DK159397B - Fremgangsmaade til fremstilling af cholesterolsyntese-inhiberende derivater af forbindelserne ml-236b lacton og ml-236b carboxylsyre - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af cholesterolsyntese-inhiberende derivater af forbindelserne ml-236b lacton og ml-236b carboxylsyre Download PDFInfo
- Publication number
- DK159397B DK159397B DK325782A DK325782A DK159397B DK 159397 B DK159397 B DK 159397B DK 325782 A DK325782 A DK 325782A DK 325782 A DK325782 A DK 325782A DK 159397 B DK159397 B DK 159397B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- compound
- formula
- lactone
- carboxylic acid
- compounds
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
- C07D309/16—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
- C07D309/28—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D309/30—Oxygen atoms, e.g. delta-lactones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Steering-Linkage Mechanisms And Four-Wheel Steering (AREA)
- Transplanting Machines (AREA)
- Switches With Compound Operations (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
1 DK 159397B
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af en række hidtil ukendte derivater af forbindelserne ML-236B som defineret i krav l's indledning, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del angivne.
5 ML-236B er omhandlet i US-patentskrift nr. 3 983 140, og udtrykket "ML 236B" anvendes til omtale af to forbindelser, en lacton benævnt "ML-236B lacton", der har formlen: 10 γ-γ'Οπ
" --.'V'· S
CH3 20 og den tilsvarende frie hydroxycarboxylsyre benævnt "ML- pc 236B carboxylsyre", der har formlen: 30 35
DK 159397 B
2 HO i 5 ° '| Ό CH3 15
Disse ML-236B forbindelser er blevet isoleret og renset ud fra stofskifteprodukter fra mikroorganismer af slægten Penicillium, specielt Penicillium citrinum, en art af blåskimmel. De har vist sig at hæmme cholesterolbiosynte-20 sen af enzymer eller dyrkede celler isoleret fra forsøgsdyr ved at konkurrere med det hastighedsbegrænsende enzym, der er aktivt ved cholesterolbiosyntesen, dvs. 3-hy-droxy-3-methylglutaryl-coenzym A-reductase, og som et resultat heraf reducerer de signifikant serumcholesterolni-25 veauerne hos dyr (Journal of Antibiotics, 29, 1346 (1976)).
En række forbindelser, der strukturelt er beslægtet med ML-236 B, er også blevet opdaget, og visse har vist sig 30 at have samme evne til at hæmme cholesterolbiosyntesen.
Blandt de ML-236B derivater, der er blevet opdaget, er den bedste omhandlet i engelsk patentskrift 2 077 264. I lactonformen kan disse forbindelser afbildes med formlen; 35
DK 159397B
3 Ον/ 5 i CH] ^A^/L/CHs
10 Γ T T
15 og de er blvet betegnet IsoM-4 lacton og IsoM-4' lacton afhængigt af den specielle konfiguration ved de forskellige asymmetriske carbonatomer, der findes i molekylet.
Den tilsvarende IsoM-4-carboxylsyre og IsoM-4'-carboxylsyre er også omhandlet, og disse forbindelser fandtes al-20 le at være i stand til at hæmme cholesterolbiosyntesen.
IsoM-4- og IsoM-4'-forbindelserne og deres alkalimetalsalte kan fremstilles ved enzymatisk hydroxylering af Ml-236B eller et derivat heraf, og andre salte og estere kan 25 naturligvis herefter fremstilles ved almindelig saltdannelse eller esterificering, idet der gås ud fra det fremstillede hydroxyleringsprodukt. Den enzymatiske hydroxylering udføres fortrinsvis under anvendelse af en passende mikroorganisme eller et enzymholdigt ekstrakt af disse 30 mikroorganimer, skønt den også kan udføres som en del af pattedyrsmetabolismen af M1-236B eller under anvendelse af lever- eller et enzymholdigt ekstrakt af leveren fra disse dyr. Foretrukne mikroorganismer til denne metode er mikroorganismer af slægterne Absidia, Cunninghamella, 35 Syncephalastrum, Mucor, Pycnoporus eller Rhizotonia.
DK 159397 B
4
Det har nu overraskende vist sig, at behandlingen af Ml-236B-lacton eller ML-236B carboxylsyre eller et salt eller en alkylester heraf med visse af disse mikroorganismer eller med enzymholdige ekstrakter heraf også kan 5 fremstille andre specielle, men beslægtede forbindelser, der ligeledes har vist sig i stand til at hæmme choleste-rolbiosyntesen.
Herudover nedbrydes de omhandlede forbindelser med større 10 besvær efter administrering end ML-236B. De omhandlede forbindelser mister derfor ikke så let aktiviteten, hvorfor de har en mere vedvarende virkning, med medfølgende fordele, der vil være velkendt inden for fagområdet.
15 Forbindelserne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er lactonen med formlen I: 20
0 | I
25 ^ CH3 30 såvel som dens tilsvarende ^,· v j e rrx hydroxy-carboxylsyre, der 35 kan afbildes med formlen ιχ.
DK 159397 B
5
.°H
Hio r Η0\Χ o 10 ch3 CH3 15 og farmaceutisk acceptable alkalimetalsalte eller C^-C^-alkylestere af syren.
20
Forbindelsen med formlen I omtales som 6-methoxy-IsoML-236B laeton, og forbindelsen med formlen II omtales som 6-methoxy-IsoML-236B carboxylsyre, idet saltene og estre-ne benævnes i overensstemmelse hermed.
25
Alkalimetalsaltene af 6-methoxy-IsoML-236B carboxylsyre kan afbildes med formel III: M—---000-''Ύ°Η 30 H°\^ 0 æ \ in CH3rrVCH3
DK 159397B
6 hvori M betyder et alkalimetalatom specielt natrium eller kalium.
Esterne af 6-methoxy-IsoML-236B carboxylsyre har formlen 5 V: R----ooc^/0” 10 H0\^· o 15 CH3 ao ^^VA.0CH3.
hvori R betegner alkoholdelen af en ester.
25 R kan være en lige eller forgrenet gruppe såsom methyl-, ethyl-, propyl-, isopropyl-, isobutyl- eller n-butyl.
De omhandlede forbindelser har vist sig at hæmme cho-lesterolbiosyntesen i leveren, og de kan således anvendes 30 ved behandlingen af hypercholesteraemi eller forhindre arteriosclerose på samme måde som de forbindelser, der er omhandlet i engelske patent skrifter nr. 2 075 013 og nr.
2 077 264.
35 De hæmmende virkninger af visse af de omhandlede forbindelser udtrykt som koncentrationen i ug/ml, der er nødvendig for at hæmme cholesterolbiosyntesen med 50 %
7 DK 159397 B
(målt ved metoden beskrevet i Journal of Biological Chemistry, 234, 2835 (1959)), er følgende: 6-methoxy-IsoML-236B lacton .................. 0,015 5 Natrium-6-methoxy-IsoML-236B carboxylat ...... 0,0044.
Til sammenligning er værdien for M1-236B lacton 0,010 fig/ml, der er sammenlignelig med de niveauer, der opnås med de omhandlede forbindelser, men som tidligere bemær-10 ket er aktiviteten af de her omhandlede forbindelser på grund af deres modstandsdygtighed mod in vivo nedbrydning betydeligt længere varende.
De omhandlede forbindelser kan administreres på sædvanlig 15 måde, f.eks. parenteralt (f.eks. subcutant, intravenøst eller intramusculært) eller peroralt, (f.eks. i form af tabletter, kapsler, pulvere eller granuler). Daglig dosis til en voksen patient vil naturligvis variere, afhængigt af patientens alder, legemsvægt og tilstand såvel som ad-20 ministreringsvejen og hyppigheden, men sædvanligvis administreres de omhandlede forbindelser i en mængde på fra 0,5 til 500 mg/dag for voksne i en enkelt dosis eller i opdelte doser, fortrinsvis 3 eller 4 gange om dagen.
25 Den omhandlede enzymatiske alkoxyleringsfremgangsmåde udføres fortrinsvis ved at bringe M-236B lacton, ML-236B carboxylsyre eller et alkalimetalsalt eller en C-^-C^-al-kylester af syren (i det efterfølgende sammenfattende omtalt som "ML236B forbindelsen") i kontakt med en mikro-30 organisme af slægten Syncephalastrum, Absidia eller Cunninghamella, der er i stand til at omdanne ML-236B forbindelsen til den ønskede omhandlede forbindelse, eller ved at bringe ML-236B forbindelsen i kontakt med en enzymholdig ekstrakt af mikroorganismen og herefter ad-35 skille den omhandlede forbindelse fra dyrkningssubstratet eller reaktionsblandingen.
DK 159397 B
8
Foretrukne mikroorganismer er Syncephalastrum racemosum IFO-4814 (NRRL 12562), Syncephalastrum racemosum IFO-4828 (NRRL 12563), Absidia coerulea IFO-4423 (NRRL 12560) og Cunninghamella echinulata IFO-4445 (NRRL 12561). Disse 5 mikroorganismer er alle frit tilgængelige under ovennævnte deponeringsnumre uden begrænsninger indtil mindst år 2011 fra Agricultural Research Culture Collection, USA.
10 Den ønskede omdannelse kan opnås ved at kontakte helcelle mikroorganismer eller i visse tilfælde cellefri ekstrakter af mikroorganismerne med ML-236B forbindelsen. Den fremstillede form af forbindelsen vil afhænge af dyrkningsbetingelserne og af den anvendte form for mikro-15 organismen. Dersom for eksempel helcelle mikroorganismen dyrkes i nærværelse af ML-236B forbindelsen, kan den opnåede forbindelse være carboxylsyren, lactonen, C^-C^-alkylesteren eller alkalimetalsaltet afhængigt af dyrkningsbetingelserne, specielt pH-værdien. Hvis derimod ML-20 236B forbindelsen blot bringes i kontakt med et hvilende cellesystem eller med en cellefri ekstrakt, er den omhandlede forbindelse, der opnås, oftest i form af alkalimetalsaltet .
25 Omdannelsens fremadskriden kan følges ved at udtage prøver af reaktionsblandingen under reaktionsforløbet og bestemme omdannelsesgraden.
Dersom mikroorganismerne skal dyrkes i nærværelse af ML-30 236B forbindelsen for at frembringe de omhandlede for bindelser, udvælges dyrkningsbetingelserne og dyrkningssubstratet specielt med henblik på den pågældende mikroorganisme, der skal dyrkes. Da de arter af mikroorganismer, der er foreslået anvendt ved fremgangsmåden ifølge 35 opfindelsen, er velkendte, er også dyrkningsbetingelser og dyrkningssubstrater, der skal anvendes til disse mikroorganismer, velkendte.
DK 159397 B
9
De omhandlede forbindelser kan skilles fra reaktionsblandingen på almindelig måde, f.eks. ved affiltrering af cellerne (dersom nødvendigt) og herefter underkaste den tilbageblevne blanding en hvilken som helst kombination 5 af tyndtlagskromatografi, søjlekromatografi eller high performance væskekromatografi. De forskellige omhandlede forbindelser eller forskellige isomere af omhandlede forbindelser, dersom to eller flere fremstilles samtidigt, kan eventuelt adskilles fra hinanden i løbet af en eller 10 flere af de kromatografiske rensningstrin, eller de kan fraskilles som en blanding.
Når den omhandlede enzymatiske alkoxyleringsfremgangsmåde frembringer 6-methoxy-IsoML-236B carboxylsyre eller 6-me-15 thoxy-IsoML-236B lacton, kan disse omdannes ved almindelige kemiske reaktioner til de tilsvarende alkalimetalsalte eller C^-C^-alkylestere (hvor det drejer sig om carboxylsyren, kan denne eventuelt først omdannes til lactonen). F.eks. kan metalsaltene (dvs. forbindelserne 20 med formel III) fremstilles ved fremgangsmåden beskrevet i engelsk patentskrift nr. 1 555 831 til fremstilling af salte af ML-236B carboxylsyre.
C^-C^-alkylestere af 6-methoxy-ML-236B carboxylsyre 25 (dvs. forbindelser med formel V) kan fremstilles ved esterificering af 6-methoxy-IsoML-236B lactonen eller carboxylsyren således som beskrevet i engelsk patentskrift nr. 1 555 831 for fremstillingen af estere af ML-236B carboxylsyre, dvs. enten ved omsætning af 6-methoxy-30 IsoML-236B forbindelsen med en alkohol i nærværelse af en passende katalysator eller ved omsætning af forbindelsen med en diazoforbindelse, fortrinsvis diazomethan eller en C-substitueret diazomethan.
35 Opfindelsen beskrives nærmere i de følgende eksempler.
DK 159397 B
10 EKSEMPEL 1
Fremstilling af 6-methoxy-IsoML-236B lacton 5 Tyve 500 ml Erlenmeyer-kolber, der hver indeholder 100 ml substrat, der har den nedenfor beskrevne sammensætning, podedes med sporer af Absidia coerulea IFO-4423. Kolberne rystedyrkedes ved 26 °C og 220 rystninger pr. minut i 4 dage. Herefter tilsattes ML-236B lacton til hver af kol-10 berne til en slutkoncentration på 0,05 vægt/rumfangsprocent. Dyrkningen fortsattes ved 26 eC og 220 rystninger pr. minut i yderligere 6 dage.
Sammensætningen af substratet var (procenterne er vægt/-15 rumfang):
Glucose................................. 2,0 % K2HP04 .................................. 0,15 %
MgS04.7H20 .............................. 0,15 % 20 NH4N03 .................................. 0,1 %
Pepton.................................. 0,1 %
Majsstøbevæske .......................... 0,2 % Gærekstrakt ............................. 0,1 %
ZnS04.7H20 .............................. 0,01 % 25 Postevand ............................... resten (Indstillet til pH 7,0)
Efter at dyrkningen var afsluttet, frafiltreredes reaktionsvæsken, og filtratet indstilledes med trifluored-30 dikesyre til pH 3. Den fremstillede blanding ekstra- heredes med tre 1 liters portioner ethylacetat, hvorved der opnåedes ekstrakter, der indeholdt 6-methoxy-IsoML-236B carboxylsyre.
35 Ekstrakterne sloges sammen og vaskedes herefter med en 11
DK 159397B
mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørredes over vandfrit natriumsulfat, hvorefter en katalytisk mængde trif1uoreddikesyre sattes til for at lactonisere. Den opnåede blanding vaskedes herefter med en 5 vægt/rum-5 fangsprocent vandig opløsning af natriumbicarbonat, tørredes over vandfrit natriumsulfat og inddampedes til tørhed under reduceret tryk. Remanensen rensedes ved hjælp af kromatografi gennem en Lobar-søjle (Merck Si 60, størrelse A), der elueredes med en 7:3 rumfangsblanding ben-10 z^n og acetone, hvorved der opnåedes 23 mg 6-methoxy- I^oML-236B lacton.
i 6-methoxy-IsoML-236B lactonen havde følgende fysiske egenskaber: 1. ^Det kernemagnetiske resonansspektrum, målt ved 90 MHz 15 i deuterochloroform under anvendelse af tetramethylsilan som den indre standard, var følgende, δ ppm: 6,15 (1H, doublet) 5.70 (1H, kvartet) 5.70 (1H, multiplet) 20 5,4Q (1H, multiplet) 4,60 (1H, multiplet) 4,40 (1H, multiplet) 3,45 (1H, doublet) 3,30 (3H, singlet).
25 2. Infrarødt absorptionsspektrum (methanol) *maxnm: 235.
3. Infrarødt absorptionsspektrum (tynd film) vm cm :
maX
3450, 1730.
4. Massespektrum m/e: 30 420 (M+), 402, 318, 300, 286, 268.
5. Tyndtlagskromatografi: 12
DK 159397B
Plade: Merck silicagel Art 5715:
Opløsningsmiddel: benzen/acetone (1:1 rumfang):
Rf-værdi: 0,7.
6. Elementaranalyse: 5 Beregnet for ^^H^gOg: c 68,54¾ - H 8,63¾.
Fundet : C 68,53¾ - H 8,81¾.
EKSEMPEL 2 ίΓ§!]3§ί111ΐ09-§?-0?ίί!ίϋ!!):§:ί}®ί!}2^:ί§2??1::^§§-ζ§^2ίΥΐ2ΐ 1 g 6-methoxy-IsoML-236B 1 acton opløstes i en ringe mængde 10 acetone, og 13 ml af en 0,2N vandig opløsning af natriumhydroxid sattes til den fremstillede opløsning. Blandingen henstod 1 time ved 40°C for at muliggøre hydrolyse. Efter reaktionen var løbet til ende, afdesti11eredes acetonen fra reaktionsblandingen, og den fremkomne remanens vaskedes 15 med 5 ml chloroform. Den vandige fase indstilledes til en pH-værdi på 8,0 ved tilsætning af 0,1N saltsyre. Fraktionen, der indeholdt det pågældende natrium-6-methoxy-IsoML-236B carboxylat, absorberedes på en dianion HP-20 søjle (et præparat fra Mitsubishi Chemical Industries Co.). Fraktionen 20 indeholdende natrium-6-methoxy-IsoML-Z36B carboxylat elue-redes herefter med 50 rumfangsprocent vandig acetone. Acetonen afdesti11eredes eluatet, og remanensen frysetørredes, hvorved der opnåedes 1,003 g af det pågældende natrium-6-methoxy-IsoML-236B carboxylat.
25 Natrium-6-methoxy-IsoML-236B carboxylat har følgende fysiske egenskaber: 1
Det kernemagnetiske resonansspektrum, målt ved 60 MHz i deuteromethanol under anvendelse af tetramethylsilan som den indre standard, var følgende, δ ppm: 13
DK 159397B
3,31 (3H, singlet) 5,42 (1H, multiplet) 5.70 (1Ha multiplet) 5.71 (1H* kvartet) 5 6,12 (IH, doublet).
2. Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) ^maxnm: 235.
-1 3. Infrarødt absorptionsspektrum (tynd film) vcm : 3400, 2950, 1580.
10 4. Elementaranalyse:
Beregnet for Cg^H^yOyNa: C 62,61¾ - H 8,04¾
Fundet : C 62,54¾ - H 8,11¾.
EKSEMPEL 3 ng_af_methyl-6-methoxy-IsoML-236B_carboxyl at 15 1 g natrium-6-methoxy-IsoML-236B carboxylat opløstes i en ringe mængde methanol, og herefter syrnedes den fremstillede opløsning ved tilsætning af trif1uoreddikesyre under afkøling. En støkiometrisk mængde af en etheropløsning af diazomethan tilsattes umiddelbart herefter, og blandingen 20 henstod i 30 minutter. Herefter afdesti11eredes opløsningsmidlet, og remanensen rensedes gennem en Lobar-søjle (Merck RP-8, størrelse B), der eltieredes med en 6:4 rumfangsblanding af methanol og vand, hvorved der opnåedes 780 g af det ønskede methyl-6-methoxy-IsoML-236B carboxy-25 lat som en farveløs olie, der havde følgende fysiske egenskaber: 1
Det kernemagnetiske resonansspektrum, målt ved 60 MHz i deuterochloroform under anvendelse af tetramethylsi 1 an som den indre standard, var følgende, δ ppm:
DK 159397 B
14 3,30 (3H, singlet) 3,60 (3H, singlet) 4,37 (IH, multiplet) 4,62 (1H, multiplet) 5 5,30 (IH, multiplet)· 5.70 (1H, multiplet) 5.71 (IH, kvartet) 6,13 (IH, doublet) 2. Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) ^axnm: 10 235.
_ 1 3. Infrarødt absorptionsspektrum (tynd film) vmaxcm : 3400, 1725.
4. Massespektrum:
Det anvendte instrument var af typen D-300, fremstillet af 15 Nippon Electronics, og målingen foretoges, efter at forbindelsen var silyleret med N,0-bis(trimethylsilyl)trifluor-acetamid, m/e: 668 (M+).
5. Elementaranalyse:
Beregnet for ^25^40^7: ^ 66,34¾ - H 8,91¾ 20 Fundet : C 66,38¾ - H 8,98¾.
EKSEMPEL 4 EE9(D§i!lIiQS»Sf _§l!2§£t!2Sy:i§2ML-236B_lactgn
Tyve 500 ml Erlenmeyer-kolber, der hver indeholdt 100 ml af et substrat, der havde den nedenfor beskrevne sammensætning, 25 podedes med sporer af Absidia coerulea IFQ-4423. Kolberne rystedyrkedes herefter ved 220 rystninger pr. minut og 26°C i 4 dage. Efter afslutning af denne periode tilsattes methyl ML-236B carboxylat til en siutkoncentration på 0,05 vægt/ rumfangsprocent. Dyrkningen fortsattes yderligere 6 dage 30 ved 26°C og 220 rystninger pr. minut.
DK 159397 B
15
Sammensætningen af substratet var (procenterne er vægt/rum-fang):
Glucose ...................................... 2,0%
KzHP04 ....................................... 0,15% 5 MgS04.7H20 ................................... 0,15% nh4no3 ....................................... 0,1%
Pepton ....................................... 0,1%
Majsstøbevæske .................,............. 0,2% Gærekstrakt .................................. 0,1% 10 ZnS04.7H20 .................................... 0,001%
Postevand .................................... Resten (indstilles til pH 7,0)
Efter dyrkningen var afsluttet, behandledes reaktionsvæsken som beskrevet i eksempel 1, hvorved der opnåedes 11 mg 6-15 methoxy-IsoML-236B lacton, der havde de samme fysiske egenskaber som forbindelsen fremstillet i eksempel 1.
EKSEMPEL 5 ti 111 GSf Z ί.5 Z?36 B _ lacton
Fremgangsmåden i eksempel 1 gentoges, bortset fra at der an-20 vendtes sporer af Syncephalastrum racemosum IF0-4814 i stedet for Absidia coerulea IFO-4423. Der opnåedes 5 mg af den ønskede 6-methoxy-IsoML-236B lacton.
EKSEMPEL 6 E3C§5?§ 5Hllng_af _6-methgxy:IsoML:236B_l actgn 25 Fremgangsmåden beskrevet i eksempel 1 gentoges, bortset fra at sporer af Cunninghamel1 a echinulata IF0 4445 anvendtes i stedet for Absidia coerulea IFO-4423. Der opnåedes 3 mg af den ønskede 6-methoxy-IsoML-236B lacton.
DK 159397 B
16 EKSEMPEL 7 ELr§Q!§5! 11 lD9_§f I§2ML-236B _ 1 acton
Tyve 500 ml Erlenmeyer-kolber, der hver indeholdt 100 ml af et substrat, der havde samme sammensætning som angivet 5 i eksempel 1, podedes med sporer af Absidia coerulea I FO-4423. Herefter dyrkedes kolberne under omrystning ved 26°C i 4 dage og med 220 omrystninger pr. minut. De fremstillede klumper af mikroorganismer opsamledes ved centrifugering, der vaskedes med fysiologisk saltvand og centrifugeredes 10 atter. Herefter opslæmmedes i 1,8 liter af en 0,1 M phos-phatpufferopløsning (pH 7,0)'. Herefter tilsattes natrium-ML-236B carboxylat og glucose til suspensionen til en slut-koncentration på henholdsvis 0,05% og 0,2%. Kulturen holdtes under omrystning i yderligere 5 dage ved 26°C og 220 omryst-15 ninger pr. minut. Herefter filtreredes reaktionsvæsken, og der behandledes som beskrevet i eksempel 1, hvorved opnåedes 8 mg 6-methoxy-IsoML-236B lacton.
Claims (8)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af en lacton med formel 5 I: Ογ^γ/ΟΗ 10
0 I 1 H3C''/XyXo ^ CH3 20 eller den tilsvarende fri hydroxycarboxylsyre eller dennes alkalimetalsalte eller C^-C^ alkylestere, k e n-25 detegnet ved, at man enzymatisk methoxylerer en ML-236B forbindelse med formlen Y'-'y'”1 30
35 I c«3 CH3 DK 159397B den tilsvarende fri hydroxycarboxylsyre eller dennes alkalimetalsalte eller C^-C^-alkylestere, ved at kontakte den med en mikroorganisme af slægten Syncephalastrum, Absidia eller Cunninghamel1a, eller med en cellefri, 5 enzymholdig ekstrakt af en sådan mikroorganisme, hvorpå en dannet lacton med formlen I eller en dannet tilsvarende fri carboxylsyre om ønsket omdannes til et alkalimetalsalt eller en C-^-C^ alkylester på i og for sig kendt måde. 10
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at mikroorganismen er Syncephalastrum racemosum IFO-4814 (NRRL 12562), Syncephalastrum racemosum IFO-4828 (NRRL 12563), Absidia coerulea IFO-4423 (NRRL 12560) 15 eller Cunninghamella echinulata IFO-4445 (NRRL 12561).
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at mikroorganismen er Absidia coerulea IFO-4423 (NRRL 12560). 20
4. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af de foregående krav, kendetegnet ved, at en forbindelse med formel I eller dens tilsvarende fri hydroxycarboxylsyre fraskilles reaktionsblandingen, og at der herefter salt- 25 dannes eller esterificeres til fremstilling af et salt eller en ester af syren.
5 H0\/ O „ \ III ✓YN
10 CH3 ^V/V/Ch'3 J 15 hvor M betyder et alkalimetalatom.
5. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af de foregående krav, kendetegnet ved, at der fremstilles en 30 forbindelse med formel III 35 DK 159397 B . M—---00(^
6. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at M betegner natrium eller kalium.
7. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af kravene 1-4, kendetegnet ved, at der fremstilles en 25 forbindelse med formel V: M R™-OOC-^X/ HQ »3 C^Å* k CH3 qc ^ J DK 159397B 20' hvor R betyder C^-C^-alkyl.
8. Fremgangsmåde ifølge krav 7, kendetegnet ved, at R betegner en methylgruppe. 5 10 15 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11403881 | 1981-07-21 | ||
| JP56114038A JPS5815968A (ja) | 1981-07-21 | 1981-07-21 | Ｍｌ−２３６ｂ誘導体およびその製法 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK325782A DK325782A (da) | 1983-01-22 |
| DK159397B true DK159397B (da) | 1990-10-08 |
| DK159397C DK159397C (da) | 1991-03-25 |
Family
ID=14627469
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK325782A DK159397C (da) | 1981-07-21 | 1982-07-20 | Fremgangsmaade til fremstilling af cholesterolsyntese-inhiberende derivater af forbindelserne ml-236b lacton og ml-236b carboxylsyre |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4447626A (da) |
| EP (1) | EP0070649B1 (da) |
| JP (1) | JPS5815968A (da) |
| KR (1) | KR880001354B1 (da) |
| AT (1) | ATE39487T1 (da) |
| AU (1) | AU547968B2 (da) |
| CA (1) | CA1185199A (da) |
| DE (1) | DE3279304D1 (da) |
| DK (1) | DK159397C (da) |
| ES (1) | ES514185A0 (da) |
| FI (1) | FI75186C (da) |
| IE (1) | IE54747B1 (da) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USRE33033E (en) * | 1985-07-05 | 1989-08-22 | Merck & Co., Inc. | Process for the preparation of HMG-CoA reductase inhibitors intermediates |
| US4611081A (en) * | 1985-07-05 | 1986-09-09 | Merck & Co., Inc. | Process for the preparation of HMG-CoA reductase inhibitors intermediates |
| US4841074A (en) * | 1987-12-11 | 1989-06-20 | Merck & Co., Inc. | Intermediates and processes for 6-carboxy HMG-CoA reductase inhibitors |
| JP2792600B2 (ja) * | 1989-04-14 | 1998-09-03 | 旭電化工業株式会社 | メバロン酸生産菌 |
| DE69025817T2 (de) * | 1989-06-09 | 1996-11-14 | Merck & Co Inc | 3-Keto-HMG-CoA Reduktase-Inhibitoren |
| KR100186758B1 (ko) | 1996-08-09 | 1999-04-01 | 영진약품공업 주식회사 | 프라바스타틴(pravastatin)전구체의제조방법 |
| IN191580B (da) | 1999-12-17 | 2003-12-06 | Ranbaxy Lab Ltd |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5612114B2 (da) * | 1974-06-07 | 1981-03-18 | ||
| DK149080C (da) * | 1980-06-06 | 1986-07-28 | Sankyo Co | Fremgangsmaade til fremstilling af derivater af ml-236b-carboxylsyre |
-
1981
- 1981-07-21 JP JP56114038A patent/JPS5815968A/ja active Granted
-
1982
- 1982-07-07 US US06/395,968 patent/US4447626A/en not_active Expired - Lifetime
- 1982-07-08 AT AT82303576T patent/ATE39487T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-07-08 DE DE8282303576T patent/DE3279304D1/de not_active Expired
- 1982-07-08 EP EP82303576A patent/EP0070649B1/en not_active Expired
- 1982-07-09 CA CA000406984A patent/CA1185199A/en not_active Expired
- 1982-07-12 AU AU85926/82A patent/AU547968B2/en not_active Expired
- 1982-07-20 FI FI822567A patent/FI75186C/fi not_active IP Right Cessation
- 1982-07-20 DK DK325782A patent/DK159397C/da not_active IP Right Cessation
- 1982-07-20 IE IE1738/82A patent/IE54747B1/en not_active IP Right Cessation
- 1982-07-20 ES ES514185A patent/ES514185A0/es active Granted
- 1982-07-21 KR KR8203252A patent/KR880001354B1/ko active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI75186C (fi) | 1988-05-09 |
| ES8308358A1 (es) | 1983-08-16 |
| EP0070649B1 (en) | 1988-12-28 |
| DK159397C (da) | 1991-03-25 |
| EP0070649A2 (en) | 1983-01-26 |
| CA1185199A (en) | 1985-04-09 |
| AU8592682A (en) | 1983-01-27 |
| FI75186B (fi) | 1988-01-29 |
| US4447626A (en) | 1984-05-08 |
| IE54747B1 (en) | 1990-01-31 |
| FI822567L (fi) | 1983-01-22 |
| AU547968B2 (en) | 1985-11-14 |
| ATE39487T1 (de) | 1989-01-15 |
| DK325782A (da) | 1983-01-22 |
| JPS5815968A (ja) | 1983-01-29 |
| JPS6355502B2 (da) | 1988-11-02 |
| KR880001354B1 (ko) | 1988-07-28 |
| KR840000519A (ko) | 1984-02-25 |
| IE821738L (en) | 1983-01-21 |
| ES514185A0 (es) | 1983-08-16 |
| EP0070649A3 (en) | 1984-04-04 |
| FI822567A0 (fi) | 1982-07-20 |
| DE3279304D1 (en) | 1989-02-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4517373A (en) | IsoMB-530B derivatives | |
| Serizawa et al. | Microbial hydroxylation of ML-236B (compactin) and monacolin K (MB-530B) | |
| US4294926A (en) | Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation | |
| CA1150170A (en) | Ml-236b derivatives and their preparation | |
| US4231938A (en) | Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation | |
| CA1340331C (en) | Hmg-coa reductase inhibitors | |
| CA1161380A (en) | Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation | |
| JPH023623A (ja) | 抗高コレステロール血症剤 | |
| DK159397B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af cholesterolsyntese-inhiberende derivater af forbindelserne ml-236b lacton og ml-236b carboxylsyre | |
| IE56322B1 (en) | Process for preparing l-carnitine and chemical intermediates employed therein | |
| US5371077A (en) | Side chain derivatized 15-oxygenated sterols, methods of using them and a process for preparing them | |
| JPH0354103B2 (da) | ||
| JPH0355471B2 (da) | ||
| US4873260A (en) | Treatment of diabetic ketoacidosis | |
| JPH06256278A (ja) | 光学活性α−カルバモイルアルカン酸誘導体およびその製法 | |
| JPS6254476B2 (da) | ||
| US5256800A (en) | Optically active 2,2-dimethyl-1,3-dioxin-4-ones and method for preparing same | |
| JPH0367075B2 (da) | ||
| JPH0333698B2 (da) | ||
| JP3434860B2 (ja) | Ｆｏ−２５４６物質およびその製造法 | |
| JPH01501281A (ja) | 微生物によるビシクロオクタジオンカルボン酸エステルの立体特異ケト還元 | |
| JPS6348858B2 (da) | ||
| CA1340452C (en) | Novel hmg-coa reductase inhibitors | |
| JPS6328595B2 (da) | ||
| JPH061786A (ja) | 生理活性物質ａｓ−１８６類縁体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |