EA020069B1 - Жидкая лекарственная форма конъюгата - Google Patents

Жидкая лекарственная форма конъюгата Download PDF

Info

Publication number
EA020069B1
EA020069B1 EA201070315A EA201070315A EA020069B1 EA 020069 B1 EA020069 B1 EA 020069B1 EA 201070315 A EA201070315 A EA 201070315A EA 201070315 A EA201070315 A EA 201070315A EA 020069 B1 EA020069 B1 EA 020069B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
pharmaceutical composition
composition according
aqueous pharmaceutical
polymer
conjugate
Prior art date
Application number
EA201070315A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201070315A1 (ru
Inventor
Вальтер Хиндерер
Кристиан Шеккерманн
Original Assignee
Биодженерикс Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Биодженерикс Аг filed Critical Биодженерикс Аг
Publication of EA201070315A1 publication Critical patent/EA201070315A1/ru
Publication of EA020069B1 publication Critical patent/EA020069B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
    • C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
    • C07K17/08—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a synthetic polymer

Abstract

Настоящее изобретение относится к жидкой фармацевтической композиции, содержащей полипептид гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, конъюгированный с полимером, причем композиция имеет значение рН в диапазоне от 4,5 до 5,5. Композиция дополнительно содержит сурфактант и необязательно одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ. Дополнительно, композиция в настоящем изобретении не содержит винной кислоты и ее солей, а также янтарной кислоты и ее солей в качестве буферных веществ и не содержит аминокислот в качестве стабилизаторов. Композиция обладает хорошей устойчивостью при хранении и особенно удобна для профилактики и лечения расстройств и при медицинских показаниях, при которых композиции гранулоцитарных колониестимулирующих факторов рассматриваются как подходящие лекарственные средства.

Description

Настоящее изобретение относится к жидкой фармацевтической композиции, содержащей полипептид гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, конъюгированный с полимером, причем композиция имеет значение рН в диапазоне от 4,5 до 5,5. Композиция дополнительно содержит сурфактант и необязательно одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ. Дополнительно, композиция в настоящем изобретении не содержит винной кислоты и ее солей, а также янтарной кислоты и ее солей в качестве буферных веществ и не содержит аминокислот в качестве стабилизаторов. Композиция демонстрирует хорошую устойчивость при хранении и особенно удобна для профилактики и лечения расстройств и при медицинских показаниях, при которых композиции гранулоцитарных колониестимулирующих факторов рассматриваются как подходящие лекарственные средства.
Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (С-С8Г) представляет собой гематопоэтический фактор роста, стимулирующий пролиферацию и дифференцировку гематопоэтических клетокпредшественников и активацию зрелых нейтрофилов. С-С8Г может способствовать пролиферации нейтрофилов ίη νίΐΓΟ и ίη νίνο. Человеческая форма 6-С8Г была клонирована группами из Японии и США в 1986 (см., например, Ыада1а с1 а1. (1986), №11иге 319: 415-418). Природный человеческий гликопротеин существует в двух формах, одна из которых содержит 174, а другая 177 аминокислот. Более распространенная и более активная 174-аминокислотная форма используется при разработке фармацевтических продуктов по технологии рекомбинантной ДНК.
Большие количества рекомбинантного С-С8Р были продуцированы с помощью полученной генетическим путем ЕксйепсЫа со11 и успешно применялись в медицинской практике для лечения раковых пациентов, страдающих от нейтропении, вызванной химиотерапией. ЕксйепсЫа соБ-продуцированный СС8Г представляет собой 175-аминокислотную полипептидную цепь, содержащую дополнительный метионин на Ν-конце. Белок продуцировался путем экспрессии гена С-С8Г в Е.сой и очистки белкового продукта до однородного состояния. Это гидрофобный белок, содержащий 5 цистеиновых остатков, четыре из которых задействованы в образовании дисульфидных связей. Свободный цистеиновый остаток обычно вовлекается в образование агрегатов большего молекулярного веса при хранении в растворе. Агрегаты белков также могут образовываться из окисленных форм белка, которые появляются путем окисления внутренних метиониновых остатков в первичной последовательности белка. Из четырех метиониновых остатков один находится на Ν-конце и три остальных - внутренние. Окисленные формы белка, содержащие окисленный метионин в положении 122, могут быть отделены от форм, содержащих окисленный метионин в положениях 127 или 138, и от нативного белка путем обычных процедур разделения обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (положения рассчитаны для метионил-С-С8Г, состоящего из 175 аминокислот).
Рекомбинантный человеческий С-С8Р, синтезированный с помощью системы экспрессии Е.сой, называется филграстим (международное непатентованное наименование, МНН). Структура филграстима несколько отличается от природного гликопротеина. Другая форма рекомбинантного человеческого СС8Р называется ленограстим (МНН) и синтезируется в клетках яичников китайского хомячка (СНО). Филграстим и ленограстим продаются в Европе под торговыми наименованиями №иродеп® и Сгапосу1е соответственно.
Однако коммерчески доступные формы рекомбинантного человеческого С-С8Р обладают кратковременным фармакологическим действием и часто должны вводиться более одного раза в день в течение всего состояния лейкопении. Молекула с большим сроком полужизни циркуляции в крови снизила бы число введений, необходимых, чтобы облегчить лейкопению и предотвратить последующие инфекционные заболевания.
Другая проблема доступных в настоящее время продуктов рекомбинантного человеческого С-С8Р состоит в возникновении дозозависимой боли в костях. Так как пациенты испытывают боль в костях как значительный побочный эффект лечения рекомбинантным человеческим С-С8Р, то было бы желательно создать продукт рекомбинантного человеческого С-С8Р, который бы не вызывал боль в костях, либо по своей природе, либо эффективный в количествах, достаточно малых, чтобы не вызывать или, по меньшей мере, вызывать меньшую боль в костях. Таким образом, очевидна необходимость в усовершенствованных молекулах С-С8Р и фармацевтических композициях, содержащих молекулы С-С8Р, в виде устойчивых, готовых к использованию композиций.
Варианты человеческого С-С8Р с измененной структурой белка были опубликованы, например, среди вариантов С-С8Р, описанных в АО 01/87925, ЕР 0456200 А, И8 6166183, И8 6004548, И8 5580755, υδ 5582823, ϋδ 5675941, ϋδ 5416195, ϋδ 5399345, АО 2005/055946 и АО 2006/074467.
Также опубликована модификация человеческого С-СδР и других полипептидов для введения по меньшей мере одной дополнительной углеводородной цепи по сравнению с нативным полипептидом (υδ 5218092). Дополнительно, были опубликованы и исследованы полимерные модификации нативного человеческого С-СδР, включая присоединение полиэтиленгликольных (ПЭГ) групп (υδ 5824778, υδ 5824784, АО 96/11953, АО 95/21629 и АО 94/20069).
Обычно принимается, что устойчивость белков может быть повышена, а иммунный ответ против этих белков снижен, когда эти белки связаны с полимерными молекулами. АО 94/28024 раскрывает, что физиологически активные белки, измененные ПЭГ, проявляют пониженную иммуногенность и антиген
- 1 020069 ность и циркулируют в кровяном русле значительно дольше, чем неконъюгированные белки, т.е. обладают сниженной скоростью выведения.
В настоящей области известно присоединение синтетических полимеров к пептидному скелету в целях попытки улучшить фармакокинетические свойства гликопротеиновых лекарственных средств. Примером полимера, конъюгированного с пептидами, служит ПЭГ. Использование ПЭГ с целью получить пептидные лекарственные средства показало снижение иммуногенности пептидов. Например, патент И8 № 4179337 раскрывает неиммуногенные полипептиды, такие как ферменты и пептидные гормоны, связанные с ПЭГ или полипропиленгликолем (ППГ). В дополнение к сниженной иммуногенности, время выведения из системы кровообращения увеличено благодаря увеличенному размеру ПЭГконъюгата рассматриваемых полипептидов.
Пэгфилграстим (МНН) представляет собой ковалентный конъюгат рекомбинантного метионильного человеческого С-С8Г (филграстим) и одиночной 20 кДа молекулы монометокси-ПЭГ. Молекула монометокси-ПЭГ ковалентно связана с Ν-концевым метионильным остатком филграстима. Пэгфилграстим продается в Европе под торговым наименованием №и1а81а®.
Основная форма присоединения ПЭГ и его производных к пептидам представляет собой неспецифическое связывание через аминокислотный остаток пептида (см., например, И8 4088538, И8 4496689, И8 4414147, И8 4055635 и АО 87/00056). Другая форма присоединения ПЭГ к пептидам - через неспецифическое окисление гликозильных остатков на гликопептиде (см., например, АО 94/05332).
В данных неспецифических методах ПЭГ присоединяется случайным, неспецифическим образом, к реакционноспособным остаткам на пептидном скелете. Случайное присоединение молекул ПЭГ имеет свои недостатки, включая недостаточную однородность конечного продукта и возможность снижения биологической или ферментативной активности пептида. Следовательно, в течение последних лет были предприняты попытки разработать более сайт-специфические методы присоединения синтетического полимера или другой метки к пептиду и было обнаружено, что специфически конъюгированные однородные пептидные лекарственные средства можно получить ίη νίίτο с помощью действия ферментов. Такие конъюгаты на основе ферментов имеют преимущества региоселективности и стереоселективности. Два основных класса ферментов для применения в синтезе конъюгированных пептидов представляет собой гликозилтрансферазы (например, сиалилтрансферазы, олигосахарилтрансферазы, Νацетилглюкозаминилтрансферазы) и гликозидазы. Эти ферменты могут быть использованы для специфического присоединения сахаров, которые в дальнейшем могут быть изменены для того, чтобы содержать в себе лекарственные вещества. Альтернативно, гликозилтрансферазы и модифицированные гликозидазы могут быть использованы для точного перенесения модифицированных сахаров на пептидный скелет (см., например, И8 6399336 и И8 2003/0040037, И8 2004/0132640, И8 2004/0137557, И8 2004/0126838 и И8 2004/0142856). Также известны способы, сочетающие как химические, так и ферментативные синтетические элементы (см., например, И8 2004/137557).
Хорошо известны и подробно описаны в известном уровне технике различные способы конъюгирования полипептидов, таких как С-С8Е, с полимерными фрагментами, такими как ПЭГ. Получение гликопэгилированного С-С8Е описано, например, в АО 2005/055946. Другая заявка на патент, направленная на получение конъюгатов между С-С8Е и фрагментами ПЭГ, - АО 2006/074467. При этом способе такие конъюгаты образуются через гликозильную линкерную группу в неизменном виде, расположенную между и ковалентно присоединенную к полипептиду С-С8Е и модифицирующей группе. С помощью действия гликозилтрансферазы конъюгаты образуются как из гликозилированного, так и из негликозилированного полипептидов С-С8Е. Гликозилтрансфераза сшивает фрагменты модифицированного сахара либо с аминокислотным, либо с гликозильным остатком на полипептиде. На раскрытие АО 2005/055946 и АО 2006/074467 явным образом дается ссылка в контексте настоящего изобретения.
Кроме ПЭГ, другие полимерные фрагменты также были описаны как подходящие для конъюгирования с С-С8Е и другими лечебными белками. АО 02/09766 раскрывает, среди прочих, биосовместимые соединения белок-полимер, продуцированные путем конъюгирования биологически активного белка с производным биосовместимого полимера. Применяемые биосовместимые полимеры представляют собой высокоактивные разветвленные полимеры и получаемые конъюгаты содержат длинный линкер между производным полимера и белком. Примерами биосовместимых полимеров согласно АО 02/09766 служат ПЭГ, ППГ, полиоксиэтилен (ПОЭ), политриметиленгликоль, полимолочная кислота и ее производные, полиакриловая кислота и ее производные, полиаминокислоты, полиуретан, полифосфазен, поли(Ьлизин), полиалкиленоксид (ПАО), водорастворимые полимеры, такие как полисахарид, декстран, а также неиммуногенные полимеры, такие как поливиниловый спирт (ПВС) и полиакриламид.
АО 94/01483 раскрывает биосовместимые конъюгаты полимеров, образованные путем ковалентного связывания биологически неактивного полимера или производного полимера с фармацевтически чистым синтетическим гидрофильным полимером, через специфические типы химических связей. В качестве природных полимеров и их производных раскрыты полисахариды, такие как гиалуроновая кислота; протеогликаны, такие как хондроитинсульфаты А, В, и С, хитин, гепарин, гепаринсульфат; декстраны, такие как циклодекстран, гидроксиэтилцеллюлоза, простой эфир целлюлозы и крахмал; липиды, такие как триглицериды и фосфолипиды.
- 2 020069 \νϋ 96/11953 описывает Ν-концевые химически модифицированные белковые соединения и способы их производства. В частности, описываются соединения С-С8Р, получаемые путем связывания водорастворимого полимера с Ν-концом С-С8Р. Примеры водорастворимых полимеров, перечисленные в νθ 96/11953, представляют собой сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлозу, декстран, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, поли-1,3-диоксолан, поли-1,3,6триоксан, сополимер этилен/малеинового ангидрида, полиаминокислоты (либо гомополимеры, либо случайные сополимеры), поли(п-винилпирролидон)полиэтиленгликоль, гомополимеры ППГ, сополимеры оксида полипропилена/оксида полиэтилена или полиоксиэтилированные многоатомные спирты.
νθ 97/30148 описывает конъюгаты полипептидов с пониженной аллергенностью, содержащие полимерную молекулу-носитель с двумя или более связанными с ней молекулами полипептида. Эти конъюгаты образуются путем активации полимерной молекулы-носителя, реакции двух или более молекул полипептида с активированной полимерной молекулой-носителем и блокировкой остаточных активных групп соединения. νθ 97/30148 перечисляет ряд полимерных молекул-носителей, включая природные или синтетические гомополимеры, такие как многоатомные спирты, полиамины, поликарбоновые кислоты, и гетерополимеры, содержащие по меньшей мере две разные присоединенные группы. Приводятся примеры, включающие в себя звездообразные ПЭГ, разветвленные ПЭГ, поливиниловые спирты, поликарбоксилаты, поливинилпирролидоны и поли-Э,Ь-аминокислоты. Конъюгаты в νθ 97/30148 также включают в себя такие, которые содержат декстраны, такие как карбоксиметиловый декстран, целлюлозы, такие как гидроксиэтилцеллюлоза или гидроксипропилцеллюлоза, гидролизаты хитозана, крахмалы, такие как гидроксиэтиловые крахмалы или гидроксипропиловые крахмалы, гликоген, агарозу, гуаровую камедь, инулин, пуллулан, ксантановую камедь, каррагинин, пектин, альгиновую кислоту и т.д.
νθ 03/074087 относится к способу связывания белков с модифицированными полисахаридами, получаемыми из крахмала. Процесс связывания между белком и полисахаридом, гидроксиалкиловым крахмалом, представляет собой образование ковалентной связи между концевой альдегидной группой или функциональной группой, получаемой путем химической модификации указанной концевой альдегидной группы молекулы гидроксиалкилового крахмала, и функциональной группой белка. В качестве реакционноспособной группы белка раскрыты аминогруппы, тиогруппы и карбоксильные группы. νθ 2005/014050 описывает получение конъюгатов гидроксиалкилового крахмала (ГАК) и белка С-С8Р. где по меньшей мере одна функциональная группа полимера или его производного реагирует по меньшей мере с одной функциональной группой белка, тем самым образуя ковалентную связь. Другие известные в настоящей области документы, относящиеся к ГАК-илированию, предпочтительно к ГЕКилированию (присоединению гидроксиэтилового крахмала), полипептидов, - νθ 2005/014655, νθ 2005/092390, νθ 2007/031266, νθ 2005/092928 и νθ 2005/092391.
Хотя в настоящей области описано несколько подходов к модификации лечебных полипептидов, таких как С-С8Р, полимерными фрагментами для того, чтобы увеличить время их выведения и чтобы снизить иммуногенность, но в разработке выгодных лекарственных форм для таких полимер-С-С8Рконъюгатов проделано, по-видимому, недостаточно работы.
Вышеуказанный продукт №и1а§1а® представляет собой жидкую композицию, предназначенную для подкожных инъекций. Композиция содержит пэгфилграстим, ацетат натрия, сорбит, полисорбат 20 и воду для инъекций и имеет рН, равный 4,0 (см. Ы1р://тетете.иеи1а81а.сот и ВОТЕ Ь18ТЕ 2007). Продукты №и1а§1а® и №иродеи®, оба продаваемые Атдеи, почти идентичны в отношении буферного вещества, вспомогательных веществ и значения рН раствора: №иродеи® содержит филграстим (вместо пэгфилграстима), ацетат натрия, сорбит, полисорбат 80 и воду для инъекций и имеет рН, равный 4,0 (см. 1Шр://\\л\л\\№иродеп.сот и ВОТЕ Ь18ТЕ 2007). Настоящее изобретение направлено на жидкие фармацевтические композиции, содержащие полимер-С-С8Р-конъюгат, причем композиции были особым образом разработаны с учетом характеристик полимер-С-С8Р-конъюгатов. Хотя в настоящей области было опубликовано несколько подходов в отношении лекарственных форм, содержащих неконъюгированные С-С8Р, об удобных композициях конъюгатов полимер-С-С8Р известно мало.
Хотя в патентной литературе представлены некоторые фармацевтические композиции, разработанные для неконъюгированного С-С8Р, так, чтобы охватить композиции, в которых неконъюгированный С-С8Р, заменен конъюгатом ПЭГ-С-С8Р, очевидно, что эти композиции предназначены и проверены только для неконъюгированного С-С8Р.
Например, νθ 2005/042024 описывает устойчивые фармацевтические композиции, содержащие СС8Р, причем композиция имеет значение рН более 4,0 и дополнительно содержит кислоту, но не содержит сурфактантов. Хотя фармацевтическая композиции, описанная в νθ 2005/042024, явно была разработана для неконъюгированного С-С8Р, в инструкции упоминается, что она также включает в себя СС8Р, химически модифицированный ПЭГ или т.п., проявляющий такую же или повышенную биологическую активность.
Другим примером служит νθ 2005/039620, также направленная на устойчивую водную композицию, содержащую С-С8Р. Композиция содержит янтарную кислоту, или винную кислоту, или их соли в качестве буферных веществ и имеет предпочтительное значение рН в диапазоне от 4,0 до 5,8. Согласно
- 3 020069 инструкции белок С-С8Е также может быть синтетически модифицирован, например, путем ферментативного гликозилирования или химического пэгилирования.
ЕР 1260230 А1 раскрывает устойчивые лекарственные формы белка, содержащие триптофан в качестве стабилизатора. Список белков покрывает С-С8Е, а также С-С8Е, химически модифицированный ПЭГ и т.п. Отмечено, что лекарственные формы О-С8Е предпочтительно должны иметь рН от 5 до 7, более предпочтительно от 6,0 до 6,7.
Другой пример представляет собой ЕР 1336410 А1, которая описывает инъецируемые фармацевтические лекарственные формы, содержащие физиологически активный белок в качестве активного ингредиента и по меньшей мере один сахар в качестве успокаивающего средства и имеющие рН от 6,5 до 7,4. В этом случае тоже отмечено, что О-С8Е, химически модифицированный ПЭГ и т.п., также включается.
ЕР 1329224 А1 описывает лекарственную форму раствора О-С8Е, содержащую по меньшей мере одну аминокислоту или ее соль, предпочтительно метионин, в качестве стабилизатора.
Лекарственные формы растворов О-С8Е предпочтительно должны иметь рН от 5 до 7, более предпочтительно от 5,5 до 6,8. В этом случае тоже оговорено, что О-С8Е, химически модифицированный ПЭГ и т.п., также включается.
Однако ни одна из лекарственных форм, известных в настоящей области, не представляет собой лекарственную форму, содержащую специфический полимер-О-С8Е-конъюгат. Точнее, описываемые в патентной литературе растворы разрабатывались и испытывались только для неконъюгированного ОС8Е.
Задача, лежащая в основе настоящего изобретения, - обеспечить композицию полимер-О-С8Еконъюгата, предназначенного для таких конъюгатов, которая при этом была бы устойчива при повышенных температурах, т.е. выше температуры холодильника, которая обычно находится в пределах от 2 до 8°С. Дополнительно, цель настоящего изобретения - обеспечить фармацевтическую композицию, не требующую восстановления ни на одной стадии изготовления и вызывающую настолько слабое раздражение при введении пациенту, насколько это возможно.
Эти проблемы решаются согласно настоящему изобретению путем получения водной фармацевтической композиции, содержащей конъюгат полимер-О-С8Е, причем рН композиции находится в диапазоне от 4,5 до 5,5. Водная композиция в настоящем изобретении содержит сурфактант и необязательно одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ. В предпочтительном варианте осуществления композиция не содержит аминокислот или их производных либо солей в качестве стабилизаторов и не содержит винной кислоты и ее солей, янтарной кислоты и ее солей в качестве буферных веществ.
Неожиданно было обнаружено, что составление рецептуры конъюгата полимер-О-С8Е в составе композиции, имеющей значение рН в диапазоне от 4,5 до 5,5, предпочтительно 5,0, предотвращает кислотный гидролиз образующей этот конъюгат связи. Такой спектр рН повышает устойчивость раствора при температурах выше температуры холодильника (2-8°С), в особенности при комнатной температуре (т.е. ниже 25°С) и даже при более высоких температурах, например при 40°С. Это означает, что композиция может храниться без охлаждения в течение длительного времени без существенной потери активности и без значительного ухудшения свойств.
Дополнительно, безотносительно устойчивости при хранении, композиции в настоящем изобретении обладают преимуществом по сравнению с композициями, имеющими рН 4,0, так как менее кислая композиция вызывает более слабое раздражение при введении пациенту.
Пока не указано другое, последующие определения даются для того, чтобы проиллюстрировать и определить значение и объем различных терминов, используемых здесь для того, чтобы описать настоящее изобретение.
Термин конъюгат полимер-О-С8Е относится к конъюгату между полипептидом О-С8Е и полимером, причем конъюгат образуется с помощью ковалентной связи между функциональной группой полимера и функциональной группой полипептида.
Конъюгаты могут содержать один или более полимерных фрагментов.
Термин О-С8Е (или полипептид О-С8Е, или белок О-С8Е, или пептид О-С8Е) относится к белку, ίη νίνο имеющему биологическую активность природного человеческого О-С8Е, т.е. к белку, способному стимулировать дифференцировку и пролиферацию гематопоэтических клеток-предшественников. О-С8Е может быть безошибочно определен как О-С8Е согласно анализу, описанному у 81и1е, Ν., е1 а1. Рйагтасокшейск о£ 5нЬсн1апеои5 тесотЫпап! йитап дгапи1осу1е со1опу-811ти1а1тд ГасЮг ίη сйПбтеп (1992), Βίοοά 79 (11), р. 2849-2854.
В примерном варианте осуществления О-С8Е имеет аминокислотную последовательность согласно последующей 8ЕО ГО ΝΟ: 1 или 8ЕО ГО ΝΟ: 2, где 8Е0 ГО N0: 1 отображает аминокислотную последовательность дикого типа человеческого метионил-О-С8Е, такую, которая продуцируется в Е.сой, и 8Е0 ГО N0: 2 отображает аминокислотную последовательность человеческого 0-С8Е, такую, которая продуцируется в клетках млекопитающих, например, в клетках яичников китайского хомячка (СНО). 8Е0 ГО N0: 1 представляет собой 175-аминокислотный вариант, в котором первая аминокислота представляет собой метионин и в котором присутствует треониновый остаток на Тйг 134. 8Е0 ГО N0: 2 представляет
- 4 020069 собой 174-аминокислотный вариант, имеющий такую же последовательность аминокислот, как и 175аминокислотный вариант, за исключением того, что первый метионин отсутствует, таким образом последовательность начинается с Т и треониновый остаток присутствует в положении 133.
8Е0 ГО N0: 1:
МТРЬОРАКЗЬРОЗРЬЬКСЬЕОУКЫОбОбААЬОЕКЬСАТУКЬСНРЕЕЕУ ЕЕСН8ЬО1Р\УАРЕ88СР80АЕ0ЕАССЕ8рЕН86ЬГЬ¥96Ш2АЕЕС18РЕ ЬОРТЕВТЬЦЬПУАОРАТП^ЦЦМЕЕЫЗМАРАЬрРТОСАМРАГАЗАГО КЕАССУЕУАЙНЕОЗГЪЕУЗУКУЕКНЕАОР (175 аминокислот)
8Е0 ГО N0: 2:
ТРЕСРАЗЗЕРОЗР'ЕЕКСЕЕОУКШрСОСААЬОЕКЬСАТУКТ.СИРЕЫД^ Е6Н8ЕС1Р5УАРЕ88СР89АЕрЕАОСЕ80ЕН8ОЕРЕУ0ОЕЕ0АЕЕС18РЕЕ 6ΡΤΕΟΤΕ0Ε0νΑΟΕΑΤΤΙ4Τ)0ΜΕΕΕϋΜΑΡΑΕζ)ΡΤ0ΟΑΜΡΑΕΑ8ΑΕζ)Ρ КАОСУЕУАЗНЕОЗГБЕУЗУКУЕКНЕАОР (174 аминокислоты)
Специалист в данной области без труда поймет, что настоящее изобретение не ограничивается отображенными здесь последовательностями, но также включает в себя варианты С-С8Г. Такие варианты хорошо известны в данной области. Они могут содержать удаления, замены или добавления одной или более аминокислот в отображенных выше аминокислотных последовательностях, сохраняя при этом биологическую активность природного С-С8Е. В качестве примеров, но никоим образом не предназначенных для ограничения настоящего изобретения, варианты С-С8Е описаны в \У0 01/87925, ЕР 0456200 А, И8 6166183, И8 6004548, И8 5580755, И8 5582823, И8 5675941, И8 5416195, И8 5399345, \\'0 2005/055946 и \\'0 2006/074467.
Полипептид С-С8Е может быть гликозилированным или негликозилированным. В предпочтительном варианте осуществления полипептид С-С8Е представляет собой рекомбинантный человеческий СС8Е, продуцированный в Ε.οοίί, т.е. имеющий аминокислотную последовательность, отображенную выше в 8Е0 ГО N0: 1, или ее вариант.
Полимер может быть любым полимером, который может быть ковалентно связан с полипептидом С-С8Е и который образует терапевтически полезный полимер-С-С8Е-конъюгат при ковалентном связывании с полипептидом С-С8Е. Несколько подходящих полимеров уже упоминались выше во вводной части, включая поли(алкиленгликоли), такие как ПЭГ и ППГ, гидроксиалкиловые крахмалы, такие как гидроксиэтиловый крахмал (ГЭК), а также полимеры, описанные в \У0 02/09766, \У0 96/11953 и \У0 97/30148 в связи с конъюгатами полимер-полипептид. В предпочтительном варианте осуществления полимер представляет собой ПЭГ.
Все характеристики концентрации в мг/мл, применяемые в дальнейшем в связи с конъюгатом полимер-С-С8Г, относятся только к фрагменту С-С8Г. Фрагмент ПЭГ по определению не рассматривается в отношении концентрации по массе.
В то время как филграстим имеет молекулярный вес около 18-19 кДа, пэгфилграстим - намного больше, благодаря фрагменту монометокси-ПЭГ, и имеет молекулярный вес около 39 кДа. Полимер-СС8Г-конъюгаты в настоящем изобретении могут иметь молекулярный вес в диапазоне от 20 до 60 кДа, предпочтительно в диапазоне от 35 до 45.
В настоящей области раскрыты подходящие ПЭГ, например в \У0 2005/055946, \У0 2006/074467 и \У0 01/87329. Фрагмент ПЭГ может быть линейным или разветвленным и может иметь размеры от 5 до 40 кДа. Предпочтительно, чтобы фрагмент ПЭГ имел молекулярный вес от 15 до 25 кДа, более предпочтительно около 20 кДа.
Способы производства полимер-С-С8Г-конъюгатов также описаны в данной области. Документы, упомянутые выше в связи с композициями конъюгатов между полипептидами и полимерными фрагментами, настоящим включены сюда в виде ссылок.
Другие полимер-С-С8Г-конъюгаты, полезные в настоящем изобретении, подробно описаны в \У0 96/11953, ЕР 822199 А, \\'0 01/51510, \\'0 2006/0128460, ЕР 921131 А и ЕР 744409. Настоящим явным образом делается ссылка на открытия этих документов, т.е. на описанные в них конъюгаты и способы их производства.
Специалист в данной области без труда определит, что настоящее изобретение не ограничивается конъюгатами, в которых полимер, такой как ПЭГ, или ГЭК, напрямую связан с аминокислотным остатком белка, но также охватывает конъюгаты, в которых полимерный фрагмент и полипептид С-С8Г связаны друг с другом через линкер. Например, удобными линкерами внутри конъюгатов в настоящем изобретении служат гликозильные линкерные группы, расположенные между полипептидом и фрагментами ПЭГ. \У0 2006/074467 описывает такие полимер-С-С8Г-конъюгаты, в которых полипептид С-С8Г и полимерный фрагмент связаны друг с другом через гликозильный линкер или негликозильный линкер, например через замещенный или незамещенный алкил, замещенный или незамещенный гетероалкил. На
- 5 020069 стоящим раскрытие \¥О 2006/0744467 явным образом включено сюда в виде ссылки.
Термин ПЭГ-С-С8Р (пэгилированный С-С8Р) относится к белку С-С8Е. который ковалентно связан с одним или более фрагментами полиэтиленгликоля, как описано ниже. Группа(ы) ПЭГ и белок СС8Т могут быть связаны друг с другом либо непосредственно, либо через линкер, например гликозильный линкер.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения конъюгат пептида полимер-С-С8Р получают согласно способу, описанному в \УО 2006/074467. В предпочтительном варианте осуществления полимер-С-С8Р представляет собой конъюгат пептида ПЭГ-С-С8Р, имеющий гликозильную линкерную группу, расположенную между модифицирующим фрагментом ПЭГ и полипептидом С-С8Р. Такой конъюгат упоминается как гликопэгилированный С-С8Р.
В примерном варианте осуществления молекулы гликопэгилированного С-С8Р в настоящем изобретении продуцируются путем опосредованного ферментами образования конъюгата между гликозилированным или негликозилированным пептидом С-С8Р и ферментативно переносимым фрагментом сахарила, включающим в себя фрагмент полиэтиленгликоля внутри своей структуры. Фрагмент ПЭГ присоединен к фрагменту сахарила напрямую (т.е. через единственную группу, образованную путем реакции двух реакционноспособных групп) или через фрагмент линкера, например через замещенный или незамещенный алкил, замещенный или незамещенный гетероалкил и т.д. Линкерной группой гликозила могут быть фрагменты сиаловой кислоты, получаемые из ПЭГ.
В предпочтительном варианте осуществления в настоящем изобретении гликозильный линкер связан с белком С-С8Р через О-гликозилирование, предпочтительно через О-гликозилирование по треониновому остатку белка С-С8Р.
