EA002734B1 - Устройство для быстрого измерения ферментативной активности - Google Patents

Устройство для быстрого измерения ферментативной активности Download PDF

Info

Publication number
EA002734B1
EA002734B1 EA200100247A EA200100247A EA002734B1 EA 002734 B1 EA002734 B1 EA 002734B1 EA 200100247 A EA200100247 A EA 200100247A EA 200100247 A EA200100247 A EA 200100247A EA 002734 B1 EA002734 B1 EA 002734B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
container
liquid phase
enzymatic activity
reagent
solid
Prior art date
Application number
EA200100247A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200100247A1 (ru
Inventor
Нейл Робертс
Джанет Мурс
Original Assignee
Авентис Анималь Нютрисьон С.А.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Авентис Анималь Нютрисьон С.А. filed Critical Авентис Анималь Нютрисьон С.А.
Publication of EA200100247A1 publication Critical patent/EA200100247A1/ru
Publication of EA002734B1 publication Critical patent/EA002734B1/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение касается устройства для быстрого измерения ферментативной активности в образце твердого материала, содержащего контейнер для приема исследуемого образца, реагент, подходящий для фермента, активность которого измеряется, и подходящий буферный раствор для помещения в него упомянутого образца и реагента, который является субстратом для указанного фермента и содержит хромофор, причем устройство снабжено градуированным эталоном, позволяющим определить ферментативную активность с учетом цвета полученной жидкой фазы в контейнере. Также описан способ измерения ферментативной активности образца твердого материала с использованием указанного устройства, предусматривающий помещение образца определенного веса в контейнер устройства, введение реагента в форме твердого шарика, добавление определенного количества подходящего буферного раствора, герметичное закрывание контейнера, энергичное встряхивание, отделение полученной жидкой фазы от твердой фазы, сбор жидкой фазы и определение ферментативной активности путем сравнения окрашивания жидкой фазы с цветом эталона.

Description

Настоящее изобретение касается устройства для быстрого измерения ферментативной активности в твердом пищевом продукте, содержащего: (ί) резервуар для содержания исследуемого образца, (ίί) реактив, подходящий для фермента, активность которого измеряется, и (ίίί) буферный раствор, позволяющий растворить этот фермент.
Пищевым продуктом предпочтительно является твердый пищевой продукт, не прошедший тепловую обработку перед измерением. В пищевые продукты, предназначенные для корма скота, обычно добавляют ферменты, служащие в основном для улучшения усвоения пищевого рациона. Эти ферменты обычно диспергируют в жидком состоянии в пищевых продуктах так, как описано, в частности, в ЕР 0789291. Ферменты могут также добавляться в пищевой продукт в порошкообразном виде.
В этой связи возникают две проблемы, первая связана с проверкой однородности распределения добавленных в пищевой продукт ферментов, а вторая - с тем, чтобы быстро определить активность фермента или ферментов, добавленных в пищевые продукты. Эти проблемы были подняты, в частности, производителями кормов и животноводами, которые хотят проверять качество кормов, которые они дают животным. До настоящего времени ферментативная активность могла измеряться только в лаборатории, что вызывало проблемы, связанные с интерпретацией и сроками, и эти проблемы являлись неудобным обстоятельством в случаях, когда требовалось получить результат немедленно.
Настоящее изобретение решает данную проблему с помощью предлагаемого устройства для измерения ферментативной активности любого обогащенного ферментом продукта для кормления скота. Данное устройство, принцип измерения которого основан на колориметрической реакции, позволяет одновременно осуществлять качественное измерение ферментативной активности образца и полуколичественное измерение данного образца.
На фиг.1 представлен вид устройства по изобретению, а именно устройства для измерения ферментативной активности, имеющего форму столбика.
В последующем описании ссылка дается на упомянутую выше фигуру.
Устройство, являющееся предметом настоящего изобретения, включает резервуар для содержания исследуемого образца, реактив, подходящий для фермента, активность которого измеряется, и буферный раствор, позволяющий растворить этот фермент.
Резервуаром данного устройства может быть столбик (фиг. 1) (в не ограничивающем смысле), образованный из нижней узкой градуированной части (11) и верхней широкой части в виде воронки (12), облегчающей введение различных реактивов в устройство, а также их перемешивание путем взбалтывания. Воронка может также быть снабжена системой герметичного закрывания (13), такой как крышка, прикрепленная к воронке перемычкой (131).
Резервуар может быть также образован трубкой одноразового использования (см. фиг. 2).
Резервуар может быть выполнен из синтетического материала, такого как пластик одноразового использования.
Предпочтительно, столбик может иметь на своем основании удлинение (14), отсекаемое для вытекания жидкой фазы содержимого столбика. Над этим удлинением имеется сужение (141), удерживающее фрагменты твердого пищевого продукта.
Измерение ферментативной активности основано на реакции окрашивания Αζοметодом. Принцип реакции окрашивания Αζοметодом основан на ферментативном гидролизе специфичного для фермента субстрата, связанного с хромофором. В результате реакции получаются растворимые олигомеры, которые окрашивают среду в синий цвет. Абсорбционная способность может измеряться при 590 нм.
Реактив, используемый в устройстве, - это связанный с хромофором субстрат катализируемой ферментом реакции.
Устройство включает также буферный раствор, позволяющий растворять ферменты, нанесенные на пищевой продукт методом распыления, и поддерживающий оптимальный уровень рН.
В качестве неограничивающего примера можно привести устройство для определения ксиланазной активности.
Для измерения ксиланазной активности используют реактив, представляющий собой комплекс ремазол-ксилана овса или пшеницы с бриллиантовым синим В, или Ксиламазу АХ (фирмы Мсд-иутс). состоящую из арабоксилана овса или пшеницы, связанного с красителем.
Применяемый буферный раствор выбран из растворов уксусной кислоты/ацетата натрия, хлоргидрата глицина/глицина, аконитовой кислоты/гидроокиси натрия, муравьиной кислоты/формиата натрия.
В качестве примера можно также привести устройство для определения бета-глюканазной активности, основанное также на реакции окрашивания Αζο-методом.
Из применяемых субстратов можно упомянуть 1,3:1,4-в-О-глюкан с Ремазолбриллиантовым синим В и Бета-Г люказим, продаваемый фирмой Мсд-иутс и состоящий из бета-глюкана, связанного с азурином.
Применяемый буферный раствор выбран из растворов уксусной кислоты/ацетата натрия, хлоргидрата глицина/глицина, аконитовой кислоты/гидроокиси натрия, муравьиной кислоты/формиата натрия.
Для измерения целлюлазной активности в качестве субстрата используют пластинки Се11ахуше (продаваемые фирмой Медахуте), В состав этих пластинок входят субстраты на базе целлюлозы и\или целлюлозы и ксилогликанов, полимеризованных с красителем азурином.
Предпочтительный вариант способа осуществления настоящего изобретения использует твердый реактив.
Предпочтительно, для более легкого растворения фермента к субстрату, содержащему хромофор, может быть добавлено поверхностно-активное вещество. Таким поверхностноактивным веществом может быть лаурилсульфат натрия или додецилсульфат натрия.
В соответствии с наиболее предпочтительным способом осуществления изобретения измерение проводят в четыре стадии:
- в резервуар (1) вводят 10 мл образца, ферментативную активность которого требуется измерить, а если образец твердый, то он должен заполнить резервуар до отметки 10 мл;
- вводят реактив в виде твердого шарика;
- вводят специальный буферный раствор до отметки 20 мл; и
- многократно интенсивно встряхивают столбик после закрытия его крышкой,
При необходимости можно предусмотреть дополнительную стадию разделения жидкой и твердой фаз (центрифугированием или фильтрацией), чтобы собрать жидкую фазу и измерить интенсивность окрашивания спектрофотометрически или путем простого сравнения с цветовой шкалой.
Появление синей окраски через 4-8 ч после начала реакции подтверждает присутствие ферментативной активности, причем интенсивность окраски пропорциональна ферментативной активности, присутствующей в образце.
Другое преимущество настоящего изобретения заключается в том, что оно позволяет осуществить полуколичественное измерение ферментативной активности. Жидкая фаза может быть извлечена из столбика путем срезания отсекаемого удлинения. Интенсивность ее окрашивания можно затем сравнить с градуированным эталоном оптической плотности (ΌΘ),
Кроме того, что данный способ позволяет осуществлять быстрое измерение, он очень прост и не требует специального оборудования. Например, производитель кормов или животновод могут провести контрольное измерение сразу после изготовления пищевого продукта,
Настоящее изобретение далее поясняется с помощью следующих примеров, которые не должны рассматриваться как ограничивающие данное изобретение.
Примеры,
Две серии опытов были проведены на ксилане ЬС ВоуаЫо (смесь ксиланазы и бетаглюканазы РешсШшт ГишсЫоыцп) и на ксиланазе ТВЬС ВоуаЫо (ксиланаза Тпсйобегша геем). ксиланазная активность которых составляет 350-550 иАХС/мл. По оценкам, в результате обработки пищевых продуктов путем распыления в них жидких соединений получают активность порядка 70-110 иАХС на кг пищевого продукта.
Применяемый буферный раствор - это ацетатный буферный раствор, рН которого составляет 4,7, Обработке распылением может подвергаться порошкообразный или гранулированный пищевой продукт.
Образец Активность (исходная) Наблюдение через 3 ч Ό, О, при 590 нм через 4 ч 30 мин И,О, при 590 нм через 8 ч Наблюдение через 8 ч
Ксиланаза ТВЬС на гранулах 1336 синий:+++ >3,0 >3,0 синий: +++
Ксиланаза ТВЬС на гранулах 886,7 синий: + 1,567 2,685 синий: ++
Ксиланаза ТВЬС на гранулах 1469,25 синий: + 1,429 2,652 синий: ++
Ксиланаза порошок до гранулирования 631,4 окраски нет 0,201 0,666 синий: +
Ксиланаза ЬС на гранулах 1144 синий: + 2,309 2,376 синий: +++
Ксиланаза ЬС на гранулах 1386,7 синий:+ 1,382 2,484 синий: +++
Ксиланаза ЬС на гранулах 1450,5 синий:+++ 2,872 2,85 синий: +++
Ксиланаза ЬС на гранулах 1330,5 синий:++ 1,233 2,096 синий: +++

Claims (6)

1. Устройство для быстрого измерения ферментативной активности в образце твердого материала, содержащее контейнер для приема исследуемого образца, реагент, подходящий для фермента, активность которого измеряется, и подходящий буферный раствор для помещения в него упомянутого образца и реагента, который является субстратом для указанного фермента и содержит хромофор, причем устройство снабжено градуированным эталоном, позволяющим определить ферментативную активность с учетом цвета полученной жидкой фазы в контейнере.
2. Устройство по п.1, отличающееся тем, что указанным резервуаром является градуированная трубка или одноразовый столбик, снабженный системой герметичного закрывания.
3. Устройство по п.2, отличающееся тем, что указанный контейнер имеет на своем основании удлинение, отсекаемое для вытекания жидкой фазы.
4. Устройство по любому из пп.1-3, отличающееся тем, что указанный реагент находится в твердом или жидком состоянии.
5. Устройство по п.1, отличающееся тем, что указанный буферный раствор выбран из группы, состоящей из растворов уксусной кислоты/ацетата натрия, хлоргидрата глицина/глицина, аконитовой кислоты/гидроокиси натрия, муравьиной кислоты/формиата натрия.
6. Способ измерения ферментативной активности образца твердого материала с использованием устройства по любому из пп.1-5, предусматривающий помещение образца определенного веса в контейнер указанного устройства, введение реагента в форме твердого шарика, добавление определенного количества подходящего буферного раствора, герметичное закрывание контейнера, энергичное встряхивание, отделение полученной жидкой фазы от твердой фазы, сбор жидкой фазы и определение ферментативной активности путем сравнения окрашивания жидкой фазы с цветом эталона.
EA200100247A 1998-08-19 1999-08-16 Устройство для быстрого измерения ферментативной активности EA002734B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9810533A FR2782523B1 (fr) 1998-08-19 1998-08-19 Dispositif de mesure rapide de l'activite enzymatique
PCT/FR1999/001990 WO2000011136A1 (fr) 1998-08-19 1999-08-16 Dispositif de mesure rapide de l'activite enzymatique

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200100247A1 EA200100247A1 (ru) 2001-08-27
EA002734B1 true EA002734B1 (ru) 2002-08-29

Family

ID=9529765

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200100247A EA002734B1 (ru) 1998-08-19 1999-08-16 Устройство для быстрого измерения ферментативной активности

Country Status (19)

Country Link
US (1) US6821722B1 (ru)
EP (1) EP1105456B1 (ru)
JP (1) JP4531258B2 (ru)
KR (1) KR20010072751A (ru)
CN (1) CN1181182C (ru)
AT (1) ATE254169T1 (ru)
AU (1) AU752174B2 (ru)
BR (1) BR9914294B1 (ru)
CA (1) CA2341581C (ru)
DE (1) DE69912806T2 (ru)
DK (1) DK1105456T3 (ru)
EA (1) EA002734B1 (ru)
ES (1) ES2209474T3 (ru)
FR (1) FR2782523B1 (ru)
ID (1) ID28921A (ru)
MX (1) MXPA01001628A (ru)
PT (1) PT1105456E (ru)
SA (1) SA00200919B1 (ru)
WO (1) WO2000011136A1 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1646725A2 (en) * 2003-07-07 2006-04-19 Syngenta Participations AG Reagents, methods and kits for detecting feed enzymes

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2341865A1 (fr) * 1976-02-19 1977-09-16 Api Labor Support pour le dosage d'activites enzymatiques et procede de dosage a l'aide de ce support
IT8505253A0 (it) * 1985-11-15 1985-11-15 Copan Srl Tampone con serbatoio di terreno di trasporto per il prelievo e il trasferimento in provetta di campioni di sostenze da analizzare.
ATE97450T1 (de) * 1989-02-02 1993-12-15 Abbott Lab Verfahren und vorrichtung zur quantitativen chromatographierung.
JPH04229168A (ja) * 1990-12-26 1992-08-18 Hoechst Japan Ltd 酵素の活性と酵素反応阻害物質の活性を測定するための器具及び方法
GB2301103B (en) * 1995-05-23 1999-12-22 Danisco An enzyme system comprising ferulic acid esterase
US6001587A (en) * 1997-04-08 1999-12-14 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Chemically specific patterning on solid surfaces using surface immobilized enzymes

Also Published As

Publication number Publication date
JP2002523038A (ja) 2002-07-30
EP1105456B1 (fr) 2003-11-12
EA200100247A1 (ru) 2001-08-27
EP1105456A1 (fr) 2001-06-13
ATE254169T1 (de) 2003-11-15
ES2209474T3 (es) 2004-06-16
AU752174B2 (en) 2002-09-05
FR2782523A1 (fr) 2000-02-25
DE69912806D1 (de) 2003-12-18
CA2341581A1 (fr) 2000-03-02
MXPA01001628A (es) 2002-04-08
AU5172799A (en) 2000-03-14
SA00200919B1 (ar) 2006-06-10
US6821722B1 (en) 2004-11-23
WO2000011136A1 (fr) 2000-03-02
FR2782523B1 (fr) 2000-10-06
JP4531258B2 (ja) 2010-08-25
BR9914294A (pt) 2001-11-06
ID28921A (id) 2001-07-12
CA2341581C (fr) 2010-10-12
DK1105456T3 (da) 2004-02-23
BR9914294B1 (pt) 2011-01-25
CN1181182C (zh) 2004-12-22
PT1105456E (pt) 2004-04-30
CN1312854A (zh) 2001-09-12
KR20010072751A (ko) 2001-07-31
DE69912806T2 (de) 2004-09-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101398386B (zh) 乳品中尿素检测试纸的制备及尿素检测方法
ES8301366A1 (es) Procedimiento y dispositivo de analisis simultaneo, especialmente para analisis clinicos. otrosi.
CN107918018A (zh) 一种基于抗体技术的近场光波靶向传感器检测甲壳类过敏原的方法
CN108205059A (zh) 一种测定降钙素含量的试剂盒及其测试方法
EP0546027B1 (en) Method for determining boar taint producing indole compounds in pork as well as a sample container to be used by the method
EA002734B1 (ru) Устройство для быстрого измерения ферментативной активности
US6051394A (en) Detection of microorganisms
Davis et al. Measurement of protein using flow injection analysis with bicinchoninic acid
CN101413897A (zh) 一种乳中亚硝酸盐屏蔽剂的检测方法及检测试剂盒
CN111122752B (zh) 一种河豚毒素成分分析标准物质的制备方法
CN108226464A (zh) 一种测定甲状腺球蛋白含量的试剂盒及其测试方法
CN106483300A (zh) 一种检测呋喃唑酮代谢物的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法与应用
CN1232825C (zh) 检测盐酸克伦特罗的参比免疫层析试纸及其检测方法
CN212568491U (zh) 全自动农残检测装置
CN108896541A (zh) 一种蔬菜农残速测假阳性的判别方法及卡
CA2639152A1 (en) Automated protein analyzer
CN108241064A (zh) 一种测定甲状腺球蛋白抗体含量的试剂盒及其测试方法
CN215953634U (zh) 一种瘦肉精三联快速检测卡
CN215953630U (zh) 一种沙丁胺醇快速检测卡
CN109283344A (zh) 一种用于检测apoA I、apoB的试剂盒及其稳定剂的制备方法
IE913920A1 (en) A process and a test means for the determination of urea
CN108548771A (zh) 一种用于流式检测的细胞固定液及其使用方法
EP0097506A2 (en) Method for diagnosis of mastitis using enzyme N-acetyl-beta-D-glucosaminidase and reaction systems for use in method
García-Moreno et al. Spectrofluorometric determination and thin layer chromatographic identification of serotonin in foods
CN108152273A (zh) 一种测定全段甲状旁腺激素含量的试剂盒及其测试方法

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM

PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment
MK4A Patent expired

Designated state(s): RU