DK163672B - Materiale til bestemmelse af cholesterol i en flydende proeve, testmiddel til anvendelse ved bestemmelsen og fremgangsmaade til fremstilling af dette middel - Google Patents
Materiale til bestemmelse af cholesterol i en flydende proeve, testmiddel til anvendelse ved bestemmelsen og fremgangsmaade til fremstilling af dette middel Download PDFInfo
- Publication number
- DK163672B DK163672B DK130881A DK130881A DK163672B DK 163672 B DK163672 B DK 163672B DK 130881 A DK130881 A DK 130881A DK 130881 A DK130881 A DK 130881A DK 163672 B DK163672 B DK 163672B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- cholesterol
- test
- determination
- bilirubin
- ferrocyanide
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/62—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/805—Test papers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/145555—Hetero-N
- Y10T436/146666—Bile pigment
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/145555—Hetero-N
- Y10T436/147777—Plural nitrogen in the same ring [e.g., barbituates, creatinine, etc.]
- Y10T436/148888—Uric acid
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
i
DK 163672 B
Den foreliggende opfindelse angår generelt det diagnostiske testområde, specielt de tests, der er nyttige til kvalitativ og kvantitativ bestemmelse af cholesterol i legemsvæsker såsom urin eller blod. Især angår opfindelsen de 5 tests, véd hvilke analyten omdannes til et oxiderende stof såsom et peroxid.
Opfindelsen angår således et materiale til bestemmelse af cholesterol i en flydende prøve, hvilket materiale omfatter 10 a) reagensmidler, der giver respons på nærværelsen af cholesterol i prøven, b) en phenol eller naphthol og c) 4-amino-phenazon.
Opfindelsen angår endvidere et testmiddel til anven-15 delse ved bestemmelsen samt en fremgangsmåde til fremstilling af testmidlet.
Den oxidative koblingsreaktion mellem phenol og 4-amino-phenazon, også kendt som 4-amino-antipyrin, til dannelse af et rødt quinonimin-farvestof har været kendt i lang 20 tid og er beskrevet af Emerson, J. Org. Chem. jS, 417 (1943) .
Reaktionen har vundet i popularitet i den kliniske kemi efter Trinder's (Ann. Clin. Biochem. £, 24 (1969)) anvendelse deraf til den enzymatiske bestemmelse af glucose, baseret på følgende reaktionsskema: 25
Glucose + 02 Giucoseoxldas\i Gluconsvre + H202 1 2H202 + Phenol + 4-Amino-phenazon -er-xa· Quinoniminfarvestof + 4H2°
Det chromogene system phenol (herunder substituerede phenoler) + 4-aminophenazon + peroxidase, der betegnes som Emer-35 son-Trinder-systemet, anvendes nu ved den kvantitative bestemmelse af ikke blot glucose, men også af cholesterol og urinsyre i 2
O
DK 163672B
serum, plasma eller andre biologiske væsker. Anvendelsen af dette system til bestemmelse af glucose er beskrevet i US patentskrift nr. 3.886.045, jfr. også US Reissue Patent nr. 29.498.
Det generelle skema for reaktionen er som følger: 5 1) Analyt + 02 ) Oxideret analyt + H2°2 10 2) H3Cn^ + ^Q^V-OH Peroxidase ^ 15 h3c nh2
fcHS
H3CvN^ 20 \ / (farvet produkt)
H3C N=0"D
Der kan anvendes mange phenoler ved Emerson-25 -Trinder-reaktionen. Eksempler på de mest almindeligt anvendte i den kliniske kemi er phenol, p-hydroxybenzoat, 2,4-dichlor-phenol og 3,5-dichlor-2-hydroxy-benzensulfonsyre. Ligeledes kan der anvendes forskellige substituerede og usubstituerede naph-tholer.
30 De prøvebestanddele, der kan bestemmes, omfatter glucose, cholesterol, urinsyre eller andre metaboliter, der kan oxideres med en specifik oxidase under samtidig dannelse af hydrogenper-oxid. Oxidasen er glucoseoxidase til bestemmelse af glucose, cholesteroloxidase til bestemmelse af cholesterol (cholesterol-35 ester-hydrolase tilsættes også til hydrolyse af esterificeret cholesterol) samt uricase til urinsyrebestemmelser.
