EA017570B1

EA017570B1 - С-замещенные в кольце прегн-4-ен-21,17-карболактоны и фармацевтические продукты, содержащие их

Info

Publication number: EA017570B1
Application number: EA201001861A
Authority: EA
Inventors: Свен Ринг; Рольф Больманн; Йоахим Кунке; Лудвиг Цорн; Штеффен Борден; Катя Прелле
Original assignee: Байер Фарма Акциенгезельшафт
Priority date: 2008-06-02
Filing date: 2009-05-26
Publication date: 2013-01-30
Also published as: HK1156954A1; AR071984A1; CL2009001342A1; HN2010002548A; MA32321B1; CA2726855A1; CR11821A; US20110130371A1; CN102046646B; TW201000106A; SV2010003748A; CN102046646A; EP2297177A1; CO6321132A2; PE20100154A1; AU2009254266A1; UY31859A; MX2010013233A; DE102008026793A1; JP2012528075A

Abstract

Настоящее изобретение касается C-замещенных в кольце прегн-4-ен-21,17-карболактонов общей формулы Iв которой Rпредставляет собой α- или β-метилен, Rпредставляет собой атом водорода и Rпредставляет собой атом брома, хлора или фтора или Rи Rвместе означают связь. Новые соединения представляют собой антиминералокортикоидные прогестероны.

Description

Настоящее изобретение касается С-замещенных в кольце прегн-4-ен-21,17-карболактонов общей формулы I

в которой

Я^6,7 представляет собой а- или β-метилен,

Я⁹ представляет собой атом водорода и

Я¹¹ представляет собой атом брома, хлора или фтора или

Я⁹ и Я¹¹ вместе означают связь.

Атом водорода Я⁹ преимущественно находиться в а-положении. Атом галогена Я¹¹ преимущественно находиться в β-положении.

Атом фтора или хлора предпочтительны как атом галогена Я¹¹; в частности, атом фтора является предпочтительным.

Соединения, указанные ниже, являются, в частности, предпочтительными согласно изобретению 11β-хлоро-6β,7β;15β,16β-диметилен-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,17β-карболактон, 6β,7β;15β,16β-диметилен-3-оксо-17-прегна-4,9(11)-диен-21,17β-карболактон, 6β,7β;15β,16β-диметилен-11β-фторо-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,17β-карболактон, 6α,7α;15β,16β-диметилен-11β-фторо-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,17β-карболактон.

Дроспиренон (6β,7β-15β,16β-диметилен-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,17β-карболактон) представляет собой новый прогестаген, который присутствует, к примеру, в оральном контрацептиве ΥΑ8ΜΙΝ® и продукте ΑΝΟΕυΟ® для лечения симптомов постменопаузы. Благодаря своему сравнительно низкому сходству с рецептором прогестагена и его сравнительно высокой ингибирующей овуляцию дозе, дроспиренон присутствует в ΥΑ8ΜΙΝ® в относительно высокой суточной дозе - 3 мг.

Дроспиренон известен тем, что имеет в дополнение к эффекту, способствующему наступлению или сохранению беременности, альдостеронантагонистический (антиминералокортикоидный) и антиандрогенный эффект. Эти два свойства делают дроспиренон подобным натуральному прогестогену прогестерона в его фармакологическом профиле, но в отличие от дроспиренона последний имеет недостаточную биодоступность при оральном введении препарата.

Поэтому целью настоящего изобретения является обеспечить соединения, которые должны иметь более высокую активность, способствующую наступлению или сохранению беременности, чем дроспиренон ίη νίνο. Это в конечном итоге предназначено для того, чтобы привести к низшей суточной дозе и к более низкому требуемому количеству активного соединения в веществе. Соединения, обеспеченные посредством настоящего изобретения, предназначены для того, чтобы дополнительно иметь антиминералокортикоидный эффект ίη νίνο, который не более высок, чем у дроспиренона, а желательно менее интенсивен, чем у последнего.

Также допольнительным предназначением является то, чтобы соединения изобретения имели антиандрогенную активность слабее, чем дроспиренон. В конце концов, соединения изобретения предназначены иметь высокую метаболическую стабильность.

\νϋ 2006072467 описывает соединения, которые показывают активность при тесте сохранения беременности у крыс, которая значительно выше, чем у дроспиренона, и показывают активность на минералкортикоидном рецепторе от гомогената почек у крыс, который сопоставим с дроспиреноном. Этими соединениями являются 18-метил-19-нор-17-прегн-4-ен-21,17-карболактоны.

Соединения, имеющие ίη νίΐτο меньше диссоциированного профиля, чем дроспиренон, в отношении с их связью к прогестогену и минералкортикоидным рецепторам, описаны в νθ 2008000521. Этими соединениями являются 18-метил-19-нор-андрост-4-ен-17,17-спироэфиры.

Способ получения 3-оксопрегн-4-ен-21,17-карболактонов путем окисления без металла 17-(3гидроксипропил)-3,17-дигидроксиандростанов описан в ΕΡ 1746101 Α1. Фармакологическая активность

- 1 017570 в основном не очевидна из ЕР 1746101 А1 для этих карболактонов. Упомянуто только конкретное соединение 63,73-153,163-диметилен-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,173-карболактон (дроспиренон). 11-Гало- и 9,11-дегидросоединения, в частности, не показаны.

Задача настоящего изобретения достигается за счет обеспечения С-замещенных в кольце прегн-4ен-21,17-карболактонов общей формулы I, описанной тут. Соединения общей формулы I (и особенно те из примера 1 и 2) характеризуются улучшенным профилем эффектов.

Соединения изобретения известны удивительно сильной активностью, способствующей наступлению или сохранению беременности, и имеют высокую активность в тесте сохранения беременности у крыс после подкожного введения.

Соединения изобретения общей формулы имеют большую активность, способствующую наступлению или сохранению беременности, и в то же самое время более слабую связь с рецептором андрогена, чем дроспиренон.

Дополнительно было обнаружено, что соединения изобретения показывают калийсохраняющий натрийуретический (антиминералкортикоидный) эффект у адреналэктомированных крыс.

Благодаря их активности, способствующей наступлению или сохранению беременности, новые соединения общей формулы I могут использоваться самостоятельно или в комбинации с эстрогеном в фармацевтических продуктах для контрацепции.

Таким образом, соединения изобретения общей формулы могут использоваться самостоятельно, к примеру, без эстрогена для приготовления так называемых ТП (таблетка прогестерона). Такие ТП на основе других соединений с активностью, способствующей наступлению или сохранению беременности, были описаны. К примеру, основанные на прогестогене левоноргестреле в форме продукта М1сто1и1® (28 единиц суточной дозы каждая содержит 30 мг левоноргестрела).

Благодаря их благоприятному профилю эффектов, соединения изобретения в особенности приемлемы для лечения предменструальных симптомов, таких как головные боли, депрессивные настроения, задержка воды и мастодинии.

Соединения изобретения благодаря их активности, способствующей наступлению или сохранению беременности, пригодны для дальнейшего возможного применения, которое является общеизвестным для прогестогенов, к примеру, для лечения тяжелых нарушений свертываемости, например меноррагии и метроррагии, лечения недостаточности желтого тела, т.е. лечения угрозы прерывания беременности, лечения задержки полового созревания и лечения состояний, которые делают, чтобы замена прогестогена казалась обозначенной.

Таким образом, к настоящему изобретению также относятся фармацевтические продукты, которые включают по крайней мере одно соединение общей формулы I вместе с фармацевтически приемлемым носителем.

Фармацевтическими продуктами, преимущественными согласно изобретению, являются те, что содержат 63,73;153,163-диметилен-3-оксо-17-прегна-4,9(11)-диен-21,173-карболактон или 6β,7β;15β,16βдиметилен-11β-фторо-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,17β-карболактон в качестве активного ингредиента. К настоящему изобретению также относится фармацевтическая комбинация продуктов, которая, кроме соединения общей формулы I и фармацевтически приемлемого носителя, содержит эстроген.

Дозировка соединений изобретения в контрацептивных продуктах должна быть от 0,01 до 5 мг, преимущественно от 0,01 до 2 мг в день. Суточная доза для лечения предменструальных симптомов должна быть от около 0,1 до 20 мг.

Способствующие наступлению или сохранению беременности и эстрогенные компоненты активных ингредиентов преимущественно вводятся орально вместе в контрацептивных продуктах. Суточную дозу преимущественно вводят всю сразу.

Подходящими эстрогенами в комбинированных продуктах изобретения для контрацепции являются эстрадиол и синтетические эстрогены, преимущественно этинилэстрадиол, а также местранол.

Дополнительно возможными для использования являются сложные эфиры эстрадиола, а из них, в частности, валериат эстрадиола или еще бензоат эстрадиола.

Эстроген вводят в суточном количестве, которое соответствует его эстрогенному эффекту от 0,01 до 0,04 мг этинилэстрадиола. Этинилэстрадиол самостоятельно используется в суточном количестве от 0,01 до 0,04 мг в таких противозачаточных продуктах.

Новые соединения общей формулы I могут также применяться в фармацевтических продуктах для лечения пре-, пери- и постменопаузных симптомов и в продуктах для гормональной заместительной терапии (ГЗТ).

Эстрогенами, которые применяются в продуктах этого типа для гормональной заместительной терапии, являются первоначально натуральные эстрогены, особенно эстрадиолы или его эстеры, например валериат эстрадиола, или еще сопряженные эстрогены (СЛЭ = сопряженные лошадиные эстрогены), как они присутствуют, к примеру, в продукте ΡΒΕΜΑΚΙΝ®.

Также недавно было описано введение фолиевой кислоты (XVО 99/53910) или 5-метил-6-(8)тетрагидрофолата и, в частности, кальциевых солей 5-метил-6-(8)-тетрагидрофолиевой кислоты (Ме1аГо

- 2 017570

1ίη®; \νϋ 2006/120035), внутрь продуктов для контрацепции или гормональной заместительной терапии. Соответствующие стабильные композиции тетрагидрофолатов с одиночным прогестогеном и в частности с прогестогеном и с эстрогеном описаны в νθ 2008/003432.

В случае продуктов для контрацепции фолиевая кислота или компонент тетрагидрофолат служит для предотвращения мальформации созревания плода. Преимуществом в данном контексте является предотвращение ДНТ (дефектов нервной трубы) у новорожденных, серьезной физической мальформации.

В рамках настоящего изобретения есть применение новых прогестогенов изобретения по аналогии с описанием в вышеуказанных публикациях для ранее известных прогестогенов.

Фармацевтические продукты, основанные на новых соединениях, составлены известным образом путем переработки активного ингредиента в соответствующих случаях в комбинации с эстрогеном, с веществами носителями, растворителями, в случае необходимости с веществами, маскирующими вкус и т.д., которые распространены в фармацевтической технологии, и преобразуются в желаемую форму введения.

Если применяются новые соединения, самостоятельно либо же вместе с эстрогеном совместно с фолиевой кислотой или с 5-метил-6-(8)-тетрагидрофолатом, могут быть получены соответствующие композиции, которые описаны в вышеуказанных публикациях.

Подходящими для преимущественно орального введения являются таблетки, таблетки с покрытием, капсулы, гранулы, суспензии или растворы.

Подходящими для парентерального введения, в частности, являются масляные растворы, такие как, например, растворы в кунжутном масле, касторовом масле или хлопковом масле. Также возможно добавлять солюбилизаторы, такие как, к примеру, бензилбензоат или бензиловый спирт, для увеличения растворимости.

Также возможно ввести вещества изобретения в трансдермальную систему и вводить их с ней через кожу.

Подобным образом возможно для новых соединений быть введенными самостоятельно или совместно с эстрогеном в систему для введения, которая высвобождает активное вещество или активные вещества в течение длительного времени, к примеру внутриматочную систему (ВМС), интравагинальное кольцо (ИВК), или в систему, которая имплантируется под кожу, из которой они постепенно высвобождаются после введения ее в полость матки или влагалища или имплантации под кожу.

Фармакология

Эффект, способствующий наступлению или сохранению беременности у овариэктомированных крыс.

Эффект, способствующий наступлению или сохранению беременности, был определен, как описано в Μιιΐιη и др. (Мийп, Р., Ктайептасйет, В., Ве1ег, 8., Е1дет, V., и 8сЫШпдет, Е. (1995). Дроспиренон: новый прогестоген с антиминералкортикоидной и антиандрогенной активностью. Фармакологическая характеристика на животных моделях. Контрацепция 51, 99-110).

Это влечет за собой исследование свойств соединений для того, чтобы компенсировать недостаток прогестерона у овариэктомированных животных, которые не имеют своего собственного синтеза прогестерона, и для поддержания беременности (сохранение беременности).

Были спарены животные женского пола весом 200-230 г. Животные были овариэктомированы на 8 день после случки (п. с.) и пролечены 5 мг/кг/д. эстрогена.

Соединения для испытаний были даны в различных концентрациях (3, 10, 30 мг/кг/д.). Лечение было начато на 8 день п.с. и продолжалось 6 дней.

Оценка.

На следующий день после последнего лечения животные были вскрыты. Степень сохранения беременности была рассчитана путем деления количества живых плодов на количество обнаруживаемых участков имплантации. Наличие бьющегося сердца было решающим для оценки плода как живого. Не идентифицированные имплантационные сайты (контроль после овариэктомии) были определены как 0% сохранения беременности.

ΕΌ₅₀ (концентрация, при которой происходит половина максимального эффекта) была определена в качестве меры активности, способствующей наступлению или сохранению беременности.

Было определено, что соединения изобретения имеют активность, способствующую наступлению или сохранению беременности, которая в четыре раза выше, чем эффект, способствующий наступлению или сохранению беременности дроспиренона.

- 3 017570

Таблица 1 Эффект, способствующий наступлению или сохранению беременности, соединений в тесте сохранения беременности

	Εϋβο
Дроспиренон	10 мг/кг/д
Соединение Пр. 1	2.9 мг/кг/д
Соединение Пр. 2	3.4 мг/кг/д

Эффект, способствующий наступлению или сохранению беременности у овариэктомированных крыс, корреляция фармакокинетических значений и фармакодинамических эффектов.

Для того чтобы описать разницу в их активности, способствующей наступлению или сохранению беременности, более точно, в изменении сохранения беременности экспериментальные образцы крови были дополнительно взяты в разное время, чтобы определить фармакокинетические параметры. Крысы были предварительно обработаны в этом случае, как описано в предыдущем эксперименте. Физиологическая основа фармакокинетической модели была разработана с использованием программ ΡΚ-8ΙΜ, версия 4.0.1 (Вауег Тес1то1оду 8ету1се5, Ьсусгкивсп. Ссгтапу). Сав1гоР1и5 версия 5.2 (δίιηιιΐηΐίοηβ Р1и8, 1пс., Ьаисайег, СА, И8А) и νίηΝοηΙίη® РгоГс55Юпа1 (версия 5.2, РйагвщЫ Согр., МоиШат У1ете, СА, И8А).

Соотношение было найдено между АИС (площадь под кривой профиля времени концентрации), достигнутой в ходе эксперимента, и измерением фармакологической активности, т. е. достигнутой сохранененной беременности. Таким образом, модель позволила оценить АИС₅₀ значения. Статистически значимая разница в активностях, ίη νίνο способствующих наступлению или сохранению беременности, между дроспиреноном и соединениями изобретения была найдена с АИС₅₀ значениями больше чем в 6 раз ниже для соединений изобретения. Исходя из соотношения между системным воздействием и эффектом, была рассчитана АИС в крови, необходимая для достижения 80% успешной беременности в крысиной модели (табл. 2).

Таблица 2 Показ количества, необходимого для достижения успешной беременности (рассчитанная)

	АбС (кровь, рассчитанная) у крыс, необходимая для 80% успешной беременности
Дроспиренон	1346 (мкг*час/л)
Соединение Пр. 1	210 (мкг*час/л)

Антиминералкортикоидный эффект соединений у адреналэктомированных крыс (эксперименты диуреза).

Антиминералкортикоидный эффект соединений определяли, как было описано выше Бовей и др. (Ьовей, V., Са5а15-8ιсηζс1. 1., и Вике, Μ. (1985). Прогестогены с антиминералкортикоидной активностью. А^ζηе^т^йе1Гο^8сйиηд 35, 459-471). Животные мужского пола весом 180-200 г были адреналэктомированы за 5 дней до эксперимента и получили замену глюкокортикоидов. Эксперимент диуреза проводился на 5 день после адреналэктомии. Непрерывную инфузию изотонического раствора №С1 плюс 5% глюкозы вводили животным внутривенно. Одновременным приемом 1 мкг/кг/ч б-альдостерона достигнут постоянный минералокортикоидный эффект, отличимый от удержания натрия и кайигевщ. Тестирующие соединения были введены подкожно в разных дозах (3, 10 и 30 мг/кг), и устранение альдостерониндуцированной задержки натрия указывает на антиминералкортикоидный эффект.

Оценка.

Животные содержались в метаболизме клеток, и фракции мочи собирали каждый час. Концентрацию натрия и ионов калия в моче определяли методом фотометрии пламени и оттуда рассчитывали отношение Nа/Κ. Соотношения Nа/Κ были изображены на графике в пределах установленного времени, и площадь под кривой [АИС] была определена. ΕΌ₅₀ (концентрация, при которой происходит половина максимального эффекта) была определена в виде меры антиминералкортикоидной активности.

Было обнаружено, что соединения изобретения имеют антиминералкортикоидную активность, которая составляет от около половины интенсивности до около интенсивности, такой как у дроспиренона.

- 4 017570

Таблица 3

Антиминералкортикоидный эффект соединений в эксперименте диуреза

	Εϋίο
Дроспиренон	6.7 мг/кг
Соединение Пр. 1	5.9 мг/кг/д
Соединение Пр. 2	12.36 мг/кг/д

Антиандрогенный эффект соединений ίη νίΐτο в анализе трансактивации антиандрогенов.

Антиандрогенный эффект определяли, как описано в 8сйпе1бет и др. (8с1пе1бег К., Ста! Е., 1ггап Е., ΝΚΗοΕοπ С., §1аш8Ьу Е.М., СообГе11о\у М., Вогбеп 8.А., Ке11ег 8., 8ιΐ55ΐηι.ι11ι Κ..Ό. и Е1еб1ет Н.Р. (2008) Всп6фо1с5 А.-С., Νον 81его1б5 Ггот Согбоша аикйаШ Ае1а 2299, 1. АпйЬюБск (Токуо) 61 (6), 356-364).

Культурной средой, используемой для культивирования клеток, используемых для анализа, была КРМ1 (РАА, #Е15-49) с 10% ЕС8, 200 ммоль Ь-глутамина, 100 и/100 мкг/мл пенициллин/стрептомицин.

Соответственные клеточные линии (клетки РС3, прочно трансфектированные с человеческим рецептором андрогена (КАК.) и корреспондирующим структурным компонентом, который содержит люциферазу под контролем восприимчивого к андрогену ускорителя (ММТУ)) были выращены при плотности 4х10⁴ клеток на ячейку на белых, непрозрачных пластинах для выращивания живых тканей с 96 ячейками в каждой (Реткт Е1тег, #Р12-106-017) и поддержаны в культурной среде с 3% ЭСС-РС8 (сыворотка, обработанная активированным углем для того, чтобы удалить интерферирующие компоненты, присутствующие в сыворотке). Соединения, которые должны быть исследованы, были добавлены спустя 8 ч, и клетки были инкубированы с соединениями в течение 16 ч. Эксперименты были проведены трижды. В конце инкубации содержащая эффектор среда была удалена и заменена лизирующим буфером. После исследования люциферазы был добавлен субстрат (Рготеда, #Е1501), пластины с этими 96 ячейками были затем вставлены в микропластинчатый люминометр (РНегаЧаг. ВМС 1аЬ1еей), и была измерена люминесценция. Значения 1С₅₀ были оценены с использованием программного обеспечения для вычисления взаимосвязей дозы-активности. Эффективность выражается в процентах максимального эффекта по сравнению с максимальным эффектом исходного антиандрогена (гидроксифлутамид).

Было найдено, что соединения изобретения имеют более слабую антиандрогенную активность, чем дроспиренон ίη νίΐτο.

Таблица 4 Антиандрогенный эффект соединений в трансактивационном анализе

Антиандрогенный эффект соединений у орхидэктомированных крыс (Хершбергер)

	1С₆₀[рМ]	Эффективность
Дроспиренон	0.12	40.3
Соединение Пр. 1	0.24	19.3
Соединение Пр. 2	0.16	31.9

Антиандрогенный эффект соединений был определен, как описано Ми1п и др. (Ми1п, Р., Ктайептасйет, К., Ве1ег, 8., Е1дет, ^., апб 8сЫШпдет, Е. (1995). Дроспиренон: новый прогестоген с антиминералкортикоидной и антиандрогенной активностью. Фармакологическая характеристика на животных моделях. Контрацепция 51, 99-110).

Это влечет за собой тестирование пригодности соединений для ингибирования зависимого от андрогена роста простаты, семенного пузырька и мышцы леватора у молодых мужского пола кастрированных крыс, получавших замену андрогена. С этой целью молодых крыс изначально кастрировали. 8 дней после орхидэктомии животные получали 1 мг/кг/день пропионат тестостерона (ПТ) подкожно самостоятельно или в комбинации с тестируемыми веществами (10 мг/кг/день) на протяжении семи дней.

На 15-й день после орхидэктомии животных умерщвляют, простату, семенной пузырек и мышцу леватора иссекают и определяют относительно влажный вес. Ингибированный вызванный андрогеном рост служит мерой антиандрогенного эффекта тестируемого вещества. Антиандрогенный эффект был преобразован в процент ингибирования с полным эффектом (100% ингибирования), когда вес простаты соотносился с контрольной группой, и 0% ингибирования, когда вес простаты соотносился с ПТ лечением.

- 5 017570

Таблица 5

Антиандрогенный эффект соединений у орхидэктомированных крыс

	Антиандрогенный эффект (% ингибирования)
Дроспиренон	22.5%
Соединение Пр. 1	<0%
Соединение Пр. 2	3.8%
Ацетат ципротерона	73.1%

В соответствии с их клиническим профилем было установлено, что ацетат ципротерона показывает сильный антиандрогенный эффект, а дроспиренон меньший, но отличающийся антиандрогенный эффект. Это было найдено по контрасту с тем, что соединения изобретения не показывают антиандрогенный эффект.

Антиандрогенный эффект соединений у орхидэктомированных крыс, исследование экспрессии генов.

Как модификация анализа Хершбергера, описаного выше, в дополнение животных умерщвляли через 24 ч после первого лечения (1 мг/кг ПТ, 10 мг/кг тестируемого вещества), и ткани простаты были немедленно подвержены шоковой заморозке сразу после вскрытия, а затем использовались для мРНК изоляции. Количественный метод ПЦР (Тас.|Мап) был использован для исследования индукции (хкратный фактор индукции) андрогенстимулированных генов, в частности биосинтеза стероидов (к примеру, ГО11, Η. М. 004508,2) в качестве меры андрогенного эффекта ПТ и их ингибирование соединениями изобретения. Ингибирование было преображено в % ингибирования с полным ингибированием (100%), когда индукционный фактор равен 1, и 0% ингибирования, когда индукционным фактором является то же, что и ПТ.

Таблица 6

Антиандрогенный эффект соединений: альтерация в экспрессии генов

	х-кратный фактор индукции ЮН мРНК после ПТ введения	Антиандрогенный эффект(% ингибирования)
Контроль (ПТ)	7.07	0%
ПТ + ДПР	5.39	27%
ПТ + Пр. 1	7.89	<0%
ПТ + ЦПТА	1.53	91%

ПТ = пропионат тестостерона;

ДПР = дроспиренон;

ЦПТА = ципротерон ацетат.

В соответствии с их клиническим профилем было установлено, что ацетат ципротерона показывает сильный антиандрогенный эффект, а дроспиренон меньший, но отличающийся антиандрогенный эффект. Это было найдено по контрасту с тем, что соединения примера 1 изобретения не показывают антиандрогенный эффект.

Новые соединения общей формулы I получают согласно изобретению, как описано ниже. Путь синтеза новых С-замещенных в кольце прегн-4-ен-21,17-карболактонов показан на схеме 1, начиная, к примеру, с известного соединения 1 [СА8: 95218-07-8, №ск1ксй и др. 1. Меб. Сйет. 1985, 546-550].

Введение Δ^9,11 двойной связи, к примеру путем мезилирования и отщепления [СйатЬегйп и др. 1. Огд. Сйет. 1960, 295] дает соединение 2 (пример 1).

- 6 017570

Условия: а) АкретдШик осктасеик; Ь) СН₃8О₂С1, пиридин, ΌΜΆΡ; с) ЫаОЛс, АсОН, Ас₂О; б) дибромодиметилгидантоин, НЕ-пиридин (70%), дихлорометан; е) Ви₃8пН/А1ВМ/бензол; Г) 2,2-диметоксипропан, пиридиний-рТкОН; д) СН₂=СНСН₂ОРО(ИМе₂)₂, п-ВцЫ, ТГФ; 1) 1. Ν-метилпирролидон, №ОАс/Н₂О. дибромодиметилгидантоин, 2. Е1Вг/Ы₂СО₃; 1) (СН₃)₃8О-1, ДМСО, №Н.

Другой способ получения соединения изобретения показан на схеме 2.

(5) Получен из известного 153,163-метиленандрост-4-ен-3,17-диона |\У1ес11еП и др. С1ет. Вег. 106, 1973, 888] (4) путем микробиологического гидроксилирования в ферментере с микроорганизмами, которые вызывают гидроксилирование стероида в 11 положении, в частности в положении 11а, к примеру, из видов АЬыб1а кр., Астетошит кр., Аксосйу1а кр., АкретдШик кр., ВасШик кр., Веаиуепа кр., Во1туоб1ро1б1а кр., Са1бапотусек кр., Са1оиесйта кр., Со11е1о1пс1шт кр., СигуШапа кр., Ризалит кр., С1ЬЬеге11а кр., С1оеокропит кр., С1отеге11а кр., Спотоша кр., Нар1окроге11а кр., Нейсок1у1ит кр., Не1ттШокропит кр., Ме1аг1ихтт кр., Мисогкр., Мдтокрога кр., Р1ихорик кр., 8рого1пс1шт кр., 8уисерйа1ак1гит кр. и \Уо]по\\'1с1а кр.

Используются, в частности, виды АЬк1б1а отсЫб1к, АЬк1б1а соеги1еа, Астетошит кйгсШт, АксосНу1а с1етайбта, АкрегдШик аШасеик, АкретдШик атеатоп, АкретдШик Дксйеп, АкретдШик Дауик, АкретдШик тайдпик, АкретдШик те11еик, АкретдШик шбШаик, АкретдШик шдет, АкретдШик осйтасеик, АкретдШик уапесо1от, ВасШик теда1елит, Веаиуепа Ьакыаиа, Веаиуепа 1еие11а, Войуоб1р1об1а та1огит, Са1бапотусек Гитадо, Са1оиесйга бесога, Со11е1о1пс1шт рйото1бек, СигуШапа 1ииа1а, Еикапит охукропит, Дикалит ко1аш, С1ЬЬеге11а хеае, С1отеге11а стди1а!а, С1оеокролит Ггисйдеиит, С1оеокролит Ыддеиыаиит, С1оеокролит как1, С1оеокролит 1асйсо1ог, С1оеокролит ойуатт, С1отеге11а Гикато1бек, Сиотота стди1а1а, Нар1окроге11а йекрегебюа, Не1ттШокролит кр., НейсокМит ртГогте, Ме1аг1ихтт аткорйае, Мисог р1итЬеик, Мисог кртокик, №дгокрога крйаепса, РЫхорик аггЫхик, РЫхорик сойил, РЫхорик бе1етаг, Р1ихорик _)арошсик, РЫхорик кахаеишк, РЫхорик тютокрогик, РЫхорик отухае, РЫхорик кйаидйа1еик1к, Р1ихорик к1о1ошГет, РЫхорик ίπϋοΐ, 8рого1пс1шт кШГитексеик, 8уисерйа1акйит гасетокит, \Уойю\\ас1а дгат1шк и \Уойю\\гс1а Ыйа.

Особенно применяются АЬк1б1а отсЫб1к (АТСС 6647), Астетошит кйюШт (№РРЙ 5759), АксосНу1а с1етайбта (СВ8), АкретдШик аШасеик (АТСС 10060), АкретдШик атеатог! (СВ8), АкретдШик Дксйеп (АТСС 1020), АкретдШик тайдиик (ΙΜΙ 16061), АкретдШик те11еик (СВ8), АкретдШик шбШаик (АТСС 11267), АкретдШик шдет (АТСС 9142, АТСС 11394), АкретдШик осЬтасеик (ΝΚΒΕ 405, ΝΚΒΕ 410, СВ8 13252, АтСс 46504), АкретдШик уапесо1от (АТСС 10067), ВасШик тедаЮгшт (АТСС 13368), Веаиуепа Ьакыаиа (1ЕО 5838, АТСС 13144, 1ЕО 4848, СВ8 11025, СВ8 12736, АТСС 7159), Войуоб1р1об1а та1огит (СВ8 13450), Са1балотусек Гитадо (АТСС 16373), Са1оиесйга бесога (АТСС 14767), СигуШапа 1ииа1а (IX 3, ΝΚΒΕ 2380), Еикапит ко1аш (АТСС 12823), Еикапит охукрогит (АТСС 7808), С1ЬЬеге11а хеае (СВ8 4474), С1отеге11а стди1а1а (АТСС 12097, АТСС 10534, СВ8 23849, СВ8 23749, АТСС 16646, 1ЕО 6459, 1ЕО 6425, 1ЕО 6470, АТСС 15093, АТСС 10529, 1ЕО 5257, АТСС 56596, АТСС 64682), С1отеге11а Гикагогбек (АТСС 9552), Сиотота стди1а1а (СВ8 15226), Нар1окроге11а йекрегебюа (СВ8 20837), Небсок1у1ит

- 7 017570 ρίπίοηηο (АТСС 8992), Ηοΐιηίηΐΐιοφοπιιιη φ. (ΝΚΚΣ 4671), Μοίαιΐιίζίιιιη αηίκορίίαο (ΙΡΟ 5940), Мисог р1итЬеи8 (СВФ 29563), ΝφΐΌφοη врИаепса (АТСС 12772), Ρΐιίζοριίδ ;πτ1ιίζι.ΐ5 (АТСС 11145), Ρΐιίζοριίδ οΐΎζαο (АТСС 4858, АТСС 34102, СВФ 32947), Ρΐιίζοριίδ κΙοΙοηίίοΓ (АТСС 15441), 8уисерйа1а8йит гасспю§ит (ΙΡΟ 4827) и \νοίηο\νίά;·ι дгатшщ (СВФ 89168).

11-Гидроксистероид 5 преобразован, к примеру, путем мезилирования и щелочным отщеплением метансульфоновой кислоты в Δ⁹⁽¹¹⁾ производное 7. Последний может быть преобразован, к примеру, путем бромофторирования Δ⁹⁽¹¹⁾ двойной связи известным способом, к примеру, в реагент Олаха/Νбромосукцинимидом [О1аИ и др. БуиФеык 1973, 780] в дион 8, и преобразуется путем сокращения деброминирования, к примеру, с гидридом трибутилолова в фтородион 9. После защиты 4-ен-3-он системы (9), такой как диеноловый эфир 10, спиролактон установлен, к примеру, методом 8ΐιιΠζ |8уп1йе515 1980, 289] или альтернативно известным способом [ВйНет Апде\\·. 1.е. 21 1982, 696; Ьаигеи! 1. 81его1б Вюсйет. 19 1983, 771]. Соединение 11 может быть преобразовано, к примеру, путем бромирования диенолового эфира по аналогии с методом [РА. 2бепс. НитЬетЮ Сатрто, А. ΡολλΌΐΈ аиб Саг1 Щега^ Фего1б8 1 1963, 233] и отщиплением бромистого водорода путем нагревания соединения 6-бромо с основными реагентами, такими как, к примеру, ЫВт или Ь1₂СО₃, в апротонных растворителях, таких как, к примеру, диметилформамид или 1-метил-2-пирролидон, при температуре 50-120°С или еще при нагревании соединений 6бромо в растворителе, таком как коллидин или лютидин, в 4,6-диен-3-он 12. Соединение 12 затем преобразовано путем метилирования Δ⁶ двойной связи известными процессами, к примеру, с диметилсульфоксониум метилидом [см., к примеру, ΌΕ-А 1183500, ΌΕ-А 2922500, ЕР-А 0019690, И8-А 4291029; Е.Р ί.’οΐΌ\· ииб М. Скау^^ку, 1. Ат. СНет. 8ο^ 84 1962, 867] в соединение 13, в результате в смесь а- и βизомеров (соотношение зависит от используемых веществ, β-изомеры обычно отчетливо преобладают), которая может быть разделена в индивидуальные изомеры, к примеру, путем хроматографии.

Введение 11-фторогруппы может также иметь место, как показано на схеме 3, к примеру, начиная с 11-гидрокси-4-енедион 5 реакцией с нонафлилфторидом и ЭВИ в органическом растворителе, к примеру тетрагидрофуране [см., к примеру, Веηηиа-8ка1тον5к^. Те!. Ьей. 1995, 2611], до образования смеси вышеупомянутого 11-фторстероида 9 и также вышеупомянутого Δ⁹⁽¹¹⁾ производного 7, который может быть выделен в индивидуальное соединение путем хроматографии и позже будет реагировать дополнительно, как описано выше.

Условия: с'/е') ΝΓΡ, ЭВИ, ТГФ; б-ί) см. схему 2.

- 8 017570

См. схему (К = метил, толил) для всех условий реакции.

Начиная с 1-гидроксистероида 5 возможно в 5 стадий получить 4,6-диен-3-он 18 методами, описанными выше, из которых соединение 2 изобретения позже получено путем метилирования 6,7 двойной связи (см. выше). 4,6-Диен-3-он 18 также может быть получен, начиная с 4-ен-3-он 7, в три стадии методами, описанными выше.

Промежуточные соединения формул 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 15, 16, 17, 18, 19 и 20 - все новые соединения. Настоящее изобретение относится ко всем им.

Настоящее изобретение дополнительно касается применения их как начальных соединений и промежуточных для получения соединения изобретения общей формулы I. Следующие примеры служат для пояснения изобретения более детально.

Пример 1. 63,73;153,163-Диметилен-3-оксо-17-прегна-4,9(11)-диен-21,173-карболактон.

а) 6β,7β;15β,16 β-Диметилен-11 а-мезилокси-3 -оксо-17-прегн-4-ен-21,17 β-карболактон.

21,7 мл мезилхлорида было добавлено каплями к раствору 25 г 6β,7β;15β,16β-диметилен-11αгидрокси-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,17β-карболактона [СА8: 95218-07-8, ΝίοΚίδοΙι и др. 1. Меб. С’йст. 1985, 546-550] в 250 мл пиридина при 0°С, и смесь перемешивали при 25°С на протяжении 2 ч. Затем эту смесь разбавляли этилацетатом, промывали раствором бикарбоната натрия, водой и соляным раствором до нейтрализации, сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме при температуре 40°С. Было получено 30 г чистого 6β,7β;15β,16β-диметилен-11α-мезилокси-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,17β-карболактона в твердом виде.

Ή-ЯМР (600 МГц, СОС1₃): δ = 6.01 (8, 1Н), 5.46 (б(Ьг), 1Н), 2.69-2.61 (т, 2Н), 2.56-2.46 (т, 3Н), 2.39 (т, 1Н), 2.27 (б(Ьг), 1Н), 2.19-2.13 (т, 2Н), 1.89 (т, 1Н), 1.81 (бб(Ьг), 1Н), 1.72 (т, 1Н), 1.67 (т, 1Н), 1.521.45 (т, 2Н), 1.37 (т, 1Н), 1.31 (т, 1Н), 1.28 (8, 3Н), 1.06 (т, 1Н), 0.94 (8, 3Н), 0.58 (т, 1Н).

Ь) 6β,7β;15β,16β-Димеτилен-3-оксо-17-прегна-4,9(11)-диен-21,17β-карболакτон.

- 9 017570

0,5 мл ангидрида уксусной кислоты было добавлено к раствору 18.5 г 63,73;153,163-диметилен11а-мезилокси-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,173-карболактона в 50 мл уксусной кислоты при 25°С, и смесь была перемешана при температуре бани 100°С на протяжении 8 ч. Затем добавляют в воду, экстрагируют три раза этилацетатом, промывают водой и соляным раствором до нейтрализации, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме при температуре 40°С. Было получено 15,2 г неочищенного 63,73;153,163-диметилен-3-оксо-17-прегна-4,9(11)-диен-21,173-карболактона. Хроматография на силикагеле с гексаном/этилацетатом привела к 7,5 г чистого продукта в твердом виде. Μδ (ΕΙ): т/ζ = 364 (М⁺);

Ή-ЯМР (400 МГц, С1)С1₃): δ = 6.07 (8, 1Н), 4.96 (т, 1Н), 2.97 (δ, 3Н), 2.75-2.51 (т, 3Н), 2.47-2.31 (т, 3Н), 2.22-1.84 (т, 5Н), 1.77-1.41 (т, 8Н), 1.32-1.23 (т, 2Н),1.03 (8, 3Н), 0.84 (т, 1Н).

Пример 2. 63,73;153,163-Диметилен-113-фторо-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,173-карболакгон.

а) 11 а-Гидрокси-15 β,16 3-метиленандрост-4-ен-3,17-дион.

л колба Эрленмейера, содержащая 1 л питательного раствора, который был стерилизован в автоклаве при 121°С в течение 30 мин, состоящий из 3%-го моногидрата глюкозы, 1%-го жидкого кукурузного экстракта, 0,2% нитрата натрия, 0,1% первичного кислого фосфата калия, 0,2% вторичного кислого фосфата калия, 0,05% хлорида калия, 0,05% магния сернокислого семиводного и 0,002% сульфата железа(11) семиводного (подогнан к рН 6,0), был инокулирован с 2 мл ледяного ДМСО культурой рода А8рег§Ши8 осйтасеи8 (ΝΚΕϋ 405), его встряхивали при 27°С на ротационном шейкере при 165 об/мин в течение 71,5 ч. Эта прекультура использовалась для инокулирования 20 л ферментера, который был заполнен 19 л стерильной среды того же самого финального состава, как описано для прекультуры. Кроме того, перед стерилизацией было также добавлено 1,0 мл силиконового масла и 1,0 мл 8упретошс для контроля пенообразования. Этот ферментер был инкубирован под сверхатмосферным давлением 0,7 бар, при температуре 28°С, с аэрацией 8 л/мин и со скоростью перемешивания 350 об/мин в течение 47,5 ч.

2,5 л прекультуры были удалены из этого 20 л ферментера для того, чтобы инокулировать 50 л ферментер, который был наполнен 47,5 л стерильной среды того же самого финального состава, как описано для прекультуры. Перед стерилизацией были добавлены 2,5 мл силиконового масла и 2,5 мл 8уиретошс. После 10 ч начальной фазы роста под сверхатмосферным давлением 0,7 бар, при температуре 28°С, с аэрацией 10 л/мин и со скоростью перемешивания 350 об/мин было добавлено 10,0 г раствора 15β,16β-метиленандрост-4-ен-3,17-диона в 200 мл ДМФ. Перемешивание было продолжено с аэрацией. После 26 ч культуральная жидкость была собрана.

5,0 л прекультуры были удалены из этого 20 л ферментера для того, чтобы инокулировать 100 л ферментера, который был наполнен 95,0 л стерильной среды того же самого финального состава, как описано для прекультуры. Перед стерилизацией были добавлены 5,0 мл силиконового масла и 5,0 мл 8упретошс. После 10 ч начальной фазы роста под сверхатмосферным давлением 0,7 бар, при температуре 28°С, с аэрацией 20 л/мин и со скоростью перемешивания 350 об/мин было добавлено 20,0 г раствора 15β,16β-метиленандрост-4-ен-3,17-диона в 400 мл ДМФ. Перемешивание было продолжено с аэрацией. После 26,25 ч культуральная жидкость была собрана.

Две культуральные жидкости были скомбинированы и экстрагированы 60 л метилизобутилкетона в течение 19,75 ч. Комбинированные органические фазы были выпарены досуха. Остаток был промыт гексаном в целях извлечения силиконового масла. Продукт затем был кристаллизован из ацетона и 19,2 г (61% теоретического) 11 а-гидрокси-15 β,16 β-метиленандрост-4-ен-3,17-диона были выделены.

100 мг были рафинированы посредством препаративного ВЭЖХ (250x40 мм, Ьипа С18, 10 μ, 100 А, вода-ацетонитрил 70:30, 100 мл/мин).

Т.п.: 225/247-249°С

- 10 017570 [α]_ο = +48.6°(СНС1₃, с = 1.0700).

Ή-ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): δ = 1.04 (8, 3Н), 1.13-1.37 (т, 8Н), 1.62 (б1, 1Н), 1.77-1.91 (т, 2Н), 1.99 (т, 1Н), 2.03-2.21 (т, 4Н), 2.31-2.57 (т, 5Н), 4.05 (т, 1Н), 5.78 (8, 1Н).

Ь) 11 а-Мезилокси-153,163-метиленандрост-4-ен-3,17-дион.

мл мезил хлорида были добавлены по капле к раствору 22 г 11а-гидрокси-153,163метиленандрост-4-ен-3,17-диона в 220 мл пиридина при 0°С, и смесь была перемешана при 25°С в течение 2 ч. Затем она была разбавлена этилацетатом, промыта раствором бикарбоната натрия, водой и солевым раствором до нейтрального состояния, высушена через сульфат натрия и выпарена под вакуумом при 40°С. Было получено 24,7 г 11а-мезилокси-153,163-метиленандрост-4-ен-3,17-диона.

Ή-ЯМР (600 МГц, СЭС1₃): δ = 5.81 (т, 1Н), 5.09 (т, 1Н), 1.39 (8, 3Н), 1.21 (т,1Н) 1.06 (8,3Н).

с) 153,163-Метиленандроста-4,9(11)-диен-3,17-дион.

0,82 мл уксусного ангидрида было добавлено к 25,6 г раствора 11а-мезилокси-153,163метиленандрост-4-ен-3,17-диона в 80 мл уксусной кислоты при 25°С, и смесь была перемешана при температуре бани 100°С в течение 8 ч. Это сопровождалось добавлением в воду, экстракцией три раза этилацетатом, промыванием водой и солевым раствором до нейтрального состояния, высушиванием через сульфат натрия и выпариванием под вакуумом при 40°С.

Кристаллизация из этилацетата имела своим результатом 16,4 г 153,163-метиленандроста-4,9(11)диен-3,17-диона.

Ή-ЯМР (600 МГц, СЭС1₃): δ = 5.79 (т, 1Н), 5.55 (т, 1Н), 1.85 (т,1Н), 1.65 (т,1Н), 1.37 (8, 3Н), 1.121.33 (2т, 2Н), 1.00 (8, 3Н).

б) 9а-Бромо-113-фторо-153,163-метиленандрост-4-ен-3,17-дион.

24,5 мл 70% концентрации НБ/пиридин были медленно добавлены к 8,76 г суспензии дибромгидантоина в 250 мл дихлорметана. 16,3 г 153,163-метиленандроста-4,9(11)-диен-3,17-диона были введены в полученный в результате раствор и перемешаны при комнатной температуре в течение 30 мин. Это сопровождалось выливанием в смесь 200 мл водного раствора аммиака (25%) и 300 мл льда, экстрагированием три раза этилацетатом, промыванием водой и солевым раствором до нейтрального состояния, высушиванием над сульфатом натрия и выпариванием под вакуумом при 40°С. Кристаллизация остатка из этилацетата имела своим результатом 15,2 г 9а-бром-113-фтор-15а,163-метиленандрост-4-ен-3,17-дион.

Ή-ЯМР (600 МГц, СЭС1₃): δ = 5.81 (т, 1Н) 5.28 (б1, 1Н), 1.695 (б, 3Н), 1.175 (б, 3Н).

е) 113-Фторо-153,163-метиленандрост-4-ен-3,17-дион.

Раствор 33,5 г 9а-бром-113-фтор-153,163-метиленандрост-4-ен-3,17-диона в 480 мл бензола был

- 11 017570 перемешан с 42 мл гидрида трибутилолова и 416 мг азобисизобутиронитрила при 80°С в течение 30 мин. Смесь была выпарена под вакуумом и остаток был хроматографирован на силикагеле 60. Кристаллизация из этилацетата имела своим результатом 18,7 г 113-фтор-153,163-метиленандрост-4-ен-3,17-диона.

Ή-ЯМР (600 МГц, СЭС1₃): δ = 5.73 (т, 1Н), 5.28 (бд, 1Н), 1.395 (б, 3Н), 1.175 (б, 3Н).

1) 113-Фторо-3-метокси-153,163-метиленандроста-3,5-диен-17-он.

1,3 г пиридина тозилата были введены в 10,79 г суспензии 113-фтор-153,163-метиленандрост-4-ен-

3,17-диона в 220 мл 2,2-диметоксипропана. Затем они были перемешаны при температуре бани 100°С в течение 3 ч. После охлаждения до комнатной температуры 2,5 мл триэтиламина были добавлены и смесь была выпарена досуха под вакуумом. Остаток был перемешан с 30 мл метанола и отфильтрован с отсасыванием. Было получено 9,6 г 113-фтор-3-метокси-153,163-метиленандроста-3,5-диен-17-она.

Ή-ЯМР (600 МГц, СЭС1₃): δ = 5.27-5.19 (т, 1.5Н), 5.14 (т, 1Н), 5.08 (д, 0.5 Н), 3.60 (8, 3Н), 1.17 (т, 6Н).

д) 113-Фторо-3-метокси-153,163-метилен-17-прегна-3,5-диен-21,173-карболактон.

г аллилтетраметилфосфородиамидата, растворенные в 30 мл тетрагидрофурана, были добавлены по капле к 91 мл 1,6М раствору бутиллития (в гексане) при -50°С. После перемешивания при -20°С в течение 30 мин было введено 22 мл Ν,Ν,Ν,Ν-тетраметилэтандиамина, и смесь нагревали до комнатной температуры. Раствор 15 г 113-фтор-3-метокси-153,163-метиленандроста-3,5-диен-17-она в 80 мл тетрагидрофурана был добавлен и смесь была перемешана при комнатной температуре в течение 4 ч. Это сопровождалось добавлением насыщенного водного раствора хлорида аммония и выливанием в воду, экстрагированием три раза этилацетатом, промыванием водой и солевым раствором до нейтрального состояния, высушиванием через сульфат натрия и выпариванием под вакуумом при 40°С. Красталлизация из этилацетата имела своим результатом 15,8 г 113-фтор-3-метокси-153,163-метилен-17-прегна-3,5-диен21,173-карболактона.

Ή-ЯМР (300 МГц, СЭС1₃): δ = 5.28-5.22 (т, 1.5Н), 5.17 (т, 1Н), 5.09 (д, 0.5Н), 3.63 (8, 3Н), 1.20 (т, 6Н), 0.53 (т, 1Н).

11) 113-Фторо-153,163-метилен-3-оксо-17-прегна-4,6-диен-21,173-карболакгон.

о

14,5 мл 10% концентрации раствор ацетата натрия и 5,11 г 1,3-дибромо-5,5-диметилгидантоин были постепенно добавлены в порциях при 0°С к 13,5 г суспензии 113-фтор-3-метокси-153,163-метилен-17прегна-3,5-диен-21,173-карболактона в 150 мл 1-метил-2-пирролидона. Смесь затем была перемешана при 0°С (ледяная баня) в течение 0,5 ч и после добавления 4,86 г бромида лития и 4,27 г карбоната лития перемешана при температуре бани 100°С в течение 3,5 ч. Затем это было налито в ледяную воду/хлорид натрия, и выделенный осадок был отфильтрован. Хроматография на силикагеле 60 (элюирование с гексаном/этилацетатом 1:1) имело своим результатом 9,1 г 113-фтор-153,163-метилен-3-оксо-17-прегна-4,6диен-21,173-карболактона.

Ή-ЯМР (600 МГц, СЭС1₃): δ = 6.41 (т, 1Н), 6.22 (т, 1Н), 5.68 (8, 1Н), 5.11 (бд, 1Н), 1.31 (б, 3Н), 1.21 (б, 3Н), 0.60 (т, 1Н).

ί) 63,73;153,163-Диметилен-113-фторо-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,173-карболактон.

- 12 017570

2,39 г гидрида натрия (60% в минеральном масле) были добавлены в порциях к 13,41 г раствору иодида триметилсульфоксониума в 250 мл сухого ДМСО при комнатной температуре и, после того как добавление было выполнено, смесь была перемешана при комнатной температуре в течение 3 ч. Затем 8,38 г 113-фторо-153,163-метилен-3-оксо-17-прегна-4,6-диен-21,173-карболактона были введены, и смесь была перемешана при комнатной температуре в течение 6 ч. Это сопровождалось выливанием в воду, экстрагированием три раза этилацетатом, промыванием водой и солевым раствором до нейтрального состояния, высушиванием через сульфат натрия и выпариванием под вакуумом при 40°С. Очистка была проведена посредством хроматографии на силикагеле 60 (элюирование с гексаном этилацетатом 1:4). 2,6 г 63,73;153,163-диметилен-113-фтор-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,173-карболактона были получены в виде фракции А. М8 (ΕΙ): т/ζ = 384 (М⁴), 349, 273, 260;

Ή-ЯМР (600 МГц, СЭС1₃): δ = 5.99 (8, 1Н), 5.07 (б(Ьг), 1Н), 2.69-2.61 (т, 2Н), 2.53 (т, 1Н), 2.43 (б(Ьг), 1Н), 2.35 (т, 1Н), 2.27 (т, 1Н), 2.17-2.10 (т, 2Н), 2.02-1.95 (т, 2Н), 1.83 (т, 1Н), 1.68-1.62 (т, 2Н), 1.61-1.52 (т, 2Н), 1.49 (т, 1Н), 1.40 (т, 1Н), 1.29 (б, 3Н), 1.25 (т, 1Н), 1.21 (т, 1Н), 1.15 (б, 3Н), 1.04 (т, 1Н), 0.59 (т, 1Н).

Альтернативный метод для синтезирования.

Пример 2.

с') 153,163-Метиленандроста-4,9(11)-диен-3,17-дион и е') 113-фтор-153,163-метиленандроста-4-ен-

3,17-дион.

0,47 мл 1,8-диазобицикло[5.4.0]ундек-7-ен (1.5-5) было добавлено по капле к 630 мг раствора 11агидрокси-153,163-метиленандрост-4-ен-3,17-диона в 16 мл тетрагидрофурана при 0°С таким образом, что внутренняя температура не превышала 5°С. Смесь затем была перемешана при 0°С в течение 30 мин, 0,55 мл фторида декафторбутан-1-сульфонила были добавлены по капле таким образом, что внутренняя температура не превышала 5°С, и смесь была перемешана при 0°С в течение дополнительных 1,5 ч. Затем это было разбавлено этилацетатом, промыто 2М серной кислоты, насыщенным раствором бикарбоната натрия и воды, высушено через сульфат натрия и выпарено под вакуумом при 40°С. Хроматография на силикагеле после элюирования с гексаном/этилацетатом (1:1) имела своим результатом 15β,16βметиленандроста-4,9(11)-диен-3,17-дион в виде фракции 1.

Ή-ЯМР (600 МГц, СЭС1₃): δ = 5.79(т, 1Н), 5.55 (т, 1Н), 1.85 (т,1Н), 1.65 (т,1Н), 1.37 (8, 3Н), 1.121.33 (2т, 2Н), 1.00 (8, 3Н).

11β-Фτор-15β,16β-меτиленандросτ-4-ен-3,17-дион был извлечен в виде фракции 2. Ή-ЯМР (600 МГц, СЭС1₃): δ = 5.73 (т, 1Н), 5.28 (бф 1Н), 1.395 (б, 3Н), 1.175 (б, 3Н). Пример 3. 6α,7α;15β,16β-Диметилен-11β-фторо-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,17β-карболактон.

0,37 г 6α,7α;15β,16β-диметилен-11β-фторо-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,17β-карболактона было получено как фракция В примера 2.

М8 (ΕΙ): т/ζ = 384 (М');

Ή-ЯМР (600 МГц, СЭС1₃): δ = 5.94 (8, 1Н), 5.08 (б(Ьг), 1Н), 1.35 (8, 3Н), 1.25 (т, 1Н), 1.21 (т, 1Н),

1.20 (б, 3Н), 1.00 (т, 1Н), 0.76 (ббб, 1Н), 0.54 (т, 1Н) 0.48 (т, 1Н).

- 13 017570

Альтернативные методы синтеза примера 1.

1-й вариант.

а) 11α-Гидрокси-3-метокси-15β,16β-метиленандрост-3,5-диен-17-он.

о

3,2 г пиридин тозилата было введено в суспензию 27 г 11α-гидрокси-15β,16β-метиленандрост-4-ен-

3,17-диона в 422 мл 2,2-диметоксипропана. Затем смесь перемешивали при температуре бани 100°С на протяжении 18 ч. Охлаждали до комнатной температуры с последующим добавлением 10 мл триэтиламина и выпаривали в вакууме досуха. Остаток перемешивали с 60 мл метанола и фильтровали с отсасыванием. Было получено 14,3 г 11α-гидрокси-3-метокси-15β,16β-метиленандрост-3,5-диен-17-она.

Ή-ЯМР (400 МГц, С1)С1_;): δ = 5.33 (ά, Ьгоаб, Ι=3.8Ηζ, 1Н), 5.14 (₈, Ьгоаб, 1Н), 4.07 (т, 1Н), 3.58 (₈, 3Н), 1.79 (т, 1Н), 1.13 (₈, 3Н), 1.02 (₈, 3Н).

Ь) 11 а-Гидрокси-3 -метокси-15 β ,16 β-метиленП 7-прегна-3,5 -диен-21,17 β-карболактон.

10,24 г аллилтетраметилфосфородиамидата, растворенного в 13 мл тетрагидрофурана, было добавлено каплями к 66,6 мл 1,6М раствора бутиллития (в гексане) при -50°С. После перемешивания при -20°С на протяжении 30 мин было введено 16 мл Ν,Ν,Ν',Ν'-тетраметилэтандиамина и затем был каплями добавлен раствор 5 г 11α-гидрокси-3-метокси-15β,16β-метиленандрост-3,5-диен-17-она в 33,5 мл тетрагидрофурана. Смесь была нагрета до комнатной температуры и затем перемешивалась на протяжении 30 мин. За этим последовало добавление 25 мл насыщенного водного раствора хлорида аммония и выливание в воду, экстрагирование три раз этилацетатом, промывание водой и соляным раствором до нейтрализации, высушивание над сульфатом натрия и концентрирование в вакууме. Кристаллизация из диизопропилового эфира в результате дает 2,85 г 11α-гидрокси-3-метокси-15β,16β-метилен-17-прегна-3,5-диен21.17(%карболактона.

Ή-ЯМР (400 МГц, С1)С1_;): δ = 5.31 (ά, Ьгоаб, 1=4.0Ш, 1Н), 5.14 (8, Ьгоаб, 1Н), 4.06 (т, 1Н), 3.58 (8, 3Н), 1.14 (8, 3Н), 1.02 (8, 3Н), 0.46 (т, 1Н).

с) 11α-Гидрокси-15β, 16β-меτилен-3-оксо-17-прегна-4,6-диен-21,17β-карболакτон.

14,8 мл 10% концентрации раствора ацетата натрия и 4 г 1,3-дибромо-5,5-диметилгидантоина были последовательно добавлены в порции при 0°С к суспензии 13,5 г 11α-гидрокси-3-метокси-15β,16βметилен-17-прегна-3,5,9(11)-триен-21,17β-карболактона в 144 мл 1-метил-2-пирролидона. Затем смесь перемешивали при 0°С (ледяная баня) на протяжении 0,5 ч и после добавления 4,88 г литий бромида и 4,31 г литий карбоната перемешивали при температуре бани 80°С на протяжении 3 ч. Затем смесь выливали в охлажденный насыщенный водный раствор хлорида натрия и экстрагировали этилацетатом, органическую фазу промывали водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия, высушивали над сульфатом натрия и фильтровали и фильтрат концентрировали досуха. Было получено 12,8 г неочищенного продукта 11α-гидрокси-15β,16β-метилен-3-оксо-17-прегна-4,6-диен-21,17β-карболактона. Образец был хроматографирован на силикагеле со смесью гексана и этилацетата для аналитических целей.

Ή-ЯМР (400 МГц, С1)С1_;): δ = 6.34 (ά, Ьгоаб, 1=9.6Ш, 1Н), 6.20 (ά, Ьгоаб, 1=9.6Ш, 1Н), 5.71 (8, Ьгоаб, 1Н), 4.05 (т, 1Н), 1.95 (т, 1Н), 1.85 (т, 1Н), 1.29 (т, 1Н), 1.25 (8, 3Н), 1.09 (8,3Н), 0.57 (т, 1Н).

ά) 11α-Мезилокси-15β, 16β-меτилен-3-оксо-17-прегна-4,6-диен-21,17β-карболакτон.

- 14 017570

12,8 г 11а-гидрокси-153,163-метилен-3-оксо-17-прегна-4,6-диен-21,173-карболактона было растворено в 113 мл пиридина. Затем каплями было добавлено 10,91 мл метансульфонил хлорида. Смесь перемешивают при комнатной температуре на протяжении 90 мин и выливают в 1,5 л ледяной воды. Перемешивали на протяжении 2 ч с последующей фильтрацией с отсасыванием, и фильтрующий корж был высушен и хроматографирован на силикагеле смесью гексана и этилацетата. Было получено 5,4 г 11амезилокси-15 3,163-метилен-3-оксо-17-прегна-4,6-диен-21,173-карболактона.

Ή-ЯМР (400 МГц, СОС1₃): δ = 6.33 (б, Ьгоаб, Ι=9.6Ηζ, 1Η), 6.23 (б, Ьгоаб, Ι=9.6Ηζ, 1Η), 5.74 (к, Ьгоаб, 1Η), 5.10 (т, 1Η), 3.01 (к, 3Η), 1.56 (т, 1Η), 1.45 (т, 1Η), 1.30 (к, 3Η), 1.14 (к, 3Η), 0.59 (т, 1Η).

е) 153,163-Метилен-3-оксо-17-прегна-4,6,9(11)-триен-21,173-карболактон.

14,8 мл уксусной кислоты, 0,16 мл уксусного ангидрида и 2,44 г ацетата натрия перемешивались при 90°С до тех пор, пока не растворился ацетат натрия. Было добавлено 5,3 г 11а-мезилокси-153,163метилен-3-оксо-17-прегна-4,6-диен-21,173-карболактона к этому раствору. Перемешивали при 100°С на протяжении 5 ч с последующим выливанием в ледяную воду и экстрагированием три раза этилацетатом. Промывание органической фазы водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия и высушивание над сульфатом магния было с последующей фильтрацией и конценрированием фильтрата. Хроматография на силикагеле смесью гексана и этилацетата в результате дает 2,12 г 153,163-метилен-3-оксо-17прегна-4,6,9(11)-триен-21,173-карболактона.

Ή-ЯМР (300 МГц, СОС1₃): δ = 6.36 (б, Ьгоаб, Ι=9.6Ηζ, 1Η), 6.24 (б, Ьгоаб, Ι=9.6Ηζ, 1Η), 5.72 (к, Ьгоаб, 1Η), 5.48 (т, 1Η), 3.09 (б, Ьгоаб, Ι=11.7Ηζ, 1Η), 1.84 (т, 1Η), 1.47 (т, 1Η), 1.38 (т, 1Η), 1.32 (к, 3Η), 1.03 (к, 3Η), 0.59 (т, 1Η).

ί) 63,73;153,163-Диметилен-3-оксо-17-прегна-4,9(11)-диен-21,173-карболактон.

0,09 г гидрида натрия (60% в минеральном масле) было добавлено в порции к раствору 0,52 г иодид триметилсульфоксония в 4 мл сухого ДМСО при комнатной температуре, смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении 2 ч. Затем было введено при 0°С 0,2 г 153,163-метилен-3-оксо-17прегна-4,6,9(11)-триен-21,173-карболактона, и смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении 2,5 ч. Затем смесь перемешивали в 100 мл серной кислоты (8 об.%) и экстрагировали этилацетатом. Органическая фаза была промыта последовательно водой и насыщенным раствором хлорида натрия, высушена над сульфатом натрия и отфильтрована. Концентрация в вакууме и хроматография на силикагеле с элюентом, содержащим этилацетат и гексан, в результате дает 30 мг 63,73;153,163-диметилен-3оксо-17-прегна-4,9(11)-диен-21,173-карболактона.

Для спектроскопических данных, см. пример 1Ь.

2-й вариант.

а) 3-Метокси-153,163-метиленандрост-3,5,9(11)-триен-17-он.

- 15 017570

0,8 г пиридин тозилата было введено в суспензию 6,4 г 153,163-метиленандрост-4,6,9(11)-триен-

3,17-диона в 106 мл 2,2-диметоксипропана. Затем смесь перемешивали при температуре бани 100°С на протяжении 6 ч. Охлаждали до комнатной температуры с последующим добавлением 5 мл пиридина и после 5 мин выпаривали в вакууме досуха. Остаток перемешивали с 130 мл метанола и фильтровали с отсасыванием. Было получено 4,15 г 3-метокси-153,163-метиленандрост-3,5,9(11)-триен-17-она.

’Н-ЯМР (400 МГц, СОС1₃): δ = 5.47 (₈, Ьгоаб, 1Н), 5.33 (₈, Ьгоаб, 1Н), 5.19 (₈, Ьгоаб, 1Н), 3.59 (₈, 3Н), 2.70 (т, 2Н), 2.38 (т, 1Н), 1.83 (т, 1Н), 1.66 (т, 1Н), 1.15 (8, 3Н), 0.99 (8, 3Н).

Ь) 3-Метокси-153,163-метилен-17-прегна-3,5,9(11)-триен-21,173-карболактон.

6,51 г аллилтетраметилфосфородиамидата, растворенного в 11,4 мл тетрагидрофурана, каплями добавляли к 42,2 мл 1,6М раствора бутиллития (в гексане) при -50°С. После перемешивания при -20°С на протяжении 30 мин было введено 10,21 мл Ν,Ν,Ν'Ν'-тетраметилэтандиамина и затем раствор 4,14 г 3метокси-15р,16р-метиленандрост-3,5,9(11)-триен-17-она в 29,4 мл тетрагидрофурана был добавлен каплями. Смесь была нагрета до комнатной температуры и перемешивалась на протяжении 30 мин. За этим последовало добавление 21 мл насыщенного водного раствора хлорида аммония и выливание в воду, экстрагирование трижды этилацетатом, промывание водой и соляным раствором до нейтрализации, высушивание над сульфатом натрия и концентрация в вакууме, после чего началась кристализация. После фильтрации с отсасыванием для удаления остатков растворителя получили 3,14 г 3-метокси-153,163метилен-3,5,9(11)-триен-21,17 β-карболактона.

^!Н-ЯМР (300 МГц, СОС1₃): δ = 5.45 (8, Ьгоаб, 1Н), 5.32 (8, Ьгоаб, 1Н), 5.18 (8, Ьгоаб, 1Н), 3 59 (8, 3Н), 1.15 (8, 3Н), 0.96 (8, 3Н).

с) 153,163-Метилен-3-оксо-17-прегна-4,6,9(11)-триен-21,173-карболактон.

1,7 мл 10% концентрации раствора ацетата натрия и 0,6 г 1,3-дибромо-5,5-диметилгидантоина были последовательно добавлены в порции при 0°С к суспензии 2,2 г 3-метокси-153,163-метилен-17-прегна3,5,9(11)-триен-21,173-карболактона в 35 мл 1-метил-2-пирролидона. Затем смесь смешивали при 0°С (ледяная баня) на протяжении 0,5 ч и после добавления 0,83 г бромида лития и 0,74 г карбоната лития перемешивали при температуре бани 100°С на протяжении 3,5 ч. Затем выливали в ледяную воду/хлорид натрия и осадок отфильтровывали. Хроматография на силикагеле 60 (элюирование смесью гексан/этилацетат 1:1) в результате давала 1,2 г 153,163-метилен-3-оксо-17-прегна-4,6,9(11)-триен-21,173карболактона.

Для спектроскопических данных, сравнить первый вариант е).

б) 63,73;153,163-Диметилен-3-оксо-17-прегна-4,9(11)-диен-21,173-карболактон.

- 16 017570

Для проведения метода и подготовки, см. 1-й вариант ί).

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Прегн-4-ен-21,17-карболактоны общей формулы I в которой

В^6,7 представляет собой а- или β-метилен,

В⁹ представляет собой атом водорода и

В¹¹ представляет собой атом брома, хлора или фтора или

В⁹ и В¹¹ вместе означают связь.
2. Прегн-4-ен-21,17-карболактоны по п.1, отличающиеся тем, что В⁹ расположен в а-позиции.
3. Прегн-4-ен-21,17-карболактоны по п.1, отличающиеся тем, что В¹¹ расположен в β-позиции.
4. Прегн-4-ен-21,17-карболактоны по п.1, отличающиеся тем, что атом галогена В¹¹ представляет собой атом фтора или хлора.
5. Прегн-4-ен-21,17-карболактоны по п.4, отличающиеся тем, что атом галогена В¹¹ представляет собой атом фтора.
6. Соединение по п.1, представляющее собой 6β,7β;15β,16β-диметилен-3-оксо-17-прегна-4,9(11)диен-21,17β-карболактон.
7. Прегн-4-ен-21,17-карболактоны по п.1, выбранные из группы

11β-хлоро-6β,7β;15β,16β-диметилен-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,17β-карболактон, 6β,7β;15β,16β-диметилен-11β-фторо-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,17β-карболактон, 6α,7α;15β,16β-диметилен-11β-фторо-3-оксо-17-прегн-4-ен-21,17β-карболактон.
8. Фармацевтический продукт, содержащий по крайней мере одно соединение общей формулы I по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
9. Фармацевтический продукт по п.8, содержащий 6β,7β;15β,16β-диметилен-3-оксо-17-прегна4,9(11)-диен-21,17β-карболактон.
10. Фармацевтический продукт по п.8, содержащий 6β,7β;15β,16β-диметилен-11β-фторо-3-оксо-17прегн-4-ен-21,17 β-карболактон.
11. Фармацевтический продукт по пп.8, 9 или 10, содержащий дополнительно по крайней мере один эстроген.
12. Фармацевтический продукт по п.11, содержащий этинилэстрадиол.
13. Фармацевтический продукт по п.11, содержащий натуральный эстроген.
14. Фармацевтический продукт по п.13, содержащий эстрадиол.
15. Фармацевтический продукт по п.13, содержащий эстрадиол валерат.
16. Фармацевтический продукт по п.13, содержащий по крайней мере один сопряженный эстроген.
17. 11α-Гидрокси-15β,16β-метиленандрост-4-ен-3,17-дион в качестве промежуточного соединения для получения соединений общей формулы I.
18. Способ получения 11α-гидрокси-15β,16β-метиленандрост-4-ен-3,17-диона, отличающийся тем, что 15β,16β-метиленандрост-4-ен-3,17-дион гидроксилирован в ферментере с микроорганизмами таких видов, как АЬ51б1а §р., Асгетошит 5р., А5сосйу1а 5р., А5регдШи5 5р., ВасШиБ 5р., Веаиуепа 5р., ВойуобЕ ро1б1а 5р., Са1бапотусе5 5р., Са1опес1па 5р., Со11еЮ1пс1шт 5р., Сигуи1апа 5р., Еи5апит 5р., 01ЬЬеге11а 5р., О1оео5ропит 5р., О1отеге11а 5р., Опотоша 5р., Нар1о5роге11а 5р., Небсо51у1ит 5р., Не1тш1йо5рогшт 5р., Ме1аг1п/шт 5р., Мисогар., №дго5рога 5р., В1и/ори5 5р., 8рого1йсйит 5р., 8упсерйа1а5йит 5р. и \Vο^ηο\ν^с^а 5р.
19. Способ согласно п.18, отличающийся тем, что гидроксилирование осуществляется с АЬ51б1а ог

- 17 017570 сЫб18, АЬз1б1а соеги1еа, Асгетошит з!лс1ит, Азсос1у1а с1етайбша, АзрегдШиз аШасеиз, АзрегдШиз аматол, АзрегдШиз £18сйег1, АзрегдШиз Дауиз, АзрегдШиз тайдпик, АзрегдШиз те11еиз, АзрегдШиз тби1апз, АзрегдШиз шдег, АзрегдШиз осйгасеиз, АзрегдШиз уапесо1ог, ВасШиз теда1елит, Веаиуела Ьазз/апа, Веаиуела 1епе11а, Войуоб1р1об1а та1огит, Са1балотусез Гитадо, Са1опес1па бесога, Со11еЮ1пс1шт р1ото1без, СшуШапа 1ипа1а, Ризалит охузролит, Ризалит зо1аш, 61ЬЬеге11а хеае, 61отеге11а стди1а1а, 61оеозролит Ргисйдепит, 61оеозрогшт Ыддепз1апит, 61оеозрогшт как1, 61оеозрогшт 1асДсо1ог, С1оеозролит ойуагит, 61отеге11а £изаго1без, Спотоша стди1а1а, Нар1озроге11а йезрегеб1са, НеШипШозропит зр., НеКсозЛйпп ршГогте, Ме1аг1ихтт ашзорНае, Мисог р1итЬеиз, Мисог зртозиз, Мдтозрога зрИаепса, КЫхориз алЫ/из, КЫхориз соНпП, КЫхориз бе1етаг, К1пхориз _)арошсиз, КЫхориз кахаепз/з, КЫхориз ιηίсгозрогиз, КЫхориз огухае, КЫхориз зйапдйа1епз1з, КЫхориз з1о1опИСг, КЫхориз ίτίίία, 8рого1пс1шт зи1Гигезсепз, 8упсерйа1аз1гит гасетозит, Ао)пою1с1а дгатйиз и Ао)пою1с1а Ыйа.
20. Способ согласно п.19, отличающийся тем, что гидроксилирование осуществляется с АЬз1б1а огсЫб1з (АТСС 6647), Асгетошит зйгсШт (ΝΚΚΒ 5759), Азсоску1а с1етайб1иа (СВ8), АзрегдШиз аШасеиз (АТСС 10060), АзрегдШиз аматол (СВ8), АзрегдШиз Пзскек (АТСС 1020), АзрегдШиз тайдшз (1М1 16061), АзрегдШиз те11еиз (СВ8), АзрегдШиз шбШапз (АТСС 11267), АзрегдШиз шдег (АТСС 9142, АТСС 11394), АзрегдШиз осйгасеиз (ΝΚΚΒ 405, ΝΒΚΒ 410, СВ8 13252, АТСС 46504), АзрегдШиз уапесо1ог (АТСС 10067), ВасШиз теда1елит (АТСС 13368), Веаиуела Ьаззиша (1РО 5838, АТСС 13144, 1РО 4848, СВ8 11025, СВ8 12736, АТСС 7159), Войуоб1р1об1а та1огит (СВ8 13450), Са1бапотусез Гитадо (АТСС 16373), Са1опес1па бесога (АТСС 14767), СшуШапа 1ипа1а (IX 3, ΝΒΚΒ 2380), Ризалит зо1ат (АТСС 12823), Ризалит охузрогит (АТСС 7808), 61ЬЬеге11а хеае (СВ8 4474), 61отеге11а стди1а!а (АТСС 12097, АТСС 10534, СВ8 23849, СВ8 23749, АТСС 16646, 1РО 6459, 1РО 6425, 1РО 6470, АТСС 15093, АТСС 10529, 1РО 5257, АТСС 56596, АТСС 64682), 61отеге11а £изаго1без (АТСС 9552), Спото^а стди1а!а (СВ8 15226), Нар1озроге11а йезрегебюа (СВ8 20837), НейсозМит ртГогте (АТСС 8992), Не1тт1йозройит зр. (ЫККЬ 4671), Ме1аг1ихтт ашзорйае (1РО 5940), Мисог р1итЬеиз (СВ8 29563), Мдгозрога зрйае^^са (АТСС 12772), КЫхориз алЫхиз (АТСС 11145), КЫхориз огухае (АТСС 4858, АТСС 34102, СВ8 32947), КЫхориз з1о1отРег (АТСС 15441), 8уисерйа1азί^ит гасетозит (1РО 4827) и \Уо)по\\'1с1а дгатшз (СВ8 89168).