DK157339B

DK157339B - 7-sulfenylamino-7alfa-methoxycephem- og 6-sulfenylamino-6alfa-methoxypenamderivater til anvendelse som mellemprodukter ved fremstilling af antibiotisk aktive cephalosporin- eller penicillinforbindelser og fremgangsmaade til fremstilling af derivaterne

Info

Publication number: DK157339B
Application number: DK149177AA
Authority: DK
Inventors: Tetsuo Hiraoka; Takeo Kobayashi
Original assignee: Sankyo Co
Priority date: 1976-04-05
Filing date: 1977-04-04
Publication date: 1989-12-18
Also published as: ES457577A1; CA1113454A; DK157339C; SE440357B; DK149177A; JPS52122390A; NL188220B; DE2715316A1; IE45411B1; CH629811A5; SE7703908L; US4438265A; NL7703745A; DE2715316C2; HU178092B; FR2347371A1; NL188220C; IE45411L; GB1530554A; FR2347371B1

Description

1 DK 157339 B

Den foreliggende opfindelse angâr 7-sulphenylamino-7a-methoxycephem- og 6-sulphenylamino-6a-methoxypenamderiva-ter til anvendelse som mellemprodukter ved fremstilling af antibiotisk aktive cephalosporin- eller penicillin-forbindelser og en fremgangsmàde til fremstilling af derivaterne, der er hidtil ukendte og velegnede som mellemprodukter ved fremstilling af antibiotisk aktive 7-alkoxycephemderivater og 6-alkoxypenicillansyrederivater.

De omhandlede cephalosporin-forbindelser er derivater af 3-cephem, som har strukturen: [7-2 δ mr . i —"yy som beskrevet i J. Amer. Chem. Soc. 84, 3400 (1962). De her omhandlede penicillinderivater benævnes derivater af penicillansyre, som har formlen: 5 /CH3 ,_ 6 5 0 ch3 • 7_;a1_2]

^^ COQH

Der kendes mange cephalosporin- og penicillinderivater med antibiotisk aktivitet. De f0rste af denne art, som man har fremstillet, havde forskellige substituerede acetamidokæder ved 70- eller 60-stillingerne og var usub-stituerede ved 7a- eller 6a-stillingerne, respektivt. Det har imidlertid for nylig vist sig, at ogsâ forskellige 2

DK 157339 B

7α- eller 6a-alkoxyderivater af disse forbindelser er værdifulde antibiotiske stoffer.

Cephem- og penamderivaterne if01ge opfindelsen er ejendommelige ved det i krav l's kendetegnende del anf0r-te, og fremgangsmàden if0lge opfindelsen er ej endommelig ved det i krav 2's kendetegnende del anf0rte.

Fra dansk patentskrift nr. 151 025 er det kendt at frem-stille Æ-lactamforbindelser, der kan overf0res i antibiotisk virksomme penicillin- og cephalosporin-deri-vater, idet der dog som mellemprodukt anvendes Schiff'ske baser. Derfor mâ carboxylsyredelen i penicillinet eller cephalosporinen foreligge i form af en stabil ester. Specielt kunne der ikke fremstilles en Schiff'sk base med en trimethylsilylestergruppe. Det har nu overraskende vist sig, at fremgangsmàden if01ge opfindelsen forl0ber glat, selv nâr der anvendes en ikke-kostbar trimethyl-silylester. Derved opnàr man pâ fordelagtig mâde det methoxylerede carboxylsyreprodukt if0lge opfindelsen ud fra den frie carboxylsyre. If0lge dansk patentskrift nr.

151 025 er det endvidere til acylering af det methoxylerede produkt n0dvendigt at omsætte den Schiff'ske base med et Girard-reagens eller et lignende reagens og at isolere den dannede frie aminoforbindelse. Derudover kan en forbindelse if01ge opfindelsen acyleres direkte med et reagens, sâsom acylchlorid. Yderligere er det muligt ved omsætning i én beholder at overf0re en forbindelse if0lge opfindelsen i en tilsvarende forbindelse med fri amino-gruppe med en mercaptan eller en phosphorforbindelse og sâ omsætte med et acylchlorid for sâledes pâ en hen-sigtsmæssig og let mâde at fâ det 0nskede penicillin-eller cephalosporinprodukt.

For nylig har man isoleret visse 7a-methoxy-cephalosporiner fra dyrkningsmedier af bacteria til-h0rende slægten Streptomyces (J. Amer. Chem. Soc., 93, 3

DK 157339 B

2308; Antimicrobiel Agens and Chemotherapy, 2, 122; og de tilgængelige japanske patentans0gninger nr. 26488/74, 30593/74 og 42893/74). Der er ogsâ foreslâet forskellige processer til indf0ring af en alkoxygruppe i 7-stillingen af cephemkernen eller i 6-stillingen af penamkernen, sàsom f01gende: (a) Dannelse af en Schiff'sk base af en 7-aminocephem- forbindelse, behandllng af denne Schiff'ske base med en stærk base til dannelse af en carbanion i 7-stillingen og en efterf01gende alkoxylering af denne carbanion; alternativt f0rst halogenering eller alkylthiolering af den Schiff'ske base og derefter omdannelse af den dannede elektrofile gruppe i 7 a-stillingen i en alkoxygruppe. Sàdanne processer er beskrevet i japansk patentans0gning nr. 42691/72; Tetrahedron Letters, 273 og 3505 (1973); J. Org.

Chem., 33, 943 og 2857 (1973); J. Org. Chem. 39, 2794 (1974). Den direkte alkoxylering af carbanionen ved 7-stillingen giver dog et dârligere udbytte, og den indirekte metode, hvorved en elektrofil gruppe f0rst indf0res og derefter omdannes til en alkoxygruppe, er en procès med for mange trin.

(b) Diazotering af en 7-aminocephem-forbindelse og efter-f01gende omdannelse af produktet til det tilsvarnede alkoxy-derivat, som beskrevet i J. Amer. Chem. Soc., 94, 1408 (1972). Denne procès omfatter mange trin, som er komplicerede og giver dârlige udbytter.

(c) N-chlorering af en 7-acylaminocephem-forbindelse, efterf0lgende omdannelse af produktet til den tilsvarende acyliminoforbindelse, efterfulgt af til-sætning af en alkanol, som beskrevet i J. Amer. Chem.

Soc., 95, 2403 (1973). Tetrahedron Letters, 1311 (1974), og J. Org. Chem., 38, 1436 (1973). Denne procès kan dog ikke anvendes, hvis en anion-dannede 4

DK 157339 B

substituent fIndes i sidekæden i 7- eller 3-stillin-gen af cephem-forbindelsen.

(d) Oxidation af en 7-benzylidenaminocephem-forbindelse og omsætning af det resulterende produkt med en alkohol, som beskrevet i tysk offentligg0relsesskrift nr. 2 442 540. Denne procès har den ulempe, at den dannede 7a-7-benzylidenaminocephem-forbindelse ikke direkte kan omdannes til en 7-alkoxy-7-acylamino-cephem-forbindelse.

(e) Omsætning af en 75-(a'-halogenacetamido)cephem-for bindelse med et halogeneringsmiddel til dannelse af et α-halogeniminohalogenid og omsætning af dette produkt med et alkalimetalalkoxid, efterfulgt af hydratisering som beskrevet i tysk offentlig-g0relsesskrift nr. 2 512 670. Denne procès har den ulempe, at visse af de som udgangsmaterialer anvendte 7 5 - ( a '-halogenacetamido)cephem-forbindelser vanske- ligt lader sig syntetisere.

Tilsvarende processer er foreslâet for fremstilling af 6-alkoxy-penicillin-derivater, hvorved man har m0dt de samme problemer.

If01ge den foreliggende opfindelse er der tilvejebragt en forbedret og enkelt metode til alkoxylering af cephem-kernen i 7-stillingen eller i penamkernen i 6-stillingen til opnâelse af hidtil ukendte 7-alkoxycephem- eller 6-alkoxypenamforbindelser, som er velegnede mellemprodukter ved syntesen af forskellige 7-alkoxycephalosporin- eller 6-alkoxypenicillinantibiotica med et bredt antibakterielt spektrum.

De omhandlede forbindelser er 7a-alkoxycephem- og 6a- alkoxypenamforbindelser med den i krav 1 angivne formel 1 2 I, hvori R , R og Z har den der angivne betydning, eller 5

DK 157339 B

er salte deraf.

2 Nàr R repræsenterer en carboxylgruppe, er det ogsâ muligt at danne salte af forbindelserne med formlen I, og disse salte dannes fortrinsvis med farmaceutisk acceptable kationer. Eksempler er salte af alkali- eller jordalkalimetaller, sâsom natrium-, kalium- eller cal-ciumsalte, aluminiumsalte, ammoniumsalte eller salte af organiske baser, f.eks. triethylamin, dicyclohexylamin, dibenzylamin, dimethylbenzylamin, piperidin eller N-ethylpiperidin.

Methyleringen udf0res fortrinsvis i et inert organisk op-l0sningsmiddel ved en temperatur fra -100 °C til 50 °C, fortrinsvis mellem -40 eC og -20 °C. Den n0dvendige reaktionstid afhænger af reagensernes art og reak-tionstemperaturen, men ligger sædvanligvis mellem 5 mi-nutter og 10 timer. Efter reaktionens afslutning kan det 0nskede produkt isoleres og renses pâ konventionel mâde.

Oxidationstemperaturen ligger fortrinsvis mellem -10 eC og 100 °C, og selv om reaktionstiden varierer i afhængighed af reagensernes natur, temperaturen og det eventuelt anvendte opl0sningsmiddel, vil reaktionen sædvanligvis være afsluttet i I0bet af mellem 30 minutter og 3 timer. Efter reaktionens afslutning kan den 0nskede forbindelse III isoleres og renses pà i og for sig kendt mâde. I stedet kan den anvendes uden isolation som udgangsmateriale ved fremstilling af den tilsvarende forbindelse med formlen I.

Forbindelsen III kan ogsâ fremstilles ved omsætning af en forbindelse med formlen IIla 6

DK 157339 B

° il

y—V

». ï 1 2 hvori R , R og Z har den ovenfor definerede betydning, med et dehydratiseringsmiddel, fortrinsvis i nærværelse af en base.

Eksempler pâ dehydrati seringsmidler, soin kan anvendes ved denne reaktion, er thionylchlorid, carboxylsyreanhydrid, carboxylsyrehalogenid, organisk sulfonsyreanhydrid, organisk suifonsyrehalogenid, phosgen og phosphoroxychlorid. Thionylchlorid er det særligt foretrukne dehydratiseringsmiddel. Eksempler pâ baser er tertiære aminer, sâsom quinolin, Ν,Ν-diethylanilin, N,N-dimethylanilin, pyridin, triethylamin, trimethylamin eller diazabi-cyclooctan; og alkalimetalcarbonater eller -bicarbonater, sâsom natriumcarbonat, natriumbicarbonat, kaliumcarbonat eller kaliumbicarbonat. Reaktionen udf0res fortrinsvis i et aprotisk organisk opl0sningsmiddel og fortrinsvis under omr0ring. Reaktionstemperaturen ligger fortrinsvis mellem -10 °C og stuetemperatur, og reaktionstiden vil variere mellem 5 minutter og 12 timer. Efter reaktionens afslutning kan det 0nskede produkt, forbindelsen III, isoleres og renses pâ i og for sig kendt mâde. I stedet kan reaktionsblandingen indeholdende forbindelsen III anvendes uden isolation som udgangsmaterialet ved frem-stilling af forbindelsen I.

Sulphenylamino-0-lactam-forbindelsen II og sulfinylamino-0-lactam-forbindelsen lia, som er udgangsmaterialer ved ovennævnte processer, kan fremstilles ved omsætning af en 7

DK 157339 B

forbindelse med formlen (V): 2 hvori R og Z har den ovennævnte betydning, med et sulphenylhalogenid med formlen:

1 1 R - S - X

1 1 hvori R har den ovennævnte betydning, og X er et halogenatom, f.eks. chlor eller brom, eller med et sulfinylhalogenid med formlen (VIII): 0 R1 - S - X2 (VIII) 2 hvori R har den ovennævnte betydning, og X er et 2 halogenatom, f.eks. chlor eller brom, i nærværelse af en hydrogenhalogenidacceptor, sâsom en base eller en oxiran.

Eksempler pâ baser er tertiære aminer, sâsom tri- ethylamin, Ν,Ν-dimethylanilin eller pyridin; alka- limetalhydroxider, sâsom natriumhydroxid eller kaliumhy- droxid; og alkalimetalcarbonater eller bicarbonater, sâsom natriumcarbonat, natriumbicarbonat, kaliumcarbonat eller kaliumbicarbonat. Eksempler pâ oxiraner er ethylen- oxid og propylenoxid. Reaktionen udf0res fortrinsvis i nærværelse af et inert organisk opl0sningsmiddel, sâsom chloroform, methylenchlorid, dioxan eller tetrahydro- furan, og fortrinsvis ved en temperatur fra -100 °C til stuetemperatur.

8

DK 157339 B

Specifikke eksempler pâ foretrukne forbindelser if0lge opfindelsen. er f0lgende :

V

DK 157339 B

1. t-Butyl-7a-methoxy-3-methyl-7p-o-nitrobenzensulfenylamino-3-cephem-4-carboxylat 2. t-Butyl-7 β-(2,4-dinitrobenzensulfenylamino-7a-methoxy-3-methyl- 3-cephem-4-carboxylat 3. Benzhydryl-3-acetoxymethyl-7a:-methoxy-7p-o-nitrobenzensul-fenylamino-3-cephem-4-carboxylat 4. p-Bromphenacyl-ôa-methoxy-ôp-o-nitrobenzensulfenylaminope-nicillanat 5· t-Butyl-7a-methoxy--3-methyl-7P-p-ttitrobenzensulfenylamino-3-cephem-4-carboxylat 6. t-Butyl-7oc-methoxy-3“niethyl-7P-pentachlorbenzensulfenylaiiiino- 3-cephem-4-carboxylat 7. 7a-Methoxy-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-7P~o-nitrobenzensulfenylamino-3-cephem-4-carboxylsyre 8. Benzhydryl-7a-methoxy-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-7P-o-nitrobenzensulfenylamino-3-cephem-4-carboxylat.

Forbindelserne med formlen (I) kan omdannes til forskellige kendte 7P-acylamino-7oc-alkoxycephalosporiner eller 6p~acylamino-6a-alkoxy-penicilliner, der har udmærket antibakteriel aktivitet, ved om-sætning med et carboxylsyrehalogenid i et inert oplosningsmiddel.

I stedet kan forbindelserne med formlen (i) omsættes med en nu-cleophil forbindelse, sâsom natriumiodid, thiourinstof, thiophenol, natriumazid, thioglycolsyre, kaliumthi ocyanat, natriumthiosulfat eller hexamethylphosphorsyretriamid, til fremstilling af en til-svarende 7P-amino-7oc-alkoxycephalosporin eller 6p-amino-6cc-alkoxy-penicillin, hvilke forbindelser er velegnede mellemprodukter ved fremstilling af antibiotisk aktive β-lactam-forbindelser.

De ovenfor beskrevne processer illustreres i det ef.terfolgende ved hjælp af et reaktionsskema:

DK 157339 B H

I >SX

¥ +Y Λ

. »^V

[il ’ '

R^-S-xl/ V^-S-X2 H · J XH

tO «'-««-H ^ /“[In/ 0 Ta 0 '[a ΙΠΙ (Ha)

•\, / - ; ϋ'-Ζ-Ηη--Y

' O^Y

• R ' ’ ·; (III]

CH3OH

: v .

R1- S.-MH —f- (Ii ! -2 ¥-t-f \

l· -V^V

ch3 R2

R-BK-j—Y; IVH

/-y • r2 (VII)

11 DK 157339 B

12 12

Grupperne R, R, Z, X og X i formlerne har den ovenfor angivne betydning, og R er en acylgruppe.

Opfindelsen skal i det efterfolgende illustreres ved hjælp af nogle eksempler, hvor eksemplerne 1 - A illustrerer fremstillingen af forbindelserne med formlen (I) ud fra forbindelserne med form-len (III), og eksemplerne 5-14 illustrerer fremstillingen^af forbindelser med formlen (I) ud fra forbindelser med formlen (il) eller (lia) via forbindelser med formlen (III). Præparationerne 1-5 illustrerer fremstillingen af forbindelser (II) og (lia) ud fra forbindelser med formlen (V), præparation 6 illustrerer fremstillingen af forbindelser med formlen (VI) ud fra forbindelser med formlen (I), og præparationer 7-9 illustrerer fremstillingen af forbindelser med formlen (VII) ud fra forbindelser med formlen (I).

EKSEMPEL 1 itz22E^2xllâi la;72 g t-butyl-3-methyl-7-o-nitrobenzensulfenylamino-3-cephem-4-carboxylat suspenderedes i 60 ml vandfri' methanol..Til oplosnin- .

. gen sattes under omrering ved -78°C en oplosning af natriummeth-oxid, som var fremstillet ud fra 170 mg (24,5 mmol) metallisk lithium og 24 ml vandfri methanol. Efter omroring af blandingen ved -78°C i 30 minutter tilsattes gradvis 70 ml vandfri tetra-hydrofuran, og blandingen blev derefter omrort i yderligere 3>5 timer ved -78°C, indtil en transparent opl0sning var dannet.

2,0 ml eddikesyre blev derefter tilsat for at afslutte reaktionen, hvorefter 50 ml vand sattes til reaktionsblandingen. Blandingen blev derefter ekstraheret tre gange, hver med 100 ml ethylacetat, og efter vask af de forenede ekstrakter med vand og t0rring, blev opl0sningsmidlet afdampet under reduceret tryk til opnâelse af et urent produkt. Dette blev renset ved kolonnekromatografi med silica-gel og under anvendelse af en blanding af benzen/ethylace-tat (10:1 efter rumfang) som eluent; der opnâedes 1,17 g t-butyl-7oc-methoxy-3-methyl-7P-o-nitrobenzensulfenylamino-3-cephem-4-carboxylat, smp.: 149 - 150on 12

DK 157339 B

Infrar0dt spektrum (Nujol-varemærke) : 3300, 1765 cm

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) & ppm: 1,50 (9H, singlet) 2,12 (3H, singlet) 3,18 og 3,39 (2H, AB-kvartet, J = 18 Hz) 3,57 (3H, singlet) 4,30 (1H, singlet) 4,90 (1H, singlet) 7,12-8,35 (4H, multiplet) EKSEMPEL 2 t-But^liIfi ι(2^4-dinitrobenz ensulfen^lamino 2=7^-methox2i3;niethYl- oepliem—4—carbox^rlat 1,35 g t-butyl-7-(2,4-dinitrobenzensulfenylimino)-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat suspenderedes i 30 ml vandfri methanol. Til. opl0sningen sattes under omr0ring ved -J8°C en opl0sning af lithi-ummethoxid, som var fremstillet ud fra 102 mg metallisk lithium og'12 ml vandfri methanol. Efter omroring af blandingen ved -78°C i 30 minutter blev 35 ml vandfri tetrahydrofuran gradvist tilsat, og reaktionsblandingen omr0rtes i yderligere 3,5 timer ved -78°C, indtil der var dannet en transparent opl0sning. 1,0 ml eddike-syre blev derefter tilsat for at afslutte reaktionen, hvorefter 25 ml vand blev sat til reaktionsblandingen. Blandingen blev derpâ ekstraheret tre gange, hver med 50 ml ethylacetat, og efter vask af de forenede ekstrakter med vand og t0rring blev opl0s-ningsmidlet afdampet under reduceret tryk til opnâelse af et urent produkt. Dette urene produkt blev derefter renset ved kolonnekromatografi med silica-gel under anvendelse af en blanding af benzen og ethylacetat (10:1 efter rumfang) som eluent. Der opnâedes 1,20 g t-butyl-7^-(2,4-dinitrobenzensulfenylamino)-7<f-methoxy-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat.

13

DK 157339 B

Infrar0dt spektrum (Nujol - varemærke): 3300, 1780 cm-1.

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) £ ppm: 1,49 (9H, singlet) 2,12 (3H, singlet) 3320 og 3,40 (2H, AB-kvartet, J = 18 Hz) 3j58 (3H, singlet) 4,58 (1H, singlet) 4,93 (1H, singlet) 8,35-9,08 (3H, multiplet) EKSEMPEL 3 amino^2z2§Ë^§5?ziiz2§£2222i§Î 515 mg benzhydryl-3-acetoxymethyl-7-o-nitrobenzensulfenylimino-3-cephem-4-carboxylat opl0stes i en blanding af 60 ml methanol og 40 ml benzen. Til opl0sningen sattes under omr0ring ved stue-temperatur 155 mg p-toluensulfonsyre-hydrat, og reaktionen fort-sattes i 30 minutter. Efter dette tidsrum tilsattes en mættet vandig opl0sning af natriumbicarbonat til afpr0velse af reaktionen, og reaktionsblandingen blev derefter ekstraheret tre gange med ethylacetat. Efter vask af de forenede ekstrakter med vand og t0rring afdampedes opl0snïngsmidlet under reduceret tryk til op-nâelse af et urent produkt. Dette blev renset ved kolonnekroma-tografi med silica-gel og under anvendelse af en blanding af benzen/ethylacetat (10:1 efter rumfang) soin eluent til dannelse af 388 mg benzhydryl-3-acetoxymethyl-7 -methoxy-7 -o-nitrobenzen-sulfenylamino-3~cephem-4-carboxylat i form af et pulver.

Infrar0dt spektrum (CHCl^): 3340, 1788, 1747 cm

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) y ppm:

DK 157339 B

1,99 (3H, singlet) 3,32 og 3,47 (2H, AB-kvartet, J = 18,5 Hz) 3,56 (3H, singlet) 4,31 (1H, singlet) 4,86 og 5,03 (2H, AB-kvartet, J = 14 Hz) 4,93 (1H, singlet) 6,98 (1H, singlet) 7,25-8,45 (14H, multiplet) EKSEMPEL 4 p-Bromphen^laçgl-f^-methox^-ôB^o-nitrobenzensulfen^laminopeni-çillanat 558 mg p-bromphenacyl-6-o-nitrobenzensulfenyliminopenicillanat suspendered.es i 15 ml vandfri. methanol. Til suspensionen sat-’ · tes under omr0ring ved -78°C en opl0sning af lithiummethoxid, som var fremstillet ud fra 36,2 mg metallisk lithium og 6 ml vandfri methanol. Efter omroring.af blandingen ved -78°C i 30 minutter blev 18 ml vandfri tetraliydrofuran gradvis tilsat, og reaktionsblandingen omr0rtes i yderligere 3,5 timer ved -78°C, indtil der var opnâet en transparent opl0sning. 0,5 ml eddike-syre blev derefter sat til· denne oplosning til’ afslutning af reaktionen, efterfulgt af 12 ml vand. Den sâledes op-nâede blanding blev derpâ ekstraheret tre gange med 25 ml ethyl-acetat. Efter vask af de forenede ekstrakter med vand og t0rring blev opl0sningsmidlet afdampet under reduceret tryk til opnâelse af et urent produkt. Dette blev renset ved præparativ silica-gel-tyndtlagskromatografi ( lagtykkelse 0,2' cm, storrelse 20 x 40 cm, udviklet med benzen/ethylacetat i et rumfangsforhold pâ 10:1); envforbindelse med en Rf-værdi pâ 0,4 blev isoleret, hvorved op-nâedes 182 mg p-bromphenacyl-6^-methoxy-6y9-o-nitrobenzensulfenyl-aminopenicillanat, smp.: 148 - 150°C.

Infrar0dt spektrum (Nujol - Varemærke): 3300, 1790 cm-1.

DK 157339 B

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) b ppm: 1,68 (6H, singlet) 3,53 (3H, singlet) 4,30 (1H, singlet) 4.80 (1H, singlet) 5,38 (2H, singlet) 5,45 (1H, singlet) 7,23-8,38 (8H, multiplet) EKSEMPEL 5 p-Bromphenae^l^ôk-methox^l^-o-nitrobenzensulfen^laminogeniçillanat 2,0 g p-bromphenaeyl-6d-q-nitrobenzen-sulfenylaminopenicillanat opl0stes i 100 ml benzen. Til oplçzSsningen sattes under omr^ring ved stuetemperatur 60,0 g aktivt mangandioxid, og reaktionsblan-dingen blev derefter omr0rt i yderligere 1 time ved stuetemperatur. Efter reaktionens afslutning blev det uopl^selige stof fra-filtreret, og opl0sningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk til opnâelse af 1,38 g p-bromphenacyl-6-o-nitrobenzensulfenylimino-penicillanat.

Infrar^dt spektrum (Nujol - Varemærke): 1780 cm ^.

Kernemagnetiske resonansspektrum (CDCl^) 6 ppm: 1,65 (3H, singlet) 1,72 (3H, singlet) 4.80 (1H, singlet) 5,43 (2H, singlet) 5,97 (1H, singlet) 7,22-8,53 (8H, multiplet)

De dannede 1,38 p-bromphenacyl-6-o-nitrobenzensulfenylimino-penicillanat behandledes som beskrevet i eksempel 4 til dannelse af 451 mg af det 0nskede p-bromphenacyl-6<C-methoxy-6/3-o-nitroben-

16 DK 157339 B

zen suif enylaminopenicillanat med egenskaber svarende t-il det i eksempel 4 opnâede produkt.

EKSEMPEL 6 tlBut^l-T^methox^iI-methgl-T^-p-nitrobenzensulfen^lamino-J- cephem-^çarbox^lat 2,0 g t-butyl-3-methyl-70 -p-nitrobenzensulfenylamino-3-cephem-4-carboxylat opl0stes i 100 ml benzen. Til opl0sningen satfces under omr0ring ved stuetemperatur 60,0 g aktivt mangandioxid, og reaktionsblandingen blev omr0rt i yderligere 1 time ved stuetemperatur. Efter reaktionens afslutning blev de uopl0selige stoffer frafiltreret, og opl0sningsmidlet blev afdampefc under re-duceret tryk til opnâelse af 1,65 g t-butyl-3-methyl-7-p-nitro-benzensulfenylimino-3-cephem-4-carboxylat, smp.: 169 - 170°C.

Infrar0dt spektrum (Nujol - Varemærke): 1790 cm

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) b ppm: 1,58 (9H, singlet) 2,15 (3H, singlet) 3,23 og 3,53 (2H, AB-kvartet, J = 18 Hz) 5,37 (1H, singlet) 7,55-8,40 (4h, multiplet) 2,70 g t-butyl-3-methyl-7-p-nitrobenzensulfenylimino-3-cephem-4-carboxylat dannet som beskrevet ovenfor, suspenderedes i 50 ml vandfri methanol. Til oplosningen sattes under omr0ring ved “78°C en opl0sning af lithiummethoxid, som var fremstillet ud fra 231 mg metallisk lithium og 20 ml vandfri methanol. Efter omr0ring af blandingen ved -78°C i 30 minutter blev 70 ml vandfri tetrahydrofuran gradvis tilsat, og reaktionsblandingen omrortes derefter i yderligere 3,5 timer ved -78°C, indtil en transparent opl0sning var opnâet. 2,40 ml eddikesyre blev derefter tilsat til afslutning af reaktionen, hvorefter 70 ml vand blev tilsat.

17 DK 157339 B

Blandingen blev derefter ekstraheret tre gange med 150 ml ethyl-acetat, og efter vask af de forenede ekstrakter med vand og t0r-ring blev opl0sningsmidlet afdampet under reduceret tryk til op-nâelse af et urent produkt. Dette blev renset ved kolonnekroma-tografi med silica-gel under anvendelse af en blanding af benzen/ ethylacetat (10:1 efter volumen) som eluent. Der opnâedes 1,45 g t-butyl-7«£-methoxy-3-methyl-7^-p-nitrobenzensulfenylamino-3-' cephem-4-carboxylat, smp.: 120 - 12l°C.

Infrar0dt spektrum (Nujol - Varemærke): 3300, 1765 em~^.

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) S ppm: 1.52 (9H, singlet) 2,12 (3H, singlet) 3,15 og 3,38 (2H, AB-quartet, J = 18 Hz) 3.53 (3H, singlet) 4,48 (1H, singlet) 4,88 (1H, singlet) 7,27-8,28 (4H, multiplet) EKSEMPEL 7 çeghem-4zçarboxylat 205 mg t“butyl-3-methyl-7iC-p-nitrobenzensulfenylamino-3"cephem-4-carboxylat suspenderedes i 3 ml carbontetrachlorid. Til suspen-sionen sattes under omr0ring 0,08 ml triethylamin efterfulgt af 73,8 mg N-chlorsuccinimid; reaktionsblandingen blev derpâ omr0rt ved 40°C i en time. Efter tilsætning af yderligere 0,04 ml triethylamin og 42,5 mg N-chlorsuccinimid omr0rtes blandingen i yderligere 30 minutter ved 40°C. Efter reaktionens afslutning blev det uopl0selige stof fjernet ved filtrering, og opl0snings-midlet blev afdampet under reduceret tryk til opnâelse af et urent produkt. Dette produkt blev renset ved præparativ siliea-gel-tyndt- 18

DK 157339 B

lagskromatografi- (Îagtykkëlsë 0,2 cm, storrelse 20 x 20 cm, ud-vikling med benzen/ethylacetat i et rumfangsforhold pâ 10:1).

Derved opnâedes 134 mg t-butyl-3-methyl-7-p-nitrobenzensulfenyl-imino-3-cephem-4-carboxylat.

Dette produkt behandledes med lithiummethoxid som beskrevet i eksempel 5 til opnâelse af 72 mg af ovennævnte forbindelse.

EKSEMPEL 8 cephemz^zçarboxylat (a) 2,0 g t-butyl-3-methyl-7^o-benzensulfenylamino-3“Cephem- 4-earboxylat opl0stes i 100 ml benzen. Til opl0sningen sattes under omr0ring ved stuetemperatur 60,0 g aktivt mangandioxid, og reaktionsblandingen blev omr0rt i yderlige-re 1 time ved stuetemperatur. Efter reaktionens afslutning blev de uopl0selige stoffer frafiltreret, og opl0sningsmid-let blev afdampet under reduceret tryk. Derved opnâedes 1,72 g t-butyl-3-methyl-7-o-nitrobenzensulfenylimino-3-cephem-4-carboxylat, smp.: 183 - 184°C.

Infrar0dt spektrum (Nujol-Varemærke): 1780 οηΤ1.

Kernemagnetiske resonansspektrum (CDCl^) & ppm: 1,60 (9H, singlet) 2,16 (3H, singlet) , 3,27 og 3j»58 (2H, AB-kvartet, J = 19 Hz) 5,47 (1H, singlet) 7,33-8,62 (4H, multiplet) (b) 70 mg t-butyl-3“methyl-7#-o-nitrobenzensulfenylamino-3- cephem-4-carboxylat opl0stes i en blanding af 1 ml tetra-hydrofuran og 2,5 ml chloroform. Til denne opl0sning sattes i rækkef01ge 93 mg quinolin i 0,45 ml chloroform og 29 mg thionylchlorid 2 0,2 ml chloroform. Reaktions-

DK 157339 B

i en time. Yderligere 93 mg quinolin i 0,45 ml chloroform og 29 mg thionylchlorid i 0,2 ml chloroform sattes til op-10sningen, og omr0ringen fortsattes ved 0°C i 18 limer. Til den dannede reaktionsblanding sattes 5 ml af en mættet van-dig natriumbicarbonatop!0sning og 50 ml ethylacetat; den organiske fase fraskiltes, hvorefter den vandige fase eks-traheredes flere gange med 15 ml ethylacetat. De forenede organiske ekstrakter t0rredes over vandfrit natriumsulfat, og derefter afdampedes opl0sningsmidlet til opnâelse af en olie, der indeholdt quinolin. Denne olie blev renset ved kolonnekromatografi med silica-gel og under anvendelse af benzen som elueringsmiddel til opnâelse af t-butyl-3-methyl-7-o-nitrobenzensulfenylimino-3-cephem-4-carboxylat, der var identisk med den autentiske pr0ve fra ovenmævnte trin (a).

1,0 g t-butyl-3-methyl-7-o-nitrobenzensulfenylimino-3-cephem-4-carboxylat behandledes som beskrevet i eksempel 1 til damnelse af 681 mg t-butyl-7ck-methoxy-3-methyl-7/3-*o-nitrobenzensulfenyl-amino-3-cephem-4-carboxylat, hvis egenskaber var identiske med egenskaberne for produktet fra eksempel .1.

EKSEMPEL '9 t-Butyl-7^~methoxy-3~methyl~7^-o-nitrqbenzensulfenylamino-3- £ËËÎîem-4;carboxylat 656 mg t-butyl-3-methyl-7y3-o-nitrobenzensulfenylamino-3-cephem-4-carboxylat suspenderedes i 15 ml carbontetrachlorid, og til suspensionen sattes under omr0ring og isafk01ing 0,35 ml tri-ethylamin, efterfulgt af 585 mg trichlorisocyanursyre; reaktions-blandingen omr0rtes derpâ ved 0°C i 1,5 timer. Efter reaktionens afslutning frafiltreredes det uopl0selige stof, og opl'0snings-midlet afdampedes fra filtratet under reduceret tryk til opnâelse af et urent produkt. Dette blev renset ved præparativ tyndtlagskromatografi under anvendelse af et lag af silica-gel, 0,2 cm tykt og 20 x 20 cm i st0rrelse, og under anvendelse af 10:1 efter rumfang blanding af benzen og ethylacetat som udvik-lingsmiddel, hvorved opnâedes 145 mg t-butyl-3-methyl-7/3-o-nitro- 20

DK 157339 B

b en z ens ulfeny1imino-3-cephem-4-carboxylat.

Dette produkt behandledes soin beskrevet i eksempel 1 til dannel-se af 99 mg t-butyl-7<^-methoxy-3-methyl-7/£--o-nitrobenzensulfe-nylamino-3-cephem-4-earboxylat med samme egenskaber som for pro-duktet if01ge eksempel 1.

EKSEMPEL 10

Benzhydryl-3-acetoxymethyl-7£-methoxy-2^-o-nitrobenzensulfenyl- amino;3rçe2hem-4-çarboxylat (a) 2,0 g benzhydryl-3-acetoxy-methyl-7/3-o-nitrobenzensulfenyl- amino-3-eephem-4-carboxylat opl0stes i 100 ml benzen. Til opl0sningen sattes under omr0ring ved stuetemperatur 70 g aktivt mangandioxid, og reaktionsblandingen omr0rtes deref-ter i 1 time ved stuetemperatur. Efter reaktionens afslut-ning blev de uopl0selige stoffer frafiltreret, og opl0s-ningsmidlet blev derpâ afdampet under reduceret tryk til op-nâelse af 1,40 g benzhydryl-3-acetoxymethyl-7-o-nitroben-zensulfenylimino-3-cephem-4-carboxylat, smp.: 134 - 135°C.

Infrar0dt spektrum (Nujol - Varemærke): 1780 cm-1.

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) S ppm: 2,01 (3H, singlet) 3,39 og 3,β5 (2H, AB-kvartet, J = 19 Hz) 4,85 og 5,08 (2H, AB-kvartet, J = 14 Hz) 5,47 (1H, singlet) 7,08 (1H, singlet) 7,25-8,60 (14H, multiplet) (b) Til en opl0sning af 122 mg benzhydryl-3-acetoxymethyl-7/3-o-nitrobenzensulfinylamino-3-cephem-4-carboxylat i 3 ml chloroform sattes i rækkef01ge 233 mg quinolin i 0,5 ml chloroform og 72 mg thionylehlorid i 1 ml chloroform under afkdling med isvand. Reaktionsblandingen blev derpâ om-

DK 157339B

r0rt ved 0°C i 1,5 timer. Til den dannede opl0sning sat-tes derefter 10 ml mættet vandig natriumbicarbonatopl0s-ning og 70 ml ethylacetat, og blandingen omr0rtes grundigfc.

Den organiske fase blev fraskilt og vasket to gange med en mættet vandig natriumchloridopl0sning. Efter t0rring af fasen over vandfrit natriumsulfat afdampedes opl0sningsmid-let under reduceret tryk til opnâelse af en olie, soin kromatograferedes pâ 4 g silica-gel. Ved eluering med ben-zen og afdampning af opl0sningsmidlet opnâedes 37 mg benz-hydryl-3"catoxymethyl-7-o-nitrobenzensulfenylimino-J“cephem-4-carboxylat, som var identisk med den autentiske :pr0ve fra trin (a) ovenfor.

1.0 g af ovennævnte benzhydryl-3“acetoxymethyl-7“0-nitnobenzen-sulfenylimino-3-cephem-4-carboxylat behandledes som beskrevet i eksempel 3 til opnâelse af 750 mg benzhydryl-3-acetoxymethyl-7<L-methoxy-7Æ-o-nitrobenzensulfenylamino-3-cephem-4-carbox^lat med identiske egenskaber som for produktet fra eksempel 3· EKSEMPEL 11 t-Butyl-7/3 - (2 ?4-dinitrobenzensulfenylamino )-7<C-methoxy-3~methyl-3zÇephem-4-çarboxylat 2.0 g t-butyl-7/3-(2,4-dinitrobenzensulfenylamino)-3~metîiiyl-3- cephem-4-carboxylat opl0stes i 100 ml benzen, og til opl^sningen sattes under omr0ring ved stuetemperatur 60,0 g aktivt mangan-dioxid; blandingen omr0rtes i yderligere 1 time ved stuetemperatur. Efter reaktionens afslutning blev uopl0selige stoffer frafiltreret, og opl0sningsmidlet blev afdampet fra filtratet under reduceret tryk, hvorved opnâedes 1,35 g t-butyl-y-(2,4-dinitrobenzensulfenylimino)-3“methyl-3-cephem-4-carboxylat, smp.: 187 - 188°C.

Infrar0dt spektrum (Nujol - Varemærke): 1790 cm

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) S ppm:

22 DK 157339 B

1,58 (9H, singlet) 2,18 (3H, singlet) 3,25 og 3,60 (2H, AB-kvartet, J = 18,5 Hz) 5,^5. (1H, singlet) 8,38-9,23 (3H, multiplet)

Det dannede t-butyl-7/0-(2,4-dinitrobenzensulfenylimino)-3-methyl-3-cephem-4-earboxylat behandledes dernæst som beskrevet i eksempel 2 til opnâelse af 1,2 g t-butyl-76-(2,4-dinitroben-zensulfenylamino)-7a-mettioxy-3“inethyl-3“cephein-4-carboxylat med samme egenskaber som produktet i eksempel 2.

EKSEMPEL 12 ïliütïilZé’Iïïê^S^lâ-methyl-J^-pentaehlorbenzensulfenylamino-^- cephem-4-carboxylat

Til en opl0sning af 500 mg t-butyl-3-methyl-7$-pentachlorben-zensulfenylamino-3-cephem-4-carboxylat i 25 ml benzen sattes portionsvis 15 g aktiveret mangandioxid. Reaktionsblandingen blev omr0rt ved stuetemperatur i 1 time, hvorefter yderligere 10 g mangandioxid blev tilsat, og omr0ringen blev fortsat i yderligere 1 time. De faste stoffer blev derpâ frafiltreret og va-sket grundigt med benzen. Opl^sningsmidlet blev afdampet fra de forenede filtrater under reduceret tryk, og remanensen blev renset ved præparativ tyndtlagskromatografi til opnâelse af 88 mg t-butyl-3-methyl-7-pentachlorbenzenuslfenylimino-3-cephem-4-carboxylat, smp.: 195 - 197°C.

Infrar0dt spektrum (Nujol - Yaremærke): 1760, 1705 cm

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^)J· ppm: 1,56 (9H, singlet) 2,10 (3H, singlet) 3,22 og 3,^5 (2H, AB-kvartet, J = 18 Hz) 5,28 (1H, singlet)

DK 157339 B

Til en opl0sning af 55 mg t-butyl-3"methyl-7-pentachlorbenzen-sulfenylimino-3“cephem-4-carboxylat i en blanding af 3 ml chlo-roform og 2 ml methanol sattes ved -78°C en opl0sning af 0,76 mg lithium i 1 ml methanol. Reaktionsblandingen blev derpâ omr0rt ved -40°C i 45 minutter og ved -20°C i 1,5 timer. Til den dan-nede opl0sning sattes derpâ 8 mg eddikesyre i 1,5 ml chloro-form og 50 ml ethylacetat; blandingen blev derpâ vasket med vandig natriumbicarbonatopl0sning og mættet vandig natriumchlo-ridopl0sning. Efter t0rring over vandfrit natriumsulfat blev de organiske opl0sningsmidler afdampet under reduceret tryk. Re-manensen blev renset ved præparativ tyndtlagskromatografl til opnâelse af 29 mg t-butyl-7d>methoxy-3-methyl-7,0-pentaehTarben-zensulfenylamino-3-cephem-4-carboxylat som et skum.

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) S ppm: 1,49 (9H, singlet) 2,08 (3H, singlet) 3,23 (3H, singlet) 3,21 og 3,31 (2H, AB-kvartet, J = 18 Hz) 4,79 (1H, singlet) 4,89 (1H, singlet).

EKSEMPEL 13 t—But ^^“Eiinitrobenzensuireri^la.mi.rio—3—_ çephem-4-çarboxylat 200 mg t-butyl-3-methyl-7/3“P“nitrobenzensulfinylamino-3-eephem- 4-carboxylat opl0stes i 5 ml methylenchlorid. Til opl0snlngen sattes under omr0ring ved -78°C 0,20 ml triethylamin, efterfulgt af 0,10 ml thionylchlorid. Efter omr0ring af reaktionsblandingen ved -78° i 1,5 timer tilsattes 20 ml methylenchlorid. Blandingen blev derpâ vasket med en mættet vandig opl0sning af natrinmbi-carbonat og derpâ med vand og t0rret, hvorefter opl0sningsmid-lerne blev fjernet ved afdampning under reduceret tryk til opnâelse af et urent produkt. Dette urene produkt blev renset ved præparativt tyndtlagskromatografl med silica-gel af en tykkelse τί ο Π O r>m Si4r 1 et ΟΠ v Ο Π n m π^τπ'1/Ι inrpQaTrcfûm Vian 7ûn /0+· VvïtI — 24

DK 157339 B

acetat i 10:1 efter rumfang, hvorved isoleredes 77 mg t-butyl-3-methyl-7-p-nitrobenzensulfenylimino-3-cephem-4-carboxylat.

Denne forbindelse blev derefter behandlet som beskrevet i eksem-pel 6 til dannelse af 4l mg t-butyl-7«^“niethoxy-3-methyl-7/â-p-nitrobenzensulfenylamino-3_cephem-4-carboxylat, der havde samme egenskaber som den i eksempel 6 fremstillede forbindelse.

EKSEMPEL 14 Zéll§^2Ml3i(l-meth2l-lH-tetrazol-5-yl)thiometh2l37/£-o-nitro- benzensulfenylamino32l2®2iî§™liiz2§î!52ï2iS£î!§

Til en suspension af 200 mg 3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thio-methyl-7/3 -o-nitrobenzensulfinylamino-3-cephem-4-carboxylsyre i 5 ml chloroform sattes 44 mg triethylamin, og efter omr0ring af blandingen i 5 minutter tilsattes 52 mg chlortrimethylsilan under afk01ing med isvand, og reaktionsblandingen omr0rtes der-næst ved stuetemperatur i 30 minutter. Den dannede opl0sning blev afk01et til -40°C3 og 310 mg quinolin i 1 ml chloroform blev tilsat, efterfulgt af 119 mg thionylchlorid. Reaktionsblandingen blev omr0rt ved -30°C i 2 timers hvorefter en opl0sning af 36 mg lithium i 2 ml methanol blev tilsat, og omr^ringen fort-sattes ved -30°C i yderligere 2 timer. Reaktionen blev derefter afbrudt ved tilsætning af 0,3 ml eddikesyre. 50 ml af en phosphat-puffer (pH = 7a8) blev tilsat, og den vandige fase blev fra-skilt og -vasket en gang med ether. Denne fase blev derefter gjort sur til pH = 3,0 ved tilsætning af fortyndet saltsyre og ekstraheret derpâ flere gange med ethylacetat. De forenede eks-trakter blev vasket med mættet vandig natriumchloridopl^sning og t0rret over vandfrit magnesiumsulfat. Yed afdampning af opl0s-ningsmidlet under reduceret tryk opnâedes 200 mg uren 7di-meth-oxy-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl“7/3-o-nitrobenzen-sulfenylamino-3-cephem-4-carboxylsyre i form af et pulver.

Til identifikation omsattes denne syre til benzhydrylesteren pâ f01gende mâde: Den urene syre opl0stes i 50 ml ethylacetat, og derpâ tilsattes 194 mg diphenyldiazomethan. Opl0sningen omr0r-tes ved stuetemperatur i 18 timer, og derefter blev opl0snings-

DK 157339 B

midlet afdampet under reduceret tryk. Remanensen blev renset ved præparativ tyndtlagskr ornât ografi med silica-gel under anvendelse af benzen/ethylacetat (4:1 efter rumfang) som udviklingsopl0s-ningsmiddel. Der opnâedes 58 mg rent benzhydryl-7<£-methoxy-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-7/3-o-nitrobenzensulfenyl-amino-3-cephem-4-carboxylat som et skum.

Infrar0dt spektrum (Nujol - Varemærke): 3300, 1785, 1720 cm”1.

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) $ ppm: 3,50 (3H, singlet) 3,60 (2H, singlet) 3,76 (3H, singlet) 4,20 og 4,46 (2H, AB-kvartet, J = 14 Hz) 4,40 (1H, singlet) 4,92 (1H, singlet) 6,90 (1H, singlet) 7,05-8,36 (14H, multiplet) PRÆPARATION 1 tl§^Ylr2z5§^YilZ^l2l5itEobenzensulfenylamino-2“çe2hem~4-carboxylat 5,40 g t-butyl-7.<â-amino-3-methyl-3“cephem-4-carboxylat opl0stes 1 100 ml vandfrit tetrahydrofuran. Til opl0sningen sattes under omr0ring og isafk01ing 2,80 ml triethylamin, og' efter 310 minut-ter tilsattes 40 ml vandfrit tetrahydrofuranopl0sning indehol-dende 3,79 g o-nitrobenzensulfenylchlorid. Blandingen omr0rtes i 2 timer under isafk01ing og derpâ yderligere i 3 timer ved stue-temperatur. Efter reaktionens afslutning blev det dannede triethylaminhydrochlorid frafiltreret, og filtratet inddampedes undei reduceret tryk. Remanensen rensedes ved kolonnekromatografi med silica-gel og som elueringsmiddel en blanding af benzen og ethyl-acetat (10:1 efter rumfang). Der opnâedes 7,20 g t-butyl-3-methyl-7/3-o-nitrobenzen-sulfenylamino-3-cephem-4-carboxylat, ™ . -,-7-. _ irynOn -1 26

DK 157339 B

Infrar^dt spektrum (Nujol - Varemærke): 3275, 1775 cm

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) £ ppm: - 1,50 (9H, singlet) 2j08 (3H, singlet) 3,22 og 3,60 (2H, AB, kvartet, J = 5, 9 Hz) 4,73 (1H, kvartet, J = 5, 9 Hz) 3,67 (1H, dublet, J = 9 Hz) 4,99 (1H, dublet, J = 5 Hz) 7,17-8,37 (4h, multiplet) PRÆPARATION 2 g-Bromghenaegliô J-o-nitrobenzensulfen^laminopenicillanat 11,3 g p-bromphenaeyl-6/5-aminopenicillanat-hydrochlorid suspen-deredes i 225 ml vandfrit tetrahydrofuran. Til opl0sningen sattes under omrszSring og isafk01ing 7,0 ml triethylamin, og efter 30 minutter 10 ml vandfrit tetrahydrofuranopl^sning inde-holdende 4,74 g o-nitrobenzensulfenylchlorid. Blandingen omr0r-tes derefter i 2 timer under isafk01ing og i yderligere 3 timer ved stuetemperatur. Efter reaktionens afslutning frafiltreredes det dannede triethylamin-hydrochlorid, og filtratet blev ind-dampet under reduceret tryk. Remanensen rensedes ved kolonne-kromatografi med silica-gel og som elueringsmiddel en blanding af benzen og ethylacetat (10:1 efter rumfang). Der opnâedes 17,8 g p-brompîienacyl-6 β-o-nitrobenzensulfenylaminopenicillanat.

Infrar0dt spektrum (Nujol - Varemærke): 3250, 1780 cm

Kernemagnetisk resonansspektrum (ODCl^) $ ppm:

DK 157339 B

1,73 (3H, singlet) 1,78 (3H, singlet) 3.67 (1H, dublet, J = 10 Hz) 4,62 (1H, singlet) 4.67 (1H, kvartet, J = 4 og 10 Hz) 5,30 og 5,55 (2H, AB-kvartet, J = 16 Hz) 5,65 (1H, dublet, J = 4 Hz) 7,18 - 8,42 (8H, multiplet) PREPARATION 3 t-Butgl-3rTgthgl-7/3-o-nitrobenzensulfinylamino-3~,cephem—4-carboxylat

En opl0sning af 590 mg o-nitrobenzensulfinylchlorid i 3 ml tetrahydrofuran sattes ved 0°C til en opl0sning af 540 mg t-butyl-7-amino-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat og 253 mg triethyl-amin i 7 ml tetrahydrofuran. Blandingen omr0rtes derefter ved 0°C i 2 timer, hvorefter den fortyndedes med 100 ml ethylacetat og vaskedes med vand, vandig natriumbicarbonatopl0sning og mættet vandig natriumchlorid. Efter t0rring over vandigt natriumsulfat afdampedes opl0sningsmidlet under reduceret tryk til opmâelse af en olie. Denne rensedes ved kolonnekromatografi pâ sïlica-gel til opnâelse af 739 mg t-butyl-3“methyl-7./3-o-nitrobenzemsulfi-nylamino-3-cephem-4-carboxylat som en olie; produktet war en blanding af to diastereomere pâ grund af sulfinylgruppen i 7β-sidekæden.

Kernemagnetisk resonansspektrer (CDCl^ + D2O) £ ppm: 1,46 og 1,56 (9H, to singletter) 2,01 og 2,06 (3H, to singletter) 3,07 og 3,25 3,16 og 3,43 (2H, to arter AB-kvartetter, J = 18 Hz) 4,34 (1H, dublet, J = 4,5 Hz) 5,27 (1H, dublet, J = 4,5 Hz) 7,55 - 8,42 (4H, multiplet).

28

DK 157339 B

PREPARATION 4 3ziir^§£î2ZiliSztËÎî!§52izSz£i2Êîîi2î!?ê^Îî2ilZ€z2lGÎtî;obenzensul- finy 1 amino z 2 Z 2 ËEîîËîîZ il Z 2 âïl22 22i Ë2E2 986 mg 7 B-amino-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-3-cephem- 4-carboxylsyre suspenderedes i 15 ml methylenchlorid,og 0,5 ml triethylamin sattes til suspensionen. Efter omr0ring i 5 minut-ter tilsattes 0,5 ml chlortrimethylsilan under isafk01ing, og omr^ringen fortsattes ved stuetemperatur i en time. Opl0sningen afk^ledes derefter til -40°C, og 0,57 ml Ν,Ν-dimethylanilin og 920 mg o-nitrobenzensulfinylchlorid i 4,5 ml methylenchlorid tilsattes. Reaktionsblandingen omr0rtes i 30 minutter ved -4û°C og i 2 timer ved 0°C. Til den dannede opl0sning sattes dernæst 50 ml af en phosphatpuffer (pH = 7,8), og den vandige fase fra-skiltes og vaskedes en gang med ether. Den vandige opl0sning gjordes herefter sur ved en pH-værdi pâ 2,7 ved tilsætning af fortyndet saltsyre og ekstraheredes tre gange med ethylacetat.

De forenede ekstrakter vaskedes med mættet vandig natriumchlo-ridopl0sning en gang, t0rredes over vandfrit magnesiumsulfat, og opl0sningsmidlet afdampedes derefter under reduceret tryk. Remanensen vaskedes med en lille mængde diethylether, hvorved opnâedes 531 mg 3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl-7Æ-o-nitrobenzen-sulfinylamino-3-cephem-4-carboxylsyre som et pul-ver. Denne forbindelse var en blanding af to diastereomere som f01ge af sulfinylgruppen i 7/^“sidekæden.

Infrar0dt spektrum (Nujol - Varemærke): 3200, 1795, 1720 cm

For at identificere hver isomer blev carboxylsyrerne pâ i og for sig kendt mâde omdannet til de tilsvarende benzhydrylestre ved hjælp af diphenyldiazomethan, og de isomere blev adskilt ved præparativ tyndtlagskromatografi med en silica-gel-plade, udvik-let med benzen/ethylacetat (1:1 efter rumfang).

Infrar0dt spektrum af en isomer (Nujol - Varemærke): 3200, 1785, 1730 cm 1.

29

DK 157339 B

Kernemagnetisk resonansspektrum (Dimethylforamld-άγ) £ ppm: 3,66 (2H, singlet) 3,92 (3H, singlet) 4.25 og 4,4l (2H, AB-kvartet, J = 14 Hz) 4,53 (1H, dublet, J = 4,5 Hz) 5,50 (1H, dublet af dublet, J = 4,5 og 9,0 Hz) 6,98 (1H, singlet) 7.25 - 8,50 (14H, multiplet)

Infrar0dt spektrum af den anden isomere (Nujol - Varemærke): 3200, 1785, 1730 cm 1.

Kernemagnetisk resonansspektrum (Dimethylformamid-d^) £ ppm: 3,80 (2H, singlet) 3.95 (3H, singlet) 4,31 og 4,42 (2H, AB-kv.artet, J = 14 Hz) 5,16 (1H dublet, J = 4,50 Hz) 5,35 (1H, dublet af dublet, J = 4,50 og 9,0 Hz) 6.95 (1H, singlet) 7.25 - 8,51 (14H, multiplet) PREPARATION 5 çarboxylat

Til en opl0sning af 1,35 g t-butyl-7B-amino-3-methyl-3-eephem- 4-carboxylat og 870 mg propylenoxid i 20 ml methylenchlorid sattes drâbevis ved 0°C en opl0sning af 1,58 g pentachlorben-zensulfenylchlorid i 10 ml methylenchlorid. Efter at tilsæt-ningen var afsluttet, blev reaktionsblandingen omr0rt ved stue-temperatur i 1 time. Opl0sningen blev derefter fortyndet med 50 ml methylenchlorid og vasket tre gange med vand. OpljzSsningen tdrredes over vandfrit natriumsulfat, og opleisningsmidlet blev

30 DK 157339B

derefter afdampet under reduceret tryk til opnâelse af en olie.

Denne kromatograferedes pâ 33 g siliea-gel, som elueredes med benzen. Benzenopl0sningen inddampedes til opnâelse af 1,115 g t-butyl-3-methyl-7/3-pentachlorbenzensulfenylamino-3-cephem-4-carboxylat som et skum. Udrivning med diisopropylether gav en pr0ve med smeltepunkt ved 156 - 158°C.

Infrar0dt spektrum (Nujol - Varemærke): 3200, 1790, 1720 cm *".

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^ + D2O) & ppm: 1,49 (9H, singlet) 2,03 (3H, singlet) 3*13 og 3,3β (2H, AB-kvartet, J = 18 Hz) 4,79 (1H, dublet, J = 4,5 Hz) 4,89 (1H, dublet, J = 4,5 Hz) PRÆPARATION 6 tlêü^2iz2éz§®iiî2rIéCîî}§tÎîoxy-3-methyl-3içe2hem;4-carboxylat 399 mg natriumiodid opl0stes i en blanding af 2 ml methanol og 0,4 ml eddikesyre;til opl0sningen sattes under isafk01ing 2 ml methylenchloridopl0sning indeholdende 102,4 mg t-butyl-7>3-meth- — oxy-7<C-p-nitrobenzensulfenylamino-3_cephem-4-carboxylat. Efter omr0-ring af blandingen under isafk01ing i 20 minutter blev de hvide krystaller udfældet, og opl0sningen blev brun. ïïdgangsmaterialet kunne ikke bestemmes i opl0sningen ved tyndtlagskromatografi (udviklingssystem benzen/ethylacetat i et mængdeforhold pâ 3:1 efter rumfang). Umiddelbart derefter blev reaktionen afbrudt ved indf0ring af opl0sningen i et bad ved -78°C og tilsætning af 20 ml etbylacetat. Reaktionsblandingen vaskedes hurtigt i rækkef01ge med en vandig opl0sning af natriumbicarbonat, en vandig opl0sning af natriumthiosulfat og vand, t0rredes derefter, og opl0sningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk.

Den sâledes opnâede remanens rensedes ved præparativ tyndtlagskromatografi, idet der anvendtes et lag af silica-gel 20 x 20 cm og 0,2 cm tykt og en blanding efter rumfang i forholdet 3:1 af benzen og ethylacetat soin udviklingsmiddel, hvorved isoleredes en forbindelse med en Rf-værdi pâ cirka 0,70. Derved opnâedes 36 mg t-butyl-7/3-amino-7fc-methoxy-3-methyl-3-cephem-4-carboxylat.

31

DK 157339 B

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) ppm: 1,52 (9H, singlet) 2,13 (3H, singlet) 1,96 - 2,40 (2H, bred singlet) 3,19 (2H, singlet) 3,48 (3H, singlet) 4,79 (1H, singlet) PRÆPARATION 7 ÎI§^£ilZ^I®Ë^222l3-methyl;7^-2henoxyaçetamido-J-çe2hem-4-cai;b- oxylat 33,1 mg t-butyl-7eC-methoxy-3-methyl-7/3-p-nitrobenzensulfenyl-amino-3-cephem-4-carboxylat opl0stes i en blanding af 1 ml methylenchlorid og 1 ml methanol. Til opl0sningen satt.es 0,1 ml phenylmercaptan og 0,04 ml triethylamin, og blandingeaa blev derefter omr0rt ved stuetemperatur i 15 timer. Efter reaktionens afslutning tilsattes ethylacetat, og blandingen inddampedes der-pâ. Efter opl0§ning af remanensen i 2 ml methylenchlorid tilsattes 0,2 ml Ν,Ν-diethylanilin ved -40°C, efterfulgt af 0,2 ml phenoxyacetylchlorid. Opl0sningen blev derefter omr0rt i 1 time ved -20°C. Efter reaktionens afslutning tilsattes 'ethylacetat til opl0sningen. Opl0sningen blev derefter vaskef med i rækkef01ge en vandig opl0sning af kaliumhydrogensulfat, en vandig opl0sning af natriumbicarbonat og vand, og opl0sningsmid-let blev derpâ afdampet under reduceret tryk. Den sâledes opnâ-ede remanens rensedes ved præparativ tyndtlagskromatografi med silica-gel, tykkelse 0,2 cm, st0rrelse 7 x 10 cm, udviklings-system en blanding efter rumfang 5:1 af benzen og ethylacetat, hvorved opnâedes 27 mg t-butyl-7<£r-methoxy-3”methyl-7/3-plienoxy-acetamido-3-cephem-4-carboxylat. Produktet indeholdt en lille mængdeA -isomer.

32

DK 157339 B

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) £ ppm: 1,53 (9H, singlet) 2,12 (3H, singlet) 3}08 og 3j33 (2H, AB-kvartet, J = 18 Hz) 3,55 (3H, singlet) 4,60 (2H, singlet) 5,07 (1H, singlet) 6,80 - 7,53 (6H, multiplet).

PRÆPARATION 8 ^I§li^2ilI<£'lï?Ë^2^2l3r^§^2ilZ^lEhË22ï2Ë:£Ët§2îi§2l3l2êEhem-4-ç§rboxYlat 30 mg t-butyl-7<C-methoxy“3“methyl-7/s-P~nitrobenzensulfenylamino- 3-cephem-4-carboxylat opl0stes i en blanding af 1 ml methylen- chlorid og 1 ml methanol. Efter tilsætning af 0,1 ml hexamethyl- phosphorsyre og 0,04 ml triethylamin omr0rtes blandingen ved stuetemperatur i 15 timer. Efter dette tidsrum blev der tilsat ethylacetat, og opl0sningen inddampedes. Efter opl0sning af re- manensen i 2 ml methylenchlorid tilsattes 0,2 ml N,N-diethyl- anilin ved -40°C, efterfulgt af 2 ml phenoxyacetylchlorid.

Den dannede opl0sning blev derefter omr0rt i 1 f-time ved -20°C, hvor- efter der tilsattes ethylacetat. Den dannede op!0sning vaske- des med i rækkef01ge en vandig opl0sning af natriumhydrogensul- fat, en vandig opl0sning af natriumbicarbonat og vand, hvoref- ter der t0rredes. Opl0sningsmidlet afdampedes under reduceret tryk, og den dannede remanens rensedes ved præparativ tyndtlags- kromatografi med silica-gel, lagtykkelse 0,2 cm, s0trrelse 7 x 10 cm, udviklingssystem en blanding i forholdet 5:1 efter rum- fang af benzen og ethylacetat, hvorved opnâedes 26 mg t-butyl- 7£C-methoxy-3-methyl-7/0-phenoxyacetamido-3-cephem-4-carboxylat. Pro- 2 .

duktet mdeholdt en lille mængde a -isomer.

33

DK 157339 B

PRÆPARATION 9 ÈiiüÈï2:iZ^zSê^222i2iS®ÈiîïiiZ^iEîîËîi2ïïÊ£ÊÈ§Sîi^2i2i:2ê2îïê5zilz2§î!5“ ox^lat 101 mg t-butyl-7a-methoxy-3-methyl-73-p-nitrobenzensulfenylamino-3-cephem-4 --carboxy 1 at oplostes'iS ml acetonitril; 0,10 ml phenoxyacetylchlorid fcilsattes under isafk01ing, og blandingen omsattes 1 30 minutter. Efter dette tidsrum tilsattes 1,0 ml ethylacetat, og den dannede opl0sning vaskedes med 1 rækkef01ge en vandig opl0sning af natriumbicarbonat og vand. Opl0sningen blev derefter t0rret, og opl0sningsmidlet blev afdampet under reduceret tryk, hvorved opnâedes en remanens, som rensedes ved præparativ tyndtlagskromatografi pâ silica-gel med en lagtyk-kelse pâ 0,2 cm, st0rrelse 10 x 20 cm, udviklingsSystem en blan-ding i forholdet 5:1 efter rumfang af benzen og ethylacetat.

Derved opnâdes 5 mg t-butyl-7,jL-methoxy-3~methyl-7/9-phe;noxyacet-amido-3-cephem-4-carboxylat.

Claims

3. Fremgangsmâde If01ge krav 2, kendetegnet ved, at basen er en uorganisk base.
4. Fremgangsmâde if0lge krav 3, kendetegnet ved, at den uorganiske base er et alkalimetalhydroxid, et jordalkalimetalhydroxid, et alkalimetalcarbonat eller et alkalimetalalkoxid.
5. Fremgangsmâde if0lge krav 4, kendetegnet ved, at alkalimetalalkoxidet er lithiummethoxid, kalium-methoxid, natriummethoxid eller kalium-t-butoxid.
6. Fremgangsmâde if01ge krav 2, kendetegnet ved, at den organiske syre er methansulfonsyre, benzen-sulfonsyre eller p-toluensulfonsyre.
7. Fremgangsmâde if01ge krav 2, kendetegnet ved, at Lewis-syren er zinkchlorid eller bortrifInorid i form af et bortrifluorid-etherat.
8. Fremgangsmâde if0lge et vilkârligt af kravene 2-7, kendetegnet ved, at den omfatter f0lgende trin: DK 157339 B (a) omsætning af en forbindelse med formlen R1—S—NH—j-/ \ Z jj 0=j N / Ÿ 1 2 hvori R , R og Z har den i krav 1 definerede betydning, med et oxidationsmiddel til dannelse af en sulfenylimino-forbindelse med formlen (III) som defineret i krav 2, eller (b) omsætning af en forbindelse med formlen î ? /S"X R1— S —N H—-( \ Z 0=1-N j lia Y med et dehydratiseringsmiddel, (c) hvilken forbindelse III omsættes med methanol i nærværelse af en base, en organisk syre eller en Lewis-syre, og (d) eventuelt efterfulgt af en overf0ring af den dannede forbindelse med formlen I til et sait deraf.
9. Fremgangsmâde if01ge krav 8, kendetegnet ved, at oxidationsmidlet er mangandioxid, kaliumperman-ganat, chromsyreanhydrid, kaliumdichromat, N-chlorsuccin- 37' DK 157339 B imid, trichlorisocyanatsyre, blytetraacetat, kaliumni-trosodisulfonat, 2,3-dichlor-5,6-dicyanobenzoquinon, te-trachlor-l,4-benzoquinon eller sulfinylchlorid.