DK173168B1 - 5alfa-androsten-17-oner og 5alfa-androstan-17-oner, der er virksomme mod kræft og obesitet, samt terapeutisk middel der ind - Google Patents

5alfa-androsten-17-oner og 5alfa-androstan-17-oner, der er virksomme mod kræft og obesitet, samt terapeutisk middel der ind Download PDF

Info

Publication number
DK173168B1
DK173168B1 DK198702593A DK259387A DK173168B1 DK 173168 B1 DK173168 B1 DK 173168B1 DK 198702593 A DK198702593 A DK 198702593A DK 259387 A DK259387 A DK 259387A DK 173168 B1 DK173168 B1 DK 173168B1
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
dhea
androsten
methyl
androstan
mice
Prior art date
Application number
DK198702593A
Other languages
English (en)
Other versions
DK259387A (da
DK259387D0 (da
Inventor
Arthur G Schwartz
Marvin Louis Lewbart
Original Assignee
Research Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Research Corp filed Critical Research Corp
Publication of DK259387D0 publication Critical patent/DK259387D0/da
Publication of DK259387A publication Critical patent/DK259387A/da
Application granted granted Critical
Publication of DK173168B1 publication Critical patent/DK173168B1/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J51/00—Normal steroids with unmodified cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not provided for in groups C07J1/00 - C07J43/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
    • C07J1/0003—Androstane derivatives
    • C07J1/0011—Androstane derivatives substituted in position 17 by a keto group
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
    • C07J1/0003—Androstane derivatives
    • C07J1/0018—Androstane derivatives substituted in position 17 beta, not substituted in position 17 alfa
    • C07J1/0022—Androstane derivatives substituted in position 17 beta, not substituted in position 17 alfa the substituent being an OH group free esterified or etherified
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
    • C07J1/0003—Androstane derivatives
    • C07J1/0018—Androstane derivatives substituted in position 17 beta, not substituted in position 17 alfa
    • C07J1/0022—Androstane derivatives substituted in position 17 beta, not substituted in position 17 alfa the substituent being an OH group free esterified or etherified
    • C07J1/0025—Esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J11/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 3
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J13/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen having a carbon-to-carbon double bond from or to position 17
    • C07J13/005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen having a carbon-to-carbon double bond from or to position 17 with double bond in position 16 (17)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J21/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen having an oxygen-containing hetero ring spiro-condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J21/005—Ketals
    • C07J21/008—Ketals at position 17
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring the nitrogen atom being directly linked to the cyclopenta(a)hydro phenanthrene skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring the nitrogen atom being directly linked to the cyclopenta(a)hydro phenanthrene skeleton
    • C07J41/0016—Oximes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/005—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of only two carbon atoms, e.g. pregnane derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J53/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by condensation with a carbocyclic rings or by formation of an additional ring by means of a direct link between two ring carbon atoms, including carboxyclic rings fused to the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton are included in this class
    • C07J53/002—Carbocyclic rings fused
    • C07J53/004—3 membered carbocyclic rings
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

i DK 173168 B1
Opfindelsen angår hidtil ukendte steroider, nærmere bestemt 5 5af-androsten-17-oner og 5of-androstan-17-oner, der er egnede som midler mod cancer, obesitet og diabetes og som hypolipi-dæmiske midler. Opfindelsen angår også terapeutiske midler, der indeholder de nævnte steroider.
Dehydroepiandrosteron (DHEA) og DHEA-sulfat er vigtige adrenal sekret ionsprodukter hos mennesker. Plasmakoncentrationen af DHEA-sulfat, som næst efter cholesterol er det mest udbredte steroid hos mennesker, undergår det mest udprægede aldersbe-slægtede forfald af noget kendt steroid.
Selv om DHEA-sulfat er hovedforstadiet af placental østrogen og kan omdannes til aktive androgener i perifert væv, er der ingen åbenbar biologisk rolle for hverken DHEA eller DHEA-sulfat hos det normale individ. Adskillige retrospektive og prospektive undersøgelser antyder, at kvinder med lavere koncentrationer end normalt af disse steroider kan være foruddis-poneret for udviklingen af brystcancer. Se f.eks. Brownsey et al., "Plasma dehydroepiandrosterone sulfate levels in patients with benign and malignant breast disease", Eur. J. Cancer, 8, 131-137 (1972)? Bulbrook et al., "Relation between urinary androgen and corticoid excretion and subsequent breast cancer", lancet 2, 395-398 (1971); Rose et al., "Plasma dehydroepian drosterone sulfate, androstenedione and cortisol, and urinary free cortisol excretion in breast cancer", Eur. J. Cancer, 13, 43-47 ( 1977); Wang et al., "Studies of the sulfate esters of dehydroepiandrosterone and androsterone in the blood of women with breast cancer", Eur. J. Cancer, 10, 477-482 (1974); og
Zumoff et al., "Abnormal 24-hr mean plasma concentrations of dehydroisoandrosterone and dehydroisoandrosterone sulfate in women with primary operable breast cancer". Cancer Research, 41, 3360-3363, September 1981.
2 DK 173168 B1
Det er også blevet fastslået, at DHEA er en kraftig ikke- kompetitiv inhibitor af pattedyrs giucose-6-phosphat-dehydro-genase (G6PDH). Se for eksempel Oertel et al., "The effects of steroids on glucose-6-phosphate dehydrogenase", J. Steroid 5 Biochem., 3, 493-496 (1972) og Marks et al., "Inhibition of mammalian giucose-6-phosphate dehydrogenase by steroids",
Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 46, 477-452 (1960). Endvidere beskrev Yen et al., "Prevention of obesity in AvY/a mice by dehydroepiandrosterone", Lipids, 12, 409-413 (1977), at 1angtids-administration af DHEA til VY-Avy/a-mus hindrede udvikling af obesitet uden at undertrykke appetitten.
Endvidere er det også kendt, at langtidsbehandling af C3H-mus med DHEA ud over at reducere vægtforøgelse uden at undertryk-15 ke appetitten udpræget inhiberer spontan brystcancerudvi kl ing og kan forhale ældningshastigheden. Det er blevet observeret, at DHEA antagoni serer kapaciteten af tumorpromotoren 12-0-te-tradecanoy1phorbo1 -13-acetat til at stimulere ^H-thymidin-inkorporering i museepi derm i s og i en dyrket rottenyre-20 ep ithelce11e1 inie. Se Schwartz, "Inhibition of spontaneous breast cancer formation in female C3H-Avy/a-mice by long-term treatment with dehydroepiandrosterone", Cancer Res., 39, 1129-1132 (1979); og Schwartz et al, "Dehydroepiandrosterone: an anti-obesity and ant i-carcinogenic agent", Nut. Cancer 3, 25 46-53 (1981).
Ben-David et al., "Anti-hypercholestero1emic effect of dehy-droepiandrosterone in rats", Proc. Soc. Expt. Biol. Med., 125, 1136-1140 (1967) har iagttaget, at DHEA-behand1 ing har en anti-hypercholesterolæmi sk virkning i mus, mens Coleman et al. (Diabetes 31, 830, 1982) beskriver, at administration af DHEA frembringer en udpræget hypog1ykæmi sk i C57BL/KsJ-db/db-mus.
De sidstnævnte forfattere antyder, at den terapeutiske virkning af DHEA kan skyldes dens metabolisme til østrogener.
3 5
Det er endvidere kendt, at DHEA og 16a-brom-epiandrosteron er inhibitorer af Epstein-Barr virusfremkaldt transformation af humane lymfocytter og at 16a-brom-epiandrosteron er en endnu 3 DK 173168 B1 kraftigere inhibitor af pattedyrs G6PDH end DHEA, Se Schwartz et al·, Carci nogens i s, bind 2, nr. 7, 683-686 (1981).
Mens DHEA har vist sig at være virksom på de før beskrevne 5 måder, er der imidlertid tegn på en østrogenisk virkning efter indgivelse over lengere tid. OHEA er ikke et østrogen per se, men det er velkendt, at det kan omdannes til østrogener. Derudover er den terapeutiske dosis af OHEA temmelig høj. Det ville derfor vare sardeles ønskeligt at tilvejebringe steroi-der, som samtidig med at de har den førnavnte fordel som OHEA, er mere virksomme og ikke giver nogen østrogenisk virkning.
Steroiderne ifølge den foreliggende opfindelse udviser signifikante og ønskelige farmakologiske egenskaber og er isar 15 egnede som cancerpraventive midler.
De omhandlede steroider er desuden egnede som midler mod obesitet, hyperglykæmi, 2 o ældning og hypercholesterolæmi.
Den foreliggende opfindelse angår endvidere steroider, som er egnede som anti-cancer-, anti-obesitet-, anti-hyperglykæmi-, anti-ældnings- oganti-hypercholesterolæmi-midler, 2 s som ikke viser tegn på østrogene virkninger.
Den foreliggende opfindelse omhandler også steroider, som er egnede til behandling og/eller forebyggelse af autoimmune sygdomme, såsom Coomb’s positive hæmolytisk 3 o anæmi og lupus erythematosus.
Den foreliggende opfindelse tilvejebringer hidtil ukendte 5a-androsten-17-oner og 5a-androstan-17-oner med formlen: 35 4 DK 173168 B1
IA
10 hvori hver Rj, R2, Rj, R5, Rg °9 R? kan være ens eller forskellige og hver uafhængig af hinanden er hydrogen eller lavere alkyl; X er fluor, chlor, hydroxy, hydrogen, lavere alkyl eller la-vere alkoxy; Z er lavere alkyl eller hydrogen; n er 1, når B-ringen er umættet, og n er 2, når B-ringen er mættet; med det forbehold, at mindst en af X og Z er forskellig fra hyrdrogen, og med det yderligere forbehold, at når B-ringen er mættet, kan X ikke være hydroxy eller lavere alkyl.
I formlen beskrevet ovenfor betegner (Ra)2/ hvori a er et helt tal 1, 2, 4, 5, 6 eller 7, at der er to substituenter på steroidringen ved en bestemt stilling. Hver Ra ved hver stilling 25 kan være ens eller forskellige og er enten hydrogen eller lavere alkyl. For eksempel betegner (Rj)2> at hver Rj kan være ens eller forskellige og at hver Rx uafhængigt af hinanden er hydrogen eller lavere alkyl.
I formlen ovenfor er de forskellige ringe betegnet som felger:
O
3 5 med hensyn til forbindelserne med formlen IA, kan B-ringen være mættet eller umættet. h++ betegner, at der kan være en 5 DK 173168 B1 ekstra binding til stede. Hvis B-ringen indeholder en dobbeltbinding, er n » 1, hvilket betyder, at der kun er en Rø-sub-stituent knyttet til B-ringen i steroiderne ifølge den foreliggende opfindelse.
5 O
*5
Hvis Β—rlngen er måttet, er n * 2, hvilket betyder, at der er 15 to R5~substituenter knyttet ti 1 b-ringen som vist nedenfor: - O? (r5)2
De forskellige substituenter er betegnet som varende i a-stil-25 lingen ved hjalp af en punkteret linie (---), der forbinder substi tuenterne til steroidkernen. Substi tuenterne er betegnet som varende i /S-sti 11 i ngen ved hjalp af en ubrudt linie (-), som forbinder substituenten til steroidkernen. I sådanne tilfalde hvor subst i tuenter ne kan vare enten i a- eller /3-30 stillingerne, er substi tuenterne angivet som varende forbundet til steroidkernen ved hjalp af en punkteret linie og en ubrudt linie anbragt side om side. Endvidere er carbonatomerne i steroiderne ifølge den foreliggende opfindelse nummereret i overensstemmelse med I.U.P. A.C.-nomenk1 aturen på følgende måde, og steroiderne har den angivne I.U.P. A.C.-stereokemi: 35 DK 173168 B1 6 »J, (Τι ~ ιϊ~^''ii' ^^hJ,-il i ,o yfή g
H
10 I overensstemmelse med den foreliggende opfindelse har det overraskende vist sig, at steroider med en bestemt struktur, beskrevet ovenfor og herefter mere detaljeret, er karakteriseret ved signifikante farmakologiske egenskaber uden toksiske 15 eller uønskede østrogene virkninger. Det vil sige at det helt overraskende har vist sig, at steroiderne ifølge den foreliggende opfindelse er egnede som cancerforebyggende midler, midler mod obes i tet, diabetes, ældning, autoimmunitet og hypercholesterolæmi, men i modsætning til DHEA er mere virk-20 somme og kun udviser meget ringe eller ingen østrogen virkning. Endvidere fremkalder forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse i modsætning til DHEA ikke leverforstørrelse og forøget katalaseaktivitet.
Ifølge den foreliggende opfindelse er alkylgrupperne fortrins-25 vis lavere alkyl, som kan være ligekædet eller forgrenet og indeholde op til 5 carbonatomer. Eksempler omfatter methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, pentyl, amyl og lignende. Den mest foretrukne alkylgruppe er methyl.
30
Yderligere variationer i strukturformlen, som repræsenterer forbindelserne ifølge opfindelsen, kan foretages uden signifi- 35 7 DK 173168 B1 kant at ændre de terapeutiske egenskaber. For eksempel kan al-kyldelene substitueres med en eller flere af en række sub-stituenter, såsom hydroxy, halogen, alkoxy og lignende.
5 En udførel sesform for forbindelsen med formlen I har formlen: ir7). o 'V* *5 hvor 1 hver Rj, R 2» R4, R5, Rg og R7 kan være ens eller forskellige og hver uafhængig af hinanden er hydrogen eller lavere alkyl; X er fluor, chlor, hydroxy, hydrogen, lavere alkyl eller lavere alkoxy; og Z er lavere alkyl eller hydrogen; med det forbehold, at mindst en af X og Z er forskellig fra hydrogen.
20 En anden udførelsesform for forbindelserne med formlen IA har form len: i! Å T (Re’2 t3V2 <KS>2
II
hvori 30 hver Rj, R2, R4, R5, Rg og R7 kan være ens eller forskellige og hver uafhængig af hinanden er hydrogen eller lavere alkyl; X er fluor, chlor, hydrogen eller lavere alkoxy; Z er lavere alkyl eller hydrogen; og med det forbehold, at mindst en af X og Z er forskellig fra 3 5 hydrogen.
8 DK 173168 B1
En foretrukken udføre 1 ses form for forbindelserne med formlen I har formi en: ' o5P- hvor 2 og X er som ovenfor beskrevet.
De foretrukne forbindelser med formlen II er 5a-androstan-17-on-derivaterne. Særligt foretrukne forbindelser har formlen: ‘ aS*· » 2° H_ hvor Z og X er som ovenfor beskrevet.
Særlige eksempler på forbindelser ifølge den foreliggende opfindelse omfatter: 16a-hydroxy-5-androsten-17-on; c o 16a-f 1 uor-5-androsten - 17-on ,· 16a-fluor-16/3-methyl-5-androsten-17-on; • l6a-methyl-5-androsten-17-on; 16/J-methyl-5-androsten-17-on ; 16a-fluor-5a-androstan-17-on;
v U
16a-fluor-16/5-methyl-5a-androstan-17-on; 16/S-methyl-5a-androstan-17-on.
Forbindelserne ifølge opfindelsen falder ind under definitionen af de forbindelser, der er beskrevet i dansk patentansøg-3 5 ning nr. 3753/84, men de her omhandlede forbindelser er ikke tidligere beskrevet. Som det fremgår af omstående forsøgsresultater har de her omhandlede forbindelser en uventet 5 9 DK 173168 B1 højere kraft som hsmmere af tumorigenesis sammenlignet med de forbindelser, der er beskrevet i dansk patentansøgning nr. 3753/84.
Steroiderne ifølge den foreliggende opfindelse kan fremstilles i overensstemmelse med konventionelle organiske synteser. De følgende "Synteser" belyser sådanne anvendelige organiske syntesetrin til brug ved fremstilling af de omhandlede steroider enten belyst ved fremstilling af disse eller ved analoge synteser af tilsvarende steroider.
10
For eksempel kan steroiderne fremstilles ud fra steroider, som er kendte eller et let tilgængelige, såsom dehydroepiandrosteron (DHEA), ved alkyleringsmetoder, haloge-neringsmetoder, hydroxyleringsmetoder eller substitutionsreaktioner, som er kendte 15 indenfor området. For de slutprodukter, som indeholder både en alkylgruppe og et halogen eller en hydroxygruppe, kan de forskellige substituenter sættes til steroidet i en hvilken som helst rækkefølge, men det foretrækkes, at alkyleringstrinnet går forud for halogeneringstrinnet, hydroxyleringstrinnet eller substitutionstrinnet.
20 I reaktionerne nedenfor anbringes de anførte reagenser i reak- tionsmediet, det vil sige f.eks. opløsningsmidler, som er inerte overfor produkterne og reaktanterne og som opløser reaktanterne. Opløsningsmidlerne omfatter »en er ikke begren-2 5 set til ethere, f.eks. diethylether, tetrahydrofuran, dioxan, pyridin og lignende. Reaktionerne foregår ved temperaturer og tryk, som er ti 1strekkelige for udførelse af den angivne substitution på de nedenfor beskrevne ringe. Ved 1 atm tryk kan temperaturerne ligge i området fra -80eC op til tilbagesva-30 1 i ngs temperaturer.
Syntese A: Alkylering
Carbon-1-alkyl er ing 35
En repræsentativ fremgangsmåde til alkylering ved carbon-1 og især syntesen af ία-methyl-desoxy-DHEA er anført i skema I.
Skema I
10 DK 173168 B1 CAc i 5 10 0Αϊ
=, ✓'vlA wJ
X}/X> J&Q0 ^ 2. Crij/pyr . 11 15 —
Allylisk bromering (f.eks. med N-bromsuccinimid (MBS)) af 17/5-acetoxyandrosta-1,4-dien-3-on 8 efterfulgt af behandling med 20 zink giver den ikke-konjugerede enon 9. Alkylering med organo-metalliske a 1ky1 er ingsmid 1 er, såsom 1 ithiodimethylcuprat, giver Ια-methylketonen 10a. På dette trin kan ketogruppen i 10a omdannes til methylen ved hjmlp af en Wolf-Kishner-reduktion eller Huang-Minlon-modifikationen deraf. Disse kraftige reak-2 5 tionsbetingelser resulterer i hydrolyse af det resulterende carbon-17-acetat, hvorved der fås hydroxydesoxyderivatet 17/5-hydroxy-1-a-methy1-5-androsten. Desoxyderivatet kan omdannes til slutproduktet ved oxidation med et oxidationsmiddel, såsom chromtrioxid i pyridin (11).
30
Syntese B: Carbon-2-alkylering
De følgende fremgangsmåder illustrerer alkylering ved carbon-2 og er figurativt belyst i skema 2 nedenfor.
35
Skema 2 11 DK 173168 B1
OH OH
5 ^ ^ CH^ ^ \ 2. CH,1 '1 T T ^
0 CH30H
io 1 2:3 VH CCOCH,
γΥί rfY
CH,., -1 Ac,0 ^ _ »j-ru
15 111 pTSA * \ II
H CH A-A-J 552 EtOH
cSCH3 CH-C3
Jit * i i? 0C0CH- (v^~j I 3 ,*3
20 I I II
CH3'-^^xXp—^ C^/pyrCHy.^ |X^_1
^'0 1. Zn/ACDH
25 O
£ 2. OH“ - 3. CrO-/pvr 1? 3 -- 30 fSÅ H-C >a XX) 35 z
Alkylen'ng af testosteron (I) med et alkyleringsmiddel, såsom methyljodid, \ nærværelse af en stærk base, såsom t-BuOK, 12 DK 173168 B1 natrium-t-pentoxid, 1 ithiumdi isopropy1 am id (LDA), NaNH2 »
Et2Ni, n-butyllithium og lignende giver en blanding af 2a- og 2/3-alkyl -17-j8-hydr oxy-4 - and ros ten-3-on {2 og 3). Behandling af blandingen med en stærk base, såsom natriummethoxid i metha-5 nol, epimeriserer 2^-aksialalkylgruppen til 2a-ækvatori al kon figurationen (2), Acetylering af 2 med et acetyleringsmiddel, såsom eddikesyreanhydrid {AC2O) og p-to 1uensu1 fonsyre (p-TSA) i toluen giver 2-a-alkyl-3,5-androstadien-3,17-diacetat (4). Behandling af diacetatet (4) med natriumborhydrid i 95% etha-10 nol giver 2a-methyl-3/S-hydroxy-5-androsten-17-acetatet (5).
Oxidation af 5 med et oxidationsmiddel, f.eks. Jones reagens, chromoxid i pyridin og lignende, giver ketonen (6). Ketogruppen i 6 omdannes til en methylengruppe via Wolff-Kish-ner-reduktionen eller Huang-Minlon-modifikationen deraf.
15 Hydrolyse af dette produkt efterfulgt af oxidation med et oxidationsmiddel, såsom chromtrioxid, giver den tilsvarende 17-keton (7 ) .
Alternativt kan 7 dannes ud fra 5 ad en anden vej so« vist i 2ø skema 2A. 5 omsættes med o-pheny1enphosphoroch1 or idit (OPPC) til fremstilling af a-methyl-3-jod-5-androsten-17-acetatet (8). Reduktion af 8 med zinkmetal og syre efterfulgt af hydrolyse og oxidation med et oxidationsmiddel, såsom chromtrio-xider, giver det endelige produkt 7.
25 30 35
Skema 2A
13 DK 173168 B1
O
o-c-CH3 l: c O-pher.y ler. ph osphorochlcrici t ’ "XtJ ~ 5
O
II
O — c — ^ -
'w V*f A
r^A
K c >. il -· 2n/A=0H
3 ' - I Λ /-J
Y AA 2. oh
Il 3. CrC^/pyr -> 20 6 25 Ί
H,C
J V
''A\A/—
30 kAJ
7 35 14 DK 173168 B1
Syntese C: Carbon-4-alkylering
En fremgangsmåde til carbon-4-alkylering og syntesen af 4o-me-thyl-DHEA er anført 1 skema 4.
5 Skema 4
CH OH
” rlfr'’ S-
C I li f=H c T I
s ~r . . :h, L
" 'c-- < 2 i , V-—p* - cs: —f—
15 /\uJ' ,;L'0?PC
J-AH 3 2' -*°d .J^ÅJ XXj 3·ia/aoac - ; L χ ϊ -—ί» 3
20 I
0£i-f- (I *· r;3u4K'i·?- I C fy 2* c-°3/pyr :l 5 CK3 - ςΧ5 i«, 36 35 15 DK 173168 B1
Under henvisning til skema 4 giver alkylering af testosteron la under anvendelse af for eksempel kalium-t-butoxid og methyl jodid 4-methyltestosteron lb. Allylisk bromering af 4-methyltestosteron under anvendelse af N-bromsuccinimid i 5 carbontetrachlorid giver 6-/3-brom-4-methyl androst-4-en-17-ol - 3-on (2). Beskyttelse af C-17-alkohol en under anvendelse af en standardbeskyttelsesgruppe, som er kendt indenfor området, såsom dets t-butyldimethylsilylderivat, giver 3. Reduktion af ketonen i 3 under anvendelse af f.eks. 1 ithiuma1uminiumhydrid 10 med ledsagende vandring af dobbeltbinding og tab af bromid giver 4. Omsatning af 4 med OPPC efterfulgt af jod og Zn/AcOH giver desoxyproduktet 5. Fjernelse af beskyttelsesgruppen og oxidation af den resulterende C-17-alkohol giver C-17-ketonen 7.
15
Syntese D: Alkylering ved carbon-6
Steroider kan alkyleres ved carbon-6 under anvendelse af fremgangsmåden beskrevet af U. Stache og W. Fritsch, Liebigs Analen 1966, 697, 204. En fremgangsmåde til carbon-6-alkyle- 20 ring er som følger.· 25 30 35 16 DK 173168 B1 η n \ Ph3?+-C"HR I \ ) f X j t· / 2. Κ2/ρ-toluer;1-- T50 (I TgO 11 sulfcnsyré 0 CHt 10 . i O 2 I “ o [ "")1·0PPC ,αϊΛ 2. Jod/CK2C12
15 ^ 3. Zn/ACOH
3 20 ~ 3a,5-cyklosteroider, såsom 3a,5-cyklo-5a-androstan-6,17-dion- 17-ketal 1 fås let ved solvolyse af steroide 5-en-30-tosyl ater og -mesylater efterfulgt af oxidation af C-6-hydroxylgruppen.
25 Alkenylering af 1 via en Wittig-reaktion giver f.eks. 6-methy-len-3a,5-cyklo-5-a-andros tan-17-on-17-keta 1 2. Behandling af 2 med vandig syre resulterer i additionen af vand og dannelsen af 30-hydroxy-6-methylandrost-5-en-17-on 3. Behandling af 3 med OPPC/jod efterfulgt af zink i fortyndet syre, f.eks. AcOH, 30 giver slutproduktet 4.
Syntese E: Alkylering ved C-7
En fremgangsmåde til carbon-7-alkylering er som følger; 35 17 DK 173168 B1 . ^ XpP ** 1 *·:η,
3 Er £ J
i. o?pc 9 >^ji 2. I2/CH2C12
,1 i / 3. Zn/AcOH I
Κ3^ν^^ΧΛ*κκ3 I
i.
CK3 20 -
Alkylering af androsta-4,6-dien-3,17-dion-17-ketal 1 med me-thylmagnesiumbromid i narvarelse af en Lewis-syre, såsom ku-prochlorid, foregår via konjugeret addition til opnåelse af 25 7-a-methy1androst-5-en-3,17-dion-17-ketal 2. Allylisk brome-ring af 2 under anvendelse af N-bromsuccinimid i carbonte-trachlorid giver 6-0-brom-7a-methy1androst-4-en-3,17-dion-17-ketal 3. Lithiuma1uminiumhydrid-redukti on af ketonen 1 3 med ledsagende vandring af dobbeltbinding og tab af bromid 30 skulle give 4. Afbeskyttelse af C-17-ketonen med vandig syre giver 30-hydroxy-7-a-methy 1 androst-5-en-17-on 5. Højere homologer kan syntetiseres under anvendelse af det substituerede Grignardreagens, det vil sige R=CH3, C2H5, C3H7. 7-0-epimeren kan syntetiseres ved behandling af 2 med DDQ-(dichlordicyano-35 quinon) til dannelse af en anden olefin ved C-7. Katalytisk reduktion af denne olefin skulle forekomme fra α-siden af steroidet til opnåelse af 70-methy 1 stero i det, det vil sige 70-methylandrost-5-en-3,17-dion-17-ketal. Ved at følge den samme 18 DK 173168 B1 række som anført ovenfor fås 3/5-hydroxy-7/3methylandrost-5-en-17-on (5a). Desoxyderivatet fremstilles ud fra 5 eller 5a ved substitutionsreaktioner kendt indenfor området, såsom ved omsætning af 5 eller 5 a med o-phenylenphosphorochloridit og 5 jod, ifølge fremgangsmåden beskrevet af Corey og Anderson i JOC, 32, 4160 (1967). Produktet omsættes derefter med zink i syre, f.eks. eddikesyre, til opnåelse af 7-methyl-5-en-17-on-der ivatet.
10 15 20 25 30 35 19 DK 173168 B1
Syntese F: Alkylering ved carbon-11
En fremgangsmåde til alkylering ved carbon-11 er som følger: 5 ‘γ-k ^ Γ J i i.f-)Srid· rftfujtiicr. HC1 S.C’.S»! i-tidiiol .E^·? J CKCU/rcTc 1 l — Si 0 ^ ·> 10 ' . f»|-f f- i ,li 1 OH Ογτ ^\l/k^ky S02cl2/?yr 1 1 Cl - I , «
02i-i- 1 I Cl ” r;1, I
15 1 j^i Γι'7’
^..xJu ~r £U
‘ V" il 5 -+f iTs ! 20 Fkk -+»:> pkr ./'--ΐΑγΑ/ 1 J'-V Cr:,/Mr ^ J ,-^τπν f i 1 “ if + „e 1 , 25 Kik U~jJ x- 0??c !x,^r|U) »· χ2 _.IDA^Ak HokkJ 3· Zn/KOA=> -i- 9 I ~ 10 30
Ch^V^xJ ° u 20 DK 173168 B1 På grund af C-ll-ketonens hindrede natur skulle selektiv reduktion af androst-5-en-3,11,17-trion 1 med hydrid give C-3, C-17-d i hydroxys tero id 2a, R=H, som er beskyttet, f.eks. med dets bis-(dimethyl-tert-butylsilyl)ether 2b, R=Si(CH3)2t-Bu.
5 Addition af hydrogenhal ogen id over C-5-olefinen, såsom HC1, giver 5a-chlor-30,17p-di hydroxyandrost-5-en-ll-on-3,17-bis- {dimethyl-7-butylsilyl)ether 3. Alkylering med alkyl 1 i thium, såsom methyllithium, foregår fra den mindre hindrede side til opnåelse af 5-chlor-ll/}-methyl-androstan-3/5-110,17/3-triol-10 3,17-bis(dimethyl-t-butyl-silyl)ether 4. Omsatn ing af 4 med thionylchlorid-pyridin giver dehydrati ser ingsproduktet 5. Katalytisk hydrogenering af 5 giver 11/3-methyl produktet 6. Behandling af chlorsilyletheren 6 med base efterfulgt af te-trabutylammoniumf lourid giver Ιΐβ-methy 1 -5-androsten-3ø, 170-15 diol 7. Selektiv silylering giver 110-methyl-5-androsten-3,17-diol-3-dimethyl-t-butylsilylether 8. Oxidation af C-17-alkoho-len i 8 giver 9 og afbeskyttelse af 3-alkoholen giver 11-methyl androst-5-en-30-ol-17-on 10. (110-methy1-DHEA). Under anvendelse af substitutions- og omdannelsesreaktioner, såsom 20 omsætning af hydroxygruppen med OPPC, jod og zink i fortyndet syre, giver slutprouktet 11. (11/3-methyl-5-androsten-17-on.)
Syntese G: Alkylering ved carbon-16
En fremgangsmåde til 16-a1ky1 er ing er som følger: 25 . I ' .· 1. η-ΒυΙί „«xtf0 - Cu , *1 . R=H, alkvi j 2.C.C1 . 2 3 35 Alkylering af 17-ketodi methy1 hydrazonen af DHEA-3-tetrahydro-pyranylether under anvendelse af n-butyliithium som basen efterfulgt af et alkylhalogenid RX giver det 16a-alkylerede steroid. Hydrazonspaltning med cuprochlorid i vandig tetrahy- 21 DK 173168 B1 drofuran fører til gendannelse af C-17-ketonen og samtidig spaltning af tetrahydropyranyletheren resulterer i 16o-alkyl-3-hydroxy-androst-5-en-17-on (2). 2 omdannes til 3 ved hjælp af fremgangsmåder, som er kendt for en fagmand indenfor områ-5 det, som f.eks. omsætning af 2 med OPPC, derefter jod efterfulgt af zink i syre.
Syntese H: Hydroxylering ved carbon-16
En fremgangsmåde til hydroxylering ved carbon-16 er som 10 < .
følger: .. c£P & c6¾¾. d5^”" 1 l 02 atm
Halogenering af 3-desoxy-DHEA med et a-halogeneringsmiddel, 20 såsom brom, chlor, jod, cupribromid i methanol og lignende giver 16a-brom-DHEA 2, som på sin side hydrolyseres med vandig base i oxygen til opnåelse af slutproduktet.
Syntese I: Halogenering ved carbon-16 25 0 rK- rt5- 30 - ’ 2
En fremgangsmåde til halogenering ved carbon-16 er som følger:
Omsætning af 16/i-hydroxy-5-androsten-17-on (1) med et fluore-3 5 ri ngsmiddel, såsom diethyl(2-chlor-l,l,2-trifluorethyl)amin giver 16a-fluor-5-androst-en-17-on 2.
22 DK 173168 B1 O KHCOCK, ctr"
5 KO
AcO
i l v (^Ϋ*γ''τ /Xj Oj 5 2
Alternativt kunne 2 fremstilles ved behandling af et enamid, 1 5 f.eks. enamidet med formlen 3, med et f 1 uoreringsmiddel, såsom perch1 ory1f1uorid . Hydrolyse af f 1 uorenamidacetatet med vandig syre giver 4. 3-hydroxygruppen i 4 kan substitueres med halogen ved hjælp af reaktioner, som er kendt indenfor områ-2ø det, f.eks. ved omsætning af 4 med OPPC/I2 til opnåelse af 5. Reduktion af 5 med syre i nærværelse af et metal, såsom zink i eddikesyre, giver 2.
Endelig kan 2a syntetiseres ud fra det tilsvarende halogenid, som er fremstillet nedenfor under Finkelstein-reaktionsbetin-25 gelser, under anvendel se af fluoreri ngsmi dier, som er kendte indenfor området, såsom AgF, HgF2, KF i N-methylpyrrolidon eller tetramethylensulfon og lignende.
35 Omsætning af androst-5-en-l7-on 1 med kupribromid giver 16a-brom-androst-5-en-17-on, 2c (e.r. Glazier, J. Org. Chem. 1962, 27, 4397). Omsætning af 1 med kuprichlorid og 1 ithiumch1 or id giver 16a-chlor-androst-5-en-17-on, 2b (E.M. Kosower et al., J. Org. Chem., 1963, 28, 632).
23 DK 173168 B1
O
il Λ
KC«3 J
XX j V1 CCr-'Cw ^ 24 J_
Omsætning af l7-hydroxyandrosta-5,16-dien-17-acetat 1 med mer-1Q curi acetat efterfulgt af behandling med kaliumjodid giver C-16a-jodidet, som hydrolyserer med syre til opnåelse af 16a-jodandrost-5-en-17-on, 2d. Omsætning af 2d med sølvfluorid giver 16a-fluorandrost-5-en-17-on, 2a.
Derudover resulterer omsætningen af 2c med NaI/acetone natten 15 over i en blanding af 16a- og 16/S-I-androst-5-en-17-oner.
På lignende måde ved anvendelse af passende udgangsmaterialer kan det følgende produkt også fremstilles: 2q 16|5-methyl-16a-fluorandrost-5-en-17-on.
Syntese J: Alkoxylering
Alkoxygrupperne afledes fra de tilsvarende alkoholer. Methoxy-substituenten dannes for eksempel ved omsætning af den tilsva-25 rende alkohol i methylenchlorid med bortri fluorid og etherisk diazomethan ifølge fremgangsmåden beskrevet af Caserio et al., JACS, 60, 2584 (1956). På lignende måde dannes ethoxysubstituenten ved omsætning af den tilsvarende alkohol i methylenchlorid med bortrifluorid og etherisk diazoethan fremstillet in 30 situ. Alternativt kan alkoxysubsti tuenterne også adderes til steroidringen ved omsætning af alkoholen under Williamsons reaktionsbetingelser med RX, hvor X er en organisk leaving-gruppe, såsom halogenidtosylat eller -mesylat, og R er lavere alkyl. En hvilken som helst base, som normalt anvendes til at 35 afprotonere en alkohol, kan anvendes, såsom natriumhydrid, natriumamid, natrium, natriumhydroxid, triethylamino eller di isopropylethyl ami η. Omsætningstemperaturer er i området fra -78eC til tilbagesvalingstemperatur. Omsætningen udføres i et 24 DK 173168 B1 opløsningsmiddel, som vil opløse begge reaktanter og som også er inert overfor både reaktanter og produkter. Opløsningsmidler omfatter men er ikke begrænset til diethylether, tetrahy-drofuran, N,N-dimethylformamid, methylenchlor id og lignende.
5 I Wi 11iamson-syntesen bør ketonen beskyttes med beskyttelsesgrupper, som kendes indenfor området. Eksempler på mange af de mulige beskyttelsesgrupper, som kan anvendes, er beskrevet i "Protective Groups in Organic Synthesis" af T.W. Green, John Wiley and Sons, 1981. For eksempel kan ketonen beskyttes som ethylenketal.
Syntese K: Hydrogenering
Androstan-17-on-derivaterne ifølge den foreliggende opfindelse 15 kan også fremstilles under anvendelse af synteseveje, som kendes indenfor området. For eksempel giver katalytisk hydrogenering af de tilsvarende 5-androsten-17-on-deri vater under anvendelse af reduktionsmidler, såsom hydrogen, palladium, platin eller nikkel, de forskellige 5-androstan-17-on-deriva-20 ter. Alternativt kan 16-halogen- og 16-hydroxy-5-androstan-17- on fremstilles ved at erstatte 5-androsten-17-on med 5-andro-stan-17-on og følge fremgangsmåden beskrevet i afsnittene med titlen "Hydroxy 1 er ing ved carbon-16" og "Ha 1 ogener ing ved car-bon-16" beskrevet ovenfor.
25 5-androstan-17-on kan på sin side fremstilles ud fra katalytisk hydrogenering af 3-desoxy-DHEA. 3-desoxy-forbindelserne på deres side kan fremstilles ud fra de tilsvarende 3-hydroxy-forbindelser ved hjælp af fremgangsmåder, som kendes indenfor 30 området. For eksempel 35 25 DK 173168 B1
O
t. ØC>C1 pyridir- · T 5 rtV-1 2-h/cn2:i2 3.Zn/AcOH 9 V- o DHEA opløst i et Inert opløsningsmiddel, såsom tetrahydrofu-ran, blev omsat med O-phenylenphosphorchloridit. Det resulterende produkt blev omsat med jod til dannelse af 3-jodderi-vatet, som på sin side omsattes med en Lewis-syre, såsom zink i eddikesyre, til dannelse af den tilsvarende 3-desoxyfor-jg bindelse.
De følgende eksempler illustrerer opfindelsen yderligere:
Eksempel I
2Q a. I6a-fluor-5-androsten-17-on CH, KHCCCHj
C - N-OH I
......φ jTYj C-.K- .ΙΌ.
23 i* 3 317,50
Til en opløsning af oximet (30,0 g) i 120 ml pyridin ved 10* 3 0 blev under magnetisk omrøring tilsat 30,0 g p-acetamidobenzen-sulfonylchlorid. Opløsningen blev omrørt i 2 timer, mens temperaturen blev holdt ved 10 ± 2*C. Den klare gule-orange reaktionsblanding blev sat til 1 liter isvand og den resulterende orange olieagtige suspension blev ekstraheret med 500 ml 3 5 methylenchlorid. Det organiske lag blev vasket med vand, filtreret gennem vandfrit natriumsulfat og inddampet til tørhed. Flere toluenti Isatn i nger efterfulgt af tørring i vacuum tjente 26 DK 173168 B1 til at fjerne det meste af pyridinet. Den orange semi krystal-linske rest blev fordøjet med 500 ml methylenchlorid. Den uopløselige fraktion blev filtreret fra, vasket med methylench1o-rid og kasseret. Til filtratet blev sat et lige så stort vo-5 lumen ethanol. Koncentrering i en luftstrøm til cirka 300 ml gav 21,1 g gule nåle, Smeltepunkt 228-230®. Fraktionskrystallisation af moderluden gav yderligere 1,90 g, smp. 227-230°. Udbytte = 23,0 g (76,7%); λ max 3320, 1530 (NHCOCH3) , 1732, 1240, 1030 cm-1 (3/5-acetat) .
10 B. Omsætning af 17-acetamid-5,16-androstadien-3B-ol-acetat med perchlory1f1uorid i pyridin (Se S. Nakanishi, J. Med. Chem. 7, 108 (1964)) 15 NHCOCHj KHCOCKj
ΠΛ „-a___________♦ rrV
rrr rrr“^
20 ‘jjOT
389,<9 I en opløsning af enamidet (7,50 g) i pyridin (400 ml) ved 0-5®C blev boblet perchlorylfluorid i 4 minutter. Reaktions-25 blandingen blev sat til 1500 ml isvand og koncentreret saltsyre blev langsomt tilsat under magnetisk omrøring til en pH-værdi på 1-2. Det farveløse krystallinske præcipitat blev filtreret fra og vasket omhyggeligt med vand. Omkrystallisation ud fra methylenchlorid-isooctan gav 4,40 g lysegule prismer, 30 smp. 165-169°, λ max 3250, 1635 (NHCOCH3) 1735, 1240, 1030 cm-l (3B-acetat). Fraktionskrysta11 i sat i on af modervæskerne gav yderligere 0,52 g, smp. 162-165®C. Udbytte * 4,92 g (66%).
Den endelige modervæskerest (3,03 g) var tilstrækkelig ren til syrehydrolyse til 16a-fluor-17-on (se C).
35 C. Syrehydrolyse af fluorenamidacetat til 16a-f 1 uor-3j3-hydro-xy-5-androsten-17-on 27 DK 173168 B1 NHCOCKj THr/a= KCl ''
' tllbagesvallng^^-J
HO
C,9H27r°2 306,41 ΤΠ en opløsning af f 1 uorenamidacetatet (4,20 g) i 150 ml hver af vandfrit tetrahydrofuran og vand blev sat 15 ml koncentreret saltsyre. Blandingen blev tiIbagesvalet i 14 timer, derefter fordelt mellem methylenchlorid og vand. Det organiske lag blev vasket med vand, filtreret gennem vandfrit natrium-sulfat og inddampet til tørhed. Krystallisation ud fra acetone-i sooctan gav 3,16 g fine nåle, smp. 145-147* (96% udbytte), λ max 3350 (hydroxyl), 1752 cm*1 (16-fluor-17-on).
D. Fremstilling af 3/5-jod-16a-f 1 uor-5-androsten-17-on 20 (Se Corey og Anderson, J0C 32, 4160, 1967) :> i, / ch,ci, i c15n26:ro 4CC.31 3ø Til en opløsning af pyridin (0,41 ml) og 0-phenylenphosphor-chloridit (0,6 ml) i vandfrit THF (10 ml) ved 0* blev sat 1,53 g (5 mmol) af hydroxyf1uorketonen i lo m! THF. Efter omrøring i to timer ved stuetemperatur blev pyridiniumchloridet filtreret fra og vasket med THF. Efter fjernelse af opløsningsmidlet 35 i vacuum blev den rå phosphitester opløst i 25 ml methylench-lorid og behandlet med 1,27 g jod i tre timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen blev vasket på hinanden følgende med 15 ml 1 N natriumhydroxid og vand, filtreret gennem vandfrit 28 DK 173168 B1 natriumsul fat og produktet blev krystalliseret ud fra methy-lenchlon'd/methanol i et udbytte på 1,85 g (92,5%), smp. 165-167° (dekomponering), λ max 1755 cm"1· (16-f luor-17-on) .
5 E. Omsætning af jodfluorketon med zink/eddikesyre o r
o H
s o * - i 5 · w
H
c’9":tfo 290,41
Til en opløsning af 30-jod-16cc-f 1 uor-5-androsten-17-on (1310 1 5 mg, 3,28 mmol) i 40 ml iseddikesyre blev sat 2,62 g zinkstøv. Blandingen blev omrørt magnetisk ved 50-55° i en time, derefter fordelt mellem methylenchlorid og vand. Det organiske lag blev vasket med fortyndet natriumhydroxid og vand, filtreret gennem vandfrit natriumsulfat og inddampet til tørhed. Kry- 20 stallisation ud fra methylenchlorid/methanol gav 630 mg af farveløse små plader (eng: platelet), smp. 167-169°. Frak- tionskrystallisation af modervæsken gav yderligere 140 mg med smp. 165-167°, hvilket forøgede udbyttet til 770 mg (81,0%), λ max 1752 cm"l (16-fluor-17-on).
25
Eksempel IT
Fremstilling af 16a-brom-5-androsten-17-on (forbindelsen er ikke ifølge opfindelsen) Å X 'Er 30 Γι' c- Πι’ k' k
C,cH2-BrO
35 *
En opløsning af 5-andros ten-17-on (10,88 g, 40 mmol) i methanol (2 liter) blev opvarmet til tilbagesvaling med 26,8 g (120 29 DK 173168 B1 mmol) CuBr2 i 17 timer. Reaktionsblandingen blev sat til 2 liter vand og den resulterende krystallinske suspension blev om-rørt flere timer ved 5eC. Produktet blev filtreret fra, vasket med vand og omkrystalliseret ud fra methanol som farveløse 5 nåle: 7,95 g, smp. 172-174°, 2,00 g, smp. 165-168°. Højtryksvaskekromatografi (HPLC) af modervasken under anvendelse af ethylacetat-n-hexan som elueringsmiddel gav yderligere 0,58 g 16a-bromid, hvilket forøgede udbyttet til 10,53 g (75,0%). Derudover opnåedes 800 mg (5,7%) 16B-brom-5-androsten-17-on, 10 smp. 149,5 til 152°. Oer blev ligeledes opnået 75 mg 16,16-dibrom-5-androsten-17-on med smp. 194-195°.
Eksempel III
Syntese af 16a-hydroxy-5-androsten-17-on r£T n-V" 1 *5 eq -i0H > H ftf 2 0 K' a9- Fy-'4ir. sr.der o, C1SK2B°2 288,41
Til en opløsning af 16a-brom-5-androsten-17-on (7,92 g, 20 25 mmol) i pyridin (300 ml) og vand (64 ml) i en oxygenatmosfære blev sat 36 ml (36 mmol) af 1 N NaOH. Efter omrøring af blandingen 1 15 minutter ved stuetemperatur under 03 blev blan dingen sat til 1 liter isvand Indeholdende 330 ml koncentreret HC1. Det krystalliserede pracipitat, som dannedes, blev fil-30 treret fra, vasket med vand og omkrystal li seret ud fra methanol som småblade (2,80 g), smp. 168-172°. HPLC af modervasken på en siHcagelsøjle under anvendelse af isopropylalkohol/n-hexan som elueringsmiddel gav yderligere 1,4 g lysegule prismer, smp. 170-174°. Det samlede udbytte af l6a-ol var 3,94 g 35 (68,4%).
Eksempel IV
30 DK 173168 B1
Fremstilling af 16a-methyl-5-androsten-17-on, 16/3-methy 1 -5- androsten-17-on og 160-methyl-16a-f1uor-5-androsten-17-on
CH
I 3 ch3 5 = KHCOCH3 ny-' rrv^"·
AecT^^ KK,0H-HC1 XAJ
ΐΓΓη·'/ ,> > A CO - onlejrlng^co itOn/pyr /3 i 1 ~ FClOj/pyr l/THF/aq . HC1 4- MCOCHj ± THF/a<3--::1 H0 ^ o c.
å I V ηφ-' ^A,ch3 ho41'’ ϋ + ΙΓ^;1* v, Zn/ACOH. I ΙΧ^Χ7Γ
~A/H3 ^\pX/CH3 Zn/AcOH
(^Xr + joS^™' - ” / H 12
Fremstilling af 16-methyl-3-acetoxy-5,16-pregnadien-20-on-30 oxim (2).
En opløsning af 16-methyl -3/3-ace toxy-5,16-pregnadien-20-on (3,70 g, 10 mmol) blev opvarmet til tilbagesvaling i en blanding af ethanol (100 ml) og pyr idi n (10 ml) i ndeholdende 3,50 g (50 mmo1) hydroxylaminhydrochlorid i 1 time. Reaktionsbian-3 5 dingen blev sat til vand og det rå produkt filtreret fra og vasket med vand. Opløsning i methylenchlorid, filtrering gennem vandfrit natriumsulfat og inddampning til tørhed i vacuum gav den rå oxim.
31 DK 173168 B1 II. Beckman-omlejring af I.
Behandling af det rå oxim fra 3,70 g 20-on i 15 ml pyridin med 3,75 g p-acetamidobenzen-sulfonylchlorid blev udført i 2 timer 5 ved 10“. Reaktionsblandingen blev sat til isvand, hvilket gav et filtrerbart fast stof, som blev vasket omhyggeligt med vand. Det tørrede produkt var 17-acetamido-16-methyl-5,16-an-drostadien-3/5-ol acetat (3) med vægten 3,88 g.
III. Omsætning af 3 med perchlorylfluorid/pyridin.
10
En opløsning af 16-methy1enamidacetatet {1,94 g) i pyridin (100 ml) blev behandlet med FCIO3 i 4 minutter som beskrevet i eksempel IB. Reaktionsblandingen blev sat til isvand og kold koncentreret HC1 blev tilsat, indtil reaktionsblandingen havde 15 en pH-værdi på 1. Det resulterende præcipitat blev filtreret fra og vasket med vand. Produktet blev opløst i methylenchlo-rid og filtreret igennem vandfrit natriumsulfat, hvilket gav det rå fluormethylenamidacetat (4).
20 IV. Fremstilling af 16/5-nethyl-16a-f 1 uor-3-hydroxy-5-andro-sten-17-on (11).
En opløsning af {4) i tetrahydrofuran {100 ml) og vand (100 ml) blev t i 1 bagesvalet i 10 ml koncentreret saltsyre i 14 timer. Reakt ionsbland i ngen blev fordelt mellem methylenchlorid 2 5 og vand og det organiske lag blev filtreret gennem vandfrit natriumsulfat. Den rå hydroxymethylf1uorketon blev underkastet præparativ HPLC på en silicagelsøjle i isopropyl alkohol/n-he-xan. Krystallisation af hovedproduktet ud fra methanol gav lange nåle (420 mg, smp. 177-180, 90 mg, smp. 170-173). Moder- 3 0 ludresten (350 mg) fra det krystallinske produkt blev anvendt i det næste trin.
V. Fremstilling af 16-methy1-16-fluor-5-androsten-17-on.
Den rå 3-ol (4, 350 mg) fra det foregående trin blev sat i 5 3 o ml methylenchlorid til 5 ml methylenchlorid indeholdende 90 μΐ pyridin og 130 μΐ O-phenylenphosphorchloridit ved 0“C. Efter henstand i 2 timer ved stuetemperatur blev det rå phosphit be- 32 DK 173168 B1 handlet med 280 mg jod og den resulterende blanding blev omrørt magnetisk ved stuetemperatur i 2\ time. Reaktionsblandingen blev vasket i rækkefølge med 1 N NaOH (6 ml) og vand (10 ml), filtreret gennem natriumsulfat og tørret. Den rå 5 3-jodid-blanding (12) (140 mg) blev behandlet i 2 ml eddike syre med 300 mg zinkstøv i 1 time ved 65-70eC. Efter fordeling af reaktionsblandingen mellem methylenchlor id og vand blev det rå produkt underkastet præparativ HPLC på en si 1 icagelsøjle i ethyleacetat/hexan.
10
Et, mere mobilt sideprodukt krystalliserede ud fra vandig acetone som små plader (12,5 mg), smp. 122-123·. Dets infrarøde spektrum var i overensstemmelse med en 16o-methy1 -16p-f1uor-5-androsten-17-on-struktur. Det mindre mobile hovedpro-15 dukt krystalliserede ud fra methanol som nåle (48,5 mg), smp. 173-175*. Dets infrarøde spektrum var i overensstemmelse med 16/5-methyl-16a-fluor-5-androsten-17-on (13) .
VI. Fremstilling af 16-a- og 16jB-methyl-5-androsten-17-oner 20 Det rå methylenamidacetat (1,94 g) blev opvarmet til tilbagesvaling i 100 ml af hver THF og vand med 10 ml koncentreret HC1 i 3¾ time. Efter den sædvanlige oparbejdning blev de rå hydroxymethylketoner (5 og 6) analyseret som 3-acetaterne. I isooctan-ethylacetat (21:4) var der groft taget 3:l-blanding 25 af polær (Rf 0,17) og mobile (Rf 0,21) produkter, hvilket repræsenterer en blanding af henholdsvis 16a-methyl- og 16/3-me-thyl-17-onerne. Krystallisation af den oprindelige 3-hydroxy-blanding gav 425 mg ren 16/5-methyl-5-androsten-17-on (6), smp. 168-170°. Modervæskeresten (660 mg) repræsenterede en blanding 30 af 16a- og 16/5-methyl-3-hydroxy-17-oner (5 og 6). En opløsning af denne blanding samt 6 ml methylenchlorid blev sat til 6 ml methylenchlorid indehoIdende 180 μΐ pyridin og 260 μΐ 0-pheny-lenphosphorchloridit ved 0°C og blandingen henstod ved stuetemperatur i 2 timer. Efter tilsætning af jod (560 mg) til det 35 rå phosphit forløb reaktionen i 2\ time ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen blev vasket med 10 ml 1 N NaOH og 10 ml vand. Blandingen af jodi der (7 og 8) blev underkastet præparativ HPLC på en s i 1 i cage 1 søj1e i ethy1acetat/hexan. Det mere 33 DK 173168 B1 mobile produkt betegnet 16a-methyl-3β-jod-5-androsten-17-on (7) krystalliserede ud fra methanol som nåle {120 mg), smp. 150-151,5*.
5 λ max 1728 cm 1 (16a-methyl- 17-on) (Se Neef et al., JOC 43, 4579, 1978).
Det mindre mobile produkt betegnet 16/3-methyl-3/3-jod-5-andro-sten-17on (8) krystalliserede ud som nåle {200 mg) fra methanol, smp. 151-153, λ max 1734 cra“l (16/3-methyl-17-on ifølge 10 Neef).
Behandling af 16a-methyl-3/3-jod-5-androsten-17-on (7) (90 mg) i 2,5 ml eddikesyre med 180 mg zinkstøv blev udført i 1 time ved 65-70*. Krystallisation af produktet ud fra vandig acetone 15 gav 40 mg nåle, smp. 92-95“C. Infrarød analyse var i overensstemmelse med 16o-methy1-5-androsten-17-on (9).
Behandling af 16/3-methyl-3/3-jod-5-androsten-17-on (8, 200 mg) i 5 ml eddikesyre med 400 mg zink som ved fremstilling af 9 20 gav 95 mg små plader ud fra methanol, smp. 102-103. IR-analyse bekræftede 16/3-methyl-5-androsten-17-on-strukturen (10).
Eksempel V
Fremstilling af 16a-brom-5-androstan-17-on (kendt forbindelse) 25 A. Metode 1. Fremstilling af 3a-jod-5a-androstan-17-on
Epiandrosteron (1,45 g, 5 mmol) og 10 ml THF blev sat til 0,41
ral pyridin, 0,60 ml O-pheny 1 enphosphorch lor id i t og 10 ml THF
ved 0*C. Blandingen blev omrørt i 2 timer ved stuetemperatur.
30
Efter frafi 1 trering af det præcipiterede pyridiniumchlorid blev opløsningsmidlet fjernet i vacuum, hvilket gav den rå phosphitester. Resten blev behandlet i 25 ml methylenchlorid med 1,27 g (5,0 mmol) jod og blandingen blev omrcrt ved stuetemperatur i 2% time. Efterfølgende vask med 15 ml 1 N NaOH og 3 5 vand efterfulgt af filtrering af det organiske lag gennem vandfrit natriumthiosulfat gav det rå 3a-jodder i vat. Krystallisation ud fra methanol kombineret med HPLC af modervæsken 34 DK 173168 B1 gav en samlet mængde på 0,82 g af det ovenfor identificerede produkt med smp. 124-127*. Signifikante dehydrohalogenerings-sideprodukter fra omsætningen var 2-androsten-l7-on og 3-an-drosten-17-on.
5
Metode 2. Fremstilling af 3/3-jod-5a-androstan-17-on
Til en opløsning af 1,6 g epiandrosteron i 12 ml pyridin blev sat 1,6 g TsCl. Blandingen henstod i 13 timer ved stuetemperatur. Efter tilsætningen af vand blev produktet ekstraheret 10 med methylenchlorid. Det organiske lag blev vasket med kold fortyndet HC1 , derefter vand, hvilket gav et råt semikrystal-linsk tosylat. Dette materiale blev opvarmet til tilbagesvaling i 100 ml acetone indehoIdende 10 g natriumjodid i 22 timer. Reaktionsblandingen blev fordelt mellem methylenchlorid 15 og vand, og det rå produkt blev krystalliseret ud fra methanol til opnåelse af 920 mg 3/J-jod-5a-androstan-17-on uigennemsigtige prismer, smp. 147-150*C. TLC af det krystallinske materiale og dets modervæske i isooctan/ethylacetat (22:3) viste, at det krystallinske materiale var homogent (Rf = 0,16).
20
Materialet absorberede i UV ved 254 nm. (UV-positiv.)
Modervæsken bestod af en ternær blanding, idet det krystallinske produkt var det mest polære (mindste Rf). En anden UV-25 positiv bestanddel med en lignende Rf-værdi (Rf * 0,20) som 3a-jodidet og en tredje (UV-negativ) mere mobil bestanddel med en større Rf-værdi (Rf * 0,25) som den olefine blanding opnået i metode I blev også isoleret.
B. Fremstilling af 5a-androstan~17-on 30
Metode 1.
0,84 g af 3a-jodandrostan-17-onen i 25 ml eddikesyre blev opvarmet med 1,68 g zinkstøv ved 70-75° i 1 time under magnetisk 35 omrøring. Reakt ionsbiandi ngen blev afkølet, fortyndet med vand og det krystallinske præcipitat, som fremkom, blev filtreret fra og vasket med vand. Resten blev vasket med methylenchlorid og produktet blev omkrystalliseret ud fra vandig methanol som 35 DK 173168 B1 små plader {480 mg) i et udbytte på 83,5%. Smeltepunkt 121-121,5*. Lignende omsætning af 3/5-jod-5a-androstan-17-on med zink i eddikesyre gav 5a-androstan-17-on i sammenlignelige udbytter.
5
Metode 2.
Til en opløsning af 2,5 g 5-androsten-17-on i 500 ml ethanol blev sat 500 mg 5% Pd-på-C og blandingen blev udsat for en hydrogenatmosfære under omrøring i 2,5 timer. Katalysatoren blev filtreret fra og resten fra filtratet havde det samme IR-spektrum som materialet fremstillet i B, metode 1.
C. 16a-brom-5-a-androstan-l7-on 2,5 gram af produktet fra del B i 450 ml methanol blev opvarmet til tilbagesvaling med 6,06 g (27,18 mmol) CuBrg i 17¾ time. Efter tilsætningen af et lige så stort volumen vand blev det krystallinske præcipitat filtreret fra og vasket med vand. Krystallisation ud fra methylenchlorid/methanol gav 2,03 g af 20 brom i det som farveløse pr ismat iske nåle med smeltepunkt 194-196* (63% udbytte).
Alternativt kan det ovenfor nævnte produkt fremstilles ved katalytisk hydrogenering over 5% pal 1 adium-på-carbon af 16a- brom-5-androsten-17-on i overensstemmelse med fremgangsmåden i 25 V B, metode 2 ovenfor.
Eksempel VI
Fremstilling af 16a-hydroxy-5a-androstan-17-on (kendt forbindelse) 30 En opløsning af 16a-brom-5-androstan-l7-on (706 mg, 2 mmol) som fremstillet i overensstemmelse med fremgangsmåden i eksempel V, 60 ml pyridin og 16 ml vand blev behandlet med 3,6 ml (3,6 mmol) 1 N natriumhydroxid under oxygen. Efter magnetomrøring ved stuetemperatur i 15 minutter i en oxygenatmosfære 35 blev den klare gule reaktionsblanding, der var fremkommet, sat til isvand indeholdende 66 ml koncentreret HC1. Produktet blev ekstraheret med methylenchlorid og blev krystalliseret som 36 DK 173168 B1 store prismer ud fra methanol, 375 mg med smeltepunkt 157-158'C.
Eksempel VII
5
Fremstilling af 16a-fluor-5a-androstan-17-on Metode 1
Til en omrørt opløsning af 500 mg 16a-brom-5-androstan-17-on, som var fremstillet ifølge fremgangsmåden beskrevet i eksempel V, i 10 ml DMSO blev sat 500 mg 18-krone-6-ether og 1500 mg KF. Opløsningen blev opvarmet til 85-90*. Efter 6 timer blev blandingen fordelt mellem methylenchlorid og vand og blev underkastet HPLC i et ethylacetat-hexan-gradientsystem. Krystal-lisation ud fra methanol af den mere mobile komponent gav 23 mg udgangsmateriale (smp. 188-190*0). Krystallisation ud fra methanol af den mindre mobile komponent gav 41 mg plader, hvis IR er i overensstemmmelse med slutproduktets.
Metode 2 20 250 mg 160-f1uor-5-a-androstan-17-on i 50 ml ethanol blev behandlet med 50 mg 5% pa 11 ad ium-på-carbon og hydrogengas i 2\ time. Reaktionsblandingen, som vist ved IR-spektret, er forligelig med 16/5-f luor-5a-androstan-17-on. Det rå produkt blev 25 behandlet med 5 ml methanol og 5 ml IN methanolisk KOH i 1 time. Blandingen blev fordelt mellem methylenchlorid og vand og underkastet HPLC som anført ovenfor. Krystallisation af den mindre mobile komponent fra methanol gav 30 mg 16o-f1uor-5a-androstan-17-on som prismatiske nåle med smp. 148-150*0.
30
Metode 3
Til en opløsning af 16a-f1uor-5a-androsten-17-on (1100 mg) i ethanol (220 ml) blev sat 220 mg 5% Pd-på-carbon. Blandingen blev omrørt i en hydrogenatmosfære i 1 time ved stuetempera-3 5 tur. Katalysatoren blev filtreret fra og vasket med ethanol. Resten fra det forenede filtrat blev omkrystalli seret ud fra methanol til opnåelse af 770 mg, smp. 146-148,5*C. IR-spektret 37 DK 173168 B1 var identisk med det for 16a-fluor-5a-androstan-17-on, som var fremstillet ovenfor.
Eksempel VIII
5 9 O CH,
Η H
10 — 16.16-dimethyl-5-androsten-17-on (20) og 16t16-dimethyl-5g-an-drostan-17-on (21) (forbindelsen er ikke ifølge opfindelsen)
Behandling af 3-desoxy-5a-androstan-17-on i t-butylalkohol og 15 kalium-t-butoxid med overskud af methyljodid giver dimethyl-17-onerne.
u O CH, —· c6^‘c'* 20 På lignende måde giver behandling af 3-desoxy-5-androsten-17-on med overskud af methyljodid ifølge fremgangsmåden beskrevet ovenfor de tilsvarende gem dimethy1 -17-oner (20).
Eksempel IX
" aS^b ο^Γ..
oS^r.· 6 3 Γ7, 5cxh 38 DK 173168 B1 16α-og 16p-methoxy-5-androsten-17-oner (14, 16) og 16a- og 16P-methoxy-5-androstan-17-oner (15, 17) (forbindelse 16 og 17 er ikke ifølge 5 opfindelsen)
Behandling af den passende 16a- eller 16/J-ol i methylenchlorid med bortn’fluorid og ether i sk di az omethan ved hjælp af frem-10 gangsmåden beskrevet af Caserio et al., JACS 80, 2584, 1958, giver de tilsvarende methylethere.
Narmere bestemt blev 16a-hydroxy-5a-androstan-17-on (1 mmol, 290 mg) i 100 ml methy1ench1 or id og 1 ml af en 1:40-fortynding 15 af frisk destilleret BF3~etherat i methylenchlorid behandlet med overskud af etherisk diazomethan, indtil den gule farve . var vedvarende. Reaktionsblandingen blev vasket med fortyndet natriumhydroxid og vand blev filtreret igennem vandfrit MgS04.
Den rå reaktionsblanding blev underkastet HPLC på silicagel-20 søjle. Kromatografien blev kørt på en gradient af 0-20% ethylacetat/hexan i 10 minutter ved en strømningshastighed på 10 ml/min. Hovedproduktet havde en retentionstid på 7,5 min. og blev opsamlet. Opløsningsmidlet blev afdampet og der blev tørret. Det rå produkt blev krystalliseret ud fra methanol til 25 frembringelse af farveløse nåle med snip. 87-88eC. Infrarød analyse viste et etherbånd ved 1200 cm-* og fraværet af et 0H-bånd.
Eksempel x 30 A. 16-hydroxymethy1 en-5-androsten-17-on (5) og 16-hydroxymethylen-5a-androstan-17-on (6) 35 39 DK 173168 B1
η _ h _ CH.OH
9 O CHOH 2 0.2
H H 6, 5*H η' H
S ""
Formylering af 17-onerne ved hjælp af fremgangsmåden beskrevet af C.H. Robinson et al., J. Org. Chem. 28, 975, 1963 giver 16-hydroxymethyl enerne.
10
Katalytisk hydrogenering af enten 5 eller 6 giver hydroxyme-thyl-17-on 7.
B. 16,16-dif1uor-5-androsten-17-on (8) og 16,16-difluor-5a-androstan-17-on (9) (forbindelserne er ikke ifølge opfindelsen) 20 Η' - .5 (CB3)3COK 7-^ 8, Δ5
- Δ FC10 H 9, 5rtH
6, 5of H J
Fluorering af hydroxymethylen-17-onerne i et t-butylalko-hol/kalium-t-butoxid-system (6 mol butoxid per ffiol steroid) 25 med perchlorylfluorid (JOC 28, 975, 1963) giver gem difluoriderne 8 og 9 efter silicagel-HPLC.
Eksempel XI
Fremstilling af 166-isopropyl-5-androsten-l7-0n 30 (Se W.C.J. Ross,--J. C*iem. Soc., side 25, 1945) 35 40 DK 173168 B1 O ^CH3 ch,oh/ch,coch_ •<XT =-<<36° ’
5 h A
10
En opløsning af 5-androsten-17-on {2,0 g) i acetone {10 ml) og methanol (10 ml) blev opvarmet til tilbagesvaling i 1 time med 2,0 g kaliumhydroxid. Reaktionsblandingen blev afkølet og fortyndet med vand. Ekstraktion af produktet med methylenchlor id 15 og krystallisation ud fra methanol gav 1,40 g (64,5%) nåle med smeltepunkt 183-185°. Infrarød analyse viste et carbonylbånd ved 1701 cm-* og et stærkt olefinbånd ved 1628 cm-1, hvorved dannedes 10£-isopropy1 -5-androsten-17-on. 16-isopropyli-den-androsten-17-onen som dannet ovenfor (2 mml, 624 mg) blev 2Q hydrogeneret med hydrogen i 5% pa 11 adium-på-carbon i ethan i en Paar-ryster ved 40 psi i 10 min. Katalysatoren blev filtreret fra. Direkte krystallisation af blandingen gav 390 mg lange nåle (97,5-98®C).
Modervæsken blev underkastet flashkromatografi på silicagel og 2 5 blev elueret med 8% ethyl acetat-hexan. Udbyttet var 20 mg med smp. 98-99°.
Derfor var det samlede udbytte 460 mg (73,2% udbytte). IR viste, at ring-D-carbonylen var ikke-konjugeret og gav et bånd 30 ved 1731 cm-1.
De følgende forbindelser er blevet testet i de efterfølgende biologiske analyser. Oisse forbindelser vil blive betegnet i de følgende tabeller ved hjælp af de betegnelser, der er an-35 ført under deres kemiske formler: DK 173168 B1 .«S* aP' p 5 i 2 3 O OH o
. P op <P
H 4 H 5 6.
O
?. f O OCH^ c6^ aS^' o5*" 7 8 9 " H “
, « CH J
dir*1* 10 25
Forbindelserne 1 og i er ikke ifølge opfindelsen.
Inhibering af G6P0H 30
Forbindelserne anført nedenfor screenes som inhibitorer af oprenset bovinadrenal G6PDH-aktivitet som en forudsigelse af cancerpreventiv virkning. Analysen til undersøgelse af inhibering af oprenset bovinandrenal G6P0H er ifølge fremgangsmåden beskrevet af G.W. Oertell og I. Rebelein i Biochem. Bio-35 phys. Acta, 184, 459-460 (1969). Resultaterne er anført nedenfor i tabel I:
Tabel I
42 DK 173168 B1 G6P0H-1nhiberingsforsøg
Forsøgsforbindelse % inhibering 5 2 10"5M 77, 77 10"6M 30, 36, 29, 38 3 10"5M 79, 83 10~6M 75, 77 10 5 10“5M 96, 96, 96, 96 10‘6M 82, 84 10_7M 36, 36 6 10~5M 54, 52 10"6M 33, 31 15 10-7M 20, 24 7 10'5M 44, 47 10~6M 13, 20 8 10~5M 82, Θ2 10_6M 66, 69 20 10_7M 28, 34 9 10‘5M 58, 58 10~6M 28, 29 10 10_5M 47, 47 10_6M 23, 19 25 Østrogen og anti-østrogen virkning
Hun-CD-rotter 26-27 dage gamle blev injiceret subkutant i 3 dage med en af forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse i en mzngde på 60 mg/kg i propylenglycol. Kontroldyr 30 modtog kun propylenglycol. På den fjerde dag blev rotterne slagtet og dyrenes uterus blev udskåret og vejet. Resultaterne er anført i tabellerne nedenfor: 35
Tabel 2 43 DK 173168 B1 Østrogen og anti-østrogen virkning
Forbindelse nr. 2 blev undersøgt for østrogen og anti-østrogen 5 virkning.
Forbindelse Gennnemsnitiig uterusvagt ± S.D.
(mg/ioo g legemsvægt) 10 Kontrol 2,02 + 0,28 (n = 6) 1 (60 mg/kg) 4,17 ± 0,48 (n=6)* 2 (60 mg/kg) 2,15 ± 0,17 (n=6) *Signifikant større end kontrolgruppe, p < 0,001 15 Tabel 2a Østrogen og anti-østrogen virkning
Forbindelse nr. 3 blev undersøgt for østrogen og anti-østrogen vi rkn i ng: 20
Forbindelse Gennnemsni11ig uterusvagt ± S.D.
(mg/100 g legemsvagt)
Kontrol 1,95 t 0,22 (n = 6) 25 1 (60 mg/kg) 3,93 ± 0,71 {n = 5)* 3 (60 mg/kg) 1,93 ± 0,29 (n*5) *S ign i f i kant større end kontrolgruppe, p < 0,001
Baggrundsinformation vedrørende virkninger af DMBA og TPA
30
Hudtumorer kan induceres 1 mus enten ved ugentlig applikation af et carcinogen, såsom 7,12-dimethyl-benzylanthracen (DMBA), eller alternativt ved en enkelt sub-tarskeldosis af carcinoge- net efterfulgt af applikationer to gange ugentligt af tumor- promotoren tetradecanoylphorbol-13-acetat (TPA). For at udøve 3 5 dets carcinogene virkning skal DMBA metaboliseres af en NADPH-afhangig oxidase med blandet funktions til kemisk reaktive mellemprodukter, som binder kovalent til 0ΝΑ og frembringer 44 DK 173168 B1 mutationer, som fører til ondartet transformation. Dehydroe-piandrosteron (DHEA) og 3B-methylandrost-5-en-17-on inhiberer 7,12-dimethy1benz(a)anthracen (DMBA)-initieret og 12-0-tetra-decanoylphorbol-13-acetat (TPA)-fremmet hudpapillomadannelse 5 hos mus, Carcinogenesis, 5, 464-466, og DHEA inhiberer bin dingsgraden af topisk tilført 3H-DMBA til A/J-musehud-DNA (tabel 4). Det kraftige androgen, testosteron, er uden inhibe-rende virkning. Virkningen af DHEA er meget sandsynligt et resultat af inhiberingen af G6PDH og sænkning af den intra- 10 cellulære pool af NADPH, som er en co-faktor for blandet- funktion-ox i daseakt i ver i ng af DMBA. Topisk DHEA- eller 3p-me-thylandrost-5-en-17-on-applikation inhiberer også DMBA-frem-bragte papillomaer og carcinomaer i den fuldstændige carcinogenesis model (L.L. Pashko, G.C. Hard, R.J. Rovito, J.R. Wil-15 liams, E.L. Sobel og A.G. Schwartz (1985). Inhibition of 7,1 2-di met hyl-benz(a ) anthracene induced skin papillomas and carcinomas by dehydroepiandrosterone and 38-methylandrost-5-en-17-one in mice, Cancer Res., 45, 164-166).
2Q Tumorpromotorer, såsom TPA, stimulerer hyperplasia og DNA-syntese når påført huden og det menes, at denne stimulering er et vigtigt trin ved forøgelsen af tumorigenesi s. Denne stimulering af epidermal DNA-syntesegrad af TPA kan vises ved en forøget grad af 3H-thymidi ni nkorporeri ng i museep iderm is 20 25 timer efter TPA-applikation. Igen ophæver topisk DHEA-behand-ling denne stimulering (tabel 5).
Inhiberingen af TPA-sti mu 1 er ing af epidermal 3H-thymidininkorporering af DHEA kan også være resultat af G6P0H-inhibering.
Pentose-phosphat-vejen giver både ribosephosphat for ribonu-30
c 1eotidsyntese såvel som NADPH, som er nødvendig både for reduktionen af folinsyre til tetrahydrofolinsyre (nødvendig for ribonucleotid- og thymidylatsyntese) såvel som for aktiviteten af ribonucleotidreductase. DHEA over et interval fra 10“ 5 M
til 10“4 M bremser væksten af mange forskellige cellelinier i 3 5 kultur. En HeLa-cellestamme, TCRC-2, er særlig følsom overfor DHEA-frembragt vækst inhibering. Denne vækst inhibering kan næsten fuldstændig overvindes ved tilsætning til kulturmediet af 45 DK 173168 B1 en blanding af deoxynucleosidenne adenin, guanin, cytosin og thymin, hvilket er i overensstemmelse med den hypotese, at DHEA inhibener cellevækst gennem G6PDH-inhibering (C.R. Dwor-kin, S.D. Gorman, L.L. Pashko, V.J. Cristofallo og A.G.
5 Schwartz (1986). Inhibition of growth of HeLa and WI-38 cells by dehydroepiandrosterone and its reversal by ribo-and deoxy-ribonuc1eosides, Life Sci., 38, 1451-1457).
Fødebegrænsning og cancerpræventi on 10
Det har veret kendt i 45 år, at reduktion af laboratoriemus's fødeindtagelse inhiberer udviklingen af et bredt spektrum af spontant og kemisk inducerede tumorer (A. Tannenbaum (1940);
The Initiation and Growth of Tumors. Introduction. I. Effects of Underfeeding, Am. J. Cancer, 38, 335-350), men denne 15 virknings-mekanisme er ikke klar. Det ser ud til, at fødebe-grcnsning af mus's fødeindtagelse i to uger inhiberer både bindingen af 3H-DMBA til hud-DNA såvel som TPA-stimuler i ngen af epidermal 3H-thymidininkorporering (tabellerne 4 og 6) i en grad, som er sammenlignelig med den, der er observeret ved en 20 tilførsel af 400 pg DHEA. Begge disse virkninger af fødebe-grænsning resulterer meget sandsynligt fra en depression i G6PDH-aktivitet (tabel 7). Således kan inhibering af G6PDH-ak-tivitet være en vigtig komponent i de cancerpræventive virkninger af både fødebegrænsning og DHEA-behandling.
25
Administration af OHEA 1 en daglig dosis på cirka 400 mg/kg i længerevarende eksperimenter har vist sig at inhibere udviklingen af bryst-, lunge- og tarm-tumorer. Denne DHEA-dosis, når indgivet gentagne gange i løbet af en periode på få uger, 30 frembringer også en anti-vægtvirkning. En enkelt administration af DHEA ved 400 mg/kg til mus inhiberer imidlertid ikke 3H-DMBAbinding til hud-DNA og inhiberer ikke TPA-stimuleringen i epidermal 3H-thymidininkorporering i en grad, som er sammenlignelig med den, som frembringes ved enten fødebegrænsning 35 eller en topisk applikation af 400 pg DHEA. (Tabel 9 vs tabel 5 og tabel 6.) Behandling af mus i 4 uger med 400 mg/kg OHEA inhiberer imidlertid 3H-DHBA-binding til hud-DNA, men denne DHEA-behandlingskur frembringer også en anti-vægtvirkning , som DK 173168 Bl 46 skyldes både en reduktion i fødeindtagelse og en formindskelse i effektiviteten af fødeudnyttelse. Således kan den cancerpra-ventive virkning af DHEA indirekte vare et resultat af dets anti-vægtvirkning snarere end fra en direkte virkning af DHEA 5 el ler målcel lerne.
Forbindelserne 2, 3 og 5 når administreret oralt til mus inhiberer imidlertid 3H-DMBA-binding til hud-DNA og TPA-stimulering i 3H-thymidininkorporering (tabellerne 3, 8 og 9) i en grad, som er sammenlignelig med den, der frembringes ved fødebegrænsning ved doser langt under 400 mg/kg, mens DHEA er inaktiv. Ved disse doser frembringer de hidtil ukendte forbindelser ikke en anti-vagtvirkning, men den mulige undtagelse for forbindelse 3, som forekommer at vare flere gange mere ak-15 tiv end DHEA som et anti-obesitetsmiddel. Derfor er de cancer-preventive virkninger af forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse mere kraftige end den cancerpraventive virkning af DHEA, og desuden er den cancerpraventi ve virkning af de hidtil ukendte steroider blevet adskilt fra anti-obesites-2o virkningen.
25 30 35
Tabel 3 47 DK 173168 B1
Virkning af oral administration af forbindelserne 4 og 5 p4 TPA-st i nu ler i ng af 3H-1hymi di ninkorporering i museep idem i s .
5 Behandling Specifik aktivitet (cpm/pg DNA)
Intet steroid 70,2 ± 2,3 (n=2)
Intet steroid plus TPA 154 ± 16 (n»2) 10 TPA plus forbindelse 5 (100 mg/kg) 7,2 ± 3,8 (n = 3) TPA plus forbindelse 5 (50 mg/kg) 25,6 ± 4,0 (n*3) TPA plus forbindelse 5 (25 mg/kg) 66,1 ± 9,8 (n*3)
Han-ICR-mus blev oralt intuberet med steroid suspenderet i sesamolie (0,5 ml/nus) i den angivne dosis. Mus, som ikke modtog 15 steroid, fik kun sesamolie. En time senere modtog mus topisk applikation af TPA og 20 timer senere blev graden af 3H-thymi-dininkorporering i epidermis bestemt som beskrevet i L.L. Pashko, A.G. Schwartz, M. Abou-Gharbia og D. Swern (1981), In-g hibition of DNA synthesis in mouse epidermis and breast epithelium by dehydroepiandrosterone and related steroids, Carcinogenesis, 2, 717-721.
25 30 35 48 DK 173168 B1
Tabel 4
Virkning af steroidbehandling eller to ugers fødebegrænsning på (3H)-DMBA-binding til hud-DNA
5 Behandling Specifik aktivitet (cpm/pg DNA)
Ad libitum fodret 116 ± 5,2
Ad libitum fodret plus DHEA 66 ± 13 10 Ad libitum fodret plus testosteron 164 ± 8,4
Begrænset føde (to uger) 57 i 14
Binding af [3H]DMBA til musehud-DNA blev bestemt som beskrevet i L.L. Pashko og A.G. Schwartz (1983), Effect of food restric-15 tion, dehydroepiandrosterone, or obesity on the binding of 3H-7,12-dimethy1benz( a )-anthracene to mouse skin DNA, J.
Gerontol., 38, 8-12. Værdier er gennemsnit ± standardafvigelse for tre individuelle bestemmelser med pool'et væv fra to mus anvendt for hver bestemmelse. DHEA eller testosteron (400 pg i 20 0,2 ml acetone) blev tilført huden en time før [3H]DMBA. Gen nemsnitsvægten for mus, der fik tilført begrænset føde, var 18,5 ± 1,0 gram, n=6, for de ad libitum fodrede 27,4 ± 1,0 g, n=6, for de ad libitum fodrede samt behandlede med DHEA 28,2 ± 0,9 g, n = 6, og for de ad libitum fodrede samt behandlede med 25 testosteron 28,3 ± 0,9 g, n=6, efterfulgt af to ugers fodring.
Den gennemsnitlig indtagne mængde føde var i gram/mus/dag 2,2, 3,8, 3,8 og 4,0 for henholdsvis de grupper, der fik tilført begrænset føde, de ad libitum fodrede, de ad libitum fodrede plus DHEA og de ad libitum fodrede plus testosteron.
3 0 * Signifikant mindre end ad libitum fodrede mus, p < 0,01; ** Signifikant større end ad libitum fodrede mus, p < 0,01.
35
Tabel 5 49 DK 173168 B1
Inhibering af TPA-st iraulerIng af 3n-t hym id i ni nkorporer i ng i epidermis af DHEA
5
Behandling Specifikaktivitet (cpm/pg ONA)
Intet steroid 66 t 1,8
Intet steroid plus TPA 174 j 35 10 TPA plus DHEA (100 μg) 52 ± 5,8 TPA plus DHEA (400 pg) 22 ± 6,5 TPA plus testosteron (100 pg) 128 ± 13 TPA plus testosteron (400 pg) 142 ± 5,9 15 Inkorporering af 3H-thymidin i A/J-museepidermalt DNA blev bestemt som beskrevet i L.L. Pashko, A.G. Schwartz, M. Abou-Gharbia og D. Swern (1981), Inhibition of DNA synthesis in mouse epidermis and breast epithelium by dehydroepiandroste-rone and related steroids, Carcinogenesis, 2, 717-721. Værdier 20 er Gennemsnitsværdi ± standardafvigelse for 3 separat behandlede mus i hver gruppe 20 timer efter TPA-applikation. DHEA eller testosteron blev tilført topisk i 0,2 ml acetone 1 time før TPA-ti 1sætning.
Tabel 6 25
Virkning af to ugers fødebegrænsning på TPA-stimulering af epidermal 3H-thymidininkorporering
Behandling Specifik aktivitet 30 (cpm/pg DNA)
Ad libitum fodret 54 ± 0,8
Ad libitum fodret plus TPA 193 ± 25
Begrænset føde (to uger) plus TPA 34 ± 6,8 35 Inkorporering af 3H-thymidin i A/J-museepidermalt DNA blev bestemt som beskrevet i tabel 5. Værdier er gennemsnitsværdi t standardafvigelse for tre separat behandlede mus i hver gruppe. Gennemsnitsvægten af mus, der fik tilført begrænset 50 DK 173168 B1 føde, var 18,3 ± 0,6 gram, n = 3, og vægten af ad libitum fodrede var 26,7 ± 1,4, n= 6, efterfulgt af to ugers fodring. Den gennemsnitlige mængde konsumeret føde var 2,4 gram/mus/dag for mus med begrænset føde tilført og 4,9 gram/mus/dag for ad 5 libitum fodrede mus.
Tabel 7
Virkning af to ugers fødebegrænsning på epidermal G6P0H-akti-vi tet 10
Behandling Specifik aktivitet (nmol NADPH/mg protein min.)
Ad libitum fodret 43,4 ± 6,0 15 Begrænset føde (to uger) 18,1 i 5,1
Epidermal G6PDH-aktivitet blev bestemt som beskrevet i V.A. Ziboh, M. A. Dreize og S.L. Hsia (1970), Inhibition of lipid synthesis and g 1ucose-6-phosphate dehydrogenase in rat skin by dehydroepiandrosterone, J, Lipid Res., 11, 346-351, og G.E.
20
Clock og P. McClean (1953). Further studies on the properties of glucose-6-phosphate dehydrogenase and 6-phosphog1uconate dehydrogenase of rat liver, Biochem. J., 55, 400-408. Værdierne er gennemsnitsværdi + standardafvigelse for tre separate bestemmelser med sammenbragt epidermalt væv fra 4 mus anvendt 2 5 for hver bestemmelse. Gennemsnitsvægten for musene, der fik tilført begrænset føde, var 18,4 i 0,8 gram, n=12. Den gennemsnitlige mængde indtagne føde var 2,4 gram/mus/dag for musene, der fik tilført begrænset føde, og 3,9 gram/mus/dag for de ad libitum fodrede mus.
30 35
Tabel 8 51 DK 173168 B1
Virkning af oral admin i strat i on af forbindelse 2 på TPA-stimulering af 3H-thymidininkorporering i museepidermis.
5 Behandling Specifik aktivitet (cpm/pg DNA) TPA plus forbindelse 2 (200 mg/kg, p.o.) 14,3 ± 1,7 (n=3) TPA plus forbindelse 2 (150 mg/kg, p.o.) 14,0 ± 1,1 (n=3) 10 TPA plus forbindelse 2 (75 mg/kg, p.o.) 15,9 ± 2,4 (n=3)
Forsøgsbetingelserne er de samme som anført ved tabel 3.
Tabel 9 15 Virkning af oral administration af DHEA (forbindelse nr. 1) eller forbindelse nr. 3 på TPA-stimulering af 3H-thymidin-inkorporering i museepidermis.
Behandling Specifik aktivitet 2Q (cpm/pg DNA)
Intet steroid 55,1 ± 1,6 (n=3)
Intet steroid plus TPA 118 i 10,5 (n=3) TPA plus DHEA (400 mg/kg) 50,9 + 3,2 (n=3) TPA plus forbindelse 3 (100 mg/kg) 15,0 ± 6,3 (n=3) 25 TPA plus forbindelse 3 (50 mg/kg) 36,2 ± 1,4 (n=3) TPA plus forbindelse 3 (25 mg/kg) 47,9 ± 2,0 (n=3)
Forsøgsbetingelserne er de samme som anført ved tabel 3.
30 35
Tabel 10 52 DK 173168 B1
Anti-obesitetsvirkning af forbindelse 2 og DHEA forbindelse nr. 1 5
Han-A/J-mus (5 uger gamle) blev leveret fra the Jackson Laboratory og anbragt i polycarbonatbure (6 mus/bur) i dyrekvar-terer holdt ved 24+leC med 12 timers lys og 12 timers mørke hvert døgn. En uge efter modtagelse blev musene sat på en diæt indeholdende enten DHEA (forbindelse nr. 1), forbindelse nr. 2 10 eller uden steroid. Dyrene blev vejet en gang ugentligt.
Uge Kontrol (intet steroid) Forb. 1 (0,45%) Forb. 2 (0,45%) Gennemsnitlig ugentlig vægt i gram ± S.D. (n=6) 15 0 23 ± 1,5 23,0 + 1,5 23,3 + 1,6 1 25,0 ± 1,6 22,8 ± 1,5 21,1 ± 1,4 2 27,0 ± 1,6 19,0+1,5 21,9+1,0 3 27,3 i 1,6 21,5 + 1,1 23,6 ± 1,5 4 27,5 + 1,9 21,4 ± 1,2 23,5 + 1,5 20
Tabel 10A
Hun-Balb/c-mus (8 uger gamle) blev leveret fra the Jackson Laboratory og anbragt i polycarbonatbure (6 mus/bur) i dyre-kvarterer holdt ved 24 ± leC med 12 timers lys og 12 timers 25 mørke hvert døgn. En uge efter ankomst blev musene sat på en diæt indeholdende enten DHEA (forbindelse nr. l), forbindelse nr. 3 eller uden steroid. Dyrene blev vejet ugentligt.
Uge Kontrol (intet steroid) Forb. 1 (0,25%) Forb. 3 (0,25%) 30 Gennemsnitlig ugentlig vægt i gram + S.D. (n=6) 0 17,5 ± 1,4 17,5 + 1,5 17,4 + 0,6 1 19,9 + 1,2 20,0 + 0,9 16,9 + 1,0 2 20,6 ± 1,0 20,6 + 0,9 17,8 + 0,8 3 21,8 + 0,8 21,3 ± 1,3 18,0 + 1,3 1. Fremkaldelse af hepatomegali og leverkatalase ved DHEA: mangel på virkning efter behandling med forbindelserne 3 eller 5 35 53 DK 173168 B1
Ud over at mangle DHEA’s østrogene og androgene bivirkninger har forbindelserne nr. 3 og 5 vist sig at mangle en anden bivirkning, som opstår ved OHEA-behandling. OHEA når oralt administreret til mus og rotter over et dosisområde fra 0,2% til 5 0,6%, frembringer 1 everforstørrelse. Lignende forstørrelse ses efter behandling med lægemidlet clofibrat og det menes at være på grund af peroxisom-proli feration i leveren. Peroxisom-proliferation er et resultat af forøgede kata 1asemængder i leveren, og hos mus og rotter kan denne tilstand forøge lever-10 tumordannelse. Det har vist sig, at efter tre ugers oral behandling af mus (0,25% diæt) med enten DHEA, clofibrat, forbindelserne 3 eller 5 forøgede både DHEA og clofibrat levervægt og stimulerede kata 1aseaktivitet, hvorimod forbindelserne 3 og 5 ikke havde nogen virkning på levervægt eller 15 katalaseaktivitet.
Leverforstørrelse forekommer at være en karakteristisk reaktion hos laboratoriedyr og hos mennesker, som udsættes for en række lægemidler eller xenobiotiske midler (J.K. Reddy et al., 2Q Hepatic and Renal Effects of Peroxisome Proliferators: Biological Implications, Annals N.Y. Acad. Sci. (1982), 366, 81-110). To typer hepatomegali er for tiden kendt: 1. Sådanne, som forekommer som reaktion på lægemidler (phenobarbital, DDT etc.), som stimulerer proliferation af glat endop1 asmatisk 25 reticulum i leverceller og inducerer mikrosomal lægemiddel- metabo 1 i serende enzymer, og 2. Sådanne, som forekommer som reaktion på administration af peroxisomproliferatorer. Typiske peroxisomproliferatorer er forskellige hypolipidæmiske lægemidler, såsom clofibrat, og plastificeringsmidlet di(2-ethyl-30 hexy1)-phtha1 at. Vedvarende behandling af mus eller rotter med peroxisomproliferatorer kan føre til hepatocellulære carcinoma .
Opfinderens laboratorium og andre laboratorier (M.P. Cleary, N. Fox, B. Lazin og J.T. Billheimer, Nutr. Res. 5, 1247-1257, 1965, A Comparison of the Effects of Dehydroepiandrosterone Treatment to Ad Libitum and Pair Feeding in the Obese Zucker Rat) har fundet, at behandling af rotter eller mus med tera- 3 5 54 DK 173168 B1 peutiske doser af DHEA (0,2% til 0,6% i diæten) frembringer hapatomegali. Moore et al. (Carcinogenesis 7, 311-316, 1986,
Modifying Influence of Dehydroepiandrosterone on the Development of Dihydroxy-di-n-propylnitrosamine-initiated Lesions in 5 the Thyroid, Lung and Liver of F344 Rats) har fundet, at behandling af rotter med 0,6% DHEA i 20-22 uger efterfulgt af 4 injektioner af carcinogent dihydroxy-di-n-propylnitrosamin in-hiberede dannelsen af enzympositive præondartede foci i leveren. De har imidlertid også fundet, at DHEA fremmede ud-10 viklingen af leverbasofi le læsioner, som var enzymnegative. Oisse sidstnævnte læsioner blev også frembragt ved behandling med diethylhexylphthalat, og forfatterne foreslog, at DHEA kan være aktiv som en peroxisomproliferator.
Peroxisomer indeholder høje katalasemængder, og forøgelsen i 1 5 den specifikke aktivitet af leverkatalase er karakteristisk for den hepatomega1 i, som ses ved behandling med peroxisomprol i feratorer,
Det har vist sig, at behandling af mus med DHEA eller clofi- 2 0 brat (0,25%) i 3 uger forårsager både hepatomegali og en tre gange forøgelse i leverkatalasespecifik aktivitet. Disse resultater er i overensstemmelse med det af Moore et al. fundne og indikerer, at DHEA er en peroxisomproliferator . Forbindelserne 3 og 5 forøgede imidlertid hverken levervægten eller 25 stimulerede katalaseaktivitet (tabel 11). Dette overraskende fund med hensyn til forbindelserne 3 og 5 indikerer, at en potentiel alvorlig bivirkning ved DHEA-behand ling tilsyneladende er blevet fjernet.
30 35
Tabel 11 55 DK 173168 B1
Virkning af steroid- eller clofibrat-behandling på levervægt og katalaseakti vitet 5 Behandling Levervægt Catalaseaktivitet (g/g legemsvægt) (enheder per mg protein) DHEA (0,25%) 0,074 ± 0,005* 97,8 4 24*
Forbindelse 3 (0,25%) 0,066 4 0,005 29,2 ± 2,6 10 Forbindelse 5 (0,25%) 0,061 ± 0,002 32,2 4 6,0
Clofibrat (0,25%) 0,084 ± 0,006** 92,1 4 8,9***
Kontrol 0,057 4 0,006 31,1 4 6,7
Hun-Balb/c-»us blev holdt i polycarbonatbure (6 mus/bur) i dy-15 rekvarterer holdt ved 24 4 1*C med 12 timers lys og 12 timers mørke hvert døgn. Dyrene blev sat på en diæt indeholdende enten DHEA, forbindelserne 3 og 5, clofibrat eller uden nogen tilsætning. Tre uger senere blev dyrene slagtet, leverne blev perfuseret med kold saltopløsning, vejet og 5% 1everhomogena-2q ter blev fremstillet til bestemmelse af katalaseaktivltet ved hjælp af den spektrofotometri ske metode beskrevet af Luck (H. Luck i Method in Enzyme Analysis, H.U. Bergmeyer, Ed. (Verlag Chemie, Weinheim/Bergstrasse, Tyskland, 1965)). Totalprotein blev målt ved hjælp af fremgangsmåden beskrevet af Lowry et 25 al. (O.H. Lowry, N.J. Rosenbrough, A.L. Farr, R.J. Randall, J.
B i o 1 . Chem., 193, 265 (1951 )).
Værdierne er gennemsnitsværdierne ± standardafvigelse for tre separate bestemmelser.
30 * Signifikant større end kontrolværdi en, p < 0,05; ** signifikant større end kontrolværdien, p < 0,002; *** signifikant større end kontrolværdien, p < 0,001.
Anti-autoimmun aktivitet 35
New Zealandske sorte mus (NZB) udvikler en fremadskridende autoimmun Coomb's positiv hæmolytisk anæmi med alderen. Det har 56 DK 173168 B1 tidligere vist sig, at langvarig behandling af NZB-mus med DHEA signifikant inhiberer udviklingsgraden for den autoimmune anæmi. R.H. Tannen, A.G. Schwartz, 1982, Reduced Weight Gain and Delay of Coomb's Positive Hemolytic Anemia in NZB Mice 5 Treated with Dehydroepiandrosterone (OHEA), Fed. Proc., 41, 463 (Abstract). Lucas et al. i J. Clin. Invest., 75, 2091-2093 (1985) har vist, at den orale administration af dehydroisan-drosteran forlængede overlevelsen af New Zealand sort/New Zealand hvid F hybridmus overfor murin lupus erythematosus. I an-10 dre undersøgelser beskrevet heri har det vist sig, at forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse har bevaret DHEA's fysiologisk virkning, såsom cancerpræventiv virkning, uden nogen tilsyneladende østrogen virkning. Der er en rimelig sandsynlighed for, at sådanne steroider også vil bevare DHEA's 15 anti-autoimmune aktivitet.
Sammeniigningsforsøg,_forbindelser kendt fra DK-patentans<z>q- ηίησ nr. 3753/84 20
Virkningen som hæmmere af tumorigenesis for repræsentative forbindelser beskrevet i dansk patentansøgning nr. 3753/84 er til sammenligning opstillet i tabel 12: 25 30 35
Tabel 12 57 DK 173168 B1
BEHANDLING SPECIFIK AKTIVITET
Forbindelser omtalt i DK-patentansøg- (cpm/pg DNA) 5 ning nr. 3753/84____ TPA plus 3-OH-5a-androstan-17- 100 ± 6,0 (n=2) on (200 mg/kg)_______ TPA plus 3-OH-5a-androsian-17- 97 ± 15 (n=2) on (100 mg/kg)_____ TPA plus 5a-androstan-17-on 64 ± 10 (n=2) (200 mg/kg)_____ TPA plus 5a-androstan-17-on 113 ± 21 (n=2)
(100mg/kg)__I
15 TPA plus 3P-methyl-5- 39 ± 1,1 (n=2) androsten-17-on (400 mg/kg)__ TPA plus 3P-methyl-5- 44 ± 2,5 (n=2) androsten-17-on (200 mg/kg)__ TPA plus 3P-methyl-5- 100 ± 19 (n=2) 20 androsten-17-on (100 mg/kg)
Ved sammenligning med resultaterne i tabel 3, 8 og 9, der angår forbindelser ifølge opfindelsen, og tabel 12 bemærkes, at der ved forsøgene ifølge dansk patentansøgning 25 nr. 3753/84 generelt administreres en højere steroiddosis til musene. Endvidere bemær kes, at til trods for denne højere dosering af forbindelserne udviser disse en ringere 3H-thymidininkorporering i sammenligning med repræsentative forbindelser ifølge den foreliggende opfindelse, hvor disse benyttes i lavere doser. Denne sammenligning viser 30 således tydeligt, at forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse har en uventet højere kraft til at forhindre inkorporering af 3H-thymidin, og at de således har en uventet højere kraft som hæmmere af tumorigenesis. På basis af denne sammenligning kan det klart konkluderes, at forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse har en uventet større effektivitet som kemopræventive lægemidler.
3 5 58 DK 173168 B1
Forbindelserne, det vil sige de terapeutiske midler ifølge opfindelsen, kan administreres alene eller i kombination med farmaceutisk acceptable bærere, hvis andel bestemmes af opløseligheden og den kemiske natur af forbindelsen, valgt admini-5 strationsvej og standardfarmaceutisk praksis. For eksempel kan de administreres oralt i form af tabletter, piller eller kapsler indeholdende sådanne excipienter, såsom stivelse, mælkesukker, visse typer ler og så videre. De kan indgives oralt i form af opløsninger, som kan indeholde farvestoffer og 10 smagsstoffer, eller de kan injiceres parenteralt, det vil sige intramuskulært, intravenøst eller subkutant. Til parenteral administration kan de anvendes 1 form af en steril opløsning indeholdende andre opløsningsmidler, f.eks. nok saltopløsning eller glucose til at gøre opløsningen isotonisk.
15 Lægen vil bestemme den dosis af de foreliggende terapeutiske midler, som vil være mest hensigtsmæssig, og dosen vil variere med administrationsformen og den spec ielt valgte forbi ndel se og vil desuden variere alt efter den patient, der behandles.
Man vil almindeligvis ønske at starte behandlingen med små doser, som er væsentligt under den optimale dosis af forbindelsen, og forøge dosen lidt efter lidt, indtil den optimale virkning under de pågældende omstændigheder opnås. Det vil almindeligvis vise sig, at når midlet administreres oralt, kræves der større mængder af det aktive stof til frembringelse af 25 den samme virkning som en mindre mængde indgivet parenteralt. Forbindelserne er egnede på samme måde som tilsvarende lægemidler og dosismængden er af samme størrelsesorden som almindeligt anvendt med disse andre lægemidler.
30 Givet oralt er de terapeutiske doser af forbindelsen ifølge opfindelsen generelt i området på fra cirka 4 til cirka 450 mg/kg/dag afhængig af det bestemte pattedyr, der behandles, og hvilken særlig effekt, der ønskes, f.eks. cancerpræventiv, ant i-obesitet, anti-diabetes, etc., når indgivet parenteralt 35 admi nistreres forbindelserne generelt i doser på f.eks. 0,5 til cirka 15 mg/kg/dag også afhængig af værten og den ønskede virkning.

Claims (10)

10. Z * hvori hver R-p R2, R4, Rg, Rg, R7, X og Z er som defineret i krav 1. 15 3. 5a-androstan-17-on ifølge krav 1, kendetegnet ved formlen: f z 20 x (r2>» jL 1 1 2. li U h 6 hvori hver Rx, R2, R4, R5, Rg, R7, X og Z er som defineret i krav 1. 3 0 4. 5a-androsten-17-on ifølge krav 1 eller 2, kendetegne t ved formlen: 35 DK 173168 B1 dS* hvori Xn er fluor, chlor, hydroxy eller lavere alkyl; og Z er lavere alkyl eller hydrogen. 5. 5a-androstan-17-on ifølge krav 1 eller 3, kende t eg-5 net ved formlen: H hvori X1 er fluor, chlor eller lavere alkoxy; og Z er lavere alkyl eller hydrogen.
6. Forbindelse ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 5, 10 kendetegnet ved, at lavere alkyl og lavere alkoxy indeholder fra 1 til 5 carbonatomer.
7. Forbindelse ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 6, kendetegnet ved, at lavere alkyl er methyl.
8. Forbindelse ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 7, „ DK 173168 Bl kendetegnet ved, at X er fluor.
9. Forbindelse ifølge et hvilket som helst af kravene 2 eller 4, kendetegnet ved, at x er fluor, hydroxy eller methyl.
10. Forbindelse ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 9,kendetegnet ved, at Z er hydrogen eller methyl.
11. Forbindelse ifølge et hvilket som helst af kravene 1-3, kendetegnet ved, at X er methoxy og Z er hydrogen eller methyl.
12. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det er forbindelsen: a5*' DK 173168 B1 0$^" ..... ctS*'
13. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er: aS* H
14. Terapeutisk middel, kendetegnet ved, at det omfatter en effektiv mængde af en forbindelse ifølge et hvil- 5 ket som helst af kravene 1 til 13 og en farmaceutisk bærer derfor.
DK198702593A 1986-05-21 1987-05-21 5alfa-androsten-17-oner og 5alfa-androstan-17-oner, der er virksomme mod kræft og obesitet, samt terapeutisk middel der ind DK173168B1 (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US86711286A 1986-05-21 1986-05-21
US86711286 1986-05-21

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK259387D0 DK259387D0 (da) 1987-05-21
DK259387A DK259387A (da) 1987-11-22
DK173168B1 true DK173168B1 (da) 2000-02-28

Family

ID=25349110

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK198702593A DK173168B1 (da) 1986-05-21 1987-05-21 5alfa-androsten-17-oner og 5alfa-androstan-17-oner, der er virksomme mod kræft og obesitet, samt terapeutisk middel der ind

Country Status (12)

Country Link
EP (1) EP0246650B1 (da)
JP (1) JP2566574B2 (da)
AT (1) ATE71107T1 (da)
AU (1) AU601184B2 (da)
CA (1) CA1329195C (da)
DE (1) DE3775617D1 (da)
DK (1) DK173168B1 (da)
ES (1) ES2039373T3 (da)
GR (1) GR3003769T3 (da)
IE (1) IE60027B1 (da)
NO (1) NO173278C (da)
PT (1) PT84911B (da)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK0547151T3 (da) * 1990-08-29 2003-03-17 Humanetics Corp Behandlingsmåde til fremme af vægttab under anvendelse af et substitueret delta-5-androsten
US5506223A (en) * 1990-08-29 1996-04-09 Humanetics Corporation Δ5-androstenes useful for promoting weight maintenance or weight loss and treatment process
US5585371A (en) * 1990-08-29 1996-12-17 Humanetics Corporation Treatment of immune system with Δ5-androstenes
JPH0684398B2 (ja) * 1990-08-31 1994-10-26 雪印乳業株式会社 新規なアンドロステン誘導体及びそれを用いる６‐アルキルカルボニルオキシ‐１４α‐ヒドロキシ‐アンドロスト‐４，６‐ジエン‐３，１７‐ジオンの製造法
EP1351971A2 (en) * 2000-10-06 2003-10-15 Aeson Therapeutics Inc. Compounds useful for treating hypertriglyceridemia
JP2005529141A (ja) * 2002-05-01 2005-09-29 アーサー シュワルツ、 ７−ヒドロキシ−１６α−フルオロ−５−アンドロステン−１７−オン類および７−ヒドロキシ−１６α−フルオロ−５−アンドロスタン−１７−オン類およびそれらの誘導体

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3485647D1 (de) * 1983-08-02 1992-05-21 Research Corp Steroide und diese enthaltende therapeutische zusammensetzungen.
EP0210665B1 (en) * 1985-08-02 1989-10-18 Research Corporation Steroids useful as anti-cancer, anti-obesity, anti-hyperglycemic, anti-autoimmune and anti-hyper-cholesterolemic agents
JP2920854B2 (ja) * 1991-08-01 1999-07-19 富士通株式会社 ビィアホール構造及びその形成方法

Also Published As

Publication number Publication date
AU601184B2 (en) 1990-09-06
PT84911B (pt) 1990-02-08
IE871312L (en) 1987-11-21
JPS62283993A (ja) 1987-12-09
AU7329687A (en) 1987-11-26
NO872115D0 (no) 1987-05-20
CA1329195C (en) 1994-05-03
DK259387A (da) 1987-11-22
EP0246650B1 (en) 1992-01-02
NO173278B (no) 1993-08-16
IE60027B1 (en) 1994-05-18
ES2039373T3 (es) 1993-10-01
PT84911A (en) 1987-06-01
DE3775617D1 (de) 1992-02-13
JP2566574B2 (ja) 1996-12-25
DK259387D0 (da) 1987-05-21
NO872115L (no) 1987-11-23
ATE71107T1 (de) 1992-01-15
EP0246650A1 (en) 1987-11-25
GR3003769T3 (da) 1993-03-16
NO173278C (no) 1993-12-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0133995B1 (en) Steroids and therapeutic compositions containing same
US5700793A (en) Steroids useful as anti-cancer and anti-obesity agents
EP1169336B1 (en) Ent-steroids as selectively active estrogens
EA014325B1 (ru) 18-метил-9-нор-17-прегн-4-ен-21,17-карболактоны, а также лекарственные препараты, которые их содержат
US5157031A (en) Method for prophylaxis of obesity
GB1599863A (en) Pharmaceutical compositions for use in the inhibition of the biosynthesis of mevalonic acid
DK171968B1 (da) 5-androsten-17-on-forbindelser samt terapeutisk præparat, der indeholder en sådan forbindelse
DE4338316A1 (de) Neue Steroide mit radikophilen Substituenten, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel
US4082780A (en) Estradiol derivatives
EP1580192A2 (de) 16-Hydroxyestratriene als selektiv wirksame Estrogene
DK173168B1 (da) 5alfa-androsten-17-oner og 5alfa-androstan-17-oner, der er virksomme mod kræft og obesitet, samt terapeutisk middel der ind
US5371077A (en) Side chain derivatized 15-oxygenated sterols, methods of using them and a process for preparing them
EP0719276A1 (en) Orally active derivatives of 1,3,5(10)-estratriene
EP0055170B1 (fr) Nouveaux dérivés stéroides 3-céto delta 4 ou delta 1-4 substitués en position 7, leur préparation, leur application comme médicaments et les compositions les renfermant
Rosen et al. Synthesis and biological activity of some 15-oxaestranes
CH633714A5 (fr) Derives 17alpha-acetyleniques de l&#39;androst 4-ene, procede de prepararation et compositions pharmaceutiques.
JPS635097A (ja) アンドロスト−４−エン−３，１７−ジオンのメチレン誘導体およびその製造方法
US3462465A (en) 6,7-methylene steroids
IE73240B1 (en) Steroids and therapeutic compositions containing same

Legal Events

Date Code Title Description
B1 Patent granted (law 1993)
PBP Patent lapsed

Country of ref document: DK