Предпочтительно, чтобы гликозильный линкер включал в себя моно-, ди- или олигосахарид, более предпочтительно, чтобы гликозильный линкер включал в себя сиаловую кислоту и Νацетилгалактозамин.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения конъюгат пептида полимер-С-С8Р включает в себя фрагмент
где К.1 представляет собой фрагмент, включающий в себя линейный или разветвленный остаток полиэтиленгликоля;
Ь представляет собой линкер, который представляет собой элемент, выбранный из пары: замещенный или незамещенный алкил и замещенный или незамещенный гетероалкил;
где пептид гликозилирован гликозильным остатком и где данный фрагмент ковалентно связан с гликозильным остатком.
Предпочтительно, чтобы гликозильным остатком был Ν-ацетилгалактозамин. В предпочтительном варианте осуществления пептид С-С8Р гликозилирован по треониновому остатку, предпочтительно по треониновому остатку в 134-м положении (рассчитано для полипептида метионил-С-С8Р, т.е. имеющего Ν-концевой метионин и в общей сложности 175 аминокислот). В предпочтительном варианте осуществления К1 представляет собой линейный остаток полиэтиленгликоля, а Ь представляет собой гетероалкил.
Вышеописанный конъюгат пептида С-С8Р может быть получен по способу, включающему в себя (а) приведение субстрата пептида С-С8Р в контакт с донором ПЭГ-сиаловой кислоты, имеющим формулу
где К1 и Ь определены выше, а также с ферментом, способным переносить фрагмент ПЭГ-сиаловой кислоты с донора на гликозильный остаток субстрата пептида С-С8Р. В предпочтительном варианте осуществления фермент представляет собой сиалилтрансферазу, например 8Т6СаШАс1, как описано в \УО 2005/055946.
- 6 020069
Конъюгат пептида С-С8Р, описанный выше, может быть получен по способу, включающему в себя (а) приведение негликозилированного субстрата пептида С-С8Р в контакт с гликозильным донором и ферментом, способным переносить фрагмент гликозила с донора на субстрат пептида С-С8Р, и (Ь) приведение гликозилированного пептида С-С8Р в контакт с донором ПЭГ-сиаловой кислоты, имеющим формулу
где К и Ь определены выше, а также с ферментом, способным переносить фрагмент ПЭГ-сиаловой кислоты с донора на гликозильный остаток субстрата пептида С-С8Р, причем (а) и (Ь) представляет собой либо последовательные, либо одновременные реакции. В предпочтительном варианте осуществления донор гликозила представляет собой υΌΡ-Ν-ацелилгалактозамин. В предпочтительном варианте осуществления фермент в (а) представляет собой Ν-ацелилгалактозаминтрансферазу, фермент в (Ь) представляет собой сиалилтрансферазу, например 0;·ι1ΝΛοΤ2 в (а) и 8Т66аШАс1 в (Ь).
С-С8Р может быть продуцирован путем химических методик синтеза или может происходить из любых источников, как человеческих, так и других млекопитающих, и может быть получен путем очистки из природных источников, таких как человеческая плацента, человеческая кровь или человеческая моча. Дополнительно, многие эпителиальные карциномы, клетки, пораженные острым миелолейкозом, и различные опухолевые клеточные линии способны экспрессировать этот фактор.
Предпочтительно, чтобы С-С8Р был продуцирован рекомбинантным путем. Это включает в себя экспрессию прокариотических или эукариотических хозяев экзогенных последовательностей ДНК, полученных из геномной ДНК, или путем клонирования кДНК, или путем синтеза ДНК. Подходящие прокариотические хозяева включают в себя различные бактерии, такие как Е.ео1т. где Е.со11 является предпочтительным хозяином. Подходящие эукариотические хозяева включают в себя дрожжи, такие как 8. сетеу181ае, и клетки млекопитающих, такие как клетки яичников китайского хомячка и клетки обезьян.
В настоящей области известно рекомбинантное продуцирование белка, такого как С-С8Р. Как правило, оно включает в себя трансфекцию клеток-хозяев соответствующими экспрессионными векторами, культивацию клеток-хозяев при условиях, позволяющих продуцирование белка, а также очистку белка от клеток-хозяев. Для получения подробной информации см., например, 8ои/а, Ь.М. е1 а1. 1986, КесотЬшапГ Ритап дгапи1осуГе со1опу-кГ1ти1айпд ГасЮг: ейесГк оп погта1 апб 1еикетю туеЫб се11к, 8с1епсе (1986), 232: 61-65; №даГа, 8. е1 а1. 1986, Мо1еси1аг с1ошпд апб ехргеккюп оГ с^NΑ Гог Ритап дгапи1осуГе со1опукГ1ти1аГшд ГасЮг №1Шге (1986), 319: 415-418; КотаГки, Υ. е1 а1. 1987, С1ошпд оГ д^аии1осуΐе со1опукГ1ти1аГшд ГасЮг с^NΑ Ггот Ритап тасгорРадек апб Рк ехртеккюп ш ЕксРепсЫа со11, 1рп. 1. Сапсег Кек. (1987), 78: 1179-1181.
В предпочтительном варианте осуществления С-С8Р имеет аминокислотную последовательность зрелого человеческого С-С8Р (см., например, №даГа, 8. еГ а1. (1986), см. выше) и может дополнительно содержать метионин на своем Ν-конце, становясь, таким образом, белком из 175 аминокислот (см. 8ЕО ΙΌ N0: 1 выше). Кроме того, вместо метионина С-С8Р может содержать сериновый или треониновый остаток.
Затем белок очищают согласно общепринятому протоколу последовательной обработки. Подходящие для С-С8Р способы очистки описаны в данной области техники, например в АО 87/01132, ЕР 0719860 А, ЕР 1458757 мА, ЕР 1527188 А, АО 03/051922, АО 01/04154 и АО 2006/097944.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения конъюгат пептида полимер-С-С8Р получают, как описано в приведенном здесь примере 1. Этот конъюгат характеризуется тем, что полипептид С-С8Р и фрагмент ПЭГ связаны через Ν-ацетилгалактозаминильную (СаШАс) группу и сиаловокислую (8А) группу. Конъюгат имеет следующую структуру: С-С8Р-СаШАс-8А-ПЭГ
- 7 020069
где Я! и Ь соответствуют определенным выше;
АА представляет собой аминокислотный остаток С-С8Е.
В примерных вариантах осуществления Я! представляет собой линейный фрагмент, связанный через сиаловокислую группу и ΟαΙΝΛο группу с полипептидом С-С8Е. как показано ниже
где Ь соответствует определенному выше;
АА представляет собой аминокислотный остаток С-С8Е;
£ представляет собой целое число, взятое в промежутке от 1 до 2500.
В некоторых вариантах осуществления конъюгат полимер-С-С8Р имеет следующую формулу:
где АА представляет собой треонин 133 (треонин 134, если есть Ν-конечный метионин) С-С8Е;
£ представляет собой целое, взятое в промежутке от 1 до 2500.
Фармацевтическая композиция в настоящем изобретении представляет собой жидкую композицию, например, водный раствор. Для инъекций предпочтительно применять чистую воду в качестве растворителя. Впрочем, также могут быть использованы другие растворители, подходящие и общепринятые для фармацевтических композиций. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтические композиции представляют собой изотонические растворы.
Дополнительно, ни на какой стадии изготовления лекарственной формы жидкого раствора в настоящем изобретении не возникает необходимости в восстановлении. Раствор представляет собой готовую к применению лекарственную форму.
Фармацевтическая композиции в настоящем изобретении имеет рН в диапазоне от 4,5 до 5,5. В предпочтительном варианте осуществления значение рН находится между 4,7 и 5,3, более предпочтительно между 4,8 и 5,2 и наиболее предпочтительно между 4,9 и 5,1.
Если для достижения желаемого диапазона рН требуется его регулировка, то рН регулируется с помощью подходящих растворов; с помощью кислых растворов в случае, если выявлено уменьшение значения рН, и с помощью щелочных растворов в случае, если выявлено увеличение значения рН. Подходящими кислыми растворами являются, например, соляная кислота, фосфорная кислота, лимонная кислота и кислый фосфат натрия или калия. Подходящими щелочными растворами являются гидроксиды щелочных и щелочно-земельных металлов, щелочные карбонаты, щелочные ацетаты, щелочные цитраты и двузамещенные кислые фосфаты, например, гидроксид натрия, ацетат натрия, карбонат натрия, цитрат натрия, двузамещенный фосфат натрия или калия, аммиак.
Предпочтительно, чтобы регулировка рН раствора проводилась с помощью гидроксида натрия. Как следствие, лекарственная форма в настоящем изобретении может содержать ионы натрия. Натрий обычно присутствует в концентрации менее 10 ммоль/л, как правило менее 6 ммоль/л.
Фармацевтическая композиция в настоящем изобретении содержит один или более сурфактантов. Типичные примеры сурфактантов включают в себя неионные сурфактанты, например сорбитановые эфиры жирных кислот, такие как монокаприлат сорбитана, монолаурат сорбитана, монопальмитат сорбитана; глицериновые эфиры жирных кислот, такие как монокаприлат глицерина, мономиристат глицерина, моностеарат глицерина; полиглицериновые эфиры жирных кислот, такие как декаглицерилмоностеарат, декаглицерилдистеарат, декаглицерилмонолинолеат; полиоксиэтиленовые сорбитановые эфиры жирных кислот, такие как полиоксиэтиленсорбитанмонолаурат, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат, по
- 8 020069 лиоксиэтиленсорбитанмоностеарат, полиоксиэтиленсорбитанмонопальмитат, полиоксиэтиленсорбитантриолеат, полиоксиэтиленсорбитантристеарат; полиоксиэтиленовые сорбитоловые эфиры жирных кислот, такие как полиоксиэтиленсорбитолтетрастеарат, полиоксиэтиленсорбитолтетраолеат; полиоксиэтиленовые глицериновые эфиры жирных кислот, такие как полиоксиэтиленглицерилмоностеарат; полиэтиленгликолевые эфиры жирных кислот, такие как полиэтиленгликоль дистеарат; полиоксиэтиленалкиловые эфиры, такие как полиоксизтиленлауриловый эфир; полиоксизтиленполиоксипропиленалкиловые эфиры, такие как полиоксиэтиленполиоксипропиленгликолевый эфир, полиоксиэтиленполиоксипропиленпропиловый эфир, полиоксиэтиленполиоксипропиленцетиловый эфир; полиоксиэтиленалкилфениловые эфиры, такие как полиоксиэтиленнонилфениловый эфир; полиоксиэтиленовые отвержденные касторовые масла, такие как полиоксиэтиленовое касторовое масло, полиоксиэтиленовое отвержденное касторовое масло (полиоксиэтиленовое гидрогенизированное касторовое масло); полиоксиэтиленовые производные воска, такие как полиоксиэтиленсорбитоловый воск; полиоксиэтиленовые производные ланолина, такие как полиоксиэтиленланолин; полиоксиэтиленовые амиды жирных кислот, такие как полиоксиэтиленовый амид стеариновой кислоты с гидрофильно-липофильным балансом в диапазоне 6-18; анионовые сурфактанты, например алкиловые сульфаты, имеющие С10-18 алкильную группу, такие как цетилсульфат натрия, лаурилсульфат натрия, олеилсульфат натрия; сульфаты полиоксиэтиленалкиловых эфиров, имеющих среднее число молей оксида этилена от 2 до 4 и С10-18 алкильную группу, такие как полиоксиэтиленлаурилсульфат натрия; соли алкиловых эфиров сульфоянтарной кислоты, имеющие С8-18 алкильную группу, такие как лаурилсульфосукцинат натрия; а также природные сурфактанты, например лецитин, глицерофосфолипиды; сфингофосфолипиды, такие как сфингомиелин; сахарозные эфиры жирных кислот с С12-18 жирными кислотами. Один или более этих сурфактантов могут быть добавлены в сочетании к лекарственным формам в настоящем изобретении.
Предпочтительные сурфактанты представляет собой полиоксиэтиленсорбитаналкиловые сложные эфиры, более предпочтительно Полисорбаты 20, 21, 40, 60, 65, 80, 81, 85, наиболее предпочтительно Полисорбаты 20 и 80.
Концентрация детергента в лекарственной форме, как правило, находится в диапазоне от 0,0005 до 0,05% (вес./об.), предпочтительно от 0,001 до 0,01% (вес./об.), более предпочтительно от 0,002 до 0,006% (вес./об.) и наиболее предпочтительно от 0,003 до 0,004% (вес./об.) в общем объеме лекарственной формы раствора.
Обычно лекарственные формы по настоящему изобретению содержат сурфактант Полисорбат 20 или 80 в концентрации 0,003; 0,0033 или 0,004% (вес./об.). Полисорбат 20 является предпочтительным.
Лекарственная форма в настоящем изобретении содержит физиологически приемлемое буферное вещество. В области лекарственных форм растворов известны подходящие буферы, например фосфатные буферы (предпочтительно система моногидрофосфат натрия - дигидрофосфат натрия), цитратные буферы, лактатные буферы, ацетатные буферы, карбонатные буферы, ВЕТгЕ. МЕБ, а также глицин-НС1. Предпочтительно применение ацетатных буферов, т.е. уксусной кислоты или ее соли, например щелочных или аммонийных солей.
Буферное вещество обычно присутствует в лекарственной форме в концентрации от 1 до 100 ммоль/л, предпочтительно от 2 до 50 ммоль/л и наиболее предпочтительно от 5 до 20 ммоль/л. В предпочтительном варианте осуществления буфер присутствует в концентрации 10 ммоль/л, наиболее предпочтительно ацетат присутствует в концентрации 10 ммоль/л.
Концентрация буфера, например ацетата, выбирается таким образом, чтобы обеспечить как достаточную буферную емкость, так и стабилизацию рН. Однако в то же время ионная концентрация и, следовательно, проводимость раствора сохраняются настолько низкими, насколько возможно, чтобы избежать образования агрегатов.
В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения проводимость конечной лекарственной формы раствора меньше чем 1,0 мСм/см, предпочтительно меньше чем 0,8 мСм/см и более предпочтительно меньше чем 0,5 мСм/см.
Дополнительно, предпочтительно, чтобы композиция не содержала винной кислоты и янтарной кислоты, а также их солей. Также предпочтительно, чтобы раствор не содержал НЕРЕБ, ТЕБ и трицина.
Также предпочтительно, чтобы лекарственная форма по настоящему изобретению не содержала сульфат-ионов.
Далее, в предпочтительном варианте осуществления лекарственная форма не содержит консервантов, где под консервантами подразумеваются вещества, традиционно используемые в качестве консервантов для повышения устойчивости при хранении и которые в нормальной концентрации обладают бактерицидным эффектом. В частности, лекарственная форма не содержит консервантов, таких как хлорэтан, бензиловый спирт, п-хлор-м-крезол, диалкиловый эфир пирокарбоновой кислоты и хлорид бензалкония.
В варианте осуществления настоящего изобретения лекарственная форма дополнительно содержит многоатомный спирт, предпочтительно сахарный спирт, наиболее предпочтительно маннит или сорбит, в качестве регулятора тоничности. Особенно предпочтителен сорбит. Количество сахарного спирта, такого как сорбит или маннит, составляет обычно вплоть до 10,0% (вес./об.) в общем объеме раствора. Пред
- 9 020069 почтительно, чтобы концентрация составляла вплоть до 8,0% (вес./об.), более предпочтительно вплоть до 6% (вес./об.) и наиболее предпочтительно 5,0% (вес./об.). В предпочтительном варианте осуществления сорбит присутствует в количестве 5,0% (вес./об.).
Дополнительно, предпочтительно, чтобы лекарственная форма раствора по изобретению не содержала стабилизирующих веществ, выбранных из аминокислот, их производных и солей, полимерных стабилизирующих веществ и белковоподобных стабилизирующих веществ.
Лекарственные формы в настоящем изобретении, содержащие конъюгат полимер-С-С8Р, обычно вводятся через парентеральные пути, такие как инъекция (подкожная, внутривенная или межмышечная инъекция), или введением через кожу, слизистую, назальное или пульмонарное, но также могут вводиться орально.
Конъюгат полимер-С-С8Р обычно присутствует в лекарственной форме в концентрации от 1,0 до 30,0 мг/мл, предпочтительно от 5,0 до 20,0 мг/мл и наиболее предпочтительно от 8,0 до 12,0 мг/мл. В предпочтительном варианте осуществления конъюгат полимер-С-С8Р представляет собой ПЭГ-δΛСаШАс-С-С8Р, присутствующий в количестве 10,0 мг/мл.
В предпочтительном варианте осуществления лекарственная форма содержит конъюгат полимер-СС8Р в качестве активного ингредиента, сурфактант, буферное вещество, регулятор тоничности, ионы натрия и воду, и не содержит никаких других составляющих. Наиболее предпочтительна водная композиция в настоящем изобретении, содержащая гликопэгилированный С-С8Р в качестве активного вещества, Полисорбат 20 и/или Полисорбат 80 в качестве сурфактанта, сорбит и/или маннит в качестве регулятора тоничности, ацетат в качестве буфера, а также натрий, и никаких других вспомогательных веществ.
В другом аспекте изобретения водная композиция по изобретению, как описано выше, разбавляется для того, чтобы получить разбавленную водную композицию, годную к применению в педиатрии. Соответствующие разведения для лечения детей достигаются в настоящем изобретении путем разбавления вышеописанного раствора в соотношении от 1:2 до 1:8.
Изобретение также относится к фармацевтической упаковке, содержащей водную композицию в настоящем изобретении или разбавленный раствор, полученный из нее путем разбавления. Подходящие фармацевтические упаковки известны из уровня техники. Упаковка может быть, например, шприцом, флаконом, бутылочкой для вливаний, ампулой или карпулой. В предпочтительном варианте осуществления, когда упаковка представляет собой шприц, этот шприц снабжен системой защиты иглы. Такие системы защиты иглы, хорошо известные из уровня техники, помогают снизить риск повреждений. В другом варианте осуществления, упаковка представляет собой карпулу внутри шприца-ручки.
Настоящее изобретение также относится к способу получения водной композиции по изобретению, в которой конъюгат полимер-С-С8Р в качестве активного вещества добавляется к водной композиции, имеющей рН в диапазоне от 4,5 до 5,5 и содержащей сурфактант и другие фармацевтические вспомогательные вещества.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению водной композиции по изобретению для лечения или предотвращения нейтропении. Дополнительно водная композиция по изобретению может успешно применяться для лечения или предотвращения неврологических нарушений или в связи с пересадкой костного мозга. В общем случае фармацевтические растворы по настоящему изобретению полезны для активации стволовых клеток.
Оказалось, что фармацевтическая жидкая лекарственная форма по настоящему изобретению проявляет очень хорошую устойчивость при хранении. В объеме настоящего изобретения под термином устойчивый при хранении понимается, что содержание активного конъюгата полимер-С-С8Р все еще составляет 80% или более от исходной концентрации после трех месяцев хранения состава при 25°С. Предпочтительно, чтобы после хранения на протяжении трех месяцев при 25°С сохранившаяся активность С-С8Р составляла по меньшей мере 85%, более предпочтительно по меньшей мере 90% и наиболее предпочтительно 95% от первоначальной активности.
Активность конъюгата полимер-С-С8Р может быть определена с помощью общепринятых тестов активности, как они описаны в известном уровне техники, см., например, Итай МоиодтарЫе РПдтакйт Соисеи!га!еб 8о1и!юи. РйаттЕит. Уо1. 19, Νο. 1, 1аи. 2007, ог 81и1е, Ν., е! а1. Рйаттасокшейск оГ киЬси!аиеоик тесотЬтаи! Питай дгаии1осу1е со1оиу-к11ти1а11ид Гас!ог ίη сШбтеи 1. (1992), В1ооб 79 (11), радек 2849-2854.
Измерение активности С-С8Р 1и уйто описано, например, у ЗЫтаГир, Ν. е! а1. 1989, А иете Ыоаккау Гог Питаи дгаии1осу!е со1оиу-кИти1а!тд Гас!ог (ПС-С8Р) икшд титше туе1оЬ1акйс ΝΡ8-60 се11к ак !агде!к аиб екйтабои оГ йк 1еуе1к ш кега йот иогта1 Пеа1!Пу регкоик аиб райеи!к \νίΐ1ι тГесОоик аиб йета!о1одюа1 б18огбег8, Ехр. Нета!о1. (1989), 17, 116-119. Для измерения активности С-С8Р ш у1уо см., например, Таиака, Н. е! а1. 1991, Рйаттасоктейск оГ тесотЫиаи! Питаи дгаии1осу!е со1оиу-к11ти1а11ид Гас!ог соищда!еб !о ро1уе!Пу1еие д1усо1 ш га!к, Саисег йекеагсй (1991), 51, 3710-3714. Дальнейшие публикации, в которых описываются тесты для измерения активности С-С8Р, описаны в ϋδ 6555660; №йуиек, С.1. е! а1. 1997, Сотрапкои оГ !Пе ро!еису оГ д1усоку1а!еб аиб иоид1усоку1а!еб тесотЫиаи! Питаи дгаии1осу!е со1оиук!1ти1а!шд Гас!огк ш иеийорешс аиб иои-иеи!горешс СИ га!к, Саисег Сйето!йег. РПагтасо1. (1997), 39, 259266.
- 10 020069
Чистота конъюгата полимер-С-С8Е, применяемого в лекарственной форме согласно настоящему изобретению, должна быть по меньшей мере 95%, предпочтительно по меньшей мере 97%, более предпочтительно по меньшей мере 99% и наиболее предпочтительно более чем 99%. Степень чистоты может быть определена средствами ВЭЖХ-анализа. Подходящие материалы и протоколы для проведения таких анализов могут быть получены из коммерческих источников, таких как Уубас или ΤΘ8ΘΗ Вю8С1епее (1Шр://\\л\л\Ло5о11Ью5ср.бс).
Компоненты для получения растворов по настоящему изобретению могут быть приобретены из традиционных источников, например в компаниях, таких как 8щша или Мегск.
Продукция лекарственной формы в настоящем изобретении может быть получена традиционными способами. Компоненты лекарственной формы могут быть растворены в водном буфере. Или же конъюгат уже может быть получен в водном буфере в результате процесса очистки.
И, наконец, готовая жидкая лекарственная форма заливается в подходящую фармацевтическую упаковку, где хранится до своего применения.
Последующие примеры предназначены для того, чтобы пояснить настоящее изобретение, без ограничения его объема.
Примеры
Пример 1. Получение С-С8Е-Са1МАс-8А-пЭг.
Следующий пример иллюстрирует получение С-С8Е-Са1ИАс-8А-ПЭГ (а) способом из двух последовательных стадий, в котором каждый промежуточный продукт очищается перед использованием на следующей стадии, и (Ь) одностадийным способом с одновременным добавлением ферментов.
a. Двустадийный способ.
Получение С-С8Е-Са1ИАс (рН 6,2) из С-С8Е и иИР-СаШАс с использованием Са1ИАс-Т2.
С-С8Е (960 мкг) в 3,2 мл запакованного буфера концентрировали путем ультрафильтрации с помощью УФ-фильтра (номинальное отсечение по молекулярной массе 5000), а затем восстанавливали 1 мл 25 мМ МЕ8-буфера (рН 6,2, 0,005% \а\;). Затем добавляли СПР-Са1\Ас (6 мг, 9,24 мМ), СаШАс-Т2 (40 мкл, 0,04 И), а также 100 мкМ МпС12 (40 мкл, 4 мМ) и получившийся раствор инкубировали при комнатной температуре.
Через 24 ч МАБО1 показала, что реакция завершена. Реакционную смесь тут же подвергали очистке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, используя 8ЕС (8ирегбех 75 и 8ирегбех 200) и элюирующий буфер, состоящий из РВ8 (фосфатно-солевой буфер, рН 4,9 и 0,005% Т\\ееп 80). Собранный С-С8Е-Са1ИАс концентрировали с помощью фильтра СегИпсоп 5 кДа М\УСО до примерно 150 мкл, а затем объем доводили до 1 мл с помощью РВ8 (фосфатно-солевой буфер, рН 4,9 и 0,005% Т\тееп 80). Конечная концентрация белка составляла 1 мг/мл (А280), выход 100%. Образец хранили при 4°С.
Получение С-С8Е-Са1ИАс-8А-ПЭГ с помощью очищенного С-С8Е-Са1ИАс, СМР-8А-ПЭГ (20 кДа) и 8Т6Са1ИАс-Т1 мыши (рН 6,2).
Буфер раствора С-С8Е-Са1ИАс, содержащего 1 мг белка, заменяли на буфер МЕ8 25 мМ (рН 6,2, 0,005% ΝηΝ3) и добавляли СМР-8А-ПЭГ (20 кДа) (5 мг, 0,25 мкмоль). После растворения добавляли МпС12 (раствор 100 мкл, 100 мМ) и 8Т6СаШАс-1 (100 мкл, фермент мыши) и реакционную смесь медленно взбалтывали при 32°С в течение трех дней. Реакционную смесь концентрировали путем ультрафильтрации (номинальное отсечение по молекулярной массе 5000), буфер заменяли на 25 мМ №1ОАс (рН 4,9) один раз и затем концентрировали до общего объема 1 мл. Затем продукт очищали с помощью 8Р-сефарозы (А: 25 мМ №1ОАс+0.005% 1\\ееп-80 рН 4,5; В: 25 мМ №1ОАс+0.005% Т\\ееп-80 рН 4,5+2М №1С1) со временем удерживания 13-18 мин и 8ЕС (8ирегбех 75; РВ8-рН 7,2, 0,005% Т\\ееп 80) со временем удерживания 8,6 мин (8ирегбех 75, поток 1 мл/мин). Нужные фракции собирали, концентрировали до 0,5 мл и хранили при 4°С.
b. Одностадийный способ.
Однореакторный (опе-ро1) процесс с использованием 8Т6СаШАс-1 мыши (рН 6,0).
С-С8Е (960 мкг белка, растворенного в 3,2 мл буфера лекарственной формы продукта) концентрировали путем ультрафильтрации (номинальное отсечение по молекулярной массе 5000) до 0,5 мл и восстанавливали 25 мМ буфером МЕ8 (рН 6,0, 0,005% NаN3) до общего объема около 1 мл или до концентрации белка 1 мг/мл. Затем добавляли иИР-СаШАс (6 мг, 9,21 мкмоль), СаШАс-Т2 (80 мкл, 80 шИ), СМР-8А-ПЭГ (20 кДа) (6 мг, 0,3 мкмоль) и фермент мыши 8Т6СаШАс-1 (120 мкл), а также 100 мМ МпС12 (50 мкл). Раствор взбалтывали при 32°С в течение 48 ч и очищали при стандартных условиях хроматографии на 8Р-сефарозе. В результате получали 0,5 мг белка (А280) или около 50% общего выхода. Структура продукта была подтверждена с помощью анализа и МАЬО1, и δΌδ-РАСЕ.
Однореакторный (опе-ро1) процесс с использованием 8Т6СаШАс-1 курицы (рН 6,0).
14,4 мг С-С8Е концентрировали до конечного объема 3 мл, заменили буфер 25 мМ буфера МЕ8 (рН 6,0, 0,05% ΝπΝ3, 0,004% Т\\ееп 80) и объем доводили до 13 мл. Затем добавили иИР-СаШАс (90 мг, 150 мкмоль), СаШАс-Т2 (0,59 И), СМР-8А-ПЭГ-20 кДа (90 мг), 5Т6баМАс-1 курицы (0,44 И), а также 100 мМ МпС12 (600 мкл). Полученную смесь выдерживали при комнатной температуре в течение 60 ч. Затем реакционную смесь концентрировали с помощью УФ (номинальное отсечение по молекулярной массе 5000) и центрифугирования. Остаток (около 2 мл) растворяли в 25 мМ буфере №1ОАс (рН 4,5) и снова
- 11 020069 концентрировали до конечного объема 5 мл. Данный образец очищали с помощью 8Р-сефарозы в течение примерно 10-23 мин, 8ЕС (8ирегбех 75, 17 мин, скорость подачи 0,5 мл/мин) и дополнительного 8ЕС (8ирегбех 200, 23 мин, скорость подачи 0,5 мл/мин), получив 3,6 мг (25% от общего выхода) С-С8Р6аШАс-8А-ПЭГ -20 кДа (А280 и анализ методом ВСА).
Пример 2. Жидкая лекарственная форма конъюгата полимер-6-С8Р (ПЭГ-8А-6а1ЫАс-6-С8Р).
Жидкую лекарственную форму, содержащую гликопэгилированный 6-С8Р (конъюгат, имеющий структуру: ПЭГ-8А-6аШАс-6-С8Е), получали путем смешивания следующих компонентов в водном растворе ацетатного буфера
Значение рН композиций регулировали путем добавления ΝαΟΗ. Качество всех компонентов находится в соответствии с установленным Европейской фармакопеей (Рй. Еиг.).
Дополнительно, была получена та же композиция либо с рН 4,5, либо с рН 5,5, пропорционально меньшим или большим содержанием натрия соответственно. Также получали лекарственную форму для сравнения, имеющую рН 4,0 (как у композиции №и1аз1а®).
Пример 3. Тест на устойчивость лекарственных форм согласно настоящему изобретению.
Композиции, рН 4,5, 5,0 и 5,5, приводили к равному объему по 500 мкл/флакон и хранили при 2-8°С и при 25°С. Через 1, 2, 3, 4,5, 6, 8, 12 и 15 месяцев образцы исследовали по параметрам теста, приведенным в таблице ниже.
Ожидаемые характеристики были такими, как указано для композиции, имеющей рН 5,0.
Параметр теста Способ Характеристика
Внешний вид Визуальный контроль Совершенно бесцветный
Содержание υν-νΐ5 10 мг/мл + 5%
Содержание КР-НРЬС (30°С) 10 мг/мл ± 5%
Активность Биоанализ 54-156%
Идентичность 203-РАСЕ Соответствует стандартному образцу
Чистота ИезЬегп В1об Соответствует стандартному образцу
Чистота КР-НРЬС (60°С) Окисление <2,0%
Чистота кр-нрьс (30°о Непэгилированный С- СЗЕ1 2,0%
Чистота ЗЕС Димеры и агрегаты <2,0%
Деамидирование ΙΕΓ Нет дополнительных распознаваемых полос
рн Согласно РЬ. Еиг. и изр 28 5,0 ± 0,2
Эндотоксины Тест на бактериальные эндотоксины согласно РЬ. Епг. 5 <5 единиц эндотоксина/мг
Стерильность Согласно РЬ. Еиг. 5 Стерилен
Не видимые невооруженным глазом частицы Загрязнение частицами: не видимые невооруженным глазом частицы, согласно РЬ. Еиг. 5 <6000 частиц ^10 мкм на флакон <600 частиц ^25 мкм на флакон
Все образцы, исследуемые в течение времени Т = 0, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 4,5 месяца, 6 месяцев, 8 месяцев, 12 месяцев и 15 месяцев, удовлетворяли ожидаемым характеристикам. Это было обнаружено для всех исследуемых композиций, содержащих гликопэгилированный 6-С8Р и имеющих рН 4,5,
- 12 020069
5,0 или 5,5.
Композиции по изобретению сравнивали с двумя лекарственными формами: №и1айа® (рН 4,0) и композицией гликопэгилированного С-СЗЕ (ПЭГ-ЗА-СаШАс-С-СЗЕ), имеющим рН 4,0. Результаты показали, что по сравнению с растворами, содержащими гликопэгилированный С-СЗЕ и имеющими рН 4,0, лекарственные формы, имеющие большие значения рН 4,5, 5,0 и 5,50, проявляют лучшую устойчивость при хранении. Собранные данные позволяют прийти к заключению, что более высокие значения рН предотвращают кислый гидролиз глико-ПЭГ связи. Дополнительно наблюдалось, что лекарственные формы по настоящему изобретению имеют устойчивость, сравнимую с устойчивостью конъюгата ПЭГ-С-СЗЕ, известного как №и1а§!а®.

Claims (26)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Водная фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат полимер-С-СЗЕ в качестве активного агента, Полисорбат 20 и/или Полисорбат 80 в качестве сурфактанта, сорбит и/или маннит в качестве регулятора тоничности, ацетат в качестве буфера и ионы натрия, в отсутствие других вспомогательных веществ, где полимер и фактор С-СЗЕ связаны через гликозильный линкер, где полимер представляет собой полиалкиленгликоль и композиция имеет рН в диапазоне от 4,9 до 5,1.
  2. 2. Водная фармацевтическая композиция по п.1, где гликозильная связь осуществляется через Огликозилирование.
  3. 3. Водная фармацевтическая композиция по п.2, где О-гликозилирование осуществляется по треониновому остатку белка С-СЗЕ.
  4. 4. Водная фармацевтическая композиция по п.3, где треониновый остаток представляет собой ТЬг 134 в аминокислотной последовательности белка метионил-С-СЗЕ или ТЬг 133 в аминокислотной последовательности природного человеческого С-СЗЕ.
  5. 5. Водная фармацевтическая композиция по любому из пп.1-4, где гликозильный линкер содержит моно-, ди- или олигосахарид.
  6. 6. Водная фармацевтическая композиция по любому из пп.1-5, где гликозильный линкер содержит сиаловую кислоту и Ν-ацетилгалактозамин.
  7. 7. Водная фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, где сурфактант находится в концентрации 0,0001-0,05% (вес./об.).
  8. 8. Водная фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, где буфер находится в концентрации 2-50 ммоль/л.
  9. 9. Водная фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, где регулятор тоничности находится в концентрации 1-10% (вес./об.).
  10. 10. Водная фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, где композиция не содержит стабилизаторов, выбранных из аминокислот, полимерных стабилизаторов и белковоподобных стабилизаторов.
  11. 11. Водная фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, где композиция не содержит консервантов.
  12. 12. Водная фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, где композиция не содержит сульфат-ионов.
  13. 13. Водная фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, где рН отрегулирован с помощью ΝηΟΗ.
  14. 14. Водная фармацевтическая композиция по любому из предыдущих пунктов, где конъюгат полимер-С-СЗЕ находится в концентрации 1-20 мг/мл.
  15. 15. Водная фармацевтическая композиция по любому из предыдущих пунктов, где конъюгат полимер-С-СЗЕ находится в концентрации 8-12 мг/мл.
  16. 16. Разбавленная водная фармацевтическая композиция, полученная из водной композиции по любому из предшествующих пунктов, где водная фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов разбавлена в соотношении от 1:2 до 1:8.
  17. 17. Фармацевтический контейнер, содержащий водную фармацевтическую композицию по любому из предшествующих пунктов.
  18. 18. Фармацевтический контейнер по п.17, где контейнер представляет собой шприц, флакон, бутылочку для вливаний, ампулу или карпулу.
  19. 19. Фармацевтический контейнер по п.17 или 18, где контейнер представляет собой шприц, оснащенный системой защиты иглы.
  20. 20. Фармацевтический контейнер по п.17 или 18, где контейнер представляет собой карпулу внутри шприца-ручки.
  21. 21. Способ получения водной фармацевтической композиции по любому из пп.1-15, где конъюгат полимер-С-СЗЕ в качестве активного вещества введен в водную композицию с рН в диапазоне от 4,9 до 5,1, содержащую Полисорбат 20 и/или Полисорбат 80 в качестве сурфактанта, сорбит и/или маннит в качестве регулятора тоничности, ацетат в качестве буфера и ионы натрия, в отсутствие других вспомога
    - 13 020069 тельных веществ.
  22. 22. Применение водной фармацевтической композиции по любому из пп.1-16 для лечения или предупреждения нейтропении.
  23. 23. Применение водной фармацевтической композиции по любому из пп.1-16 для лечения или предупреждения неврологических нарушений.
  24. 24. Применение водной фармацевтической композиции по любому из пп.1-16 для лечения состояний, связанных с пересадкой костного мозга.
  25. 25. Применение водной фармацевтической композиции по любому из пп.1-16 для активации стволовых клеток.
  26. 26. Применение водной фармацевтической композиции по п.16 в качестве педиатрического лекарственного средства.
    Евразийская патентная организация, ЕАПВ
    Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
EA201070315A 2007-08-27 2008-08-27 Жидкая лекарственная форма конъюгата EA020069B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP07115047 2007-08-27
PCT/EP2008/061232 WO2009027437A1 (en) 2007-08-27 2008-08-27 Liquid formulation of g-csf conjugate

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201070315A1 EA201070315A1 (ru) 2010-08-30
EA020069B1 true EA020069B1 (ru) 2014-08-29

Family

ID=39862881

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201070315A EA020069B1 (ru) 2007-08-27 2008-08-27 Жидкая лекарственная форма конъюгата

Country Status (24)

Country Link
US (1) US8546328B2 (ru)
EP (2) EP2197919B1 (ru)
JP (2) JP5570988B2 (ru)
KR (1) KR20100052501A (ru)
CN (2) CN104689333B (ru)
AU (1) AU2008292186B9 (ru)
BR (1) BRPI0815975B8 (ru)
CA (1) CA2696594C (ru)
CY (1) CY1115908T1 (ru)
DE (1) DE202008017456U1 (ru)
DK (1) DK2197919T3 (ru)
EA (1) EA020069B1 (ru)
ES (1) ES2476915T3 (ru)
HR (1) HRP20140590T1 (ru)
IL (1) IL204190A (ru)
MX (1) MX2010002448A (ru)
NZ (1) NZ583276A (ru)
PL (1) PL2197919T3 (ru)
PT (1) PT2197919E (ru)
RS (1) RS53404B (ru)
SI (1) SI2197919T1 (ru)
UA (1) UA98001C2 (ru)
WO (1) WO2009027437A1 (ru)
ZA (1) ZA201000798B (ru)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUE034398T2 (en) * 2010-01-19 2018-02-28 Hanmi Science Co Ltd Liquid preparations for sustained G-CSF conjugate
CA2789615A1 (en) 2010-03-17 2011-09-22 Biogenerix Gmbh Method for obtaining biologically active recombinant human g-csf
EP2384759A1 (en) 2010-05-06 2011-11-09 Suomen Punainen Risti Veripalvelu Sulphated hyaluronic acid in combination with G-CSF for use in mobilising blood stem cells
WO2017181920A1 (zh) * 2016-04-18 2017-10-26 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法
IT201700108526A1 (it) * 2017-09-28 2019-03-28 Alfasigma Spa Composizioni orali per il trattamento del refluso gastroesofageo.
WO2019212429A2 (en) * 2018-05-04 2019-11-07 İlkogen İlaç Sanayi̇ Ve Ti̇caret A.Ş. Stable hybrid fc fusion g-csf formulation
CN114224853B (zh) * 2022-01-04 2022-09-23 山东新时代药业有限公司 聚乙二醇化重组人粒细胞刺激因子注射用冻干制剂
WO2024037633A2 (en) * 2022-08-19 2024-02-22 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd Formulations comprising g-csf and uses thereof

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1260230A1 (en) * 2000-02-29 2002-11-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preparations stabilized over long time
WO2005039620A1 (de) * 2003-10-20 2005-05-06 Hexal Biotech Forschungs Gmbh Stabile wässrige g-csf-haltige zusammensetzungen
WO2006074467A2 (en) * 2005-01-10 2006-07-13 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
WO2007099145A1 (de) * 2006-03-01 2007-09-07 Bioceuticals Arzneimittel Ag G-csf-flüssigformulierung

Family Cites Families (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1479268A (en) 1973-07-05 1977-07-13 Beecham Group Ltd Pharmaceutical compositions
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
CH596313A5 (ru) 1975-05-30 1978-03-15 Battelle Memorial Institute
US4414147A (en) 1981-04-17 1983-11-08 Massachusetts Institute Of Technology Methods of decreasing the hydrophobicity of fibroblast and other interferons
US5675941A (en) 1983-12-09 1997-10-14 Dykmans; Maximiliaan J. Method and apparatus for constructing prestressed structures utilizing a membrane and floating dome assembly
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
JP2524586B2 (ja) 1985-06-26 1996-08-14 シタス コーポレイション ポリマ−接合を利用する医薬組成物用蛋白質の可溶化
US4810643A (en) 1985-08-23 1989-03-07 Kirin- Amgen Inc. Production of pluripotent granulocyte colony-stimulating factor
US6004548A (en) 1985-08-23 1999-12-21 Amgen, Inc. Analogs of pluripotent granulocyte colony-stimulating factor
KR0133561B1 (ko) 1988-05-13 1998-04-21 스티븐 엠. 오드레 과립구 군체 자극인자의 정제방법
US5218092A (en) 1988-09-29 1993-06-08 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Modified granulocyte-colony stimulating factor polypeptide with added carbohydrate chains
US6166183A (en) 1992-11-30 2000-12-26 Kirin-Amgen, Inc. Chemically-modified G-CSF
DE68925966T2 (de) 1988-12-22 1996-08-29 Kirin Amgen Inc Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor
GB9107846D0 (en) 1990-04-30 1991-05-29 Ici Plc Polypeptides
DE4014750A1 (de) 1990-05-08 1991-11-14 Boehringer Mannheim Gmbh Muteine des granulozyten-stimulierenden faktors (g-csf)
US5399345A (en) 1990-05-08 1995-03-21 Boehringer Mannheim, Gmbh Muteins of the granulocyte colony stimulating factor
US6565841B1 (en) 1991-03-15 2003-05-20 Amgen, Inc. Pulmonary administration of granulocyte colony stimulating factor
DE4126983A1 (de) * 1991-08-15 1993-02-18 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur herstellung von humanprotein-enthaltenden, konservierten arzneimitteln fuer infusions- oder injektionszwecke
WO1994001483A1 (en) 1992-07-02 1994-01-20 Collagen Corporation Biocompatible polymer conjugates
AU5098193A (en) 1992-09-01 1994-03-29 Berlex Laboratories, Inc. Glycolation of glycosylated macromolecules
WO1994028024A1 (en) 1993-06-01 1994-12-08 Enzon, Inc. Carbohydrate-modified polymer conjugates with erythropoietic activity
US5874075A (en) 1993-10-06 1999-02-23 Amgen Inc. Stable protein: phospholipid compositions and methods
DE69534676T2 (de) 1994-02-08 2006-08-17 Amgen Inc., Thousand Oaks Orale Verabreichung von chemisch modifizierten Proteinen
US6245900B1 (en) 1994-02-23 2001-06-12 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Platelet production promoting agent
US5824784A (en) 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
WO1997030148A1 (en) 1996-02-15 1997-08-21 Novo Nordisk A/S Conjugation of polypeptides
WO1998031826A1 (en) 1997-01-16 1998-07-23 Cytel Corporation Practical in vitro sialylation of recombinant glycoproteins
ATE469166T1 (de) 1997-06-06 2010-06-15 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Chemisch modifizierte polypeptide
US6540672B1 (en) * 1998-12-09 2003-04-01 Novo Nordisk A/S Medical system and a method of controlling the system for use by a patient for medical self treatment
FR2796071B1 (fr) 1999-07-08 2001-09-07 Hoechst Marion Roussel Inc Procede de purification de facteur de stimulation de colonies de granulocytes
US6555660B2 (en) 2000-01-10 2003-04-29 Maxygen Holdings Ltd. G-CSF conjugates
ES2327606T3 (es) 2000-01-10 2009-11-02 Maxygen Holdings Ltd Conjugados de g-csf.
US20020019342A1 (en) 2000-05-12 2002-02-14 Robert Bayer In vitro modification of glycosylation patterns of recombinant glycopeptides
WO2001087329A1 (en) 2000-05-15 2001-11-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Liquid pharmaceutical composition containing an erythropoietin derivate
NZ522847A (en) 2000-05-16 2004-11-26 Bolder Biotechnology Inc Methods for refolding proteins containing free cysteine residues
KR100396983B1 (ko) 2000-07-29 2003-09-02 이강춘 고반응성의 가지 달린 고분자 유도체 및 고분자와 단백질또는 펩타이드의 접합체
JP5490972B2 (ja) 2000-08-04 2014-05-14 中外製薬株式会社 タンパク質注射製剤
EP1930024A3 (en) 2000-09-01 2008-08-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha G-CSF solution formulations having long-term stability
US7157277B2 (en) 2001-11-28 2007-01-02 Neose Technologies, Inc. Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII
US7265085B2 (en) 2001-10-10 2007-09-04 Neose Technologies, Inc. Glycoconjugation methods and proteins/peptides produced by the methods
US7265084B2 (en) 2001-10-10 2007-09-04 Neose Technologies, Inc. Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods
NZ532027A (en) 2001-10-10 2008-09-26 Neose Technologies Inc Remodeling and glycoconjugation of peptides
SI21102A (sl) 2001-12-19 2003-06-30 LEK, tovarna farmacevtskih in kemi�nih izdelkov, d.d. Postopek za izolacijo biološko aktivnega granulocitne kolonije stimulirajočega dejavnika
DE10209821A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid
SI21273A (sl) 2002-07-31 2004-02-29 LEK farmacevtska dru�ba d.d. Priprava inkluzijskih teles z visokim deležem pravilno zvitega prekurzorja heterolognega proteina
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
CA2534418A1 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and g-csf
WO2005042024A1 (en) 2003-11-04 2005-05-12 Lek Pharmaceuticals D.D. Stable pharmaceutical composition comprising granulocyte-colony stimulating factor
US20070254836A1 (en) 2003-12-03 2007-11-01 Defrees Shawn Glycopegylated Granulocyte Colony Stimulating Factor
KR101439880B1 (ko) * 2004-01-08 2014-09-12 라티오팜 게엠베하 펩티드의 오-결합형 글리코실화
WO2005092391A2 (en) 2004-03-11 2005-10-06 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
WO2005092928A1 (en) 2004-03-11 2005-10-06 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein, prepared by reductive amination
DE102004036909B4 (de) 2004-07-29 2007-04-05 Infineon Technologies Ag Halbleiterbasisbauteil mit Verdrahtungssubstrat und Zwischenverdrahtungsplatte für einen Halbleiterbauteilstapel sowie Verfahren zu deren Herstellung
EP1869078A2 (en) 2005-03-17 2007-12-26 Zenotech Laboratories Limited Process for the purification of recombinant granulocyte-colony stimulating factor
BRPI0611221A2 (pt) 2005-06-01 2010-08-24 Maxygen Holdings Ltd polipeptÍdeos de g-csf peguilados e mÉtodos de produÇço dos mesmos
EP1762250A1 (en) 2005-09-12 2007-03-14 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Conjugates of hydroxyalkyl starch and an active substance, prepared by chemical ligation via thiazolidine
ITMI20061624A1 (it) 2006-08-11 2008-02-12 Bioker Srl Mono-coniugati sito-specifici di g-csf
CA2682897C (en) 2007-04-03 2016-11-22 Biogenerix Ag Methods of treatment using glycopegylated g-csf
US8207112B2 (en) * 2007-08-29 2012-06-26 Biogenerix Ag Liquid formulation of G-CSF conjugate

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1260230A1 (en) * 2000-02-29 2002-11-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preparations stabilized over long time
WO2005039620A1 (de) * 2003-10-20 2005-05-06 Hexal Biotech Forschungs Gmbh Stabile wässrige g-csf-haltige zusammensetzungen
WO2006074467A2 (en) * 2005-01-10 2006-07-13 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
WO2007099145A1 (de) * 2006-03-01 2007-09-07 Bioceuticals Arzneimittel Ag G-csf-flüssigformulierung

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PIEDMONTE ET AL.: "Formulation of Neulasta(R) (pegfilgrastim)". ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS, ELSEVIER BV, AMSTERDAM, NL, vol. 60, no. 1, 11 August 2007 (2007-08-11), pages 50-58, XP022370571, ISSN: 0169-409X, page 4, section "The stability of PEG-r-metHuG-CSF as a function of pH", page 51, column 1, paragraph 2, page 51, column 2, paragraph 1, page 57, section "Conclusion", figure 3 *
SCHNEIDER ARMIN ET AL.: "A role for G-CSF (granulocyte-colony stimulating factor) in the central nervous system". CELL CYCLE, vol. 4, no. 12, December 2005 (2005-12), pages 1753-1757, XP002501967, ISSN: 1538-4101, abstract *

Also Published As

Publication number Publication date
ZA201000798B (en) 2010-10-27
BRPI0815975A2 (pt) 2015-02-18
PL2197919T3 (pl) 2014-09-30
US8546328B2 (en) 2013-10-01
JP5836351B2 (ja) 2015-12-24
MX2010002448A (es) 2010-10-04
EP2578235A2 (en) 2013-04-10
HRP20140590T1 (hr) 2014-08-15
CN104689333B (zh) 2018-05-29
WO2009027437A1 (en) 2009-03-05
JP2010536929A (ja) 2010-12-02
JP5570988B2 (ja) 2014-08-13
AU2008292186A1 (en) 2009-03-05
EP2197919B1 (en) 2014-04-09
CA2696594C (en) 2019-03-19
EP2578235A3 (en) 2013-08-28
EA201070315A1 (ru) 2010-08-30
SI2197919T1 (sl) 2014-09-30
KR20100052501A (ko) 2010-05-19
US20110053844A1 (en) 2011-03-03
BRPI0815975B1 (pt) 2019-04-02
AU2008292186B9 (en) 2014-07-03
CY1115908T1 (el) 2017-01-25
BRPI0815975B8 (pt) 2021-05-25
CA2696594A1 (en) 2009-03-05
IL204190A (en) 2015-01-29
NZ583276A (en) 2012-06-29
CN104689333A (zh) 2015-06-10
UA98001C2 (ru) 2012-04-10
ES2476915T3 (es) 2014-07-15
RS53404B (en) 2014-10-31
EP2197919A1 (en) 2010-06-23
DK2197919T3 (da) 2014-07-07
JP2014101362A (ja) 2014-06-05
DE202008017456U1 (de) 2009-08-27
PT2197919E (pt) 2014-07-17
CN101827864A (zh) 2010-09-08
AU2008292186B2 (en) 2014-02-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8207112B2 (en) Liquid formulation of G-CSF conjugate
JP5836351B2 (ja) Ｇ−ｃｓｆ結合体の液体調製物
RU2519031C1 (ru) Жидкие препаративные формы для длительно действующего конъюгата g-csf
EP2459226B1 (en) Glycopolysialylation of proteins other than blood coagulation proteins
JPH08504784A (ja) Ｇ−ｃｓｆの安定凍結乾燥薬理製剤
JP2020037701A (ja) 非血液凝固タンパク質の糖ポリシアル酸化
ES2693273T3 (es) Preparación farmacéutica
US10052361B2 (en) Liquid pharmaceutical composition of conjugated erythropoietin
CA2812704C (en) Formulations for bovine granulocyte colony stimulating factor and variants thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Registration of transfer of a eurasian patent in accordance with the succession in title
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU