DK157047B - Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af glykosileret haemoglobin og reagens til adskillelse mellem glykosileret og ikke glykosileret haemoglobin - Google Patents
Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af glykosileret haemoglobin og reagens til adskillelse mellem glykosileret og ikke glykosileret haemoglobin Download PDFInfo
- Publication number
- DK157047B DK157047B DK458682A DK458682A DK157047B DK 157047 B DK157047 B DK 157047B DK 458682 A DK458682 A DK 458682A DK 458682 A DK458682 A DK 458682A DK 157047 B DK157047 B DK 157047B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- glycosylated
- hemoglobin
- haptoglobin
- glycosilated
- glycosylated hemoglobin
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title claims description 11
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 claims abstract description 56
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 claims abstract description 56
- 102000014702 Haptoglobin Human genes 0.000 claims abstract description 48
- 108050005077 Haptoglobin Proteins 0.000 claims abstract description 48
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 23
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 10
- 108010061951 Methemoglobin Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 108010014663 Glycated Hemoglobin A Proteins 0.000 claims description 66
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 claims description 66
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 9
- 239000012637 allosteric effector Substances 0.000 claims description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- XOHUEYCVLUUEJJ-UHFFFAOYSA-I 2,3-Diphosphoglycerate Chemical compound [O-]P(=O)([O-])OC(C(=O)[O-])COP([O-])([O-])=O XOHUEYCVLUUEJJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 3
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 claims description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N Carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 12
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 6
- 108010013766 hemoglobin A(0) Proteins 0.000 description 5
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N guaiacol Chemical compound COC1=CC=CC=C1O LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FSBLVBBRXSCOKU-UHFFFAOYSA-N n-butyl isocyanide Chemical compound CCCC[N+]#[C-] FSBLVBBRXSCOKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L sodium dithionite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])=O JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M sodium fluoride Chemical compound [F-].[Na+] PUZPDOWCWNUUKD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- PGYIKLBGEVSGSN-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid cyanide Chemical compound N#[C-].OP(O)(O)=O PGYIKLBGEVSGSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 2
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 2
- GRWZHXKQBITJKP-UHFFFAOYSA-L dithionite(2-) Chemical compound [O-]S(=O)S([O-])=O GRWZHXKQBITJKP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 229960001867 guaiacol Drugs 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 235000013024 sodium fluoride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011775 sodium fluoride Substances 0.000 description 2
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- 0 CC[Ag]1(*)CC=CC1 Chemical compound CC[Ag]1(*)CC=CC1 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Phytic acid Natural products OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800001646 Protein n Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- -1 alkyl isocyanide Chemical compound 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010036302 hemoglobin AS Proteins 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 150000004028 organic sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 150000002903 organophosphorus compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940068041 phytic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
- G01N33/721—Haemoglobin
- G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
- Y10T436/107497—Preparation composition [e.g., lysing or precipitation, etc.]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 157047 B
Opfindelsen angâr en fremgangsmâde og et reagens til bestem-melse af glykosileret hæmoglobin i blodprover og et reagens til adskillelse mellem glykosileret og ikke-glykosileret hæmoglobin.
5
Glykosileret hæmoglobin (HbAi) fremkommer ved ikke-enzymatisk glykosilering af hæmoglobin (HbAo). Almindel igvis udge-r kon-centrationen af glykosileret hæmoglobin i blod ca. 5%, bereg-net pâ den samlede mængde hæmoglobin. Hos diabetikere er denne 10 koncentration forhojet til det 2- til 4-dobbelte.
Bestemmelsen af den glykosilerede andel i den samlede mængde hæmoglobin har i de sidste âr opnâet betydning ved diabetes-diagnosticering (jf. L. Jovanovic og C„M. Peterson, Am. J.
15 Med. 70 (1981) s. 331-338). Reaktionen mellem enkelte hæmoglo-binmolekyler og glukosen giver et stabilt reaktionsprodukt, som bevares i hele erythrocyternes levetid, altsâ ca. 100-200 dage. Kortvarige svingninger i blodsukkerindholdet pâvirker ikke afgorende koncentrationen af glykosileret hæmoglobin.
20 Koncentrationen af glykosileret hæmoglobin afspejler derfor relativt nojagtigt den gennemsnitlige glukosekoncentration i en patients blod over et langt tidsrum.
Flere fremgangsmâder til bestemmelse af den glykosilerede an-25 del i den samlede mængde hæmoglobin er kendt. I kliniske labo-ratorier er kromatografiske separationsmetoder mest udbredt. Herved skilles hæmoglobins glykosilerede andel fra den ikke-glykosi 1 erede ved hjælp af en kromatografisojle, en mikrosojle eller ved hjælp af HPLC-metoden (HPLC = High pressure liquid 30 chromatography), hvorhos sajlerne er fyldt med en ionbytter, f.eks. med BioRex 70. Aile disse metoder er dog meget folsomme over for ændringer af pH-værdien, temperaturen og ionkoncen-trationen. Separationsmetoderne skal derfor gennemfores meget forsigtigt for at opnà optimale resultater (jf. ovennævnte 35 skrift side 332) .
