DK3124973T3 - Aflatoxin-nanobody-immunabsorberingsmiddel og immunoaffinitetssøjle og fremstillingsfremgangsmåde og anvendelse deraf - Google Patents

Aflatoxin-nanobody-immunabsorberingsmiddel og immunoaffinitetssøjle og fremstillingsfremgangsmåde og anvendelse deraf Download PDF

Info

Publication number
DK3124973T3
DK3124973T3 DK14887513.1T DK14887513T DK3124973T3 DK 3124973 T3 DK3124973 T3 DK 3124973T3 DK 14887513 T DK14887513 T DK 14887513T DK 3124973 T3 DK3124973 T3 DK 3124973T3
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
aflatoxin
vhh antibody
antibody
silica gel
sepharose
Prior art date
Application number
DK14887513.1T
Other languages
English (en)
Inventor
Peiwu Li
Qi Zhang
Yanru Wang
Zhaowei Zhang
Xiaoxia Ding
Original Assignee
Oilcrops Res Institute Of Chinese Academy Of Agriculture Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Oilcrops Res Institute Of Chinese Academy Of Agriculture Sciences filed Critical Oilcrops Res Institute Of Chinese Academy Of Agriculture Sciences
Application granted granted Critical
Publication of DK3124973T3 publication Critical patent/DK3124973T3/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/14—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from fungi, algea or lichens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56961—Plant cells or fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/37—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from fungi
    • G01N2333/38—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from fungi from Aspergillus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Claims (7)

1. Aflatoxin-VHH-antistof-immunabsorberingsmiddel, kendetegnet ved at immunabsorberingsmidlet indeholder fastfasebærer og aflatoxin-VHH-antistof koblet med fastfasebæreren, hvor aflatoxin-VHH-antistoffet er aflatoxin B1-VHH-antistof 2014AFB-G15, hvis aminosyresekvens er som gengivet i SEQ ID NO:7, og hvis kodningssekvens er som gengivet i SEQ ID NO:8.
2. Aflatoxin-VHH-antistof-immunabsorberingsmiddel ifølge krav 1, kendetegnet ved at tre komplementaritetsbestemmende regioner af nævnte aflatoxin B1-VHH-an-tistof 2014AFB-G15 henholdsvis har aminosyresekvenser omfattende amino-syresekvensen af CDR1 som gengivet i SEQ ID NO:1, aminosyresekvensen af CDR2 som gengivet i SEQ ID NO:2 og aminosyresekvensen af CDR3 som gengivet i SEQ ID NO:3; og de tre komplementaritetsbestemmende regioner deraf henholdsvis har kodningssekvenser omfattende kodningssekvensen af CDR1 som gengivet i SEQ ID NO:4, kodningssekvensen af CDR2 som gengivet i SEQ ID NO:5 og kodningssekvensen af CDR3 som gengivet i SEQ ID NO:6.
3. Aflatoxin-VHH-antistof-immunabsorberingsmiddel ifølge krav 1, kendetegnet ved at fastfasebæreren er sepharosegel- eller silicagel-mikropartikler.
4. Fremgangsmåde til fremstilling af aflatoxin-VHH-antistof-immunabsorbe-ringsmidlet ifølge krav 1, kendetegnet ved at, når fastfasebæreren er silicagel-mikropartikler, så omfatter fremgangsmåden trinnene: at afveje 1-5 g silicagel-mikropartikler og skiftevis vaske silicagel-mikropartiklerne med rent vand og phosphatbuffer med en pFI-værdi på 6; at suspendere silicagel-mikropartiklerne i 5-25 ml phosphatbuffer med en pH-værdi på 6 og omrøre, indtil alle silicagel-mikropartiklerne er suspenderet, til frembringelse af en silicagel-mikropartikel-suspension; at opløse 2-10 mg aflatoxin B1-VFIFI-antistof 2014AFB-G15 i 1-5 ml phosphatbuffer med en pH-værdi på 6 og drypvist tilsætte den resulterende opløsning til silicagel-mikro-partikel-opløsningen; at afveje 70-350 mg carbodiimid og hurtigt tilsætte car-bodiimid til silicagel-mikropartikel-suspensionen og omsætte under omrøring ved 4 °C i 18-22 t. til dannelse af aflatoxin-VHH-antistof-immunabsorberings-middel med silicagel-mikropartikler som fastfasebæreren; eller når fastfasebæreren er sepharosegel, så omfatter fremgangsmåden trinnene: at afveje 0,3-1 g sepharose og vaske sepharosen gentagne gange med 1 mM HCI-opløsning; at suspendere sepharosen i 5-15 ml koblingsbuffer, tilsætte 0,6-2 mg aflatoxin B1-VHH-antistof 2014AFB-G15 deri og omsætte den resulterende opløsning under omrøring i 1-2 t. ved rumtemperatur til frembringelse af sepharosegelsuspension; at filtrere antistofopløsningen i sepharosegelop-løsningen, der ikke er koblet med sepharosegelen, og vaske sepharosegelen med koblingsbuffer; at tilsætte 0,1 M Tris-HCI-buffer med en pH-værdi på 8,0 og omsætte ved rumtemperatur i 2 t.; og vaske sepharosegelen skiftevis med 0,1 M Tris-HCI-buffer med en pH-værdi på 8,0 og 0,1 M Tris-HCI-buffer med en pH-værdi på 4,0 til dannelse af aflatoxin-VHH-antistof-immunabsorberings-middel med sepharosegel som fastfasebæreren; hvor koblingsbufferen er 0,1 M NaCCh og 0,5 M NaCI med en pH-værdi på 8,3.
5. Aflatoxin-VHH-antistof-immunoaffinitetssøjle ladet med aflatoxin-VHH-anti-stof-immunabsorberingsmidlet ifølge krav 1.
6. Fremgangsmåde til fremstilling af aflatoxin-VHH-antistof-immunoaffinitets-søjlen ifølge krav 5, omfattende trinnene: at fylde aflatoxin-VHH-antistof-im-munabsorberingsmidlet i et fastfase-ekstraktionsrør, at tilsætte 0,01 M phosphatbuffer med en pH-værdi på 6 deri og lade den resulterende opløsning udfældes naturligt; at vaske med 0,01 M phosphatbuffer med en pH-værdi på 6 og lagre det resulterende fyldstof i 0,01 M phosphatbuffer med en pH-værdi på 6 indeholdende 0,02 vægt-% natriumazid, hvorved der opnås en aflatoxin-VHH-antistof-immunoaffinitetssøjle.
7. Fremgangsmåde til oprensning og koncentration af aflatoxin B1 indeholdt i en ekstraktionsopløsning af en prøve under anvendelse af aflatoxin-VHH-an-tistof-immunoaffinitetssøjlen ifølge krav 4, hvilken fremgangsmåde omfatter: først at skylle den fremstillede aflatoxin-VHH-antistof-immunoaffinitetssøjle med renset vand, derefter at tilsætte ekstraktionsopløsningen af en prøve; at skylle med renset vand, hvor efter fuldstændig væskedrænering, at eluere med methanol og at opsamle eluatet, hvor eluatet er renset og koncentreret ekstraktion af prøven, som kan anvendes direkte til ladning i en maskine til detektering.
DK14887513.1T 2014-03-28 2014-08-27 Aflatoxin-nanobody-immunabsorberingsmiddel og immunoaffinitetssøjle og fremstillingsfremgangsmåde og anvendelse deraf DK3124973T3 (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410121834.8A CN103861569B (zh) 2014-03-28 2014-03-28 一种黄曲霉毒素纳米抗体免疫吸附剂、免疫亲和柱及其制备方法和应用
PCT/CN2014/085316 WO2015143834A1 (zh) 2014-03-28 2014-08-27 一种黄曲霉毒素纳米抗体免疫吸附剂、免疫亲和柱及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DK3124973T3 true DK3124973T3 (da) 2019-04-08

Family

ID=50900937

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK14887513.1T DK3124973T3 (da) 2014-03-28 2014-08-27 Aflatoxin-nanobody-immunabsorberingsmiddel og immunoaffinitetssøjle og fremstillingsfremgangsmåde og anvendelse deraf

Country Status (8)

Country Link
US (1) US9631010B2 (da)
EP (1) EP3124973B1 (da)
JP (1) JP6092486B2 (da)
CN (1) CN103861569B (da)
DK (1) DK3124973T3 (da)
ES (1) ES2718624T3 (da)
SG (1) SG11201605383RA (da)
WO (1) WO2015143834A1 (da)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103866401B (zh) * 2014-03-28 2014-11-26 中国农业科学院油料作物研究所 一种黄曲霉毒素纳米抗体基因库、构建方法、用途及黄曲霉毒素b1纳米抗体2014afb-g15
CN103861569B (zh) * 2014-03-28 2015-04-22 中国农业科学院油料作物研究所 一种黄曲霉毒素纳米抗体免疫吸附剂、免疫亲和柱及其制备方法和应用
CN104399283B (zh) * 2014-12-04 2016-02-17 江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所 黄曲霉毒素b1适配体亲和柱的制备方法
CN104707362A (zh) * 2015-01-05 2015-06-17 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心 净化3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素、赭曲霉毒素a、玉米赤霉烯酮复合亲和柱
CN104610451A (zh) * 2015-01-30 2015-05-13 东南大学 一种针对黄曲霉毒素b1纳米抗体及其编码序列和应用
CN105399824A (zh) * 2015-12-02 2016-03-16 南昌大学 特异识别黄曲霉毒素的单域重链抗体
CN105399821A (zh) * 2015-12-02 2016-03-16 南昌大学 针对黄曲霉毒素的单域重链抗体
CN105396557A (zh) * 2015-12-02 2016-03-16 南昌大学 基于特异识别黄曲霉毒素纳米抗体的亲和吸附材料
CN105413644A (zh) * 2015-12-02 2016-03-23 南昌大学 基于特异结合黄曲霉毒素单域重链抗体的亲和吸附材料
CN105399823A (zh) * 2015-12-02 2016-03-16 南昌大学 能特异性结合黄曲霉毒素的纳米抗体
CN105399825A (zh) * 2015-12-02 2016-03-16 南昌大学 一种特异识别黄曲霉毒素的纳米抗体
CN107085098A (zh) * 2015-12-02 2017-08-22 南昌大学 一种黄曲霉毒素纳米抗体免疫亲和吸附材料
CN105399822A (zh) * 2015-12-02 2016-03-16 南昌大学 特异识别黄曲霉毒素的纳米抗体
CN105396560A (zh) * 2015-12-02 2016-03-16 南昌大学 基于抗黄曲霉毒素单域重链抗体的亲和吸附材料
CN105384816A (zh) * 2015-12-02 2016-03-09 南昌大学 抗黄曲霉毒素的纳米抗体
CN105396558A (zh) * 2015-12-02 2016-03-16 南昌大学 基于抗afb1纳米抗体的亲和吸附材料
CN105384817A (zh) * 2015-12-02 2016-03-09 南昌大学 抗afb1的纳米抗体
CN107144657B (zh) * 2017-05-19 2018-08-10 南京财经大学 黄曲霉毒素b1适配体亲和毛细管整体柱的制备及应用
CN108535376A (zh) * 2018-03-30 2018-09-14 中国农业科学院油料作物研究所 一种植物蛋白饮料中黄曲霉毒素的检测方法
CN109627334B (zh) * 2019-01-29 2020-07-17 康元医疗科技(大连)有限公司 一种纳米抗体、以该纳米抗体为配基的吸附剂及其用途
CN109705215B (zh) * 2019-02-21 2020-09-04 武汉中科兴达技术有限公司 一种具有高特异性识别黄曲霉毒素b1的纳米抗体2018afb-n11及其应用
CN110538640A (zh) * 2019-09-27 2019-12-06 江苏大学 一种真菌毒素壳聚糖免疫亲和吸附剂的制备方法及用途
CN111154001A (zh) * 2019-12-30 2020-05-15 南昌大学 一种黄曲霉毒素b1纳米抗体免疫吸附材料及其制备方法和应用
CN111122847B (zh) * 2020-01-22 2022-09-20 福建中医药大学 一种基于适配体的现场快速检测黄曲霉毒素b1的方法
CN111701576B (zh) * 2020-05-26 2023-07-28 武汉瑞法医疗器械有限公司 西尼罗病毒免疫吸附剂的制备方法、免疫吸附剂及其应用
CN112305099B (zh) * 2020-10-15 2022-08-26 中国农业科学院油料作物研究所 黄曲霉毒素污染发生前的早期预警方法
CN113514632B (zh) * 2021-04-20 2024-06-25 中国科学技术大学 基于纳米抗体的微悬臂梁免疫传感方法
CN113721022B (zh) * 2021-09-07 2023-06-27 中国农业科学院油料作物研究所 农田黄曲霉毒素产毒菌相对丰度快速鉴别方法及其应用
CN114130377A (zh) * 2021-12-14 2022-03-04 无锡创谱生物科技有限公司 一种亲和层析填料、其制备方法及用途
CN114950371A (zh) * 2021-12-16 2022-08-30 四川大学华西医院 纳米抗体耦联填料及其制备方法及用途

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4818687A (en) * 1985-02-28 1989-04-04 Massachusetts Institute Of Technology Affinity column and process for detection of low molecular weight toxic substances
CN1588068A (zh) * 2004-09-07 2005-03-02 上海大学 黄曲霉毒素的检测方法
WO2008059837A1 (fr) * 2006-11-17 2008-05-22 Horiba, Ltd. Anticorps dirigé contre les aflatoxines, support utilisant ledit anticorps, procédé de détection immunologique des aflatoxines et procédé de concentration et de purification des aflatoxines
CN103157439B (zh) * 2011-12-09 2015-01-21 山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心 真菌毒素复合免疫吸附剂和免疫亲和柱与试剂盒及其应用
CN103869065B (zh) * 2014-03-28 2015-03-11 中国农业科学院油料作物研究所 一种黄曲霉毒素m1纳米抗体免疫吸附剂、免疫亲和柱及其制备方法和应用
CN103861569B (zh) * 2014-03-28 2015-04-22 中国农业科学院油料作物研究所 一种黄曲霉毒素纳米抗体免疫吸附剂、免疫亲和柱及其制备方法和应用
CN103866401B (zh) * 2014-03-28 2014-11-26 中国农业科学院油料作物研究所 一种黄曲霉毒素纳米抗体基因库、构建方法、用途及黄曲霉毒素b1纳米抗体2014afb-g15

Also Published As

Publication number Publication date
JP2016536353A (ja) 2016-11-24
SG11201605383RA (en) 2016-08-30
ES2718624T3 (es) 2019-07-03
EP3124973B1 (en) 2019-01-02
EP3124973A1 (en) 2017-02-01
CN103861569B (zh) 2015-04-22
US9631010B2 (en) 2017-04-25
CN103861569A (zh) 2014-06-18
EP3124973A4 (en) 2017-08-30
JP6092486B2 (ja) 2017-03-08
US20160318998A1 (en) 2016-11-03
WO2015143834A1 (zh) 2015-10-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK3124973T3 (da) Aflatoxin-nanobody-immunabsorberingsmiddel og immunoaffinitetssøjle og fremstillingsfremgangsmåde og anvendelse deraf
US9435776B2 (en) Immunosorbent and immunoaffinity column for aflatoxin M1 nanobody and preparation method thereof
EP3124498A1 (en) Aflatoxin b1 nanobody 2014afb-g15
US9128089B1 (en) Aflatoxin M1 nanobody 2014AFM-G2
CN106892980B (zh) 抗vegfr2单克隆抗体及其应用
CN109705215B (zh) 一种具有高特异性识别黄曲霉毒素b1的纳米抗体2018afb-n11及其应用
CN112028997B (zh) 抗ceacam5纳米抗体
CN114262377B (zh) 一种阻断cd70与其配体cd27结合的抗人cd70纳米抗体的制备方法及其编码序列
Plana et al. Development and application of recombinant antibody-based immunoassays to tetraconazole residue analysis in fruit juices
CN106084048A (zh) 抗cd3单域抗体
CN106084046A (zh) 抗cd3单域抗体
CN110684080B (zh) 一种适用于噻虫嗪残留分析的scFv-ELISA试剂盒
CN110133249B (zh) 净化黄曲霉毒素、环匹阿尼酸、赭曲霉毒素a和玉米赤霉烯酮免疫吸附剂及免疫亲和柱
CN109503711B (zh) 一种用于血凝方法检测pcv2病毒的双功能纳米抗体、编码基因及其应用
CN114702592B (zh) 一种识别喹硫磷农药的纳米抗体及酶联免疫分析方法
CN106117359A (zh) 抗cd3单域抗体
CN112920277B (zh) 分析溴氰虫酰胺和氯虫苯甲酰胺残留的vhh-elisa试剂盒及其应用
CN114671947A (zh) 乙肝病毒不同亚型表面s蛋白高亲和力纳米抗体及其应用
CN107417790B (zh) 一种适用于三唑磷残留分析的vhh-elisa试剂盒
CN115975015A (zh) 一种小反刍兽疫病毒（pprv）f蛋白纳米抗体和纳米抗体的制备、纯化及中和试验方法
CN106146661A (zh) 抗cd3单域抗体
CN117209606B (zh) 纳米抗体及其应用
CN106117358A (zh) 抗cd3单域抗体
CN106146662A (zh) 抗cd3单域抗体
CN106084049A (zh) 抗cd3单域抗体