DK172788B1 - Anvendelse af castanosperminestere til fremstilling af et farmaceutisk præparat - Google Patents

Description

i DK 172788 B1

Opfindelsen angår anvendelsen af visse castanosper-minestere til behandling af retrovirale infektioner, herunder HIV-infektioner.

Der er fortiden meget forskning igang til udvikling 5 af behandlinger og lægemidler mod virale infektioner hos mennesker og dyr. Især forøges forekomsten af AIDS og ARC hos mennesker med en alarmerende hastighed. En overlevelsessats på fem år for personer med AIDS er nedslående, og AIDS--patienter, hvis immunsystem er blevet alvorligt svækket 10 ved infektionen, lider af mange opportunistiske infektioner, herunder Kaposi's sarcoma og Pneumocystis earn ini i-pneumonia.

Der kendes ikke noget lægemiddel mod sygdommen, og hidtidige behandlinger er stort set uden tilstrækkeligt bevis på en virkningsfuldhed, og behandlingerne har mange uheldige bi-15 virkninger. Frygt for sygdommen har resulteret i udstødelse af samfundet og diskrimination af de personer, der har eller som mistænkes for at have sygdommen.

Retrovira er en klasse ribonucleinsyre (RNA)-vira, der replikerer under anvendelse af omvendt transkriptase 20 til dannelse af en streng komplementær DNA (cDNA), ud fra hvilken der dannes et dobbelt-strenget proviralt DNA. Dette provirale DNA inkorporeres herefter vilkårligt i værtscellens chromosomale DNA, hvilket gør viral replikation ved senere translation af det integrerede DNA indeholdende det virale 25 genom mulig.

Mange af de kendte retrovira er onkogene eller frem-kaldér tumorer. Faktisk viste de to først opdagede humane retrovira, der betegnes human T-celleleukemivirus I og II eller HTLV-I og -II, sig at forårsage sjældne leukemier hos 30 mennesker efter infektion af T-lymphocyterne. Det tredie humane virus af denne type, der blev opdaget, HTLV-III, der nu betegnes HIV, fandt man forårsagede celledød efter infektion af T-lymphocyterne, og dette virus er blevet identificeret som det materiale, der forårsager erhvervet immundefekt-35 -syndromet (AIDS) og AIDS-relateret komplet (ARC).

Retrovira har foruden det almindelige virale capsid 2 DK 172788 B1 en ydre membran af lipid og glycoprotein, der ligner almindelige cellers membran. Faktisk er den retrovirale membrans lipid sandsynligvis direkte afledt af en tidligere inficeret værtscelles membran, dog er den virale membrans glycoprotein 5 unikt for viruset selv, og det virale genom koder herfor. Infektion af en værtscelle med et retrovirus afhænger i starten af den indbyrdes reaktion mellem forskellige receptorer på værtscellens overflade og virusets glycoprotein-membrankappe. Herefter sammensmelter virus og cellemembranen, 10 og virionens indhold frigives over i værtscellens cytoplasma. Retroviraenes glycoproteinkappe spiller en vigtig rolle ved den indbyrdes reaktion i begyndelsen mellem virionen og værtscellen og ved den senere fusion mellem den virale membran og værtscellens membran.

15 Interferens med dannelsen af det virale kappeglyco- protein kan forebygge den indbyrdes reaktion i starten mellem virus og værtscelle eller den efterfølgende fusion, eller kan forebygge viral fordobling ved at forhindre dannelse af det korrekte glycoprotein, der er krævet til færdiggørelse 20 af den virale membran. Det er fornyligt beskrevet, at glyco-sylationsinhibitorerne 2-deoxy-D-glycose og j9-hydroxy-nor-valin inhiberer ekspression af HlV-glycoproteiner og blokerer dannelse af syncytia. Η.Ά. Glough et al., Biochemical and Biophysical Research Communications, 141(1), 33-38 (1986).

