DK163930B - Biologisk aktivt peptid og peptidfragment deraf med natriuretisk, diuretisk og vasodilataterende aktivitet og terapeutisk middel indeholdende et saadant peptid eller peptidfragment - Google Patents
Biologisk aktivt peptid og peptidfragment deraf med natriuretisk, diuretisk og vasodilataterende aktivitet og terapeutisk middel indeholdende et saadant peptid eller peptidfragment Download PDFInfo
- Publication number
- DK163930B DK163930B DK081685A DK81685A DK163930B DK 163930 B DK163930 B DK 163930B DK 081685 A DK081685 A DK 081685A DK 81685 A DK81685 A DK 81685A DK 163930 B DK163930 B DK 163930B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- ser
- leu
- arg
- gly
- ala
- Prior art date
Links
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 title claims abstract description 16
- 230000001882 diuretic effect Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 230000000304 vasodilatating effect Effects 0.000 title claims abstract description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 title 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 title 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 title 1
- 230000001452 natriuretic effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 59
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 33
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 claims description 9
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 claims description 9
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 claims description 5
- 206010047141 Vasodilatation Diseases 0.000 claims description 5
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000024883 vasodilation Effects 0.000 claims description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 4
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000012495 positive regulation of renal sodium excretion Effects 0.000 claims 2
- QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- YKBHOXLMMPZPHQ-GMOBBJLQSA-N Arg-Ile-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YKBHOXLMMPZPHQ-GMOBBJLQSA-N 0.000 claims 1
- NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N Phe-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NAXPHWZXEXNDIW-JTQLQIEISA-N 0.000 claims 1
- 108010070409 phenylalanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 108010082685 antiarrhythmic peptide Proteins 0.000 abstract description 4
- YQAXFVHNHSPUPO-RNJOBUHISA-N 2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s,4r)-1-[(2s)-1-(2-aminoacetyl)pyrrolidine-2-carbonyl]-4-hydroxypyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]amino]propanoyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1C[C@@H](O)CN1C(=O)[C@H]1N(C(=O)CN)CCC1 YQAXFVHNHSPUPO-RNJOBUHISA-N 0.000 abstract description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 21
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 14
- 102000002723 Atrial Natriuretic Factor Human genes 0.000 description 13
- 210000002837 heart atrium Anatomy 0.000 description 12
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 8
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 8
- 101800001288 Atrial natriuretic factor Proteins 0.000 description 7
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 7
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 230000001746 atrial effect Effects 0.000 description 7
- NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N carperitide Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N 0.000 description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 101710187800 Natriuretic peptides A Proteins 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 6
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 5
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 5
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102400001287 Atriopeptin-1 Human genes 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- 108020001621 Natriuretic Peptide Proteins 0.000 description 3
- 102000004571 Natriuretic peptide Human genes 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 108010033590 atrial natriuretic factor prohormone (103-123) Proteins 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 3
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 3
- 239000000692 natriuretic peptide Substances 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 210000002254 renal artery Anatomy 0.000 description 3
- 230000008327 renal blood flow Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000757797 Geobacillus stearothermophilus Aminopeptidase 2 Proteins 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 101000733766 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) Aminopeptidase 2, mitochondrial Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000002048 spasmolytic effect Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- AYCBRUDZNRVKGK-GWLSAQFNSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(4R,10S,16S,19S,22S,28S,31S,34S,37S,40S,49S,52R)-52-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-19-(3-amino-3-oxopropyl)-49-benzyl-28,37-bis[(2S)-butan-2-yl]-31,40-bis(3-carbamimidamidopropyl)-34-(carboxymethyl)-16-(hydroxymethyl)-22-methyl-10-(2-methylpropyl)-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51-hexadecaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50-hexadecazacyclotripentacontane-4-carbonyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 AYCBRUDZNRVKGK-GWLSAQFNSA-N 0.000 description 1
- PQMRRAQXKWFYQN-UHFFFAOYSA-N 1-phenyl-2-sulfanylideneimidazolidin-4-one Chemical class S=C1NC(=O)CN1C1=CC=CC=C1 PQMRRAQXKWFYQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O OMLWNBVRVJYMBQ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 101800001890 Atrial natriuretic peptide Proteins 0.000 description 1
- 102400001275 Atriopeptin-2 Human genes 0.000 description 1
- 102400001276 Atriopeptin-3 Human genes 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000005572 Cathepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108010059081 Cathepsin A Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- UZWUBBRJWFTHTD-LAEOZQHASA-N Glu-Val-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O UZWUBBRJWFTHTD-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 1
- 101500027325 Homo sapiens Atrial natriuretic peptide Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M Pentobarbital sodium Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)[N-]C1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 108010034703 atrial natriuretic factor prohormone (103-125) Proteins 0.000 description 1
- 108010034646 atrial natriuretic factor prohormone (103-126) Proteins 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000001964 muscle biopsy Methods 0.000 description 1
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002833 natriuretic agent Substances 0.000 description 1
- 229940054441 o-phthalaldehyde Drugs 0.000 description 1
- MTHMVLLKCNMJQL-UHFFFAOYSA-N oxalonitrile hydrobromide Chemical compound Br.N#CC#N MTHMVLLKCNMJQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002275 pentobarbital sodium Drugs 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000819 phase cycle Methods 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N phthalaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1C=O ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- 108010094135 rat atrial natriuretic peptide Proteins 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 229940124550 renal vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 210000004739 secretory vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000050 smooth muscle relaxant Substances 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 1
- 210000000626 ureter Anatomy 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/58—Atrial natriuretic factor complex; Atriopeptin; Atrial natriuretic peptide [ANP]; Cardionatrin; Cardiodilatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
Description
DK 163930 B
Den foreliggende opfindelse angår et hidtil ukendt atriumpeptid med høj molekylvægt samt et peptidfragment af dette, som har nyttig natriuretisk, diuretisk og vaso-dilataterende aktivitet.
5
Det er kendt, at cellerne i atriummyocardiet i pattedyr indeholder talrige membranbundne lagergranuler. Disse karakteristiske sekretoriske granuler, som er blevet observeret i rotte-, hunde-, katte- og menneskeatrium, ligner 10 de, der er i peptid-hormonalproducerende celler. Se DeBold et al., J. Histochem. Cytochem. 26, 1094-1102 (1978). Det er blevet rapporteret, at rå vævsekstrakter af atriummyocardium, når de injiceres intravenøst i ikke-diuretiske rotter, producerede et hurtigt og kraftigt na-15 triuretisk respons. Se DeBold et al., Life Science 28, 89-94 (1981). Særlig rensning af rotteatriumhomogenater med et kort kogningstrin og fraktionering på "Sephadex"® blev opnået af Trippodo et al., Proc. Soc. Exp. Biol.
Med. 170, 502-508 (1982). Diuretisk aktivitet fandtes ved 20 disse undersøgelser i det totale molekylvægtsområde 3600 til 44000 dalton i peptidfraktioner med såvel det højere molekylvægtsområde på 36000 til 44000 dalton som i et lavere molekylvægtsområde på 3600 til 5500 dalton.
25 Rotteatriumekstrakter er også blevet fraktioneret i lav molekylvægtsfraktioner (<10000 dalton) og højmolekylvægtsfraktioner (20000-30000 dalton), hvilke ekstrakter begge in vitro afspændte den glatte muskulatur og var kraftige natriuretiske midler, når de blev administreret 30 intravenøst i rotter. Se Currie et al., Science 221, 71-73 (1983).
I andre nylige publikationer har en række videnskabsmænd behandlet forskellige lav- og mellemmolekylvægtsatrie na-35 triuretiske peptider, der har aminosyresekvenser i områ-det-på fra ca. 19 til 59 aminosyrer. Således rapporterer DeBold et al., Fed. Proc. 42 (3), Abstract 1870, side 611
DK 163930 B
2 (1983) rensningen af et atrium-natriuretisk peptid med en molekylvægt på 5150 dalton og en sekvens af 47 aminosyrer, som de benævnte "Cardionatrin I". Tre yderligere spidser med natriuretisk aktivitet blev opnået ved høj -5 tryksvæskekromatografi (HPLC).
I en sidste publikation omtaler Grammer et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 116(2), 696-703, 31. oktober 1983, den delvise rensning af en rotteatrium-natriuretisk fak-10 tor med en molekylvægt på ca. 3800 og indeholdende 36 aminosyrerester.
I endnu nyere publikationer omtaler Flynn et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 117(3), 859-653, (28. decem-15 ber 1983) og Kangawa og Matsuo, Ibid, 118(1), 131-39 (13. januar, 1984), atrium-natriuretiske peptider for rotte og menneske, der har sekvenser på 28 aminosyrer.
Thibault et al., FEBS Letters 167, 352-56 (1984), omtaler 20 rensningen af et atrium-natriuretisk peptid med en mellemmolekylvægt og 73 aminosyrer, og Kangawa et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 119(3), 933-40 (1984), omtaler rensningen af et beta-rotteatrium-natriuretisk peptid med en middelmolekylvægt og 48 aminosyrer.
25 I ansøgernes verserende ansøgning DK nr. 5334/84 omtales atrium-peptider med lav molekylvægt og ca. 19 til ca. 24 aminosyrer, og sådanne peptider er genstand for patentkrav. Adskillige af disse peptider er yderligere omtalt 30 af en researchgruppe under ledelse af ansøgeren, Currie et al., Science 223, 67-69 (1984).
I overensstemmelse med den foreliggende opfindelse tilvejebringes et hidtil ukendt peptid med høj molekylvægt, 35 som -udviser nyttig natriuretisk, diuretisk og vasodilata-terende aktivitet. Dette biologisk aktive peptid har følgende aminosyresekvens:
DK 163930 B
3 5 10 15
Lys-Asa-Leu-Leu-Asp-His-Leu-Glu-Glu-Lys-Met-Pro-Val-Glu-Asp- 20 25 30
Glu-Val-Met-Pro-Pro-Gln-Ala-Leu-Ser-Glu-Gln-Thr-Asp-Glu-Ala- 5 35 40 * 45
Gly-Ala-Ala-Leu-Ser-Ser~Leu-Ser-Glu-Val-Pro“Pro-Trp-Thr-Gly- 50 55 60 10
Glu-Val-Asn-Pro-Ser-Gln-Arg-Asp-Gly-Gly-Ala-Leu-Gly-Arg-Gly- 65 70 75
Pro-Trp-Asp-Pro-Ser-Asp-Arg-Ser-Ala-Leu-Leu-Lys-Ser-Lys-Leu- 15 80 85 90
Arg-Ala-Leu-Leu-Ala-Gly-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-C^s- 95 100 105
Phe-Gly-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly- U U --- --- - - ..... —Kl I I«. -.I.— .»— ... .1 110
Cys-Asa-Ser-Phe-Arg-Tyr-COOH
25 Ligeledes i overensstemmelse med den foreliggende opfindelse tilvejebringes et hidtil ukendt peptidfragment af ovennævnte højmolekylære peptid, omfattende sekvensen af aminosyrer 19 til 111, hvilket peptidfragment i det væsentligste har de samme terapeutiske egenskaber som pep-30 tidet ifølge opfindelsen.
