EA006254B1 - Ингибиторы npy для лечения женской сексуальной дисфункции - Google Patents

Ингибиторы npy для лечения женской сексуальной дисфункции Download PDF

Info

Publication number
EA006254B1
EA006254B1 EA200001043A EA200001043A EA006254B1 EA 006254 B1 EA006254 B1 EA 006254B1 EA 200001043 A EA200001043 A EA 200001043A EA 200001043 A EA200001043 A EA 200001043A EA 006254 B1 EA006254 B1 EA 006254B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
camp
agent
νέυ
νρυ
fsd
Prior art date
Application number
EA200001043A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200001043A3 (ru
EA200001043A2 (ru
Inventor
Грэм Найджел Мо
Кристофер Питер Уэйман
Original Assignee
Пфайзер Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB9926437A external-priority patent/GB9926437D0/en
Priority claimed from GB0004021A external-priority patent/GB0004021D0/en
Priority claimed from GB0013001A external-priority patent/GB0013001D0/en
Priority claimed from GB0016563A external-priority patent/GB0016563D0/en
Priority claimed from GB0017141A external-priority patent/GB0017141D0/en
Application filed by Пфайзер Инк. filed Critical Пфайзер Инк.
Publication of EA200001043A2 publication Critical patent/EA200001043A2/ru
Publication of EA200001043A3 publication Critical patent/EA200001043A3/ru
Publication of EA006254B1 publication Critical patent/EA006254B1/ru

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4402—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof only substituted in position 2, e.g. pheniramine, bisacodyl
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New breeds of animals
    • A01K67/027—New breeds of vertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4015—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. piracetam, ethosuximide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4412—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/02—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for disorders of the vagina
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/12—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for climacteric disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • A61P5/30—Oestrogens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
    • G01N33/5088—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms of vertebrates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/689—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to pregnancy or the gonads
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/107—Rabbit
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value

Abstract

Описан способ лечения женщины, страдающей ЖСД, в частности РПВЖ, при котором вводят И:NPY. Этот И:NPY может быть смешан с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.

Description

Настоящее изобретение относится к применению фармацевтической композиции для лечения женской сексуальной дисфункции (ЖСД), в частности расстройства полового возбуждения у женщины (РПВЖ).
Настоящее изобретение относится также к способу лечения ЖСД, в частности РПВЖ.
Для удобства список сокращений, которые используются в нижеследующем тексте, приведен перед разделом “Формула изобретения”.
Сексуальная реакция у женщин
Фазу возбуждения сексуальной реакции у женщин нелегко отличить от фазы влечения до тех пор, пока не начнутся физиологические изменения во влагалище и клиторе, а также в других половых органах. Половое возбуждение и наслаждение сопровождаются сочетанием сосудистых и нервно-мышечных явлений, которые приводят к переполнению кровью клитора, губ и стенки влагалища, усилению смазывания влагалища и расширению вагинального просвета (Ьеут, 1980; Ойс5сп. 1983; Ьеут, 1991; Ьеут, 1992; 8_)оЬегд, 1992; Уадпег, 1992; 8сЫау1 е! а1., 1995; Мак!ег8 е! а1., 1996; Вегтап е! а1., 1999).
Переполнение кровью влагалища создает условия для транссудации, а этот процесс ответственен за усиление смазывания влагалища. Транссудация делает возможным ток плазмы через эпителий на поверхность влагалища, движущей силой которого является усиленный кровоток в вагинальном капиллярном ложе во время возбужденного состояния. Кроме того, переполнение кровью приводит к увеличению длины влагалища и диаметра просвета, особенно в дистальных 2/3 вагинального канала. Расширение просвета влагалища является следствием сочетания релаксации гладких мышц его стенки и релаксации скелетных мышц дна тазовой полости. Считается, что некоторые сексуальные болевые расстройства, такие как вагинизм, по меньшей мере, частично являются следствием неадекватной релаксации, препятствующей расширению влагалища; предстоит еще выяснить, является ли это в первую очередь проблемой гладких или скелетных мышц (Ьеу1п, 1980; О!!екеп, 1983; Ьеу1п, 1991; Ьеу1п, 1992; 8_)оЬегд, 1992; Уадпег, 1992; 8сЫау1 е! а1., 1995; Мак!ег8 е! а1., 1996; Вегтап е! а1., 1999).
Сосудистая и микрососудистая сеть влагалища иннервируется нервами, содержащими нейропептиды, а также другие нейромедиаторы-кандидаты. Они включают в себя родственный гену кальцитонина пептид (ССКР), нейропептид Υ (ΝΡΥ), синтазу оксида азота (N08), вещество Р и вазоактивный интестинальный пептид (УГР) (Ноу1е е! а1., 1996). Пептиды, которые присутствуют в клиторе, обсуждаются ниже. Синтаза оксида азота, которая часто локализована вместе с УГР, иммунологически проявляет более сильную экспрессию в глубоких артериях и венах, чем в кровеносных сосудах проприо (Ноу1е е! а1., 1996).
Женская сексуальная дисфункция
Известно, что некоторые индивидуумы могут страдать женской сексуальной дисфункцией (ЖСД).
ЖСД лучше всего определить как затруднение или неспособность женщины получить удовлетворение в сексуальном выражении. ЖСД является собирательным термином для нескольких разных сексуальных расстройств у женщин (Ье1Ь1ит, 1998, Вегтап е! а1., 1999). У женщины может отсутствовать влечение, могут быть затруднения с возбуждением или оргазмом, боль при половом сношении или сочетание этих проблем. Некоторые типы заболеваний, лекарственные средства, повреждения или психологические проблемы могут вызвать ЖСД.
Исследования, изучающие сексуальную дисфункцию у пар, показывают, что вплоть до 76% женщин имеют жалобы на сексуальную дисфункцию, и что 30-50% женщин в США испытывают ЖСД.
Подтипы ЖСД включают в себя расстройство гипоактивного полового влечения, расстройство полового возбуждения у женщин, оргазмическое расстройство и расстройство полового влечения.
Разрабатываемые терапии направлены на лечение конкретных подтипов ЖСД, преимущественно расстройств влечения и возбуждения.
Категории ЖСД лучше всего определять, противопоставляя их фазам нормальной сексуальной реакции у женщин: влечения, возбуждения и оргазма (Ье1Ь1ит, 1998). Половое влечение, или либидо, является двигателем полового выражения, и его проявления часто включают в себя сексуальные мысли либо в обществе заинтересованного партнера, либо под воздействием других эротических стимулов. В противоположность этому, возбуждение представляет собой сосудистую реакцию на половую стимуляцию, важным компонентом которой является смазывание влагалища и растяжение влагалища. Таким образом, половое возбуждение, в противоположность половому влечению, представляет собой реакцию, относящуюся к генитальному (например вагинальному и клиторному) кровотоку и не обязательно к чувствительности. Оргазм представляет собой высвобождение полового напряжения, которое достигает кульминации во время возбуждения. Следовательно, ЖСД обычно возникает, когда женщина проявляет неадекватную или неудовлетворительную реакцию в любой из этих фаз, обычно в фазе влечения, возбуждения или оргазма. Категории ЖСД включают в себя расстройство гипоактивного полового влечения, расстройство полового возбуждения, оргазмическое расстройство и сексуальные болевые расстройства.
Расстройство гипоактивного полового влечения имеет место, если женщина не имеет или имеет слабое желание быть сексуальной, либо не имеет или имеет мало сексуальных мыслей или фантазий. Причиной этого типа ЖСД может быть низкий уровень тестостерона вследствие либо естественной ме
- 1 006254 нопаузы, либо хирургической менопаузы. Другими причинами являются болезнь, лекарственные средства, утомление, депрессия и тревога.
Расстройство полового возбуждения у женщин (РПВЖ) характеризуется неадекватной генитальной реакцией на половую стимуляцию. Гениталии (например влагалище и/или клитор) не подвергаются переполнению кровью, которое характеризует нормальное половое возбуждение. Стенки влагалища недостаточно смазываются, вследствие чего половое сношение становится болезненным. Это может служить препятствием наступлению оргазма. Расстройство возбуждения может быть вызвано снижением эстрогена при менопаузе или после родов и в период лактации, а также болезнями с сосудистыми компонентами, такими как диабет и атеросклероз. Другие причины проистекают от лечения диуретиками, антигистаминами, антидепрессантами, например 88К1§, или антигипертензивными агентами. РПВЖ более детально обсуждается ниже.
Сексуальные болевые расстройства (которые включают в себя диспареунию и вагинизм) характеризуются болью в результате проникания и могут быть вызваны лекарственными средствами, которые ослабляют смазывание, эндометриозом, воспалением органов в области таза, воспалительным кишечным заболеванием или проблемами мочевого тракта.
Распространенность ЖСД трудно оценить, поскольку этот термин охватывает несколько типов проблемы, некоторые из которых трудно определить, а также в связи с тем, что интерес в лечении ЖСД является относительно недавним. Многие сексуальные проблемы у женщин связаны либо непосредственно с процессом старения женщины, либо с хроническими заболеваниями, такими как диабеты и гипертензия.
В сообщениях о встречаемости и распространенности ЖСД имеются большие расхождения, которые отчасти объясняются использованием различных критериев оценки, однако большинство исследователей сообщают о том, что значительная доля здоровых в других отношениях женщин имеет симптомы одной или более чем одной подгруппы ЖСД. Например, сравнительные исследования сексуальной дисфункции у пар, показали, что 63% женщин имеют дисфункцию возбуждения или оргазмическую дисфункцию по сравнению с 40% мужчин с эректильной или эякуляторной дисфункцией (Р1апк с1 а1., 1978).
Однако распространенность расстройства полового возбуждения у женщин значительно варьирует от обследования к обследованию. По данным недавнего Отчета об обследовании национального здоровья и социальной жизни 19% женщин сообщили о затруднениях со смазыванием, а в амбулаторной гинекологической клинике о подобных затруднениях со смазыванием сообщили 14% женщин (Кокеп с1 а1., 1993).
Некоторые исследования выявили также дисфункцию полового возбуждения у женщин-диабетиков (вплоть до 47%), и это включало ослабление смазывания влагалища (ХУшсхе е1 а1., 1993). Связь между невропатией и сексуальной дисфункцией отсутствовала.
Многочисленные исследования показали также, что от 11 до 48% всех женщин могут иметь возрастное снижение полового влечения. Также от 11 до 50% женщин сообщают о проблемах с возбуждением и смазыванием и вследствие этого испытывают боль при половом акте. Вагинизм намного менее распространен, поражая примерно 1% женщин.
Исследования сексуально опытных женщин показали, что 5-10% имеют первичную аноргазмию. Другие 10% имеют нечастые оргазмы, а еще 10% испытывают их несогласованно (8рес1ог е1 а1., 1990).
Поскольку ЖСД состоит из нескольких подтипов, при которых симптомы проявляются в отдельных фазах цикла сексуальной реакции, единой терапии не существует. Современная терапия ЖСД фокусируется главным образом на психологических вопросах и вопросах взаимоотношений. Терапия ЖСД постепенно развивается, поскольку все больше клинических и фундаментальных исследований посвящается изучению данной медицинской проблемы. Жалобы женщин на сексуальные расстройства не являются полностью психологическими по патофизиологии, особенно для тех индивидуумов, которые могут иметь компонент дисфункции сосудистого генеза (например РПВЖ), влияющий на общую жалобу женщины на сексуальное расстройство. В настоящее время не существует лекарств, разрешенных для лечения ЖСД. Эмпирическая лекарственная терапия включает в себя введение эстрогена (местно или в виде гормонозаместительной терапии), андрогенов или лекарств, влияющих на настроение, такие как буспирон или тразодон. Эти возможные варианты лечения часто являются неудовлетворительным из-за низкой эффективности или неприемлемых побочных эффектов.
Поскольку интерес к фармакологическому лечению ЖСД является относительно недавним, терапия состоит из следующего: психологическое консультирование, половые смазывающие средства, продаваемые без рецепта, и кандидаты для исследований, в том числе лекарственные средства, одобренные для других состояний. Эти лекарственные средства включают в себя гормональные агенты, либо тестостерон, либо комбинации эстрогена и тестостерона, а с недавнего времени сосудистые лекарства, эффективность которых доказана при эректильной дисфункции у мужчин. Ни для одного их этих агентов не было продемонстрировано высокой эффективности при лечении ЖСД.
Расстройство полового возбуждения у женщин (РПВЖ)
Реакция полового возбуждения включает в себя прилив крови в область таза, смазывание влагалища и растяжение и набухание наружных половых органов. Нарушение вызывает заметный дистресс
- 2 006254 и/или межличностные трудности. Исследования, изучающие сексуальную дисфункцию у пар, показывают, что существует большое число женщин, которые страдают дисфункцией полового возбуждения, иначе известной как расстройство полового возбуждения у женщин (РПВЖ).
Руководство по диагностике и статистике (Ό8Μ) IV Американской ассоциации психиатров определяет расстройство полового возбуждения у женщин (РПВЖ) следующим образом: «устойчивая или повторяющаяся неспособность достигать или поддерживать адекватную реакцию смазывания-набухания при половом возбуждении до завершения половой активности. Это нарушение может вызывать заметный дистресс или межличностные трудности».
РПВЖ является широко распространенным сексуальным расстройством, поражающим женщин в период пред-, пери- и постменопаузы (±НК.Т). Оно связано с сопутствующими расстройствами, такими как депрессия, сердечно-сосудистые заболевания, диабеты и урогенитальные (УГ) расстройства.
Первичными последствиями РПВЖ являются недостаточность переполнения кровью/набухания, недостаточность смазывания и отсутствие ощущения удовольствия в гениталиях. Вторичными последствиями РПВЖ являются снижение полового влечения, боль во время полового сношения, затруднение в достижении оргазма.
Недавно была выдвинута гипотеза, что симптомы РПВЖ по меньшей мере у части пациентов имеют сосудистую основу (Οοΐάδίοίη е! а1., 1998), и данные на животных подкрепляют эту точку зрения (Рагк е! а1., 1997).
Лекарственными средствами-кандидатами для лечения РПВЖ, которые находятся в стадии исследований на эффективность, являются, прежде всего, терапии эректильной дисфункции, которые способствуют кровообращению в мужских гениталиях. Они включают в себя два типа препаратов - пероральные или сублингвальные лекарственные средства (Апоморфин, Фентоламин, Силденафила) и простагландин (ПГЕ1 - Альпростадил), который инъецируют или вводят трансуретрально мужчинам и местно в гениталии женщинам.
Настоящее изобретение направлено на создание эффективных средств лечения ЖСД, и в частности РПВЖ.
Краткое изложение аспектов настоящего изобретения
Основополагающим открытием настоящего изобретения является возможность лечить женщину, страдающую ЖСД (предпочтительно РПВЖ), с использованием агента, который представляет собой ΉΝΡΥ.
В соответствии с настоящим изобретением на И:кР¥ по настоящему изобретению ссылаются как на «агент по настоящему изобретению».
Агент по настоящему изобретению (то есть И:кР¥) можно использовать также в комбинации с одним или более чем одним дополнительным фармацевтически активным агентом. На дополнительный фармацевтически активный агент, если он присутствует или используется в комбинации с агентом по настоящему изобретению, может быть ссылка как на «дополнительный агент». Один или более чем один из этих дополнительных агентов может представлять собой один или более чем один из следующих: И:ФДЭ, И:НЭП, другой Η:ΝΡΥ. Комбинации агентов более детально обсуждаются ниже.
Если дополнительный агент по настоящему изобретению представляет собой И:ФДЭ, то для некоторых воплощений указанная ФДЭ представляет собой ФДЭ, гидролизующую цАМФ (и возможно гидролизующую цГМФ). Термин «гидролизующая цАМФ» включает в себя также метаболизм и/или разрушение цАМФ. Термин «гидролизующая цАМФ (и возможно цГМФ)» означает, что этот дополнительный агент может быть способен гидролизовать цГМФ в дополнение к цАМФ. Здесь термин «гидролизующая цГМФ» также включает в себя метаболизм и/или разрушение цГМФ. Однако относительно некоторых воплощений настоящего изобретения следует иметь в виду, что дополнительный агент по настоящему изобретению не обязательно должен быть способен гидролизовать цГМФ.
Здесь общие ссылки на агенты могут применяться к дополнительным агентам, так же как и к агентам по настоящему изобретению.
В соответствии с настоящим изобретением агент по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) действует на мишень, предпочтительно специфично на определенную мишень. На эту мишень иногда дается ссылка как на «мишень по настоящему изобретению». Однако агент по настоящему изобретению может действовать на одну или более чем одну другую мишень. На эти другие мишени могут быть ссылки как на «дополнительную мишень». Также, если используют дополнительный агент, то действие этого дополнительного агента может быть направлено на ту же самую мишень по настоящему изобретению и/или на дополнительную мишень (которая не обязательно должна представлять собой ту же самую дополнительную мишень, на которую действует этот агент по настоящему изобретению). Мишени описаны в данном описании изобретения. Следует иметь в виду, что в данном описании изобретения общие ссылки на мишени могут применяться к дополнительным мишеням, так же как и к мишени по настоящему изобретению.
Следующим основополагающим открытием настоящего изобретения является возможность усиливать генитальный (например вагинальный или клиторный) кровоток у женщин с использованием агента по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ).
- 3 006254
В своих экспериментах авторы изобретения обнаружили, что РПВЖ связано с ослаблением генитального кровотока, в частности с ослаблением кровотока во влагалище и/или клиторе. Следовательно, лечение женщин с РПВЖ может быть достигнуто путем усиления генитального кровотока вазоактивными агентами. В своих исследованиях авторы изобретения выявили, что цАМФ опосредует вагинальную и клиторную вазорелаксацию, и что генитальный (например вагинальный и клиторный) кровоток можно усилить/потенцировать посредством повышения уровней цАМФ. Это еще одно основополагающее открытие.
В этом отношении никто ранее не предполагал, что РПВЖ можно лечить таким образом, то есть прямым или косвенным повышением уровней цАМФ. Более того, в данной области техники не существует теорий, которые позволяют предположить, что РПВЖ связано с негативной модуляцией активности и/или уровней цАМФ или что цАМФ ответственен за опосредование вагинальной и клиторной вазорелаксации. Поэтому настоящее изобретение является еще более неожиданным.
Кроме того, авторы изобретения обнаружили, что, применяя агенты по настоящему изобретению, можно усилить переполнение кровью гениталий и лечить РПВЖ - например, усилить смазывание во влагалище и повысить чувствительность во влагалище и клиторе.
Таким образом, в широком аспекте настоящее изобретение относится к использованию потенциатора цАМФ, для лечения ЖСД, в частности РПВЖ.
Настоящее изобретение имеет преимущество в том, что создает средства для восстановления нормальной реакции полового возбуждения, а именно: усиления генитального кровотока, приводящего к переполнению кровью влагалища, клитора и губ. Это приводит к усилению вагинального смазывания посредством транссудации плазмы, повышению вагинальной податливости и повышению генитальной (например вагинальной и клиторной) чувствительности. Следовательно, согласно настоящему изобретению предложены средства для восстановления или потенцирования нормальной реакции полового возбуждения.
Подробное описание аспектов настоящего изобретения
В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению фармацевтической композиции, содержащей ингибитор нейропептида Υ (Π:ΝΡΥ), способный потенцировать циклический аденозин-3',5'монофосфат (цАМФ) в гениталиях женщины, страдающей женской сексуальной дисфункцией (ЖСД), и возможно фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент, в качестве средства для лечения ЖСД. Здесь эта композиция (подобно любой другой композиции, упомянутой здесь) может быть упакована для последующего применения в лечении ЖСД, в частности РПВЖ.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению Π:ΝΡΥ в изготовлении лекарства (такого как фармацевтическая композиция) для лечения ЖСД, в частности ЖСД.
В следующем аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения женщины, страдающей ЖСД, в частности РПВЖ, при котором вводят Π:ΝΡΥ, который способен потенцировать цАМФ в гениталиях женщины, в таком количестве, чтобы вызвать потенцирование цАМФ в гениталиях этой женщины; при этом указанный Π:ΝΡΥ возможно смешан с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.
Предложен также способ анализа для идентификации агента, который можно использовать для лечения ЖСД, в частности РПВЖ, при котором определяют, может ли этот агент прямо или косвенно потенцировать цАМФ; при этом потенцирование цАМФ в присутствии этого агента является показателем того, что этот агент может быть полезен в лечении ЖСД, в частности РПВЖ; и при этом указанный агент представляет собой Π:ΝΡΥ.
В качестве примера, способ анализа для идентификации агента, который может прямо или косвенно потенцировать цАМФ, чтобы лечить ЖСД, в частности РПВЖ, при котором агент приводят в контакт с компонентом, способным воздействовать на активность и/или уровни цАМФ, и измеряют активность и/или уровни цАМФ; при этом потенцирование цАМФ в присутствии этого агента является показателем того, что этот агент может быть полезен в лечении ЖСД, в частности РПВЖ; и при этом указанный агент представляет собой Π:ΝΡΥ.
В качестве еще одного примера, способ анализа для идентификации агента, который может прямо или косвенно потенцировать цАМФ для того, чтобы лечить ЖСД, в частности РПВЖ, при котором агент приводят в контакт с цАМФ и измеряют активность цАМФ; при этом потенцирование цАМФ в присутствии этого агента является показателем того, что этот агент может быть полезен в лечении ЖСД, в частности РПВЖ; и при этом указанный агент представляет собой Π:ΝΡΥ.
Предложен способ, включающий в себя стадии, на которых: (а) осуществляют анализ, как описано здесь; (б) идентифицируют один или более чем один агент, который может прямо или косвенно потенцировать активность цАМФ; и (в) получают некое количество одного или более чем одного идентифицированного агента; и где указанный агент представляет собой Π:ΝΡΥ.
Согласно этому аспекту агент, идентифицированный на стадии (б), может быть модифицирован таким образом, чтобы, например, максимизировать активность, а затем стадию (а) можно повторить. Эти стадии можно повторять до тех пор, пока желаемая активность или фармакокинетический профиль не будут достигнуты.
- 4 006254
Таким образом, предложен также способ, включающий в себя стадии, на которых: (а1) осуществляют анализ, как описано здесь; (б1) идентифицируют один или более чем один агент, который может прямо или косвенно потенцировать активность цАМФ; (б2) модифицируют один или более чем один указанный идентифицированный агент; (а2) возможно повторяют стадию (а1); и (в) получают некое количество одного или более чем одного идентифицированного агента (то есть тех, которые были модифицированы); и где указанный агент представляет собой Η:ΝΡΥ.
Предложен также способ лечения ЖСД, в частности РПВЖ, путем потенцирования цАМФ с использованием агента ίη νίνο; где этот агент способен прямо или косвенно потенцировать цАМФ при способе анализа ίη νίίτο; где этот способ анализа ίη νίίτο представляет собой способ анализа, как он описан здесь; и где указанный агент представляет собой Π:ΝΡΥ.
Предложено также применение агента в приготовлении фармацевтической композиции для лечения ЖСД, в частности РПВЖ; где этот агент способен потенцировать цАМФ прямо или косвенно при анализе ίη νίίτο способом анализа, как описано здесь; и где указанный агент представляет собой Π:ΝΡΥ.
В следующем аспекте настоящее изобретение относится к применению животной модели, включающей в себя анестезированную самку животного вместе со средствами для измерения изменений генитального кровотока у указанного животного после стимуляции его тазового нерва и средства для стимуляции тазового нерва, для идентификации Π:ΝΡΥ, способного лечить ЖСД.
Предложен также способ анализа для идентификации агента, который может прямо или косвенно потенцировать цАМФ для того, чтобы лечить РПВЖ, при котором агент вводят животной модели, как описано здесь, и измеряют любое потенцирование цАМФ и/или усиление кровотока во влагалище и/или клиторе указанного животного; и где указанный агент представляет собой Π:ΝΡΥ.
В следующем аспекте настоящее изобретение относится к способу диагностики ЖСД у женщины, при котором определяют, содержит ли образец, взятый из гениталий женщины или их секрета, ΝΡΥ, который оказывает прямое или косвенное воздействие на уровень или активность цАМФ в гениталиях этой женщины, и присутствует ли он в количестве, которое может вызывать ЖСД, и который может быть модулирован для достижения благоприятного эффекта посредством использования Π:ΝΡΥ, который лечит ЖСД.
В следующем аспекте настоящее изобретение относится к диагностическому набору для диагностики ЖСД у женщины, содержащему средства для обнаружения ΝΡΥ в образце, взятом из гениталий женщины или их секрета, и определения количества указанного ΝΡΥ, средства для определения уровня или активности цАМФ и средства для определения достижения благоприятного эффекта посредством использования Π:ΝΡΥ, который лечит ЖСД.
Для удобства эти и последующие аспекты настоящего изобретения теперь обсуждаются под соответствующими заголовками разделов. Однако то, что указано в каждом разделе не обязательно ограничивается содержанием каждого конкретного раздела.
Предпочтительные аспекты
Агент по настоящему изобретению (то есть И: ΝΡΥ) предпочтительно представляет собой агент для лечения РПВЖ.
Агент по настоящему изобретению (то есть ΚΝΡΥ) предпочтительно представляет собой медиатор генитальной (например вагинальной или клиторной) вазорелаксации у женщин.
В одном воплощении агент по настоящему изобретению (то есть ΚΝΡΥ) предпочтительно представляет собой агент для перорального введения.
В другом воплощении агент по настоящему изобретению (то есть ΚΝΡΥ) может быть агентом для местного введения.
Предпочтительно, агент по настоящему изобретению представляет собой антагонист.
Агент по настоящему изобретению представляет собой ΚΝΡΥ (иногда пишут как ΝΡΥ1).
Для некоторых применений агент предпочтительно представляет собой ^ΝΡΥ Υ1, или ΚΝΡΥ Υ2, или ^ΝΡΥ Υ5, более предпочтительно агент представляет собой ΚΝΡΥ Υ1.
Предпочтительно агент представляет собой избирательный ΚΝΡΥ. Предпочтительно агент представляет собой ΚΝΡΥ Υ1. Предпочтительно агент представляет собой избирательный Η:ΝΡΥ Υ1. Для некоторых применений агент по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) можно вводить в комбинации с другим фармацевтически активным агентом. Здесь это совместное введение нет необходимости делать одновременно, не говоря уже об одинаковом пути. Примером совместно вводимой композиции может быть композиция, которая содержит агент по настоящему изобретению (то есть ΚΝΡΥ) и дополнительный агент, причем этот дополнительный агент может оказывать прямое потенцирующее воздействие на цАМФ. Примеры комбинаций обсуждаются ниже.
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно имеет косвенное потенцирующее воздействие на цАМФ. Примеры таких дополнительных агентов включают в себя И:НЭП и/или ΚΝΡΥ. В альтернативном выражении для некоторых применений этот дополнительный агент предпочтительно не оказывает прямого потенцирующего воздействия на цАМФ. Очевидно, что этот агент может оказывать косвенное потенцирующее воздействие на цАМФ, действуя на естественные и естественно
- 5 006254 локализованные прямо действующие агенты - такие как естественный и естественно локализованный νιρ.
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно оказывает прямое потенцирующее воздействие на цАМФ. Примеры таких дополнительных агентов включают в себя И:ФДЭ.
Для некоторых применений дополнительный агент представляет собой ингибитор, то есть он способен проявлять ингибиторную функцию.
Для некоторых применений дополнительный агент представляет собой антагонист.
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно представляет собой И: ФДЭ (иногда пишут как ФДЭ1).
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно представляет собой избирательный И: ФДЭ.
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно представляет собой И:ФДЭ1 или И:ФДЭ2 (иногда пишут как И:ФДЭ11, или ФДЭ111, или ФДЭ21), или И:ФДЭ3, или И:ФДЭ4, или И:ФДЭ7, или И:ФДЭ8, более предпочтительно этот агент представляет собой И:ФДЭ2.
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно представляет собой избирательный И:ФДЭ11.
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно представляет собой И:НЭП (иногда пишут как НЭП1).
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно представляет собой избирательный И: НЭП.
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно представляет собой И: НЭП, где указанный НЭП представляет собой ЕС 3.4.24.11.
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно представляет собой избирательный И:НЭП, где указанный НЭП представляет собой ЕС 3.4.24.11.
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно представляет собой Η:ΝΡΥ (иногда пишут как ΝΡΥ).
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно представляет собой Η:ΝΡΥ Υ1, или Η:ΝΡΥ Υ2, или Η:ΝΡΥ Υ5, более предпочтительно этот агент представляет собой Η:ΝΡΥ Υ1.
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно представляет собой избирательный Η:ΝΡΥ.
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно представляет собой Η:ΝΡΥ Υ1.
Для некоторых применений дополнительный агент предпочтительно представляет собой избирательный И:ΝΡΥ Υ1.
Для некоторых применений агент не вызывает - либо его вводят таким образом, что он не вызывает - продолжительного падения кровяного давления (например в течение периода примерно 5 мин или более). В данном воплощении, если агент нужно вводить местно, то этот агент может быть способным вызывать падение кровяного давления (как, например, если бы его вводили внутривенно), при условии что при местном введении минимальные уровни агента проходят в кровяное русло. Для перорального агента предпочтительно, чтобы этот агент не вызывал продолжительного падения кровяного давления.
В предпочтительном аспекте агент по настоящему изобретению (то естьИ:NΡΥ) не вызывает - или его вводят таким образом, что он не вызывает - большого изменения частоты сердечных сокращений.
Лечение
Следует иметь в виду, что в данном описании изобретения все ссылки на лечение включают в себя одно или более чем одно из следующего: лечебную, паллиативную и профилактическую терапию. Предпочтительно термин лечение включает в себя по меньшей мере лечебную терапию и/или паллиативную терапию.
Женские гениталии
Термин «женские гениталии» используется в соответствии с определением, которое дано в Стау'к А паю ту, С.Э.С1етеп1е. 13г11 Атепсаи Εάίΐίοη: «Генитальные органы включают в себя внутреннюю и наружную группу. Внутренние органы расположены в пределах таза и включают в себя яичники, маточные трубы, матку и влагалище. Наружные органы являются поверхностными и расположены против урогенитальной диафрагмы и внизу тазового свода. Они включают в себя лобок, большие губы и малые губы, клитор, преддверие, луковицу преддверия и большие железы преддверия».
Эндогенный цАМФ
В особенно предпочтительном воплощении агент по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) потенцирует эндогенный цАМФ, например потенцирует уровни эндогенного цАМФ.
Здесь термин «эндогенный цАМФ» означает цАМФ, который является результатом половой стимуляции (полового возбуждения). Следовательно, этот термин не охватывает уровни цАМФ, которые повышаются независимо от полового влечения.
Таким образом, согласно настоящему изобретению лечение РПВЖ достигается посредством прямого или косвенного потенцирования эндогенной цАМФ сигнализации, что, в свою очередь, усиливает ва
- 6 006254 гинальный кровоток/смазывание и/или клиторный кровоток, тем самым усиливая естественную реакцию полового возбуждения. Таким образом, способ лечения по настоящему изобретению восстанавливает или потенцирует нормальную реакцию возбуждения.
При способе лечения по настоящему изобретению этого результата можно достичь, используя антагонист рецептора ΝΡΥ.
Здесь предложена животная модель испытаний. Эту животную модель испытаний можно использовать для определения усиления генитального кровотока в результате потенцирования цАМФ. В этой животной модели стимулируют тазовый нерв, что вызывает эффект, который имитирует физиологию полового возбуждения/реакции. В этих экспериментах агенты по настоящему изобретению (то есть Π:ΝΡΥ) вызывают усиление кровотока выше контрольного усиления после того, как этот нерв был стимулирован. В отсутствие стимуляции эти агенты не обладают эффектом (или обладают пренебрежимо малым эффектом) вызывать усиление кровотока. Обычно в этих экспериментах нерв стимулируют, чтобы получить базисное усиление кровотока. Затем агент-кандидат (или реальный агент) дают животному системно или местно, например внутривенным, местным или пероральным путем. Усиление кровотока выше контрольного усиления, следовательно, является показателем агента по настоящему изобретению (то есть Π:ΝΡΥ).
Половая стимуляция
Настоящее изобретение также охватывает введение агента по настоящему изобретению (то есть Π:ΝΡΥ) до и/или во время половой стимуляции. Здесь термин «половая стимуляция» может быть синонимом термину «половое возбуждение». Данный аспект настоящего изобретения создает преимущество, поскольку он обеспечивает системную избирательность. Естественный каскад происходит только в гениталиях, а не в других локализациях, например в сердце и т.д. Следовательно, достижение избирательного воздействия на гениталии будет возможно.
Таким образом, в некоторых аспектах настоящего изобретения чрезвычайно желательно, чтобы имела место стадия половой стимуляции. Авторы изобретения обнаружили, что эта стадия может обеспечить системную избирательность. Здесь «половая стимуляция» может представлять собой одно или более чем одно из следующего: визуальная стимуляция, физическая стимуляция, звуковая стимуляция или мысленная стимуляция.
Таким образом, агенты по настоящему изобретению (то есть Π:ΝΡΥ) предпочтительно вводят до или во время половой стимуляции, особенно когда эти агенты предназначены для перорального введения.
Следовательно, в этом предпочтительном аспекте согласно настоящему изобретению предложено применение агента по настоящему изобретению (то есть Π:ΝΡΥ) в изготовлении лекарства для лечения РПВЖ; где этот агент способен потенцировать цАМФ в сексуальных гениталиях женщины, страдающей РПВЖ; и где указанная женщина подвергается половой стимуляции до или во время введения указанного лекарства.
Предпочтительно, согласно настоящему изобретению предложено применение агента по настоящему изобретению (то есть Π:ΝΡΥ) в изготовлении лекарства для лечения РПВЖ; где этот агент способен потенцировать цАМФ в сексуальных гениталиях женщины, страдающей РПВЖ; где указанная женщина подвергается половой стимуляции до или во время введения указанного лекарства; и где указанное лекарство вводят указанной женщине перорально.
Кроме того, в этом предпочтительном аспекте согласно настоящему изобретению предложен способ лечения женщины, страдающей РПВЖ, при котором этой женщине вводят агент по настоящему изобретению (то есть Π:ΝΡΥ), который способен потенцировать цАМФ в сексуальных гениталиях, причем в таком количестве, чтобы вызвать потенцирование цАМФ в сексуальных гениталиях этой женщины; при этом агент возможно смешан с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом; и при этом указанная женщина подвергается половой стимуляции до или во время введения указанного агента.
Предпочтительно, согласно настоящему изобретению предложен способ лечения женщины, страдающей РПВЖ, при котором этой женщине вводят агент по настоящему изобретению (то есть Π:ΝΡΥ), который способен потенцировать цАМФ в сексуальных гениталиях, причем в таком количестве, чтобы вызвать потенцирование цАМФ в сексуальных гениталиях этой женщины; при этом агент возможно смешан с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом; при этом указанная женщина подвергается половой стимуляции до или во время введения указанного агента; и при этом указанный агент вводят указанной женщине перорально.
Потенцирование цАМФ
При использовании здесь со ссылкой на цАМФ термин «потенцирование» включает в себя одно или более чем одно из следующего: повышение эффективности цАМФ, повышение уровней цАМФ, повышение активности цАМФ, снижение уровня расщепления цАМФ, снижение уровня ингибирования цАМФ.
Потенцирующий эффект может быть прямым эффектом. Примером прямого эффекта может быть положительная регуляция уровней цАМФ агентом, который повышает его экспрессию.
- 7 006254
Альтернативно, потенцирующий эффект может быть косвенным эффектом. Примером такого эффекта может быть действие на вещество, которое в противном случае ингибировало бы и/или снижало уровни и/или активность цАМФ. Другим примером такого эффекта может быть усиление действия вещества, которое повышает эффективность цАМФ, повышает уровни цАМФ, повышает активность цАМФ, снижает уровень расщепления цАМФ или снижает уровень ингибирования цАМФ.
Примером ПцАМФ может быть И:ФДЭ, такой как И:ФДЭ11.
Миметик цАМФ
В некоторых аспектах настоящего изобретения дополнительный агент может действовать как миметик цАМФ.
Используемый здесь термин «миметик цАМФ» означает агент, который может действовать подобно цАМФ (например, иметь подобный биологический профиль и эффект) в сексуальных гениталиях женщины и при этом оказывает одно или более чем одно из следующих действий: повышает эффективность цАМФ-подобных компонентов, повышает уровни цАМФ-подобных компонентов, повышает активность цАМФ-подобных компонентов, снижает уровень расщепления цАМФ-подобных компонентов, снижает уровень ингибирования цАМФ-подобных компонентов.
Примером миметика цАМФ может быть форсколин. Теперь авторы изобретения обнаружили, что форсколин повышает вагинальный и клиторный кровоток и может действовать также в качестве вагинального релаксанта.
В предпочтительном аспекте миметик цАМФ вводят перорально.
Активатор цАМФ
Используемый здесь термин «активатор цАМФ» означает вещество, которое контролирует или высвобождает цАМФ в сексуальных гениталиях женщины. Этот контроль может быть прямым (например направленным на сам цАМФ) или косвенным (например через активацию цАМФ). Для удобства авторы изобретения ссылаются на эти вещества как на АцАМФ.
Мишень
Термин «мишень», используемый здесь со ссылкой на настоящее изобретение, означает любое вещество, которое представляет собой цАМФ, АцАМФ, ИцАМФ или НМцАМФ. Иначе выражаясь, на мишень, как используется здесь, может быть ссылка как на мишень ПцАМФ.
Мишень, как она описана здесь, и/или дополнительная мишень может представлять собой аминокислотную последовательность и/или нуклеотидную последовательность, кодирующую ее, и/или единицу экспрессии, ответственную за ее экспрессию, и/или ее модулятор.
Мишень может представлять собой также комбинацию таких мишеней.
Агент
Агент по настоящему изобретению представляет собой И:КР¥.
Агент по настоящему изобретению может представлять собой любой подходящий агент, который может действовать как ПцАМФ.
Агент (то есть агент по настоящему изобретению и/или дополнительный агент) может представлять собой аминокислотную последовательность или ее химическое производное. Это вещество может также представлять собой органическое соединение или другое химическое вещество. Агент может также представлять собой нуклеотидную последовательность, которая может быть смысловой последовательностью или антисмысловой последовательностью. Агент может также представлять собой антитело.
Таким образом, термин «агент» включает в себя, но не ограничивается им, соединение, которое может быть получено из любого подходящего источника или синтезировано с помощью любого подходящего источника, как природного, так и неприродного.
Агент может быть сконструирован или получен из библиотеки соединений, которые могут включать в себя пептиды, а также другие соединения, такие как небольшие органические молекулы, такие как соединения свинца.
В качестве примера, агент может представлять собой природное вещество, биологическую макромолекулу или экстракт, изготовленный из биологических материалов, таких как бактерии, грибы, либо клетки или ткани животных (в частности млекопитающих), органическую или неорганическую молекулу, синтетический агент, полусинтетический агент, структурный или функциональный миметик, пептид, пептидомиметик, производный агент, пептид, отщепленный от целого белка, или пептиды, синтезированные синтетическим путем (таким как, например, либо с использованием синтезатора пептидов, либо рекомбинантными способами, либо их комбинациями), рекомбинантный агент, антитело, природный или неприродный агент, слитый белок или его эквивалент, а также мутанты, их производные или сочетания.
Используемый здесь термин «агент» может означать отдельную единицу, либо он может означать комбинацию агентов.
Если агент представляет собой органическое соединение, то для некоторых применений, таких как если этот агент представляет собой ИГРУ, это органическое соединение типично может содержать две или более чем две связанные углеводородные группы. Для некоторых применений агент предпочтительно содержит по меньшей мере две циклические группы, причем одна из них может представлять собой конденсированную циклическую кольцевую структуру. Для некоторых применений предпочтительно по
- 8 006254 меньшей мере одна из этих циклических групп представляет собой гетероциклическую группу. Для некоторых применений эта гетероциклическая группа предпочтительно содержит по меньшей мере один N в кольце. Примеры таких соединений представлены здесь в разделе “Примеры”.
Если дополнительный агент представляет собой органическое соединение, то для некоторых применений, таких как если этот агент представляет собой И:НЭП, это органическое соединение типично может содержать амидную группу (то есть -^Н)-С(О)- или также -С(О)-^Н)-) и одну или более чем одну углеводородную группу. Здесь термин «углеводородная группа» означает группу, содержащую по меньшей мере С и Н, а также возможно содержащую один или более чем один другой подходящий заместитель. Примеры таких заместителей могут включать в себя галогено-, алкокси-, нитро-, алкильную группу, циклическую группу и т.д. В дополнение к тому, что возможны заместители, представляющие собой циклическую группу, комбинация заместителей может образовать циклическую группу. Если углеводородная группа содержит более чем один С, то эти атомы углерода не обязательно должны быть связаны друг с другом. Например, по меньшей мере два атома углерода могут быть связаны через подходящий элемент или группу. Таким образом, углеводородная группа может содержать гетероатомы. Подходящие гетероатомы очевидны для специалистов в данной области и включают в себя, например, серу, азот и кислород. Для некоторых применений агент предпочтительно содержит по меньшей мере одну циклическую группу. Для некоторых применений агент предпочтительно содержит по меньшей мере одну циклическую группу, связанную с другой углеводородной группой посредством амидной связи. Примеры таких соединений представлены здесь в разделе “Примеры”.
Если дополнительный агент представляет собой органическое соединение, то для некоторых применений, таких как если этот агент представляет собой И:ФДЭ, это органическое соединение типично может содержать две или более чем две связанные углеводородные группы. Для некоторых применений агент предпочтительно содержит по меньшей мере две циклические группы, причем возможно одна из этих циклических групп может представлять собой конденсированную циклическую кольцевую структуру. Для некоторых применений по меньшей мере одна из этих циклических групп предпочтительно представляет собой гетероциклическую группу. Для некоторых применений эта гетероциклическая группа предпочтительно содержит по меньшей мере один N в кольце. Примеры таких соединений представлены в разделе “Примеры”.
Агент может содержать галогеногруппы. Здесь «галогено» означает фторо, хлоро, бромо или иодо.
Агент может содержать одну или более чем одну алкильную, алкокси, алкенильную, алкиленовую или алкениленовую группу, которая может быть неразветвленной или разветвленной.
Агент может находиться в форме фармацевтически приемлемой соли, такой как соль присоединения кислоты или соль основания, либо ее сольвата, включая гидрат. Подходящие соли рассматриваются в Ветде е! а1., 1.Рйатт.8с1, 1977, 66, 1-19.
Подходящие соли присоединения кислоты образуются из кислот, которые образуют нетоксичные соли, примерами которых являются соли гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, сульфат, бисульфат, нитрат, фосфат, гидрофосфат, ацетат, малеат, фумарат, лактат, тартрат, цитрат, глюконат, сукцинат, сахарат, бензоат, метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, п-толуолсульфонат и памоат.
Подходящие соли оснований образуются из оснований, которые образуют нетоксичные соли, примерами которых являются соли натрия, калия, алюминия, кальция, магния, цинка и диэтаноламина.
Фармацевтически приемлемую соль агента по настоящему изобретению (то есть ИДРУ) легко можно получить путем смешивания вместе растворов агента и желаемой кислоты или основания, где как подходит. Эту соль можно осадить из раствора и собрать фильтрованием, либо ее можно выделить выпариванием растворителя.
Агент может существовать в полиморфной форме.
Агент может содержать один или более чем один асимметрический атом углерода и, следовательно, существовать в двух или более стереоизомерных формах. В случае, когда агент содержит алкенильную или алкениленовую группу, может иметь место цис (Е) и транс (Ζ) изомерия. Настоящее изобретение включает в себя индивидуальные стереоизомеры агента и, если это свойственно, его индивидуальные таутомерные формы вместе с их смесями.
Разделение диастереоизомеров или цис и транс изомеров может быть успешно выполнено традиционными способами, например фракционной кристаллизацией, хроматографией или ВЭЖХ стереоизомерной смеси агента или его подходящей соли или производного. Индивидуальный энантиомер агента может быть получен также из соответствующего оптически чистого промежуточного соединения либо разделением, например ВЭЖХ, соответствующего рацемата с использованием подходящей хиральной стационарной фазы, либо фракционной кристаллизацией диастереоизомерных солей, образованных взаимодействием соответствующего рацемата с подходящей оптически активной кислотой или основанием, где как подходит.
Настоящее изобретение также включает в себя все подходящие изотопные разновидности агента или его фармацевтически приемлемой соли. Изотопную разновидность агента по настоящему изобретению (то есть ИДРУ) или его фармацевтически приемлемой соли определяют как разновидность, в которой по меньшей мере один атом заменен атомом, имеющим то же атомное число, но имеющим атомную
- 9 006254 массу, отличную от атомной массы, обычно обнаруживаемой в природе. Примеры изотопов, которые могут быть введены в агент и его фармацевтически приемлемые соли, включают в себя изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, серы, фтора и хлора, такие как 2Н, 3Н, 13С, 14С, 15Ν, 17О, 18О, 31Р, 32Р, 358, 18Р и 36С1 соответственно.
Некоторые изотопные разновидности агента и его фармацевтически приемлемых солей, например те, в которые введен радиоактивный изотоп, такой как 3Н или 14С, полезны в исследованиях тканевого распределения лекарственного средства и/или субстрата. Тритиевые, то есть 3Н, и углерод-14, то есть 14С, изотопы особенно предпочтительны в связи с простотой их получения и обнаружения. Кроме того, замещение изотопами, такими как дейтерий, то есть 2Н, может давать определенные терапевтические преимущества благодаря более высокой метаболической стабильности, например, повышенному периоду полураспада ίη νίνο или пониженной потребности дозировки, и поэтому при некоторых обстоятельствах она может быть предпочтительна. Изотопные разновидности агента и его фармацевтически приемлемых солей, как правило, могут быть получены традиционными способами с использованием соответствующих изотопных разновидностей подходящих реагентов.
Для специалистов в данной области очевидно, что агент может образовываться из пролекарства. Примеры пролекарств включают в себя объекты, которые имеют определенную защитную группу (группы) и которые могут не обладать фармакологической активностью сами по себе, но в определенных случаях их можно вводить (например перорально или парентерально), после чего они претерпевают метаболизм в организме с образованием агента, который является фармакологически активным.
Кроме того, очевидно, что некоторые группировки, известные как «про-группировки», например как описано в «Эсзщп о£ Ргобгидз». Н. Випбдаатб, Е1зс\зсг. 1985 (раскрывается здесь посредством ссылки), могут быть помещены на соответствующие функциональные группы агентов. Такие пролекарства также включены в объем изобретения.
Пцдмф может осуществлять одно или более чем одно из следующего: прямо или косвенно повышать эффективность цАМФ, прямо или косвенно повышать уровни цАМФ, прямо или косвенно повышать активность цАМФ, прямо или косвенно снижать уровень расщепления цАМФ, прямо или косвенно снижать уровень ингибирования цАМФ.
Предпочтительно агент по настоящему изобретению (то есть ИТРУ) прямо или косвенно повышает уровни цАМФ в сексуальных гениталиях женщины, страдающей РПВЖ.
Более предпочтительно агент по настоящему изобретению (то есть ΓΝΡΥ) прямо или косвенно избирательно повышает уровни цАМФ в сексуальных гениталиях женщины, страдающей РПВЖ.
Более предпочтительно агент по настоящему изобретению (то есть ^ΝΡΥ) прямо или косвенно избирательно повышает уровни цАМФ, где указанный цАМФ представляет собой цАМФ, индуцируемый половым возбуждением.
В особенно предпочтительном аспекте агент по настоящему изобретению (то есть ΚΝΡΥ) повышает относительное количество цАМФ, индуцируемого половым возбуждением.
Для некоторых применений агент по настоящему изобретению (то есть ΚΝΡΥ) избирательно лечит РПВЖ.
В одном аспекте агент может действовать на подходящую мишень как ингибитор или антагонист и тем самым повышать уровни цАМФ в сексуальных гениталиях женщины. В данном тексте авторы изобретения использовали термин «ингибитор» для обозначения ингибитора и/или антагониста.
В другом аспекте агент может действовать на подходящую мишень как активатор или агонист и тем самым повышать уровни цАМФ в сексуальных гениталиях женщины. В данном тексте авторы изобретения использовали термины «активатор» и «позитивный регулятор» для обозначения активатора и/или позитивного регулятора и/или агониста.
Таким образом, агент может действовать на подходящую мишень как агонист, антагонист, позитивный регулятор или ингибитор.
Агент по настоящему изобретению (то есть И^РУ) может представлять собой одну единицу, которая способна проявлять два или более чем два из этих свойств. Альтернативно или дополнительно агент по настоящему изобретению может представлять собой комбинацию агентов, которые способны проявлять одно или более чем одно из этих свойств.
Предпочтительно агент может действовать на подходящую мишень как избирательный агонист, избирательный антагонист, избирательный позитивный регулятор или избирательный ингибитор.
Агент также может быть способным проявлять одно или более чем одно другое благоприятное функциональное свойство. Например, агент по настоящему изобретению может потенцировать цАМФ, а также потенцировать цГМФ.
Для некоторых применений (как например местное применение) агент может также проявлять ингибиторное действие по отношению к АПФ (ангиотензинпревращающий фермент). Анализ АПФ представлен здесь в Экспериментальном Разделе. Для некоторых применений (например у конкретных типов пациентов) такие агенты (то есть агенты, которые также проявляют ингибиторное действие по отношению к АПФ) могут быть неподходящими для перорального введения.
- 10 006254
Для некоторых применений агент может проявлять также ингибиторное действие по отношению к ЭПФ (эндотелий-превращающий фермент). Анализы ЭПФ общеизвестны в данной области техники.
Фармацевтические комбинации
Агент по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) можно использовать в комбинации с одним или более чем одним другим фармацевтически активным агентом, таким как ПцГМФ (такой ингибитор фосфодиэстеразы типа 5, как например Силденафил, или донор оксида азота, или предшественник оксида азота, например Ь-аргинин, или ингибиторы аргиназы) и/или действующее на центральную нервную систему фармацевтическое средство (например агонисты рецепторов дофамина, такие как апоморфин, или селективные агонисты рецептора Ό2 дофамина, такие как ΡΝυ-95666, или агонист рецепторов меланокортина, такой как меланотан II). Указания по использованию апоморфина в качестве фармацевтического препарата можно найти в υδ-Α-5945117. В данном конкретном документе апоморфин вводят сублингвально. Дополнительно или альтернативно агент можно использовать в комбинации с одним или более чем одним ингибитором ФДЭ5 (например силденафилом, варденафилом (Вауег ВА 38-9456) и 1С351 (С1а11з, 1со§ йШу)), одним или более чем одним донором оксида азота (например ΝΜΙ-921), одним или более чем одним агонистом рецепторов дофамина (например апоморфином, уприма, иксеном), одним или более чем одним гетероциклическим амином, таким как гетероциклические амины, описанные в общих чертах и конкретно в Ж) 00/40226, в частности примеры 7, 8 и 9, одним или более чем одним агонистом рецепторов меланокортина (например меланотаном II или РТ14), одним или более чем одним открывателем калиевого канала (например открывателем калиевого канала КАТФ (например миноксидилом, никорандилом), и/или активируемым кальцием открывателем калиевого канала (например ΒΜ8204352), одним или более чем одним антагонистом а1-адреноцептора (например фентоламином, вазофемом, вазомаксом), одним или более чем одним агонистом рецепторов У!Р или аналога У!Р (например Ко125-1553) или фрагментов Υ!Ρ, одним или более чем одним антагонистом α-адреноцепторов в сочетании с У!Р (например инвикорпом, авиптадилом), одним или более чем одним антагонистом а2-адреноцептора (например иохимбином), одним или более чем одним эстрогеном, эстрогеном и медроксипрогестероном или медроксипрогестерона ацетатом (МПА), либо агентом гормонозаместительной терапии эстрогенов и метилтестостерона (например НКТ (гормонозаместительная терапия), в частности премарин, сенестин, эстрофеминал, эквин, эстрас, эстрофем, эллесте соло, эстринг, эстрадерм, эстрадерм ТТ8, эстрадерм матрикс, дерместрил, премфаз, премпро, премпак, премик, эстратест, эстратест Н8, тиболон), одним или более чем одним заместительным агентом тестостерона (шс ΌΗΕΑ (дегидроандростедион), тестостерон (Тострелл) или тестостероновый имплантат (Органон)), одним или более чем одним тестостерон/эстрадиол агентом, одним или более чем одним агонистом эстрогенов, например лазофоксифеном, одним или более чем одним агонистом или антагонистом рецепторов серотонина (например агонистом и антагонистом рецепторов 5НТ1А, 5НТ2С, 5НТ2А и 5НТ3, как они описаны в Ж9 2000/28993), одним или более чем одним агонистом простаноидных рецепторов (например Мизе, алпростадил, мизопростол), одним или более чем одним агонистом пуринергических рецепторов (в частности Ρ2Υ2 и Ρ2Υ4), одним или более чем одним агентом-антидепрессантом (например бупропионом (Велбутрин), мирртазапином, нефазодоном).
Структура !С351 представляет собой
Если вводят комбинацию активных агентов, то их можно вводить одновременно, по отдельности или последовательно.
Комбинация С У1Р
Согласно настоящему изобретению агент не представляет собой У!Р (или предпочтительно не представляет собой его аналог или его фрагмент). Однако в некоторых воплощениях агент по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) можно вводить совместно с Υ!Ρ, либо с его аналогом или фрагментом.
В очень предпочтительном аспекте Υ!Ρ, либо его аналог или его фрагмент, не вводят. Его не вводят в связи с тем, что было сообщение о том, что инфузии У!Р приводят к значительным нежелательным сердечнососудистым эффектам, таким как увеличение частоты сердечных сокращений и снижение диастолического кровяного давления (Ойезеп 1983, 1987, 1995).
Кроме того, и даже несмотря на то, что Ойезеп и его соавторы продемонстрировали, что У!Р индуцирует усиление вагинального кровотока и смазывания у здоровых добровольцев, механизм, посредством которого ΥΓΡ проявляет свои эффекты, неясен. В литературе имеется ряд примеров Υ!Ρ сигнализа
- 11 006254 ции через различные вторичные системы посредников, например цГМФ/гуанилатциклазу (АкЬиг-ЕаЫап, 1999), монооксид углерода (СО)/гемоксигеназу (Рап е1 а1., 1998) и цАМФ/аденилатциклазу (Роба, 1995; ЗсЬоеГГег, 1985; Си, 1992). Примеры этому приведены в недавнем сообщении, которое раскрывает, как вазорелаксирующие эффекты νΐΡ в маточной артерии можно объяснить высвобождением оксида азота (1оуапоу1с, 1998). Опять же, имеется также подтверждение МР модуляции оксида азота (НО)/цГМФ в мужской мочеполовой функции (К1т, 1994).
Кроме того, в литературе было сообщение о том, что νΐΡ не воздействует на уровни цАМФ в культурах гладкомышечных клеток влагалища (см. ТгаЫг А., Моге1апб, КВ., Ниапд, Υ., е1 а1 (1999). Эеуе1ортеп! оГ Нитап апб гаЬЫ1 уадта1 ктооШ тикс1е се11 сиНигек: ЕГГес!к оГ уакоасбге адеп!к оп т!гасе11и1аг 1еуе1к оГ сусйс пис1еоНбек. Мо1. Се11. Вю1. Кек. Сотт., 2, 131-137).
Более того, в последующих исследованиях ОНекеп и его соавторы (см. Ρа11е, Вгебк)аег, ОНекеп апб РаНгепкгид, 1990. С11шса1 апб Ехрептеп1а1 ?Ьагтасо1оду апб ΡЬук^о1оду, уо1. 17, 61-68) сообщают, что воздействие νΐΡ на вагинальный кровоток независимо от пути введения является скорее частью системного сосудорасширяющего эффекта, а не локальным ответом. Кроме того, они сообщают о ряде сосудистых побочных эффектов, связанных с νΐΡ, а именно: о покраснении, гипотензии и тахикардии.
Значения К
Для некоторых применений агент по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) (и возможно возможный дополнительный агент) предпочтительно имеет значение К1 менее примерно 100 нМ, предпочтительно менее примерно 75 нМ, предпочтительно менее примерно 50 нМ, предпочтительно менее примерно 25 нМ, предпочтительно менее примерно 20 нМ, предпочтительно менее примерно 15 нМ, предпочтительно менее примерно 10 нМ, предпочтительно менее примерно 5 нМ.
Значения Кн
Для некоторых применений агент по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) (и возможно возможный дополнительный агент) предпочтительно имеет значение КЬ менее примерно 100 нМ, предпочтительно менее примерно 75 нМ, предпочтительно менее примерно 50 нМ, предпочтительно менее примерно 25 нМ, предпочтительно менее примерно 20 нМ, предпочтительно менее примерно 15 нМ, предпочтительно менее примерно 10 нМ, предпочтительно менее примерно 5 нМ.
Значения Ка
Для некоторых применений агент по настоящему изобретению (то естьИ:NΡΥ) (и возможно возможный дополнительный агент) предпочтительно имеет значение Ка менее примерно 100 нМ, предпочтительно менее примерно 75 нМ, предпочтительно менее примерно 50 нМ, предпочтительно менее примерно 25 нМ, предпочтительно менее примерно 20 нМ, предпочтительно менее примерно 15 нМ, предпочтительно менее примерно 10 нМ, предпочтительно менее примерно 5 нМ.
Фармакокинетика
В некоторых воплощениях настоящего изобретения агенты по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) (и возможно возможный дополнительный агент, например И: НЭП) предпочтительно имеют 1од Ό от -2 до +4, более предпочтительно от -1 до +2. 1од Ό может быть определен стандартными методами, известными в данной области, такими, которые описаны в 1. Ρΐιηπη. ?Ьагтасо1. 1990, 42:144.
В дополнение или альтернативно, в некоторых воплощениях агенты по настоящему изобретению (то есть ΚΝΡΥ) (и возможно возможный дополнительный агент, например И:НЭП) предпочтительно характеризуются поступлением в сасо-2 более чем 2х10-6 см-с-1, более предпочтительно более чем 5х10-6 см· с-1. Значение поступления в сасо можно определить стандартными методами, известными в данной области, такими как описано в 1. Ρΐιηπη. 8сг 79, 7, р.595-600, и ГНагт. Кек. ^1. 14, Ыо. 6 (1997).
Избирательность
Для некоторых применений агент по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) (и возможно возможный дополнительный агент) предпочтительно имеет по меньшей мере примерно 100-кратную избирательность к желаемой мишени, предпочтительно по меньшей мере примерно 150-кратную избирательность к желаемой мишени, предпочтительно по меньшей мере примерно 200-кратную избирательность к желаемой мишени, предпочтительно по меньшей мере примерно 250-кратную избирательность к желаемой мишени, предпочтительно по меньшей мере примерно 300-кратную избирательность к желаемой мишени, предпочтительно по меньшей мере примерно 350-кратную избирательность к желаемой мишени.
Для некоторых применений агент по настоящему изобретению (то естьИ:NΡΥ) (и возможно возможный дополнительный агент) предпочтительно имеет по меньшей мере примерно 400-кратную избирательность к желаемой мишени, предпочтительно по меньшей мере примерно 500-кратную избирательность к желаемой мишени, предпочтительно по меньшей мере примерно 600-кратную избирательность к желаемой мишени, предпочтительно по меньшей мере примерно 700-кратную избирательность к желаемой мишени, предпочтительно по меньшей мере примерно 800-кратную избирательность к желаемой мишени, предпочтительно по меньшей мере примерно 900-кратную избирательность к желаемой мишени, предпочтительно по меньшей мере примерно 1000-кратную избирательность к желаемой мишени.
- 12 006254
Методы химического синтеза
В типичном случае агент может быть получен методами химического синтеза.
Агент или его мишень или варианты, гомологи, производные, фрагменты или миметики могут быть получены химическими способами для синтеза агента целиком или частично. Например, пептиды могут быть синтезированы твердофазными методами, отщеплены от смолы и очищены посредством препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии (например СгещЫоп (1983) Рго1ет 8(гис1игек Апб Мо1еси1аг Ргтс1р1ек, \¥Н Ргеетап апб Со, №\ν Уогк ΝΥ). Состав этих синтетических пептидов можно подтвердить аминокислотным анализом или секвенированием (например по методике расщепления Эдмана; СгещЫоп. см. выше).
Прямой синтез агента, или его вариантов, гомологов, производных, фрагментов или миметиков может быть осуществлен с использованием различных твердофазных методов (КоЬегде 1Υ е! а1. (1995) 8с1епсе 269: 202-204), а автоматический синтез может быть успешно выполнен например с использованием синтезатора пептидов АВ1 43 1 А (Регкш Е1тег) в соответствии с инструкциями, предоставленными изготовителем. Дополнительно аминокислотные последовательности, составляющие агент или любую его часть, можно изменять в процессе прямого синтеза и/или объединять, используя химические способы, с последовательностью из других субъединиц или любой их частью, с получением варианта агента или мишени, такого как, например, вариант ФДЭ.
В альтернативном воплощении изобретения кодирующую последовательность агента, его мишени или вариантов, гомологов, производных, фрагментов или миметиков можно синтезировать, целиком или частично, используя химические способы, общеизвестные в данной области техники (см. СатиШегк МН е! а1. (1980) Мс. Ас1бк Кек. 8утр. 8ег. 215-23, Нот Т е! а1. (1980) Шс. Ас1бк Кек. 8утр. 8ег. 225-232).
Миметик
Используемый здесь термин «миметик» относится к любому химическому соединению, которое включает в себя, но не ограничивается ими, пептид, полипептид, антитело или другое органическое химическое соединение, которое обладает такой же количественной активностью или таким же эффектом, как и упомянутый агент, по отношению к мишени.
Химическое производное
Термин «производное» или «производный», как он используется здесь, включает в себя химическую модификацию агента. Иллюстрацией таких химических модификаций может быть замещение водорода галогеногруппой, алкильной группой, ацильной группой или аминогруппой.
Химическая модификация
В одном воплощении настоящего изобретения агент может представлять собой химически модифицированный агент.
Химическая модификация агента может либо усиливать, либо ослаблять взаимодействие с образованием водородной связи, взаимодействие зарядов, гидрофобное взаимодействие, ван-дер-ваальсово взаимодействие или дипольное взаимодействие между агентом и мишенью.
В одном аспекте идентифицированный агент может действовать в качестве модели (например матрицы) для разработки других соединений.
Рекомбинантные способы
В типичном случае агент для использования в анализе по настоящему изобретению может быть получен по методикам рекомбинантных ДНК.
Потенцирование цГМФ
Используемый здесь со ссылкой на цГМФ термин «потенцирование» включает в себя любое из следующего: повышение эффективности цГМФ, повышение уровней цГМФ, повышение активности цГМФ, снижение уровня расщепления цГМФ, снижение уровня ингибирования цГМФ.
Потенцирующий эффект может представлять собой прямой эффект. Альтернативно он может представлять собой вторичный эффект и/или нисходящий эффект.
При этом агент, который потенцирует цГМФ, предпочтительно действует на ИцГМФ и/или на НМцГМФ, причем модулятор цГМФ обладает негативным воздействием на цГМФ, так что этот агент снижает и/или устраняет и/или маскирует и/или направляет в другую сторону нежелательный эффект ИцГМФ и/или НМцГМФ, направленный на цГМФ.
Поэтому настоящее изобретение охватывает комбинацию одного или более чем одного И:ИцАМФ и одного или более чем одного И:ИцГМФ. В одном аспекте И:ИцГМФ представляет собой И:ФДЭцГМФ.
ИцАМФ и/или НМцАМФ
Авторы изобретения показали, что цАМФ опосредует генитальный (например вагинальный или клиторный) кровоток, и путем усиления цАМФ сигнализации им удалось усилить генитальный (например вагинальный или клиторный) кровоток в животной модели. Таким образом, агент, который позитивно регулирует/усиливает опосредованную цАМФ вазорелаксацию, должен быть эффективным в лечении РПВЖ. Для удобства авторы изобретения ссылаются на эти вещества как на ингибиторы цАМФ (ИцАМФ) и/или ингибиторы НМцАМФ. Здесь ИцАМФ и НМцАМФ обладают негативным воздействием на уровни или активность цАМФ.
- 13 006254
Таким образом, этот агент может представлять собой любой один или более чем один из: И:ИцАМФ и/или И:НМцамф.
Этот агент может представлять собой одну единицу, которая способна проявлять два или более чем два из этих свойств. Альтернативно или дополнительно этот агент может представлять собой комбинацию агентов, которые способны проявлять одно или более чем одно из этих свойств.
Примеры ИцАМФ и НМцАМФ включают в себя ΝΡΥ и возможно одно или более чем одно из ФДЭ и НЭП, или любой компонент, связанный с ними. Этот связанный компонент может представлять собой, например, рецептор и/или кофактор.
Таким образом, агент по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) можно использовать в сочетании с одним или более чем одним из следующего:
И:ФДЭ (иногда пишут как ФДЭ,) и И:НЭП.
Подобным образом, этот агент может представлять собой одну единицу, которая способна проявлять два или более чем два из этих свойств. Альтернативно или дополнительно этот агент может представлять собой комбинацию агентов, которые способны проявлять одно или более чем одно из этих свойств.
И:Ицамф и/или И:НМцамф
В соответствии с настоящим изобретением авторы изобретения обнаружили, что РПВЖ возможно лечить и/или предупреждать, используя агент, который снижает и/или устраняет и/или маскирует и/или направляет в другую сторону и/или предотвращает нежелательный эффект ИцАМФ и/или НМцАМФ, направленный на цАМФ. Этот агент может даже восстанавливать уровни цАМФ, которые были снижены ИцАМФ и/или НМцАМФ. Для удобства авторы изобретения ссылаются на эти вещества как на И:ИцАМФ и/или И:НМцАМФ. Здесь И:ИцАМФ и И:НМцАМФ предотвращают или снижают негативное воздействие на уровни или активность цАМФ.
Таким образом, в одном предпочтительном аспекте агент представляет собой И:ИцАМФ и/или И:НМцАМФ, причем НМцАМФ обладает нежелательным воздействием на цАМФ.
АцАМФ
В соответствии с настоящим изобретением авторы изобретения обнаружили, что один из важных случаев РПВЖ является следствием низких уровней или низкой активности цАМФ в женских гениталиях.
Таким образом, агент может представлять собой ПР: АцАМФ.
Таким образом, агент по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) предпочтительно может также быть способным действовать как А:АЦ, Α:νΐΡΓ, Α:νΐΡη, И: И :νΐΡΓ или И: И :νΐΡιι- и/или его можно использовать в сочетании с одним или более чем одним из А:АЦ, Α:νΐΡΓ, Α:νΐΡη, Η:Η:\;'ΙΡΓ или И: И :νΐΡη.
Этот агент может представлять собой одну единицу, которая способна проявлять два или более чем два из этих свойств. Альтернативно или дополнительно этот агент может представлять собой комбинацию агентов, которые способны проявлять одно или более чем одно из этих свойств.
ПР:АцАМФ
В другом отношении дополнительная мишень может представлять собой компонент, который повышает уровень цАМФ. Следовательно, агент может также действовать как ПР:АЦ.
Следовательно, например агент по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) может быть также способным действовать как ПР:АцАмф, А:АЦ, Α:νΐΡΓ, Α:νΐΡη, И:И :νΐΡΓ или И:И :νΐΡιι, и/или его можно использовать в сочетании с одним или более чем одним агентом, который может представлять собой любой из: ПР:Ацамф, А:АЦ, Α:νΐΡΓ, Α:νΐΡη, ИйУЩ или Κ:Κ:νΐΡη.
В качестве примера мишень может представлять собой сам по себе цАМФ, либо АЦ или νΐΡ (либо их комбинации).
Комбинация И:Ицамф, и/или И:Мцамф, и/или ПР:Ацамф
В другом аспекте агент по настоящему изобретению (то есть Μ:ΝΡΥ) можно использовать с комбинацией потенциаторов цАМФ. Например, агент по настоящему изобретению (то есть Μ:ΝΡΥ) можно применять в комбинации с одним или более чем одним из
И: ФДЭцАМФ И:ФДЭпцАМФ
Μ:ΝΡΥ
Μ:ΝΡΥ Υη
И:НЭП
ПР: АцАМФ
А:АЦ
Α:νΐΡΓ
Α:νΐΡη
ΚΚνίΡ,.
ΚΜΛΊΡ,, миметик цАМФ
- 14 006254
Ингибитор
Термин «ингибитор», как он используется здесь в отношении агента по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ), означает агент, который может снижать и/или устранять и/или маскировать и/или предотвращать нежелательное действие ИцАМФ и/или нежелательное действие МцАМФ, направленное на цАМФ.
Активатор
Термин «активатор», как он используется здесь в отношении агента по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ), означает агент, который может повышать и/или продуцировать и/или демаскировать и/или развивать и/или обеспечивать действие цАМФ и/или АцАМФ. Этот активатор может действовать как агонист.
Другие активные компоненты
В другом аспекте агент по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) может также находиться в комбинации с одним или более чем одним другим активным компонентом, таким как один или более чем один из агентов, способных потенцировать цГМФ.
Аминокислотная последовательность
Используемый здесь термин «аминокислотная последовательность» является синонимом термину «полипептид» и/или термину «белок». В некоторых случаях термин «аминокислотная последовательность» является синонимом термину «пептид». В некоторых случаях термин «аминокислотная последовательность» является синонимом термину «белок».
Аминокислотную последовательность можно получить, выделив ее из подходящего источника, либо ее можно получить синтетическим путем, либо ее можно получить путем использования методик рекомбинантных ДНК.
Предложена также аминокислотная последовательность, которая способна действовать как мишень в анализе для идентификации одного или более чем одного агента и/или его производного, способного воздействовать на эту аминокислотную последовательность, чтобы потенцировать цАМФ для лечения РПВЖ.
Нуклеотидная последовательность
Используемый здесь термин «нуклеотидная последовательность» является синонимом термину «полинуклеотид».
Нуклеотидная последовательность может представлять собой ДНК или РНК либо геномного, либо синтетического, либо рекомбинантного происхождения. Нуклеотидная последовательность может быть двунитевой или однонитевой, представляя собой либо смысловую, либо антисмысловую нить, либо их сочетания.
Для некоторых применений нуклеотидная последовательность предпочтительно представляет собой ДНК.
Для некоторых применений нуклеотидную последовательность предпочтительно получают, используя методики рекомбинантных ДНК (например рекомбинантную ДНК).
Для некоторых применений нуклеотидная последовательность предпочтительно представляет собой кДНК.
Для некоторых применений нуклеотидная последовательность предпочтительно может быть такой же, как встречающаяся в природе форма для данного аспекта.
Предложена также нуклеотидная последовательность, кодирующая вещество, способное действовать как мишень в анализе (таком как анализ двух гибридов дрожжей) для идентификации одного или более чем одного агента и/или его производного, способных воздействовать на эту аминокислотную последовательность, чтобы потенцировать цАМФ для лечения РПВЖ.
Для специалистов очевидно, что многочисленные разнообразные нуклеотидные последовательности могут кодировать мишени в результате вырожденности генетического кода. Кроме того, очевидно, что специалисты могут, используя рутинные методики, делать нуклеотидные замены, которые существенно не влияют на активность, кодируемую этой нуклеотидной последовательностью по настоящему изобретению, чтобы отражать использование кодонов любого конкретного организма-хозяина, в котором экспрессируется мишень. Таким образом, термины «вариант», «гомолог» или «производное» в отношении нуклеотидной последовательности, приведенной в прилагаемых перечнях последовательностей, включают в себя замену, вариацию, модификацию, замещение, делецию или добавление одной (или более чем одной) нуклеиновой кислоты из этой последовательности или к этой последовательности, приводящие к нуклеотидной последовательности, кодирующей функциональную мишень по настоящему изобретению (или даже агент по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ), если указанный агент содержит нуклеотидную последовательность или аминокислотную последовательность).
Как указано выше, в отношении гомологии последовательности имеет место предпочтительно по меньшей мере 75%, более предпочтительно по меньшей мере 85%, более предпочтительно по меньшей мере 90% гомология с последовательностями, представленными в перечне последовательностей. Более предпочтительно имеет место по меньшей мере 95%, более предпочтительно по меньшей мере 98% гомология. Сравнения нуклеотидной гомологии можно проводить, как описано выше. Предпочтительной
- 15 006254 программой сравнения последовательностей является программа ССС №18сои81и Ве8ЙЦ, описанная выше. По умолчанию оценочная матрица имеет согласованное значение 10 для каждого идентичного нуклеотида и -9 для каждого несогласованного. Занижение для образования гэпа по умолчанию составляет -50, а занижение для удлинения гэпа по умолчанию составляет -3 для каждого нуклеотида.
Предложены также нуклеотидные последовательности, которые способны избирательно гибридизоваться с представленными здесь последовательностями, либо с любым их вариантом, фрагментом или производным, либо с комплементом любого из вышеуказанного. Длина нуклеотидных последовательностей предпочтительно составляет по меньшей мере 15 нуклеотидов, более предпочтительно по меньшей мере 20, 30, 40 или 50 нуклеотидов. Эти последовательности можно использовать в качестве зондов, таких как в диагностическом наборе.
Варианты/гомологи/производные
Кроме упомянутых здесь специфичных аминокислотных последовательностей и нуклеотидных последовательностей, предложено также применение их вариантов, гомологов и производных. Здесь термин «гомология» может приравниваться к термину «идентичность».
В контексте настоящего изобретения принято, что гомологичная последовательность включает в себя аминокислотную последовательность, которая может быть по меньшей мере на 75, 80 или 90% идентичной, предпочтительно по меньшей мере на 95 или 98% идентичной. В частности, обычно следует учитывать гомологию в отношении тех районов, которые известны как существенные для активности. Хотя гомологию можно также рассматривать с точки зрения подобия (то есть аминокислотных остатков, имеющих подобные химические свойства/функции), в контексте описанного здесь предпочтительно выражать гомологию в терминах идентичности последовательности.
Сравнение гомологии можно проводить глазами или, более обычно, с помощью общедоступных программ сравнения последовательностей. Эти коммерчески доступные компьютерные программы могут вычислять % гомологии между двумя или более чем двумя последовательностями.
% гомологии можно вычислять между прилегающими последовательностями, то есть одну последовательность выравнивают с другой последовательностью, и каждую аминокислоту в одной последовательности непосредственно сравнивают с соответствующей аминокислотой в другой последовательности по одному остатку. Это называется выравниванием «без гэпов». Обычно такие выравнивания без гэпов осуществляют только в пределах относительно малого числа остатков.
Хотя этот способ является очень простым и надежным, он не способен учесть то, что например в идентичной в другом отношении паре последовательностей одна инсерция или делеция приведет к тому, что следующие аминокислотные остатки не будут выровнены, что, возможно, приведет к большому снижению % гомологии при проведении глобального выравнивания. Следовательно, большинство способов сравнения последовательностей разработано таким образом, чтобы получать оптимальные выравнивания с учетом возможных инсерций и делеций без необоснованного занижения общей оценки гомологии. Это достигается путем вставки «гэпов» в выравнивание последовательностей таким образом, чтобы постараться максимизировать локальную гомологию.
Однако при этих более сложных способах определяют «штрафные очки гэпов» для каждого гэпа, который встречается при выравнивании, таким образом, что для одного и того же числа идентичных аминокислот при выравнивании последовательности при как можно меньшим числе гэпов - что отражает более высокую степень родства между двумя сравниваемыми последовательностями - будет достигаться более высокая оценка, чем при большом числе гэпов. Обычно используют «цены родства по гэпам» («аГПпе дар со818»), которые назначают относительно высокую «цену» за существование гэпа и меньшие «штрафные очки» для каждого следующего остатка в гэпе. Эта система оценки гэпов наиболее широко используется. Высокие «штрафные очки» для гэпов, конечно, будут приводить к оптимизированному выравниванию при гэпах меньших размеров. Большинство программ выравнивания дают возможность модифицировать «штрафные очки» для гэпов. Однако при использовании такого программного обеспечения для сравнений последовательностей предпочтительно использовать значения по умолчанию. Например, при использовании пакета программ ССС №18сои81и Ве8ЙЦ (см. ниже) «штрафные очки» для гэпа по умолчанию составляют -12 для гэпа и -4 для каждого удлинения.
Вычисление максимума % гомологии, следовательно, прежде всего требует получения оптимального выравнивания с учетом «штрафных очков» для гэпов. Подходящей компьютерной программой для осуществления такого выравнивания является пакет программ ССС ХУСсогМп Ве8ЙЦ (Ииуегайу оГ №18сои81и, И.8.А.; Эеуегеих е1 а1., 1984, Ыискю Ас1б8 Ве8еагсй 12:387). Примеры другого программного обеспечения, которое может осуществлять сравнение последовательностей, включают в себя, но не ограничены ими, пакет программ ВБА8Т (см. Аи8иЬе1 е1 а1., 1999 1Ыб - СйарЮг 18), БА8ТА (АйсНЫ е1 а1., 1990, 1. Мо1. Вю1., 403-410) и комплект программ сравнения СЕХЕ№ОВК8. Как ВБА8Т, так и БА8ТА доступны как для автономного, так и для оперативного поиска (см. Аи8иЬе1 е1 а1., 1999 1Ь1б, раде8 7-58 1о 7-60). Однако предпочтительно использовать программу ССС №18сои81и Ве81П(. Также пригодна новая программа, названная ВБА8Т 2 8едиеисе8, для сравнения белковой и нуклеотидной последовательности (см. БЕМ8 МюгоЬю1 Ьей 1999 174(2): 247-50; БЕМ8 МюгоЬю1 Ьей 1999 177(1): 187-8 и 1айаиа@исЬ1. и1т. шй.доу).
- 16 006254
Хотя конечный % гомологии можно измерить с точки зрения идентичности, сам по себе процесс выравнивания обычно не основан на сравнении пар по принципу «все или ничего». Вместо этого, как правило, используют матрицу оценки со шкалой подобия, которая назначает очки для каждого попарного сравнения, основанного на химическом подобии или эволюционном расстоянии. Примером такой широко используемой матрицы является матрица ВЬО8ИМ62 - матрица по умолчанию для комплекта программ ВЬЛ8Т. В программах ССС \Уйсоп5т. как правило, используется либо общедоступные значения по умолчанию, либо изготовленная на заказ сравнительная таблица символов, если она поставляется (дополнительные подробности см. в руководстве для пользователя). Предпочтительно использовать общедоступные значения по умолчанию для пакета программ ССС или матрицу по умолчанию ВЬО8ИМ62 в случае другого программного обеспечения.
Как только программное обеспечение дало оптимальное выравнивание, возможно вычисление % гомологии, предпочтительно % идентичности последовательности. Обычно программное обеспечение производит это вычисление как часть сравнения последовательностей и дает количественный результат.
В последовательностях могут также быть делеции, инсерции или замены аминокислотных остатков, которые приводят к молчащей замене и дают в результате функционально эквивалентное вещество. Преднамеренные аминокислотные замены можно получить на основе подобия полярности, заряда, растворимости, гидрофобности, гидрофильности и/или амфипатической природы этих остатков, пока сохраняется вторичная связывающая активность этого вещества. Например, отрицательно заряженные аминокислоты включают в себя аспарагиновую кислоту и глутаминовую кислоту; положительно заряженные аминокислоты включают в себя лизин и аргинин; и аминокислоты с незаряженными полярными главными группами, имеющие подобные значения гидрофильности, включают в себя лейцин, изолейцин, валин, глицин, аланин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, фенилаланин и тирозин.
Консервативные замены можно делать, например, согласно приведенной ниже таблице. Аминокислоты в одном и том же блоке во второй графе и предпочтительно в одной и той же строке в третьей графе можно заменять друг на друга.
Может иметь место гомологичная замена (термины замена и замещение оба используются здесь для обозначения обмена существующего аминокислотного остатка на альтернативный остаток), то есть замена подобного на подобный, например основного на основной, кислотного на кислотный, полярного на полярный и т.д. Может также иметь место негомологичная замена, то есть от одного класса остатков к другому, либо такая, в которую альтернативно вовлечено включение неприродных аминокислот, таких как орнитин (здесь на него ссылаются как на Ζ), диаминомасляная кислота орнитин (здесь на него ссылаются как на В), норлейцин орнитин (здесь на него ссылаются как на О), пириилаланин, тиенилаланин, нафтилаланин и фенилглицин.
Замены могут быть также сделаны на неприродные аминокислоты, альфа* и альфа-дизамещенные* аминокислоты, Ν-алкиламинокислоты*, молочную кислоту*, галоидные производные природных аминокислот, такие как трифтортирозин*, п-С1-фенилаланин*, п-Вг-фенилаланин*, п-1-фенилаланин*, Ь-аллилглицин*, β-аланин*, Ь-а-аминомасляную кислоту*, Ь-у-аминомасляную кислоту*, Ь-а-аминоизомасляную кислоту*, Ь-е-аминокапроновую кислоту*, 7-аминогептановую кислоту*, Ь-метионина сульфон#*, Ь-норлейцин*, Ь-норвалин*, п-нитро-Ь-фенилаланин*, Ь-гидроксипролин#, Ь-тиопролин*, метильные производные фенилаланина (РЬе), такие как 4-метил-РЬе*, пентаметил-РЬе*, Ь-РЬе (4-амино)#, Ь-Туг (метил)*, Ь-РЬе (4-изопропил)*, Ь-Тю (1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбоновая кислота)*, Ьдиаминопропионовую кислоту* и Ь-РЬе (4-бензил)*. Обозначение * использовано в целях вышеприведенного обсуждения (относительно гомологичной и негомологичной замены), чтобы указать на гидрофобную природу этого производного, тогда как обозначение # использовано, чтобы указать на гидрофильную природу этого производного, #* указывает на амфипатические характеристики.
Вариант аминокислотных последовательностей может включать в себя подходящие спейсерные группы, которые можно встраивать между любыми двумя аминокислотными остатками последовательности, в том числе алкильные группы, такие как метильная, этильная или пропильная группы, в дополнение к аминокислотам-спейсерам, таким как остатки глицина или β-аланина. Следующая форма вариации, в которую вовлечено присутствие одного или более чем одного из аминокислотных остатков в пептоидной форме, должна быть хорошо известна специалистам в данной области. Во избежание сомнений «пептоидная форма» используется для ссылки на вариант аминокислотных остатков, где группазаместитель α-углерода находится скорее на атоме азота этого остатка, а не на α-углероде. Способы по- 17 006254 лучения пептидов в пептоидной форме известны в данной области (например, 81топ КТ с1 а1., ΡΝΑ8 (1992) 89(20), 9367-9371, и 11оп\е11 ΌΟ, Тгепйк Вю1есЬпо1. (1995) 13(4), 132-134).
Гибридизация
Предложено также использование последовательностей, которые могут гибридизоваться с представленными здесь последовательностями мишеней, так, как будто агент представляет собой антисмысловую последовательность.
Термин «гибридизация», как он используется здесь, должен включать в себя «процесс, в результате которого нить нуклеиновой кислоты соединяется с комплементарной нитью посредством спаривания оснований», а также процесс амплификации, который происходит при технологиях полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Нуклеотидные последовательности, способные избирательно гибридизоваться с представленными здесь нуклеотидными последовательностями или с их комплементом, должны быть, как правило, по меньшей мере на 75%, предпочтительно по меньшей мере на 85 или 90% и более предпочтительно по меньшей мере на 95 или 98% гомологичными соответствующим представленным здесь комплементарным нуклеотидным последовательностям на протяжении района по меньшей мере 20, предпочтительно по меньшей мере 25 или 30, например по меньшей мере 40, 60, 100 или более смежных нуклеотидов. Предпочтительные нуклеотидные последовательности будут содержать районы, гомологичные нуклеотидной последовательности, представленной в 8ЕО ΙΌ N0 2 перечней описанных здесь последовательностей, предпочтительно по меньшей мере на 80 или 90%, и более предпочтительно по меньшей мере на 95% гомологичные нуклеотидной последовательности, представленной в 8Е0 ΙΌ N0 2 перечней последовательностей, описанных здесь.
Термин «избирательно гибридизующийся» означает, что нуклеотидную последовательность, когда ее применяют в качестве зонда, используют в условиях, при которых обнаруживается, что нуклеотидная последовательность-мишень гибридизуется с этим зондом на уровне, значительно превышающим фон. Фоновая гибридизация может происходить в связи с присутствием других нуклеотидных последовательностей, например в кДНК или геномной ДНК библиотеке, которую подвергают скринингу. В этом случае под фоном подразумевают уровень сигнала, генерируемого взаимодействием между зондом и неспецифическим ДНК-членом библиотеки, который является менее чем в 10 раз, предпочтительно менее чем в 100 раз интенсивным, чем при специфическом взаимодействии, наблюдаемом с ДНК-мишенью. Интенсивность взаимодействия можно измерить, например, посредством радиоактивного мечения зонда, например 32Р.
Условия гибридизации основаны на температуре плавления (Тпл) комплекса связывания нуклеиновых кислот (Вегдег апб К1тте1, 1987, Сшбе 1о Мо1еси1аг С1ошпд 1ес11пк|ие5. Ме1ЪоЙ8 ίη Епхуто1оду. Уо1 152, Лсайетю Рге§5, 8ап О|едо СА), и возлагают определенную «строгость», как объяснено ниже.
Максимальная строгость обычно создается при примерно Тпл -5°С (на 5°С ниже Тпл зонда); высокая строгость - при температуре примерно на 5-10°С ниже Тпл; промежуточная строгость - при температуре примерно на 10-20°С ниже Тпл; и низкая строгость - при температуре примерно на 20-25°С ниже Тпл. Как известно специалистам в данной области, гибридизацию максимальной строгости можно использовать для идентификации или обнаружения идентичных нуклеотидных последовательностей, тогда как промежуточную (или низкую) строгость гибридизации можно использовать для идентификации или обнаружения подобных или родственных полинуклеотидных последовательностей.
В предпочтительном аспекте предложены также нуклеотидные последовательности, которые могут гибридизоваться с описанной здесь нуклеотидной последовательностью в строгих условиях (например 65°С и 0,1х88С (1х88С = 0,15М №С1, 0,015М №3цитрат, рН 7,0). Если описанная здесь нуклеотидная последовательность является двунитевой, обе нити этого дуплекса либо индивидуально, либо в сочетании включены. Если нуклеотидная последовательность является однонитевой, комплементарная последовательность этой нуклеотидной последовательности также включены.
Нуклеотидные последовательности, которые не являются на 100% гомологичными описанным здесь последовательностям, могут быть получены рядом способов. Другие варианты описанных здесь последовательностей могут быть получены, например, путем зондирования ДНК библиотек, созданных из ряда источников. Кроме того, могут быть получены другие вирусные/бактериальные или клеточные гомологи, в частности клеточные гомологи, обнаруживаемые в клетках млекопитающих (например в клетках крысы, мыши, быка и приматов), и такие гомологи и их фрагменты, как правило, будут способны избирательно гибридизоваться с последовательностями, представленными здесь в перечне последовательностей. Такие последовательности могут быть получены путем зондирования «ДНК библиотек, созданных из других видов животных, либо геномных ДНК библиотек из других видов животных, и зондирования таких библиотек зондами, полностью или частично содержащими представленную здесь нуклеотидную последовательность, в условиях строгости от средней до высокой. Подобные соображения применяют к получению видовых гомологов и аллельных вариантов аминокислотных и/или нуклеотидных последовательностей по настоящему изобретению.
Варианты и штаммовые/видовые гомологи также могут быть получены с использованием вырожденной ПЦР, в которой будут использованы праймеры, сконструированные к последовательностям
- 18 006254 мишеням в пределах вариантов и гомологов, кодирующих консервативные аминокислотные последовательности в пределах описанных здесь последовательностей. Консервативные последовательности можно предсказать, например, путем выравнивания аминокислотных последовательностей из нескольких вариантов/гомологов. Выравнивания последовательностей можно осуществлять, используя компьютерное программное обеспечение, известное в данной области. Например, широко используется программа 6С6 Χνίδοοηδίη Ρίίβυρ. Праймеры, используемые в вырожденной ПЦР, будут содержать одно или более чем одно вырожденное положение, и их будут использовать при условиях более низкой строгости, чем условия, которые используют для клонирующих последовательностей с праймерами единственной последовательности против известных последовательностей.
Альтернативно, такие нуклеотидные последовательности могут быть получены путем сайтнаправленного мутагенеза охарактеризованных последовательностей, таких как нуклеотидная последовательность, представленная на 8Е0 ΙΌ ΝΟ 2 перечней последовательностей. Это может быть полезным, если, например, молчащие замены кодонов требуются для последовательностей, чтобы оптимизировать предпочтительность кодонов для конкретной клетки-хозяина, в которой экспрессируется эта нуклеотидная последовательность. Другие изменения последовательности могут быть желательны, чтобы ввести сайты узнавания ферментов рестрикции, или чтобы изменить активность белка, кодируемого этими нуклеотидными последовательностями.
Нуклеотидные последовательности можно использовать для получения праймера, например ПЦР праймера, праймера для альтернативной реакции амплификации, зонда, например меченого выявляющей меткой традиционными способами с использованием радиоактивных или нерадиоактивных меток, или эти нуклеотидные последовательности можно клонировать в векторы. Длина таких праймеров, зондов и других фрагментов должна составлять по меньшей мере 15, предпочтительно по меньшей мере 20, например по меньшей мере 25, 30 или 40 нуклеотидов, и они также охвачены термином «нуклеотидная последовательность», как он используется здесь.
Нуклеотидные последовательности, такие как ДНК полинуклеотиды и зонды, можно получить рекомбинантным, синтетическим путем или любыми способами, доступными специалистам в данной области. Их можно также клонировать по стандартным методикам.
Как правило, праймеры получают синтетическими способами, включающими в себя поэтапное производство желаемой последовательности нуклеиновой кислоты по одному нуклеотиду за раз. Методики для выполнения этого с использованием автоматизированных технологий, общедоступны в данной области техники.
Более длинные нуклеотидные последовательности, как правило, получают, используя рекомбинантные способы, например используя ПЦР (полимеразная цепная реакция) методики клонирования. Такие способы включают в себя создание пары праймеров (например примерно от 15 до 30 нуклеотидов), фланкирующих район последовательности-мишени, который желательно клонировать, приведение этих праймеров в контакт с мРНК или кДНК, полученной из клетки животного или человека, проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР) в условиях, которые приводят к амплификации желаемого района, выделение амплифицированного фрагмента (например путем очистки реакционной смеси на агарозном геле) и выделение амплифицированной ДНК. Праймеры могут быть сконструированы таким образом, чтобы они содержали подходящие сайты узнавания ферментов рестрикции, так чтобы амплифицированную ДНК можно было клонировать в подходящий вектор клонирования.
Вследствие свойственной генетическому коду вырожденности для клонирования и экспрессии последовательностей-мишеней можно использовать другие последовательности ДНК, которые кодируют по существу такую же или функционально эквивалентную аминокислотную последовательность. Как известно специалистам в данной области, для некоторых систем экспрессии может быть благоприятным получать последовательности-мишени с кодонами, не встречающимися в природе. Кодоны, предпочтительные для конкретного прокариотического или эукариотического хозяина (Миггау Е е1 а1. (1989) Νιιο Άαάκ Кек 17: 477-508), можно выбрать, например, чтобы повысить скорость экспрессии мишени или чтобы получить рекомбинантные РНК транскрипты, имеющие желаемые свойства, такие как более длительный период полураспада, чем у транскриптов, продуцируемых с последовательности, встречающейся в природе.
Векторы экспрессии
Нуклеотидная последовательность для использования в качестве мишени или для экспрессии мишени может быть включена в рекомбинантный вектор замещения. Этот вектор можно использовать для репликации нуклеотидной последовательности в совместимой клетке-хозяине и/или ее экспрессии из совместимой клетки-хозяина. Экспрессию можно регулировать, используя регуляторные последовательности, которые включают в себя промоторы/энхансеры и другие сигналы регуляции экспрессии. Можно использовать прокариотические промоторы и промоторы, функциональные в эукариотических клетках. Можно использовать тканеспецифичные или стимул-специфичные промоторы. Можно также использовать химерные промоторы, содержащие элементы последовательности от двух или более чем двух различных промоторов, описанных выше.
- 19 006254
Белок, продуцируемый рекомбинантной клеткой-хозяином посредством экспрессии нуклеотидной последовательности, может быть секретируемым или может содержаться внутриклеточно в зависимости от последовательности и/или от используемого вектора. Кодирующие последовательности могут быть сконструированы с сигнальными последовательностями, которые направляют секрецию вещества, кодируемого этими последовательностями, через мембрану конкретной прокариотической или эукариотической клетки.
Слитые белки
Аминокислотная последовательность-мишень может быть получена в виде слитого белка, например чтобы способствовать его выделению и очистке. Примеры белков-партнеров слияния включают в себя глутатион-8-трансферазу (С8Т), 6χΗί§, САБ4 (ДНК-связывающий домен и/или домен транскрипционной активации) и β-галактозидазу. Может быть также удобным включить сайт протеолитического расщепления между белком-партнером слияния и интересующей белковой последовательностью, чтобы дать возможность удалить последовательности белка слияния. Предпочтительно белок слияния не скрывает активность мишени.
Слитый белок может содержать антиген или антигенный детерминант, слитый с веществом, описанным здесь. В данном воплощении этот слитый белок может представлять собой не встречающийся в природе слитый белок, содержащий вещество, которое может действовать в качестве адъюванта в смысле обеспечения общей стимуляции иммунной системы. Антиген или антигенный детерминант можно присоединить либо к амино, либо к карбокси концу вещества.
В другом воплощении аминокислотную последовательность можно лигировать с гетерологичной последовательностью, чтобы кодировать слитый белок. Например, для скрининга пептидных библиотек на агенты, способные влиять на активность вещества, может быть полезным кодировать химерное вещество, экспрессирующее гетерологичный эпитоп, который распознается коммерчески доступным антителом.
Антитела
Предложено также антитело. Дополнительно или альтернативно мишень может представлять собой антитело. Дополнительно или альтернативно средства для обнаружения мишени могут представлять собой антитело.
Антитела могут быть получены стандартными способами, таким как иммунизация веществом по изобретению или использование библиотеки фагового дисплея.
Для целей данного изобретения термин «антитело», если не указано другое, включает в себя, но не ограничивается ими, поликлональное, моноклональное, химерное, одноцепочечное, БаЬ фрагменты, фрагменты, продуцируемые библиотекой БаЬ экспрессии, а также их миметики. Такие фрагменты включают в себя фрагменты целостных антител, которые сохраняют их связывающую активность по отношению к веществу-мишени, Бу, Б(аЬ') и Б(аЬ')2 фрагменты, а также одноцепочечные антитела (ксБу), слитые белки и другие синтетические белки, которые содержат антиген-связывающий сайт антитела. Кроме того, антитела и их фрагменты могут представлять собой гуманизированные антитела. Нейтрализующие антитела, то есть те, которые ингибируют биологическую активность веществ полипептидов, являются особенно предпочтительными для диагностики и лечения.
Если желательными являются поликлональные антитела, выбранное животное (например мышь, кролика, козу, лошадь и т.д.) подвергают иммунизации иммуногенным полипептидом, несущим эпитоп (эпитопы), получаемый от идентифицированного агента и/или описанного здесь вещества.
В зависимости от видов-хозяев для усиления иммунологического ответа можно использовать различные адъюванты. Такие адъюванты включают в себя, но не ограничены ими, адъювант Фрейнда, минеральные гели, такие как гидроксид алюминия, и поверхностно-активные вещества, такие как лизолецитин, плюроновые полиолы, полианионы, пептиды, масляные эмульсии, гемоцианин из блюдечка и динитрофенол. ВС6 (Вас1Ш СайпеЦе-Сиепп) и СогуиеЬас1егшт рагуит являются потенциально полезными адъювантами человека, которые можно применять, если очищенное вещество полипептид вводят индивидуумам с иммунологическим риском, в целях стимуляции системной защиты.
Сыворотку от иммунизированного животного собирают и обрабатывают по известным методикам. Если сыворотка, содержащая поликлональные антитела к эпитопу, получаемому от идентифицированного агента и/или вещества по настоящему изобретению, содержит антитела к другим агентам, эти поликлональные антитела можно очистить с помощью иммуноаффинной хроматографии. Методики получения и обработки поликлональных антисывороток известны в данной области техники. Чтобы такие антитела можно было изготовить, предложены также полипептиды или их фрагменты, гаптенизированные с другим полипептидом, для использования в качестве иммуногенов у животных или людей.
Специалист в данной области также может легко получить моноклональные антитела, направленные против эпитопов, получаемых от идентифицированного агента и/или вещества, описанного здесь. Общая методология изготовления моноклональных антител с помощью гибридом хорошо известна. Бессмертные антитело-продуцирующие клеточные линии можно создать с помощью клеточного слияния, а также с помощью других методик, таких как прямая трансформация В лимфоцитов онкогенной ДНК или трансфекция вирусом Эпштейна-Барра. Группы моноклональных антител, продуцируемых против сфе
- 20 006254 рических эпитопов, можно подвергать скринингу на различные свойства; то есть на изотип и аффинность к эпитопу.
Моноклональные антитела к веществу и/или идентифицированному агенту можно получить, используя любую методику, которая разработана для продуцирования молекул антител непрерывными клеточными линиями в культуре. Они включают в себя, но не ограничены ими, гибридомную методику, впервые описанную КоеЫег аиб Мбйеш (1975 Ыа1иге 256: 495-497), методику В-клеточных человеческих гибридом (КокЬог е! а1. (1983) 1ттипо1. Тобау 4:72; Со1е е! а1 (1983) Ргос. ЫаП. Асаб. 8с1. И8А 80: 20262030) и методику ЕВУ-гибридом (Со1е е! а1. (1985) Мопос1опа1 АпИЬоб1е8 апб Сапсег Тйегару, А1ап В Шк 1пс., рр. 77-96). Кроме того, можно использовать методики, разработанные для продуцирования «химерных антител», сплайсинг генов мышиных антител с генами человеческих антител с получением молекулы с подходящей антигенной специфичностью и биологический активностью (Моггйоп е! а1 (1984) Ргос. Ыа!1. Асаб. 8сг И8А 81: 6851-6855; ЫеиЬегдег е! а1 (1984) Ыа!иге 312: 604-608; Такеба е! а1 (1985) Ыа!иге 314: 452-454). Альтернативно, методики, описанные для получения одноцепочечных антител (патент США № 4946779) можно адаптировать для получения специфичных к веществу одноцепочечных антител.
Антитела, как моноклональные, так и поликлональные, которые направлены против эпитопов, доступных от идентифицированного агента и/или вещества, особенно полезны в диагностике, а те, которые являются нейтрализующими, полезны при пассивной иммунотерапии. Моноклональные антитела, в частности, можно использовать, чтобы вызвать противоидиотипические антитела. Противоидиотипические антитела представляют собой иммуноглобулины, которые несут «внутренний образ» вещества и/или агента, против которого желательна защита. Методики создания противоидиотипических антител известны в данной области техники. Эти противоидиотипические антитела могут быть также полезны в терапии.
Антитела можно также получить, индуцируя их ίη νί\Ό продуцирование в популяции лимфоцитов, или с помощью скрининга библиотек рекомбинантных иммуноглобулинов или групп высокоспецифичных связывающих реагентов, как описано в Ог1апб1 е! а1 (1989, Ргос. №111. Асаб. 8сг 86: 3833-3837) и А'пПег О. Апб М1к!еш С. (1991; Уинге 319: 293-299).
Можно также создать фрагменты антител, которые содержат специфичные сайты связывания для вещества. Например, такие фрагменты включают в себя, но не ограничены ими, Р(аЬ')2 фрагменты, которые можно получить с помощью ферментативного гидролиза молекулы антитела пепсином, и ЕаЬ фрагменты, которые можно создать с помощью удаления дисульфидных мостиков Е(аЬ')2 фрагментов. Альтернативно можно сконструировать библиотеки ЕаЬ экспрессии, что позволяет быстро и легко идентифицировать моноклональные ЕаЬ фрагменты с желаемой специфичностью (Нике^Э е! а1 (1989) 8с1епсе 256:1275-1281).
Репортеры
В аналитических способах (а также скринингах), описанных здесь, можно использовать широкое разнообразие репортеров, причем предпочтительные репортеры обеспечивают удобно обнаруживаемые сигналы (например при спектроскопии). В качестве примера репортерный ген может кодировать фермент, который катализирует реакцию, изменяющую свойства поглощения света.
Примеры репортерных молекул включают в себя, но не ограничены ими, β-галактозидазу, инвертазу, зеленый флуоресцентный белок, люциферазу, хлорамфеникол, ацетилтрансферазу, β-глюкуронидазу, экзо-глюканазу и глюкоамилазу. Альтернативно, меченые радиоактивной меткой или меченые флуоресцентной меткой нуклеотиды можно включать во вновь образующиеся транскрипты, которые затем идентифицируют при связывании с олигонуклеотидными зондами.
В одном предпочтительном воплощении продуцирование репортерной молекулы измеряют по ферментативной активности продукта репортерного гена, такого как β-галактозидаза.
В данной области техники известно множество протоколов для обнаружения и измерения экспрессии мишени, например с использованием либо поликлональных, либо моноклональных антител, специфичных к этому белку. Примеры включают в себя иммуноферментный твердофазный анализ (ЕЬ18А), радиоиммунологический анализ (В1А) и активируемый флуоресценцией анализ клеток (ЕАС8). Предпочтительным является двухсайтовый иммунологический анализ на моноклональной основе, использующий моноклональные антитела, реактивные к двум не интерферирующим эпитопам на полипептидах, но можно также применять конкурентный анализ связывания. Эти и другие анализы описаны, среди прочего, в Натр!оп В е! а1. (1990, 8его1ощса1 Ме1йоб§, А ЬаЬога!огу Мапиа1, АР8 Ргекк, 8! Раи1 ΜΝ) и Маббох ΌΕ е! а1. (1983, 1. Ехр. Меб. 15,8: 121 1).
Широкое разнообразие меток и методик конъюгации известно специалистам в данной области, и их можно использовать в различных анализах нуклеиновых кислот и аминокислот. Способы получения меченых зондов гибридизации или ПЦР для обнаружения полинуклеотидных последовательностеймишеней включают в себя олигомечение, ник-трансляцию, концевое мечение или ПЦР амплификацию с использованием меченого нуклеотида. Альтернативно, кодирующую последовательность или любую ее часть можно клонировать в вектор для получения мРНК зонда. Такие вектора известны в данной области
- 21 006254 техники, коммерчески доступны, и их можно использовать для синтеза РНК зондов ίη νίίτο добавлением подходящей РНК полимеразы, такой как Т7, Т3 и 8Р6, и меченых нуклеотидов.
Ряд фирм, таких как РНагтааа Вю!есН (РйсаКпуау. N1), Рготеда (Майкоп, XVI) и И8 ВюсНетюа1 Согр (С1е\'е1апй, ОН) поставляют коммерческие наборы и протоколы для этих методик. Подходящие репортерные молекулы или метки включают в себя радионуклиды, ферменты, флуоресцентные, хемилюминесцентные или хромогенные агенты, а также субстраты, кофакторы, ингибиторы, магнитные частицы и тому подобное. Патенты, в которых имеются указания по использованию таких меток, включают в себя υδ-Ά-3817837; И8-Л-3850752; И8-Л-3939350; И8-Л-3996345; И8-Л-4277437; И8-Л-4275149 и И8-Л4366241. Рекомбинантные иммуноглобулины можно также получить, как показано в υδ-Ά-4816567.
Дополнительные способы количественного определения экспрессии конкретной молекулы включают в себя радиоактивно-меченые (Ме1Ьу РС е! а1. 1993 I. 1ттипо1. Ме!Нойк 159: 235-44) или биотинилированные (Эир1аа С е! а1. 1993 Апа1. ВюсНет. 229-36) нуклеотиды, коамплификацию контрольной нуклеиновой кислоты и стандартные кривые, на которые интерполируют экспериментальные результаты. Количественное определение множественных образцов можно ускорить с помощью проведения анализа в формате ЕЫ8А, где интересующий олигомер представлен в различных разведениях, и спектрофотометрический или колориметрический ответ дает быстрое количественное определение.
Хотя присутствие/отсутствие экспрессии маркерного гена позволяет предположить, что интересующий ген также присутствует, его присутствие и экспрессию необходимо подтвердить. Например, если нуклеотидная последовательность встроена внутри последовательности маркерного гена, рекомбинантные клетки, содержащие эту последовательность, можно идентифицировать по отсутствию функции маркерного гена. Альтернативно, маркерный ген можно расположить в тандеме с кодирующей последовательностью-мишенью под контролем одного промотора. Экспрессия маркерного гена в ответ на индукцию или отбор обычно указывает также на экспрессию мишени.
Альтернативно, клетки-хозяева, которые содержат кодирующую последовательность для мишени и экспрессируют кодирующие районы этой мишени, можно идентифицировать с помощью разнообразных методик, известных специалистам в данной области. Эти методики включают в себя, но не ограничены ими, ДНК-ДНК или ДНК-РНК гибридизацию, а также методики биологического или иммунологического теста на белок, которые включают в себя технологии на основе мембран, на основе растворов или на основе гранул для обнаружения и/или количественного определения нуклеиновой кислоты или белка.
Общие анализы на активность/уровни цАМФ
Способность тестируемого агента потенцировать цАМФ можно определить путем измерения соответствующего повышения или снижения уровня мишени. Дополнительно или альтернативно, способность тестируемого агента потенцировать цАМФ можно определить путем измерения соответствующего повышения уровней цАМФ. Например, можно адаптировать методику 8тНН е! а1 1993 (Арр1. ВюсНет. Вю1есНпо1. 41: 189-218). Имеются также коммерчески доступные наборы иммунологического анализа для измерения цАМФ (например АтегкНат 1п1егпайопа1, Лг1т§!оп НеЦНК 1Ь и ЭиРоп!, ВоДоп, МА). Подробности по подходящему анализу цАМФ приведены в Экспериментальном Разделе.
Скрининги
Любую одну или более чем одну подходящую мишень, такую как аминокислотная последовательность или нуклеотидная последовательность, можно использовать для идентификации ПцАМФ в любом из разнообразных методик скрининга лекарств. Мишень, используемая в таком тесте, может свободно находиться в растворе, может фиксироваться на твердом носителе, ее может нести клеточная поверхность, либо она может быть локализована внутри клетки. Эта мишень может даже находиться внутри животной модели, где указанная мишень может представлять собой экзогенную мишень или введенную мишень. Эта животная модель обычно является не человеческой животной моделью. Отмена активности мишени или образование комплексов связывания между мишенью и тестируемым агентом могут быть измерены.
Методики скрининга лекарств могут быть основаны на способе, описанном Оеукеп в Европейской патентной заявке 84/03564, опубликованной 13 сентября 1984. В кратком изложении, большие количества различных небольших пептидных тестируемые соединений синтезируют на твердом субстрате, таком как пластмассовые стержни или какая-либо другая поверхность. Эти пептидные тестируемые соединения подвергают взаимодействию с подходящей мишенью или ее фрагментом и промывают. Затем определяют связанные вещества, например соответствующим образом адаптированными способами, общеизвестными в данной области техники. Очищенную мишень также можно нанести непосредственно на планшеты для использования в методиках скрининга лекарств. Альтернативно, для улавливания пептида и иммобилизации его на твердом носителе можно использовать не нейтрализующие антитела.
Предложено также использование конкурентных скрининговых анализов лекарственных средств, при которых нейтрализующие антитела, способные связываться с мишенью, специфично конкурируют с тестируемым соединением за связывание с мишенью.
Другая методика скрининга разработана для скрининга с высокой пропускной способностью (НТ8) агентов, обладающих подходящей связывающей аффинностью к веществам, и основана на способе, подробно изложенном в νθ 84/03564.
- 22 006254
Ожидается, что эти способы анализа, описанные здесь, подходят как для малого, так и для широкомасштабного скрининга тестируемых соединений, а также в количественных анализах.
Таким образом, предложен также способ идентификации агентов, которые потенцируют цАМФ, при котором подходящую мишень приводят в контакт с агентом, а затем измеряют активность и/или уровни цАМФ.
Предложен способ идентификации агентов, которые избирательно потенцируют цАМФ в сексуальных гениталиях женщины, при котором приводят в контакт подходящую мишень из сексуальных гениталий женщины, а затем измеряют активность и/или уровни цАМФ.
Предложен способ идентификации агентов, которые потенцируют цАМФ, при котором подходящую мишень приводят в контакт с агентом, а затем измеряют активность и/или уровни этой мишени.
Предложен также способ идентификации агентов, которые избирательно потенцируют цАМФ в сексуальных гениталиях женщины, при котором приводят в контакт подходящую мишень из сексуальных гениталий женщины, а затем измеряют активность и/или уровни этой мишени.
В предпочтительном аспекте предложенный скрининг включает в себя по меньшей мере следующие стадии (которые не обязательно должны быть в таком же порядке последовательности), на которых: (а) осуществляют ίη νίίτο скрининг, чтобы определить, имеет ли агент-кандидат соответствующую активность (например антагонизм ΝΡΥ); (б) осуществляют один или более чем один скрининг избирательности, чтобы определить избирательность указанного агента-кандидата (например увидеть, является ли указанный агент также ингибитором АПФ, например используя протокол анализа, представленного здесь); и (в) осуществляют ίη νίνο скрининг с указанным агентом-кандидатом (например используя функциональную животную модель). Обычно, если указанный агент-кандидат проходит скрининг (а) и скрининг (б), тогда осуществляют скрининг (в).
Диагностика
Согласно настоящему изобретению предложен также диагностический набор для обнаружения предрасположенности к РПВЖ. В этом отношении этот набор содержит объект, который способен указать на присутствие одной или более чем одной - или также отсутствие одной или более чем одной - из мишеней в тестируемом образце. Предпочтительно этот тестируемый образец получают из сексуальных гениталий женщины или из их секрета.
Например, диагностическая композиция может содержать любую нуклеотидную последовательность, упомянутую здесь, или ее вариант, гомолог, фрагмент или производное, либо последовательность, способную гибридизоваться с любой полноразмерной или частичной последовательностью.
Чтобы обеспечить основу для диагностики заболевания, следует установить нормальные или стандартные значения для мишени. Это можно осуществить путем объединения жидкостей организма или клеточных экстрактов, взятых у нормальных субъектов, либо у животного, либо у человека, с антителом к мишени в условиях, подходящих для образования комплекса, которые общеизвестны в данной области. Количество стандартного образования комплекса можно подсчитать путем сравнения его с сериями разведений положительных контролей, где известное количество антитела сочетается с известными концентрациями очищенной мишени. Затем стандартные значения, полученные с нормальными образцами, можно сравнить со значениями, полученными с образцами, взятыми у субъектов, потенциально пораженных РПВЖ. По отклонению между стандартным значением и значением у субъекта устанавливают наличие болезненного состояния.
Сама мишень или любая ее часть может обеспечить базу для диагностики и/или терапевтического соединения. В целях диагностики можно использовать полинуклеотидные последовательности мишени, чтобы обнаружить и количественно определить генную экспрессию при состояниях, расстройствах или заболеваниях, в которые может быть вовлечено РПВЖ.
Полинуклеотидную последовательность, кодирующую мишень, можно использовать для диагностики РПВЖ в результате экспрессии этой мишени. Например, для обнаружения аномалии в экспрессии мишени полинуклеотидные последовательности, кодирующие мишень, можно использовать в гибридизации или ПЦР анализах тканей из биопсий или аутопсий, либо биологических жидкостей. Виды таких качественных или количественных способов могут включать в себя Саузерн- или Нозерн-анализ, дотблот или другие технологии на мембранной основе; ПЦР технологии; технологии погружения стержня, штыря или гранулы; и ЕЬ18Л или другие технологии формата множественных образцов. Все эти технологии хорошо известны в данной области техники и фактически составляют основу многих коммерчески доступных диагностических наборов.
Такие анализы могут быть приспособлены для оценки эффективности конкретного режима терапевтического лечения и могут быть использованы в исследованиях животных, в клинических испытаниях или в мониторинге лечения индивидуального пациента. Чтобы обеспечить базу для диагностики заболевания, следует установить нормальный или стандартный профиль для экспрессии мишени. Это осуществляют путем объединения жидкостей организма или клеточных экстрактов, взятых у нормальных субъектов, либо у животного, либо у человека, с мишенью или ее частью, в условиях, подходящих для гибридизации или амплификации. Стандартную гибридизацию можно определить количественно путем сравнения значений, полученных для нормальных субъектов, с серией разведений положительных кон
- 23 006254 тролей, выполняемой в том же эксперименте, где используют известное количество очищенной мишени. Стандартные значения, полученные с нормальными образцами, можно сравнить со значениями, полученными с образцами от субъектов, потенциально пораженных расстройством или заболеванием, связанным с экспрессией кодирующей последовательности мишени. По отклонению между стандартным значением и значением субъекта устанавливают наличие болезненного состояния. Если заболевание установлено, вводят существующий терапевтический агент, и можно построить терапевтические профили или значения. Наконец, этот анализ можно повторять на регулярной основе, чтобы оценить, прогрессируют эти значения или возвращаются к нормальному или стандартному паттерну. Успешные терапевтические профили можно использовать для выявления эффективности лечения за период несколько дней или несколько месяцев.
Таким образом, предложено использование полипептида-мишени или его варианта, гомолога, фрагмента или производного, для продуцирования антител против мишени, которые можно использовать, например в диагностических целях, для обнаружения и количественного определения уровней мишени при состояниях РПВЖ.
Предложены также диагностические анализы и наборы для обнаружения мишени в клетках и тканях, содержащие очищенную мишень, которую можно использовать в качестве положительного контроля, и антитела против мишени. Такие антитела можно использовать в основанных на растворах, основанных на мембранах или основанных на тканях технологиях для обнаружения любого болезненного состояния, либо состояния, относящегося к экспрессии белка-мишени или экспрессии его делеций, либо его варианта, гомолога, фрагмента или производного.
Способы анализа
Диагностические композиции и/или способы и/или наборы можно использовать в следующих методиках, которые включают в себя, но не ограничены ими, конкурентные и не конкурентные анализы, радиоиммунологический анализ, биолюминесцентные и хемилюминесцентные анализы, флюориметрические анализы, сэндвич-анализы, иммунорадиометрические анализы, дот-блот анализы, ферментные анализы, включая ЕЬИЗА, микротитровальные планшеты, покрытые антителами полоски или стержни для погружения для быстрого мониторинга мочи или крови, иммуногистохимию и иммуноцитохимию.
Например, набор для иммуногистохимии можно также использовать для локализации активности ΝΡΥ в ткани гениталий. Этот набор для иммуногистохимии дает возможность определить локализацию ΝΡΥ в срезах ткани и культивируемых клетках с использованием как световой, так и электронной микроскопии, которую можно применять как в исследовательских, так и в клинических целях. Такая информация может быть полезной в диагностических и, возможно, в терапевтических целях для обнаружения и/или предупреждения и/или лечения ЖСД, такой как РПВЖ. Для каждого набора устанавливают диапазон, чувствительность, точность, надежность, специфичность и воспроизводимость анализа. Вариации внутри анализа и между анализами устанавливают в точках 20, 50 и 80% на стандартных кривых размера или активности.
Зонды
Предложены также зонды гибридизации нуклеиновых кислот или ПЦР, которые способны обнаруживать (в частности зонды, которые способны избирательно обнаруживать) полинуклеотидные последовательности, включая геномные последовательности, кодирующие кодирующий район мишени, или близкородственные молекулы, такие как аллели. Специфичность зонда, то есть его происхождение из высоко консервативного, консервативного или неконсервативного района или домена, и строгость гибридизации или амплификации (высокая, промежуточная или низкая), должна определять, идентифицирует ли этот зонд только встречающуюся в природе кодирующую последовательность мишени или родственные последовательности. Зонды для обнаружения родственных последовательностей нуклеиновых кислот выбирают из консервативных или высоко консервативных нуклеотидных районов членов семейства мишени, и такие зонды можно использовать в пуле вырожденных зондов. Для обнаружения идентичных последовательностей нуклеиновых кислот или там, где желательна максимальная специфичность, зонды нуклеиновых кислот выбирают из неконсервативных нуклеотидных районов или уникальных районов полинуклеотидов мишени. Используемый здесь термин «неконсервативный нуклеотидный район» относится к нуклеотидному району, который является уникальным для кодирующей последовательности мишени, описанной здесь, и не встречается у родственных членов этого семейства.
ПЦР, как описано в υδ-Α-4683195, υδ-Α-4800195 и υδ-Α-4965188, предполагает дополнительные применения для олигонуклеотидов, основанных на последовательностях мишени. Такие олигомеры, как правило, синтезируют химически, но их можно сконструировать ферментативным путем или продуцировать из рекомбинантного источника. Олигомеры, как правило, содержат две нуклеотидные последовательности, одну со смысловой ориентацией (5'->3') и одну с антисмысловой ориентацией (3'<-5'), применяемые в оптимизированных условиях для идентификации конкретного гена или состояния. Те же два олигомера, встроенные наборы олигомеров или даже вырожденный пул олигомеров можно применять в менее строгих условиях для обнаружения и/или количественного определения близкородственных ДНК или РНК последовательностей.
- 24 006254
Последовательность нуклеиновой кислоты для мишени можно также использовать, чтобы конструировать зонды гибридизации, как описано ранее, для картирования эндогенной геномной последовательности. Эту последовательность можно картировать на конкретной хромосоме или в специфичном районе хромосомы, используя общеизвестные методики. Они включают в себя ίη кйи гибридизацию с мазками хромосом (Уегша с1 а1. (1988) Нитап Сйготокотек: А Мапиа1 о£ Вакк Тесйшдиек, Регдатоп Ргекк, №\ν Уогк Сйу), хромосомами, механически отобранными с помощью проточной цитометрии, или искусственными хромосомными конструкциями, такими как УАС бактериальные искусственные хромосомы (ВАС), бактериальные Р1 конструкции или библиотеки кДНК отдельных хромосом.
Ιη кйи гибридизация хромосомных препаратов и методики физического картирования, такие как анализ сцепления с использованием установленных хромосомных маркеров, бесценны в развитии генетических карт. Примеры генетических карт можно найти в 8с1епсе 1995, 270:410£ и 1994; 265:1981£. Часто помещение гена на хромосому другого вида млекопитающих может выявить сопряженные маркеры, даже если номер или плечо конкретной хромосомы человека неизвестны. Новые последовательности можно привязать к плечам хромосом или их участкам с помощью физического картирования. Оно обеспечивает ценную информацию для исследователей, занимающихся поиском генов заболевания, используя позиционное клонирование или другие методики исследования гена. После грубой локализации заболевания или синдрома посредством генетического сцепления в конкретном районе генома, любые последовательности, картированные в этой области, могут представлять собой сопряженные или регуляторные гены для дальнейшего исследования. Нуклеотидную последовательность, как она описана здесь, можно также использовать для обнаружения различия в хромосомной локализации вследствие транслокации, инверсии и т.д. между нормальным индивидуумом, носителем и больным.
Клетки-хозяева
Используемый здесь термин «клетка-хозяин» включает в себя любую клетку, которая может содержать мишень для агента.
Таким образом, предложены клетки-хозяева, трансформированные или трансфецированные полинуклеотидом, который представляет собой или экспрессирует мишень. Предпочтительно, указанный полинуклеотид переносится в векторе для репликации и экспрессии полинуклеотидов, которые должны являться мишенью или должны экспрессировать эту мишень. Эти клетки следует выбирать таким образом, чтобы они были совместимы с указанным вектором, и они могут представлять собой, например, прокариотические (например бактериальные), грибные, дрожжевые или растительные клетки.
Грамотрицательную бактерию Е.сой широко используют в качестве хозяина для гетерологичной генной экспрессии. Однако большие количества гетерологичного белка имеют тенденцию к аккумуляции внутри клетки. Последующая очистка желаемого белка из всей массы внутриклеточных белков Е.сой иногда бывает затруднительна.
В противоположность Е.сой, бактерии из рода ВасШик являются самыми подходящими для использования в качестве гетерологичных хозяев в связи с их способностью секретировать белки в культуральную среду. Другими бактериями, подходящими для использования в качестве хозяев, являются бактерии из родов 81гер1отусек и Ркеиботопак.
В зависимости от природы полинуклеотида, кодирующего описанный здесь полипептид, и/или от желательности дальнейшего процессинга экспрессированного белка, предпочтительными могут быть эукариотические хозяева, такие как дрожжи или другие грибы. Вообще, дрожжевые клетки предпочитают другим грибным клеткам в связи с тем, что с ними легче работать. Однако, некоторые белки либо слабо секретируются из дрожжевой клетки, либо в некоторых случаях не претерпевают правильный процессинг (например гипергликозилирование в дрожжах). В этих случаях организм-хозяин следует выбирать из других грибов.
Примерами подходящих хозяев экспрессии являются грибы, такие как грибы вида АкрегдШик (такие как те, которые описаны в ЕР-А-0184438 и ЕР-А-0284603) и вида Тпсйойегта; бактерии, такие как бактерии вида ВасШик (такие как те, которые описаны в ЕР-А-0134048 и ЕР-А-0253455), вида 81гер1отусек и вида Ркеиботопак; и дрожжи, такие как дрожжи вида К1иууеготусек (такие как те, которые описаны в ЕР-А-0096430 и ЕР-А-0301670) и вида 8ассйаготусек. Например, типичные хозяева экспрессии могут быть выбраны из АкрегдШик шдег, АкрегдШик шдег уаг. ШЫдешк, АкрегдШик шдег уаг. а\\'атогг Акрегдй1ик аси1еа118, АкрегдШик шбШапк, АкрегдШик огу/ае, йтсйобегта геекег ВасШиккиЫШк, ВасШик йсйепИогт18, ВасШик ату1оНдие1ас1епк, К1иууеготусек 1асОк и 8ассйаготусек сегеу181ае.
Использование подходящих клеток-хозяев, таких как дрожжевые, грибные и растительные клеткихозяева, может обеспечить посттрансляционные модификации (например миристоилирование, гликозилирование, укорочение, лапидацию и фосфорилирование по тирозину, серину или треонину), которые могут потребоваться для придания оптимальной биологической активности рекомбинантным продуктам экспрессии по настоящему изобретению.
Организм
Используемый здесь термин «организм» включает в себя любой организм, который может содержать мишень и/или продукты, полученные из нее. Примеры организмов могут включать в себя гриб, дрожжи или растение.
- 25 006254
Используемый здесь термин «трансгенный организм» включает в себя любой организм, который содержит мишень и/или полученные продукты.
Трансформация клеток-хозяев/организмов-хозяев
Как указано выше, организм-хозяин может представлять собой прокариотический или эукариотический организм. Примеры подходящих эукариотических организмов включают в себя Е.сой и ВасШик киЬй1Щ Указания по трансформации прокариотических хозяев хорошо документированы в данной области техники (см. например 8атЬгоок е! а1. (Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬога!огу Мапиа1, 2'1 ебйюп, 1989, Со1б 8рипд НагЬог 1аЬога!огу Ргекк) и АикиЬе1 е! а1., Сиггеп! Рго!осо1к т Мо1еси1аг Вю1оду (1995), 1о1т У11еу & 8опк, 1пс).
Если используют прокариотического хозяина, нуклеотидной последовательности может потребоваться подходящая модификация перед трансформацией, такая как удаление интронов.
В другом воплощении трансгенный организм может представлять собой дрожжи. В этом отношении дрожжи также широко используют в качестве носителя для гетерологичной генной экспрессии. Вид 8ассйаготусек сегеуЩае имеет долгую историю промышленного применения, включая его применение для гетерологичной генной экспрессии. Обзор экспрессии гетерологичных генов в 8ассйаготусек сегеУ1к1ае сделан Сообеу е! а1 (1987, Υеак! Вю!есйио1оду, Ό К Веггу е! а1, ебк, рр 401-429, А11еп апб ищут, Ьопбоп) и Ктд е! а1 (1989, Мо1еси1аг апб Се11 Вю1оду о£ Υеак!к, Е Е Уа1!оп апб С Т Υа^^оп!оп, ебк, рр 107133, В1аск1е, С1акдо\у).
По нескольким причинам 8ассНаготусек сегеуЩае хорошо подходят для гетерологичной генной экспрессии. Во-первых, они не патогенны для людей и не способны продуцировать определенные эндотоксины. Во-вторых, они имеют долгую историю безопасного использования на протяжении веков коммерческого применения для различных целей. Это привело к широкому общественному признанию. Втретьих, интенсивное коммерческое применение и исследования, посвященные этому организму, привели в результате к богатству знаний по генетике и физиологии, а также характеристикам крупномасштабной ферментации 8ассНаготусек сегеуЩае.
Обзор принципов гетерологичной генной экспрессии в 8ассНаготусек сегеуЩае и секреции генных продуктов сделан Е. НтсНсйГГе, Е. Кеппу (1993, <^еак! ак а уеЫс1е £ог !Не ехргеккюп о£ йе!его1одоик депек», Υеак!к, Уо1. 5, АгиНопу Н Коке апб 1 8!иаП Наткоп, ебк, 2пб ебйюп, Асабетю ргекк Ь!б.).
В распоряжении имеется несколько типов дрожжевых векторов, включая интегративные векторы, которым требуется рекомбинация с геномом хозяина для их поддержания, и автономно реплицирующиеся плазмидные векторы.
Чтобы получить трансгенные 8ассНаготусек, конструкции экспрессии изготавливают путем вставки описанной здесь нуклеотидной последовательности в конструкцию, предназначенную для экспрессии в дрожжах. Разработано несколько типов конструкций, используемых для гетерологичной экспрессии. Эти конструкции содержат промотор, активный в дрожжах, слитый с описанной здесь нуклеотидной последовательностью. Обычно используют промотор дрожжевого происхождения, такой как промотор САЕ1. Обычно используют сигнальную последовательность дрожжевого происхождения, такую как последовательность, кодирующая сигнальный пептид 8ИС2. Терминатор, активный в дрожжах, завершает систему экспрессии.
Для трансформации дрожжей разработано несколько протоколов трансформации. Например, трансгенные 8ассйаготусек можно получить, следуя указаниям Н^ииеη е! а1 (1978, Ргосеебтдк о£ 1Не №1юпа1 Асабету о£ 8с1епсек о£ !Не И8А, 75, 1929); Веддк, ΕΌ. (1978, МШие, Еопбоп, 275, 104); и 1!о, Н. е! а1 (1983, ί Вас!епо1оду 153, 163-168).
Трансформированные дрожжевые клетки отбирают, используя различные селективные маркеры. Среди маркеров, используемых для трансформации, находится ряд ауксотрофных маркеров, таких как ЬЕи2, Н184 и ТКР1, и доминантные маркеры устойчивости к антибиотикам, такие как маркеры аминогликозидных антибиотиков, например С418.
Другой организм-хозяин представляет собой растение. Основным принципом в конструировании генетически модифицированных растений является встраивание генетической информации в геном растения таким образом, чтобы получить стабильное поддержание этого встроенного генетического материала. Для встраивания этой генетической информации существует несколько методик, при этом двумя главными принципами является прямое введение генетической информации и введение генетической информации путем использования векторной системы. Обзор общих методик можно найти в статьях Ройукик (Аппи Кеу Р1ап! РНук1о1 Р1ап! Мо1 Вю1 [1991] 42: 205-225) и С’НпкЮн (Адго-Еооб-1пбикйу НЕТесН Магсй/Аргй 1994 17-27). Дополнительные указания по трансформации растений можно найти в ЕР-А0449375.
Таким образом, предлагается способ трансформации клетки-хозяина нуклеотидной последовательностью, которая должна быть мишенью или экспрессировать мишень. Клетки-хозяева, трансформированные этой нуклеотидной последовательностью, можно культивировать в условиях, подходящих для экспрессии и выделения кодируемого белка из клеточной культуры. Белок, продуцируемый рекомбинантной клеткой, может быть секретируемым, либо может содержаться внутриклеточно в зависимости от используемой последовательности и/или вектора. Для специалистов в данной области очевидно, что век
- 26 006254 торы экспрессии, содержащие кодирующие последовательности, можно сконструировать с сигнальными последовательностями, которые направляют секрецию кодирующих последовательностей через конкретную прокариотическую или эукариотическую мембрану. Другие рекомбинантные конструкции могут присоединять кодирующую последовательность к нуклеотидной последовательности, кодирующей домен полипептида, который может способствовать очистке растворимых белков (Кго11 Ό1 е! а1 (1993) ΩΝΛ Се11 Вю1 12:441-53).
Фармацевтические композиции
Предложена фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество агента по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиенты (включая их комбинации).
Фармацевтические композиции могут предназначаться для использования в медицине и ветеринарии и типично содержат один или более чем один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент. Приемлемые носители или разбавители для терапевтического применения общеизвестны в области фармацевтики и описаны, например, в Кетшд1ои'к РНагтасеи11са1 8с1епсек, Маск РиЬЕкЫпд Со. (А. К. Сеппаго ебй. 1985). Выбор фармацевтического носителя, эксципиента или разбавителя может быть сделан с учетом назначенного пути введения и стандартной фармацевтической практики. Фармацевтические композиции могут содержать в качестве носителя, эксципиента или разбавителя или в дополнение к нему любой подходящий связывающий агент(ы), смазывающий агент(ы), суспендирующий агент(ы), покрывающий агент(ы), солюбилизирующий агент(ы).
Консерванты, стабилизаторы, красители, а также корригирующие агенты могут быть включены в фармацевтическую композицию. Примеры консервантов включают в себя бензоат натрия, сорбиновую кислоту и эфиры п-гидроксибензойной кислоты. Можно использовать также антиоксиданты и суспендирующие агенты.
В зависимости от различных систем доставки к композиции/препарату могут быть различные требования. Например, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена в виде препарата для доставки с использованием мини-насоса или мукозальным путем, например в виде назального спрея или аэрозоля для ингаляции, либо проглатываемого раствора, либо для доставки парентеральным путем, для чего композицию изготавливают в виде препарата в инъецируемой форме для доставки например внутривенным, внутримышечным или подкожным путем. Альтернативно, может быть создан препарат для введения с помощью и тем и другим путем.
Если агент требуется доставлять через слизистую оболочку, через желудочно-кишечную слизистую оболочку, то он должен обладать способностью сохранять стабильность во время транспорта через желудочно-кишечный тракт; например, он должен быть устойчивым к протеолитическому расщеплению, стабильным при кислом рН и устойчивым к воздействию детергентов желчи.
По обстоятельствам, фармацевтические композиции можно вводить ингаляцией; в форме суппозитория или пессария; местно в форме лосьона, раствора, крема, мази или присыпки, пользуясь кожным пластырем; перорально в форме таблеток, содержащих эксципиенты, такие как крахмал или лактоза, или в капсулах или овулях, либо одни, либо в смеси с эксципиентами, или в форме эликсиров, растворов или суспензий, содержащих корригирующие или красящие агенты; или их можно инъецировать парентерально, например внутривенно, внутримышечно или подкожно. Для парентерального введения композиции лучше всего использовать в форме стерильного водного раствора, который может содержать другие вещества, например достаточное количество солей или моносахаридов, чтобы сделать этот раствор изотоническим с кровью. Для трансбуккального или сублингвального введения композиции можно вводить в форме таблеток или лепешек, препараты которых могут быть приготовлены общепринятым способом.
В некоторых воплощениях агенты можно также использовать в комбинации с циклодекстрином. Известно, что циклодекстрины образуют комплексы включения и комплексы не включения с молекулами лекарственного средства. Образование комплекса лекарственное средство-циклодекстрин может модифицировать растворимость, скорость растворения, биологическую доступность и/или стабильность молекулы лекарственного средства. Комплексы лекарственное средство-циклодекстрин, как правило, полезны для большинства лекарственных форм и путей введения. В качестве альтернативы прямого комплексообразования с лекарственным средством циклодекстрин можно использовать в качестве вспомогательной добавки, например в качестве носителя, разбавителя или солюбилизатора. Альфа-, бета- и гамма-циклодекстрины используют чаще всего, и подходящие примеры описаны в ^О-А-91/11172, \УОА-94/02518 и №О-А-98/55148.
В предпочтительном воплощении агенты по настоящему изобретению (то есть Η:ΝΡΥ) доставляют системно (например перорально, трансбуккально, сублингвально, более предпочтительно перорально.
Поэтому агент предпочтительно находится в форме, которая является подходящей для пероральной доставки.
Для некоторых воплощений агент, когда его применяют, предпочтительно не действует на центральную нервную систему.
Для некоторых воплощений агент, когда его применяют, предпочтительно действует периферически.
- 27 006254
Введение
Термин «введение» включает в себя доставку с помощью вирусных и невирусных методик. Механизмы вирусной доставки включают в себя, но не ограничены ими, аденовирусные векторы, аденоассоциированные вирусные (ААУ) векторы, герпесвирусные векторы, ретровирусные векторы, лентивирусные векторы и бакуловирусные векторы. Механизмы невирусной доставки включают в себя трансфекцию, опосредованную липидами, липосомы, иммунолипосомы, липофектин, катионные фациальные амфифилы (СРА) и их комбинации.
Агенты по настоящему изобретению (то есть ингибиторы ΚΝΡΥ) можно вводить сами по себе, но, как правило, их вводят в виде фармацевтической композиции - например когда агент находится в смеси с подходящим фармацевтическим эксципиентом, разбавителем или носителем, выбранным с учетом назначенного пути введения и стандартной фармацевтической практики.
Например, агент можно вводить (например перорально или местно) в форме таблеток, капсул, овулей, эликсиров, растворов или суспензий, которые могут содержать корригирующие или красящие агенты, для применений немедленного, замедленного, модифицируемого, длительного, импульсного или регулируемого высвобождения.
Таблетки могут содержать эксципиенты, такие как микрокристаллическая целлюлоза, лактоза, цитрат натрия, карбонат кальция, дикальцийортофосфат и глицин, разрыхлители, такие как крахмал (предпочтительно кукурузный, картофельный или тапиоковый крахмал), крахмальный гликолят натрия, натрий-кроскармелоза и некоторые комплексные силикаты, и связующие для гранулирования, такие как поливинилпирролидон, гидроксипропилметилцеллюлоза (ГПМЦ), гидроксипропилцеллюлоза (ГПЦ), сахароза, желатин и аравийская камедь. Кроме того, могут быть включены смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота, глицерилбегенат и тальк.
Твердые композиции подобного типа можно использовать также в качестве наполнителей в желатиновых капсулах. Предпочтительные в этом отношении эксципиенты включают в себя лактозу, крахмал, целлюлозу, молочный сахар или высокомолекулярные полиэтиленгликоли. Для водных суспензий и/или эликсиров агент можно объединять с различными подслащивающими или вкусоароматическими агентами, красящим веществом или красителями, с эмульгирующими и/или суспендирующими агентами и с разбавителями, такими как вода, этанол, пропиленгликоль и глицерин, и их комбинации.
Пути введения (доставки) включают в себя, но не ограничены ими, один или более чем один из следующих: пероральный (например в виде таблетки, капсулы или в виде проглатываемого раствора), местный, через слизистую оболочку (например в виде назального спрея или аэрозоля для ингаляции), назальный, парентеральный (например с помощью инъецируемой формы), желудочно-кишечный, внутрипозвоночный, внутрибрюшинный, внутримышечный, внутривенный, внутриматочный, внутриглазной, внутрикожный, внутричерепной, внутритрахеальный, интравагинальный, интрацеребровентрикулярный, интрацеребральный, подкожный, офтальмический (включая внутристекловидный и внутрикамерный), чрескожный, ректальный, трансбуккальный, вагинальный, эпидуральный, сублингвальный путь.
Следует иметь в виду, что не весь агент необходимо вводить одним и тем же путем. Также, если композиция содержит более чем один активный компонент, то эти компоненты можно вводить различными путями.
Если агент по настоящему изобретению (то есть ИАБУ) вводят парентерально, то примеры такого введения включают в себя одно или более чем одно из следующих: внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное, внутриоболочковое, интравентрикулярное, интрауретральное, интрастернальное, внутричерепное, внутримышечное или сублингвальное введение агента; и/или используя технику инфузии.
Для парентерального введения агент лучше всего использовать в форме стерильного водного раствора, который может содержать другие вещества, например достаточное количество солей или глюкозы, чтобы сделать этот раствор изотоническим с кровью. Водные растворы следует соответствующим образом забуферить (предпочтительно до рН от 3 до 9), если необходимо. Приготовление подходящих парентеральных препаратов в стерильных условиях легко осуществляют по стандартным фармацевтическим методикам, хорошо известным специалистам в данной области.
Как указано, агент по настоящему изобретению (то есть ΚΝΡΥ) можно вводить интраназально или ингаляцией, и удобно доставлять его в форме сухого порошкового ингалятора или аэрозольного распыляемого препарата из контейнера под давлением, насоса, пульверизатора или распылителя с использованием подходящего пропеллента, например дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана, гидрофторалкана, такого как 1,1,1,2-тетрафторэтан (НРА 134А™) или 1,1,1,2,3,3,3-гептафторпропан (НРА 227ЕА™), диоксида углерода или другого подходящего газа. В случае аэрозоля под давлением единицу дозировки можно определить при помощи клапана для доставки отмеренного количества. Контейнер под давлением, насос, пульверизатор или распылитель может содержать раствор или суспензию активного соединения, например с использованием смеси этанола и пропеллента в качестве растворителя, который может дополнительно содержать смазывающий агент, например триолеат сорбита. В препараты капсул и картриджей (изготовленных, например, из желатина) для использования в ингалято
- 28 006254 ре или инсуффляторе можно включать порошкообразную смесь агента и подходящей порошковой основы, такой как лактоза или крахмал.
Альтернативно, агент можно вводить в форме суппозитория или пессария, или его можно применять местно в форме геля, гидрогеля, лосьона, раствора, крема, мази или присыпки. Агент можно вводить также кожно или чрескожно, например путем использования кожного пластыря. Их можно также вводить легочным или ректальным путем. Их можно вводить глазным путем. Для офтальмического применения препараты соединений могут быть приготовлены виде микронизированных суспензий в изотоническом стерильном физиологическом растворе с установленным рН или, предпочтительно, в виде растворов в изотоническом стерильном физиологическом растворе с установленным рН, возможно в сочетании с консервантом, таким как бензилалкония хлорид. Альтернативно, они могут быть введены в состав мази, такой как вазелин.
Для нанесения местно на кожу агент может быть приготовлен в виде подходящей мази, содержащей активное соединение, суспендированное или растворенное, например, в смеси с одним или более чем одним из следующего: минеральное масло, жидкий вазелин, белый вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен-полиоксипропиленовое соединение, эмульгированный воск и вода. Альтернативно, его можно приготовить в виде подходящего лосьона или крема, суспендируя или растворяя, например, в смеси одного или более чем одного из следующего: минеральное масло, моностеарат сорбита, полиэтиленгликоль, жидкий парафин, полисорбат 60, воск из цетиловых эфиров, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и вода.
Описанные здесь композиции можно вводить с помощью прямой инъекции.
Для некоторых применений агент вводят предпочтительно перорально.
Для некоторых применений агент вводят предпочтительно местно.
Уровни доз
Обычно врач будет определять фактическую дозировку, которая наиболее подходит для индивидуального субъекта. Конкретный уровень доз и частота дозировки для любого конкретного пациента могут варьировать, и будут зависеть от ряда факторов, в том числе от активности конкретного применяемого соединения, метаболической стабильности и длительности действия соединения, от возраста, массы тела, общего состояния здоровья, пола, диеты, вида и времени введения, скорости выведения, комбинации лекарственных средств, тяжести конкретного состояния и индивидуальной терапии. Агент и/или фармацевтическую композицию, описанную здесь, можно вводить в соответствии с режимом от 1 до 10 раз в сутки, например один раз или два раза в сутки.
Для перорального и парентерального введения пациентам-людям суточный уровень дозировки агента может находиться в однократной дозе или раздельных дозах.
В зависимости от потребности агент можно вводить в дозе от 0,01 до 30 мг/кг массы тела, например от 0,1 до 10 мг/кг, более предпочтительно от 0,1 до 1 мг/кг массы тела. Естественно, упомянутые здесь дозировки являются примером среднего случая. Несомненно, могут быть индивидуальные случаи, когда будут предпочтительны более высокие или более низкие диапазоны дозировки.
Препарат
Агент может быть приготовлен в виде фармацевтической композиции, например смешиванием с одним или более чем одним подходящим носителем, разбавителем или эксципиентом по методикам, которые известны в данной области техники.
Ниже представлено несколько не ограничивающих примеров препаратов. Препарат 1: таблетку изготавливают, используя следующие ингредиенты:
масса/мг
Агент 250
Целлюлоза микрокристаллическая 400
Диоксид кремния, белая сажа 10
Стеариновая кислота 5
Всего 665
Эти компоненты смешивают и прессуют для формования таблеток, каждая из которых весит 665 мг.
Препарат 2: внутривенный препарат может быть изготовлен следующим образом:
Агент 100мг
Изотонический физиологический раствор 1000 мл
Фармацевтически активная соль
Агент можно вводить в виде фармацевтически приемлемой соли. Обычно фармацевтически активную соль легко можно получить, используя желаемую кислоту или основание, по обстоятельствам. Эту соль можно осадить из раствора и собрать фильтрованием, или можно выделить ее путем выпаривания растворителя.
Животные контрольные модели
Ιη νίνο модели могут быть использованы для исследования и/или разработки терапии или терапевтических агентов для лечения РПВЖ. Эти модели могут быть использованы для исследования воздействия различных средств/ведущих соединений на ряд параметров, которые указывают на реакцию полово- 29 006254 го возбуждения. Эти животные контрольные модели могут быть использованы как анализ или в анализе, предложенном здесь. Эта животная контрольная модель будет представлять собой не человеческую животную контрольную модель.
В распоряжении имеется ряд животных моделей васкулогенной женской сексуальной дисфункции, которые можно использовать.
Например, можно сделать ссылку на инвазивные животные модели (например см. Рагк с1 а1., 1997). Здесь вагинальную и клиторную гемодинамические реакции можно регистрировать непосредственно после стимуляции тазового нерва у нормальных и атеросклеротических самок кролика. Ιη νίνο эффекты средств, потенцирующих цАМФ можно исследовать либо у нормальных животных, либо у животных с РПВЖ.
В качестве еще одного примера можно сделать ссылку на неинвазивные животные модели (например см. обзор 6о1б81еш с1 а1., 1998; Ьаап с1 а1., 1998). Здесь импульсная волновая ультразвуковая доплеровская эхография обеспечивает средства обнаружения изменений кровотока в вагинальной и клиторной артериях. Эту модель можно использовать для исследования васкулогенных эффектов во время фармакологического введения вазодилататоров.
Другие неинвазивные методики, которые можно использовать, включают в себя вагинальную фотоплетизмографию, которая обеспечивает количественное измерение переполнения кровью слизистой влагалища, и методики вагинального теплового клиренса, которые основаны на том принципе, что изменения вагинального кровотока можно регистрировать путем измерения теплоотдачи от внутривлагалищного зонда, поддерживаемого при постоянной температуре.
Животная модель полового возбуждения
В своих исследованиях авторы изобретения разработали здоровую воспроизводимую модель физиологии полового возбуждения. В этой модели используют анестезированного кролика и применяют лазерные доплеровские технологии для мониторинга генитального кровотока, одновременно рутинно регистрируя сердечно-сосудистые параметры. Авторы изобретения способны измерять малые изменения в вагинальном (а также клиторном) кровотоке, вызванные стимуляцией тазового нерва или инфузией νΐΡ в отсутствие и в присутствии тестируемых агентов.
Авторы изобретения полагают, что их животная модель непосредственно отражает клинические данные. Следовательно, эту модель можно использовать для изучения агентов-кандидатов для лечения РПВЖ, например измеряя усиление вагинального или клиторного кровотока.
Физиологическое измерение полового возбуждения у женщин
Для измерения клиторного и вагинального кровотока можно использовать ряд различных методик. Например, можно использовать вагинальную фотоплетизмографию, методику вагинальной теплоотдачи, МРВ (магнитно-резонансную визуализацию) с повышенной контрастностью клитора и влагалища, импульсную лазерную доплеровскую визуализацию клитора/вульвы и клиторную ультразвуковую эхографию.
Количественно вагинальное смазывание также может быть измерено по методикам, известным в данной области, таким как (а) взвешивание вагинальных тампонов перед и после стимуляции и (б) измерение рН вагинальной жидкости. В отношении последнего аспекта нормальная кислая среда во влагалище в покое становится более щелочной, поскольку она достигает рН крови, когда во время половой стимуляции происходит транссудация жидкости.
ΝΡΥ (нейропептид Υ)
Согласно одному из аспектов настоящего изобретения дополнительная мишень представляет собой ПцАМФ мишень, причем эта ПцАМФ мишень представляет собой ΝΡΥ или один из связывающихся с ним рецепторов.
Нуклеотидные последовательности и аминокислотные последовательности для ΝΡΥ и его рецепторов описаны в литературе. Некоторые последовательности представлены в приведенных здесь Перечнях последовательностей.
Теперь авторы изобретения обнаружили, что нейропептид Υ (ΝΡΥ) оказывает ингибиторное регуляторное влияние на опосредованную вазоактивным интестинальным пептидом (νΐΡ) вазорелаксацию. Следовательно, ингибирование рецепторов ΝΡΥ будет приводить в результате к повышенному опосредованному тазовым нервом и νΐΡ-опосредованному усилению генитального (например вагинального и клиторного) кровотока. Клинически это должно приводить к усилению переполнения кровью влагалища и/или клитора, которое в конечном счете приводит к усилению смазывания посредством транссудации плазмы и повышению вагинальной податливости. Следовательно, подходящей мишенью для лечения РПВЖ является ΝΡΥ или один из связывающихся с ним рецепторов.
Таким образом, в предпочтительном аспекте дополнительная мишень представляет собой ΝΡΥ Υ1 Υ2 или Υ5 антагонист, предпочтительно пероральный ΝΡΥ Υ1 Υ2 или Υ5 антагонист. Этот агент будет лечить РПВЖ посредством усиления генитального (например вагинального или клиторного) кровотока и усиления смазывания.
ΝΡΥ-опосредованный антагонизм νΐΡ-индуцированного усиления кровотока, следовательно, представляет собой потенциальную терапевтическую мишень, посредством которой можно влиять на крово
- 30 006254 ток в женских половых путях. Механизм, по которому возникает этот антагонизм, наиболее вероятно происходит через ΝΡΥ Υ1 рецептор-индуцированную Ο1/ο активацию. Показано, что в других физиологических системах рецепторы ΝΡΥ Υ1 вовлечены в опосредование вазоконстрикции и в ингибирование высвобождения симпатического медиатора (ЪинбЬсгд с1 а1., 1996; эффект ΝΡΥ Υ2 нельзя исключать). Авторы изобретения считают, что в женских половых путях ΝΡΥ ингибирует вазорелаксацию через прямое ингибирование непосредственно ингибируемого аденилатциклазой высвобождения νΐΡ или симпатической нейротрансмиссии.
Как указано, дополнительная ПцАМФ мишень представляет собой один из рецепторов ΝΡΥ.
Нейрональное высвобождение ΝΡΥ регулирует νΐΡ-индуцированную вазорелаксацию вагинального сосудистого ложа. Наиболее вероятно это происходит посредством пресинаптического механизма, в который вовлечены рецепторы ΝΡΥ Υ1, хотя нельзя исключать постсинаптический тип действия. ΝΡΥ антагонист будет потенцировать νΐΡ-индуцированную вазорелаксацию вагинального сосудистого ложа. Клинически это приведет к повышению смазывания и податливости влагалища посредством переполнения кровью стенки влагалища.
В предпринятых исследованиях экспрессии рецептора ΝΡΥ авторы изобретения идентифицировали ΝΡΥ Υ1 Υ2 и Υ5 подтипы рецептора в пределах человеческого влагалища.
Следовательно, в одном аспекте дополнительная ПцАМФ мишень представляет собой один или более чем один из ΝΡΥ Υ1 Υ2 и Υ5 рецепторных подтипов.
Предпосылки по ΝΡΥ и связывающимся с ним рецепторам представлены УюЮг Α. ΜοΚιιζίΚ с1 а1. на 1ιΙρρ://\ν\ν\ν3. ηοΝ.η^.ηίΙι.βον/ϋηιίιη/δοαΓοΙιοιηίιη.ΙιΙιη. Из этого источника извлечен следующий текст, касающийся ΝΡΥ.
«Нейропептид Υ (ΝΡΥ) представляет собой пептид, который имеется в изобилии и широко распространен в нервной системе млекопитающих. Он имеет гомологию последовательности с пептидом ΥΥ и более чем 50% гомологию аминокислотной и нуклеотидной последовательности с панкреатическим полипептидом (ΡΝΡ; 167780). ΝΡΥ представляет собой 36-аминокислотный пептид. Μίηΐΐι с1 а1. (1984) клонировали ген ΝΡΥ, исходя из мРНК феохромоцитомы. ТакеисЫ с1 а1. (1985, 1986) выделили кДНК клоны генов ΝΡΥ и ΡΝΡ из феохромоцитомы и эндокринной опухоли поджелудочной железы, соответственно. Используя эти кДНК зонды для анализа геномной ДНК из панелей сопряжения хромосом соматических клеточных гибридов человек-мышь, они затем исследовали вопрос, являются ли эти гены синтеничными. Эти исследования показали несинтеничность, при этом ΝΡΥ находится на 7р1ег-7с.|22, а ΡΝΡ на 17ρ11.117с|1ег. С помощью исследований возвратного скрещивания с Миз зрге1из Вабагу еί а1. (1991) картировали гомологичный ген ΝΡΥ на мышиной хромосоме 6. Поскольку мышиная хромосома 6 имеет гомологию с человеческой 7ц, вероятно, что ген ΝΡΥ у человека локализован в районе 7ссп-с.|22. МеЫег еί а1. (1987) исключили тесное сцепление между локусами для муковисцидоза (219700) и нейропептида Υ. ТегеидЫ еί а1. (1987) определили распределение мРНК, кодирующей ΝΡΥ, в нейронах коры головного мозга в препаратах хирургических биопсий и посмертного головного мозга с помощью методик ίη зби гибридизации. Они показали совместную локализацию транскрипции и экспрессии гена ΝΡΥ в нормальных зрелых корковых нейронах. Вакег еί а1. (1995) с помощью флуоресцентной ίη κίΐυ гибридизации показали, что ген ΝΡΥ локализован на 7р15.1 и существует в единственной копии. Они высказали мнение, что ΝΡΥ является одним из наиболее высококонсервативных известных пептидов, например с только 3 аминокислотными различиями между человеком и акулой. Нейропептид Υ представляет собой нейромодулятор, вовлеченный в регуляцию энергетического баланса, и его сверхпродуцирование происходит в гипоталамусе мышей ο6/ο6. Чтобы определить роль ΝΡΥ в ответе на недостаток лептина (164160), ΕΓχΚδοη еί а1. (1996) сконструировали мышей ο6/ο6 с недостаточностью ΝΡΥ. В отсутствие ΝΡΥ мыши ο6/ο6 меньше страдали ожирением в связи с меньшим усвоением пищи и повышенным расходом энергии, и были менее подвержены диабету, стерильности и соматотропным дефектам. Эти результаты интерпретировали как указание на то, что ΝΡΥ является центральным эффектором недостаточности лептина. Анализом генетического сцепления у крыс, которых селекционно выводили относительно алкогольного предпочтения, идентифицировали хромосомный район, который включал в себя ген ΝΡΥ (Сагг еί а1., 1998). Крысы, предпочитающие алкоголь, имели низкие уровни ΝΡΥ в нескольких участках головного мозга по сравнению с крысами, не предпочитающими алкоголь. Поэтому Тб1е1е еί а1. (1998) исследовали потребление алкоголя мышами, у которых полностью отсутствовал ΝΡΥ в результате направленного прерывания гена (ΕΓΚ&δοη еί а1., 1996). Они обнаружили, что ΝΡΥ-дефицитные мыши проявляли повышенное по сравнению с мышами дикого типа потребление растворов, содержащих 6%, 10% и 20% (об./об.) этанола. ΝΡΥдефицитные мыши были также менее чувствительны к седативным/снотворным эффектам этанола, что показывало более быстрое пробуждение от индуцированного этанолом сна, даже несмотря на то, что концентрации этанола в плазме не отличались значительно от таковых в контролях. В противоположность этому трансгенные мыши со сверхэкспрессией меченого гена ΝΡΥ в нейронах, в которых он обычно экспрессируется, обладали более низким предпочтением этанола и были более чувствительны к седативным/снотворным эффектам этанола, чем контроли. Эти данные дают прямое свидетельство того, что потребление алкоголя и устойчивость находятся в обратной зависимости от уровней ΝΡΥ в головном мозге. В качестве части продолжающегося исследования генетической основы ожирения Κπτνο^η еί а1.
- 31 006254 (1998) идентифицировали 1128Т-С полиморфизм, который приводил к замене лейцина на пролин в остатке 7 сигнального пептидного участка пре-про-ΝΡΥ. Этот полиморфизм не был связан с ожирением или энергетическим обменом, но был значительно и последовательно связан с высокими сывороточными суммарным и ЛНП (липопротеины низкой плотности) уровнями холестерина как у финнов с нормальным весом и с ожирением, так и у субъектов-датчан с ожирением. Иикбира е! а1. (1998) обнаружили полиморфизм рго7 у 14% финнов, но только у 6% датчан. Субъекты с рго7 в ΝΡΥ имели в среднем на 0,61,4 ммоль/л более высокие уровни суммарного сывороточного холестерина, чем субъекты без этого генного варианта. Поскольку воздействие рго7 ΝΡΥ на уровни сывороточного холестерина можно обнаружить у датчан с нормальным весом, можно принять, что люди с ожирением могут быть более чувствительны к эффекту этого генного варианта. Было вычислено, что вероятность обладания рго7 в ΝΡΥ может составлять от 50% до 60% у субъектов с ожирением при суммарном сывороточном холестерине, равном или выше 8 ммоль/л. По меньшей мере среди финнов рго7 форма ΝΡΥ является одним из сильнейших генетических факторов, влияющих на уровни сывороточного холестерина. См. также А11еп апб В1оот (1986); Эоскгау (1986); Массаггопе апб 1аггой (1986); М1п!к е! а1. (1986).»
Как указано, предпосылки по ΝΡΥ и связывающимся с ним рецепторам представлены Ую!ог А. МсКи/П; е! а1. (там же). Из этого источника извлечен следующий текст, касающийся ΝΡΥΚ1.
«Нейропептид Υ (ΝΡΥ; 162640) является одним из самых обильных нейропептидов в нервной системе млекопитающих и демонстрирует разнообразный диапазон важных физиологических активностей, включая воздействия на психомоторную активность, усвоение пищи, регуляцию центральной эндокринной секреции и сильные вазоактивные воздействия на сердечно-сосудистую систему. Два главных подтипа ΝΡΥ (Υ1 и Υ2) определены по фармакологическим критериям. Рецепторы ΝΡΥ Υ1 идентифицированы в ряде тканей, включая головной мозг, селезенку, тонкий кишечник, почки, семенники, плаценту и гладкую мускулатуру аорты. Υ2 рецептор обнаружен главным образом в центральной нервной системе. Негход е! а1. (1992) сообщили о клонировании кДНК, кодирующей человеческий ΝΡΥ рецептор, который, как они доказали, является членом надсемейства рецепторов, связанных с С белком. При экспрессии в клетках яичника китайского хомячка (СНО) или эмбриональных почек человека этот рецептор демонстрировал характерную лигандную специфичность. В клеточной линии почек этот рецептор связывался с чувствительным к коклюшному токсину С белком, который является посредником ингибирования аккумуляции циклической АМФ. В клеточной линии СНО, с другой стороны, этот рецептор был связан не с ингибированием аденилатциклазы, а скорее с повышением внутриклеточного кальция. Таким образом, вторичный посредник, связывающийся с ΝΡΥ рецептором, был специфичен к клеточному типу в зависимости от конкретного состава С белков и эффекторных систем, присутствующих в этом клеточном типе. Ьагйаттаг е! а1. (1992) независимо клонировали и охарактеризовали рецептор нейропептида Υ. Негход е! а1. (1993) определили молекулярную организацию и регуляцию человеческого гена рецептора ΝΡΥ Υ1. Они обнаружили, что, в противоположность непрерывной структуре большинства генов рецепторов, связывающихся с С белком, ген рецептора ΝΡΥ Υ1 имеет 3 экзона. Они также идентифицировали обычный ΡδΙΙ полиморфизм в первом интроне этого гена. Путем флуоресцентной ш δίΐιι гибридизации высокого разрешения они локализовали этот ген в 4с|31.3-с|32. Негход е! а1. (1997) обнаружили, что гены ΝΡΥ1Κ и ΝΡΥ5Κ (602001) совместно локализованы на хромосоме 4с.|31 -с.|32. Эти 2 гена транскрибируются в противоположных направлениях с общего промоторного района. Один из экзонов альтернативного сплайсинга 5-прим гена Υ1 рецептора является участком кодирующей последовательности Υ5 рецептора. Эта необычная организация позволила Негход е! а1. (1997) предположить, что эти 2 гена образовались в результате события дупликации гена, и что их экспрессия может быть координированной. С помощью межвидового анализа возвратного скрещивания БЮх е! а1. (1997) картировали гены Ыру1г и Ыру2г в консервативных группах сцепления на хромосомах мыши 8 и 3, соответственно, что соответствует дистальному району человеческой хромосомы 4с.|.»
Как указано, предпосылки по ΝΡΥ и связывающимся с ним рецепторам представлены Ую!ог А. МсКих|к е! а1. (там же). Из этого источника извлечен следующий текст, касающийся ΝΡΥΚ2.
«Нейропептид Υ (ΝΡΥ) осуществляет сигнал через семейство рецепторов, связывающихся с С белком, присутствующих в головном мозге и симпатических нейронах. По меньшей мере 3 типа рецепторов нейропептида Υ определены на основе фармакологических критериев, тканевого распределения и структуры кодирующего гена (см. 162641 и 162643). Коке е! а1. (1995) сообщили об экспрессионном клонировании в СО8 клетках кДНК человеческого рецептора типа 2, ΝΡΥ2Κ. Трансфецированные клетки проявляли высокую аффинность к ΝΡΥ (16240), пептиду ΥΥ (ΡΥΥ; 600781) и фрагменту ΝΡΥ, включающему в себя аминокислоты с 13 по 36. Предсказанный 381-аминокислотный пептид имеет 7 трансмембранных доменов, характерных для рецепторов, связывающихся с С белком, и только на 31% идентичен человеческому Υ1 рецептору (ΝΡΥ1Κ; 162641). На Нозерн-блотах образцов ткани из нескольких участков нервной системы обнаружили 4 т.п.о. мРНК. Сега1б е! а1. (1995) клонировали кДНК, соответствующую человеческому Υ2 рецептору из кДНК экспрессирующей библиотеки гиппокампа человека, используя анализ связывания радиоактивно меченого ΡΥΥ. Они экспрессировали ген Υ2 в СО8-7 клетках и осуществили анализ связывания гормона, который показал, что Υ2 рецептор связывает (от самой высокой до самой низкой аффинности) гормоны ΡΥΥ, ΝΡΥ и панкреатический полипептид (РР; 167780). Аттаг е! а1.
- 32 006254 (1996) клонировали и охарактеризовали человеческий ген, кодирующий рецептор ΝΡΥ типа 2. Транскрипт занимает 9 т.п.о. геномной последовательности и кодируется в 2 экзонах. Поскольку в гене ΝΡΥ рецептора типа 1 5-прим нетранслирующий район ΝΡΥ2Κ прерван 4,5 т.п.о. промежуточной последовательности. ΑιηιηαΓ е! а1. (1996) с помощью Саузерн-анализа клеточных гибридов грызун-человек с последующей флуоресцентной ίη зйи гибридизацией (Н8Н) продемонстрировали, что ген ΝΡΥ2Κ картирован в 4с.|31, том же районе, который содержит ген ΝΡΥ1Κ, предполагая, что эти подтипы могли образоваться в результате дупликации гена, несмотря на их структурные различия. С помощью межвидового анализа возвратного скрещивания йи!х е! а1. (1997) картировали гены Кру 1 г и Кру2г в консервативных группах сцепления на хромосомах мыши 8 и 3, соответственно, что соответствует дистальному району человеческой хромосомы 4с.|.»
Анализ для определения, может ли предполагаемый или действительный агент связываться с ΝΡΥ, представлен в \νθ-Α-98/52890 (см. с. 96, строки 2-28 описания изобретения).
Π:ΝΡΥ
Как указано выше, дополнительный агент может представлять собой любой подходящий агент, который может действовать как ^ΝΡΥ (иногда ссылаются как на антагонист ΝΡΥ). Дополнительно или альтернативно, агент по настоящему изобретению также может действовать как ΚΝΡΥ.
ΚΝΡΥ (в частности, антагонисты ΝΡΥ) обсуждаются в следующих обзорных статьях:
Отбор 1, Иозепх\ге1д-Ырзоп 8: Тйегареибс арргоасйез ίο оЬезйу Ехр Ορίη Тйег Га! 1999 8 12 16831694;
Vаηд 8, Регдизоп КС, Виглз ΊΡ, Ойигапбйаг ΝΥ: 81й аппиа1 т!егпа!юпа1 сопГегепсе оп ойезйу апб поптзийп берепбеп! б1айе!ез те11йиз: поуе1 бгид беуе1ортеп!з. Ехр Орт йкез! Огидз 1999 8 7 1117-1125;
Ьтд ΑΚ №игорерйбе Υ гесер!ог ап!адотз!з Ехр Орт Тйег Ба! 1999 9 4 375-384;
Αбйат Ν, Татт 1, Όιι Ρ, Нои С е! а1.: !беп(1Г1са11оп оГ гез1биез туо1уеб т !йе Ьтбтд оГ !йе ап!адотз! 8ΝΑΡ 6608 Го !йе Υ5 гесер!ог 8ос №игозс1 Α^ίτ 1998 24 рай 2 626.9;
8йи ΥΖ, Сийопе 10, К1ойг 8Е, Ниапд 8: ВМ8-192548, а !е!гасус1ю Ьтбтд шЫЬйог оГ пеигорерйбе Υ гесер!огз, Ггот Αзρе^д^11из тдег νΒ2346. II. ?йуз1со-сйет1са1 ргорегЬез апб з!гис!ига1 сйагас!епха!юп 1 ΑπЙио! 1995 48 10 1060-1065;
КгдоШег Ρ, Киедег Н, Vй^ίеЬ^еаб 8, Υатадисй^ Υ, Сй1ез1 М, 8сйШтд V, Спзсюпе Ь: 8уп!йез1з апб 8ΑΚ оГ ССΡ 71683Α, а ро!еп! апб зе1есйуе ап!адотз! оГ пеигорерйбе Υ Υ5 гесер!ог. Ой 8утр Меб Сйет 1998 15* ЕбтЬигдй 239;
Спзсюпе Ь, КгдоШег Ρ, Ва!х1-Наг!тапп С, Киедег Н, 8!пскег-Кгопдагб Α е! а1.: Рооб ир!аке т ГгееГеебтд апб епегду-берпуеб 1еап га!з 1з теб1а!еб Ьу !йе пеигорерйбе Υ5 гесерЮг. 1 Сйп ГОуез! 1998 102 12 2136-2145;
№игодеп Согр: Ν6Ό 95-1 Сйп Тпа1з Мопйог 1996 5 10 ΑЬ 19244;
Вий1е ΕΑ: Αηί^-οЬез^ίу бгидз: оп !агде! Гог йиде тагке! за1ез. Ехр Орт ГОуез! Огидз 1996 5 1215831587;
Сей1ег! ΌΚ, Шрзктб ΡΑ: №игорерйбе Υ гесер!ог ап!адотз!з т оЬезйу. Ехр Орт куез! Огидз 1996 7 9 1827-1838;
Со1бз!ет Ό1, Тгаи!тапп МЕ: Тгеа!теп!з Гог оЬезйу. Етегдтд Огидз 1997 2-1-27;
Шрзктб ΡΑ, ЬоЬЬ КЬ, Мхоп 1Α, Вийоп ТС, Вгипз КР, С.’а!1о\у 1, Э1есктап МсСт!у ΌΚ, Саске пйе1тег 8Ь, С1йег ВО, кепдаг 8, 8сйоЬег ΌΑ е! а1.: Ροίеηί апб зе1есйуе 1,2,3-!пзиЬз!йи!еб тбо1е ΝΡΥ Υ-1 ап!адотз!з. 1 Меб Сйет 1997 40 3712-3714;
Ζ^тте^таη ОМ, Сап!га1 ВЕ, 8тйй ЕСК, Мхоп 1Α, Вгипз КР, С1йег ВО, Шрзктб ΡΑ, Огпз!ет ΡΕ, Ζа^^^ηтауей Н, Впйоп ТС, 8сйоЬег ΌΑ, Сей1ег! ΌΚ: 8йис!иге-асйуйу ге1а!юпз1ирз оГ а зейез оГ 1зпЬз!1!п!еб-4-те!йу1Ьепх1т1бахо1е пеигорерйбе Υ-1 гесер!ог ап!адотз!з Вюогдашс Меб Сйет Ьей 1998 8 5 473-476;
Ζа^^^ηтауей Н, Мтез Α, Огпз!ет ΡΕ, Ζ^тте^таη Ό, Αγ^Μ МВ е! а1.: 8уп!йез1з апб еуа1иабоп оГ а зепез оГ поуе1 2-|(4-сй1огорйепоху)те!йу1|Ьепхтйбахо1ез аз зе1ес!|уе пеигорерйбе Υ Υ1 гесер!ог ап!адотз!з. 1 Меб Сйет 1998 41 2709-2719;
Впйоп ТС, 8ртаххе Ρ& Шрзктб ΡΑ, Ζ^тте^таη ОМ, Ζа^^^ηтауей Н, 8сйоЬег ΌΑ, Сей1ег! ΌΚ, Вгипз КР: 8йис!иге-асйуйу ге1а!юпзЫрз оГ а зепез оГ Ьепхо!йюрйепе-бепуеб ΝΡΥ-Υ1 ап!адотз!з: орйпихайоп оГ !йе С2 з1бе сйат Вюогдашс Меб Сйет Ьей 1999 9 3 475-480;
Ζа^^^ηтауей Н, Ζ^тте^таη ОМ, Сап!ге11 ВЕ, 8сйоЬег ΌΑ, Вгипз КР, Саскепйе1тег 8Ь, Огпз!ет ΡΕ, Шрзктб ΡΑ, Впйоп ТС, Сей1ег! ОК: 8!гис!иге-ас!|уйу ге1айопзЫр оГ а зепез оГ б1атшоа1ку1 зиЬз!йи!еб Ьепхтйбахо1е аз пеигорерйбе Υ Υ1 гесер!ог ап!адотз!з Вюогдашс Меб Сйет Ьей 1999 9 5 647-652;
Мигакат1 Υ, Нага Н, Окаба Т, НазЫхпте Н, Κίί М, кЫйага Υ, [зЫка^а М, М1йага 84, Ка!о С, Напазак1 К, Над1зййа 8, Еирто!о И: 1,3-б1зиЬз!йи!еб Ьепхахертез аз поуе1, ро!еп!, зе1есйуе пеигорерйбе Υ Υ1 гесер!ог ап!адотз!з 1 Меб Сйет 1999 42 14 2621-2632;
Кибо1Г К, ЕЬег1ет V, Епде1 V, V^е1аηб ΗΑ, \νί11ίιη КО, Еп!хегогй М, V^еηеη V, Веск 8юктдег Α& Оообз Н№ Тйе Газ! Ыдй1у ро!еп! апб зе1есбуе поп-рерббе пеигорерйбе Υ Υ1 гесер!ог ап!адотз!: ΒIΒΡ3226 Еиг 1 Патта^ 1994 271 2-3 К11-К13;
- 33 006254
У1е1апб НА, У1Шт ΚΌ, Еп1хегог11 М, У1епеп У, ΕιιάοΙΓ К, ЕЬег1еш У, Епде1 У, Όοοάδ ΗΝ: 8иЬ!уре зе1есйуйу апб аШа^ш^ ргой1е οΓ !Ье гюп-рерйбе пеигорерйбе Υ Υ1 гесерГОг ата^тй: В1ВР3226 1 РЬагтато1 Ехр ТЬег 1995 275 1 143-149;
УпдЬ! 1. Вο1!οη С, Сгезхуе11 М, Οολνπίπβ Ό, Сеο^д^с Ь, НеГпег Т, Ηο6^8 1. МсКегШе Я, У1зе Ь: 8ат^ηο-6-(а^у18и1рЬοη^1)-5-η^ί^ο^и^ηο1^ηе8: гюуе1 гюп-рерббе пеигорерйбе Υ Υ1 гесерГОг аη!адοш8!8 ΕίοοΓдатс Меб СЬет Ьей 1996 6 15 1809-1814;
Сарпгго Ό, Ηι^ο^οΠοίΌ 1Р: ТЬе ^ηνο1νетеη! οΓ пеигорерйбе Υ Υ1 гесерГОго т !Ье Μοο6 ргеззиге ЬагогеПех: 8!иб1е8 \νί11ι В1ВР 3226 апб В1В 3304. Еиг 1 РЬагта^ 1999 376 3 251-255;
^итοη! Υ, Саб1еих А, Όοο68 Н, Ошгоп Я: №\ν Ιοο1δ Ιο шуезйда!е пеигорерйбе Υ гесерГОго т !Ье сеп!га1 апб репрЬега1 пег^из з\з1етз: В1ВО-3304 (Υ1), В11Е-246 (Υ2) апб [1251]-СЯ-231118 (Υ1/Υ4). 8οο №игозс1 АЬзй 1999 25 Рай 1 АЬз 74.11;
Недбе 88, Вοηйаи8 ОУ, 8!ап1еу У, Ед1еп ЯМ, Μοу ТМ, БюеЬ М е! а1: РЬа^тасο1οд^са1 еуа1иа!юп οΓ 1229И91, а ЫдЬ айшйу апб зе1есйуе пеигорерйбе Υ(ΝΓΥ) - Υ1 гесерГОг аηΐадοш8ΐ РЬагта^ Яез 1995 31 190;
МайЬете 1Е, СЬапсе УТ, Спхх1е МК, Неуег Ό, Оаше1з А1: Εοο6 ир!аке шШЬйгоп апб Ьοбу хуеЩЫ кзз ш га!з 1геа1еб \νίθι С1 264879А, ап ΝΓΥ-Υ1 гесерГОг. 8οс №игозс1 АЬзй 1997 23 Р! 2 1346;
Όοο68 НЫ, У1Шт Κ-Ό, 8тИй 81: В1ВР 3226: а зе1есйуе апб ЫдЫу рοΐеηΐ ΝΓΥ-Υ1 аηίадοш8ΐ Ргас Вг РЬагта^ 8οс 1994 13-16 Оес. С47;
Яибο1Γ К, ЕЬег1еш У, Епде1 У, У1е1апб НА, У1Шт ΚΌ, ЕпкегогЬ М, У1епеп У, Веск 81сктдег АС, Όοο68 НМ: ТЬе Пг5( ЫдЫу рοΐеηΐ апб зе1есйуе гюп-рерОбе пеигорерйбе Υ Υ1 гесерГОг аηίадοш8ΐ: В1ВР3226 Еиг 1 РЬагта^ 1994 271 2-3 Я11-Я13;
8еггабеШ-Ье-Са1 С, Vа1ейе С, ЯοиЬу РЕ, Ре11е! А, V^11аηονа С, Εοη1οΐ'ΐ Ь, Ьезру Ь, №11а! С, СЬатЬοη 1Р, МаГГгапб 1Р, Ье-Еиг С: 8Я 12010А апб 8Я120819А: Т\\и рοΐеηΐ апб зе1есйуе, ο^а11у-еΓΓесйνе аηΐадοш8ΐ8 Γογ №У Υ1 гесерГОгз 8οс пентоза АЬзй 1994 20 Р! 1 907 - АЬз 376.14;
^пд Υ, С^едο^ V, Ыпд АЬ, Штр^пз Рοήе^ 1, Отои Т8, Рабегез С, Репд Ζ, Надатап С, Апбегез
К, Ьи1Ып Ό, Мау 1: 8уп1йе515 апб ЬюкдОй еуаЫа!юп οΓ гтоуе1 диапу1игеа сοтрοиηб8 аз рο!еη! ΝΓΥ Υ1 гесеркг аηίадοш8! Асз 1999 217 Апайе1т МЕЭ1 108.
ΜΑΡΥ (в частности Ν₽Υ антагонисты) описаны в следующих документах:
УО-98/07420;
УО-94/00486;
УО-96/22305;
УО-97/20821;
УО-97/20822;
УО-96/14307;
1Р-07267988;
УО-96/12489;
И8-5552422;
УО-98/35957;
УО-96/14307;
УО-94/17035;
ЕР-0614911;
УО-98/40356;
ЕР-0448765;
ЕР-0747356;
УО-98/35941;
УО-97/46250;
ЕР-0747357.
Предпочтительные примеры И: Ν₽Υ выбраны из следующих структур. Эти соединения были испытаны, и было обнаружено, что они полезны в потенцировании цАМФ и поэтому пригодны для лечения РПВЖ. Некоторые экспериментальные данные, касающиеся этих соединений, представлены в экспериментальном разделе (см. ниже).
- 34 006254
Соединение Структура Тип действия Ссылки
Р34 Η.ΝΡΥ Υ1 \АЮ-98/07420 РеТЗ
Е35 ои Η:ΝΡΥ РеГ5
Р36 ОСГИЭ^ХО Μ:ΝΡΥ Υ5 РеГ1,4
Е37 11е-Су8-Рго-Су5-Туг-Агд-1_еи-Агд-Туг-МН2 циклический (2,2’), (4,4’)-дисульфидный димер Η:ΝΡΥ Υ1 №0-94/00486 №0-96/22305 Ре(1,2, 23
Е38 ν П н—С1 ΝΗ3 Η:ΝΡΥ Υ5 №0-97/20821 №0-97/20822 РеП, 3, 6, 7
- 35 006254
Е39 Μ:ΝΡΥ Υ1 ννθ-96/14307 Ρβί 1,8, 9, 10, 11
Р40 Η Ι^ΝΧΝΜ· 0 < ο ΝΗ Χχ<Α Χ-Κ^Ι ОН ΗΝ >Γ тС Ν ΐί ΊΓ ΝΗ, I I Η I Η Η II : ότ °0 ? ° ΥΊι ΗΝ>^° Ο > 0 /ЗС Ь Χχ Η у и Μ:ΝΡΥ Υ1 ΰΡ-07267988 Κθί 1
Е41 уСг^О ΓΎν/Αθ7 чАЛ/\=/ Ι/1:ΝΡΥ Υ1 №0-96/12489 КеГЗ, 12, 13, 14, 15, 16, 17
Е42 ΝΗ, ΤΚ¥θ Μ:ΝΡΥ Υ1 118-5552422 Ее! 17, 18, 19, 20
Е43 % ν< сАлСг'А Ρ1:ΝΡΥ Υ5 №0-98/35957 РеГЗ
- 36 006254
Е44 Сй1га1 (^ЛаД^ И Н Н № > О < Ч Α ^Ν. .ΝΗ, . Т Р Р |/1:ΝΡΥ Υ1 Ке(21,22
Е45 Р о > о \ Η:ΝΡΥ Υ1 ννθ-96/14307 КеТЗ
Р46 Формулу см. в ссылке Η:ΝΡΥΥ1 КеГ24
Е47а С1ига1 3> н № ° но-^^ η νη Υ'Α'ΙΗ Η 2 Μ:ΝΡΥΥ1 №0-94/17035 Κβί3, 17,25, 26
Р47Ь Формулу см. в ссылке Η:ΝΡΥ Υ1 РеГЗ, 12, 13, 14, 15, 16, 17
Е48 ООАу „ %Λ-Ο'υΌ.α О Η:ΝΡΥ Υ1 ΕΡ-0614911 Ρβί 27
Р49 сод? » 0 °сДмн | Ο^-,χΐ Η ХДА о Μ:ΝΡΥ Υ1 ΕΡ-0614911 Κβΐ27
- 37 006254
Р50 ΝΗ 0 ΠθΛΛΓ··0 ^νη Η:ΝΡΥ Υ1 КеГ28
Р51 0 Μ:ΝΡΥ Υ5 \Λ/Ο-98/40356
Е52 Μ:ΝΡΥΥ1 ΕΡ-0448765
Е53 Η /ΟΥΥΎ°Χ О χ-Ц ° ο °ί__ η и Ο ^=7 Н-С1 --- Μ:ΝΡΥΥ1 ΕΡ-0747356
Р54 αλΧΧ ο δΗ сснЯ —Ν Μ.ΝΡΥ Υ1 №0-98/35941
- 38 006254
Е55 оУих. ст - Η:ΝΡΥ Υ5 \/\Ю-97/46250
Е56 н н-α Μ:ΝΡΥΥ1 ΕΡ-0747357
ФДЭ (фосфодиэстераза)
Согласно настоящему изобретению мишень представляет собой ПцАМФ мишень, причем эта ПцАМФ мишень представляет собой ФДЭ (фосфодиэстеразу), которая представляет собой ФДЭ, гидролизующую цАМФ (и возможно гидролизующую цГМФ).
Известно, что циклические нуклеотиды, такие как цАМФ и цГМФ, являются важными внутриклеточными вторичными посредниками. Фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов - иначе известные как ФДЭ - представляют собой семейство ферментов, которые катализируют расщепление циклических нуклеотидов и вследствие этого являются одним из клеточных компонентов, которые регулируют концентрацию циклических нуклеотидов.
В последние годы по меньшей мере семь ФДЭ ферментов (таких как ФДЭ1 - ФДЭ VII), а также множество подтипов этих ферментов, были определены на основе субстратной аффинности и потребности в кофакторах (Веаνο ЙА апй КеИзпуйег ΌΗ, Тгепйз РНагтасо1. 8сг 11:150 [1990]; Веаνο 1 т: сусНс №с1ео11йе РНо8рНой1е81ега8е§: 81гис1иге, Кеди1а1юп апй Пгну Асйоп, Веаνο 1 апй Ноик1еу ΜΌ (Ейк.) \\н1е'у: СЫсНе81ег, рр. 3-15 [1990]).
Примеры ФДЭ включают в себя: ФДЭ1, которая представляет собой Са2+/кальмодулин-зависимую ФДЭ; ФДЭ11, которая представляет собой цАМФ и цГМФ стимулируемую ФДЭ; ФДЭ111, которая представляет собой цГМФ ингибируемую ФДЭ; ФДЭIV, которая представляет собой высоко аффинную цАМФ-специфичную ФДЭ; и ФДЭV, которая представляет собой цГМФ-специфичную ФДЭ. ФДЭ1 и т.д. иногда называют ФДЭ типа I и т.д. или ФДЭ типа 1 и т.д.
Каждое семейство ФДЭ может содержать две или более чем две изоформы (то есть может существовать два или более чем два ФДЭ изофермента). Например, известно, что ФДЭ IV млекопитающих, гомолог гена Пипсе ПгокорНПа (СНеп СN е1 а1., Ргос. №11. Асай. 8сг (и8А) 83:9313 [1986]) имеет четыре изоформы у крысы (8^1ппеп IV е1 а1., Ргос. №11. Асай. 8сг (и8А) 86:5325 [1989]). Известно также, что человеческие ФДЭ встречаются в виде изоформ и имеют варианты сплайсинга. Например, о клонировании одной человеческой изоформы ФДЭ IV из моноцитов сообщали в 1990 (Ι.ίνί ОР е1 а1., Мо1. Се11. Вю., 10:2678 [1990]). В качестве еще одного примера, другие исследователи имеют независимо клонированные три варианта сплайсинга ФДЭ IV, которые в настоящее время обозначены ИРПИУ-ВЕ ИР1)И\'-В2 и НРПЕГУ-В3.
Сведения о фосфодиэстеразах циклических нуклеотидов можно также найти в и8-А-5932423 и υ8А-5932465.
Сведения о еще одной фосфодиэстеразе циклических нуклеотидов, а именно СN РСЭЕ8, можно найти в VО-А-97/35989. СN РСЭЕ8 имеет два изофермента, которые были обозначены как СN РСЭЕ8А и СN РСПЕ8. На термин «изозим» в данной области техники иногда ссылаются как на «изоформу».
Согласно VО-А-97/35989 идентифицированы многие ингибиторы различных ФДЭ, и некоторые получили клиническую оценку. Например, ингибиторы ФДЭШ разрабатывают в качестве противотромботических агентов, в качестве антигипертензивных агентов и в качестве кардиотонических агентов, полезных при лечении застойной сердечной недостаточности. Ролипрам, ингибитор ФДЭШ, применяли при лечении депрессии, а другие ингибиторы ФДЭШ получили клиническую оценку как противовоспалительные агенты. Было показано также, что ролипрам ингибирует индуцируемый липополисахаридами (ЛПС) ФНО-альфа, который, как было показано, способствует репликации ВИЧ-1 ш νίΐΐΌ. Следовательно, ролипрам может ингибировать репликацию ВИЧ-1 (Апде1 е1 а1. 1985 АГО8 9:1137-44). Кроме того, на
- 39 006254 основании его способности подавлять продуцирование ФНО альфа и бета, а также интерферона гамма, показана эффективность ролипрама в лечении энцефаломиелита, экспериментальной животной модели рассеянного склероза (8оттег е! а1., 1995 Ν! Меб 1:244-248) и возможная эффективность при лечении поздней дискинезии (8акак1 е! а1., 1995 Еиг 1 Рйагтасо1 282:71-76).
Согласно \УО-А-97/35989 существует также множество неспецифических ингибиторов ФДЭ, таких как теофиллин, применяемый в лечении бронхиальной астмы и других респираторных заболеваний, и пентоксифиллин, применяемый в лечении перемежающейся хромоты и индуцированного диабетом периферического сосудистого заболевания. Считают, что теофиллин действует на функцию гладкой мускулатуры дыхательных путей, а также в противовоспалительной и иммуномодуляторной функциональной активности в лечении респираторных заболеваний (Ваппег е! а1., 1995 Векрй 1 8:996-1000), где считается, что он действует посредством ингибирования как гидролиза цАМФ СN РЭЕ. так и гидролиза цГМФ (Ваппег е! а1., 1995 Мопа1б1 ЛгсН Сйек! Όίκ 50:286-292). Пентоксифиллин, о котором также известно, что он блокирует продуцирование ФНО-альфа, может ингибировать репликацию ВИЧ-1 (Апде1 е! а1., см. выше). Список ингибиторов СN РИЕ приведен в Веауо 1995, см. выше.
Предполагалось, что избирательные ингибиторы ФДЭ в дополнение к их изозимам и подтипам будут приводить к более эффективной терапии с меньшими побочными эффектами. Например, см. обзоры ^1екйаат ВЕ е! а1. (1. Меб. Сйет., 28:537 [1985]), С|етЬусх МА (Вюсйет. Рйагт., 43:2041 [1992]) и Ьо\\'е 1А апб Сйепд 1В (Игидк о£ !йе Еи!иге, 17:799-807 [1992]).
Таким образом, для некоторых применений желательно иметь избирательное ингибирование индивидуального типа ФДЭ.
Предпосылки по ФДЭ представлены У1с!ог А. МсКик1к е! а1. на й!рр://^^^3. псЫ.п1т.шй.доу/От1т/ кеагсйот1тй!т. Из этого источника извлечена следующая информация, касающаяся ФДЭ11 или цГМФстимулируемой ФДЭ: «Циклические нуклеотиды служат в качестве вторичных посредников, которые опосредуют ряд клеточных ответов на внеклеточные сигналы, такие как гормоны, свет и нейромедиаторы. Фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов (ФДЭ) играют роль в сигнальной трансдукции посредством регуляции клеточной концентрации циклических нуклеотидов. Клетки млекопитающих содержат множество ФДЭ, которые разделены по меньшей мере на 7 семейств на основании их субстратной аффинности и по их избирательной чувствительности к кофакторам и ингибиторным лекарственным средствам. Эти семейства представляют собой: (I) Са2+/кальмодулин-зависимые ФДЭ; (II) цГМФстимулируемые ФДЭ; (III) цГМФ-ингибируемые ФДЭ; (1У) цАМФ-специфичные ФДЭ; (У) цГМФспецифичные ФДЭ; (VI) фоторецепторные ФДЭ; и (VII) высоко аффинные цАМФ-специфичные. Из аминокислотных последовательностей явно видно, что все эти семейства ФДЭ содержат родственный домен, который считают каталитическим доменом, примерно с 30% идентичностью последовательности между семействами. Члены одного и того же семейства имеют более близкое родство; они разделяют от 60 до 80% идентичности последовательности на протяжении всего кодирующего района.
М1сйае1 е! а1. (1993) разработали высокочувствительный функциональный скрининг для выделения кДНК, кодирующих цАМФ фосфодиэстеразы, посредством комплементации дефектов у штамма 8ассйаготусек сегеу1К1ае, у которого отсутствуют оба эндогенных гена цАМФ ФДЭ, ФДЭ1 и ФДЭ2. Три группы кДНК, соответствующие 3 отдельным человеческим генам, кодирующим цАМФ-специфичные ФДЭ, были выделены из кДНК библиотеки глиобластомы человека с использованием этого функционального скрининга. Два из этих генов имели близкое родство с цАМФ-специфичной ФДЭ «бипсе» ИгокорйПа. Третий ген, на который Мюйае1 е! а1. (1993) ссылались как на НСР1, кодировал новую цАМФспецифичную ФДЭ. НСР1 имел аминокислотную последовательность, родственную последовательностям каталитических доменов всех ФДЭ циклических нуклеотидов. Эта ФДЭ представляет собой высоко аффинную цАМФ-специфичную ФДЭ, которая, однако, не разделяет другие свойства цАМФспецифичного семейства ФДЭ. ФДЭ активность НСР1 не была чувствительна к цГМФ или другим ингибиторам цГМФ-ингибируемых ФДЭ. Биохимические и фармакологические свойства НСР1, которая является членом ранее не открытого семейства ФДЭ циклических нуклеотидов, которое было обозначено как семейство УП. предположили Мюйае1 е! а1. (1993). Нозерн-блот-анализ указывал на присутствие высоких уровней НСР1 РНК в скелетной мускулатуре человека.
С помощью Саузерн-блот-анализа соматических гибридных клеточных линий М11а!оуюй е! а1. (1994) картировали локус НСР1 в хромосоме 8; с помощью исследования гибридных соматических клеточных линий, которые содержали различные районы хромосомы 8, они распознали привязку гена к району 8с.|13-с|22. Нап е! а1. (1998) картировали ген РИЕ7А в 8ц13 с помощью флуоресцентной ш кйи гибридизации. С помощью межвидового анализа возвратных скрещиваний они картировали мышиный ген Рбе7А в проксимальном районе хромосомы 3.»
Предпосылки по ФДЭ2 представлены 1епп1£ег Р. Маске е! а1 на 1ирр://\у\у\т3.псЫ.п11п.ш11.доу/О1ппп/ кеагсйот1т.й!т. Из этого источника извлечена следующая информация, касающаяся цГМФстимулируемой ФДЭ2:
«Воктап е! а1. (1997) клонировали кДНК, соответствующую человеческой ФДЭ2А. Этот ген ФДЭ2А кодирует полипептид из 941 аминокислоты с предсказанной молекулярной массой 106 кД. Белковая последовательность на 90% идентична последовательностям бычьей и крысиной ФДЭ2А. Нозерн
- 40 006254 блот-анализ показал, что ФДЭ2А экспрессировался в виде 4,2 т.п.о. мРНК при варьирующих уровнях во всех протестированных тканях человека с самой высокой экспрессией в головном мозге. Исследования экспрессии выявили, что ФДЭ2А гидролизует цАМФ и цГМФ и ингибируется ФДЭ2А-специфичным ингибитором ЕНNА.»
Нуклеотидные последовательности и аминокислотные последовательности для ФДЭ описаны в литературе. Некоторые последовательности представлены в приведенных здесь Перечнях последовательностей.
В одном аспекте ФДЭ мишень выбрана из одного или более чем одного из следующих ФДЭ ферМентов: ФДЭцАМф1, ФДЭцАМФ2, ФДЭцАМФ3, ФДЭцАМФ4, ФДЭцАМФ7 и ФДЭцАМФ8.
В более предпочтительном аспекте ФДЭ мишень выбрана из одного шпу более чем одного из следующих ФДЭ ферментов: ФДЭцАМФ1, ФДЭцАМФ2, ФДЭцАМФ3 и ФДЭцАМФ4.
Предпочтительно для настоящего изобретения ФДЭ для мишени является по меньшей мере ФДЭ2. И:ФДЭ
Как указано выше, дополнительный агент может представлять собой любой подходящий агент, который может действовать как И: ФДЭ. В дополнение или как альтернатива, агент по настоящему изобретению может также действовать как И:ФДЭ.
Примеры И:ФДЭ раскрыты в ЕР-А-091133 и ЕР-А-07711799.
Предпочтительно И: ФДЭ представляет собой И:ФДЭ2. Следовательно, предпочтительными примерами соединений являются те, которые представлены в ЕР-А-0771799.
Для удобства авторы изобретения в данный момент повторяют пункт 1 ЕР-А-0771799: Производное пурин-6-она с общей формулой (I)
где
К1 представляет собой водород, либо нормальный или разветвленный алкил, содержащий до 8 атомов углерода;
К2 представляет собой нормальный или разветвленный ацил, содержащий до 4 атомов углерода, либо нормальный или разветвленный алкил, содержащий до 8 атомов углерода, возможно замещенный гидроксилом, азидо или группой формулы -ΝΚ3Κ4 или -О8О2К5, где
К3 и К4 являются идентичными или различными и представляют собой циклоалкил, содержащий от 3 до 6 атомов углерода, водород, формил, либо нормальный или разветвленный алкил, содержащий до 6 атомов углерода, возможно замещенный нормальным или разветвленным алкокси или алкоксикарбонилом, соответственно содержащими до 6 атомов углерода, либо группой формулы -^ΟΧ-ΝΕ6^, где
А представляет собой число 0 или 1;
К6 и К7 являются идентичными или различными и представляют собой водород, формил, гидроксил, фенил, либо нормальный или разветвленный алкил, содержащий до 6 атомов углерода, возможно замещенный гидроксилом, либо нормальным или разветвленным алкокси, содержащими до 5 атомов углерода; или
К3 и/или К4 представляют собой нормальный или разветвленный алкоксикарбонил, содержащий до 6 атомов углерода, карбоксил, либо нормальный или разветвленный ацил, содержащий до 6 атомов углерода, возможно замещенный гидроксилом, либо нормальным или разветвленным алкокси, содержащим до 4 атомов углерода; или
К3 и/или К4 представляют собой остаток формулы -^ΟΧ-Τ-ΝΗ^9, -СО-К10, -8О2КП или -8О^12К13, где
В имеет значение, данное выше для а, и является идентичным ему или отличным от него;
Т может представлять собой нормальный или разветвленный алкил, содержащий до 5 атомов углерода, или, когда Ь 0, может также представлять собой связь;
К8 и К9 имеют значения, приведенные выше для К6 и К7, и являются идентичными им или отличными от них;
К10 представляет собой насыщенный, частично ненасыщенный или ненасыщенный 5-7-членный гетероцикл, содержащий до 3 гетероатомов, выбранных из 8, N и/или О, который может быть возможно замещен по Ν функции нормальным или разветвленным алкилом, алкокси или алкоксикарбонилом, содержащим до 4 атомов углерода, карбоксилом, бензилоксикарбонилом или гидроксилом;
К11 представляет собой нормальный или разветвленный алкил, содержащий до 5 атомов углерода, бензил или фенил;
- 41 006254
К12 и К13 являются идентичными или разными и представляют собой водород, фенил, либо нормальный или разветвленный алкил, содержащий до 6 атомов углерода; или
К3 и К4 вместе с атомом азота образуют 5- или 6-членный насыщенный, частично ненасыщенный или ненасыщенный гетероцикл, который может содержать до 3 гетероатомов, выбранных из 8, Ν и/или О или остатка -ΝΕ14, и который возможно замещен карбонилом, нормальным или разветвленным алкоксикарбонилом, содержащим до 5 атомов углерода, или нормальным или разветвленным алкилом, содержащим до 5 атомов углерода, который в свою очередь может быть замещен гидроксилом, карбокси или нормальным или разветвленным ацилом, алкокси или алкоксикарбонилом, соответственно содержащими до 6 атомов углерода; где
К14 представляет собой водород, карбонил, либо нормальный или разветвленный алкил или алкоксикарбонил, соответственно содержащие до 5 атомов углерода; и
К5 представляет собой фенил, либо нормальный или разветвленный алкил, содержащий до 5 атомов углерода;
А представляет собой нормальную или разветвленную алкиленовую или алкениленовую цепь, соответственно содержащую до 6 атомов углерода;
Ό и Ь являются идентичными или разными и представляют собой арил, содержащий от 6 до 10 атомов углерода, или 5-7-членный ароматический, возможно бензоконденсированный гетероцикл, содержащий до 3 гетероатомов, выбранных из 8, Ν и/или О, возможно замещенный до 3 раз, идентично или по-разному, галогеном, гидроксилом, нитро, трифторметилом, карбокси, нормальным или разветвленным алкилом, алкокси или алкоксикарбонилом, соответственно содержащими до 6 атомов углерода, или группой формулы -(Ук-КК^К16 и/или -ОК17; где
С представляет собой число 0 или 1;
У представляет собой остаток формулы -СО или -8О2;
К15 ' и К16 являются идентичными или разными и имеют значение, данное для К3 и К4 выше;
К17 представляет собой водород, нормальный или разветвленный алкенил, содержащий до 8 атомов углерода, либо нормальный или разветвленный алкил, содержащий до 8 атомов углерода, возможно замещенный до 3 раз, идентично или по-разному, гидроксилом, карбонилом, либо нормальным или разветвленным алкоксикарбонилом, содержащим до 5 атомов углерода; и/или циклы возможно замещены арилом, содержащим от 6 до 10 атомов углерода, или 5-7-членным ароматическим, возможно бензоконденсированным гетероциклом, содержащим до 3 гетероатомов, выбранных из 8, Ν и/или О, который в свою очередь возможно замещен до двух раз, идентично или по-разному, галогеном, гидроксилом, нитро, карбоксилом, трифторметилом, либо нормальным или разветвленным алкилом, алкокси или алкоксикарбонилом, соответственно содержащими до 5 атомов углерода, или группой формулы -(ν^-ΝΕ^Ε.19; где
Ό имеет значение, данное выше для а, и является идентичным ему или отличным от него;
К18 1 и К19 имеют значения, приведенные выше для К3 и К4, и являются идентичными им или отличными от них;
У' имеет значение, данное выше для У, и является идентичным ему или отличным от него; и/или представляет собой кольцевую систему, данную ниже для Ό, возможно замещенную нормальным или разветвленным ацилом, содержащим до 5 атомов углерода, возможно замещенным гидроксилом, нормальным или разветвленным алкокси, содержащим до 5 атомов углерода, или группой формулы кто 2^о 21
-МК К ; где
21 3 4
К и К являются идентичными или разными и имеют значения, данные выше для К и К ; или
Е представляет собой остаток формулы -ΟΗ2-Υ-Ζ-; где
Υ представляет собой связь или атом кислорода или серы, либо группу -ΝΗ-;
Ζ представляет собой нормальную или разветвленную алкильную цепь, содержащую до 5 атомов углерода;
Ό представляет собой остаток формулы
и его таутомеры и соли.
Предпочтительные И:ФДЭ выбраны из следующих структур:
- 42 006254
Соединение Οτρνκτνοβ Вид действия Ссылки
. Г1а И:ФДЭ1 ЕР-А-0911333 (Пример 50)
Е1Ь ΝΗ, Ν Ч/ он И:ФДЭ2 ΕΗΝΑ (также ингибитор аденозиндезаминазы)
Я1 ОМе О МеО’хК. ηνι>4^Ν λΓ-λ О И:ФДЭ2 ЕР-А-0771799 (Пример 100)
ЯП Лк ОН И:ФДЭЗ Милринон (который имеется в продаже)
Είν 0О Μβ°γ=Κ О И:ФДЭ4 Ролипрам (который имеется в продаже)
НЭП (нейтральная эндопептидаза)
Согласно одному из аспектов настоящего изобретения дополнительная мишень представляет собой мишень ПцаМФ, причем эта мишень ПцаМФ представляет собой НЭП.
Нуклеотидные последовательности и аминокислотные последовательности НЭП описаны в литературе. Некоторые последовательности представлены в прилагаемых здесь перечнях последовательностей.
В одном аспекте НЭП представляет собой НЭП (ЕС 3.4.24.11) (известную также как энкефалиназа или эндопептидаза-2). Сейчас авторы изобретения обнаружили мРНК НЭП ЕС 3.4.24.11 и экспрессируемый белок во влагалище человека и кролика.
Здесь авторы изобретения полагают, что у женщин, включая тех, которые страдают РПВЖ, νΐΡ расщепляется посредством НЭП ЕС 3.4.24.11. Следовательно, ингибиторы НЭП должны потенцировать эндогенный вазорелаксирующий эффект νΐΡ, высвобождаемого во время возбуждения. Это должно привести к лечению РПВЖ, например посредством усиления переполнения кровью влагалища. Авторы изобретения показали, что избирательные ингибиторы НЭП ЕС 3.4.24.11 способствуют νΐΡиндуцированному усилению генитального (например вагинального или клиторного) кровотока при стимуляции тазового нерва. Кроме того, эти избирательные ингибиторы НЭП усиливают опосредованную νΐΡ и нервом релаксацию изолированной стенки влагалища.
Предпосылки по НЭП представлены νΐοΐοΓ А. МсКиык с! а1. на Ιιίρρ://\ν\ν\ν3 лсЫ .ηΐηι .ηίΐι.^,ον/ От1т/8еагскот1т.Ъ1т. Из этого источника извлечена следующая информация, касающаяся НЭП:
«Антиген общего острого лимфолейкоза (АООЛЛ) является важным маркером клеточной поверхности в диагностике острого лимфолейкоза у человека (ОЛЛ). Он присутствует на лейкозных клетках пре-В фенотипа, которые представляют 85% случаев ОЛЛ. АООЛЛ, однако, не ограничен лейкозными
- 43 006254 клетками и обнаруживается в ряде нормальных тканей. АООЛЛ представляет собой гликопротеин, который особенно представлен в почках, где он присутствует на щеточной каемке проксимальных почечных канальцев и на гломерулярном эпителии. Йе1аг1е е1 а1. (1988) клонировали кДНК, кодирующую АООЛЛ, и показали, что аминокислотная последовательность, выведенная на основании «ДНК последовательности, является идентичной последовательности мембрано-связанной нейтральной эндопептидазы человека (НЭП: ЕС 3.4.24.11), известной также как энкефалиназа. НЭП расщепляет пептиды по амино-стороне гидрофобных остатков и инактивирует некоторые пептидные гормоны, включая глюкагон, энкефалины, вещество Р, нейротензин, окситоцин и брадикинин. С помощью трансфекционного анализа кДНК 8й1рр е1 а1. (1989) подтвердили, что АООЛЛ представляет собой функциональную нейтральную эндопептидазу типа, который ранее был назван энкефалиназой. Вагкег е1 а1. (1989) продемонстрировали, что ген АООЛЛ, который кодирует 100 кД трансмембранный гликопротеин типа ΙΙ, существует в единственной копии более чем 45 т.п.о., которая не претерпевает перестройку в злокачественных опухолях, экспрессирующих АООЛЛ клеточной поверхности. Этот ген локализован на хромосоме 3 человека при исследовании гибридов соматических клеток и т кйи гибридизацией районирован в положении 3с|21-с.|27. ТгапРа1егкоп е1 а1. (1989) также привязали этот ген к хромосоме 3 при Саузерн-блот-анализе ДНК из гибридов соматических клеток человека и грызунов. Ц'Айапйо е1 а1. (1989) продемонстрировали, что ген АООЛЛ распространяется более чем на 80 т.п.о. и состоит из 24 экзонов.»
И:НЭП
Как указано выше, дополнительный агент может представлять собой любой подходящий агент, который может действовать как И:НЭП. Дополнительно или альтернативно агент по настоящему изобретению может также действовать как И:НЭП.
Детали по подходящей системе анализа для идентификации и/или исследования И:НЭП представлены в следующем разделе.
И: НЭП обсуждается в следующих обзорных статьях:
Ра!йо1. Вю1.,46(3), 1998, 191;
Сиггеп! Рйагт. Цеыдп, 2(5), 1996, 443;
Вюсйет. 8ос. Тгапк., 21(3), 1993, 678;
Напййоок Ехр. Рйагтасой, 104/1, 1993, 5474
Т1Р8, 11, 1990,245;
Рйагтасой Кеу., 45(1), 1993, 87;
Сигг. Орт. 1пуек. Цгидк, 2(11), 1993, 1175;
Апййурейепк. Цгидк, (1997), 113;
Сйет1гас1к, (1997), 10(11), 804;
2шс Ме1а11орго1еакек Неайй ЦБ. (1996), 105;
СагШоуакс. Цгид Кеу., (1996), 14(2), 166;
Сеп. Рйагтасой, (1996), 27(4), 581;
СагШоуакс. Цгид Кеу., (1994), 12(4), 271;
Сйп. Ехр. Рйагтасой Рйукюй, (1995), 2291), 63;
СагШоуакс. Цгид Кеу., (1991), 9(3), 285;
Ехр. Орт. Тйег. Ра1еп1к (1996), 6(11), 1147;
И: НЭП описаны в следующих документах:
ЕР-509442А;
И8-192435;
И8-4929641; ЕР-599444В; И8-884664;
ЕР-544620А;
И8-798684;
1. МеФСйет. 1993, 3821; Сиси1айоп 1993, 88(4), 1; ЕР-136883;
ЙР-85136554;
И8-4722810;
Сигг. Рйагт. Цеыдп, 1996, 2, 443;
ЕР-640594;
1. МеФСйет. 1993, 36(1), 87;
ЕР-738711-А;
ЙР-270957;
СА8# 115406-23-0;
ЦЕ-19510566;
ЦЕ-19638020;
ЕР-830863;
- 44 006254
ЕР-98101565;
ЕР-733642;
УО-9614293;
ЕР-08245609;
ЕР-96245609;
УО-9415908;
ЕР-05092948;
УО-9309101;
УО-9109840;
ЕР-519738;
ЕР-690070;
Е Меб. СНет. (1993), 36, 2420;
ЕР-95157459;
Вюогд. Меб. СНет. Ье!!к., 1996, 6(1), 65.
Предпочтительные И:НЭП описаны в следующих документах:
ЕР-А-0274234;
ЕР-88165353;
ВюсНеш. ВюрНук. Кек. Сотт., 1989, 164, 58;
ЕР-629627-А;
И8-77978;
Регкрес!. Меб. СНет. 91993, 45.
ЕР-358398-В.
Предпочтительные примеры И:НЭП выбраны из следующих структур:
Соединение Структура Вид действия Ссылки
ΕΧΙΙ Ме 0'^3- И:НЭП ЕР-509442А и8-192435 118-4929641
ΡΧ1ΙΙ но2с—к И:НЭП (также ингибитор АПФ) ЕР-599444В и8-884664
ΕΧΐν с°=н 0 ° οΛνΑ он И:НЭП ЕР-544620А и8-798684 б. Мед. СЬет. 1993, 3821.
ΕΧν Ме Н •«’-ы ° 1 ^Ме но2с И:НЭП (также ингибитор АПФ) Миксанприл С|гси1а1юп 1993, 88(4). 1.
- 45 006254
ΕΧνί [Η 0 И:НЭП ЕР-136883 ЛР-85136554 118-4722810
ΕΧνίΙ «α ο ο Η5^ΛνΑΑοη Η И.НЭП Ретротиорфан Сигг.РКагт.Эе81дп, 1996, 2, 443.
ΕΧνίΙΙ ч 0 / N Α>να 0 С02Н И:НЭП (также ингибитор АПФ) ЕР-640594
ΕΧΙΧ Λ 1 Λ И:НЭП 1 Мед. СЬет. 1993, 36(1), 87.
ΡΧΧ СРЛ-сон ΗΝ С°’Н 0 И:НЭП (также ингибитор АПФ) ЕР-738711-А ΰΡ-270957
ΡΧΧΙ <λ 9 ? ί> Γ ηουλ-νίΤ|ϊ%-οη Ο Ο Μ 0 И:НЭП САЗ # 115406-23-0
ΡΧΧΙΙ ..ίςυ 0 Η ><Х_С0.Е( И.НЭП (также ингибитор ЕСЕ) ЭЕ-19510566 ЭЕ-19638020 ЕР-830863 ϋΡ-98101565 I
- 46 006254
ΕΧΧΙΙΙ θΊΟ но Ν 0 Ο ΗΟ,ε-7 ИгНЭП (также ингибитор ЕСЕ) ЕР-733642
ΕΧΧΐν о» Ан 9 ο ο и-.нэп №096/14293
ΕΧΧν Ан 9 ΗΟγ^.ΝγΝ_ζΧΟΗ ° ° И:НЭП ΰΡ-08245609 ΰΡ-96245609
ΕΧΧνί Ηθ.ΝΚ><γ.Ν^εο2Η Η Ο И.НЭП №09415908
ΕΧΧνίΙ ο ο Ύ'4' ΗΟί-^Ά°.» И:НЭП ΰΡ05092948
ΕΧΧνίΙΙ Ο Ν'Ν '-со.н И.НЭП №0-9309101
ΕΧΧΙΧ о со2н И:НЭП №0-9109840
- 47 006254
ΕΧΧΧΙ И:НЭП ЕР-519738 ЕР-690070
ΡΧΧΧΙΙ но2с θ°ΎΝΛΪ (У н и-.нэп (также ингибитор АПФ) Меб. СЬет. (1993), 36, 2420.
ΕΧΧΧΙΙΙ о о И.НЭП 6Р-95157459 Вюогд. Меб. СЬет. Ьейз., 1996, 6(1), 65.
Более предпочтительные И:НЭП выбраны из следующих структур:
Соединение Структура Вид действия Ссылки
ρν о И.НЭП ЕР-А-0274234 (Пример 300)
ρνι И:НЭП ЕР-А-0274234 (Пример 379)
ρνιι ОМе 0 ° : он И.НЭП Кандоксатрилат ЕР-274234 ΰΡ-88165353 Вюсбет. ΒϊορΚγε. Кез.
- 48 006254
Сотт., 1989, 164, 58.
ρνιιι 9 9°гн ° ( ^δΗ И:НЭП Омапатрилат (также ингибитор АПФ) ЕР-0629627-А 1)8-77978
нх ΝΗ5Ο2Μβ 0 он И:НЭП Сампатрилат (также ингибитор АПФ) РегзресЕ Мед. СКет. (1993), 45. ЕР-0358398-В
ЕХ Ме Эх V п но Гн НОЛ /ρ'νΛΥν<εΧ кЛо он со,н ΝΗ но Ьн И:НЭП Фосфорамидон (который имеется в продаже)
ΕΧΙ И:НЭП Тиорфан (который имеется в продаже)
Более предпочтительные И: НЭП выбраны из следующих структур:
СОЕДИНЕНИЕ СТРУКТУРА
Е57 н’с-о I г
Н°хА I
н О и к 0
- 49 006254
- 50 006254
Е62 О =₽ но э
ноД Н3с X
Е63
°ч о I Л ____N 1У Л
А о N Н 5 снэ
/ Н3С
Е64 о II о и Ди
“X Д II ι. и
1 нэс
Е65 о л о И
Х[ ,Ν. 11
1 V Н3С __/
Е66 н3с с )
но— Д г‘ \сн2)пу
о
(1с)
Эти соединения были получены по методикам, представленным в экспериментальном разделе (см. ниже). Эти соединения тестировали в качестве агентов и обнаружили, что они пригодны для потенцирования цАМФ и, следовательно, пригодны для лечения РПВЖ. Некоторые из экспериментальных данных, касающихся этих соединений, представлены в Экспериментальном разделе (см. ниже).
Анализ НЭП
Получение и анализ растворимой нейтральной эндопептидазы (НЭП) из коркового вещества почки собаки, крысы, кролика и человека
Растворимую НЭП получают из коркового вещества почки и анализируют активность путем измерения скорости расщепления субстрата НЭП А^-О-Агд-Агд-Ьеи-ЕППпр с образованием его флуоресцентного продукта АЬ7-0-Агд-Агд.
- 51 006254
Экспериментальная методика
1. Материалы.
Вся вода дважды деионизирована.
1.1. Ткани.
Почка человека 11АМ (Регюзукаша. И.8.А.).
Почка крысы.
Почка кролика.
Почка собаки.
1.2. Среда для гомогенизации.
100 мМ Маннит и 20 мМ Трис @ рН 7,1.
2,42 г Трис (Р1зкег Т/Р630/60) разводят в 1 л воды и доводят рН до 7,1, используя 6М НС1 при комнатной температуре. К этому добавляют 18,22 г маннита (81дта М-9546).
1.3. Трис буфер (НЭП буфер).
мл 50 мМ Трис рН 7,4 (81дта Т2663) разводят в 950 мл воды.
1.4. Субстрат (АЫ-Э-Агд-Агд-Реи-ЕООпр).
Получают по заказу от 8ΝΓΕ и хранят в виде порошка при -20°С. 2 мМ исходный раствор готовят мягким ресуспендированием субстрата в Трис-буфере. Его не следует перемешивать на вортексе или подвергать обработке ультразвуком.
600 мкл аликвоты этого 2 мМ исходного раствора хранят при -20°С до одного месяца (Мебе1гоз, М.А.8., Рн-теа, М.8.Р. е! а1., (1997) ВшОт 1οιΐΓηα1 ο£ Меб1са1 αη6 Вюкдк^ Кезеагск, 30, 1157-1162).
1.5. Суммарный продукт.
Образцы, соответствующие 100% превращению субстрата в продукт, включают в планшет, чтобы обеспечить определение % превращения субстрата. Суммарный продукт образуется при инкубации 1 мл 2 мМ субстрата с 20 мкл исходного раствора фермента в течение 24 ч при 37°С.
1.6. Стоп-раствор.
Готовят 300 мкМ исходный раствор фосфорамидона (81дта К7385) в НЭП буфере и хранят аликвотами по 50 мкл при -20°С.
1.7. Диметилсульфоксид (ДМСО).
1.8. Хлорид магния - МдС12.6Н2О (Р|зНег М0600/53).
1.9. Черные 96-луночные плоскодонные аналитические планшеты (Соз1аг 3915).
1.10. %рзеа1 А (Раскагб 6005185).
1.11. Центрифужные пробирки.
2. Специальное оборудование.
2.1. Центрифуга 8οΓνα11 КС-5В (ротор 8834 С8А, предварительно охлажденный до 4°С).
2.2. Миксер мини-гомогенизатор Винт.
2.3. Центрифуга Βесктаη С8-6К.
2.4. РкюзЕп да1аху.
2.5. Встряхивающий инкубатор ХУезЬаП 1589. 3. МЕТОДЫ
3.1. Получение препарата ткани
3.2. НЭП собаки, крысы, кролика и человека получают из коркового вещества почки, используя адаптированный способ по Βοο(11. А.С. & Кеипу, АЭ. (1974) Вюскет. 1. 142, 575-581.
3.3. Замороженным почкам дают оттаять при комнатной температуре, и корковое вещество отрезают от мозгового слоя.
3.4. Корковое вещество мелко нарезают и гомогенизируют примерно в 10 объемах буфера для гомогенизации (1.2), используя мини-гомогенизатор Виши (2.2).
3.5. К гомогенату добавляют хлорид магния (1.8) (20,3 мг/г ткани) и перемешивают в ледяной бане в течение 15 мин.
3.6. Гомогенат центрифугируют при 1500 х д (3820 об/мин) в течение 12 мин в центрифуге Вескт-η (2.3), после чего супернатант переносят в чистую центрифужную пробирку, а осадок отбрасывают.
3.7. Супернатант центрифугируют при 15000 х д (12100 об/мин) в течение 12 мин в центрифуге 8οτνη11 (2.1), и супернатант отбрасывают.
3.8. Бледно-розовый слой на поверхности оставшегося осадка снимают и ресуспендируют в буфере для гомогенизации, содержащем хлорид магния (9 мг МдС12 в 5 мл буфера на 1 г ткани).
3.9. Эту суспензию центрифугируют при 2200 х д (4630 об/мин) в течение 12 мин в центрифуге Весктам (2.3), и осадок отбрасывают.
3.10. Супернатант центрифугируют при 15000 х д (12100 об/мин) в течение 12 мин, используя центрифугу 8οΓνα11 (2.1), и супернатант отбрасывают.
3.11. Конечный остаток ресуспендируют в буфере для гомогенизации, содержащем хлорид магния (0,9 мг МдС12 в 0,5 мл буфера на 1 г ткани). Однородную суспензию получают, используя минигомогенизатор Виши (2.2). Затем ее замораживают в 100 мкл аликвотах, чтобы анализировать на активность НЭП.
4. Определение активности НЭП.
- 52 006254
Активность НЭП, предварительно разделенной на аликвоты, измеряют по ее способности расщеплять специфичный для НЭП пептидный субстрат.
4.1. Готовят 4% раствор ДМСО/НЭП буфер (4 мл ДМСО в 96 мл НЭП буфера).
4.2. Концентрированные растворы субстрата, суммарного продукта, фермента и фосфорамидона оставляют на льду до оттаивания.
4.3. В каждую лунку добавляют 50 мкл 4% раствора ДМСО/НЭП буфер.
4.4. 2 мМ концентрированный раствор субстрата разводят 1:40 с получением 50 мкМ раствора. В каждую лунку добавляют 100 мкл 50 мкМ субстрата (конечная концентрация 25 мкМ).
4.5. Для инициации реакции добавляют 50 мкл серии разведений фермента (обычно используют 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600 и 1:3200). В чистые лунки добавляют 50 мкл НЭП буфера.
4.6. 2 мМ суммарный продукт разводят 1:80 с получением 25 мкМ раствора. В первые четыре лунки нового планшета добавляют 200 мкл 25 мкМ продукта.
4.7. Планшеты инкубируют при 37°С во встряхивающем инкубаторе в течение 60 минут.
4.8. 300 мкМ исходный раствор фосфорамидона разводят 1:1000 до 300 нМ. Реакцию останавливают добавлением 100 мкл 300 нМ фосфорамидона и инкубируют при 37°С во встряхивающем инкубаторе в течение 20 минут до появления красного цвета на Е1иог81аг (ех320/ет420).
5. Анализы на ингибирование НЭП.
5.1. Исходные растворы субстрата, суммарного продукта, фермента и фосфорамидона оставляют на льду до оттаивания.
5.2. Готовят исходные растворы соединения в 100% ДМСО и разводят 1:25 в НЭП буфере с получением 4% ДМСО раствора. Все дальнейшие разведения осуществляют в 4% ДМСО растворе (4 мл ДМСО в 96 мл НЭП буфера).
5.3. В 96-луночный планшет добавляют 50 мкл соединения в двух повторах и 50 мкл 4% ДМСО/НЭП буфера в контрольную и чистую лунки.
5.4. 2 мМ исходный раствор субстрата разводят 1:40 в НЭП буфере с получением 50 мкМ раствора (275 мкл 2 мМ субстрата на 10,73 мл буфера достаточно для 1 планшета).
5.5. Исходный раствор фермента разводят в НЭП буфере (определено из проверок на активность).
5.6. 2 мМ суммарный продукт разводят 1:80 в НЭП буфере с получением 25 мкМ раствора. В первые четыре лунки отдельного планшета добавляют 200 мкл.
5.7. 300 мкМ исходный раствор фосфорамидона разводят 1:1000 с получением 300 нМ раствора (11 мкл фосфорамидона на 10,99 мл НЭП буфера).
5.8. В каждую лунку 96-луночного планшета добавляют следующее:
Таблица реагентов, которые добавляют в 96-луночный планшет
Соединение/ДМСО Трис буфер Субстрат НЭП фермент Суммарный продукт
Образцы 2 мкл соединения 50 мкл 100 мкл 50 мкл Нет
Контроли 2 мкл ДМСО 50 мкл 100 мкл 50 мкл Нет
Чистые контроли 2 мкл ДМСО 100 мкл 100 мкл Нет Нет
Суммарные 2 мкл ДМСО нет Нет Нет 200 мкл
5.9. Реакцию инициируют добавлением НЭП фермента, а затем инкубируют при 37°С в течение 1 часа во встряхивающем инкубаторе.
5.10. Реакцию останавливают 100 мкл 300 нМ фосфорамидона и инкубируют при 37°С во встряхивающем инкубаторе в течение 20 минут до появления красного цвета на Е1иог81аг (ех320/ет420).
6. Вычисления.
Активность НЭП фермента определяют в присутствии и в отсутствие соединения и выражают в процентах.
Контрольная активность в % (превращение фермента):
Средняя ЕЙ контролей - средняя ЕЙ чистых контролей -------------------------------------------------------------------------- х100;
Средняя ЕЙ суммарных - средняя ЕЙ чистых контролей
Активность с ингибитором в %:
Средняя ЕЙ соединения - средняя ЕЙ чистых контролей ------------------------------------------------------------------------- х100;
Средняя ЕЙ суммарных - средняя ЕЙ чистых контролей
- 53 006254
Активность, выраженная в % от контроля:
Активность с ингибитором в %
------------------------------------------ х100.
Контрольная активность в %
Сигмоидальная кривая доза-ответ соответствует % активностям (% от контроля) против концентрации соединения, и значения 1С50 вычисляют, используя ЬаЬ81а!к кривые соответствия в Ехсе1.
νΐΡ (вазоактивный интестинальный пептид).
Согласно одному из аспектов настоящего изобретения дополнительная мишень представляет собой ПцАМФ мишень, причем эта ПцАМФ мишень представляет собой νΐΡ или один из связывающихся с ним рецепторов. В современной классификации/номенклатуре на них ссылаются как на ΥΡΑΟ, VΡАС2 и РАСАР.
Нуклеотидные последовательности и аминокислотные последовательности для νΐΡ и его рецепторов описаны в литературе. Некоторые последовательности представлены в приведенных здесь Перечнях последовательностей.
Авторы изобретения показали, что νΡΑΟ и VΡΑС2 присутствуют во влагалище человека и кролика. РАСАР отсутствовал во влагалище как кролика, так и человека.
νΐΡ является главным эндогенным нейромедиатором, высвобождаемым во время полового возбуждения, который ответственен за индуцированную нервом вагинальную вазодилатацию сосудистого ложа, расположенного в стенке влагалища. Эти сосудорасширяющие эффекты опосредованы активацией аденилатциклазы и продуцированием цАМФ. Если не ограничиваться теорией, этот эффект может быть опосредован через рецепторные подтипы ΥΡΑ^, νΡΑ^ или РАСАР (пептид, активируемый гипофизарной аденилатциклазой) рецепторов νΐΡ. Рецепторы νΡΑ^ и РАСАР наиболее широко экспрессируются в ЦНС, и эти рецепторы, несмотря на то, что они экспрессируются в гипофизе, по-видимому, не имеют широко распространенной биологической функции.
Агент может потенцировать νΐΡ и/или действовать как миметик νΐΡ или его аналог. Этот агент будет, таким образом, потенцировать и/или повторять вазорелаксирующие эффекты эндогенного νΐΡ, высвобождаемого во время полового возбуждения. Этот агент может также иметь аддитивный эффект на νΐΡ-индуцированную релаксацию гладкой мускулатуры влагалища. Клинически это приведет к лечению РПВЖ, хотя бы усилением смазывания влагалища посредством переполнения кровью и податливости стенки влагалища. В этом воплощении миметик или аналог не будут обладать, однако, вредными свойствами νΐΡ, которые обсуждались выше.
Предпосылки по νΐΡ и связывающимся с ним рецепторам представлены Мс!ог Α. МсКи/П; е! а1. на 1ирр://\у\у\у3.псЫ.п1т.ш11.доу/От1т/кеагс1ютпп.1ит. Из этого источника извлечен следующий текст, касающийся νΐΡ.
«Вазоактивный интестинальный пептид (νΐΡ), 28-аминокислотный пептид, исходно выделенный из двенадцатиперстной кишки свиньи, присутствует не только в желудочно-кишечных тканях, но также в нервных тканях, возможно в качестве нейромедиатора, и оказывает разнообразные биологические действия. Поскольку νΐΡ имеет сходство с глюкагоном, секретином и желудочным ингибиторным пептидом (ΌΐΡ). его считают членом семейства глюкагона-секретина. Первичный продукт трансляции мРНК, кодирующей νΐΡ (препро-νΐΡ), имеет молекулярную массу 20 дальтон. В результате клонирования ДНК последовательности, комплементарной мРНК, кодирующей человеческий νΐΡ, 1!оН е! а1. (1983) обнаружили, что предшественник νΐΡ содержит не только νΐΡ, но также новый пептид из 27 аминокислот, обозначенный РНМ27, который имеет аминотерминальный гистидин и карбокситерминальный метионин. Он отличается от ΡΗΐ17, выделенного из кишечника свиньи, на 2 аминокислоты; ΡΗΐ27 как указано в его обозначении, имеет карбокситерминальный изолейцин. Ыпбег е! а1. (1987) выделили человеческий ген νΐΡ и РНМ27 и исследовали его экспрессию в различных тканях крысы. Нетх-Епап е! а1. (1985) высказали предположение, что недостаточное обновление потовых желез у пациентов с муковисцидозом посредством νΐΡ нейропептида может быть основным механизмом пониженного содержания воды и относительной непроницаемости эпителия для ионов хлора и других ионов, что характеризует муковисцидоз. Чтобы проверить эту гипотезу, Сохек е! а1. (1987) предприняли подход «кандидатного гена». Вобпег е! а1. (1985) показали, что νΐΡ и РНМ-27 кодируются смежными экзонами. Сохек е! а1. (1987) использовали кодирующий РНМ-27 геномный фрагмент, чтобы обнаружить присутствие гена νΐΡ на 6с|21-с.]1ег. Таким образом, они исключили дефектный ген νΐΡ как кандидат для первичной причины муковисцидоза (который кодируется хромосомой 7). С помощью методик ш кйи гибридизации Сохек е! а1. (1987) привязали ген νΐΡ к 6с.|24. Таким образом νΐΡ поместили в район МУВ (189990), который картирован на 6с.|22. Сохек е! а1. (1987) исследовали функциональные взаимоотношения между 2 генами в нервной ткани. Они наблюдали острый пик мРНК М¥В в гиппокампе 3-суточных крыс, предшествующий пику мРНК νΐΡ, который появляется в этой области в возрасте 8 суток. Отагу апб КадпоГГ (1987) обнаружили ядерные рецепторы νΐΡ в клеточной линии аденокарциномы толстой кишки человека. Со!оН е! а1. (1988) привязали νΐΡ к хромосоме 6 посредством спот-блот гибридизации молекулярно-клонированного фрагмента
- 54 006254 этого гена с отсортированными хромосомами. Локализацию уточнили как 6с.]26-с|27 с помощью ш 811и гибридизации.»
Как указано, предпосылки по УТ и связывающимся с ним рецепторам представлены Ую1ог А. МсКи/|к е1 а1 на Н!рр://\у\у\у3. ηсЬ^.η1т.η^Н.дον/От^т/8еа^сНοт^т.Н1т. Из этого источника извлечен следующий текст, касающийся УТР.
«Вазоактивный интестинальный пептид (VI?; 192320) представляет собой октакозамерный нейроэндокринный медиатор, обнаруживаемый преимущественно в холинергических пресинаптических нейронах центральной нервной системы и в периферических пептидергических нейронах, иннервирующих различные ткани. Среди многих нейроэндокринных пептидов с иммунологическими функциями '1Р выделяется своей способностью непосредственно воздействовать как на В-клетки, так и на Т-клетки. Отдельные подгруппы нервных, респираторных, желудочно-кишечных и иммунных клеток несут специфичные высоко аффинные рецепторы для '1Р, которые связаны с гуанидиннуклеотид-связывающим (О) белком, способным активировать аденилатциклазу. Ь1Ьег1 е1 а1. (1991) получили 4 новых рецептора из семейства рецепторов, связывающихся с О белком, с помощью избирательной амплификации и клонирования из кДНК щитовидной железы. Один из них, названный КИС1, 81геейНагап е1 а1. (1991) идентифицировали как рецептор ΆΓ. ЫЬей е1 а1. (1991) картировали ген ΥΤΕ в 2с|37 с помощью ш 811и гибридизации. Более поздняя информация поставила под сомнение, что ген, картированный в 2с.]37, в действительности является рецепторным геном 'Р ('а88аг1, 1992). Хепдег (1993) обнаружил, что последовательность, которая была обозначена как СРРЮ 8геейНагап е1 а1. (1991) и картирована в 2с.|37, не связывает 'Ш. 8геейНагап е1 а1. (1995) выделили ген рецептора 'Р аутентичного типа I и посредством ш 811и гибридизации локализовали его в диске 3р22 в районе, связанном с мелкоклеточным раком легкого. С помощью межвидового анализа возвратного скрещивания На8Ыто1о е1 а1. (1999) картировали мышиный ген VIРН1 в дистальном районе хромосомы 9, районе, который проявляет гомологию синтении с человеческой хромосомой 3р. 8гееййагап е1 а1. (1993) клонировали человеческий ген интестинального рецептора '1Р; выведенная аминокислотная последовательность имеет 84% идентичность с крысиным легочным рецептором 'Ш. Со^шеаи е1 а1. (1994) выделили 2 кДНК клона ΥΤΕ из кДНК библиотеки человеческих тощекишечных эпителиальных клеток. Один из них кодирует рецептор '1Р, состоящий из 460 аминокислот и имеющий 7 предполагаемых трансмембранных доменов, как и другие рецепторы, связывающиеся с О белком. Другой кодирует 495-аминокислотный '1Р рецептор-родственный белок, проявляющий 100% гомологию с функциональным рецептором 'Р более чем 428 аминокислот в С-концевом районе, но содержащий полностью отличный 67-аминокислотный Д-концевой домен. При экспрессии в СО8-7 клетках второй белок не связывается с меченым радиоактивным иодом '1Р, хотя он нормально адресовался к плазматической мембране, как было определено в иммунофлуоресцентных исследованиях. 8гееййагап е1 а1. (1995) обнаружили, что рецептор 'Р типа I, также названный рецептором РАСАР типа II (см. другой тип рецептора РАСАР в 102981), занимает примерно 22 п.о. и содержится в 13 экзонах (находятся в диапазоне от 42 до 1400 п.о.) и 12 интронах (находятся в диапазоне от 0,3 до 6,1 т.п.о.). 8геейНагап е1 а1. (1995) также охарактеризовали промотор и 5-прим фланкирующий район этого гена.»
Как указано, предпосылки по 'Р и связывающимся с ним рецепторам представлены '|с!ог А. МсКи/|к е1 а1. (там же). Из этого источника извлечен следующий текст, касающийся '1РК2 и 'РАС2.
«Вазоактивный интестинальный пептид ('1Р; 192320) и полипептид, активирующий гипофизарную аденилатциклазу (РАСАР; 102980) представляют собой гомологичные пептиды, которые функционируют в качестве нейромедиаторов и нейроэндокринных гормонов. Хотя рецепторы для 'Р и РАСАР имеют гомологию, они различаются по их субстратной специфичности и паттернам экспрессии. См. 'ТРШ (192321) и Λ^СΥΛР1Κ1 (102981). 8νοЬοйа е1 а1. (1994) провели ПЦР низкой жесткости, используя праймеры, основанные на последовательностях, консервативных среди рецепторов 'Р. Они клонировали человеческий ген рецептора '№2 из кДНК библиотеки лимфобластов. Этот ген кодировал 438аминокислотный полипептид, который имеет 86% идентичность с крысиным рецептором '1Р2. Они экспрессировали человеческий рецептор 'Р2 в клетках яичника китайского хомячка и обнаружили, что он связывается с РАСАР-38, РАСАР-27, 'Р и хелодермином, и что связывание этого рецептора с любым из этих пептидов активирует аденилатциклазу. Было обнаружено, что связывание пептидов ингибируется ГТФ. Айатои е1 а1. (1995) клонировали ген рецептора '№2 из кДНК библиотеки человеческой плаценты. Нозерн-блоттинг выявил, что '1РК2 экспрессируется в виде 2 транскриптов 4,6 т.п.о. и 2,3 т.п.о. на высоких уровнях в скелетной мускулатуре и на более низких уровнях в сердце, головном мозге, плаценте и поджелудочной железе. Маскау е1 а1. (1996) использовали флуоресцентную ш 811и гибридизацию для картирования гена '1РК2 в человеческой хромосоме 7с.]36.3. Дальнейшее картирование с использованием клеточных линий, выделенных у пациентов с голопрозэнцефалией типа 3 (НРЕ3; 142945), выявило, что ген '1РК2 лежит в пределах минимального критического района НРЕЗ. Маскау е1 а1. (1996) установили, что, хотя '1РК2 может вносить вклад в НРЕЗ фенотип, он не является единственным ответственным за него фактором.»
АЦ (аденилатциклаза).
Предлагается также дополнительная мишень, которая представляет собой ПцАМФ мишень, причем ПцАМФ мишень представляет собой АЦ.
- 55 006254
Нуклеотидные последовательности и аминокислотные последовательности для АЦ можно найти в литературе.
Для подтверждения того, что УГР индуцирует вазорелаксацию посредством повышения внутриклеточных уровней цАМФ и последующей активации аденилатциклазы, авторы изобретения измерили вагинальные концентрации цАМФ во время УР стимуляции и использовали форсколин, активатор аденилатциклазы, чтобы имитировать эффекты активации метаболического пути цАМФ/аденилатциклаза.
В этих исследованиях авторы изобретения обнаружили, что лечение УТР и лечение форсколином повышают внутриклеточные концентрации цАМФ в изолированной ткани влагалища.
Авторы изобретения также обнаружили, что форсколин усиливает вагинальный кровоток в животной модели полового возбуждения.
Кроме того, авторы изобретения обнаружили, что форсколин индуцирует релаксацию в изолированном влагалище.
Предпосылки по АЦ представлены У1с!ог А. МсКи/П; е! а1. на й!рр.7/^^^3. псЬкп1т.шй.доу/ О1ппп/кеагс1ю1ппп.1и1п. Из этого источника извлечен следующий текст, касающийся АЦ.
«Аденилилциклаза (ЕС 4.6.1.1) катализирует превращение АТФ в циклический АМФ. Ферментативная активность находится под контролем нескольких гормонов, и различные полипептиды участвуют в передаче сигнала от рецептора к каталитическому компоненту. Стимуляторные и ингибиторные рецепторы (Вк и В1) взаимодействуют с О белками (Ок и Οι), которые ингибируют ГТФазную активность, и они модулируют активность каталитической субъединицы аденилилциклазы. Рагта е! а1. (1991) клонировали кДНК, соответствующую аденилилциклазе головного мозга, обозначенную ими как НВАС1. С помощью ш к1!и гибридизации с мазками метафазных хромосом, используя кДНК зонд головного мозга человека, 8!епде1 е! а1. (1992) показали, что этот ген локализован на 8с.|24.2. Высоко гомологичный ген АЭСУ2 (103071) привязали к 5р15.3 таким же способом.»
Общая методология рекомбинантных ДНК
Хотя в общем упомянутые здесь методики общеизвестны в данной области техники, можно сделать ссылку, в частности, на 8атЬгоок е! а1., Мо1еси1аг С1ошпд, А ЬаЬога!огу Мапиа1 (1989) и АикиЬе1 е! а1., 8йой Рго!осо1к т Мо1еси1аг Вю1оду (1999) 4* Еб, 1ойп ^11еу & 8опк, Ичс. ПЦР описана в И8-А-4683195, И8-А-4800195 и И8-А-4965188.
Резюме
В совокупности, настоящее изобретение относится к применению ОРУ для лечения ЖСД, в частности, РПВЖ.
Примеры
Теперь настоящее изобретение будет описано только как пример, в котором сделана ссылка на следующие графические материалы, из которых фиг. 1-9, 11 и 12 приведены в целях информации:
фиг. 1, которая представляет собой график;
фиг. 2, которая представляет собой график;
фиг. 3, которая представляет собой график;
фиг. 4, которая представляет собой график;
фиг. 5, которая представляет собой диаграмму;
фиг. 6, которая представляет собой диаграмму;
фиг. 7, которая представляет собой график;
фиг. 8, которая представляет собой график;
фиг. 9, которая представляет собой график;
фиг. 10, которая представляет собой диаграмму;
фиг. 11, которая представляет собой диаграмму и фиг. 12, которая представляет собой диаграмму.
Должно быть понятно, что агент по настоящему изобретению представляет собой И:№¥. Представлены также научные данные по И: ФДЭ и И: НЭП, которые ясно указывают специалисту в данной области на то, что агент по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с одним или обоими агентами этих типов для достижения благоприятного эффекта, упомянутого здесь. Эти дополнительные научные данные также включены как дополнительное подтверждение основополагающих открытий авторов изобретения.
Теперь графические материалы обсуждаются более детально.
Фиг. 1. Электрическая стимуляция тазового нерва индуцирует частотозависимое усиление вагинального кровотока в модели полового возбуждения анестезированного кролика. Увеличение частоты стимуляции индуцирует большее усиление кровотока. Мониторинг изменений проводили, используя лазерные доплеровские технологии.
Фиг. 2. Вазоактивный интестинальный пептид (УФ) индуцирует усиление вагинального кровотока в модели полового возбуждения анестезированного кролика. Фиг. 2а иллюстрирует, как усиливается вагинальный кровоток в зависимости от концентрации в результате инфузий УФ (внутривенный болюс). Фиг. 2б демонстрирует, что 2 повторные инфузии УФ производят сходное усиление вагинального крово
- 56 006254 тока. Заметим, что продолжительность реакции также являются сходной. Мониторинг всех изменений проводили, используя лазерные доплеровские технологии.
Фиг. 3. Вазоактивный интестинальный пептид (УГР) снижает среднее артериальное давление крови в модели полового возбуждения анестезированного кролика. Этот график иллюстрирует типичные воздействия вазоактивных агентов и параметров стимуляции, используемых для исследования вагинального кровотока, на среднее артериальное давление у анестезированного кролика. Эти наблюдаемые воздействия являются типичными тенденциями, наблюдаемыми у всех тестируемых животных. УГР индуцировал значительное падение среднего артериального давления, а стимуляция тазового нерва, контрольные инфузии гепсалина или ингибиторов ФДЭцАМФ или НЭП не оказывали воздействия на давление крови. Заметим, что снижение кровяного давления, связанное с инфузиями УГР, связано также с большим увеличением частоты сердечных сокращений.
Фиг. 4. Активация метаболического пути цАМФ/аденилатциклаза имитирует опосредованную УГР вазорелаксацию и релаксацию гладкой мускулатуры в ткани влагалища. Фиг. 4а иллюстрирует, что инфузия форсколина (40 нмоль/кг в.в. болюс, миметик цАМФ) индуцирует значительное усиление вагинального кровотока. Заметим, что амплитуда и продолжительность ответа подобны индуцированным УГР (20,0 мкг/кг, в.в. болюс). Интересно, что воздействие на кровоток имеет большую продолжительность действия на внешнюю стенку влагалища. Мониторинг всех изменений проводили, используя лазерные доплеровские технологии. Фиг. 4б демонстрирует, что как УГР (0,1 мкМ), так и форсколин (10 мкМ) значительно повышают внутриклеточные концентрации цАМФ по сравнению с базальными уровнями во влагалище кролика. Фиг. 4в показывает, что форсколин индуцирует сильную релаксацию предварительно сокращенных (1 мкМ фенилэфрин) полосок влагалища кролика при 1С50 ~300 нМ. Все изменения определяли количественно, используя ш у1уо лазерные доплеровские технологии, биохимический ферментативный иммуноанализ цАМФ, или по релаксации ткани ш νίΙΐΌ.
Фиг. 5. Инфузия УГР усиливает клиторный кровоток, а активация метаболического пути цАМФ/аденилатциклаза имитирует УГР-опосредованную клиторную вазорелаксацию в модели полового возбуждения анестезированного кролика. Инфузия УГР (60-200 мкг/кг) индуцирует зависимое от концентрации усиление клиторного кровотока. 115% усиление клиторного кровотока наблюдали после в.в. инфузии 200 мкг/кг УГР. Эффекты УГР на клиторный кровоток можно имитировать путем инфузии миметика цАМФ форсколина (ФСК, 40 нмоль/кг, в.в. болюс). 156% усиление клиторного кровотока наблюдали после в. в. инфузии 40 нмоль/кг форсколина. Все усиления значительно отличались в положительную сторону от контрольных инфузий (гепсалин). Заметим, что амплитуда ответа подобна амплитуде, индуцированной УГР (200 мкг/кг, в.в. болюс) и сравнима с амплитудой, наблюдаемой в вагинальном кровотоке на фиг. 2 и фиг. 4. Все изменения определяли количественно, используя ш у1уо лазерные доплеровские технологии, и они были в значительной степени повышены по сравнению с инфузиями носителя (гепсалина).
Фиг. 6. Избирательный ингибитор НЭП ЕС 3.4.24.11 повышает усиление вагинального кровотока в результате стимуляции тазового нерва (СТН) в модели полового возбуждения анестезированного кролика. Повторные СТН через 15-минутные интервалы индуцируют воспроизводимое усиление вагинального кровотока (белая полоса). Введение ингибитора НЭП (серая полоса) повышало пик усиления вагинального кровотока, индуцированного субмаксимальными частотами стимуляции (например 4 Гц), по сравнению с усилением, наблюдаемым во время соответствующих контрольных стимуляций контроляминосителями (заштрихованная полоса). Наблюдали следующие дозозависимые усиления - доза 0,3 мг/кг в.в. индуцировала 40% усиление, а доза 1,0 мг/кг в.в. индуцировала 91% усиление (среднее п=3). Ингибитор НЭП не оказывал воздействия на базальный (без стимуляции) вагинальный кровоток (данные не показаны). Мониторинг всех изменений проводили, используя лазерные доплеровские технологии.
Фиг. 7. Избирательные ингибиторы НЭП ЕС 3.4.24.11 повышают УГР-индуцированное усиление вагинального кровотока в модели полового возбуждения анестезированного кролика. Повторные СТН через 30-минутные интервалы индуцируют воспроизводимое усиление вагинального кровотока (см. фиг. 2б). Ингибитор НЭП и потенцирует амплитуду и продлевает продолжительность усиления кровотока, когда это усиление индуцируется субмаксимальными дозами УГР, например 60 мкг/кг. При дозах УГР, которые индуцируют максимальное усиление вагинального кровотока, например 60 мкг/кг, ингибиторы НЭП только потенцируют продолжительность усиления вагинального кровотока. УГР-индуцированное усиление в присутствии ингибитора НЭП показано в виде сплошных треугольников, тогда как контрольные УГР ответы показаны в виде пустых треугольников. Контрольная инфузия гепсалина не оказывала воздействия на амплитуду этих ответов. Мониторинг всех изменений проводили, используя лазерные доплеровские технологии.
Фиг. 8. Избирательный ингибитор ФДЭцАМФ типа 2 повышает усиление вагинального кровотока при стимуляции тазового нерва (СТН) в модели полового возбуждения анестезированного кролика. Повторные СТН через 15-минутные интервалы индуцируют воспроизводимое усиление вагинального кровотока (белые квадраты). Введение ингибитора ФДЭцАМФ типа 2 повышало пик усиления вагинального кровотока, индуцированного субмаксимальными частотами стимуляции (черные квадраты; 4 Гц) по сравнению с усилением, наблюдаемым во время соответствующих контрольных стимуляций контролями-носителями
- 57 006254 (пустые квадраты). Инфузия ингибитора ФДЭ2 (500 мкг/кг) индуцировала 86,8±21,9% усиление вагинального кровотока (среднее±стандартное отклонение среднего, η=2). Мониторинг всех изменений проводили, используя лазерные доплеровские технологии.
Фиг. 9. Избирательные ингибиторы ФДЭцАМФ типа 2 повышают νΐΡ-индуцированное усиление вагинального кровотока в модели полового возбуждения анестезированного кролика. Повторные инфузии νΐΡ через 30-минутные интервалы индуцируют воспроизводимое усиление вагинального кровотока (см. фиг. 2б). Избирательный ингибитор ФДЭцАМФ типа 2 (25 мкг/кг, в.в. болюс) потенцирует продолжительность усиления кровотока, индуцированного νΐΡ (60 мкг/кг, в.в. болюс). νΐΡ-индуцированное усиление в присутствии ингибиторов ФДЭцАМФ показано в виде сплошных треугольников, а контрольные νΐΡ ответы показаны в виде пустых треугольников. Контрольная инфузия гепсалина не оказывала воздействия на амплитуду этих ответов. Мониторинг всех изменений проводили, используя лазерные доплеровские технологии.
Фиг. 10. Избирательный антагонист рецепторов ΝΡΥ Υ1 повышает усиление вагинального кровотока при стимуляции тазового нерва (СТН) в модели полового возбуждения анестезированного кролика. Повторные СТН через 15-минутные интервалы индуцируют воспроизводимое усиление вагинального кровотока (данные не показаны). Введение антагониста ΝΡΥ Υ1 (серый столбик) повышало пик усиления вагинального кровотока, индуцированного субмаксимальными частотами стимуляции (например 4 Гц), по сравнению с усилением, наблюдаемым во время соответствующих контрольных стимуляций контролями-носителями (заштрихованный столбик). Наблюдали следующие дозозависимые усиления - доза 0,01 мг/кг в.в. индуцировала 15,8±19,6% усиление; доза 0,03 мг/кг в.в. индуцировала 35,1±17,17% усиление; доза 0,10 мг/кг в.в. индуцировала 60,1±16,9% усиление, а доза 0,3 мг/кг в.в. индуцировала 91,9±27,4% усиление (среднее±стандартное отклонение среднего, η=3). Антагонист ΝΡΥ Υ1 не оказывал воздействия на базальный (без стимуляции) вагинальный кровоток (данные не показаны). Мониторинг всех изменений проводили, используя лазерные доплеровские технологии.
Фиг. 11 представляет суммарную диаграмму для некоторых приведенных здесь данных, показывающую, что агенты абсолютно пригодны для усиления вагинального кровотока посредством потенцирования эндогенных уровней цАМФ.
Фиг. 12 Избирательный ингибитор НЭП ЕС 3.4.24.11 повышает усиление клиторного кровотока при стимуляции тазового нерва (СТН) в модели полового возбуждения анестезированного кролика. Введение ингибитора НЭП (серый столбик) повышало пик усиления клиторного кровотока, индуцированного субмаксимальными частотами стимуляции (например 4 Гц) по сравнению с усилением, наблюдаемым во время соответствующих контрольных стимуляций контролями-носителями (заштрихованный столбик). Наблюдали следующие дозозависимые усиления - доза 1,0 мг/кг в.в. индуцировала 131% усиление (среднее, η=3). Ингибитор НЭП не оказывал воздействия на базальный (без стимуляции) вагинальный кровоток (данные не показаны). Мониторинг всех изменений проводили, используя лазерные доплеровские технологии.
Анализ для измерения активности/уровней цАМФ
Измерение цАМФ из образцов ткани влагалища с использованием набора для иммуноферментного анализа (ИФА) Вю!гаск сАМΡ (АтсгЖат Ьйе 8с1спсс5 ΚΡΝ 225).
Уровни цАМФ измеряют в образцах ткани влагалища с помощью ИФА. ИФА основан на конкуренции между немеченым цАМФ и фиксированным количеством меченого пероксидазой цАМФ за ограниченное количество цАМФ-специфичного антитела.
1. Материалы
Если не указано иначе, все материалы обеспечены набором для ИФА цАМФ АтсгЖат Ы£с 8с1спсск (ΚΡΝ 225).
1.1. Микротитровальный планшет - 96-луночный планшет, покрытый ΐ§Ο осел против кролика.
1.2. Аналитический буфер - 0,05М натрий-ацетатный буфер, рН 5,8, содержащий 0,02% бычьего сывороточного альбумина и 0,5% консерванта после переразбавления. Содержимое бутылки переносят в градуированный цилиндр, используя 3х15 мл промывочной дистиллированной воды. Затем конечный объем доводят до 500 мл.
1.3. Стандарт цАМФ (для способа ацетилирования). ЦАМФ в концентрации 10,24 пмоль/мл в 0,05М ацетатном буфере, рН 5,8, содержащем 0,02% бычьего сывороточного альбумина и 0,5% консерванта после переразбавления. Для использования стандарт растворяют в 2,5 мл аналитического буфера.
1.4. Антисыворотка. Антитело анти-цАМФ в 0,05М ацетатном буфере, рН 5,8, содержащем 0,02% бычьего сывороточного альбумина и 0,5% консерванта после переразбавления. Перед использованием антитело разводят 11 мл аналитического буфера и смешивают спокойным переворачиванием до растворения содержимого.
1.5. Конъюгат цАМФ. цАМФ пероксидаза хрена в 0,05М ацетатном буфере, рН 5,8, содержащем 0,02% бычьего сывороточного альбумина и 0,5% консерванта после переразбавления. Перед использованием антитело разводят 11 мл аналитического буфера и смешивают спокойным переворачиванием до растворения содержимого.
- 58 006254
1.6. Промывочный буфер. 0,01М фосфатный буфер рН 7,5, содержащий 0,05% (об./об.) Т\гееп|Л|20 после переразбавления. Содержимое бутылки переносят в градуированный цилиндр, используя 3х15 мл промывочной дистиллированной воды. Затем конечный объем доводят до 500 мл.
1.7. ТМБ субстрат. 3,3',5,5'-тетраметилбензидин (ТМБ)/перекись водорода в 20% (об./об.) диметилформамиде. Готов к использованию.
1.8. Ацетилирующий реагент. 2 мл уксусного ангидрида, 4 мл триэтиламина, приготовленные как требуется.
1.9. Серная кислота (1М). 1М раствор серной кислоты готовят из 18М исходного раствора (ВЭН). 1,11 мл кислоты добавляют в 18,8 мл дистиллированной воды.
2. Специальное оборудование.
2.1. Одноразовые 5 мл стеклянные пробирки для тестирования.
2.2. Спектрофотометрическое считывающее устройство для планшетов (8рес1га тах 190).
2.3. Шейкер для микротитровальных планшетов (Ьискйат К100).
3. Методики.
Подготовка образца ткани. Ткани подвергали соответствующей предобработке в образцах по 5 мл например агонистов, цАМФ миметиков и т.д в физиологическом солевом растворе. После обработки образцы немедленно замораживали в жидком азоте, а затем разбивали молотком. Порошок соскребали в центрифужную пробирку и добавляли 0,5М охлажденной во льду перхлорной кислоты (ПХА). Образец перемешивали на вортексе и оставляли на льду на 1 ч.
Экстракция цАМФ из образцов ткани. Образцы центрифугировали при 10000 д в течение 5 мин при 4°С. Супернатант извлекали и помещали в другие центрифужные пробирки. Остаток хранили для анализа на белок при -80°С. Образцы супернатанта затем нейтрализовали до рН ~ 6, используя К3РО4. Центрифугировали при 10000д в течение 5 мин при 4°С. Отделяли супернатант и промывали 4 раза 5 объемами (по 5 мл) диэтилового эфира, насыщенного водой. Верхний эфирный слой следует отбрасывать после каждой промывки. Водный слой переносили в короткую тонкостенную стеклянную пробирку и высушивали в потоке азота при 60°С. Высушенный экстракт растворяли в 1 мл аналитического буфера и хранили в холодильнике до тех пор, пока он не потребуется (или можно заморозить).
Исходные реагенты уравновешивают до комнатной температуры, а затем готовят рабочие растворы. цАМФ стандарты готовят в стеклянных пробирках, помеченных 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256 и 512 фмоль. Этого достигают добавлением 1 мл аналитического буфера в каждую пробирку кроме стандарта 512 фмоль. Затем к двум наибольшим стандартам (256 и 512 фмоль) добавляют 1 мл стандарта ацетилирования (10,24 пмоль/мл). Стандарт 256 фмоль перемешивают на вортексе, и 1 мл переносят в стандарт 128 фмоль. Эту процедуру продолжают до стандарта 2 фмоль, из которого отбирают 1 мл раствора. Устанавливают пробирку нулевого стандарта, содержащую 1 мл аналитического буфера.
Образцы тканевых экстрактов оттаивают на льду (если необходимо) и разводят 1 в 100 (10 мкл образца на 990 мкл аналитического буфера) в помеченных стеклянных пробирках.
цАМФ во всех стандартах и образцах ацетилируют в вытяжном шкафу добавлением 100 мкл ацетилирующего реагента, который добавляют вниз по стенке пробирки, а затем немедленно перемешивают на вортексе.
мкл всех стандартов и образцов добавляют в соответствующие лунки 96-луночного планшета и добавляют 150 мкл аналитического буфера в лунки для неспецифического связывания (НСС).
100 мкл антисыворотки добавляют во все лунки кроме чистых контролей (В) и НСС, а затем инкубируют в течение 2 ч при 3-5°С.
После инкубации 100 мкл конъюгата цАМФ-пероксидаза добавляют во все лунки кроме В, а затем инкубируют еще 1 ч при 3-5°С.
Планшеты осушают, переворачивая их вверх дном и промокая на промокательной бумаге, а затем промывают каждую лунку четыре раза по 400 мкл промывочного буфера. После каждой промывки планшеты снова промокают, чтобы гарантировать, что весь оставшийся отмывочный буфер удален. Затем 200 мкл ТМБ немедленно распределяют по всем лункам.
Планшеты помещают на шейкер для планшетов на 30 мин при комнатной температуре, а затем во все лунки добавляют по 100 мкл 1М серной кислоты. Оптическую плотность считывают на 8рес1га тах 190 при 450 нм в пределах 30 мин.
4. Стандарты.
При каждом анализе устанавливают следующие стандартные пробирки.
4.1. Получение пика стандарта в аналитическом буфере. Пик для известного количества цАМФ получают в аналитическом буфере, чтобы определить эффективность анализа. 70 пмоль/мл цАМФ добавляют в аналитический буфер, что эквивалентно 35 фмоль/лунку в анализе, и это является средним значением на кривой доза-ответ.
Для составления 1 мл стандарта: 68,4 мкл 521 фмоль/лунку стандарта 931,6 мкл аналитического буфера.
4.2. Воздействие соединений на планшет.
- 59 006254
Устанавливают стандарты для определения, обладает ли соединение, используемое в функциональных исследованиях, каким-либо воздействием на 96-луночный планшет или влияет ли оно на связывание цАМФ. Они включают в себя:
Получение пика для соединения только в аналитическом буфере для оценки воздействия этого соединения непосредственно на планшет.
Получение пика соединения в плазме, содержащей базальные уровни цАМФ, для оценки воздействия этого соединения на связывание цАМФ с планшетом.
Получают пики 5 нМ концентраций соединения в каждом стандарте. 5 нМ концентрация выбрана потому, что суммарные уровни лекарственного средства в конце инфузии раньше составляли примерно 150-300 нМ. Образцы разводят 1:100 перед анализом, поэтому 5 нМ дает возможность для любых концентраций лекарственного средства, которые больше, чем ожидаемые в конце инфузии.
5. Вычисления.
Считывающее устройство для планшетов 8рес!га тах считывает оптическую плотность (ОБ) при 450 нм.
Стандартную кривую получают путем построения графика зависимости 5В/Во (ось у) от цАМФ фмоль/лунку (ось х) на 8рес1га тах.
%В/Во (% связывания) для каждого образца и стандарта вычисляют следующим образом:
Во = нулевой стандарт (см. методы 3.2)
5В/Во = (стандарт или образец ОР - НСС ОР) х100 (Во ОР - НСС ОР)
Затем значение фмоль/лунку можно считывать непосредственно со стандартной кривой для каждого образца. Затем значения переводят в пмоль/мл, а затем берут среднее для каждой пары образцов.
Перевод значений из фмоль/лунку в пмоль/мл:
фмоль в пмоль = разделить на 1000
Объем в лунке = 50 мкл...80(х1000)/50
Образец разводят 1/100, поэтому всего = 1 х 1000/1000 х 100/50 = 2
Таким образом, все значения фмоль/лунку умножают на 2 с получением пмоль/мл.
Животная контрольная модель
Потенцирование эффектов циклического аденозин-3',5'-монофосфата (цАМФ) приводит к усилению вагинального кровотока в модели полового возбуждения анестезированного кролика 1.0 Цели.
1. Разработать и обосновать животную модель женского полового возбуждения.
2. Идентифицировать механизм(ы), ответственные за регуляцию генитального кровотока у анестезированного кролика.
3. Идентифицировать потенциальные подходы к усилению вагинального и клиторного кровотока.
4. Исследовать механизм(ы), которые лежат в основе релаксации гладкой мускулатуры влагалища, и идентифицировать потенциальные подходы к усилению вагинальной релаксации.
2.0 Введение.
Нормальная реакция полового возбуждения состоит из ряда физиологических реакций, которые наблюдаются во время полового возбуждения. Эти изменения, такие как переполнение кровью влагалища, губ и клитора, являются результатом усиления генитального кровотока. Переполнение кровью приводит к усилению смазывания влагалища посредством транссудации плазмы, к повышению податливости влагалища (релаксации вагинальной гладкой мускулатуры) и к повышению чувствительности влагалища и клитора.
Расстройство полового возбуждения у женщин (РПВЖ) является широко распространенным сексуальным расстройством, поражающим до 40% женщин в пред-, пери- и постменопаузе (±НКТ). Первичным последствием РПВЖ является ослабление переполнения кровью или набухания гениталий, которое проявляется в недостаточности смазывания влагалища и в отсутствии ощущения наслаждения в гениталиях. Вторичные последствия включают в себя пониженное половое влечение, боль во время полового сношения и затруднение в достижении оргазма. Наиболее распространенной причиной РПВЖ является ослабление генитального кровотока, приводящее к пониженному переполнению кровью влагалища, губ и клитора (Гагк, 1997; 6о14к!ет, 1998; Вегтап, 1999а; \Vе^Ь^η. 1999).
Как объяснено здесь, согласно настоящему изобретению предложены средства для восстановления или потенцирования нормальной реакции полового возбуждения у женщин, страдающих РПВЖ, посредством усиления генитального кровотока.
В своих исследованиях авторы изобретения идентифицировали цАМФ (циклический аденозин-3',5'монофосфат) как медиатор вагинальной вазорелаксации, используя лазерную доплеровскую технологию для измерения небольших изменений в генитальном кровотоке. Используя ингибитор метаболизма У1₽ (ингибитор НЭП ЕС 3.4.24.11), авторы изобретения продемонстрировали также, что усиление генитального кровотока, наблюдаемое во время стимуляции тазового нерва (то есть полового возбуждения) опосредовано УБ. В связи с этим была разработана животная модель полового возбуждения, и было продемонстрировано, что эти данные отражают физиологические изменения, наблюдаемые по время полового
- 60 006254 возбуждения женщины. Эту модель затем использовали для идентификации и обоснования механизмов, которые усиливают генитальный кровоток, например прямое или косвенное потенцирование цАМФопосредованной вазорелаксации.
3.0 Методики.
3.1. Протокол анестезии.
Самкам новозеландских кроликов (~2,5 кг) проводили премедикацию комбинацией медетомидина (ΌοιηίΙοΓ®·) 0,5 мл/кг в.м. и кетамина ^е!а1аг®) 0,25 мл/кг в.м., поддерживая при этом подачу кислорода через лицевую маску. Кроликов трахеотомировали, используя эндотрахеальную трубку без манжеты 3 ΙΌ Рго!ех™, соединенную с вентилятором и поддерживаемую при скорости вентиляции 30-40 дыханий в минуту с объемом воздуха, обмениваемого при одном дыхании, примерно 18-20 мл и при максимуме давления в трубке 10 см Н2О. Затем анестезию переключали на изофлуран и продолжали вентиляцию О2 при 2 л/мин. Правую маргинальную ушную вену канюлировали, используя катетер 23С и 24С, и осуществляли перфузию раствора Рингера с лактатом при 0,5 мл/мин. Кролика держали на 3% изофлуране в течение инвазивной операции, снижая до 2% для поддержания анестезии.
3.2. Канюлирование сосудов.
Левую паховую область кролика выбривали и делали вертикальный разрез примерно 5 см в длину вдоль бедра. Бедренную вену и артерию обнажали, изолировали, а затем канюлировали ПВХ (поливинилхлоридным) катетером (17С) для инфузии лекарственных средств и соединений. Канюлирование повторяли для бедренной артерии, вводя катетер на глубину 10 см, чтобы гарантировать, что катетер достигает брюшной аорты. Этот артериальный катетер соединяли с системой Гоулда для регистрации кровяного давления. Пробы для анализа крови на газы также брали через артериальный катетер. Измеряли систолическое и диастолическое давление и вычисляли среднее артериальное давление, используя формулу (диастолическое х 2 + систолическое) - 3. Частоту сердечных сокращений измеряли посредством оксиметра пульса и системы программного обеспечения сбора данных Рο-ηе-так ^петай РЬузюЫду Р1а1&гт, 6οϋ1ά 1пз(гитеп1 8уз1етз 1пс).
3.3. Стимуляция тазового нерва.
Делали вентральный разрез по средней линии в брюшную полость. Этот разрез составлял примерно 5 см в длину непосредственно над лобком. Проводили тупое отделение жировой ткани и мышц, чтобы выявить поджелудочный нерв, который проходит вниз полости тела. Важно было держать закрытой боковую кривую стенки лобка, чтобы избежать повреждения бедренной вены и артерии, которые лежат над лобком. Седалищный и тазовый нервы, которые лежат глубже, локализовали после дальнейшего рассечения кролика со спины. Сразу после опознания седалищного нерва легко локализовали тазовый нерв. Термин тазовый нерв применяется неточно; в анатомических книгах по данному предмету отсутствует достаточно детальное определение нервов. Однако стимуляция этого нерва вызывает усиление вагинального и клиторного кровотока и иннервацию тазовой области. Тазовый нерв освобождали от окружающей ткани, и вокруг нерва располагали биполярный стимулирующий электрод Нагуагб. Нерв слегка поднимали, чтобы создать некоторое напряжение, затем электрод закрепляли в этом положении. Вокруг нерва и электрода помещали примерно 1 мл легкого парафинового масла. Оно действует как защитная смазка нерва и предотвращает загрязнение электрода кровью. Электрод подсоединяли к стимулятору Сгазз 888. Тазовый нерв стимулировали, используя следующие параметры: - 5В, ширина импульса 0,5 мс, продолжительность стимула 10 с и диапазон частот от 2 до 16 Гц. Воспроизводимые ответы получали, когда нерв стимулировали каждые 15-20 мин.
Кривую частотного ответа определяли в начале каждого эксперимента, чтобы определить оптимальную частоту для использования в качестве субмаксимального ответа, обычно 4 Гц. Инфузию соединения(й), которое тестировали, осуществляли через бедренную вену, используя насос для инфузии Нагуагб 22, создавая возможность непрерывного 15-минутного цикла стимуляции.
3.4. Размещение лазерных доплеровских датчиков.
Делали вентральный разрез по средней линии в хвостовом конце лобка, чтобы обнажить лобковую область. Соединительную ткань удаляли, чтобы обнажить оболочку клитора, обеспечивая освобождение стенки от мелких кровеносных сосудов. Внешнюю стенку влагалища также обнажали удалением всей соединительной ткани. Один подвижный лазерный доплеровский датчик вводили внутрь влагалища на 3 см, так чтобы половина стержня датчика была все еще видимой. Второй датчик размещали таким образом, чтобы он лежал прямо над внешней стенкой клитора. Положение этих датчиков затем регулировали до тех пор, пока не получали сигнал. Второй датчик помещали прямо над поверхностью кровеносного сосуда на внешней стенке влагалища. Оба датчика зажимали в этом положении.
Вагинальный и клиторный кровоток регистрировали либо в виде чисел прямо с измерителя скорости кровотока, используя программное обеспечение сбора данных Рο-ηе-так ^петак РЬузюЫду Р1а!(огт, 6οϋ1ά 1пз!гцтеп! 8уз1етз 1пс), либо косвенно с записанной кривой графического записывающего устройства Οοπ1ά. Калибровку устанавливали в начале эксперимента (0-125 мл/мин/100 г ткани).
3.5. Инфузия вазоактивного интестинального полипептида (У1Р). Дозы ντ (ВасЬет, Н-3775) составляли 2,0, 6,0, 20,0, 60,0 мкг/кг в.в., и его инфузию осуществляли в объеме 0,5 мл физиологического раствора. Инфузию νίΓ осуществляли, используя насос Нагуагб 22, со скоростью 500 мкл/мин через 3
- 61 006254 ходовой кран в бедренную вену. После инфузии νΐΡ катетер промывали гепаринизированным физиологическим раствором (гепсалином), так чтобы νΐΡ не оставался в катетере.
Для экспериментов с использованием инфузий νΐΡ была необходима исходная сенсибилизация кривой доза-ответ (2-60 мкг/кг), чтобы можно было получать воспроизводимые ответы. Начальную инфузию гепсалина (50 υΐ/мл) проводили, чтобы он действовал в качестве отрицательного контроля.
3.6. Инфузия ингибиторов.
Ингибиторы НЭП (нейтральная эндопептидаза ЕС 3.4.24.11), ингибиторы фосфодиэстеразы типа 5 (ФДЭ5) и антагонисты ΝΡΥ Υ1 растворяли в физиологическом растворе или в 5% растворе глюкозы (200 мкл 50% глюкозы в 1,8 мл воды на инъекцию). Ингибиторы ФДЭцАМФ растворяли в 40% растворе этанола (200 мкл 50% глюкозы в 1,8 мл вода/этанол на инъекцию). Инфузию ингибиторов и контролей-носителей проводили с той же скоростью, что и νΐΡ. Ингибиторы НЭП оставляли на 30 мин перед кривой дозаответ νΐΡ; кроме того, ингибиторы НЭП, антагонисты рецептора ΝΡΥ Υ1 и ингибиторы ФДЭцАМФ оставляли на 15 мин до стимуляции тазового нерва.
3.7. Измерение релаксации гладкой мускулатуры в изолированном влагалище кролика.
3.7(а). ΐη νίίΓο препарат влагалища кролика. Самок новозеландских белых кроликов (2,0-3,0 кг) забивали путем цервикальной дислокации. Вскрывали брюшную полость и вырезали влагалище. Полоски ткани укрепляли продольно в 5 мл силиконизированных камерах для органов ^ез1еу Сс. плетеными шелковыми нитями для сшивания ран (размер 6/0) при исходном остаточном натяжении 1,5 г в бикарбонатном буфере Кребса, поддерживали при 37°С и пропускали газ 95%02/5%С02. Верхнюю лигатуру каждой полоски ткани прикрепляли к датчику перемещения, вызванного силой нагрузки 10 г, и изменения в изометрической силе измеряли и регистрировали, используя ίη νίίτο систему сбора данных ΌΑΚΤ. Тканям давали уравновеситься в течение 1,5 ч и регулярно промывали буфером Кребса.
3.7(б). Индуцированная вазоактивным интестинальным пептидом релаксация влагалища кролика. Каждую ткань сокращали, используя фенилэрфин в концентрации 1 мкМ на ванночку. Когда сократительный ответ достигал стабильного плато (~15 минут), νΐΡ кумулятивно добавляли в камеру для органа в логарифмических единицах для получения концентрации от 0,1 до 100 нМ. Релаксационные ответы измеряли через 5 мин после добавления νΐΡ каждой концентрации; за это время максимум релаксации достигался. Затем ткани получали либо тестируемый агент (например ингибитор НЭП или ФДЭ), либо ДМСО-носитель (синхронизированный контроль).
3.7(в). Анализ данных экспериментов по νΐΡ-релаксации. Для каждой кривой концентрация νΐΡрелаксационный ответ, релаксационные ответы, индуцированные νΐΡ, выражали в виде процента от максимального индуцированного фенилэрфином сокращения. Затем эти значения наносили на график против 1ο§ концентрации νΐΡ и по точкам строили сигмоидальные кривые. В целях вычерчивания кривой по точкам минимум релаксационного ответа условно принимали за 0%, а максимум релаксационного ни к чему не привязывали. Определяли концентрацию νΐΡ, требуемую для получения 50% релаксации фенилэрфинового сокращения (ЕС50 ΡΕ).
3.7(д). Стимулируемая электрическим полем релаксация влагалища кроликаю. Вагинальные полоски кролика получали, как описано в разделе 3.7(а). Эти полоски ткани укрепляли между двумя платиновыми электродами, помещенными на наверху и внизу камеры для органов на расстоянии примерно 4 см друг от друга. Каждую ткань сокращали, используя фенилэрфин в концентрации 1 мкМ на ванночку. Когда сократительный ответ достигал стабильного плато (~15 мин), ткани подвергали предобработке стимуляцией электрическим полем (ЭПС), индуцирующей релаксационную кривую. Это осуществляли между 40-60 В при последовательных частотах 2, 4, 8 и 16 Гц, подаваемых в виде 10-секундных серий импульсов длительности 0,5 мс. Тканям давали вернуться к базовой линии предсократительного натяжения в промежутках между частотами (5 мин), и регистрировали величину релаксационного ответа.
После завершения построения кривой ЭПС ответа предобработки все ткани промывали в течение 15 мин, давая возможность тканям вернуться к базовой линии натяжения. Затем ткани получали либо тестируемый агент (например ингибитор НЭП или ФДЭ), либо носитель - ДМСО (синхронизированный контроль). Ткани повторно сокращали фенилэрфином (1 мкМ) через 15 мин после добавления соединения или носителя и определяли кривую ЭПС-индуцированного релаксационного ответа, как описано выше.
Для ЭПС экспериментов в буфер Кребса добавляли атропин (10 мкМ) и гуанетидин (150 мкМ), чтобы аннулировать какие-либо холинергические или адренергические нейрональные иннервации влагалища.
3.8. Измерение уровней цАМФ в изолированном влагалище кролика.
Измерение концентраций цАМФ проводили в экстрактах вагинальных тканей, используя набор для иммуноферментного анализа (ИФА) Вю1гаск сΑМΡ (Лшегзбаш ЫГе 8с1Спсс5 ΡΡΝ 225). Образцы выделенных тканей влагалища обрабатывали тестируемыми агентами (например форсколином или νΐΡ). Через 5 мин эти образцы мгновенно замораживали, используя жидкий азот, гомогенизировали и выделяли цАМФ. Уровни цАМФ измеряли с помощью ИФА. ИФА основан на конкуренции между немеченым цАМФ и фиксированным количеством меченого пероксидазой цАМФ за ограниченное количество цАМФ-специфичного антитела.
- 62 006254
3.9. Измерение активности фосфодиэстеразы (ФДЭ) в изолированном влагалище кролика.
Цитозольные экстракты стенки влагалища человека получали от АВ8 1ис., Эекпуаге (возраст доноров 41 и 60 лет). Изоферменты ФДЭ разделяли с помощью анионообменной хроматографии Моио-Ц и характеризовали на основании их субстратной избирательности, чувствительности к аллостерическим модуляторам и избирательным ингибиторам. Проводили также Вестерн-анализ, используя специфичные антитела к изоферментам ФДЭ, для обнаружения экспрессии ФДЭ во влагалище человека.
Все данные приведены как среднее ± стандартное отклонение среднего. Используя ΐ-критерий Стьюдента, идентифицировали значительные изменения.
4.0. Результаты и обсуждение.
4.1. Животная модель полового возбуждения.
В своих исследованиях авторы изобретения разработали на грызунах воспроизводимую модель физиологии полового возбуждения. С использованием этой модели анестезированного кролика авторам изобретения удалось измерить малые изменения в генитальном кровотоке, используя лазерную доплеровскую технологию. Стимуляцию тазового нерва использовали, чтобы стимулировать нейрональные эффекты полового возбуждения.
Авторы изобретения обнаружили, что стимуляция тазового нерва индуцирует частотозависимое усиление вагинального и клиторного кровотока (см. фиг. 1). Это усиление вагинального кровотока является существенным при регистрации на внутренней и внешней стенках влагалища. Стимуляция тазового нерва при 2 Гц индуцировала средний максимум повышения вагинального кровотока 10,3±1,8; при 4 Гц 20,0±4,6, при 8 Гц - 36,3±4,8 и при 16 Гц - 46,6±4,7 мл/мин/100 г ткани (и=4; 15-20В, 0,5 мс, 10 с) и усиление клиторного кровотока 14,7±3,6 при 2 Гц, 29,4±1,4 при 4 Гц и 69,7±2,1 при 8 Гц. Эти значения имеют амплитуду, подобную амплитуде, наблюдаемой ранее при исследованиях человеческих и животных моделей возбуждения (Вегтаи, 1999а; Рагк, 1997).
Авторы изобретения обнаружили, что субмаксимальная стимуляция тазового нерва приводит к воспроизводимому усилению генитального кровотока (например стимуляция 4 Гц каждые 15 минут давала среднее усиление вагинального кровотока 8,50±0,10 мл/мин/100 г ткани, и=8, и среднее усиление клиторного кровотока 13,65±0,86 мл/мин/100 г ткани, п=11). Воспроизводимость сохранялась вплоть до 5 ч. Авторы изобретения могут использовать воспроизводимость этих ответов для исследования а) идентичности эндогенных вазоактивных агентов/механизмов, которыми опосредовано переполнение кровью гениталий, и б) влияния лекарственных средств, которые могут быть эффективными в усилении вагинального и/или клиторного кровотока.
Авторы изобретения обнаружили, что у анестезированного кролика отсутствуют нежелательные сердечно-сосудистые эффекты, связанные со стимуляцией тазового нерва (см. фиг. 3).
Генитальный кровоток усиливается во время полового возбуждения (Вегтаи, 1999) посредством повышенного артериального кровоснабжения - вагинальная артерия, вагинальная ветвь маточной артерии, внутренняя лобковая артерия и средние ветви средней ректальной артерии все вовлечены в кровоснабжение влагалища и клитора. Тазовый нерв, который берет начало из 82/84 спинальных областей, иннервирует женские гениталии и имеет ветви, оканчивающиеся в нижней части влагалища, клиторе и соответствующих кровеносных сосудах. Посредством стимуляции тазового нерва авторы изобретения могут стимулировать воздействие на кровоток, наблюдаемое во время полового возбуждения, то есть усиление артериального генитального кровотока. Интересно, что усиление артериального кровотока не вызывает венозного дренажа, позволяя капиллярным сеткам переполняться кровью. Переполнение кровью влагалища приводит к смазыванию влагалища посредством повышения транссудации плазмы, и это является одним из первых тазовых ответов, наблюдаемых во время половой стимуляции. Нейромедиаторы, которые высвобождаются при стимуляции тазового нерва или во время полового возбуждения, в настоящее время не идентифицированы. Нервы, содержащие нейропептиды и другие нейромедиаторыкандидаты, которые иннервируют сосудистую сеть и микрососудистую сеть влагалища и клитора, идентифицированы иммуногистохимически. Эти исследования указывают на то, что родственный гену кальцитонина пептид (ССКР), нейропептид Υ (ΝΡΥ), синтаза оксида азота (ΝΟ8), вещество Р и вазоактивный интестинальный пептид (νΐΡ) все присутствуют в нервах, которые иннервируют влагалище и клитор человека (Ноу1е, 1996; Наи8ег-КгоиЬегдег, 1999).
4.2. Обоснование модели полового возбуждения анестезированного кролика.
Чтобы перевести данные по кровотоку, полученные с использованием этой модели, в данные, наблюдаемые на человеческой модели полового возбуждения, авторы изобретения провели прямое сравнение своих данных с данными по вагинальному кровотоку и сердечно-сосудистыми данными, полученными в предклинических исследованиях.
Авторы изобретения обнаружили, что инфузия νΐρ оказывает следующие воздействия в модели полового возбуждения кролика:
Экзогенный νΐΡ (в.в. болюс) индуцирует значительное зависимое от концентрации усиление вагинального кровотока (см. фиг. 2а). Значения этого усиления значительно превышают базальные значения кровотока, когда их регистрируют на внутренней и внешней стенке влагалища. Вагинальный кровоток в значительной степени усиливался на 24,7±3,6 мл/мин/100 г ткани при внутривенном введении νΐΡ (60
- 63 006254 мкг/кг). Кровоток оставался повышенным по сравнению с базальным в течение примерно 11 мин после инфузии. Более низкие дозы индуцировали меньше усиление, например доза 6,0 мкг/кг повышала кровоток на 7,5±1,3 мл/мин/100 г ткани, и кровоток был повышенным в течение 7 мин после инфузии.
Повторные инфузии сходных доз УГР (в.в. через 30 минутные интервалы) индуцируют значительное воспроизводимое усиление вагинального кровотока (см. фиг. 2б).
УГР (в.в.) в значительной степени повышает частоту сердечных сокращений и снижает среднее артериальное давление (см. фиг. 3). В дозе 6,0 мкг/кг (в.в.) УГР вызывал существенное снижение среднего артериального давления крови 13,2±0,7 мм рт. ст. и существенное повышение частоты сердечных сокращений 16±4 ударов в мин.
Эта животная модель непосредственно отображает клинические данные, наблюдаемые при инфузии УГР здоровым добровольцам, то есть усиление вагинального кровотока, снижение кровяного давления и повышение частоты сердечных сокращений. Следовательно, эту модель можно использовать для исследования механизма(ов), который лежит в основе физиологических изменений, которые происходят во время полового возбуждения, и, кроме того, для обоснования новых подходов к усилению вагинального кровотока и, следовательно, лечению РПВЖ.
4.3. УГР индуцирует изменения в вагинальном кровотоке через стимуляцию метаболического пути цАМФ/аденилатциклаза ОНекеп и его соавторы продемонстрировали, что УГР индуцирует усиление вагинального кровотока и смазывания у здоровых добровольцев. Однако механизм, посредством которого УГР оказывает эти воздействия, неясен. В литературе имеется множество примеров УГР-сигнализации через различные системы вторичных посредников, включая цГМФ/гуанилатциклазу (Аккиг-БаЫаи, 1999), монооксид углерода/гемоксигеназу (Бап, 1998) и цАМФ/аденилатциклазу (8с1юеГГег, 1985; Си, 1992; Боба, 1995). Примеры этого приведены в недавнем сообщении, в котором описано, как релаксационные эффекты УГР в маточной артерии можно объяснить высвобождением оксида азота иоуапохзс, 1998). Интересно, что имеется также свидетельство УГР модуляции МО/цГМФ в мужской мочеполовой функции (К1т, 1994), и имеется прямое свидетельство того, что обработкой культур гладкомышечных клеток влагалища человека УГР (0,5 мкМ) не удается повысить уровни цАМФ (ТгащЬ, 1999/Ь/б).
В данном исследовании авторы изобретения показали, что УГР индуцирует вазорелаксацию посредством повышения внутриклеточных уровней цАМФ. При проведении серии функциональных экспериментов авторы изобретения измерили кровоток и релаксацию гладкой мускулатуры в дополнение к биохимическим измерениям внутриклеточных концентраций цАМФ. Авторы изобретения использовали форсколин, активатор аденилатциклазы или миметик цАМФ, чтобы воспроизвести эффекты активации метаболического пути цАМФ/аденилатциклаза. УГР и форсколин оказывают идентичные воздействия на физиологическое возбуждение, на вагинальный кровоток и релаксацию.
УГР (20 мкг/кг) и форсколин (40 нмоль/кг) индуцируют значительное усиление вагинального кровотока 13,2 и 12,7 мл/мин/100 мг ткани соответственно (см. фиг. 2а и 4а). Эти изменения амплитуды, индуцируемые УГР и форсколином, различались незначительно. Эти значения усиления в значительной степени выше базальных значений кровотока, когда их регистрировали либо на внутренней, либо на внешней стенке влагалища.
УГР (0,1 мкМ) и форсколин (10 мкМ) оба значительно повышали внутриклеточные концентрации цАМФ выше базальных уровней в изолированной ткани влагалища (см. фиг. 4б).
УГР (0,1 мкМ) и форсколин (10 мкМ) повышали базальные концентрации с 276 нМ на 156% и 238% соответственно. Различия в этих процентных соотношениях отражают различие в использованных концентрациях УГР и форсколина, например УГР в концентрации 0,1 мкМ расслабляет предварительно сокращенное изолированное влагалище примерно на 80%, тогда как достаточное для полного расслабления изолированного влагалища количество форсколина составляет 10 мкМ.
Кроме того, авторы изобретения показали, что УГР и форсколин индуцируют релаксацию изолированной ткани влагалища при значениях ЕС50 18,8±0,6 нМ и 320±20 нМ соответственно (см. фиг. 4в).
Эти данные подтверждают, что УГР индуцирует вагинальную вазорелаксацию через метаболический путь цАМФ/аденилатциклаза. Следовательно, эту модель может быть использована для получения сведений, приводит ли стимуляция тазового нерва, то есть половое возбуждение, к высвобождению УГР/активации метаболического пути цАМФ/аденилатциклаза. Кроме того, могут быть также исследованы подходы к усилению вагинального кровотока во время полового возбуждения, например путем прямого или косвенного усиления цАМФ-сигнализации.
4.4. цАМФ является медиатором вагинальной вазорелаксации.
Кандидаты нейромедиатора и вторичного посредника, ответственные за усиление вагинального кровотока во время полового возбуждения, в настоящее время не идентифицированы. До настоящего времени ученые концентрировали свое внимание на метаболическом пути оксид азота ^О)/цГМФ. В соответствии с настоящим изобретением авторы изобретения продемонстрировали, что: 1) метаболический путь цАМФ/аденилатциклаза опосредует УГР-индуцированное усиление вагинального кровотока; 2) УГР является эндогенным нейромедиатором, который высвобождается во время полового возбуждения; и 3) эндогенно высвобождаемый УГР индуцирует свои эффекты вазорелаксации посредством повышения цАМФ.
- 64 006254
Нейромедиатор, ответственный за расслабление стенки влагалища, в настоящее время не идентифицирован. Авторы изобретения показали, что УГР является нейромедиатором, который высвобождается при стимуляции тазового нерва, и что цАМФ опосредует УГР-опосредуемую вазорелаксацию. Агенты, которые предотвращают метаболизм УГР или прямо усиливают цАМФ-сигнализацию, повышают стимулируемое тазовым нервом усиление вагинального кровотока, например ингибиторы НЭП или ингибиторы ФДЭцАМФ соответственно (см. следующие разделы).
В своих исследованиях авторы изобретения обнаружили, что можно исключить роль ΝΟ в УГРиндуцированной вагинальной релаксации. Сильнодействующий и избирательный ингибитор ФДЭ типа 5 обладает минимальным воздействием на УГР-индуцированные релаксации изолированных гладких мышц влагалища (30% усиление УГР-индуцированной релаксации; см.табл. 1).
Таблица 1. Усиление УГР-опосредованной релаксации изолированного влагалища кролика. Эта таблица иллюстрирует процент повышения ЕС50 для УГР-индуцированной релаксации предварительно сокращенной гладкой мышцы влагалища (1 мкМ фенилэрфин). Избирательные ингибиторы ФДЭцАМФ типов 1, 2, 3 и 4 все в значительной степени потенцировали УГР-опосредованные релаксации, а избирательный ингибитор ФДЭцГМФ типа 5 или контроль-носитель не оказывали никакого воздействия на УГРопосредованные релаксации.
Ингибитор ФДЭ в избирательной дозе Процент усиления νΐΡиндуцированной релаксации
ФДЭцамф тип 1 210%
ФДЭцамф тип 2 130%
ФДЭцамф тип 3 220%
ФДЭцамф тип 4 160%
ФДЭцгмф тип 5 нет эффекта (30%)
Контроль - носитель Нет эффекта
Авторы изобретения показали, что УГР является также эндогенным не адренергическим, не холинергическим (НАНХ) нейромедиатором, частично ответственным за ЭПС-индуцированные релаксации изолированной гладкой мышцы влагалища. Высокая доза ингибитора синтазы оксида азота (Ε-ΝΟΛΒΟ, 300 мкМ) ингибирует только 50% ЭПС-индуцированных релаксаций. Ингибитор НЭП (1 мкМ), который будет предотвращать НЭП-индуцированный метаболизм УГР и, следовательно, усиливать УГРсигнализацию, усиливает не оксидазотную НАНХ релаксацию, индуцированную ЭПС. Авторы изобретения показали, что и ΝΟ, и УГР регулируют тонус гладкой мускулатуры в стенке влагалища. Терапевтически будет возможно усиливать релаксации вагинальной гладкой мускулатуры агентами, которые усиливают опосредованную ЫО/цГМФ и/или УГР/цАМФ сигнализацию.
4.5 УГР индуцирует клиторную вазорелаксацию посредством метаболического пути цАМФ.
Кандидаты нейромедиатора и вторичного посредника, ответственные за усиление клиторного кровотока во время полового возбуждения, в настоящее время не идентифицированы. Параллельно с текущим исследованием вагинального кровотока работа была сфокусирована на метаболическом пути оксид азота (ЯО)/цГМФ. Нет сообщений о том, что УГР играет роль в опосредовании клиторного кровотока/переполнения кровью, хотя в ткани клитора визуализированы нейроны, содержащие УГР (НаизегΚτοη^^Γ е! а1., 1999).
В данном исследовании авторы изобретения продемонстрировали, что
1. Инфузия УГР усиливает клиторный кровоток.
2. УГР-индуцированное усиление клиторного кровотока опосредовано метаболическим путем цАМФ/аденилатциклаза.
3. УГР является эндогенным клиторным нейромедиатором, который высвобождается во время полового возбуждения:
1) Инфузия УГР (60-200 мкг/кг, в. в. болюс) индуцирует зависимое от концентрации усиление клиторного кровотока (фиг. 5). 115% усиление клиторного кровотока наблюдали после в.в. инфузии 200 мкг/кг УГР. Это значительно превышало контрольные инфузии (гепсалин).
2) Воздействие УГР на клиторный кровоток можно имитировать путем инфузии миметика цАМФ форсколина (40 нмоль/кг в.в. болюс, фиг. 5). 156% усиление клиторного кровотока наблюдали после в.в. инфузии 40 нмоль/кг форсколина. Это значительно превышало контрольные инфузии (гепсалин). Заметим, что амплитуда ответа подобна амплитуде, индуцированной УГР (200 мкг/кг, в.в. болюс) и сравнима с наблюдаемой на вагинальном кровотоке на фиг. 2 и 4.
3) Избирательные ингибиторы НЭП ЕС 3.4.24.11 в клинически уместных дозах значительно повышают стимулированное тазовым нервом усиление клиторного кровотока (см. фиг. 12). Ингибитор НЭП повышал пиковое усиление клиторного кровотока на значение вплоть до 131% по сравнению со значениями усиления для контроля-носителя.
Эти данные подтверждают, что УГР обладает способностью усиливать клиторный кровоток/вазорелаксацию, и что этот эффект можно имитировать путем активации метаболического пути
- 65 006254 цАМФ/аденилатциклаза. Открытие того, что ингибитор НЭП ЕС 3.4.24.11 (ответственный за метаболизм νΐΡ) повышает стимулированное тазовым нервом усиление клиторного кровотока, демонстрирует, что νΐΡ является нейромедиатором, который высвобождается во время стимуляции тазового нерва/полового возбуждения.
4.6. Генитальный кровоток усиливается фармакологическими агентами, которые прямо или косвенно повышают уровни цАМФ.
РПВЖ связано и, возможно, является результатом пониженного генитального кровотока. Потенциальные подходы к лечению этого расстройства вращаются вокруг усиления генитального кровотока. Установив, что цАМФ является посредником генитальной вазорелаксации, и что повышение цАМФ является результатом высвобождаемого из нейронов νΐΡ, авторы изобретения считают, что если усиливается цАМФ сигнализация, то, как следствие, будет усиливаться генитальный кровоток, приводя к восстановлению генитального кровотока до нормальных уровней и лечению РПВЖ.
В особо предпочтительном аспекте авторы изобретения выбирают три мишени для прямого или косвенного усиления цАМФ-опосредованной вазорелаксации - ингибиторы ФДЭцАМФ, например ингибиторы ФДЭцАМФ типа 2, ингибиторы НЭП (ЕС 3.4.24.11) и антагонисты рецептора нейропептида Υ Υ1 (ΝΡΥ Υ1).
4.6.1. Ингибиторы нейтральной эндопептидазы (НЭП ЕС 3.4.24.11).
НЭП ЕС 3.4.24.11 метаболизирует νΐΡ и, следовательно, прекращает νΐΡ-опосредованную биологическую активность. Ингибиторы НЭП потенцируют эндогенный релаксирующий эффект νΐΡ, высвобождаемого по время возбуждения. Клинический эффект этого - усиление переполнения кровью гениталий.
Ранее в литературе не было сообщений о локализации НЭП ЕС 3.4.24.11 или о ее функциональной роли в ткани влагалища или роли в половом возбуждении.
Избирательные ингибиторы НЭП ЕС 3.4.24.11 в клинически уместных дозах значительно повышают стимулированное тазовым нервом усиление вагинального кровотока (см. фиг. 6).
Ингибитор НЭП повышал пик усиления вагинального кровотока на значение вплоть до 53% по сравнению с синхронизированным контрольным усилением. Это усиление субмаксимальных частот стимуляции (например 4 Гц) было дозозависимым, например доза 0,1 мг/кг в.в. индуцировала 35,0±7,6% усиление; доза 0,3 мг/кг в.в. индуцировала 42,60±27,7% усиление; и доза 1,0 мг/кг в.в. индуцировала 52,8±32,5% усиление. Ингибиторы НЭП не оказывали никакого воздействия на базальный (без стимуляции) вагинальный кровоток. Следовательно, агенты по настоящему изобретению скорее усиливают возбуждение посредством потенцирования цАМФ сигнализации, чем индуцируют возбуждение в отсутствие полового влечения, то есть посредством прямого повышения цАМФ сигнализации.
Избирательные ингибиторы НЭП ЕС 3.4.24.11 в клинически уместных дозах значительно повышают стимулированное тазовым нервом усиление клиторного кровотока (см. фиг. 12). Ингибитор НЭП повышал пик усиления клиторного кровотока на значение вплоть до 131% по сравнению со значениями усиления контроля-носителя. Ингибиторы НЭП не оказывали никакого воздействия на базальный (без стимуляции) вагинальный кровоток. Это дополнительно подтверждает мнение авторов изобретения, что агенты по настоящему изобретению скорее усиливают возбуждение посредством потенцирования цАМФ сигнализации, чем индуцируют возбуждение в отсутствие полового влечения, то есть посредством прямого потенцирования цАМФ сигнализации.
Избирательные ингибиторы НЭП ЕС 3.4.24.11 в клинически уместных дозах повышают νΐΡиндуцированное усиление вагинального кровотока по сравнению с синхронизированными контролями. В субмаксимальных дозах νΐΡ (например 6,0 мкг/кг) происходит значительное потенцирование как в пиковом усилении (95±6%), так и в продлении продолжительности этого усиления (примерно 140% - от 7 до больше 17 мин; см. фиг. 7). Ингибиторы НЭП значительно продлевают продолжительность νΐΡиндуцированного усиления вагинального кровотока, когда их дают в комбинации с дозой νΐΡ, который продуцирует максимальные значения усиления кровотока (примерно 80% увеличение продолжительности - от 11 до 20 мин).
Избирательные ингибиторы НЭП ЕС 3.4.24.11 в клинически уместных дозах значительно повышают νΐΡ-индуцированные и опосредованные нервом релаксации в изолированной ткани. ЕС50 для νΐΡ значительно снижается с 18,8±0,6 нМ до 2,9±0,3 нМ в присутствии избирательного ингибитора НЭП (1 мкМ). Эффект ингибитора НЭП зависит от концентрации.
мРНК посредник и белок НЭП ЕС 3.4.24.11 экспрессируется, и он был идентифицирован во влагалище человека и кролика с помощью Нозерн и Вестерн-анализов.
4.6.2. Ингибиторы фосфодиэстеразы (ФДЭ).
цАМФ расщепляется цАМФ-гидролизующими ФДЭ, то есть ФДЭцАМФ, ингибиторы ФДЭцАМФ будут потенцировать эндогенный вазорелаксирующий эффект цАМФ, высвобождаемого во время возбуждения. Это должно давать клинический эффект усиления переполнения кровью влагалища.
В литературе нет сообщений о локализации ФДЭцАМФ или о функциональной роли этих изоферментов в ткани влагалища или о роли в половом возбуждении. ФДЭ профилированием влагалища человека и кролика авторы изобретения показали, что присутствуют следующие изоферменты ФДЭцАМФ 1, 2, 3, 4, 7
- 66 006254 и 8. Ингибиторы этих ФДЭцАМФ представляют собой потенциальные агенты для усиления вагинального кровотока и/или релаксации гладкой мускулатуры влагалища.
Избирательный ингибитор ФДЭцАМФ, ингибитор типа 2, в клинически уместных дозах значительно повышает стимулированное тазовым нервом усиление вагинального кровотока (см. фиг. 8). Ингибитор ФДЭцАМФ типа 2 повышал пиковое усиление вагинального кровотока на 86,8±21,9% по сравнению со значениями усиления, наблюдаемыми во время синхронизированного контроля (@ 4 Гц).
Избирательный ингибитор ФДЭцАМФ типа 2 значительно увеличивал продолжительность νΐΡиндуцированного (60 мкг/кг) усиления пикового вагинального кровотока на значение свыше 100% (измеренное при 50% амплитуде; см. фиг. 9). Избирательный ингибитор ФДЭцАМФ типа 2 значительно повышает пиковое усиление кровотока, индуцированное νΐΡ-стимуляцией (примерно 15±3% [200 мкг/кг]).
Избирательный ингибитор ФДЭцАМФ типа 2 значительно увеличивал продолжительность νΐΡиндуцированного усиления пикового вагинального кровотока на значение свыше 100% (измеренное при 50% амплитуде; см. фиг. 8). Избирательный ингибитор ФДЭцАМФ типа 2 значительно повышает пиковое усиление в кровотоке, индуцированное стимуляцией тазового нерва(примерно 15±3% [200 мкг/кг] при 4 Гц).
Избирательные ингибиторы ФДЭцАМФ усиливают νΐΡ-индуцированную релаксацию предварительно сокращенной изолированной гладкой мышцы влагалища (1 мкМ фенилэрфин; см. табл. 1). Избирательные ингибиторы ФДЭцАМФ типов 1, 2, 3 и 4 все значительно потенцировали νΐΡ-опосредованные релаксации (210% @ 76 нМ, 130% @ 8 нМ, 220% @ 3,4 мкМ и 160% @ 686 нМ потенцирование значений ЕС50 νΐΡ). Эти ингибиторы вводили в дозе, которая, как известно, является избирательной в отношении конкретной интересующей ФДЭцАМФ. Избирательный ингибитор ФДЭцАМФ типа 5 или контроль-носитель не оказывали видимого воздействия на νΐΡ-опосредованные релаксации.
4.6.3. Антагонисты рецептора ΝΡΥ Υ1.
ΝΡΥ оказывает ингибиторное влияние на νΐΡ-опосредованную вазорелаксацию, и антагонисты ΝΡΥ Υ1 будут способствовать вазорелаксирующему эффекту эндогенного νΐΡ, высвобождаемого по время возбуждения. Клиническим эффектом этого будет усиление переполнения кровью влагалища.
В литературе нет сообщений о локализации рецепторов ΝΡΥ или о функциональной роли этих рецепторов в ткани влагалища или о роли в половом возбуждении.
Исследования экспрессии рецепторов ΝΡΥ с помощью Нозерн- и Вестерн-анализов идентифицировали, что подтипы рецептора ΝΡΥ Υ1 Υ2 и Υ3 присутствуют во влагалище человека и кролика.
Избирательные ингибиторы ΝΡΥ Υ1 в клинически уместных дозах значительно повышают стимулированное тазовым нервом усиление вагинального кровотока (см. фиг. 10). Антагонист ΝΡΥ Υ1 повышал пиковое усиление вагинального кровотока на значение вплоть до 92% по сравнению со значениями синхронизированного контрольного усиления. Это усиление субмаксимальных частот стимуляции (например 4 Гц) было дозозависимым, например доза 0,01 мг/кг в.в. индуцировала 15,8±19,6% усиление; доза 0,03 мг/кг в.в. индуцировала 35,1±17,17% усиление; доза 0,10 мг/кг в.в. индуцировала 60,1±16,9% усиление; и доза 0,3 мг/кг индуцировала 91,9±27,4% усиление (среднее±стандартное отклонение среднего, п=3). Антагонисты ΝΡΥ Υ1 не оказывали никакого воздействия на базальный (без стимуляции) вагинальный кровоток. Это подкрепляет мнение авторов изобретения, что они скорее усиливают возбуждение посредством потенцирования цАМФ сигнализации, чем индуцируют возбуждение в отсутствие полового влечения, то есть посредством прямого повышения цАМФ сигнализации.
4.7. Воздействия агентов, которые повышают иАМФ или усиливают вагинальный кровоток, на среднее артериальное давление крови у анестезированного кролика.
При поиске пероральной терапии РПВЖ желательно, чтобы не было связанных с ним нежелательных сердечно-сосудистых эффектов, например воздействия на давление крови или частоту сердечных сокращений. В своих исследованиях авторы изобретения обнаружили, что инфузии νΐΡ значительно снижают среднее артериальное давление крови (см. фиг. 3) и значительно повышают частоту сердечных сокращений. Следовательно, в особенно предпочтительном аспекте агент не представляет собой νΐΡ. Стимуляция тазового нерва и ингибиторы ФДЭцАМФ и НЭП, однако, не оказывают никакого воздействия на давление крови. В дозе 6,0 мкг/кг νΐΡ (в.в.) вызывал значительное снижение среднего артериального давления крови 13,2±0,7 мм рт. ст. и значительное повышение частоты сердечных сокращений 16±4 ударов в минуту. В более высоких дозах, таких как 60,0 мкг/кг, νΐΡ (в. в.) вызывал значительное снижение среднего артериального давления крови 14,7±1,37 мм рт. ст., и это было сопряжено со значительным повышением частоты сердечных сокращений 111±30 ударов в минуту, что затем повышало среднее артериальное давление крови на 8,5±1,4 мм рт. ст.
Тестируемые соединения
Серию упомянутых выше соединений тестировали в соответствии с настоящим изобретением, и было обнаружено, что они эффективны в соответствии с настоящим изобретением, то есть они могут действовать как ПцАМФ, чтобы лечить ЖСД, в частности РПВЖ.
Эти соединения включали в себя:
- 67 006254
Соединение формулы Та («На») -то есть 5-[4-(диэтиламино)бензил]-1-метил-3-пропил-6,7-дигидро1Н-пиразоло[4,3-б]пиримидин-7-он. Соединение Еа может быть получено как указано в ЕР-А-0911333 (пример 50 этой заявки).
Соединение формулы П («ЕП») - то есть 9-(1-ацетил-4-фенилбутил)-2-[(3,4-диметоксифенил)метил]-1,9-дигидро-6Н-пурин-6-он. Соединение ЕП может быть получено как указано в ЕР-А-0771799 (пример 100 этой заявки).
Соединение формулы ГГГ («ЕГГГ») - то есть милринон. Соединение ЕГГГ является коммерчески доступным продуктом.
Соединение формулы ГУ («ЕГУ») - то есть ролипрам. Соединение ЕГУ является коммерчески доступным продуктом.
Соединение формулы У («ЕУ») - то есть 3-[[[1-(2-карбокси-4-пентенил)циклопентил]карбонил] амино]циклогексанкарбоновой кислоты 1-этиловый эфир. Соединение ЕУ может быть получено как указано в ЕР-А-0274234 (пример 300 этой заявки).
Соединение формулы УГ («ЕУГ») - то есть 3-[[[1-(2-карбокси-4-пентенил)циклопентил]карбонил] амино]циклогексанкарбоновая кислота. Соединение ЕУГ может быть получено как указано в ЕР-А0274234 (пример 379 этой заявки).
В частности, На, ЕП, ЕШ и НУ являются ингибиторами ФДЭцАМФ. ЕИ является И:ФДЭГ, ЕП является И:ФДЭП, ЕШ является И:ФДЭШ и НУ является И:ФДЭГУ
Данные для этих соединений представлены выше в предыдущем разделе примеры - например, см. табл. 1.
Ясно, что эти ингибиторы ФДЭцАМФ усиливают УГР-индуцированные релаксации изолированной ткани.
Соединение ЕГГ, которое является избирательным И:ФДЭГГ, повышает УГР-индуцированное усиление вагинального кровотока в клинически уместных дозах.
Соединение ЕГГ также повышает стимулированное тазовым нервом усиление вагинального кровотока в клинически уместных дозах.
Соединения ЕУ и ЕУГ являются избирательными ингибиторами НЭП ЕС 3.4.24.11.
Данные, представленные выше в предыдущем разделе примеры, являются данными для соединения ЕУГ. Однако сходные результаты были получены для соединения ЕУ.
Ясно, что соединения ЕУ и ЕУГ повышают УГР-индуцированное усиление вагинального кровотока в клинически уместных дозах.
Соединения ЕУ и ЕУГ также повышают стимулированное тазовым нервом усиление вагинального кровотока в клинически уместных дозах.
Соединения ЕУ и ЕУГ также усиливают УГР-индуцированную и опосредованную нервом релаксацию изолированной ткани в клинически уместных дозах.
Дополнительные соединения, которые тестировали и доказали, что они являются эффективными, включают в себя
2-[(1-{[(1 -бензил-6-оксо-1,6-дигидро-3-пиридинил)амино]карбонил}циклопентил)метил]-4-метоксибутановую кислоту (Е57),
2-{[1-({[3 -(2-оксо-1 -пирролидинил)пропил] амино }карбонилциклопентил]метил}-4-фенилбутановую кислоту (Е58), (+)2-{[1-({[2-(гидроксиметил)-2,3-дигидро-1Н-инден-2-ил]амино}карбонил)циклопентил]метил}-4фенилбутановую кислоту (Е59),
2-[(1-{ [(5-метил- 1,3,4-тиадиазол-2-ил)амино]карбонил}циклопентил)метил]-4-фенилбутановую кислоту (Е60), цис-3-(2-метоксиэтокси)-2-[(1-{[(4-{[(фенилсульфонил)амино]карбонил}циклогексил)амино]карбонил}циклопентил)метил]пропановую кислоту (Е61), (+)-2-{[1-({[2-(гидроксиметил)-2,3-дигидро-1Н-инден-2-ил]амино }карбонил)циклопентил]метил} пентановую кислоту (Е62), (+)-2-[(1-{[(5-этил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)амино]карбонил}циклопентил)метил]пентановую кислоту (Е63),
2-({1-[3-бензиланилино)карбонил]циклопентил}метил)пентановую кислоту (Е64),
2-[(1-{[(1 -бензил-6-оксо-1,6-дигидро-3-пиридинил)амино]карбонил}циклопентил)метил]пентановую кислоту (Е65),
2-([1-({[(1К,38,4К)-4-(аминокарбонил)-3-бутилциклогексил]амино}карбонил)циклопентил]метил} пентановую кислоту (Е66).
Каждое из соединений Е57-66 представляет собой И:НЭП.
Синтез соединений Е57-66
В следующем комментарии примеры получения являются примерами синтеза промежуточных соединений, а примеры являются примерами синтеза соответствующих соединений по настоящему изобретению.
- 68 006254
Пример 1. 2-[( 1 -{[(1 -Бензил-6-оксо-1,6-дигидро-3-пиридинил)амино]карбонил}циклопентил)метил]-4-метоксибутановая кислота (Р57).
Смесь бензилового эфира из примера получения 1 (1/62) (850 мг, 1,64 ммоль) и 5% палладий на угле (250 мг) в 40% водном этаноле (21 мл) гидрировали при 30 фунт/кв.дюйм (206,84 кПа) и комнатной температуре в течение 30 мин. Эту реакционную смесь фильтровали через НуГ1о®, и фильтрат упаривали при пониженном давлении. Остаточную пену очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя дихлорметан: метанол (97:3) в качестве элюента, с получением соединения, указанного в заголовке, в виде белой пены, 550 мг, 79%; '11 ЯМР (ДМСО-б6, 300 МГц) δ: 1.24-2.17 (т, 12Н), 2.18-2.31 (т, 1Н), 3.07 (з, 3Н), 3.21 (!, 2Н), 5.08 (з, 2Н), 6.63 (б, 1Н), 7.23-7.41 (т, 5Н), 7.72 (б, 1Н), 8.24 (з, 1Н).
Анализ: Обнаружено: С 67,46; Н, 7,18; Ν, 6,24. С-ΊI; К О, требует С 67,58; Н, 7,09; Ν, 6,57%.
Пример 2. 2-{ [1-({[3-(2-Оксо-1-пирролидинил)пропил]амино}карбонилциклопентил]метил}-4-фенилбутановая кислота (Р58).
Смесь бензилового эфира из примера получения 3 (3/67) (780 мг, 1,55 ммоль) и 10% палладий на угле (100 мг) в смеси этанол:вода (90:10 об./об.) (30 мл) гидрировали при комнатной температуре и давлении Н2 60 фунт/кв.дюйм (413,689 кПа) в течение 1,5 ч. Катализатор отфильтровывали, и фильтрат упаривали при пониженном давлении с получением соединения, указанного в заголовке, в виде белой пены, 473 мг, 74%; '11 ЯМР (СОС13, 300 МГц) δ: 1.26-1.77 (т, 10Н), 1.78-2.46 (т, 11Н), 2.49-2.70 (т, 2Н), 2.953.36 (т, 4Н), 6.92-7.38 (т, 5Н). Анализ: Обнаружено: С, 64,05; Н, 7,73; Ν, 6,22. С24Н34^О4-0,75Н2О требует С, 65,88; Н, 7,83; Ν, 6,40%.
Пример 3. (+)-2-{ [ 1 -({[2-(Гидроксиметил)-2,3-дигидро-1Н-инден-2-ил]амино }карбонил)циклопентил]метил}-4-фенилбутановая кислота (Р59).
2-{[1-({ [2-(Гидроксиметил)-2,3-дигидро-1Н-инден-2-ил]амино }карбонил)циклопентил]метил}-4фенилбутановую кислоту (^О 9110644) можно очистить по стандартным методикам ВЭЖХ, используя колонку ΑΌ (атмосферное давление) и смесь гексан:изопропанол:трифторуксусная кислота (70:30:0,2) в качестве элюента, с получением соединения, указанного в заголовке примера 3, 99,5% ее (энантиомерная чистота); [α]ο=+9,1° (с=1,76 в этаноле).
Пример 4. 2-[(1-{ [(5-Метил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)амино]карбонил}циклопентил)метил]-4-фенилбутановая кислота (Р60).
Смесь бензилового эфира из примера получения 4 (4/70) (187 мг, 0,39 ммоль) и 10% палладий на угле (80 мг) в этаноле (20 мл) гидрировали при 60 фунт/кв.дюйм (413,69 кПа) в течение 18 ч. Анализ ТСХ (тонкослойная хроматография) показывал остаточный исходный материал, поэтому добавляли дополнительный 10% палладий на угле (100 мг), и реакцию продолжали в течение еще 5 ч. Анализ ТСХ снова показывал остаточный исходный материал, поэтому добавляли дополнительный катализатор (100 мг), и гидрирование продолжали в течение 18 ч. Эту смесь фильтровали через Α^Ьοсе1®, фильтрат концентрировали при пониженном давлении и подвергали азеотропной перегонке с дихлорметаном. Сырой продукт очищали хроматографией на силикагеле, используя колонку Вю!аде® и дихлорметан:метанол (95:5) в качестве элюента, с получением соединения, указанного в заголовке, в виде прозрачного масла,
- 69 006254 мг, 53%; Ή ЯМР (СПС13, 300 МГц) δ: 1.51-1.89 (т, 9Н), 2.03 (т, 1Н), 2.20 (т, 1Н), 2.40 (т, 2Н), 2.60 (т, 5Н), 7.15-7.30 (т, 5Н); ЬКМ8 (жидкостная хроматография-масс-спектрометрия): т/ζ 387,8 (МН+).
Пример 5. цис-3-(2-Метоксиэтокси)-2-[(1-{[(4-{[(фенилсульфонил)амино]карбонил}циклогексил) амино]карбонил}циклопентил)метил]пропановая кислота (Р61).
Раствор трет-бутиловрго эфира из примера получения 8 (8/66) (446 мг, 0,75 ммоль) в дихлорметане (5 мл) и трифторуксусную кислоту (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Эту реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток подвергали азеотропной перегонке с дихлорметаном, затем с толуолом и наконец с эфиром с получением соединения, указанного в заголовке, в виде белой пены, 385 мг, 95%; 1Н ЯМР (СПС13, 400 МГц) δ: 1.48-2.17 (т, 18Н), 2.40 (к, 1Н), 3.50-3.70 (т, 6Н), 3.94 (к, 1Н), 6.10 (б, 1Н), 6.59 (к, 1Н), 7.55 (!, 2Н), 7.61 (т, 1Н), 8.02 (б, 2Н), 9.11 (к, 1Н); Анализ: Обнаружено: С 54,88; Н, 6,90; Ν, 5,04. С26Н38Х2О88-1,7Н2О требует С 57,97; Н 7,11; Ν 5,20%.
Пример 6. (+)-2-{[1-({[2-(Гидроксиметил)-2,3-дигидро-1Н-инден-2-ил]амино}карбонил) циклопентил]метил}пентановая кислота (Р62).
2-{[1-({ [2-(Гидроксиметил)-2,3-дигидро-1Н-инден-2-ил]амино }карбонил)циклопентил] метил} пентановую кислоту (\УО 9110644) дополнительно очищали ВЭЖХ, используя колонку ΑΌ и смесь гексан : изопропанол : трифторуксусная кислота (90:10:0,1) в качестве элюента, с получением соединения, указанного в заголовке примера 6,99% ее; [а]о=+10.4° (с=0,067, этанол).
Пример 7. (+)-2-[(1-{ [(5-Этил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)амино]карбонил}циклопентил)метил]пентановая кислота (Р63).
Кислоту из примера получения 18 (18/пр.4) (824 мг) дополнительно очищали ВЭЖХ, используя колонку ΑΌ и смесь гексан:изопропанол:трифторуксусная кислота (85:15:0,2) в качестве элюента, с получением соединения, указанного в заголовке примера 7, в виде белой пены, 386 мг, 99% ее; Ή ЯМР (СПС13, 400 МГц) δ: 0.90 (!, 3Н), 1.38 (т, 6Н), 1.50-1.79 (т, 9Н), 2.19 (т, 1Н), 2.30 (т. 1Н), 2.44 (т, 1Н), 2.60 (т, 1Н), 2.98 (ф 2Н), 12.10-12.27 (Ьк, 1Н); ЬКМ8: т/ζ 338 (МН+); и [α]π=+3,8ο (с=0,1, метанол).
Пример 8. 2-({1-[(3-Бензиланилино)карбонил]циклопентил}метил)пентановая кислота (Р64).
Смесь бензилового эфира из примера получения 10 (10/53) (1,3 г, 2,47 ммоль) и 5% палладий на угле (130 мг) в воде (10 мл) гидрировали при 30 фунт/кв.дюйм (206,84 кПа) и комнатной температуре в течение 2 ч. Эту реакционную смесь фильтровали через Α^Ьосе1®, фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток растирали с дихлорметаном. Остаточную смолу растирали с эфиром, затем с гексаном и высушивали при 50°С с получением соединения, указанного в заголовке, в виде твердого вещества, 0,79 г, 81%; Ή ЯМР (СПС13, 300 МГц) δ: 0.95 (!, 3Н), 1.24-1.51 (т, 3Н), 1.58-1.80 (т, 7Н), 1.88 (бб, 1Н), 2.15 (т, 2Н), 2.24 (т, 1Н), 2.48 (т, 1Н), 4.00 (к, 2Н), 6.98 (б, 1Н), 7.24 (т, 6Н), 7.40 (т, 3Н); Аналитически обнаружено: С 75,48; Н 7,76; Ν 3,59. С25Н31ХО3-0,25Н2О требует С 75,44; Н 7,98; Ν 3,51%.
Пример 9. 2-[(1-{ [(1-Бензил-6-оксо-1,6-дигидро-3-пиридинил)амино]карбонил}циклопентил)метил] пентановая кислота (Р65).
- 70 006254
Соединение, указанное в заголовке, получали в виде белой пены с выходом 51% из бензилового эфира примера получения 13 (13/56), следуя методике, подобной методике, описанной в примере получения 19 (19/пр.21), за исключением того, что продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя этилацетат в качестве элюента; 1Н ЯМР (СЭС13, 300 МГц) δ: 0.96 (!, 3Н), 1.28-1.80 (т, 12Н), 2.01 (т, 1Н), 2.30-2.52 (т, 2Н), 5.02 (бб, 2Н), 6.60 (б, 1н), 7.27 (т. 5Н), 7.70 (к, 1Н), 8.34 (к, 1Н); Анализ: Обнаружено: С, 69,52; Н, 7,41; Ν, 6,51. С24Н3(№О4-0,25Н2О требует С, 69,45; Н, 7,41; Ν, 6,75.
Пример 10. 2-{ [ 1 -({[(1В,38,4В)-4-(Аминокарбонил)-3-бутилциклогексил]амино}карбонил)циклопентил] метил} пентановая кислота (Е66).
Соединения общей формулы 1с, то есть соединения общей формулы 1, где г1 представляет собой пропил, получали из соответствующего трет-бутилового эфира, следуя методике, подобной методике, описанной в примере получения 14 (14/пример1).
Пример получения 1 (1/62). Бензиловый эфир 2-[(1-{[(1-бензил-6-оксо-1,6-дигидро-3-пиридинил) амино]карбонил}циклопентил)метил}-4-метоксибутановой кислоты.
Оксалилхлорид (0,26 мл, 3,00 ммоль) добавляли к охлажденному во льду раствору 1-{2[(бензилокси)карбонил]-4-метоксибутил}циклопентанкарбоновой кислоты (ЕР 274234) (1,0 г, 3,00 ммоль) и Ν,Ν-диметилформамида (2 капли) в дихлорметане (20 мл), и эту реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Этот раствор концентрировали при пониженном давлении, и остаток подвергали азеотропной перегонке с дихлорметаном (3х10 мл). Продукт растворяли в дихлорметане (20 мл), затем охлаждали в ледяной бане. Добавляли амин из примера получения 2 (2/28) (600 мг, 3 ммоль) и Ν-метилморфолин (0,6 мл, 5,45 ммоль), и эту реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и распределяли между водой и эфиром. Органический слой промывали соляной кислотой (2 н.), раствором бикарбоната натрия, затем водой, высушивали (Мд8О4) и выпаривали при пониженном давлении. Остаточное зеленое твердое вещество очищали колоночной хроматографией среднего давления на силикагеле, используя этилацетатгексан (90:10) в качестве элюента, с получением соединения, указанного в заголовке, 880 мг, 57%. 1Н ЯМР (СПС13, 300 МГц) δ: 1.37-2.28 (т, 12Н), 2.46-2.64 (т, 1Н), 3.20 (к, 3Н), 3.31 (т, 2Н), 4.97 (бб, 2Н), 5.08 (бб, 2Н), 6.57 (б, 1Н), 7.12 (т, 1Н), 7.18-7.48 (т, 10Н), 8.08 (б, 1Н).
Пример получения 2 (2/28). 5-Амино-1-бензил-2(1 Н)-пиридинон.
Смесь 1-бензил-5-нитро-1Н-пиридин-2-она (,1икШк МеЫдк Апп. Сйет. 484; 1930; 52) (1,0 г, 4,35 ммоль) и гранулированного олова (3,5 г, 29,5 ммоль) в концентрированной соляной кислоте (14 мл) нагревали при 90°С в течение 1,5 ч. Охлажденный раствор разбавляли водой, нейтрализовали, используя раствор карбоната натрия, и экстрагировали этилацетатом (всего 250 мл). Объединенные органические экстракты фильтровали, высушивали (Мд8О4) и выпаривали при пониженном давлении с получением соединения, указанного в заголовке, в виде бледно-зеленого твердого вещества (со временем становившегося голубым), 440 мг, 51%. 1Н ЯМР (СВС13, 250 МГц) δ: 4.12-4.47 (Ьк, 2Н), 5.00 (к, 2Н), 6.31 (б, 1Н), 6.86 (к, 1Н), 7.07 (т, 1Н), 7.14-7.42 (т, 5Н).
Пример получения 3 (3/67). Бензиловый эфир 2-[(1-({[3-(2-оксо-1-пирролидинил)пропил]амино}карбонилциклопентил]метил}-4-фенилбутановой кислоты.
- 71 006254
1-(3-Диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид (1,06 г, 5,53 ммоль), 1-гидроксибензотриазола гидрат (0,60 г, 4,44 ммоль) и 4-метилморфолин (0,56 г, 5,54 ммоль) последовательно добавляли к охлажденному раствору 1-{2-[(бензилокси)карбонил]-4-фенилбутил}циклопентанкарбоновой кислоты (ЕР 274234) (1,5 г, 3,94 ммоль) в сухом дихлорметане (15 мл) при комнатной температуре, а затем добавляли №(3-аминопропил)-2-пирролидинон (0,56 г, 3,94 ммоль), и эту реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Эту смесь промывали водой, 2н. соляной кислотой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия, а затем высушивали (Мд8О4) и выпаривали при пониженном давлении. Остаточное желтое масло очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя этилацетат:пентан (50:50) в качестве элюента, с получением соединения, указанного в заголовке, в виде прозрачной смолы, 800 мг, 40%; 1Н ЯМР (СЭС13, 300 МГц) δ: 1.37-2.20 (т, 16Н), 2.342.58 (т, 5Н), 2.92-3.46 (т, 6Н), 5.07 (δ, 1Н), 5.18 (δ, 1Н), 6.98-7.47 (т, 10Н).
Пример получения 4 (4/70). Бензиловый эфир 2-[(1-{[(5-метил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)амино]карбонил}циклопентил)метил]-4-фенилбутановой кислоты.
Соединение, указанное в заголовке, получали в виде прозрачного масла с выходом 74% из 1-{2[(бензилокси)карбонил]-4-фенилбутил}циклопентанкарбоновой кислоты (ЕР 274234) и 2-амино-5-метил-1,3,4-тиадиазола, следуя методике, подобной методике, описанной в примере получения 5 (5/68); 1Н ЯМР (СОС13, 400 МГц) δ: 1.58-1.76 (т, 7Н), 1.83-1.98 (т, 3Н), 2.03 (т, 1Н), 2.20 (т, 1Н), 2.35 (т, 1Н), 2.44 (т, 3Н), 2.65 (к, 3Н), 5.02 (δδ, 2Н), 7.00 (δ, 2Н), 7.15 (т, 1Н), 7.19 (т, 2Н), 7.35 (т, 5Н); ЬКМ8: т/ζ 478,7 (МН+).
Пример получения 5 (5/68). Бензиловый эфир 2-{[1-({[3-(метиламино)-3-оксопропил]амино}карбонил)циклопентил]метил}-4-фенилбутановой кислоты.
1-(3-Диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид (122 мг, 0,64 ммоль), 1-гидроксибензотриазола гидрат (86 мг, 0,64 ммоль) и 4-метилморфолин (173 мкл, 1,59 ммоль) последовательно добавляли к охлажденному раствору 1-{2-[(бензилокси)карбонил]-4-фенилбутил} циклопентанкарбоновой кислоты (ЕР 274234) (202 мг, 0,53 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (5 мл) при комнатной температуре, а затем добавляли амина гидрохлорид из примера получения 6 (6/23) (146 мг, 1,06 ммоль), и эту реакционную смесь перемешивали при 90° С в течение 18 ч. Охлажденный раствор концентрировали при пониженном давлении, и остаток распределяли между водой (20 мл) и этилацетатом (100 мл). Слои разделяли, органическую фазу промывали водой (3х30 мл), рассолом (25 мл), высушивали (Мд8О4) и выпаривали при пониженном давлении с получением прозрачного масла. Этот сырой продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя дихлорметан: метанол (98:2) в качестве элюента, с получением соединения, указанного в заголовке, в виде бесцветного масла, 162 мг, 67%; 1Н ЯМР (СЭС13, 400 МГц) δ: 1.38-1.53 (т, 2Н), 1.53-1.96 (т, 8Н), 2.02 (т, 2Н), 2.27 (ΐ, 2Н), 2.46 (т, 3Н), 2.76 (δ, 3Н), 3.44 (т, 2Н), 5.13 (к, 2Н), 5.79 (Ьк, 1Н), 6.38 (т, 1Н), 7.06 (δ, 2Н), 7.18 (т, 1Н), 7.22 (т, 2Н), 7.38 (т, 5Н); ЬКМ8: т/ζ 465,5 (МН+).
Пример получения 6 (6/23). 3-Амино-№метилпропанамида гидрохлорид.
Смесь бензилкарбамата из примера получения 7 (7/13) (7,92 г, 33,5 ммоль) и 5% палладия на угле (800 мг) в этаноле (300 мл) гидрировали при 50 фунт/кв.дюйм (344,74 кПа) и комнатной температуре в течение 4 ч. Эту реакционную смесь фильтровали через АгЬосе1®, промывая этанолом, и к объединенному фильтрату добавляли 1н. соляную кислоту (36,9 мл, 36,9 ммоль). Этот раствор упаривали при пониженном давлении, и остаток подвергали азеотропной перегонке с дихлорметаном с получением соединения, указанного в заголовке, в виде бесцветной пены, 4,66 г. 1Н ЯМР (ДМСО-δ^ 300 МГц) δ: 2.46 (ΐ, 2Н), 2.60 (к, 3Н), 2.95 (т, 2Н), 7.98-8.16 (т, 2Н).
Пример получения 7 (7/13). Бензиловый эфир 3-(метиламино)-3-оксопропилкарбаминовой кислоты.
- 72 006254
Смесь К-[(бензилокси)карбонил]-3-аланина (10 г, 44,8 ммоль), метиламина гидрохлорида (3,33 г, 49,28 ммоль), 1-гидроксибензотриазола гидрата (6,05 г, 44,8 ммоль), 1-(3-диметиламинопропил)-3этилкарбодиимида гидрохлорида (10,3 г, 53,76 ммоль) и Ν-метилморфолина (11,33 мл, 103 ммоль) в дихлорметане (200 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Полученный осадок отфильтровывали с получением желаемого продукта в виде бесцветной пены, и фильтрат выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией, используя градиентное элюирование смесью этилацетат:гексан (с 90:10 до 100:0) с получением дополнительного продукта, 7,96 г, суммарный выход 75%; 2Н ЯМР (СПС13, 300 МГц) δ: 2.42 (1, 2Н), 2.80 (8, 3Н), 3.50 (т, 2Н), 5.21 (8, 2Н), 5.49 (Ь8, 1Н), 5.63 (Ь8, 1Н), 7.36 (т, 5Н); Анализ: Обнаружено: С 60,68; Н 7,00; Ν 11,95. С12Н16^О3 требует С 61,00; Н 6,83; Ν 11,86%.
Пример получения 8 (8/66). цис-трет-Бутиловый эфир 3-(2-метоксиэтокси)-2-[(1-{[(фенилсульфонил)амино]карбонил}циклогексил)амино]карбонил)циклопентил)метил]пропановой кислоты.
Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид (199 мг, 0,97 ммоль), 4-диметиламинопиридин (118 мг, 0,97 ммоль) и бензолсульфонамид (152 мг, 0,97 ммоль) добавляли к охлажденному во льду раствору кислоты из примера получения 9 (9/63) (400 мг, 0,878 ммоль) в дихлорметане (12 мл) и Ν,Ν-диметилформамиде (0,5 мл), и эту реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Эту смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток суспендировали в холодном этилацетате. Полученный нерастворимый материал отфильтровывали, фильтрат промывали соляной кислотой (1 н.) и водой, затем высушивали (Мд8О4) и выпаривали при пониженном давлении. Этот сырой продукт очищали колоночной хроматографией, используя градиентное элюирование смесью дихлорметан: метанол (с 95:5 до 90:10), с получением соединения, указанного в заголовке, в виде белой пены, 480 мг, 92%; 2Н ЯМР (СПС13, 400 МГц) ά: 1.44 (8, 9Н), 1.63 (т, 13Н), 1.80 (т, 2Н), 1.88 (т, 1Н), 1.98 (т, 2Н), 2.36 (т, 1Н), 2.57 (т, 1Н), 3.38 (8, 3Н), 3.40 (т, 1Н), 3.51 (1, 2Н), 3.58 (т, 3Н), 3.95 (т, 1Н), 5.92 (ά, 1Н), 7.56 (т, 2Н), 7.62 (т, 1Н), 8.05 (ά, 2Н), 8.75 (Ь8, 1Н); ЬКМ8: т/ζ 618 31\а/.
Пример получения 9 (9/63). 4-{[(1-{3-трет-Бутокси-2-[(2-метоксиэтокси)метил 1-3-оксопропил} циклопентил)карбонил] амино} циклогексанкарбоновая кислота.
Смесь бензилового эфира 4-{[(1-{3-трет-бутокси-2-[(2-метоксиэтокси)метил]-3-оксопропил}циклопентил)карбонил]амино} циклогексанкарбоновой кислоты (ЕР 274234) и 10% палладия на угле (250 мг) в воде (10 мл) и этаноле (50 мл) гидрировали при 50 фунт/кв.дюйм (344,74 кПа) и комнатной температуре в течение 18 ч. Эту реакционную смесь фильтровали через 8о1каПос®, фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток подвергали азеотропной перегонке с толуолом (3х), а затем с дихлорметаном (3х) с получением соединения, указанного в заголовке, 2,0 г, 96%; 2Н ЯМР (СЭС13, 300 МГц) δ: 1.48 (8, 9Н), 1.53-1.84 (т, 14Н), 1.94-2.10 (т, 5Н), 2.60 (т, 2Н), 3.40 (8, 3Н), 3.41-3.63 (т, 5Н), 3.96 (т, 1Н), 5.90 (Ь0, 1Н).
Пример получения 10 (10/53).
Следующее соединение:
где
- 73 006254
Пример Получе- ния Р Выход (%) Данные
10 (10/53)1 90 1Н ЯМР (СОС13, 300 МГц) δ: 0.84 (ΐ, ЗН), 1.24 (т, 2Н), 1.40-1.76 (т, 7Н), 1.84 (όό, 1Н), 1.98 (т, 1Н), 2.19 <άά, 1Н), 2.28 (т, 1Н), 2.56 (т, 1Н), 3.98 (ε, 2Н), 4.99 (άά, 2Н), 6.98 (б, 1Н), 7.19-7.42 (т, 15Н).
1= дихлорметан использовали в качестве колоночного элюента получали из хлорангидрида кислоты из примера получения 11 (11/3) и соответствующего амина, следуя методике, подобной методике, описанной в примере получения 12 (12/52).
Пример получения 11 (11/3). Бензиловый эфир 2-{[1-(хлоркарбонил)циклопентил]метил}пентановой кислоты.
Оксалилхлорид (1,15 мл, 13,2 ммоль) добавляли к охлажденному во льду раствору 1-{2[(бензилокси)карбонил]пентил} циклопентанкарбоновой кислоты (ЕР 274234) (2,0 г, 6,3 ммоль) в сухом дихлорметане (20 мл), и этот раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Эту реак ционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток подвергали азеотропной перегонке с дихлорметаном (3х) с получением соединения, указанного в заголовке, в виде золотистого масла, 2,1 г, 'Н ЯМР (СЭС13, 300 МГц) б: 0.88 (1, 3Н), 1.28 (т, 2Н), 1.43 (т, 2Н), 1.63 (т, 6Н), 2.00 (т, 1Н), 2.08-2.35 (т, 3Н), 2.44 (т, 1Н), 5.15 (з, 2Н), 7.28 (т, 5Н).
Пример получения 12 (12/52). Бензиловый эфир 2-({1-[(3-пиридиниламино)карбонил]циклопентил} метил)пентановой кислоты.
Триэтиламин (0,11 мл, 0,78 ммоль) добавляли к смеси хлорангидрида кислоты из примера получения 11 (11/3) (200 мг, 0,60 ммоль) и 2-аминопиридина (61 мг, 0,65 ммоль) в дихлорметане (3 мл), и эту реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Эту смесь упаривали при пониженном давлении, остаток распределяли между раствором бикарбоната натрия (5 мл) и этилацетатом (20 мл) и разделяли слои. Органическую фазу высушивали (Мд8О4) и упаривали при пониженном давлении с получением смолы. Этот сырой продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя этилацетат в качестве элюента, с получением соединения, указанного в заголовке, 130 мг; 1Н ЯМР (СЭС13, 400 МГц) б: 0.82 (1, 3Н), 1.21 (т, 3Н), 1.40 (т, 1Н), 1.43-1.72 (т, 6Н), 1.81 (б, 1Н), 1.98 (т, 1Н), 2.18 (т, 1Н), 2.24 (т, 1Н), 2.46 (т, 1Н), 4.98 (т, 2Н), 7.20-7.38 (т, 6Н), 7.42 (з, 1Н), 8.06 (б, 1Н), 8.35 (б, 1Н), 8.56 (з, 1Н).
Пример получения 13 (13/56).
Следующее соединение:
сн3 где
- 74 006254
Пример Получе- ния К Выход (%) Данные
13 (13/56)2 ψ-χι ^ΝΗ 53 1Н ЯМР (СОС13, 300 МГц) δ: 0.84 (ΐ, ЗН), 1.25 (т, 2Н), 1.271.99 (т, ЮН), 2.07-2.30 (т, 2Н), 2.47 (т, 1Н), 4.99 (δ, 2Н), 5.10 (άά, 2Н), 6.59 (д, 1Н), 7.15 (ΰ, 1Н), 7.34 (т, 11Н), 8.10(5, 1Н).
= Ν-метилморфолин использовали в качестве основания получали из хлорангидрида кислоты из примера получения 11 (11/3) и соответствующего амина, следуя методике, подобной методике, описанной в примере получения 12 (12/52).
Пример получения 14 (14/пример 1). 2-({1-[(1,3-Бензодиоксол-5-иламино)карбонил]циклопентил} метил)пентановая кислота.
Трифторуксусную кислоту (5 мл) добавляли к раствору трет-бутилового эфира из примера получения 15 (15/34) (130 мг, 0,31 ммоль) в дихлорметане (5 мл), и этот раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Эту реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток подвергали азеотропной перегонке с толуолом и дихлорметаном с получением соединения, указанного в заголовке, в виде прозрачного масла, 112 мг; '11 ЯМР (С^С13, 400 МГц) δ: 0.83 (1, 3Н), 1.22-1.40 (т, 3Н), 1.50-1.72 (т, 8Н), 1.95 (т, 1Н), 2.10 (т, 2Н), 2.19 (т, 1Н), 4.30 (т, 2Н), 5.93 (8, 2Н), 5.99 (Ь8, 1Н), 6.74 (т, 3Н); ЬКМ8: т/ζ 380 (МН+).
Пример получения 15 (15/34).
Следующее соединение:
где
Пример Получе- ния Я Исходный амин Выход (%) Данные
15 (15/34) Пиперониламин 88 1Н ЯМР (СОС13, 400 МГц) δ: 0.85 (ΐ, ЗН), 1.26 (т, 4Н), 1.42 (е, 9Н), 1.46 (т, 2Н), 1.591.75 (т, 5Н), 1.95 (т, 2Н), 2.06 (т, 1Н), 2.22 (т, 1Н), 4.26 (άά, 1Н), 4.39 (дф 1Н), 5.95 (т, ЗН), 6.78 (т, ЗН). Ι.ΚΜ8: т/ζ 418,3 (МН+).
получали из кислоты из примера получения 16 (16/1) и соответствующего аминного соединения, следуя методике, подобной методике, описанной в примере получения 17 (17/33).
Пример получения 16 (16/1). 1-[2-(трет-Бутоксикарбонил)-4-пентил]циклопентанкарбоновая кислота
- 75 006254
Смесь 1-[2-(трет-бутоксикарбонил)-4-пентенил]-циклопентанкарбоновой кислоты (ЕР 274234) (23 г, 81,5 ммоль) и 10% палладия на угле (2 г) в сухом этаноле (200 мл) гидрировали при 30 фунт/кв.дюйм (206,84 кПа) и комнатной температуре в течение 18 ч. Эту реакционную смесь фильтровали через Αγ6οсе1®, и фильтрат упаривали при пониженном давлении с получением желтого масла. Этот сырой продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя этилацетат:пентан (40:60) в качестве элюента, с получением желаемого продукта в виде прозрачного масла, 21 г, 91%; 2Н ЯМР (СЭС13): 0.86 (ί, 3Н), 1.22-1.58 (т, 15Н), 1.64 (т, 4Н), 1.78 (άά, 1Н), 2.00-2.18 (т,3Н), 2.24 (т, 1Н); БКМ8: т/ζ 283 (ΜΗ)-.
Пример получения 17 (17/33). трет-Бутиловый эфир 2-{[1-({[1-(гидроксиметил)циклопентил] амино } карбонил)циклопентил] метил } пентановой кислоты.
1-(3-Диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид (41 мг, 0,21 ммоль), 1-гидроксибензотриазола гидрат (27 мг, 0,2 ммоль), Ν-метилморфолин (35 мкл, 0,31 ммоль) и в конце 1-амино-1циклопентанметанол (25 мг, 0,22 ммоль) добавляли к раствору кислоты из примера получения 16 (16/1) (150 мг, 0,53 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (3 мл), и эту реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 18 ч. Охлажденный раствор разбавляли этилацетатом (90 мл), промывали водой (3х25 мл) и рассолом (25 мл), затем высушивали (Мд8О4) и упаривали при пониженном давлении. Этот сырой продукт очищали хроматографией на силикагеле, используя этилацетат: пентан (30:70) в качестве элюента, с получением соединения, указанного в заголовке, 38 мг, 57%; 2Н ЯМР (СЭС13, 400 МГц) ά: 0.88 (ί, 3Н), 1.41-1.78 (т, 26Н), 1.78-1.98 (т, 4Н), 2.04 (т, 1Н), 2.26 (т, 1Н), 3.59 (άά, 1Н), 3.70 (άά, 1Н), 4.80 (ί, 1Н), 5.81 (з, 1Н); БКМ8: т/ζ 380 (МН+).
Пример получения 18 (18/пример 4). Соединение указанной ниже формулы получали из соответствующего трет-бутилового эфира, следуя методике, подобной методике, описанной в примере получения 14 (14/пример 1).
где
- 76 006254
Пример получения 19 (19/пример 21). 2-({1-[(3-Бензиланилино)карбонил]циклопентил}метил) пентановая кислота.
Смесь бензилового эфира из примера получения 10 (10/53) (1,3 г, 2,47 ммоль) и 5% палладия на угле (130 мг) в воде (10 мл) и этаноле (40 мл) гидрировали при 30 фунт/кв.дюйм (206,84 кПа) и комнатной температуре в течение 2 ч. Эту реакционную смесь фильтровали через А^Ьοсе1®, фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и остаток растирали с дихлорметаном. Остаточную смолу растирали с эфиром, затем с гексаном и высушивали при 50°С с получением соединения, указанного в заголовке, в виде твердого вещества, 0,79 г, 81%; Ή ЯМР (СПС13, 300 МГц) δ: 0.95 (!, 3Н), 1.24-1.51 (т, 3Н), 1.58-1.80 (т, 7Н), 1.88 (бб, 1Н), 2.15 (т, 2Н), 2.24 (т, 1Н), 2.48 (т, 1Н), 4.00 (з, 2Н), 6.98 (б, 1Н), 7.24 (т, 6Н), 7.40 (т, 3Н); Анализ: Обнаружено: С, 75,48; Н, 7,76; Ν, 3,59. С25Н31НО3-0,25Н2О требует С, 75,44; Н, 7,98; Ν, 3,51%.
Анализ АПФ
Получение и анализ растворимого ангиотензин-превращающего фермента (АПФ) из коркового вещества почки свиньи и человека.
Растворимый АПФ получали из коркового вещества почки и анализировали путем измерения скорости расщепления субстрата АПФ АЬζ-С1у-р-η^ί^ο-РЬе-Р^ο-ОΗ с образованием его флуоресцентного продукта АЬх-С1у.
1. Материалы.
Вся вода дважды деионизирована.
1.1 Почка человека - 11АМ (РеппзуКаша. И.8.А.) или ИК Нитап Т1ззие Вапк (ИК НТВ).
1.2 Почка свиньи - 81дта (А2580).
1.3 Буфер гомогенизации-1.
100 мМ Маннит и 20 мМ Трис @ рН 7,1
2,42 г Трис (Е1зЬег Т/Р630/60) разводят в 1 литре воды и доводят рН до 7,1, используя 6М НС1 при комнатной температуре. К этому добавляют 18,22 г маннита (81дта М-9546).
1.4 Буфер гомогенизации-2.
100 мМ Маннит, 20 мМ Трис @ рН 7,1 и 10 мМ МдС12-6Н2О (Е1зЬег МО600/53).
К 500 мл буфера гомогенизации-1 (1.3) добавляют 1,017 г МдС12.
1.5 Трис буфер (АПФ буфер) 50 мМ Трис и 300 мМ №1С1 @ рН 7.4.
мл 50 мМ Трис, рН 7,4, (81дта Т2663) и 17,52 г №1С1 (Е1зЬег 8/3160/60) разводят до 1000 мл в воде.
1.6 Субстрат (АЬζ-^-С1у-р-η^!^ο-РЬе-Р^ο-ОΗ) (ВасЬет М-1100) Субстрат АПФ хранят в виде порошка при -20°С. 2 мМ исходный раствор готовят осторожно ресуспендированием субстрата в АПФ буфере; его нельзя перемешивать на вортексе или обрабатывать ультразвуком.
Аликвоты по 400 мкл этого 2 мМ исходного раствора хранят при -20°С до одного месяца.
1.7 Суммарный продукт.
Образцы, соответствующие 100% превращению субстрата в продукт, включают в планшет, чтобы обеспечить определение % превращения субстрата (см. вычисления). Суммарный продукт образуется инкубацией 1 мл 2 мМ субстрата с 20 мкл исходного раствора фермента в течение 24 ч при 37°С.
1.8 Стоп-раствор.
Для приготовления 2 мМ раствора 0,5М ЭДТА (Рготеда СА8[6081/92/6]) разводят 1:250 в АПФ буфере.
1.9. Диметилсульфоксид (ДМСО).
1.10. Хлорид магния - МдС12-6Н2О (Е1зЬег М0600/53).
1.11. Черные 96-луночные плоскодонные аналитические планшеты (Ο'οδΠΐΓ 3915 или Раскагб).
1.12. %рзеа1 А (Раскагб 6005185).
1.13. Центрифужные пробирки.
2. Специальное оборудование.
2.1. Центрифуга 8οιύ;·ι11 ЯС-5В (ротор 8834 С8А, предварительно охлажденный до 4°С).
2.2. Миксер мини-гомогенизатор Вгаип.
2.3. Центрифуга Весктап С8-6Я.
2.4. ВМС Ε^οδ^ Са1аху.
2.5. Встряхивающий инкубатор УезЬай 1589.
3. Методики.
3.1. Получение препарата ткани.
- 77 006254
3.2. АПФ человека получают из коркового вещества почки, используя адаптированный способ Воо1Н, А.О. & Кеппу, А.1 (1974) ВюсНет. I. 142, 575-581.
3.3. Замороженным почкам дают оттаять при комнатной температуре, и корковое вещество отрезают от мозгового вещества.
3.4. Корковое вещество мелко нарезают и гомогенизируют примерно в 10 объемах буфера гомогенизации 1 (1.3), используя мини-гомогенизатор Вгаип (2.2).
3.5. К гомогенату добавляют хлорид магния (1.11) (20,3 мг/г ткани) и перемешивают в ледяной бане в течение 15 мин.
3.6 Гомогенат центрифугируют при 1500 д (3820 об/мин) в течение 12 мин в центрифуге Весктап (2.3), после чего супернатант переносят в чистую центрифужную пробирку, а осадок отбрасывают.
3.7 Супернатант центрифугируют при 15000 д (12100 об/мин) в течение 12 мин в центрифуге 8ог\га11 (2.1), и супернатант отбрасывают.
3.8 Бледно-розовый слой на поверхности остатка извлекают и ресуспендируют в буфере гомогенизации 2 (1.4) (5 мл буфера на 1 г ткани).
3.9. Эту суспензию центрифугируют при 2200 д (4630 об/мин) в течение 12 мин в центрифуге Весктап, и остаток отбрасывают.
3.10. Супернатант центрифугируют при 15000 д (12100 об/мин) в течение 12 мин, используя центрифугу 8огта11, и супернатант отбрасывают.
3.11. Конечный остаток ресуспендируют в буфере гомогенизации 2 (0,5 мл буфера на 1 г ткани). Гомогенную суспензию получают, используя мини-гомогенизатор Вгаип. Затем ее замораживают в аликвотах по 100 мкл, чтобы анализировать на активность АПФ.
4. Определение активности АПФ.
Активность АПФ, предварительно разделенного на аликвоты, определяют по его способности расщеплять специфичный для АПФ пептидный субстрат.
Свиной АПФ (1.2) размораживают и ресуспендируют в АПФ буфере (1.6) при 0,004 ед./мкл, а затем замораживают в аликвотах по 50 мкл.
4.1. Готовят 4% раствор ДМСО/АПФ буфер (4 мл ДМСО в 96 мл АПФ буфера).
4.2. Субстрат (1.7), суммарный продукт (1.8) и фермент (1.1, 1.2, 1.3) оставляют на льду до оттаивания.
4.3. В каждую лунку добавляют 50 мкл 4% раствора ДМСО/АПФ буфер.
4.4. 2 мМ исходный раствор субстрата разводят 1:100 с получением 20 мкМ раствора. В каждую лунку добавляют 100 мкл 20 мкМ субстрата (конечная концентрация в анализе 10 мкМ).
4.5. Для инициирования реакции добавляют 50 мкл серии разведений фермента (обычно используют 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600 и 1:3200). В чистые лунки добавляют 50 мкл АПФ буфера.
4.6. 2 мМ суммарный продукт разводят 1:200 с получением 10 мкМ раствора. В первые четыре лунки нового планшета добавляют по 200 мкл 10 мкМ продукта.
4.7. Планшеты инкубируют при 37°С во встряхивающем инкубаторе в течение 60 мин.
4.8. Ферментативную реакцию останавливают добавлением 100 мкл 2 мМ ЭДТА в АПФ буфере и инкубируют при 37°С во встряхивающем инкубаторе в течение 20 мин до появления красного цвета на ВМО Ииог81аг Оа1аху (ех320/ет420).
5. Анализы на ингибирование АПФ.
5.1. Исходные растворы субстрата, суммарного продукта и фермента оставляют на льду до оттаивания.
5.2. Готовят исходные растворы соединения в 100% ДМСО и разводят 1:25 в АПФ буфере с получением 4% ДМСО раствора. Все дальнейшие разведения осуществляют в растворе 4% ДМСО/АПФ буфер (4 мл ДМСО в 96 мл АПФ буфера).
5.3. В 96-луночный планшет добавляют по 50 мкл соединения в двух повторах и по 50 мкл 4% ДМСО/АПФ буфер в контрольную и чистую лунки.
5.4. Стадии 5.2 и 5.3 можно проводить либо вручную, либо используя мультипробные роботы Раскагй.
5.5. 2 мМ исходный раствор субстрата разводят 1:100 в АПФ буфере с получением 20 мкМ раствора (10 мкМ конечная концентрация в анализе) (110 мкл 2 мМ субстрата, добавленного к 10,89 мл буфера, достаточно для 1 планшета).
5.6. Исходный раствор фермента разводят в АПФ буфере, как определено из проверок на активность (4.0).
5.7. 2 мМ исходный раствор суммарного продукта разводят 1:200 в АПФ буфере с получением 10 мкМ раствора. В первые четыре лунки отдельного планшета добавляют по 200 мкл.
5.8. 0,5 М исходный раствор ЭДТА разводят 1:250 с получением 2 мМ исходного раствора (44 мкл ЭДТА на 10,96 мл АПФ буфера).
5.9. В каждую лунку 96-луночного планшета добавляют следующие реагенты.
- 78 006254
Таблица 1. Реагенты, которые добавляют в 96-луночный планшет
Соединение/ДМСО Трис буфер Субстрат АПФ фермент Суммарный продукт
Образцы 2 мкл соединения 50 мкл 100 мкл 50 мкл нет
Контроли 2 мкл ДМСО 50 мкл 100 мкл 50 мкл нет
Чистые контроли 2 мкл ДМСО 100 мкл 100 мкл нет нет
Суммарные 2 мкл ДМСО Нет нет нет 200 мкл
5.10. 50 мкл самой высокой концентрации каждого соединения, используемого в анализе, добавляют в двух повторах в тот же 96-луночный планшет, что и суммарные (5.7). 150 мкл АПФ буфера добавляют для определения флуоресценции любого соединения.
5.11. Реакцию инициируют добавлением АПФ фермента, а затем инкубируют при 37°С в течение 1 ч во встряхивающем инкубаторе.
5.12. Реакцию останавливают добавлением 100 мкл 2 мМ ЭДТА и инкубируют при 37°С во встряхивающем инкубаторе в течение 20 мин до появления красного цвета на ВМО Р^гз!— Оа1аху (ех320/ет420).
6. Вычисления.
Активность АПФ фермента определяют в присутствии и в отсутствие соединения и выражают в процентах.
Ри = единица флуоресценции.
(1) Контрольная активность в % (превращение фермента).
Средняя Ри контролей - средняя Ри чистых контролей ------------------------------------------------------------------------ х100;
Средняя Ри суммарных - средняя Ри чистых контролей (2) Активность с ингибитором в %:
Средняя Ри соединения - средняя Ри чистых контролей ------------------------------------------------------------------------ х100.
Средняя Ри суммарных - средняя Ри чистых контролей (3) Активность, выраженная в % от контроля:
% Активности с ингибитором
........................................ х100 %;
Контрольной активности или
Средняя Ри соединения - средняя Ри чистых контролей ------------------------------------------------------------------------ х100.
Средняя Ри контролей - средняя Ри чистых контролей (4) % Ингибирования = 100 - % контроля.
(5) Для флуоресцентных соединений среднюю РИ чистых контролей, содержащих соединение (5.10), вычитают из средней Ри из значений соединения, используемых для вычисления % активности.
Строят сигмоидальную кривую доза-ответ по точкам % активностей (% от контроля) против концентрации соединения, и значения ГС50 вычисляют, используя ЬаЬ81а1з кривые соответствия в Ехсе1.
Выводы
Авторы изобретения разработали животную модель, которая отображает физиологическую реакцию возбуждения, наблюдаемую во время полового возбуждения женщины, и непосредственно показывает клинические данные, полученные у людей-добровольцев. В этой модели используются лазерные доплеровские технологии для регистрации малых изменений в вагинальном и клиторном кровотоке, индуцированных стимуляцией тазового нерва или вазоактивными нейромедиаторами. Во время полового возбуждения имеет место усиление генитального кровотока, являющееся результатом иннервации от тазового нерва. Это стимулированное тазовым нервом усиление вагинального и клиторного кровотока, наблюдаемое у животной модели, представляет собой эндогенные сосудистые эффекты, наблюдаемые во время полового возбуждения женщины - то есть переполнение кровью. Следовательно, эту модель можно использовать для, во-первых, определения механизмов, вовлеченных в регуляцию вагинального и клиторного кровотока и, во-вторых, обоснования новых подходов к усилению генитального кровотока.
В этом исследовании, для того чтобы показать, что УГР опосредует генитальный кровоток, и идентифицировать цАМФ как медиатор/вторичный посредник, регулирующий генитальную вазорелаксацию (и релаксацию стенки влагалища), было успешно использовано сочетание ΐη νΐνο, ΐη νΐίΓο и биохимических методик. Используя эту животную модель, авторы изобретения продемонстрировали, что инфузионное вливание УГР усиливает вагинальный и клиторный кровоток. Используя ингибитор УГР метабо
- 79 006254 лизма (например ингибитор НЭП ЕС 3.4.24.11), авторы изобретения также продемонстрировали, что усиление генитального кровотока, наблюдаемое во время стимуляции тазового нерва (то есть полового возбуждения) опосредовано νΐΡ. Авторы изобретения показали, что опосредованное νΐΡ усиление генитального кровотока является результатом повышения тканевого цАМФ, тогда как ранее было показано, что νΐΡ усиливает вагинальный кровоток у здоровых добровольцев, но клеточный механизм не был идентифицирован. Кроме того, авторы изобретения продемонстрировали, что генитальный кровоток можно усилить прямо миметиком цАМФ или косвенно повышением концентраций цАМФ ингибитором ФДЭцАМФ типа 2 или антагонистом рецептора ΝΡΥ Υ1.
Основной причиной РПВЖ является ослабленный генитальный кровоток, и это само по себе проявляется в виде пониженного переполнения кровью влагалища, губ и клитора. Лечение женщин с РПВЖ достижимо путем восстановления нормальной реакции полового возбуждения. Этого можно достичь путем усиления генитального кровотока. Подход авторов изобретения к лечению РПВЖ состоит в усилении генитального кровотока и посредством этого потенцировании переполнения кровью/смазывания влагалища и переполнения кровью/чувствительности клитора посредством либо прямого, либо косвенного потенцирования эндогенной цАМФ сигнализации, например ингибитором НЭП (ЕС 3.4.24.11), ингибитором ФДЭ, гидролизующей цАМФ, или антагонистом рецепторов ΝΡΥ. В целом это будет воздействовать на восстановление или потенцирование нормальной реакции полового возбуждения без сердечно-сосудистых побочных эффектов. Половое возбуждение/переполнение кровью будет скорее усиливаться, чем просто индуцироваться в отсутствие полового влечения, что возможно в случае с некоторыми экзогенно вводимыми вазоактивными агентами, например νΐΡ.
Таким образом, в кратком изложении настоящее изобретение среди прочего относится к следующему.
Применение фармацевтической композиции, содержащей ингибитор нейропептида Υ (Η:ΝΡΥ). способный потенцировать циклический аденозин-3',5'-монофосфат (цАМФ) в гениталиях женщины, страдающей женской сексуальной дисфункцией (ЖСД), и возможно фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент, в качестве средства для лечения ЖСД.
Применение ΉΝΡΥ в изготовлении лекарства для лечения ЖСД, предпочтительно РПВЖ.
Способ лечения женщины (такой как женщина, страдающая ЖСД, предпочтительно РПВЖ), при котором вводят Η:ΝΡΥ, который способен потенцировать цАМФ в гениталиях женщины, в таком количестве, чтобы вызвать потенцирование цАМФ в гениталиях этой женщины; при этом указанный Η:ΝΡΥ возможно смешан с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.
В особенно предпочтительном воплощении настоящее изобретение среди прочего относится к следующему.
Применение фармацевтической композиции, содержащей Η:ΝΡΥ, способный потенцировать цАМФ в гениталиях женщины, страдающей ЖСД, и возможно фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент, в качестве средства для лечения ЖСД; при этом указанный агент вводят перорально.
Применение Η:ΝΡΥ в изготовлении лекарства для лечения ЖСД, предпочтительно РПВЖ; при этом указанный Η:ΝΡΥ вводят перорально.
Способ лечения женщины (например женщины, страдающей ЖСД, предпочтительно РПВЖ), при котором вводят Η:ΝΡΥ, который способен потенцировать цАМФ в гениталиях женщины, в таком количестве, чтобы вызвать потенцирование цАМФ в гениталиях этой женщины; при этом указанный Η:ΝΡΥ возможно смешан с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом; и при этом указанный Η:ΝΡΥ вводят перорально.
В дополнительном особенно предпочтительном воплощении настоящее изобретение среди прочего относится к следующему.
Применение фармацевтической композиции, содержащей Η:ΝΡΥ, способный потенцировать цАМФ в гениталиях женщины, страдающей ЖСД, и возможно фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент, где указанный Η:ΝΡΥ потенцирует эндогенный цАМФ, в качестве средства для лечения ЖСД.
Применение Η:ΝΡΥ в изготовлении лекарства для лечения ЖСД, предпочтительно РПВЖ, где указанный Η:ΝΡΥ потенцирует эндогенный цАМФ.
Способ лечения женщины (например женщины, страдающей ЖСД, предпочтительно РПВЖ), при котором вводят Η:ΝΡΥ, который способен потенцировать цАМФ в гениталиях женщины, в таком количестве, чтобы вызвать потенцирование цАМФ в гениталиях этой женщины; при этом указанный Η:ΝΡΥ возможно смешан с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом; и при этом указанный Η:ΝΡΥ потенцирует эндогенный цАМФ.
В еще одном особенно предпочтительном воплощении настоящее изобретение среди прочего относится к следующему.
Применение фармацевтической композиции, содержащей Η:ΝΡΥ, способный потенцировать цАМФ в гениталиях женщины, страдающей ЖСД, и возможно фармацевтически приемлемый носитель, разба
- 80 006254 витель или эксципиент, в качестве средства для лечения ЖСД; при этом указанный Η:ΝΓΥ вводят перорально; и при этом указанный Η:ΝΓΥ потенцирует эндогенный цАМФ.
Применение Η:ΝΓΥ в изготовлении лекарства для лечения ЖСД, предпочтительно РПВЖ, при этом указанный Η:ΝΓΥ вводят перорально, и при этом указанный Η:ΝΓΥ потенцирует эндогенный цАМФ.
Способ лечения женщины (например женщины, страдающей ЖСД, предпочтительно РПВЖ), при котором вводят Η:ΝΓΥ, который способен потенцировать цАМФ в гениталиях женщины, в таком количестве, чтобы вызвать потенцирование цАМФ в гениталиях этой женщины; при этом указанный И:NРΥ возможно смешан с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом; и при этом указанный агент вводят перорально; и при этом указанный агент потенцирует эндогенный цАМФ.
Все публикации, упомянутые в приведенном выше описании, включены в данный документ ссылкой на них. Различные модификации и варианты описанных способов и совокупности по настоящему изобретению без отклонения от объема и сущности настоящего изобретения должны быть очевидны для специалистов в данной области. Хотя настоящее изобретение описано в отношении конкретных предпочтительных воплощений, следует иметь в виду, что данное изобретение, как оно заявлено, не должно необоснованно ограничиваться такими конкретными воплощениями. Безусловно, различные модификации описанных способов осуществления изобретения, которые очевидны специалистам в биохимии и биотехнологии или родственных областях, находятся в объеме следующей ниже формулы изобретения.
Ссылки ко всему тексту
АкНиг-БаЫап, О., Реп, О., Ь1Шпд, С., е! а1. (1999). 8ΝΥ, а НрорНЛс кирегасйуе УГР апа1од, ас!к ЛгоидН сСМР !о ргото!е пеигопа1 кшугуаТ Рерйбек, 20, 629-633.
Вегтап, ТК., Вегтап, Ь. & Со1бк!ет, Г. (1999). Бета1е кехиа1 букЛпсйоп: ттбепсе, раЛорЬукю1оду, еуа1иа!юп апб !геа!теп! орйопк. Иго1оду, 54, 385-391.
Вегтап, Т, Со1бк1е1п, Г., ХУегЬт, Т., е! а1. (1999а). ЭоиЫе Ьтб р1асеЬо соп!го11еб к!ибу шИН сгоккоусг !о аккекк еГГес! оГ кПбепаГП оп рНук1о1од1са1 рагате!егк оГЛе Гета1е кехиа1 гекропке. Г ИгоГ, 161, 805.
Витей, А., СаМп, Ό., 8|1уег, К. е! а1. (1997). !ттипоЫк!осНет1са1 бекспрРоп оГ п1!г1с ох1бе купЛаке 1ко£огтк 1п Нитап сЛопк. Т Игок, 158, 75-78.
П1адпокйс апб к!айкйса1 тапиа1 оГ теп!а1 бхкогбегк-ГУ, Атепсап РкусЫаМс Аккос1а!юп: ^акНтд!оп, ОС., 1987, рр. 493-518.
Бап, Υ.₽., СНакбег, 8. & Ка!!оп, 8. (1998). ГпЫЬйогу еГГес! оГ хтс ргоЮрогрНупп ГХ оп 1ошег екорНадеа1 крНтс!ег ктоо!Н тикс1е ге1аха!юп Ьу уакоасруе 1п!ек11па1 ро1урерНбе апб о!Нег гесер!ог адошк!к. Г РНагтасо1. Ехр. ТНег., 285, 468-474.
Боба, Η.Ό., 8НагаГ, Н.Н., АЬкооб, А., е! а1. (1995). РНнНагу абепу1а!е сус1аке-ас!гуа!тд рерйбе (РАСАР), а УГР-Нке рерйбе, Нак рго1опдеб аншау ктоо!Н тикс1е ге1ахап! асйуйу. РерНбек, 16, 1057-1061.
Бгапк, Е., Апбегкоп, С. & КиЫпк!е1п, Ό. (1978). Ргес.|иепсу оГ кехиа1 букГипсРоп ш «погта1» соир1ек. Ν. Епд1. I Меб., 229, 111-115.
Со1бк!ет, Г. & Вегтап, !К. (1998). Уакси1одешс Гета1е кехиа1 букЛпсНоп: уадта1 епдогдетеп! апб с11!ога1 егес!11е ткиГйтепсу купбготек. Л!. Г Гтро!. Кек., 10, 884-890.
Си, ΖΈ., .Тепкеп, К.Т. & Ма!оп, ₽.Ν. (1992). А рптагу го1е Гог рго!ет ктаке А ш ктоо!Н тикс1е ге1ахайоп Ьу абгепегдю адошк!к апб пеигорерйбек. Ат. Г РНукюк, 263, С360-С364.
Наикег-КгопЬегдег, С., СНеипд, А., Наскег, С., е! а1. (1999). Рерйбегдю 1ппегуайоп оГ Ле Нитап сЛопк. Рерйбек, 20, 539-543.
Ноу1е, С.Н.У., 8!опек, К.^., КоЬкоп, Т., е! а1. (1996). ГппегуаНоп оГ уакси1а!иге апб тюгоуакси1а!иге оГ Ле Нитап уадта Ьу NΟ8 апб пеигорерНбе соп!аштд пегуек. Г Апа!., 188, 633-644.
ГддепНоуеп, Ν. & Веск-8юктдег, А.С. (1997). Пиогексеп! 1аЬе11еб апа1одиек оГ пеигорерйбе Υ Гог Ле сНагас!епха!юп оГ се11к ехргекктд ΝΓΥ гесер!ог киЫурек. Г Кесер!. 81дпа1 Тгапкбис!. Кек., 17, 407-418.
Луапохзс, А., !оуапоу1с, 8., ТиНс, Г., е! а1. (1998). Ргеботтап! го1е Гог п1!г1с ох1бе ш Ле ге1аха!юп тбисеб Ьу уакоасЛ'е т!ек!та1 ро1урерйбе ш Нитап и!егте аг!егу. Мо1. Нитап Кергоб., 4, 71-76.
Кар1ап, Н.8. (1974). ТНе №ш 8ех ТНегару. Ьопбоп, ВаННеге Ттба11.
Кар1ап, Н.8., Ке1к, К.В., КоНт, Г.1, е! а1. (1999). 8аГе!у апб еГйсасу оГ кНбепай1 ш рок!тепораика1 шотеп шНН кехиа1 букЛпсйоп. Иго1оду, 53, 481-486.
К1т, Υ.Ο., СНо1, Н.К., АНп, Υ.8., е! а1. (1994). ТНе еГГес! оГ уакоасйуе т!ек!та1 ро1урер!1бе (УГ Р) оп гаЬЬй сауегпока1 ктооЛ тикс1е соп!гасй1йу. Г Апбго1., 15, 392-739.
Ьаап, Е. & Еуегаегб, (1998). РНук1о1од1са1 теакигек оГ уадта1 уакосопдекйоп. Л!. Г Гтро!. Кек., 10, 8107-8110.
Ье1Ь1ит, 8.К. (1998). ОейпЛоп апб с1акк1йса!юп оГ Гета1е кехиа1 б1когбегк. Л!. Г Гтро!епсе Кек., 10, 8104-8106.
Ьеут, К.1 (1980). ТНе рНукю1оду оГ кехиа1 Гипсйоп ш шотеп. С1т. ОЬк!е!. Супесо1., 7,213-252.
Ьеут, К.Ь (1991). УГР, уадта, с1йога1 апб ргеигеЛга1 д1апбк: Ап ирба!е оп Гета1е деп!а1 агоика1. Ехр. Сйп. Епбостюк 98, 61-69.
Ьеут, К.Ь (1992). ТНе тесНашктк оГ Нитап Гета1е кехиа1 агоика1. Апп. Кеу. 8ех. Кек., 3, 1-48.
ЬеуЛ К.Ь & ^адпег, С. (1986). ТКН апб уадта1 Ь1ооб Г1ош-еГГес!к ш сопсюик шотеп апб апаекЛеЙкеб Леер. I РНукю1., 373, 83Р.
- 81 006254
ЬипбЬегд, ЕМ., Мобш, А. & Ма1тк!гот, К.Е. (1996). Кесеп! беуе1ортеп!к \уИН петорерНбе Υ гесерЮг ап!адошк!к. Тгепбк кНагтасок 8ск, 17, 301-304.
Мак!егк, \ν.Η., 1оНпкоп, У.Е. Нитап 8ехиа1 Кекропке. ЬйНе, Вго\уп: Вок!оп, 1996.
Ойекеп, В., Сегк!епЬегд, Т., ЫпсНкеп, Н., е! а1. (1983). ¥акоасйуе т!ек!та1 ро1урерйбе (νΐΡ) тсгеакек уадта1 Ь1ооб Г1оте апб 1пН1Ьйк ктоо!Н тикс1е асйуйу ш \уотеп. Еиг. 1. С.’1т. 1пуек!., 13, 321-324.
Ойекеп, В., '№адпег, С. & РаНгепкгид, 1. Ρерΐ^бе шпегуайоп оГ !Не кехиа1 огдапк. 1п: НапбЬоок оГ 8ехо1оду, Уо1. 6, ТНе ΡНа^тасо1од^са1 апб Епбосгшо1оду оГ 8ехиа1 Рипсйоп, 8йкеп, ЕМ.А. (ебк.), Атк!егбат: Е1кеу1ег 8с1епсе ΡυΜΐδΙοΓδ (1988), сНар!ег 4, рр. 66-97.
Ойекеп, В., кеберке!, В., №е1кеп, 1., е! а1. (1987) ¥акоасйуе т!ек!та1 ро1урер!1бе (νΐΡ) ргоуокек уад1па1 1иЬг1сайоп т погта1 теотеп. Ρер!^бек, 8, 797-800.
Ρ;·ιγ1<, К., Со1бк!ет, I., Апбгу, С., е! а1. 91997). ¥акси1одешс Гета1е кехиа1 букГипсйоп: ТНе Нетобупатс Ьак1к Гог уадта1 епдогдетеп! шкиГйаепсу апб с1йога1 егесй1е ткиГйтепсу. 1п!. 1. [тройпсе Кек., 9, 27-37.
Кокеп, К., Тау1ог, 1., Ье1Ь1ит, 8., е! а1. (1993). кгега1епсе оГ кехиа1 букГипсйоп ш теотеп: геки1!к оГ а кшуеу оГ 329 теотеп т ап оШраНеп! дупесо1од1са1 сйшс. 1. 8ех тагйа1 ТНег., 19, 171-188.
8сЫау1, К.С. & 8еадгауек, К.Т. (1995). ТНе Ью1оду оГ кехиа1 Гипсйоп. ккусЫак С1т. №г111. Ат., 18, 723.
8сНоеГГег, Ρ. & 8!ос1е!, ЕС. (1985). ЕГГес! оГ уакоасйуе т!екйпа1 ро1урерйбе (νΐΡ) оп сусНс АМΡ 1еуе1 апб ге1ахайоп т га! 1ко1а!еб аойа. Еиг. 1. кНагтасо1., 109, 275-279.
8еггабе11-Ье Са1, С., ¥а1е!!е, С., КоиЬу, ΡΈ., е! а1. (1995). 8К 120819А, ап ога11у-асйуе апб ке1есйуе пеигорерйбе Υ Υ1 гесер!ог ап!адотк!. РЕВ8 Ьейегк, 3, 192-196.
8]оЬегд, ΐ. (1992). ТНе уадта: МогрНо1одюа1, Гипсйопа1 апб есо1одюа1 акрес!к. Ас!а ОЬк!. Супесо1. 8сапб., 71, 84-85.
8рес!ог, Ι.Ρ. & Сагеу, МЛ. (1990). 1пс1бепсе апб ргеуа1епсе оГ кехиа1 букГипсйопк: а спйса1 геу1ете оГ Не етршса1 1йега!иге. АгсН. 8ех. ВеНау., 19, 389-408.
Vадηе^, С. (1992). Акрес!к оГ деп!а1 рНукю1оду апб ра!Но1оду. 8ет. №игок, 12, 87-97.
Vе^Ь^η. Т., 8айтроиг, Ρ., Вегтап, Ь., е! а1. (1999). ЕГГес! оГ кехиа1 кйти1айоп апб аде оп депйа1 Ь1ооб Иоте ш теотеп тейН кехиа1 к!1ти1а!юп. 1. Иго1., 161,688.
V^ηсζе. ΡΡ., А1Ьей, А. & Вапка1, 8. (1993). 8ехиа1 агоика1 т б1аЬейс Гета1ек: кНукю1ощса1 апб ке1Ггерой теакигек. АгсН. 8ех ВеНау., 22, 587-601.
V^е1аηб. Н.А., νίΗ™, Κ.Ό., ЕпЦего!Н, М., е! а1. (1995). 8иЬ1уре ке1есйуйу апб ап!адошк! ргоГбе оГ (Не попрерйбе Υ1 гесер!ог ап1адотк! ВIВΡ 3226. 1. кНагтасок Ехр. ТНег., 275, 143-9.
Ссылки к разделу ФДЭ
1. Нап, Ρ.; Р1е!сНег, С.Р.; Соре1апб, Ν.Ο.; 1епк1пк, Ν.Ά.; Уагетко, Ь.М.; МюНаеН, Т.: Акыдптеп! оГ (Не тоике Ρбе7А депе !о !Не ргох1та1 гедюп оГ сНготокоте 3 апб оГ !Не Нитап кЬЕ7А депе !о сНготокоте 8я13. Сепотюк 48: 275-276, 1998.
2. М1сНае11, Т.; В1оот, Т.Е; МагНпк, Т.; ЬоидНпеу, К.; Регдикоп, К.; К1ддк, М.; Кобдегк, Ь; Веауо, РА.; V^д1е^, М.: 1ко1а!юп апб сНагас!етаНоп оГ а ргеуюик1у ипбе!ес!еб Нитап сАМΡ рНокрНоб1ек!егаке Ьу сотр1етеп!а!юп оГ сАМΡ рНокрНоб1ек!егаке-беДс1еп! 8ассНаготусек сегеуыае. 1. Вю1. СНет. 268: 1292512932, 1993.
3. Мба!оу1сН, А.; Во1дег, С.; М1сНае11, Т,; Ргапске, и.: СНготокоте 1оса11ха(1опк оГ депек Гог Нуе сАМк-кретНс рНокрНоб1ек!егакек ш тап апб тоике. 8ота!. Се11 Мо1ес. Сепе!. 20: 75-86, 1994.
4. Коктап, 6.1; МагНпк, Т.1; 8оппепЬигд, ν.Κ.; Веауо, кА.; Регдикоп, К.; ЬоидНпеу, К.: 1ко1а!юп апб сНагасЮпхаНоп оГ Нитап с^NАк епсобтд а сСМк-кЕтик-Кеб 3-рпте, 5-рпте-сус1ю пис1еоНбе рНокрНоб1ек!егаке. Сепе 191: 89-95, 1997.
Ссылки к разделу НЭП
1. Вагкег, ΡΈ.; 8Н1рр, М.А.; О'Абатю, Ь.; Мак!е11ег, Е.Ь; КетНег/, Е.Ь. ТНе соттоп аси!е 1утрНоЬ1акНс 1еикет1а апНдеп депе тарк !о сНготокота1 гедюп 3(с|21-с|27). 1. 1ттип. 142: 283-287, 1989.
2. О'Абатю, Ь.; 8Н1рр, М.А.; Мак!е11ег, Е.Ь.; КешНеге, Е.Ь.: О^даη^ζа!^оη оГ !Не депе епсобтд соттоп аси!е 1утрНоЬ1акНс 1еикет1а апНдеп (пеи!га1 епборерНбаке 24.11): ти1Нр1е тНиехопк апб керага!е 5-рпте ип!гапк1а!еб гедюпк. кгос. №!1. Асаб. 8ск 86: 7103-7107, 1989.
3. Ье!айе, М.; ¥ега, 8.; Тгап, К.; Абб1к, ЕВ.Ь.; Ошхика, К.Е; ОиаскепЬисН, Е.Е; 1опдепее1, С.У.; Мс1ппек, К.К.: Соттоп аси!е 1утрНоЬ1акНс 1еикет1а апНдеп 1к 1бепНса1 !о пеийа1 епборерНбаке. 1. Ехр. Меб. 168: 1247-1253, 1988.
4. 8Н1рр, М.А.; ¥уауагадНауап, 1.; 8сНт1б!, Е.У.; Мак!е11ег, Е.Ь.; О'Абатю, Ь.; НегкН, Ь.В.; КетНег/, Е.Ь.: Соттоп аси!е 1утрНоЬ1ак!ю 1еикет1а апНдеп (САЬЬА) 1к асНуе пеийа1 епборерНбаке 24.11 ('епкерНаНпаке'): бНес! еу1бепсе Ьу с^NА ИапкГесНоп апа1ук1к. кгос. №К1. Асаб. 8ск 86: 297-301.
5. Тгап-ке!егкоп, К.; \νί1Ε·ΐΓύ, Н.Р.; Ье!айе, М.: ТНе соттоп аси!е 1утрНоЬ1акНс 1еикет1а апНдеп (пеиЬга1 епборерНбаке - 3.4.24.11) депе 1к 1оса!еб оп Нитап сНготокоте 3. Сапсег Сепе!. Су!одепе!. 42: 129-134, 1989.
Ссылки к разделу ΝΡΥ
1. А11еп, ЕМ.; В1оот, 8.К.: №игорерНбе Υ: а ри!а!1уе пеиго!гапктй1ег. №игосНет. 1п!. 8: 1-8, 1986.
- 82 006254
2. Вайагу, Ν.; Ζο^^сй, С.; ?асй!ег, ЕЕ.; Ье1Ье1, К.Ь; Рпебтап, ЕМ.: Мо1еси1аг депейс йпкаде тарз оГ тоизе сйготозотез 4 апб 6. Сепоткз 11: 33-47, 1991.
3. Вакег, Е.; Ног!, Υ.Ε; Ва11, Н.; 8и!йег1апб, С.К.; 8Ыпе, 1.; Негход, Н.: Αзз^дηтеηί оГ !йе йитап пеигорерйбе Υ депе !о сйготозоте 7р15.1 Ьу пошзо!орк ш зйи йуйпб|ха!кп. Сепоткз 26: 163-164, 1995.
4. Сагг, Ь.С.; Рогоиб, Т.; Вке, Ρ.; СоЬЬей, Т.; Е'азйта, 1.; ЕбепЬегд, Н.; Ьитепд, Ь; Ь1, Т.К.: Α диапй!а!|уе !гай 1осиз Гог а1сойо1 сопзитрйоп ш зе1есйуе1у Ьгеб га! Йпез. Α1^^1 С1т. Ехр. Кез. 22: 884-887, 1998.
5. Эоскгау, С.Е: Кеигорерббе Υ: шзеагсй оГ а Гипсйоп. Кеигоскет. к!. 8: 9-11, 1986.
6. Егккзоп, ЕС.; С1едд, К.Е.; ?а1тйег, К.Э.: 8епзй1УЙу !о 1ерйп апб зизсерйЬййу !о зе1хпгез оГ писе 1асктд пеигорерйбе Υ. №1!иге 381: 415-421, 1996. ЬиЬМеб ГО: 8632796.
7. Епскзоп, РС.; Но11оре!ег, С.; ?а1тйег, К.ГО: Αйеηиаί^οη оГ !йе оЬезйу зупбготе оГ оЬ/оЬ тке Ьу !йе 1озз оГ пеигорерйбе Υ. 8скпсе 274: 1704-1706, 1996.
8. Кагуопеп, М.К.; ₽езопеп, и.; Кои1и, М.; Мзкапеп, Ь.; Ьаакзо, М.; К1ззапеп, Α.; Эеккег, ЕМ.; Наг!, Ь.М.; Υη1\Ό, К.; иизйира, М.Е: Αззοс^аί^οη оГ а 1еисте(7)-!о-ргойпе(7) ро1утогрЫзт т !йе з1дпа1 рерйбе оГ пеигорерйбе Υ тейй Ыдй зегит сйо1ез!его1 апб ЬВЬ сйо1ез!его1 1еуе1з. №1!иге Меб. 4: 1434-1437, 1998.
9. Массагопе, С.; Ьаггой, В.: Непгорер!1бе Υ: а рп!а!|уе пеигойапзтй!ег. Непгосйет. к!. 8: 13-22, 1986.
10. Ме1з1ег, М.Н.; 8репсе, РЕ.; О1хоп, ЕЕ.; Са1бтее11, К.М.; Мт!й, СГО.; Веаибе!, Α.Ε.: Ехс1изкп оГ с1озе йпкаде Ье!теееп !йе 1ос1 Гог сузйс ЕЬгоз1з апб пеигорерйбе Υ оп йитап сйготозоте 7. Су!одепе!. Се11 Сепе!. 44: 175-176, 1987.
11. Мт!й, СГО; ΑιΠίΌλλΈ, ₽.С.; О1хоп, ЕЕ.: Сйагас!ег1ха!1оп, зедиепсе апб ехргеззкп оГ !йе с1опеб йитап пеигорерйбе Υ депе. 1. Вю1. Сйет. 261: 11974-11979,1986.
12. Мт!й, СГО; В1оот, 8.К.; ?о1ак, ЕМ.; О1хоп, ЕЕ.: С1ошпд, сйагас!епха!кп апб ΌΝΑ зедиепсе оГ а йитап с^NΑ епсобтд пеигорерйбе !угозте. ₽гос. Νη!1. Αсаб. 8сЕ 81: 4577-4581, 1984.
13. ТакеисЫ, Т.; Ситкк, ГО; Еббу, К.; Ме1з1ег, М.; Мт!й, С.; О1хоп, 1.; Υатаба, Т.; 8йотез, Т.: Αзз1дптеп! оГ !йе ге1а!еб рапсгеайс ро1урерйбе (ΡΡΥ) апб пеигорерйбе Υ (ΝΡΥ) депез !о гедкпз оп йитап сйготозотез 17 апб 7. ^Ьзкас!) Су!одепе!. Се11 Сепе!. 40: 759 оп1у, 1985.
14. ТакеисЫ, Т.; Ситкк, ГО; Υатаба, Т.; Ме1з1ег, М.; Мт!й, С.; О1хоп, ЕЕ.; Еббу, К.; 8йотез, Т.: депез епсобтд рапсгеайс ро1урерйбе апб пеигорерйбе Υ аге оп йитап сйготозотез 17 апб 7. 1. Сйп. Ыуез!. 77: 1038-1041, 1986.
15. ТегепдЫ, С.; Ρο1ак, ЕМ.; Нат1б, р.; О'Впеп, Е.; Эеппу, Ρ.; Ьедоп, 8.; О1хоп, ЕЕ.; Мт!й, С.; Ρа1ау, 8.Ь; Υаза^д^1, С.; Сйап-?а1ау, V.: Ьосайхайоп оГ пеигорерйбе Υ тКNΑ т пеигопз оГ йитап сегеЬга1 сойех Ьу теапз оГ т зйи йуйпб|ха!кп тейй а сотр1етеп!агу КNΑ ргоЬе. ₽гос. Νη!1. Αсаб. 8сЕ 84: 7315-7318,1987.
16. ТЫе1е, Т.Е.; Магзй, ГОЕ; 8!е. Майе, Ь; Ветз!ет, ЕЬ; ?а1тйег, К.ГО: Е!йапо1 сопзитрйоп апб гез1з!апсе аге туегзе1у ге1а!еб !о пеигорерйбе Υ 1еуе1з. Ыа!иге 396: 366-369, 1998.
17. иизйира, М.Е; Кагуопеп, М.К.; ₽езопеп, и.; Кои1и, М.: Ыеигорерйбе Υ: а поуе1 йпк Ье!теееп !йе пеигоепбосппе зуз!ет апб сйо1ез!его1 те!аЬойзт. Αηη. Меб. 30: 508-510, 1998.
Ссылки к разделу ΝΕΥΡΕ
1. Негход, Н.; Ваитдайпег, М.; Υί\ΌΐΌ, С.; 8е1Ьк, ΕΑ.; Αικγ, В.; 8Ыпе, 1.: Сепотк огдашхаиоп, 1осакхаиоп, апб а11е1к бГегепсез т !йе депе Гог !йе йитап пеигорерйбе Υ Υ1 гесер!ог. 1. Вю1. Сйет. 268: 6703-6707, 1993.
2. Негход, Н.; ОагЬу, К.; Ва11, Н.; Ног!, Υ.; Веск-8кктдег, Α.; 8Ыпе, 1.: Оуейарртд депе зйисЫге оГ !йе йитап пеигорерйбе Υ гесер!ог зиЬ!урез Υ1 апб Υ5 зиддез!з соогбта!е !гапзспр!юпа1 геди1айоп. Сепоткз 41: 315-319, 1997.
3. Негход, Н.; Ног!, Υ.; Ва11, Н.; Науез, С.; 8Ыпе, 1.; 8е1Ьк, Ε.Α.: С1опеб йитап пеигорерйбе Υ гесер!ог соир1ез !о !тео б1ГГегеп! зесопб теззепдег зуз!етз. ₽гос. ЫаЙ. Αсаб. 8сЕ 89: 5794-5798, 1992.
4. Ьагйаттаг, ГО; В1отду1з!, ΑΌ.; Υее, Р.; Е1хт, Е.; Υοο, Н.; VаЫезίебί, С.: С1ошпд апб Гипсйопа1 ехргеззкп оГ а йитап пеигорерйбе Υ/рерйбе ΥΥ гесер!ог оГ !йе Υ1 !уре. 1. Вю1. Сйет. 267: 10935-10938,
1992.
5. Ьик, С.М.; Ргапке1, ν.Ν.; Ккйагбз, ЕЕ.; Тйотрзоп, Ό.Α.: Ыеигорерйбе Υ гесер!ог депез оп йитап сйготозоте 4с|31-с.|32 тар !о сопзегуеб йпкаде дгоирз оп тоизе сйготозотез 3 апб 8. Сепоткз 41: 498500, 1997.
Ссылки к разделу ΝΡΥΒΖ
1. Αтта^. Ό.Α.; Еабк, ГОМ.; Vοηд, ГОЕ; Ма, Υ.-Υ.; Ко1акотезк1, Ь.Р., 1г.; Υаηд-Реηд, Т.Ь; Тйотрзоп, Ό.Α.: Сйагас!епха!юп оГ !йе йитап !уре 2 пеигорерйбе Υ гесер!ог депе (NΡΥ2К) апб 1осакха!юп !о !йе сйготозоте 4с.| гедкп соЫаштд !йе !уре 1 пеигорерйбе Υ гесер!ог депе. Сепоткз 38: 392-398, 1996.
2. Сега1б, С.; νΗ^τ, М^.; Υауззе, Ρ.Ε-Ε; Не, С.; Вгапсйек, ΈΑ.; V^еηзйаηк, К.Ь.: Ехргеззкп с1оптд апб рйагтасо1одка1 сйагас!епха!кп оГ а йитап Ырросатра1 пеигорерйбе Υ/рерйбе ΥΥ Υ2 гесер!ог зиЬ!уре. 1. Вю1. Сйет. 270:26758-26761,1995.
3. Ьик, С.М.; Ргапке1, ν.Ν.; Ккйагбз, ЕЕ.; Тйотрзоп, Ό.Α.: Непгорер!|бе Υ гесер!ог депез оп йитап сйготозоте 4с|31-с.|32 тар !о сопзегуеб йпкаде дгоирз оп тоизе сйготозотез 3 апб 8. Сепоткз 41: 498500, 1997.
- 83 006254
4. Коке, Р.М.; Гегпапйек, Р.; 1упсй, 18.; Ггаг1ег, 8.Т.; Икйег, 8.М.; Койики1а, К.; К1епг1е, В.; 8ее!йа1а, К.: С1ошпд апй ГипсРопа1 ехргеккюп оГ а с^NА епсоШпд а йитап ΐуре 2 пеигорерййе Υ гесерЮг. 1. Вю1. Сйет. 270: 22661-22664, 1995.
Ссылки к разделу У1Р
1. Войпег, М.; Рпйкт, М.; Согек, I.: СоШпд керпепсек Гог уакоасруе 1п1ек11па1 рерЦДе апй РНМ-27 рерййе аге 1оса!ей оп йуо ай)асеп1 ехопк ш 1йе йитап депоте. Ргос. №111. Асай. 8с! 82: 3548-3551, 1985.
2. СоЮй, Е.; Υαιηαβαιηί, Т.; Υататоΐо, Н.; ОкатоЮ, Н.: Сйготокота1 аккщптеп! оГ йитап У1Р/РНМ27 депе Ю 6с|26-с.|27 гедюп Ьу кро! Ь1о1 йуЪйШгайоп апй т кйи йуЪг1й1га!1оп. Вюсйет. ΙπΙ. 17: 555-562, 1988.
3. Согек, I.; Ау1йог, К.; Υайаν, Υ.; Какпе1коп, Ό.; Сгосе, С.М.; НиеЪпег, К.: Тйе депе епсойтд уакоасруе 1п(ек(1па1 рерЦЦе 1к 1оса!ей оп йитап сйготокоте 6р21-6с|1ег. Нит. Сепе!. 75: 41-44, 1987.
4. Согек, I.; №1кай Н.; Вуегк, М.; Ау1йог, К.; ХУеткЮт, Υ.; 8йат, Υ.; 8йо\ук, Т.В.: 8ерпеп1а1 ехргеккюп ш 1йе пегуоик кукЮт оГ С-МУВ апй УТ депек, 1оса!ей ш йитап сйготокота1 гедюп 6с|24. 8ота!. Се11 Мо1ес. Сепей 13: 305-313,1987.
5. Нешг-Епап, Р.; Цеу, К.Ц.; Них, М.; 8а1й, 8.Ι.: ЦеПс1еп1 уакоасйуе 1п(ек(1па1 рерИ0е 1ппегуайоп ш куеа! д1апйк оГ сукйс йЪгокк раРегИк. 8с1епсе 229: 1407-1408, 1985.
6. Ной, Ν.; ОЪа!а, К.; Υаηа^йа^а, Ν.; ОкатоЮ, Н.: Нитап ргергоуакоасРуе 1п1ек11па1 рерЦЦе сопйатк а поуе1 РШ-27-йке рерййе, РНМ-27. №Пиге 304: 547-549,1983.
7. йпйег, 8.; Вагкйет, Т.; №гЪегд, А.; Регккоп, Н.; 8сйа1йпд, М.; Нокйей, Т.; Мадпиккоп, С.: 81гис1иге апй ехргеккюп оГ !йе депе епсойтд !йе уакоасйуе 1п(ек(1па1 рерРйе ргесигког. Ргос. №111. Асай. 8сй 84: 605609, 1987.
8. Отагу, М.В.; КадпоГГ, М.Р.: ШепЕйсайоп оГ пис1еаг гесерЮгк Гог УЙР оп а йитап со1ошс айепосагстота се11 йпе. 8с1епсе 238: 1578-1581, 1987.
Ссылки к разделу АЦ
1. Рагта, I; 8!епде1, Ό.; Саппаде, М.-Н.; Роуагй, М.; Вагоикй К.; Напоипе, I: 8ес.|иепсе оГ а йитап Ъгат айепу1у1 сус1аке рагйа1 сЭХА еуШепсе Гог а сопкепкик сус1аке йотат. Вюсйет. Вюрйук. Кек. Соттип. 179: 455-462, 1991.
2. 8!епде1, Ό.; Рагта, 1; Саппаде, М.-Н.; Коеске1, Ν.; Майер М.-С.; Вагоикй К.; Напоипе, I: ЦгЙегепй сйготокота1 1осайгайоп оГ !уо айепу1у1 сус1аке депек ехргеккей ш йитап Ъгат. Нит. Сепе!. 90: 126-130,
1992.
Ссылки к разделу УРАС1
1. Соиутеаи, А.; Коиуег-Ееккагй, С.; Цагтоп1, Ό.; Маоге!, 1-1; Саггего, I.; Од1ег-Оешк, Е.; ЬаЪиййе, М.: Нитап 1п1екРпа1 УЙР гесерЮг: с1оптд апй ГипсРопа1 ехргеккюп оГ !уо сЭХА епсойтд рго1етк уйй δίίГегеп! №1егпппа1 йотатк. Вюсйет. Вюрйук. Кек. Соттип. 200: 769-776, 1994.
2. НакйРпоЮ, Н.; КкЫпо, А.; 81ип1апй Ν.; НадШага, Ν.; Соре1апй, КС.; )епктк, КА.; Υататоΐо, К.; Ма!кийа, Т.; Шипага, 8.; ВаЪа, А.: Сепотю огдатгайоп апй сйготокота1 1осайоп оГ !йе тоике уакоасруе т1екРпа1 ро1урерййе 1 (УРАС-1) гесерЮг. Сепотюк, 58: 90-93, 1999.
3. ЫЪегй, Р.; Раккаде, Е.; Рагтепйег, М.; 81топк, М.-1; Уаккай, С.; Майер М.-С.: Сйготокота1 тарртд оГ А1 апй А2 айепокте гесерЮгк, УТ гесерЮг, апй а пеу киЪйуре оГ кегоЮтп гесерЮг. Сепотюк 11: 225-227, 1991.
4. 8гееййагап, 8.Р.; Ниапд, 1-Х.; Сйеипд, М.-С.; Сое!г1, Е.1: 81гис1иге, ехргеккюп, апй сйготокота1 1осайгайоп оГ !йе йуре I йитап уакоасруе 1п1екРпа1 ро1урер11йе гесерЮг депе. Ргос. №111. Асай. 8сг 92: 29392943, 1995.
5. 8гееййагап, 8.Р.; Ра!е1, Ц.К.; Ниапд, 1-Х.; Сое!г1, Е.1: С1ошпд апй ГипсРопа1 ехргеккюп оГ а йитап пеигоепйосппе уакоасруе 1п1екРпа1 ро1урерййе гесерЮг. Вюсйет. Вюрйук. Кек. Соттип. 193: 546-553,
1993.
6. 8гееййагап, 8.Р.; КоЫкйоп, А.; Ре1егкоп, К.Е.; Сое!г1, Е.1: С1ошпд апй ехргеккюп оГ !йе йитап уакоасйуе 1п(ек(1па1 рерййе гесерЮг. Ргос. №111. Асай. 8сг 88:4986-4990, 1991.
7. Уаккай, С.: Регкопа1 Соттишсайоп. Вгикке1к, Ве1дтт, 1/15/1992 & Уепдег, С.Ц.: Регкопа1 Соттишсайоп. Со1итЪик, Ойю, 8/3/1993.
Ссылки к разделу УРАС2
1. Айатои, 1Е.; А1уаг, Ν.; Уап Нот, 8.; Е1кйоигЪаду, КА.: С1ошпд апй Гипсйопа1 сйагасЮпгаРоп оГ !йе йитап уакоасруе 1п1екРпа1 рерййе (УТ)-2 гесерЮг. Вюсйет. Вюрйук. Кек. Соттип. 209: 385-392, 1995.
2. Маскау, М.; Рап!ек, 1; 8сйегег, 8.; Воу1е, 8.; \УекР К.; Ткш, Ь.-С.; Ве11ош, Е.; йгйг, Е.; Уап Неушпдеп, У.; Нагтаг, А.1: Сйготокота1 1осайгайоп ш тоике апй йитап оГ !йе уакоасйуе т1екРпа1 рер11йе гесерЮг йуре 2 депе: а рокк1Ъ1е сопйгЪиЮг !о !йе йо1оргокепсерйа1у 3 рйепойуре. Сепотюк 37: 345-353, 1996.
3. 8уоЪойа, М.; ТакЮпоу, М.; Уап Катре1Ъегдй, 1; Сооккепк, Й.-Р.; Це №еГ, Р.; Уае1Ъгоеск, М.; КоЪЪегесйй Р.: Мо1еси1аг с1ошпд апй Гипсйопа1 сйагасЮпгаРоп оГ а йитап УТ гесерЮг йот 8ИР-Т1 1утрйоЪ1акйк. Вюсйет. Вюрйук. Кек. Соттип. 205: 1617-1624, 1994.
- 84 006254
Сокращения
ЖСД = женская половая дисфункция;
РПВЖ = расстройство полового возбуждения женщин цАМФ = циклический аденозин-3',5'-монофосфат;
цГМФ = циклический гуанозин-3',5'-монофосфат;
Пцамф = потенциатор цАМФ;
ПцГМФ = потенциатор цГМФ;
АцАМФ = активатор цАМФ;
АцГМФ = активатор цГМФ;
НМцАМФ = негативный модулятор цАМФ;
НМцГМФ = негативный модулятор цГМФ;
ИцАМФ = ингибитор цАМФ;
ИцГМФ = ингибитор цГМФ;
И: ИцАМФ = ингибитор ингибитора цАМФ;
И:ИцГМФ = ингибитор ингибитора цГМФ;
И: НМцАМФ = ингибитор негативного модулятора цАМФ;
И:НМцГМФ = ингибитор негативного модулятора цГМФ;
ПР:АцАМФ = позитивный регулятор активатора цАМФ;
ПР:АцГМФ = позитивный регулятор активатора цГМФ;
АЦ = аденилатциклаза;
А: АЦ = активатор АЦ;
НЭП = нейтральная эндопептидаза;
И: НЭП = ингибитор НЭП;
УГР = вазоактивный интестинальный пептид (уакоасйуе ш!екйпа1 рерйбе);
У1Рг = рецептор УГР (может быть выражен как VI ΡΚ);
νΐΡη = подтип рецептора νΐΡ (такой как νΐΡΚ1.νΐΡΚ2);
Α:νΐΡΓ = активатор νΐΡΓ;
Α^Ρ,, = активатор ΥΓΡ^
Η:νΐΡ,= ингибитор νΐΡΓ;
ΚνΐΡ^ ингибитор ΥΓΡ,,;
Η:Η:νΐΡΓ = ингибитор ингибитора νΐΡΓ ;
ИМУЩ, = ингибитор ингибитора ΥΡ^
ФДЭ = фосфодиэстераза;
ФДЭп = семейство ФДЭ (например ФДЭ1, ФДЭ2 и т.д.);
ФДЭцАМФ = ФДЭ, гидролизующая цАМФ;
ФДЭцГМФ = ФДЭ, гидролизующая цГМФ;
И: ФДЭ = ингибитор ФДЭ;
ФДЭцАМФ1 = ингибитор ФДЭ, гидролизующей цАМФ;
ФДЭцГМФ1 = ингибитор ФДЭ, гидролизующей цГМФ;
И: ФДЭцАМФ = ингибитор ФДЭ, гидролизующей цАМФ;
И:ФДЭцГМФ = ингибитор ФДЭ, гидролизующей цГМФ;
И: ФДЭцАМФ = ингибитор семейства цАМФ-гидролизующих ФДЭ;
ΝΡΥ = нейропептид Υ;
ΝΡΥΓ = рецептор ΝΡΥ (может быть выражен как ΝΡΥΚ);
ΝΡΥ ¥п = ¥п подтип рецептора ΝΡΥ (например ΝΡΥ Υ1) (например ΝΡΥΚ1);
Η:ΝΡΥ = ингибитор ΝΡΥ;
Η:ΝΡΥ ¥п = ингибитор ΝΡΥ Υ^ кД = килодальтон;
п.о. = пара оснований;
т. п.о. = тысяча пар оснований.
- 85 006254
Перечни последовательностей
1. НЭП (ЕС 3.4.24.11)
ЛОКУС
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДОСТУП
ΝΙϋ
ВЕРСИЯ
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА
ИСТОЧНИК
ОРГАНИЗМ
ССЫЛКА
АВТОРЫ НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ
ΜΕΟΙ-ΙΝΕ
ПРИЗНАКИ
СОЗ
Η5ΜΚΝΑΕΝ 3181 п.о. МРНК ΡΚΙ 12 сентября 1993 человеческая мрнк энкефалиназы (ЕС 3.4.24.11)
Х07166 д34757
Х07166.1 01:34757
Энкефалиназа; металлопротеин; нейтральная эндопептидаза человек ното зартепз
Еикагуога; мегагоа; сЬогдаса; УегхеЬгага; матта!та; ЕисЬегта; Ргттагез; СагаггМт’; ноппптдае; ното (основания 1-3181) маТГгоу, в., киапд, и.з., зееЬигд, р.н., мазол, А.з. апд БсНоНеТд, Р.к. Мо1еси1аг сТоптпд апд апл'по астй зечиепсе οί Нитап епкерЬаИпазе (пеигга) епдорергтдазе)
РЕВ5 Ье«. 229 (1), 206-210 (1988)
88152222
ЬосаС1оп/0иаИ£1ег5
1.. 3181 /огдап1зт=Ното Бархепз /<ЗЬ_хге£=Еахоп:9606 /Е1ззие_Еуре= р1асеп£а· /с1опе_ИЬ=1атЬда дЕ10 /с1опе=1атЬ<1а Н7
18.. 2249 /поЕе»епкерЪа11пазе (АА 1-743) /содоп_зЕагЕ=1 /ргосехп_1<а= СААЗ 0157.1 /0Ь_хге£=РЮ:д34758 /<ЗЬ_хге£= ΟΙ: 34758 /<ЗЬ_хге£= 5ΗΙ55-ΡΗΟΤ: Р08473 / Егапз1аЕ1ОП= М01Т01НТРКРКККОКМТРОЕ15ЬЗУОУОЬЬТ11АУТМ1АОУАТ УООС1СК55ОС1КЗААЯЫ0ММОАТТЕРСТОГРКУАСССМЬККМУ1РЕТЗЗЯУОНРО1 ЬКОЕЕЕУУЬКОУЬ0ЕРКТЕВ1УАУ0КАКАЬУ1гЗС1КЕЗА1ОЗПССЕР00КЬОРО1УСИ ΡνΑΤΕΝΜΕΟΚΥΟΑ3ΜΤΑΕΚΑΙΑΟΟΝ3ΚΥΟΚΚνθΙΝΟΕνσΤΟΟΚΝ3νΝΗνΐΗΙΟΟΡΚθα ЬРЗНОУУЕСТО1УКЕАСТАУУОРМ13УАНЫН0ЕЕНЬР1ОЕЫ0ЬАЬЕММКУМЕЬЕКЕ1 ΑΝΑΤΑΚΡΕΟΚΝΟΡΜΟΟΥΝΚΜΤ1ΑΟΙΟΝΝΓ3ϋΕΙΝΟΚΡΓ3ΗΟΝΓΤΝΕΙΜ5ΤνΝΙ5ΙΤΝΕ ЕОУУУУАРЕУЬТКОКРЮТКУЗАКОООИЬМЗКППМОЬУЗЗЬЗНТУКЕЗКМАРНКАЬУ ΟΤΤΕΕΤΑΤΜΗΚεΑΝϊνΝαΝΜΕΝΑνΟΧΟΥνΕΑΑΓΑΟΕΕΚΗννΕΟΟΙΑΟΙΗΕνΡΙΟΤΟΟΟ ЬТИМОАЕТККНАЕЕКАЬА1КЕК1ОУРОО1У5МОМК1ЛЫЕУЬЕЬЫУКЕОЕУРЕМ110ЫЬ ΚΓ303Κ0ΕΚΚ0ΚΕΚνθΚΟΕΜΙ5ΟΑΑννΝΑΕΎ33ΟΗΝ0ΐνΓΡΑΟΙΟ0ΡΡΓΡ3Α003Ν30 ΝΥ00Ι0Μνΐ0ΗΕΙΤΗ0Ρ0ΟΝ0ΗΝΡΝΚΟ0Ο0νθΜΗΤζ)05Α3ΝΡΚΕ0300ΜνΥ0Υ0ΝΡ3Μ ОЬАОООН1Ла1ЫТЬОЕМ1АОЫСаи;аАУКАУОМУ1ККЫСЕЕКЬЬРОЬОЬМНКОЬГРЬМ ΓΑ0νΜ0σΤΥΚΡΕΥΑνΝ5ΙΚΤθνΗ5ΡΟΝΡΚΙΙ0ΤΟ0Ν5ΑΕΡ3ΕΑΡΗσΗΚΝ3ΥΜΝΡΕΚΚε НУИ ш1зс_£еаСиге 3073..3078 /поЕе=ро1у А
ЧИСЛО ОСНОВАНИЙ 1055 а 582 с
ОРИДЖИН
1 дсаадЕсада аадЕсадаЕд
61 адсдаЕддас ЕссасЕддад
121 сЕдЕдасааЕ даЕсдсасЕс
181 дсаЕааааЕс адсЕдсЕсда
51дпа1
657 д 887 ΐ дасаЬаасСд аСаСсаасас Ессааадсса аадаадааас аЕсадссЕсЕ сддЕссЕЕдЕ ссЕдсЕссЕс ассаЕсаЕад ЕаЕдсаассЕ асдасдасдд ЕаЕЕЕдсаад ЕсаЕсадасЕ сЕдаЕссааа асаЕддаЕдс сассасЕдад ссЕЕдЕасад
- 86 006254
241 асЕЕЕЕЕсаа аЕЭЕдсЕЕдс ддаддссддЕ Едааасдсаа ЕдссасЕссс дадассадсЕ
301 сссдЕЕасдд саасЕЕЕдас ассЕЕаадад аЕдаасЕада адЕсдЕЕЕЕд ааадасдгсс
361 ЕЕсаадаасс саааасСдаа дасасадсад садедсадаа адсаааадса ссдсасаддг
421 сЕсдЕасааа сдаасссдсс ассдасадса даддсддада ассЕссасЕс ааассдЕЕас
481 садасасаЕа Едддсддсса дгадсаасад аааасЕддда дсаааааСаС ддЕдссЕсЕЕ
541 ддасадсЕда аааадссагс дсасаасЕда ассссаааса сдддаааааа дЕссЕСаЕСа
601 аЕЕЕдЕЕЕдЕ ЕддсасЕдас даСаадааСС ссдсдааЕса ЕдЕааЕЕсаЕ аЕЕдассаас
661 сссдасседд ссесссеесС ададаЕЕасЕ аСдааедсас сддаасссас ааададдсЕЕ
721 дЕасадсаЕа сдсддасссс аЕдаЕЕЕсЕд ЕддссадасЕ даЕЕсдЕсад даадааадас 781 сдсссассда Едаааассад СЕЕдсЕЕЕдд ааасдааеаа адЕЕаЕддаа ссддааааад 841 аааЕЕдссаа ЕдсЕасддсс ааассЕдаад ассдааасда сссааЕдсЕЕ сЕдЕаЕааса 901 адаЕдасаЕЕ ддсссадагс сааааЕаасЕ ссссасеада даЕсааЕддд аадссаСЕса 961 дсЕддЕЕдаа ЕЕЕсасаааЕ даааЕсаЕдЕ саасЕдЕдаа ЕаЕЕадЕаСС асааасдадд 1021 аадасдЕддс ЕдЕЕЕаЕдсс ссадааЕаЕЕ саассааасЕ саадсссаЕЕ сЕЕассаааЕ 1081 аЕЕсЕдссад адаЕсЕЕсаа аасЕсааЕдЕ ссЕддадаЕЕ саЕааЕддаС сЕЕдЕаадса 1141 дссЕсадссд аассСасаад дадЕссадаа асдсЕЕЕссд сааддсссЕЕ ЕаЕддЕасаа 1201 ссссадааас адсаасЕЕдд адасдЕсдсд сааасЕаЕдЕ сааЕдддааЕ аЕддааааЕд 1261 сЕдЕддддад дсЕЕЕаЕдсд даадсадсаЕ ЕЕдсЕддада дадСааасас дЕддЕсдадд 1321 аЕЕЕдаЕЕдс асадаЕссда даадЕСЕЕСа сссадасгЕС адаСдассСс асЕЕддаЕдд 1381 аЕдссдадас аааааадада дсЕдаадааа аддссссадс ааЕСааадаа аддаЕсддсЕ 1441 аЕссЕдаЕда саЕсдсссса аасдаЕааса аассдаасаа ЕдадЕассЕс дадЕЕдаасЕ 1501 асааадаада ЕдааЕасЕсс дадаасасаа ЕЕсааааСЕЕ даааСЕсадс сааадЕааас 1561 аасЕдаадаа дсЕссдадаа ааддСддаса аадаЕдадЕд даСаадЕдда дсадссдсад 1621 ЕсааЕдсаЕЕ ЕЕасЕсЕЕса ддаадаааЕс адаЕадЕсЕЕ сссадссддс асЕсЕдсадс 1681 сссссеесее ЕадЕдсссад садЕссаасЕ саЕЕдаасЕа ЕдддддсаЕс ддсаЕддЕса 1741 Еаддасасда ааЕсасссаЕ ддсЕЕсдаЕд асааЕддсад ааасЕЕЕаас ааадаЕддад 1801 ассЕсдЕЕда сЕддЕддасс саасадЕссд саадЕаасЕЕ сааддадсаа ЕсссадЕдса 1861 ЕддЕдЕаЕса дЕасддааас ЕЕссссЕддд асседдсадд Еддасадсас сЕЕааЕддаа 1921 ЕЕааЕасасЕ дддадаааас аЕЕдсЕдаЕа аЕддаддЕсЕ ЕддЕсаадса ЕасададссЕ 1981 аЕсадааЕЕа ЕаЕЕааааад ааеддсдаад аааааЕЕасЕ ЕссЕддасЕЕ дассЕаааЕс 2041 асааасаасЕ аЕЕЕЕЕСЕЕд аасЕЕЕдсас аддЕдЕддЕд ЕддаассЕаЕ аддссададс
2101 аЕдсддЕЕаа сЕссаЕЕааа асадаЕдЕдс асадЕссадд сааЕЕЕсадд аЕЕаЕЕддда
2161 сЕЕЕдсадаа сЕСЕдсадад ЕЕЕЕсадаад ссЕЕЕсасЕд ссдсаадааЕ ЕсаЕасаЕда
2221 аЕссадаааа даадЕдссдд дсссддгдас сЕЕсаааада адсаЕЕдсад сссЕЕддсСа
2281 дасЕЕдссаа сассасадаа аЕддддааЕЕ ссссааЕсда аадааааСдд дсссЕадддд
2341 ссасЕдьасс дасссдаддд СдаССаасад ададддсасс а(сасааеас адасаасасе
2401 аддЕЕдЕссЕ адааадддсд Еддадддадд аадддддссс ааддгсЕаЕс аадЕсааЕса
2461 ЕЕЕсЕсассд гдсасаЕаас дсЕЕааЕЕЕс ЕааадаЕааЕ аЕЕасЕдсЕЕ аЕЕЕсЕдЕЕЕ
2521 сссаЕаЕддЕ сЕассадЕЕЕ дсЕдаЕдссс сСадааааса асдсаааасс ЕССдаддЕад
2581 ассаддаЕЕЕ сЕааЕсаааа дддаааадаа даЕдЕЕдаад ааЕасадЕЕа ддсассадаа
2641 даасадЕадд ЕдасасГаса дЕЕЕааааса саЕЕдссЕаа сЕасЕадЕЕЕ ЕЕасЕЕЕЕаЕ
2701 ЕЕдсаасаЕЕ ЕасадЕссСЕ сааааЕссЕЕ ссааадааЕЕ сЕЕаЕасаса ЕЕддддссЕЕ
2761 ддадсЕЕаса ЕадЕЕЕЕааа сЕсаЕЕЕЕЕд ссаЕасаЕса дЕЕаЕЕсаЕЕ сЕдЕдаЕсаЕ
2821 ЕЕаЕЕЕЕаад сасЕсЕЕааа дсааааааЕд ааЕдЕсЕааа аЕЕдЕЕЕЕЕЕ дЕЕдЕассЕд
2881 сЕЕЕдасЕда ЕдсЕдадаЕЕ сЕЕсаддсЕЕ ссЕдсааЕЕЕ ЕсЕаадсаас ЕЕСЕЕдсЕсЕ
2941 аЕсЕсЕсааа асЕЕддЕаЕЕ ЕЕЕсададаЕ ЕЕаЕаЕаааЕ дЕаааааЕаа ЕааЕЕЕЕЕаЕ
3001 аЕЕЕааЕЕаЕ ЕаасЕасаЕЕ ЕаЕдадЕаас ЕаЕЕаЕЕаЕа ддЕааЕсаас дааЕаЕЕдаа
3061 дЕСЕсадсЕЕ аааасаааса дЕЕдЕдаасс аадаЕсЕаЕа аадсдаЕаЕа садаСдаааа
3121 ЕЕЕдадасЕа ЕЕЕааасЕга ЕааассаЕаЕ ЕдаЕдаааад аСССаадсас ааасЕЕЕадд
3181 д
- 87 006254
2. ФДЭ ТИП 1
ЛОКУС
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ДОСТУП
N10
ВЕРСИЯ
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА
ИСТОЧНИК
ОРГАНИЗМ
ССЫЛКА
АВТОРЫ
НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ
ΜΕΟίΙΝΕ
ССЫЛКА
АВТОРЫ
НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ
ПРИЗНАКИ зоигсе деле
СОЗ
Н5РОЕ1АЗА 2008 п.о. мрнк Рй1 12 апреля 1996 человеческая мрнк 3’,5’ фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов (нзроеаЗа), полная сба.
и40370 д1151108 и40370.1 61:1151108 кальмодулин-стимулируемая фосфодиэстераза человек
Ното аартепа
Еикагуога; метагоа; сЬогбата; уегтеЬгата; маттаИа; ЕиТкета; Рттатеа; СатаггЫт’; ноппт'бае; Ното (основания 1-2008)
1_оидкпеу, К., магТ1па, Т.З., Нагт’а, Е.А., 5абЬи, К., Нтска, З.В., 5оппепЬигд, и.к., Веауо, З.А. апб Регдиаоп, к.
1ао1аТ1'оп апб сЬагастетгаТтоп οί сОЫАа соггеаропбтпд То Тио Иитап саТстит, са1тоби1тп-геди1агеб, 3’,5’-сус)тс пис1еопбе рЬоаЬобтеатегааеа 3. В1О1. СЬет. 271 (2), 796-806 (1996)
96132810 (основания 1-2008) юидЬпеу, к., магТтпа, Т.э., наггта, Е.А.5., 5абНи, к., нтска, З.В., ЬоппепЬигд, и.к., Веауо, З.А. апб Регдиаоп, к.
отгест ВиЬттаатоп
5иЬттттеб (07-Νθν-1995) Кахе ЮидЬпеу, 1СО5, 22021 20гК Ανε. 5. Е., ВотЬеП, ЫА 98021, и5А
Ьосасхоп/ОиаИИегз
1..2008 /огдап1зт='Ното вархепа* /<ЗЪ_хге£= Сахоп: 9606 ’ 85..1692 /депе=-РОЕ1А85..1692 /депе=-РОЕ1А/поСе=-РОЕ1АЗ; Суре I рЪозрНобхезСегазе/собоп_зсагс=1 /ргобисс=3·,5' сус1хс пис1еоСхбе рЪозрИодхезСегаве· /ргоСехп_хЙ=-ААС50436.1’ /с1Ь_хге£ = Р10:д1151109· /с1Ь_хге£=-61:1151109 / Сгапа1аСхоп= М633АТЕ1ЕЕЬЕГП'ТЕКУЬТ6Е0ТЕКМ>ЮН1.К61ЬНСЬ\Л<0ЕЕН
СОУьп/УОЕКгаПЕУААЗУЪЕАУУЮЕТННЕЕОТЕПЕЬЗОЮТОЗУРЗЕУНОИЬАЗТЕТ НКМСМТКККРЕЕКРКГН31УНАУ0АС1Е7ЕНМ¥ЯКТУНМУСЬАУРААУ1УТЬКПУПКИ 5ГОУГА1ЛЕАЗСЕН5ЬКГМ1¥ЕЬГТКУОЫЫЯГК1РиЗСЫТГАЕАЬЕУ6УЗКУКЫРУ
ЧИСЛО ОСНОВАНИЙ
627 а
Η^ΙΗΑΑηνΤ0ΤνΗΥΙΜΕΗΤ6ΙΜΗνπ,ΤΕΕΕΙΕΑΜνΓΑΑΑΙΗΟΥΕΗΤ6ΤΤΝΝΕΗΙ0ΤΗ3 ОУА1ЬУ1ГОП5УЕЕКННУЗААУКЬМ0ЕЕЕМЫ1ЫМЬЗКПОННОЫиЛ,У1ЕМУЬЗТПМ36 НЕООХЮШЩЗЕООРЕСЮКАКТМЗЫЬНААОХЗНРАКЗИКЬНУНИТМАЬМЕЕРЕЬОС ОКЕАЕЬСЬРР8РЬСПККЗТМУА0301СЕ1ОР1УЕРТРЗЬЬТОЗТЕК1У1РЫЕЕАЗКА ΕΤ83ΥνΑ383ΤΤΐν6ΕΗΙΑ0ΑΙ>ΚΚ3ΝΤΚ68Μ3063Υ3Ρ0Υ8ΙΛΑν0ΕΚ3ΡΚΝΝΕν0ΙΙ ΟΟΝΚΕΠΗΚΕΙΛΑΟΕΑΚΤΕΒΟΚΟΕΓΙΗΟ'
400 с 437 д 544
ОРИДЖИН даассесдас СдадСасСса дСдсССсадс дсасадааса
121 аасассассс
181 ддаасассаа
241
301 аадаадааСа адасССсСдд дссддадсас ССаадСаСсС дасдсССддС *
ССдааСаСдс асассдаада сассасдддд Сасаддадаа дсаасадасд СсСадедсса даадсадссд ддсаСсСдСд СдадсСсадС садассдааа дааададдСд ссддаадсад дасасесада адесдссссс сададастда аааСдСддса асдссааедс СССаСаСеда сСдасСсадС ддддададсс адаассддаа дсдсссдааа сдСсдасССа Сдааасаада сссасссдаа
- 88 006254
361 дЕссдддасЕ ддЕЕддсЕЕс ЕассЕЕЕаса сддааааЕдд ддаЕдасааа ааадааассЕ
421 даддааааас саааассссд дадсаЕЕдЕд сасдссдссс аадсЕддааЕ ЕЕЕЕдЕддаа
481 адааЕдЕасс дааааасаСа ссасасддсс ддсссддсас аЕссадсадс ЕдЕсаЕсдЕа
541 асассааадд асдсЕдаЕаа аЕддЕсЕЕЕс дасдсасссд ссссааасда адсаадЕдда
601 дадсаЕадЕс ЕдаадЕЕЕаЕ даЕЕЕаЕдаа сЕдЕЕЕасса даЕаЕдаЕсЕ ЕаЕсаассдЕ
661 ЕЕсаадаЕЕс сЕдЕЕЕсЕЕд ссЕааЕсасс сссдсадаад сЕЕЕадаадЕ ЕддЕЕасадс
721 аадгасаааа асссаеасса сааЕЕЕдаЕЕ сасдсадссд аЕдЕсасЕса аассдсдсаг
781 ЕасагааЕдс ЕЕсаЕасадд ЕаЕсаЕдсас ЕддсЕсасЕд аасЕддаааЕ ЕЕЕадсаасд
841 дЕсЕЕЕдсЕд сЕдссаЕЕса ЕдаЕЕаЕдад саЕасаддда саасааасаа сЕЕЕсасаЕЕ
901 садасааддЕ садаЕдЕЕдс саЕЕЕЕдЕаЕ ааЕдаЕсдсЕ сЕдЕссЕЕда дааЕсассас
961 дЕдадЕдсад сЕЕаЕсдасЕ ЕаЕдсаадаа даадааасда аЕаЕсЕЕдаЕ аааЕЕЕаЕсс
1021 ааадаЕдасЕ ддадддаЕсЕ ЕсддаассЕа дЕдаЕЕдааа ЕддЕЕЕЕаЕс ЕасадасаЕд
1081 ЕсаддЕсасЕ ЕссадсаааЕ ЕаааааЕаЕа адааасадЕЕ Едсадсадсс ЕдаадддаЕЕ
1141 дасададсса ааассаЕдЕс ссЕдаЕЕсгс сасдсадсад асаЕсадсса сссадссааа.
1201 ЕссЕддаадс ЕдсаЕЕаЕсд дгддассаЕд дсссЕааЕдд аддадЕЕЕЕЕ ссЕдсаддда
1261 даЕааадаад сЕдааЕЕадд дсЕЕссаЕЕЕ ЕссссасЕЕЕ дЕдаЕсддаа дЕсаассаЕд
1321 дЕддсссадЕ сасаааЕадд ЕЕЕсаЕсдаЕ ЕЕсаЕадЕад адссаасаЕЕ ЕЕсЕсЕЕСЕд
1381 асадасЕсаа сададааааЕ ЕдЕЕаЕЕссЕ сЕЕаЕададд аадссЕсааа адссдааасЕ
1441 ЕсЕЕссЕаЕд Еддсаадсад СЕсаассасс аЕЕдЕддддЕ ЕасасаЕЕдс ЕдаЕдсасса
1501 адасдаЕсаа аЕасаааадд сЕссаЕдадЕ даЕдддЕссЕ аЕЕссссада сЕасЕсссЕЕ
1561 дсадсадЕдд ассЕдаадад ЕЕЕсаадаас аассЕддЕдд асаЕсаЕЕса дсадаасааа
1621 дададдЕдда аададЕЕадс Едсасаадаа дсаадаасса дЕЕсасадаа дЕдЕдадЕЕЕ
1681 аЕЕсаЕсадЕ ааасассЕЕЕ аадЕаааасс ЕсдЕдсаЕдд ЕддсадсЕсЕ ааЕЕЕдасса
1741 ааадасЕЕдд адаЕЕЕЕдаЕ ЕаЕдсЕЕдсЕ ддаааЕСЕас ссЕдЕссЕдЕ дЕдадасадд
1801 аааЕсЕаЕЕЕ ЕЕдсадаЕЕд сЕсааЕаадс аЕсаЕдадсс асаЕаааЕаа садсЕдЕааа
1861 сЕссЕЕааЕЕ сассдддсЕс аасЕдсЕасс даасадаЕЕс аЕсЕадЕддс ЕасаЕсадса
1921 ссЕЕдЕдсЕЕ ЕсадаЕаЕсЕ дЕЕЕсааЕдд саЕЕЕЕдЕдд саЕЕЕдЕсЕЕ ЕассдадЕдс
1981 сааЕаааЕЕЕ ЕсЕЕЕдадса аааааааа
- 89 006254
3. ФДЭ ТИП 2
ЛОКУС ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ДОСТУП
N10
ВЕРСИЯ КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА источник
ОРГАНИЗМ
ССЫЛКА
АВТОРЫ
НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ
ΜΕΟυίΝΕ
ССЫЛКА
АВТОРЫ
НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ
ПРИЗНАКИ зоигсе деле
СРВ
Η51Ι67733 4240 П.о. мРНК ΡΚΙ 21 МАЯ 1997 человеческая мрнк цгма>-стимулируемой 3’,5* фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов (нзроеаЗа), полная еда.
Ц67733 д21О8О51
Ц67733.1 С1:2108051 человек ното зартепз
Еикагуота; мегагоа; сНогйага; УеггеЬгата; маттаИа; ЕигЬета; Ргттагез; сатаггЬппт; ноттлтдае; ното (основания 1-4240) козтап, 6.7., маггтпз, Т.з., зоппепЬигд, VI.к., веауо, 1.А., Регдизоп, к. апд юидКпеу, к.
1зо1аТ1оп апс! сЬагасгегтгагтоп οί Питал сэыаз епсосНлд а сбМР-зЕдти1аге0 3’, 5'-сусИс пис1еоС10е рКозКосНезгегазез беле 191 (1), 89-95 (1997)
97354299 (основания 1-4240) йозтап, 6.3., маггтпз, Т.З., ЗоппепЬигд, И.к., Веауо, З.А., Регдизоп, К. алд (.оидКпеу, к.
О1гесс зиЬттззтоп
5иЬт1ГГед (21-Аиб-1996), 1соз Согрогагтол, 22021 201Ь Ауе. 5. Е., ΒοΐΠβΊΙ, ИА 98021, и5А
ЬосаСхоп/ОиаИЕхегз
1.. 4240 /огдап1гт=Но1по зархепз /<ЗЬ_хге £= · Сахоп: 9 6 0 6 ·
162.. 2987 /депе=РОЕ2А·
162 . .2987 /депе=’РОЕ2А· /£υησ£ίοη=·ο6ΜΡ-8Είιπυ1βΕβ<1 З'.З'-сусЫс пис1еоС1бе рЬоарЪосН ез г егаае' /ηοεβ=·ΡϋΕ2 £али.1у; зрИсе уаггапЕ 3’ /со<Зоп_вЕагЕ=1 /ргодисЕ=·РОЕ2АЗ· /ρτοΕβίη_ίά=·ААС51320.1· /с!Ь_хге£= РЮ: д2108052' /<ЗЬ_хге£= 61:2108052· / Сгапз1аЕ1оп= М<30АС6Н51ЬСН300УРААПРАЕРН600иРЬКРОЕРРРРР0РСА
П5Ь0ПАЬЬ5Е65У1О136Ь0НАУКЕАО5АУЬРНУЕТУУТУиДХЗЕ30ЕУСЕПРРНЕЬР 0ЕСКУНЕА1130КН0ССНа06Г30ЬРСКР0АНЬУАРЬАРОТ0\7ЬУМР0АОКЕА6АУАА УХЬУНССОЬЗОЫЕЕНЗООАУЕКНТЕУАЕНЯУОУЪООКбРНЕАРНАУОМРРЕСТАЕООК СбААУТОКОККЮОЬССЕЬУОЬОАЗЗЬОЬКУЬОУЬООЕТНАЗПССЬЬЬУЗЕПМЬОЬЗС КУ1ОТКУ1ЛЕЕУЗРРЬТаСЬ60УУЕОКК510ЬКОЬТ8ЕОУ00Ь03МЬ6СЕЬ0АМЬСУР VI ΕΚΑΤΟαννΑΟΑΟΑΓΝΚΟΕαΟΕΓΤΟΕΟΕΗνί ОНСЕНУТЗТУЬТЗТЬАГОКЕОКЬКСЕ СОАЕООУАКМЪЕТНЬООУ8УЕ£.ОЕ11ТЕАМП.5ЫАЕ1СЗУГЬЫХ}ЫЕ1АГАКУГ1366УУ йОЕЗУЕ1Н1РА1ХХ;1А6НУАТТС01Ш1РОАУАНРЬГУНСУПОЗТСГКТЮ41ЬСГР1К МЕМОЕУ1СУАЕОУМК1Ы6РИРЗКГОЕОЬАТАР31УС6131АН5ЬЬУККУМЕАОУНЗНЬ АМЕМММУНМКУ5ПОЕУТКЬЬНОС10РУАА1ОЗЫРА5РТУТРП5ЬРЕООТ5МА1Ь8МЬ0 ОММПМЫУКЮСРТОАКЕСЕМУККСУНОРРУНЫИМНАЕЗУЗНЕСУЬОУКМЪЕЬТЫУЬЕ ΟΙΕΙΕΑΟΕΙ80ΜΟΗΟΟΟΗΗ6ΤΝΝ5ΕθνΑ3Κ8νθΑΑΕΥ35Ε68νΜΕΗΗΗΕΑΟΑΙΑΙΕΝΤ ΗΟεΝΙΕΟΗΕΒΗΚΟΥΟΒΜΟΟΟΜΚΡΙΙΟΑΤΟΕΑΗΗΟΗΙΕΚΟΕΟΚΜΑΕνΟΥΟΗΝΝΚΟΗΗΚΙ. ЦЬСЬЬМТЗСОЕ5О0ТК6НКТТНК1АЕЫУКЕЕЕ30СП0ЕКАМСЫНРМЕММОНЕКАУ1Р ЕЬ015РМЕН1АМР1УКЕЕ0ОЬЕРКААЕЕУЕВУА5ЫНЕНИТКУЗНКЕТ1НаЬРЗЫЫ5ЕО И,РЕЕУЕУРО1.оаТКАР1ЫаССЗООАЕ·
- 90 006254
ЧИСЛО ОСНОВАНИЙ 902 а 1260 с 1202 д 876 г
ОРИДЖИН
1 садсададсЕ ддаЕЕддддЕ дЕЕдадЕсса ддсЕдадЕад ддддсадссс асЕдсЕсЕЕд
61 дЕсссЕдЕдс сЕдсЕддддд сдсссЕдссс ЕдаасЕссад дсадсдддда садддсдадд
121 ЕдссассЕЕа дЕСЕддсЕдд ддаддсддас даЕдаддадЕ даЕддддсад дсаЕдсддсс
181 асЕссаЕссЕ сЕдсаддадс садсадЕасс сддсадсдсд ассддсЕдад ссдсддддсс
241 адсаддЕсЕЕ ссЕсаадссс сасдадссдс сдссдссдсс дсадссаЕдс дссдасадсс
301 Едсаддасдс сЕЕдсЕдадЕ СЕдддсЕсЕд ЕсаЕсдасаЕ ЕЕсаддссЕд саасдЕдсЕд
361 Есааддаддс ссЕдЕсадсЕ дЕдсЕссссс дадЕддааас ЕдЕсЕасасс ЕассЕасЕдд
421 аЕддЕдадЕс ссадсЕддЕс ЕдЕдаддасс ссссасаЕда дсЕдссссад даддддааад
481 Ессдддаддс ЕаЕсаЕсЕсс садаадсддс ЕдддсЕдсаа ЕдддсЕдддс ЕЕСЕсадасс
541 Едссадддаа дсссЕЕддсс аддсЕддЕдд сЕссасЕддс ЕссЕдаЕасс саадЕдсЕдд
601 ЕсаЕдссдсЕ адсддасаад саддсЕдддд ссдЕддсадс ЕдЕсаЕсЕЕд дЕдсасЕдЕд
661 дссадсЕдад ЕдаЕааЕдад дааЕддадсс ЕдсаддсддЕ ддадаадсаЕ асссЕддЕсд
721 сссЕдсддад ддЕдсаддЕс ссдсадсадс дсдддсссад ддаддсЕссс сдадссдЕсс
781 адаасссссс ддаддддасд дсддаадасс адаадддсдд ддсддсдЕас ассдассдсд
841 ассдсаадаЕ ссЕссаасЕд Едсддддаас ЕсЕасдассЕ ддаЕдссЕсЕ ЕсссЕдсадс
901 ЕсааадЕдсЕ ссааЕассЕд садсаддада сссдддсаЕс ссдсЕдсЕдс сЕссЕдсЕдд
961 ЕдЕсддадда сааЕсЕссад СЕЕЕсЕЕдса аддЕсаЕсдд адасааадЕд сЕсддддаад
1021 аддЕсадсЕЕ ЕсссЕЕдаса ддаЕдссЕдд дссаддЕддЕ ддаадасаад аадЕссаЕсс
1081 адсЕдаадда ссЕсассЕсс даддаЕдЕас аасадсЕдса дадсаЕдЕЕд ддсЕдЕдадс
1141 ЕдсаддссаЕ дсЕсЕдЕдЕс ссЕдЕсаЕса дссдддссас ЕдассаддЕд дЕддссЕЕдд
1201 ссЕдсдссЕЕ саасаадсЕа дааддадасЕ Едсссассда сдаддасдад сасдЕдаЕсс
1261 адсасЕдсЕЕ ссасЕасасс адсассдЕдс Есассадсас ссЕддссЕЕс садааддаас
1321 адааасЕсаа дЕдЕдадЕдс саддсЕсЕЕс ЕссаадЕддс ааадаассЕС ЕЕсасссасс
1381 ЕддаЕдасдЕ сЕсЕдЕссЕд сЕссаддада ЕсаЕсасдда ддссадааас сЕсадсаасд
1441 сададаЕсЕд сЕСЕдЕдЕЕс сЕдсЕддаЕс адааЕдадсЕ ддЕддссаад дЕдЕСсдасд
1501 ддддсдЕддЕ ддаЕдаЕдад адсЕаЕдада ЕссдсаЕссс ддссдаЕсад ддсаЕсдсдд
1561 дасасдЕддс дассасдддс садаЕссЕда асассссСда сдсаСасдсс саЕссдсЕЕЕ 1621 ЕСЕассдсдд сдсддасдас адсассддсс Ессдсасдсд саасаЕсеЕс ЕдсЕЕсссса 1681 Есаадаасда даассаддад дЕсаЕсддЕд ЕддссдадсЕ ддЕдаасаад аЕсааЕдддс 1741 саЕддЕЕсад саадЕЕсдас даддассЕдд сдасддссЕЕ сЕссаЕСЕас ЕдсддсаЕса 1801 дсаЕсдссса ЕЕсЕсЕссЕа Еасаааааад ЕдааЕдаддс ЕсадЕаЕсдс адссассЕдд 1861 ссааЕдадаЕ даЕдаЕдЕас сасаЕдаадд ЕСЕссдасда ЕдадЕаЕасс ааасЕЕсЕсс 1921 асдаЕдддаЕ ссадссЕдЕд дсЕдссаЕЕд асЕссааЕЕЕ ЕдсаадЕЕЕс ассЕаЕассс 1981 сЕсдЕЕсссЕ дсссдаддаЕ дасасдЕсса ЕддссаЕссЕ дадсаЕдсЕд саддасаЕда 2041 аЕЕЕсаЕсаа саасЕасааа аЕЕдасЕдсс сдасссЕддс ссддЕЕсЕдЕ ЕСдаСддЕда 2101 адаадддсЕа ссдддаЕссс сссЕассаса асЕддаЕдса сдссЕЕЕЕсЕ дЕсЕсссасЕ 2161 ЕСЕдсЕассЕ дсЕсЕасаад аассЕддадс ЕсассаасЕа ссЕсдаддас аЕсдадаЕсЕ 2221 ЕЕдссЕЕдЕЕ ЕаЕЕЕссЕдс аЕдЕдЕсаЕд ассЕддасса сададдсаса аасаасЕСЕЕ 2281 ЕссаддЕддс сЕсдаааЕсЕ дЕдсЕддсЕд сдсЕсЕасад сЕсЕдадддс ЕссдЕсаЕдд 2341 ададдсасса сЕЕЕдсЕсад дссаЕсдсса ЕссЕсаасас ссасддсЕдс аасаЕсЕЕЕд 2401 аЕсаЕЕЕсЕс ссддааддас ЕаЕсадсдса ЕдсЕддаЕсЕ даЕдсдддас аЕсаЕсЕЕдд 2461 ссасадассЕ ддсссассаЕ с£ссдса£с£ ЕсааддассЕ ссадаадаЕд дсЕдаддЕдд 2521 дсЕасдассд ааасаасаад садсассаса дасЕЕсЕссЕ сЕдссЕссЕс аЕдассЕссЕ 2581 дЕдассЕсЕс Едассадасс аадддсЕдда адасЕасдад ааадаЕсдсд дадсЕдаЕсЕ 2641 асааадааЕЕ сЕЕсЕсссад ддадассЕдд адааддссаЕ дддсаасадд ссдаЕддада 2701 ЕдаЕддассд ддадааддсс ЕаЕаЕсссЕд адсЕдсаааЕ садсЕЕсаЕд дадсасаЕЕд 2761 сааЕдсссаЕ сЕасаадсЕд ЕЕдсаддасс ЕдЕЕссссаа адсддсадад сЕдЕасдадс 2821 дсдЕддссЕс саассдЕдад саседдасса аддпдессса саадсссасс аЕссдсддсс 2881 ЕсссаадЕаа саасЕсдсЕд сасЕЕссЕдд аЕдаддадЕа сдаддЕдссЕ даЕСЕддаЕд 2941 дсасЕадддс ссссаЕсааЕ ддсЕдсЕдса дссЕЕдаЕдс ЕдадЕдаЕсс ссЕссаддас 3001 асЕЕсссЕдс ссаддссасс ссссасадсс ссссасЕддс сЕддссадаЕ дсасЕдддаа 3061 сададссасд ддЕссЕдддЕ сссадассад дасЕЕссЕдЕ дЕдасссЕдд асаадЕасЕа
- 91 006254
3121 ссЕЕсседдд ссссадссес сссдессдСа
3181 дасСХСдйаа еседсспссс сдададсаса
3241
3301
ЕдсассЕсЕд асддсссссс ассасассгх сссдссссае
3361
Ссссассссь
ЕдддссСсса
3421 ададЕдсддс ассссддааа
3481 дааддссссс
3541 ддссссадда
3601
3661
3721
3781 дадаадсадд аЕдааЕдадс ЕсЕдддссаа дссЕааааЕа
Едаддассас адаадсЕддс аЕдддаЕЕда садссаЕдсЕ асадддадсд дссссайддс
3841 сссСааддса садададсса
3901 ссЕдадсссс ссасссассс
3961
4021
4081
4141 сЕсЕЕсаадд ЕЕдддЕсадс ддЕдддддад ЕсЕаддасЕс ссасасссас ссдссасЕдд ддддЕссасс ЕдЕдсаасЕд
4201 асааассьаь ессйеессас
4. ΝΡΥ
ЛОКУС
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ДОСТУП яю
ВЕРСИЯ
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА
ИСТОЧНИК
ОРГАНИЗМ
ССЫЛКА
АВТОРЫ
НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ
ΜΕϋίΙΝΕ
КОММЕНТАРИИ
ПРИЗНАКИ зоигсе
ΠΤΗΝΑ депе
51д_рерС1бе сиз таС_рерС16е
ЧИСЛО ОСНОВАНИЙ ОРИДЖИН ддсаадЬссх ссссдсссса ддаЕссЕсаС садСссСЕад сасйагассд сададдддса сдддсаддад ссссссЕдсс ддСаадасаа
Сссдсддадь асссСдадСд сгдсадссад ссдедссссд
СССССсЕСЕЕ
ЕдссЕЕассЕ
ЕсдЕаЕасдд сааааааааа саасддаадс ддддсдасса Есссаадсса ссадаЕсЕЕЕ ддааддддаа ЕЕсЕдЕддда аЕддЕдддаЕ дсссадйдсс ддаЕссссдс ЕдЕдЕдасдс ЕссаЕдсЕсЕ сссадсадад ссссададдс
ЕдададассЕ дддсЕЕддда ЕЕСсЕссдЕЕ ссссдадссд ссссдедддс аааааааааа аадасЕЕсса аЕдадсадед ЕЕСЕЕЕдЕсЕ дсЕССЕЕЕСС ддсдадасаЕ ддасЕадааа ЕдддассЕдд ссдсададад асСдддадас
ЕдддсдадЕс аадаЕссаЕЕ дсЕаЕддааЕ ссссЕдадЕд ддссссадсс дассссаеад ссагеседсд сссьсадада
СдассдсЕСД
1995 сбз.
ассЕсасдда ддсссЕасЕс дадсадсгсд сЕЕЕдаддас сЕдадЕдадс садссдсддс дддаСасадд дддсссЕддд аддсссаддЕ ессссссссд сеадассаас дЕЕЕссдсаа
ЕЕссссСЕдд сддсадсдсй дссдддасЕс
ЕдсдссдЕдд даедсдсссс дЕасайдада нимыру 551 п.о. μρηκ ρκι 07 января человеческая мРНК нейропептида Υ (ΝΡΥ), полная К01911 д189273 К01911.1 61:189273 нейропептид Υ человеческая феохромоцитома, кднк - мРНК, клон ното зартепз Еикагуота; метагоа; скогдага; УегтеЬгата; МаттаПа; ЕиЕкегта; Рттагез; СаГаггМпт; ноппптбае; Ното (основания 1-551) мтпгк, С.0-, В1оот, 5.К., РоТак, З.м. апс! Ρίχοη, З.Е.
С1оптпд, скагасгегтхагтоп апб ΟΝΑ зечиепсе οί а китап сОЫА епсосНпд пеигорергтде гугозтпе
Ргос. ЫаГ1. Асад. 5ст. и5А 81 (14), 4577-4581 (1984) 84272678 нейропептид Υ (ΝΡΥ) является одним из наиболее обильных пептидов в нервной системе млекопитающих, и его широкое распространение позволяет предположить роль нейромедиатора или -модулятора. ΝΡΥ также обнаружен в некоторых хромаффинных клетках мозгового вещества надпочечников.
ЬосаС1оп/0иа11£1егз
1..551 /огдап1зт=’Ното заргепз’ /<1Ь_хге£= · Ьахоп: 9606 · /С1ззие_суре=·рЪеосЪготосуСота /тар=7рСег-ч22' <1.-551 /депе=МРУ’ /посе=С00-119-456
1.. 551 /депе=-ЫРУ
87.. 170 /депег-ЫРУ· /поСе=‘С00-119-456 Θ7..380 /депег'ЫРУ’ /собоп_зсагг=1 /йЬ_хге£=ΟϋΒ:С00-119-456’ /ргодисС=пеигорерС1де У /ρΓΟΟείη_ίά=·ААА59944.1 /<1Ь_хге£= · РЮ: д189274 · /с1Ь_хге£=С1:189274 / Сгапз1аС1оп= •МЬСЫКНЬСЬЗСЬТЬАЬЗЬЬУСЬСАЬАЕАУРЗКРСЫРвЕОАРАЕР
МАЯУУЗАЬННУ1ЛЫТК0ПУСКНЗЗРЕТЫЗПЬЕМКЕЗТЕКУРНТНЬЕОРАМН·
171.. 278 /депег'ИРУ /поСе=С00-119-456’ /ргодис£='пеигорерС1де
ΡΝΡΥ3-75 а
п.о.
131
171 с 129 д по восходящей от сайта
120 ΐ кза!
- 92 006254 ассссаЕссд ссддсссЕса ссссЕсддад асдсссдссс дасадсаЕад ЕасЕЕдссдс ссадссасдс ссдсдсдсса дссассаЕдс ЕаддЕаасаа дсдасЕдддд сЕдгссддас 121 гдасссЕсдс ссЕдЕсссЕд сЕсдЕдЕдсс ЕдддЕдсдсЕ ддссдаддсд ЕассссЕсса 181 адссддасаа сссдддсдад дасдсассад сддаддасаЕ ддссадаЕас ЕасЕсддсдс 241 ЕдсдасасЕа саЕсаассЕс аЕсассаддс ададагаСдд аааасдаЕсс адсссадада 301 сасЕдаГЕЕс адассЕсЕСд агдададааа дсасадаааа ЕдЕЕсссада асЕсддсЕЕд 361 аадасссЕдс аагдЕддЕда ЕдддаааЕда дасЕЕдсЕсЕ сЕддссЕЕЕЕ ссЕаЕЕЕЕса 421 дсссаЕаЕЕЕ саЕсдЕдЕаа аасдадааЕс сасссаЕссЕ ассааЕдсаЕ дсадссасЕд 481 ЕдсЕдааЕЕс ЕдсааЕдЕЕЕ ЕссЕЕЕдЕса ЕсаЕЕдЕаЕа ЕаЕдЕдЕдЕЕ ЕаааЕааадг 541 аЕсаЕдсаЕЕ с
5. РЕЦЕПТОР ΝΡΥ Υ1
ЛОКУС ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДОСТУП N10
ВЕРСИЯ
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА
ИСТОЧНИК
ОРГАНИЗМ
ССЫЛКА
АВТОРЫ НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ ПРИЗНАКИ зоигсе
А26481 2624 п.о. мРНК РАТ 17 октября 1995 кднк человеческого рецептора νρυ Υ1
А26481 д1247452
А26481.1 С1:1247452 человек
Ното зартепз
Еикагуога; МеЕагоа; СЬогбата; УегсеЬгага; МаттаЪ’а; ЕигЬегта; Ргттасез; СагаггЬтпт; ноггпптсГае; Ното (основания 1-2624)
ΗϋΜΑΝ ΝΕϋΚΟΡΕΡΤΙΟΕ Υ-Υ1 КЕСЕРТОК
Ратепт: ио 9309227-а 3 13-ΜΑΥ-1993
ЬосаЕ1Оп/0иа11£1егз
1..2624 /огдал1зт=Ното заргепз /<ЗЬ_хге£=' сахоп: 9606' СОЗ 152..1306 /соаоп_зсагг=1 /ргодисс=“пеигорерс1де Υ Υ1 гесерСог· /ρΓθΕβίη_ίά=·0ΑΑ01819.1 * /аЬ_хге£=-РЮ:е205126· /с1Ь_хге£='Р1О:д1247453· /0Ь_хге£=-С1:1247453· /<ЗЬ_хге£= ‘ЗЫ135-РН0Т: Р25929 ‘ / Егапз 1 ас ί оп= · МКЗТЬР50УЕННЗУН5ЫГЗЕКМА0ЬЬАРЕИООСНЬРЬАМ1ГТЬА ЬАУСАУ! IЬСУЗСМЬАЫ11 ΙϋΚΟΚΕΜΗΝνΤΝΙ Ы УЫЬЗЕЗОЬЬУА1МСЬРРТЕУУТЬ №НМУРСЕАМСКШРЕУ<Х?У51ТУ51Г5ЕУЬ1АУЕКН0Ь11НРКСИПРЫЫПНАУТ7С1А УТИУЬАУАЗЗЬРГЫУОУМТОЕРРОКУТЕОАУКОКУУСГООЕРЗОЗНКЬЗУТТЬЬЬУЬ 0УГСРЬСЕ1Р1СУГК1У1НЬКЮи4ЫММОКМНОЫКУН55ЕТКК11П:МЬЬ$1УУАР7И7СМ ЬРЬТХГОТУГОИМНОИАТСКНЫЬЬГЬЬСНЬТАМХЗТСУКРТГУСГЕМКМГОКОЬОЕГ ΕΝΓεθΕΚ3ΗΟΟΟΥΕΤΙΑΜ$ΤΜΗΤθν8ΚΤ30ΚΟΑ5ΡνΑΓΚΚΙΝΝΝΟΟΝΕΚΙ·
ЧИСЛО ОСНОВАНИЙ 791 А 479 С : 473 С
ОРИДЖИН
1 аССдССсадС ссаадддаас
61 дддааСаада асаадесдаа
121 аааасааСсС аСаасаасса
181 ааассассса дСссасссСа
241 сдасдассдс сассСдсссс
301 дассассесс ддсдсссесд
361 даСдадаааС дссассааса
421 саСсаСдСдС ссесссссса
481 ддсдаСдсдС аадссдаасс
541 сссддссесс ассдссдсдд
601 ааасаасада сасдсссасд
661 сссдсссссс сСдаСССасс
721 сдсдсасааа дасааасасд
781 ссасассасс ссссссссдд
841 ссасССсаад асасасасас
901 саасаадсас аддсссадсд
961 адсаССсдса дсссдссддс
1021 ссадассасс дссасссдса
878 Т 3 других даадаассса даасаасссс ддсааасдда ССссааСаСС садссдассс дссссдаада аасасассдс ссасссдсес аассаассаа аасдаасСса асаССаСССС сссаддссда ассссссада даадаасдсс садсссссдд сССССдаааа сддссасдас асссассССа дсссССдсСС аСддадсСдС дааасссддс сссдассаса аСсаССССда аасаааадда ссссдассдс даассссссс сссссадасс сдсссдссдс сасссдссса сасассааСд дассассддд сссссддсда ессссдсдса асдсдсссса ассассдсдс ссаССССсСс аасдасасса дссдасаасс аасссСсдад ддсддадасс саддсассде сдсдасссдд дСсссСдсед СддсССсССс аадсаасдас сдасдадссд ссссааааСд саасасССда сдсдссссда ссаассссса ссддасСсСс асаддссдсс сдссдсадса ссссддссса ссссдсссса сасссасссд дессааааад дадааасаас асдасддаса адасдадада ааассаааад аассаасаСс аСдсСдсСсс ссаССдСддС ссссссссае сасссссаас ассдсдсссд ассддаасса ассасаассс дссасссссд сСссдссасс ссасадсаас
- 93 006254
1081 дагасссасс 1141 сссдсадссс 1201 адссасдСсс 1261 сдсасссааа 1321 са^ддЕсссд 1381 едсС-сессса 1441 епссссассд 1501 дддссссссд 1561 сасаасасаа 1621 спппсСдасЬ 1681 адасеадасс 1741 ссесадсдсд 1801 сссдаадсса 1861 сссспъсссс 1921 ааСХСааааа 1981 сссасаддаа 2041 асаададсас 2101 ааС£а£а£СС 2161 сдсссд^саа 2221 аасасаааса 2281 дессассесе 2341 адсадддааа 2401 ас^дсдгдас 2461 саедсьааед 2521 дадааассаг 2581 аСдедСССда
СдСдесаасс ьссньсаась асда&дсаса ааааСсааса дасдасассс аддаасдддд с^ессдеедс дааасадссс адас£СС£аС СсадаадСас адагсадас^ сеасаасаде ЬСсадаад^д ассСПааддд Сдаасааааа Ьдаададада ^ПСададСаа ас^сдаасгд дессссддсс Ьсдсс^есса саааддаадИ аасасасааа ЬЬдеддсдЕс €дсс£аасс( аЬСССааада ССССаааадд ссасасс^па сссдсдассс садаСдСССс асаасдасда дсссааааас сгдааассае аседссасаа сдассадаса ассдсаесса ссдссаесса дссаасадас аасадеасдс дсссдаддсс аддссгЕсас дасасасссс аадсадсссс ссаассеаас а^ддссаада саасаедсас сасадсадсд аасассаадд аассдсадас сса^ааасаа сасдсасссс асаадасаса дсддасаССС сдддсссссд ссддсс^сдд саааасС^сС саасдааааа аадсасаасс ссдаааа^да ссасасесдд сссссдаадс ссддаасдаа асасддесас сдддссаСсс аааадсадса сссдесесс^ ссссссссда СсадсСдсаа ссаасиъсаа ааад^аааСС дассссссае ссдааадасС сссаьаеадс сасаагдсса ассссаеаеа сдсасгд^аа дсааесасда ссссаа^дса СаС^аааасс аасааааасС дасдасдасс гхдаадсаад асссдааасс сдсаасасас е^аадасссс аасааааддс дссгсесдсд аспсссгхаа СадассдддС ссасссса^д СХсаддадсс ддсддсессе сгдас^дсса аГассасдда аассассссд адгасгдсед гссссгхаса сьссдсс^ас дасСдаСССС ааддаа^аСС дсссасСССа адассаседа еьдадсс^са ГХаСасадаГ аадд
Сссададада асдааасаас саадсссадс асссасадсс сссдасеасс сссдссссдс дсдддсссгд аасссасдса адсасхасда сасессдасс асаддсасса дааада^адс деесдсессс сееааа^саа даассдддса дсасссдаса саааСадсса дасСдССсад аасссдсада ааепсссаас сасъесассс. асссдсаеаа асадссдсдс даасеаесгд ааад£а£Сас
- 94 006254
6. РЕЦЕПТОР
ΝΡΥ Υ2
ЛОКУС
Η5υ36269
1200 η.о.
МРНК
ΡΚΙ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДОСТУП
ΝΊΌ
ВЕРСИЯ ноября 1995 мрнк человеческого рецептора нейропептида Υ/пептида ΥΥ Υ2, полная сбз. и36269
С1063633 и36269.1 61:1063633
КЛЮЧЕВЫЕ
СЛОВА источник
ОРГАНИЗМ
ССЫЛКА
АВТОРЫ
НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ
ΜΕϋΙ-ΙΝΕ
ССЫЛКА
АВТОРЫ
НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ
ПРИЗНАКИ зоигсе
Человек
Ното зартепз
ЕикагуоЕа; МеЕагоа; СЬогбаЕа; уеггеЬгага; Матта1та; ЕигНегта; Ргттагез; СагаггМлт; нопппЫае; Ното (основания 1-1200)
Сега!б, с., Иа1кег, м.и., Уаузье, Р.З., не, С., вгалсЬек, Т.А. апб иетпзЬапк, κ.ι_.
Ехргез51оп сТоптпд апб рЬагтасо1одтса) сЬагасгегтгаттоп οί а Питал
Ктрросатра! ηειίΓορερΐίάβ У/рерТ1де ΥΥ Υ2 гесергог зиЬгуре
3. ΒΪΟ1. СЬет. 270 (45), 26758-26761 (1995)
96070760 (основания 1-1200)
СегаТб, С.А.
РтгесЕ ЗиЬттззтоп
ЗиЬттггеб (13-5ЕР-1995) сНпзгоре А. бегаЧб, зупаргзс РЬагтасеи11са1
Согрога11оп, мо)еси1аг В1о1оду, 215 Со11еде коад, Рагатиз, N1 07652, и5А ЬосаЕюп/0иа11£1егз
1..1200 /огдап1зт='Ното зархепз /<ЗЬ_хге£=*Еахоп: 9606
5‘итн /с1опе='ЬЬУ2· /зех= 1па1е· /Е13зие_Еуре=’Ьга1П Ихрросатриз /άεν_5 Еаде=·ади1Е
1. .20
СОЗ
21. .1166 з ·υτκ /поЕе=’ΝΡΥ/ΡΥΎ Υ2 гесерЕог /со<Зоп_зЕаг£=1 /ргобис£=*пеигорерС1де У/рерсгбе ΥΥ Υ2 гесерЕог” /ргоЕе1п_1д=’ ААС502 31.1’ /<ЗЬ_хге£=Р1П:д1063634 /аЬ_хге£=С1:1063634 /Егапз1аЕ1Оп='МСР1САЕАОЕЫ0ТУЕЕМКУЕ0УСР0ТТРКСЕЬУРОРЕРЕЫО5Т
КЫЕУ0УУЫЬАУС311ЬЕСУ1(»15ЬУ1Н¥\ПКККЗМЯТУТ»1РЕ1АМЬАУАОЬЬУМТЬ
СЬРГТЬТ¥ТЬМСЕИКМСРУ1.СНЬУРУА0СЕА\/0У5Т1ТЬТУ1АЬОКНВС1УУНЬЕЗК1 ЗКЯ18РЫ1СЕАИС15АИ.АЗРЬА1ГВЕУЗЫЕ1 ΙΡϋΕΕίνΑΟΤΕΚΗΡΟΕΕΚδΙΥΟΤν Υ8Ε53ΟΕΙΕΥνΕΡΙΛ3ΙΙ5Ε5ΥΤΚΙΝ5ΚΕΚΝΗν3ΡΟΑΑΝϋΗΥΗ0ΚΗΟΚΤΤΚΜΙ.νονννν ГАУЗИЪРЬНАГ0ЬАУО1ОЗС>УЬ0ЬКЕУКЫРТУРН11АМСЗТГАМРШУСМММЗКГУНК АГЬЗАГНСЕОКЬОА1 Η3Εν5νΤΓΚΑΚΚΝΕΕνΗΚΝ5ΟΡΝΟ5ΕΤΕΑΤΝν
1164..1200
ЧИСЛО ОСНОВАНИЙ
292 а 295
299 д 314 ί
ОРИДЖИН саадСддасс
Ζдζасζдааа аζдддζссаа
СаддС.дсада
ЕддаадаааЕ дааддЕддаа саасасдддс сасааасаас ддсζдаζдад аассадасад ЕссЕададдЕ даасζддζсс
121
181
241 сЕдасссЕда
ЕаЕЕддссЕа
ЕддЕдаЕсаа дссададсЕЕ сЕдсЕссаЕс асадаЕадЕа аЕсЕЕдсЕЕд
301
361
421
481
541
601
661
721
781
841
901
961
1021
1081
1141 ссаадсЕдаЕ
ЕдаддЕасаа дЕЕдЕЕсЕса асссаададс аЕдсдсасад дддЕааЕЕдд ЕаассаасЕЕ саасЕссЕЕд ЕЕЕсаЕЕдсс дЕдаЕссаЕд ааЕсЕддсЕд
ЕддсадаЕсЕ дддадЕддаа ЕасаадЕаЕс ассассЕада дсаЕсадЕдс ЕсаЕсссдда ЕСЕаЕддсас ЕЕаЕаЕсаЕЕ сЕдсаааЕда ЕддЕддЕдЕЕ асадссаддЕ ссаЕдЕдсЕс аддсЕЕЕссЕ ссдЕдасаЕЕ сЕЕЕсасада
ЕЕЕддЕдаас ааЕдддЕссЕ сасааЕсасс дадсаадаЕс ссЕдсЕддса сЕЕЕдадаЕЕ ЕдЕСЕаЕадЕ ЕЕссЕасасЕ ссасЕассаЕ
ЕдсддЕсадс ссЕддассЕд сасЕЕЕЕдсс сЕсддссЕЕс сааддсЕааа ддсЕассааЕ асЕсЕдЕдЕс дЕссЕдЕдсс ЕЕдасадЕаа Ессаадсдаа адЕссссЕдд дЕддссЕдЕа СЕЕЕСЕЕССЕ сдсаЕЕЕдда садсдааддс ЕддсЕдссЕс ааддадЕаса ааЕссссЕЕс сдсЕдЕдадс аадаассЕдд дЕсЕааддаа
ЕассдЕЕсас ассЕддЕдсс ЕЕдсссЕдда ЕсадсЕЕссЕ ссаЕсЕЕссд сЕдаааадЕд ЕдЕЕдаЕсЕЕ дЕаааЕЕдаа аааааассас
ЕссаЕдссЕЕ аасЕсаЕсЕЕ
ЕсЕаЕддсЕд адсддЕЕдда аддгсадааа дсЕдЕддЕдЕ
ЕсЕЕассЕаЕ сЕаЕдсссад ссддсасадд даЕЕаЕЕддс ддадЕаЕЕсд дссЕддсдад дЕаЕдЕЕЕЕд даассаЕдЕс сааааЕдсЕд ссадсЕЕдсс сасадЕдЕЕс даЕдаасадс ЕдссаЕЕсас даасадЕддс дааааЕдЕаЕ ассЕЕааЕдд ддссЕддсад ЕдсаЕсдЕсЕ ЕЕддссЕддд сЕдаЕЕдада дадаададса ссЕсЕдддса адЕссЕддад дζдζдζдζдд дЕЕдасаЕЕд сасаЕсаЕсд аасЕасадаа ЕсЕдаддЕдЕ сссааЕдасЕ ддаЕдааЕЕс
- 95 006254
7. РЕЦЕПТОР
ΝΡΥ Υ5
ЛОКУС
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ДОСТУП
ΝΙϋ
ВЕРСИЯ
Η51Ι66275
1370 п.о. МРНК ΡΚΙ 18 октября 1996
МРНК человеческого рецептора нейропептида Υ5 (ΝΡΥΚ5), полная сбз и66275
С1620655
1,66275.1 С1:1620655
КЛЮЧЕВЫЕ
ИСТОЧНИК
СЛОВА
ОРГАНИЗМ
ССЫЛКА
АВТОРЫ
НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ
ΜΕΟίΙΝΕ
ССЫЛКА
АВТОРЫ
НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ
ПРИЗНАКИ воигсе депе
Человек ното зартепз
Еикагуога; меГагоа; Скогбага; уегсеЬгага; Матта!За; ЕигЬегта; Ргтшагез; Сагаггктпт; Ноттптбае; Ното (основания 1-1370)
Ни, Υ., в1оотчит5Г, в.т., согп-Гте!б, 1..1., ОеСагг, ц.в., Р1оге5-йтуегоз, 3.Κ., Ргтебтап, ί., Зтапд, р., 1_еил5-нтддтп5, ί., 5аб1оизкт, Υ., ЗскаеСег, 3., Уе1агдиег, Ν. , апб МсСа1еЬ, Μ.ί.
ТбепгтГтсактоп οί а πόνε! Курочка!апл с пеигорерктбе Υ гесерсог аззостагеб иттк £еебтпд Ьекаутог
3. Вто1. Скет. 271 (42), 26315-26319 (1996)
96421636 (основания 1-1370) ни, Υ., в1оотяит5Г, в.т., согпГтеЗб, ί.3., ОеСагг, 1_.в., Р1огез-ктуегоз, З.К., Егтебтап, 1_. , зтапд, Р., кеитз-нтддтпз, I.., ЗабТоизкт, Υ., БскаеГег, 3., Уе!агдиег, Ν. , апб мсСа1еЬ, м.ь.
От’гесг 5иЬттззтоп
ЗиЬттгсеб (06-А11С-1996) мегаЬо!тс Отзогбег, Вауег Согрогагтоп, 400 могдап капе, иезк науеп, ст 06516, и5А
ЬосаЕюп/0иа11£1егз
1. . 1370 /огдап1зт=-Но1по зар1епз /<1Ь_хге£ = · Еахоп: 9606
18..1355
СЭЗ /депе='МРУН5
18. .1355 /депе=НРУН5· /£ипсСюп=*С рго£е1П-соир1е<3 гесерЕог /содоп_5ЕагЕ=1 /рго<ЗисС=пеигорерЕ1йе Υ5 гесерЕог /ρΓοΕβίη_ίά=·ААС50741.1 · /0Ь_хге£=-Р1О:д1620656· /дЬ_хге£='С1:1620656/ Е гаП5 1 а С ί ОП= ΜΟΕΕΙ.ϋΕΥΎΝΚΤΓ.ΑΤΕΝΝΤΑΑΤΗΝ3ΟΡΡννπΤΟΥΚ33νθΟΟ0ΥΓΙ.
1СЬУТРУЗЫХЗРМСЮ.ЫЕМАЬМКККМ0КТТУМРЫ(ЛЛ.АР5С1ЬУУЬРС5РРТЬТ5У ΕΕΟΟΚΜΡΟΚνΜΟΗΙΜΡΓΜ?σν5νΐ,ν3ΤΕΙΕΙ3ΙΑΐνΒΥΗΜΙΚΗΡΙ3ΝΝΙ/ΓΆΝΗσΥΓΙ.Ι АТУЫТЬСГА1С8РЬРУРН8ЬУЕЬ0ЕТРаЗАИ.53КУ1,СУЕ5ИРЗОЗГК1АРТ15Ы,Г,У 0У1ЬРЬУС1Л’УЗНТ5УСВ815С0ЬЗМКЕМНЬЕЕЫЕМ1Ы1.ТЬНРЗККЗСР0\ЛСЕЗ<38НК НЗУЗР1ККНННЯУЗККТАСУЬРАРЕНРЗОЕМНЗП1ЬРЕЫРСЗУНЗОЬ8338КР1РСУР ТСРЕ1КРЕЕК5ОУНЕ1<НУКВ5УГК1ККК5КЗУРУНХ.Т1Ы1ЛГРАУ8КМРЬНЬРНТЛГГО РЫПИЫЗМННРКЦУУСЮНШСММЗССШРШУСРиЖГСТКАОЬУЗЫНСЬНМчисло ОСНОВАНИЙ ОРИДЖИН
392 а 263 с
257 д
458 ΐ
121
181
241 ссаадсадда сададааЕаа дсадсдсада дсЕЕЕасддд сддкааасСС сСаЕааЕаЕд СасЕдсЕдсс СдасССасад дааЕсЕасЕЕ ссСсаСаддс даЕЕЕададс асЕсддааЕЕ сассссесда аЕЕСЕаасдд аасссддссс
ЕсдасдадЕа сЕдаЕЕЕссс ЕЕдддсЕсЕа сЕсЕсаЕдаа сссссдасас
ССаСаасаад адЕсСдддаЕ СасаЕЕЕдса ааадсдЕааЕ ссьддгсдсд асасСЕдсса дасЕаЕаааа адЕсЕСсЕЕд садаадасса сСдЕЕЕСдсЕ
301
361
421 сассесссас
481
541
601
661
721
781
841
901
961 1021 1081 1141 1201 1261 1321 аЕаЕЕаЕдсс ЕЕдссаЕЕдЕ асддссассе садсдЕЕЕса ддЕаЕЕсасд ЕаЕЕдсЕадЕ дсадаадсас ЕсаасЕЕаас аЕааасддад дсдсдесасс ассссддссс сЕЕдссссда ссдЕсасаад ЕадсаЕссдс асаассЕЕас ЕдаЕдЕссЕд асссадсдсс асЕдасдЕсЕ еееесеесвэ саддкаЕсаЕ ЕСЕдаЕадсЕ садЕСЕЕдЕд ЕдЕЕдадсса ЕсадСаЕаЕЕ аадссдЕдда ЕсЕЕсаЕсса аесадЕддаС дСССддсааа ЕЕЕЕддЕЕЕс аасЕЕЕааЕЕ аксссасасс ЕаакааЕЕЕа сасЕаддЕЕС ЕдссассЕдЕ ааасаЕЕЕдд ЕЕсадсаЕЕд сеасьсаесс
ЕдсЕссадаа ЕдЕаадаадЕ даЕаааассЕ ааЕаааааад СдЕЕадЕЕдд ЕЕсаааЕадд ЕЕдЕсЕЕааЕ ссЕЕаЕасас дЕссЕдсЕдд ЕдЕдсдЕсад аЕдаЕаааас асЕдЕСЕдда даасЕЕсаад
ЕддссаЕссд аЕЕсаЕасад ааЕЕдссЕЕЕ ссдсссЕЕад ЕЕЕдЕсЕЕас ЕдЕаадЕсаЕ ЕЕдЕссааса аадаааасад асЕЕдаадаа Ессааааада дЕдддссЕса ддЕдааасЕс ассаааааас асадаадаад аЕаЕадсаад адассЕЕсЕс аададаасса СЕссадааЕа садсЕсЕсЕЕ саЕссадЕаа дЕЕсаСасса даадааааЕЕ садаЕдЕЕса ЕдааЕСдада адаЕСЕсдаа дЕдЕЕЕЕсЕа садасЕдасс аЕдссасЕас ассЕЕЕЕсса ЕдЕддЕаасЕ саЕЕЕсаадЕ ЕддЕдЕаЕЕд саЕЕЕдЕсаЕ ссааЕЕСЕаЕ аЕдддЕЕЕсЕ ЕааЕаасддд ЕдЕсЕЕсаЕа ЕдЕааЕааЕЕ сЕсасЕдЕЕС дссаЕдСдсс ЕЕааЕаЕсаа асадсааасс есессссссс скдадсадса асЕаЕсЕсЕЕ аеаадсдссс ааЕдадаеда ЕсЕддсадсс аадасадсаЕ сссссадааа ддддссссса дЕаааасдЕЕ асаседаСаС даЕЕЕЕааЕд
ЕЕдЕЕдддса ассааадссд
- 96 006254
8. νΐΡ
ЛОКУС
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ДОСТУП
ЫЮ
ВЕРСИЯ
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА
ИСТОЧНИК
ОРГАНИЗМ νΐΡ 1511 п.о. МРНК ΡΚΙ 19 марта 1999 мРНК вазоактивного интестинального пептида (νιρ) Ното зартепз ΝΜΟΟ3381 д4507896
ΝΜ003381.1 С1:4507896
ССЫЛКА
АВТОРЫ
КаиазНтта, Е., Ро!ак, З.М., апб В1оот,
НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ
ΜΕΟΙ.ΙΝΕ
КОММЕНТАРИИ
ПРИЗНАКИ зоигсе деле
Б1д_рерС1де
СО5 тас_рерС1де шаг_рерС1де ро1уА_51дпа1
Человек
Ното зартепз
ЕикагуоЕа; Мегагоа; СИогдага; уеггеЬгага; Матта!та; Еигйегта; Ргттасез; СагаггКтпт; ноттптбае; Ното (основания 1-1511) оекатаггег, 1.Р., вие1!, с.ы.,
5.я.
УазоасЕтуе тпгезгтпа! рерпде: ехргеззтоп о Г кНе ргоЬогтопе ίη ЬасТеп’а! се! 15
Рерктбез 6 5ирр1 1, 95-102 (1985)
86016352
КЕР5Е0: Данная справочная последовательность была получена из М36634. ΡΚονίδίΟΝΑί КЕР5Е0: Эта запись представляет собой временную справочную последовательность, которая еще не была предметом обзора по человеку. Окончательная рекомендуемая справочная последовательность может некоторым образом отличаться от данной.
ЬосаС1Оп/0иа11£1ег5
1..1511 /огдал1зш=Ното зархепз· /сЗЬ_хге£=· Сахоп: 9606 /тар=·6ς24-ς27· /Е1ззие_суре='ралсгеас1с сшпог
1..1511 /депе=’У1Р /с1Ь_хге£=М1М: 192320· /<1Ь_хге£= ЬосиБЮ :7432 ·
67..129 /ргобис£=·νββοβσϋινβ 1пСевС1па1 рерСхбе
67..579 /депе=У1Р /содоп_зЕагС=1 /ρΓοάιιοί^’νβΒΟβοεχνβ 1псеБСхпа1 ρβρΕιάθ /ρΓο£βίη_ιά=·ΝΡ_003372.1' /аЬ_хге£=-Р1О:д4507897/дЬ_хге£=-С1:4507897/ СГ апз1 а С1 ол= МОТНЫКА01ЛУЬ1.ТИ.5УЬЕ50Т5АИРЬУНАР5АЬНЬСОН1 РЕЕ САЫЕРООУЗЬКЕОХПМЬОЫАЬАЕМОТРУУПУЗНМАЯНАПаУЕТЗОГЗКЬЬСОЕЕАККУ ЬЕЗЬМСККУ55Ы15Е0РУРУКННЗОАУЕТО1Л'ТКЬНК0МАУККУ1Л31 ЬЫСКНЗЗЕСЕ ЗРОЕРЕЕЬЕК·
307..387 /ргобисС=*νΒβοβσεινε 1пСезс.1па1 рерсхбе
439..522 /ргодисС=νθΕοβοεινθ 1псезс1па1 рерС1де”
1326..1331
ЧИСЛО ОСНОВАНИЙ
541 А 255 С 276 С 439 Т
ОРИДЖИН
121
181
241
301
361
421
481
541
601
661
721
781
841
901
961 1021 1081 1141 1201 1261 1321 1381 1441 ддЕсадсЕсс асадаааЕдд сЕсЕЕсЕсас дасадаасас дасаЕдЕЕдс дсеаддсагд дссааааадЕ ссЕдЕассад ааасаааЕдд ддадааЕсЕс адсЕдаЕдас ЕЕадаЕЕсса сдгдссдсда ааЕадЕаЕЕЕ дсЕдЕаСаЕс ааЕЕаЕаЕда дадЕдЕасЕЕ Еаадсадасд аЕааааадас ддсаассЕЕЕ аддсЕссссс ЕЕСССЕЕЕСЕ ЕсааЕааЕаа СЕсЕдЕдааа дададааааЕ аааасааЕсс асассадааа адасЕЕсддс ссСЕЕдаддд ааааЕдсаЕЕ сЕдаЕддадЕ ассЕЕдадЕс ЕсааасдЕса сЕдЕааадаа ссдасЕЕЕсс аасЕЕсссад саЕаадЕааЕ аЕдЕЕдЕдаЕ дададЕЕсЕа сЕЕЕсЕааса дасдЕЕЕЕЕд аасЕаЕЕсад дааЕдсЕдсд аЕЕСЕЕссаа аЕЕЕЕЕааЕд сЕдаЕадЕсЕ дсЕЕдЕдЕЕа аЕаЕСЕСЕдс ЕасаЕЕЕЕдд ааадассЕЕд ддаасддсса Еааддсссад аЕддссЕСЕЕ адсаааЕдаа адсЕдааааЕ ЕЕЕсассадЕ ЕСЕЕаЕддда сЕсадаЕдса аЕаЕЕЕдаас адаададЕЕа ЕдааЕЕсЕЕд Есаадаааас дЕаЕЕСЕадс ааЕЕЕЕдЕсЕ ааааааЕаЕа даададЕадЕ дададЕадаа ЕЕаааЕааас ааадаЕЕЕЕс дЕдЕЕЕЕааа ЕЕсадЕЕаад адЕаЕдЕдЕа саЕааЕдасЕ адасасаасЕ сЕЕаЕдаЕЕд дсЕссддддд сЕссЕЕдЕдс Еасадддсас ссЕдаЕсаад дасасасссЕ дасЕЕсадЕа ааасдЕдЕЕа дЕСЕЕсасЕд ЕсааЕЕсЕда даааааЕдаЕ ааддааааЕд аасЕЕсааЕа ЕааЕдЕааЕа ЕЕаасЕсаЕа ЕЕЕЕааЕдаЕ ааЕададсаа садаЕааЕса сЕсааааЕдЕ адааааЕаЕЕ аааЕСЕсааа дадаасдасс аааЕдЕдаад садааЕаЕЕд аЕЕЕЕЕссаа садаЕааааа адсасдасЕд ЕссЕдасЕсЕ СЕЕСЕдсЕСЕ ЕСЕсаЕЕааа аЕЕаЕдаЕдЕ аасссЕЕддд дсадЕаасаЕ асаасЕаЕас аЕддааадад дааааадасс аЕасдсааса Ессааассаа ассдЕдаадЕ аааадссЕдс аадгаасдсЕ ааЕЕдаЕдЕд дЕдЕдЕсЕаа сЕаадаЕадЕ аЕдЕдЕЕЕсс ЕЕЕддаЕЕдс ссЕдсЕсссд Едаасдааас сЕЕЕддЕсаЕ ааЕааЕЕЕЕа аааааааааа ддсдададдс ЕсЕсадЕдЕд саддЕЕдддЕ адаадасаЕЕ аЕссадаааЕ ЕСааСЕЕЕСЕ сЕсадаадас ссдссЕЕада дадсадЕдад ЕЕЕддадсаа ЕааЕЕаааЕЕ аЕаааааЕаЕ СЕасаЕЕдЕа ааЕЕЕсаЕаЕ аддЕЕааЕсс ЕЕЕаЕЕЕаЕа аЕЕЕдаасдЕ аасааЕдаад аЕаЕЕЕЕаЕа ЕааЕсассаа асасЕдааас асЕсадЕЕдЕ аЕдадсЕЕсс адаааЕсааа аааааааааа
1501 аааааааааа а
- 97 006254
9. РЕЦЕПТОР
УРАС1
ЛОКУС
1511 П.о.
МРНК
ΡΚΙ марта 1999
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДОСТУП N10
ВЕРСИЯ
VIР мрнк вазоактивного интестинального пептида (νΐΡ) Ното зартепз ΝΜ_ΟΟ3381 д4507896
ΝΜ_003381.1 01:4507896
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА источник
ОРГАНИЗМ
ССЫЛКА
АВТОРЫ
НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ
ΜΕΟίΙΝΕ
КОММЕНТАРИИ
Человек
Ното зарзепз
ЕикагуоЕа; мегагоа; Сбогбага; УегЕеЬгага; маттаПа; ЕиЕЬегта; Ргттагез; СагаггЬтпт; ноттт’бае; Ното (основания 1-1511)
Оеьатаггег, Э.Е., ВиеП, Ο.Ν., КаиазЫта, Е., Ро1ак, З.М., апб В1оот, 5.К.
Уазоасгтуе 1пге5Гтпа1 рергтбе: ехргеззтоп о Г гЬе ргокогтопе τη ЬасЕегза1 сеПз
Рергзбез 6 5ирр1 1, 95-102 (1985)
86016352
КЕР5Е0: Данная справочная последовательность была получена из М36634. ΡΚΟνίδΙΟΝΑί ВЕР5Е0: Эта запись представляет собой временную справочную последовательность, которая еще не была предметом обзора по человеку. Окончательная рекомендуемая справочная последовательность может некоторым образом отличаться от данной.
ПРИЗНАКИ зоигсе
ЬосаЕюп/0иа11 £1егз
1..1511 /огдап1зт=’Ното заргепз /<ЗЬ_хге£= · сахоп: 9606 · /тар= *6д24-д27' депе /Е13зие_Еуре=рапсгеаЕ1С Еитог
1..1511
Е1д_рерС1де
СйЗ /депе=У1Р· /<ЗЬ_хге£= ΜΙΜ -192320' /<1Ь_хге£=' ЬосизЮ: 74 32'
67.. 129 /ргодисЕ='νβΒοβοΕινβ 1ПЕезЕ1па1 рерЕкЗе'
67.. 579 /депе='У1Р' /содоп_зЕагЕ=1 /ргобисЕ='νβΒοβσΕινε 1псезС1па1 рерСкЗе /ргосе1п_1б=ΝΡ_003372 1' /сЗЬ_хге£=' РЮ: д4507897 /<ЗЬ_хге£= С1: 4 507897' / Е гапз 1 а Е1 ОП= ' МПТНМКА0ЬЬУЪЬТЬЬ2УЬР50Т5АИРЬУКАР5АЬНЬ0ПК1РРЕ САМЕРО0У5ЬК£О1ПМЬ0МАЬАЕГГОТРУУОУ5КЦАЯНАХ)СУГТ5ОР5КСЬСаЬ5АККУ ЕЕ5ЬМСКИУ55Ш5ЕПРУРУККН5ОАУЕТОГ™ТПЬКК0МАУККУЬМ51ЬМСКК55ЕСЕ шаЕ_рерЕ10е
1лас_рерС1де ро1уА_31дпа1
ВРОРРЕЕЬЕК'
307..387 /ргодисЕ=’уазоасЕ1уе 1ПЕезЕ1па1 рерЕхбе
439..522 /ргобисЕ»·νββοβοεινβ 1псезЕ1па1 рерЕхде'
1326..1331
ЧИСЛО ОСНОВАНИЙ ОРИДЖИН
541
255 С
276 С
439 Т
121 ддЕсадсссс асадаааСдд сЕсЕЕсЕсас аааасаассс ддаасддсса
181
241 дасадааЕас дасаЕдЕЕдс
301 асассадааа адасЕЕсддс ссЕЕЕдаддд аааасдеасе сЕдаЕддадЕ
Еааддсссад аЕддссЕсЕЕ
361
421
481
541
601
661
721
781
841
901
961
1021
1081
1141
1201
1261
1321
1381
1441 дсЕссддддд сгссЕЕдЕдс
Еасадддсас ссЕдаЕсаад дасасасссЕ дасЕЕсадЕа ааасдсдсса адсасдасЕд ЕссЕдасЕсЕ сЕЕсЕдсЕсЕ ЕЕЕсаЕЕааа адсаааЕдаа адсЕдааааЕ есссассаде ссЕЕаЕддда сЕсадаЕдса дЕсЕЕсасЕд аЕаЕЕЕдаас ЕсааЕЕсЕда адаададЕЕа даааааЕдаЕ ЕдааЕЕсЕЕд ааддааааЕд Есаадаааас аасЕЕсааЕа аЕЕаЕдаЕдЕ аасЕСЕЕддд дсадЕаасаЕ асаасЕаЕас асддааадад дааааадасс асасдсааса
Ессааассаа аЕаааааЕаЕ ддсдададдс СсссадСдСд саддЕЕдддЕ адаадасаЕЕ аЕссадаааЕ ЕсаасЕЕЕсЕ сСсадаадас ссдссЕЕада дадсадЕдад ЕЕЕддадсаа ЕааЕЕаааЕЕ дссаддсаЕд дссааааадЕ ассЕЕдадЕс ссЕдЕассад ЕсааасдЕса ааасаааЕдд сЕдЕааадаа ддадааЕсЕс ссдасЕЕЕсс адсЕдаЕдас аасЕЕсссад ЕЕадаЕЕсЕа саЕаадЕааЕ
ЕдЕдЕЕдЕда аЕдЕЕдЕдаЕ дЕаЕЕсЕадс ЕааЕдЕааЕа асЕдЕдаадЕ ЕЕасаЕЕдЕа ааЕадЕаЕЕЕ дададЕЕсЕа ааЕЕЕЕдЕсЕ ЕЕаасЕсаЕа аааадссЕдс ааЕЕЕсаЕаЕ дсЕдЕаЕаЕс сЕЕЕсЕааса ааааааЕаЕа ЕЕЕЕааЕдаЕ аадЕааЕдсЕ аддЕЕааЕсс ааЕЕаЕаЕда дасдЕЕЕЕЕд даададЕадЕ аасададсаа ааЕЕдаЕдЕд ЕЕЕаЕЕЕаЕа дадЕдЕасЕЕ аасЕаЕЕсад дададЕадаа садаЕааЕса дЕдедЕсЕаа аЕЕЕдааЕдЕ ЕаадсадаЕд дааЕдсЕдЕд ЕЕаааЕааас сЕсааааЕдЕ сЕаадаЕадЕ аасааЕдаад аЕааааадас аЕЕсЕЕссаа ааадаЕЕЕЕс адааааЕаЕЕ аЕдЕдЕЕЕсс аЕаЕЕЕЕаЕа ддсаассЕЕЕ аЕЕЕЕЕааЕд дЕдЕЕЕЕааа аааЕсЕсааа ЕЕЕддаЕЕдс ЕааЕсассаа аддсЕсЕсЕс сЕдаЕадЕсС ЕЕсадСЕаад дадаасдасс сссдсЕЕСЕд асасЕдааас еесссееесе дсЕЕдЕдЕЕа адЕаЕдЕдЕа аааЕдЕдаад ЕдааЕдааас асЕсадЕЕдЕ ЕсааЕааЕаа аЕаЕЕЕЕЕдс саЕааЕдасЕ садааЕаЕЕд сЕЕЕддЕсаЕ аЕдадсЕЕсс ЕЕсЕдЕдааа ЕасаЕЕЕЕдд адасасаасЕ аЕЕЕЕЕсеаа ааЕааЕЕЕЕа адаааЕсааа дададааааЕ ааадассЕЕд сЕЕаЕдаЕЕд садаЕааааа аааааааааа аааааааааа аааааааааа а
1501
- 98 006254
10. РЕЦЕПТОР
УРАС2
ЛОКУС
ОПРЕДЕЛЕНИЕ нимнувр
ДОСТУП
N10
ВЕРСИЯ
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА
ИСТОЧНИК
ОРГАНИЗМ
ССЫЛКА АВТОРЫ
НАЗВАНИЕ
ЖУРНАЛ
ΜΕΟίΙΝΕ
ПРИЗНАКИ зоигсе
51д_рерС1де
СйЗ
СЙЗ хелодермин-предпочитагадий рецептор
УеггеЬгаЕа; Матта1та; ЕиЕКета; ноттптйае; Ното οί а Питал VIр (1994) са11есЗ таС_рерС1де
1640 п.о. мрнк РН1 16 февраля 1995 мрнк человеческого хелодермин-предпочитакхдего рецептора νΐΡ (рецептор У1р2/расар), полная 136566 д550477
1.36566.1 61:550477 рецептор расар; рецептор νΐΡ; кднк - мрнк ното Бартелз ното Бартелз ЕикагуоЕа; Мегагоа; сЬогйага;
Ргттагез; СаЕаггЬтпт (основания 1-1640) БуоЬойа, м., тазселоу, м., Уап Натре!ЬегдЬ, 3., Сооззелз, з.р., Ое Ыее-Р, Ρ., ЫаеТЬгоеск, м., апс1 яоЬЬегесЬг, Р. Мо1еси1аг сТоптпд апй £ипсЕтопа1 сЬагасгегтгаЕтоп гесерЕог (тот 5иР-т1 ЧутрЬоЫазЕз ВтосНет. ВторЬуз. Вез. Соттип. 205 (3), 1617-1624 95110300
Ёосас1оп/0иа11£1егз
1.. 1640 /огдал1зт=Ното зархепз* /дЬ_хге£='Еахоп:9606' /се11_Ипе=5иР Т1 1утрНоЫазЕ· /σ1οπβ_11Π=·1βπκ3β ΖΑΡ II
163.. 231 /поЕе=’рисаЕ1Уе; рисаЕХУе
163.. 1479 /по£е=Питал VIР2 гесерЕог иаз ргеУ1оиз1у •Ье1одети.п-рге£егг1пд νΐΡ гесерЕог'; ЕгалететЬгале Зотахлз аге 1осаЕеб а£ ροβίΕίοπβ: 637-696; 772-844; 880-948; 1003-1071; 1147-1209; 1243-1302.; ΡοΕβηΕΐβΙ д1усозу1а£хоп зхЕез аге 1осасеб а£ -.334-336; 424-426; 436-438.
/содоп_зЕагЕ=1 /£ипсЕхоп='У1Р апс1 РАСАР гесерЕог /ргоЕехп_хд=’ААС37569.1 · /<аЬ_хге£ = -РЮ:д550478· /<ЗЬ_хге£= ΌΙ: 550478· / Егалв1аЕ1ОП= •МНТЬЬРРАЬЬТСИиЛРУ№1НРЕСКГНЬЕЮЕЕЕТКСТЕЦ(Н8 СгТЕКНКАС5<ЗУТОЫ1ТСИНРАЫУСЕТУТУРСРКУГ5МЕУ5КАСЫ15КЫСТ£ПСИ5ЕТГ ΡηΡνΟΑΟΟΥδΟΡΕηΕδΚΧΤΕΥΙβνΚΑΙΥΤΙΛΥδνδΙΛδΙΛΤΟδΙΙΙΧΧΠΙΚΙ.ΗΟΤΗΝΥ 1НШЬЕЬ5Г1ЪНА15У1.УКППУЕУ255СТЬНСРО0РЗЗИУССКЬЗЬУЕи!ТС1МАМРР МЬЬУЕСЬУЬНТЬЬУАМЬРРНЯСР1ЛУЬЬ1СНСЬРТУС1САИТААНЬУЬЕГ)ТССИ1ЛТГО ΗδνΡΝΜνίΚΙ Р1Ы δϊ I νΝΓνί,ΕΙ δΐ ни ЬЬОКЬТВРПУСОГООВОУККЬАКВТЬЬЫ РЬЕСУНУМУЕАУЕР1615ВКУ01ЕЕЕЬСЕСЗЕОСЬУУАУЬУСЕЬ№ЕУОСЕЬКНКНН2 Η0ΡΤΡδΑδΙΟΥΚν0σδδΕδΗΝ<3δΕ0ΑΕ0ΕΗΗΑδΗΑ0δΓΙΛ}ΤΕΤδνΐ·
232.. 1476 /£илсЕхоп=У1Р алд РАСАР гесерЕог
ЧИСЛО ОСНОВАНИЙ
315
512 С
461 С 352 Т
ОРИДЖИН сдддасдадд ссссдсдсас дддсддсссс ссдсссссдд сдсдсссддд сссаЕдсЕдд
121
181
241 аддсддсддд сссдсдсЕдс ЕЕЕсассЕдд сдссдддсдд
ЕдассЕдсЕд аааЕасадда
301 дааааасаса
361
421 дЕдддадада ддааасасаа аадссЕдсад ссдЕсасддс дсааааассд
481
541 дасдсссдсд ааддссаЕЕЕ дссасадсда асасссЕддд
601
661 аСЕссдсдсс седссссеса
СсСЕсаддаа
ЕссЕдададс
721
781 ссЕддсасдс дЕссссссдс сдсассдссс адсасЕдсас
841 сЕссасассс
901 аЕсддасддд ссссддсддс дссЕссссас
961
1021 даадасассд ссдаЕСЕЕаа дссдссддда
Ессссассас
1081
1141
1201 сЕдсадаадс дссаадссса ЕЕЕсссаЕса
ЕаасаЕсссс сссссддсас дседсссдсс ддаадаааса сддсдсссдд дссссдссса СасдадСдас ддсссдаддЕ ссЕаддасдд дсЕдсЕдссЕ адаасдссда дЕсЕсаааса дссЕдссааЕ
1261
1321
1381 садддсссдд аадсдаааас ддсЕсссссс
1441 дсссадсссс
1501
1561
1621 дсддсдддад адаЕдсссда ссассааасс дсдсЕсддсЕ асадсЕдсдд аддсддсдда асссддддда дсЕдадсЕсд ддаЕдсддас сссдЕдааса дсаЕЕсассс ааасдЕасад адсЕЕсЕдад дасаасаЕса сдЕдсЕддсд ааадсссЕса дсааСЕЕЕЕа ддаЕддЕсад адасдЕЕссс сссддаддас дададсаада есасдЕЕЕЕа ссасадЕдсс ЕсЕссдаедС сЕсЕЕдсаас дсЕдсассдс ассаддаасс асаЕссассЕ саесесадсд ссддссаадд асдасдсссЕ сдассадсса сссЕсссддд сдддсЕдсаа сасддссаас сссссссддс сдсгддсдда сасдсссссс сссадааддс дсЕЕссЕддс сдЕсСдсаЕс ддсдсасдда ссдсддссад сасааасдас сасадсдсдс ссСддСдддС сдссааСЕЕЕ дсссссссса ЕЕадЕаЕЕаС адасдссддс ддсаасдасс адЕСЕсадЕа еассссдсед сссддсдссс асеасаеддЕ сдсЕссСдсс дсаЕсЕсссс саааСассад аЕасЕдсЕЕд адсЕдЕдссЕ сддсддссдс сссссассдс сссссдааса дсдаддсдса ддсдаадссд дедсссдасс ссдЕссдсда дссдддаССа ЕсЕсссасаа сддсЕсддад ддсдссссдс адЕЕссассд Ссссдсааас ддадассЕсд дссасссадс сссассссЕд дсссасддгс сддддсЕЕсс дсддддссда дасдссддсЕ дсассдЕдЕс дддсаддсса дддсддсссс дасЕссдсса ссасасссдд садсааадса адассссдсс ЕаЕЕсЕддЕд аддаадсаЕа даассЕдЕЕс сЕассссадс дсЕдадссЕд ддддсссгас ссассссссд дссссассса сасасдааса асдаассссд саададдссд дсссдссдсд сдддЕсдЕЕс дсдсдадссд садддЕссдс сдсдссссда сссдссддас сссссссссс адссддссдг

Claims (35)

1. Применение фармацевтической композиции, содержащей ингибитор нейропептида Υ (ИАРУ), способный потенцировать циклический аденозин-3',5'-монофосфат (цАМФ) в гениталиях женщины, страдающей женской сексуальной дисфункцией (ЖСД), и возможно фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент, в качестве средства для лечения ЖСД.
2. Применение по п.1, где указанный Η:ΝΈΥ способен опосредовать генитальную (например вагинальную или клиторную) вазорелаксацию.
3. Применение по п.1 или 2, где композиция находится в форме для перорального введения.
4. Применение по любому из пп.1-3, где ЖСД представляет собой расстройство полового возбуждения у женщины (РПВЖ).
5. Применение по любому из пп.1-4, где указанный цАМФ представляет собой эндогенный цАМФ, причем указанный эндогенный цАМФ является результатом половой стимуляции (полового возбуждения).
6. Применение по любому из пп.1-5, где Η:ΝΈΥ оказывает косвенное потенцирующее воздействие на цАМФ.
7. Применение по п.6, где Η:ΝΈΥ воздействует на естественный и естественно локализованный вазоактивный интестинальный пептид (УГР).
8. Применение по любому из пп.1-7, где композиция применима до или во время половой стимуляции.
9. Способ диагностики ЖСД у женщины, при котором определяют, содержит ли образец, взятый из гениталий женщины или их секрета, ΝΓΥ, который оказывает прямое или косвенное воздействие на уровень или активность цАМФ в гениталиях этой женщины, и присутствует ли он в количестве, которое может вызывать ЖСД, и который может быть модулирован для достижения благоприятного эффекта посредством использования Η:ΝΈΥ, который лечит ЖСД.
10. Способ по п.9, где ЖСД представляет собой РПВЖ.
11. Диагностический набор для диагностики ЖСД у женщины, содержащий средства для обнаружения ΝΓΥ в образце, взятом из гениталий женщины или их секрета, и определения количества указанного ΝΈΥ, средства для определения уровня или активности цАМФ и средства для определения достижения благоприятного эффекта посредством использования Η:ΝΈΥ, который лечит ЖСД.
12. Набор по п.11, где ЖСД представляет собой РПВЖ.
13. Применение животной модели, включающей в себя анестезированную самку животного вместе со средствами для измерения изменений генитального кровотока у указанного животного после стимуляции его тазового нерва и средствами для стимуляции тазового нерва, для идентификации Η:ΝΈΥ, способного лечить ЖСД.
14. Применение по п.13, где ЖСД представляет собой РПВЖ.
15. Применение по любому из пп.13-14, где указанные средства для измерения изменений генитального кровотока являются средствами для измерения изменений вагинального или клиторного кровотока.
16. Применение по любому из пп.13-15, где указанный Η:ΝΈΥ способен опосредовать генитальную (например вагинальную или клиторную) вазорелаксацию.
17. Применение по любому из пп.15-16, где Η:ΝΈΥ применим до или во время половой стимуляции.
18. Способ идентификации Η:ΝΈΥ, который может лечить ЖСД у женщины путем введения указанного Η:ΝΈΥ, при котором указанный Η:Ν₽Υ вводят животной модели, как она определена в любом из пп.13-17, и измеряют уровень и/или активность цАМФ и/или кровоток в гениталиях указанного животного после введения указанного Η:ΝΈΥ, и если указанные уровень или активность и/или кровоток увеличиваются после введения указанного Η:ΝΈΥ, идентифицируют его как Η:ΝΈΥ, который может лечить ЖСД.
19. Способ по п.18, где Η:ΝΈΥ может лечить ЖСД путем перорального введения.
20. Способ по любому из пп.18-19, где ЖСД представляет собой РПВЖ.
21. Применение Η:Ν₽Υ в изготовлении лекарства для лечения ЖСД.
22. Применение по п.21, где Η:ΝΈΥ идентифицирован способом по п.18.
23. Применение по любому из пп.21-22, где ЖСД представляет собой РПВЖ.
24. Применение по любому из пп.21-23, где лекарство представляет собой лекарство для перорального введения.
25. Применение Η:ΝΈΥ в приготовлении фармацевтической композиции для лечения ЖСД.
26. Применение по п.24, где Η:ΝΈΥ идентифицирован способом по п.18.
27. Применение по любому из пп.25-26, где ЖСД представляет собой РПВЖ.
28. Способ лечения женщины, страдающей ЖСД, при котором вводят Η:ΝΓΥ, который способен потенцировать цАМФ в гениталиях женщины, в таком количестве, чтобы вызвать потенцирование цАМФ в гениталиях этой женщины; при этом указанный Η:ΝΈΥ возможно смешан с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.
- 100 006254
29. Способ по п.28, где указанный ИЛ’РУ опосредует генитальную (например вагинальную или клиторную) вазорелаксацию.
30. Способ по п.28 или 29, где ЖСД представляет собой РПВЖ.
31. Способ по любому из пп.28-30, где указанный ΡΙΛ’Ι’Υ вводят перорально.
32. Способ по любому из пп.28-31, где указанный цАМФ представляет собой эндогенный цАМФ, причем указанный эндогенный цАМФ является результатом половой стимуляции (полового возбуждения).
33. Способ по любому из пп.28-32, где указанный ΡΙΛ’ΙΎ оказывает косвенное воздействие на цАМФ.
34. Способ по п.33, где ^№Υ воздействует на естественный и естественно локализованный вазоактивный интестинальный пептид (УГР).
35. Способ по любому из пп.28-34, где указанный ΡΙΛΊ’Υ вводят до или во время половой стимуляции.
EA200001043A 1999-11-08 2000-11-08 Ингибиторы npy для лечения женской сексуальной дисфункции EA006254B1 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9926437A GB9926437D0 (en) 1999-11-08 1999-11-08 Pharmaceutical
GB0004021A GB0004021D0 (en) 2000-02-18 2000-02-18 Pharmaceutical
GB0013001A GB0013001D0 (en) 2000-05-26 2000-05-26 Pharmaceutical
GB0016563A GB0016563D0 (en) 2000-07-05 2000-07-05 Pharmaceutical
GB0017141A GB0017141D0 (en) 2000-07-12 2000-07-12 Pharmaceutical

Publications (3)

Publication Number Publication Date
EA200001043A2 EA200001043A2 (ru) 2001-12-24
EA200001043A3 EA200001043A3 (ru) 2002-04-25
EA006254B1 true EA006254B1 (ru) 2005-10-27

Family

ID=27515922

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200001044A EA006242B1 (ru) 1999-11-08 2000-11-08 Ингибиторы нэп для лечения женской сексуальной дисфункции
EA200001042A EA200001042A3 (ru) 1999-11-08 2000-11-08 Соединения для лечения женской сексуальной дисфункции
EA200001043A EA006254B1 (ru) 1999-11-08 2000-11-08 Ингибиторы npy для лечения женской сексуальной дисфункции

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200001044A EA006242B1 (ru) 1999-11-08 2000-11-08 Ингибиторы нэп для лечения женской сексуальной дисфункции
EA200001042A EA200001042A3 (ru) 1999-11-08 2000-11-08 Соединения для лечения женской сексуальной дисфункции

Country Status (25)

Country Link
US (1) US6734186B1 (ru)
EP (5) EP1097707A1 (ru)
JP (9) JP2001247479A (ru)
KR (7) KR20010051481A (ru)
CN (5) CN1322526A (ru)
AT (1) ATE285249T1 (ru)
AU (6) AU7140900A (ru)
BR (3) BR0005266A (ru)
CA (4) CA2323464A1 (ru)
CO (2) CO5680108A1 (ru)
CZ (3) CZ20004110A3 (ru)
DE (1) DE60016877T2 (ru)
DK (1) DK1097719T3 (ru)
EA (3) EA006242B1 (ru)
ES (1) ES2233297T3 (ru)
HK (3) HK1040627A1 (ru)
HU (4) HUP0004350A2 (ru)
IL (4) IL139457A0 (ru)
MY (2) MY141651A (ru)
NO (3) NO20005662L (ru)
NZ (4) NZ508006A (ru)
PE (4) PE20010926A1 (ru)
PL (3) PL343753A1 (ru)
PT (1) PT1097719E (ru)
SK (3) SK16702000A3 (ru)

Families Citing this family (63)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040014761A1 (en) * 1997-10-28 2004-01-22 Place Virgil A. Treatment of female sexual dysfunction with phosphodiesterase inhibitors
DK172900B1 (da) 1998-12-18 1999-09-27 Per Julius Nielsen Præparat samt kit til brug ved intraoculære operationer
US20050020547A1 (en) * 1999-11-08 2005-01-27 Pfizer Inc. Compounds for the treatment of female sexual dysfunction
US20020052370A1 (en) * 2000-07-06 2002-05-02 Barber Christopher Gordon Cyclopentyl-substituted glutaramide derivatives as inhibitors of neutral endopeptidase
AU2002220977A1 (en) * 2000-12-15 2002-06-24 Pfizer Inc. Treatment of male sexual dysfunction
US6660756B2 (en) 2001-03-28 2003-12-09 Pfizer Inc. N-phenpropylcyclopentyl-substituted glutaramide derivatives as inhibitors of neutral endopeptidase
DOP2002000364A (es) 2001-03-28 2002-10-15 Pfizer Derivados de glutaramida sustituida con n-fenpropilciclopentilo como inhibidores de nep para fsad
GB0111709D0 (en) * 2001-05-14 2001-07-04 Pfizer Ltd Novel pharmaceuticals
AR037097A1 (es) 2001-10-05 2004-10-20 Novartis Ag Compuestos acilsulfonamidas, composiciones farmaceuticas y el uso de dichos compuestos para la preparacion de un medicamento
HN2002000317A (es) * 2001-11-02 2003-05-21 Pfizer Inhibidores de pde9 para tratamiento de trastornos cardiovasculares
GB0219961D0 (en) 2002-08-28 2002-10-02 Pfizer Ltd Oxytocin inhibitors
GB0225908D0 (en) * 2002-11-06 2002-12-11 Pfizer Ltd Treatment of female sexual dysfunction
US20060106037A1 (en) * 2003-03-04 2006-05-18 Thomas Bar Purin-6-one-derivatives
CA2820537C (en) 2003-04-23 2015-10-20 Valeritas, Inc. Hydraulically actuated pump for fluid administration
US7291640B2 (en) 2003-09-22 2007-11-06 Pfizer Inc. Substituted triazole derivatives as oxytocin antagonists
US7452875B2 (en) 2003-09-26 2008-11-18 Solvay Pharmaceuticals Gmbh Amidomethyl-substituted 1-(carboxyalkyl) cyclopentyl-carbonylamino-benzazepine-N-acetic acid compounds, process and intermediate products for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US7427611B2 (en) 2003-09-26 2008-09-23 Solvay Pharmaceuticals Gmbh Amidomethyl-substituted 1-(carboxyalkyl)-cyclopentyl-carbonylamino-benzazepine-N-acetic acid compounds, process and intermediate products for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US7262184B2 (en) 2003-09-26 2007-08-28 Solvay Pharmaceuticals Gmbh Amidomethyl-substituted 1-(carboxyalkyl) cyclopentyl-carbonylamino-benzazepine-N-acetic acid compounds, process and intermediate products for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US20050267072A1 (en) * 2004-05-14 2005-12-01 Solvay Pharmaceuticals Gmbh Pharmaceutical compositions containing dually acting inhibitors of neutral endopeptidase for the treatment of sexual dysfunction
US20050267124A1 (en) * 2004-05-14 2005-12-01 Solvay Pharmaceuticals Gmbh Pharmaceutical compositions comprising NEP-inhibitors, inhibitors of the endogenous producing system and PDEV inhibiitors
US20060029590A1 (en) * 2004-06-10 2006-02-09 Christopher Thanos Administration of neutral endopeptidase to treat inflammatory bowel disease
US9089636B2 (en) 2004-07-02 2015-07-28 Valeritas, Inc. Methods and devices for delivering GLP-1 and uses thereof
ATE412648T1 (de) 2005-03-21 2008-11-15 Pfizer Ltd Substituierte triazolderivate als oxytocinantagonisten
ES2566058T3 (es) 2006-03-30 2016-04-08 Valeritas, Inc. Dispositivo de suministro de fluidos de múltiples cartuchos
US9255099B2 (en) 2006-06-06 2016-02-09 Intra-Cellular Therapies, Inc. Pyrazolo[3,4-D]pyrimidine-4,6(5H,7H)-diones as phosphodiesterase 1 inhibitors
KR20100094551A (ko) 2007-12-06 2010-08-26 인트라-셀룰라 써래피스, 인코퍼레이티드. 유기 화합물
US8986253B2 (en) 2008-01-25 2015-03-24 Tandem Diabetes Care, Inc. Two chamber pumps and related methods
US8408421B2 (en) 2008-09-16 2013-04-02 Tandem Diabetes Care, Inc. Flow regulating stopcocks and related methods
CA2737461A1 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Tandem Diabetes Care, Inc. Solute concentration measurement device and related methods
BRPI0922809A2 (pt) 2008-12-06 2018-05-29 Intracellular Therapies Inc compostos orgânicos
SG171777A1 (en) 2008-12-06 2011-07-28 Intra Cellular Therapies Inc Organic compounds
EP2367431B1 (en) 2008-12-06 2015-08-05 Intra-Cellular Therapies, Inc. Organic compounds
US20130213393A1 (en) 2009-12-22 2013-08-22 Evoke Pharma, Inc. Nasal formulations of metoclopramide
US9468637B2 (en) 2009-05-13 2016-10-18 Intra-Cellular Therapies, Inc. Organic compounds
US8680116B2 (en) 2009-07-22 2014-03-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Quinolinone PDE2 inhibitors
EP2459251B1 (en) 2009-07-30 2014-03-12 Tandem Diabetes Care, Inc. Infusion pump system with disposable cartridge having pressure venting and pressure feedback
US9371327B2 (en) 2010-05-31 2016-06-21 Intra-Cellular Therapies, Inc. PDE1 inhibitor compounds
US9434730B2 (en) 2010-05-31 2016-09-06 Intra-Cellular Therapies, Inc. PDE1 inhibitor compounds
AU2012347997B2 (en) * 2011-12-05 2017-07-20 Suda Limited Oral spray formulations and methods for administration of sildenafil
US9180242B2 (en) 2012-05-17 2015-11-10 Tandem Diabetes Care, Inc. Methods and devices for multiple fluid transfer
US9381297B2 (en) 2012-06-07 2016-07-05 Tandem Diabetes Care, Inc. Sealed infusion device with electrical connector port
US9801882B2 (en) 2013-02-17 2017-10-31 Intra-Cellular Therapies, Inc. Phosphodiesterase-1 inhibitors and their use in treatment of cardiovascular diseases
US9173998B2 (en) 2013-03-14 2015-11-03 Tandem Diabetes Care, Inc. System and method for detecting occlusions in an infusion pump
US9815796B2 (en) 2013-12-23 2017-11-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Pyrimidone carboxamide compounds as PDE2 inhibitors
TWI686394B (zh) 2014-08-07 2020-03-01 美商內胞醫療公司 有機化合物
US10285992B2 (en) 2014-08-07 2019-05-14 Intra-Cellular Therapies, Inc. Combinations of PDE1 inhibitors and NEP inhibitors and associated methods
US9546175B2 (en) 2014-08-07 2017-01-17 Intra-Cellular Therapies, Inc. Organic compounds
WO2016145614A1 (en) 2015-03-17 2016-09-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Triazolyl pyrimidinone compounds as pde2 inhibitors
WO2016154081A1 (en) 2015-03-26 2016-09-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Pyrazolyl pyrimidinone compounds as pde2 inhibitors
US10195201B2 (en) 2015-05-05 2019-02-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Heteroaryl-pyrimidinone compounds as PDE2 inhibitors
WO2016183741A1 (en) 2015-05-15 2016-11-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Pyrimidinone amide compounds as pde2 inhibitors
WO2016191935A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Merck Sharp & Dohme Corp. 6-alkyl dihydropyrazolopyrimidinone compounds as pde2 inhibitors
WO2016192083A1 (en) 2015-06-04 2016-12-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Dihydropyrazolopyrimidinone compounds as pde2 inhibitors
WO2016209749A1 (en) 2015-06-25 2016-12-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted pyrazolo/imidazolo bicyclic compounds as pde2 inhibitors
WO2017000277A1 (en) 2015-07-01 2017-01-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted triazolo bicycliccompounds as pde2 inhibitors
WO2017000276A1 (en) 2015-07-01 2017-01-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Bicyclic heterocyclic compounds as pde2 inhibitors
TN2017000507A1 (en) 2015-07-07 2019-04-12 H Lundbeck As Pde9 inhibitors with imidazo triazinone backbone and imidazo pyrazinone backbone for treatment of peripheral diseases
US10492141B2 (en) 2015-11-17 2019-11-26 Tandem Diabetes Care, Inc. Methods for reduction of battery usage in ambulatory infusion pumps
WO2017172795A1 (en) 2016-03-28 2017-10-05 Intra-Cellular Therapies, Inc. Novel compositions and methods
WO2017168174A1 (en) 2016-04-02 2017-10-05 N4 Pharma Uk Limited New pharmaceutical forms of sildenafil
WO2018112061A1 (en) 2016-12-15 2018-06-21 Evoke Pharma, Inc. Treatment of moderate and severe gastroparesis
US11839614B2 (en) 2018-01-31 2023-12-12 Intra-Cellular Therapies, Inc. Methods for treating or mitigating cardiotoxicity characterized by inhibition of adenosine A2 signaling and/or adenosine A2 receptor expression
CN114533740B (zh) * 2022-02-10 2024-04-12 广州威生医药科技有限公司 一种公猪气味剂组合物及其应用

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4666908A (en) * 1985-04-05 1987-05-19 Warner-Lambert Company 5-Substituted pyrazolo[4,3-d]pyrimidine-7-ones and methods of use
KR880007441A (ko) * 1986-12-11 1988-08-27 알렌 제이.스피겔 스피로-치환된 글루타르아미드 이뇨제
US4749717A (en) * 1987-01-08 1988-06-07 Smithkline Beckman Corporation Dopamine-beta-hydroxylase inhibitors
WO1991004042A1 (en) * 1989-09-18 1991-04-04 Senetek, Plc Method for inducing vaginal lubrication
US5380758A (en) 1991-03-29 1995-01-10 Brigham And Women's Hospital S-nitrosothiols as smooth muscle relaxants and therapeutic uses thereof
GB9514465D0 (en) 1995-07-14 1995-09-13 Glaxo Lab Sa Chemical compounds
US6143746A (en) 1994-01-21 2000-11-07 Icos Corporation Tetracyclic cyclic GMP-specific phosphodiesterase inhibitors, process of preparation and use
US5612314A (en) 1995-04-21 1997-03-18 Brigham & Women's Hospital Nitrosylated neuropeptides
DE19541264A1 (de) * 1995-11-06 1997-05-07 Bayer Ag Purin-6-on-derivate
WO1997020821A1 (en) * 1995-12-01 1997-06-12 Novartis Ag Heteroaryl derivatives
US5798246A (en) 1996-03-25 1998-08-25 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Cyclic nucleotide phosphodiesterase
GB9608408D0 (en) * 1996-04-23 1996-06-26 Adams Michael A Treatment of erectile dysfunction
ES2186907T3 (es) * 1996-07-23 2003-05-16 Neurogen Corp Ciertos derivados de bencilamina sustituidos; una nueva clase de ligandos especificos del neuropeptido y1.
US5958926A (en) 1996-11-01 1999-09-28 Nitromed, Inc. Nitrosated and nitrosylated phosphodiesterase inhibitor compounds, compositions and their uses
US6331543B1 (en) * 1996-11-01 2001-12-18 Nitromed, Inc. Nitrosated and nitrosylated phosphodiesterase inhibitors, compositions and methods of use
US6043252A (en) 1997-05-05 2000-03-28 Icos Corporation Carboline derivatives
US20020004529A1 (en) * 1997-10-20 2002-01-10 Gary W. Neal Methods, compositions, and kits for enhancing female sexual desire and responsiveness
US5965718A (en) * 1997-10-24 1999-10-12 The Scripps Research Institute Analogs of sarcodictyin and eleutherobin
GB9722520D0 (en) * 1997-10-24 1997-12-24 Pfizer Ltd Compounds
CA2306837C (en) * 1997-10-28 2007-05-08 Asivi, Llc. Treatment of female sexual dysfunction
AUPP010397A0 (en) * 1997-10-30 1997-11-20 Vaisman, Jakov Method and composition for treatment of sexual dysfunction
SK287161B6 (sk) * 1997-11-12 2010-02-08 Bayer Healthcare Ag 2-Fenylsubstituované imidazotriazinóny, spôsob ich výroby, liečivá obsahujúce tieto látky a ich použitie
CA2314369A1 (en) * 1997-12-18 1999-06-24 Nathan Earl Scott Prostaglandin e2/f2.alpha. combination for treating impotence and enhancing sexual arousal
JP2002524564A (ja) 1998-09-16 2002-08-06 アイコス コーポレイション ｃＧＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤としてのカルボリン誘導体
US6486207B2 (en) * 1998-12-10 2002-11-26 Nexmed (Holdings), Inc. Compositions and methods for amelioration of human female sexual dysfunction
US20020169101A1 (en) * 1999-05-10 2002-11-14 Gonzalez Maria Isabel Treatment of sexual dysfunction
US20020052370A1 (en) * 2000-07-06 2002-05-02 Barber Christopher Gordon Cyclopentyl-substituted glutaramide derivatives as inhibitors of neutral endopeptidase

Also Published As

Publication number Publication date
AU7140900A (en) 2001-05-10
KR20010086267A (ko) 2001-09-10
HU0004348D0 (ru) 2001-01-29
CN1322526A (zh) 2001-11-21
HUP0004348A2 (hu) 2001-06-28
CO5680108A1 (es) 2006-09-29
AU2005202750A1 (en) 2005-07-21
ES2233297T3 (es) 2005-06-16
KR20040074022A (ko) 2004-08-21
PL343753A1 (en) 2001-05-21
PE20010926A1 (es) 2001-09-15
EA200001043A3 (ru) 2002-04-25
KR20040074023A (ko) 2004-08-21
HUP0004349A2 (hu) 2001-06-28
HUP0004347A2 (hu) 2001-06-28
JP2001213802A (ja) 2001-08-07
PL343755A1 (en) 2001-05-21
IL139457A0 (en) 2001-11-25
SK16712000A3 (sk) 2002-07-02
KR20010082545A (ko) 2001-08-30
EP1097707A1 (en) 2001-05-09
SK16722000A3 (sk) 2002-09-10
HK1040627A1 (zh) 2002-06-21
JP2001247478A (ja) 2001-09-11
JP2005350482A (ja) 2005-12-22
ATE285249T1 (de) 2005-01-15
EP1097719B1 (en) 2004-12-22
HK1041646A1 (zh) 2002-07-19
EA006242B1 (ru) 2005-10-27
AU781186B2 (en) 2005-05-12
HUP0004350A2 (hu) 2001-06-28
CN1328824A (zh) 2002-01-02
CA2323464A1 (en) 2001-05-08
EP1097706A1 (en) 2001-05-09
EA200001042A2 (ru) 2001-12-24
EA200001044A2 (ru) 2001-12-24
HU0004350D0 (ru) 2001-01-29
AU781403B2 (en) 2005-05-19
SK16702000A3 (sk) 2002-07-02
BR0005266A (pt) 2003-04-08
CO5680109A1 (es) 2006-09-29
CA2324484A1 (en) 2001-05-08
CA2323191A1 (en) 2001-05-08
PL343754A1 (en) 2001-05-21
PT1097719E (pt) 2005-04-29
AU7141100A (en) 2001-05-10
MY140534A (en) 2009-12-31
NO20005618D0 (no) 2000-11-07
PE20010925A1 (es) 2001-09-17
DE60016877T2 (de) 2005-12-15
CN1636597A (zh) 2005-07-13
KR20010082544A (ko) 2001-08-30
EP1481667A1 (en) 2004-12-01
CZ20004107A3 (cs) 2002-04-17
IL139455A0 (en) 2001-11-25
IL139454A0 (en) 2001-11-25
JP2001247479A (ja) 2001-09-11
BR0005276A (pt) 2003-04-08
AU7140700A (en) 2001-05-17
EP1097719A1 (en) 2001-05-09
KR20010051481A (ko) 2001-06-25
CZ20004106A3 (cs) 2002-04-17
DK1097719T3 (da) 2005-03-29
CZ20004110A3 (cs) 2002-04-17
BR0005299A (pt) 2003-04-15
EA200001044A3 (ru) 2002-04-25
NO20005618L (no) 2001-05-09
NO20005662L (no) 2001-05-09
NZ508012A (en) 2002-06-28
NO20005661L (no) 2001-05-09
PE20010817A1 (es) 2001-08-14
CN1575816A (zh) 2005-02-09
AU7140800A (en) 2001-05-17
PE20010924A1 (es) 2001-09-13
EP1097718A1 (en) 2001-05-09
NZ508011A (en) 2002-06-28
JP2005013237A (ja) 2005-01-20
EA200001042A3 (ru) 2002-04-25
JP2005043377A (ja) 2005-02-17
JP2005021167A (ja) 2005-01-27
HU0004349D0 (ru) 2001-01-29
DE60016877D1 (de) 2005-01-27
NZ508007A (en) 2002-06-28
KR20040074021A (ko) 2004-08-21
HK1040626A1 (zh) 2002-06-21
CN1320426A (zh) 2001-11-07
MY141651A (en) 2010-05-31
EA200001043A2 (ru) 2001-12-24
AU2005202166A1 (en) 2005-06-16
HU0004347D0 (ru) 2001-01-29
NO20005661D0 (no) 2000-11-07
NZ508006A (en) 2002-06-28
CA2323183A1 (en) 2001-05-08
JP2001206855A (ja) 2001-07-31
US6734186B1 (en) 2004-05-11
NO20005662D0 (no) 2000-11-07
JP2005070055A (ja) 2005-03-17
AU781400B2 (en) 2005-05-19
IL139456A0 (en) 2001-11-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA006254B1 (ru) Ингибиторы npy для лечения женской сексуальной дисфункции
US20150072995A1 (en) Treatment of male sexual dysfunction
AU2005201482A1 (en) Compounds for the treatment of female sexual dysfunction
US20050020547A1 (en) Compounds for the treatment of female sexual dysfunction
AU2003201471B2 (en) Treatment of male sexual dysfunction
KR20030061441A (ko) 남성 성기능 장애의 치료

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU

NF4A Restoration of lapsed right to a eurasian patent

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU