DK172284B1 - Renset hematoporfyrinderivat til diagnose og behandling af tumorer samt fremgangsmåde til fremstilling af de rensede derivater og præparater indeholdende dem - Google Patents

Description

DK 172284 B1

Den foreliggende opfindelse angår et nyt og hidtil ukendt lægemiddel, der er anvendeligt til diagnose og behandling af tumorer, idet det muliggør anvendelse af nedsatte mængder af lægemidlet sammenlignet med beslægtede kendte lægemidler, og 5 som medfører mindre alvorlige bivirkninger. Opfindelsen angår også en hidtil ukendt fremgangsmåde til fremstilling af det nye lægemiddel samt præparat indeholdende det nye lægemiddel.

Fra den hidtil kendte teknik kendes det at diagnosticere maligne tumorer med fotosensitive lægemidler. I "Etudes Sur 10 Les Aspects Offerts Par Des Tumeur Experimentales Examinee A La Lumiere De Woods", CR Soc. Biol. 91, 1924, s. 1423-1424, beskriver forfatteren Policard, at nogle menneske- og dyretu-morer fluorescerede, når de blev bestrålet med en Wood's lampe. Den røde fluorescens blev tilskrevet porphyriner, som 15 blev dannet i tumoren. I "Untersuchungen Uber Die Rolle Der Porphine Bei Geschwulstkranken Menschen Und Tieren", Z.

Krebsforsch 53, 1942, s. 65-68, påviste Auler og Banzer, at hematoporphyrin, som er et derivat af hemoglobin, fluorescerer i tumorer, men ikke i normalt væv efter systemisk 20 injektion i rotter. I "Cancer Detection and Therapy Affinity of Neoplastic Embryonic and Traumatized Regenerating Tissue For Porphyrins and Metalloporphyrins", Proc. Soc. Exptl.

Biol. Med. 68, 1948, s. 640-641, påviste Figge et al., at injiceret hematoporphyrin bliver lokaliseret og fluorescerer 25 i flere typer tumorer induceret i mus. I "The Use of a Derivative of Hematoporphyrin in Tumor Detection", J. Natl. Cancer Inst. 26, 1961, s. 1-8, beskriver Lipson et al. et råmateriale, som fremstilles ved eddikesyre/svovlsyrebehandling af hematoporphyrin, og som har en forbedret evne til at blive 30 lokaliseret i tumorer.

Den fotosensitive egenskab hos tumorselektive porphyrinfor-bindelser gør dem også nyttige til behandling af tumorer. I "Photodynamic Therapy of Malignant Tumors", Lancet 2, 1973, s. 1175-1177, opnåede Diamond et al. tumomecrose, efter at 35 læsionsbærende rotter havde fået injiceret hematoporphyrin og var blevet udsat for hvidt lys. I "Photoradiation Therapy for DK 172284 B1 2 the Treatment of Malignant Tumors", Cancer Res. 38, 1978, s. 2628-2635, og "Photoradiation in the Treatment of Recurrent Breast Carcinoma", J. Natl. Cancer Inst. 62, 1979, s. 231-237, beskriver Dougherty et al. anvendelsen af det af Lipson 5 beskrevne rå hematoporphyrinderivat til anvendelse i fotobestrålingsterapi af menneskepatienter. Det af Lipson beskrevne rå hematoporphyrinderivat har evnen til at trænge ind i alle slags celler og blive holdt tilbage i tumorceller, efter at det i det store og hele har forladt serummet. Påfølgende 10 bestråling med rødt lys anslår det rå Lipson-derivat, som på sin side anslår oxygenmolekyler. De anslåede oxygenmolekyler eksisterer i et mikrosekund, hvilket er længe nok til at angribe tumorcellevægge og forårsage necrose. I "Effects of Photo-Activated Porphyrins in Cell Surface Properties", 15 Biochem. Soc. Trans 5, 1977, s. 139-140, har Kessel beskrevet, at tværbinding af proteiner i tumorcellemembraner forårsager lækning og til sidst cellesprængning.