I peptidstrukturen er aminosyrekomponenterne betegnet ved konventionelle forkortelser som følger: 35 --
DK 163930 B
4
Forkortet
Aminosyre betegnelse L-Alanin Ala 5 L-Arginin Arg L-Aspartinsyre Asp L-Asparagin Asn L-Cystein Cys L-Glutaminsyre Glu 10 L-Glutamin Gin
Glycin Gly L-Histidin His L-Isoleucin Ile L-Leucin Leu 15 L-Lysin Lys L-Methionin Met L-Phenylalanin Phe L-Prolin Pro L-Serin Ser 20 L-Threonin Thr L-Tryptophan Trp L-Tyrosin Tyr L-Valin Val 25 Peptidmaterialet ifølge krav 1 er blevet isoleret på delvis renset form, som ikke eksisterede i rottemyocardiet, hvorfra det oprindeligt blev opnået. Det vil sige, det er blevet fremstillet i en form, som er i alt væsentlig fri for peptider med lav molekylvægt, og fri for andre cellu-30 lære komponenter og vævsmateriale. Dette hidtil ukendte atriale peptid eller et peptidfragment deraf som angivet i krav 3 har fysiologiske egenskaber, som tyder på, at det er vigtigt i den medicinske videnskab ved studiet af det endokrine system for cardial atrium med hensyn til 35 humorale midler for modulering af ekstracellulært volume^ natrium og vaskulær resistens.
DK 163930 B
5
Det hidtil ukendte peptid eller peptidfragment ifølge opfindelsen har især terapeutisk anvendelse som diureticum, natriureticum, renal vasodilatator og afspændende middel for den glatte muskulatur. Det vil sige, det er effektivt 5 mod natrium, urinvolumen, renal vasodilatation og den glatte muskulaturs tonus.
Kort sagt er dette hidtil ukendte peptid eller peptidfragment blevet opnået ved fraktionering af rotteatrie-10 ekstrakter ved gelfiltreringskromatografi til tilvejebringelse af en fraktion med høj molekylvægt og en fraktion med lav molekylvægt, der begge havde nyttig natri-uretisk aktivitet. Fraktionen med den lavere molekylvægt blev fraskilt og renset i adskillige atrium-natriuretiske 15 peptider med lav molekylvægt som beskrevet i den i det foregående nævnte verserende ansøgning tilhørende opfinderen.
Den opnåede fraktion med høj molekylvægt (atriopeptigen-20 ATG) ved førnævnte gelfiltreringskromatografi af rotte-atrieekstrakter blev fraktioneret i overensstemmelse med den foreliggende opfindelse ved isoelektrisk fokusering og omvendtfaset HPLC til opnåelse af et delvist renset APG. Rensning af cyanogenbromid-nedbrydninger af den del-25 vist rensede fraktion med høj molekylvægt resulterede i isoleringen af et enkelt biologisk aktivt cyanogenbromid-spaltningspeptid ifølge krav 3 på 93 aminosyrer omfattende aminosyrer 19 til 111 af ovennævnte APG. Sekvensanalyser af disse peptider koblet med nylige rapporter af se-30 kvensanalyser af atriumpeptider med middelmolekylvægt [Thibault et al., FEBS Letters 167, 352-356 (1984) og
Kangawa et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 119, 933-940 (1984)] giver den komplette primære struktur af ovennævnte 111 rest APG.
35 ·
Opfindelsen forklares nærmere i den efterfølgende detaljerede beskrivelse af foretrukne udførelsesformer for op-
DK 163930 B
6 findelsen. For nemheds skyld er de citerede referencer anført efter afslutningen af denne detaljerede beskrivelse. Ved gelfiltreringskromatografi er den natriuretiske og diuretiske aktivitet for rotteatriale ekstrakter ble-5 vet fundet i fraktioner med høj molekylvægt (20000-30000) og lav molekylvægt (mindre end 10000), som også udviser spasmolytisk aktivitet på den glatte muskulatur (in vitro) (1). Det blev konkluderet af opfinderen, at fraktionen med den høje molekylvægt er forstadiet for fraktionen 10 med den lave molekylvægt med henblik på virkningerne af delvis proteolyse med trypsin. Trypsinbehandling af fraktionen med den høje molekylvægt forøgede mærkbart den spasmolytiske aktivitet. De aktive produkter, som vandrer med fraktionen med den lave molekylvægt i gelfiltrering 15 (2), er atriopeptiner I, II og III (3) ved omvendt faset HPLC. Derfor er de aktive komponenter i fraktionen med den høje molekylvægt blevet betegnet som atriopeptigener (APGer), forstadier for atriopeptinerne (APer), de bioaktive atriale peptider med lav molekylvægt. Disse atrio-20 peptiner omfatter følgende delvise sekvens af det fulde 111 aminosyre atriopeptigen som beskrevet i den i det foregående nævnte verserende patentansøgning tilhørende opfinderen: 25 AP I = aminosyrer 88 til 108 AP II = aminosyrer 88 til 110 og AP III = aminosyrer 88 til 111.
Ved rensningen af atriumpeptiderne med den høje molekyl-30 vægt og derivater deraf blev en bioprøve for glat muskulatur for hver fraktion udført efter aktivering af partiel tryptisk proteolyse (1, 2). De aktive fraktioner indeholder sekvensen for atriopeptinerne med lav molekylvægt (3). Det første trin i rensning af fraktionen med 35 den-høje molekylvægt (opnået ved G-75 "Sephadex”-kromatografi) var isoelektrisk fokusering, som viste, at det var en blanding af bioaktive arter (tilsyneladende isoelek-
DK 163930 B
7 triske punkter ved pH 4,91, 5,01, 5,17, 5,34 og 6,03). Massen af bioaktive arter (pH mellem 4,6 og 5,4) blev efter fjernelse af ampholyter og saccharose underkastet omvendtfaset HPLC.
5
Det typiske kromatogram viste en kompleks blanding af bioaktive peptider samlet ved 31 og 34% acetonitril. Af disse var en overvejende komponent med tilstrækkelig renhed ved gelanalyse (tilsyneladende molvægt 17000), og den 10 blev udvalgt som atriopeptigen til yderligere rensning og karakterisering i overensstemmelse med den foreliggende opfindelse.
Med henblik på atriopeptigenernes kompleksitet sammenlig-15 net med den enkle sekvens for atriopeptinerne afledt derfra er det blevet konkluderet af opfinderen, at atriopep-tigenerne igen kan være derivater af nogle større peptider. Følgelig blev virkningerne af kemisk spaltning undersøgt. Cyanogenbromidspaltning blev valgt på grund af 20 manglen på methionin i den lavmolekylære atriopeptinsek-vens (5). Cyanogenbromidspaltning foregår ved methionin i stilling 18 i den fulde 111 aminosyresekvens i atriopep-tigenet til tilvejebringelse af et højmolekylært peptidfragment på 93 aminosyrer. Det indledende trin ved frak-25 tionering af et cyanogenbromid-nedbrydningsprodukt med den totale høje molekylvægtsfraktion gav et bioaktivt materiale (fundet ved 30 til 31% acetonitril), som blev renset ved omvendtfaset HPLC til opnåelse af en enkelt komponent ved HPLC med en tilsyneladende molvægt på 9500 30 ved gelelektroforese.
Sekvensdata for begge peptider er vist i det følgende. Overlapning af sekvenserne for disse peptider og peptiderne ifølge Thibault et al., FEBS Letters 167, 352-6 35 (1984) og Kangawa et al., Biochem. Biophys. Res. Commun.
119,- 933-40 (1984) giver den primære struktur for et 111 rest atriopeptigen. Resultaterne af C-terminal analyse er
DK 163930 B
8 i overensstemmelse hermed. Carboxypeptidasebehandling af APG fjernede hurtigt Phe uden frigørelse af detekterbar Tyr og Arg. På den anden side gav lignende behandling af det cyanogenbromidspaltede peptid hurtig frigørelse af 5 Tyr, Arg og Phe (tabel 1), hvilket indikerede, at dette præparat består af tre peptider, der har de samme sekvenser, som slutter i Tyr, Arg og Phe.
Denne sekvens af 111 aminosyrerester inkorporerer i den 10 C-terminale ende peptiderne med lav molekylvægt, som nyligt er beskrevet (understreget i sekvensen i det følgende) i forbindelse med et par basiske aminosyrerester (Arg-Arg i dette tilfælde), som typisk danner spaltningsstedet i en række forskellige forstadier for sekreterede 15 peptider og proteiner.
20 25 30 35
DK 163930 B
9 5 10 15
Lys-Asn-Leu-Leu-Asp-His-Leu-Glu-Glu-Lys-Met-Pro-Val-Glu-Asp- A
20 20 30
Glu-Val-Met-Pro-Pro-Gln-Ala-Leu-Ser-Glu-Gln-Thr-Asp-Glu-Ala- A
5 Pro-Pro-Gln-Ala-Leu-Ser-Glu-Gln-Thr-Asp-Glu-Ala- B
35 40. 45
Gly-Ala-Ala-Leu A
Gly-Ala-Ala-Leu-Ser-Ser-Leu.-Ser-Glu-Val-Pro-Pro-Trp-Thr-Gly- B
Glu-Val-Pro-Pro-Trp-Thr-Gly- C
10 50 55
Glu-Val-Asn~Pro-Ser-Gln-Arg-Asp-Gly-Gly-Ala-Leu- B
Glu-Val-Asn-Pro-Ser-Gln-Arg-Asp-Gly-Gly-Ala-Leu-Gly-Arg-Gly- C
65 70 75
Pro-Trp-Asp-Pro-Ser-Asp-Arg-Ser-Ala-Leu-Leu-Lys-Ser-Lys-Leu- C
15 Pro-Ser-Asp-Arg-Ser-Ala-Leu-Ieu-Lys-Ser-Lys-Leu- D
80 85 90
Arg-Ala-Leu-Leu-Ala-Gly-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys- C
Arg-Ala-Ieu-Leu-Ala-Gly-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys- D
95 100
20 Phe-Gly-Gly-Arg-Ile-Asp C
Phe-Gly-Gly-Arg-lle-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly- D
110
Cys-Asa-Ser-Pha-Arg-Tyr-COOH D
DK 163930 B
10 I det foregående blev den komplette primære struktur af 111 aminosyreatriopeptigenet afledt fra: A aminosyresek-vens for de første 34 rester af atriopeptigenet, B amino-syresekvens for de første 39 rester af det med cyanogen-5 bromid spaltede peptid, C aminosyresekvensen af "mellemproduktet Mr for den atriale natriuretiske faktor" (11) og D komplet aminosyresekvens for "beta-rotteatrium-na-triuretisk polypeptid" (12).
10 TABEL 1
Carboxylterminal sekvensanalyse af cyanogenbromidspalt-ningspeptid 15 -
Amino- pmol produkt syre rest 20 s 2 min 10 min 60 min 20 Tyr 10 18 45 62
Arg 23 26 55 74
Phe 26 27 65 89 25 De efterfølgende eksempler beskriver rensningen, den delvise karakterisering og den natriuretiske, diuretiske og vasodilataterende aktivitet af ovennævnte peptid ifølge krav 1 (111 aminosyrer) af fraktionen med høj molekylvægt (20000-30000) og af et cyanogenbromidpeptidfragment iføl-30 ge krav 3 (93 aminosyrer) afledt af denne fraktion.
EKSEMPEL 1
Fremstilling af et atriopeptigen 35
En -ekstrakt af atria fra 1200 rottehjerter blev fremstillet og underkastet kromatografi på G-75 "Sephadex" ved
DK 163930 B
11 den almene procedure som beskrevet i det foregående (3). Fraktionen med den høje molekylvægt blev lyofiliseret, opløst i "Ampholine"-bæreampholyter ved pH 4-6 (LBK Instruments, Inc., Rockville, Maryland) og elektrofokuseret 5 i en llO ml saccharosemassefyldegradientsøjle (LKB) ved 1000 V i 40 timer (4). Søjlen derpå tømt med en hastighed på 48 ml pr. time, idet man opsamlede 2 ml fraktioner.
Efter bestemmelse af pH blev aliquoter (50 aliter) af søjlefraktioner indstillet til pH 8 (ved tilsætning af 10 450 aliter 0,1 M tris-puffer, pH 8,4) og inkuberet med trypsin (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri), en enhed pr. ml i 1 time ved 22 °c. Disse præparater blev prøvet for kyllingerectum-relaxationsaktivitet ved den almene procedure som tidligere beskrevet (1,2). Kombine-15 rede søjlefraktioner (pH 4,6 til 5,4) indeholdende massen af bioaktivitet (~30 ml) blev kromatograferet på G-50 "Sephadex" (80 x 2,7 cm) i 0,5 M eddikesyre til fjernelse af ampholyter og saccharose. Efter frysetørring blev dette materiale underkastet HPLC med omvendt fase under an-20 vendelse af Brownlee RP-300 Aquapore-søjlen og det tidligere beskrevne opløsningsmiddelsystem (3). Gradienten bestod af (a) 0-24% A i 8,8 minutter, (b) 24-28% A i 25 minutter, (c) 28-36% A i 100 minutter. Aliquoter (50 aliter) af HPLC søjlefraktioner (2 ml) blev tørret i va-25 kuum, optaget i 500 aliter 0,1 M tris, pH 8, trypsinise-ret og bioafprøvet som anført i det foregående.
Fremstilling af cyanogenbromidpeptid ud fra fraktionen med høj molvægt 30
Den lyofiliserede fraktion med høj molekylvægt som opnået ved kromatografi på G-75 "Sephadex" fra en ekstrakt af atrium fra 600 rottehjerter (1,3), opløst i 10 ml 70%'s myresyre, blev sat til 500 mg cyanogenbromid (Eastman Or-35 ganic Chemicals, Rochester, N.Y.) i et rør med glasprop (5).· Efter 16 timers forløb (ved 22 °C) blev der tilsat 90 ml vand, og opløsningen blev lyofiliseret. Resten blev
DK 163930 B
12 underkastet HPLC med omvendt fase under anvendelse af det i det foregående beskrevne system med (a) 0-27,2% A i 10 minutter efterfulgt af (b) 27,2-32% A i 60 minutter. Bioaktive fraktioner (opnået ved 29,6-31,2% A) blev bragt 5 til tørhed i vakuum og renset ved en anden protokol under anvendelse af en blanding af opløsningsmiddel A’ (0,1% trifluoreddikesyre i propanol-1) og B (0,1% trifluoreddikesyre i vand) ved 0,67 ml pr. minut bestående af (a) 0-15% A' i 5 minutter efterfulgt af (b) 15-24% A' i 90 mi-10 nutter. Bioaktive fraktioner ved 22-22,5% A') blev bragt til tørhed i vakuum og derpå underkastet en tredie protokol under anvendelse af opløsningsmidler A" (0,085% phos-phorsyre i propanol-1) og B" (0,085% phosphorsyre i vand) ved 0,67 ml pr. minut, bestående af 0-50% A' i 50 minut-15 ter. Det bioaktive produkt (opnået ved 32,1% A") blev derpå igen ført to gange gennem HPLC under anvendelse af anden protokol som i det foregående, hvilket til sidst gav 110 ug (protein) af en enkelt bioaktiv komponent (de-tekteret ved 215 nm) ved 22,1% A'.
20
Analyse af peptider
Aminosyreanalyse blev foretaget ved hydrolyse af 1 nmol peptid i 6 N HC1 i 22 timer ved 110 °C. Hydrolysatet blev 25 lyofiliseret og påført et Waters aminosyreanalysesystem under anvendelse af o-phthalaldehyd-forkolonnederivatise-ring (6) efterfulgt af HPLC med omvendt fase.
Peptidsekvensering - N-terminal sekvensering blev foreta-30 get ved sekventiel Edman-nedbrydning af 2-4 nmol peptid under anvendelse af en Applied Biosystems model 470A gasfasesekvenser (7), detektering af phenylthiohydantoinde-rivater ved HPLC (8). Gennemsnitlige gentagne udbytter overskred 93%. C-terminal sekvensering blev foretaget ved 35 addition af carboxypeptidase Y (2 ug, 20 uliter, Perce Chemical Co., Rockford, Illinois) til 1-2 nmol peptid opløst i 280 uliter 50 mM natriumacetatpuffer, pH 5,5. Med 13 mellemrum blev aliquoter på 50 uliter sat til 25 uliter 1%'s trifluoreddikesyre (9), og de frigjorte aminosyrer blev bestemt ved aminosyreanalyse (se i det foregående).
5 Gelanalyse - Elektroforese af peptider (1-2 ug) blev foretaget med en 15%'s polyacrylamidgel (0,4% bis-acryl-amid) efter Laemmli (10). Gelen blev farvet med 0,8%'s sølvnitrat i 20 minutter, vasket og udviklet med en opløsning af 0,005%'s citronsyre og 0,2%'s formaldehyd.
10 EKSEMPEL 2
Cyanogenbromidpeptidet med høj molekylvægt fra rotteatrium som beskrevet i eksempel 1 i det foregående blev 15 afprøvet for natriuretisk aktivitet i hunde.
Peptidet med høj molekylvægt blev enten injiceret alene eller efter trypsinbehandling. Trypsininkuberingen (1 enhed/ml) blev foretaget i 30 minutter ved stuetemperatur 20 med 100 ug af det rensede høj molekylære cyanogenbromid-peptid, Atriopeptin I og II blev leveret af Peninsula Labs, San Carlos, California. Atriopeptin III og Ser-Leu-Arg-Arg-Atriopeptin III (Flynn et al., peptidet, reference 13) blev syntetiseret ved automatiseret peptidsyntese. 25
Bastardhunde af begge køn blev anæstetiseret (i.v.) med pentobarbital-natrium (30 mg/kg). Der blev foretaget et flankeindsnit til retroperitoneal frilæggelse af den højre nyre. Urinlederen blev kanyleret med PE160 (Clay 30 Adams) rør, som blev forbundet til en fraktionsopsamler for urin. En elektromagnetisk strømningsprobe (8 mm diameter Carolina Instrument) blev anbragt rundt om den højre renale arterie for måling af den renale blodstrømning. En nål nr. 22 (knyttet til PE50 rør og sprøjte) 35 blev- indsat i den renale arterie over strømningsproben.
Hunden blev kontinuerligt infuseret med saltvand (0,9% NaCl) ved 1,3 ml/min. Urinprøver blev samlet med 5 minut-
DK 163930 B
14 ters mellemrum og analyseret for volumen, natrium, kalium og osmolaritet. Peptiderne blev injiceret (bl.a. i den renale arterie) med 30 minutters mellemrum.
5 Resultater
Peptidet med den høje molekylvægt (cyanogenbromid) gav en koncentrationsafhængig diurese, som ikke blev væsentligt ændret ved trypsinisering. Grænserespons (en 50%'s for-10 øgelse i urinvolumen, FU5Q) blev opnået med 0,3 nmol, mens en 450%"s i urinstrøm (FU^gg) blev opnået med 3 nmol. Sammenligning af mængden af peptid påkrævet til at producere en 200%'s forøgelse i urinvolumen (FU200^ ln^l“ kerer, at Ser-Leu-Arg-Arg-APIII kræver 0,3 nmol; høj mo-15 lekylvægt + trypsin kræver 0,5 nmol, høj molekylvægt ale ne 0,7 nmol; a triopep tin II og III kræver 10 nmol; og atriopeptin I forøgede ved 30 nmol kun urinvolumenet med 50%. Styrkerækkefølgen for vasodilatation i sammenligning med dosis påkrævet for at give en forøgelse på 10 ml/min 20 i renal blodstrømning (RB^q) er som følger: Ser-Leu-Arg-Arg-APIII krævede 1 nmol; det højmolekylære cyanogenbro-midpeptid (med eller uden trypsinforbehandling) krævede 3 nmol; atriopeptin III krævede 8 nmol; atriopeptin II krævede 17 nmol; mens 30 nmol atriopeptin I kun gav en 6 25 ml/min ændring i renal blodstrøm (RDg). Hvert peptid blev afprøvet på 3-5 forskellige hunde.
Tabel 2 viser resultaterne skematisk.
30 35 ------
DK 163930 B
15 TABEL 2 FU50 FU200 |FU450 II rø6 RB10 5 (nmol) (nmol) (nmol) (nmol) (nmol)
Cyanogenbromidpeptid 0,3 0,7 3 - 3 (19-111 sekvens ifølge opfindelsen)
Trypsiniseret - 0,5 - - 3 cyanogenbrompeptid 10 (19-111 sekvens ifølge opfindelsen) AP I (DK 5334/84) 30 - - 30 - AP II (DK 5334/84) 10 - 17 15 AP III (DK 5334/84) - 10 - - 8
Ser-Leu-Arg-Arg- - 0,3 - - 1 AP III (ref. 13)
Sammenfattende kan det siges, at direkte injektion af det 20 rensede cyanogenbromidfragment af atriopeptigen med høj molekylvægt gav en udtalt diurese, der ikke kunne skelnes fra de kraftigste polypeptider med lav molekylvægt. Dette kan genspejle en øjeblikkelig overføring af peptidet i nyren eller direkte genkendelse af nyren for det intakte 25 peptid. Denne væsensforskellighed i styrkerækkefølgen for peptiderne i henseende til renal vasodilatation mod na-triurese antyder, at disse respons er medieret af separate receptorer. Væsentligt lignende diurese blev opnået, når det delvist rensede 111 aminosyre atrio-peptigen (før 30 35
DK 163930 B
16 cyanogenbromidspaltning) blev afprøvet i hunde.
De referencer, som er nævnt i den foregående detaljerede beskrivelse af opfindelsen vedrørende offentliggjorte 5 procedurer, er som følger:
Referencer: 1. Currie et al., Science 221, 71-73 (1983).
10 2. Currie et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 81, 1230-1233 (1984).
3. Currie et al., Science 223, 67-69 (1984).
4. Geller et al., Biochem. J. 127, 865-874 (1972).
5. Gross and Witkop, J. Biol. Chem. 237, 1856-1860 15 (1962).
6. Hili et al., Anal. Chem. 51, 1338-1341 (?) (1979).
7. Hunkapiller et al., Methods Enzymol. 91, 399-413 (1983).
8. Hunkapiller and Hood, ibid., 486-493.
20 9. Hayashi, Methods Enzymol. 47, 84-93 (1977).
10. Laemmli, Nature 227, 680-685 (1970).
11. Thibaule et al., FEBS Letters 167, 352-56 (1984).
12. Kangawa et al., Biochem. Biophys. Res. Commun 119, 933-40 (1984).
25 13. Flynn et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 117, 859-65 (1983).
30 35
Claims (4)
1. Peptid med kraftig natriuretisk, diuretisk og vasodi-5 lataterende aktivitet, kendetegnet ved, at det har følgende aminosyresekvens: 5 10 15 Lys-Asn-Leu-Leu-Asp-His-Leu-Glu-Glu-Lys-Met-Pro-Val-Glu-Asp- 10 20 25 30 Glu-Val-Met-Pro-Pro-Gln-Ala-Leu-Ser-Glu-Gln-Thr-Asp-Glu-Ala- 35 40 45
25 Gly-Ala-Ala-Ieu-Ser-Ser-Leu-Ser-Glu-Val-Pro-Pro-Trp-Thr-Gly- 50 55 60 Glu-Val-Asn-Pro-Ser-Gln-Arg-Asp-Gly-Gly-Ala-Leii-Gly-Arg-Gly- 20 65 70 75 Pro-Trp-Asp-Pro-Ser-Asp-Arg-Ser-Ala-Leu-Leu-Lys-Ser-Lys-Leu- 80 85 90 Arg-Ala-Leu-Leu-Ala-Gly-Pro-Arg-Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys- 25 95 100 105 Phe-Gly-Gly~Arg-Ile-Asp~Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly- 110 _n Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr-COOH Ow eller et peptidfragment af dette peptid med i det væsentligste samme terapeutiske egenskaber. 35 2. - Terapeutisk præparat til opnåelse af natriurese, di- urese eller vasodilatation, kendetegnet ved, at det omfatter en terapeutisk effektiv mængde af et pep- DK 163930 B tid ifølge krav 1.
3. Peptidfragment ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det omfatter sekvensen af aminosyrer 19 til 111. 5
4. Terapeutisk præparat til opnåelse af natriurese, di-urese eller vasodilatation, kendetegnet ved, at det omfatter en terapeutisk effektiv mængde af pepti-det ifølge krav 3. 10 15 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/607,064 US4508712A (en) | 1984-01-10 | 1984-05-04 | Atrial peptide |
| US60706484 | 1984-05-04 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK81685D0 DK81685D0 (da) | 1985-02-22 |
| DK81685A DK81685A (da) | 1985-11-05 |
| DK163930B true DK163930B (da) | 1992-04-21 |
| DK163930C DK163930C (da) | 1992-09-14 |
Family
ID=24430657
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK081685A DK163930C (da) | 1984-05-04 | 1985-02-22 | Biologisk aktivt peptid og peptidfragment deraf med natriuretisk, diuretisk og vasodilataterende aktivitet og terapeutisk middel indeholdende et saadant peptid eller peptidfragment |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4508712A (da) |
| EP (1) | EP0162032B1 (da) |
| JP (1) | JPH0615559B2 (da) |
| AT (1) | ATE68503T1 (da) |
| AU (1) | AU569776B2 (da) |
| CA (1) | CA1244407A (da) |
| DE (1) | DE3584388D1 (da) |
| DK (1) | DK163930C (da) |
| FI (1) | FI79119C (da) |
| GR (1) | GR850474B (da) |
| IE (1) | IE57880B1 (da) |
| IL (1) | IL74426A (da) |
| NO (1) | NO167295C (da) |
| ZA (1) | ZA851376B (da) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4761469A (en) * | 1982-02-22 | 1988-08-02 | Queen's University At Kingston | Isolation, purification and sequence determination of cardionatrins |
| CA1241646A (en) * | 1982-02-22 | 1988-09-06 | Adolfo J. De Bold | Atrial natriuretic factor |
| AU572173B2 (en) * | 1983-08-29 | 1988-05-05 | Institut De Recherches Cliniques De Montreal | Natriuretic factors |
| JPS60136596A (ja) * | 1983-12-26 | 1985-07-20 | Suntory Ltd | ペプチド及びこれを有効成分とする利尿剤 |
| US4952561A (en) * | 1984-02-07 | 1990-08-28 | Merck & Co., Inc. | Cardiac atrial peptides |
| JPH0794473B2 (ja) * | 1984-03-02 | 1995-10-11 | サントリー株式会社 | 新規なペプチド及びこれを有効成分とする利尿剤 |
| US4618600A (en) * | 1984-04-19 | 1986-10-21 | Biotechnology Research Associates, J.V. | Novel polypeptide diuretic/vasodilators |
| WO1985004872A1 (en) * | 1984-04-24 | 1985-11-07 | The Salk Institute For Biological Studies | Atrial peptide analogs |
| NZ212291A (en) * | 1984-06-08 | 1991-10-25 | Suntory Ltd | Peptide from human atrium cordis having diuretic action, dna coding therefor and pharmaceutical compositions thereof |
| US4670540A (en) * | 1984-08-29 | 1987-06-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Novel peptide |
| IE862891L (en) * | 1985-11-05 | 1987-05-05 | Behringwerke Ag | Analogs of atrial natriuretic peptides |
| US4757048A (en) * | 1985-11-05 | 1988-07-12 | Biotechnology Research Associates J.V. | Synthetic analogs of atrial natriuretic peptides |
| US4716147A (en) * | 1986-03-27 | 1987-12-29 | Monsanto Company | Synthetic airial peptides |
| US4721704A (en) * | 1986-05-09 | 1988-01-26 | Peninsula Laboratories, Inc. | Potent synthetic atrial peptide analogs |
| US5159061A (en) * | 1986-09-29 | 1992-10-27 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Atrial natriuretic peptide derivative |
| US4804650A (en) * | 1986-10-28 | 1989-02-14 | Biotechnology Research Associates, J.V. | Analogs of atrial natriuretic peptides |
| US5500230A (en) * | 1987-01-23 | 1996-03-19 | The General Hospital Corporation | Method for treatment of glaucoma with nitrogen containing guanylate cyclase activators |
| JP2845913B2 (ja) * | 1987-01-23 | 1999-01-13 | ザ・ゼネラル・ホスピタル・コーポレイション | 緑内障、水頭症、および脳水腫（頭蓋液量異常）治療用のアトリオペプチン、グアニル酸シクラーゼ賦活物質、およびホスホジエステラーゼ阻害物質 |
| CA1337400C (en) * | 1987-06-08 | 1995-10-24 | Norma G. Delaney | Inhibitors of neutral endopeptidase |
| US5461142A (en) * | 1987-11-07 | 1995-10-24 | Pharma Bissendorf Peptide Gmbh | Phosphorylated derivatives of cardiodilatin/ANF peptides |
| DE3737917A1 (de) * | 1987-11-07 | 1989-05-18 | Bissendorf Peptide Gmbh | Phosphorylierte derivate von cardiodilatin/anf-peptiden |
| US5047397A (en) * | 1988-08-26 | 1991-09-10 | California Biotechnology Inc. | Linear analogs of atrial natriuretic peptides |
| US5114923A (en) * | 1988-05-31 | 1992-05-19 | California Biotechnology Inc. | Recombinant techniques for production of novel natriuretic and vasodilator peptides |
| CA1339210C (en) * | 1988-05-31 | 1997-08-05 | John Lewicki | Recombinant techniques for production of novel natriuretic and vasodilator peptides |
| DK1992352T3 (da) | 2006-02-14 | 2014-06-10 | Calpis Co Ltd | Middel til anvendelse i forbyggelsen af aterosklerosis |
| BRPI0707827A2 (pt) * | 2006-02-14 | 2011-05-10 | Calpis Co Ltd | vasodilatador |
| WO2012115772A2 (en) | 2011-02-25 | 2012-08-30 | Medtronic, Inc. | Therapy for kidney disease and/or heart failure |
| EP2750697A4 (en) | 2011-09-02 | 2015-03-25 | Medtronic Inc | CHIMERIC NATRIURETIC PEPTIDE COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1985004872A1 (en) * | 1984-04-24 | 1985-11-07 | The Salk Institute For Biological Studies | Atrial peptide analogs |
| NZ212291A (en) * | 1984-06-08 | 1991-10-25 | Suntory Ltd | Peptide from human atrium cordis having diuretic action, dna coding therefor and pharmaceutical compositions thereof |
-
1984
- 1984-05-04 US US06/607,064 patent/US4508712A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-02-22 AT AT85870029T patent/ATE68503T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-02-22 IE IE436/85A patent/IE57880B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-02-22 GR GR850474A patent/GR850474B/el unknown
- 1985-02-22 ZA ZA851376A patent/ZA851376B/xx unknown
- 1985-02-22 JP JP60034281A patent/JPH0615559B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-02-22 EP EP85870029A patent/EP0162032B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-02-22 IL IL74426A patent/IL74426A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-02-22 AU AU39073/85A patent/AU569776B2/en not_active Ceased
- 1985-02-22 FI FI850744A patent/FI79119C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-02-22 NO NO850709A patent/NO167295C/no unknown
- 1985-02-22 CA CA000475001A patent/CA1244407A/en not_active Expired
- 1985-02-22 DK DK081685A patent/DK163930C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-02-22 DE DE8585870029T patent/DE3584388D1/de not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI79119B (fi) | 1989-07-31 |
| IL74426A (en) | 1989-09-10 |
| AU569776B2 (en) | 1988-02-18 |
| AU3907385A (en) | 1985-11-07 |
| JPH0615559B2 (ja) | 1994-03-02 |
| DK81685A (da) | 1985-11-05 |
| EP0162032A2 (en) | 1985-11-21 |
| US4508712A (en) | 1985-04-02 |
| ATE68503T1 (de) | 1991-11-15 |
| NO167295B (no) | 1991-07-15 |
| CA1244407A (en) | 1988-11-08 |
| IE57880B1 (en) | 1993-05-05 |
| JPS6127924A (ja) | 1986-02-07 |
| NO167295C (no) | 1991-10-23 |
| FI850744A0 (fi) | 1985-02-22 |
| DE3584388D1 (de) | 1991-11-21 |
| IL74426A0 (en) | 1985-05-31 |
| EP0162032A3 (en) | 1988-03-30 |
| DK163930C (da) | 1992-09-14 |
| IE850436L (en) | 1985-11-04 |
| DK81685D0 (da) | 1985-02-22 |
| ZA851376B (en) | 1986-09-24 |
| EP0162032B1 (en) | 1991-10-16 |
| FI850744L (fi) | 1985-11-05 |
| NO850709L (no) | 1985-11-05 |
| GR850474B (da) | 1985-05-10 |
| FI79119C (fi) | 1989-11-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK163930B (da) | Biologisk aktivt peptid og peptidfragment deraf med natriuretisk, diuretisk og vasodilataterende aktivitet og terapeutisk middel indeholdende et saadant peptid eller peptidfragment | |
| EP0142487B1 (en) | Novel atrial peptides | |
| US5861379A (en) | Chimeric fatty body-pro-GRF analogs with increased biological potency | |
| DK173649B1 (da) | Fremgangsmåde til kædekombination til fremstilling af biologisk aktivt humant relaxin eller analoge deraf | |
| JPH04504858A (ja) | 肝臓特異性インシュリン類似体 | |
| KR20010103772A (ko) | 공유적으로 가교결합된 인슐린 이량체 | |
| US5480869A (en) | Anti-inflammatory peptide analogs and treatment to inhibit vascular leakage in injured tissues | |
| CA2071538C (en) | Hpth (1-37) fragment, its production, drug containing it and its use | |
| US4992417A (en) | Superactive human insulin analogues | |
| Gelher et al. | The sequence of an atriopeptigen: a precursor of the bioactive atrial peptides | |
| CZ34799A3 (cs) | Analogy paratyroidního hormonu pro léčení osteoporézy | |
| FI98731C (fi) | Menetelmä superaktiivisten insuliinianalogien valmistamiseksi | |
| GB2194438A (en) | Enchancing the bioactivity of atrial peptides | |
| US4734399A (en) | Growth hormone releasing factor analogs | |
| US4557864A (en) | Atrial peptides | |
| US4824937A (en) | Synthetic natriuretic peptides | |
| CA2072253A1 (en) | Anti-inflammatory peptides and treatment to inhibit vascular leakage in injured tissues | |
| Suzuki et al. | Isolation and characterization of Japanese eel prolactins | |
| US4721704A (en) | Potent synthetic atrial peptide analogs | |
| SCHWARTZ et al. | [12‐ASPARAGINE‐B] HUMAN INSULIN: An Analogue with Modification in the Hydrophobic Core of Insulin | |
| US5461035A (en) | Short peptides with insulin activity | |
| US6127519A (en) | Calcitonin derivatives | |
| CA1338584C (en) | Superactive human insulin analogues | |
| JPH04321699A (ja) | 新規な利尿ペプチド | |
| IL111437A (en) | Insulin analogues |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |