EA018716B1

EA018716B1 - Новые 4-(тетразол-5-ил) хиназолиновые производные в качестве противораковых средств

Info

Publication number: EA018716B1
Application number: EA201070543A
Authority: EA
Inventors: Дурга Прасад Конаканчи; Субба Рао Пула; Лакшми Анантханени; Муддасани Пулла Редди; Бхуджанга Рао Адибхатла Кали Сатиа; Наннапанени Венкайах Човдари
Original assignee: Натко Фарма Лимитед
Priority date: 2007-10-29
Filing date: 2008-10-28
Publication date: 2013-10-30
Also published as: AU2008320342A1; CA2703767A1; NZ585357A; AU2008320342A2; KR20100087185A; UA101168C2; US20100261740A1; EA201070543A1; JP2011502141A; MY150054A; EP2220054A2; WO2009057139A3; AU2008320342B2; US8080558B2; WO2009057139A2; CN101878203A; ZA201002807B; GEP20125603B; MX2010004625A

Abstract

Изобретение относится к замещенным 4-(тетразол-5-ил)хиназолиновым производным формулы I или их фармацевтически приемлемым солям, которые обладают антипролиферативной активностью, такой как противораковая активность, и, соответственно, являются пригодными в способах лечения человека и животного. Настоящее изобретение также относится к способам получения замещенных 4-(тетразол-5-ил)хиназолиновых производных, к фармацевтическим композициям, содержащим данные соединения, и к их применению для получения лекарственных средств для оказания антипролиферативного действия на теплокровного животного, такого как человек.

Description

Изобретение относится к замещенным 4-(тетразол-5-ил)хиназолиновым производным формулы I

Формула I или их фармацевтически приемлемым солям, которые обладают антипролиферативной активностью, такой как противораковая активность и, соответственно, являются пригодными в способах лечения организма человека и животного. Настоящее изобретение также относится к способу получения замещенных 4-(тетразол-5-ил)хиназолиновых производных, к фармацевтическим композициям, содержащим данное соединение, и к их применению для получения лекарственных средств для оказания антипролиферативного действия на теплокровных животных, таких как человек.

Во многих из предложенных ранее режимов лечения заболеваний, связанных с пролиферацией клеток, таких как псориаз и рак, применяют соединения, которые ингибируют синтез ДНК. Данные соединения обычно являются токсичными для клеток, но их токсический эффект на быстро делящиеся клетки, такие как клетки опухоли, может быть полезным. Альтернативные подходы к антипролиферативным средствам, которые действуют по механизмам, отличным от ингибирования синтеза ДНК, обладают способностью проявлять повышенную селективность действия.

В последние годы было обнаружено, что клетка может стать раковой посредством трансформации части ее ДНК в онкоген, т.е. ген, который при активации приводит к образованию клеток злокачественной опухоли (Вгабкйате, МиЦщспсХ. 1986, 1, 91). Несколько данных онкогенов вызывают синтез пептидов, которые являются рецепторами факторов роста. Комплекс с рецептором фактора роста впоследствии приводит к усилению клеточной пролиферации. Например, известно, что некоторые онкогены кодируют тирозинкиназные ферменты и что некоторые рецепторы факторов роста также представляют собой тирозинкиназные ферменты (Уагбеп с1 а1., Апп. Кеу. Вюсйет, 1988, 57, 443; Ьагкеп е1. а1. Апп. Керойк ίη Меб. Сйет. 1989, С11р1. 13).

Неправильная передача сигнала является отличительной чертой канцерогенеза. Рецепторы поверхности клеток, их лиганды и белковые тирозинкиназы являются ключевыми компонентами сигнальных путей роста и являются мутированными или активированными при широком разнообразии опухолей у человека. В частности, путь с применением рецептора эпидермального фактора роста (БОРК.) непосредственно связан с событиями, способствующими развитию опухоли, такими как клеточное деление, клеточная адгезия и миграция, ангиогенез и антиапоптоз. Сверхэкспрессия ЕОРК, обнаруженная, в целом, в одной трети случаях эпителиального рака, может изменяться от 20 до 80% в зависимости от гистологического типа и связана с устойчивостью к гормональной терапии, цитотоксическим агентам и радиации.

ЕОРК относится к егЬВ семейству структурно связанных рецепторов, включающему ЕСРК (НЕК-1, егЬВ1), НЕК-2/пеи (егЬВ2), НЕК-3 (егЬВЗ) и НЕК-4 (егЬВ4). Данные трансмембранные гликопротеины содержат внешний лиганд-связывающий домен, цитоплазматический тирозинкиназный (ТК) домен и домен 8гс гомологичности 2 (8Н2) для связывания субстрата. ЕОР, трансформирующий фактор роста-а и амфирегулин связываются исключительно с ЕОРК, тогда как гепаринсвязывающий ЕОР, бета-целлулин и эпирегулин связываются с ЕОРК и НЕК-4, и герегулины и нейрорегулины связываются с НЕК-3 и НЕК-4.

Центральная роль ЕОРК в развитии рака вызвала напряженные усилия по разработке ЕОРК антагонистов. Две стратегии, которые наиболее удалены от клинических испытаний, представляют собой моноклональные антитела, которые блокируют связывание лиганда и активацию рецептора, и низкомолекулярные ингибиторы ЕОРК ТК. Низкомолекулярные ингибиторы первого поколения действуют в качестве АТР аналогов, обратимо конкурирующих за ТК каталитический сайт. Более новые ингибиторы, которые находятся в разработке, проявляют необратимый антагонизм и/или нацелены на многочисленные егЬВ рецепторы.

Рецепторные тирозинкиназы играют важную роль в передаче биохимических сигналов, которые вызывают репликацию в клетке. Они представляют собой большие ферменты, которые связываются с клеточными мембранами и содержат внеклеточный связывающий домен для факторов роста, таких как эпидермальный фактор роста (ЕОР), и внутриклеточную часть, которая функционирует, как киназа для фосфорилирования тирозиновых аминокислот в белках и, следовательно, влияют на клеточную пролиферацию. Известны различные классы рецепторных тирозинкиназ (^йкк, Абуапсек ш Сапсег Кекеагсй, 1993, 60, 43-73), исходя из семейств факторов роста, которые связывают различные рецепторные тирозинкиназы. Классификация включает рецепторные тирозинкиназы класса I, включающие ЕОР семейство рецепторных тирозинкиназ, таких как ЕОР, ТОРа, НЕИ, егЬВ, Хтгк, НЕК и !е123 рецепторы, рецепторные тирозинкиназы класса II, включающие инсулиновое семейство рецепторных тирозинкиназ, таких как

- 1 018716 инсулиновый рецептор, ЮН и рецепторы, связанные с инсулином (ГВВ), и рецепторные тирозинкиназы класса III, включающие семейство факторов роста тромбоцитов (РИСЕ) рецепторных тирозинкиназ, такие как ΡΌΟΡα, ΡΌΟΡβ и рецепторы колониестимулирующего фактора 1 (СИЕ1).

Известно, что киназы класса I, такие как ЕСР семейство рецепторных тирозинкиназ, часто присутствуют при широко распространенных видах рака у человека, таких как рак молочной железы (8аткЬигу е! а1., Вгй 1. Сапсег, 1988, 58,458; Сиепп е! а1, Опсодепе Век., 1988, 3, 21 апб К1уп е! а1, Вгеак! Сапсег Век. ТгсаГ. 19 94, 29, 73), немелкоклеточный рак легкого (И8СЕС), включая аденокарциному (Сету е!., Вгй. 1. Сапсег, 1986, 54, 265; ВеиЬ1 е! а1., ИТ 1. Сапсег, 1990, 45, 269; и Виксй е! а1., Сапсег Векеагсй, 1993, 53, 2379) и плоскоклеточный рак легкого (Непб1ег е! а1., Сапсег Се11к, 1989, 7, 347), рак мочевого пузыря (Иеа1 е! а1., Еапсе!, 1985, 366), рак пищевода (МикаНа е! а1., Сапсег, 1991, 68, 142), гастроинтестинальный рак, такой как рак толстой кишки, рак прямой кишки или рак желудка (Во1еп е! а1., Опсодепе Век., 1987, 1, 149), рак простаты (У1какогр1 е! а1., Н1к!осйет. 1., 1992, 24, 481), лейкемия (Копака е! а1., Се11, 1984, 31, 1035) и рак яичников, бронхиальный рак или рак поджелудочной железы (Еигореап Ра!еп! 8ресгйсайоп Ио. 0400586). Поскольку следующие опухолевые ткани человека испытывали на наличие ЕСЕ семейства рецепторных тирозинкиназ, ожидают, что их обширная распространенность будет установлена в следующих видах рака, таких как рак щитовидной железы и рак матки. Также известно, что активность тирозинкиназы ЕСЕ типа редко обнаруживают в нормальных клетках, тогда как данную активность более часто обнаруживают в злокачественных клетках (Нип!ег, Се11., 1987, 50, 823). Совсем недавно было показано 1 СиШск, Вгй. Меб. Ви11., 1991, 47, 87), что ЕСЕ рецепторы, которые обладают тирозинкиназной активностью, сверхэкспрессируются при многих видах рака человека, таких как опухоли мозга, плоских клеток легкого, мочевого пузыря, желудка, молочной железы, головы и шеи, пищевода, гинекологические опухоли и опухоли щитовидной железы.

Соответственно, было признано, что ингибитор рецепторных тирозинкиназ должен обладать ценностью в качестве селективного ингибитора роста раковых клеток у млекопитающего (Уа1кй е! а1. 8с1епсе, 1988, 242, 933). Данная точка зрения подтверждается демонстрацией того, что эрбстатин, ингибитор ЕСЕ рецепторных тирозинкиназ, специфически ослабляет рост трансплантированной человеческой карциномы молочной железы у голых мышей, которая экспрессирует ЕСЕ рецепторную тирозинкиназу, но без влияния на рост другой карциномы, которая не экспрессирует ЕСЕ рецепторную тирозинкиназу (То1 е! а1., Еиг. 1. Сапсег Сйп. Опсо1., 1990, 26, 722.) Также установлено, что различные производные стирола обладают свойствами ингибитора тирозинкиназы (Патентные европейские заявки № 0211363, 0304493 и 0322738) и являются пригодными в качестве противоопухолевых средств. Ингибирующий эффект ш у1уо двух данных производных стирола, которые являются ингибиторами ЕСЕ рецепторной тирозинкиназы, был продемонстрирован в отношении роста плоскоклеточной карциномы человека, введенной голым мышам (Уопеба е! а1., Сапсег Векеагсй, 1991, 51, 4430). Различные известные ингибиторы тирозинкиназ описываются в недавнем обзоре Т В Витке 1г. (Игидк о! !йе Еи!иге, 1992, 17, 119).

Известно из патентных заявок № ЕР0520722, ЕР0566226 и ЕР0635498, что определенные хиназолиновые производные, которые содержат анилиновый заместитель в 4-положении, обладают ингибирующей активностью рецепторных тирозинкиназ. Кроме того, известно из патентной заявки № ЕР0602851, что определенные хиназолиновые производные, которые содержат гетероариламинозаместитель в 4положении, также обладают ингибирующей активностью рецепторной тирозинкиназы.

Кроме того, известно из патентной заявки № \¥О 92/20642, что определенные арильные и гетероарильные соединения ингибируют ЕСЕ и/или РИСЕ рецепторную тирозинкиназу. В ней имеется описание некоторых хиназолиновых производных, но не упоминаются 4-анилинохиназолиновые производные.

Антипролиферативный эффект ш У1!го 4-анилинохиназолинового производного описывают Егу е! а1., 8с1епсе, 1994, 265, 1093. Установлено, что соединение 4-(3'-броманилино)-6,7-диметоксихиназолин является чрезвычайно мощным ингибитором ЕСЕ рецепторной тирозинкиназы.

Также ожидают, что ингибиторы рецепторных тирозинкиназ ЕСЕ типа будут пригодны для лечения других заболеваний избыточной клеточной пролиферации, таких как псориаз. Ак!га2епеса разработала и выпустила гефитиниб (И8 5770599) формулы II

Формула II перорально активный, селективный ингибитор тирозинкиназы рецептора эпидермального фактора роста (ЕСЕВ-ТК1). Его назначают в качестве монотерапии для продолжительного лечения пациентов с локальным раком на поздней стадии или метастатическим немелкоклеточным раком легкого после неудачного лечения химиотерапией на основе платины и доцетаксела, которая является полезной или оказывает благоприятный эффект, связанный с гефитинибом. Торговым названием является йекка.

О8I Рйагтасеийса1к разработала и выпустила эрлотиниб (И8 5747498) формулы III

- 2 018716

Формула III перорально активный, АТР-конкурентный низкомолекулярный ингибитор ЕОРК ТК. В настоящее время его используют для стандартного лечения немелкоклеточного рака легкого (ИБСЬС) и рака поджелудочной железы. Ожидается, что его активность будет большей при комбинировании со стандартными цитотоксическими противораковыми лекарственными средствами на основе антибиотиков. Торговым названием является Татсеуа.

Кроме того, оказалось, что ингибирующие антитела против ЕОРК и егЬВ2 (эрбитукс® (с225/цетуксимаб) и герцептин (трастузумаб), соответственно) оказывают положительный эффект в клинике для лечения некоторых солидных опухолей (обсуждено в Мепбе1койп е! а1, 2000, 5 Опсодепе, 19, 6550-6565).

Недавно в определенных разновидностях немелкоклеточного рака легкого (кЪСЬС) обнаружены мутации в АТР-связывающем кармане внутриклеточного каталитического домена ЕОР рецептора. Оказалось, что наличие мутаций в рецепторе связано с ответом на ингибиторы ЕОРК тирозинкиназы, такие как гефитиниб (Ьупсй е! а1., N Епд1 1 Меб 2004; 350: 2129-2139; Рае/ е! а1., 8с1епсе 2004; 304: 1497-1500), хотя становится понятно, что полезный клинический эффект соединений, таких как гефитиниб и эрлотиниб, по всей вероятности не опосредован только ЕОРК мутациями. Было показано, что лигандная стимуляция приводит в результате к различной картине фосфорилирования в мутированных рецепторах по сравнению с тем, что наблюдается в рецепторах дикого типа, и считают, что мутантные ЕОР рецепторы селективно преобразуют жизненно важные сигналы, при которых Νδί,'Ρί.' становятся зависимыми. Ингибирование данных сигналов соединениями, такими как гефитиниб, может вносить вклад в эффективность данных лекарственных средств (8отбе11а е! а1. 8аепсе 2004; 305: 1163-1167). Аналогично, в определенных первичных опухолях, таких как Νδί,'Ρί.'. глиобластома и опухоли желудка и яичников, недавно обнаружены мутации внутри егЬВ2 киназного домена (8!ерйепк е! а1., №11иге 2004; 431; 525-526). Соответственно, ингибирование ЕОР и/или егЬВ2 тирозинкиназы и в мутированных рецепторах и в рецепторах дикого типа является важной мишенью, которая, как ожидается, будет оказывать противораковый эффект.

Была обнаружена амплификация и/или активность членов рецепторных тирозинкиназ егЬВ типа и, следовательно, подразумевается, что они участвуют в ряде доброкачественных пролиферативных заболеваний, таких как псориаз (Веп-Вакка!, Сигг. Рйагт. Рек., 2000, 6, 933; Е1бег е! а1., 8аепсе, 1989, 243, 811), доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ВРН) (Китаг е! а1., 1п!. Ито1. №рйто1., 2000, 32,73), атеросклероз и рестеноз (Вокетеуег е! а1., К1бпеу 1п!., 2000, 58, 549). Следовательно, ожидают, что ингибиторы рецепторных тирозинкиназ егЬВ типа будут полезны в лечении этих и других доброкачественных заболеваний с избыточной клеточной пролиферацией. В каждом из АО 96/09294, АО 96/15118, АО 96/16960, АО 96/30347, АО 96/33977, АО96/33978, АО 96/33979, АО 96/33980, АО 96/33981, АО 97/03069, АО 97/13771, АО 97/30034, АО 97/30035, АО 97/38983, АО 98/02437, АО 98/02434, АО 98/02438, АО 98/13354, АО 99/35146, АО 01/21596, АО 01/55141 и АО 02/18372 описывают, что определенные хиназолиновые производные, которые содержат анилиновый заместитель в 4положении, обладают ингибирующей активностью рецепторных тирозинкиназ. В АО 99/35132 описывают определенные 4-(индазол-5-иламино)хиназолиновые производные. Однако не одно из данных хиназолиновых производных не содержит заместитель в 5-положении хиназолинового кольца.

В АО 01/94341 описывают, что определенные хиназолиновые производные, которые содержат 5 заместитель, являются ингибиторами 8тс семейства нерецепторных тирозинкиназ, таких как с-8тс, с-Уек и с-Руп. Также в АО 01/94341 нет описания 4-(индазол-5-иламино)хиназолиновых производных, в которых атом азота индазолильной группы замещают заместителем, содержащим арильную или гетероарильную группу.

В каждом из АО 03/040108 и АО 03/040109 описывают, что определенные хиназолиновые производные, которые содержат 5-заместитель, являются ингибиторами егЬВ семейства тирозинкиназных ингибиторов, в частности ЕОР и егЬВ2 рецепторные тирозинкиназы. В каждом из АО 03/040108 и АО 03/040109 описывают определенные 4-(индазол-5-иламино)хиназолиновые производные. Не одно из описанных хиназолиновых производных не содержит ациламиноэтоксигруппу в 5-положении хиназолинового кольца.

В ϋδ-2004/0048880 описывают определенные 4-анилинохиназолиновые производные и их применение для лечения опухолевых заболеваний. Данные хиназолиновые производные не содержат заместителя в 5-положении хиназолинового кольца. В АО 2004/46101 описывают определенные 4-(индазол-5иламино)хиназолиновые производные и их применение в качестве ингибиторов ЕОР и егЬВ2 рецепторных тирозинкиназ. Данные хиназолиновые производные не содержат заместителя в 5-положении хина

- 3 018716 золинового кольца.

В каждом из УО 2004/093880 и УО 2005/051923 описывают определенные 4-анилинохиназолиновые производные и их применение в качестве ингибиторов егЬВ2 рецепторной тирозинкиназы. Ни в одном из данных документов не описывают 4-(индазол-5-иламино)хиназолиновое производное.

Сохраняется необходимость в разработке новых соединений с высокой активностью ίη νίνο вместе с улучшенными фармакологическими характеристиками по сравнению с известными егЬВ тирозинкиназными ингибиторами, в частности соединений, которые являются селективными егЬВ2 тирозинкиназными ингибиторами. Например, существует необходимость в новых соединениях с полезными и/или улучшенными характеристиками, такими как, но не ограничиваясь ими, например, (ί) физические свойства; (ίί) полезные ΌΜΡΚ свойства, такие как высокая биодоступность, и/или подходящее время полужизни, и/или подходящий объем распределения, и/или высокая абсорбция; (ίίί) факторы, которые снижают недостаток клинического взаимодействия лекарственных средств между собой (например, ингибирование или возбуждение фермента цитохром Р450); и (ίν) соединения с ослабленным недостатком удлинения ОТ интервала у пациентов, например, соединения, которые являются неактивными или слабо активными в НЕКО анализе.

В настоящее время авторы изобретения неожиданно обнаружили, что отобранная группа замещенных 4-(тетразол-5-ил)хиназолиновых производных по настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемые соли обладают мощной противоопухолевой активностью.

Данные способы при применении для получения хиназолинового производного по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли предоставляют в качестве дополнительного признака настоящего изобретения и иллюстрируют следующими представленными примерами. Необходимые исходные соединения можно получить стандартными методиками органической химии. Получение данных исходных соединений описывают в приводимых неограничивающих примерах. Альтернативно, необходимые исходные соединения получают методиками, аналогичными данным, которые являются известными специалистам в данной области органической химии.

Краткое описание настоящего изобретения

Иобретение относится к замещенным 4-(тетразол-5-ил)хиназолиновым производным формулы I

в которой каждый К₁ представляет собой С₁-С₆алкил;

К₂ представляет собой водород или его выбирают из группы, состоящей из замещенного бензила, пиридин-2-илметила и 1-метила-1Н-имидазол-2-илметила, где заместители для бензила независимо выбирают из группы, состоящей из нитро и амино;

или его фармацевтически приемлемая соль.

Подробное описание настоящего изобретения

Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли можно получить любым способом, о котором известно, что он применим к химически родственным соединениям. Обычно активные соединения можно получить из подходящих замещенных 4-галогенхиназолиновых соединений, полученных из предшественников, являющихся замещенными 4Н-хиназолин-4-онами. Активные соединения настоящего изобретения получают в соответствии со следующей схемой I синтеза.

Схема I

О + О1(2Н Изомер)

Формула I

- 4 018716

Κι и Κ₂ такие, как определено выше.

Где X представляет собой галоген или сульфонильную уходящую группу. Где Υ представляет собой галоген или сульфонильную уходящую группу. Различные соединения формулы I получают:

(а) обработкой соединения формулы А

галогенирующим агентом, таким как тионилгалогенид, тригалогенид фосфора, пентагалогенид фосфора, фосфорилтригалогенид для получения 4-галогензамещенных хиназолиновых производных формулы В, в которой Κ| такой, как определено выше. Реакцию можно проводить или в чистом виде без растворителя или с растворителями, такими как хлористый метилен, дихлорид этилена, толуол, ксилол, циклогексан и т.д. Температуру реакции поддерживают в диапазоне от 25 до 150°С, предпочтительно при температуре кипения с обратным холодильником галогенирующего реагента.

(Ь) Обработкой соединения формулы В

триалкиламином Ν(Κ₃)₃ (где К₃ такой, как определено выше) в подходящем растворителе, таком как толуол, ксилол или циклогексан, для получения замещенных хиназолинил-4-триалкиламингалогенидных четвертичных солей. Температуру реакции поддерживают в диапазоне от 25 до 150°С, предпочтительно при комнатной температуре.

(с) Обработкой соединения формулы С

с β

цианирующим агентом, таким как цианид натрия, цианид калия, цианид меди, триалкилсилицианид и т.д., в подходящем растворителе, таком как толуол, ксилол, циклогексан или диметилформамид, диметилацетамид, формамид и т.д., для получения замещенных 4-аминохиназолинов формулы Ό, где Κ₁ такой, как определено выше. Температуру реакции поддерживают в диапазоне от 25 до 150°С, предпочтительно от 100 до 125°С.

(б) Обработкой соединения формулы Ό

азидирующими агентами, такими как азид натрия, триалкилсилилазид и т.д., для получения соединений формулы Е, где Κι такой, как определено выше.

Реакцию предпочтительно проводят в присутствии подходящего растворителя или разбавителя, например спирта, такого как метанол, этанол, изопропанол, эфирного растворителя, такого как этилацетат, галогенированного растворителя, такого как хлористый метилен, хлороформ или тетрахлорид углерода, эфирного растворителя, такого как тетрагидрофуран, 1,4-диоксан, ароматического углеводородного растворителя, такого как толуол, или диполярного апротонного растворителя, такого как Ν,Ν-диметилформамид, Ν,Ν-диметилацетамид, Аметилпирролидин-2-он или диметилсульфоксид.

Реакцию удобно проводить при температуре в диапазоне, например 10-150°С, предпочтительно в диапазоне 50-120°С.

(е) Обработкой соединения формулы Е

Е Р С 01

- 5 018716 алкилирующим агентом формулы Р (Υ и Р₂ такие, как определено выше), применяя основание, такое как карбонаты щелочного металла, гидроксиды, гидриды металлов, алкоксиды металлов, тетраалкилгуанидины, алкил лития, ЬОА и т.д. Применяемыми растворителями являются ацетонитрил, диметилформамид, диметилацетамид, тетрагидрофуран, толуол и т.д. Реакция удобно проводить при температуре в диапазоне, например 10-150°С, предпочтительно в диапазоне 20-80°С.

(ί) Очисткой смеси соединения формулы С (и его изомера С₁)

перекристаллизацией из подходящего растворителя или препаративной хроматографией для получения требуемого 1Н-тетразолильного производного.

Соединения формулы I с замещениями по 6,7-положениям с кислородной связью и их фармацевтически приемлемые соли можно получить любым способом, о котором известно, что он является пригодным для химически родственных соединений. Обычно активные соединения можно получить из подходящих замещенных 4-хлор-6,7-О-защищенных хиназолиновых соединений, полученных из предшественников, замещенных 4Н-хиназолин-4-онов. Активные соединения формулы I получают в соответствии со следующей схемой II синтеза.

где Р₅ независимо представляет собой водород или В₄, и Υ представляет собой подходящую защитную группу, такую как ацил, бензил, бензоил, силил, алкилсульфонил, арилсульфонил, аралкилсульфонил и т.д.; Ζ представляет собой галоген или подходящую уходящую группу, содержащую сульфон.

Основание, применяемое на стадии О-алкилирования, получают из карбонатов щелочных металлов, гидроксидов щелочных металлов, алкоксидов металлов, гидридов щелочных металлов, алкиллития, тетраметилгуанидина и т.д.

(а) Обработка соединения формулы Н (или его таутомера формулы Н₁)

галогенирующим агентом, таким как тионилгалогенид, тригалогенид фосфора, пентагалогенид фосфора, фосфорилтригалогенид, для получения 4-галогензамещенных хиназолиновых производных формулы В, где В₄ и X такие, как определено выше. Реакцию можно проводить или в чистом виде без растворителя или с растворителями, такими как хлористый метилен, дихлорид этилена, толуол, ксилол, циклогексан и т.д. Температуру реакции поддерживают в диапазоне от 25 до 150°С, предпочтительно при температуре кипения галогенирующего реагента.

(Ь) Обработка соединения формулы I

триалкиламином Ν(Β₃)₃, где В₃ такой, как определено выше). Реакцию проводят в подходящем растворителе, таком как толуол, ксилол или циклогексан, для получения замещенных хиназолинил-4

- 6 018716 триалкиламингалогенидных четвертичных солей. Температуру реакции поддерживают в диапазоне от 25 до 150°С, предпочтительно при комнатной температуре.

(с) Обработка соединения формулы 1

цианирующим агентом, таким как цианид натрия, цианид калия, цианид меди, триалкилсилицианид и т.д., в подходящем растворителе, таком как толуол, ксилол, циклогексан или диметилформамид, диметилацетамид, формамид и т.д., для получения, замещенных 4-цианохиназолинов формулы К, где К₃, Кд и X такие, как определено выше. Температуру реакции поддерживают в диапазоне от 25 до 150°С, предпочтительно от 100 до 125°С.

(б) Обработка соединения формулы К

азидирующими агентами, такими как азид натрия, азид калия, триалкилсилилазид и т.д.

Реакцию предпочтительно проводят в присутствии подходящего растворителя или разбавителя, например, спирта, такого как метанол, этанол, изопропанол, или эфирного растворителя, такого как этилацетат, галогенированного растворителя, такого как хлористый метилен, хлороформ или тетрахлорид углерода, эфирного растворителя, такого как тетрагидрофуран, 1,4-диоксан, ароматического углеводородного растворителя, такого как толуол, или диполярного апротонного растворителя, такого как Ν,Νдиметилформамид, Ν,Ν-диметилацетамид, №метилпирролидин-2-он или диметилсульфоксид.

Реакцию удобно проводить при температуре в диапазоне, например, 10-150°С, предпочтительно в диапазоне 50-120°С.

(е) Обработка соединения формулы Ь

алкилирующим агентом формулы Р (Υ и К₂ такие, как определено выше), применяя основание, такое как карбонаты щелочного металла, гидроксиды, гидриды металлов, тетраалкилгуанидины, алкил лития, ЬОЛ и т.д. Применяемыми растворителями являются ацетонитрил, диметилформамид, диметилацетамид, тетрагидрофуран, толуол и т.д. Реакцию удобно проводить при температуре в диапазоне, например, 10150°С, предпочтительно в диапазоне 20-80°С.

(ί) Очистка смеси соединения формулы М (и его изомера М1)

перекристаллизацией из подходящего растворителя или препаративной хроматографией для получения 1Н-тетразолильного производного формулы N

(д) реакция соединений формулы N с аликилирующими агентами формулы Κ₅Ζ (где Ζ и К₅ такие, как определено выше), применяя основание, такое как карбонаты щелочных металлов, гидроксиды, гидриды металлов, тетраалкилгуанидины, алкил лития, ЬОЛ и т.д. Применяемыми растворителями являются ацетонитрил, диметилформамид, диметилацетамид, тетрагидрофуран, толуол и т.д. Реакцию удобно проводить при температуре в диапазоне, например, 10-150°С, предпочтительно в диапазоне 20-80°С.

Также должно быть ясно, что определенные хиназолиновые производные формулы I могут сущест

- 7 018716 вовать в сольватированной форме, также как в несольватированной форме, такой как, например, гидратная форма. Должно быть ясно, что настоящее изобретение включает все данные сольватированные формы, которые обладают антипролиферативной активностью.

Подходящими фармацевтически приемлемыми солями хиназолинового производного настоящего изобретения являются, например, аддитивные соли моно- или дикислоты хиназолинового производного по настоящему изобретенияю, которые являются достаточно основными, например, кислотноаддитивная соль, например, неорганической или органической кислоты, например, хлороводородной, бромоводородной, серной, фосфорной, трифторуксусной, лимонной, малеиновой, винной, фумаровой, метансульфоновой или 4-толуолсульфоновой кислоты.

Настоящее изобретение в конкретном вополощении относится к соединениям, выбранным из группы, состоящей из 6,7-диметоксизамещенных 4-(тетразол-5-ил)хиназолиновых производных формулы IVVII

Номер соединения	Структура	Химическое название
IV	/А г^,=м.	6,7-диметокси-4(1-0- нитробензил)-1Нтетразол-5ил)хиназолин
V	Ν=Ν \	б,7-диметокси-4(1- О- аминобензил)-1Нтетразсл-5ил)хиназолин
VI	0 м, γ ч	б,7-диметокси-4(1-((1-метил-1Нимидазол-2- ил)метил)-1Нтетразол-5ил)хиназолин
VII	Ν=Ν V П νΑν-Α’ν	6,7-диметокси-4(1-(пиридин-2илмегил)-1Нтетразол-5ил)хиназолин

ί) 6,7-Диметоксихиназолиновые производные

Номер соединения	Структура	Химическое название
1УЬ	+ сг МСН^з ϊΟΆ	хлорид 6,7-диметокси-4хиназолинил)триметиламмония
ΐνά	м н^°ххЬ	6,7-диметокси-4-(1Нтетразол-5-ил}хиназолин

- 8 018716 ίί) 6,7-Диэтоксихиназолиновые производные

б,7-диэтокси-4-(1Н-

Номер соединения	Структура	Химическое название
УШа	С1	4-хлор-б,7- диэтоксихиназолин
VI иь	+ СГ М(СН₃)₃ ^Н=^С'-	Хлорид 6,7-ДИЭТОКСИ-4хиназолинил)триметиламмония
УШС	см	4-циано-6,7- диэтоксихиназолин

ϊϊΐ) 6,7-Ди-н-пропоксихиназолиновые производные

Номер соединения	Структура	Химическое название
УПа	н₃с~°ууА	4-хлор-б,7- дипропоксихиназолин
νιΐΒ	+ СГ М^снз)з з	Хлорид 6,7-дипропокси-4хиназолинил)триметиламмония
УИс	ΟΝ	4-циано-6,7- дипропоксихиназолин
VI Ιά'	ΝψΝΗ н^Д/Д	б,7-дипропокси-4 - (1Нтетразол-5-ил)хиназолин

ίν) 6,7-Диэтоксизамещенные 4-(тетразол-5-ил)хиназолиновые производные формулы νΐΙΙ-ΧΙ

Номер соединения	Структура	Химическое название
VIII	Ν=Ν ДД. Н_ЭС '''сД''Д '	6,7-ДИЭТОКСИ-4-(1-(3нитробензил)-1Нтетразол-5ил)хиназолин

- 9 018716

IX	Ν-Ν \ (V ц_эс—οΔΧ-У	3- ( (5- (6,7- диэтоксихиназолин-4- ил)-1Н-тетразол-1- ил)метил)анилин
X	β=Ν А γΛ	6,7-ДИЭТОКСИ-4-(1((1-метил-1Нимидазол-2-ил)метил)1Н-тетразол-5ил)хиназолин
XI	γΑ	6,7-ДИЭТОКСИ-4-(1(пиридин-2-илметил)1Н-тетразол-5ил)хиназолин

ν) 6,7-ди-н-пропоксизамещенные 4-(тетразол-5-ил)хиназолиновые производные формулы ΧΙΙ-ΧΥ

Номер соединения	Структура	Химическое название
XII	Ν=Ν \ 'С 1 ' н_ас-^'⁰'^=уАы	6,7-ди-н-пропокси-4(1-(3-нитробензил)1Н-тетразол-5ил)хиназолин
XIII	Ν=Ν \ V	3-((5-(6,7-ди-нпропоксихиназолин-4 ил)-1Н-тетразол-1ил)метил)анилин
XIV	гч Я γ-Α	4-(1-((1-метил-1Нимидазол-2-ил)метил)- 1Н-тетразол-5-ил)- 6,7-ди-н- пропоксихинаэолин
XV	м=н С- /	— 6,7-ди-н-пропокси-4 (1-[ пиридин-2илметил)-1Н-тетразол5-ил)хиназолин

В настоящем изобретении должно быть ясно, что, поскольку определенные соединения формулы I могут существовать в оптически активной или рацемической формах за счет одного или более заместителей, содержащих асимметрический атом углерода, настоящее изобретение включает любую данную оптически активную или рацемическую форму, которая обладает антипролиферативной активностью. Синтез оптически активных форм можно осуществлять стандартными методиками органической химии, хорошо известными в данной области техники, например синтезом из оптически активных исходных соединений или разделением рацемической формы.

Испытания ΐη νΐΐΓθ

МТТ анализ пролиферации

МТТ [3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолий бромид] анализ, впервые описанный Мокшаии в 1983, основан на способности митохондриального дегидрогеназного фермента из жизнеспособных клеток расщеплять тетразолийные кольца бледно-желтого МТТ и образовывать темно-синие формазановые кристаллы, в основном непроницаемые для клеточных мембран, таким образом, приводя к их накоплению в здоровой клетке. Солюбилизация данных клеток добавлением детергента приводит в результате к высвобождению кристаллов, которые растворяются. Число выживших клеток прямо про- 10 018716 порционально концентрации образовавшегося формазанового продукта. Затем, цвет можно количественно измерить, применяя простой колориметрический анализ. Данный анализ выполняют, применяя 0-1000 нг/мл концентрации эрлотиниба и его производных в А549 и Н1299 клетках. Протокол основывается на

АТСС и на инструкциях производителей (Са!а1од ИитЬег 30-1010К).

В естерн-блоттинг

Идеальную концентрацию лекарственного средства, определенную из МТТ анализа пролиферации, применяли для обработки 1х10⁶ А549 или Н1299 клеток в подходящей среде в течение 72 ч, после чего клеточные лизаты экстрагировали и разделяли на 10% 8Ό8 РАСЕ геле при восстановительных условиях. С гелей получали промоканием реплику на обработанных нейлоновых мембранах (Вю-Каф и иммунотестировали на ЕСЕК, Р13К и АКТ.

Инвазивный тест с применением матригеля

Инвазивность ίη νίίτο Н1299 или А549 клеток в присутствии различных концентраций ИКС соединений (как определено МТТ анализом) оценивали, применяя тест с модифицированной камерой Бойдена. Клетки обрабатывали данными соединениями в течение 48 ч. 1х10⁶ клеток суспендировали в 600 мкл бессывороточной среды, снабженной 0,2% В8А и помещали в верхний отдел камер системы ТтапветеИ (Соттапд Со51аг Екейет 8с1епййс Са1 #07-200-158, РйкЬигдй РА), покрытых матригелем (0,7 мг/мл). Нижний отдел камеры заполняли 200 мкл среды, содержащей сыворотку, и клеткам позволяли мигрировать в течение 24 ч. После инкубирования, клетки фиксировали и окрашивали Нета-3 и количественно определяли, как описано ранее (Мойапат, е1 а1. 1993). Мигрированные клетки определяли количественно в виде процентной инвазии.

Ангиогенный анализ ίη νίΙΐΌ

Для определения антиангиогенных свойств эрлотиниба и его производных, применяли идеальные концентрации лекарственных средств для обработки А549 клеток в течение 72 ч, как описано ранее, после чего полную среду заменяли бессывороточной средой в течение 12 ч. Бессывороточную среду называют кондиционированной средой, и ее применяют для ангиогенной индукции НМЕС клеток, выращенных до 80% слияния, как в стандартных протоколах.

Вестерн-блоттинг

Как описано ранее, идеальные концентрации лекарственного средства, определенные из МТТ анализа пролиферации, применяли для обработки 1 х 10⁶ А549 или Н1299 клеток в подходящей среде в течение 72 часов, с последующим вестерн-блоттингом. Применяя А549 клетки, вышеупомянутые соединения вызывали дозозависимое снижение уровней экспрессии ЕСЕК Клетки Н1299 показали аналогичное снижение уровней экспрессии ЕСЕК при обработке вышеуказанными соединениями, но они были менее чувствительны, чем А549 клетки.

Инвазивный тест с применением матригеля

Инвазию с применением матригеля проводили, как описано в материалах и методах. Применяя А549 клетки, контрольное соединение, являющееся эрлотинибом, уменьшало инвазивность зависящим от дозы способом от 100 до 800 нг/мл. Вышеупомянутые соединения вызывали замедление инвазии, аналогичное эрлотинибу при 1/10 концентрации (10-80 нг/мл). Применяя Н1299 клетки, наблюдали аналогичную картину замедления инвазии.

Исследования ΐη νίνο

Действие вышеупомянутых соединений на подкожные опухоли легкого у голых» мышей Способ

Голым мышам имплантировали 2х10⁶ А549 клеток в правую сторону задней конечности. При наблюдении опухоли (> 2 мм), мышам давали перорально или внутрибрюшино эрлотиниб, и вышеупомянутые соединения при 1/10 дозы эрлотиниба. На основании литературных данных 100 мг/кг эрлотиниба устанавливали в качестве базисной дозы. Вышеуказанные соединения вызывали замедление роста опухоли, аналогичное эрлотинибу, при 1/10 концентрации (10-80 нг/мл).

Преимущества настоящего изобретения:

1. Вышеупомянутые новые соединения превосходят существующие стандартные соединения для лечения немелкоклеточного рака легкого, такие как гефитиниб и эрлотиниб, и являются потенциально пригодными в лечении рака легкого.

2. Вышеупомянутые новые соединения также действуют в других областях, таких как, в случае рака поджелудочной железы, и являются потенциально пригодными в лечении рака поджелудочной железы.

3. Вышеупомянутые новые соединения также действуют в других областях, таких как, в случаях рака горла и полости рта, и являются потенциально пригодными в лечении рака горла и полости рта.

Настоящее изобретение будет более полно описано в соответствии со следующими конкретными примерами, которые не расцениваются в качестве ограничивающих объем настоящего изобретения.

Экспериментальная методика

Пример 1.

1а) Получение 4-хлор-6,7-диметоксихиназолина

- 11 018716

соединение1Уа

720,0 г (6,05 моль) тионилхлорида и 50,0 г (0,243 моль) 6,7-диметокси-3Н-хиназолин-4-она загружали в 2,0 л 4-горлую круглодонную колбу, соединенную с механической мешалкой, гнездом термометра и обратным холодильником с двумя поверхностями. Температуру реакционной массы повышали до температуры кипения с обратным холодильником (78-80°С). Медленно добавляли при температуре кипения с обратным холодильником 20,0 мл диметилформамида. Поддерживали температуру реакционной массы, равной температуре кипения с обратным холодильником в течение 7-8 ч при перемешивании. Тионилхлорид отгоняли полностью в вакууме при температуре ниже 70°С. Охладив реакционную массу до 40-45°С в атмосфере азота загружали при перемешивании 1000,0 мл гексана. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 40-45°С, в течение 30-45 мин. Понижали температуру реакционной массы до 25-30°С. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 25-30°С, в течение 45-60 мин в атмосфере азота. Отфильтровывали твердое вещество в атмосфере азота. Твердое вещество промывали 250,0 мл гексана. Соединение сушили в полочной вакуумной сушилке, содержащей пентаоксид фосфора, при 30-35°С до того, как потери при сушке были не более чем 0,50% вес./вес. Получали 52,50 г (выход составляет 96,33% теоретически) продукта желтого цвета. Диапазон температур плавления 214-220°С. ВЭЖХ чистота составляет 96,5%.

Спектральные данные: ЕТ-ΙΒ (КВг): 3060, 3041, 2951, 2838, 1618, 1562, 1505, 1429, 1360, 1336, 1232, 1163, 966, 878, 853, 806, 656, 615, 493, 471.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆): δ величина (ррт): 3,89-3,91(м)2(О-СН₃)(6Н), 7,37(с)Аг-На(1Н), 7,46(с)АгНЬ91Н), 9,01(с)Нс(1Н).

¹³С-ЯМР: δ величина (ррт): 56,55(2С), 101,69(1С), 105,95(1С), 113,39(1С), 134,28(1С), 148,01(1С), 150,15(1С), 155,68(1С), 157,30(1С), 157,80(1С).

Масс: 225,6[М+1], 224,6 [М].

1Ь) Получение хлорида (6,7-диметокси-4-хиназолинил)триметиламмония

Экспериментальная методика: 6,50 л триметиламина в толуольном растворе переносили в 10,0 л 4горлую круглодонную колбу, соединенную с механической мешалкой, гнездом термометра и обратным холодильником. Охлаждали реакционную смесь до 15-20°С. Загружали 50,0 г (0,22 моль) 4-хлор-6,7диметоксихиназолина при перемешивании при 15-20°С. Перемешивали реакционную смесь в течение 6090 мин при 15-20°С. Нерастворимое соединение отфильтровывали, и фильтрат собирали в 10,0 л 4горлую круглодонную колбу. Колбу закрывали пробкой. Раствор хранили при 25-35°С в течение 7 дней без перемешивания. Твердое вещество фильтровали и промывали 100,0 мл толуола в атмосфере азота. Соединение сушили в полочной вакуумной сушилке, содержащей пентоксид фосфора при 30-35°С до того, как потери при сушке были не более чем 1,0% вес./вес. Получали 38,80 г (выход составляет 61,45% теоретически) продукта светло-желтого цвета. Диапазон температур плавления 218-224°С. ВЭЖХ чистота 94,8%.

Спектральные данные: ЕТ-ΙΒ (КВг): 3416, 3027, 1615, 1509, 1479, 1447, 1413, 1361, 1350, 1276, 1239, 1205, 1168, 975, 884, 830, 662, 572.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆): δ величина (ррт): 2,27(с)Ы-(СН3)₃(9Н), 3,83(с)2(О-СН₃)(6Н), 7,24(с)Аг-На(1Н), 7,41(с)Аг-НЬ(1Н), 8,49(Нс)(1Н).

¹³С-ЯМР δ величина (ррт): 51,1(3С), 56,1(2С), 103,5(1С), 108,9(1С), 119,2(1С), 148,1(1С), 152,3(1С), 154,9(1С), 159,2(1С), 178,1(1С).

Масс: 284,5[М+1], 283,4[М].

1с) Получение 4-циано-6,7-диметоксихиназолина * сГ

Соединениеΐνο

Экспериментальная методика: 1800,0 мл толуола и 37,0 г (0,13 моль) (хлорида 6,7-диметокси-4хиназолинил)триметиламмония загружали в 3,0 л 4-горлую круглодонную колбу, соединенную с механической мешалкой, гнездом термометра, обратным холодильником и аппаратом Дина-Старка. Повыша

- 12 018716 ли температуру реакционной массы в азеотропных условиях до температуры кипения с обратным холодильником. Поддерживали температуру реакционной массы, равной температуре кипения с обратным холодильником до отделения теоретического количества воды. После завершения отделения воды, отгоняли 400,0 мл толуола. Понижали температуру реакционной массы до 95-100°С. Загружали при 95-100°С 46,0 г (0,78 моль) ацетамида. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 95-100°С, в течение 20-30 мин. Загружали при 95-100°С 19,80 г (0,40 моль) цианида натрия. Поддерживали температуру реакционной массы равной 95-100°С в течение 20-30 мин. Температуру реакционной массы повышали до температуры кипения с обратным холодильником в азеотропных условиях. Поддерживали температуру реакционной массы, равной температуре кипения с обратным холодильником, до завершения азеотропного отделения воды. После завершения отделения воды, понижали температуру реакционной массы до 95-100°С. Поддерживали температура реакционной массы, равной 90-95°С, в течение 6-7 ч в атмосфере азота. Понижали температуру реакционной массы до 25-30°С. Загружали 200,0 мл ΌΜ воды. Перемешивали реакционную смесь в течение 20-30 мин, и выдерживали реакционную смесь в течение 15-20 мин. Отделяли верхний органический слой и хранили отдельно. Помещали водный слой в экстракционную воронку. Соединение экстрагировали 3x300 мл толуола. Объединенные органические слои загружали в коническую воронку. Органический слой сушили с 50 г сульфата натрия. Загружали 10,0 г активированного угля. Повышали температуру реакционной массы до 50-55°С. Поддерживали температура реакционной массы, равной 50-55°С, в течение 30-45 мин. Отфильтровывали сульфат натрия и уголь через слой хайфлоу и промывали сульфат натрия и уголь 250,0 мл толуола. Фильтрат загружали в колбу, и полностью отгоняли толуол при высоком вакууме, при температуре реакционной смеси, не превышающей 65°С. Понижали температуру реакционной массы до 25-30°С. Загружали 100,0 мл изопропилового эфира. Перемешивали при температуре реакционной массы, равной 25-30°С, в течение 45-60 мин. Фильтровали твердое вещество и промывали 25,0 мл изопропилового эфира. Соединение сушили при 50-55°С. Получали 22,40 г (79,85% выход теоретически) продукта светло-желтого цвета. Диапазон температур плавления: 218,1°С-219,2°С. ВЭЖХ чистота 96,5%.

Спектральные данные: ΡΤ-ΙΚ (КВг): 3408, 2927, 2233, 1614, 1578, 1549, 1502, 1357, 1290, 1230, 1175, 981, 882, 843, 822, 663, 569, 494.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆) δ величина (ррт): 4,04(с)2(О-СН3)(6Н), 7,30(с)Аг-На(1Н), 7,51(с)Аг-НЬ, 9,23(с)Аг-Нс(1Н).

¹³С-ЯМР δ величина (ррт): 56,70(2С), 100,88(1С), 106,67(1С), 114,92(1С), 120,82(1С), 137,61(1С), 148,83(1С), 152,57(1С), 153,0(1С), 157,62(1С).

Масс: 217,22[М+2], 216,21[М+1].

16) Получение 6,7-диметокси-4-(1Н-тетразол-5-ил)хиназолина

Соединение 1(1

Экспериментальная методика: 400,0 мл диметилформамида и 20,0 г (0,09 моль) 4-циано-6,7диметоксихиназолина загружали в 1,0 л 4-горлую круглодонную колбу, соединенную с механической мешалкой, гнездом термометра, обратным холодильником в атмосфере азота. Загружали при 25-35°С 6,80 г (0,10 моль) азида натрия и 5,50 г (0,10 моль) хлорида аммония. Перемешивали реакционную смесь в течение 15-20 мин при 25-35°С. Перемешивали реакционную смесь в течение 15-20 мин при 25-35°С. Температуру реакционной массы повышали до 110-115°С. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 110-115°С, в течение 8-9 ч. Неорганическое твердое вещество отфильтровывали при 110115°С, и фильтрат собирали в коническую колбу. Охлаждали фильтрат до 25-30°С. Загружали в 5,0 л 4горлую круглодонную колбу, соединенную с механической мешалкой, гнездом термометра и дополнительной колбой 4000,0 мл этилацетата. Реакционную массу диметилформамидного раствора добавляли к этилацетатному раствору при перемешивании. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 25-30°С, в течение 60-90 мин. Понижали температуру реакционной массы до 0-5°С. Поддерживали температура реакционной массы, равной 0-5°С, в течение 150-180 мин. Отфильтровывали твердое вещество, и твердое вещество промывали 100,0 мл этилацетата. Соединение сушили при 25-30°С в вакууме. Получали 14,20 г (выход составляет 59,16% теоретически) продукта. Температура плавления 207,2°С. ВЭЖХ чистота: 98,6%.

Спектральные данные: ΡΤ-ΙΚ (КВг): 3421, 2986, 1615, 1552, 1507, 1478, 1431, 1342, 1242, 998, 965, 799, 659, 450.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆) δ величина (ррт): 3,92(с)2(О-СН3)(6Н), 7,34(с)Аг-На(1Н), 8,20 (уширенный)1ХН (1Н), 8,97(с)Аг-НЬ(1Н), 9,07(с)Нс(1Н).

¹³С-ЯМР δ величина (ррт): 56,36(2С), 103,28(1С), 106,72(1С), 117,39(1С), 146,81(1С), 149,87(1С),

151,43(1С), 152,58(1С), 154,65(1С), 156,54(1С).

- 13 018716

Масс: 258,14[М], 257,18[М-1].

1. Получение 6,7-диметокси-4-(1-(3-нитробензил)-1Н-тетразол-5-ил)хиназолина (соединение IV)

Экспериментальная методика: 150,0 мл Ν,Ν-диметилацетамида и 10,0 г (0,038 моль) 6,7-диметокси4-(1Н-тетразол-5-ил)хиназолина загружали в 500 мл 4-горлую круглодонную колбу, соединенную с механической мешалкой, гнездом термометра, обратным холодильником и дополнительной колбой при среднем давлении азота. Добавляли при 25-30°С 6,0 г (0,06 моль) триэтиламина. Перемешивали реакционную смесь в течение 15-20 мин при 25-30°С. Температуру реакционной массы повышали до 50-55°С. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 50-55°С, в течение 15-20 мин. 3-Нитробензилхлоридный раствор {4,50 г (0,026 моль) 3-нитробензилхлорида растворяли в 37,50 мл Ν,Ν-диметилацетамида} медленно добавляли при 50-55°С в течение 30-45 мин. Поддерживали температура реакционной массы, равной 50-55°С, в течение 15-20 мин. Повышали температуру реакционной массы до 8085°С. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 80-85°С, в течение 7-8 ч. Понижали температуру реакционной массы до 25-30°С. Загружали в 3,0 л 4-горлую круглодонную колбу, соединенную с механической мешалкой, гнездом термометра, обратным холодильником и дополнительной колбой, при 25-30°С 1875,0 мл метанола. Реакционную смесь диметилацетамидного раствора добавляли к метанольному раствору при 25-30°С в течение 60-90 мин при перемешивании. Поддерживали температура реакционной массы, равной 25-30°С, в течение 60-90 мин. Понижали температуру реакционной массы до 0-5°С. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 0-5°С, в течение 150-180 мин. Твердое вещество отфильтровывали и промывали 50,0 мл метанола. Соединение сушили при 25-30°С. Получали 11,80 г (выход 77,6% теоретически) высушенного соединения I.

Диапазон температур плавления: 221,2-222,2°С. ВЭЖХ чистота: 97,24%.

Спектральные данные: РЫК (КВг): 3428, 3105, 2940, 1615, 1519, 1504, 1427, 1359, 1324, 1241, 1151, 1118, 1001, 966, 868, 851, 728, 658, 631, 561, 470.

^!Н-ЯМР (ДМСО-4₆) δ величина (ррт): 3,92(§)2(О-СН3)(6Н), 6,22(с)(СН2)(2Н), 7,51(с)Аг-На(1Н), 7,64-7,7,67(т)Аг-НЬ(1Н), 7,87-7,89(д)(1Н), 8,14-8,18(т) Аг-Не(1Н), 8,32(с)Аг-Н£(1Н), 9,28(с)Нд(1Н).

¹³С-ЯМР δ величина (ррт): 51,56(1С), 56,45(2С), 103,27(1С), 106,80(1С), 118,51(1С), 123,16(1С), 123,32(1С), 130,23(1С), 135,15(1С), 136,92(1С), 147,55(1С), 147,73(1С), 149,63(1С), 151,10(1С), 151,40(1С), 152,21(1С), 156,68(1С).

Масс: 395,2[М+2], 394,2[М+1].

Пример 2.

2. Получение 6,7-диметокси-4-(1-(3-аминобензил)-1Н-тетразол-5-ил)хиназолина (соединение V)

Экспериментальная методика: 400,0 мл диметилформамида и 10,0 г (0,025 моль) 6,7-диметокси-4(1-(3-нитробензил)-1Н-тетразол-5-ил)хиназолиновой суспензии загружали в 1,0 л котел автоклава для гидрирования при 25-30°С. Загружали в атмосфере азота 5,0 г 5% палладия на угле (50 вес.%). Гидрирование осуществляли при 35-40 фунтов на кв. дюйм при качании при 25-30°С. Поддерживали давление газообразного водорода (35-40 пси) до прекращения поглощения водорода. Отфильтровывали катализатор через слой хайфлоу в атмосфере азота. Катализатор промывали 50,0 мл диметилформамида в атмосфере азота. Фильтрат собирали в одногорлую КВ колбу, и полностью отгоняли диметилформамид при высоком вакууме и при температуре ниже 60°С. Понижали температуру реакционной массы до 25-30°С и сбрасывали вакуум, загружали 50,0 мл гексана, и перемешивали реакционную смесь в течение 45-60 мин при 25-30°С. Фильтровали твердое вещество, промывали 25,0 мл гексана. Соединение сушили при 2530°С. Получали 8,40 г неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле, применяя мобильную фазу в виде смеси этилацетата и гексана. Получали 5,20 г (56,3% выход теоретически) продукта с ВЭЖХ чистотой, равной 99,3%.

Спектральные данные: РЫК (КВг): 3430, 3008, 2930, 1613, 1551, 1501, 1429, 1375, 1320, 1236, 1150, 1001, 963, 871, 845, 797, 775, 693, 657, 627, 446.

^!Н-ЯМР (ДМСО-а₆) δ величина (ррт): 3, 92(с)(О-СН3)(3Н), 4,03(с)(О-СН3)(3Н), 5,07(с)СН2(2Н), 5,95-5,98(с)ХН2(2Н), 6,34-6,43(м)Аг-На,НЬ,Нс(3Н), 6,86-6,89(т)Аг-На(1Н), 7,50(с)Аг-Не(1Н), 8,04(с)АгН£(1Н), 9,31(с)Нд(1Н).

- 14 018716 ¹³С-ЯМР δ величина (ррт): 51,561С), 56,45(2С), 103, 07(1С), 106,80(1С), 112,91(1С), 113,61(1С), 115,07(1С), 118,49(1С), 129,08(1С), 129,08(1С), 135,31(1С), 147,69(1С), 148,95(1С), 150,63(1С), 151,42(1С), 152,31(1С), 156,76(1С).

Масс: 365,3[М+2],364,3[М+1].

II. НС1: получение хлороводородной соли 6,7-диметокси-4-(1-(3-аминобензил)-1Н-тетразол-5ил)хиназолина

Соединение V Г идрохлорид

Экспериментальная методика

Загружали 200,0 мл хлористого метилена и 5,0 г (0,013 моль) 6,7-диметокси-4-(1-(3-аминобензил)1Н-тетразол-5-ил)хиназолина в 500 мл 4-горлую круглодонную колбу, соединенную с механической мешалкой, гнездом термометра и обратным холодильником при 25-30°С. Перемешивали реакционную смесь в течение 15 мин. После того как раствор становился прозрачным, добавляли 6,0 г ΓΡΆ НС1. Перемешивали реакционную смесь в течение 1 ч. Хлористый метилен отгоняли до суммарного объема, равного 30,0 мл. Добавляли 200 мл гексана. Перемешивали реакционную смесь в течение 1 ч. Фильтровали твердое вещество и промывали 30,0 мл гексана. Соединение сушили при 55-60°С. Получали сухое соединение 4,80 г светло-желтого цвета (выход составляет 87,2% теоретически). Диапазон температур плавления: 234,8-236,3°С. Чистота продукта: 99,5% по ВЭЖХ.

Спектральные данные: ЕТЧК (КВг): 3424, 3227, 3094, 3052, 2978, 2878, 2746, 1665, 1595, 1508, 1471, 1435, 1411, 1352, 1312, 1286, 1260, 1239, 1205, 1131, 1110, 1065, 1050, 917, 885, 854, 827, 778, 721, 684, 534, 476.

^!Н-ЯМР (ДМСО-б₆) δ величина (ррт) 3,94(с)(О-СН3)(3Н), 4,03(с)(О-СН3)(3Н), 5,07(с)СН2(2Н), 6,09(с)ИН2(2Н), 6,34-6,43(м)Аг-На,НЬ,Нс(3Н), 6,86-6,89(т)Аг-Нб(1Н), 7,50(с)Аг-Не(1Н), 8,04(с)Аг-Н£(1Н), 9,31(с)Нд(1Н).

¹³С-ЯМР δ величина(ррт): 51,95(1С), 56,43(1С), 103,26(1С), 106,75(1С), 118,35(1С), 122,77(1С), 127,54(1С), 130,01(1С), 132,79(1С), 136,68(1С), 147,68(1С), 150,93(1С), 151,37(1С), 152,28(1С),

156,60(1С).

Масс: 400,3[М+1], 398,3[М-1].

Пример 3. Получение 6,7-диметокси-4-[1-(1-метил-1Н-имидазол-2-илметил)-1Н-тетразол-5-ил]хиназолина (формула-ΥΣ)

Соединение VI

Экспериментальная методика

50,0 мл Ν,Ν-диметилацетамида и 5,0 г (0,019 моль) 6,7-диметокси-4-(1Н-тетразол-5-ил)хиназолина загружали в 250 мл 4-горлую круглодонную колбу, соединенную с механической мешалкой, гнездом термометра, обратным холодильником и дополнительной колбой при среднем давлении азота. Добавляли при 25-30°С 3,80 г (0,038 моль) триэтиламина. Перемешивали реакционную смесь в течение 15-20 мин при 25-30°С. Температуру реакционной массы повышали до 50-55°С. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 50-55°С, в течение 15-20 мин. 2-Хлорметил-1-метилимидазольный раствор [2,50 г (0,019 моль) 2-хлорметил-1-метилимидазола растворяли в 25,0 мл Ν,Ν-диметилацетамида] медленно добавляли при 50-55°С в течение 30-45 мин. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 5055°С, в течение 15-20 мин. Повышали температуру реакционной массы до 80-85°С. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 80-85°С, в течение 7-8 ч. Полностью отгоняли в вакууме Ν,Νдиметилацетамид. Неочищенное соединение очищали колоночной хроматографией, применяя гексан и этилацетат. Получали чистое соединение с весом 2,40 г (выход 35,2% теоретически). Спектральные данные: Масс: 353[М+1], 352,0[М].

Пример 4. Получение 6,7-диметокси-4-[1-(пиридин-2-илметил)-1Н-тетразол-5-ил]хиназолина

- 15 018716

Экспериментальная методика: 50,0 мл Ν,Ν-диметилацетамида и 5,0 г (0,019 моль) 6,7-диметокси-4(1Н-тетразол-5-ил)хиназолина загружали в 250 мл 4-горлую круглодонную колбу, соединенную с механической мешалкой, гнездом термометра, обратным холодильником и дополнительной колбой при среднем давлении азота. Добавляли при 25-30°С 3,80 г (0,038 моль) триэтиламина. Перемешивали реакционную смесь в течение 15-20 мин при 25-30°С. Температуру реакционной массы повышали до 50-55°С. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 50-55°С, в течение 15-20 минут. Раствор гидрохлорида 2-хлорметилпиридина [3,20 г (0,019 моль) гидрохлорид 2-хлорметилпиридина растворяли в 25,0 мл Ν,Ν-диметилацетамида] медленно добавляли при 50-55°С в течение 30-45 минут. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 50-55°С, в течение 15-20 мин. Повышали температуру реакционной массы до 80-85°С. Поддерживали температуру реакционной массы, равной 80-85°С, в течение 7-8 ч. Ν,ΝДиметилацетамид полностью отгоняли в вакууме. Неочищенное соединение очищали колоночной хроматографией, применяя гексан и этилацетат. Получали 1,90 г (выход 28,0% по теории) чистого соединения. Спектральные данные: масс: 350 [М+1], 349,0 [М].

Пример 5-8.

Аналогичные соединения 3,4-диэтоксипроизводных хиназолиновых соединений νΐΙΙ-ΧΙ и их промежуточные соединения νΐΐΐα-νΐΐΐά получали, следуя методике, приведенной в примерах получения 1аИ следующих соединений ΐν-ΥΠ.

ί) Масс-спектрометические характеристики соединений Υΐΐΐα-Υΐΐΐά

Номер соединения	Молекулярная формула	Молекулярный вес	Масс-пики
Пик ί	Пик ϋ
νιιι&	С₁₂Н„Ы₂О₂С1	252,5	253,7 [М+1]	252,5[М]
УШЬ	с₁₅н₂₂ы₃о₂с1	311,5	312,6 [М+1]	311,6[М]
νΐΐΐς	0₁₃Η₁₃Ν₃Ο₂	243,0	245,2 [М+2]	244,2 [М+1]
νιιΐά	С₁₃Н₁₄Н₆О₂	286,0	286,3[М]	235,1 [М-1]

ίί) Масс-спектрометические характеристики соединений Υΐΐΐ-Χΐ

Номер соединения	Молекулярная формула	Моле кулярный вес	Масс-пики
[М+2]	[М+1]
VIII	с_2Сн_1Эы₇о₄	421,0	423,4	422,4
IX	С_гоН_2гЫ₇0₂	391,0	393,4	392,4
X	С1_ЭН₂оМв0₂	380,0	382,4	381,4
XI	С₁₉Н₁₉М₇О₂	377,0	379,4	378,4

Пример 9-12.

Аналогичные соединения 3,4-дипропоксипроизводных хиназолиновых соединений Χΐΐ-Χν и их промежуточные соединения ХПа-Χΐΐά получали, следуя методике, приведенной в примерах получения 1а-1б следующих соединений ΐν-ΥΠ.

ш) Масс-спектрометические характеристики соединений Χΐ^-ΧΐΜ

Номер соединения	Молекулярная формула	Молекулярный вес	Масс-пики
Пик ϊ	Пик ϋ
ХИа	Ο₁₄Η₁₇Ν₂Ο₃Ο1	280,5	281,7[М+1]	280,7[М]
ХПЬ	С₁₇Н_2еЫ₃О_гС1	339,5	340,6[М+1]	339,6[М]
хпс	Οι₅Η₁₇Ν₃Ο₂	271,0	273,2 [М+2]	272,2[М+1]
хна	С1₅Н_1аЫ₆О2	314,0	314,3[М]	313,1 [М-1]

- 16 018716 ίν) Масс-спектрометические характеристики соединений ХП-ХУ

Номер соединения	Молекулярная формула	Молекулярный вес	Масс-пики
[М+2]	[М+1]
XII		449,0	451,4	450,4
XIII	с₂₂н₂₅ц₇о₂	419,0	421,4	420,4
χτν	С2ОН241Я0О2	403,0	410,4	409,4
XV	021Η23Νγ02	405,0	407,4	406,4

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. 4-(Тетразол-5-ил)хиназолиновое производное формулы I

Формула I в которой каждый К! представляет собой С1-С₆алкил;

К₂ представляет собой водород или его выбирают из группы, состоящей из замещенного бензила, пиридин-2-илметила и 1-метила-1Н-имидазол-2-илметила, где заместители для бензила независимо выбирают из группы, состоящей из нитро и амино;

или его фармацевтически приемлемая соль.
2. 4-(Тетразол-5-ил)хиназолиновое производное формулы I или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, выбранное из:

a) 6,7-диметокси-4-( 1 -(3 -нитробензил)-1Н-тетразол-5-ил)хиназолина;

b) 3 -((5-(6,7-диметоксихиназолин-4-ил)-1Н-тетразол-1 -ил)метил)анилина;

Ь') гидрохлорида 6,7-диметокси-4-( 1 -(3 -аминобензил)-1Н-тетразол-5-ил)хиназолина;

c) 6,7-диметокси-4-( 1 -((1 -метил-1Н-имидазол-2-ил)метил)-1Н-тетразол-5-ил)хиназолина;

б) 6,7-диметокси-4-(1-(пиридин-2-илметил)-1Н-тетразол-5-ил)хиназолина;

б') 6,7-диметокси-4-(1Н-тетразол-5-ил)хиназолина;

е) 6,7-диэтокси-4-(1Н-тетразол-5-ил)хиназолина;

ί) 6,7-диэтокси-4-( 1 -(3 -нитробензил)-1Н-тетразол-5 -ил)хиназолина;

д) 3-((5-(6,7-диэтоксихиназолин-4-ил)-1Н-тетразол-1ил)метил)анилина

й) 6,7-диэтокси-4-( 1 -((1 -метил-1Н-имидазол-2-ил)метил)-1Н-тетразол-5-ил)хиназолина;

ί) 6,7-диэтокси-4-( 1 -(пиридин-2-илметил)-1Н-тетразол-5-ил)хиназолина;

_)) 6,7-дипропокси-4-(1Н-тетразол-5-ил)хиназолина;

k) 6,7-ди-н-пропокси-4-( 1 -(3 -нитробензил)-1Н-тетразол-5-ил)хиназолина;

l) 3-((5-(6,7-ди-н-пропоксихиназолин-4-ил)-1Н-тетразол-1-ил)метил)анилина;

т) 4-(1 -((1 -метил-1Н-имидазол-2-ил)метил)-1Н-тетразол-5-ил)-6,7-ди-н-пропоксихиназолина;

п) 6,7-ди-н-пропокси-4-(1-(пиридин-2-илметил)-1Н-тетразол-5-ил)хиназолина.
3. Способ получения соединения формулы I по п.1 или его соли, который включает:

(а) обработку соединения формулы А галогенирующим агентом, таким как тионилгалогенид, тригалогенид фосфора, пентагалогенид фосфора, фосфорилтригалогенид для получения 4-галогензамещенных хиназолиновых производных формулы В;

(Ь) обработку соединения формулы В триалкиламином (Ν(Κ₃)₃), где К₃ представляет собой С1-С₆ линейную или разветвленную алкильную

- 17 018716 цепь, в подходящем растворителе, таком как толуол, ксилол или циклогексан, для получения замещенной четвертичной соли хиназолинил-4-триалкиламингалогенида формулы С;

(с) обработку соединения формулы С и

с цианирующими агентами, выбранными из цианида натрия, цианида калия, цианида меди и триалкилсилилцианида, в подходящем растворителе, выбранном из толуола, ксилола, циклогексана, диметилформамида, диметилацетамида и формамида, для получения замещенных 4-аминохиназолинов формулы Ό;

(й) обработку соединения формулы Ό ϋ Е азидирующими агентами, выбранными из азида натрия и триалкилсилилазида, для получения соединений формулы Е, и затем, когда В₂ не является водородом,

е) обработку соединения формулы Е алкилирующим агентом формулы Е

Р где Υ означает галоген или сульфонильную уходящую группу в присутствии основания, такого как карбонаты щелочного металла, гидроксиды, гидриды металлов, алкоксиды металлов, тетра-алкилгуанидины, алкил лития, ЕЭЛ, с получением смеси соединений С и С₁ и (1) очистку смеси соединений формулы С и его изомера С_| перекристаллизацией из подходящего растворителя или препаративной хроматографией для получения требуемого соединения формулы I;

где в формулах А, В, С, Ό, Е, Е, С и С_ь В_| и В₂ представляют собой значения, определенные в п.1, и X представляет атом галогена или сульфонильную уходящую группу.
4. Фармацевтическая композиция для лечения гиперпролиферативного заболевания у млекопитающего, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
5. Способ лечения гиперпролиферативного заболевания у млекопитающего, который включает введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения по п.1.
6. Способ по п.5, в котором упомянутым гиперпролиферативным заболеванием является рак.
7. Способ по п.6, в котором указанный рак представляет собой рак легкого, плоских клеток, мочевого пузыря, желудка, поджелудочной железы, груди, головы, шеи, пищевода, мозга, гинекологический рак или рак щитовидной железы.
8. Способ по п.5, в котором гиперпролиферативное заболевание не является раком.
9. Способ ингибирования рецепторной тирозинкиназы ЕСЕ типа у субъекта, включающий введение указанному субъекту эффективного количества соединения по п.1.