DK161198B

DK161198B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af substituerede omega-aroylpropionyl-l-proliner

Info

Publication number: DK161198B
Application number: DK369079A
Authority: DK
Inventors: Francis Joseph Mcevoy; Jay Donald Albright
Original assignee: American Cyanamid Co
Priority date: 1978-09-05
Filing date: 1979-09-04
Publication date: 1991-06-10
Also published as: ZA793536B; IL57802A0; DE2934592C2; DD147236A5; NZ190995A; DE2934592A1; DK161198C; IL57802A; NO155240C; PT70025A; IE791682L; NO155240B; DK369079A; AR230624A1; ES483846A1; FI75152C; AR229953A1; GR73190B; EP0010347A1; NO792849L

Description

DK 161198 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte substituerede ω-aroylpropionyl-L-proliner eller estere deraf, som har nedenstående almene formel 5 0 0 _ II * II / ARYL-C-CH-CH-C-N (I) I I \ 10 R3 R4 J- 0=C-0-R5.

hvor R3 er mercapto, benzoylthio eller alkanoylthio med 2-4 carbonatomer, R4 er hydrogen eller alkyl med op til 15 4 carbonatomer, R5 er hydrogen eller alkyl med op til 4 carbonatomer; og ARYL er 1-naphthyl, 2-naphthyl, 4-bipheny-lyl, 5-indanyl, 4-indanyl eller en gruppe med formlen 20 O’ (R7) ' m hvor R6 er hydrogen, fluor, chlor, brom, trifluormethyl, 25 halogenphenoxy eller alkyl med op til 4 carbonatomer, R7 er chlor, fluor, brom, alkyl med op til 4 carbonatomer eller alkoxy med op til 4 carbonatomer, og R6 og R7 sidder i m-eller p-stilling, og m er 0, 1 eller 2, herunder diastereo-mere former, eller kationiske salte deraf, når R5 er hydro-30 gen.

Den her omhandlede analogifremgangsmåde er karakteriseret ved det i den kendetegnende del af kravet angivne.

De her omhandlede forbindelser med formlen (I) har et asymmetrisk carbonatom (vist med asterisk) og eksisterer 35 således i diastereoisomere former.

De her omhandlede substituerede ω-aroylpropionyl-L--proliner med formel (I) fås sædvanligvis som hvide til gule, krystallinske materialer med karakteristiske smel-

DK 161198B

f 2 tepunkter og absorptionsspektra eller som hvide eller gule, glasagtige materialer med karakteristiske absorptionsspektra.

De er generelt opløselige i mange organiske opløsningsmidler som f.eks. alkanoler, tetrahydrofuran, dioxan, chloroform 5 og lignende.

Fra DK fremlæggelsesskrift nr. 157.487 kendes forbindelser med lignende struktur, bl.a. forbindelsen captopril, som er l-(3-mercapto-2-methyl-l-oxypropyl)-L-prolin (dvs. i formel (I) er ARYL-CO erstattet af H, R3 betyder mercapto, 10 R4 betyder methyl, og R5 er H), og som har blodtrykssænkende virkning. Forbindelserne med formel (I) har dog en kraftigere virkning end captopril, således som det fremgår af nedenstående tabel II.

Angiotensin II er et kraftigt vasokonstriktormiddel, 15 som har været anført som hovedårsagen til fremkaldelse af renovaskulær hypertension. Angiotensin II dannes ud fra angiotensin I ved indvirkningen af angiotensinomdannelses-enzymet. Angiotensin I er et biologisk indifferent decapep-tid, som fraspalter blodproteinet angiotensinogen ved ind-20 virkningen af enzymet renin, jvf. Oparil et al., New England J. of Med., 291, 389-457 (1974). Angiotensinogen og renin er også biologisk indifferente. Angiotensinogenomdannelses-enzymet er også ansvarligt for inaktiveringen af bradykinin, et vasodilataterende middel, som har været nævnt i forbin-25 delse med reguleringen af renalfunktionen, jvf. Erdos, Circulation Research 36, 247 (1975). Midler, som inhiberer angiotensinomdannelsesenzymet, kan derfor modvirke pressor-virkningen af angiotensin I, da denne virkning kun skyldes dets omdannelse til angiotensin II. Disse midler kan anvendes 30 terapeutisk ved behandlingen af former for renovaskulær og malign hypertension samt andre former for angiotensinafhængig hypertension, jvf. Gavras et al., New England J. of Med.

291, 817 (1974).

De her omhandlede forbindelser med formel (I) in-35 hiberer angiotensinomdannelsesenzymet og inhiberer således omdannelsen af angiotensin I til angiotensin II, og forbin-

DK 161198 B

3 delserne kan derfor anvendes til at nedsætte hypertension, især angiotensinrelateret hypertension hos forskellige pattedyrarter. De her omhandlede forbindelsers virkning som hypotensive midler konstateres ved to metoder, ved hvilke 5 forbindelsernes evne til at virke som inhibitorer for an-giotensinomdannelsesenzymet måles, nemlig ved en spektrofo-tometrisk test på forbindelserne in vitro og ved måling af forbindelsernes blodtrykssænkende virkning i rotter, som er gjort renalhypertensive ved underbinding af aorta.

10

Spektrofotometrisk test på inhibitorer for anaiotensionsom-dannelsesenzymet.

Virkningen in vitro til inhibering af angiotensinom-dannelsesenzymet (ACE) måles ved fremgangsmåden ifølge D.W.

15 Cushman og H.S. Cheung, Biochem. Pharmacol. 20, 1637-1648 (1971), ved anvendelse af benzoyl-glycyl-histidyl-leucin som substrat. Reaktionsblandingen består af 50 ml kaliumphosphat (500 mmol, pH 10,2), 30 ml (2500 mmol) natriumchlorid, 25 ml (50 mmol) substrat, 30-50 ml af råekstrakten af ACE, 10 20 ml (2,5 mmol) af forsøgsforbindelsen eller bærestof og en passende mængde destilleret vand, således at der fås et samlet volumen på 250 ml. Denne reaktionsblanding inkuberes i 30 minutter ved 37°C, hvorefter reaktionen bringes til ophør ved tilsætning af 250 ml IN saltsyre. Hippursyren 25 ekstraheres derpå med 1,5 ml ethylacetat ved hvirvelblanding i 15 sekunder. Efter centrifugering pipetteres 1 ml af ethyl-acetatlaget over i et andet reagensglas og inddampes til tørhed. Den ekstraherede hippursyre opløses derpå i 1 ml vand, og mængden af denne syre måles ved dens absorbans ved 30 228 nm. ACE ekstraheres fra kaninlungeacetonepulver (Pel-

Freez, Biol. Inc.) ved blanding af 5 g af pulveret i 50 ml phosphatpuffer (50 mmol, pH 8,3) og derpå centrifugering ved 40.000 g i 30 minutter. Den ovenstående væske holdes derpå ved 5“C og anvendes som enzymkilde. Virkningen af 35 ACE-inhibitoren beregnes som procent inhibering af ACE-ak-tiviteten sammenlignet med kontrolværdien for den pågældende

DK 161198 B

4 prøve. Der optegnes derpå en detaljeret dosis-respons-in-hiberingskurve til bestemmelse af IC50-værdien, som kan defineres som den molære koncentration af en forbindelse, som vil inhibere ACE-aktiviteten med 50 procent. Eksempler 5 på de her omhandlede forbindelser og deres tilsvarende IC5q-værdier bestemt ved den ovennævnte fremgangsmåde er anført i den nedenstående tabel I.

Tabel I

10 Inhibitorer for angiotensinomdannelsesenzymet.

Forbindelse IC50 (10“7M) 1-(3-Acetylthio-3-benzoyl-2-methylpropio-15 nyl)-L-prolin 1,47 1-(3-Acetylthio-3-benzoylpropionyl)-L--prolin 4,55 1-(3-Benzoylthio-3-benzoylpropionyl)-L-prolin 5,13 20 1-[3-Acetylthio-3-(4-fluorbenzoyl)propio- nyl]-L-prolin 4,73 1-[3-Benzoylthio-3-(4-fluorbenzoyl)propio-nyl]-L-prolin 3,53 1-[3-(4-Brombenzoyl)-3-thiopropionyl)-L-25 -prolin 3,52 1-[3-Acetylthio-3-(4-brombenzoyl)propionyl]--L-prolin 1,31 1-[3-(4-Brombenzoyl)-3-benzoylthiopropionyl]--L-prolin 1,15 30 l-[3-Acetylthio-3-(4-tert.-butylbenzoyl)- propionyl]-L-prolin 1,83 1-[3-Acetylthio-3-(3-trifluormethylbenzoyl)--propionyl]-L-prolin 10,7 1-[3-Acetylthio-3-(3-£luor-4-methoxy-3 5 benzoyl)-propionyl]-L-prolin 6,0 l-[3-(Acetylthio-3-(3-fluorbenzoyl)- -2-methylpropionyl]-L-prolin 0,617

DK 161198 B

5

Tabel I (fortsat)

Forbindelse IC50 (10“7Μ) 1-[3-Acetylthio-3-(4-biphenylylcarbo-5 nyl)propionyl]-L-prolin 0,86 l-{3-Acetylthio-3-[4-(4-chlorphenoxy)- benzoyl]-propionyl}-L-prolin 3,58 l-[3-Acetylthio-3-(4-chlorbenzoyl)-2- -methylpropionyl]-L-prolin 3,35 10 l-[3-Acetylthio-3-(3-fluorbenzoyl)- propionyl]-L-prolin 0,316 1-[3-Acetylthio-3-(4-chlorbenz oy1)- propionyl]-L-prolin 0,826 1-[3-Benzoylthio-3-(3-fluorbenzoyl)-15 propionyl]-L-prolin 17,6 [S-(R*,S*)]-1-[3-(Acetylthio)-3-(3--fluorbenzoyl-2-methylpropionyl]-L- -prolin 0,37 [S-(R*,R*)]-1-[3-Acetylthio)-3-(3-20 -fluorbenzoyl)-2-methylpropionyl]-L- -prolin 2,33 [R-(R*,R*)]-1-[3-(Acetylthio)-3-(3--fluorbenzoyl)-2-methylpropionyl]-L--prolin 160 25 [R-(R*,S*)]-l-[3-(Acetylthio)-3-(3- -fluorbenzoyl)-2-methylpropionyl]-L--prolin 2800 1-[3-Acetylthio-3-(2-naphthoyl)-propionyl] -L-prolin 1,3 30 1-[3-(Acetylthio)-3-(5-indanylcar- bonyl)propionyl]-L-prolin 2,18 [S-(R*,S*)]-l-[3-Acetylthio)-3-(4--brombenzoyl)-2-methylpropionyl]- -L-prolin 0,985 35 [S-(R*,R*)]-l-[3-Acetylthio)-3-(4- -brombenzoyl)-2-methylpropionyl]-L- -prolin 1,33

DK 161198 B

6

Tabel I (fortsat)

Forbindelse IC50 (10“7M) [S-(R*, S*)]-1-[3-(Acetylthio)-3-ben-5 zoyl-2-methylpropionyl)-L-prolin 0,515 [S-(R*#R*)]-1-[3-(Acetylthio)-3-ben- zoyl-2-methylpropionyl]-L-prolin 0,78 Måling af arterieblodtrvkket i rotter, som er gjort renal-10 hypertensive ved underbinding af aorta.

Sprague-Dawley normotensive hanrotter, som vejer 300-325 g (Charles River Breading Lab. Inc., Wilmington,

Mass.), holdes på Purina Laboratory dyrefoder og ledningsvand ad libitum i 1-7 dage før anvendelse. Hypertension fremkaldes 15 ved fuldstændig underbinding af aorta mellem fremspringet af nyrearterierne i overensstemmelse med fremgangsmåden ifølge J.M. Rojo-Ortega og J. Genest, A Method for Production of Experimental Hypertension in Rats, i Can. J. Physiol. Pharmacol. 46, 883-885 (1968), med modifikationer af de 20 kirurgiske indgreb. Rotterne bedøves således intraperitonealt med methohexitolnatrium i en mængde på 66 mg/kg legemsvægt og lægges på deres højre side. Der lægges et snit lige under brystkassen på den venstre side. Fedtet skubbes forsigtigt tilbage med en vatpind for at blotlægge den venstre nyre.

25 Nyren holdes forsigtigt mellem tommelfingeren og pegefingeren uden for krophulen. Aorta underbindes fuldstændigt mellem fremspringet af nyrearterierne med en silkesutur nr. -000.

Man skal sørge for at undgå okklusion af den højre nyrearterie. Såret lukkes derpå i to lag ved anvendelse af en 4-0 30 polyglycolsyresutur på musklen og sårklemmer på huden. Såret sprøjtes derefter med thimerosalaerosol nr. 3. Efter dette indgreb anbringes rotterne igen i deres bure og forsynes med Purina Laboratory foder og vand ad libitum. 6 Dage efter indgrebet fastgøres rotterne, som er ved bevidsthed, på 35 rotteborde med elastikbånd. Halsområdet bedøves lokalt ved subcutan infiltration af 2% lidocain. En kanyle opsættes i trachea, og rotterne respirerer spontant, halspulsåren iso-

DK 161198 B

7 leres, og der opsættes et polyamidkateter (indre diameter 0,38 mm, ydre diameter 0,76 mm), som forbindes med en Statham P23Gb tryktransducer - Gold Brush recorder (Model 2400) til måling af blodtrykket. Forsøgsforbindelserne opløses i en 5 lille mængde ethanol og fortyndes derpå den til ønskede koncentration med saltopløsning. Opløsningen indeholder forsøgsforbindelsen indgives oralt via mavesonde, og der foretages et parallelt sammenligningsforsøg med den kendte forbindelse captopril og et kontrolforsøg med bærestof alene.

10 Repræsentative eksempler på de her omhandlede forbindelser er aktive, når de testes ved denne fremgangsmåde. Resultater fremgår af nedenstående tabel II.

DK 161198 B

8 nncnnnnncooacvjrsjnncjnn t^cs.t^f^f^ts.t^t^vot^t^r^cor'covo I I I I I I I I I I I I I I I I H oooooooooooooooo

O HHHHHHHHHHHHHHHH

g

v C

• tncocnmc\iHincor''Oroinr^minio M in inHt^ininmHcooomvoHmrit"

p H ^in^COCOHHHHVØCMCOCOHCOH

-P

0 54 9-1 a) > O O Φ Λ <D Λ dl ΐ Λ •H NhOlOOr'^lfllOONO'Nlil'Om 01 '^in©oHincoojt^coH^mH'j3n

Q) COHVOVOCNinvOcOVOLOlOC^^mr^CN

4-1 HH

u <D 54 54 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 o i cd ω > oi 4-i g int^r-'OOcominnooocor-'t'-'Ln jS ΑίΉ-H Nvovoino<ncoc'acoooin'd,©vor^ 0) >iQ)4J - - - - - >· >-........- >4 54 incNM<©fNio^©OHwoin©Hn

4-1 «—*. m CM H HHHH H CM C*") H

C Ό &>

0 W

- H

<1> Λ g C g Ό Λ Λ ΌϋϋΦΛΛΟΛΌ Ό on'—- ©>©HHinc4H©ininoHonco MC -H ænneo©©vonm'4,H©co^oico 1-1 Λ 4-> (ΰ inhiiihnifi'iifl'iH'iO^^^n

, >4 -H HH

da) C 0n <D

O Ό 01 C g +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1

•S C g -Η -H

Sø 0) Π 4-> inowoomooor^inoomn ^ i C ,¾ njor-ocornooinot^oonm ø C ø m -.....- - -......

4-i a) S * ©HincMTOæoor~c4'4,'d,>r~r'H

Μ (DUO H HH HHC'lHHCMCMHHHrf 0 (0

01 H

O (0 Λ 4-1 M — c>.c 0 <d — 'ίΠ'ίηκιυΐΡΐ^Όη'ίηΐΜΰω'ί

C

•H

C

*

U

ri 01 tP

> -Η x .

01 \ O 9-1 > o Cr> · oooooooooooooooo

•H Q g Οι CMCMOJCMOlCMCMCMCMCMCMCMCMCMCMCM

01 c a) 4-> 54 o a) o g > o cQfqpQfQpqcqcqcQcQcQ ω m m m m ffi oi + + + + + + + + + + + + + + + «5 54 · I 94 54

C C

•H 0) Λ W · 54 H 01 00),¾ r)'a,invDr-OH’5i,incooiMrO'4,ino h ø O ηηηηηΊ'^^'ί'ί^ιηιηιηιηιο

DK 161198 B

9 r-1 Ή

<»·ν ^ -—* · -P

*3· oj ro 03 03 οι σι H4j wv^www-ww Μ φ co co co oo co 5¾

I I I I I I I OG

h ooooooo *r?

O HHHHHHH · -P

g ft P

^ C . -H <P

o*«-' σι o ο* io co co vo +> , <5 in »s· co h co co h in tn P * tø n ^ ·*>.>.·. i «. O) d) “ i—i η in t^ vo σι h 03 Η l -P -P 0ϋ Ή CO Ό tn <d c © ·ρ +> 0) G Λ

G g 0) P

QJOQJ'dO d) *P <D O

to r*» rorooO-H Ό +> 5 *P

o H 03 ro o co ^ G H tn - «. ^ - n co 4-> m = t n rom Γοεοιη*" ω +· § H CO 03 o Φ to

4-> Λ P

P P +1+1 +1 +1 +1 +1 0) ft ·|° O

I d) Q) +1 p <1) P ^ tø-PS'+t" ro r- o r-· P _ ό >;ΐΗ·ιΗΗΗ CO 10 O VO in (0 C c

>,0)+) - Λ Q)H0J

p f" CO Η ΙΟ O H CO G θ' Ό

+) —wOJ H 03 I Γ0 03 CO 03 I C “G

TO ·«. ·Η rH

OM <1) G o 0) H cn X O c

Se h c >1 ®

g <D Ό Ό 0) O O Φ d> W H pH

O«'— Η'£>0'0*<0θσΐ·+ Cn in Øl (C

•η voiniDcoininHH *p 5,

Γ-\ W.^«*.K*.*.**V £> ·*· 0) *P

-P no piin-i^hOcoN Ή · 7* tø •H (d ft >1 >

c 01 <D · Λ *H

tn g g +i +i +i +i +i +i +i+i p ‘H i?

g -ri -ri tø . tø ’S

d)C+> cooo^oovoco ·ΰ tø >i G

^owHinmvoco G 'H · d c C m ***«.·.».*.*· (d tn —s o tø d) ftj ^ ojnf't'Cioooo) +3 o ή ft ^ tn

Ø in O 03 03 H 03 03 H 03 tø Ό -P O' 7J

P rH G 0) +1 G ft g Ή &1

tø O G S

H H +J H in P

Λ G G ft * © O

4J +) GidOH+4 G >, G rH TiOftii <Cfrtw ^10100-0*031010 <D G w · O >ί

Ό 0) rH 4-1 P

Ό d) O rri +3 •h w tn G <d Ό g 0) rH (0 tn o

> <D Μ H

ιη03 P -h rø +> * Λ

“is . tø £ β ® M

in\0 Ό *rl -Pi O O' · OOOOOOO P G Λ H 01 tn Q g ft [\| ri (Ί O) ΟΙ N (O I fl) ·Ρ P S O > •H O i i Ό

>0 P <4-1 rri O

p d) in *· *p * p « g cn o in -p

S > -P c ~ >i TJ

e 4J -P Ή P

η PQ <1) .Cd)« uj ri- g . . . h in cn tn Ό > H rfjcQrfj<m.<ii >inojHo >--Htng •POOOOrHrH (d B P* O* *·*“· *· CB ·Ρ GOOOO P d) Ό pH +3 (rt <d d) g G B [d

Li . m v v v v +> S G tn iiuu h d) midpod)

CG o QftftftftWWØrHM

“P d) P

sx t n · +3 p rH tn ο» β o m v co σι Η in O O — (POd) in in vo \ocoW (ΰΛϋΌΦ+ΐϊηΐ! ·ρ

DK 161198B

10

Af tabel II vil det specielt ses, at forbindelserne ifølge nedenstående eksempler 44, 49, 52 og 61 (både isomer A og isomer B) i en dosis på 20 mg/kg bevirker samme blodtrykssænkning som captopril i en dosis på 30 mg/kg. Tabellen 5 viser desuden, at en lang række af de øvrige forbindelser må forventes at have en virkning, som mindst er lige så stor som virkningen af captopril, hvis de anvendes i en samme dosis som dette (30 mg/kg).

De her omhandlede forbindelser har således vist sig 10 at være yderst anvendelige til sænkning af forhøjet blodtryk i pattedyr, når de indgives i mængder på fra ca. 1 mg til ca. 1000 mg/kg legemsvægt pr. dag. En foretrukken dosis til opnåelse af optimale resultater vil være på fra ca. 10 til ca. 300 mg/kg legemsvægt pr. dag. Dosismængden kan regu-15 leres til opnåelse af det maksimale terapeutiske respons. Eksempelvis kan der indgives flere enkeltdoser dagligt, eller dosis kan reduceres proportionalt med de krav, som den terapeutiske situation stiller. De aktive forbindelser indgives fortrinsvis oralt, men kan indgives på en vilkårlig 20 hensigtsmæssig måde, f.eks. intravenøst, intramuskulært eller subcutant.

Præparater, som har den ønskede klarhed, stabilitet og anvendelighed til parenteral indgift, fås ved at opløse eller suspendere den aktive forbindelse i et bærestof be-25 stående af en polyvalent aliphatisk alkohol eller blandinger deraf. Særligt tilfredsstillende er glycerol, propylenglycol og polyethylenglycoler. Polyethylenglycolerne består af en blanding af ikke-flygtige, normalt flydende polyethylenglycoler, som er opløselige i både vand og organiske væsker, 30 og som har molekylvægte på fra ca. 200 til 1500. Selv om mængden af den aktive forbindelse opløst eller suspenderet i det ovennævnte bærestof kan variere, er mængden af aktivt stof i præparatet sådan, at der opnås en dosis i området fra ca. 10 til 500 mg af forbindelsen. Selv om der kan an-35 vendes forskellige blandinger af de førnævnte ikke-flygtige polyethylenglycoler, anvendes fortrinsvis en blanding, som

DK 161198 B

11 har en gennemsnitlig molekylvægt på fra ca. 200 til ca. 400.

Foruden den aktive forbindelse kan de parenterale opløsninger eller suspensioner også indeholde forskellige konserveringsmidler, som kan anvendes for at forhindre bak-5 terie- og svampeforurening. Som eksempler på anvendelige konserveringsmidler til dette formål kan nævnes myristyl-Ύ--picoliniumchlorid, benzalkoniumchlorid, phenethylalkohol, p-chlorphenyl-a-glycerolether, methyl- og propylparabener og thiraerosal. Som en praktisk foranstaltning er det også 10 hensigtsmæssigt at anvende antioxidanter som f.eks. natrium-hydrogensulfit, natriummetahydrogensulfit og natriumformal-dehydsulfoxylat. Sædvanligvis anvendes koncentrationer af de nævnte antioxidanter på fra ca. 0,05 til ca. 0,2 procent.

De aktive forbindelser kan indgives oralt, f.eks.

15 med et indifferent fortyndingsmiddel eller med en fordøjelig spiselig bærer, eller de kan være indkapslet i hårde eller bløde gelatinekapsler eller være komprimeret til tabletter, eller de kan inkorporeres direkte med det pågældende fødeemne. Til oral terapeutisk indgift kan den aktive for-20 bindelse inkorporeres med strækkemidler og anvendes i form af tabletter, pastiller, kapsler, suspensioner, sirupper, vafler og lignende. De nævnte præparater bør indeholde mindst 0,1 procent aktiv forbindelse. Procentdelen i præparaterne kan naturligvis varieres og er hensigtsmæssigt på ca. 2-25 ca. 60 procent af enhedsvægten. Mængden af aktiv forbindelse i sådanne terapeutisk anvendelige præparater er sådan, at der opnås en passende dosis.

Tabletter, pastiller, piller, kapsler og lignende kan også indeholde følgende: et bindemiddel som f.eks. tra-30 gantgummi, akacia, majsstivelse eller gelatine, strækkemidler som f.eks. dicalciumphosphat, et desintegreringsmiddel som f.eks. majsstivelse, kartoffelstivelse eller alginsyre, et smøremiddel som f.eks. magnesiumstearat og et sødemiddel som f.eks. saccharose eller lactose eller et smagsstof som 35 f.eks. pebermynte, vintergrøntolie eller kirsebærsmagsstof.

Når dosisenhedsformen er kapsler, kan de foruden den oven-

DK 161198 B

12 nævnte type materialer indeholde en flydende bærer som f.eks. en fed olie. Forskellige andre materialer kan være til stede som overtræk eller for på anden måde at modificere den fysiske form af dosisenheden. Eksempelvis kan tabletter, piller 5 eller kapsler være overtrukket med shellak, sukker eller begge dele. En sirup eller suspension kan indeholde den aktive forbindelse, saccharose som et sødemiddel, methyl-og propylparabener som konserveringsmidler, et farvestof og et smagsstof som f.eks. kirsebær- eller appelsinsmagsstof.

10 Naturligvis bør ethvert materiale anvendt ved fremstillingen af en vilkårlig doseringsenhedsform være farmaceutisk rent og hovedsagelig ugiftig i den anvendte mængder.

Opfindelsen beskrives mere detaljeret i forbindelse med de følgende specifikke eksempler. Eksemplerne 1-31 be-15 lyser fremstillingen af udgangsmaterialer, eksemplerne 32-65 belyser fremstillingen af slutprodukter, og eksemplerne 66-68 belyser forbindelsernes anvendelse ved fremstilling af farmaceutiske præparater.

20 Eksempel 1 2-Methvl-3-(m-trifluormethvlbenzovl^-propionsvre.

Til en opløsning af 60,0 g a-(m-trifluormethylphenyl)--4-morpholinacetonitril i 200 ml tetrahydrofuran sættes 10 ml 30%'s kaliumhydroxid i ethanol, hvorpå der hurtigt til-25 sættes 22,0 ml methacrylonitril (eksoterm). Blandingen omrøres ved stuetemperatur natten over, og opløsningsmidlet fjernes. Til remanensen sættes 200 ml eddikesyre og 20 ml vand, og blandingen tilbagesvales i 2 timer. Opløsningsmidlet fjernes i vakuum, og 200 ml 6N saltsyre sættes til remanen-30 sen. Blandingen tilbagesvales i 18 timer, afkøles og ekstra-heres med dichlormethan. Dichlormethanekstrakten ledes gennem en søjle af vandholdigt magnesiumsilicat. Eluatet koncentreres i vakuum og krystalliseres fra en blanding af dichlormethan og hexan, hvorved der fås 55 g grålighvide krystaller.

35 Disse krystaller opløses i dichlomethan og ekstraheres med mættet natriumhydrogencarbonatopløsning. Den vandige ekstrakt

DK 161198 B

13 syrnes med saltsyre og ekstraheres med dichlormethan. Den organiske ekstrakt ledes gennem vandholdigt magnesiumsili-cat, og eluatet koncentreres. Remanensen krystalliseres fra en blanding af dichlormethan og hexan, hvorved der fås 5 39 g af den ønskede forbindelse i form af grålighvide kry staller med smp. 90-918C.

Eksempel 2 3-fm-Fluorbenzovl)-2-methvlpropionsvre.

10 En opløsning af 48,0 g a-(m-fluorphenyl) -4-morpholin- acetonitril i 200 ml tetrahydrofuran omsættes som beskrevet i eksempel 1, hvorved der fås 34 g af den ønskede forbindelse i form af grålighvide krystaller med smp. 192-194“C.

15 Eksempel 3 1-(3-Benzovlpropionvl)-L-prolinmethvlester.

En blanding af 3,56 g 3-benzoylpropionsyre og 3,24 g Ν,Ν-carbonyldiimidazol i 30 ml tetrahydrofuran omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter. En portion på 3,32 g L-prolin-20 methylesterhydrochlorid tilsættes, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2,5 dage. Opløsningsmidlet fjernes i vakuum.

Vand og dichlormethan sættes til remanensen, og det organiske lag isoleres, vaskes med vand og derpå med 0,1 N saltsyre og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernes i 25 vakuum, hvorved der fås 5,0 g af den ønskede forbindelse som grålighvide krystaller med smp. 66-70°C.

Eksempel 4 3-Brom-3-(p-fluorbenzoyl)-propionsvre.

30 Til en opløsning af 19,62 g 3-(p-fluorbenzoyl)-pro- pionsyre i 100 ml eddikesyre sættes 16 g brom. Blandingen omrøres i 18 timer, hvorpå opløsningsmidlet fjernes. Is og vand sættes til remanensen, og blandingen filtreres. Det faste stof vaskes med vand, hvorpå det opløses i 80 ml ace-35 tone. Opløsningen fortyndes med 400 ml hexan og inddampes ved stuetemperatur til et volumen på 125 ml. Der tilsættes

DK 161198 B

14 100 ml hexan, og blandingen filtreres, hvorved der fås 24,6 g af den ønskede forbindelse i form af gulbrune krystaller med smp. 131-135°C.

5 Eksempel 5 2-Methvl-3-(benzoyl)-propionsvre.

Til en opløsning af 40,4 g a-(phenyl)-4-morpholinace-tonitril i 400 ml tetrahydrofuran sættes 10 ml 30%'s kaliumhydroxid i ethanol. Der tilsættes dråbevis 21 ml methacrylo-10 nitril (eksoterm), og blandingen omrøres i 18 timer. Opløsningsmidlet fjernes i vakuum, remanensen opløses i en blanding af ether og acetone og filtreres. Filtratet koncentreres, og remanensen tritureres med hexan, afkøles og filtreres, hvorved der fås 51,1 g 4-methyl-2-morpholin-2-(phenyl)-15 -glutarnitril som hvide krystaller med smp. 93-98°C.

En blanding af 5,0 g 4-methyl-2-morpholin-2-(phenyl)--glutarnitril, 26 ml eddikesyre og 2,9 ml vand tilbagesvales i 1 time. Opløsningsmidlet fjernes i vakuum, og den gummi-agtige remanens fordeles mellem vand og dichlormethan. Di-20 chlormethanet isoleres, vaskes med vand, tørres over magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet fjernes, hvorved fås 2-methyl-3-(benzoyl)-propionitril som et gummiagtigt materiale.

30 ml koncentreret saltsyre sættes til det nævnte gummiagtige materiale, blandingen tilbagesvales i 1 time, afkøles og 25 filtreres, og det faste stof vaskes med vand, hvorved den ønskede forbindelse fås som hvide krystaller med smp. 143-145 °C.

Eksempel 6 30 2-Methvl-3-(p-trifluormethvlbenzovl^-propionsyre.

Til en opløsning af 54,0 g a-(p-trifluormethylphenyl)--4-morpholinacetonitril i 400 ml tetrahydrofuran sættes 10 ml 10%'s kaliumhydroxid i ethanol. Der tilsættes dråbevis 28 ml methacrylonitril (eksoterm), og blandingen omrøres 35 ved stuetemperatur i 18 .timer. Opløsningsmidlet fjernes.. Remanensolien opløses i * ether, og opløsningen vaskes med

DK 161198 B

15 vand, natriumchloridopløsning og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernes, og remanensen krystalliseres fra hexan, som indeholder en lille mængde ether. Det gummiagtige, gule faste stof opløses i acetone, opvarmes til kogepunktet, 5 og der tilsættes hexan, indtil der udskilles krystaller.

Disse krystaller udvindes ved afkøling og filtrering og omkrystalliseres to gange fra en blanding af acetone og hexan, hvorved der fås 16,1 g 4-methyl-2-morpholino-2-(p--trifluormethylphenyl)-glutarnitril som hvide krystaller 10 med smp. 156-159°C.

En blanding af 35 g 4-methyl-2-morpholino-2-(p-tri-fluormethylphenyl)-glutarnitril i 170 ml eddikesyre og 17,5 ml vand tilbagesvales i 2 timer. Opløsningsmidlet fjernes, og remanensen tritureres med hexan-ether, hvorved fås et 15 orange fast stof. Det faste stof omkrystalliseres fra ace-tone-hexan, hvorved der fås 17,7 g 2-methyl-3-(p-trifluor-methylbenzoyl)-propionitril som gule krystaller med smp. 94-96°C.

En blanding af 13,0 g 2-methyl-3-(p-trifluormethyl-20 benzoyl)-propionitril i 130 ml koncentreret saltsyre tilbagesvales i 5 timer, hvorpå den afkøles og filtreres. Det faste stof vaskes med vand, hvorved der fås 13,7 g af den ønskede forbindelse som grålighvide krystaller med smp. 116-119“C.

25

Eksempel 7 2-Methvl-3-(benzovl)-propionsvre-hvdroxvsuccinimidester.

Til en blanding af 12,86 g 2-methyl-3-(benzoyl)-pro-pionsyre, fremstillet ifølge eksempel 5, og 7,71 g N-hydroxy-30 succinimid i 70 ml dioxan sættes en opløsning af 13,8 g dicyclohexylcarbodiimid i 50 ml dioxan. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer og filtreres, og filtratet koncentreres i vakuum til en olie. Denne olie krystalliseres med hexan, som indeholder en lille mængde ether. Det faste 35 stof omkrystalliseres fra dichlormethan, hvorved der fås 12,0 g af den ønskede forbindelse som hvide krystaller med

DK 161198 B

16 srnp. 112-115°C.

Eksempel 8 1-(3-Benzovl-2-methvlpropionvl)-L-prolin.

5 Til en opløsning af 4,8 g L-prolin og 6,97 g natrium- hydrogencarbonat i 170 ml vand sættes en opslæmning af 12,0 g 2 -methyl-3- (benzoyl) -propionsyrehydroxysuccinimidester fremstillet ifølge eksempel 7, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer. Voluminet reduceres 50 procent i 10 vakuum, og blandingen syrnes med saltsyre under afkøling. Blandingen ekstraheres med dichlormethan. Den organiske ekstrakt vaskes med natriumchloridopløsning og tørres over magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet fjernes i vakuum, hvorved fås et gummiagtigt materiale. Det gummiagtige materiale 15 opløses i 60 ml varm eddikesyre, der tilsættes 5 ml koncentreret saltsyre, og der tilsættes vand under afkøling, indtil opløsningen er uklar. Ved afkøling og filtrering fås et fast stof, som omkrystalliseres fra en blanding af acetone og dichlormethan, hvorved den ønskede forbindelse fås som 20 hvide krystaller med smp. 218-220°C (betegnet isomer A).

Moderluden, fra hvilken isomer A krystalliserer, koncentreres til et glasagtigt materiale, som renses ved chromatografering til dannelse af et glasagtigt materiale (betegnet isomer B). Disse to isomere betegnet A og B er 25 de to diastereoisomere, i hvilke det chirale carbonatom, som bærer 2-methylgruppen,_ er i R- eller S-konfiguration.

Eksempel 9 1-(3-Benzovl-3-brom-2-methvlpropionvll-L-prolin.

30 Til en blanding af 1,25 g l-(3-benzoyl-2-methylpro- pionyl)-L-prolin (isomer A ifølge eksempel 8) i 30 ml eddikesyre sættes 0,7 g brom i 10 ml eddikesyre. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer, opløsningen koncentreres i vakuum til halvdelen af sit volumen, og blandingen 35 hældes i is og vand. Blandingen ekstraheres med dichlormethan. Den organiske ekstrakt vaskes med vand og derpå med

DK 161198 B

17 natriumchloridopløsning og tørres over magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet fjernes i vakuum, hvorved fås et gummiagtigt materiale. Det gummiagtige materiale opløses i dichlormethan, der tilsættes hexan, og opløsningsmidlet fjernes ved stue-5 temperatur, hvorved fås et hvidt, glasagtigt materiale. Det glasagtige materiale chromatograferes på en silicagelsøjle med en blanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre (75:25:2), hvorved der fås 1,25 g af den ønskede forbindelse som et hvidt, glasagtigt materiale (3-bromderivat af isomer 10 A) .

På lignende måde omsættes l-(3-benzoyl-2-methylpro-pionyl)-L-prolin (isomer B ifølge eksempel 8) med brom i eddikesyre til dannelse af et glasagtigt materiale (3--bromderivat af isomer B).

15

Eksempel 10 3-(p-Chlorbenzovl)-propionsvre-hvdroxvsuccinimidester.

Til en blanding af 10,7 g 3-(p-chlorbenzoyl)-propion-syre og 5,75 g N-hydroxysuccinimid i 100 ml dioxan sættes 20 10,3 g dicyclohexylcarbodiimid. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer, hvorpå den afkøles i 18 timer.

Ved filtrering og inddampning af filtratet fås en remanens, som ved skrabning i petroleumsether (kp. 30-60°C) giver et gummiagtigt, gyldenbrunt fast stof. Det faste stof opløses 25 i 50 ml dichlormethan. Der tilsættes 50 ml petroleumsether (kp. 30-60°C), hvilket gør blandingen uklar. Blandingen afkøles, og den ønskede forbindelse udvindes ved filtrering som hvide krystaller med smp. 121-123°C.

30 Eksempel 11 3-fp-Fluorbenzovl)-propionsvre-hvdroxvsuccinimidester.

Til en opløsning af 25,0 g 3-(p-fluorbenzoyl)-pro-pionsyre og 14,7 g N-hydroxysuccinimid i 140 ml dioxan sættes en opløsning af 26,4 g dicyclochexylcarbodiimid i 100 ml 35 dioxan. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer og filtreres, og filtratet inddampes til tørhed i vakuum, hvor-

DK 161198 B

18 ved der som remanens fås en rød olie. Ved skråbning af denne olie i hexan fås et rødt fast stof. Det faste stof opløses i 200 ml dichlormethan, og der tilsættes 200 ml hexan, hvilket gør blandingen uklar. Blandingen afkøles i isbad i 2 5 timer, hvorved den ønskede forbindelse fås som hvide krystaller med smp. 130-132°C.

Eksempel 12 10 3-Benzovlpropionsvre-hvdroxvsuccinimidester.

Til en delvis opløsning af 53,4 g 3-benzoylpropionsyre og 34,5 g N-hydroxysuccinimid i 325 ml dioxan sættes en opløsning af 61,8 g dicyclohexylcarbodiimid i 225 ml dioxan. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer og filtre-15 res, og filtratet inddampes til tørhed i vakuum. Remanensen tritureres med hexan og filtreres, hvorved der fås et fast stof, som opløses i 700 ml dichlormethan og filtreres. Der sættes 700 ml hexan til filtratet, som bliver uklart. Ved afkøling fås et fast stof, som udvindes ved filtrering og 20 vaskes med 250 ml dichlormethan-hexan (1:1), hvorved den ønskede forbindelse fås som hvide krystaller med smp. 130-132 eC.

Eksempel 13 25 1-(Benzovlpropionvl)-L-prolin.

Til en opløsning af 25,5 g L-prolin og 37,3 g natri-umhydrogencarbonat i 800 ml vand sættes en opslæmning af 61,0 g 3-benzoylpropionsyre-hydroxysuccinimidester, fremstillet ifølge eksempel 12, i 800 ml ethanol. Blandingen 30 koncentreres til det halve volumen, afkøles og syrnes med koncentreret saltsyre. Blandingen ekstraheres med dichlormethan, og ekstrakten vaskes med vand og mættet natriumchlo-rid og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernes under vakuum til dannelse af et orange, gummiagtigt mate-35 riale, som danner et fast stof ved skrabning i ether indeholdende lidt dichlormethan. Det faste stof omkrystalliseres

DK 161198 B

19 fra 250 ml acetone ved fortrængning med hexan. Ved afkøling i 2 timer fås 32,6 g af den ønskede forbindelse som hvide krystaller med smp. 95-97“C.

5 Eksempel 14 1— Γ 3 — f4-Fluorbenzovl)-propionvll-L-prolin.

Til en opløsning af 10,6 g L-prolin og 15,5 g natri-umhydrogencarbonat i 370 ml vand sættes en opslæmning af 26,9 g 3-(p-fluorbenzoyl)-propionsyrehydroxysuccinimidester, 10 fremstillet ifølge eksempel 11, i 370 ml ethanol. Blandingen behandles som beskrevet i eksempel 13, hvorved der fås 13,1 g af den ønskede forbindelse som hvide krystaller med smp. 127-129e C.

15 Eksempel 15 1-Γ3-M-Chlorbenzovl)-propionvll-L-prolin.

Til en opløsning af 2,30 g L-prolin og 3,36 g natri-umhydrogencarbonat i 50 ml vand sættes en delvis opløsning af 5,96 g 3-(p-chlorbenzoyl)-propionsyrehydroxysuccinimid-20 ester, fremstillet ifølge eksempel 10, i 60 ml ethanol. Fremgangsmåden beskrevet i eksempel 13 følges, hvorved der fås 3,37 g af den ønskede forbindelse med smp. 137-138"C.

Eksempel 16 25 1-Γ3-Brom-3-(4-fluorbenzovl)-propiony11-L-prolin.

Til en opløsning af 10,26 g l-[3-(4-fluorbenzoyl)--propionyl]-L-prolin, fremstillet ifølge eksempel 14, i 100 ml eddikesyre sættes 3 dråber 30%'s hydrogenbromid i eddikesyre. Derefter tilsættes dråbevis en opløsning af 30 5,6 g brom i 20 ml eddikesyre, og blandingen omrøres ved stuetemperatur natten over. Blandingen inddampes til en tredjedel af dens volumen, hældes i is og vand og ekstra-heres med dichlormethan. Den organiske ekstrakt vaskes to gange med vand og derpå med saltopløsning, tørres over mag-35 nesiumsulfat og inddampes til tørhed i vakuum med moderat opvarmning, hvorved der fås et hvidt, glasagtigt materiale.

DK 161198B

20

Det glasagtige materiale skrabes fra kolben, og der fås 12,2 g af et hvidt pulver. Dette pulver opløses i en blanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre (75:25:2), anbringes på en silicagelsøjle (1,27 x 50,8 cm) og elueres med den samme 5 opløsningsmiddelblanding, idet der udtages fraktioner på 100 ml med en forfraktion på 300 ml og et tilbageholdelsesvolumen på 400 ml. Fraktionerne 2, 5 og 6 kombineres og søjlebehandles igen på samme måde. Fraktion 2 giver den ønskede forbindelse som et hvidt, glasagtigt materiale.

10

Eksempel 17 1-(3-Brom-3-benzovlpropionvl)-L-prolin.

Til en opløsning af 8,25 g l-(3-benzoylpropionyl)-L--prolin, fremstillet ifølge eksempel 13, i 80 ml eddike-15 syre sættes 5 dråber 30%'s hydrogenbromid i eddikesyre og derpå 4,80 g brom i 20 ml eddikesyre. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer, inddampes til en tredjedel af dens volumen, hældes i isvand og ekstraheres med dichlor-methan. Den organiske ekstrakt vaskes med saltopløsning, 20 tørres over magnesiumsulfat og inddampes til tørhed, hvorved den ønskede forbindelse fås som et hvidt, glasagtigt materiale i en mængde på 10,3 g.

Eksempel 18 25 1-Γ3-(4-Brombenzoyl)-propionyl)-L-prolin-tert-butvlester.

En opløsning af 1,285 g p-brombenzoylpropionsyre og 0,50 ml triethylamin i 25 ml tetrahydrofuran omrøres i et is-saltbad ved -8°C. Der tilsættes dråbevis en opløsning af 0,48 ml ethylchlorcarbonat i 5 ml tetrahydrofuran, og blan-30 dingen omrøres ved -5°C i 30 minutter. Der tilsættes dråbevis en opløsning af 885 mg tert-butylprolin i 10 ml tetrahydrofuran, opløsningen omrøres i is-saltbadet i 30 minutter, hvorpå opløsningen henstilles ved stuetemperatur i 30 minutter. Blandingen hældes i isvand, ekstraheres med dichlor-35 methan, og den organiske ekstrakt vaskes med mættet vandigt natriumhydrogencarbonat, vand og derpå IN saltsyre, tørres

DK 161198 B

21 over magnesiumsulfat og inddampes til tørhed i vakuum, hvorved der fås en remanensolie. Olien krystalliseres fra hexan indeholdende en lille mængde ether, og der fås et grålighvidt fast stof, som omkrystalliseres fra en blanding af acetone 5 og hexan, hvorved den ønskede forbindelse fås som hvide krystaller i en mængde på 505 mg. Smp. 70-71“C.

Eksempel 19 1-Γ3-(4-Brombenzovl)-propionvl]-L-prolin-methvlester 10 En opløsning af 5,14 g p-brombenzoylpropionsyre og 2,78 ml triethylamin i 50 ml tetrahydrofuran omrøres og afkøles til -15°C i et methanol-is-saltbad. Der tilsættes dråbevis en opløsning af 1,9 ml ethylchlorcarbonat i 10 ml tetrahydrofuran, og blandingen omrøres ved -10“C i 30 minut-15 ter.

En opløsning af 3,32 g methylprolinhydrochlorid i 50 ml methylenchlorid behandles med 2,78 ml triethylamin i 15 minutter, hvorpå den filtreres. Filtratet sættes derpå dråbevis til den ovennævnte opløsning, idet temperaturen holdes 20 under -5°C. Blandingen omrøres i badet i 30 minutter, hvorpå den får lov til at antage stuetemperatur i løbet af 1 time. Blandingen hældes i 300 ml vand og ekstraheres med dichlor-methan. Den organiske ekstrakt vaskes med mættet vandigt natriumhydrogencarbonat, vand og derpå IN saltsyre, tørres 25 over magnesiumsulfat og inddampes til en olie. Ved skrabning af olien i petroleumsether (kp. 30-60°C) fås et fast stof, som omkrystalliseres fra en blanding af acetone og hexan, hvorved den ønskede forbindelse fås som hvide krystaller i en mængde på 2,09 g. Smp. 84-86°C.

30

Eksempel 20 3-(4-Brombenzoyl}-propionsvre-hvdroxvsuccinimidester

En opløsning af 41,2 g dicyclohexylcarbodiimid i 150 ml dioxan sættes til en delvis opløsning af 51,4 g p-brom-35 benzoylpropionsyre og 23,0 g N-hydroxysuccinimid i 250 ml dioxan. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer, \

DK 161198 B

22 hvorpå den oxnrøres i isbad og filtreres, og filtratet inddampes i vakuum til en remanens. Remanensen tritureres i hexan og ved skrabning fås et fast stof. Det faste stof opløses i 130 ml dichlormethan, og der tilsættes 120 ml 5 petroleumsether (kp. 30-60®C), som gør blandingen uklar.

Ved afkøling i isbad fås 31,1 g af den ønskede forbindelse som hvide krystaller med smp. 127-129“C.

Eksempel 21 10 1-Γ3-Γ4-Brombenzovl)-propionyll-L-prolin-methvlester.

Til en opløsning af 3,54 g 3-(4-brombenzoyl)-propion-syre-hydroxysuccinimidester, fremstillet ifølge eksempel 20, og 1,66 g methylprolinhydrochlorid i 10 ml acetonitril sættes 1,75 ml diisopropylethylamin. Blandingen omrøres 15 ved stuetemperatur i 18 timer og inddampes i vakuum til en remanens. Remanensen opløses i dichlormethan, vaskes med IN saltsyre, tørres over magnesiumsulfat og inddampes i vakuum til et gummiagtigt materiale. Ved skrabning af det gummiag-tige materiale i hexan fås et fast stof, som omkrystalliseres 20 fra en blanding af acetone og hexan, hvorved der fås 2,01 g af den ønskede forbindelse som et hvidt, fast stof med smp.

78-82 °C.

Eksempel 22 25 1-Γ3-(4-Brombenzovl)-propionvll-L-prolin-methvlester.

Fremgangsmåden beskrevet i eksempel 21 gentages ved anvendelse af 21,8 ml triethylamin i stedet for diisopropylethylamin og ved anvendelse af 27,3 g 3-(4-brombenzoyl)-propionsyre-hydroxysuccinimidester, 13,0 g methylprolin-30 hydrochlorid og 150 ml acetonitril. Den ønskede forbindelse fås som hvide krystaller i en mængde på 16,6 g. Smp. 83-85°C.

Eksempel 23 1-Γ3-(4-Brombenzovl)-3-brompropionvi)-L-prolin-methvlester.

35 Til en opløsning af 3,52 g l-[3-(4-brombenzoyl)-pro- pionyl]-L-prolin-methylester, fremstillet ifølge eksempel

DK 161198 B

23 22, i 50 ml carbontetrachlorid sættes dråbevis en opløsning af 0,51 ml brom i 20 ml carbontetrachlorid. Efter 30 minutter tilsættes 2 dråber 30%'s hydrogenbromidsyre i eddikesyre, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer.

5 Opløsningsmidlet dekanteres fra det dannede gummiagtige materiale. Det gummiagtige materiale opløses i dichlormethan, vaskes to gange med vand og én gang med natriumchl or idopløsning, tørres over magnesiumsulfat og klares med trækul. Filtratet inddampes til tørhed i vakuum, hvorved der fås 10 3,87 g af den ønskede forbindelse som et gummiagtigt materia le.

Eksempel 24 2- Γα f (2-Carboxv-l-pvrrolvlcarboxvl) -methvll-phenacylthio]-15 l-methylpvridiniumbromid-methvlester.

Til en opløsning af 7,5 g l-[3-(4-brombenzoyl)-3--brompropionyl]-L-prolin i 50 ml acetonitril sættes en opløsning af 2,1 g l-methyl-2-(lH)-pyridinthion i 30 ml acetonitril. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer, 20 og opløsningsmidlet fjernes under vakuum til dannelse af et hvidt, glasagtigt materiale. Det glasagtige materiale tritu-reres med ether og filtreres, og det faste stof vaskes med ether og petroleumsether (kp. 30-60°C), hvorved der fås 8,0 g af forbindelsen som et cremefarvet pulver.

25

Eksempel 25 l-r3-(’4-Brombenzoyl) -propionvl]-L-prolin.

En blanding af 2,64 g l-[3-(4-brombenzoyl)-propionylJ--L-prolin-methylester, fremstillet ifølge eksempel 19, og 30 26 ml IN natriumhydroxid omrøres ved stuetemperatur. De faste stoffer isoleres ved dekantering, opløses i tetrahy-drofuran og sættes atter til den basiske opløsning, som omrøres yderligere ved stuetemperatur. Den basiske opløsning vaskes med ethylacetat og hældes i isafkølet saltsyre. Blan-35 dingen ekstraheres med dichlormethan. Den organiske ekstrakt tørres over magnesiumsulfat og inddampes til tørhed i vakuum, 24

DK 161198 B

hvorved der fås en gummiagtig remanens. Den gummiagtige remanens tritureres med ether til dannelse af hvide krystaller, som omkrystalliseres fra en blanding af acetone og hexan, hvorved der fås 1,35 g af den ønskede forbindelse 5 som hvide krystaller med smp. 138-139“C.

Eksempel 26 1-Γ 3-f 4-Brorobenzovl)-propionvl1-L-prolin.

Til en opløsning af 12,65 g L-prolin og 18,5 g natri-10 umhydrogencarbonat i 390 ml vand sættes en opslæmning af 39,0 g 1-(3-p-brombenzoyl)-propionsyrehydroxysuccinimid-ester, fremstillet ifølge eksempel 20, i 390 ml ethanol. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer, inddampes til halvdelen af dens volumen og syrnes med koncentreret 15 saltsyre til dannelse af en olie. Olien krystalliseres ved skrabning til et fast stof, som omkrystalliseres fra en blanding af acetone og hexan, hvorved der fås 26,3 g af den ønskede forbindelse som gyldenbrune nåle med smp. 143-144“C.

20 Eksempel 27 l-r3-f4-Brombenzovl1-3-brompropionvil-L-prolin.

Til en opløsning af 17,7 g l-[3-(4-brombenzoyl)-pro-pionyl]-L-prolin, fremstillet ifølge eksempel 26, i 150 ml eddikesyre sættes dråbevis en opløsning af 9,0 g brom i 20 25 ml eddikesyre og derpå 5 dråber hydrogenbromidsyre i eddikesyre. Blandingen omrøres i 18 timer, inddampes til halvdelen af dens volumen, hældes i 300 ml isvand og ekstraheres med methylenchlorid. Den organiske ekstrakt vaskes to gange med vand og én gang med mættet natriumchloridopløsning, 30 tørres over magnesiumsulfat, klares med trækul og inddampes til tørhed i vakuum. Der fås 20,5 g af den ønskede forbindelse som et hvidt, amorft fast stof.

35

DK 161198 B

25

Eksempel 28 1-Γ3-Γ 3-Fluorbenzovl) -2-methylpropionyH -L-prolinmethvlester.

Til en opløsning af 2,10 g 3-(4-fluorbenzoyl)-2-me-thylpropionsyre, fremstillet ifølge eksempel 2, i 20 ml 5 tetrahydrofuran sættes 1,62 g Ι,ΐ'-carbonyldiimidazol. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time, hvorpå der tilsættes 1,66 g L-prolinmethylester, og omrøringen fortsættes i 18 timer. Blandingen inddampes til tørhed i vakuum, og remanensen fordeles mellem dichlormethan og vand. Det or-10 ganiske lag isoleres og vaskes successivt med IN saltsyre, vand, natriumhydrogencarbonatopløsning og saltopløsning, tørres over magnesiumssulfat og inddampes til tørhed i vakuum, hvorved der fås 1,98 g af den ønskede forbindelse som et gummiagtigt materiale.

15

Eksempel 29 1-Γ 3-(3-Fluorbenzovl)-2-methvlpropionvl1-L-prolin.

1,98 g l-[3-(3-fluorbenzoyl)-2-methylpropionyl]-L--prolinmethylester, fremstillet ifølge eksempel 28, opløses 20 i 2 ml tetrahydrofuran, og der tilsættes 20 ml IN natrium hydroxid. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 4 timer, afkøles i isbad, syrnes med koncentreret saltsyre og ekstra-heres med dichlormethan. Den organiske ekstrakt vaskes med natriumchloridopløsning, tørres over magnesiumsulfat og 25 inddampes til et gummiagtigt materiale i vakuum. Det gummiagt ige materiale tritureres med ether, hvorved der fås 500 mg af den ønskede forbindelse som et hvidt fast stof.

Eksempel 30 30 3-(3-Chlorbenzovl)-2-methvlpropionsvre.

Til en opløsning af 11,8 g a-(3-chlorphenyl)-4-mor-pholinoacetonitril i 50 ml tetrahydrofuran sættes 60 dråber af en 30%’s kaliumhydroxidopløsning i methanol. Til opløsningen sættes 4,62 ml methacrylonitril. Efter omrøring i l 35 time, koncentreres blandingen til tørhed, og remanensen opløses i dichlormethan. Opløsningen ledes gennem en kort

DK 161198 B

26 søjle af vandholdigt magnesiumsilicat, eluatet koncentreres, og dér fås 15,5 af en gul olie. Olien opvarmes på et dampbad med en blanding af 75 ml eddikesyre og 5 ml vand i 1 time. Opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og vand sættes til 5 remanensen. Ved filtrering fås 11,2 g 3-(3-chlorbenzoyl)-2--methylpropionitril som krystaller med smp. 72-75°C.

En blanding af 7,9 g af den netop nævnte forbindelse og 75 ml koncentreret saltsyre tilbagesvales i 1 time. Blandingen afkøles og filtreres, hvorved der fås 8,5 g af den 10 ønskede forbindelse som krystaller med smp. 102-105“C.

Eksempel 31 3-(4-Chlorbenzovl1-2-methvlpropionsvre.

Til en blanding af 152,2 g p-toluensulfonsyre og 15 148,1 g morpholin i 700 ml tetrahydrofuran sættes 102 g 4- chlorbenzaldehyd i 200 ml tetrahydrofuran. Blandingen tilbagesvales i 6 timer og afkøles, og der tilsættes 65,1 g kaliumcyanid i 100 ml vand. Blandingen tilbagesvales i 18 timer, og opløsningsmidlet fjernes under vakuum. Remanensen 20 opløses i dichlormethan, og opløsningen vaskes med natrium-hydrogensulfitopløsning og ledes gennem en søjle af vandholdigt magnesiumsilicat. Filtratet koncentreres, indtil det er næsten tørt, og der tilsættes hexan. Ved filtrering fås 87,5 g a-(4-chlorphenyl)-4-morpholinoacetonitril som hvide 25 krystaller med smp. 70°C. Til 87,5 g af den foranstående forbindelse i 500 ml tetrahydrofuran sættes 25 ml af en 30%'s kaliumhydroxidopløsning i ethanol. Til blandingen sættes 33,5 ml methacrylonitril. Blandingen omrøres i 50 timer ved stuetemperatur, og opløsningsmidlet fjernes under 30 vakuum. Remanensen opløses i dichlormethan og ledes gennem en søjle af vandholdigt magnesiumsilicat. Eluatet koncentreres og fortyndes med hexan, og der fås 50 g hvide krystaller med smp. 158-160“C.

En blanding af 50 g af den sidstnævnte forbindelse i 35 400 ml eddikesyre og 100 ml vand tilbagesvales i 18 timer.

Opløsningsmidlet fjernes, og remanensen opløses i dichlor-

DK 161198 B

27 methan. Opløsningen ledes gennem en søjle af vandholdigt magnesiumsilicatr og eluatet koncentreres til dannelse af en gul olie. Ved krystallisation fra hexan fås 57 g 3-(4-chlorbenzoyl)-2-methylpropionitril som krystaller med smp.

5 80-82 ®C.

Sidstnævnte forbindelse tilbagesvales med koncentreret saltsyre, hvorved den ønskede forbindelse fås med smp. 125-129“C.

10 Eksempel 32 1-f3-Acetvlthio-3-benzovl-2-methylpropionvl)-L-prolin.

Til en suspension af 0,47 g kaliumthioacetat i 10 ml ethanol sættes 1,25 g l-(3-benzoyl-3-brom-2-methylpropio-nyl)-L-prolin, fremstillet ifølge eksempel 9 (3-bromderivat 15 af isomer A). Blandingen omrøres i 18 timer, og opløsningsmidlet fjernes i vakuum, og remanensen fordeles mellem di-chlormethan og vand. Det organiske lag vaskes med vand og derpå med natriumchloridopløsning og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernes i vakuum, hvorved der fås 20 et gult, glasagtigt materiale, som opløses i 10 ml ethanol.

Der tilsættes 0,47 g kaliumthioacetat, og den ovennævnte fremgangsmåde gentages til dannelse af et gult, glasagtigt materiale. Det glasagtige materiale renses ved chromatogra-fering på en silicagelsøjle med en blanding af ethylacetat, 25 hexan og eddikesyre (75:25:2), hvorved der fås 0,28 g af den ønskede forbindelse som et gult, glasagtigt materiale.

På lignende måde omsættes l-(3-benzoyl-3-brom-2-me-thylpropionyl)-L-prolin, fremstillet ifølge eksempel 9 (3-bromderivat af isomer B), med kaliumthioacetat til dannelse 30 af et glasagtigt materiale.

Eksempel 33 1-(3-Acetylthio-3-benzovlpropionvl)-L-prolin.

Til en omrøret blanding af 1,25 g kaliumthioacetat i 35 20 ml ethanol sættes en opløsning af 3,54 g l-(3-brom-3- -benzoylpropionyl)-L-prolin, fremstillet ifølge eksempel

DK 161198 B

28 17, i 20 ml ethanol. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Blandingen koncentreres til tørhed under vakuum, og remanensen fordeles mellem dichlormethan og vand. Di-chlormethanlaget vaskes med mættet natriumchloridopløsning 5 og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og der fås 2,9 g af forbindelsen som et glas-agtigt materiale. En prøve på 2,3 g chromatograferes over silicagel med en opløsningsmiddelblanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre (75:75:2), og der fås 1,07 g af forbin-10 delsen som et lysegult, glasagtigt materiale.

Eksempel 34 1-(3-Benzovlthio-3-benzovlpropionvl)-L-prolin.

Til 440 mg af en natriumhydriddispersion i olie (vas-15 ket to gange med hexan) sættes en opløsning af 1,60 g thio-benzoesyre i 25 ml ethanol. Blandingen omrøres i 30 minutter, hvorpå der tilsættes 3,54 g l-(3-brom-3-benzoylpropio-nyl)-L-prolin, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer. Fremgangsmåden beskrevet i eksempel 32 følges, hvorved 20 den ønskede forbindelse fås som et glasagtigt materiale.

Eksempel 35 1-Γ3-Acetylthio-3-(4-fluorbenzovl)-propionvll-L-prolin.

Til en opløsning af 3,7 g l-[3-brom-3-(4-fluorben-25 zoyl)-propionyl]-L-prolin, fremstillet ifølge eksempel 16, i 37 ml ethanol sættes 1,37 g kaliumthioacetat. Fremgangsmåden beskrevet i eksempel 32 følges, hvorved den ønskede forbindelse fås som et glasagtigt materiale i en mængde på 1,02 g.

30

Eksempel 36 1-Γ 3-Benzovlthio-3-(4-fluorbenzovl)-propionvl1-L-prolin.

Til 440 mg af en natriumhydr iddispersion i olie (vasket to gange med hexan) sættes dråbevis en opløsning af 35 1,60 g thiobenzoesyre i 25 ml ethanol. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time, og der tilsættes 3,7 g l-[3-

DK 161198B

29 -brom-3- (4-fluorbenzoyl)-propionyl]-L-prolin, fremstillet ifølge eksempel 16. Fremgangsmåden beskrevet i eksempel 32 følges, hvorved den ønskede forbindelse fås som et hvidt, glasagtigt materiale i en mængde på 3,81 g.

5

Eksempel 37 1-f 3- M-Brombenzoyl)-3-thiopropionvl1-L-prolin.

5,2 g 2-[a-[(2-carboxy-l-pyrrolyl-carboxy)-methyl]--phenacylthio]-1-methylpyridiniumbromid-methylester, fremit) stillet ifølge eksempel 24, opslæmmes med 50 ml vand og ekstraheres med chloroform. Ekstrakten inddampes til et gummiagtigt materiale, som blandes med 50 ml 1N natriumhydroxid og omrøres ved stuetemperatur i 3 timer. Blandingen vaskes med chloroform, og den basiske opløsning syrnes med 15 saltsyre og ekstraheres med chloroform. Ekstrakten tørres, hvorpå den inddampes til tørhed i vakuum, og der fås et glasagtigt materiale. Ved skrabning af det glasagtige materiale i hexan fås et gyldenbrunt, amorft, fast stof. Det faste stof underkastes fordelingschromatografi på "Celite®" 20 ved anvendelse af en blanding af heptan, ethylacetat, methanol og vand (55:45:15:1). Fraktion nr. 3 giver den ønskede forbindelse som et gyldenbrunt, glasagtigt materiale i en mængde på 539 mg.

25 Eksempel 38 1- r 3-Acetvlthio-3- (4-brombenzovl^ -propionyll-L-prolin-me-thvlester.

Til en opløsning af 5,28 g l-[3-(4-brombenzoyl)-3--brompropionyl)-L-prolin-methylester, fremstillet ifølge 30 eksempel 23, i 35 ml acetonitril sættes 1,48 g kaliumthio-acetat. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer og filtreres, og filtratet inddampes til tørhed i vakuum, hvorved der fås en ravgul gummiagtig remanens. Remanensen opløses i ether og chromatograferes på på silicagelsøjle (2,54 x 35 40,64 cm), idet der elueres med ether og udtages fraktioner på 100 ml. Fraktion nr. 3 giver den ønskede forbindelse som

DK 161198 B

30 et glasagtigt materiale i en mængde på 1,64 g.

Eksempel 39 1-(3-Benzovl-3-thiopropionyl)-L-prolin.

5 Til en opløsning af 65 mg hydroxylamin-hydrochlorid i 10 ml methanol sættes en opløsning af 0,35 g l-(3-ben-zoylthio-3-benzoylpropionyl)-L-prolin i 10 ml methanol.

Til denne blanding sættes 164 mg natriumacetat, og blandingen omrøres i 2 timer. Opløsningsmidlet fjernes, og re-10 manensen fordeles mellem vand og dichlormethan. Det organiske lag vaskes med vand og mættet natriumchloridopløsning og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og der fås 174 mg af et gummiagtigt materiale. Ved chromatografering over silicagel med en opløsningsmiddelblan-15 ding af ethylacetat, hexan og eddikesyre (75:25:2) fås den ønskede forbindelse som et glasagtigt materiale.

Eksempel 40 1-Γ 3-Acetylthio-3-(4-brombenzovl)-propionvlΊ-L-prolin.

20 Til en omrørt suspension af 469 mg kaliumthioacetat i 10 ml ethanol sættes 1,76 g l-[3-(4-brombenzoyl)-3-brom-propionyl]-L-prolin, fremstillet ifølge eksempel 27. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer og filtreres, og filtratet inddampes til tørhed. Remanensen opløses i 25 dichlormethan, vaskes med vand og mættet natriumchloridopløsning, tørres over magnesiumsulfat og inddampes til tørhed i vakuum, hvorved der fås 1,68 g af den ønskede forbindelse som et hvidt, glasagtigt materiale.

30 Eksempel 41 1-Γ3-(4-Brombenzovl)-3-benzovlthiopropionvll-L-prolin.

Til 440 ml natriumhydriddispersion i olie sættes en opløsning af 1,60 g thiobenzoesyre i 25 ml ethanol. Blandingen omrøres i 30 minutter, hvorpå der tilsættes 4,33 g 35 l-[3-(4-brombenzoyl)-3-brompropionyl]-L-prolin, fremstillet ifølge eksempel 27, og blandingen omrøres ved stuetemperatur

DK 161198 B

31 i 18 timer. Opløsningsmidlet fjernes i vakuum, og remanensen fordeles mellem dichlormethan og vand. Det organiske lag vaskes med vand og derpå med natriumchloridopløsning, tørres over magnesiumsulfat og inddampes til tørhed i vakuum, hvor-5 ved der fås en ferskenfarvet, glasagtig remanens. En portion på 2,8 g af den glasagtige remanens opløses i en blanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre (75:25:2) og anbringes på en silicagelsøjle (2,54 x 38,1 cm) . Søjlen elueres med den samme opløsningsmiddelblanding (100 ml tilbageholdelses-10 volumen), og der udtages 50 ml-fraktioner. Den ønskede forbindelse udvindes fra fraktion nr. 2 som et glasagtigt materiale.

Eksempel 42 15 l- Γ 3-Acetvlthio-3- (l-naphthovl) -2-methvlpropionvll-L-prolin.

Til en blanding af 133,2 g p-toluensulfonsyre og 130,7 g morpholin i 500 ml tetrahydrofuran sættes 98,0 g 1-naphthaldehyd, og blandingen tilbagesvales i 6 timer.

Til den afkølede blanding sættes 48,8 g kaliumcyanid i 100 20 ml vand, og blandingen tilbagesvales i 18 timer. Opløsningsmidlet fjernes, og remanensen fordeles mellem dichlormethan og vand. Det organiske lag isoleres, og det vandige lag ekstraheres med dichlormethan. Det organiske lag og ekstrakterne blandes, vaskes med mættet natriumhydrogensulfitopløs-25 ning og ledes gennem en søjle af vandholdigt magnesiumsili-cat. Eluatet koncentreres, fortyndes med hexan og filtreres, og der fås 123 g a-(l-naphthyl)-4-*morpholinoacetonitril som krystaller med smp. 88-89°C.

Til 120 g af sidstnævnte forbindelse i 500 ml tetra-30 hydrofuran sættes 35 ml af en 30%'s opløsning af kaliumhydroxid i ethanol og 43,6 ml methacrylonitril. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 24 timer, og opløsningsmidlet fjernes. Til remanensen sættes 600 ml 6N saltsyre, og blandingen tilbagesvales i 18 timer. Blandingen ekstraheres med 35 dichlormethan, og den organiske ekstrakt ekstraheres med natriumhydrogencarbonatopløsning. Det vandige lag syrnes

DK 161198B

32 med saltsyre og ekstraheres med dichlormethan. Dichlormethan-ekstrakten vaskes med mættet natriumchloridopløsning og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernes, og remanensen tritureres med hexan, og der fås 19,2 g 3-(1-5 naphthoyl)-2-methylpropionsyre som krystaller med smp. lll-114eC.

12,0 g af sidstnævnte forbindelse opløses i 100 ml dioxan, og der tilsættes 5,70 g N-hydroxysuccinimid. Til blandingen sættes 10,2 g Ν,Ν-dicyclohexylcarbodiimid i 100 10 ml dioxan i løbet af 15 minutter. Blandingen omrøres natten over og filtreres, og filterkagen vaskes med dioxan. Filtratet koncentreres, der tilsættes hexan, og der filtreres.

Det faste stof omkrystalliseres fra dichlormethan-hexan, og der fås 3-(1-naphthoyl)-2-methylpropionsyre-hydroxysuccini-15 midester som hvide krystaller med smp. 170°C.

3,4 g af sidstnævnte forbindelse opslæmmes i 40 ml ethanol og sættes til en opløsning af 2,30 g L-prolin og 1,68 g natriumcarbonat i 40 ml vand. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 uge. Blandingen koncentreres til 20 halvdelen af dens volumen, afkøles og syrnes med koncentreret saltsyre. Blandingen ekstraheres med dichlormethan, og ekstrakten vaskes med mættet natriumchloridopløsning og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernes, og der fås 1-[3-(naphthoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin.

25 Sidstnævnte forbindelse opdeles i diastereoisomere A

og B, som hver omsættes med brom som i eksempel 16 til dannelse af 1-[3-brom-3-(1-naphthoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin som et glasagtigt materiale (bromeret isomer A og bromeret isomer B). De foregående forbindelser omsættes 30 med kaliumthioacetat som i eksempel 33, hvorved de ønskede produkter fås.

Eksempel 43 1-r3-Acetvlthio-3-(3-chlorbenzovl)-propionvll-L-prolin.

35 Til en kold opløsning af 76 g p-toluensulfonsyre i 500 ml tetrahydrofuran sættes 87 g morpholin og 50,6 g m-

DK 161198 B

33 -chlorbenzaldehyd. Blandingen tilbagesvales i 2,5 timer, og der af destilleres 100 ml tetrahydrofuran. Blandingen afkøles, og der tilsættes en opløsning af 28,6 g kaliumcyanid i 100 ml vand. Blandingen tilbagesvales i 5 timer og koncentreres 5 til tørhed under vakuum. Remanensen opløses i dichlormethan, og opløsningen vaskes med vand, natriumhydrogensulfitopløs-ning, mættet natriumchloridopløsning og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningen ledes gennem en kort søjle af vandholdigt magnesiumsilicat. Eluatet tilbagesvales under 10 tilsætning af hexan, indtil der udfældes krystaller. Ved afkøling og filtrering fås 78 g a-(3-chlorphenyl)-4-mor-pholinoacetonitril som krystaller med smp. 72-73'C.

Til 23,5 g af sidstnævnte forbindelse i 100 ml tetrahydrofuran sættes 120 dråber af en 30%'s kaliumhydroxid-15 opløsning i methanol. Til blandingen sættes 4,1 ml acrylo-nitril. Efter omrøring i 1 time koncentreres blandingen til tørhed i vakuum. Remanensen opløses i dichlormethan og ledes gennem en kort søjle af vandholdigt magnesiumsilicat. Eluatet koncentreres under vakuum, og der fås 36,6 g af en 20 gul olie. Olien opvarmes på et dampbad sammen med en blanding af 150 ml eddikesyre og 10 ml vand i 1 time. Opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og remanensen behandles med vand. Blandingen filtreres, og der fås 18,8 g 3-(3-chlorbenzoyl)-propionitril som krystaller med smp. 49-51"C.

25 En blanding af 8,1 g af sidstnævnte forbindelse og 80 ml koncentreret saltsyre tilbagesvales i 7 timer. Ved afkøling fås en olie, som krystalliserer, og der fås 8,8 g 3-(3-chlorbenzoyl)-propionsyre som krystaller med smp. 105-107 °C.

30 Sidstnævnte forbindelse omdannes til 3-(3-chlorben- zoyl)-propionsyre-hydroxysuccinimidester som beskrevet i eksempel 12 og kobles med L-prolin som beskrevet i eksempel 13, og der fås l-[3-(3-chlorbenzoyl)-propionyl]-L-prolin.

Denne forbindelse omsættes med brom i eddikesyre som be-35 skrevet i eksempel 17, og der fås l-[3-brom-3-(3-chlorben-zoyl)-propionyl]-L-prolin. Denne forbindelse omsættes i en

DK 161198B

34 blanding af ethanol og vand (1:1) med kaliumthioacetat som beskrevet i eksempel 33, hvorved den ønskede forbindelse fås som et glasagtigt materiale.

5 Eksempel 44 1- r3-Acetvlthio-3- (4-tert-butvlbenzovll -prop ionvi 1 -L-prol in.

Til en omrørt blanding af 17,0 g p-tert-butylbenzen og 13,0 g ravsyreanhydrid i 340 ml 1,1,2,2-tetrachlorethan sættes 36 g aluminiumchlorid. Blandingen omrøres ved stue-10 temperatur i 3 timer, hvorpå den hældes i 170 ml iskold 6N saltsyre. Blandingen inddampes ved stuetemperatur natten over, og slamremanensen omrøres med 300 ml kogende vand, afkøles og filtreres. Det faste stof opløses i 1,5 liter kogende vand indeholdende 20 g natriumcarbonat. Den varme 15 blanding filtreres, og filtratet syrnes med 100 ml 6N saltsyre. Ved afkøling og filtrering fås et gyldenbrunt, fast stof, som omkrystalliseres fra en blanding af ethanol og vand, og der fås 28 g forbindelse med smp. 85-89"C. Ved omkrystallisation fra benzen-petroleumsether fås 17,0 g 3-20 (4-tert-butylbenzoyl)-propionsyre som lysegule krystaller med smp. 119-121°C.

Sidstnævnte forbindelse omdannes til 3-(4-tert-butylbenzoyl) -propionsyre-hydroxysuccinimidester, som beskrevet i eksempel 12, som kobles til L-prolin til dannelse af 1-25 [3-(4-tert-butylbenzoyl)-propionyl]-L-prolin.

Denne forbindelse omsættes med brom i eddikesyre til dannelse af l-[3-brom-3-(4-tert-butylbenzoyl]-propionyl]--L-prolin som beskrevet i eksempel 17.

Sidstnævnte forbindelse omsættes i en blanding af 30 ethanol og vand (1:1) med kaliumthioacetat som beskrevet i eksempel 33, hvorved den ønskede forbindelse fås som et glasagtigt materiale.

35

DK 161198B

35

Eksempel 45 1- Γ 3 -Acetvl thi o-3 - (3 -tri f luormethylbenzoyl) -propionvl 1 -L--prolin.

Til en opløsning af 5,0 g a-[3-trifluormethyl)-phe-5 nyl]-4-morpholinoacetonitril i 200 ml tetrahydrofuran, som er omrørt ved stuetemperatur, sættes 30 dråber 30%'s kaliumhydroxid i ethanol. Til blandingen sættes 10 ml ethylacrylat.

Efter 1 time tilsættes yderligere 30 dråber 30%'s kaliumhydroxid i ethanol og 10 ml ethylacrylat. Blandingen omrøres 10 i 2 timer, og opløsningsmidlet fjernes under vakuum. Der tilsættes toluen, og opløsningsmidlet fjernes. Dette gentages flere gange. Remanensen omrøres med ether og filtreres, og opløsningsmidlet fordampes, hvorved der fås ethyl-nr-cyano--'r-[3-(trifluormethyl)-phenyl]-4-morpholinbutanoat (5,6 g) 15 som en olie. Olien opvarmes med 70%'s iseddike i 2 timer, og opløsningsmidlet fjernes. Remanensen opløses i dichlor-methan og vaskes med vand. Det organiske lag tørres (Na2S04), og opløsningsmidlet fjernes, hvorved fås en olie. En blanding af olien og 300 ml 6N saltsyre tilbagesvales i 5 timer, 20 afkøles og ekstraheres med dichlormethan. Det organiske lag ekstraheres med natriumhydrogencarbonat. Det vandige lag syrnes med koncentreret saltsyre og ekstraheres med dichlormethan. Ekstrakten tørres (Na2S04), og opløsningsmidlet fjernes. Remanensen krystalliseres fra hexan, hvorved der 25 fås 3-(3-trifluormethylbenzoyl)-propionsyre som krystaller med smp. 80-82°C.

3- (3-Trif luormethylbenzoyl) -propionsyre-hydroxysuc-cinimidester fremstilles som beskrevet i eksempel 12 og kobles til L-prolin som i eksempel 13. l-[3-(3-Trifluor- 30 methylbenzoyl)-propionyl]-L-prolin i eddikesyre omsættes med brom som beskrevet i eksempel 17 til dannelse af l-[3--brom-3- (3-trifluormethylbenzoyl) -propionyl]-L-prolin. Sidstnævnte forbindelse omsættes med kaliumthioacetat i ethanol og vand (1:1) som beskrevet i eksempel 33, hvorved den øn-35 skede forbindelse fås som et glasagtigt materiale.

DK 161198 B

36

Eksempel 46 1-Γ3-Acetvlthio-3-(3.4-dichlorbenzovll-propionvll-L-orolin.

Til en blanding af 122 ml morpholin og 124 g p-toluen-sulfonsyre i 150 ml tetrahydrofuran sættes 106,3 g 3,4-di-5 chlorbenzaldehyd i 50 ml tetrahydrofuran. Blandingen opvarmes på et dampbad i 2 timer. Til blandingen sættes en opslæmning af 45 g kaliumcyanid i 30 ml vand. Blandingen tilbagesvales i 2 timer, og opløsningsmidlet fjernes under vakuum. Til remanensen sættes en opløsning af natriumhydrogensulfit, og 10 blandingen ekstraheres med dichlormethan. Ekstrakten vaskes med natriumhydrogensulfitopløsning og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernes under vakuum. Remanensen opløses i benzen og fortyndes med petroleumsether, og der fås 122 g a-(3,4-dichlorphenyl)-4-morpholinoacetonitril som 15 krystaller med smp. 59-60°C.

11,6 g af sidstnævnte forbindelse opløses i 125 ml tetrahydrofuran, og der tilsættes 60 dråber af en 30%'s kaliumhydroxidopløsning i ethanol. Til blandingen sættes dråbevis 6,8 ml ethylacrylat i 50 ml tetrahydrofuran i løbet 20 af 10 minutter. Efter henstand i 1,5 timer ved stuetemperatur fjernes opløsningsmidlet under vakuum. Der tilsættes toluen, og opløsningsmidlet fjernes. Der tilsættes en blanding af petroleumsether og ether, og blandingen filtreres. Filtratet koncentreres, og der fås 12,9 g af en gul olie. Olien opvar-25 mes med 70%' s eddikesyre på et dampbad i 2 timer. Opløsningsmidlet fjernes, hvorved ethyl-3-(3,4-dichlorbenzoyl)-propio-nat fås.

Denne forbindelse opvarmes sammen med 6N saltsyre til dannelse af 3-(3,4-dichlorbenzoyl)-propionsyre. 3-(3,4-30 -Dichlorbenzoyl)-propionsyre-hydroxysuccinimidester fremstilles som beskrevet i eksempel 12 og kobles til L-prolin som beskrevet i eksempel 13. l-[3-(3,4-Dichlorbenzoyl)-propio-nyl]-L-prolin i eddikesyre omsættes med brom som beskrevet i eksempel 17 til dannelse af l-[3-brom-3-(3,4-dichlorben-35 zoyl)-propionyl]-L-prolin.

Denne forbindelse omsættes med kaliumthioacetat i

DK 161198 B

37 ethanol og vand (1:1) som beskrevet i eksempel 33, hvorved den ønskede forbindelse fås som et glasagtigt materiale.

Eksempel 47 5 1-Γ 3-Acetvlthio-3-(4-chlor-3-trifluormethvlbenzovl)-propio- nvll-L-prolin.

48,9 g 5-amino-2-chlorbenzotrifluorid omdannes til 4-chlor-3-trifluormethylbenzaldehyd i overensstemmelse med fremgangsmåden beskrevet i Organic Synthesis Coll., bind 5, 10 s. 139, og der fås 13,9 g af en olie.

Sidstnævnte forbindelse (13,9 g) sættes til en blanding af 14,3 g p-toluensulfonsyre og 13,0 g morpholin i 150 ml tetrahydrofuran. Blandingen tilbagesvales i 3 timer, og der tilsættes 4,9 g kaliumcyanid i 25 ml vand. Blandingen 15 tilbagesvales i 18 timer, og opløsningsmidlet fjernes under vakuum. Remanensen fortyndes med vand og ekstraheres med dichlormethan. Ekstrakten vaskes med mættet natriumhydrogen-sulfitopløsning og mættet saltopløsning og ledes gennem en søjle af vandholdigt magnesiumsilicat. Filtratet koncentreres 20 under vakuum, og remanensen krystalliseres fra en blanding af dichlormethan og hexan, og der fås 14 g a-(4-chlor-3--trifluormethylphenyl) -4-morpholinoacetonitril som krystaller med smp. 73-74°c.

Til 14 g af denne forbindelse i 150 ml tetrahydrofuran 25 sættes 1 ml af en 30%'s kaliumhydroxidopløsning i methanol.

Til blandingen sættes 10 ml methylacrylat, og blandingen henstilles ved stuetemperatur natten over. Opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og remanensen tilsættes toluen, som afdrives. Dette gentages flere gange. Remanensen opløses i 30 dichlormethan og ledes gennem en søjle af vandholdigt magnesiumsilicat. Filtratet koncentreres til en olie. Olien opvarmes med 70%'s eddikesyre på et dampbad og hydrolyseres med 6N saltsyre som beskrevet i eksempel 45 til dannelse af 3-(4-chlor-3-trifluormethylbenzoyl)-propionsyre som beskrevet 35 i eksempel 12.

Sidstnævnte forbindelse omdannes til 3-(4-chlor-3-

DK 161198 B

38 -trifluormethylbenzoyl) -propionsyre-hydroxysuccinimidester og kobles til L-prolin som beskrevet i eksempel 13. l-[3--(4-Chlor-3-trifluormethylbenzoyl) -propionyl]-L-prolin bromeres som beskrevet i eksempel 17, og produktet omsættes med 5 kaliumthioacetat i en blanding af ethanol og vand (1:1) som beskrevet i eksempel 33, hvorved den ønskede forbindelse fås som et glasagtigt materiale.

Eksempel 48 10 l- Γ 3-Acetvlthio-3- (3-fluor-4-methoxvbenzovl) -propionvl 1 -L--prolin.

Som beskrevet i eksempel 46 omdannes 3-fluor-4-me-thoxybenzaldehyd til 3 - (3 -fluor-4 -methoxybenzoyl) -propionsyre med smp. 169-171°C.

15 Som beskrevet i eksempel 12 omdannes denne forbindelse til 3- (3-f luor-4-methoxybenzoyl) -propionsyre-hydroxysuc-cinimidester, som kobles til L-prolin som beskrevet i eksempel 13. l-[3-(3-Fluor-4-methoxybenzoyl)-propionyl]-L-prolin med smp. 180-182°C bromeres som beskrevet i eksempel 17, og 20 produktet omsættes med kaliumthioacetat i ethanol og vand som beskrevet i eksempel 33, hvorved den ønskede forbindelse fås som et glasagtigt materiale.

Eksempel 49 25 1- r3-Acetvlthio-3- (3-fluorbenzovl) -2-methvlpropionvl 1 -L- -prolin.

Til en opløsning af 6,21 g prolin og 9,07 g natrium-hydrogencarbonat i 220 ml vand sættes en opslæmning af 16,6 g 1-[3—brom-3-(3-fluorbenzoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin 30 i 220 ml ethanol. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer og filtreres. Filtratet koncentreres under vakuum til halvdelen af dets volumen, afkøles i isbad, filtreres og syrnes med koncentreret saltsyre (ca. pH 4). Blandingen ekstraheres med dichlormethan, og ekstrakten vaskes med 35 vand og mættet natriumchloridopløsning og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernes, og der fås 11,8 g

DK 161198 B

39 af et hvidt gummiagtigt materiale. Det gummiagtige materiale opløses i 1 ml ethylacetat, 10 ml hexan og 0,2 ml eddikesyre.

Ved afkøling og filtrering fås 3,18 g hvide krystaller med smp. 176-180“C (isomer A) . Filtratet chromatograferes to 5 gange over silicagel med en opløsningsmiddelblanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre (25:25:1), hvorved der fås 3.2 g af et gummiagtigt materiale (isomer B).

Isomer A omsættes med Ν,Ν-dichlorhexylamin i acetone, hvorved der fås dicyclohexylaminsaltet af isomer A. Smp.

10 164-166 ° C.

Isomer B omsættes med Ν,Ν-dicyclohexylamin i acetone, hvorved der fås dicyclohexylaminsaltet af isomer B. Smp.

98-100 ° C.

6,8 g af isomer B i form af dens dicyclohexylaminsalt 15 opløses i 50 ml vand, afkøles og syrnes med koncentreret saltsyre. Blandingen ekstraheres med ethylacetat, og ekstrakten koncentreres, og der fås 4,3 g af et gummiagtigt materiale. Det gummiagtige materiale opløses i 20 ml methanol, og der tilsættes 20 ml vand og 4 ml IN natriumhydroxid.

20 Opløsningen ledes gennem 50 g af en "IR-120"-harpiks (forvasket med IN saltsyre og derpå med vand). Fraktionerne indeholdende faste stoffer kombineres, og de faste stoffer fordeles mellem dichlormethan og vand. Dichlormethanlaget vaskes med vand og mættet natriumchloridopløsning og tørres 25 over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernes, og der fås 3.3 g af et gummiagtigt materiale, som krystalliseres fra hexan og et spor af ether, hvorved fås 3,07 g hvide krystaller med smp. 100-103eC. Ved omkrystallisation fra ethyl-acetat-hexan fås 1,5 g krystaller med smp. 107-108°C (ren 30 isomer B).

Til en opløsning af 4,0 g af isomer A (smp. 184-186°C) i 90 ml eddikesyre sættes 2,08 g brom i 10 ml eddikesyre.

Efter 18 timer ved stuetemperatur koncentreres opløsningen til en tredjedel af dens volumen og hældes i isvand. Blan-35 dingen ekstraheres med dichlormethan, og ekstrakten koncentreres til tørhed, hvorved der fås 4,78 g l-[3-brom-3-

DK 161198 B

40 -(3-fluorbenzoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin som et glas-agtigt materiale (bromderivat af isomer A).

Til en opløsning af 2,32 g af det nævnte bromderivat af isomer A i 25 ml ethanol sættes 0,82 g kaliumthioacetat, 5 og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 42 timer. Opløsningsmidlet fjernes, og remanensen fordeles mellem vand og dichlormethan. Det organiske lag vaskes med vand og mættet natriumchloridopløsning og tørres over magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernes, og der fås 2,06 g fast stof. Ved 10 rensning ved chromatografering på silicagel med en opløsningsmiddelblanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre (25:25:1) fås 0,52 g fast stof. Ved krystallisation fra ethylacetat-hexan fås 0,3 g af forbindelsen som krystaller med smp. 113-115°C (produkt af isomer A).

15 På en lignende måde som beskrevet ovenfor bromeres isomer B til dannelse af l-[3-brom-3-(3-fluorbenzoyl)-2--methylpropionyl]-L-prolin som et glasagtigt materiale (brom-eret derivat af isomer B). Det bromerede derivat af isomer B omsættes med kaliumthioacetat i ethanol, hvorved den øn-20 skede forbindelse af isomer B fås.

Eksempel 50 1- f 3-Acetylthio-3- (4-biphenvlvlcarbonvl) -propionyll-L-prolin.

En blanding af 50,0 g 3-biphenylylcarbonyl)-propion-25 syre, 23,0 g N-hydroxysuccinimid, 41,3 g N,N-dicyclohexylcar-bodiimid og 400 ml dioxan omrøres ved stuetemperatur. Blandingen filtreres, og filtratet koncentreres til en olie, som krystalliseres fra chloroform-hexan, og der fås 38 g krystaller med smp. 160-163°C. Ved omkrystallisation fra 30 chloroform-ethanol fås 32 g cremefarvede krystaller med smp. 163-164°C. En blanding af ovenstående forbindelse (20 g), 9,9 g L-prolin, 14,3 g natriumhydrogencarbonat, 170 ml vand og 200 ml ethanol omrøres ved stuetemperatur og koncentreres til halvdelen af dens volumen. Blandingen syrnes 35 med koncentreret saltsyre og filtreres, og der fås 24,0 g af et grålighvidt fast stof. Det faste stof opløses i di- 41

DK 161198 B

chlormethan og ekstraheres med vandigt natriumhydrogencar-bonat. Den vandige fase syrnes med koncentreret saltsyre og filtreres, og det faste stof vaskes med vand, og der fås 10 g grålighvide krystaller med smp. 128-131°C. Ved omkrystal-5 lisation fra CH2Cl2-hexan fås hvide krystaller med smp. 131-133°C. 7,0 g af denne forbindelse bromeres som beskrevet i eksempel 17, og der fås 2,0 g l-[3-brom-3-(4-biphenylyl-carbonyl)-propionyl]-L-prolin med smp. 135-138“C. 0,50 g af denne forbindelse omsættes med natriumthioacetat i 5 ml 10 ethanol, hvorved den ønskede forbindelse fås som hvide krystaller med smp. 173-176°C.

Eksempel 51 1-(3 -Acetvlthio-3-Γ 4-(4-chlorphenoxv)-benzoyl1-propionvl>-15 -L-prolin.

En blanding af 9,8 g 3-(4-fluorbenzoyl)-propionsyre, 6,5 g p-chlorphenol, 13,8 g kaliumcarbonat og 120 ml N,N--dimethylacetamid opvarmes under argon ved 135°c i 16 timer. Blandingen afkøles og hældes i 1 liter vand. Blandingen 20 filtreres gennem "Celite®", og filtratet syrnes med koncentreret saltsyre. Blandingen fortyndes til 2 liter og filtreres, og det faste stof omkrystalliseres fra ethanol--vand (1:1), hvorved der fås 12,2 g farveløse nåle med smp.

148-150°C. Denne forbindelse omdannes til 3-[4-(4-chlor-25 phenoxy)-benzoyl]-propionsyre-hydroxysuccinimidester som beskrevet i eksempel 12, og kobles til L-prolin til dannelse af 1-{3— [4— (chlorphenoxy) -benzoyl] -propionyl}-L-prolin. Sidstnævnte forbindelse omsættes med brom i eddikesyre til dannelse af 1-{3-brom-3-[4-(4-chlorphenoxy)-benzoyl]-propio-30 nyl}-L-prolin som beskrevet i eksempel 17. Denne forbindelse omsættes i en blanding af ethanol og vand med kaliumthioace-tat som i eksempel 33, hvorved den ønskede forbindelse fås som et glasagtigt materiale.

35

DK 161198 B

42

Eksempel 52 1- [3-Acetvlthio-3- (4-chlorbenzovll -2-methvlpropionvn-L--prolin.

En opløsning af 14,3 g 3-(4-chlorbenzoyl)-2-methyl-5 -propionsyre, fremstillet ifølge eksempel 31, 7,26 g N-hy-droxysuccinimid og 13 g dicyclohexylcarbodiimid i 150 ml dioxan omrøres ved stuetemperatur natten over, hvorpå den filtreres. Filtratet koncentreres ved formindsket tryk og optages i 100 ml vand indeholdende 7,25 g L-prolin og 10,58 10 g natriumhydrogencarbonat. Blandingen omrøres ved 25-35“C natten over og filtreres gennem "Celite®". Filtratet koncentreres til fjernelse af ethanolen. Der tilsættes koncentreret saltsyre, og blandingen ekstraheres flere gange med dichlormethan. Ekstrakterne vaskes med vand og tørres 15 (Na2S04). Ved fordampning af opløsningsmidlet fås et ravfar vet, gummiagtigt materiale, som opløses i ethylacetat. Der tilsættes hexan, hvorved der udskilles hvide krystaller.

Ved omkrystallisation fra ethylacetat fås farveløse nåle med smp. 177,5-179,5eC (isomer A) . Denne forbindelse bromeres 20 som i eksempel 17, og produktet omsættes med kaliumthioacetat i ethanol-vand som i eksempel 33, hvorved den ønskede forbindelse fås som et glasagtigt materiale.

Eksempel 53 25 1-C 3-Acetylthio-3-(3-fluorbenzoyl)-propionyl1-L-prolin.

3-(3-Fluorbenzoyl)-propionsyre fremstilles ud fra 3--fluorbenzaldehyd under anvendelse af den i eksempel 31 beskrevne fremgangsmåde og fås i form af gule nåle med smp.

97-99°C. Til en blanding af 9,8 g af denne forbindelse og 30 5,75 g N-hydroxysuccinimid i 80 ml dioxan sættes en opløsning af 10,3 g Ν,Ν-dicyclohexylcarbodiimid i 40 ml dioxan. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer og filtreres, og opløsningsmidlet fjernes under vakuum. Remanensen tritu-reres med hexan, og der fås 13,7 g grålighvide krystaller 35 med smp. 115-122“C. Ved omkrystallisation fra CH2Cl2-hexan fås 11 g hvide krystaller med smp. 130-133eC. 11 g af denne

DK 161198 B

43 forbindelse som en opslæmning i 210 ml ethanol sættes til en opløsning af 9,24 g natriumhydrogencarbonat og 6,33 g L--prolin i 210 ml vand. Efter omrøring i 18 timer ved stuetemperatur koncentreres opløsningen til halvdelen af dens volu-5 men, afkøles og syrnes med koncentreret saltsyre. Blandingen ekstraheres med dichlormethan, og ekstrakterne vaskes med vand og saltopløsning og tørres (MgSC^). Opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og der fås 10,8 g af et gummiagtigt materiale. Ved triturering med hexan indeholdende ganske 10 lidt ether fås 8,6 g hvide krystaller med smp. 84-89eC.

6,42 g af denne forbindelse bromeres som i eksempel 17 til dannelse af l-[3-(fluorbenzoyl)-propionyl]-L-prolin som et hvidt, glasagtigt materiale (7,9 g). 3,72 g af dette materiale omsættes med 1,48 g kaliumthioacetat i 35 ml ethanol 15 i 18 timer, og der fås 3,4 g af et gummiagtigt materiale. Det gummiagtige materiale chromatograferes over silicagel med en blanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre (75:25:2) som opløsningsmiddel, hvorved der fås 2,6 g af den ønskede forbindelse som et gyldenbrunt, glasagtigt materiale.

20

Eksempel 54 1-Γ 3-Acetvlthio-3-(2-naphthovl)-propionvl1-L-prolin.

Til en opløsning af 46,8 g 2-naphthaldehyd og 57,5 g p-toluensulfonsyre i 300 ml tetrahydrofuran sættes 52,5 ml 25 morpholin. Blandingen tilbagesvales i l time og afkøles, og der tilsættes en opslæmning af 19,5 g kaliumcyanid i 15 ml vand. Blandingen omrøres og tilbagesvales i 1 time, afkøles og hældes i 600 ml 10%'s kaliumcarbonatopløsning. Blandingen ekstraheres med dichlormethan, og ekstrakten vaskes med 30 vand, natriumhydrogensulfit- og saltopløsninger. Opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og remanensen tritureres med hexan, hvorved der fås 61 g af et gult fast stof. 61 g af det faste stof i 400 ml tetrahydrofuran sættes til 15 ml af en 30%'s opløsning af KOH i ethanol. Til blandingen sættes 35 24 ml acrylonitril i 150 ml tetrahydrofuran. Efter omrøring i 24 timer fjernes opløsningsmidlet. Remanensen opløses i 44

DK 16119 8 B

CH2Cl2 og vaskes med vand, og opløsningen tørres (MgS04). Opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og der fås 65 g af et mørkt, gummiagtigt materiale. Til 65 g af dette materiale sættes 230 ml eddikesyre og 38 ml vand. Blandingen tilbage-5 svales i 1,5 timer, og opløsningsmidlet fjernes. Remanensen opløses i CH2CI2 r vaskes med vand og saltopløsning og tørres (MgS04). Opløsningsmidlet fjernes, og der fås 60 g af et mørkt, gummiagtigt materiale, En blanding af 60 g af dette materiale og 200 ml 6N saltsyre tilbagesvales i 1,5 timer.

10 Blandingen afkøles og filtreres, og det faste stof vaskes med vand, hvorved der fås 49,6 g 3-(2-naphthoyl)-propionsyre med smp. 147-155“C. Ved omkrystallisation fås krystaller med smp. 168-170eC. Til en opslæmning af 9,12 g af sidstnævnte forbindelse i 60 ml dioxan sættes en opløsning af 15 8,24 g Ν,Ν-dicyclohexylcarbodiimid i 40 ml dioxan og 4,6 g N-hydroxysuccinimid. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer og filtreres. Filtratet koncentreres under vakuum. Remanensen tritureres med hexan-ether, og der fås 13,0 g fast stof med smp. 153-160°C. Det faste stof opløses i 150 20 ml CH2CI2, og der tilsættes 160 ml hexan. Ved filtrering fås 9,8 g hvide krystaller med smp. 162-165°C. 9,8 g af denne forbindelse som en opslæmning i 160 ml ethanol sættes til en opløsning af 5,18 g L-prolin og 7,58 g NaHC03 i 160 ml vand. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer, 25 og opløsningen koncentreres til det halve volumen. Opløsningen ekstraheres med ethylacetat, hvorpå den afkøles og symes med koncentreret saltsyre. Blandingen ekstraheres med CH2cl2' og ekstrakten vaskes med H20 og saltopløsning og tørres (MgS04) . Opløsningsmidlet fjernes, og der fås 9,5 g af et 30 gummiagtigt materiale, som chromatograferes over silicagel med en blanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre som opløsningsmiddel, hvorved der fås 5,5 g krystaller med smp. 115-118°C. 3,24 g af denne forbindelse, 3-(2-naphthoyl)- -propionyl-L-prolin, bromeres som i eksempel 17 til dannelse 35 af 1-[3-brom-3-(2-naphthoyl)-propionyl]-L-prolin som et glasagtigt materiale (2,55 g). 2,55 g af denne forbindelse 45

DK 16119 8 B

i 30 ml ethanol omsættes med natriumthioacetat i 18 timer, hvorved den ønskede forbindelse fås som et hvidt, glasagtigt materiale.

5 Eksempel 55 1-Γ 3-Acetvlthio-3-(4-chlorbenzovl)-prooionvl1-L-prolin.

Til en opløsning af 34 g l-[3-(4-chlorbenzoyl)-pro-pionyl]-L-prolin, fremstillet ifølge eksempel 15, i 300 ml eddikesyre sættes 17,5 g brom. Blandingen omrøres i 24 timer, 10 og opløsningsmidlet fjernes under vakuum. Remanensen fordeles mellem dichlormethan og vandig natriumhydrogencarbonatopløs-ning. Det vandige lag isoleres og sættes dråbevis til en blanding af is og koncentreret saltsyre. Blandingen ekstra-heres med dichlormethan, og ekstrakten tørres (Na2S04).

15 Opløsningsmidlet fjernes, og der fås 44 g af et gult, glasagtigt materiale. Til en blanding af 0,54 g natriummethoxid og 1,14 g thioeddikesyre i 15 ml ethanol sættes 2,0 g af det nævnte, glasagtige materiale, og blandingen omrøres i 2 timer. Blandingen hældes i knust is og ekstraheres med di-20 chlormethan. Ekstrakten tørres (Na2S04), og opløsningsmidlet fjernes under vakuum, hvorved der fås 1,5 g af den ønskede forbindelse som et gult, glasagtigt materiale.

Eksempel 56 25 1-Γ3-Benzovlthio-3-(3-fluorbenzoyl)-propionvl1-L-prolin.

2,44 g natriumhydrid (60%'s oliedispersion) vaskes med hexan. Til hydridet sættes 1,6 g thiobenzoesyre i 25 ml ethanol. Til blandingen sættes 3,7 g 1-[3-brom-3-(3-fluorbenzoyl )-propionyl]-L-prolin, og blandingen omrøres i 18 30 timer. Opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og remanensen fordeles mellem dichlormethan og vand. Det organiske lag isoleres, vaskes med vand og saltopløsning og tørres (Mgso4). Opløsningsmidlet fjernes, og der fås 4,5 g af et gummiagtigt materiale. Det gummiagtige materiale chromatograferes over 35 silicagel med en blanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre som opløsningsmiddel, hvorved der fås 2,5 g af den ønskede

DK 161198 B

46 forbindelse som et glasagtigt materiale.

Eksempel 57 1-Γ3-f Acetvl thio) -3--(2 -naphthovl) -propionvl 1 -L-prol in.

5 Til en opløsning af 46,8 g 2-naphthaldehyd og 57,5 g p-toluensulfonsyre i 300 ml tetrahydrofuran sættes 52,5 ml morpholin. Blandingen tilbagesvales i 1 time og afkøles, og der tilsættes en opslæmning af 19,5 g kaliumcyanid i 15 ml vand. Blandingen tilbagesvales i 1 time, afkøles og hældes 10 i 600 ml 10%'s kaliumcarbonatopløsning. Blandingen ekstra-heres med dichlormethan, og ekstrakterne vaskes med vand, 600 ml 10%'s natriumhydrogensulfit og saltopløsning. Ekstrakten tørres (MgS04), og opløsningsmidlet fjernes. Remanensen tritureres med hexan, og der fås 61,7 g a-(2-naphthyl)-4-15 -morpholinoacetonitril som et gult fast stof.

Til 61,7 g af sidstnævnte, faste stof i 400 ml tetrahydrofuran sættes 15 ml 30%'s KOH i ethanol. Til blandingen sættes 24 ml acrylonitril i 150 ml tetrahydrofuran (ekso-term 20°C -» 38*C). Blandingen omrøres i 18 timer ved stue-20 temperatur, og opløsningsmidlet fjernes. Remanensen opløses i dichlormethan og vaskes med vand. Opløsningsmidlet fjernes, og der fås 65 g af et mørkt, gummiagtigt materiale. En blanding af 65 g af det gummiagtige materiale, 230 ml eddikesyre og 38 ml vand tilbagesvales i 1,5 timer. Opløsningsmidlet 25 fjernes, og remanensen opløses i CH2Cl2· Ekstrakten vaskes med vand og saltopløsning og tørres (MgS04), og opløsningsmidlet fjernes, og der fås 60 g af et gummiagtigt materiale.

En blanding af det gummiagtige materiale og 200 ml 6 N saltsyre tilbagesvales i 1,5 timer. Blandingen afkøles og fil-30 treres, og der fås 49,6 g rå 3—(2-naphthoyl)-propionsyre som et gyldenbrunt, fast stof med smp. 147-155°C. Det faste stof ekstraheres med 500 ml varmt ethylacetat. Fra ethyl-acetatekstrakten fås 24,3 g krystaller i to portioner. Ved omkrystallisation 2 gange fra ethylacetat fås 10,5 g gyl-35 denbrune krystaller med smp. 168-170°C.

Til en opslæmning af 9,12 g 3(2-naphthoyl)-propionsyre

DK 161198 B

47 og 4,6 9 N-hydroxysuccinimid sættes 8,24 g N,N-dicyclohexyl-carbodiimid i 40 ml dioxan. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer og filtreres. Filtratet koncentreres til tørhed, og remanensen tritureres med en blanding af hexan 5 og ether, hvorved der fås 13,0 g fast stof. Det faste stof opløses i 150 ml dichlormethan, og der tilsættes 160 ml hexan. Ved filtrering fås 9,8 g N-hydroxysuccinimidester (smp. 162-165°C) af 3-(2-naphthoyl)-propionsyre.

9,77 g af den fremkomne forbindelse opslæmmet i 160 10 ml ethanol sættes til en opløsning af 5,18 g L-prolin og 7,58 g natriumhydrogencarbonat i 160 ml vand. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer og koncentreres under vakuum til det halve volumen. Blandingen ekstraheres med ethylacetat, afkøles i isbad og syrnes med koncentreret 15 saltsyre. Den syrnede blanding ekstraheres med dichlormethan, og ekstrakterne vaskes med vand og saltopløsning og tørres (MgS04). Opløsningsmidlet fjernes, og der fås 9,5 g l-[3-(2-naphthoyl)-propionyl]-L-prolin som et gummiagtigt materiale. Ved chromatografering af materialet på en 3,81 x 20 45,72 cm silicagelsøjle (0,074-0,246 mm) med en blanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre (1:1:0,4) som opløsningsmiddel fås 5,5 g krystaller, som omkrystalliseres fra en blanding af dichlormethan-hexan, og der fås 4,9 g hvide krystaller med smp. 116-118’C.

25 Til 3,24 g af den fremkomne forbindelse i 35 ml ed dikesyre sættes 1,6 g brom i 10 ml eddikesyre. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer, koncentreres til det halve volumen og hældes i isvand. Blandingen ekstraheres med dichlormethan, og ekstrakterne vaskes med vand og salt-30 opløsning og tørres (MgS04). Opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og der fås 4,0 g af et gummiagtigt materiale. Det gummiagtige materiale chromatograferes over silicagel med en blanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre (1:1:0,4) som opløsningsmiddel. Ved koncentrering af søjlefraktioner 35 fås 2,6 g 1-[3-brom-3-(2-naphthoyl)-propionyl]-L-prolin som et hvidt, amorft, fast stof med smp. 50-80*C.

DK 161198 B

48

Til 30 ml ethanol, som er afkølet i isbad, sættes 380 mg natriumhydrid (60%·s dispersion i olie) og 0,67 ml thioleddikesyre. Efter omrøring i 30 minutter tilsættes 2,55 g l-[3-brom-3-(2-naphthoyl)-propionyl]-L-prolin, og 5 blandingen omrøres i 18 timer. Opløsningsmidlet fjernes under vakuum. Remanensen chromatograferes på en silicagel-søjle med en blanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre (7,5:2,5:0,2) som opløsningsmiddel, hvorved der fås 1,2 g af den ønskede forbindelse som et hvidt, glasagtigt mate-10 riale, [a]D = -36° (c = 0,96, ethanol).

Eksempel 58 [S-(R*,S*)]-1-(3-Acetylthio-3-benzoyl-2-methylpropionyl)-L--prolin og [S-(R*,R*)]-1-(3-acetylthio-3-benzoyl-2-methyl-15 propiony1)-L-prolin.

22,6 g (S)—1—(3—benzoyl—2—methylpropionyl)-L-prolin (isomer A) med smp. 216-219°C i 400 ml eddikesyre bromeres som beskrevet i eksempel 9 med 12,5 g brom med tilsætning 20 af hydrogenbromidgas som katalysator. Efter 2 timer koncentreres opløsningsmidlet til en tredjedel af voluminet og hældes i isvand. Blandingen ekstraheres med dichlormethan, og ekstrakterne vaskes med vand og saltopløsning og tørres (MgS04). Ved koncentrering af ekstrakten fås et hvidt glas-25 agtigt materiale [blanding af [S-(R*,S*)]-l-(3-brom-3-ben-zoyl-2-methylpropionyl)-L-prolin og [S-,(R*,R*)]-l-(3-brom--3-benzoyl-2-methylpropionyl)-L-prolin].

23,9 g af disse forbindelser (blanding af diastereo-mere) omsættes som beskrevet i eksempel 32 med natriumthiol-30 acetat, fremstillet af 9,0 ml thioleddikesyre og 2,92 g NaH (60%'s oliedispersion), i 2,2 liter acetonitril. Blandingen omrøres i 18 timer ved stuetemperatur, og der tilsættes 90 ml eddikesyre. Opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og remanensen fordeles mellem dichlormethan og vand. Det or-35 ganiske lag isoleres og tørres (MgS04), og opløsningsmidlet fjernes under vakuum, hvorved der fås 23 g gummiagtigt materiale. Det gummiagtige materiale opløses i varmt ethylace-

DK 161198 B

49 tat, og opløsningen afkøles og filtreres (2,7 g fast stof).

Til filtratet sættes 70 ml hexan, og opløsningsmidlet dekanteres fra det gummiagtige materiale. Den dekanterede opløsning koncentreres, og der fås 19,1 g gummiagtigt materiale, 5 som chromatograferes på en 5,08 x 63,50 cm silicagelsøjle (0,074-0,246 mm) med en blanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre (5:5:0,2). Af de første fraktioner fås 4,53 g fast stof, som krystalliseres fra en blanding af ethylacetat og hexan, og der fås 3,14 g hvide krystaller med smp. 123-10 125°C. Ved omkrystallisation fra en blanding af acetone og hexan fås 3,0 g hvide krystaller med smp. 160-161°C af [S—(R*,S*)]-l-(3-acetylthio-3-benzoyl-2-methylpropionyl)-L--prolin; [a]23° = +275° ±1° (c = ,0,956, ethanol). Fraktionerne fra søjlen, som viser en blanding af diastereomere 15 ved tyndtlagschromatografi, omchromatograferes. De senere fraktioner visende én komponent kombineres, hvorved fås 4,1 g [S-(R*,R*)]”1”(3-acetylthio-3-benzoyl-2-methylpropionyl)-L—prolin som et hvidt, glasagtigt materiale, [α]23β = -91° ±1° (c = 1,08, ethanol).

20

Eksempel 59 [S-(R*,S*)]-1-[3-Acety1thio-3-(3-fluorbenz oy1)-2-methylpro- pionyl]-L-prolin og [S-(R*,R*)]-l-[3-acetylthio-3-(3-fluor- benzoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin.

25 - 4/0 g (S)-l-[3-(3-fluorbenzoyl)-2-methylpropionyl]--L-prolin (isomer A) med smp. 182-185°C bromeres som beskrevet i eksempel 49 til dannelse af bromderivatet af isomer A [blanding af [S>-(R*,S*) ]-l-[3-brom-3-(3-fluorbenzoyl) -2-30 -methylpropionyl]-L-prolin og [S-(R*,R*)]-l-[3-brom-3-(3--fluorbenzoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin. Ved adskillelse af blandingen ved chromatografi på en prep LC/500 søjle med en blanding af hexan, ethylacetat og eddikesyre (75:25:2) som opløsningsmiddel fås 1,68 g ren diastereomer betegnet X 35 og 0,74 g ren diastereomer betegnet Y. Ved omsætning af diastereomer X med kaliumthioacetat i ethanol i 4 dage fås de ønskede forbindelser (blanding af diastereomere). Ved

DK 161198 B

50 omsætning af diastereomer Y med kaliumthioacetat i ethanol i 4 dage fås de her ønskede forbindelser (blanding af dia-stereomere). Ved chromatografering af blandingen på en si- j licagelsøjle med en blanding af ethylacetat, hexan og ed- j 5 dikesyre (5:5:0,2) udskiller diastereomerene, og der fås | [S—(R*,S*)]-l-[3-acetylthio-3-(3-fluorbenzoyl)-2-methylpro-pionyl]-L-prolin med smp. 158-159°C; [ot]= +252* ± 3° (c = 0,318, ethanol) og [S-(R*,R*)]-l-[3-acetylthio-3-(3-fluor-benzoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin som et hvidt, glasagtigt 10 materiale [a]D = -147° ±1° (c = 0,834, ethanol).

Eksempel 60 [R-(R*,S*)]-l-[3-Acetylthio-3-(3-fluorbenzoyl)-2-methylpro-pionyl]-L-prolin og [R-(R*,R*)]-l-[3-acetylthio-3-(3-fluor-15 benzoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin.

(R)-l-[3-(3-Fluorbenzoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin (isomer B) , smp. 107-108“C, isoleres fra (S)-diastereomer (isomer A) som beskrevet i eksempel 49. Til 4,76 g af den nævnte 20 forbindelse (isomer B, smp. 107-108°C) i 50 ml eddikesyre sættes 2,48 g brom i 25 ml eddikesyre. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer. Blandingen filtreres, og det faste stof vaskes med petroleumsether (kp. 30-60°C), og der fås 3,26 g hvide krystaller med smp. 128-135°C (sønderde-25 ling). Fra moderluden fås yderligere 2,9 g fast stof. De faste stoffer er en blanding af [R-(R*,S*)]-l-[3-brom-3-(3--fluorbenzoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin og [R-(R*,R*)]--l-[3-brom-3-(3-fluorbenzoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin.

5,7 g af blandingen omsættes med natriumthioacetat 30 (fremstillet af 1,8 ml thioleddikesyre og 0,885 g NaH (60%'s dispersion i olie)) i 150 ml acetonitril ved stuetemperatur i 5 minutter. Til blandingen sættes 15 ml eddikesyre, og opløsningsmidlet fjernes under vakuum. Remanensen fordeles mellem dichlormethan og vand, og det organiske lag isoleres, 35 vaskes med vand og saltopløsning og tørres (MgS04). Opløsningsmidlet fjernes, og der fås 5,9 g af et gummiagtigt materiale. Det gummiagtige materiale chromatograferes over

DK 161198B

51 silicagel med en blanding af ethyl acetat, hexan og eddikesyre (5:5:0,2) som opløsningsmiddel, hvorved der fås 1,5 g [R- (R*,E*)]-l-[3-acetylthio-3-(3-fluorbenzoyl)-2-methylpro-pionyl]-L-prolin som et hvidt glasagtigt materiale, [a]D = 5 +18° ±1° (c = 1,075, ethanol), og 0,45 g [R-(R*,S*)]-l-[3- -acetylthio-3- (3-fluorbenzoyl) -2-methylpropionyl] -L-prolin som hvide krystaller med smp. 86-98*C. Ved omkrystallisation fra en blanding af dichlormethan og petroleumsether (kp. 30-60°C) fås hvide krystaller med smp. 91-93*C, [a]D = -325“ 10 ±2" (c = 0,649, ethanol).

Eksempel 61 [ S- (R*, S*) ] -1-[3-Acetylthio-3- (4-brombenzoyl) -2-methylpropionyl]-L-prolin og [S-(R*,R*)]-l-[3-acetylthio-3-(4-brom-15 benzoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin.

Til en opløsning af 100 g 4-brombenzaldehyd i 400 ml tetrahydrofuran sættes 104 g p-toluensulfonsyre-monohydrat.

Til opløsningen sættes dråbevis en opløsning af 94,5 ml 20 morpholin i 100 ml tetrahydrofuran. Blandingen tilbagesvales i 1 time og afkøles, og der tilsættes en opslæmning af 35,2 g kaliumcyanid i 27 ml vand. Blandingen tilbagesvales i 18 timer, afkøles og hældes i 1 liter 10%'s kaliumcarbonat. Blandingen ekstraheres med dichlormethan, og ekstrakten 25 vaskes med vand, 10%'s natriumhydrogensulfit og saltopløsning og tørres (MgS04). Opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og remanensen tritureres med hexan og filtreres, og der fås 136,2 g hvide krystaller med smp. 88-90*C. Til 136,2 g af det dannede a-(4-bromphenyl)-4-morpholinacetonitril i 800 30 ml tetrahydrofuran sættes 25 ml 30%'s kaliumhydroxid i ethanol. Til den omrørte blanding sættes langsomt 42,5 ml me-thacrylonitril i 200 ml tetrahydrofuran (eksoterm 17-34“C). Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer og filtreres, og filtratet koncentreres til 200 ml. Ved tilsætning 35 af 100 ml ether, afkøling og filtrering fås 113,7 g hvide krystaller med smp. 170-175°C. En blanding af denne forbindelse, 500 ml eddikesyre og 58 ml vand tilbagesvales i 1

DK 161198 B

52 time, og opløsningsmidlet fjernes. Remanensen opløses i dichlormethan og vaskes med vand og saltopløsning og tørres (MgS04). Opløsningsmidlet fjernes, og der fås 83 g 2-methyl--3-(4-brombenzoyl)-propionitril med smp. 101-103“C. En blan-5 ding af den nævnte forbindelse (83 g) og 400 ml 6N saltsyre tilbagesvales i 18 timer. Blandingen afkøles i isbad og filtreres. Det faste stof vaskes med vand og opløses i 400 ml dichlormethan. Dichlormethanet tørres (MgS04) og koncentreres på et dampbad under tilsætning af hexan. Ved af-10 køling og filtrering fås 72,0 g hvide krystaller af 3-(4--brombenzoyl)-2-methylpropionsyre med smp. 124-125°C.

72 g af sidstnævnte forbindelse omdannes til N-hy-droxysuccinimidester med smp. 99-104°C som beskrevet i eksempel 7, og 94,6 g af den aktiverede ester kobles til 44,9 15 g L-prolin, som beskrevet i eksempel 8, hvorved der fås 70,7 g l-[3-(4-brombenzoyl)-2-methylpropionyl)-L-prolin som et gummiagtigt materiale (blanding af diastereomere). Det gummiagtige materiale opløses i 200 ml varm ethylacetat, og der tilsættes 250 ml hexan. Ved afkøling fås 19,3 g fast 20 stof, som omkrystalliseres fra ethylacetat, hvorved fås 10,3 g (S)-1-[3-(4-brombenzoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin med smp. 165-167°C (isomer A). Fra moderluden fås en yderligere mængde af isomer A, som renses ved chromatografering på silicagel. Fra søjlen fås (R)-l-[3-(4-brombenzoyl)-2-25 -methylpropionyl]-L-prolin (isomer B) . Til en blanding af 10,2 g af isomer A i 125 ml eddikesyre sættes 4,43 g brom i 20 ml eddikesyre. Der tilsættes vandfrit hydrogenbromid, og blandingen omrøres i 3 timer. Blandingen koncentreres til en tredjedel af voluminet og hældes i isvand. Blandingen 30 ekstraheres med dichlormethan, og ekstrakten vaskes med vand og saltopløsning og tørres (MgS04). Opløsningsmidlet fjernes under vakuum, og der fås 12,7 g af et glasagtigt materiale (blanding af diastereomere). En blanding af 10,5 g af det glasagtige materiale i 150 ml acetonitril sættes 35 dråbevis til en blanding af natriumthioacetat, fremstillet af 2,9 ml thioleddikesyre og 1,4 g NaH (60%'s oliedisper-

DK 161198 B

53 sion), i 150 ml acetonitril. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 18 timer, der tilsættes 30 ml eddikesyre, og opløsningsmidlet fjernes under vakuum. Remanensen fordeles mellem dichlormethan og vand. Dichlormethanlaget isoleres, 5 vaskes med vand og saltopløsning og tørres (MgS04). Opløsningsmidlet fjernes, og remanensen chromatograferes på en silicagelsøjle med en blanding af ethylacetat, hexan og eddikesyre (5:5:0,2) som opløsningsmiddel. De første fraktioner, som hovedsagelig indeholder én komponent, blandes 10 og chromatograferes på silicagel, og der fås 5,1 g fast stof. Ved krystallisation fra en blanding af ethylacetat og hexan fås 3,5 g [S-(g*,S*)]-l-[3-acetylthio-3-(4-bromben-zoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin som hvide krystaller med smp. 136-138'C, [a]D = +211° ±1° (c = 0,971, ethanol). De 15 senere fraktioner fra søjlechromatograferingen indeholdende én komponent påvist ved tyndtlagschromatografi blandes, hvorved fås 1,2 g [S-(B*,R*)]-l-[3-acetylthio-3-(4-bromben-zoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolin som et hvidt, glasagtigt materiale, [a]D = -69° ±1° (c = 0,983, ethanol).

20

Eksempel 62 1- Γ 3-Acetylthio-3- (2-naphthovl) -2-methvlpropionvll-L-prolin.

2-Naphthaldehyd omdannes som beskrevet i eksempel 42 til 3-(2-naphthoyl)-2-methylpropionsyre og kobles til L-25 -prolin. l-[3-(2-Naphthoyl)-2-methylpropionyl]-L-prolinet opdeles i isomere A og B. Isomer A, (S)-l-[3-(2-naphthoyl)--2-methylpropionyl]-L-prolin, omsættes med brom i eddikesyre, og produktet omsættes med natriumthioacetat i acetonitril som i eksempel 61, hvorved fås den ønskede forbindelse som 30 et glasagtigt materiale (blanding af diastereomere).

Eksempel 63 1 - Γ 3-Acetvlthio-3- (4-chlorbenzovl) -2-methvlpropionvl 1 -L--prolin.

35 Til en opslæmning af 14,3 g 3-(4-chlorbenzoyl)-2- -methylpropionsyre og 7,26 g N-hydroxysuccinimid i 150 ml

DK 161198 B

54 dioxan sættes 13 g N,N-dicyclohexylcarbodiimid. Efter omrøring natten over filtreres blandingen, og det faste stof vaskes med ether. Det kombinerede filtrat og vaskevæskerne koncentreres under vakuum, hvorved der fås 20,1 g af en 5 olie. Olien sættes til en opløsning af 7,25 g L-prolin og 10,58 g natriumhydrogencarbonat i 200 ml 50%'s ethanol. Blandingen omrøres natten over og filtreres gennem diatome jord. Filtratet syrnes med koncentreret saltsyre og ekstra-heres med dichlormethan. Ekstrakten vaskes med vand og tørres 10 (MgS04), og opløsningsmidlet fjernes under vakuum, hvorved fås et ravfarvet, gummiagtigt materiale. Det gummiagtige materiale opløses i ethylacetat-hexan, og blandingen henstilles i flere dage. Ved filtrering fås 3,23 g krystaller med smp. 170-179°C. Ved omkrystallisation fra ethylacetat-15 -hexan fås 2,81 g (S)-l-[3-(4-chlorbenzoyl)-2-methylpropio-nyl]-L-prolin som farveløse nåle med smp. 177,5-179,5°C. Forbindelsen opløses i 50 ml eddikesyre, og der tilsættes 1,27 g brom. Blandingen omrøres natten over, hvorpå den koncentreres under vakuum og hældes i isvand. Blandingen 20 ekstraheres med dichlormethan, og ekstrakten vaskes med vand og tørres (MgS04). Opløsningsmidlet fjernes, hvorved der fås 3,15 g af et hvidt, glasagtigt materiale.

Til en opløsning af 0,454 g natriummethoxid i 40 ml methanol sættes 0,684 g thioleddikesyre. Til opløsningen 25 sættes 3,07 g af det nævnte, glasagtige materiale, og blandingen omrøres i 3 dage. Blandingen hældes i isvand og ekstraheres med dichlormethan. Ekstrakten koncentreres, hvorved der fås 2,85 g af den ønskede forbindelse (blanding af dia-stereomere) som et hvidt, glasagtigt materiale.

30

Eksempel 64 1-Γ3-(4-tert-Butvlbenzovl)-propionvll-L-prolin.

Som beskrevet i eksempel 63 omsættes 14 g 3-(4-tert--butylbenzoyl)-propionsyre med 6,9 g N-hydroxysuccinimid i 35 nærværelse af 12,36 g N,N-dicyclohexylcarbodiimid, hvorved der fås 15,5 g 3-(4-tert-butylbenzoyl)-propionsyre-N-hydroxy-

DK 16119 8 B

55 succinimidester med smp. 135-138°c. Denne forbindelse sættes til en opløsning af 8,05 g L-prolin og 11,76 g natriumhy-drogencarbonat i 400 ml ethanol-vand (1:1). Blandingen omrøres natten over og filtreres, og filtratet koncentreres 5 under vakuum. Blandingen syrnes med koncentreret saltsyre og ekstraheres med dichlormethan. Opløsningsmidlet fjernes, og der fås et ravfarvet, gummiagtigt materiale, som chroma-tograferes på 150 g silicagel med en blanding af hexan og ethylacetat (1:1) indeholdende 2%'s eddikesyre som opløs-10 ningsmiddel. Fra søjlen fås 12,4 g af et glasagtigt materiale. Til en opløsning af 9,8 g af det glasagtige materiale i 150 ml eddikesyre sættes 4,8 g brom. Blandingen omrøres natten over, koncentreres og hældes i isvand. Blandingen ekstraheres med dichlormethan, og ekstrakten koncentreres, 15 hvorved der fås 12,1 g glasagtigt materiale. Det glasagtige materiale sættes til en opløsning af 1,94 g natriummethoxid og 4,56 g thioleddikesyre i 50 ml ethanol. Efter omrøring i 2 timer tilsættes 1 ml eddikesyre, og blandingen fortyndes med vand. Blandingen ekstraheres med dichlormethan, ekstrakt-20 en vaskes med vand og tørres (MgS04), og opløsningsmidlet fjernes, hvorved der fås 12 g forbindelse som et gult, glasagtigt materiale.

Eksemnel 65 25 l-f3-Acetylthio-3-(5-indanvlcarbonvl)-propionyll-L-prolin.

21,8 g 3-(5-indanylcarbonyl)-propionsyre omsættes med 11,5 g N-hydroxysuccinimid og 20,6 g N,N-dicyclohexyl-carbodiimid i dioxan, som beskrevet i eksempel 64, hvorved der fås 27,6 g N-hydroxysuccinimidester som gule krystaller 30 med smp. 112-117“C. Denne forbindelse sættes til en opløsning af 12,25 g L-prolin og 17,8 g natriumhydrogencarbonat i 600 ml ethanol-vand (1:1). Blandingen omrøres natten over og filtreres, og filtratet koncentreres og syrnes til pH 4 med koncentreret saltsyre. Blandingen ekstraheres med dichlor-35 methan, og ekstrakterne koncentreres, hvorved der fås 24 g af en olie. Ved henstand udfælder krystaller, og der tilsæt- DK 161198B .

56 tes en blanding af ethylacetat og ether. Ved filtrering fås 15,5 g l-[3-(5-indanylcarbonyl)-propionyl]-L-prolin som hvide krystaller med smp. 89-91°C.

Til en opløsning af 13,9 g af den fremkomne forbin-5 delse i 200 ml eddikesyre sættes 7,06 g brom. Blandingen omrøres natten over og koncentreres under vakuum til en olie. Olien chromatograferes på en silicagelsøjle med en blanding af hexan og ethylacetat (1:1) indeholdende 2% eddikesyre som opløsningsmiddel, hvorved der fås 14,9 g af en 10 lysegul olie. Olien sættes til en opløsning af 2,55 g na-triummethoxid og 5,78 g thioleddikesyre i 75 ml methanol, og blandingen omrøres natten over. Blandingen oparbejdes ved syrning, fortyndes med vand og ekstraheres med dichlor-methan, hvorved der fås 13 g forbindelse som et lysegult, 15 glasagtigt materiale.

Eksempel 66

Fremstilling af 50 mg tabletter.

Pr. tablet Pr. 10.000 tabletter 20 0,050 g l-[3-(m-Fluorbenzoyl)- -2-acetylthio-propio-nyl]-L-prolin 500 g 0,080 g Lactose 800 g 0,010 g Majsstivelse (til blanding) 100 g 25 0,008 g Majsstivelse (til pasta) 75 g 0,148 g 1475 g 0.002 g Magnesiumstearat (1%) 15 g 0,150 g 1490 g 30 1- [ 3 - (m-Fluorbenzoyl) -2-acetyl thiopropionyl ]-L-pro- lin, lactose og majsstivelse (til blanding) blandes. Majsstivelsen (til pasta) suspenderes i 600 ml vand og opvarmes med omrøring til dannelse af en pasta. Denne pasta anvendes derpå til at granulere de blandede pulvere. Der tilsættes 35 yderligere vand, hvis det er nødvendigt. Det våde granulat sigtes gennem en nr. 8 håndsigte og tørres ved 49°C. Det

DK 161198 B

57 tørre granulat sigtes derpå gennem en nr. 16 sigte. Blandingen smøres med 1% magnesiumstearat og komprimeres til tabletter i en passende tabletteringsmaskine.

5 Eksempel 67

Fremstilling af oral suspension Bestanddel Mængde 1—[3-(3,4-Dimethoxybenzoyl)-2-ben-zoylthiopropionyl]-L-prolin 500 mg 10 Sorbitolopløsning (70% N.F.) 40 ml

Natriumbenzoat 150 mg

Saccharin 10 mg Rødt farvestof 10 mg

Kirsebærsmagsstof 50 mg 15 Destilleret vand ad 100 ml

Sorbitolopløsningen sættes til 40 ml destilleret vand, og 1-[3- (3,4-dimethoxybenzoyl) -2-benzoylthiopropionyl]--L-prolinet suspenderes deri. Saccharin, natriumbenzoat, 20 smags- og farvestof tilsættes og opløses. Voluminet indstilles på 100 ml med destilleret vand. Hver ml af siruppen indeholder 5 mg l-[3-(3,4-dimethoxybenzoyl)-2-benzoylthiopropionyl ]-L-prolin.

25 Eksempel 68

Fremstilling af parenteral opløsning.

I en opløsning af 700 ml propylenglycol og 200 ml injektionsvand suspenderes 20,0 g l-[3-(4-trifluormethylben-zoyl) -2-mercaptopropionyl]-L-prolin-natriumsalt med omrøring.

30 Når suspenderingen er afsluttet, indstilles pH på 5,5 med saltsyre, og voluminet indstilles på 1000 ml med injektionsvand. Præparatet steriliseres, fyldes på 5,0 ml ampuller, som hver indeholder 2,0 ml (svarende til 40 mg af medikamentet) og forsegles under nitrogen.

Claims

58 DK 161198 B PATENTKRAV. Analogifremgangsmåde til fremstilling af substituerede ω-aroylpropionyl-L-proliner med den almene formel 5 0 0 3. ii " ] aryl-c-ch-ch-c-n^ R3 R4 VJ ( ’ co2R5 10 hvor R3 er mercapto, benzoylthio eller alkanoylthio med 2-4 carbonatomer, R4 er hydrogen eller alkyl med op til 4 car-bonatomer, R5 er hydrogen eller alkyl med op til 4 carbonatomer, og ARYL er 1-naphthyl, 2-naphthyl, 4-biphenylyl, 5-15 -indanyl, 4-indanyl eller en gruppe med formlen 20 <*7>m hvor R6 er hydrogen, fluor, chlor, brom, trifluormethyl, halogenphenoxy eller alkyl med op til 4 carbonatomer, R7 er chlor, fluor, brom, alkyl med op til 4 carbonatomer eller 25 alkoxy med op til 4 carbonatomer, og R^ og R7 sidder i m-eller p-stilling, og m er 0, 1 eller 2, herunder de dia-stereomere former, eller kationiske salte deraf, når R5 er hydrogen, kendetegnet ved, at en forbindelse med formlen 30 ° ° / \ ARYL-C-CH-CH-C-N \ (χχ) X R4 A ς C02Rb 35 DK 161198 B 59 hvor R4, R5 og ARYL har ovennævnte betydninger, og X er chlor, brom eller iod, omsættes med anionen i et thiolerings-reagens med formlen H-R3, hvor R3 har ovennævnte betydning, 5. et indifferent organisk opløsningsmiddel, og, om ønsket, når R3 er forskellig fra hydrogen, denne thiobeskyttelses-gruppe fraspaltes til dannelse af en mercaptogruppe med ammoniumhydroxid eller hydroxylamin, og der, om ønsket dannes et kationisk salt af forbindelserne med formlen (I), når R5 10 er hydrogen.