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2[dioxaborolan-2-il)benzaldeído

Procedimento geral 5: 2-etoxi-6-formil-fenila éster de ácido triflúoro-metanosulfônico (2.0 g, 6.7 mmol), B₂pin₂ (5.11 g, 20.1 mmol), PdC12(dppf)*CH2C12 (0.98 g, 1.3 mmol), KOAc (1.97 g, 20.1 mmol) e dioxano (100 mL). Purificação: Cromatografia instantânea (10% EtOAc / hexano): rendimento de 1.05 g (57%).

*H RMN (400 MHz, CDC1₃)Ô (ppm): 9.93 (s, 1H), 7.46 (t, J =

7.8 Hz, 1H), 7.40-7.36 (m, 1H), 7.07 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.05 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.46 (s, 12H), 1.42 (t, 3H).

7-Etoxi-3-nitrometil-3H-benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (A51)

Procedimento geral 9: 3-etoxi-2-(4,4,5,5-tetrametil- [l,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (1.05 g, 3.8 mmol), MeNO2 (0.26 g,

263

4.2 mmol), 0.5% NaOH (2 mmol) e CTAC1 (8 mg.). A reação foi agitada a temperatura ambiente durante a noite. Salmoura (20 mL) foi adicionada e a solução foi extraída com EtOAc (3 x 20 mL). As frações orgânicas combinadas foram lavadas com HCl 1M (3 x 10 mL). A camada orgânica foi 5 secada, filtrada e concentrada em vácuo para dar A51: rendimento 0.6 g (67%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 9.08 (s, 1H), 7.45 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.71 (dd, J = 9.4, 2.7 Hz, 1H), 5.31 (dd, J = 13.3, 2.7 Hz, 1H), 4.55 (dd, J = 13.7, 9.4 Hz, 10 1H), 4.16-4.05 (m, 2H), 1.33 (t, J = 7.0 Hz, 3H); M/z de MS (ESI) = 236 (M+l, positivo); HPLC: 99.14% (MaxPlot), 98.05% (220 nm).

3-Aminometil-7-etoxi-3H-benzo[c ] [1,21 cloridrato__________de oxaborol-l-ol (A52)

HCl nh₂

Procedimento geral 13: A51 (1.0 g, 4.2 mmol) Pd(OH)₂ (0.3 g) e AcOH (20 mL). Purificação: HPLC preparativa: rendimento 103 mg.

(10%).

'H RMN (400 MHz, DMSO-c^) δ (ppm): 8.86 (bs, 1H), 7.59 (bs, 1H), 7.46 (t, J - 7.8 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 8.2 Hz,

1H), 5.23 (dd, J = 8.2, 2.7 Hz, 1H), 4.14-4.07 (m, 2H), 2.80 (dd, J = 13.3, 8.6 20 Hz, 1H), 1.34 (t, J = 6.8 Hz, 3H); M/z de MS (ESI) = 208 (M+l, positivo);

HPLC: 97.28% (MaxPlot), 97.88% (220 nm).

3-Aminometil-7-metoxi-3H-benzo[c] [1,2] cloridrato de oxaborol-l-ol (A53)

264

benzaldeído

Procedimento geral 6: 2-hidroxi-3-metoxi-benzaldeído (20 g, 0.13 mol), Tf₂O (33.2 mL, 0.20 mol), piridina (21 mL, 0.26 mol) e CH₂C1₂ (300 mL). Purificação: Cromatografia instantânea (2.5% EtOAc / hexano):

rendimento de 10.3 g (28%).

’H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 10.26 (s, 1H), 7.56-7.51 (m, 1H), 7.47 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 (dd, J = 8.2, 1.6 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H).

Procedimento geral 5: éster 2-formil-6-metoxi-fenila de ácido 10 triflúoro-metanosulfônico (5.75 g, 20.2 mmol), B₂pin₂ (15.4 g, 60.7 mmol),

PdCl₂(dppf)»(CH₂Cl₂ (2.96 g, 4.05 mmol), KOAc (5.96 g, 60.7 mmol) e 1,4dioxano (200 mL). Purificação: Cromatografia instantânea (10% EtOAc / hexano): rendimento 4.5 g (85%).

’H RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 9.97 (s, 1H), 7.48 (t, J = 15 7.6 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H),

1.42 (s, 12H).

7-Metoxi-3-nitrometil-3H-benzo[c][1,2] oxaborol-l-ol

OMe nu

NO₂

265

Procedimento geral 9: 3-metoxi-2-(4,4,5,5-tetrametil- [l,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzaldeído (4.5 g, 17 mmol), MeNO₂ (1.36 g, 22.3 mmol), 0.5% NaOH (0.2 mmol) e CTAC1 (8 mg.). A reação foi agitada a temperatura ambiente durante a noite e então salmoura (20 mL) foi adicionada. A solução foi extraída com EtOAc (3 x 20 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com HCI 1M (3 x 10 mL). A camada orgânica foi secada, filtrada e concentrada em vácuo para dar o composto título: rendimento de 2.5 g (61%).

’H RMN (400 MHz, CDC13)Ô (ppm): 7.51 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.86 (dd, J = 9.8, 3.1 Hz, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.75 (dd, J = 13.5, 3.3 Hz, 1H), 4.46 (dd, J = 12.9, 8.9 Hz, 1H), 3.9 (s, 3H).

3-Aminometil- 7-metoxi-3H-benzo[c][1,2Jcloridrato de oxaborol-l-ol (A53)

Procedimento

-metoxi-3 -nitrometil-3H- benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (1.0 g, 4.5 mmol), Pd (OH)₂ (0.3 g) e AcOH (20 mL). Purificação: HPLC preparativa. A53 isolado como um sólido branco:

rendimento 86 mg. (10%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 8.99 (bs, 1H), 8.12 (bs, 1H), 7.49 (t, 1H), 7.08 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 5.23 (dd, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.50-3.39 (m, 1H), 2.85-2.75 (m, 1H); M/z de MS (ESI) = 194 (M+l, positivo); HPLC: 95.13% (220 nm), 98.79% (MaxPlot).

3-(l-ammo-etil)-3H-benzo[c] [1,2]oxaborol-l-ol (A54)

B(OH)₂

CHO

EtlMO₂₁NaOH

H₂0, t.a. ,30 min

Procedimento

Geral 12

266

3-(1 -Nitro-etil)-3H-benzo [c] [ 1,2] oxaborol- l-ol

ÇH no₂

Uma solução de NaOH (1.6 g, 41 mmol) em H₂O (20 mL) foi acrescentada a 2-formila ácido fenilborônico (5.1 g, 34 mmol) a temperatura ambiente. A mistura foi agitada por 15 min. E, então, nitroetano (2.9 mL, 41 mmol) foi adicionado em gotas. A mistura foi agitada por 30 min. e, então, a solução de reação clara foi acidificada com HCI 2N e EtOAc foi adicionado. A camada orgânica foi separada, lavada com H₂O e, então, salmoura, secada (Na2SO4) e concentrada em vácuo. Purificação por cromatografia instantânea (2:1 hexano / EtOAc) deu o composto título como um óleo incolor: rendimento 6.72 g (quantitativo).

'11 RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 7.78 (dd, J = 7.2, 2.9 Hz, 1H), 7.58-7.49 (m, 1H), 7.45 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 18.2, 7.6 Hz, 1H), 5.89 e 5.60 (d, J = 6.6 Hz e J = 3.5 Hz, 1H), 5.14 e 5.11 (s, 1H), 4.83 e 4.70 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 1.74-1.59 (m, 3H); M/z de MS (ESI) = 207 (M-l, negativo).

3-(l-Amino-etil)-3H-benzo[cJ [1,2] oxaborol-1 -ol (A54)

Procedimento

-(1 -ni tro-eti 1 )-3// benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (3.2 g, 15 mmol), Raney Ni (30% p/p, 1.0 g),

NH3 2M em EtOH (40 mL). Purificação: cromatografia instantânea (10:10:1

CHCfi/MeOH/NHLtOH). A54 foi isolado como um sólido branco: rendimento

0.25 g (27%).

p.f. 118-119°C; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): são atribuídos 2 isômeros; 9.13 (bs, 2H), 7.70 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.54-7.39 (m,

267

2Η), 7.39-7.24 (m, 1H), 5.05-4.88 (m, 1H), 3.16 e 3.09-2.93 (m, 1H), 0.99 e 0.75 (d, J - 10.2, 6.6 Hz, 3H); MS (ESI) m/z — 178 (M+l, positivo); Pureza HPLC: 97.77% (2 isômeros, 30.61% e 67.16%) (MaxPlot 200-400 nm), 98.07% (2 isômeros, 28.39% e 69.68%) (220 nm), Anal. Calcd para C₉H₁₂BNO₂«(0.1H₂O: C 60.30%; H 6.89%; N 7.81%. Encontrado: C 60.27%; H 6.88%; N 8.25%.

tert-butila ester de ácido [ 1-(1-Hidróxi-1,3-dihidrobenzo[cl[l,21oxaborol-3-il)-etill-carbâmico (BocA54)

KOH (0.5 g, 8.8 mmol) em H₂O foi acrescentado a uma suspensão de A54 (1.3 g, 6.8 mmol) em /-BuOH (20 mL). A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 10 min. e, então, esfriada até 0°C (temperatura do banho). Boc₂O (1.5 g, 7.1 mmol) foi adicionado em porções e a solução resultante foi deixada aquecer até a temperatura ambiente e foi agitada durante a noite. A mistura foi concentrada, então, parcialmente em vácuo e, então, extraída com CH₂C1₂ (4 x 80 mL). As frações orgânicas foram combinadas, lavadas com H₂O, secadas (Na₂SO₄) e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia instantânea (100:1 CH₂Cl₂/MeOH) para dar o composto título como um gel pegajoso vermelho: rendimento 1.7 g (93%).

’H RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 9.22 e 9.13 (s, 1H), 7.71-7.61 (m, 1H), 7.47-7.27 (m, 2H), 7.01 e 6.66 (d, J = 7.8, J = 8.6 Hz 1H),

5.12 e 5.05 (d, J = 3.1 Hz, J = 5.1 Hz, 1H), 4.12-4.00 (m, 1H), 3.70-3.62 (m, 1H), 1.38 e 1.23 (s, 9H), 0.95 e 0.78 (d, J = 6.6 Hz, J = 6.6 Hz 3H); M/z de MS (ESI) = 277 (M-l, negativo); Pureza HPLC: 98.35% (2 isômeros 31.05% e 67.30%) (MaxPlot 200-400 nm), 97.43% (2 isômeros, 32.72% e 64.71%) (220 nm); Anal. Calcd para C₁₄H₂₀BNO₄: C 60.68%; H 7.27%; N 5.05%.

268

Encontrado: C 60.86%; H 7.75%; N 5.08%.

Separação de Diastereômeros de tert-butila éster de ácido [1- (1 -Hidroxi-1, 3-dihidro-benzo[cl [1,2 ]oxaborol-3-il)-etil]-carbâmico A55 e

UM56

Uma mistura 2:1 de diastereômeros de tert-butila éster de ácido [ 1 -(1 -hidroxi-1,3 -dihidro-benzo[c] [ 1,2]oxaborol-3 -il)-etil]-carbâmico (1.0 g) foi separado por HPLC de fase inversa (MeCN:H₂O com a H₂O contendo 0.1% AcOH) dar ο A55 de eluição mais rápida (0.275 g) e A56 (0.468 g), ambos como liofilizados brancos.

Tert-butila ester de ácido [1-(1 -Hidroxi- 1,3-dihidrobenzo[c][l,2]oxaborol-3-il)-etil]-carbâmico (A55)

'11 RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 9.11 (s, 1H), 7.65 (d,

J = 7.4 Hz, 1H), 7.41-7.36 (m, 2H), 7.29 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 6.63 (bd, J = 8.2

Hz, 1H), 5.12 (s, 1H), 4.03 (bs, 1H), 1.24 (s, 9H), 0.96 (d, J = 6.2 Hz, 3H);

MS (ESI): m/z = 276 (M-l, negativo); Pureza de HPLC: 98.82% (MaxPlot

200-400 nm), 96.11% (220 nm).

Tert-butila éster de ácido [1-(1 -Hidroxi-1,3-dihidrobenzo[c][l,2]oxaborol-3-il)-etil]-carbâmico (A56)

’H RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 9.24 (s, 1H), 7.70 (d,

J = 7.0 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.37-7.30 (m, 2H), 7.01 (d, J = 8.2

269

Hz, 1H), 5.05 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 3.68-3.63 (m, 1H), 1.38 (s, 9H), 0.78 (d, J =

6.6 Hz, 3H); MS (ESI): m/z = 276 (M-l, negativo); Pureza HPLC: 99.37% (MaxPlot 200-400 nm), 98.65% (220 nm); Anal. Calcd para

C₁₄H₂₀BNO₄»0.1H₂O: C 60.24%; H 7.30%; N 5.02%. Encontrado: C

59.92%; H 7.34%; N 5.23%.

3-(l-Amino-etil)-3H-benzo[c] [1,2] cloridrato de oxaborol-l-ol (A571

Procedimento geral 11: A55 (0.238 g, 0.860 mmol), HCl 4N em dioxano (8 mL) e dioxano (8 mL). Purificação: HPLC preparativa (AcOH). A57 foi isolado como um liofilizado branco: rendimento 56 mg. (30%).

'll RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 9.57 (bs, 1H), 7.81 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.78 (bs, 3H), 7.51 (d, J = 3.5 Hz, 2H), 7.43-7.38 (m, 1H), 5.15 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 3.47-3.42 (m, 1H), 1.38 (d, J = 6.6 Hz, 3H); M/z de MS (ESI) =178 (M+l, positivo); Pureza HPLC: 96.55% (MaxPlot 200-400 nm), 98.30% (220 nm).

3-(l-Amino-etil)-3H-benzo[c][ 1,21 oxaborol-l-ol (A58)

Procedimento geral 11

Procedimento geral 11: A56 (0.406 g, 1.47 mmol), HCl 4N em dioxano (14 mL) e dioxano (10 mL). Purificação: HPLC preparativa de fase inversa (0.1% AcOH). A58 foi isolado como um liofilizado branco:

rendimento 124 mg. (40%).

Ή RMN (400 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 9.66 (bs, 1H), 8.45 (bs, 3H), 7.84 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.52-7.47 (m, 2H), 7.38 (td, J = 7.0, 1.2 Hz,

270

1Η), 5.48 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 3.86-3.79 (m, 1H), 0.65 (d, J = 7.0 Hz, 3H); M/z de MS (ESI) = 178 (M+l, positivo); Pureza HPLC: 98.23% (MaxPlot 200-400 nm), 98.60% (220 nm).

3-(l-Amino-propil)-3H-benzo[cl[1,2]oxaborol-l-ol (A59)

3-(l-Nitro-propil)-3H-benzo[c][1,2] oxaborol-l-ol

no₂

Uma solução de NaOH (2.2 g, 56 mmol) em H₂O (30 mL) foi acrescentada ao aldeído (7.0 g, 47 mmol) a temperatura ambiente e a mistura de reação foi agitada durante 10 min.. Nitropropano (5.0 mL, 56 mmol) foi adicionado em gotas e a mistura foi agitada durante 40 min.. A solução de reação clara foi acidificada com HC1 2N e EtOAc foi adicionado. A camada orgânica foi separada, lavada com H₂O e, então, salmoura, secada (Na₂SO₄) e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado através de cromatografia instantânea (2:1 hexano / EtOAc) para dar o composto título como um óleo incolor: rendimento 8.8 g (85%).

'11 RMN (400 MHz, CDC1₃) δ (ppm): são atribuídos 2 isômeros. 7.77 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.59-7.34 (m, 3H), 5.64 e 5.53 (d, J = 7.02 Hz e J = 5.1 Hz, 1H) 5.03-5.17 (bs, 1H), 4.51 (ddd, J = 10.6, 6.9, 3.9 Hz, 1H), 2.34-2.06 (m, 2H), 1.05-0.94 (t, J = 7.4 Hz, 3H).

3-(l-Amino-propil)-3H-benzo[c][1,2]oxaborol-l-ol (A59)

Procedimento

3-( 1 -nitro-propil)-3/7

271 benzo[c][l,2]oxaborol-l-ol (4.7 g, 21 mmol), Raney Ni (30% p/p, 1.0 g) e NH3 2M em EtOH (50 mL). Purificação: cromatografia instantânea (10:10:1 CHCl₃/MeOH/NH4OH). A59 foi isolado como um sólido rosa claro: rendimento 0.25 g (20%).

p.f. 96-97 °C; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): são atribuídos 2 isômeros; 8.43 (bs, 3H), 7.89-7.69 (m, 2H), 7.60-7.47 e 7.47-7.35 (m, 2H), 5.54 e 5.34 (s, 1H), 3.65 e 3.47 (bs, 1H), 1.71 e 1.25 (dd, J = 15.0,

7.6 Hz, 2H), 1.08 e 0.72 (t, J = 7.6 Hz, 3H); M/z de MS (ESI) = 192 (M+l, positivo); Pureza HPLC: 91.65% (2 isômeros 41.87% e 49.78%) (MaxPlot 200-400 nm), 98.07% (2 isômeros, 43.34% e 49.16%) (220 nm), Anal. Calcd para C₁₀H₁₄BNO₂ (0.2H2O: C 61.71%; H 7.46%; N 7.20%. Encontrado: C 61.75%; H 7.34%; N 7.33%.

Cloridrato_____________de_____________(S)-3-(aminometil)-3metilbenzo[cl [1,21 oxaborol-1(3H)-ol (A61)

1·('ΡγΟ₃)Β

2. ⁿBuLi, THF

1. MsCI, pyr

2. NaN₃, DMF

A uma suspensão de brometo de metiltrifenila fosfônio (108g,

303 mmol) em THF (750mL) a temperatura ambiente foi adicionado KOtBu (112.24g, 303 mmol) em porções. Depois de é agitada por 5min, a mistura de reação foi tratada com 2'bromoacetofenona (50.3g, 253 mmol). A mistura de reação foi agitada por 3h a temperatura ambiente, então, resfriada rapidamente com cloreto de amônio saturado. Extraída 3X com Et2O e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre

MgSO₄ e evaporadas sob vácuo. Purificada por cromatografia de sílica gel (100% éter de petróleo) para dar 43.8g (88%) de l-bromo-2-(prop-l-en-2il)benzeno como um óleo incolor.

272

Mistura AD-α (153.4g) foi dissolvida em uma mistura bifásica de água (550mL) e 'BuOH (550mL) e esfriada até 0°C. l-bromo-2-(prop-len-2-il)benzeno (21.6g, 109 mmol) foi adicionado e a mistura heterogênea foi agitada a 0°C por 18h, resfriada rapidamente com sulfato de sódio (164g), aquecida até a temperatura ambiente e agitada por uma hora adicional. Extraída 5X com DCM e as camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO₄ e evaporadas sob vácuo. Purificada por cromatografia de sílica gel (50% éter de petróleo / Et2O) para dar 19.2g (76%) de (S)-2-(2bromofenil)propano-l,2-diol como um óleo amarelo pálido.

(S)-2-(2-bromofenil)propano-l,2-diol (12.lg, 52.4 mmol) foi dissolvido em piridina (250mL) e esfriado até 0°C antes da adição de cloreto de metanosulfonila (4.0mL, 52.4 mmol). A mistura de reação foi permitida esquentar até a temperatura ambiente e agitada por 2h. A piridina foi removida sob vácuo e o resíduo repartido entre DCM e NaHCO₃ aquoso. A camada orgânica foi secada sobre MgSO₄ e evaporada sob vácuo para dar o mesilato cru. Este material foi combinado com NaN₃ (15.3g, 235.6 mmol), dissolvido em DMF (140mL) e aquecido a 80°C por 18h. Água (450mL) foi adicionada e extraída 3X com 500mL de Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas sobre MgSO₄ e evaporadas sob vácuo. Purificada por cromatografia de sílica gel (10-20% Et2O / éter de petróleo) para dar 8.7g (65%) de (S)-l-azido-2-(2-bromofenil)propan-2-ol como um óleo laranja.

(S)-l-azido-2-(2-bromofenil)propan-2-ol (8.7g, 34.0 mmol) e borato de triisopropila (9.4mL, 40.8 mmol) foram dissolvidos em 170mL de tolueno. A mistura de reação foi refluxada com um aparelho Dean / Stark para remover o tolueno e o resíduo foi dissolvido em 150mL de THF seco. Esta solução foi esfriada até -78°C e BuLi (25M em Hexanos, 15.6mL, 39.1 mmol) foi adicionado em gotas e agitado durante 30 min.. A mistura de reação foi aquecida até a temperatura ambiente e deixada a agitar por 3h antes

273 de é resfriada rapidamente com 50mL de HC1 6M e concentrada sob vácuo. Esta foi extraída 3X com lOOmL de DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO₄ e evaporadas sob vácuo. Purificada por cromatografia de sílica gel (20-30% Et2O / éter de petróleo) para dar 2.1g (30%) de (S)-3-(azidometil)-3-metilbenzo[c][l,2]oxaborol-l(3H)-ol como um óleo amarelo escuro.

(S)-3 -(azidometil)-3 -metilbenzo [c] [ 1,2]oxaborol-1 (3H)-ol (700mg, 3.45 mmol) e trifenila fosfina (1.8g, 6.9 mmol) foram dissolvidos em 35mL de acetonitrila. Depois de 5min. ácido clorídrico concentrado (6.9mL) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada por 24h a temperatura ambiente antes de é concentrada sob vácuo. O resíduo foi levado em DCM e lavado 3X com 20mL de HC1 2M. As camadas aquosas combinadas foram evaporadas até secura sob vácuo. O sólido resultante foi lavado com EtOH e filtrado para remover subprodutos, concentrado e cristalizado da acetonitrila para dar 160mg (20%) de cloridrato de (S)-3-(aminometil)-3metilbenzo[c][l,2]oxaborol-l(3H)-ol como um sólido branco.

'H RMN (300 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 9.35 (s, 1H), 8.08 (bs, 3H), 7.85-7.83 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.56-7.23 (m, 3H), 3.40-3.33 (m, 1H), 3.07-3.03 (m, 1H), 1.52 (s, 3H).

Cloridrato de (S)-3-(aminometil)-7-(3-hidroxipropoxi)-3metilbenzo[c][l,2]oxaborol-l(3H)-ol (A62)

274

Acetato de 7-(3-aminopropiltio)benzo[c] l~l,21oxaborol-l(3H)ol (A63)

1. BuLi

2. CO₂

O

OH

1. Procedimento Geral 7

2. AcOH, 80 °C,5h

Acido 2 (l-hidroxi-l,3-dihidrobenzo[c] [l,2]oxaborol-7 iltio)acético (A64)

275

Procedimento

Geral 5

7-(3-hidroxipropiltio)benzo[c][l,2]oxaborol-l (3H)-ol (A65)

1. BuLi

O

Na / piridina

O

2. CO₂

OH

3-Ammometil-7 - (3-hidroxi-propilthio) -3H-benzo [c] [1,2] cloridrato de oxaborol-l-ol (A66)

276

Pd(OH)2/AcOH

H2 3,18 kgf/cm² /

* Composto 3 é uma preparação da literatura. J. Heterocyclic

Chem. 18(3), 639-640, 1981.

3-Aminometil-6-(2-hidroxi-etilsulfanil)-3Hbenzo[c] [1,2] oxaborol-l-ol, sal de cloridrato (A67)

^thpo#^s'h

Br

CHO

Procedimento geral 5

Na₂CO₃, DMSO

Boc

2-(Tetra-hidro-piran-2-iloxi)-etanotiol podem ser gerado de

277

Procedimento geral 5 acordo com J. Med. Chem. 1999, 42, 706. 721.

3-Aminometil-6-(3-hidroxi-propilsulfanil)-3Hbenzoíc][l,2]oxaborol-l-ol sal de cloridrato (A68)

^thp0#^s'h

Br

CHO

Na₂CO₃, DMSO

3-(Tetra-hidro-piran-2-iloxi)-propano-l-tiol podem ser gerado de acordo com J. Med. Chem. 1999, 42, 706. 721.

EXEMPLO 2

Teste de MIC Antifúngica e Antibacteriana

Todo o teste MIC de bactérias seguiu as diretrizes de Clinicai and Laboratory Standards Institute (CLSI) para teste antimicrobial de bactérias aeróbicas (Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bactéria That Grow Aerobically; Approved Standard - Sétima Edição) (M07-A7) e bactérias anaeróbicas (Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bactéria; Approved Standard - Sétima Edição) (MllA7).

Testes MIC de leveduras e fungos filamentosos podem seguir as diretrizes do National Committee for Clinicai Laboratory Standards (NCCLS) para testes antimicrobiais de leveduras (M27-A2 NCCLS) e fungos filamentosos (Pfaller et al., Publicação NCCLS M38-A - Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous Fungi; Approved Standard. Wayne, PA: NCCLS; 2002 (Vol. 22, No. 16)..

EXEMPLO 3

278

Ensaio de gueratina

As afinidades dos compostos para pó de queratina podem ser determinadas por um método descrito em Tatsumi, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 46(12):3797-3801 (2002).

EXEMPLO 4

Ensaio para determinar que um composto inibe o domínio de edição de tRNA sintetase em uma bactéria

Este exemplo estabelece um ensaio representativo para determinar se um composto particular inibe o domínio de edição de um ARS em uma bactéria.

A tRNAleu mal carregada de [ H]-isoleucina foi sintetizada incubando 1 μΜ de Saccharomyces cerevisiae que edita Cdc60p defeituoso (C326F) em 500 pL de 50mM Tris-HCl (pH 8.0), 60mM MgCl₂, 4mM ATP, lmM DTT, 0.02% (p/v) BS A, 4mg/mL E.coli tRNA tRNA cru (Roche), isoleucina O.lmM e 5 mCi L-[4,5-3H]isoleucina (lOOCi/mmole, GE Healthcare) e 20% (v/v) DMSO por 1 hora a 30°C. A reação foi parada adicionando 10 pL de ácido acético 10% (v/v) seguido de duas extrações de fenol acídico (Sigma). O tRNA mal carregado na fase aquosa de topo foi removido e precipitado adicionando dois volumes de etanol 96% (v/v) e incubando a -20°C por 30 minutos. O precipitado foi peletizado por centrifugação a 13.200 xg por 30 minutos e o pelete de tRNA mal carregado foi lavado duas vezes com etanol 70% (v/v) e, então, resuspenso em tampão de fosfato de potássio 50 mM pH 5.2.

A reação foi terminada depois de 2 horas de incubação a 30°C pela adição de ácido acético até 0.17% (v/v). O tRNA^Leu cru isoleucilado foi purificado extraindo duas vezes com extrações de clorofórmio-fenol acídico (pH 4.3), seguido por precipitação de etanol. O pelete de tRNA foi lavado duas vezes com etanol 70%, secado e, então, resuspenso em fosfato de potássio 50 mM (pH 5.0) e armazenado a -20°C. Uma alíquota foi

279 precipitada com TCA 10% (p/v) para quantificar ile-tRNA^Leu.

Ensaios de hidrólise de edição pós-transferência foram conduzidos a 30°C em Hepes 50 mM (pH 8), MgCl₂ 10 mM, KC1 30mM com H-isoleucina-tRNA cru (~ 0.3 pCi / mL). Cada reação foi iniciada por adição da enzima 150 nM. A cada ponto no tempo três alíquotas de 20 pL da mistura de reação foram adicionadas a 200 pL de TCA 10% (p/v) em uma placa de filtro Millipore e precipitadas durante 20 minutos a 4°C. O precipitado foi filtrado e lavado três vezes com 200 pL de TCA 5% (p/v), então secado e 20 pL de coquetel de cintilação Supermix foram adicionados. As placas de filtro Millipore foram contadas no MicroBeta Trilux. O IC₅₀ foi determinado pela quantidade de inibidor que inibiu 50% da atividade, 100% de edição pós-transferência foram calculados levando em conta a atividade do controle sem enzima da atividade de enzima tipo selvagem.

Compare a concentração inibitória mínima (MIC) de uma cepa tolC Escherichia coli contendo um plasmídeo derivado de pUC e sem um inserto de gene leuS.

Se o MIC da cepa contendo as cópias extras de leuS for maior que 2 vezes mais a cepa de controle, então, irrigar as placas de ágar LB com quatro vezes a concentração do MIC do composto.

Colocar 1 χ 10¹⁰ E. coli em dez placas contendo 4 x MIC do composto. Incubar por 1-2 dias a 37°C e escolher dez colônias e recolocar em placas ágar 4 x MIC LB para confirmar resistência.

Levar uma colônia grande de cada um dos dez mutantes resistentes a E. coli e resuspender em 50 pL de tampão PCR.

Amplificar o domínio de edição de CDC60 usando uma enzima PCR de confirmação e os seguintes primers, ggcaccgtggacgtacgacaacatcgc e gggaaacaccccagtcgcgcaggcgg.

Purificar o produto PCR 980 bp usando kits de limpeza Qiagen ou Promega PCR.

280

Amplificar na sequência o DNA mutante e comparar o mesmo ao tipo selvagem. Se o DNA mutante contiver mutações no domínio de edição o inibidor afeta leucil-tRNA sintetase via domínio de edição.

EXEMPLO 5

Ensaio para determinar que um composto inibe o domínio de edição de tRNA sintetase em um fungo

Este exemplo detalha um ensaio exemplar para determinar se um composto selecionado inibe o domínio de edição de um ARS em um fungo.

O tRNAleu mal carregado de [³H]-isoleucina podem ser sintetizado incubando 1 μΜ de Saccharomyces cerevisiae que edita Cdc60p defeituoso (C326F) em 500 pL de Tris-HCl (pH 8.0) 50mM, MgCl₂ 60mM, ATP 4mM, DTT lmM, BSA 0.02% (p/v), tRNA de levedura de cervejeiro 16M (Roche), isoleucina 0.1 mM e 5 mCi L-[4,5-3H]isoleucina (lOOCi/mmole, GE Healthcare) e DMSO 20% (v/v) durante 1 hora a 30°C. A reação podem ser parada adicionando 10 pL de ácido acético 10% (v/v) seguido de duas extrações de fenol acídico (Sigma). O tRNA mal carregado na fase aquosa de topo podem ser removido e precipitado adicionando dois volumes de etanol 96% (v/v) e incubando a -20°C por 30 minutos. O precipitado podem ser peletizado por centrifugação a 13.200 xg por 30 minutos e o pelete de tRNA mal carregado foi lavado duas vezes com etanol 70% (v/v) e, então, resuspenso em tampão de fosfato de potássio 50 mM pH 5.2.

A reação podem ser terminada depois de 2 horas de incubação a 30°C pela adição de ácido acético até 0.17% (v/v). O tRNA^Leu cru isoleucilado podem ser purificado extraindo duas vezes com extrações de clorofórmio-fenol acídico (pH 4.3), seguido por precipitação de etanol. O pelete de tRNA podem ser lavado duas vezes com etanol 70%, secado e, então, resuspenso em fosfato de potássio 50 mM (pH 5.0) e armazenado a 281

20°C. Uma alíquota podem ser precipitada com TCA 10% (p/v) para quantificar ile-tRNA^Leu.

Ensaios de hidrólise de edição pós-transferência podem ser conduzidos a 25°C em Hepes 50 mM (pH 7,5), MgCl₂ 10 mM, KC1 30mM com ³H-isoleucina-tRNA cru (~ 0.3 pCi / mL). Cada reação podem ser iniciada por adição da enzima 150 nM. A cada ponto no tempo três alíquotas de 20 pL da mistura de reação podem ser adicionadas a 200 pL de TCA 10% (p/v) em uma placa de filtro Millipore e precipitadas durante 20 minutos a 4°C. O precipitado podem ser filtrado e lavado três vezes com 200 pL de TCA 5% (p/v), então secado e 20 pL de coquetel de cintilação Supermix podem ser adicionados. As placas de filtro Millipore podem ser contadas no MicroBeta Trilux. O IC₅₀ podem ser determinado pela quantidade de inibidor que inibiu 50% da atividade, 100% de edição pós-transferência foram calculados levando em conta a atividade do controle sem enzima da atividade de enzima tipo selvagem

EXEMPLO 6

Diálise de equilíbrio

Podem ser executados experimentos de diálise de equilíbrio em tampão lx AARS que contém Hepes-KOH 50 mM (pH 8.0), MgC12 30 mM e KC1 30 mM. Podem ser executados experimentos usando aparelho 5k MWCO DispoEquilibrium Dialyzer (Harvard Apparatus, Holliston, MA). Em um lado da membrana de diálise (lado A), composto da invenção [metileno-¹⁴C], 2.04 GBq / mmol (Amersham) foi adicionado a concentrações que variam de 1 para 200 pM em 20 pL. No lado oposto da membrana (lado B), recombinante CdcóOp 30 p M (LeuRS citoplásmico Saccharomyces cerevisiae) e AMP 10 mM (adenosina 5’-monofosfato, Sigma) foi adicionado em 20 pL. Foram incubadas amostras a temperatura ambiente (21°C) enquanto agitando por 4.5 h para estabelecer o equilíbrio do composto da invenção pela membrana. No equilíbrio, um composto da invenção em cada

282 lado da membrana de diálise foi quantificado por contagem de cintilação um contador de cintilação líquido Wallac MicroBeta Trilux modelo 1450. A quantidade de composto da invenção ligado a CdcóOp foi determinada subtraindo [composto da invenção]_A do [composto da invenção]_B.

Ensaio de troca de PPi

O ensaio de troca PPi podem ser executado em tampão lx AARS que contém Hepes-KOH de 50 mM (pH 8.0), MgCl₂ 30 mM e KC1 30 mM suplementado com ATP 2 mM e [³²P] PPi (10⁵ cpm/pmol), leucina 2 mM e recombinante CdcóOp 7nM. Também podem ser executados experimentos na presença ou ausência de composto da invenção (15 μΜ) e tRNA (16 μΜ). Depois de uma incubação de 20 minutos a 30°C, reações podem ser iniciadas pela adição de ATP. A vários intervalos de tempo, podem ser somados 45 pL de mistura de reação a 100 pL de ácido perclórico 2% e Na₄P₂O₇ 0.1 M para resfriar rapidamente a reação. ATP radioativo podem ser absorvido, então, em carvão ativado pela adição de 30 pL de uma suspensão 5% de Norit A lavado em ácido. Esta mistura podem ser filtrada através de filtros de vidro GF / C filtra e lavada 2x com 200 pL de água destilada, então, lx com 200 pL de etanol 95%. Os filtros podem ser secados e a cintilação contada usando um contador de cintilação líquido Wallac MicroBeta Trilux modelo 1450.

Síntese de tRNAleu Mal Carregado Tritiado

O tRNAleu mal carregado [³H]-isoleucina podem ser sintetizado incubando 1 pM de Saccharomyces cerevisiae que edita CdcóOp defeituoso (C326F) em 500 pL de Tris-HCl 50 mM (pH 8.0), MgCl₂ 60 mM, ATP 4mM, DTT lmM, 0.02% (p/v) BSA, tRNA de levedura de cervejeiro 16 pM (Roche), isoleucina O.lmM e 5 mCi L-[4,5-3H]isoleucina (lOOCi/mmole, GE Healthcare) e 20% (v/v) DMSO durante 1 hora a 30°C. A reação podem ser parada adicionando 10 pL de ácido acético 10% (v/v) seguido de duas extrações de fenol acídico (Sigma). O tRNA mal carregado na fase aquosa superior podem ser removido e precipitado adicionando dois volumes de

283 etanol 96% (v/v) e incubando a -20°C durante 30 minutos. O precipitado podem ser peletizado por centriíugação a 13.200 xg por 30 minutos e o pelete de tRNA mal carregado podem ser lavado duas vezes com etanol 70% (v/v) e, então, resuspenso em tampão de fosfato de potássio 50 mM pH 5.2.

Ensaio de Edição Pós-transferência

O substrato de tRNAleu mal carregado [³H)-isoleucina, 40nM, podem ser adicionado a Hepes-KOH 50mM pH 8.0, KC1 30mM, MgCl₂30mM, 0.02% (p/v) BSA, lmM DTT, 2.4 nM 5. cerevisiae Cdc60p a 30°C para começar a reação e alíquotas de 20 pL, tomadas em pontos no tempo estabelecidos, foram adicionadas a 200 pL de ácido tricloroacético (TCA) gelado 10% (p/v). Os precipitados de TCA podem ser lavados duas vezes com 200 pL de TCA gelado 5% (p/v) e filtrados por um filtro Multiscreen HTS HA (Millipore). Coquetel de cintilação Optiphase (Perkin Elmer) podem ser acrescentado aos filtros e o precipitado de TCA foi contado em um contador de cintilação líquido Wallac MicroBeta Trilux modelo 1450.

EXEMPLO 7

Analise para determinar que os compostos inibem atividade de síntese de AARS

Ensaios de aminoacilação podem ser conduzidos para determinar a taxa de síntese de leucine líquida / tRNA^Leu através de leucila tRNA sintetase. Podem ser executados experimentos em 500 pl de misturas de reação contendo tampão lx AARS (Hepes-KOH 50 mM. (pH 8.0), MgCl₂30 mM e KC1 30 mM) suplementado com [14C]-leucina (Perkin Elmer, 11,32 GBq/mmol), tRNA de levedura crua 16 pM, 0,02 BSA, ditiotreitol lmM, LeuRS (CDC60) de levedura recombinante 2nM e ATP 2 mM. As reações podem ser conduzidas a 30 graus Celsius. No tempo zero as reações podem ser iniciadas pela adição de ATP. A vários intervalos de tempo, podem ser adicionadas alíquotas de 20 pL a 150 pL de ácido tricloroacético (TCA) dentro de um único poço de uma pica de filtro de membrana de nitrocelulose

284 (Millipore Multiscreen HTS, MSHAN4B50). Cada poço podem ser lavado, então, 3x com 100 pL de TCA 5%. As placas de filtro podem, então, é secadas sob uma lâmpada de aquecimento e os complexos [14C]-leucina / tRNA^Leu foram quantificados por contagem de cintilação líquida usando um contador de cintiliação líquida Wallac MicroBeta Trilux 1450. Os efeitos inibitórios de compostos da invenção podem ser determinados por adição de até 100 pM do composto na mistura de reação durante 20 minutos antes da adição de ATP.

Será entendido que a invenção presente cobre todas as combinações de aspectos com todos os outros aspectos satisfatórios e/ou modalidades exemplares descritas neste. Será entendido que a invenção presente também cobre todas as combinações de modalidades exemplares com todos os outros aspectos satisfatórios e/ou modalidades exemplares descritas neste.

É compreendido que os exemplos e as modalidades descritas neste são para propósitos ilustrativos apenas e que várias modificações ou mudanças à luz das mesmas serão sugeridas por pessoas qualificadas na arte e serão incluídas dentro do espírito e escopo deste pedido e no âmbito das reivindicações apensas. Todas as publicações, patentes e pedidos de patente citados neste são por este meio incorporadas através de referência na sua totalidade para todos os propósitos.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto, caracterizado pelo fato de que tem uma estrutura

de acordo com a fórmula: ^R or* rFBo h r³

em que

R* é H;

R³ é -CH2NH2;

R^a é H ou -YR⁵em que

Y é O ou S;

R⁵ é:

em que a é um inteiro selecionado de 1 a 10, e opcionalmente selecionado de 1 a 5;

cada R¹⁰ e cada R¹¹ é independente selecionado de H, alquila substituída ou não substituída, OH ou NH2;

R¹² é selecionado de H, R⁷, amidino, OR⁷, NR⁷R⁸, SR⁷, C(O)R⁷, -C(O)OR⁷, -C(O)NR⁷R⁸, em que cada R⁷ e cada R⁸ é independentemente selecionado de H, alquila substituída ou não substituída, heteroalquila substituída ou não substituída, cicloalquila substituída ou não substituída, heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída ou heteroarila substituída ou não substituída;

com a condição de que R^a e R^*, junto com os átomos aos quais

Petição 870190001728, de 07/01/2019, pág. 7/12 eles estão ligados, são opcionalmente combinados para formar um anel heterocicloalquil substituído ou não substituído de 6 a 10 mesmbros;

em que o termo “alquil” significa C1-C10 alquila; e em que os substituintes dos radicais alquila são cada um independentemente seleccionados do grupo que consiste em -R', -OR', =O, =NR', =N-OR', NR'R, -SR', -halogênio, -SiR'RR', -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R, -OC(O)NR'R, -NRC(O)R', -NR'-C(O)NRR', -NRC(O)2R', -NR.....C(NR'RR')=NR , -NR-C(NR'R)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', S(O)2NR'R, -NRSO2R', -CN, -NO2, -N3, -CH(Ph)2, fluoro(C1-C4)alcoxi e fluoro(C1-C4)alquilo, em números que variam de zero a (2m' + 1), onde m' é o número total de átomos de carbono no grupo alquila e em que R', R, R', R e R.....referem-se independentemente a hidrogênio, heteroalquila, arila, grupos alquila, alcoxi, tioalcoxi ou grupos arilalquila.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que tem uma estrutura de acordo com a fórmula:

em que

C* é um átomo de carbono, em que C* é um estereocentro que tem uma configuração (S).
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que R³ é -CH2NH2 e o estereocentro C* está em uma configuração (S).
4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que cada R¹⁰ e cada R¹¹ é independentemente selecionado de H, OH ou NH2.
5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que cada R¹⁰ e cada R¹¹ é independentemente

Petição 870190001728, de 07/01/2019, pág. 8/12 selecionado de H, hidroxialquila ou NH2.
6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações

1 a 5, caracterizado pelo fato de que

R¹² é selecionado de H, amidino, OR⁷, NR⁷R⁸, -C(O)OR⁷ ou C(O)NR⁷R⁸;

cada R⁷ e cada R⁸ é independentemente selecionado de H, alquila C1-C4 substituída ou não substituída, heteroalquila substituída ou não substituída, cicloalquila substituída ou não substituída, heterocicloalquila substituída ou não substituída, arila substituída ou não substituída ou heteroarila substituída ou não substituída; e em que R⁹ é alquila C1-C4 substituída ou não substituída.
7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que R¹² é selecionado de H, OH, NH2, -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3, -NHC(O)CH3, -NHC(O)NHCH2CH3, -C(O)NH2, C(O)OH, 4-(metóxi)fenila, benzila, -NHC(O)OCH2Ph, -C(O)NHCH2CH2OH ou -C(NH2)(NH).
8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações

1 a 5, caracterizado pelo fato de que

R³ é -CH2NH2; e

R^a é selecionado de H, -O(CH2)3NH2, -O(CH2)3OH, -OCH2CH3, -O(CH2)3NHS(O)2CH3, -O(CH2)3CN, -O(CH2)3NHC(O)CH3, -O(CH2)3NHCH3, -O(CH2)3OCH3, -O(CH2)4OH, -OCH3, -O(CH2)3NHC(O)NHCH2CH3, O(CH2)3C(O)NH2, -O(CH2)3C(O)OH, -O(CH2)4NH2, -O(CH2)2NH2, OCH2CH2CH(NH2)CH2OH, -OCH2Ph(4-metóxi), -O(CH2)4OCH2Ph, O(CH2)3NHC(O)OCH2Ph, -OCH2C(O)NH(CH2)2OH, -O(CH2)3NHC(O)CH3, O(CH2)3C(NH2)(NH), -OCH2C(O)OH ou -OCH2CH(CH2OH)(CH2)OH.
9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações

1 a 5, caracterizado pelo fato de que

R³ é -CH2NH2; e

Petição 870190001728, de 07/01/2019, pág. 9/12

R¹² é selecionado de H, OH, NH₂, -CH₃, -CH₂CH₃, CH2CH2CH3, -NHC(O)CH₃, -NHC(O)NHCH₂CH₃, -C(O)NH₂, -C(O)OH, 4(metóxi)fenila, benzila, -NHC(O)OCH₂Ph, -C(O)NHCH₂CH₂OH ou C(NH₂)(NH).
10. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que tem uma estrutura que é em que R* é H.
11. Composto, caracterizado pelo fato de que é ou um sal do mesmo.

10
12. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o sal é um sal farmaceuticamente aceitável.
13. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que é
14. Formulação farmacêutica, caracterizada pelo fato de que
15 compreende:

a) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e

b) um excipiente farmaceuticamente aceitável.

15. Uso de um composto como definido em qualquer uma das

Petição 870190001728, de 07/01/2019, pág. 10/12 reivindicações 1 a 10 ou 11 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para exterminar ou prevenir o crescimento de um microorganismo.
16. Uso de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo 5 fato de que o microorganismo é uma bactéria.
17. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10 ou 11 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para tratar e/ou prevenir uma infecção microbiana em um animal.

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18. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a infecção microbiana é uma infecção bacteriana.
19. Uso de acordo com a reivindicação 17 ou 18, caracterizado pelo fato de que o animal é um humano.