O
DK 163672 B
3 Mængden af dannet farvestof er proportional med koncentrationen af hydrogenperoxidet og derfor med koncentrationen af bestanddelen i prøven. Koncentrationen af bestanddelen i prøven kan således fås ved simpel måling af absorbansen af den omsatte 5 opløsning og sammenligning af en sådan måling med målingen på en kendt standardopløsning af bestanddelen.
Det dannede farvestof kan måles i det synlige område, almindeligvis mellem 500 og 550 nanometer (nm), afhængigt af den anvendte phenol, idet der kun kræves et kolorimeter 10 eller et fotometer til brug i det synlige farveområde.
Emerson-Trinder-chromogensystemet lider af den hovedulempe, at den oxidative koblingsreaktion påvirkes af reducerende forbindelser og bilirubin, en metabolit, der sædvanligvis er til stede i serum i koncentrationer ikke højere end 15 1 milligram pr. deciliter (mg/dl), men som kan nå meget høje niveauer (20 mg/dl eller mere) i nogle tilfælde. Bilirubin--niveauer højere end normalen påvirker de enzymatiske glucose-, cholesterol- og urinstyretests ved formindskelsen af farven ved reaktionen. Interferensen forøges med forøgelsen i bilirubin-20 -niveauet.
Forklaringen på den negative interferens af reducerende forbindelser, f.eks. ascorbinsyre, er ganske åbenbar, eftersom de hovedsageligt virker som konkurrenter til chromoge-net ved den peroxidase-katalyserede reaktion med hydrogenperoxid, 25 eller som blegemidler i relation til den dannede farve. Interferensen fra reducerende stoffer er imidlertid ikke noget virkeligt problem, i det mindste ikke i serum, hvor ascorbinsyremæng-den sjældent overstiger 3 mg/dl.
I modsætning hertil er interferensen fra bilirubin 30 et signifikant problem ved bestemmelsen af metaboliter i serum ved hjælp af Emerson-Trinder-chromogensystemet og repræsenterer et væsentligt negativt aspekt ved dette system ved rutinemæssig laboratoriepraksis, hvor hyperbilirubinholdige prøver hyppigt forekommer.
35 Reaktionsmekanismen for bilirubin er ganske kompleks og er endnu ikke fuldt opklaret. Den bedste tilnærmelse til en løsning på problemet, der hidtil er fremkommet, hidrører fra
DK 163672 B
4
Witte, jfr. Clin. Chem. 2j4, 1778 (1978) , der tilskriver interferensen fra bilirubin indflydelsen af én eller'flere af de følgende faktorer: simple spektraleffekter, virkning som et alternativt peroxidase-substrat eller destruktion af peroxidase-5 reaktion-mellemprodukter.
I BE offentliggørelsesskrift nr. 877.610 er der beskrevet forsøg på at overvinde de problemer, der hidrører fra tilstedeværelsen af bilirubin i Emerson-Trinder-systemet til bestemmelse af urinsyre ved tilsætning af ferrocyanid, 10 men der angives intet om de involverede reaktionsmekanismer.
Som anført i det foregående er bilirubins interferensmekanisme ved Emerson-Trinder-reaktionen ikke opklaret til trods for de af Witte, jfr. det foregående, foretagne undersøgelser. Virkningsmekanismen for ferrocyanid ved formindskelse 15 af bilirubin-interferensen ved en urinsyrebestemmelse er ej heller opklaret.
Det kunne således ikke forventes, at en tilsvarende effekt kunne opnås i tilfælde af en i forhold til urinsyre helt anderledes beskaffen metabolit som cholesterol. Man 20 måtte snarere have ventet, at de forskellige testbetingelser (pH-værdi, puffer etc.) ville bevirke, at den endelige chro-mogene reaktion ville opnås gennem forskellige mellemprodukter, om hvilke det var uvist, hvorvidt de ville blive påvirket af ferrocyanid eller ej.
25 I US patentskrift nr. 3.886.045, der er nævnt i det foregående, er der tale om en metode, ved hvilken der anvendes ferrocyanid i forbindelse med et Emerson-Trinder-system, hver bilirubin er involveret, nemlig ved en glucosebestem-melse, ved hvilken der anvendes glucoseoxidase. Der er i US 30 skriftet imidlertid ikke tale om, at ferrocyanid har nogen virkning på interferensen fra bilirubin ved en glucosebe-stemmelse. Det fremgår yderligere af spalte 4, linie 41-52 i US skriftet, at bilirubin interfererer med glucosebestem-melser, selv i nærværelse af ferrocyanid.
35 På baggrund af den kendte teknik kunne det således ikke forventes, at ferrocyanid kunne anvendes i det her
DK 163672B
5 omhandlede materiale til cholesterolbestemmelse under opnåelse af hindring af bilirubins uheldige indvirkning på analyseresultatet.
Det er således formålet med den foreliggende opfin-5 delse at tilvejebringe et forbedret materiale og en forbedret test til detektering af cholesterol i en flydende prøve, hvilken test er i høj grad modstandsdygtig over for de interfererende virkninger af bilirubin.
I forbindelse med den foreliggende opfindelse er det 10 blevet opdaget, at bilirubin interfererer kraftigt med chro-mogene tests af den type, hvor der anvendes en substitueret eller usubstitueret phenol og 4-amino-phenazon, hovedsageligt ved to forskellige mekanismer: (1) ved overlapning med spektret for farvestoffet dannet ved reaktionen, hvorved der 15 fremkaldes en positiv interferens, og (2) ved en kemisk mekanisme som tidligere omtalt, der forårsager en negativ interferens. Den positive interferens, der er et resultat af den første mekanisme, kan formindskes ved aflæsning af absorbansen ved en bølgelængde på 520 nm eller mere. Dette 20 er imidlertid ikke tilfældet med hensyn til den anden mekanisme. Denne spiller en yderst vigtig rolle, eftersom den bevirker unøjagtige resultater ved de ovenfor omtalte tests, når bilirubin er til stede i prøven i anormale koncentrationer.
25 I modsætning til de kendte materialer er materialet ifølge opfindelsen stærkt sensitivt over for tilstedeværelsen af cholesterol i legemsvæsker, og det er tillige i det væsentlige resistent over for bilirubin-interferens.
Dette overraskende resultat opnås ifølge den forelig-30 gende opfindelse med det her omhandlede materiale, der er af den allerede angivne art og er ejendommeligt ved, at reagensmidlerne omfatter en ferrocyanidion.
Skønt der for klarheds skyld anvendes specifikke betegnelser i den følgende beskrivelse, skal disse betegnel-35 ser kunne tjene til beskrivelse af en bestemt udførelsesform for opfindelsen, der er udvalgt til illustration.
O
DK 163672 B
6
Materialet ifølge opfindelsen kan have mange fysiske former og omfatte en phenol, herunder substituerede og usub-stituerede phenoler, der er velkendt for sin anvendelighed til brug sammen med 4-amino-phenazon-kompositioner, i kombina-5 tion med reagenserne, der omfatter en ferrocyanidion. Disse skal beskrives sammen med materialer såsom stabiliserende midler og andre konventionelle additiver, der om ønsket yderligere kan anvendes.
Foretrukne reagenser omfattende en ferrocyanidion 10 omfatter alkalimetalsalte af ferrocyanid, såsom natriumeller kaliumferrocyanid, samt enhver anden kilde til ferro- cyanidioner, herunder ethvert salt eller system indeholdende -4 eller i stand til at frigive Fe(CN)g -ioner.
Materialet ifølge opfindelsen indeholder reagensmid-15 ler, der giver respons på nærværelsen af cholesterol i en flydende prøve til dannelse af et oxiderende stof. sådanne cholesterol-responsgivende midler er fortrinsvis af enzymatisk natur og omfatter fortrinsvis cholesteroloxidase til bestemmelse af cholesterol. Koncentrationerne og typerne af 20 reagenser, der er anvendelige i de analyt-responsgivende midler, skal omfatte de, der henhører under den kendte teknik.
Testmidlerne kan anvendes som en opløsning til bestemmelse af analyten. De opløsningsmidler, der anvendes 25 til fremstilling af opløsningerne, kan være vand, fysiologiske opløsninger, organiske opløsningsmidler, f.eks. methanol, eller blandinger deraf.
Materialet anvendes fortrinsvis til detektering af analyten ved tilsætning af en prøve såsom vævskultursuperna-30 tant og fortrinsvis serum, plasma eller helblod.
Når materialet anvendes på opløsningsform, anvendes reagensmidlerne indeholdende ferrocyaniddionen fortrinsvis i koncentrationer på fra ca. 1,0 mikromol pr. liter (/umol/liter) til koncentrationen af en mættet opløsning. Det foretrukne område 35
DK 163672 B
7 ligger fra 5 /zmol/liter til 50 μιηοΐ/liter. Når chlolesterol-oxidase er en del af de analyt-responsgivende midler, ligger koncentrationen deraf fortrinsvis fra 10 til 200 I.U./liter.
Når cholesterolhydrolase anvendes til bestemmelser af total 5 cholesterol, er koncentrationen deraf fortrinsvis fra 10 til 200 I.U./liter. Når peroxidase er mindst ét af de reagenser, der indeholder de analyt-responsgivende midler, ligger koncentrationen af peroxidase fortrinsvis fra 10 til 200 I.U./liter.
10 Enzymaktiviteten udtrykkes i internationale enheder (I.U.), idet én I.U. er den mængde enzymaktivitet, der kræves til at katalysere omdannelsen af 1 mikromol (/umol) substrat pr. minut under specifikke pH- og temperaturbetingelser. Peberrodsoxidase og cholesteroloxidase som anvendt i eksemplerne kan 15 fås fra Research Products Division, Miles Laboratories,
Inc., Elkhart, Indiana.
Der tilvejebringes også testmidler, der omfatter en bærer inkorporeret med materialet ifølge opfindelsen, samt en fremgangsmåde til fremstilling af sådanne testmidler ved 20 inkorporering af en bærer, f.eks. en matrix, sammen med materialet. Når denne inkorporering sker ved imprægnering af en opløsning af materialet ifølge opfindelsen, tørres den således imprægnerede bærer. Foruden ved imprægnering kan midlerne ifølge opfindelsen fremstilles ved andre egnede 25 inkorporeringsmetoder, f.eks. trykning eller spraying af materialet på et substrat eller en matrix. Alternativt kan materialerne ifølge opfindelsen indføres i en bærer, der har form af en presset eller formet tablet indeholdende konventionelt bærermateriale.
30 Betegnelsen "bærer" refererer til matrixer, der er uopløselige i og bibeholder deres strukturelle integritet, når de udsættes for en fysiologisk væske eller anden væske. Egnede matrixer, der kan anvendes, omfatter papir, cellulose, træ, syntetiske harpiksflor, glasfibre, uvævede og 35 vævede stoffer, gelatine, forskellige organiske polymere, f.eks. polypropylen, og andre organiske materialer, der er velkendte som filmdannere for fagfolk. Af bekvemmeligheds-
DK 163672 B
8 grunde kan bæreren eller testmidlet være i forbindelse med en uopløselig understøtning eller et håndgreb, der f.eks. kan fremstilles af polystyren.
Når testmaterialet skal anvendes til detektering 5 af cholesterol i blod, dækkes overfladen af den imprægnerede bærermatrix med fordel med en semipermeabel, transparent overtræksfilm af ethylcellulose eller et andet egnet materiale. Dette kan f.eks. ske ved påføring af et lag af ethylcellulose opløst i benzen på overfladen af den imprægnerede 10 bærermatrix, hvorpå opløsningsmidlet fjernes ved fordampningstørring.
Indikatorer i form af behandlede bærermatrixer eller testmidler opbevares ofte i betydelige tidsrum inden brugen, og det er derfor ønskeligt, at de valgte reagenser 15 ikke er let autooxiderbare i luft. Det anbefales, at testmidlerne beskyttes mod udsættelse for lys, og i nogle . tilfælde er det ønskeligt at holde dem forseglet i en fugtighedsskyende pakning, der kun åbnes med det formål at fjerne ét eller flere testmidler kort før anvendelsen deraf.
20 Hvis det er ønskeligt, kan en bærermatrix behandles ‘ med et baggrundsfarvestof med envbestemt farve, f.eks. gul, således at den farve, der frembringes ved testreaktionen, blandes med baggrundsfarven til frembringelse af de forskellige nuancer svarende til koncentrationen af prøvebestanddelen. 25 Midlet fremstilles fortrinsvis ved en enkeltdypnings proces. Koncentrationerne af reagenser anvendt ved dypningen varierer fra ca. 10 ^ mM op til en mættet opløsning. Mest generelt anvendelig til 4-amino-phenazonen er en koncentration på ca. 0,2 mM. Peroxidasekoncentrationen er fra 0,1 30 mg/dl til 20 mg/dl i dyppeopløsningen. De opløsningsmidler, der anvendes til fremstilling af imprægneringsopløsningerne, kan være vand, fysiologiske opløsninger, organiske opløsningsmidler eller kombinationer deraf.
Testmidlet anvendes med fordel ved momentan dyp-35 ning deraf i en testprøve eller ved indføring af testprøven på eller i bærermatrixen, hvorved der fremkommer en detek-terbar farveændring, når analyten er til stede.
DK 163672 B
9
Testmidlet kan anvendes på samme måde ved testning af prøver af plasma, serum eller andre blodvæsker. Når der testes helblod foretrækkes det dog, at en dråbe blod bringes i kontakt med overfladen af testmidlet.
5 De følgende eksempler tjener til illustration af opfindelsen.
Eksempel 1
Bestemmelse af cholesterol med cholesteroloxidase/cholesterol- 10 esterhydrolase og peroxidase/phenol/4-amino-phenazon._
Der fremstilles testopløsninger ifølge den kendte teknik og ifølge opfindelsen, og disse sammenlignes med hensyn til deres resistens mod de interfererende virkninger af bilirubin ved bestemmelsen af cholesterol.
15 Der fremstilles testopløsninger ifølge den kendte teknik med følgende sammensætning:
Phosphatpuffer 100 mmol/liter, pH = 7,7
Cholesterolester-hydrolase 80 I.U./liter 20 Cholesterol-oxidase 40 I.U./liter
Peroxidase 500 I.U./liter 4-Aminophenazon 0,5 mmol/liter
Phenol 10 mmol/liter
Natriumcholat 3 mmol/liter 25 Triton X-100 0,5% vol./vol. (v/v).
Testopløsninger indeholdende materialet ifølge opfindelsen fremstilles nøjagtigt som ovenfor, men med tilsætning af 12 mmol/liter kaliumferrocyanid, K^Fe(CN)g.
En 2,5 ml aliquot af testopløsningen ifølge den 30 kendte teknik pipetteres til hvert af en første gruppe reagensglas, og en 2,5 ml aliquot af opløsningen af materialet ifølge opfindelsen pipetteres til hvert af en anden gruppe reagensglas. En parallel serie prøver indføres i reagensglassene i hver gruppe.
35 En vandig cholesterolopløsning fremstilles med en koncentration på 200 mg/dl, og opløsningen opdeles i aliquoter. Der tilsættes bilirubinmængder således, at der fås choleste-
DK 163672 B
10 o rolprøver med bilirubinkoncentrationer på henholdsvis 1,3, 3,8, 6,3, 9,8, 12,0, 13,5 og 18,3 mg/dl. En anden choleste-rolopløsning og arbejdsopløsningen anvendes til kalibrering af en blindværdi.
5 Hver gruppe reagensglas injiceres med en parallel serie 0,02 ml aliquotprøver indeholdende de forskellige bilirubinkoncentrationer, og reaktionen i disse reagensglas får lov at forløbe i 15 minutter ved 37°C. Absorbansaflæsningerne udføres, og cholesterolkoncentrationerne beregnes.
10 Resultaterne, der viser mængden af cholesterol iagt taget ved forsøgene under anvendelse af den kendte teknik og testsystemerne ifølge opfindelsen ved de forskellige bilirubin--koncentrationer, fremgår af tabel I.
15 Tabel I
Cholesterol iagttaget (procent udbytte)
Bilirubin med uden (mg/dl) K4Fe(CN)g K4Fe(CN)g 20 1.3 100,0 - 1,7 100,0 - 1,7 3,8 99,2 97,1 6.3 98,3 93,0 9,8. 97,8 87,1 25 12,0 97,9 85,4 13,5 97,6 85,8 18,3 97,9 80,5
Den kemiske interferens ved cholesterol-testen 30 i fraværelse af ferrooyanid er bemærkelsesværdig. I nærværelse af ferrocyanid er interferensen imidlertid så kraftigt formindsket, at den for praktiske formål kan betragtes som negligérbar op til i det mindste 18 mg bilirubin pr. dl.