Fra tysk of fentl iggerelsesskrif t 29 50 457 kendes en frem-gangsmâde til bestemmelse af glykosileret hæmoglobin i blod- 2
DK 15 7 Ο 4 7 B
prover, ved hvilken man udnytter ændringen af en blodproves spektroskopiske egenskaber ved tilsætning af en allosterisk effektor til bestemmelsen af HhA^. Herved pâvirkes udelukkende den ikke-glykosilerede hovedandel af hæmoglobinet. De màlte 5 ekstinktionsdifferencer er meget smà i det relevante interval.
De bliver desuden endnu mindre, nâr den glykosilerede mængde af den samlede mængde hæmoglobin tiltager.
Der er derfor den foreliggende opfindelses sigte at tilveje-10 bringe en fremgangsmâde, ved hvilken det glykosilerede hæmoglobin pà hurtig teknisk enkel gennemforlig màde pâlideligt og nojagtigt kan bestemmes.
Denne opgave loses ved hjælp af fremgangsmâden ifolge opfin-15 delsen, ved hvilken man efter en kemisk eller fysisk behand-ling af blodproven til frigorelse af hæmoglobinet af erythro-cyterne gennemforer en adskillelse mellem den glykosilerede og ikke-glykosilerede hæmoglobinandel ved hjælp af haptoglobin og bestemmer mængden af glykosileret hæmoglobin.
20
Den foreliggende opfindelse angâr derfor en fremgangsmâde til bestemmelse af glykosileret hæmoglobin i blodprover, hvorved man forst ved hjælp af kemisk eller fysisk behandling af blod-proven frigor glykosileret og ikke-glykosileret hæmoglobin fra 25 erythrocyterne, eventuelt omdanner hæmoglobinet til methæmo-globin, derpâ gennemforer en adskillelse mellem glykosileret og ikke-glykosileret hæmoglobin og endelig bestemmer det gly-kosilerede hæmoglobin, hvilken fremgangsmâde er ejendommelig ved, at adskillelsen mellem glykosileret og ikke-glykosileret 30 hæmoglobin foretages ved hjælp af haptoglobin.
Fremgangsmâden ifolge opfindelsen kan gennemfores i nærværelse af et egnet puffersystem. Som egnet puffersystem kan enhver puffer, der er virksom i pH-værdiintervallet fra 4,0 til 8,5, 35 fortrinsvis 6,0 til 7,0 anvendes inden for opfindelsens ram-mer. Særligt egnede er phosphat- og bis-tri s-puffer.
3
DK 157047 B
Haptoglobin (Hp) er et p 1 asmaprotei n. Det er kendt, at haptoglobin kan binde frigjort hæmoglobin fra erythrocyter (jf.
T. Sasazuki, Immunochemistry 8 (1971), side 695-704).
5 Det kunne nu overraskende fastslâs, at glykosileret og ikke- glykosileret hæmoglobin i henseende til deres bindingsforhold er forskellige over for haptoglobin. Det g 1ykosi1erede hæmoglobin bindes hurtigere til haptog1 obi net end det ikke-glyko-silerede hæmoglobin. Dette folger f.eks. ved formindskelsen af 10 f1uorescensintensiteten af en haptog1obinho1dig proveop1osning efter tilsætning af glykosileret eller ikke-glykosileret hæmoglobin. Mâlingen af f 1 uorescensstrâ 1 ingen, som er et mâl for vekse1virkningen mellem hæmoglobin og haptoglobin, kan udfores pâ kendt mâde.
15 I fig. 1 er formindskelsen af fluorescensintensiteten for beg-ge proveop1osninger mod tiden anfcrt. Det er tydeligt, at fluorescensintensiteten efter tilsætning af glykosileret hæmoglobin aftager hurtigere end efter tilsætning af ikke-glykosi-20 leret hæmoglobin (figuren er forklaret pâ side 8). Dette tyder pâ, at bindingsvirkningen mellem haptoglobin og det glykosile-rede hæmoglobin er stærkere end mellem haptoglobin og den ikke-glykosi lerede andel.
25 Fremgangsmâden til bestemmelse af den samlede mængde hæmoglo-bins g 1ykosi1erede andel gennemf0res hensigtsmæssigt ved, at man forst efter sædvanlige metoder frigor det glykosilerede og det ikke-glykosilerede hæmoglobin fra erythrocyterne. Den hæ-molyserede blodprove tilsættes eventuelt efter forudgàende 30 tilsætning af et egnet oxidationsmiddel til omdannelse af hæmoglobinet til methæmoglobin en haptoglobinholdig oplosning. Hæmog1obinets glykosilerede andel bindes fortrinsvis til hap-toglobinet. For at adskille den bundne fra den ikke-bundne andel af hæmoglobinet eller methæmog1 obi net anvendes sædvan-35 lige forsogsmetoder. Ved at mâle forskellige hæmoglobinholdige prover med forskelligt glykosileret hæmoglobinindhold kan en kalibreringskurve optegnes, ved hjælp af hvilken den glykosi- 4
DK 157G47B
lerede andel i den samlede mængde hæmoglobin i ukendte prover kan mâles.
