EA003829B1

EA003829B1 - Способ получения полимеров и/или сополимеров и композиция для внутреннего введения людям, животным или птицам

Info

Publication number: EA003829B1
Application number: EA200000796A
Authority: EA
Inventors: Грэм Джон Гамильтон Мелрос
Original assignee: КЕМЕК эЛТиДи
Priority date: 1995-05-30
Filing date: 1996-05-30
Publication date: 2003-10-30
Also published as: CN1397283A; ES2210362T3; US20040170599A1; EA199700448A1; EP1393735B1; EP0828498B1; ATE399559T1; AU701974B2; AU5755796A; CN1186436A; HK1010490A1; DE69631048D1; EP1393735B8; DE69637585D1; DK0828498T3; BR9609166A; HK1050137A1; ES2309262T3; DE69631048T2; US7438899B2

Abstract

Изобретение относится к способу получения полимеров и/или сополимеров и содержащей их композиции для внутреннего введения людям, животным или птицам при лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта и/или злокачественных опухолей, а также для увеличения прироста в весе. Способ заключается в нагревании полимеров и/или сополимеров, содержащих повторяющееся звеногде R - Н или алкил, такой как С-Салкил, или указанное звено в гидратированной, полуацетальной или ацетальной форме, до температуры, не превышающей 100°С, в присутствии воздуха с получением целевого продукта, содержащего 0,1-5 молей карбоксильных групп на 1 кг полимера и/или сополимера. Полученный продукт и содержащая его композиция предпочтительно растворимы в воде.

Description

Настоящая заявка является заявкой, выделенной из евразийской заявки № 199700448.

Область техники

Настоящее изобретение относится к способу получения полимеров и к содержащей их композиции для внутреннего введения людям, животным или птицам, применяемой при лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта и/или злокачественных опухолей и для увеличения прироста в весе человека, животных или птиц.

Уровень техники

В условиях интенсивного разведения свиней наблюдается массовое заболевание колибактериозом животных, отнятых от грудного вскармливания. Например, интенсивное разведение свиней широко распространено в Европе, США и Австралии. Так, в США основной причиной падежа отнятого от грудного вскармливания молодняка является коли-бактериоз (Ъетап е! а1., 1986). Заболевание связано с пролиферацией кишечной палочки ЕксйепсШа сой в передней тонкой кишке у животных, отнятых от грудного вскармливания, и вызывает падеж или потерю нормального прироста в весе животных. Наблюдается также массовое заболевание свиней, вызванное другими бактериями, которые часто сопровождают коли-бактериоз. Аналогичные заболевания наблюдаются у других животных в условиях интенсивного разведения, особенно в птицеводстве.

В прошлом были предприняты попытки лечения указанного заболевания путем приема внутрь антимикробных композиций или путем вакцинации. Однако было показано, что ни один из способов не был эффективен.

Причиной потери активности антимикробных композиций при кормлении животных считается тот факт, что белковые компоненты, входящие в состав корма, и содержимое желудочно-кишечного тракта представляют собой реактивную и разрушительную среду по отношению к любому хемотерапевтическому средству. Следовательно, антимикробный агент будет неэффективен ίη νίνο в желудочно-кишечном тракте, даже если этот агент активен ίη νίίτο.

Кроме того, для обеспечения практической эффективности к антимикробным средствам для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта часто предъявляется ограничивающее требование, заключающееся в том, что такие средства должны поддерживать низкий уровень бактерий в двенадцатиперстной кишке и достаточно высокий уровень в нижних участках желудка.

В то же время тот факт, что антимикробные средства проявляют активность ίη νίνο, не означает, что они будут вызывать прирост в весе, так как известно, что даже кормление смесью, состоящей из нескольких коммерческих антимикробных средств, вызывает различный или частичный прирост и даже отрицательное изменение в весе по сравнению с контрольными животными.

В связи с этим существует необходимость в разработке эффективных средств для профилактики и/или лечения заболеваний человека, и/или животных, и/или птиц, нуждающихся в указанном лечении, путем приема внутрь антимикробных композиций. Более того, необходимо, чтобы находящиеся на лечении человек, и/или животные, и/или птицы набирали в весе.

Согласно настоящему изобретению предлагается использовать полимеры, полученные преимущественно на основе акролеина и содержащие повторяющееся звено формулы

где Я - Н или алкил, обычно С₁-С₄алкил, или содержащие указанное повторяющееся звено в гидратированной, полуацетальной или ацетальной форме, возможные структуры которых представлены, но не исчерпывают всех возможных структур, следующими формулами:

где п>1, Я - как определено выше.

Полимеры (гомополимеры и/или сополимеры) в данном описании далее названы полимеры, полученные способом согласно изобретению и представляют собой широкий спектр антимикробных и/или противоопухолевых средств, действующих ίη νίνο и пригодных для лечения пероральным методом.

Известно, что степень проникновения молекул через мембраны находится в обратно пропорциональной зависимости от их молекулярной массы. Таким образом, в данной области техники известно и общепринято утверждение, что молекулы, введенные пероральным путем и обладающие молекулярной массой >1000, настолько ограниченно проникают через стенки кишечника, что их потенциальная токсичность сведена к минимуму.

Полимеры по изобретению, являясь альдегидами, особенно реакционноспособны по отношению к белкам. (Действительно, при проведении микробиологических тестов обычным и простым способом гашения/инактивации активности полимеров по изобретению является добавление белка). Следовательно, нельзя было предположить, что полимеры согласно изобретению будут проявлять значительную микробиологическую активность в кишечнике, особенно в присутствии белковых кормов.

Сущность изобретения

Согласно первому объекту настоящего изобретения предложен способ получения полимеров, содержащих повторяющиеся звенья формулы

К

I (ΓΗ, где Я означает Н или алкил, такой как С₁С₄алкил, либо указанные звенья в гидратированной, полуацетальной или ацетальной форме, а также содержащих 0,1-5 молей карбоксильных групп на 1 кг полимера, включающий стадии нагревания полимеров, содержащих повторяющиеся звенья формулы

где Я означает Н или алкил, такой как С₁С₄алкил, либо указанные звенья в гидратированной, полуацетальной или ацетальной форме, от комнатной температуры до температуры, не превышающей 100°С, в присутствии воздуха. Нагревание можно осуществлять до температуры 80-85°С.

В частном случае осуществления способ получения полимеров и/или сополимеров дополнительно включает стадию придания полученному полимеру растворимости в водной среде и/или способности к использованию в водной среде.

Полученные полимеры и/или сополимеры используют для внутреннего введения людям, животным и птицам.

Другим объектом настоящего изобретения является композиция, пригодная для внутреннего введения людям, животным и птицам, которая содержит полимеры и/или сополимеры, полученные способом, соответствующим настоящему изобретению. Данную композицию используют при лечении заболеваний желудочнокишечного тракта и/или злокачественных опухолей и для увеличения прироста в весе человека, животных или птиц.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Настоящее изобретение основано на ряде обнаружений.

Во-первых, было обнаружено, что благодаря высокой молекулярной массе полимеры, полученные способом по изобретению, не способны проникать через биологические мембраны и могут быть эффективно использованы в желудочно-кишечном тракте, так как их проникновение через кишку в поток крови минимально для того, чтобы потенциально вызвать токсичность. В особенности, было обнаружено, что полимеры, полученные способом согласно изобретению, имеют молекулярную массу >1000 и, в основном, >2000, что сводит к мини муму их проникновение через мембраны кишечника. В результате было установлено, что в то время как полимеры, полученные способом согласно изобретению, проявляют токсичность при внутривенном введении, они не проявляют токсичность при пероральном введении. Следовательно, было обнаружено, что полимеры по изобретению имеют минимальную токсичность и обладают преимуществами при использовании в качестве хемотерапевтических средств для лечения любого организма, имеющего мембраны кишечника, например человека, животных или птиц.

В основном, полимеры, полученные с использованием ионного инициирования/катализации, являются более гидрофильными, чем полимеры, полученные с использованием свободнорадикального инициирования/катализации, и гидрофильность указанных полимеров можно увеличить путем включения в их структуру гидрофильных групп, особенно карбоксильных групп или гидрофильных мономеров, особенно акриловой кислоты. В частности, осторожное нагревание полимеров согласно изобретению, полученных методом ионного инициирования/катализации, в присутствии воздуха при температуре от комнатной до 100°С, предпочтительно при 80-85°С, приводит к получению полимеров согласно изобретению, содержащих 0,1-5 молей карбоксильных групп на 1 кг, и растворимых в воде, особенно при рН, равном рН среды двенадцатиперстной кишки, и такие полимеры могут быть предпочтительно использованы при указанном введении в желудочно-кишечный тракт.

Полимеры, полученные способом согласно изобретению, проявляют антимикробную активность ίη νίνο, что позволяет их использовать для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта у человека, животных или птиц.

Показано, что полимеры, полученные способом согласно изобретению, увеличивают прирост в весе у человека, животных или птиц. Показано также, что данные полимеры являются противоопухолевыми средствами ίη νίνο.

В связи с тем, что полимеры, полученные способом согласно изобретению, предназначены для приготовления на их основе композиции для внутреннего введения для профилактики и/или лечения заболеваний желудочнокишечного тракта, в настоящее время показано, что у поросят на свиноводческой ферме, получавших такие композиции в питьевой воде аб НЬйнт, наблюдается снижение продолжительности диареи (в днях) и снижение числа кишечных палочек в экскрементах. Более того, как и предполагалось, действие полимеров значительно эффективнее по сравнению с частичным действием, оказываемым при введении коммерческих антимикробных средств одновременно с вакцинацией. Кроме того, в настоящее время обнаружено, что полимеры согласно изобрете нию в полимерных композициях с регулируемым высвобождением не только снижают продолжительность диареи у животных, но и приводят к чрезвычайно высокому приросту в весе. Как показано в примере 17, у поросят наблюдается низкая смертность, а прирост в весе у некоторых из них на 46% выше по сравнению с контрольными животными. В связи с этим предполагается, что полимеры, полученные способом согласно изобретению, можно использовать в качестве добавок в твердый корм животным в форме полимерных композиций с регулируемым высвобождением, так как в этом случае полимеры согласно изобретению будут выделяться постепенно и, в основном, в двенадцатиперстной кишке. Кроме того, предполагается, что содержание полимеров согласно изобретению в системе с регулируемым высвобождением приведет к снижению разрушающего взаимодействия как с содержимым желудочнокишечного тракта, так и с белковыми компонентами корма, особенно в процессе стерилизации корма путем нагревания. Более того, отказ животных в приеме указанных композиций по причине вкусовых ощущений будет значительно снижен.

При использовании полимеров согласно изобретению для лечения заболеваний и/или инфекции у человека, животных или птиц, нуждающихся в лечении, например поросят с диареей, вызванной коли-бактериозом, предпочтительно начинать лечение немедленно после отнятия от грудного вскармливания и непременно продолжать лечение в течение последующих 5 дней, иногда последующих 30 дней, но, предпочтительно, по крайней мере, в течение последующих 15 дней после отнятия от грудного вскармливания, и в периоды, когда наблюдается диарея. Предпочтительно проводить лечение в форме с регулируемым высвобождением, причем содержание полимеров согласно изобретению должно составлять теоретически 5-50% (мас./мас.), более предпочтительно 20-30% (мас./мас.). Предпочтительно добавлять форму с регулируемым высвобождением/гранулы в корм либо в процессе приготовления корма, либо во время кормления, таким образом, чтобы корм содержал 1-20% (мас./мас.), наиболее предпочтительно 2-8% (мас./мас.) гранул. Например, если поросенок весом 5 кг съедает в день 500 г корма, содержащего 4% (мас./мас.) гранул с регулируемым высвобождением, содержащих 25% (мас./мас.) полимеров согласно изобретению, то расчетная доза для полимеров по изобретению должна составлять 1000 мг/кг (живого веса)/день, в форме с регулируемым высвобождением она составляет практически 50-5000 мг/кг/день и предпочтительно 500-2500 мг/кг/день. Если полимеры согласно изобретению вводят в форме, отличной от формы с регулируемым высвобождением, то следует использовать меньшие дозы - 25-500 мг/кг/день. Схема введения и величины доз аналогичны для лечения и других микробиологических инфекций или раковых заболеваний.

Как проявляемая полимерами, полученными способом согласно изобретению, антимикробная активность ίη νίνο в присутствии огромного количества реакционноспособных белков, содержащихся в желудочно-кишечном тракте, так и выявленный спектр хемотерапевтических активностей являются удивительными. Согласно неопубликованным исследованиям композиция согласно изобретению проявляет также противокоагуляционную активность по отношению к крови человека и различных животных. Такой особенный спектр удивительных активностей ίη νίνο предполагает, что неожиданно композиция согласно изобретению имеет такую активность, связанную с адсорбционным внутренним взаимодействием типа лектинселектин-интегрин.

Композиции для внутреннего введения согласно изобретению могут быть получены известными в данной области техники способами (в области получения ветеринарных и фармакологических композиций), включающими смешение, измельчение, размалывание, гомогенизацию, суспендирование, растворение, эмульгирование и диспергирование и, если необходимо, смешение полимеров согласно изобретению с выбранными наполнителями, разбавителями, носителями и адъювантами.

Для перорального введения фармацевтические или ветеринарные композиции могут быть приготовлены в форме таблеток, пастилок, лепешек, пилюль, капсул, элексиров, порошков, включающих лиофилизированные порошки, растворы, гранулы, суспензии, эмульсии, сиропы и настойки. Могут быть также приготовлены композиции пролонгированного или замедленного действия, например, в форме частиц со специальным покрытием, многослойных таблеток или микрогранул. Предпочтительно, чтобы система с регулируемым высвобождением состояла из рН-чувствительных, поперечносшитых водно-абсорбционных гранул, которые в воде образуют гель. Твердые формы для перорального введения могут содержать фармацевтически или ветеринарно приемлемые связующие, подсластители, дезинтегранты, разбавители, ароматизирующие добавки, обволакивающие вещества, консерванты, смазывающие вещества и/или вещества пролонгированного действия. К подходящим связующим относятся аравийская камедь, желатин, кукурузный крахмал, трагакант, альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза или полиэтиленгликоль.

Подходящими подсластителями являются сахароза, лактоза, глюкоза, аспартам или сахарин. Подходящими дезинтегрантами являются кукурузный крахмал, метилцеллюлоза, поливинилпирролидон, ксантановая камедь, бентонит, альгиновая кислота или агар. Подходящими разбавителями являются лактоза, сорбит, маннит, декстроза, каолин, целлюлоза, карбонат кальция, силикат кальция или моногидрофосфат кальция. Подходящие ароматические и вкусовые добавки включают мятное масло, масло грушанки, добавку с запахом вишни, апельсина или малины. К подходящим веществам для покрытия относятся полимеры акриловой и/или метакриловой кислоты, и/или их эфиры, и/или их амиды, воск, жирные спирты, зеин, щеллак или клейковина. Подходящими консервантами являются бензоат натрия, витамин Е, альфатокоферол, аскорбиновая кислота, метилпарабен, пропилпарабен или бисульфат натрия. Подходящими смазывающими веществами являются стеарат магния, стеариновая кислота, олеат натрия, хлорид натрия или тальк. Подходящие вещества пролонгированного действия включают моностеарат глицерина или дистеарат глицерина. Жидкие формы для перорального введения, кроме указанных выше компонентов, могут содержать жидкий носитель. Подходящие жидкие носители включают воду, масла, такие как оливковое масло, арахисовое масло, подсолнечное масло, масло сафлора красильного, кунжутное масло, кокосовое масло, жидкий парафин, этиленгликоль, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, этанол, пропанол, изопропанол, глицерин, жирные спирты, триглицериды или их смеси. Композиции для перорального ведения могут, кроме того, содержать диспергирующие и/или суспендирующие агенты. К подходящим суспендирующим агентам относятся натрийкарбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, поливинилпирролидон, альгинат натрия или цетиловый спирт. Подходящие диспергирующие агенты включают лецитин, сложные эфиры полиоксиэтилена и жирных кислот, таких как стеариновая кислота, полиоксиэтиленсорбитол моно- или ди- олеат, -стеарат или -лаурат, полиоксиэтиленсорбитан моно- или ди- олеат, -стеарат или лаурат и подобные им. Эмульсии для перорального введения могут включать одно или более эмульгирующих веществ. Подходящими эмульгирующими веществами могут быть указанные выше диспергирующие вещества или камеди, такие, как аравийская камедь или трагакант. Согласно четвертому аспекту настоящего изобретения предложен способ получения гранул, содержащих полимеры, определенные в первом аспекте изобретения, в смеси с фармацевтически или ветеринарно приемлемыми носителем, разбавителем, адъювантом, наполнителем и/или с системой регулируемого высвобождения, главным образом, в полимерной матрице. Способ включает добавление полимерной матрицы к раствору, суспензии или эмульсии полимеров согласно первому аспекту изобретения. Согласно пятому аспекту настоящего изобретения предложен способ получения гранул или подобных твердых композиций, содержащих полиме ры согласно первому аспекту изобретения, в основном, заключенные в полимерной матрице. Этот способ определен в четвертом аспекте изобретения и включает следующие стадии: (ί) растворение полимеров в водном щелочном или основном растворе; (и) нейтрализацию указанного раствора кислотой; (ίίί) добавление к указанному нейтрализованному раствору нерастворимых поперечно-сшитых абсорбирующих полимеров акриловой кислоты и/или сополимеров акриламида и акриловой кислоты для образования набухших влажных гранул; (ίν) по желанию, полное или частичное высушивание указанных набухших влажных гранул. Полученные таким образом влажные, набухшие гранулы в виде влажных, частично высушенных или полностью высушенных гранул могут быть использованы в качестве добавок, например, в корм для животных. Действие указанной композиции рассчитано таким образом, что карбоксильные группы, содержащиеся в полимерной матрице и расположенные на ее внешней поверхности, обеспечивают, по существу, сохранение полимеров согласно изобретению внутри полимерной матрицы в кислой среде желудка. Однако в щелочной среде двенадцатиперстной кишки карбоксильные группы матрицы ионизируются и отталкиваются друг от друга, что приводит к быстрому набуханию гранул и высвобождению полимеров согласно изобретению, которому способствует отталкивание собственных ионизированных групп и в конечном итоге приводит к высвобождению полимеров согласно изобретению за счет диффузии, скорость которой приблизительно соответствует скорости прохождения пищи через двенадцатиперстную кишку. В данном изобретении был использован термин соп1го11ей гс1са5с хуЧсш (система регулируемого высвобождения) в том же контексте, и он включает те же примеры, как это описано в работе Соп1го11ей Эгид ЭОп'Сгу (ВоЬткоп & Ьее, 1987). Полимер акриловой кислоты или сополимер акриламида и акриловой кислоты может быть заменен на другие рН-чувствительные системы регулируемого высвобождения, известные в данной области техники (ВоЬткоп апй Ьее, 1987). Например, растворимые анионные или нерастворимые, поперечно-сшитые и анионные целлюлозные системы или растворимые и анионные или нерастворимые, поперечно-сшитые и анионные полимеры на основе акриловой кислоты и/или ее производных. Предпочтительными являются поперечно-сшитые и нерастворимые полимеры, так как они набухают и менее подвергаются метаболизму. В заключение следует отметить, что описанные композиции могут быть использованы для профилактики злокачественных опухолей и/или инфекционных заболеваний и, в особенности, приводят к увеличению прироста в весе человека, животных или птиц с желудочно-кишечными инфекциями. Изобретение можно использовать для лечения человека, животных или птиц с инфекционными заболеваниями желудочно-кишечного тракта, вызванными, например, ЕксйепсЫа сой. Предпочтительным использованием изобретения является использование его для увеличения прироста в весе поросят, отнятых от грудного вскармливания, с диареей, вызванной пролиферацией бактерий ЕксйепсЫа сой в передней тонкой кишке. Изобретение можно использовать для лечения человека с заболеванием желудочно-кишечного тракта, вызванным, например, бактериями §!арйу1ососси8 аигеик и/или НеКсоЬасЮг ру1огг Далее приводятся примеры осуществления данного изобретения, которые не следует рассматривать как ограничивающие изобретение.

Примеры 1-13

Получение полимеров согласно изобретению

Пример 1.

(а) Использование свободно-радикального инициатора/свободно-радикального катализатора.

9,64 г перегнанного акролеина и 25 г метанола помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и продувают азотом. Затем добавляют 0,525 г перекиси бензоила и раствор перемешивают в атмосфере азота при 60°С. Реакцию проводят в течение около 88 ч. По завершению реакции реакционная смесь окрашена в интенсивно желтый цвет и имеет содержание твердого осадка 30,5%. ¹³С-ЯМР (300 Мгц) δ (относительно б₄-метанола при 49,00): 33,27 (СН); 33,53 (СН); 33,79 (СН); 33,87 (СН₂); 37,03 (СН); 37,29 (СН); 37,54 (СН); 37,64 (СН₂); 97,15 (СН);

103,37 (СН); 104,34 (СН); 139,36 (СН); 139,78 (СН₂); 196,72 (СН). В ¹³С-ЯМР-спектре сигнал при δ 196,72 свидетельствует о наличии некоторых остатков акролеина с углеродом альдегидной группы, а сигналы при δ 139,78 и δ 139,36 соответствуют СН₂ и СН винильной группы соответственно. Кроме сигнала резонансной абсорбции при δ 196,72 (СН), других сигналов, соответствующих СНО-группе, в спектре не наблюдается. Спектр соответствует полиакролеину, состоящему из сопряженных тетрагидропирановых циклов и некоторого количества свободных дигидроксиметильных групп. Циклы принимают либо конформацию кресла, либо конформацию ванны, что приводит к наличию в спектре большего количества химических сдвигов, чем можно было бы ожидать.

Было показано, что полиакролеин характеризуется меньшим временем удерживания, как показателя величины молекулярной массы полимера, по сравнению с полиэтиленгликолем 2000. Молекулярную массу полимеров определяли по времени удерживания с использованием колонки РогаШ 6РС 60 Лп§51гот на жидкостном хроматографе \Уа1ег5 Л55ос1а1еб Мобе1 ЛЬС/СРС 204, оборудованном дифференциальным рефрактометром К.401.

(б) Использование ионного инициатора/катализатора.

1,6 г перегнанного акролеина помещают в химический стакан объемом 200 мл и добавляют деионизированную воду до 20 мл, а затем добавляют, примерно, 0,5 мл 0,2 М раствора гидроксида натрия при перемешивании до рН около 10-11. Раствор мутнеет и выпадает белый осадок. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч и фильтруют. Осадок тщательно промывают деионизированной водой до нейтрального значения рН фильтрата. Продукт осторожно высушивают при нагревании и обильном аэрировании воздухом сначала при комнатной температуре с последующим повышением температуры до приблизительно 100°С. В качестве альтернативы, как в данном случае, продукт может быть высушен в вакууме с образованием мелкодисперсного порошка беложелтого цвета; затем порошок растворен в метаноле и упарен досуха и затем снова растворен в метаноле или других растворителях. Содержание карбоксильных групп в полимере согласно изобретению составляет 0,1-5 молей/кг, времена удерживания, определенные методом ГПХ, в основном, меньше времени удерживания полиэтиленгликоля 2000. ¹³С-ЯМР (300 Мгц) δ (относительно б₄-метанола при 49,00); 19-31 (СН₂);

35,95 (СН2); 37-42 (СН); 62-73 (СН2); 73-81 (СН); 92-95 (СН); 96-103 (СН); 114-120 (СН₂); 134-141 (СН); 196,0 (СН).

В дальнейших опытах в каждом случае использовали швейцарских белых мышей, две группы по 10 особей (обработанные и контрольные соответственно). Было показано, что растворы полимеров согласно изобретению в водном триэтаноламине с рН 8 проявляют острую внутривенную токсичность в дозе 320 мг/кг и острую оральную токсичность в дозе более 5000 мг/кг (при этом в течение 14 дней не наблюдается летальных исходов или аномальных симптомов).

Пример 2.

6,489 г перегнанной акриловой кислоты, 0,56 г перегнанного акролеина и 15 г метанола загружают в круглодонную колбу объемом 50 мл и продувают азотом. Затем добавляют 0,33 г перекиси бензоила и реакционную смесь перемешивают в атмосфере азота при 60-65°С. Реакцию проводят в течение около 66 ч, после чего содержимое колбы становится очень вязким, содержание твердых веществ составляет 57,7% (соответствует 100% конверсии).

Вязкий продукт переносят в чашку Петри и высушивают на горячей пластине для удаления растворителя. Высушивание завершают в сушильном шкафу при 80-85°С и получают прозрачный полимер светло-желтого цвета. Сополимер полностью растворим в теплой воде (приблизительно 50°С) и после этого остается растворенным даже при охлаждении раствора.

Чтобы убедиться в том, что твердый продукт является полимером, был проведен простой опыт с диализом: 10 г водного раствора, содержащего 0,65% твердого продукта, помещают в диализную трубку и орошают проточной водой в течение приблизительно 66 ч. Раствор извлекают из диализной трубки и определяют содержание твердого вещества как равное 0,68%. На основании полученных данных был сделан вывод, что твердый материал является полимером, так как весь твердый материал остается в диализной трубке, а нижний предел проникновения твердого вещества через диализную трубку составляет 2000 ш\\1.

Пример 3.

2.8 г диэтилацетальакролеина загружают в круглодонную колбу объемом 100 мл и содержимое продувают азотом. Затем добавляют раствор 0,216 г персульфата калия в 7,5 г воды при перемешивании в атмосфере азота. Колбу погружают в масляную баню, нагретую до 6070°С, и реакционную смесь перемешивают в течение приблизительно 20 ч. После выделения осадка желтого цвета и высушивания при 50°С получают 0,915 г продукта.

Пример 4.

г перегнанной акриловой кислоты, 4,81 г диэтилацетальакролеина и 15 г метанола помещают в круглодонную колбу объемом 50 мл и продувают азотом. Затем добавляют 0,3 г перекиси бензоила и продолжают перемешивание в атмосфере азота при 60-65°С в течение 70 ч (содержание твердых веществ соответствует 50% конверсии). ¹³С-ЯМР (300 Мгц) δ (относительно 64-метанола при 49,00): 15,58 (СН₃); 18,31 (СН₃); 35,52 (СН₂); 36,24 (СН₂); 37,07 (СН₂); 42,36 (СН); 42,85 (СН); 58,32 (СН₂); 130,00 (СН); 131,57(СН₂); 178,51 (СН).

Пример 5.

3.8 г диэтилацетальакролеина, 3,3 г винилпирролидона и 19 г метанола загружают в круглодонную колбу объемом 50 мл и тщательно продувают азотом. Затем добавляют 0,71 газобисизобутиронитрила и колбу нагревают на масляной бане при 60-65°С при перемешивании в атмосфере азота в течение 72 ч. Конверсия составляет 44%. Сополимер растворим в метаноле.

Пример 6.

Аналогично вышеописанным примерам 3,9 г диэтилацетальакролеина, 1,16 г акриловой кислоты, 7,5 мл воды и 0,216 г персульфата калия нагревают в атмосфере азота при перемешивании на масляной бане при 60-70°С в течение приблизительно 24 ч, после чего выделяют воскообразный продукт белого цвета, который нерастворим в воде, но набухает в метаноле, ацетоне, тетрагидрофуране или метилэтилкетоне.

Пример 7.

Аналогичные результаты получают путем нагревания и перемешивания в описанных выше условиях реакционной смеси следующего состава: 14,5 г метанола, 3,62 г перегнанного ак ролеина, 1,21 г перегнанной акриловой кислоты и 0,265 г перекиси бензоила. Через 40 ч конверсия составляет 40%.

Примеры 8-11.

Смесь мономеров 50:50 обрабатывают следующим образом: 2,35 г перегнанного акролеина, 2,88 г перегнанной акриловой кислоты и 14,5 г метанола загружают в круглодонную колбу объемом 50 мл и продувают азотом. Затем добавляют 0,2625 г перекиси бензоила и после нагревания при 60-70°С в течение 48 ч конверсия составляет 70%. Полимер набухает в метаноле, но не растворим в воде.

Аналогичные продукты получают при различном соотношении мономеров, а именно, акролеин:акриловая кислота - 30:70 (пример 9), 10:90 (пример 10), 2,5:97,5 (пример 11). Продукты, полученные согласно примерам 10 и 11, растворимы в воде и остаются в диализной трубке после диализа (нижний предел удерживания мембраны 2000 шет1).

Пример 12.

Аналогичный продукт получают в описанных выше условиях из реакционной смеси следующего состава: 1,8 г акролеина, 3,3 г винилпирролидона и 0,071 г азобисизобутиронитрила. Конверсия - 42%. Полимер набухает в метаноле или воде.

Пример 13.

К раствору 1,02 г полиэтиленгликольакрилата и 0,5 мл акролеина в 5 мл метанола добавляют 30 мг перекиси бензоила. Смесь перемешивают и кипятят с обратным холодильником в течение 48 ч, конверсия - 90%. Маслообразный остаток (1,2 г) подвергают хроматографии на 8ерйабех ЬН-20 (18 г) в метаноле. Структуру полученного полимера устанавливают методом ЯМР.

Пример 14.

Молодых взрослых самок мышей прививают внутрибрюшинно асцитными опухолевыми клетками Эрлиха (2,3х10560) и через одну неделю отбирают мышей с набухшей брюшной полостью для дальнейших опытов: 15 таких мышей подвергают 2 раза в день в течение 3 дней и 1 раз в день в течение следующих 3 дней внутрибрюшинным инъекциям композиции согласно изобретению в 0,5% водном растворе карбоната натрия дозой 100 мг/кг мыши; контрольную группу мышей, включающую 15 особей с асцитной опухолью Эрлиха, подвергают только инъекции раствора карбоната натрия. Затем мышей обеих групп умерщвляют, собирают брюшинную жидкость и подсчитывают число опухолевых клеток:

Контрольная группа	Обработанная группа
№ мыши	Число перитональ- ных клеток х 10⁹	№ мыши	Число перитональ- ных клеток х 10⁹
1	2,30	16	0,97
2	3,55	17	0,54
3	2,13	18	0,14

4	0,05	19	0,06
5	2,55	20	0,11
6	2,27	21	0,07
7	2,93	22	0,27
8	1,93	23	0,93
9	2,34	24	0,36
10	5,58	25	1,04
11	2,23	26	0,12
12	1,65	27	0,64
13	4,76	28	0,16
14	2,01	29	0,67
15	3,36	30	0,54
	х=2,64		х=0,44
	8=1,31		8=0,35

Результаты анализа с использованием Iкритерия показали, что различие между средними величинами, полученными для контрольной и обработанной групп, отличаются с достоверностью более 99%.

Пример 15.

Композиции согласно изобретению суспендируют/растворяют в питьевой воде для поросят. В течение первых 2-3 дней концентрация полимеров в питьевой воде составляет 0,1% (мас./об.); а затем в течение следующих 7 дней 0,05% (мас./об.). Питьевая вода постоянно доступна (аб йЫ1ит) для поросят. Поглощение полимеров, полученных способом согласно изобретению, при питье поросят составляет приблизительно 200 мг/кг веса животного/день.

Исследуют три группы 28-дневных, только что отнятых от грудного вскармливания поросят (средний вес 5,6 кг) при лечении:

1. Только композиция согласно изобретению.

2. Только в соответствии с известной схемой вакцинации.

3. Без лечения (контрольная группа).

В течение 14 дней опыта поросят выдерживают в обычной обстановке на ферме, причем, если при ежедневном осмотре обнаруживают особи с диареей, то этим животным делают инъекции антибиотика.

	Лечение только композицией по изобретению	Лечение только вакцинацией	Контроль без лечения
Число 28-дневных поросят в группе	15	19	10
Продолжительность диареи в днях (средняя величина/особь)	0,47	1,11	1,8
Число инъекций антибиотика (средняя величина/особь)	0,6	2,53	4,6
Число особей с высокой численностью Е.сой в фекалиях, 7-ой день (средняя величина/особь)	0,53	0,79	0,9
Прирост в весе, 14 дней (средний %/особь)	33	32	37

Пример 16.

В типичном низкомасштабном опыте полимеры, полученные способом согласно изобретению, (35 г) растворяют при перемешивании в воде (638 г), содержащей карбонат натрия (19 г), и затем раствор немедленно нейтрализуют до рН 7,2 10%-ным раствором соляной кислоты. Добавляют дискретно сахарозу (32 г, подсластитель) при постоянном перемешивании, а затем добавляют либо абсорбирующий полимер акриловой кислоты (64 г; САКВОРОЬ 934, В.Р. Сообпсй. США), либо абсорбирующий сополимер акриламида и акриловой кислоты (64 г; АБСО8ОВВ АВ 38, АШеб Со11о1б8, Англия). Полученные набухшие бисерные частицы приобретают светло-желтый цвет, свойственный раствору полимеров по изобретению. Бисерные частицы/гранулы можно использовать во влажной форме, но обычно перед использованием их высушивают либо частично, либо полностью при температуре до 45°С. Однако можно сушить при более высокой температуре до 90100°С. Теоретически, исходя из твердых добавок, полученные гранулы содержат 25% (мас./мас.) полимера, полученного способом согласно изобретению, по отношению к добавленным твердым веществам.

Для оценки степени высвобождения полимеров при рН, соответствующем рН среды желудка и двенадцатиперстной кишки, проводят два опыта. Во-первых, полученные как указано выше, полностью высушенные бисерные частицы (200 мг) осторожно перемешивают в 0,1 М растворе соляной кислоты (100 мл). Аликвоты (10 мл) отбирают периодически и разбавляют избытком 0,2 М водного раствора бикарбоната натрия. Максимальное высвобождение полимеров в 0,1 М растворе соляной кислоты, определенное по высоте пика поглощения при 265 нм, составляет приблизительно 35% через приблизительно 45 мин. Во-вторых, напротив, результаты сравнительного опыта при перемешивании в 0,1 М водном растворе бикарбоната натрия свидетельствуют о том, что высвобождение составляет 35% через приблизительно 20 мин и 90-100% через 3-5 ч. На эти свойства шариков не влияет нагревание, которое может использоваться в коммерческом производстве кормов для снижения содержания микроорганизмов (90°С/30 мин).

Пример 17.

В первом опыте двум группам (каждая по 10 особей) 21-дневных поросят с ферм, отнятых от грудного вскармливания, вводили перорально дозу гемолитических бактерий Е.сой (50 мл; 109 КОЕ/мл), полученных из изолятов, выделенных из животных, больных колибактериозом. В этот же день одна группа получала аб йййит корм, содержащий 19% белковых компонентов и 3,75% (мас./мас.) распыленных на корм полностью высушенных бисерных частиц/гранул. Теоретически содержание полиме ров, полученных способом согласно изобретению, в гранулах составляло приблизительно 25% (мас./мас.). Далее группа без лечения получала только корм. Каждый поросенок съедал приблизительно 500 г корма в день. Мазки ректальных фекалий берут в исходный момент и через 48 ч после инфицирования Е.еой. Через 3 дня (в течение которых два поросенка из группы без лечения погибли от острой секреторной диареи) всех оставшихся поросят умерщвляли и определяли численность Е.сой в кусочках ткани двенадцатиперстной кишки полуколичественным методом, обычно используемым в микробиологии. После соскобов слизистой оболочки подсчет колоний проводят на чашках, которые засеивали предварительно разведенными образцами, причем оценку результатов проводят по условной шкале от 0 (самое низкое разведение) до 4 (самое большое разведение). После вскрытия не обнаружено ни одного случая воспаления слизистой оболочки желудка.

В нижеследующей таблице приведены результаты оценки численности гемолитических бактерий Е.сой в ректальных фекалиях поросят в двух группах в день инфицирования и через 48 ч.

Исходный момент	Через 48 ч
Без лечения	Обработка с лечением	Без лечения	Обработка с лечением
1	2	1	0
0	0	3	1
1	1	4	2
1	0	4	0
0	1	3	1
0	2	2	1
0	1	1	1
1	1	4	0
0	0	4	2
0	0	2	2
Итого 4	8	28	10

Через 48 ч число гемолитических бактерий Е.сой в фекалиях поросят, получавших полимеры, полученные согласно изобретению, значительно ниже по сравнению с животными без лечения (Х²=16,24; р=<0,001).

Кроме того, определяют распределение гемолитических бактерий Е.еой в верхней (25%) и в средней (50%) части тощей кишки животных (после забоя) с лечением и без лечения. Получают следующие результаты:

25%	50%
Без лечения	Обработка с лечением	Без лечения	Обработка с лечением
1	1	2	1
0	0	1	0
1	1	4	4
3*	0	4*	0
2	0	3	1
1	1	2	1

1	3	2	3
4	0	4	0
3*	20	4*	0
1	0	2	0
Итого 17	6	28	9

* Погибшие животные.

У животных с лечением наблюдается значительное снижение численности гемолитических бактерий Е.сой как в верхней части (25%) (Х²=7,38; р<0,01), так и в средней части (50%) тощей кишки (Х²=16,24; р<0,001).

Другой опыт проводили в аналогичных условиях за исключением того, что в каждую группу включают по 15 особей поросят, только что отнятых от грудного вскармливания. Дозу для исходного инфицирования бактериями Е.еой снижают до 1/3 от указанной выше, гранулы прологированного действия содержали 20% (мас./мас.) композиции согласно изобретению. В течение 21 дня регистрируют прирост в весе и продолжительность диареи в днях у животных. Полученные статистически достоверные результаты свидетельствуют о том, что после лечения животных наблюдается значительное снижение продолжительности диареи и увеличение прироста в весе по сравнению с контрольной группой.

Прирост в живом весе и продолжительность диареи в днях
Группа	Контрольная	Обработанная
Число	15	15
Средний исходный вес, кг, 1-ый день	4,77	4,43
Стандартная ошибка	0,22	0,19
Относительная величина, %	100,00	92,00
Средний конечный вес, кг, 21-ый день	6,63	7,31
Стандартная ошибка	0,35	0,36
Относительная величина, %	100,00	110,30
Средний прирост в весе в день, г, 0-21 дней	94,18	137,33
Стандартная ошибка	10,27	13,16
Относительная величина, %*	100,00	146,00
Продолжительность диареи в днях**	32	13

* 1=2,47; р=0,02 (двухфазный анализ) ** Ни одного случая диареи через 10 дней.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ получения полимеров и/или сополимеров, используемых для внутреннего введения людям, животным или птицам и содержащих повторяющиеся звенья формулы

К

I где В означает Н или алкил, такой как С₁С₄алкил, либо указанные звенья в гидратированной, полуацетальной или ацетальной форме, отличающийся тем, что указанные полимеры и/или сополимеры нагревают от комнатной температуры до температуры, не превышающей 100°С, в присутствии воздуха и получают целевой продукт с содержанием 0,1-5 молей карбоксильных групп на 1 кг полимера и/или сополимера.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанные полимеры и/или сополимеры нагре вают до температуры, находящейся в интервале от 80 до 85°С.
3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что полученные полимеры и/или сополимеры предпочтительно растворимы в водной среде.
4. Композиция, предназначенная для внутреннего введения людям, животным или птицам, отличающаяся тем, что она содержит полимеры и/или сополимеры, полученные способом по любому из пп.1-3.