EA019478B1 - Устойчивые к имидазолиноновому гербициду растения подсолнечника и их применение - Google Patents

Abstract

Описаны устойчивые к имидазолиноновому гербициду растения подсолнечника и их потомство. Растения подсолнечника MUT31 и их потомство обладают повышенной устойчивостью по меньшей мере к одному имидазолиноновому гербициду по сравнению с растениями подсолнечника дикого типа. Также раскрываются способы борьбы с сорняками вблизи устойчивых к имидазолиноновому гербициду растений и способы повышения устойчивости к имидазолиноновому гербициду растений подсолнечника.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии, в особенности к резистентным к гербицидам растениям подсолнечника и новым полинуклеотидным последовательностям, которые кодируют большую субъединицу белков синтазы ацетогидроксикислот дикого типа и резистентную к гербицидам.

Предпосылки создания изобретения

Синтаза ацетогидроксикислот (ЛНЛЗ; ЕС 4.1.3.18, также известна как ацетолактатсинтаза или ЛЬЗ), представляет собой первый фермент, который катализирует биохимический синтез аминокислот с разветвленными цепями, таких как валин, лейцин и изолейцин (З1идй (1999) Вюзуикйез1з ой тайпе, кисте апб 1зо1еисте, в Р1аик Лтто Лс1б, под ред. Зтдй, В.К., Магсе1 Иеккег 1пс. Ыете Уогк, Ыете Уогк, сс. 227-247). АНЛ8 является мишенью действия пяти структурно различных семейств гербицидов, включая сульфонилмочевины (ЬаВозза и Еа1со (1984) Ттеибб Вюкесйпок 2:158-161), имидазолиноны (8йаиет и др. (1984) Р1аик Рйузю1. 76:545-546), триазолопиримидины (Зийтаташаи и Сег\\'1ск (1989) 1ий1Ьйюи о! асеко1аскаке зуикйазе Ьу кба7о1орупт1бтез, в Вюсака1уз1з т Лдбси1кига1 Вюкесйиокду, под ред. АЫкакет, ЕК и Зоииек, Р.Е., ЛСЗ Зутрозшт Зебез, Лтебсаи Сйетка1 8ос1е(у, АазЫидкои, И.С., сс. 277-288), и пиримидилоксибензоаты (Зийтаташаи и др. (1990) Р1аик Рйузю1 94: 239-244). Гербициды из семейства имидазолинонов и сульфонилмочевин широко используют в современном сельском хозяйстве благодаря их эффективности в очень небольших нормах расхода и относительной нетоксичности для животных. Путем ингибирования активности ЛНЛЗ, представители этих семейств гербицидов препятствуют дальнейшему росту и развитию чувствительных к ним растений, включая многие виды сорняков. Примерами коммерчески доступных гербицидов из семейства имидазолинонов являются РИВЗЫТ® (имазетапир), ЗСЕРТЕК® (имазаквин) и ЛКЗЕМЛЕ® (имазапир). Примерами гербицидов из семейства сульфонилмочевин являются хлорсульфурон, метсульфуронметил, сульфометуронметил, хлоримуронэтил, трифенсульфуронметил, трибенуронметил, бенсульфуронметил, никосульфурон, этаметсульфуронметил, римсульфурон, трифлусульфуронметил, триасульфурон, примисульфуронметил, циносульфурон, амидосульфурон, флазасульфурон, имазосульфурон, пиразосульфуронэтил и галосульфурон.

Благодаря их высокой эффективности и низкой токсичности, имидазолиноновые гербициды являются предпочтительными для опрыскивания на верхней части растений на большой площади их произрастания. Возможность осуществлять гербицидом опрыскивание верхней части растений на большой площади их произрастания снижает стоимость, связанную с созданием и поддержанием плантаций, и снижает необходимость в подготовке участка приготовления перед использованием таких химических средств защиты. Опрыскивание верхних частей требуемых толерантных видов приводит также к возможности достижения максимального потенциального урожая требуемых видов из-за отсутствия видовконкурентов. Однако возможность применения таких методов опрыскивания верхних частей растений зависит от присутствия резистентной к имидазолинону видов желательной растительности в области проведения обработок.

Из основных сельскохозяйственных культур некоторые виды бобовых, такие как соя, обладают природной резистентностью к имидазолиноновым гербицидам благодаря их способности быстро метаболизировать гербицидные соединения (Зйаиег и ИоНизои (1985) Аееб Зск 33:469-471). Другие культурные растения, такие как кукуруза (Ыетейоизе и др. (1992) Р1аик Рйузю1. 100:882-886) и рис (Ваттей и др. (1989) Сгор Зайеиегз йот НегЬ1с1без, Лсабетк Рте88, Ыете Уогк, сс. 195-220) в некоторой степени чувствительны к имидазолиноновым гербицидам. Различный уровень чувствительности к имидазолиноновым гербицидам зависит от химической природы конкретного гербицида и различного метаболизма конкретного соединения в каждом растении, приводящего к превращению токсичной формы в нетоксичную (Зйаиег и др. (1984) Р1аик Рйузю1. 76:545-546; Вго\уп и др., (1987) Реббс. Вюсйет. Рйузю1. 27:24-29). Чувствительность зависит также в большей степени от других физиологических различий растений, таких как абсорбция и транслокация (Зйаиег и Войтзои (1985) Аееб Зск 33:469-471).

Растения, которые резистентны к имидазолинонам, сульфонилмочевинам, триазолопиримидинам и пиримидилоксибензоатам, были успешно получены с использованием мутагенеза семени, микроспор, пыльцы и каллюса таких растений, как 2еа тауз, ЛтаЬ1борз1з кбабаиа, Втаззка иариз (то есть, канола) С1усте тах, №собаиа каЬасит, сахарная свекла (Века уи1дабз) и Огуха забуа (ЗеЬазбаи и др. (1989) Сгор Зск 29:1403-1408; Зтеаизои и др., 1989 Тйеог. Лрр1. Сеиек. 78:525-530; Ыетейоизе и др. (1991) Тйеог. Лрр1. Сеиек. 83:65-70; Закйаз1уаи и др. (1991) Р1аик Рйузюк 97:1044-1050; Моигаиб и др. (1993) 1. Негеб1ку 84:9196; Абдйк и Реииег (1998) Тйеог. Лрр1. Сеиек. 96:612-620; патент США № 5,545,822). Во всех случаях, резистентность была обусловлена индивидуальным, частично доминантным ядерным геном. Ранее с помощью мутагенеза семян были получены также резистентные к имидазолинонам четыре линии растений пшеницы Тббсит аезбуит Ь. су. Е1бе1 (Ыетейоизе и др. (1992) Р1аик Рйузюк 100:882-886). Опыты по оценке особенностей наследования подтвердили, что резистентность обусловлена индивидуальным, частично доминантным геном. Основываясь на изучении аллелей, авторы сделали заключение о том, что мутации в четырех идентифицированных линиях локализованы в одном и том же локусе. Один из генов, обусловливающих толерантность культивара Е1бе1, был обозначен как ЕЗ-4 (Ыетейоизе и др. (1992) Р1аик

- 1 019478

РЬу8ю1. 100:882-886).

Популяции растений природного происхождения, которые, как было обнаружено, были резистентны к гербицидам на основе имидазолинона и/или сульфонилмочевины, также использовали для выведения резистентных к гербицидам скрещенных линий подсолнечника. Недавно при использовании зародышевой плазмы, полученной из дикой популяции подсолнечника обыкновенного (Не11ап1йи8 аппиик) были разработаны две линии подсолнечника, которые резистентны к гербициду на основе сульфонилмочевины, в качестве источника признака резистентности к гербициду (МШег и А1-КНа11Ь (2004) Сгор 8с1. 44:1037-1038). Ранее, ^Нйе и др. ((2002) \Уеей 8с1. 50:432-437) описали, что отдельные растения из дикой популяции подсолнечника обыкновенного из штата Южная Дакота, США, являлись перекрестно резистентными к гербицидам на основе имидазолинона и сульфонилмочевины. При анализе части кодирующего участка генов большой субъединицы синтазы ацетогидроксикислот (ЛНЛ§Ь) отдельных растений из этой популяции была обнаружена точечная мутация, приводящая к аминокислотной замене А1а на Уа1 в белке АНА8Б подсолнечника, которая соответствует А1а₂₀₅ в белке АНА8Б АгаЫйоркй (НаНаиа дикого типа (^Ы1е и др. (2003) \Уеей 8с1. 51:845-853).

Компьютерное моделирование трехмерной конформации комплекса АНА8-ингибитор позволило предсказать несколько аминокислот в предполагаемом связывающемся с ингибитором кармане в качестве сайтов, в которых индуцированные мутации, по-видимому, обуславливали селективную резистентность к имидазолинонам (Ой и др. (1996) 1. Мо1. Бю1. 263:359-368). Растения пшеницы, полученные с использованием некоторых таких рационально созданных мутаций в предполагаемых сайтах связывания фермента АНА8, действительно обладали специфической резистентностью к одному классу гербицидов (Ой и др. (1996) 1. Мо1. Бю1. 263:359-368).

Резистентность растений к имидазолиноновым гербицидам также была описана во многих патентах. В патентах США №№ 4,761,373, 5,331,107, 5,304,732, 6,211,438, 6,211,439 и 6,222,100 описано в целом применение измененного гена АНА8 для создания резистентности к гербицидам у растений, и, в частности, описаны определенные линии зерновых, резистентные к имидазолинонам. В патенте США № 5,013,659 описаны растения, имеющие обуславливающие резистентность к гербицидам мутации, которые затрагивают по меньшей мере одну аминокислоту в одной или нескольких консервативных областях. Мутации, описанные в этом источнике, кодируют либо перекрестную резистентность к имидазолинонам и сульфонилмочевинам либо специфическую резистентность к сульфонилмочевинам, однако специфическая резистентность к имидазолинонам не была описана. В патенте США № 5,731,180 и патенте США № 5,767,361 обсуждается выделенный ген, имеющий единичную аминокислотную замену в аминокислотной последовательности АНА8 дикого типа однодольных растений, которая обуславливает специфическую резистентность к имидазолинонам. Дополнительно, растения риса, являющиеся резистентными к гербицидам, которые препятствуют АНА8, были выведены путем мутационной селекции, а также путем отбора резистентных к гербицидам растений из совокупности растений риса, полученных путем культивирования пыльников. См., патенты США №№ 5,545,822, 5,736,629, 5,773,703, 5,773,704, 5,952,553 и 6,274,796.

У растений, как у всех других исследуемых организмов, фермент АНА8 состоит из двух субъединиц: большой субъединицы (каталитическая роль) и малой субъединицы (регуляторная роль) (ЭиддКЬу и Раид (2000) 1. ВюсНет. Мо1. Вю1. 33:1-36). Большая субъединица АНА8 (также в настоящем изобретении обозначается как АНА8Ь) может кодироваться единственным геном, как в случае АгаЫборДк, риса и сахарной свеклы, или посредством представителей семейства полимерных генов многих генов, как в кукурузе, канопле и хлопке. Специфические замены одного нуклеотида в большой субъединице придают ферменту степень нечувствительности к одному или нескольким классам гербицидов (СНапд и Эидд1еЬу (1998) ВюсНет 1. 333:765-777).

Например, пшеница обыкновенная, Тгйгсиш аеШуит Ь., содержит три гомологичных гена генов большой субъединицы синтазы ацетогидроксикислот. Каждый из этих генов проявляет значительную экспрессию, основанную на чувствительности к гербициду и биохимических данных от мутантов в каждом из этих трех генов (А^сеих! и др. (2003) 1п1егиайоиа1 8ос1е1у о! Р1ап( Мо1еси1аг Вю1одй18 Сопдге55. Вагсе1оиа, 8раш, № реферата 810-17). Кодирующие последовательности всех трех генов имеют значительную гомологию на нуклеотидном уровне (\УО 03/014357). При секвенировании генов АНА8Б из различных разновидностей ТпОсит аекйуит, было обнаружено, что молекулярной основой толерантности к гербициду в большинстве 1М1-толерантных (толерантных к имидазолинонам) линий является мутация 8653(Άΐ)Ν, указывающая на замену серина на аспарагин в положении, эквивалентном серину в аминокислоте 653 в АгаЫборДк (НаКапа (\УО 03/01436; \УО 03/014357). Эта мутация происходит вследствие полиморфизма одного нуклеотида (8ΝΡ) в последовательности ДНК, которая кодирует белок АНА8Ь.

Также известно, что множественные гены АНА8Ь встречаются в видах двудольных растений. Недавно, Ко1ктап и др. ((2004) ТНеог. Арр1. Сепе1. 109: 1147-1159) сообщили об идентификации, клонировании и секвенировании трех генов АНА8Ь (АНА8Ь1, АНА8Ь2 и АНА8Ь3) из генотипов подсолнечника (НеПап11ш5 аппиит Ь.), резистентных к гербициду и дикого типа. Ко1ктап и др. описали, что резистентность к гербициду была вызвана либо заменой Рго197Ьеи (используя номенклатуру аминокислотных положений АНА8Ь АгаЫборДк) или заменой А1а205Уа1 в белке АНА8Ь1 и что каждая из этих замен обес

- 2 019478 печивает резистентность как к гербицидам семейства имидазолинонов, так и семейства сульфонилмочевин.

Принимая во внимание их высокую эффективность и низкую токсичность, имидазолиноновые гербициды являются преимущественными для применения в сельском хозяйстве. Однако возможность применения имидазолиноновых гербицидов, в особенности в конкретной системе выращивания сельскохозяйственных культур, зависит от наличия резистентных к имидазолинонам разновидностей представляющего интерес сельскохозяйственного растения. Для получения таких резистентных к имидазолинонам разновидностей селекционерам необходимо получить выведенные линии с признаком резистентности к имидазолинонам. Следовательно, необходимы дополнительные резистентные к имидазолинонам выведенные линии и разновидности сельскохозяйственных растений, а также способы и композиции для получения и применения резистентных к имидазолинонам выведенных линий и разновидностей.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает растения подсолнечника, имеющие повышенную резистентность по меньшей мере к одному гербициду по сравнению с растением подсолнечника дикого типа. В особенности растения подсолнечника по изобретению обладают повышенной резистентностью по меньшей мере к одному имидазолинононовому гербициду, в особенности имазамоксу и/или имазапиру, по сравнению с растением подсолнечника дикого типа. В отличие от описанных ранее резистентных к имидазолинонам растений подсолнечника, растения подсолнечника согласно настоящему изобретению включают новый механизм резистентности к гербициду, в который не вовлечена мутация в гене, кодирующем белок большой субъединицы синтазы ацетогидроксикислот (АНА8Ь). Растения подсолнечника по изобретению также включают семена и потомство растений, которые содержат по меньшей мере одну копию гена или полинуклеотида, кодирующего резистентный к гербициду белок АНА8Ь по изобретению.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение обеспечивает резистентные к гербицидам растения подсолнечника, которые имеют происхождение из линии подсолнечника, которая в настоящем изобретении обозначается как МиТ31.

Образец семян линии МиТЗ 1 задепонирован в Американской коллекции типовых культур (АТСС) под регистрационным номером АТСС для цели патентования РТА-7839. Настоящее изобретение также обеспечивает семена, потомство растений и другие потомки растений, которые обладают характеристиками резистентности к гербицидам МиТЗ 1.

Настоящее изобретение обеспечивает способ борьбы с сорняками вблизи резистентных к гербицидам растений подсолнечника по изобретению. Способ включает обработку эффективным количеством гербицида сорняков и резистентного к гербицидам растения подсолнечника, где резистентное к гербицидам растение подсолнечника обладает повышенной резистентностью по меньшей мере к одному гербициду, предпочтительно имидазолиноновому гербициду, более предпочтительно имазамоксу, по сравнению с растением подсолнечника дикого типа. Гербицидом можно обрабатывать, например, листья растений, семена растений перед посевом, и/или почву перед или после посева.

Настоящее изобретение также обеспечивает способы получения резистентного к гербицидам растения подсолнечника. Способы включают скрещивание первого растения подсолнечника, обладающего резистентностью к гербицидам, со вторым растением подсолнечника, которое не резистентно к гербициду, где первое растение подсолнечника обладает характеристиками резистентности к гербицидам МиТ31, в особенности растение подсолнечника МиТ31 или любой резистентный к гербицидам потомок МиТ31. Такое резистентное к гербициду растение обладает характеристиками резистентности к гербицидам МНТ31, характерные семена МИТ31 были задепонированы в АТСС под регистрационным номером для цели патентования РТА-7839. Способы также охватывают отбор потомства растения, которое резистентно к гербициду.

Дополнительно, настоящее изобретение обеспечивает способы повышения резистентности к гербицидам растения подсолнечника. Способы включают скрещивание первого растения подсолнечника, обладающего резистентностью к гербицидам, со вторым растением подсолнечника, где первое растение подсолнечника обладает характеристиками резистентности к гербицидам МНТ31, в особенности растение подсолнечника МНТ31 или любой резистентный к гербицидам потомок МЦТ31. Второе растение подсолнечника может, но это не является обязательным, обладать резистентностью по меньшей мере к одному гербициду. Способы также включают отбор потомства растения, которое обладает повышенной резистентностью к гербицидам по сравнению с резистентностью к гербицидам второго растения подсолнечника. В одном варианте осуществления по изобретению, второе растение подсолнечника содержит по меньшей мере один ген АНА8Ь, обеспечивающий резистентность к гербициду. Такое второе растение подсолнечника обладает повышенной резистентностью к одному или нескольким гербицидам, которые ингибируют АНА8, предпочтительно имидазолиноновому гербициду.

Краткое описание фигур

На чертеже графически представлены результаты 2X3X2 факторного эксперимента для исследования действий на генотип подсолнечника (КНА266 или МНТ31), при дозе гербицида (0, 0,25Х и 0,50Х; где X = 50 г активного вещества имазамокса/га), и малатион (0 или 1000 г активного вещества/га). Расте

- 3 019478 ния подсолнечника находились на стадии роста 3-4 листа во время опрыскивания малатионом и гербицидом. Малатионом опрыскивали растения за 30 мин до опрыскивания имазамоксом. Растения подсолнечника оценивали через 7 дней после опрыскиванием гербицидом для определения степени поражения. Более подробное описание представлено ниже в примере 3.

Подробнное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к растениям подсолнечника, которые обладают повышенной резистентностью по меньшей мере к одному гербициду по сравнению с растениями подсолнечника дикого типа. Резистентные к гербицидам растения подсолнечника получали, как описано в настоящей заявке ниже, подвергая растения подсолнечника дикого типа (по отношению к резистентности к гербицидам) действию мутагена, позволяя растениям дозревать и размножаться, и отбирая потомство растений, которые проявляют повышенную резистентность к имидазолиноновому гербициду, имазамоксу, по сравнению с резистентностью растения подсолнечника дикого типа к имидазолиноновому гербициду. Изобретение обеспечивает новую резистентную к гербицидам линию подсолнечника, обозначенную в данной заявке как МиТ31. Поскольку настоящее изобретение не связано любым конкретным биологическим механизмом, то резистентные к гербицидам растения подсолнечника по изобретению включают новый механизм резистентности к гербицидам, который независим от мутации или мутаций в одном или нескольких генах АНА8Ь. Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает новый источник резистентности к имидазолинонам, который находит применение в способах борьбы с сорняками, а также в способах получения резистентных к гербицидам растений подсолнечника или повышения резистентности к гербицидам растений подсолнечника, которые уже обладают резистентностью к гербицидам, включая, но не ограничиваясь только ими, резистентность к имидазолинонам.

В контексте настоящего изобретения, термины толерантный к гербициду и резистентный к гербициду используются взаимозаменяемо и имеют идентичное значение и идентичный объем. Аналогично, термины толерантность к гербициду и резистентность к гербициду используются взаимозаменяемо и имеют идентичное значение и идентичный объем. Подобным образом, термины резистентный к имидазолинону и резистентность к имидазолинону используются взаимозаменяемо и имеют идентичное значение и идентичный объем, как и термины толерантный к имидазолинону и толерантность к имидазолинону, соответственно.

Настоящее изобретение охватывает толерантные к гербицидам или резистентные к гербицидам растения и способы получения и использования таких растений. Толерантное к гербициду или резистентное к гербициду растение представляет собой растение, которое толерантно или резистентно по меньшей мере к одному гербициду на уровне, который обычно убивает или ингибирует рост нормального растения или растения дикого типа.

В одном варианте осуществления по изобретению способы согласно настоящему изобретению повышения резистентности к гербициду растения задействуют применение растений подсолнечника, содержащих резистентные к гербициду полинуклеотиды АНА8Ь и резистентные к гербициду белки АНА8Ь. Резистентный к гербициду полинуклеотид АНА8Б представляет собой полинуклеотид, который кодирует резистентный к гербициду белок АНА8Ь, где белок обеспечивает резистентную к гербициду активность АНА8. Резистентный к гербициду белок АНА8Ь представляет собой белок АНА8Ь, который проявляет повышенную активность АНА8, относительно активности АНА8 белка АНА8Ь дикого типа, где в присутствии по меньшей мере одного гербицида, для которого известно препятствование активности АНА8 и при концентрациях или уровне гербицида, для которого известно ингибирование активности АНА8 белка АНА8Ь дикого типа. Кроме того, активность АНА8 такого толерантного к гербициду или резистентного к гербициду белка АНА8Ь может обозначаться в настоящем изобретении как толерантная к гербициду или резистентная к гербициду активность АНА8.

Кроме того, установлено, что толерантный к гербициду или резистентный к гербициду белок АНА8Ь может быть встроен в растение путем трансформации растения или его предка нуклеотидной последовательностью, кодирующей толерантный к гербициду или резистентный к гербициду белок АНА8Ь. Такие толерантные к гербициду или резистентные к гербициду белки АНА8Ь кодируются толерантными к гербициду или резистентными к гербициду полинуклеотидами АНА8Ь. Альтернативно, толерантный к гербициду или резистентный к гербициду белок АНА8Ь может встречаться в растении в результате встречающейся в природе или индуцированной мутации в эндогенном гене АНА8Ь в геноме растения или его предшественника. Нуклеотидные последовательности, кодирующие резистентные к гербициду белки АНА8Ь и резистентные к гербициду растения, содержащие эндогенный ген, который кодирует резистентный к гербициду белок АНА8Ь, известны в данной области. См., например, патенты США №№ 5,013,659, 5,731,180, 5,767,361, 5,545,822, 5,736,629, 5,773,703, 5,773,704, 5,952,553 и 6,274,796; все из них включены в данную заявку в качестве ссылки.

Настоящее изобретение обеспечивает растения, ткани растений и клетки растений с повышенной резистентностью или толерантностью по меньшей мере к одному гербициду, в особенности имидазолиноновому гербициду, более предпочтительно имазамоксу, имазапиру, или обоим имазамоксу и имазапиру. Предпочтительное количество или концентрация гербицида представляет собой эффективное количество или эффективную концентрацию. Под эффективным количеством и эффективной концен

- 4 019478 трацией понимают количество и концентрацию, соответственно, достаточные для уничтожения или ингибирования роста сходных, дикого типа, растений, ткани растения или клетки растения, но при этом указанное количество не убивает или не ингибирует в значительной степени резистентные к гербициду растения, ткани растения и клетки растений согласно настоящему изобретению. Обычно эффективное количество гербицида представляет собой количество, которое традиционно применяют в системах сельскохозяйственного производства для уничтожения рассматриваемых сорняков. Такое количество известно специалисту в данной области, или легко может быть определено с помощью методов, известных в данной области.

Способы согласно настоящему изобретению находят применение для повышения резистентности к гербицидам растений подсолнечника, включая растение подсолнечника, которое обладает резистентностью к одному или нескольким гербицидам, таким как, например, те гербициды, которые ингибируют или другим образом препятствуют или с активностью фермента АНА8 дикого типа. Такие гербициды также в настоящем изобретении могут обозначаться как гербициды, которые ингибируют АНА8 или просто АНА8-ингибиторы. Как используется в настоящем изобретении, гербицид, который ингибирует АНА8 или ингибитор АНА8 не следует понимать как ограничение только одним гербицидом, который препятствует активности фермента АНА8. Таким образом, если специально не указано иначе или не является очевидным из контекста, гербицид, который ингибирует АНА8 или ингибитор АНА8 может представлять собой один гербицид или смесь двух, трех, четырех или более гербицидов, каждый из которых препятствует активности фермента АНА8.

Под растением подсолнечника, тканью растения или клеткой растения дикого типа понимают растение подсолнечника, ткань растения или клетку растения, соответственно, которые не обладают свойствами резистентности к гербицидам резистентных к гербицидам растений подсолнечника согласно настоящему изобретению, в особенности МиТ31 и резистентных к гербициду его потомков. Следовательно, применение термина дикий тип не обозначает, что у растения подсолнечника, ткани растения или клетки растения отсутствует рекомбинантная ДНК в его геноме, и/или отсутствует резистентные к гербициду характеристики, которые отличаются от раскрытых в настоящем изобретении.

Как используется в настоящей заявке, если из контекста не очевидно другое, термин растение предназначен для обозначения растения на какой-либо стадии развития, а также какой-либо части или частей растения, которая может быть прикреплена к или отделена от целого интактного растения. Такие части растения включают органы, ткани и клетки растений, но не ограничиваются ими. Примеры конкретных частей растения включают стебель, листья, корень, соцветие, цветок, цветок компактного соцветия, фрукт, цветоножку, плодоножку, тычинку, пыльник, пыльцу, рыльце, столбик, завязь, лепесток, чашелистик, плодолистик, верхушку корня, корневой чехлик, корневую волосинку, листовые волосинки, волосинки семян, пыльцевое зернышко, микроспору, семядолю, гипокотиль, эпикотиль, ксилему, флоэму, паренхиму, эндосперм, клетку-спутник, замыкающую клетку, и любые другие известные органы, ткани и семена растения. Более того, установлено, что семя представляет собой растение.

Растения подсолнечника согласно настоящему изобретению включают как нетрансгенные, так и трансгенные растения. Под термином нетрансгенное растение понимают растение, в геноме которого отсутствует рекомбинантная ДНК. Под термином трансгенное растение понимают растение, которое содержит в своем геноме рекомбинантную ДНК. Такое трансгенное растение может быть получено путем встраивания рекомбинантной ДНК в геном растения. Если такую рекомбинантную ДНК встраивают в геном трансгенного растения, то потомство растения также может содержать рекомбинантную ДНК. Потомство растения, которое содержит по меньшей мере часть рекомбинантной ДНК по меньшей мере одного родительского трансгенного растения, также является трансгенным растением.

Настоящее изобретение обеспечивает резистентную к гербициду линию подсолнечника, которая в настоящем изобретении обозначается как МиТ31. Было задепонировано по меньшей мере 2500 семян линии МиТЗ 1 подсолнечника (НейапБшк аппит Ь.) в Патентном Депозитарии Американской коллекции типовых культур (АТСС), Мапкаккак, УА 20110 И8А 22 августа 2006 года под регистрационным номером АТСС для целей патентования РТА-7839. Депонирование линии подсолнечника МПТ31 было осуществлено на срок по меньшей мере 30 лет и по меньшей мере 5 лет после последнего запроса для обеспечения образца депонирования, полученного АТСС. Депозит будет поддерживаться согласно условиям Будапештского Договора о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры. Депонирование линии подсолнечника МПТ31 было осуществлено на срок по меньшей мере 30 лет и по меньшей мере 5 лет после последнего запроса для обеспечения образца депонирования, полученного АТСС. Дополнительно, заявители удовлетворили все требования 37 С.Е.К.. §§ 1.801-1.809, включая обеспечение указания жизнеспособности образца.

Настоящее изобретение обеспечивает резистентные к гербицидам растения подсолнечника линии МПТ31, которые получают путем мутационной селекции. Растения подсолнечника дикого типа подвергали мутагенезу путем воздействия на растения мутагена, в особенности химического мутагена, более предпочтительно этилметансульфонат (ЕМ8). Однако настоящее изобретение не ограничивается резистентными к гербицидам растениями подсолнечника, которые получают с помощью метода мутагенеза с применением химического мутагена ЕМ8. Любой способ мутагенеза, известный в данной области техни

- 5 019478 ки, можно использовать для получения резистентных к гербицидам растений подсолнечника согласно настоящему изобретению. В таких способах мутагенеза можно применять, например, любой один или нескольких мутагенов: ионизирующее излучение, такие как рентгеновские лучи, гамма-лучи (например, кобальт 60 или цезий 137), нейтроны, (например, продукта ядерного деления урана 235 в атомном реакторе), бета-излучение (например, излучаемое радиоактивными изотопами, такими как фосфор 32 или углерод 14), и ультрафиолетовое излучение (предпочтительно в диапазоне от 2500 до 2900 нм), и химические мутагены, такие как аналоги оснований (например, 5-бром-урацил), родственные соединения (например, 8-этокси кофеин), антибиотики (например, стрептонигрин), алкилирующие средства (например, сернистые иприты, азотистые иприты, эпоксиды, этиленамины, сульфаты, сульфонаты, сульфоны, лактоны), азид, гидроксиламин, азотистая кислота или акридины. Резистентные к гербициду растения также могут быть получены с помощью методов культивирования тканей для отбора клеток растений, содержащий мутации резистентности к гербициду и затем регенерации из них резистентных к гербициду растений. См., например, патенты США №№ 5,773,702 и 5,859,348, оба документа включены в настоящее изобретение полностью в качестве ссылки. Дальнейшие подробности мутационной селекции могут быть обнаружены в РппараЕ οί СиШуат Осус1ортсШ Рейт, 1993 МасшШаи РиЫкЫпд Сотрапу, раскрытие этого документа включено в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Растения подсолнечника и семена согласно настоящему изобретению обладают характеристиками резистентности к гербицидам МИТ31. Такие растения и семена могут обозначаться в настоящем изобретении как содержащие МИТ31 признак. МИТ31 признак придает резистентность к имидазолиноновым гербицидам растению или семени, обладающему этим признаком, независимо от того, находится ли этот признак в гетерозиготном или гомозиготном состоянии в растении. В особенности, МИТ31 признак придает растению подсолнечника или семени резистентность по меньшей мере к одному имидазолиноновому гербициду, в особенности имазамоксу и/или имазапиру, где резистентность к имидазолинону уменьшается или ингибируется фосфорорганическим инсектицидом малатионом. Как описано в настоящей заявке ниже, обнаружено, что резистентность или толерантность МБТ31 растений подсолнечника к имидазолиноновому гербициду имазамоксу уменьшается или ингибируется после обработки малатионом МИТ31 растений подсолнечника перед применением имазамокса. Таким образом, растения подсолнечника и семена, содержащие МИТ31 признак, содержат ингибируемую малатионом резистентность к имидазолинону. Несмотря на то, что настоящее изобретение не ограничено конкретным биологическим механизмом, полагают, что резистентность к гербицидам МИТ31 растений подсолнечника или МИТ31 признак обусловлена индуцированной мутацией в единичном гене в ядерном геноме подсолнечника.

Растения подсолнечника согласно настоящему изобретению включают, например, потомки линии МИТ31, которые являются гетерозиготными или гомозиготными по МИТ31 признаку. Установлено, что такие потомки могут быть получены с помощью методов полового размножения или бесполого размножения, известных в данной области техники, таких как, например, культура тканей. Потомки линии МИТ31, которые содержат МИТ31 признак, могут быть идентифицированы путем определения, обладает ли потомок растения подсолнечника ингибируемой малатионом резистентность к имидазолинону. Настоящее изобретение не зависит от конкретного метода определения, обладает ли потомок растения подсолнечника ингибируемой малатионом резистентностью к имидазолинону. Можно использовать любой метод, известный в данной области техники, включая метод, описанный ниже в примере 3, для определения того, обладает ли потомок МИТ31 ингибируемой малатионом резистентностью к имидазолинону. Способ охватывает обработку малатионом потомка МИТ31 перед применением имидазолинонового гербицида и определения того, может ли малатион уменьшать или ингибировать резистентность потомка к имидазолиноновому гербициду. Потомки, которые содержат МПТ31 признак, содержат ингибируемую малатионом резистентность к имидазолинону. Таким образом, растения подсолнечника согласно настоящему изобретению включают, например, те растения подсолнечника, которые являются потомками МИТ31 и содержат ингибируемую малатионом резистентность к имидазолинону.

Настоящее изобретение обеспечивает способы повышения толерантности или резистентности растений подсолнечника, ткани растения, клетки растения или другой клетки-хозяина по меньшей мере к одному гербициду, в особенности к имидазолиноновому гербициду или смеси двух или более имидазолиноновых гербицидов. Для настоящего изобретения, имидазолиноновые гербициды включают, но не ограничиваясь только ими, РИКБШТ® (имазетапир), САЭКЕ® (имазапик), КАРТОВ® (имазамокс), 8СЕРТЕК® (имазаквин), А88ЕВТ® (имазетабенз), ΑΚ8ΕΝΑΕ® (имазапир), производное любого из вышеупомянутых гербицидов, и смесь двух или более вышеупомянутых гербицидов, например, имазапир/имазамокс (ΟΌΥ88ΕΥ®). Более специфически, имидазолиноновый гербицид может быть выбран из группы, включающей, но не ограничиваясь только ими, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2ил)-никотиновую кислоту, 2-(4-изопропил-4-метил-5 -оксо-2-имидазолин-2-ил)-3 -хинолинкарбоновую кислоту, 5-этил-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-никотиновую кислоту, 2-(4изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5-(метоксиметил)никотиновую кислоту, 2-(4-изопропил4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5-метилникотиновую кислоту, и смесь метил 6-(4-изопропил-4метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)метатолуата и метил 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2

- 6 019478 ил)паратолуата. Предпочтительным является применение 5-этил-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2имидазолин-2-ил)никотиновой кислоты и 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5(метоксиметил)никотиновой кислоты. Особенно предпочтительным является применение 2-(4изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5-(метоксиметил)никотиновой кислоты.

Резистентные к гербициду растения по изобретению находят применение в способах борьбы с сорняками. Таким образом, настоящее изобретение также обеспечивает способ борьбы с сорняками вблизи резистентного к гербициду растения подсолнечника по изобретению. Способ включает нанесение эффективного количества гербицида на сорняки и на резистентное к гербицидам растение подсолнечника, где растение обладает повышенной резистентностью по меньшей мере к одному гербициду, особенности к гербициду семейства имидазолинона или сульфонилмочевины, по сравнению с растением дикого типа. В таком способе борьбы с сорняками, резистентные к гербициду растения по изобретению предпочтительно представляют собой сельскохозяйственные культуры, включая, но не ограничиваясь только ими, подсолнечник, люцерну, Вгакыса §р., сою, хлопчатник, сафлор, арахис, табак, помидор, картофель, пшеницу, рис, кукурузу, ячмень, рожь, просо и сорго.

В результате получения растений, обладающих повышенной резистентностью к гербицидам, в особенности гербицидам семейства имидазолинона и сульфонилмочевины, можно применять широкое разнообразие композиции для защиты растений от сорняков, что способствует росту растений и снижает конкуренцию за питательные вещества. Гербицид можно применять индивидуально для предвсходовой, послевсходовой, предпосевной обработки и обработки в процессе посева с целью борьбы с сорняки в областях, окружающих растения, описанные в настоящем изобретении, или можно применять препаративную форму на основе имидазолинонового гербицида, которая содержит другие добавки. Гербицид также можно использовать для обработки семян. То есть, эффективную концентрацию или эффективное количество гербицида, или композицию, содержащую эффективную концентрацию или эффективное количество гербицида, можно наносить непосредственно на семена перед или при высевании семян. Добавки, входящие в состав препаративной формы имидазолинона или сульфонилмочевины или композиции, включающей другие гербициды, поверхностно-активные вещества, адъюванты, вещества, повышающие смачивающую способность, прилипатели, стабилизаторы или др. Препаративная форма гербицида может представлять собой влажный или сухой препарат и может включать, но не ограничиваясь только ими, текучие порошки, эмульгирующие концентраты и жидкие концентраты. Гербицид и препаративные формы гербицида можно применять в соответствии с общепринятыми методами, например, путем распыления, орошения, опыливания, дражирования и т.д.

Настоящее изобретение обеспечивает семена с повышенной резистентностью по меньшей мере к одному гербициду, в особенности имидазолиноновому гербициду. Такие семена включают, например, семена подсолнечника, которые являются резистентными к гербициду потомками линии подсолнечника митз1.

Потомок линии подсолнечника МиТЗ 1 включает любое растение, клетку растения или часть растения, которое имеет происхождение путем полового и/или бесполого размножения из МИТ31, репрезентативные семена МИТ31, которые были задепонированы в АТСС для целей патентования под регистрационным номером АТСС РТА-7839. Например, такой потомок включает растение, полученное путем скрещивания первого растения со вторым растением с получением семени третьего растения (то есть, потомка), где первое растение представляет собой растение подсолнечника МиТ31, а второе растение представляет собой другое растение подсолнечника, которое не является растением подсолнечника МиТ31. Такой потомок также включает любые растения, которые являются потомками третьего растения, независимо от того, получены они путем полового и/или бесполого размножения. Например, клетки, ткань или орган из третьего растения можно использовать для получения четвертого растения с помощью метода бесполого размножения, включая, но не ограничиваясь только ими, методы культивирования в условиях ίη νίΐτο клеток, тканей и органов растений и методы, включающие укоренение срезов стебля.

В настоящем изобретении, резистентный к гербициду потомок МПТ31 представляет собой потомок МПТ31, который обладает характеристиками резистентности к гербицидам МПТ31, являясь потомком одного или нескольких МПТ31 растений подсолнечника. Другими словами, такой резистентный к гербициду потомок наследует характеристики резистентности к гербициду растения подсолнечника МПТ31 путем полового размножения, бесполого размножения или их комбинации.

Если специально не указано иначе или из контекста не следует другое, потомство растения включает растение любого последующего поколения, предок которого может быть прослежен к этому растению. Аналогично этому, если специально не указано иначе, резистентное к гербициду потомство МПТ31 включает растение любого последующего поколения, предок которого может быть прослежен к МПТ31 и которое обладает характеристиками резистентности к гербицидам МПТ31 посредством этого предка.

Настоящее изобретение обеспечивает способы получения резистентного к гербициду растения, в особенности резистентного к гербициду растения подсолнечника, путем общепринятой селекции растений, включающей половое размножение Способы включают скрещивание первого растения, обладающе

- 7 019478 го резистентностью к гербициду, со вторым растением, которое не является резистентным к гербициду. Первое растение может представлять собой любое из резистентных к гербициду растение согласно настоящему изобретению, включая, например, растения подсолнечника, которые обладают характеристиками резистентности к гербицидам растения подсолнечника МИТ31, в особенности растения подсолнечника митз 1 и резистентные к гербициду потомки МИТ31. Второе растение может представлять собой любое растение, которое может продуцировать жизнеспособное потомство растений (то есть, семена) при скрещивании с первым растением. Как правило, но необязательно, первое и второе растения являются растениями одного вида. Способы по изобретению также могут охватывать одно или несколько поколений обратного скрещивания потомства растений первого скрещивания с растением той же линии или генотипа в качестве первого либо второго растения. Альтернативно, потомство первого скрещивания или любого последующего скрещивания можно скрещивать с третьим растением другой линии или генотипа, чем первое либо второе растения. Способы по изобретению дополнительно могут охватывать отбор растений, которые обладают характеристиками резистентности к гербицидам первого растения.

Настоящее изобретение также обеспечивает способы повышения резистентности растения к гербициду, в особенности резистентности к гербициду растения подсолнечника, путем общепринятой селекции растения, включающей половое размножение. Способы включают скрещивание первого растения, обладающего резистентностью к гербициду, со вторым растением, которое может быть резистентным к гербициду или может не быть резистентным к гербициду или может быть резистентным к другому гербициду или гербицидам, отличающихся от таких для первого растения. Первое растение может представлять собой любое из резистентных к гербицидам растение подсолнечника согласно настоящему изобретению, включая, например, растение подсолнечника МиТЗ 1 и его резистентный к гербициду потомок. Второе растение может представлять собой любое растение, которое способно продуцировать жизнеспособное потомство растений (то есть, семена) при скрещивании с первым растением. Как правило, но не обязательно, первое и второе растение являются растениями одного вида. Потомство растений, получаемое с помощью этого метода согласно настоящему изобретению, обладает повышенной или усиленной резистентностью к гербициду по сравнению с первым либо вторым растением или обоими. Если первое и второе растения являются резистентными к различным гербицидам, то потомство растений будет обладать комбинированными характеристиками резистентности к гербицидам первого и второго растений. Способы по изобретению дополнительно могут охватывать одно или несколько поколений обратного скрещивания потомства растений первого скрещивания с растением той же самой линии или генотипа в качестве первого либо второго растения. Альтернативно, потомство первого скрещивания или любого последующего скрещивания можно скрещивать с третьим растением другой линии или генотипа, чем первое либо второе растения. Способы по изобретению дополнительно могут охватывать отбор растений, которые обладают характеристиками резистентности к гербицидам первого растения, второго растения, или обоих первого и второго растения.

Настоящее изобретение обеспечивает способы повышения или усиления резистентности растений подсолнечника по меньшей мере к одному имидазолиноновому гербициду. Известно, что имидазолиноновые гербициды являются гербицидами, которые ингибируют АНА8, в связи с этой установленной способностью ингибировать активность АНА8 в условиях ίη νίνο и ίη νίΐτο. Кроме имидазолиноновых гербицидов, гербицидами, которые ингибируют АНА8, являются, например, гербициды из семейства сульфонилмочевин, гербициды из семейства триазолопиримидинов, гербициды из семейства пиримидинилоксибензоатов, и гербициды из семейства сульфониламино-карбонилтриазолинонов.

В одном варианте осуществления изобретения способы охватывают повышение или усиление резистентности резистентного к гербициду растения подсолнечника, которое является резистентным к гербициду, который ингибирует АНА8, где резистентность к гербициду, который ингибирует АНА8, обуславливается одним или несколькими резистентными к гербициду белками АНА8Ь. Такое резистентное к гербициду растение подсолнечника может быть резистентным к одному или нескольким гербицидам, которые ингибируют АНА8, такие как, например, имидазолиноновый гербицид, гербицид на основе сульфонилмочевины, гербицид на основе триазолопиримидина, гербицид на основе пиримидинилоксибензоата, гербицид на основе сульфониламино-карбонилтриазолинона, или их смесь. Примеры некоторых подходящих имидазолиноновых гербицидов описаны выше. Гербициды из семейства сульфонилмочевин включают, но не ограничиваясь только ими, хлорсульфурон, метсульфуронметил, сульфометуронметил, хлоримуронэтил, трифенсульфуронметил, трибенуронметил, бенсульфуронметил, никосульфурон, этаметсульфуронметил, римсульфурон, трифлусульфуронметил, триасульфурон, примисульфуронметил, циносульфурон, амидосульфурон, флазасульфурон, имазосульфурон, пиразосульфуронэтил, галосульфурон, азимсульфурон, циклосульфурон, этоксисульфурон, флазасульфурон, флупирсульфуронметил, форамсульфурон, йодсульфурон, оксасульфурон, мезосульфурон, просульфурон, сульфосульфурон, трифлоксисульфурон, тритосульфурон, производное любого из вышеописанных гербицидов, и смесь двух или более вышеописанных гербицидов. Гербициды из семейства триазолопиримидинов включают, но не ограничиваясь только ими, хлорансулам, диклосулам, флорасулам, флуметсулам, метосулам и пенокссулам. Гербициды из семейства пиримидинилоксибензоатов по изобретению включают, но не ограничиваясь только ими, биспирибак, пиритиобак, пириминобак, пирибензоксим и пирифталид.

- 8 019478

Гербициды из семейства сульфониламино-карбонилтриазолинонов включают, но не ограничиваясь только ими, флукарбазон и пропоксикарбазон.

Установлено, что гербициды из семейства пиримидинилоксибензоатов тесно связаны с гербицидами на основе пиримидинилтиобензоата и обобщены под рубрикой последних согласно \Уееб 8аепсе 8оас1у оГ Атепса. Таким образом, гербициды согласно настоящему изобретению дополнительно охватывают гербициды на основе пиримидинилтиобензоата, включая, но не ограничиваясь только ими, гербициды из семейства пиримидинилоксибензоатов, описанные выше.

Растения подсолнечника согласно настоящему изобретению могут быть нетрансгенными или трансгенными. Примерами нетрансгенных растений подсолнечника, обладающих повышенной резистентностью по меньшей мере к одному имидазолиноновому гербициду, являются растение подсолнечника МиТ31, репрезентативные семена МиТ31 были задепонированы в АТСС для целей патентования под регистрационным номером РТА-7839; или является мутантным, рекомбинантным, или созданным с помощью генной инженерии производным МиТ31; или любого потомства МиТ31; или растение, которое представляет собой потомство любого из этих растений; или растение, которое обладает характеристиками резистентности к гербицидам МПТ31, в особенности резистентный к гербициду потомок МПТ31. Примером трансгенного растения подсолнечника, обладающего повышенной резистентностью по меньшей мере к одному имидазолиноновому гербициду, является растение подсолнечника, которое представляет собой созданное помощью генной инженерии производное МПТ31, которое обладает характеристиками резистентности к гербицидам МПТ31. Такое созданное с помощью генной инженерии производное может содержать в своем геноме, например, представляющий интерес трансген, включая, но не ограничиваясь только ими, ген АНА8Ь, обеспечивающий резистентность к гербициду, ген, придающий устойчивость к заболеванием, и ген, придающий устойчивость к насекомым.

Настоящее изобретение обеспечивает способы, предусматривающие применение имидазолинонового гербицида. В этих способах, имидазолиноновый гербицид можно наносить с помощью любого метода, известного в данной области, включая, но не ограничиваясь только ими, обработку семян, обработку почвы и обработку листьев.

Перед применением, имидазолиноновый гербицид может быть превращен в обычно используемые препараты, например, растворы, эмульсии, суспензии, дусты, порошки, пасты и гранулы. Форма применения зависит от конкретной предполагаемой цели; в каждом случае, она должна обеспечивать тонкодисперсное и равномерное распределение соединений в соответствии с изобретением.

Препараты получают известным способом (см., например, обзор И8 3,060,084, ЕР-А 707 445 (для жидких концентратов), Вго^шпд, Адд1отегабоп, Сйет1са1 Епдтеегтд, Осс. 4, 1967, 147-48, Реггу'к С11с1шса1 Епдтеег'к НапбЬоок, 4111 Еб., МсСга^-НШ, Ыете Уогк, 1963, сс. 8-57 и последующие. \¥О 91/13546, И8 4,172,714, И8 4,144,050, И8 3,920,442, И8 5,180,587, И8 5,232,701, И8 5,208,030, СВ 2,095,558, И8 3,299,566, Кйпдтап, \Уееб Соп1го1 а§ а 8с1епсе, 1ойп \Убеу и 8опу 1пс., Ыете Уогк, 1961, Напсе и др., \Уееб Соп1го1 НапбЬоок, 8(Н Еб., В1аск\\с11 8с1еп(1Пс РиЫюабопк, ОхГогб, 1989 и Мо11е1, Н., СгиЬетапп, А., ЕотибаОоп 1есйпо1о§у, \Убеу УСН Уег1ад СтЬН, ХУетйенп (Сегтапу), 2001, 2. Ό. А. КпоШеу Сйеткбу и Тесйпо1о§у оГ Адгосйет1са1 Гогтц1а1юп8, К1ц^ег Асабетк РиЫкйега, ОогбюсЫ, 1998 (Ι8ΒΝ 0-7514-0443-8), например, путем увеличения объема активного соединения при помощи вспомогательных веществ, приемлемых для формулирования агрохимикалий, таких как растворители и/или носители, по желанию, эмульгаторы, поверхностно-активные вещества и диспергирующие агенты, консерванты, противовспенивающие агенты, средства от замерзания, композиции для обработки семян, а также необязательно красители и/или связующие вещества и/или гелеобразующие агенты.

Примерами приемлемых растворителей являются вода, ароматические растворители (например, такие, как 8о1хе55о продукты, ксилол), парафины (например, минеральные фракции), спирты (например, такие, как метанол, бутанол, пентанол, бензиловый спирт), кетоны (например, такие, как циклогексанон, гамма-бутиролактон), пирролидоны ^МР, ΝΟΡ), ацетаты (гликоля диацетат), гликоли, диметиламиды жирных кислот, жирные кислоты и сложные эфиры жирных кислот. В принципе, также можно применять смеси растворителей.

Примерами приемлемых носителей являются почвенные природные минералы (например, такие, как каолины, глины, тальк, мел) и почвенные синтетические минералы (например, високодиспергированный кремнезем, силикаты).

Приемлемыми эмульгаторами являются неионные и анионные эмульгаторы (например, такие, как полиоксиэтиленовые эфиры жирных спиртов, алкилсульфонаты и арилсульфонаты).

Примерами диспергирующих агентов являются лигнинсульфитные отработанные щелочи и метилцеллюлоза.

Приемлемыми применяемыми поверхностно-активными веществами являются щелочные, щелочноземельные, аммониевые соли лигно-сульфониевой кислоты, нафталинсульфониевой кислоты, фенолсульфониевой кислоты, дибутил-нафталинсульфониевой кислоты, алкиларилсульфонаты, алкилсульфаты, алкилсульфонаты, сульфаты спиртов жирного ряда, жирные кислоты и сульфатированные гликольэфиры спиртов жирного ряда, дополнительно, продукты конденсации сульфонированного нафталина или производных нафталина с формальдегидом, продукты конденсации нафталина или нафталин- 9 019478 сульфоновой кислоты с фенолом и формальдегидом, полиоксиэтиленоктилфенольные эфиры, этоксилированные изооктилфенол, октилфенол, нонилфенол, алкилфенилполигликолевые эфиры, трибутилфенилполигликолевый эфир, тристеарилфенилполигликолевый эфир, алкиларилполиэфирные спирты, конденсаты окиси этилена/спирта жирного ряда и спирта, этоксилированное касторовое масло, полиоксиэтиленалкиловые эфиры, этоксилированный полиоксипропилен, полигликольэфирный ацетат лауриловых спиртов, сложные эфиры сорбита, лигнинсульфитные отработанные щелочи или метилцеллюлоза.

Вещества, приемлемые для получения растворов, которые могут быть непосредственно распылены, эмульсий, паст или масляных дисперсий, представляют собой фракции минерального масла с точкой кипения от средней до высокой, такие как керосин или дизельное топливо, дополнительно, каменноугольные масла и масла растительного или животного происхождения, алифатические, циклические и ароматические углеводороды, например, такие, как толуол, ксилол, парафин, тетрагидронафталин, алкилированные нафталины или их производные, метанол, этанол, пропанол, бутанол, циклогексанол, циклогексанон, изофорон, очень полярные растворители, например, диметилсульфоксид, Ν-метилпирролидон и вода.

Средства от замерзания, такие, как глицерин, этиленгликоль, пропиленгликоль, и бактерицидные агенты также могут быть добавлены к композиции.

Приемлемые противовспенивающие агенты представляют собой, например, противовспенивающие агенты на основе кремния или стеарата магния.

Приемлемые консерванты представляют собой, например, дихлорофен и бензилалкохолполуформаль.

Композиции для обработки семян могут дополнительно содержать связующие вещества и, необязательно, красители.

Связующие вещества могут быть добавлены для улучшения прилипания активных материалов к семенам после обработки. Приемлемые связующие вещества представляют собой блок-сополимеры ЕО/РО поверхностно-активных веществ, но также поливиниловые спирты, поливинилпирролидоны, полиакрилаты, полиметакрилаты, полибутены, полиизобутилены, полистирол, полиэтиленамины, полиэтиленамиды, полиэтиленимины (Ьира8о1®, Ро1уш1и®), полиэфиры, полиуретаны, поливинилацетат, тилозу и сополимеры, которые получают из указанных полимеров.

Необязательно, композиция также может содержать красители. Приемлемыми красителями или пигментами композиций для обработки семян являются родамин В, С.1. красный пигмент 112, С.1. красный растворитель 1, голубой пигмент 15:4, голубой пигмент 15:3, голубой пигмент 15:2, голубой пигмент 15:1, голубой пигмент 80, желтый пигмент 1, желтый пигмент 13, красный пигмент 112, красный пигмент 48:2, красный пигмент 48:1, красный пигмент 57:1, красный пигмент 53:1, оранжевый пигмент 43, оранжевый пигмент 34, оранжевый пигмент 5, зеленый пигмент 36, зеленый пигмент 7, белый пигмент 6, коричневый пигмент 25, основной фиолетовый 10, основной фиолетовый 49, кислотный красный 51, кислотный красный 52, кислотный красный 14, кислотный голубой 9, кислотный желтый 23, основной красный 10, основной красный 108.

Примером приемлемого гелеобразующего агента является карраген (§айаде1®).

Порошки, материалы для рассеивания и продукты для распыления могут быть получены путем смешивания или одновременного измельчения активных веществ с твердым носителем.

Гранулы, например, покрытые гранулы, импрегнированные гранулы и гомогенные гранулы, могут быть получены путем связывания активных соединений к твердым носителям. Примерами твердых носителей являются минеральные земли, такие, как силикагели, силикаты, тальк, каолин, атаклей, известняк, известь, мел, известковая глина, лесс, глина, доломит, диатомовая земля, кальция сульфат, магния сульфат, магния оксид, грунтовые синтетические материалы, удобрения, такие, как, например, аммония сульфат, аммония фосфат, аммония нитрат, мочевины, и продукты растительного происхождения, такие, как мука из злаковых растений, мука из древесной коры, древесная мука и мука из гороховой скорлупы, целлюлозные порошки и другие твердые носители.

Как правило, препараты содержат от 0,01 до 95% по весу, предпочтительно от 0,1 до 90% по весу, имидазолинонового гербицида. В этом случае, имидазолиноновые гербициды применяют с чистотой от 90 до 100% по весу, предпочтительно от 95 до 100% по весу (в соответствии с ЯМР спектром). Для обработки семян, соответствующие препараты могут быть разведены в 2-10 раз, что приводит к получению концентраций в готовых к применению препаратах от 0,01 до 60% по весу активного соединения, предпочтительно от 0,1 до 40% по весу.

Имидазолиноновый гербицид может быть применен отдельно в форме его композиций или формах применения, полученных из него, например, в форме растворов, которые непосредственно распыляют, порошков, суспензий или дисперсий, эмульсий, масляных дисперсий, паст, продуктов, которые распыляют, материалов для распространения, или гранул, путем разбрызгивания, распыления, опыления, рассеивания или поливания. Формы применения полностью зависят от намеченных целей; они должны обеспечить в каждом случае наилучшее возможное распространение имидазолинонового гербицида в соответствии с изобретением.

- 10 019478

Водные формы применения могут быть получены из эмульсионных концентратов, паст или смачиваемых порошков (порошки, которые могут быть разбрызганы, масляные дисперсии) путем добавления воды. Для получения эмульсий, паст или масляных дисперсий, вещества, в чистом виде или растворенные в масле или растворителе, могут быть гомогенизированы в воде при помощи увлажняющего средства, вещества для повышения клейкости, диспергирующего вещества или эмульгатора. Также можно получить концентраты, состоящие из активного вещества, увлажняющего средства, вещества для повышения клейкости, диспергирующего вещества или эмульгирующего вещества и, если приемлемо, растворителя или масла, такие концентраты являются приемлемыми для разведения водой.

Концентрации активного соединения в готовых к применению препаратах могут быть изменены в относительно широких пределах. В основном, они составляют от 0,0001 до 10%, преимущественно от 0,01 до 1% по массе.

Имидазолиноновый гербицид также может быть успешно применен в процессе сверхмалого объема (иьу), можно применять композиции, содержащие более 95% по весу активного соединения, или даже применять активное соединение без вспомогательных веществ.

Далее приведены примеры препаратов.

1. Продукты для разбавления водой для нанесения на листья. С целью обработки семян, такие продукты можно применять к семенам разбавленными или неразбавленными.

A) Водо-растворимые концентраты (8Ь, Ь8).

Десять частей по массе имидазолинонового гербицида растворяли в 90 частях по массе воды или водо-растворимого растворителя. Альтернативно, добавляли увлажняющие агенты или другие вспомогательные агенты. Имидазолиноновый гербицид растворяли при разбавлении водой, таким образом получали композицию с 10% (мас./мас.) имидазолинонового гербицида.

B) Диспергируемые концентраты (ИС).

Двадцать частей по массе имидазолинонового гербицида растворяли в 70 частях по массе циклогексанона с добавлением 10 частей по массе диспергирующего вещества, например, поливинилпирролидона. Разбавление водой приводило к получению дисперсии, таким образом получали композицию с 20% (мас./мас.) имидазолинонового гербицида.

C) Эмульгирующиеся концентраты (ЕС).

Пятнадцать частей по массе имидазолинонового гербицида растворяли в 7 частях по массе ксилола с добавлением додецилбензолсульфоната кальция и этоксилата касторового масла (в каждом случае 5 частей по массе). Разбавление водой приводило к получению эмульсии, таким образом получали композицию с 15% (мас./мас.) имидазолинонового гербицида.

Ό) Эмульсии (Ε\ν. ЕО, Е8).

Двадцать пять частей по массе имидазолинонового гербицида растворяли в 35 частях по массе ксилола с добавлением додецилбензолсульфоната кальция и этоксилата касторового масла (в каждом случае 5 частей по массе). Указанную смесь вводили в 30 частей по массе воды при помощи эмульгирующей машины (например, ИкгаШгах) и превращали в гомогенную эмульсию. Разбавление водой приводило к получению эмульсии, таким образом получали композицию с 25% (мас./мас.) имидазолинонового гербицида.

Е) Суспензии (8С, ΘΌ, Е8).

В шаровой мельнице с непрерывным перемешиванием, 20 частей по массе имидазолинонового гербицида измельчали с добавлением 10 частей по массе диспергирующих агентов, увлажняющих агентов и 70 частей по массе воды или органического растворителя с получением тонкодисперсной суспензии имидазолинонового гербицида.

Разбавление водой приводило к получению стойкой суспензии имидазолинонового гербицида, таким образом получали композицию с 20% (мас./мас.) имидазолинонового гербицида.

Е) Водо-диспергируемые гранулы и водорастворимые гранулы (\ν6, 86).

Пятьдесят частей по массе имидазолинонового гербицида тщательно измельчали с добавлением 50 частей по массе диспергирующих агентов и увлажняющих агентов и превращали в водо-диспергируемые или водо-растворимые гранулы при помощи технических средств (например, таких, как экструзия, скруббер с распыляющим орошением, псевдоожиженный слой). Разбавление водой приводило к получению устойчивой дисперсии или раствора имидазолинонового гербицида, таким образом получали композицию с 50% (мас./мас.) имидазолинонового гербицида.

6) Водо-диспергируемые порошки и водо-растворимые порошки (νΡ, 8Р, 88, ν8).

Семьдесят пять частей по массе имидазолинонового гербицида измельчали в ротор-статорной мельнице с добавлением 25 частей по массе диспергирующих агентов, увлажняющих агентов и силикагеля. Разбавление водой приводило к получению устойчивой дисперсии или раствора имидазолинонового гербицида, таким образом получали композицию с 75% (мас./мас.) имидазолинонового гербицида.

I) Гелевые композиции (6Е).

В шаровой мельнице с непрерывным перемешиванием, 20 частей по массе имидазолинонового гербицида измельчали с добавлением 10 частей по массе диспергирующих агентов, 1 части по массе гелеобразующих агентов, увлажняющих агентов и 70 частей по массе воды или органического растворителя с

- 11 019478 получением тонкодисперсной суспензии имидазолинонового гербицида. Разбавление водой приводило к получению устойчивой суспензии имидазолинонового гербицида, таким образом получали композицию с 20% (мас./мас.) имидазолинонового гербицида. Указанная гелевая композиция является приемлемой для применения при обработке семян.

2. Продукты для применения неразбавленными для нанесения на листья. С целью обработки семян, такие продукты можно применять к семенам разбавленными.

A) Распыляемые порошки (ΌΡ, Ό8).

Пять частей по массе имидазолинонового гербицида тонкодисперсно измельчали и гомогенно перемешивали с 95 частями по массе тонкоизмельченного каолина. Это приводило к получению распыляемых продуктов, содержащих 5% (мас./мас.) имидазолинонового гербицида.

B) Гранулы (СК, ГС, 66, Мб).

Половину части по массе имидазолинонового гербицида тонкодисперсно измельчали и перемешивали с 95,5 частями по массе носителей, таким образом получали композицию с 0,5% (мас./мас.) имидазолинонового гербицида. Наиболее распространенными способами являются экструзия, высушивание распылением или псевдоожиженный слой. Это приводило к получению гранул, предназначенных для применения неразбавленными для нанесения на листья.

Традиционные композиции для обработки семян включают, например, текучие концентраты Г8, растворы Ь8, порошки для сухой обработки Ό8, водо-диспергируемые порошки для суспензионной обработки ν8, водо-растворимые порошки 88 и эмульсию Е8 и ЕС и гелевую композицию бГ. Указанные композиции могут быть применены к семенам разбавленными или неразбавленными. Обработку семян проводят перед посевом, или непосредственно на семена.

В преимущественном воплощении Г8 композицию применяют для обработки семян. Как правило, Г8 композиция может содержать 1-800 г/л активного ингредиента, 1-200 г/л поверхностно-активного вещества, от 0 до 200 г/л агента от замерзания, от 0 до 400 г/л связывающего агента, от 0 до 200 г/л пигмента и до 1 л растворителя, преимущественно воды.

Настоящее изобретение обеспечивает семена резистентных к гербициду растений согласно настоящему изобретению, в особенности семена, которые представляют собой резистентные к гербициду потомки МиТ31. Для обработки семян, семена согласно настоящему изобретению обрабатывают гербицидами, предпочтительно гербицидами, выбранными из группы, включающей гербициды, которые ингибируют АНА8, такие как амидосульфурон, азимсульфурон, бенсульфурон, хлоримурон, хлорсульфурон, циносульфурон, циклосульфамурон, этаметсульфурон, этоксисульфурон, флазасульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, галосульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, метсульфурон, никосульфурон, оксасульфурон, примисульфурон, просульфурон, пиразосульфурон, римсульфурон, сульфометурон, сульфосульфурон, тифенсульфурон, триасульфурон, трибенурон, трифлоксисульфурон, трифлусульфурон, тритосульфурон, имазаметабенз, имазамокс, имазапик, имазапир, имазаквин, имазетапир, хлорансулам, диклосулам, флорасулам, флуметсулам, метосулам, пенокссулам, биспирибак, пириминобак, пропоксикарбазон, флукарбазон, пирибензоксим, пирифталид, пиритиобак, и их смеси, или препаратом, содержащим гербицид, который ингибирует АНА8. Предпочтительно, гербициды, которые ингибируют АНА8, согласно настоящему изобретению представляют собой имидазолиноновые гербициды.

Термин обработка семян охватывает все подходящие технологии обработки семян, известные в данной области, такие как протравливание (дезинфекция) семян, дражирование семян, опудривание семян, пропитывание семян и удобрение семян.

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящего изобретения, дополнительный объект настоящего изобретения представляет собою способ обработки почвы путем применения, в частности, в рядовой сеялке, какой-либо гранулированной композиции, содержащей имидазолиноновый гербицид в виде композиции/состава (например, гранулированная композиция, необязательно с одним или более твердыми или жидкими, сельскохозяйственными носителями и/или необязательно с одним или более сельскохозяйственно приемлемыми поверхностно-активными веществами. Указанный способ преимущественно применяют, например, в грядках злаков, кукурузы, хлопчатника и подсолнечника.

Настоящее изобретение также охватывает семена, покрытые или содержащие препарат для обработки семян, содержащий по меньшей мере один ингибитор АЕ8, выбранный из группы, включающей амидосульфурон, азимсульфурон, бенсульфурон, хлоримурон, хлорсульфурон, циносульфурон, циклосульфамурон, этаметсульфурон, этоксисульфурон, флазасульфурон, флупирсульфурон, форамсульфурон, галосульфурон, имазосульфурон, йодсульфурон, мезосульфурон, метсульфурон, никосульфурон, оксасульфурон, примисульфурон, просульфурон, пиразосульфурон, римсульфурон, сульфометурон, сульфосульфурон, тифенсульфурон, триасульфурон, трибенурон, трифлоксисульфурон, трифлусульфурон, тритосульфурон, имазаметабенз, имазамокс, имазапик, имазапир, имазаквин, имазетапир, хлорансулам, диклосулам, флорасулам, флуметсулам, метосулам, пенокссулам, биспирибак, пириминобак, пропоксикарбазон, флукарбазон, пирибензоксим, пирифталид и пиритиобак.

Термин семена охватывает семена и побеги растений всех видов, включая, но не ограничиваясь приведенным, действительные семена, черенки, корневые ростки, клубнелуковицы, луковицы, фрукт,

- 12 019478 клубни, зерна, отводки, ростковые черенки и подобное и, в предпочтительном варианте осуществления, обозначает действительные семена.

Термин покрытое при помощи и/или содержащее в основном, означает, что активный ингредиент находится, главным образом, на поверхности продукта размножения во время применения, хотя большая или меньшая часть этого ингредиента может проникать в продукт размножения, в зависимости от способа применения. Когда указанный продукт размножения сажают (пересаживают), он может поглощать активный ингредиент.

Обработку семян имидазолиноновым гербицидом или препаратом, содержащим имидазолиноновый гербицид, осуществляют путем опрыскивания или опыления семян перед посевом растений и перед прорастанием растений.

При обработке семян, соответствующие препараты применяют путем обработки семян эффективным количеством имидазолинонового гербицида или препарата, содержащего имидазолинон гербицид. При этом, нормы применения составляют, как правило, от 0,1 г до 10 кг активного вещества (или смеси активных веществ или препарата) на 100 кг семян, предпочтительно от 1 г до 5 кг на 100 кг семян, в особенности от 1 г до 2,5 кг на 100 кг семян. Для специфических сельскохозяйственных культур, таких как салат-латук, указанная норма может быть выше.

Настоящее изобретение обеспечивает способ борьбы с нежелательной растительностью или борьбы с сорняками, который включает контактирование семян резистентных растений в соответствии с настоящим изобретением перед посевом и/или после предварительного проращивания с имидазолиноновым гербицидом. Способ дополнительно может включать высевание семян, например, в почву в поле или в горшки в теплицу. Способ находит особое применение для борьбы с нежелательной растительностью или борьбы с сорняками в непосредственной близости к семенам.

Под борьбой с нежелательной растительностью понимают уничтожение сорняков и/или другое замедление или ингибирование нормального роста сорняков. Сорняки, в самом широком смысле, охватывают все те растения, которые растут в местах, где они нежелательны.

Сорняки согласно настоящему изобретению включают, например, двудольные и однодольные сорняки. Двудольные сорняки включают, но не ограничиваясь только ими, сорняки родов: 8тар1в, ЬерИшш, Оа1шт, 81е11апа, Ма1псапа, Λπΐΐκιηίβ, Оа1твода, СЬепоробшт, Игйса, 8еиесю, АтагапШив, РогШ1аса, ХайЫит, Сопуо1уи1и5, 1ротоеа, Ро1удопит, 8евЬаша, АтЬгов1а, Спвшт, Сагбиив, 8опсЬив, 8о1аиит, Ког1рра, Ко1а1а, Ьтбегша, Ьатшт, Уегошса, АЬиШои, Етех, РаЦиа, Ую1а, Оа1еорв1в, Рарауег, СеШаигеа, ТиГо1шт, Каиипси1и5 и Тагахасит. Однодольные сорняки включают, но не ограничиваясь только ими, сорняки родов: ЕсЫиосЫоа, 8е1апа, Рашсит, Р|дЦапа, РЫеит, Роа, ЕевШса, Е1еивте, ВгасЫапа, Ьо1шт, Вготив, Ауеиа, Сурегив, 8огд1шт, Адгоругоп, Супобоп, Моноскопа, ИтЬг1в1ув11в, 8адШапа, Е1еоскапв, 8с1гри5, Равра1ит, 1вскаетит, 8ркепос1еа, РасКЮсКшит, АдговЕв, Моресигив и Арега.

Дополнительно, сорняки согласно настоящему изобретению могут включать, например, культурные растения, которые растут в нежелательном месте. Например, самосев растения кукурузы, то есть в поле, которое преимущественно содержит растения сои, может рассматриваться как сорняк, если растение кукурузы является нежелательным в поле растений сои.

Форма единственного числа используется в настоящей заявке для обозначения одного или больше чем одного (то есть, по меньшей мере одного) грамматического объекта. Например, элемент обозначает один или несколько элементов.

Как используется в настоящей заявке, слово содержащий, или варианты, такие как содержит или который содержит, следует понимать в значении включения указанного элемента, целого числа или стадии, или группы элементов, целых чисел или стадий, но не исключения любого другого элемента, целого числа или стадии, или группы элементов, целых чисел или стадий.

Следующие примеры представлены для иллюстрации и никоим образом не ограничивают настоящее изобретение.

Пример 1. Мутагенез НеИапШив аппит линии КНА266 и отбор имидазолинон-резистентных растений.

Весной, в первый период вегетации, сорок рядков подсолнечника (НеЕайЪив аптшв) линии КНА266 высевали на открытом грунте на исследовательской станции АбуаШа 8етП1ав Вю1еск Кевеагск 81а1юп в Ва1сагсе, ВвАв, Аргентина, и затем часть растений обрабатывали этилметансульфонатом (ЕМ8, также обозначается как этиловый эфир метансульфоновой кислоты). ЕМ8 является известным мутагеном, который обычно индуцирует транзиции ОС-на-АТ в ДНК (1апбег и др. (2003) Р1ап1 РНув1о1. 131:139146). Растения обрабатывали раствором, содержащим 0,5, 5 или 10% (мас./об.) ЕМ8. Для каждой обработки ЕМ8, обрабатывали 13 рядков растений подсолнечника. Перед цветением, все растения М₀ упаковывали в мешки для обеспечения того, что полученные М₁ семена будут продуктом самоопыления. Семя, развившееся после каждой обработки ЕМ8, собирали и обмолачивали целиком. На следующий период вегетации, семена М1 высевали на открытом грунте для каждой обработки на отдельный опытный участок. Через двадцать дней, когда растения достигали стадии роста 2-4 пар листьев, все обработанные ЕМ8 растений обрызгивали 2Х с помощью 8\УЕЕРЕК 70ΌΟ (100 г активного вещества/га). Активным веществом в 8\УЕЕРЕК является имазамокс. После обрызгивания гербицидом, всего выживало 54 расте

- 13 019478 ния и их отбирали в качестве предположительно резистентных. Сорок четыре резистентных растения достигали стадии цветения, вырабатывали пыльцу и семена М₂. Распределение сорока четырех фертильных растений на обработку ЕМ8 представлено в табл. 1.

Таблица 1. Количество М₁ имидазолинон-резистентных растений подсолнечника, восстановившихся после каждой обработки ЕМ8

Концентрация ЕМ8 (%)	Количество восстановившихся резистентных растений
0,5	19
5,0	9
10	16

Образцы ткани отбирали из каждого индивидуального выжившего М₁ растения и ДНК из каждого образца экстрагировали для ПЦР-амплификации и секвенирования, как описано ниже в примере 2.

М₂ семена, которые продуцируются каждым из сорока четырех фертильных М₁ растений, высевали на отдельные экспериментальные участки в Еатдо, ΝΏ затем обрызгивали с помощью 0,5 X Б^ЕЕРЕК 70ΌΟ (25 г активного вещества имазамокса/га) на стадии роста 2-4 пар листьев. Один из участков отбирали в качестве гомозиготных толерантных и обозначали как МиТ31. Девятнадцать М₂ растений МИТ31 собирали, их М_2:3 потомство высевали в Ва1сагсе летом 2003-2004 г. и полученным растением позволяли созревать и затем самоопыляли. Мд семена с одного участка собирали и обозначали элитным семенем на основе фенотипических исследований. (Элитное семя представляет собой семя, полученное под непосредственным контролем селекционера, и является основой для первого и повторного семенного фонда).

Пример 2. ПЦР-амплификация и секвенирование полинуклеотидов подсолнечника, кодирующих АНЛ8Ь1 белки, которые резистентны к имидазолинону, и белки АНЛ8Ь1 дикого типа.

Для определения причины толерантности к имидазолинону в растениях подсолнечника из примера 1, осуществляли амплификацию геномной ДНК с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) для амплификации полноразмерных кодирующих участков для каждого из генов АНЛ8Ь1, АНЛ8Ь2 и АНЛ8Ь3 подсолнечника. Для ПЦР-амплификации, геномную ДНК выделяли из ткани растения подсолнечника М₁ МИТ31. Контрольную геномную ДНК дикого типа также выделяли из ткани растения подсолнечника КНЛ266 для ПЦР-амплификации каждого из генов АНЛ8Ь дикого типа. Полученные ПЦРпродукты секвенировали для определения последовательностей ДНК генов АНЛ8Ь1, АНЛ8Ь2, и АНЛ8Ь3 из растений МИТ31 и КНА266.

Неожиданно было обнаружено, при выравнивании последовательностей ДНК генов АНЛ8Ь1, АНЛ8Ь2 и АНЛ8Ь3 из МИТ31 и сравнении с их соответствующими ДНК последовательностям из КНЛ266, не было обнаружено отличий (данные не представлены). Поскольку настоящее изобретение не связано любым конкретным биологическим механизмом, то эти результаты указывают на то, что растения подсолнечника МИТ31 обладают новым механизмом резистентности к гербицидам, который независим от мутации или мутаций в одном или нескольких генах АНЛ8Ь.

Пример 3. Исследование нейтрализации токсического действия гербицида для МИТ31.

Для оценки способности нейтрализовать токсическое действие растениями подсолнечника МИТ31, осуществляли опыт в теплице. Целью эксперимента было определение наличие взаимосвязи между толерантностью к имазамоксу растений МИТ31 с механизмом нейтрализации токсического действия, который опосредуется ферментом монооксигеназой Р450 (в настоящей заявке обозначается как фермент Р450). Ранее было установлено, что фосфорорганический инсектицид малатион (диэтилдиметокситиофосфорилтиосукцинат) специфически ингибирует ферменты Р450 путем блокирования активности нейтрализации токсического действия гербицидов (Уи и др. (2004) Рек1. Вюсйеш. Р11у5ю1. 78:21-30). Таким образом, предполагают, что растения, обладающие усиленной толерантностью к гербицидам, которая обусловлена измененным ферментом Р450, становятся менее толерантными или чувствительны к гербициду, если малтионом обрабатывают растения перед их обработкой гербицидом.

Осуществляли факторный эксперимент с тремя факторами: генотипы (МИТ31 и КНЛ266), доза гербицида (контроль, 0,25Х, и 0,50Х; где Х=50 г активного вещества имазамокса/га) и малатион (с малатионом или без него) в рандомизированной схеме исследования с расщепленными опытными участками. Имазамокс (8^ЕЕРЕК) распыляли на стадии роста 3-4 листа. Р450 ингибитор малатион распыляли в дозе 1000 г активного вещества/га за 30 мин до распыления гербицида. Оценивание растений осуществляли через семь дней после распыления гербицида, используя критерии, приведенные в табл. 2.

Таблица 2. Критерии для оценки степени поражения гербицидом при исследовании растений

Симптом	Оценка поражения
Хлороз, желтая окраска	5-10%
Уменьшение скорости	роста, короткие
междоузлия	10-20%
Деформация листьев	20 - 30 %
Некроз	30 - 45 %
Гибель растения	+ 50 %

- 14 019478

Применение малатиона при отсутствии гербицида не оказывало влияния на ответную реакцию линии подсолнечника МИТ31 и ΚΉΆ266; среднее значения и погрешность обе были равны нулю (табл. 3). Обе линии были более толерантными (более низкий % оценки поражения), если малатион не распыляли перед имазамоксом. Если растения обрабатывали только 0,5Х имазамоксом, то МПТ31 проявила существенное усиление толерантности к гербициду по сравнению с контролем КНА266. Толерантность к гербициду МИТ31 существенно снижалась (более высокая оценка) после обработки малатионом (табл. 3, фиг. 1). Результаты статистического анализа представлены в табл. 4.

Результаты этого факторного опыта свидетельствуют о том, что малатион ингибирует толерантность к гербициду, проявляемую МЛТ31, и позволяет предположить, что толерантный к гербициду фенотип МиТ31 может быть обусловлен механизмом нейтрализации токсического действия, опосредуемой одним или несколькими измененными ферментами Р450. Несмотря на то, что настоящее изобретение не зависит от любого конкретного биологического механизма относительно усиленной резистентности к гербициду, эти результаты дополнительно позволяют предположить, что растение подсолнечника МиТ31 содержит в своем геноме одну или несколько мутаций в одном или нескольких генах, кодирующих Р450 ферменты.

Таблица 3. Средние значения оценки степени поражения гербицидом

Доза гербицида	ОХ (контроль)	0,25Х	0,50Х
Малатион	Нет	Да	Нет	Да	Нет	Да
митз1	0,00	0,00	9,50	30.35	20,13	40,31
КНА266	0,00	0,00	27,95	45,30	42,35	45,50

Таблица 4. Статистический анализ факторного опыта мит-31 и КНА266

Источник	Βί	Средн.кв.	Е	Рг(>Р)	Значимость
Реппикаты	3	38,2
Малатион	1	1893,43	122,01	0,001589	**
Погрешность (а)	3	15,52
Доза гербицида	1	619,08	34,966	0,001041	**
Малатион х доза	1	110,45	6,2381	0,046678	*
Погрешность (б)	6	17,71
Линия	1	1849,08	101,6794	3,27Е-07
Малатион х линия	1	210,89	11,5969	0,005217
Доза х линия	1	17,93	0,9857	0,340397
Малатион х доза х линия	1	91,63	5,0388	0,044418	*
Остатки	12	18,19

Пример 4. Толерантность к гербициду линий подсолнечника с МИТ31 и толерантным к гербициду геном АНА8Ь.

Осуществляли полевые испытания для сравнения толерантности к гербицидам гибридов подсолнечника, несущих МПТ31 признак и мутацию А205У в гене АНА8Ь подсолнечника (А205У/А205У). Ген АНА8Ь подсолнечника с мутацией А205У кодирует белок АНА8Ь, который содержит валин в положении аминокислоты, которое соответствует положению аминокислоты 205 в белке АНА8Ь АгаЫборык ЛаНапа. Аминокислотой в этом же положении в белке АНА8Ь подсолнечника дикого типа является аланин. В аминокислотной последовательности белка АНА8Ь подсолнечника, эта аминокислотная замена аланина на валин происходит в положении аминокислоты 190. Приняты, что сайты аминокислотных замен, для которых известно, что они являются причиной резистентности к гербицидам в белках АНА8Ь растений, обычно обозначаются по положению замены в аминокислотной последовательности белка АНА8Ь АгаЫборык.

Таблица 5. Описание тестируемых линий подсолнечника

Исследуе-	Тип материала	Мутация	Зиготность	Описание
мая				исследуемой
группа				группы
1	ΙΜΙ восстановитель	А205У	гомо	гибрид
2	ΙΜΙ цмс х ΙΜ1 восстановитель	А205У	гомо	гибрид
3	ДТ х ΙΜΙ восстановитель	А205У	гетеро	гибрид
4	ДТ х ΙΜΙ восстановитель	А205У	гетеро	гибрид
5	А 83 7 цмс х ΙΜΙ восстановитель	А205У	гетеро	гибрид
6	ΙΜΙ цмс х митз 1 восстановитель	А205У/МЦТ31	гетеро	гибрид
7	ДТ		...	линия
8	МиТ31 восстановитель	митз1	гомо	линия

- 15 019478

Семена из каждой исследуемой группы получали в условиях оптимальной продукции семян в Южной Америке в 2005/2006 г. Полевые испытания проводили на одной территории, в шт. Северная Дакота, США, в 2006 г. Исследуемые группы разделяли на радномизированные полные блоки, используя схему опыта с расщепленными участками, включая 3 репликации для каждой комбинированной обработки. Фактором А являлось обработка гербицидом, и фактором В было введение подсолнечника. Размер участка составлял 4 рядка х 12 футов и нормы высева соответствовали местной агрономической практике. Нормы расхода гербицидов для каждой обработки для каждой из исследуемых групп 1-6 представлены в табл. 6. Нормы расхода гербицида для каждой обработки для исследуемой группы 8 представлены в табл. 7. Распыляемое количество составляло 10 галлонов на акр площади (СРА) (или 100 л/га) для ранцевого опрыскивателя или 20 СРА (или 200 литров/га) для монтируемого на тракторе опрыскивателя. Обработку гербицидами осуществляли на стадии роста 2-4 листа.

Таблица 6. Фактор А, схема обработки гербицидом для исследуемых групп 1-6 № обработки Обработка

Необработанные

50 г активного вещества имазамокса/га + 0,25% (об./об.) N18

100 г активного вещества имазамокса/га + 0,25% (об./об.) N18

200 г активного вещества имазамокса/га + 0,25% (об./об.) N18

160 г активного вещества имазапира/га + 0,25% (об./об.) N18

N18 - неионогенное поверхностно-активное вещество табл. 7.

Таблица 7. Фактор А, схема обработки гербицидом для исследуемой группы 8 № обработки Обработка ) Необработанные

12,5 г активного вещества имазамокса/га + 0,25% (об./об.) N18

25 г активного вещества имазамокса/га + 0,25% (об./об.) N18

37,5 г активного вещества имазамокса/га + 0,25% (об./об.) N18

80 г активного вещества имазапира/га + 0,25% (об./об.) N18

N18 = неионогенное поверхностно-активное вещество

Исследуемую группу 7 (Линия Мат1атег дикого типа) не обрабатывали гербицидом во всех обработанных блоках. Каждую обработку гербицидом тестировали на пограничном участке ДТ для проверки эффективности продукта (100% поражение сельскохозяйственной культуры через 21 день после распыления).

Оценку фитотоксичности проводили на 7 день и 21 день после обработки гербицидом. Фитотоксичность определяли как степень поражения растения (в процентах), где оценка '0' указывает на отсутствие поражения растения на участке относительно необработанного участка. Оценка '100' указывает на полный некроз (гибель) растений на участке относительно необработанного участка.

Полученные данные обрабатывали с помощью ΑΝΟνΑ анализа и средние значения для 3 повторов обобщены в табл. 8 (фитотоксичность на 21 день после обработки).

Таблица 8. Оценка фитотоксичности (% поражения культивируемого растения) через 21 день после обработки (ДПО)

				21 ДПО	21 ДПО	21 ДПО	21 ДПО
Исследуемая группа	Тип материала	Мутация	Зиготность	50 С ИМАЗАМОКС	100 С ИМАЗАМОКС	200 С ИМАЗАМОКС	160 С ИМАЗАПИР	21 ДПО необработанные
I	1М1 восстановитель	А205	гомо	5,00	6,67	13,00	6,67	0,00
2	1М1 цмс к ΙΜ1 восстановитель	А205	гомо	0,00	3,33	21,67	3,33	0,00
3	ДТ х ΙΜΙ восстановитель	А205	гетеро	6,67	25,00	73,33	20,00	0,00
4	ДТ х ΓΜΙ восстановитель	А205	гетеро	11,67	46,67	76,67	43,33	0,00
5	А837 имс х ΙΜΙ восстановитель	А205	гетеро	3.33	40,00	78,33	36,67	0,00
6	ΙΜ1 имс х МитЗ! восстановитель	А205/МиТ31	гетеро	1,67	10,00	43,33	10,00	0,00
7	ДТ			0,00	0,00	0,00	0,00	0,00

				21ДПО	21 ДПО	21 ДПО	21 ДПО
Исследуемая	Тип материала	Мутация	Зиготность	12.5 6	25 6	37.5 6	80 6	21 ДПО
.р.				ИМАЗАМОКС	ИМАЗАМОКС	ИМАЗАМОКС	ИМАЗАПИР	необработанные
8	М1ГГ31 восстановитель	митз!	гомо	15,00	25,00	46,67	88,33	0,00
			НДР =8,89 Ст. откл. “ 5,55	КВ = 56,78

Фитотоксичность в гетерозиготных исследуемых группах Α205ν (исследуемые группы 3-5) была

- 16 019478 значительно выше, чем в двойной гетерозиготной исследуемой группе А205У/МИТ31 (исследуемая группа 6) через 21 после обработки имазамоксом и имазапиром. Гомозиготные А205У исследуемые группы (исследуемые группы 1-2) проявляли наиболее низкие уровни фитотоксичности или поражения культивируемых растений (табл. 1). При обработке 100 г активного вещества имазамокса/га диапазон фитотоксичности для А205У гетерозиготных исследуемых групп составлял от 25 до 47% по сравнению со степенью поражения 10% для А205У / МИТ31 гетерозиготной исследуемой группы. При обработке 200 г активного вещества имазамокса/га диапазон фитотоксичности для А205У гетерозиготных исследуемых групп составлял от 73 до 78% поражения по сравнению со степенью поражения 43% для А205У/ МИТ31 гетерозиготной исследуемой группы. При обработке 160 г активного вещества имазапира/га диапазон фитотоксичности для А205У гетерозиготных исследуемых групп составлял от 20 до 43% поражения по сравнению со степенью поражения 10% для А205У / МИТ31 гетерозиготной исследуемой группы.

Если МИТ31 отдельно (исследуемая группа 8) обрабатывали 37,5 г активного вещества имазамокса/га, то обнаруживали степень поражения 47% на 21 день после обработки. Из предыдущих исследований (данные не представлены), МИТ31 проявил 100% степень поражения при обработке 75 г активного вещества имазамокса на гектар и 100 г активного вещества имазапира на гектар.

Двойные гетерозиготные А205У/МИТ31 исследуемые группы проявляли существенно более высокую толерантность к гербицидам к обеим обработкам имазамоксом и имазапиром относительно гетерозиготных А205У/- исследуемых групп и относительно МИТ31 исследуемой группы отдельно.

Исходя из этих данных, МИТ31, при дополнении мутацией А205У в гетерозиготном состоянии обеспечивает более эффективную (усиленную) толерантность к гербициду по сравнению с А205У мутацией в гетерозиготном состоянии. Наличие продукта, который работает в гетерозиготном состоянии при 2х обработке коммерческими продуктами (100 г активного вещества имазамокса/га и 160 г активного вещества имазапира/га) является очень большим преимуществом для селекционеров гибридных растений подсолнечника по сравнению с имеющимся в настоящее время гомозиготным А205У/А205У продуктом, что позволяет экономить как время, так и затраты при селекции толерантных к имидазолинону растений подсолнечника.

Все публикации и патентные заявки, указанные в данной заявке, являются характерными для специалистов в данной области, к которой относится данное изобретение. Все публикации и патентные заявки включены в данную заявку путем ссылки в том же объеме, как если бы каждая отдельная публикация или патентная заявка конкретно и отдельно были включены в данную заявку путем ссылки.

Хотя представленное выше изобретение описано в некоторых деталях путем иллюстрации и примера в целях ясности понимания, очевидно, что можно осуществить определенные изменения и модификации в объеме приведенной формулы изобретения.

Claims (43)

1. Устойчивое к имидазолиноновому гербициду растение подсолнечника, которое является несортовым потомством растения подсолнечника линии МИТ31, несущим признак устойчивости к имидазолиноновому гербициду линии МИТ31, причем репрезентативный образец семян указанной линии МИТ31 депонирован в АТСС под регистрационным номером РТА-7839, а устойчивость указанного растения подсолнечника к имидазолиноновому гербициду может быть снижена или подавлена с помощью малатиона.

2. Растение подсолнечника по п.1, где указанное растение подсолнечника не является линией МИТ31.

3. Растение подсолнечника по п.1, где указанное растение подсолнечника является несортовым потомством растения подсолнечника линии МИТ31, поскольку оно не принадлежит к какому-либо сорту.

4. Растение подсолнечника по п.1, где указанное растение подсолнечника является несортовым потомством линии МИТ31, поскольку оно является гибридным растением.

5. Растение подсолнечника по п.1, которое выбрано из группы, включающей:

(а) растения подсолнечника, которые являются несортовыми потомками линии МИТ31, которые получены половым путем;

(б) растения подсолнечника, которые являются мутантами, рекомбинантами или созданными с помощью генной инженерии производными линии МИТ31;

(в) растения подсолнечника, которые являются потомками от скрещивания растений подсолнечника линии МИТ31 и растений второй отличающейся линии;

(г) растения подсолнечника, которые являются потомками растений подсолнечника, указанных в (а)-(г), полученными половым путем.

6. Растение подсолнечника по любому из пп.1-5, где указанный имидазолиноновый гербицид выбран из группы, состоящей из 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)никотиновой кислоты, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-3-хинолинкарбоновой кислоты, 5-этил-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)никотиновой кислоты, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5-(метоксиметил)никотиновой кислоты, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2

- 17 019478 ил)-5-метилникотиновой кислоты, смеси метил 6-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)метатолуата и метил 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)паратолуата, и их смеси.

7. Растение подсолнечника по п.6, где указанный имидазолиноновый гербицид представляет собой имазамокс, имазапир, имазетапир или их смеси.

8. Семя растения подсолнечника или семя, способное продуцировать растения подсолнечника по любому из пп.1-7.

9. Семя по п.8, которое обработано имидазолиноновым гербицидом.

10. Клетка растения по любому из пп.1-7.

11. Клетка по п.10, которая представляет собой клетку пыльцы или клетку семени.

12. Пыльцевое зерно растения по любому из пп.1-7.

13. Способ борьбы с сорняками вблизи растения подсолнечника, включающий нанесение эффективного количества имидазолинонового гербицида на сорняки и растение подсолнечника, где указанное растение подсолнечника является растением линии МИТ31, причем репрезентативный образец семян указанной линии МИТ31 депонирован в АТСС под регистрационным номером РТА-7839, или потомством устойчивого к имидазолиноновому гербициду растения подсолнечника линии МИТ31, а устойчивость указанного растения подсолнечника к имидазолиноновому гербициду может быть снижена или подавлена с помощью малатиона.

14. Способ по п.13, где указанный гербицид наносят довсходовой обработкой, послевсходовой обработкой, предпосевной обработкой, обработкой при посеве или обработкой семян.

15. Способ по п.13 или 14, где указанный имидазолиноновый гербицид выбран из группы, состоящей из 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)никотиновой кислоты, 2-(4-изопропил-4метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-3-хинолинкарбоновой кислоты, 5-этил-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо2-имидазолин-2-ил)никотиновой кислоты, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5-(метоксиметил)никотиновой кислоты, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5-метилникотиновой кислоты, смеси метил 6-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)метатолуата и метил 2(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)паратолуата, и их смеси.

16. Способ получения устойчивого к имидазолиноновому гербициду растения подсолнечника, который включает следующие этапы:

(а) получение первого растения подсолнечника, несущего признак устойчивости к имидазолиноновому гербициду линии МИТ31, причем репрезентативный образец семян указанной линии МИТ31 депонирован в АТСС под регистрационным номером РТА-7839; где указанное первое растение подсолнечника является растением линии МИТ31, или устойчивым к имидазолиноновому гербициду потомком растения подсолнечника линии МИТ31, а устойчивость указанного растения подсолнечника к имидазолиноновому гербициду может быть снижена или подавлена с помощью малатиона;

(б) скрещивание указанного первого растения подсолнечника со вторым растением подсолнечника; и (в) отбор растения-потомка, полученного половым путем, и которое является устойчивым к имидазолиноновому гербициду.

17. Способ по п.16, где указанное второе растение подсолнечника обладает устойчивостью к имидазолиноновому гербициду.

18. Способ по п.17, где указанный имидазолиноновый гербицид выбран из группы, состоящей из 2(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)никотиновой кислоты, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо2-имидазолин-2-ил)-3-хинолинкарбоновой кислоты, 5-этил-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)никотиновой кислоты, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5-(метоксиметил) никотиновой кислоты, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5-метилникотиновой кислоты, смеси метил 6-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)метатолуата и метил 2-(4-изопропил4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)паратолуата, и их смеси.

19. Способ по п.17, где указанный имидазолиноновый гербицид выбран из группы, состоящей из имазамокса, имазапира, имазетапира и их смеси.

20. Способ по п.16, где указанное второе растение подсолнечника содержит по меньшей мере один ген АНА8Ь, обеспечивающий устойчивость к гербициду.

21. Способ по п.16, где указанное второе растение подсолнечника содержит по меньшей мере один ген АНА8Ь, кодирующий белок АНА8Ь, содержащий аминокислотную замену А205У.

22. Способ по любому из пп.16-21, где указанный потомок, полученный половым путем, обладает повышенной устойчивостью по меньшей мере к одному имидазолиноновому гербициду по сравнению с указанным первым растением подсолнечника, указанным вторым растением подсолнечника или обоими указанными первым и вторым растениям подсолнечника.

23. Способ по п.22, где указанный потомок, полученный половым путем, обладает повышенной устойчивостью к имазамоксу, имазапиру или обоим гербицидам имазамоксу и имазапиру по сравнению с указанным первым растением подсолнечника, указанным вторым растением подсолнечника или обоими указанными первым и вторым растениям подсолнечника.

24. Способ по любому из пп.16-23, где указанное второе растение обладает устойчивостью к глифо

- 18 019478 сату.

25. Устойчивое к имидазолиноновому гербициду растение подсолнечника, полученное способом по любому из пп. 16-24.

26. Семя растения по п.25, где указанное семя несет признак устойчивости к имидазолиноновому гербициду линии МИТ31.

27. Устойчивое к имидазолиноновому гербициду семя устойчивого к имидазолиноновому гербициду растения подсолнечника, которое является потомком линии МИТ31, несущим признак устойчивости к имидазолиноновому гербициду линии МИТ31, причем репрезентативный образец семян указанной линии МиТ31 депонирован в АТСС под регистрационным номером РТА-7839, а устойчивость указанного растения подсолнечника к имидазолиноновому гербициду может быть снижена или подавлена с помощью малатиона.

28. Семя по п.26 или 27, которое обработано имидазолиноновым гербицидом.

29. Способ по п.28, где указанный имидазолиноновый гербицид выбран из группы, состоящей из 2(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)никотиновой кислоты, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо2-имидазолин-2-ил)-3-хинолинкарбоновой кислоты, 5-этил-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)никотиновой кислоты, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5-(метоксиметил) никотиновой кислоты, 2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-5-метилникотиновой кислоты, смеси метил 6-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)метатолуата и метил 2-(4-изопропил4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)паратолуата, и их смеси.

30. Способ по п.28, где указанный имидазолиноновый гербицид выбран из группы, состоящей из имазамокса, имазапира, имазетапира и их смеси.

31. Способ борьбы с сорняками вблизи растения подсолнечника, который включает обеспечение контактирования семян растения подсолнечника по любому из пп.8-9 и 26-28 перед посевом и/или после предварительного проращивания с имидазолиноновым гербицидом.

32. Способ по п.26, который дополнительно включает посев указанных семян подсолнечника в среду, благоприятную для роста растения подсолнечника.

33. Растение подсолнечника или его часть, полученное путем выращивания семени по пп.8, 9, 2628.

34. Культура ткани регенерируемых клеток, полученная из растения подсолнечника или его части по п.33.

35. Культура ткани по п.34, клетки которой происходят из ткани, выбранной из группы, состоящей из листьев, пыльцы, эмбриона, семядоли, гипокотиля, корня, верхушки корня, пыльника, стебля и цветка.

36. Протопласты, полученные из растения подсолнечника или его части по п.33 или культуры ткани по п.35.

37. Растение подсолнечника, регенерированное из культуры ткани по п.34, где указанное растение несет признак устойчивости к имидазолиноновому гербициду линии МИТ31.

38. Семя растения подсолнечника по п.37.

39. Способ получения гибридных семян устойчивого к имидазолиноновому гербициду растения подсолнечника, включающий скрещивание первого растения подсолнечника со вторым растением подсолнечника и сбор полученных гибридных семян растения, где указанное первое растение подсолнечника является устойчивым к имидазолиноновому гербициду растением линии МИТ31, причем репрезентативный образец семян указанной линии МИТ31 депонирован в АТСС под регистрационным номером РТА-7839, или устойчивым к имидазолиноновому гербициду потомством растения подсолнечника линии МиТ31, а указанная устойчивость указанного растения подсолнечника к имидазолиноновому гербициду может быть снижена или подавлена с помощью малатиона.

40. Применение имидазолинонового гербицида для обработки семян устойчивого к имидазолиноновому гербициду растения подсолнечника, которое является (а) устойчивым к имидазолиноновому гербициду растением линии МИТ31, причем репрезентативный образец семени указанной линии МИТ31 депонирован в АТСС под регистрационным номером РТА-7839, или (б) потомством устойчивого к имидазолинону растения подсолнечника линии МИТ31, а указанная устойчивость указанного растения подсолнечника к имидазолиноновому гербициду может быть снижена или подавлена с помощью малатиона.

41. Применение по п.40, где обработка предусматривает протравливание семян, дражирование семян, опудривание семян, пропитывание семян и удобрение семян.

42. Способ по любому из пп.13-24, где указанное устойчивое к имидазолиноновому гербициду потомство растения подсолнечника выбрано из группы, включающей:

(а) растения подсолнечника, которые являются мутантами, рекомбинантами или созданными с помощью генной инженерии производными линии МИТ31;

(б) растения подсолнечника, которые являются потомками от скрещивания растений подсолнечника МиТ31 и растений второй отличающейся линии;

(в) растения подсолнечника, которые являются потомками растений подсолнечника, указанных в (а)-(б), полученными половым путем.

43. Применение по любому из пп.40-41, где указанное устойчивое к имидазолиноновому гербициду

- 19 019478 потомство растения подсолнечника выбрано из группы, включающей:

(а) растения подсолнечника, которые являются мутантами, рекомбинантами или созданными с помощью генной инженерии производными линии МиТ31;

(б) растения подсолнечника, которые являются потомками от скрещивания растений подсолнечника митз 1 и растений второй отличающейся линии;

(в) растения подсолнечника, которые являются потомками растений подсолнечника, указанных в (а)-(б), полученными половым путем.