DK159172B - Testmateriale, dets anvendelse og fremstilling - Google Patents

Description

DK 159172 B

Opfindelsen angår et testmateriale til bestemmelse af tilstedeværelsen af et stof i en testprøve, idet prøven bringes i berøring med materialet, og den overskydende prøve dernæst afstryges. Efter afstrygningen vil et detekterbart 5 respons kunne iagttages i materialet, hvis den specifikke analyt forekommer i prøven. Opfindelsen angår desuden en fremgangsmåde til bestemmelse af nærværelsen af et stof i en testprøve under anvendelse af testmaterialet, og opfindelsen angår tillige en fremgangsmåde til fremstilling af dette 10 materiale.

opfindelsen finder anvendelse inden for mange analyseområder. Målingen af glucose i blod eller serum har længe været et anliggende af største vigtighed for diabetikere. Målingen af kaliummængden i blodet hjælper lægen ved diag-15 nosticering af tilstande, der fører til muskelirritabilitet og nervøse forandringer i hjertemuskelvævet. Sådanne tilstande omfatter oliguri, anuri, urinobstruktion og nyresvigt på grund af chok. Påvisningen af okkult blod i fæces er ligeledes til stor hjælp, når diagnosen af mange indre syg-20 domme skal stilles.

Med testprøver, såsom blod og fæces, har et testmateriale - hvor prøven er påført fysisk og fulgt op af direkte visuelle observationer eller observationer med instrumenter - ledsagekomplikationer, som ikke kendes fra vandige 25 opløsninger, f.eks. urin. Både blod og fæces indeholder stærkt pigmenterede bestanddele, som kan gribe forstyrrende ind i observationen af et detekterbart respons, hvilket skyldes tilstedeværelsen af et specifikt stof under analysen.

Det er åbenbart, at en hurtig, lettilgængelig metode 30 til at bestemme sådanne testprøvebestanddele, hvorved den overskydende prøve simpelthen kan afstryges, vil højne niveauet betydeligt af såvel disse teknologier som af andre, hvor hurtige, nøjagtige bestemmelser vil være fordelagtige.

Et problem, der har medført væsentlige ulemper ved 35 de kendte testmaterialer, jfr. det i det følgende angivne, er den følsomme natur af ethvert øvre lag eller filtrerende

DK 159172 B

2 lag. Interfererende stoffer, herunder røde blodlegemer, der tilbageholdes på overfladen af et øvre eller overliggende lag, må fjernes ved vask eller aftørring, inden et respons kan iagttages eller måles. Når forsøg er blevet gjort på at 5 aftørre alle de interfererende stoffer fra det øvre lag, har det vist sig, at det er vanskeligt at fjerne alle disse stoffer uden at anvende et betydeligt tryk ved aftørringen.

Et sådant tryk har tendens til at sprænge det polymere øvre lag, hvilket bevirker, at aflæsninger af resultaterne bliver 10 vanskelige og ofte unøjagtige. Det har derfor været praksis at forsøge at fjerne interfererende stoffer ved vask efterfulgt af opsugning (aftrykning) til fjernelse af overskud af fugtighed. Omend denne metode stadig anvendes i udstrakt grad, fjerner vask ikke alle de interfererende stoffer eller 15 farvet materiale. Hvis der gøres forsøg på at forøge trykket af den strøm, der anvendes til vask af testmaterialet, har det vist sig, at overfladen kan sprænges på samme måde som forårsaget af en kraftig aftørrende påvirkning. Der har således længe været behov for at anvise en mulighed for 20 fjernelse af interfererende stoffer fra det polymere øvre lag af et testmateriale, uden at der øves uønsket indflydelse på detekteringen.

Det har vist sig, at en i det mindste delvis tværbundet polymer at gelatine, agarose, alginsyre, et salt af 25 alginsyre eller en blanding deraf kan anvendes til beskyttelse af et øvre reagenslag. Den nævnte polymer er ikke blot gennemtrængelig for vand, men også uigennemtrængelig for proteiner og farvede pigmenter, og tjener derfor som en ideel overflade for et testmateriale, der aftørres.

30 Testmaterialet ifølge opfindelsen, der er af den i krav l's indledning angivne art, er således ejendommeligt ved, at det øvre lag omfatter en polymer af gelatine, agarose, alginsyre, et salt af alginsyre eller blandinger deraf, hvilken polymer i det mindste er delvis tværbundet.

35 Anvendelsen af et testmateriale, hvori en bærermatrix, f.eks. papir, er imprægneret med en indikator for glucose,

DK 159172 B

3 er beskrevet i USA-patentskrift nr. 2.981.606. Et sådant materiale omtales som nyttigt, når glucosen i blod skal bestemmes.

Det omtalte patentskrift beskriver en glucoseindika-5 tor, som omfatter en blanding af glucoseoxidase, peroxidase samt et farvedannende stof, f.eks. benzidin eller o-tolidin.

Når papir imprægneres med en sådan sammensætning og tørres, opnås et testpapir, som kan anvendes til at måle glucosen, idet papiret bringes i berøring med en dråbe blod eller 10 urin, og man iagttager, om der dannes nogen farve.

Imidlertid har materialet i det omtalte patentskrift en betydelig mangel, når det er blod, der er testprøven: det farvede stof i blodet vanskeliggør en let iagttagelse af farven, som dannes ved en positiv test. Man har ifølge 15 USA-patentskrifterne nr. 3.092.465 og 3.298.789 været opmærksom på dette problem. Begge patentskrifter omhandler flere aspekter af et testmateriale til at undersøge, omd er er glucose i blod. Begge beskriver testmaterialer, som omfatter et enzymsystem i en porøs bærermatrix, som i f.eks.

20 USA-patentskrift nr. 2.981.606.

Denne imprægnerede sammensætning beskyttes mod hæmoglobinets og andre bestanddeles tilbøjelighed til at plette, idet der anvendes et beskyttende overtræk, eller et øvre lag, af en membran, der er gennemtrængelig for vand og glu-25 cose, men som tilbageholder relativt store molekyler. Generende pigmenter, f.eks. hæmoglobin, kan således afvaskes, før materialet iagttages for tilstedeværelsen af eller ændring i farve, der skyldes tilstedeværelsen af glucose. Den beskyttende membran kan udstøbes som en flydende film, f.eks.

30 en opløsning af celluloseacetat i benzen, som man lader tørre, hvorved der efterlades en kontinuerlig, porøs film på det reagensimprægnerede papirlag.

En lignende teknologi er beskrevet i USA-patentskrift nr. 3.992.158. Der beskrives alment et komplet testelement, 35 som er udstyret med mindst to lag, og som omfatter et sprede-lag og et reagenslag. En væskeformig prøve bringes i berøring

DK 159172 B

4 med spredelaget, som er porøst, og som bevirker, at testprøven spredes ud over overfladen af spredelaget.

I DE offentliggørelsesskrift nr. 2.460.903 er det beskrevet, at tetraalkylbenzidin kan anvendes som chromogen 5 i forskellige testmaterialer, f .eks. papirbaserede materialer til påvisning af analyter i serum og urin. De her beskrevne materialer har et reagenslag med en polyvinylacetat-propio-nat-matrix.

Til opsummering af baggrunden af teknologiske udvik-10 linger, som har ført til den foreliggende opfindelse, kan det angives, at der kendes materialer, som detekterer tilstedeværelsen af mange analyter, som forekommer i flydende testprøver. Eksempelvis kan glucose i blod påvises ved at benytte en papirstrimmel, der er imprægneret med glucoseoxi-15 dase, peroxidase og en egnet indikator.

Selv om et sådant materiale har haft en betydelig kommerciel succes i forbindelse med glucose-urinanalyse, lider det af en alvorlig mangel i forbindelse med blodanalyse, nemlig vanskeligheden ved at iagttage farvedannelse, 20 som skyldes sådanne blodbestanddele som hæmoglobin. I USA--patentskrifterne nr. 3.092.465, 3.298.789 og 3.992.158 har man været opmærksom på dette problem, idet man har tilvejebragt et porøst filmovertræk, som filtrerer de interfererende blodbestanddele fra, medens det samtidig tillader den vandige 25 del af prøven at gennemtrænge filmen og berøre reagenslaget.

Sådanne materialer tillader fjernelsen af de interfererende bestanddele ved afvaskning i en vandstrøm. Imidlertid har alle tidligere eksperimentatorer undgået en afstryg-ningsteknik til praktiske formål. Den foreliggende opfindelse 30 giver brugeren mulighed for blot at af stryge den overskydende prøve fra testmaterialet, og derved elimineres nødvendigheden af en afvaskning.

For at sikre, at læserens opfattelse er identisk med den tilsigtede, hvad angår en række udtryks forståelse, er 35 det nødvendigt at definere visse udtryk, som anvendes i nærværende beskrivelse. De følgende definitioner skal tyde-

DK 159172 B

5 liggøre omfanget af den foreliggende opfindelse og muliggøre dens udarbejdelse og anvendelse.

Udtrykket "stof" skal betegne vandopløselige bestanddele af blod, fæces eller andre testprøver, som kan påvises 5 ved hjælp af den foreliggende opfindelse. F.eks. kan "stof" omfatte glucose, hydrogenion (pH), urinsyre, cholesterol og aminosyrer.

Ved "bærermatrix" forstås fysiske midler til at holde et reagenssystem i stand til at påvise stoffet og til at 10 muliggøre adskillelse og let fjernelse af blodbestanddele, der ikke kan opløses i vand. Bærermatrixen omfatter mindst to lag; et øvre lag, som er porøst, og som tillader passagen af vandet og opløste stoffer gennem det øvre lag, og et nedre lag, som indeholder reagenssystemet.

15 Det anvendte "bærermateriale" omfatter et bredt område af materialer og størrelser. Ideelt er det en relativt tynd film, som er aflang, idet den søvre og nedre side i det væsentlige er plane. Bærermatrixen er fastgjort til den øvre sides ene ende, og den anden ende fungerer som et hånd-20 greb. De typiske materialer, som er egnet til bærermaterialet, omfatter utallige plastmaterialer eller polymere, f.eks. celluloseacetat, polyethylenterephthalat, polycarbonater og polystyren. Et "reagenssystem", som det benævnes her, omfatter én eller flere bestanddele, som, hvadenten de virker 25 enkeltvis eller samlet, er i stand til at tilvejebringe et detekterbart respons, når det specifikke stof analyseres.

F.eks. kan et sådant reagenssystem, der er nyttigt ved påvisningen af glucose i blod, indeholde glucoseoxidase, peroxidase samt en indikator, som skifter farve i nærværelse af 30 hydrogenper oxid. Desuden kan reagenssystemer indeholde enhver af mange kendte pH-indikatorer. De sidstnævnte kan anvendes i en test for blodets pH-værdi. Adskillelige andre reagenssystemer kan anvendes i forbindelse med den foreliggende opfindelse; valget af disse ligger inden for en fagmands 35 område, når denne er bekendt med nærværende beskrivelse.

DK 159172 B

6

Et "detekterbart respons" er en fysisk eller kemisk manifestation eller forandring, som hidrører fra tilstedeværelsen af det specifikke stof i testprøven. Det kan være en ændring i farve eller fremkomsten af farve, fluorescens, 5 luminescens, lysabsorption eller reflektans, ultraviolette eller infrarøde spektre eller en anden egenskab, som kan iagttages visuelt eller ved hjælp af instrumenter.

Udtrykket "polymer" omfatter gelatine, alginsyre og dens salte samt agarose.

10 Den foreliggende opfindelse bygger som allerede nævnt på tilvejebringelsen af et nyt testmateriale til detektering af et stof i f.eks. blod. Den omfatter en forbedring af de tidligere materialer, som indeholder et reagenssystemlag, som på den ene side er fastgjort til et bærermateriale og 15 på den side til et øvre lag, som er gennemtrængeligt for vand og stoffet, men som i det væsentlige er uigennemtrængeligt for proteiner og farvede pigmenter, f.eks. hæmoglobin, som er indeholdt i blodet. Forbedringen ligger i anvendelsen som overlag af de nævnte i det mindste delvis tværbundne 20 polymere, som omfatter gelatine, alginsyre og dens salte samt agarose. Det forbedrede testmateriale gør det muligt for brugeren at påføre blod eller en anden testprøve på det øvre lag, vente en forudbestemt tid for at gøre det muligt for stoffet at passere gennem det øvre lag til reagens system-25 laget, og derpå blot afstryge den overskydende prøve. Det er således ikke længere nødvendigt at afvaske det overskydende blod eller anden testprøve omhyggeligt, og de ledsagende forstyrrende proteinholdige materialer og farvede pigmenter udelukkes. Ved at være i besiddelse af den egenskab 30 at kunne afstryges, tilvejebringer testmaterialet en forbedret mulighed for iagttagelse af det detekterbare respons, større nøjagtighed og anvendelighed, og samtidig formindskes forekomsten af forkerte negative resultater.

Det her omhandlede testmateriale indeholder fire 35 grundelementer, nemlig et bærermateriale, et nedre reagenssystemlag, et reagenssystem og et øvre lag. Reagenssystem- 7 laget indeholder reagenssysternet, som giver respons for det stof, der skal analyseres, og hvis ene side er fastgjort til det øvre lag, medens den anden side er fastgjort til bærermaterialet.

5 De sammensatte øvre og nedre lag (herefter benævnt bærermatrix) er fastgjort til et aflangt bærermateriales ene ende, således at det nedre lag af matrixen er anbragt mellem det øvre lag og bærermaterialet. I brug funderer den anden ende af bærermaterialet som et bekvemt håndgreb. Et 10 sådant testmateriale kan holdes i den ende, hvor grebet er, medens den anden ende, som bærer matrixen, bringes i berøring med testprøven.

Materialet, der kan anvendes til bærermaterialet, omfatter film af et overmåde stort antal plastmaterialer 15 eller polymere. Eksemplerne herpå er sådanne polymere materialer som f.eks. celluloseacetat, polyethylenterephthalat, polycarbonater og polystyren. Bæreren kan være uigennemtrængelig for lys, eller den kan transmittere lys eller anden energi. Foretrukne bærere omfatter transparente materialer, 20 som er i stand til at transmittere elektromagnetisk stråling af en bølgelængde i området fra ca. 200 nm til ca. 900 nm. Bæreren behøver naturligvis ikke at transmittere hele 200-900 nm-området, selv om det er ønskeligt for den fluoro-metriske påvisning af analytiske resultater, at bæreren er 25 transparent over et område, der er bredere end, eller i det mindste lig med absorptions- og emissionsspektrene for ethvert fluorescerende materiale, som anvendes til påvisningen. Det kan også være ønskeligt at have en bærer, som transmitterer ét eller flere snævre bølgelængdebånd, og som er uigen-30 nemtrængelig for tilstødende bølgelængdebånd. Dette kan f.eks. gennemføres ved at imprægnere eller overtrække bæreren med ét eller flere farvemidler, som har egnede absorptionsegenskaber.

Bærermatrixen er fortrinsvis fastgjort til et aflangt 35 bærermateriale, som har en øvre, i det væsentlige plan overflade, f.eks. et aflangt stykke polystyrenfilm. Bærermatrixen

DK 159172 B

8 er fastgjort til den plane overflade ved den ene ende, idet den anden ende af polystyrenet fungerer som et bekvemt håndgreb.

Bærermatrixen kan fastgøres til bærermaterialet ved 5 hjælp af ethvert middel, der er foreneligt med den påtænkte anvendelse. Én metode er at bruge en dobbeltsidet klæbestrimmel mellem bærermatrixen og bærermaterialet. En sådan tape kendes som Double Stick® og kan fås fra 3M Company. En anden måde at fastgøre testmidlerne på er at udstøbe en film af 10 en emulsion fra en vandig polymerfase (dvs. en hydrofil bærermatrix), som indeholder reagenssystemet, direkte på bæreren, hvorpå der gennemføres et tørringstrin.

Som angivet ovenfor afhænger det anvendte reagenssystem af den endelige analyse, der skal udføres med testmate-15 rialet. Hvis stoffet, der skal analyseres, er glucose, kan reagenssystemet være et hvilket som helst af mange kendte • formuleringer, som frembringer et kolorimetrisk eller et andet detekterbart respons på glucosen. Et foretrukket reagenssystem for glucose omfatter glucoseoxidase, peroxidase 20 og en redox-indikator, f.eks. benzidin og/eller dettes derivater. De redox-indikatorer, som er egnede til et sådant glucose-følsomt reagenssystem, omfatter o-tolidin, 3,3',5,5*--tetramethylbenzidin (TMB), guaiacum, o-dianisidin, 4-amino-antipyren og andre kendte indikatorer. De er i stand til at 25 ' blive oxideret og til at frembringe et farvet produkt, hvis der forekommer hydrogenperoxid og et peroxidativt aktivt stof.

Andre reagenssystemer, som kan anvendes ifølge opfindelsen, omfatter de systemer, som er i stand til at detektere 30 urinsyre, cholesterol og aminosyrer. Til urinsyre kan et egnet réagenssystem omfatte uricase, peroxidase og en redox--indikator? til cholesterol kan det omfatte cholesterol-oxidase, peroxidase og en redox-indikator; og til aminosyrer den pågældende aminosyreoxidase, peroxidase og en redox-35 indikator.

DK 159172 B

' 9

Opfindelsen kan også anvendes til at detektere fækalt okkult blod, og et egnet reagenssystem til dette brug kan omfatte et organisk hydroperoxid og en redox-indikator.

Reagenssystemet er indeholdt i et lag af bærermatri-5 xen, som er anbragt mellem det øvre lag og bærermaterialet.

Udover reagenssystemet kan reagenslaget også omfatte andre lag, som supplerer reagenssystemet, og som støtter i brugen af testmaterialet. F.eks. kan det være ønskeligt at indbefatte et lysreflekterende lag til at understøtte ved lysreflek-10 tansmålingeme, eller et absorberende lag til at understøtte ved absorptionen af testprøven fra det øvre lag.

Et foretrukkent reagenslag omfatter filtrerpapir eller andet sugende materiale, som er blevet optaget blandt reagenssystemets bestanddele, f.eks. glucoseoxidase, peroxi-15 dase og TMB. Filtrerpapiret kan imprægneres med reagenssystemet ved at dyppes i en opløsning, som indeholder reagens-systembestanddelene. Hvis det er nødvendigt, kan der anvendes to eller flere dypningsopløsninger, således at filtrerpapiret skiftevis dyppes i hver af dem, og tørres mellem dypningerne.

20 En sådan kombinationsdypningsmetode muliggør isolering af de reagenssystembestanddele, som er uforligelige med hinanden i opløsning, men som er forligelige i den tørre tilstand.

Efter imprægnering kan det tørrede filtrerpapir overtrækkes med det øvre lag for at danne en sammensat bærer-25 matrix og derpå påsættes bærermaterialet, eller det kan påsættes direkte på bærermaterialet, efterfulgt af anbringelsen af det øvre lag. Alternativt kan andre lag fastgøres til filtrerpapiret, f.eks. lysreflekterende og/eller absorberende lag, som efterfølges af anbringelsen af det øvre 30 lag og fastgørelsen af bæreren til bærermaterialet.

Selvom fagfolk kender mange midler til at fastgøre bærermatrixen til bærermaterialet, er det foretrukne middel en dobbeltsidet klæbestrimmel, såsom Double Stick® (3M Company) .

35 Det ifølge opfindelsen anvendte særlige øvre lag omfatter den allerede nævnte polymer. Det har vist sig, at

DK 159172 B

10 en tværbunden polymer er enestående modstandsdygtig over for farvning, der skyldes blodbestanddele. Mens de filmbelægninger, der er nævnt i det foregående, kan bruges i en vaskeprocedure, resulterer forsøg på at afstryge den overskydende 5 prøve i en i det mindste delvis indlejring af farvemidler i filmen og/eller beskadigelse af filmens overflade. Den hærdede polymer, der anvendes ifølge opfindelsen, lider ikke af en sådan mangel. Det her omhandlede testmateriale anvendes således ved blot at påføre en testprøve på matrixen og af-10 stryge den igen med f.eks. en serviet, vatkugle eller et papirslommetørklæde. Ethvert respons på analyten kan derefter iagttages uhindret af generende prøvebestanddele.

Det øvre lag påføres fortrinsvis reagenslaget direkte som en opløsning eller emulsion. Polymer, et egnet tværbin-15 dingsmiddel og eventuelt andre bestanddele optages således i et passende opløsningsmiddel, f.eks. vand, og udstøbes som en film på reagenslaget. Ved efterfølgende tørring frembringes en bærermatrix, som er i stand til at detektere en prøvebestanddel, medens generende prøvebestanddele holdes 20 tilbage på det øvre lags overflade. Desuden kan sådanne forstyrrende elementer afstryges fra overfladen af det øvre lag, idet de efterlader den tværbundne polymerfilm praktisk taget intakt.

Tværbinding af polymere, som anvendes i det øvre 25 lag, kan opnås ved enhver kendt tværbindingsmetode, enten ved en kemisk metode (med et hvilket som helst af mange tværbindingsmidler), eller ved brug af højenergistråling, f.eks. ultraviolet lys med høj intensitet. Typiske kemiske tværbindingsmidler omfatter polyfunktionelle aziridinforbin-30 delser, f.eks. ΧΑΜΆ 7, en navnebeskyttet sammensætning, som fremstilles af Cordova Chemical Co., North Muskegon, MI), samt glutaraldehyd, og det er brugen af sådanne forbindelser, der foretrækkes for at opnå den ønskede hærdning af det øvre lag.

35 Den tværbindingsgrad, der er nødvendig for at opnå det hærdede øvre lag af polymer, kan variere meget, og ekspe-

DK 159172 B

11 rimentatoren kan let tilpasse den hensigtsmæssige tværbindingsgrad til den specifikke analyse, hvortil det endelige testmateriale skal anvendes. Ved siden af de specifikke tværbindingsgrader, som opnås i nedenstående eksempler, 5 ligger således enhver tværbindingsgrad inden for rammerne af den foreliggende opfindelse, forudsat at den vil være tilstrækkelig til at tilvejebringe et hærdet øvre lag, som forbliver intakt efter af strygning af den overskydende prøve, f.eks. med en papirlag eller en serviet. Tværbindingsgraden 10 skal naturligvis ikke være sådan, at den udelukker gennemtrængningen af de vandige bestanddele af testprøven gennem det øvre lag til reagenssystemlaget. Det må også påregnes, at for kraftig tværbinding kan resultere i tværbundne polymere, som er skøre og/eller svære at påføre eller fastgøre 15 til reagenslaget.

Eksempler

De følgende eksempler anføres for at være læseren yderligere behjælpelig med udøvelsen af den foreliggende 20 opfindelse. De foretrukne udførelsesformer er beskrevet i enkeltheder og resultaterne analyseret.

Fremstilling af afstrygeliot testmateriale for glucose i blod.

25 Eksperimenter blev udført til fremstilling af et teststrimmelmateriale til måling af glucose i helblod. Labo-ratorie-filtrerpapir blev imprægneret med glucoseoxidase, peroxidase og TMB og derefter tørret. En vandig opløsning af gelatine og tværbindingsmiddel blev pålagt som overtræk 30 på den ene side af det tørrede filtrerpapir og fik mulighed for at tørre. Det overtrukne papir blev derpå påsat - med papirsiden nedad - en polystyrenstrimmel.

En strimmel filtrerpapir (Whatman 3MM) blev dyppet i en opløsning, som indeholder 1,5% (w/v) TMB;2HC1 og 1,0% 35 (w/v) Gantrez AN-139 i vand og er tørret ved 60°C. Gantrez AN er en interpolymer af methylvinylether og maleinsyrean-

DK 159172 B

12 hydrid og er markedsført af GAF Corp. Det tørrede papir blev derpå neddyppet i en anden opløsning, som indeholdt 4,8% (w/v) polyvinylpyrrolidon, 5,2% (w/v) tris-(hydroxyl-methyl)-aminomethan, 2,2% (w/v) malonsyre, 3,7% (w/v) dina-5 triummalonat, 4 x 106 IU/1 peroxidase og 56.000 IU/l glucose-oxidase i destilleret vand.

Efter tørring ved 60“C blev papiret neddyppet i en tredje opløsning, som indeholdt 1,5% (w/v) ethylcellulose i et opløsningsmiddel, som er 5% (w/v) ethylalkohol og 95% 10 (w/v) toluen, efterfulgt af tørring ved 60eC.

Det således fremstillede glucosepapir frembringer en blå farve, når det bringes i berøring med en vandig opløsning, som indeholder glucose.

Der blev fremstillet en overtræksopløsning, som inde-15 holdt 12,5% (w/v) gelatine (type A, 275 Bloom, Fisher Scientific Co.), 0,1% (w/v) natriumbenzoat, 0,5% (w/v) XAMA-7 (en navnebeskyttet tværbindende sammensætning, der er baseret på aziridin, fremstillet af Cordova Chemical Co.) i vand.

20 Glucosepapir, som var fremstillet som ovenfor, blev overtrukket med overtræksopløsningen, idet der blev anvendt en # 46 Mayer-stav (vådfilmtykkelse på ca. 0,10 mm). Filmen blev tørret i en luftovn ved ca. 40"C.

Den således fremstillede bærermatrix blev derefter 25 skåret til en strimmel med en bredde på ca. 0,5 cm og påsat kanten af en polystyrenfilmstrimmel, idet der blev anvendt et dobbeltsidet klæbebånd, kendt som Double Stick® (3M Co.). Klæbebåndets ene side blev påsat den ikke-overtrukne side af den imprægnerede filtrerpapirstrimmel. Klæbebåndets anden 30 side blev påsat polystyrenfilmen.

Polystyrenfilmen med den påsatte bærermatrix blev derpå skåret op vinkelret på papirstrimlens akse. De resulterende teststrimler målte ca. 0,5 x ca. 8,25 cm. På hver af dem blev et kvadrat af bærermatrixen med dimensionerne 35 ca. 0,5 cm x ca. 4,5 cm fastgjort til den ene ende.

DK 159172 B

13

Bedømmelse af testmaterialets kapacitet til qlucosemålinq.

Der blev foretaget en bedømmelse af testmaterialet i det ovenstående eksempel. Formålet med bedømmelsen var at vurdere materialets egnethed til at måle glucose ved anven-5 delse af afstrygningsteknikken.

Testmaterialer blev inokuleret med helblodprøver, som var blevet indstillet på forskellige glucosekoncentra-tioner. For hver prøve blev en dråbe helblod påført en reagensstrimmel og derpå 30 sekunder senere afstrøget med en 10 vatkugle. Den benyttede reagensstrimmel blev undersøgt med et SERALYZER®-reflektionsfotometer (tilgængeligt fra Ames Division, Miles Laboratories, Inc.) ved 770 nm tyve sekunder efter, at prøven blev fjernet. Denne fremgangsmåde blev gentaget, idet der blev anvendt blodprøver med ti forskellige 15 glucosekoncentrationer.

De opnåede data fremgår af den følgende tabel:

Glucose (mg/dl) K/S (ved 770 nm) 20 0,105 20 41 0,218 75 0,548 101 0,735 132 0,976 161 1,146 25 200 1,406 245 1,603 282 1,759 325 1,973 (K/S) er defineret som: 30

(K/S) = (1-R)2 2R

35 i hvilken R er fraktionen af reflektans fra testmaterialet, K er en konstant, og S er lysspredningskoefficienten for det specifikke reflekterende medium. Den ovenstående ligning

DK 159172 B

14 er en simplificeret form af den velkendte Kubelka-Munk-ligning, jfr. Gustav Kortiim, "Reflectance Spectroscopy", side 106-111, Springer Verlag, New York (1969).

De angivne data svarer til en lineær dosis-respons-5 kurve, som betegner en god funktion af testmaterialet.

Claims (10)

1. Testmateriale til bestemmelse af tilstedeværelsen af et stof i en testprøve, hvilket materiale omfatter en bærermatrix, som har et øvre og et nedre lag, idet det nedre 5 lag er fastgjort til et bærermateriale, hvorhos det øvre lag er gennemtrængeligt for vand, men uigennemtrængeligt for proteiner og/eller farvet pigment, som er indeholdt i testprøven, og det nedre lag omfatter et reagenssystem, som kan frembringe et detekterbart respons i nærværelse .af stof-10 fet, kendetegnet ved, at det øvre lag omfatter en polymer af gelatine, agarose, alginsyre, et salt af algin-syre eller blandinger deraf, hvilken polymer i det mindste er delvis tværbundet.

2. Testmateriale ifølge krav 1, kendete g-15 net ved, at polymeren er gelatine.

3. Testmateriale ifølge krav l og 2, kendetegnet ved, at tværbindingen af polymeren er opnået ved anvendelse af højenergistråling eller ved hjælp af et kemisk tværbindingsmiddel.

4. Testmateriale ifølge ethvert af kravene 1 til 3, kendetegnet ved, at stoffet, der skal bestemmes, er glucose, hydrogenion, natrium, kalium, lithium, urinsyre, cholesterol eller en aminosyre.

5. Testmateriale ifølge ethvert af kravene 1 til 4, 25 kendetegnet ved, at det omfatter en bærermatrix, som har et øvre lag og et reagenssystemlag, der er fastgjort til det øvre lag, idet reagenssystemlaget omfatter et sugende materiale, hvori der er inkorporeret et reagenssystem, der er i stand til at frembringe et detekterbart respons i nær-30 værelse af stoffet, og at det øvre lag omfatter en kontinuerlig film af en i det mindste delvis tværbundet polymer som defineret i krav 1 eller 2, og et bærermateriale, til hvilket bærermatrixens reagenssystemlag er fastgjort.

6. Testmateriale ifølge ethvert af kravene 1 til 5, 35 kendetegnet ved, at reagenssystemet omfatter glucoseoxidase, peroxidase og en redox-indikator. DK 159172 B

7. Testmateriale ifølge krav 6, kendetegnet ved, at indikatoren er 3,31,5,5'-tetramethylbenzidin.

8. Fremgangsmåde til bestemmelse af nærværelsen af et stof i en testprøve, kendetegnet ved, at den 5 omfatter følgende trin: kontakt mellem et testmateriale ifølge ethvert af kravene 1 til 7 og en testprøve, efterfølgende afstrygning af testprøverester fra det øvre lag og iagttagelse af et detekterbart respons.

9. Fremgangsmåde til fremstilling af et testmateriale ifølge ethvert af kravene 1 til 7, kendetegnet ved, at den omfatter følgende trin: inkorporering af et sugende materiale i et reagenssystem til dannelse af et reagenssystemlag, som har en øvre 15 side og en nedre side, overtrækning af reagenssystemlagets øvre side med en vandig opløsning af en polymer som defineret i krav 1 eller 2 og et tværbindingsmiddel derfor til dannelse af et øvre lag og 20 fastgørelse af reagenssystemlagets nedre side til et bærermateriale *

10. Fremgangsmåde ifølge krav 9, kendetegnet ved, at reagenssystemlagets øvre side overtrækkes med det øvre lag, inden den nedre side af reagenslaget fast-25 gøres til bærermaterialet.