35
DK 163672 B
11 o
Eksempel 2
Testmiddel til bestemmelse af cholesterol i serum med chole-steroloxidase og peroxidase/3,5-dichlor-2-hydroxy-benzensulfon-syre/4-amino-phenazon.
Der fremstilles testmidler indeholdende materialer ifølge den kendte teknik og ifølge den foreliggende opfindelse, og disse sammenlignes med hensyn til deres resistens mod interfererende virkninger af bilirubin ved testning for nærværelsen af cholesterol i serum.
10
En imprægneringsopløsning ifølge den kendte teknik fremstilles med følgende sammensætning:
Phosphatpuffer 100 mmol/liter, pH = 7,7
Cholesterolester-hydro- -240 I.U./liter lase 15 Cholesterol-oxidase 120 I.U./liter
Peroxidase 2.500 I.U./liter 4-Aminophenazon 0,5 mmol/liter 3,5-dichlor-2-hydroxy- benzensulfonsyre 10 mmol/liter 20 Natriumcholat 3 mmol/liter
Triton X-100 0,5% vol./vol. (v/v)'.
Imprægneringsopløsninger indeholdende et materiale ifølge opfindelsen fremstilles nøjagtigt som ovenfor, men med tilsætning af 20 yumol/liter kaliumferrocyanid, K^Fe(CN)g.
25 Ark af Whatman No. 17 filtrerpapir (Whatman, Inc.,
Clifton, N.J.) imprægneres til mætning med imprægneringsopløsningerne og tørres ved 60°C. Disse ark indeholdende den tørrede remanens fra imprægneringsopløsningerne udskæres i stykker på 2,5 x 2,5 mm til dannelse af testmid- 30 ler, som derpå beklædes med en bagklædning af dobbeltsidet adhæsivt tape og derved fikseres til plasthåndgreb.
Der tilvejebringes serumprøver, som slås sammen og testes for indhold af cholesterol (der er omkring 200 mg/dl) og bilirubin. Det samlede serum fortyndes derpå med 10 rumfang 35 destilleret vand. Bilirubinet sættes til det fortyndede, sammenbragte serum op til en koncentration på 20 mg/dl, hvorved der fås en testopløsning. Denne testopløsning opdeles i aliquoter.
DK 163672 B
12
O
Testmidlerne ifølge opfindelsen neddyppes momentant i én aliquot af cholesterol-testopløsningen, og testmidler ifølge den kendte teknik neddyppes momentant i en anden aliquot deraf. Testmidlerne undersøges visuelt for farveændrin-5 ger efter ca. 10 minutter.
Midler fremstillet ifølge opfindelsen viser en distinkt ændring i farve, hvilket indicerer tilstedeværelsen af cholesterol, medens testmidler indeholdende materialet ifølge den kendte teknik ikke ændrer farve og dermed viser en falsk negativ 10 reaktion for cholesterol.
15 20 25 1 35
Claims (7)
1. Materiale til bestemmelse af cholesterol i en flydende prøve, hvilket materiale omfatter a) reagensmidler, der giver respons på nærværelsen 5 af cholesterol i prøven, b) en phenol eller naphthol og c) 4-amino-phenazon, kendetegnet ved, at reagensmidlerne omfatter en ferrocyanidion.
2. Materiale ifølge krav 1, kendetegnet ved, at phenolen er en usubstitueret phenol.
3. Materiale ifølge krav l, kendetegnet ved, at phenolen er 3,5-dichlor-2-hydroxy-benzensulfonsyre.
4. Materiale ifølge ethvert af kravene 1-3, k e n -15 detegnet ved, at det indeholder natriumferrocyanid.
5. Materiale ifølge ethvert af kravene 1-3, kendetegnet ved, at det indeholder kaliumferrocyanid.
6. Testmiddel, kendetegnet ved, at det omfatter en bærer inkorporeret med et materiale ifølge et- 20 hvert af kravene 1-5.
7. Fremgangsmåde til fremstilling af et testmiddel til bestemmelse af cholesterol, kendetegnet ved, at en bærer inkorporeres med et materiale ifølge ethvert af kravene 1-5. 25 1 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US13353380 | 1980-03-24 | ||
| US06/133,533 US4291121A (en) | 1979-04-13 | 1980-03-24 | Bilirubin-resistant determination of uric acid and cholesterol |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK130881A DK130881A (da) | 1981-09-25 |
| DK163672B true DK163672B (da) | 1992-03-23 |
| DK163672C DK163672C (da) | 1992-08-17 |
Family
ID=22459065
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK130881A DK163672C (da) | 1980-03-24 | 1981-03-23 | Materiale til bestemmelse af cholesterol i en flydende proeve, testmiddel til anvendelse ved bestemmelsen og fremgangsmaade til fremstilling af dette middel |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4291121A (da) |
| EP (1) | EP0036563B1 (da) |
| JP (1) | JPS56155852A (da) |
| AU (1) | AU523916B2 (da) |
| CA (1) | CA1144050A (da) |
| DE (1) | DE3162461D1 (da) |
| DK (1) | DK163672C (da) |
| FI (1) | FI77896C (da) |
| GR (1) | GR74834B (da) |
| NO (1) | NO810809L (da) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1130252B (it) * | 1980-02-04 | 1986-06-11 | Elvi Spa | Metodo per l'eliminazione dell'interferenza da biliribuna nel dosaggio di perossido di idrigeno mediante una reazione di trinder modificata |
| JPS5783287A (en) * | 1980-11-14 | 1982-05-25 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Elimination of hydrogen peroxide |
| DE3124590A1 (de) * | 1981-06-23 | 1983-01-27 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Stabilisiertes reagenz zum nachweis von h(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)o(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts) |
| DE3249743C2 (da) * | 1982-02-18 | 1990-10-04 | Amano Pharmaceutical Co., Ltd., Nagoya, Aichi, Jp | |
| US4427770A (en) * | 1982-06-14 | 1984-01-24 | Miles Laboratories, Inc. | High glucose-determining analytical element |
| JPH0614879B2 (ja) * | 1984-04-27 | 1994-03-02 | 株式会社ヤトロン | ビリルビンの干渉を回避して行なう生体成分の測定方法 |
| US4680259A (en) * | 1984-09-26 | 1987-07-14 | Eastman Kodak Company | Analytical element and method for colorimetric determination of total cholesterol |
| ZA862671B (en) * | 1985-05-06 | 1986-11-26 | Richardson Vicks Inc | Diagnostic saliva test for detecting periodontal disease |
| JPS6211167A (ja) * | 1985-07-09 | 1987-01-20 | Fuji Photo Film Co Ltd | コレステロ−ル分析用多層分析要素 |
| JPS6348457A (ja) * | 1986-08-19 | 1988-03-01 | Fuji Photo Film Co Ltd | 乾式多層分析要素 |
| US4971918A (en) * | 1988-05-25 | 1990-11-20 | Boehringer Mannheim Corporation | Reducible indicator compositions containing pyrogallol derivatives |
| DE69121456T2 (de) * | 1990-05-09 | 1996-12-19 | Hoffmann La Roche | Stabilisiertes Harnsäurereagens |
| EP1030931A4 (en) * | 1998-08-06 | 2004-05-26 | Syntron Biores Inc | URIC ACID TEST DEVICE HAVING A STABILIZED URICASE REACTIVE COMPOSITION |
| US6753159B1 (en) * | 1998-08-06 | 2004-06-22 | Jin Po Lee | Uric acid assay device with stabilized uricase reagent composition |
| US20130345614A1 (en) | 2012-06-22 | 2013-12-26 | Viraj P. Mane | Device for extracorporeal photo-isomerization for hyperbilirubinemia, and method thereof |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USRE29498E (en) | 1972-05-12 | 1977-12-20 | Istituto Sieroterapico e Vaccinogeno Toscano "SCLAVO", S.p.A. | Process for the enzymatic determination of glucose with a glucose-oxydazed/peroxidazed enzyme system |
| IT986838B (it) * | 1972-05-12 | 1975-01-30 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Complesso di reagenti per la deter minazione enzimatica del glucosio sistema glucosio ossidasi perossi dasi con metodo manuale e automati co con lettura a termine o in cinetica |
| US4186251A (en) * | 1973-03-01 | 1980-01-29 | Miles Laboratories, Inc. | Composition and method for determination of cholesterol |
| US4095948A (en) * | 1973-10-19 | 1978-06-20 | Hoffmann-La Roche Inc. | Determination of uric acid |
| US4184921A (en) * | 1976-03-25 | 1980-01-22 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process and reagent for determining cholesterol |
| JPS5425892A (en) * | 1977-07-29 | 1979-02-27 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Quantitative determination of hydrogen peroxide |
| US4247631A (en) * | 1979-01-31 | 1981-01-27 | Millipore Corporation | Reagent and method for the analytic determination of hydrogen peroxide |
| CA1134247A (en) * | 1979-04-13 | 1982-10-26 | Giovanni Berti | Bilirubin-resistant determination of uric acid |
| FR2586744B1 (fr) * | 1985-09-05 | 1987-12-04 | Mecanismes Comp Ind De | Serrure a ouverture et fermeture electriques, notamment pour portieres de vehicules automobiles |
-
1980
- 1980-03-24 US US06/133,533 patent/US4291121A/en not_active Expired - Lifetime
-
1981
- 1981-01-29 CA CA000369625A patent/CA1144050A/en not_active Expired
- 1981-03-10 NO NO810809A patent/NO810809L/no unknown
- 1981-03-11 EP EP81101784A patent/EP0036563B1/en not_active Expired
- 1981-03-11 DE DE8181101784T patent/DE3162461D1/de not_active Expired
- 1981-03-20 AU AU68595/81A patent/AU523916B2/en not_active Expired
- 1981-03-20 FI FI810869A patent/FI77896C/fi not_active IP Right Cessation
- 1981-03-20 GR GR64461A patent/GR74834B/el unknown
- 1981-03-23 JP JP4052481A patent/JPS56155852A/ja active Granted
- 1981-03-23 DK DK130881A patent/DK163672C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GR74834B (da) | 1984-07-12 |
| US4291121A (en) | 1981-09-22 |
| JPS56155852A (en) | 1981-12-02 |
| AU523916B2 (en) | 1982-08-19 |
| AU6859581A (en) | 1981-10-22 |
| JPS6359466B2 (da) | 1988-11-18 |
| EP0036563A1 (en) | 1981-09-30 |
| DK163672C (da) | 1992-08-17 |
| NO810809L (no) | 1981-09-25 |
| DE3162461D1 (en) | 1984-04-12 |
| CA1144050A (en) | 1983-04-05 |
| FI77896B (fi) | 1989-01-31 |
| EP0036563B1 (en) | 1984-03-07 |
| DK130881A (da) | 1981-09-25 |
| FI77896C (fi) | 1989-05-10 |
| FI810869L (fi) | 1981-09-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1084393A (en) | Process for the determination of substrates or enzyme activities | |
| US4391905A (en) | System for the determination of glucose in fluids | |
| US5334508A (en) | Process and agent for the colorimetric determination of an analyte by means of enzymatic oxidation | |
| US4391906A (en) | System for the determination of glucose in fluids | |
| US4340669A (en) | System for the determination of glucose in fluids | |
| US4361648A (en) | Color fixed chromogenic analytical element | |
| US4211845A (en) | Glucose indicator and method | |
| US4578245A (en) | Multilayer analytical element | |
| US4517287A (en) | Method and reagent for the enzymatic determination of enzyme substrates | |
| DK163672B (da) | Materiale til bestemmelse af cholesterol i en flydende proeve, testmiddel til anvendelse ved bestemmelsen og fremgangsmaade til fremstilling af dette middel | |
| CA1141637A (en) | Cofactor indicator compositions | |
| JPS5948099A (ja) | アスコルビン酸塩耐性広濃度域用グルコ−ス試験組成物、試験具および試験方法 | |
| US4273868A (en) | Color stable glucose test | |
| US4900682A (en) | Method and reagent for the determination of peracids | |
| DK167197B1 (da) | Middel og fremgangsmaade til bilirubinresistent bestemmelse af urinsyre | |
| CA2129117C (en) | Inhibition of catalase activity in biological fluids | |
| US4394444A (en) | Cofactor indicator compositions | |
| US5312759A (en) | Method for measurement of fructosamines using 1,2-quinones | |
| EP0101945A1 (en) | Multilayer analytical element | |
| US4695539A (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| US4409328A (en) | Method and reagent for the determination of glycerol | |
| JPS60210998A (ja) | 無機リン酸塩の酵素学的測定用試験組成物、試験具及び試験方法 | |
| NO117789B (da) | ||
| JPS63201567A (ja) | 生体試料中の還元物質の除去法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed | ||
| PUP | Patent expired |