25 Den virale multiplikation af HIV-inficerede celler, der er behandlet med disse midler, stoppes, sandsynligvis på grund af dét til dannelse af den virale membran nødvendige glycoproteins utilgængelighed. I en anden publikation fandt man, at glycosylationsinhibitoren 2-deoxy-2-fluor-D-mannose ud-30 viser antiviral aktivitet mod med influenza inficerede celler ved at forebygge glycosylation af det virale membranprotein.

W. McDowell et al., Biochemistry, 24(27), 8145-52 (1985).

I denne publikation undersøges også 2-deoxyglucoses og 2--deoxy-2-fluorglucoses antivirale aktivitet, og man fandt, 35 at hver inhiberer viral proteinglycosylation ved hjælp af en forskellig mekanisme. Man har fundet, at mange andre i 3 DK 172788 B1 kendte glycosylationsinhibitorer ikke har nogen antiviral aktivitet. Den antivirale aktivitet mod vira med membran i almindelighed og den anti-retrovirale aktivitet i særdeleshed af glycosylationsinhibitorer er således ret uforudsigelig.

5 Castanospermin er et alkaloid, der er isoleret fra frø af Castanospermum australe, og det har den følgende formel: 1° \-n

.....O

OH OH

15

Denne forbindelse kan systematisk navngives på flere forskellige måder som følger: (lS-(la,6jØ,7a,8ø,8a/?) ]-octa-hydro-l,6,7,8-indolizintetrol eller (lS,6S,7R,8R,8aR)-l,6,- 7,8-tetrahydroxyindolizidin eller l,2,4,8-tetradeoxy-l,4,8-20 -nitrilo-L-glycero-D-galacto-octitol. Betegnelsen "castano-spermin” eller det første systematiske navn anvendes i diskussionen nedenfor.

Isoleringen af denne forbindelse og bestemmelsen af dens struktur er beskrevet af L.D. Hohenshutz et al., Phyto-25 chemistry, 2£L, 811 (1981) . Som en del af hans undersøgelse af castanospermin fik Hohenshutz castanospermin-tetraacetat ved omsætning af castanospermin med et meget stort overskud af eddikesyreanhydrid, men der foreslås ikke andre estere af castanospermin i artiklen.

30 Fra WO offentliggørelsesskrift nr. 87/03903 er det kendt, at castanospermin har virkning på retroviral infektion.

Det har nu vist sig, at visse estere af castanospermin har en overlegen antiretroviral aktivitet i forhold til 35 castanospermin og derfor med fordel kan anvendes til behandling af forskellige retrovirale infektioner, herunder til DK 172788 B1 4 behandlingen af AIDS eller ARC, der hidrører fra infektion med HIV eller andre retrovira.

Den foreliggende opfindelse angår således anvendelsen af castanosperminestere med formlen 5 H° ^

J-N

HO / \ 10 \_/

OH 0R

hvori R betyder Ci-iQ-alkanoyl, furancarbonyl eller benzoyl, 15 som eventuelt er substitueret med Ci_4-alkyl eller halogen, eller et farmaceutisk acceptabelt salt heraf til fremstilling af et farmaceutisk præparat til behandling af en retroviral infektion.

De C^-iQ-alkanoylgrupper, der henføres til ovenfor, 20 kan være ligekædede eller forgrenede eller cycliske, og de kan f.eks. være formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobuty-ryl, cyclopropancarbonyl, hexanoyl, octanoyl og decanoyl. Furancarbonylgrupperne, der henføres til ovenfor, omfatter de forskellige positionsisomere, dvs. furan-2-carbonyl og 25 furan-3-carbonyl.

Udtrykket "et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt" gælder et hvilket som helst ikke-toksisk organisk eller uorganisk syreadditionssalt af forbindelserne som baser. Eksempler på uorganiske syrer, der danner egnede 30 salte, omfatter saltsyre, hydrogenbromidsyre, svovlsyre og phosphorsyre, og syremetalsalte, såsom natriummonohydrogen-orthophosphat og kaliumhydrogensulfat. Eksempler på organiske syrer, der danner egnede salte, omfatter mono-, di- og tri-carboxylsyrerne. Eksempler på sådanne syrer er f.eks. ed-35 dikesyre, glycolsyre, mælkesyre, pyrodruesyre, malonsyre, ravsyre, glutarsyre, fumarsyre, æblesyre, vinsyre, citron- a

II

5 DK 172788 B1 syre, ascorbinsyre, maleinsyre, hydroxymaleinsyre, benzoesyre, hydroxybenzoesyre, phenyleddikesyre, kanelsyre, salicylsyre og 2-phenoxybenzoesyre. Andre organiske syrer, der danner egnede salte, er sulfonsyrerne, såsom methansulfonsyre 5 og 2-hydroxyethansulfonsyre. Disse salte og forbindelserne som baser kan forekomme enten i en hydratiseret form eller på en i det væsentlige vandfri form. Syresaltene fremstilles ved hjælp af standardteknikker, såsom ved at opløse den frie base i en vandig eller en vandig alkohol-opløsning 10 eller et andet egnet opløsningsmiddel, der indeholder den egnede syre, hvorefter der isoleres ved at inddampe opløsningen, eller ved at omsætte den fri base i et organisk opløsningsmiddel, i hvilket tilfælde saltet udskiller direkte, eller det kan fås ved koncentrering af opløsningen. I 15 almindelighed er syreadditionssaltene af forbindelserne ifølge opfindelsen krystallinske materialer, der er opløselige i vand og forskellige hydrophile organiske opløsningsmidler, og som i sammenligning med forbindelserne som frie baser udviser højere smeltepunkter og en forøget opløselig-20 hed.

Foretrukne er de forbindelser anvendt ifølge den foreliggende opfindelse, hvori R betyder en alkanoylgruppe, især en Ci_4~alkanoylgruppe eller en benzoylgruppe, der eventuelt er substitueret med en alkyl eller halogen. Særlig 25 foretrukne er de forbindelser med formlen I, hvori R betyder en C1_4~alkanoyl eller' en benroyl, der eventuelt er substitueret med methyl, brom, chlor eller fluor.

Esterne anvendt ifølge den foreliggende opfindelse fremstilles ved omsætning af castanospermin med et passende 30 syrechlorid eller anhydrid i et indifferent opløsningsmiddel. Halogenidet kan være et chlorid eller bromid, og anhydridet omfatter blandede anhydrider. Den relative mængde af anvendt syrehalogenid eller anhydrid, den relative mængde opløsningsmiddel, temperaturen og reaktionstiden styres alle til mini-35 mering af antallet af hydroxygrupper, der vil blive acylerede. Der anvendes således kun et begrænset overskud af 6 DK 172788 B1 syrederivatet, hvilket vil sige op til ca. et tredobbelt overskud af acyleringsmidlet. Anvendelse af et opløsningsmiddel i relativt store mængder tjener til fortynding af reaktanterne, og til at holde mængden af højere acylerede 5 produkter, der dannes, nede. Det anvendte opløsningsmiddel er fortrinsvis et, der opløser de anvendte reaktanter uden at reagere med disse reaktanter. Det foretrækkes endvidere at udføre omsætningen i nærværelse af en tertiær amin, der vil reagere med og fjerne en hvilken som helst syre, der 10 dannes under reaktionsforløbet. Den tertiære amin kan sættes til blandingen, eller den kan i sig selv anvendes i overskud og tjene som opløsningsmiddel. Pyridin er i denne henseende et foretrukket opløsningsmiddel. Som anført ovenfor styres tiden og temperaturen ligeledes for at begrænse omfanget af 15 den acylering, der finder sted. Fortrinsvis udføres reaktionen med afkøling i et isbad i en tidsperiode på ca. 16 timer til dannelse af monoesterne, hvor reaktionstiden udstrækkes over en længere periode, såsom 7 dage, hvis diesterne er ønskede. Omsætningen kan ligefrem udføres ved højere 20 temperaturer og faktisk kan opvarmning anvendes så længe de forskellige involverede faktorer styres korrekt. Sagen er, at når omsætningen udføres som det er beskrevet, vil den endelige reaktionsblanding stadig indeholde en betragtelig mængde ikke-omsat castanospermin. Dette ikke-omsatte materia-25 le kan fjernes fra reaktionsblandingen, og det kan recirkuleres til efterfølgende omsætninger, og således forøges den samléde mængde af castanospermin, der omdannes til ester.

Denne recirkulation er særlig vigtig når omsætningen udføres under betingelser, der favoriserer isoleringen af monoestere.

30 Castanosperminesterderivaterne ifølge opfindelsens evne til at virke som anti-retrovirale midler kan påvises ved hjælp af deres evne til at inhibere vækst og replikation af murin leukemivirus, et onkogent retrovirus, som bestemt ved hjælp af en in vitro XC-plaque-analyse. Denne analyse 35 udføres i overensstemmelse med den metode, der er beskrevet af Rowe et al. (Virology, 1970, £2, 1136-39) som tidligere 7 DK 172788 B1 er beskrevet af L. Hsu et al. (J. Virological Methods, 1980,

Ir 167-77) og T.L. Bowlin og M.R. Proffitt (J. Interferon Res., 1983, 3 (1)r 19-31). SC-l-celler fra mus (fibroblast) (105) podes i hver brønd i en plade med en klynge på 6 brønde 5 (Costar #3506) i 4 ml minimum essential medium (MEM) med 10% fetalt kalveserum (FCS). Efter en inkubationsperiode på 18 timer (37°c) tilføres Moloney-murin-leukemivirus (MoLV) ved en forud bestemt titerværdi til opnåelse af et optimalt antal (dvs. som kan tælles) virus plaques. Forbindelserne 10 tilsættes 2 timer før tilsætningen af viruset. Tre dage senere fjernes dyrkningsmediet, og SC-l-celle-monolagene udsættes for UV-bestråling (1800 erg), og rotte-XC-celler (106) podes over i hver brønd i 4 ml MEM. Efter yderligere tre dages inkubation (37°C) fikseres disse celler med ethyl- 15 alkohol (95%), og de farves med 0,3% krystalviolet. Plaques tælles derefter under en lille forstørrelse. De antivirale aktiviteter af de forskellige forbindelser ifølge opfindelsen er anført i tabel I.

20 TABEL I

Inhiberende koncentrationer af forskellige castanospermin-esterderivater med formlen I

R IC50 25 (Mg/ml)

Butanoyl 0,1 p-F-Bz 10 30 - / Bz 0, 1 p-CH3-Bz 1,0 35 AC 10 2-Furanoyl 1,0 "Bz" betegner benzoyl; "p-F-Bz" betegner p-fluorbenzoyl; 40 "p-CI^Bz" betegner p-methylbenzoyl; og ’'Ae" betegner acetyl.

8 DK 172788 B1

Castanosperminesterderivaterne anvendt ifølge opfindelsen kan anvendes til behandling af et stort antal sygdomme og tilstande, der vides at vare forårsaget af retrovira, herunder de sygdomme og tilstande, der er forårsaget af murin 5 leukemivirus, katte-leukemivirus, cytomegalovirus (CMV), fjerkræ-sarcoroavirus, humant immundefekt virus (HIV), HTLV--I og HTLV-II. Folk med praktisk erfaring er klar over de omstændigheder, der kræver anti-retroviral behandling. Anvendelsen af castanosperminesterderivaterne ifølge opfindelsen 10 til behandling af HIV-infektioner hos mennesker betragtes som værende af stor vigtighed. Den heri anvendte betegnelse "patient11 betyder pattedyr, såsom primater, herunder mennesker, får, heste, kvæg, svin, hunde, katte, rotter og mus.

Den mængde af castanosperminesterderivat med formlen 15 I, der skal indgives, kan variere meget alt efter den særlige doseringsenhed, der anvendes, behandlingsperioden, den behandlede patients alder og køn, naturen og graden af den sygdom, der behandles, og det særlige castanosperminesterderivat, der er valgt. Endvidere kan castanosperminester-20 derivatet anvendes sammen med andre midler, der vides at være anvendelige ved behandlingen af retrovirale sygdomme, og sammen med midler, der vides at være anvendelige ved behandlingen af symptomer på og de komplikationer, der er forbundet med, sygdomme og tilstande, der er forårsagede af 25 retrovira. Den anti-retroviralt effektive mængde af et castanosperminesterderivat med-formlen I, der skal indgives, er i almindelighed på fra ca. 15 mg pr. kg til 500 mg pr. kg. En enhedsdosering kan indeholde fra 25 til 500 mg af castanosperminesterderivatet, og den kan indtages en eller 30 flere gange pr. dag. Castanosperminesterderivatet kan indgives sammen med en farmaceutisk bærestof enten oralt eller parenteralt under anvendelse af konventionelle doseringsenhedsformer.

Den foretrukne indgivelsesvej er oral indgivelse.

35 Til oral indgivelse kan castanosperminesterderivatet formuleres som faste eller flydende præparater, såsom kapsler, 9 DK 172788 B1 piller, tabletter, pastiller, bolsjer, smelteblandinger, pulvere, opløsninger, suspensioner eller emulsioner. Enhedsdoseringsformerne på fast form kan være en kapsel, der kan være af den almindelige type med en gelatineskal af den 5 hårde eller bløde type, hvilken kapsel f.eks. indeholder overfladeaktive midler, smøremidler og indifferente fyldstoffer, såsom lactose, sucrose, calciumphosphat og majsstivelse. I en anden udformning kan forbindelserne anvendt Ifølge opfindelsen udformes i form af tabletter med de kon-10 ventionelle tabletgrundlag, såsom lactose, sucrose og majs-stivelse, i kombination med bindemidler, såsom acacia, majsstivelse eller gelatine, disintegreringsmidler, der er påtænkt at skulle medvirke ved opsplitningen og opløsningen af tabletten efter indgivelsen, såsom kartoffelstivelse, 15 alginsyre, majsstivelse og guargummi, smøremidler, der er påtænkt at skulle forbedre tabletgranulationens strømning, og som skal forhindre adhæsion af tabletmaterialet til tabletmatricernes og tabletpatricernes overflader, f.eks. talkum, stearinsyre eller magnesium-, calcium- eller zink-20 stearat, farvestoffer og smagsstoffer, der er påtænkt at skulle forøge tabletternes æstetiske kvaliteter og gøre dem mere acceptable for patienten. Egnede excipienter til anvendelse i orale væskeformige doseringsformer omfatter fortyndingsmidler, såsom vand og alkoholer, f.eks. ethanol, ben-25 zylalkohol og polyethylenalkoholerne, enten med eller uden tilsætning af et farmaceutisk acceptabelt overfladeaktivt middel, et suspenderingsmiddel eller et emulgeringsmiddel.

Forbindelserne anvendt ifølge opfindelsen kan også indgives parenteralt, dvs. subkutant, intravenøst, intra-30 muskulært eller intraperitonealt, som injicerbare doseringer af forbindelsen i et fysiologisk acceptabelt fortyndingsmiddel med et farmaceutisk bærestof, hvilket kan være en steril væske eller en blanding af væsker, såsom vand, saltvand, vandig dextrose og lignende sukkeropløsninger, en alkohol, 35 såsom ethanol, isopropanol eller hexadecylalkohol, glycoler, såsom propylenglycol eller polyethylenglycol, glycerolketa- 10 DK 172788 B1 ler, såsom 2,2-dimethyl-1,3-dioxolan-4-methanol, ethere, såsom poly(ethylenglycol)-400, en olie, en fedtsyre, en fedtsyreester eller -glycerid eller et acetyleret fedtsyre-glycerid med eller uden tilsætning af et farmaceutisk accep-5 tabelt overfladeaktivt middel, såsom en sæbe eller en detergent, et suspenderingsmiddel, såsom pectin, carbomere, met-hylcellulose, hydroxypropylroethylcellulose eller carboxy-methylcellulose, eller et emulgeringsmiddel eller andre farmaceutiske hjælpestoffer. Eksempler på olier, der kan an-10 vendes i de parenterale formuleringer ifølge opfindelsen, er olier af jord, animalsk, vegetabilsk eller syntetisk oprindelse, f.eks. jordnøddeolie, sojabønneolie, sesamolie, bomuldsfrøolie, majsolie, olivenolie, paraffinolie og mineralolie. Egnede fedtsyrer omfatter oliesyre, stearinsyre og 15 isostearinsyre. Egnede fedtsyreestere er f.eks. ethyloleat og isopropylmyristat. Egnede sæber omfatter fedtsyrealkali-metal-, -ammonium- og -triethanolaminsalte, og egnede detergenter omfatter kationiske detergenter, f.eks. dimethyl-dialkylammoniumhalogenider, alkylpyridiniumhalogenider og 20 alkylaminacetater; anioniske detergenter, f.eks. alkyl-, aryl og olefinsulfonater, alkyl-, olefin-, ether- og mono-glyceridsulfater og sulfosuccinater,· ikke-ioniske detergenter, f.eks. fede aminoxider, fedtsyrealkanolamider og polyoxyethylenpolypropylen-copolymere; og amfote detergenter, 25 f.eks. alkyl-£-aminopropionater og 2-alkylimidazolin-kvater-nære ammoniumsalte samt blandinger heraf. De parenterale præparater ifølge opfindelsen indeholder typisk fra ca. 0,5 til ca. 25 vægtprocent af castanosperminesterderivatet med formlen I i opløsning. Fordelagtigt kan også konserverings-30 stoffer og puffere anvendes. For at minimere eller eliminere irritation på injektionsstedet kan sådanne præparater indeholde et ikke-ionisk overfladeaktivt middel med en hydrofil--lipofil balance (HLB) på fra ca. 12 til ca. 17. Mængden af overfladeaktivt middel i sådanne præparater kan være fra 35 ca. 5 til ca. 15 vægtprocent. Det overfladeaktive middel kan være en enkelt komponent med den ovenfor anførte HLB, 11 DK 172788 B1 eller det kan være en blanding af to eller flere komponenter med den ønskede HLB. Eksempler på overfladeaktive midler, der kan anvendes i de parenterale formuleringer, er klassen af polyethylensorbitanfedtsyreestere, f.eks. sorbitanmono-5 oleat og addukter af ethylenoxid med en hydrofob base, hvilke har en høj molvægt, der er dannet ved kondensation af pro-pylenoxid med propylenglycol.

Eksempel l 10 En opslæmning af 4,0 g castanospermin i 140 ml pyridin omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter, indtil i det væsentlige al det faste stof er opløst. Opløsningen afkøles til 0°C i et is/vandbad, og hertil dryppes en opløsning af 5,85 ml benzoylchlorid i 15 ml pyridin i løbet af 15 minutter 15 under nitrogen. Efter tilsætningen omrøres reaktionsblandingen ved 8°C natten over.

Reaktionsblandingen fordeles mellem 225 ml methylen-chlorid og 300 ml vand. Det organiske lag skilles fra, og det vandige lag ekstraheres med to 225 ml's portioner methy-20 lenchlorid. De samlede organiske lag vaskes i rækkefølge med 150 ml 0,5 N saltsyre, en mættet natriumcarbonatopløsning, vand, og en mættet natriumchloridopløsning, hvorefter der tørres over natriumsulfat. Ved inddampning af opløsningsmidlerne under formindsket tryk fås 2,9 g af en gyldenbrun 25 glasagtig remanens.

Dette materiale opslæmmes i chloroform, og der dannes en hvid udfældning. Disse faste stoffer isoleres, hvorved fås 910 mg af et hvidt pulver. Tyndtlagschromatografisk analyse (85:15, ethylacetat:methanol) viser at materialet 30 er sammensat af to komponenter (Rf 0,33 og Rf 0,26). Blandingen på fast form opslæmmes i 45 ml 4:1 ethylacetat methanol, og der filtreres. Remanensen tørres under vakuum til tilvejebringelse af 350 mg [lS-(la,6j3,7cr,8/J,8aj9) )-octahydro--l,6,7,8-indolizintetrol-6-benzoat som et hvidt pulveragtigt 35 fast stof med et smeltepunkt på ca. 233-236eC (sønderdeling).

Dette svarer til blandingens mindre polære komponent. NMR

12 DK 172788 B1 (DMSO-dg) S 1,5-2,2 (m, 5H) , 2,9-3,6 (m, 4H) , 4,1 (m, IH, C^-H) , 4,3 (d, IH, -OH), 4,7 (d, IH, -OH), 4,8 (sekstet, IH, C6-H), 5,1 (d, IH, -OH), 7,6-8,1 (m, 5H, aryl). MS (CI-CH4) 294 (MH+), 276 (MH+-H20), 172 (MH+-PhC02H).

5

Eksempel 2 Når fremgangsmåden ifølge eksempel l gentages med anvendelse af castanospermin og et passende syrechlorid fås de følgende forbindelser: 10 [ IS- (1«, 6/3,7α, 8β, 8a/3) ] -octahydro-1,6,7,8-indolizintetrol- -6-(4-fluorbenzoat), der smelter ved ca. 216-218°C; [IS - (Ια, 6β, 7a, 80,8a/3) ] -octahydro-1,6,7,8-indolizintetrol--6-(4-brombenzoat), der smelter ved ca. 234-235°C.

Til en suspension af 3 g castanospermin i 30 ml pyri-din ved 0°C dryppes en opløsning af 3 g 4-methylbenzoylchlo-rid. Efter tilsætningen tillades blandingen at opvarme til stuetemperatur, hvorefter den opvarmes ved 55eC i 24 timer.

20 Reaktionsblandingen fortyndes med 10 ml vand, hvorefter den inddampes til tørhed under vakuum. Den fremkomne remanens omrøres i 150 ml af en l:2-blanding af vand:methylenchlorid.

Det uopløselige materiale skilles fra ved filtrering, hvorved tilvejebringes et amorft gråhvidt fast stof, der opløses i 25 60 ml varm methanol, hvorefter blandingen behandles med 0,5 g aktiveret carbon, og der filtreres. Det farveløse filtrat afkøles, hvorved fås farveløse krystaller af [lS-(la,6/3,7a,-8β,8aØ) 3-octahydro-1,6,7,8-indolizintetrol-6-(4-methylben-zoat), der smelter ved ca. 255-258°C (sønderdeling) (580 30 mg, 12%'s udbytte).

Eksempel 4 Når fremgangsmåden ifølge eksempel 3 gentages under anvendelse af castanospermin og et egnet syrechlorid fås de 35 følgende estere: 6-(3-Methylbenzoat); 13 DK 172788 B1 6-(2-furancarboxylat), der smelter ved ca. 209-212°C.

Eksempel 5

Til en omrørt suspension af 1,5 g castanospermin i 5 15 ml pyridin, der er afkølet ved 0°C i et isbad, dryppes 1,0 g butyrylchlorid. Denne blanding omrøres ved stuetemperatur i 3 dage, hvorefter den sættes til en l:l-blanding af vand:methylenchlorid (400 ml). Efter deling koncentreres den vandige fase under vakuum til tilvejebringelse af en olieagio tig remanens, hvilken fraktioneres ved radial tyndtlagschro-matografi (silicagel, en plade med en tykkelse på 2 mm, 2:8 methanol:chloroform) til tilvejebringelse af 68 mg [ IS- (la, 6/3,7a, 8/3, 8a/3) ) -octahydro-1,6,7,8-indolizintetrol-6--butanoat, der er homogent ved tyndtlagschromatografi (sili-15 cagel, 2:8 methanol .‘chloroform, Rf = 0,5). Omkrystallisering af produktet fra 5:95 isopropanol:hexan giver et farveløst fast stof, der smelter ved 113-114eC. NMR (CDC13) S 3,5-3,8 (2t, 2H, C7-H og C8-H), 4,4 (m, IH, C^-H), 4,95 (m, IH, C6--H) . MS (CI-CH4) 260 (MH+), 242 (MH+-H20), 172 (MH+-20 -C3H7C02H).

Når den ovenfor anførte fremgangsmåde gentages under anvendelse af acetylchlorid eller propionylchlorid fås på lignende måde [lS-(la, 6/3,7a, 8/3,8a/?) )-octahydro-l,6,7,8-in-dolizintetrol-6-acetat, der smelter ved ca. 188-189eC.

25

Eksempel 6

Der fremstilles tabletter, der hver har den følgende sammensætning: [ IS-(la, 6/3,7a, 8/3, 8a/3) ]-octahydro-1,6,7,8-30 -indolizintetrol-6-benzoat 250 mg

Stivelse 40 mg

Talkum 10 mg

Magnesiumstearat 10 mg.

DK 172788 B1 14

Der fremstilles injicerbare doseringsformer, der hver har sammensætningen: [ IS- (la, 6/3,7 a, 8jS, 8a/3) ] -octahydro-1,6,7,8-5 -indolizintetrol-6-(4-fluorbenzoat) 0,500 g

Polyoxyethylensorbitan-monooleat 2,000 g

Natriumchlorid 0,128 g

Vand til injektion qs ad 20,000 ml.

10 15 20 25 30 1 35 f

Claims (4)

15 DK 172788 B1 PATENTKRAV.

1. Anvendelse af castanosperminestere med formlen: H0 V. 5 'I / )-N HO ^ ^

10 OH OR hvori R betyder C1_10-alkanoyl, furancarbonyl eller benzoyl, soro eventuelt er substitueret med Ci_4-alkyl eller halogen, eller et farmaceutisk acceptabelt salt heraf, til fremstil-15 ling af et farmaceutisk præparat til behandling af en retroviral infektion.

2. Anvendelse af castanosperminestere ifølge krav 1, hvori R betyder C1_4-alkanoyl eller en benzoylgruppe, der eventuelt er substitueret med alkyl eller halogen, eller et 20 farmaceutisk acceptabelt salt heraf, til fremstilling af et farmaceutisk præparat til behandling af en retroviral infektion.

3. Anvendelse af castanosperminestere ifølge krav 1, hvori R betyder C1_4-alkanoyl eller en benzoylgruppe, der 25 eventuelt er substitueret med methyl, brom, chlor eller fluor, eller et farmaceutisk acceptabelt salt heraf til fremstilling af et farmaceutisk præparat til behandling af en retroviral infektion.

4. Anvendelse af castanosperminestrene 3 0 [IS-(la, 6/3,7a, 8/3,8a/3) ]-octahydro-1,6,7,8-indolizintetrol-6- -benzoat, [ IS - (la, 6/3,7a, Ββ, 8a/?) ] -octahydro-1,6,7,B-indolizintetrol--6~(4-methylbenzoat), [ IS- (Ια, 6β, 7a, 8/3,8a/3) ] -octahydro-1, 6,7,8-indolizintetrol-35 -6-butanoat eller [ lS-(la, 6/3,7a, 8/3,8a/7) ] -octahydro-1,6,7,8-indolizintetrol- 16 DK 172788 B1 -6-(2-furancarboxylat) til fremstilling af et farmaceutisk præparat til behandling af en retroviral infektion.