Forskellen i bindingsforhold mellem glykosileret og ikke-5 glykosileret hæmoglobin over for haptoglobin kan forstærkes ved tilsætm'ng af en eller flere forbindelser med bindings-virkning pà det allosteriske effektorsted. Sàdanne forbindelser er kendt. F.eks. skal nævnes: Organiske phosphorfor- bindelser, sâsom 2,3-diphosphoglycerat og inosithexaphosphat, 10 organiske sulfater, sâsom inosithexasulfat og carboxy1syre, sâsom mel1itsyre.
Ifolge en foretrukken udforelsesform for fremgangsmâden ifolge opfindelsen gennemfores adskillelsen mellem glykosileret og 15 ikke-glykosileret hæmoglobin folgelig ved hjælp af haptoglobin under tilsætning af en eller flere forbindelser med bindings-virkning pâ hæmoglobinets allosteriske effektorsted. Til gen-nemfering af fremgangsmâden ifolge opfindelsen stâr en række stoffer med bindingsvirkning pâ det allosteriske effektorsted 20 til râdighed for fagmanden. Særligt egnede stoffer ifolge opfindelsen er inosithexaphosphat, 2,3-diphosphoglycerat og mellitsyre. De tilsættes oplosningen i i det mindste ækviva-lente mængder, beregnet pâ hæmoglobinindholdet. Almindeligvis er det dog en fordel at anvende disse stoffer i overskud, for-25 trinsvis i 10- til 200 gange molært overskud.
Inosithexaphosphats indvirkning pâ bindingsforholdene af glykosileret og ikke-glykosileret hæmoglobin over for haptoglobin fremgàr tydeligt af fig. 2 (figuren er forklaret pà side 8).
30 Màlekurvernes forlob viser tydeligt, at glykosileret hæmoglobin i nærværelse af inosithexaphosphat bindes væsentligt hur-tigere til haptoglobin end det ikke-glykosilerede hæmoglobin.
Det er eventuelt hensigtsmæssigt forud for adskillelsen mellem 35 glykosileret og ikke-glykosileret hæmoglobin at omdanne det sædvanligvis efter hæmolyse af erythrocyterne foreliggende hæmoglobin til methæmoglobin. En række kendte metoder hertil
DK 157047 B
5 stàr til râd ighed for fagmanden, f.eks. oxi dat ion med kali um-hexacyanoferrât-(III) eller med natriumnitrit.
Det er fordelagtigt at stabilisere sàvel hæmoglobinet som ogsà 5 eventuelt methæmoglobinet med en eller flere hæmbindende li- gander. I princippet er aile mulige hæmbindende ligander egne-de til fremgangsmâden ifelge opfindelsen. Særligt foretrukne er alkylisocyanid, oxygen, carbonmonooxid og nitrogenmonooxid som hæmbindende ligander til hæmoglobinet samt fluorid, azid, 10 cyanid og vand som hæmbindende ligander til methæmog1 obi net.
Koncentrationen af hæmbindende ligander i proveoplosningen skal mindst være ækvimolær med hæm-koncentrationen. Da hvert hæmoglobinmolekyle har fire hæm-rester, skal denne minimalkon-centration udgore fire gange hæmog1 obinkoncentrationen. For-15 delagtigt anvendes de hæmbindende ligander dog ogsâ i stort, fortrinsvis i 10- til 105-ganges molært overskud.
Det er desuden hensigtsmæssigt at tilsætte et ionbindings-stabi1iserende middel til proveoplosningen forud for kontak-20 tering med haptoglobin. Sâdanne stoffer med en stabiliserende virkning pà ionisk binding er f.eks. polyethylenglycol og saccharose.
Hæmoglobin forekommer i blodet i to former·. Oxy- og deoxyfor-25 men. Til fremgangsmâden ifolge opfindelsen er det hensigtsmæssigt, at det i den hæmolyserede blodprove indeholdte hæmoglobin bringes pâ en ensartet form. Det samlede hæmoglobinindhold forud for adskillelsen mellem glykosileret og ikke-glykosile-ret hæmoglobin omdannes fortrinsvis til deoxyformen. Metoder 30 til omdannelsen af oxy- til deoxyformen eller deoxy- til oxy-formen er velkendte for fagmanden. F.eks. kan oxyformen omdannes ved hjælp af dithionit eller andre reduktionsmidler til deoxyformen.
35 Særligt foretrukne er den udf0relsesform for fremgangsmâden i-folge opfindelsen, ved hvilken det i den hæmolyserede blodpro-ve indeholdte hæmoglobin fuldstændigt overferes i deoxyformen
DK 157047 B
6 ved hjælp af et reduktionsmiddel, f.eks. natriumdithionit, be-hand!es med et eller flere stoffer med bindingsvirkning pâ det allesteriske effektorsted og/eller med en eller flere hæmbin-dende ligander og derpâ bringes i kontakt med haptoglobin. Pâ 5 denne mâde opnâs, at kun den glykosilerede andel af en preves samlede hæmoglobinindhold bindes af haptoglobin og kan bestem-mes kvantitativt.
Haptoglobin tilsættes i mindst ækvimolære mængder, beregnet pâ 10 hæmoglobin. Ogsâ her er et væsentligt overskud fordelagtigt. Fortrinsvis anvendes 2 til 50 gange den molære mængde.
Haptoglobinet kan bringes i kontakt med proveoplesningen i fri form. I dette tilfælde bestemmes den glykosilerede andel i den 15 samlede mængde hæmoglobin i den homogène fase hensigtsmæssigt efter kendte metoder. F.eks. kan den glykosilerede andel mâles ved hjælp af f1uorescenseksti nktionsmetoden i felge Nage! og Gibson, J. Biol. Chem. 242 (1967), side 3428. En yderligere mulighed opstâr af den forskellige pH-afhængighed af pseudo-20 peroxidase-aktiv.i tet af fri og haptogl obi nbundet hæmoglobin (jf. Kawamura m.fl., Biochem. Biophys. Acta 285 (1972), side 22-27) .
Det er yderligere muligt at fiksere haptoglobinet pâ en bærer.
25 I dette tilfælde kan fremgangsmâden til bestemme1sen gennemfo-res ved, at man enten a) dypper den med haptoglobin forsynede bærer i den hæmolyse-rede, eventuelt forbehandlede blodprove, eller b) tildrypper en defineret mængde af den forbehandlede blod- 30 prove til haptoglobinbæreren, eller c) med en defineret mængde af den forbehandlede blodpreve eluerer haptoglobin fra bæreren.
Som bærematerialer er sædvanlige bærere til analytiske kon-35 trolreagenser, sâsom papir, cellulose, ikke-vævet tekstil, porose plastmaterialer og lignende egnede. Fremsti11ingen fo-regâr ved at dyppe i eller sprojte med en haptoglobinholdig oplesni ng.
7
DK 157047 B
Haptog1 obi net kan ogsâ være kovalent bundet til en uopleselig bærer. Som bærer egner aile sædvanlige bærematerialer, der er egnede til fiksering af proteiner, sig. Forbindelsen af hap-toglobinet med bærematerialet forlober pâ en for fagmanden 5 almindelig kendt mâde. Det bærerfikserede haptoglobin sættes til den hæmolyserede blodprove, som eventuelt er forsynet med de ovenfor omtalte ti1sætningsstoffer . Efter tiIstrækkelig kontakttid, f.eks. efter ca. 1 minut, skilles det bærerfikse-rede haptoglobin med den bundne glykosilerede hæmoglobinandel 10 fra, og det glykosi1erede hæmoglobin bestemmes pâ sædvanlig mâde, enten direkte fotometrisk pâ grund af dets egenfarve e 1 -ler ogsâ pâ grund af dets pseudo-peroxidative aktivitet.
Den haptoglobinholdige bærer kan ogsâ sættes til en sojle, 15 gennem hvilken den hæmolyserede, med éventuelle tilsætnings- stoffer forsynede blolprove ledes igennem. Hæmoglobinets gly-kosilerede andel bliver ved denne fremgangsmâde hæftet til det bærerbundne haptoglobin og kan folgelig let skilles fra den i oplosningen forblivende ikke-glykosilerede hæmoglobinandel. I 20 dette tilfælde er det hensigtsmæssigt at bestemme den ikke- bundne, ikke-glykosilerede hæmoglobinandel i eluatet. HbAi~ indholdet fremgâr derpâ af forskellen mellem den samlede mæng-de hæmoglobin og den mâlte ikke-g1ykosi1erede hæmoglobinandel.
25 Opfindelsen angâr yderligere et reagens til bestemmelse af glykosileret hæmoglobin i en blodprove, som i et egnet puffer-system indeholder et middel til hæmolyse af erythrocyter samt frit eller bærerbundet haptoglobin. Til reagenset kan ogsâ pâ fordelagtig mâde sættes et eller flere stoffer med bindings-30 virkning pâ det allosteriske effektorsted, en{t) eller flere hæmbindende ligander og/eller stoffer med stabi1iserende virkning pâ ioniske bindinger.
Opfindelsen angâr endvidere et reagens til adskillelse mellem 35 glykosileret og ikke-glykosi1eret hæmoglobin, som indeholder haptoglobin i fri eller bærerbundet form.
8
DK 157047 B
De vedlagte figurer angâr hver for sig:
Fig. 1: Formindskelse af fluorescensintensiteten af en . haptoglobinoplosning efter tilsætning af glykosileret (kur-ve 1) eller ikke-glykosileret (kurve 2) hæmoglobin.
5 It = fluorescensintensitet til tiden t
Ico = f luorescensintensitet efter afslutning af reaktion-en.
Fig. 2: Formindskelse af fluorescensintensiteten af en haptoglobinoplosning efter tilsætning af glykosileret hæmo-10 globin og inosithexaphosphat (kurve 1) eller af ikke-glykosileret hæmoglobin og inosithexaphosphat (kurve 2)
It = fluorescensintensitet til tiden t 1«, = f luorescensintensitet efter afslutning af reaktion- en.
Fig. 3; Det til haptoglobin bundne hæmoglobins afhængighed af den procentvise andel af glykosileret hæmoglobin af det samlede hæmoglobinindhold.
De folgende eksempler belyser opfindelsen:
Eksempel 1.
20 Fra en oplosning, som indeholder 0,3 mmol/1 K3[Fe(CN)6j, 25 mmol/1 natriumfluorid og 45,5 mg/1 haptoglobin af human oprindelse (blandingstype) i 100 mmol/1 phosphatpuffer, pH=6,70 sættes 2,2 ml til en kolbe. Efter tilsætning af 100 μΐ af en 0,05% oplosning af glykosileret hæmoglobin, som 25 ligeledes indeholder 0,3 mmol/1 K3[Fe(CN)gJ og 25 mmol/1 natriumfluorid, folges formindskelsen af fluorescensintensiteten med tiden (begyndelsesbolgelængde 280 nm, emissi-onsbolgelængde 330 nm). Forsogsresultatet er angivet i fig.
1, kurve 1.
9
DK 157047 B
Pâ samme mâde soin ovenfor beskrevet mâles forlobet af flu-orescensintensiteten, efter at forsogsoplosningen i stedet for glykosileret hæmoglobin var tilsat ikke-glykosileret hæmoglobin. Resultatet er angivet i fig» 1, kurve 2.
5 Eksempel 2.
Pr0veopl0sninger forberedes som angivet i eksempel L stedet for phosphatpufferen anvendes en 0,05 molær bis tris-puffer, pH - 6,70 [bis-tris-puffer = Ν,Ν-bis-(2-hy-droxyethyl)-imino-tris(hydroxymethyl)methan ]. For tilsæt-10 ningen af det glykosilerede eller det ikke-glykosilerede hæmoglobin behandles pr0veopl0sningerne hver gang med 0,2 mmol/1 inosithexaphosphat. Den tidsmæssige formindskelse af fluorescensintensiteten er angivet i fig. 2.
Eksempel 3.
15 Fremstilling af haptoglobin-sepharose,, 20 nag haptoglobin af human oprindelse ( blandingstype) ira Fa. Behringwerke AG kobles til 4 g bromcyanaktiveret sepha-rose efter fremgangsmâden fra Klein og Mihaesco (Biochem. und Biophys. Research Comun. 52 (1973), side 774-778). Ved 20 tilsætning af 16 g inaktiv sepharose fortyndes det opnâeda bærerbundne haptoglobinpræparat. Man opnâr et til sepharos' koblet haptoglobinpræparat med en bindingskapacitet pâ 5 10"3 mol hæmoglobin pr. 1 g fugtig haptoglobin-sepharose.
Bestemmelse af det til haptoglobin-sepharose bundne haarno-25 globin. 1 ml af en 8 x 10"7 mol/1 oplosning af hæmoglobin i 0,05 mol/1 bis-tris-puffer, pH-værdi 6,70 behandles med ca. 5 m natriumdithionit til omdannelse til deoxyformen. Efte hinanden tilsættes inosithexaphosphat og N-butylisocyanid : 30 de folgende koncentrationer;
DK 157047 B
10
Prove Hæmo- Inosithexa- n-butyliso- Ekstinktion nr. globin phosphat cyanid (mE) (mol/1) (mol/1) 1 HbAj 5 x 10”5 0 0 5 2 HbA1 5 x ΙΟ”5 5 x 10"1* 188 3 HbA1 0 5 x 10“^ 194 4 HbA0 5 x 10"5 0 0 5 HbA0 5 x 10"5 5 x 10"4 0 6 HbA0 0 5 x 10" ** 184 10 Opiosningen blandes grundigt med 160 mg af det pâ den oven-for beskrevne mâde fremstillede haptoglobin-sepharose-præ-parat 1 minut under omrystning. Derpâ vaskes med dithionit-holdig puffer, to gange kun med puffer, og det skilles fra den overliggende fraktion.
15 Det til haptoglobin-sepharose bundne hæmoglobin bliver pâ grund af sin pseudo-peroxidaseaktivitet bestemt pâ kendt mâde ved hjælp af guajakol. I forbindelse hermed sættes 1 ml af en 30 mmol/1 guajakolopl0sning i 0,1 mol/1 acetat-puffer, pH-værdi 4,0 til den centrifugerede haptoglobin-20 sepharose. Ved yderligere tilsætning af 50 μΐ af en 1%'ig hydrogenperoxidoplosning startes reaktionen. Efter 5 minut-ters reaktionstid centrifugeres fra sepharosen, og ekstink-tionen af det fremkomne farvestof i den overliggende fraktion mâles ved 436 nm. De fundne ekstinktionsværdier er 25 angivet i den ovenfor anforte sammenstilling.
De fundne ekstinktionsværdier viser, at i nærværelse af inosithexaphosphat alene bindes hverken glykosileret eller ikke-glykosileret hæmoglobin af haptoglobinsepharose. I nærværelse af N-butylisocyanid uden tilsætning af inosit-30 hexaphosphat finder en vekselvirkning mellem haptoglobin og sâvel det ikke-glykosilerede som det glykosilerede hæmoglo-
DK 157047 B
11 bin sted. En skelnen mellem ikke-glykosileret og glykosile-ret hæmoglobin er sa mulig med meget god nojagtighed, nâr inosithexaphosphat og N-butylisocyanid sættes til proven. De ovenfor anf0rte ekstinktionsværdier viser, at kun den 5 glykosilerede andel af hæmoglobinet i dette tilfælde bindes til haptoglobin-sepharosen.
Eksempel 4.
1 ml af en 8 x 10“7 mol/1 oplosning af hæmoglobinet 0,05 mol/1 bis-tris-puffer, pH-værdi 6,70, behandles til 10 overforing i deoxyformen med ca. 5 mg natriumdithionit. Der tilsættes 25 μΐ af en 0,1 mol/1 oplosning af natriumnitrit. Efter en reaktionstid pâ 5 minutter tilsættes inosithexaphosphat i de folgende koncentrationer;
Prove Hæmoglo- Inosithexa- Ekstinktion 15 nr. bin phosphat (mE) (mol/1) 1 HbA1 0 224 2 HbAχ 5 x 10“5 190 3 HbA0 0 219 20 4 HbA0 5 x 10“5 16 | i
Oplosningen blandes grundigt med 160 mg af et haptoglobin-sepharosepræparat, der er fremstillet som angivet i eksempel 3, i 1 minut under omroring og viderebehandles pâ samme mâde som angivet i eksempel 3.
25 Den til haptoglobin-sepharosen bundne hæmoglobinandel be-stemmes som angivet i eksempel 3» De fundne ekstinktion-værdier er angivet i den ovenstâende sammenstilling.
DK 157047 B
12
De fundne ekstinktionsværdier viser, at det glykosilerede hæmoglobin i nærværelse af inosithexaphosphat er bundet raeget stærkere til haptoglobin-sepharose end den ikke-gly-kosilerede hæmoglobinform.
5 Eksempel 5.
pâ den i eksempel 3 angivne mâde fremstilles hæmoglobinhol-dige prover, hvorhos andelen af glykosileret hæmoglobin stiger fra 0-100%. Praverne behandles hver især med 5 mg natriumdithionit, 5 x 10"5 mol/1 inosithexaphosphat og 5 10 x 10“^ mol/1 N-butylisocyanid og viderebehandles som angivet i eksempel 3. Et haptoglobin-sepharosepræparat, som er opnâet pâ analog mâde som angivet i eksempel 3, anvendes som haptoglobinreagens, som dog har en bindingska-pacitet pâ 1,7 x 10"8 mol hæmoglobin pr. 1 g præparat. I 15 fig. 3 er de fundne ekstinktionsværdier anfart i afhængig-hed af den procentuelle andel af glykosileret hæmoglobin i det samlede hæmoglobinindhold.
Ved hjælp af den i fig. 3 gengivne standardkurve lader det ukendte indhold af glykosileret hæmoglobin i en prave efter 20 den her angivne fremgangsmâde sig bestemme.
Claims (8)
1. Fremgangsmâde til bestemmelse af glykosîleret hæmoglobin i 5 blodprever, hvorved man ferst ved kemisk eller fysisk behand- ling af blodproven friger glykosileret ' og ikke-glykosileret hæmoglobin fra erythrocyter, eventuelt omdanner hæmoglobînet til methæmoglobin, derpâ gennemforer en adskillelse mellem glykosîleret og ikke-glykosileret hæmoglobin og endelig be-10 stemmer det glykosilerede hæmoglobin, kendetegnet ved, at adskillelsen mellem glykosîleret og ikke-glykosileret hæmoglobin udfores ved hjælp af haptoglobin.
2. Fremgangsmâde ifelge krav 1, kendetegnet ved, 15 at adskillelsen mellem glykosîleret og ikke-glykosileret hæmoglobin gennemferes i nærværelse af et egnet puffersystem og/el 1er et eller flere stoffer, sont bevirker en konforma-tionsændring i glykosîleret og/el1er ikke-glykosileret hæmoglobin. 20
3. Fremgangsmâde ifolge krav 2, kendetegnet ved, at der som stoffer, sont bevirker en konformationsændring i glykosîleret og/eller ikke-glykosileret hæmoglobin, anvendes forbindelser med bindingsvirkning pâ det allosteriske effek- 25 torsted og/eller hæmbindende ligander.
4. Fremgangsmâde if0lge krav 3, kendetegnet ved, at der som forbindelser med bindingsvirkning pâ det alloste-riske effektorsted anvendes inosithexaphosphat, 2,3-diphospho- 30 glycerat eller mellitsyre.
5. Fremgangsmâde ifelge krav 3, kendetegnet ved, at a 1kylisocyanider, oxygen, carbonmonooxid eller nitrogen-monooxi d samt fluorid, azid, cyanid eller vand anvendes som 35 hæmbindende ligander.
6. Fremgangsmâde ifolge ethvert af kravene 1-5, kendetegnet ved, at haptoglobin foreligger i 2 til 50 ganges DK 157047 B overskud i forhold til hæmoglobin.
