FI75186B - Foerfarande foer framstaellning av ml-236b-derivat. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av ml-236b-derivat. Download PDFInfo
- Publication number
- FI75186B FI75186B FI822567A FI822567A FI75186B FI 75186 B FI75186 B FI 75186B FI 822567 A FI822567 A FI 822567A FI 822567 A FI822567 A FI 822567A FI 75186 B FI75186 B FI 75186B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- compound
- lactone
- methoxy
- isoml
- microorganism
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
- C07D309/16—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
- C07D309/28—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D309/30—Oxygen atoms, e.g. delta-lactones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungi isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Seasonings (AREA)
- Steering-Linkage Mechanisms And Four-Wheel Steering (AREA)
Description
751 86 1 Menetelmä ML-236B-johdannaisien valmistamiseksi Förfarande för framställning av ML-236B-derivat 5 Tämän keksinnön kohteena on menetelmä kaavan (I) mukaisen lääkeaineena käyttökelpoisen yhdisteen: 10 θ5^^°Η v o 20 CH3 25 tätä yhdistettä vastaavan vapaan hydroksikarboksyylihapon ja tämän hapon suolojen ja estereiden valmistamiseksi.
30 ·· ML-236B on selitetty US-patenttljulkalsussa 3.983.140 ja nimitystä "ML-236B" käytetään viittaamaan kahteen yhdisteeseen; laktoniin "ML-236B laktoni", jolla on rakennekaava: 35 2 75186 W" 10 \ CH3 f[VCH3 15 ja vastaavaan vapaaseen hydroksikarboksyylihappoon "ML-236B karbok-syylihappo", jolla on rakennekaava: 20
^OH
HOOC^^Y^ HO. .
25 \X
0 Η3θ·-^γ^\θ \ 30 CH3
II
35 75186 3 Ί Nämä ML-236B yhdisteet on eristetty ja puhdistettu Penicillium-suvun mikro-organismien, erityisesti Penicillium £itrinum'in (eräs sinihome-laji), aineenvaihduntatuotteista. Niiden on osoitettu estävän entsy-mien tai koe-eläimistä erotettujen, viljeltyjen solujen välityksellä 5 tapahtuvaa kolesterolin biosynteesiä, kilpailemalla kolesterolin biosynteesissä vaikuttavan, nopeutta rajoittavan entsyymin, so. 3-hydroksi- 3-metyyli-glutaryyli-koentsyymi A reduktaasin, kanssa ja tämän seurauksena merkittävästi alentavan seerumin kolesterolipitoisuuksia eläimissä Journal of Antibiotics, 29 (1976), 1346 .
10
On löydetty myös joukko yhdisteitä, jotka ovat rakenteellisesti lähellä yhdistettä ML-236B ja joillakin on havaittu myös tämä kyky estää kolesterolin biosynteesiä. Löydetyistä ML-236B-johdannaisista tärkeimmät ovat GB-patenttijulkaisun 2.077.264 (** FI-patentti 71 168) aiheena.
15 Laktonimuodossa nämä yhdisteet voidaan esittää rakennekaavalla:
20 7 I
25 X.
30 A
35 ja ne on nimetty IsoM-4 laktoniksl tai IsoM-4' laktoniksi, riippuen molekyylissä olevien asymmetristen hiiliatomien konfiguraatiosta. Vastaavat IsoM-4 karboksyylihappo ja IsoM-4' karboksyylihappo on myös selos- 4 75186 1 tettu ja kaikilla näillä yhdisteillä on havaittu olevan kyky estää kolesterolin biosynteesiä.
IsoM-4- ja IsoM-4'-yhdisteet ja niiden alkalimetalllsuolat voidaan val-5 mistaa yhdisteen ML-236B tai sen johdannaisen entsymaattisella hydroksy-loinnilla ja muut suolat sekä esterit voidaan tietysti sitten valmistaa tavanomaisin suolanmuodostus- tai esteröintimenettelytavoin lähtemällä saadusta hydroksylointituotteesta. Entsymaattinen hydroksylointi aikaansaadaan edullisesti käyttäen sopivaa mikro-organismia tai entsyymipi-10 toista uutetta tällaisesta mikro-organismista, vaikkakin se voidaan aikaansaada myös osana yhdisteen ML-236B aineenvaihduntaa nisäkkäässä tai käyttäen tällaisen eläimen maksaa tai entsyymipitoista uutetta maksasta. Edullisia mikro-organismeja tässä menetelmässä käytettäviksi ovat sukuihin Absidia, Cunninghamella, Syncephalastrum, Mucor, 15 Pycnoporus tai Rhizoctonia kuuluvat.
Tunnettuna tekniikan tasona viitataan myös FI-patenttiin 71 168 sekä FI-patentteihin 66 427 ja 67 231, joista tunnetaan läheistä rakennetta olevia hypokolesteremisla yhdisteitä.
20
Olemme nyt yllättäen keksineet, että ML-236B laktonin tai ML-236B kar-boksyylihapon tai niiden suolan tai alkyyliesterin käsitteleminen tietyillä näistä mikro-organismeista tai entsyymipitoisella uutteella niistä voi tuottaa myös muita, selvästi eroittuvia, mutta läheisiä yh-25 disteitä, joilla samoin on kyky estää kolesterolin biosynteesiä.
Lisäksi keksinnön mukaiset uudet yhdisteet metabolisoituvat antamisen jälkeen paljon vaikeammin kuin ML-236B. Näin ollen eivät keksinnön mukaiset yhdisteet deaktivoidu yhtä helposti ja näin niillä on pitkäai-30 kaisempi vaikutus siihen liittyvine etuineen, jotka hyvin tunnetaan alalla.
Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet ovat kaavan (I) mukainen laktoni:
II
35 5 751 86 5 OsJ (I ) 0
10 Η30^Λ» S
CH3 15 sekä sitä vastaava vapaa hydroksikarboksyylihappo, joka voidaan esit-20 tää rakennekaavalla (II):
M
HOOr 25 HO^/ 0 (Π) . 30 0 ch3 35 6 75186 1 ja tämän hapon farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit.
Menetelmä keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi on tunnettu siitä, että ML-236B-yhdiste, joka on valittu ryhmästä, joka käsittää 5 ML-236B laktonin, ML-236B karboksyylihapon sekä tämän hapon suolat ja esterit alkoksiloldaan entsymaattisesti saattamalla ML-236B yhdiste kosketukseen suvun Syncephalastrum, Absidia tai Cunninghamella mikro-organismin tai mainitusta mikro-organlmista saadun soluvapaan, entsyymipitoisen uutteen kanssa ja tarvittaessa suoritetaan tuotteen 10 suolan muodostaminen tai esteröinti.
Kaavan (1) mukaiseen yhdisteeseen viitataan nimellä 6-metoksi-IsoML-236B laktoni ja kaavan (II) mukaiseen yhdisteeseen nimellä 6-metoksi-IsoML-236B karboksyyllhappo, suolat ja esterit nimetään vastaavasti.
15
Keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa ML-236B laktonin, ML-236B karboksyylihapon tai tämän karboksyylihapon suolan tai esterin entsymaattisella alkoksiloinnilla.
20 6-metoksi-IsoML-236B karboksyylihapon suolat voivat olla metallisuolo-ja, ammoniumsuoloja tai suoloja orgaanisten amiinien tai aminohappojen kanssa.
6-metoksi-IsoML-236B karboksyylihapon metallisuolat voidaan esittää 25 kaavalla (III): 30
II
35 7 75186
~~ /v. ^OH
M--OOC^ 5
HQ^^J
0 1 L (m) 10 j CH3 15 _ J n 20 jossa M tarkoittaa metalliatomia ja n tarkoittaa metalliatomin va-lenssia. Esimerkkejä metalleista, joita M näissä suoloissa voi tarkoittaa, ovat: alkallmetalllt, kuten natrium tai kalium; maa-alkali-metalllt, kuten kalsium; ja muut metallit, kuten magnesium, alumiini, 25 rauta, sinkki, koboltti tai nikkeli. Näistä metalleista ovat alkallmetalllt, maa-alkalimetalllt ja alumiini edullisia, natrium ja kalium edullisimpia.
6-metoksi-IsoML-236B karboksyylihapon esterit voidaan esittää kaavalla 30 (V): 35 8 75186 Γ ^ΟΗ Ί R---ooc^ 5 Η0\Χ ο
S
10 CH3 IT) 15 L Jp (jossa R tarkoittaa esterin alkohollosaa ja p tarkoittaa R:n valens-sla) .
20
Kun p on 1, tarkoittaa R edullisesti C^-C^ alkyyliryhmMM.
Kun R tarkoittaa alkyyliryhmää, voi tämä olla suora- tai haaraketjui-nen ryhmä ja siinä on edullisesti 1-6 hiiliatomia. Esimerkkejä tällai-25 sesta ryhmästä ovat metyyli-, etyyli-, propyyli-, ispropyyli-, butyyli-, pentyyll- ja heksyyliryhmät.
Kun p on 2, tarkoittaa R kahdenarvoista alkoholitähdettä, edullisesti alkyleeni- tai alkylldeenlryhmää, esimerkiksi etyleeni-, etyll-30 deenl-, propyleeni-, propylideeni-, trimetyleeni-, tetrametyleeni-, butylideenl-, pentametyleeni- tai pentylideeniryhmää, samoin kuin tällaisia ryhmiä, joissa on yksi tai useampi substituentti, esim. hydrok-siryhmiä, halogeenlatomeja tai trifluorimetyyliryhmiä.
35 Kun p on 3, tarkoittaa R kolmenarvoista alkoholitähdettä ja se on edullisesti tyydyttynyt alifaattinen hiilivetyryhmä, jossa on 2-6 hiili-atomia ja valinnaisesti yksi tai useampi substituentti, esim. hydrok-
II
9 75186 1 siryhmiä, halogeeniatomeja tai trifluorimetyyliryhmiM.
Pidämme edullisena, että p olisi 1 ja että R tarkoittaisi alkyyliryh-mää (edullisimmin metyyliä, etyyliä, propyyliä, isopropyyliä, butyy-5 liä, isobutyyliä tai heksyyliä), valinnaisesti substituoltua bentsyy-liryhmää (edullisimmin bentsyyliä, 4-metyylibentsyyliä, 4-metoksibent-syyliä tai 4-klooribentsyyliä) tai valinnaisesti substituoitua fenasyy-liryhmää (edullisimmin fenasyyliä, 4-metyylifenasyyliä, 4-metoksi-fenasyyliä tai 4-bromifenasyyliä).
10
Edullisimmat R:n tarkoittamat ryhmät ovat metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, butyyli- ja isobutyyliryhmät.
Keksinnön mukaisten yhdisteiden on havaittu estävän kolesterolin bio-15 synteesiä maksassa ja niitä voidaan täten käyttää hyperkolesteremlan hoitoon tai arterioskleroosin ehkäisemiseen, samalla tavoin kuin GB-patenttijulkaisuissa 2 075 013 ja 2 077 264 selostettuja yhdisteitä.
Eräiden keksinnön mukaisten yhdisteiden estävä vaikutus, ilmaistuna 20 pitoisuutena (jig/ml), joka tarvitaan kolesterolin biosynteesein 50% estämiseen /mitattu menetelmällä, joka on selostettu julkaisussa Journal of Biological Chemistry, 234 (1959), 2835^, on seuraavanlainen : 25 6-metoksi-IsoML-236B laktonl 0,015 natrium-6-metoksi-IsoML-236B kar-boksylaatti 0,0044
Vertailun vuoksi, arvo ML-236B laktonille on 0,010 ^ig/ml, mikä on ver-30 rattavlesa keksinnön mukaisilla yhdisteillä saavutettavaan tasoon, mutta kuten edellä huomautettiin, on kekslnnönmukalsten yhdisteiden vaikutus paljon pitkäaikaisempi, johtuen niiden vastustuskyvystä hajoamista in vivo vastaan.
35 Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan antaa lääkkeeksi millä tahansa tavanomaisella tavalla, esimerkiksi parenteraalisesti (esim. ihonalaisena, laskimonsisäisenä tai lihaksensisäisenä ruiskeena) tai suun kaut- 10 751 86 1 ta (esim. tabletteina, kapseleina, jauheina tai rakeina). Aikuisen päivittäinen annos vaihtelee tietysti riippuen potilaan iästä, kehonpainosta ja tilasta sekä lääkkeen antamisen tavasta ja ajankohdasta, mutta yleensä on edullista antaa keksinnön mukaisia yhdisteitä 0,5-500 5 mg/päivä aikuisille, yhtenä annoksena tai jaettuna edullisesti 3 tai 4 kertaa päivässä.
Tämän keksinnön mukainen entsymaattinen alkoksilointimenetelmä suoritetaan edullisesti saattamalla ML-236B laktoni, ML-236B karboksyyli-10 happo tai tämän hapon suola tai esteri (joihin jäljempänä viitataan yhteisesti nimityksellä "ML-236B yhdiste") kosketukseen sellaisen, sukujen Syncephalastrum, Absidia tai Cunninghamella mikro-organismin kanssa, joka pystyy muuttamaan ML-236B yhdisteen halutuksi keksinnön mukaiseksi yhdisteeksi tai saattamalla ML-236B yhdiste kosketukseen 15 tällaisesta mikro-organismista saadun entsyymipitoisen uutteen kanssa ja erottamalla sitten keksinnön mukainen yhdiste viljelyvällaineesta tai reaktioseoksesta.
Voidaan käyttää mitä tahansa mikro-organismia, joka kykenee muuttamaan 20 ML-236B yhdisteen kaavan (I) tai (11) mukaiseksi yhdisteeksi tai sen suolaksi tai esteriksi, vaikkakin edullisia ovat sukujen Syncephalastrum, Absidia tai Cunninghamella mikro-organismit, jotka kaikki kuuluvat ala-; ; luokkaan Zygomycetes. Erityisen edullisia ovat Syncephalastrum race- mosum IFO-4814, Syncephalastrum racemosum IFO-4828, Absidia coerulea . . 25 IFO-4423 ja Cunninghamella echinulata IFO-4445. Kaikki nämä mikro-orga nismit ovat saatavissa Institute for Fermentation:sta, Osaka, Japani; ilmoitetuilla tunnusnumeroilla.
ML-236B yhdisteen muuttuminen keksinnön mukaiseksi yhdisteeksi voidaan 30 saada aikaan saattamalla mikro-organismi kokonaisuudessaan tai joissakin tapauksissa soluvapaa uute mikro-organismista kosketukseen ML-236B yhdisteen kanssa. Tuotetun yhdisteen rakenne riippuu viljelyolosuhteista ja käytetystä mikro-organismista. Niinpä esimerkiksi viljeltäessä mikro-organismia kokonaisuudessaan, ML-236B yhdisteen läsnäollessa, 35 voi tuote olla karboksyylihappo, laktoni, esteri (erityisesti alkyyli-esteri) tai suola (erityisesti alkallmetalllsuola), riippuen viljely-olosuhteista, erityisesti pH-arvosta. Toisaalta, mikäli ML-236B yhdis- n n 75186 1 te yksinkertaisesti saatetaan kosketukseen lepotilassa olevien solujen tai soluvapaan uutteen kanssa, saadaan keksinnön mukainen yhdiste yleisimmin alkallmetallisuolanaan.
5 Muunnosreaktion edistyminen voidaan määrittää tutkimalla näytteitä reaktioseoksesta reaktion aikana konversion määrittämiseksi.
Kun mikro-organismeja viljellään ML-236B yhdisteen läsnäollessa keksinnön mukaisten yhdisteiden tuottamiseksi, valitaan käytettävät vil-10 jelyolosuhteet ja -väliaine viljeltäväksi aiottu nimenomainen mikro-organismi huomioon ottaen. Koska mikro-organismilajit, joita ehdotetaan käytettäväksi tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä, ovat tunnettuja, ovat myös näiden mikro-organismien kanssa käytettävät viljelyolosuhteet ja -väliaineet tunnettuja.
15
Keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan erottaa reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin, esimerkiksi poistamalla mikorbisolut suodattamalla (mikäli tarpeen) ja käsittelemällä sitten jäljelle jäänyttä seosta ohutkerroskromatografiaa, pylväskromatografiaa tai suuren erotuskyvyn 20 nestekromatograflaa miten tahansa yhdistellen. Keksinnön mukaiset eri yhdisteet tai keksinnön mukaisten yhdisteiden eri isomeerit voidaan haluttaessa, milloin kaksi tai useampia valmistetaan yhdessä, erottaa toisistaan yhden tai useamman näistä kromatografisista puhdistusvai-heista aikana tai ne voidaan erottaa seoksena.
25
Kun keksinnön mukainen entsymaattlnen alkoksilointimenetelmä tuottaa 6-metoksi-IsoML-236B karboksyylihappoa tai 6-metoksi-IsoML-236B lakto-nla, voidaan nämä tavanomaisilla kemiallisilla reaktioilla muuttaa vastaaviksi suoloiksi tai estereiksi (karboksyylihapon ollessa kyseessä 30 voidaan se haluttaessa ensin muuttaa laktoniksi). Esimerkiksi metalli-suolat /so. kaavan (III) mukaiset yhdisteet/ ja aminohapposuolat /so. kaavan (IV) mukaiset yhdisteet, joissa A on aminohappo/ voidaan . . valmistaa GB-patenttijulkaisussa 1 555 831 selostetulla menetelmällä ML-236B karboksyylihapon suolojen valmistamiseksi.
6-metoksi-ML-236B karboksyylihapon esterit /so. kaavan (V) mukaiset yhdisteet^ voidaan valmistaa esteröimällä 6-metoksi-IsoML-236B lakto- 35 75186 12 1 ni tai karboksyylihappo, kuten on selostettu GB-patenttijulkaisussa 1 555 831 ML-236B karboksyylihapon estereiden valmistukseen liittyen, ts. joko 6-metoksi-IsoML-236B yhdisteen reaktiolla alkoholin kanssa sopivan katalyytin läsnäollessa tai tämän yhdisteen reaktiolla diatso-5 yhdisteen, edullisesti diatsometaanin tai C-substituoidun diatsometaa-nin, kanssa.
Keksintöä valaistaan edelleen seuraavllla esimerkeillä.
10 Esimerkki 1 6-metoksl-IsoML-236B laktonin valmistus
Kahteenkymmeneen 500 ml:n Erlenmeyer-pulloon, joista kukin sisälsi 15 100 ml alla selostetun koostumuksen omaavaa väliainetta, ympättiin
Absidia coerulea IF0-4423 itiöitä. Pulloja viljeltiin ravistaen 26°C:ssa, 220 ravistusta minuutissa (s.p.m.), 4 päivän ajan. Tämän ajan lopussa lisättiin sitten jokaiseen pulloon ML-236B laktonia lop-pupltoisuuteen 0,05 paino-%. Viljelyä jatkettiin 26°C:ssa, 220 s.p.m., 20 vielä 6 päivän ajan.
: Väliaineen koostumus oli (paino-%): glukoosia 2,0% 25 K2HP04 0,15%
MgS0A * 7H20 0,15% nh4no3 0,1% peptonia 0,1% maissinliotusvettä 0,2% 30 hiivauutetta 0,1%
ZnSO^ · 7H20 0,001% * vesijohtovettä loput (pH säädetty arvoon 7,0).
·;· 35 ·.· Viljelyn päätyttyä reaktioliemi suodatettiin ja suodoksen pH säädet tiin trifluorietikkahapolla arvoon 3. Näin saatua seosta uutettiin
II
13 75186 Ί kolmella 1 litran erällä etyyliasetaattia, jolloin saatiin 6-metoksi-IsoML-236B karboksyylihappoa sisältäviä uutteita.
Uutteet yhdistettiin ja pestiin sitten kyllästetyllä natriumkloridin 5 vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, minkä jälkeen lisättiin katalyyttinen määrä trifluorietikkahappoa laktoni-sointla varten. Saatu seos pestiin sitten natriumbikarbonaatin 5 paino-Z vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin 10 kromatografiällä Lobar-pylvään (Merck Si60, koko A)· läpi eluoiden bentseenin ja asetonin seoksella 7:3 (tilavuusosia), jolloin saatiin 23 mg 6-metoksi-IsoML-236B laktonia.
6-metoksi-IsoML-236B laktonilla on seuraavat fysikaaliset ominaisuu- 15 det: 1. NMR-spektri mitattuna 90 MHz:llä deuterokloroformlssa, käyttäen tetrametyylisilaania sisäisenä standardina, oli seuraavanlainen, ; <$ppm: 20 6,15 (1H, dupletti); 5.70 (1H, kvartetti); 5.70 (1H, multipletti); ·. 5,40 (1H, multipletti); 25 4,60 (1H, multipletti); 4,40 (1H, multipletti); 3,45 (1H, dupletti); 3,30 (3H, singletti).
30 2. UV-absorptiospektri (metanoli) ^ nm: 235. 1 2 IR-absorptiospektri (ohut kalvo) V cm *: max 3450, 1730.
35 2 massaspektri m/e: 420 (M+), 402,318,300,286,268.
h 75186 1 5. ohutkerroskromatografia levy: Merck piigeeli Art 5715; liuotin: bentseeni/asetoni (1:1, tilavuusosia); R^-arvo: 0,7.
5 6. alkuaineanalyysi: laskettu Co/Ho,0,:lle 24 36 6 C 68,54%; H 8,63% löydetty C 68,53%; H 8,81%.
10
Esimerkki 2
Natrium-6-metoksi-IsoML-236 B karboksylaatin valmistus 15 1 g 6-metoksi-IsoML-236B laktonla liuotettiin pieneen määrään aseto nia ja näin saatuun liuokseen lisättiin 13 ml natrlumhydroksidin 0,2 N vesiliuosta. Seoksen annettiin seistä 40°C:ssa 1 tunnin ajan, jotta hydrolyysi tapahtuisi. Reaktion päätyttyä asetoni poistettiin tislaamalla reaktloseoksesta ja jäännös pestiin 5 ml:11a kloroformia. Vesi-20 faasin pH säädettiin arvoon 8,0 lisäämällä 0,1 N kloorivetyhappoa. Halutun natrium-6-metoksi-IsoML-236B karboksylaatin sisältävä osa absorboitiin Dlaion HP-20 pylväälle (Mitsubishi Chemical Industries Co:n tuote). Natrium-6-metoksi-IsoML-236B karboksylaatin sisältävä jae eluoitiin sitten asetonin 50 til-% vesiliuoksella. Asetoni tis-; 25 lättiin eluaatista ja jäännös pakastekuivattlin, jolloin saatiin 1,003 g haluttua natrium-6-metoksi-IsoML-236B karboksylaattia.
Natrium-6-metoksi-IsoML-236B karboksylaatilla on seuraavat fysikaali-.. set ominaisuudet: 30 1. NMR-spektri mitattuna 60 MHz:llä deuterometanollssa, käyttäen tetra-metyylisllaania sisäisenä standardina, oli seuraavanlainen, 5"ppm: 3,31 (3H, singletti); 35 5,42 (1H, multipletti); 5.70 (1H, multipletti); 5.71 (1H, kvartetti); 6,12 (1H, dupletti).
Il 15 751 86 1 2. UV-absorptiospektri (metanoii) ^max nm: 235.
3. IR-absorptiospektrl (ohut kalvo) V cm max 5 3400, 2950, 1580.
4. alkuaineanalyysi laskettu C„.H„_0_Na:lie 24 37 7 C 62,61%; H 8,04% 10 löydetty C 62,54%; H 8,11%.
Esimerkki 3
Metyyll-6-metoksi-IsoML-236B karboksylaatin valmistus 15 1 g natrlum-6-metoksi-IsoML-236B karboksylaattia liuotettiin pieneen määrään metanolia ja näin saatu liuos tehtiin happamaksi lisäämällä trifluorletikkahappoa jäähdyttäen. Stoklometrinen ylimäärä diatsome-taanin eetteriliuosta lisättiin välittömästi ja seoksen annettiin 20 seistä 30 minuutin ajan. Tämän ajan lopussa liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännös puhdistettiin Lobar-pylvään (Merck RP-8, koko B) läpi, eluoiden metanoIin ja veden seoksella 6:4 (tilavuusosia), joi-·, loin saatiin 780 mg haluttua metyyli-6-metoksi-IsoML-236B karboksy- laattla värittömänä öljynä, jolla oli seuraavat fysikaaliset ominai-: : ; 25 suudet: 1. NMR-spektri mitattuna 60 MHzrllä deuteroklorofonnissa, käyttäen tetrametyylisilaania sisäisenä standardina, oli seuraavanlainen, £ppm: 30 3,30 (3H, singletti); 3,60 (3H, singletti); 4,37 (1H, multipletti); . 4,62 (1H, multipletti); 35 5,30 (1H, multipletti); 5.70 (1H, multipletti); 5.71 (1H, kvartetti); 6,13 (1H, dupletti).
16 751 86 1 2. UV-absorptiospektri (metanoli) λmax nm: 235.
3. IR-absorptiospektri (ohut kalvo) cm 5 3400, 1725.
4. massaspektri, käytetty mittalaite oli tyyppiä D-300, valmistaja Nippon Electronics, ja mittaus suoritettiin sen jälkeen kun yhdiste oli silyloitu N,0-bis(trimetyylisilyyli)trifluoriasetamidilla; 10 m/e: 668 (M+).
5. alkuaineanalyysi: laskettu CocH/n0,:lle 25 40 7 C 66,34%; H 8,91% 15 löydetty C 66,38%; H 8,98%.
Esimerkki 4 6-metoksi-IsoML-236B laktonln valmistus 20
Kaksikymmentä 500 ml:n Erlenmeyer-pulloa, joista kussakin oli 100 ml alla selostetun koostumuksen omaavaa väliainetta, ympättiin Absidia coerulea 1FO-4423 itiöillä. Pulloja viljeltiin sitten ravistaen 220 s.p.m. 26°C:ssa 4 päivän ajan. Tämän ajan lopussa lisättiin 25 kaikkiin pulloihin metyyli-ML-236B karboksylaattia loppupitoisuuteen 0,05 paino-%. Viljelyä jatkettiin ravistaen 220 s.p.m. 26°C:ssa vielä 6 päivän ajan.
Väliaineen koostumus oli (paino-%): ' 30 glukoosia 2,0% K2HP04 0,15% : . MgS04 ’ 7H20 0,15% nh4no3 0,1% 35 peptonia 0,1% maissinllotusvettä 0,2% hiivauutetta 0,1% 17 751 86 1 ZnSO, ' 7H Ο 0,001% vesijohtovettä loput (pH säädetty arvoon 7,0).
5
Viljelyn päätyttyä reaktiolientä käsiteltiin kuten esimerkissä 1 on selostettu, jolloin saatiin 11 mg 6-metoksi-IsoML-236B laktonia, jolla oli samat fysikaaliset ominaisuudet kuin esimerkissä 1 saadulla tuotteella.
10
Esimerkki 5 6-metoksl-IsoML-236B laktonln valmistus 15 Esimerkissä 1 selostettu menettely toistettiin, paitsi että Absldla coerulea IF0-4423:n asemasta käytettiin Syncephalastrum racemosum IF0-4814 itiöitä. Saatiin 5 mg haluttua 6-metoksi-IsoML-236B laktonia.
20 Esimerkki 6 6-metoksi-l8oML-236B laktonin valmistus
Esimerkissä 1 selostettu menettely toistettiin, paitsi että Absidla 25 coerulea IFO-4423:n asemasta käytettiin Cunninghame1la echinulata IFO-4445 itiöitä. Saatiin 3 mg haluttua 6-metoksi-IsoML-236B laktonia.
Esimerkki 7 30 6-metoksi-l8oML-236B laktonin valmistus
Kaksikymmentä 500 ml:n Erlenmeyer-pulloa, joista kussakin oli 100 ml esimerkissä 1 kuvatun koostumuksen omaavaa väliainetta, ympättiin 35 Absidia coerulea IFO-4423 itiöillä. Pulloja viljeltiin sitten ravistaen 220 s.p.m., 26°C:ssa 4 päivän ajan. Näin saatu mlkro-organismi-massa kerättiin sentrifugolmalla, pestiin fysiologisella suolaliuok- 1β 75186 1 sella ja kerättiin jälleen sentrlfugolmalla. Se suspendoitiln sitten 1,8 litraan 0,1 N fosfaattipuskuriliuosta (pH 7,0). Natrium-ML-236B karboksylaattia ja glukoosia lisättiin sitten suspensioon, vastaavasti loppupitoisuuksiin 0,05% ja 0,2%. Viljelmä pidettiin 26°C:ssa, ra-5 vistaen 220 s.p.m., vielä 5 päivää. Tämän jälkeen reaktioliemi suodatettiin ja käsiteltiin kuten esimerkissä 1 on selostettu, antaen 8 mg 6-metoksi-IsoML-236B laktonla.
10 15 20 25 30 35
Claims (7)
19 751 86
1 Patenttivaatimukset
1. Menetelmä kaavan (1) mukaisen lääkeaineena käyttökelpoisen yhdisteen: 5 0^/v/OH 10 111 O H3C'^^yX‘° ^
15 CH3 OCH3 20 tätä yhdistettä vastaavan vapaan hydroksikarboksyylihapon ja tämän hapon suolojen ja estereiden valmistamiseksi, tunnettu siitä, että ML-236B-yhdiste, joka on valittu ryhmästä, joka käsittää ML-236B 25 laktonin, ML-236B karboksyylihapon sekä tämän hapon suolat ja esterit alkokslloidaan entsymaattisesti saattamalla ML-236B yhdiste kosketukseen suvun Syncephalastrum, Absidia tai Cunninghamella mikro-organismin tai mainitusta mikro-organimista saadun soluvapaan, entsyymipitoisen uutteen kanssa ja tarvittaessa suoritetaan tuotteen suolan muodostaminen . . 30 tai esteröinti. :r.: 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mikro-organismi on Syncephalastrum racemosum IFO-4814, Absidia coerulea IFO-4423 tai Cunninghamella echinulata IFO-4445. 1 2 35 Minkä tahansa edellisistä patenttivaatimuksista mukainen menetelmä, 2 tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (III) mukainen yhdiste: 75186 m--ooc^ 5 0 \ (E) io H3C J ^ CH3 is jossa M on natrium tai kalium.
4. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (V) mukainen yhdiste: 25 R-OOC^ H°\/ 30 0 S ; 35 CH3 AJ^^ch 3- m II 751 86 1 jossa R tarkoittaa alkyyliryhmää, jossa on 1-6 hiiliatomia.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R tarkoittaa metyyliryhmää. 5 10 15 20 25 30 35 22 751 86
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11403881 | 1981-07-21 | ||
| JP56114038A JPS5815968A (ja) | 1981-07-21 | 1981-07-21 | Ｍｌ−２３６ｂ誘導体およびその製法 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI822567A0 FI822567A0 (fi) | 1982-07-20 |
| FI822567L FI822567L (fi) | 1983-01-22 |
| FI75186B true FI75186B (fi) | 1988-01-29 |
| FI75186C FI75186C (fi) | 1988-05-09 |
Family
ID=14627469
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI822567A FI75186C (fi) | 1981-07-21 | 1982-07-20 | Foerfarande foer framstaellning av ml-236b-derivat. |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4447626A (fi) |
| EP (1) | EP0070649B1 (fi) |
| JP (1) | JPS5815968A (fi) |
| KR (1) | KR880001354B1 (fi) |
| AT (1) | ATE39487T1 (fi) |
| AU (1) | AU547968B2 (fi) |
| CA (1) | CA1185199A (fi) |
| DE (1) | DE3279304D1 (fi) |
| DK (1) | DK159397C (fi) |
| ES (1) | ES8308358A1 (fi) |
| FI (1) | FI75186C (fi) |
| IE (1) | IE54747B1 (fi) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USRE33033E (en) * | 1985-07-05 | 1989-08-22 | Merck & Co., Inc. | Process for the preparation of HMG-CoA reductase inhibitors intermediates |
| US4611081A (en) * | 1985-07-05 | 1986-09-09 | Merck & Co., Inc. | Process for the preparation of HMG-CoA reductase inhibitors intermediates |
| US4841074A (en) * | 1987-12-11 | 1989-06-20 | Merck & Co., Inc. | Intermediates and processes for 6-carboxy HMG-CoA reductase inhibitors |
| JP2792600B2 (ja) * | 1989-04-14 | 1998-09-03 | 旭電化工業株式会社 | メバロン酸生産菌 |
| ATE135352T1 (de) * | 1989-06-09 | 1996-03-15 | Merck & Co Inc | 3-keto-hmg-coa reduktase-inhibitoren |
| KR100186758B1 (ko) | 1996-08-09 | 1999-04-01 | 영진약품공업 주식회사 | 프라바스타틴(pravastatin)전구체의제조방법 |
| IN191580B (fi) | 1999-12-17 | 2003-12-06 | Ranbaxy Lab Ltd |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5612114B2 (fi) * | 1974-06-07 | 1981-03-18 | ||
| DK149080C (da) * | 1980-06-06 | 1986-07-28 | Sankyo Co | Fremgangsmaade til fremstilling af derivater af ml-236b-carboxylsyre |
-
1981
- 1981-07-21 JP JP56114038A patent/JPS5815968A/ja active Granted
-
1982
- 1982-07-07 US US06/395,968 patent/US4447626A/en not_active Expired - Lifetime
- 1982-07-08 EP EP82303576A patent/EP0070649B1/en not_active Expired
- 1982-07-08 AT AT82303576T patent/ATE39487T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-07-08 DE DE8282303576T patent/DE3279304D1/de not_active Expired
- 1982-07-09 CA CA000406984A patent/CA1185199A/en not_active Expired
- 1982-07-12 AU AU85926/82A patent/AU547968B2/en not_active Expired
- 1982-07-20 FI FI822567A patent/FI75186C/fi not_active IP Right Cessation
- 1982-07-20 IE IE1738/82A patent/IE54747B1/en not_active IP Right Cessation
- 1982-07-20 ES ES514185A patent/ES8308358A1/es not_active Expired
- 1982-07-20 DK DK325782A patent/DK159397C/da not_active IP Right Cessation
- 1982-07-21 KR KR8203252A patent/KR880001354B1/ko not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI75186C (fi) | 1988-05-09 |
| IE821738L (en) | 1983-01-21 |
| DK325782A (da) | 1983-01-22 |
| IE54747B1 (en) | 1990-01-31 |
| AU8592682A (en) | 1983-01-27 |
| JPS6355502B2 (fi) | 1988-11-02 |
| DE3279304D1 (en) | 1989-02-02 |
| KR840000519A (ko) | 1984-02-25 |
| AU547968B2 (en) | 1985-11-14 |
| FI822567L (fi) | 1983-01-22 |
| KR880001354B1 (ko) | 1988-07-28 |
| ES514185A0 (es) | 1983-08-16 |
| EP0070649A3 (en) | 1984-04-04 |
| EP0070649B1 (en) | 1988-12-28 |
| FI822567A0 (fi) | 1982-07-20 |
| US4447626A (en) | 1984-05-08 |
| DK159397C (da) | 1991-03-25 |
| JPS5815968A (ja) | 1983-01-29 |
| EP0070649A2 (en) | 1983-01-26 |
| ES8308358A1 (es) | 1983-08-16 |
| CA1185199A (en) | 1985-04-09 |
| DK159397B (da) | 1990-10-08 |
| ATE39487T1 (de) | 1989-01-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0074222B1 (en) | Mb-530b derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| Serizawa et al. | Microbial hydroxylation of ML-236B (compactin) and monacolin K (MB-530B) | |
| FR2483912A1 (fr) | Derives hydroxycarboxyles du compose ml-236b, leur procede de preparation et leur application therapeutique | |
| US4342767A (en) | Hypocholesteremic fermentation products | |
| US4319039A (en) | Preparation of ammonium salt of hypocholesteremic fermentation product | |
| CA2112442A1 (en) | Hexahydroaphthalene ester derivatives, their preparation and their therapeutic uses | |
| EP0076601B1 (en) | Octahydronaphthalene derivatives and their preparation | |
| HK1000937B (en) | Hexahydronaphthalene ester derivatives, their preparation and their therapeutic uses | |
| FI75186C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ml-236b-derivat. | |
| Tsantrizos et al. | Biosynthesis of the hypotensive metabolite oudenone by Oudemansiella radicata. 1. Intact incorporation of a tetraketide chain elongation intermediate | |
| US4343814A (en) | Hypocholesterolemic fermentation products | |
| US4432996A (en) | Hypocholesterolemic fermentation products and process of preparation | |
| JPH0354103B2 (fi) | ||
| US5102793A (en) | Stereospecific keto reduction of bicyclooctandione-carboxylic acid esters by microorganisms | |
| EP0068680B1 (en) | Antibiotics | |
| JPS6254476B2 (fi) | ||
| JPH0355471B2 (fi) | ||
| JPH0333698B2 (fi) | ||
| WO1999060151A1 (en) | New biotechnological process for preparing hydroxylated ml-236b derivatives, known as m-4 and m-4', and analogues thereof | |
| JPH0366297B2 (fi) | ||
| JPH0482135B2 (fi) | ||
| JPH0379332B2 (fi) | ||
| JPS6348858B2 (fi) | ||
| JP2003012607A (ja) | 新規なメバスタチン誘導体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |
Owner name: SANKYO COMPANY LIMITED |