Det af Lipson beskrevne rå hematoporphyrinderivat trænger ind i normalt væv og forårsager uacceptable skader, når der 20 anvendes terapeutisk lys, som er tilstrækkeligt til at behandle store tumorer. Der kan forekomme alvorligt ødem og afskalning af sund hud, når der anvendes det rå Lipson-derivat. Nogle patienter tager endog skade af udsættelse for almindeligt sollys 30 dage efter behandlingen med lægemidlet.

25 Et bedre fotosensitiveringsmiddel til behandling af tumorer bør ikke have nogen systemisk toxicitet. Lægemidlet bør have en bedre vævsfordeling, således at det forlader kroppen hurtigere. Såvidt nærværende ansøgere ved, beskrives der ikke i den kendte litteratur noget sådant stof.

30 Den foreliggende opfindelse angår et hidtil ukendt lægemiddel, som fås som et aggregat med høj molekylvægt (dvs. større end éen porphyrinenhed), som er afledt af hematoporphyrin og renset ved filtrering gennem en mikroporøs membran, hvilket middel selektivt lokaliseres i tumorer, er fluorescerende og 35 forårsager necrose af de maligne tumorer ved lysinduceret reaktion, uden at der sker materiel skade på normalt væv.

DK 172284 B1 3 Hæmatoporphyrinderivat ifølge opfindelsen, som egner sig til lokalisering og/eller ødelæggelse af tumorer, er fluorescerende og lysfølsomt og er i stand til at lokaliseres i og blive holdt tilbage i tumorceller i forhold til normalt væv, 5 og er ejendommeligt ved, at det er et højmolekylært aggregat af et porphyrinderivat med absorptionstoppe i det synlige spektrum ved ca. 505, 537, 565 og 615 nm, absorptionstoppe i det infrarøde spektrum ved ca. 3,0, 3,4, 6,4, 7,1, 8,1, 9,4, 12 og 15 μτη, og absorptionstoppe i 13C-NMR-spektret ved ca.

10 9,0, 18,9, 24,7, 34,5, 62, 94,5, 130-145, 171,7 ppm i forhold til en resonanstop for dimethylsulfoxid ved 37,5 ppm og udviser massetal på 1899, 1866, 1809, 1290, 1200, 609, 591, 219 og 149 i henhold til massespektroskopi og kan fremstilles ved 15 a) omsætning af hæmatoporphyrin med eddikesyre/svovlsyre og udfældning af råproduktet med natriumacetat, b) indstilling af pH på 7-7,2 i en vandig suspension af dette derivat, og c) opsamling af et højmolekylært aggregat af derivatet ved 20 filtrering af suspensionen gennem en 10.000 molekylvægts filterpakning til udelukkelse af bestanddele med en molekylvægt under 10.000.

Foretrukne udførelsesformer af hæmatoporphyrinderivatet ifølge den foreliggende opfindelse fremgår af det i krav 2 25 angivne.

Et formål med opfindelsen er således at tilvejebringe et fotosensitivt lægemiddel, som kan anvendes til at udføre fotobestrålingsterapi af tumorer.

Et yderligere formål med opfindelsen er at tilvejebringe et 30 hidtil ukendt fotosensitivt lægemiddel, som i høj grad er tumorselektivt, og som efterlader normalt væv relativt upåvirket efter udsættelse for stærke doser af terapeutisk lys.

DK 172284 B1 4

Endnu et formål med opfindelsen er at tilvejebringe et tumorsensitivt lægemiddel, som fluorescerer, hvilket afgrænser den maligne tumor og fremmer diagnosen.

Et formål med opfindelsen er desuden at tilvejebringe en 5 hidtil ukendt fremgangsmåde til fremstilling af det ovenfor beskrevne lægemiddel.

Den foreliggende opfindelse angår derfor også en fremgangsmåde til fremstilling af hæmatoporphyrinderivatet ifølge opfindelsen, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at i 10 hematoporphyrin omsættes med eddikesyre/svovlsyre til dannelse af en opløsning, råproduktet udfældes ved neutralisering i natriumacetat, råproduktet opløses i natriumhydroxid, opløsningens surhed indstilles til en pH-værdi på 7,0-7,2 med saltsyre, og den resulterende urene opløsning lades passere 15 gennem en 10.000 molekylvægts filterpakning til udelukkelse af bestanddele med en molekylvægt under 10.000, hvorved der opnås rensning, idet processen i det væsentlige udføres ved omgivelsestemperatur.

Foretrukne udførelsesformer af fremgangsmåden ifølge opfind-20 elsen fremgår af det i krav 5 og 6 angivne.

Opfindelsen angår endvidere et præparat, som indeholder et hæmatoporphyrinderivat ifølge opfindelsen i flydende form med en koncentration på ca. 2,5 mg/cm3 og omfatter en isotonisk saltopløsning ved en pH-værdi på ca. 7,0-7,2.

25 Opfindelsen angår yderligere et injicerbart præparat, som er ejendommeligt ved at indeholde et hæmatoporphyrinderi-vat ifølge opfindelsen i en dosis på ca. 1-4 mg/kg af værtens legemsvægt.

Andre formål og fordele ved opfindelsen fremgår af neden-30 stående beskrivelse og af tegningen, hvor fig. 1 er en massespektrometriudskrift af det hidtil ukendte lægemiddel, DK 172284 B1 5 fig. 2 er et synligt lysspektrum af det hidtil ukendte lægemiddel i vandig opløsning, fig. 3 og fig. 3A tilsammen viser et infrarødt spektrum af det hidtil ukendte lægemiddel dispergeret i kaliumbromid, 5 fig. 4 er en 13C-NMR-udskrift af det hidtil ukendte lægemiddel med dimethylsulfoxid som reference, fig. 5 og fig. 5A tilsammen viser udskriften fra en "Waters Associates Variable Wave Length Detector" anvendt sammen med dens μ Bondpak C-18-søjle, hvilken udskrift viser forskellige 10 komponenter, herunder en spidsdannelse, som er repræsentative for det hidtil ukendte lægemiddel, fig. 6 og fig. 6A tilsammen viser en udskrift fra en "Waters Associates Variable Wave Length Detector", som anvendes sammen med dens μ Bondpak C-18-søjle, hvilken udskrift viser 15 spidsdannelsen for selve det hidtil ukendte lægemiddel, fig. 7 er en molekylformel, der viser en ether, som højst sandsynligt er den enhed, der associerer til dannelse af det højmolekylære aggregat ifølge opfindelsen, og fig. 8 og fig. 8A tilsammen viser en 13C-NMR-udskrift af det 20 hidtil ukendte lægemiddel med tetramethylsilan som standard i deuterochloroform som opløsningsmiddel, hvor forstørrelsen af spektret er vist i området 20-30 ppm og 55-75 ppm.

A. En foretrukken fremstillingsmetode og rensning af det hidtil ukendte lægemiddel.

25 (Alt udstyr og alle reagenser skal være sterile).

285 ml eddikesyre sættes til en 1000 ml's Erlenmeyer-kolbe, som indeholder en med Teflon® overtrukket magnetomrører. Eddikesyren omrøres, og der tilsættes langsomt 15 ml koncentreret svovlsyre. 15,0 g hematoporphyrin-hydrochlorid (der 30 fortrinsvis fås fra Roussel Corporation, Paris, Frankrig), afvej es, og porphyrinet sættes til den sure opløsning. Der omrøres i 1 time.

Der fremstilles en opløsning af 150 g natriumacetat i 3 liter glasdestilleret vand under anvendelse af et 4 liters glas- DK 172284 B1 6 bæger. Efter l time filtreres porphyrin/syreopløsningen, fortrinsvis gennem et Whatman nr. 1 filtrerpapir, idet filtratet lades dryppe ind i det 4 liters bæger af 5%'s natriumacetat. Den 5%'s natriumacetatopløsning indeholder nu et 5 mørkerødt bundfald, der fortrinsvis lades henstå i l time under lejlighedsvis omrøring. Det mørkerøde bundfald filtreres derefter igen, fortrinsvis under anvendelse af den ovenfor beskrevne filtermekanisme. Filterkagen fra filtreringsprocessen vaskes derefter med glasdestilleret vand, 10 indtil filtratet har en pH-værdi på 5,5-6,0 (1500-2500 ml vaskevand kan være nødvendigt). Filterkagen lades derefter fortrinsvis lufttørre ved stuetemperatur.

Det lufttørrede bundfald formales, fx i morter, indtil der fås et fint pulver. Pulveret kan derefter overføres til en 15 250 ml's rundbundet kolbe. Kolben fastgøres derefter til en rotationsinddamper, og rotation i vakuum fortsætter ved stuetemperatur i fortrinsvis 24 timer.

20,00 g af det vakuumtørrede pulver anbringes derefter fortrinsvis i en 4 liters aspiratorkolbe, som kan indeholde en 20 magnetomrører, og derefter tilsættes 1000 ml 0,1N natriumhydroxid. Denne opløsning omrøres fortrinsvis i 1 time, hvorefter der dråbevis tilsættes IN saltsyre, fortrinsvis under anvendelse af en burette. Den IN saltsyre tilsættes, indtil der er opnået en pH-værdi på 7,0-7,4, og som er stabil 25 i 15 minutter. Ved fx at anvende aflæsningerne fra buretten kan den mængde natriumchlorid, som dannes ved neutraliseringen af natriumhydroxid med saltsyren, beregnes.

En isotonisk opløsning er 0,9% NaCl eller 9 g natriumchlorid pr. liter opløsning. Den mængde NaCl, som dannes ved neutra-30 liseringen, trækkes derfor fra den mængde NaCl, som kræves for at gøre opløsningen isotonisk. Den beregnede mængde NaCl sættes derefter til opløsningen, og opløsningen omrøres i fortrinsvis 15 minutter. Mængden af opløsning bringes derefter op på et samlet volumen af 4 liter ved tilsætning af 35 0,9% NaCl-opløsning.

DK 172284 B1 7

Aspiratorkolben, som indeholder opløsningen, forbindes derefter med overføringsledninger, som fører til et Milli-Pore Pellicon Cassette-system, som er udstyret med en 10.000 molekylvægts filterpakning (Millipore Corporation, Bedford, 5 Mass. 01730). Det foretrækkes, at opløsningens pH-værdi er 7,0-7,2 under filtreringsprocessen, og det foretrækkes, at opløsningens temperatur er omgivelsestemperatur. Pellicon-kassette-systemet indeholder fortrinsvis mindst 25 liter isotonisk saltopløsning.

10 Den peristaltiske tilførselspumpe startes, og opløsningen føres gennem Pellicon-kassette-systemet ved et tryk på fortrinsvis 0,68-1,36 ato. Trykket kan varieres afhængig af strømningshastigheden gennem systemet. Saltopløsning sættes til systemet for at opretholde et volumen på 4 liter i den 15 tilsluttede aspiratorkolbe, som indeholder opløsningen.

Filtreringsprocessen fortsættes, indtil opløsningen i det væsentlige kun indeholder det højmolekylære, biologisk aktive produkt. På dette tidspunkt er affaidsprodukt-monomerer sædvanligvis ikke længere til stede. Udskillelse af affalds-20 produktet gennem filtersystemets mikroporøse membran bekræftes ved at analysere det højmolekylære, biologisk aktive produkt med en Bio-Gel P-10-søjle (fås fx fra Bio-Rad, Richmond, Ca.) eller ved højtryksvæskechromatografi under anvendelse af en μ Bondpak C-18-søjle med en fastgjort variabel 25 bølgelængdedetektor (fås fx fra Waters Associates, Milford, Ma.), således som det er beskrevet nedenfor.

Koncentrationerne af produktet kan forøges ved at anvende Pellicon-kassette-systemet uden saltopløsningstilførsel. Koncentrationer af produktet kan nedsættes ved at tilsætte 30 saltopløsning. Det foretrækkes, at koncentrationen af det hidtil ukendte lægemiddel i opløsningen er ca. 2,5 mg/cm3.

8 DK 172284 B1 B. Dyreforsøg med det hidtil ukendte lægemiddel DBA2 Ha/D-mus fik transplanteret SMT-F-tumorer. Da de transplanterede tumorer nåede en størrelse på 5-6 mm i diameter, fik musene injiceret en dosis på 7,5 milligram af det kendte 5 rå Lipson-derivat pr. kg legemsvægt til sammenligningsformål. Ca. 24 timer efter injektion blev tumorområderne på musene barberet for at fjerne pelsen. Musene blev udsat for rødt lys (6000-7000 Angstrom) fra en buelampe med en intensitet på 160 milliwatt pr. cm2 i 30 minutter. 10 ud af 20 mus havde ingen 10 synlige tumorer 7 dage efter behandlingen. Det injicerede lægemiddel forbliver i tumorcellerne længere end i normalt væv. Dette forsøg blev gennemført under anvendelse af det hidtil ukendte lægemiddel ifølge opfindelsen, og der opnåedes tilsvarende resultater ved anvendelse af blot ca. den halve 15 lægemiddeldosis (4 mg/kg legemsvægt) sammenlignet med det kendte Lipson-middel. Der anvendes rødt lys til behandling af tumorer ved bestråling af samme for at udnytte de længere synlige lysbølgers evne til at gennemtrænge væv. Belysning kan udføres ved direkte belysning eller ved fiberoptik, 20 således at det er muligt at belyse en hvilken som helst legemsdel generelt uden kirurgi.

I yderligere forsøg fik ICR Swiss (Albino) mus injiceret en terapeutisk dosis af det rå Lipson-derivat (7,5 mg/kg legemsvægt) . Ca. 24 timer efter en sådan injektion blev musenes 25 bagpoter udsat for de samme lysbetingelser, som der blev anvendt i den ovenfor beskrevne tumorreaktionsundersøgelse. Beskadigelsen af bagpoterne blev bedømt som 2,0 på en arbitrær skala, hvor 0,0 betegner ingen beskadigelse, og 5,0 betegner fuldstændig necrose. Fugtig desquamation var tyde-30 lig, og poteområdet vendte langsomt tilbage til normal tilstand efter ca. 40 dage. Dette forsøg blev gentaget under anvendelse af det hidtil ukendte lægemiddel ifølge opfindelsen i doser på 4 mg/kg legemsvægt. Der bemærkes kun let erythem og/eller ødem efter behandling. Denne tilstand for-35 svandt efter 48-72 timer uden nogen residualvirkning. Dette fører til den antagelse, at hudens fotosensitivitet ikke 4 DK 172284 B1 9 længere behøver at være et væsentligt problem, når der anvendes dette hidtil ukendte lægemiddel.

C. Analyse af lægemidlet

Det hidtil ukendte lægemiddel, som fås fra Pellicon-systemet, 5 er et højmolekylært materiale, som fås ved behandling af hematoporphyrin-hydrochlorid med eddikesyre og svovlsyre efterfulgt af hensigtsmæssig hydrolyse. Dets manglende evne til at passere gennem Milli-Pore Pellicon 10.000 molekylvægts filterpakningen viser en molekylvægt på over 10.000. Masse-10 spektrometri (fig. 1) af det hidtil ukendte lægemiddel viser særlig kraftige spidser ved massetallene 149, 219, 591, 609 og karakteristiske, men mindre spidser ved 1200, 1218, 1290 og 1809.

Spektrofotometri (fig. 2) af det hidtil ukendte orangerøde 15 lægemiddel i vandig opløsning viser veldefinerede spidser ved ca. 505, 537, 565 og 615 nm.

Infrarød spektrofotometri (fig. 3 og 3A) af det hidtil ukendte lægemiddel dispergeret i kaliumbromid viser en bred top forbundet med hydrogenstrækning, idet toppen har et centrum 20 ved ca. 3,0 μτη og en skulder ved ca. 3,4 μτη. Finere toppe iagttages ved ca. 6,4, 7,1, 8,1, 9,4, 12 og 15 μπι.

Grundstofanalyse af dinatriumsaltderivatet af det hidtil ukendte lægemiddel viser, at det har bruttoformlen c34H35-36N4°5-6Na2' idet der er en vis usikkerhed med hensyn 25 til hydrogen og oxygen som følge af spor af vand, som ikke kan fjernes fra lægemidlet. En 13C-NMR-undersøgelse (fig. 4) af lægemidlet i fuldstændigt deutereret dimethylsulfoxid viser toppe ved ca. 9,0 ppm for -CH3, 18,9 ppm for -CH2-, 24,7 ppm for CH3CHOH, 34,5 ppm for -CH2-, 62 ppm for CH3CHOH, 30 94,5 ppm for =C (methin), 130-145 ppm for ring C og 171,7 ppm for CsO, idet alle ppm-værdier er angivet i forhold til dimethylsulfoxidresonans ved ca. 37,5 ppm. Yderligere vinyl- DK 172284 B1 10 toppe ved ca. 118 og 127 ppm kan være repræsentative for det hidtil ukendte lægemiddel eller muligvis en forurening.

Da det ufiltrerede reaktionsprodukt, som er beskrevet på side 5, linje 23-32, i nærværende ansøgning, blev elueret fra en 5 Waters Associates' μ Bondpak C-18 søjle under anvendelse af først methanol, vand og eddikesyre (20:5:1) i den nævnte rækkefølge og derefter tetrahydrofuran og vand (4:1), blev der fundet fire bestanddele. Tre biprodukter blev identificeret som hematoporphyrin, hydroxyethylvinyldeuteroporphyrin 10 og protoporphyrin ved sammenligning med standarder på tyndt-lagschromatografi med Rf-værdier på henholdsvis ca. 0,19, 0,23 og 0,39 (fig. 5) under anvendelse af Brinkman SIL-sili-caplader og benzen/methanol/vand (60:40:15) som eluent.

Den fjerde bestanddel vist i fig. 5A var det biologisk aktive 15 lægemiddel ifølge opfindelsen. Chromatografi (fig. 6 og 6A) viser, at fjernelse af de ovennævnte urenheder under anvendelse af Milli-Pore Pellicon-kassettesystemet udstyret med en 10.000 molekylvægts filterpakning har fundet sted under fremstillingen af lægemidlet ifølge opfindelsen.

20 Det biologisk aktive lægemiddel ifølge opfindelsen er sandsynligvis et aggregat af ethermolekyler, som dannes mellem to hematoporphyrinmolekyler ved forbindelse af hydroxyethylvinylgrupperne som vist i fig. 7. Denne forbindelse kan opstå via hydroxyethylvinylgrupperne i 3- eller 8-stillingen som 25 nummereret i fig. 7. Forbindelse kan opnås i 3-stillingen i begge halvdele af etheren, i 8-stillingen i begge halvdele af etheren eller via 3-stillingen i den ene halvdel af etheren og i 8-stillingen i den anden halvdel af etheren.

Disse strukturer kan betegnes som derivater af ethylether, 30 dvs.

bis-1-[3-(1-hydroxyethyl)deuteroporphyrin-8-yl]-ethylether, som vist i fig. 7.

DK 172284 B1 11

Andre strukturisomerer kan betegnes: 1-[3-(l-Hydroxyethyl)deuteroporphyrin-8-yl]-1'-[8-(1-hydroxy-ethyl)deuteroporphyrin-3-yl]ethylether eller 1-[8-(l-hydroxyethyl)deuteroporphyrin-3-yl]-1'- [3-(1-hydroxy-5 ethyl)deuteroporphyrin-8-yl]ethylether og bis-l-[8-(l-hydroxyethyl)deuteroporphyrin-3-yl]ethylether.

Den ene eller begge hydroxyethylgrupper i 3- eller 8-stillingen, som ikke anvendes til etherdannelse, kan dehydrati-seres til dannelse af vinylgrupper. Selv om der ikke er 10 blevet udført forsøg, viser erfaringen, at ethere som vist i fig. 7 kan være substitueret med forskellige kombinationer af hydrogen, alkylgrupper, carboxylsyregrupper og alkoholholdige grupper på forskellige steder i strukturen. Desuden kan der findes mange mulige optiske isomerer af disse strukturer.

15 En 13C-NMR-undersøgelse (fig. 8 og 8A) af lægemidlet i deu-terochloroform med tetramethylsilan som standard viser to yderligere absorbanser, som ikke var synlige i fig. 4. Spidser ved 24,7 ppm og 62 ppm i fig. 4 har flyttet sig til 25,9 ppm og 65,3 ppm i fig. 8A, men nyudviklede toppe ved 27,9 ppm 20 og 68,4 ppm i fig. 8A betegner resonanser for CH3 og H-C-OH bundet fra 3-stillingen i fig. 8A. Disse nyudviklede resonanser underbygger den i fig. 7 viste molekylformel.

Medens tests, som gør brug af det hidtil ukendte lægemiddel, til dato kun er blevet udført på dyr, formodes det, at til-25 svarende resultater kan opnås med mennesker under anvendelse af den samme eller mindre relative mængde af lægemidlet i forhold til legemsvægten. Det antages, at den ovenfor beskrevne behandling af lægemidlet ifølge opfindelsen kan anvendes gentagne gange uden kumulativ beskadigelse af nor-30 malt væv under forudsætning af, at behandlingen ikke er alt for voldsom.

Medens der i de ovennævnte dyreforsøg anvendtes en dosis af det hidtil ukendte lægemiddel på ca. 4 mg/kg legemsvægt,

Claims (6)

1. Hæmatoporphyrinderivat, som egner sig til lokalisering og/eller ødelæggelse af tumorer, hvilket derivat er fluorescerende og lysfølsomt og er i stand til at lokaliseres i og 25 blive holdt tilbage i tumorceller i forhold til normalt væv, kendetegnet ved, at det er et højmolekylært aggregat af et porphyrinderivat med absorptionstoppe i det synlige spektrum ved ca. 505, 537, 565 og 615 nm, absorptionstoppe i det infrarøde spektrum ved ca. 3,0, 3,4, 6,4, 7,1, 8,1, 9,4, 30 12 og 15 μτα, og absorptionstoppe i 13C-NMR-spektret ved ca. 9,0, 18,9, 24,7, 34,5, 62, 94,5, 130-145, 171,7 ppm i forhold til en resonanstop for dimethylsulfoxid ved 37,5 ppm og udviser massetal på 1899, 1866, 1809, 1290, 1200, 609, 591, DK 172284 B1 219 og 149 i henhold til massespektroskopi og kan fremstilles ved a) omsætning af hæmatoporphyrin med eddikesyre/svovlsyre og udfældning af råproduktet med natriumacetat, 5 b) indstilling af pH på 7 - 7,2 i en vandig suspension af dette derivat, og c) opsamling af et højmolekylært aggregat af derivatet ved filtrering af suspensionen gennem en 10.000 molekylvægts filterpakning til udelukkelse af bestanddele med en 10 molekylvægt under 10.000.

2. Hæmatoporphyrinderivat ifølge krav l, kendetegnet ved, at det har en orangerød farve og en empirisk formel på ca. Ο68Η70Ν8Οχ1 (Na plus H)4.

3. Fremgangsmåde til fremstilling af hæmatoporphyrinderivatet 15 ifølge krav 1, kendetegnet ved, at hematoporphyrin omsættes med eddikesyre/svovlsyre til dannelse af en opløsning, råproduktet udfældes ved neutralisering i natriumacetat, råproduktet opløses i natriumhydroxid, opløsningens surhed indstilles til 20 en pH-værdi på 7,0-7,2 med saltsyre, og den resulterende urene opløsning lades passere gennem en 10.000 molekylvægts filterpakning til udelukkelse af bestanddele med en molekylvægt under 10.000, hvorved der opnås rensning, idet processen i det væsentlige udføres ved omgivelsestemperatur.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 3, kendetegnet ved, at natriumchlorid sættes til den urene opløsning for at gøre den isotonisk, før den lades passere gennem membransystemet. 1 Fremgangsmåde ifølge krav 4, 30 kendetegnet ved, at stoffet i opløsningen har en koncentration på ca. 2,5 mg/cm3, og denne koncentration indstilles ved tilsætning eller fjernelse af væske. DK 172284 B1

6. Præparat, kendetegnet ved, at det indeholder et hæmatopor-phyrinderivat ifølge krav l eller 2 i flydende form med en koncentration på ca. 2,5 mg/cm3 og omfatter en isotonisk 5 saltopløsning ved en pH-værdi på ca. 7,0-7,2.

7. Injicerbart præparat, kendetegnet ved, at det indeholder et hæmatopor-phyrinderivat ifølge krav 1 i en dosis på ca. 1-4 mg/kg af værtens legemsvægt.