7. Reagens til bestemmelse af glykosileret hæmoglobin i blodprover, kendetegnet ved, at det indeholder et 5 middel til hæmolyse af erythrocyter, et egnet puffersystem og frit eller bærerbundet haptoglobin samt eventuelt et eller flere stoffer med bindingsvirkning pà det allosteriske effek-torsted, en(t) eller flere hæmbindende ligander og/eller stoffer med stabiliserende virkning pà ioniske bindinger. 10
8. Reagens til adskillelse mellem glykosileret og ikke-glyko-sileret hæmoglobin, kendetegnet ved, at det indeholder haptoglobin i fri eller bærerbundet form. 15 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3141146 | 1981-10-16 | ||
| DE19813141146 DE3141146A1 (de) | 1981-10-16 | 1981-10-16 | Verfahren und reagens zur bestimmung von glykosiliertem haemoglobin |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK458682A DK458682A (da) | 1983-04-17 |
| DK157047B true DK157047B (da) | 1989-10-30 |
| DK157047C DK157047C (da) | 1990-04-02 |
Family
ID=6144259
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK458682A DK157047C (da) | 1981-10-16 | 1982-10-15 | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af glykosileret haemoglobin og reagens til adskillelse mellem glykosileret og ikke glykosileret haemoglobin |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4438204A (da) |
| EP (1) | EP0077515B1 (da) |
| JP (1) | JPS5879163A (da) |
| AT (1) | ATE12318T1 (da) |
| AU (1) | AU537363B2 (da) |
| CA (1) | CA1199257A (da) |
| DD (1) | DD203778A5 (da) |
| DE (2) | DE3141146A1 (da) |
| DK (1) | DK157047C (da) |
| ES (1) | ES8306406A1 (da) |
| FI (1) | FI73088C (da) |
| HU (1) | HU188211B (da) |
| IE (1) | IE53534B1 (da) |
| ZA (1) | ZA827547B (da) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3314308A1 (de) * | 1983-04-20 | 1984-10-25 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagens zur bestimmung des haemoglobin-haptoglobin komplexes in gegenwart von freiem haemoglobin |
| DE3532868A1 (de) * | 1985-09-14 | 1987-03-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von glykosiliertem haemoglobin sowie hierzu geeignete verbindungen und verfahren zu deren herstellung |
| US4837170A (en) * | 1986-01-20 | 1989-06-06 | Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. | Monoclonal antibody, measuring method of glucosylated protein by utilizing the monoclonal antibody, and kit therefor |
| EP0299419B1 (en) * | 1987-07-14 | 1993-10-20 | Kabushiki Kaisha Kyoto Daiichi Kagaku | Automatic measurement method of glycohemoglobin |
| US4970171A (en) * | 1987-11-09 | 1990-11-13 | Miles Inc. | Denaturant reagents for convenient determination of hemoglobin derivatives in blood |
| JP3032891B2 (ja) * | 1989-03-04 | 2000-04-17 | 吉富製薬株式会社 | 遊離ヘモグロビン測定用試薬キット及びそれを用いる遊離ヘモグロビンの測定法 |
| US5484735A (en) * | 1989-08-23 | 1996-01-16 | Northwestern University | Immunoassay of glycosylated proteins employing antibody directed to reductively glycosylated N-terminal amino acids |
| DK0589001T3 (da) * | 1992-03-04 | 2002-11-04 | Abbott Lab | Bestemmelse af glykeret haemoglobin ved kvælning af fluorescens |
| US5739037A (en) * | 1992-09-29 | 1998-04-14 | Drew Scientific Limited | Process for eliminating labile glycohaemoglobin from a sample |
| AU5457494A (en) * | 1992-11-03 | 1994-05-24 | Chronomed, Inc. | Methods and procedures for preparing red blood fractions |
| US5424447A (en) * | 1993-07-07 | 1995-06-13 | The Medical College Of Wisconsin Research Foundation, Inc. | Heme binding compounds and use thereof |
| US6174734B1 (en) | 1997-10-24 | 2001-01-16 | Abbott Laboratories | Measurement of glycated hemoglobin |
| DE19856433C2 (de) * | 1998-12-08 | 2001-09-13 | Aventis Behring Gmbh | Verfahren zum spezifischen Nachweis von glykosilierten Proteinen |
| DE102009053225A1 (de) * | 2009-11-06 | 2011-05-12 | Deutsche Sporthochschule Köln | Verfahren zur Bestimmung der totalen Hämoglobinmenge im Körper eines Lebewesens |
| ES2961300T3 (es) * | 2010-03-31 | 2024-03-11 | Sekisui Medical Co Ltd | Método para analizar hemoglobinas |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3350174A (en) * | 1964-01-08 | 1967-10-31 | Miles Lab | Process of determining hemoglobin separated from peroxidase inhibitors in urine |
| US4189304A (en) | 1978-10-27 | 1980-02-19 | Miles Laboratories, Inc. | Device and method for detecting myoglobin |
| US4200435A (en) | 1978-12-26 | 1980-04-29 | Abbott Laboratories | Determination of glycosylated hemoglobin in blood |
| US4268270A (en) * | 1979-04-30 | 1981-05-19 | Children's Hospital Medical Center | Glycosylated hemoglobin measurement |
| US4255385A (en) | 1979-10-23 | 1981-03-10 | Abbott Laboratories | Reagent and test kit for determining glycosylated hemoglobin |
| US4371374A (en) | 1980-11-17 | 1983-02-01 | The Rockefeller University | Monitoring metabolic control in diabetic patients by measuring glycosylated amino acids and peptides in urine |
-
1981
- 1981-10-16 DE DE19813141146 patent/DE3141146A1/de not_active Withdrawn
-
1982
- 1982-09-29 US US06/426,510 patent/US4438204A/en not_active Expired - Lifetime
- 1982-09-30 AU AU88896/82A patent/AU537363B2/en not_active Ceased
- 1982-10-11 EP EP82109382A patent/EP0077515B1/de not_active Expired
- 1982-10-11 DE DE8282109382T patent/DE3262693D1/de not_active Expired
- 1982-10-11 FI FI823454A patent/FI73088C/fi not_active IP Right Cessation
- 1982-10-11 AT AT82109382T patent/ATE12318T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-10-13 DD DD82243954A patent/DD203778A5/de unknown
- 1982-10-14 ES ES516496A patent/ES8306406A1/es not_active Expired
- 1982-10-15 ZA ZA827547A patent/ZA827547B/xx unknown
- 1982-10-15 IE IE2493/82A patent/IE53534B1/en unknown
- 1982-10-15 DK DK458682A patent/DK157047C/da not_active IP Right Cessation
- 1982-10-15 HU HU823286A patent/HU188211B/hu not_active IP Right Cessation
- 1982-10-15 CA CA000413594A patent/CA1199257A/en not_active Expired
- 1982-10-15 JP JP57180095A patent/JPS5879163A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3141146A1 (de) | 1983-04-28 |
| ATE12318T1 (de) | 1985-04-15 |
| DK157047C (da) | 1990-04-02 |
| ZA827547B (en) | 1983-09-28 |
| ES516496A0 (es) | 1983-06-01 |
| HU188211B (en) | 1986-03-28 |
| DE3262693D1 (en) | 1985-04-25 |
| FI73088B (fi) | 1987-04-30 |
| IE53534B1 (en) | 1988-12-07 |
| US4438204A (en) | 1984-03-20 |
| AU537363B2 (en) | 1984-06-21 |
| EP0077515B1 (de) | 1985-03-20 |
| JPH0153748B2 (da) | 1989-11-15 |
| EP0077515A3 (en) | 1983-08-17 |
| AU8889682A (en) | 1983-04-21 |
| FI73088C (fi) | 1987-08-10 |
| JPS5879163A (ja) | 1983-05-12 |
| DK458682A (da) | 1983-04-17 |
| ES8306406A1 (es) | 1983-06-01 |
| FI823454A0 (fi) | 1982-10-11 |
| FI823454L (fi) | 1983-04-17 |
| IE822493L (en) | 1983-04-16 |
| EP0077515A2 (de) | 1983-04-27 |
| DD203778A5 (de) | 1983-11-02 |
| CA1199257A (en) | 1986-01-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pundir et al. | Determination of glycated hemoglobin with special emphasis on biosensing methods | |
| JP5829766B2 (ja) | 酵素法を利用したヘモグロビンＡ１ｃ定量分析のための溶血試薬組成物 | |
| US5686316A (en) | Methods and reagents for the rapid determination of glycated hemoglobin | |
| US4200435A (en) | Determination of glycosylated hemoglobin in blood | |
| DK157047B (da) | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af glykosileret haemoglobin og reagens til adskillelse mellem glykosileret og ikke glykosileret haemoglobin | |
| US4255385A (en) | Reagent and test kit for determining glycosylated hemoglobin | |
| JPH0377465B2 (da) | ||
| Mosca et al. | Plasma protein glycation as measured by fructosamine assay. | |
| Thode et al. | Evaluation of a new semiautomatic electrode system for simultaneous measurement of ionized calcium and pH | |
| Schleicher et al. | Protein glycation: measurement and clinical relevance | |
| CN103267855A (zh) | 一种cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法 | |
| US20080293074A1 (en) | Hemoglobin Derivative Measurement Method, and Reagent Composition, Measurement Kit, Analysis Device and Analysis System for Use in the Method | |
| JP4144117B2 (ja) | グルコースの測定方法及び測定装置 | |
| GB1597859A (en) | Method for determination of free hormones in biological fluids | |
| Nathan et al. | Two commercial methods evaluated for eliminating the labile fraction from the assay for glycated hemoglobin (glycohemoglobin). | |
| EP0448072A2 (en) | Process for assaying free hemoglobin and reagent kit for assaying free hemoglobin | |
| Ross et al. | A semi-automated method for the determination of glycosylated haemoglobin | |
| EP0965043B1 (en) | Detection of cardiac muscle necrosis by immunoassay and appropriate antibodies therefor | |
| Wålinder et al. | New spectrophotometric method for the determination of hemoglobin A1 compared with a microcolumn technique. | |
| EP2831581A1 (en) | Measurement of biologically labile hydrogen sulfide pools | |
| Nakashima et al. | Immediate elimination of labile HbA1c with allosteric effectors of hemoglobin | |
| WO1987006345A1 (en) | Colorimetric ratioing immunoassay | |
| JPH0658936A (ja) | 糖化蛋白の測定方法 | |
| Nugnes | Advanced analytical methods for profiling disease-related alterations in diabetic patients with kidney impairment | |
| JP2000065839A (ja) | ヒトヘモグロビン検出装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |