CN103267855A - 一种cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种肌钙蛋白I（cTnI）,肌红蛋白(Myo）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）三合一胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法，该试纸条和试剂盒采用层析技术以及双抗体夹心法原理制备而成，通过一次操作即可检测临床标本（全血/血清/血浆）中人cTnI、Myo和CK-MB的水平，简化了操作过程。
Description
技术领域
本发明属于免疫诊断试剂技术领域，涉及一种利用胶体金免疫层析技术以及双抗体夹心法原理定性检测临床标本（全血/血清/血浆）中人心肌肌钙蛋白I、肌红蛋白和肌酸激酶同工酶的一种试纸条、试剂盒及其制备方法。
背景技术
心肌梗死是冠心病中最凶险的一种，随着生活水平的提高，其发病率成逐年上升的趋势，现已对人类健康和生存造成了重大的威胁，是世界上各国面临的社会问题。有统计显示，以前在发作急性心肌梗死的病人中，三分之二没被送入医院就已经死亡，而在被送入医院的患者中，死亡率仍高达30％。
从临床来看，约有25%的心肌梗死患者发病早期没有典型的临床症状，约50%左右的心肌梗死患者缺乏心电图（ECG）的特异改变。由于缺乏典型的临床表现，会使医生迟迟无法确诊，从而延误治疗。在这种情况下，心肌损伤生化标志物的检测在诊断急性心肌梗死时尤为重要。
目前，主要有如下三种心肌损伤生化标志物：
（1）肌钙蛋白I（cTnI）是分子量22.5kD的心肌蛋白、肌钙蛋白T(TnT)和肌钙蛋白C(TnC)一起形成肌钙蛋白复合体，从而对细胞内钙离子信号的传递和肌动-肌球蛋白的相互作用起着极其主要的作用。心肌梗塞发作后肌钙蛋白复合体分解，cTnI快速地释放入血液循环。尽管骨髂肌中也有肌钙蛋白I，但其氨基酸组成和心肌cTnI不同，造成二者的免疫活性不同，进而保证了心肌cTnI测试的准确性。心肌梗死症状发作后4-6小时cTnI才达到正常值上限，12-24小时后达到最高浓度，有时能维持6-10天。正常血清cTnI低于0.06ng/ml，有些患者cTnI可高达1,300ng/ml。与CK-MB相比，cTnI对心肌损伤的诊断敏感性更高，特导性更强，持续时间更长。因此cTnI测定对再发心肌梗死的诊断尤其有帮助，还可诊断微小心梗，故对不稳定性心绞痛（UA）和非ST抬高的心肌梗死的鉴别有极大帮助。
（2）肌红蛋白（Myo）可来自骨骼肌和心肌，在肌肉中有运输氧和储氧功能。因为Myo分子小，不通过淋巴结就可直接进入血液循环，所以心肌轻度受损时即从心肌细胞直接进入血液循环。美国纽约心脏病协会的建议认为，Myo是用于心肌损伤的最佳早期标志物。Myo在心肌损伤时能很快释放出来，即在出现症状后的1-3小时就可见于血清中（敏感性60％），其高峰为AMI后的3-6小时（敏感性90％）。由于其半衰期很短，故在较晚（6-8小时后）对心肌梗死的诊断价值就很小。
（3）肌酸激酶为细胞内重要的能量代谢酶，分布广泛，以肌细胞中最多，由二个亚基组成二聚体；肌酸激酶同工酶（CK-MB）主要存在于心肌细胞的外浆层，在心肌损伤3-4小时后，开始在血液中升高，更具心脏特异性。一直是临床诊断心肌损伤的心肌酶谱中最具特异性的酶。
综上所述，由于心肌损伤后cTnI、Myo和CK-MB释放动力学的差异，cTnI、Myo和CK-MB联检对诊断急性心肌梗塞(AMI)有协同互补作用，cTnI（肌钙蛋白I）,Myo(肌红蛋白）,CK-MB三合一检测比单项cTnI检测更有助于心梗的早期诊断。三种标志物的诊断优势相结合，具有更好的灵敏度和特异性，使您的诊断更精准。
目前，大多数只进行心肌梗塞的单项指标检测，检测误差大，容易使医生误判或者漏判，而一种cTnI（肌钙蛋白I）、Myo(肌红蛋白）、CK-MB（肌酸激酶同工酶）三合一快速检测法使医生的诊断更准确定性定量三判断，是国内外公认的临床诊断心肌梗死较为可靠的检测法，能够为临床快速诊断心肌梗塞提供全面可靠的、准确的方法。
发明内容
针对现有检测技术的不足，本发明的目的在于提供一种cTnI（肌钙蛋白I）,Myo(肌红蛋白）和CK-MB（肌酸激酶同工酶）三合一检测试纸条、试剂盒及其制备方法。采用本发明的试纸条或试剂盒，可通过一次操作实现快速检测人肌钙蛋白I、肌红蛋白和肌酸激酶同工酶，从而简化操作过程，实现快速检测的目的。
本发明的第一个目的是这样实现的：
一种cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试纸条，包括底板，在底板的一面顺次相互搭接地粘附有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫上贴有全血滤血膜，所述金标垫为涂覆有单克隆抗体cTnI/Myo/CK-MB胶体金标记物的玻璃纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上有三条检测线和一条质控线，所述三条检测线分别包被有cTnI抗体、Myo抗体、CK-MB抗体，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体。
优选地，上述cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试纸条，采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，在金溶胶中缓慢加入单克隆抗体cTnI、Myo、CK-MB，形成单克隆抗体cTnI/Myo/CK-MB胶体金标记物，并涂覆在玻璃纤维膜上干燥而得金标垫，干燥条件为20-30℃，相对湿度30-35%，干燥5小时。
优选地，上述cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试纸条，其中所述cTnI抗体、Myo抗体、CK-MB抗体、羊抗鼠IgG抗体分别以1.0～1.2mg/mL的浓度划到硝酸纤维素膜上包被并干燥，干燥条件为20-30℃，相对湿度30-35%，干燥5小时。
进一步优选地，上述cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试纸条，在PVD胶板上，依次粘贴上样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，样品垫一端压住金标垫一端0.5～1mm，金标垫另一端压住硝酸纤维素膜一端0.5～1mm，吸水垫的一端压住硝酸纤维素膜另一端0.5～1mm，并且用力压紧。
本发明的第二个目的是这样实现的：
一种cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试剂盒，包含样本处理瓶和检测试纸条，所述样本处理瓶内装有样本处理液，所述的检测试纸条同实现本发明第一个目的所述的技术方案。
上述cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试剂盒，其中所述的样本处理液为pH7.0±0.2的磷酸盐缓冲液。
一种cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
（1）将cTnI、Myo、CK-MB、羊抗鼠IgG抗体分别稀释到包被浓度1.0～1.2mg/mL,将四种包被液分别划到硝酸纤维素膜上的指定位置，将已包被的硝酸纤维素膜在20-30℃、相对湿度30-35%的条件下干燥5小时备用；
（2）采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，在金溶胶中缓慢加入单克隆抗体cTnI、Myo和CK-MB，使胶体金与抗体形成单克隆抗体cTnI/Myo/CK-MB胶体金标记物，并涂覆在玻璃纤维膜上干燥而得金标垫，干燥条件为20-30℃，相对湿度30-35%，干燥5小时备用；
（3）将全血滤血膜贴在样品垫上；
（4）在底板的一面顺次相互搭接地粘附有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，确保样品垫一端压住金标垫一端0.5～1mm，金标垫另一端压住硝酸纤维素膜一端0.5～1mm，吸水垫的一端压住硝酸纤维素膜另一端0.5～1mm，得试纸条；
（5）将试纸条放入塑料板卡内，压实，装入铝箔袋中封口；
（6）配制pH7.0±0.2的磷酸盐缓冲液，作为样本处理液装入样品处理瓶，1ml/瓶；
（7）将试纸条和样品处理瓶按照1:1的配比组装制成试剂盒。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和显著的进步：肌钙蛋白I（cTnI）,肌红蛋白(Myo）,肌酸激酶同工酶（CK-MB）三合一快速检测试纸条（胶体金法）采用免疫胶体金免疫层析技术以及双抗体夹心法捕测定相关蛋白，通过一次操作即可联合检测出常见三项急性心肌梗死特异性蛋白，简化了操作过程；本发明所述试剂盒检测简便、快速、准确、易于普及，特别适用于基层，是急性心肌梗塞早期诊断的一种辅助手段。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
实施例1：肌钙蛋白I（cTnI）,肌红蛋白(Myo）,肌酸激酶同工酶（CK-MB）三合一快速检测试纸条（胶体金法）的构成
1.样品处理瓶：样品处理瓶(购自杭州北域)装有1mL样品处理液（磷酸缓冲液，主要原料购自国药集团）。
2.试纸条：60*5mm底板（购自上海杰一公司）；吸水垫为15*5mm的粗纤维滤纸（购自上海杰一公司）；25*5mm硝酸纤维素膜(购自Millipore公司)依次包被心肌肌钙蛋白I抗体（购自abcam公司）、肌红蛋白抗体（购自abcam公司）、肌酸激酶同工酶抗体（购自abcam公司）、羊抗鼠IgG抗体（购自abcam公司）；样品垫（购自上海杰一公司）上贴附有全血滤血膜（购自上海杰一公司）；金标垫（购自上海杰一公司）。
实施例2：试剂盒的制备
1.样品处理液制备：制备样本处理液：配制磷酸盐缓冲液（pH7.0±0.2），分装至样本处理瓶中，1mL/瓶。
2.试纸条制备：
2.1.将人cTnI单克隆抗体、人Myo单克隆抗体、人CK-MB单克隆抗体、羊抗鼠IgG抗体稀释到包被浓度1.0～1.2mg/mL,将四种包被液分别划到硝酸纤维素膜上指定位置，将已包被的硝酸纤维素膜干燥后保存，干燥条件为20-30℃，相对湿度30-35%5小时。
2.2.金标垫的制备：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，在金溶胶中一定比例缓慢加入单克隆抗体cTnI/Myo/CK-MB，使胶体金与抗体形成单克隆抗体cTnI/Myo/CK-MB胶体金标记物。单克隆抗体cTnI/Myo/CK-MB胶体金标记物混合后包被在玻璃纤维膜上，然后，20-30℃，相对湿度30-35%，干燥5小时备用；
2.3.将全血滤血膜贴在样品垫上。
2.4.反应板的制备：在底板上一端顺次相互搭接地贴附有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜，另一端贴附吸水垫；确保金标垫的上部压住硝酸纤维素膜0.5～1mm，确保样品垫的上部压住金标垫下部0.5～1mm，确保吸水垫的上部压住硝酸纤维素膜0.5～1mm，并且用力压紧，避免留有空隙影响实验结果。
2.5.切割装配：将反应板切成5mm试纸条，将试纸条放入塑料板卡内，压实，℃装入铝箔袋中封口。
3.将试纸条和样品处理瓶按照1:1的配比组装制成试剂盒。
实施例3检测方法
3.1.标本收集
1.全血标本的采集：指尖、耳垂末梢或静脉标本采集后应尽可能立即使用，抗凝血应在24小时内使用以避免融血。
2.血清/血浆标本的收集：血清/血浆标本由静脉采血后离心获得，标本在2-8°C可保存一周，长期保存需冷冻，但需避免反复冻溶。
3.取全血、血清、血浆样本100-200ul滴加至加样窗，如果全血较为粘稠，可在加样窗滴加1～2滴未使用的样本处理液。
4.检测温度15-30℃，湿度40-60%为最佳。
5.10-15分钟后判读结果：
5.1.如果样本中含有肌红蛋白或肌酸激酶同工酶或心肌肌钙蛋白I，则标本中的肌红蛋白或肌酸激酶同工酶或心肌肌钙蛋白I分别与预先包被在聚酯膜上的金标记的肌红蛋白或肌酸激酶同工酶或心肌肌钙蛋白I抗体结合，结合物在毛细效应下向上层析，随后会被固定在膜上相应测试区的肌红蛋白或肌酸激酶同工酶或心肌肌钙蛋白I抗体结合捕获，从而在相应测试区出现紫红色条带。。
5.2.无论标本中是否存在肌红蛋白、肌酸激酶同工酶或者心肌肌钙蛋白I，一条紫红色条带都会出现在质控区（C）内。质控区（C）内所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。如此线不出现，表示该试剂盒失效，检测结果无效。
实施例4：临床患者检测
临床可疑为AMI的门诊和住院病人87例，其中临床确诊AMI的有28例和59例阴性病例。用这些全血样本分别用cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试纸条和心肌肌钙蛋白IcTnI胶体金法检测试纸条进行检测，结果显示试剂盒与心肌肌钙蛋白IcTnI胶体金法检测试纸条具备相似的灵敏度和特异性。检测结果统计如下：
Claims (7)
1.一种cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试纸条，包括底板，在底板的一面顺次相互搭接地粘附有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于：所述样品垫上贴有全血滤血膜，所述金标垫为涂覆有单克隆抗体cTnI/Myo/CK-MB胶体金标记物的玻璃纤维素膜，所述硝酸纤维素膜上有三条检测线和一条质控线，所述三条检测线分别包被有cTnI抗体、Myo抗体、CK-MB抗体，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体。
2.根据权利要求1所述cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试纸条，其特征在于：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，在金溶胶中缓慢加入单克隆抗体cTnI、Myo、CK-MB，形成单克隆抗体cTnI/Myo/CK-MB胶体金标记物，并涂覆在玻璃纤维膜上干燥而得金标垫，干燥条件为20-30℃，相对湿度30-35%，干燥5小时。
3.根据权利要求1所述cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试纸条，其特征在于：所述cTnI抗体、Myo抗体、CK-MB抗体、羊抗鼠IgG抗体，分别以1.0～1.2mg/mL的浓度划到硝酸纤维素膜上包被并干燥，干燥条件为20-30℃，相对湿度30-35%，干燥5小时。
4.根据权利要求1-3任一项所述cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试纸条，其特征在于：样品垫一端压住金标垫一端0.5～1mm，金标垫另一端压住硝酸纤维素膜一端0.5～1mm，吸水垫的一端压住硝酸纤维素膜另一端0.5～1mm。
5.一种cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试剂盒，其特征在于：包含样本处理瓶和权利要求1所述的检测试纸条，所述样本处理瓶内装有样本处理液。
6.根据权利要求5所述cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试剂盒，其特征在于：所述的样本处理液为pH7.0±0.2的磷酸盐缓冲液。
7.一种cTnI、Myo和CK-MB三合一胶体金法检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）将cTnI、Myo、CK-MB、羊抗鼠IgG抗体分别稀释到包被浓度1.0～1.2mg/mL,将四种包被液分别划到硝酸纤维素膜上的指定位置，将已包被的硝酸纤维素膜在20-30℃、相对湿度30-35%的条件下干燥5小时备用；
（2）采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，在金溶胶中缓慢加入单克隆抗体cTnI、Myo和CK-MB，使胶体金与抗体形成单克隆抗体cTnI/Myo/CK-MB胶体金标记物，并涂覆在玻璃纤维膜上干燥而得金标垫，干燥条件为20-30℃，相对湿度30-35%，干燥5小时备用；
（3）将全血滤血膜贴在样品垫上；
（4）在底板的一面顺次相互搭接地粘附有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，确保样品垫一端压住金标垫一端0.5～1mm，金标垫另一端压住硝酸纤维素膜一端0.5～1mm，吸水垫的一端压住硝酸纤维素膜另一端0.5～1mm，得试纸条；
（5）将试纸条放入塑料板卡内，压实，装入铝箔袋中封口；
（6）配制pH7.0±0.2的磷酸盐缓冲液，作为样本处理液装入样品处理瓶，1ml/瓶；
（7）将试纸条和样品处理瓶按照1:1的配比组装制成试剂盒。
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Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104165995A (zh) * | 2014-08-11 | 2014-11-26 | 上海应用技术学院 | 一种血中tnni3k的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用 |
| CN105092861A (zh) * | 2015-09-14 | 2015-11-25 | 广州市微米生物科技有限公司 | 一种crp/saa定量联合检测免疫荧光层析试纸及其制备方法 |
| CN105548534A (zh) * | 2015-04-04 | 2016-05-04 | 吉林双正医疗科技有限公司 | 心肌标志物的联合检测装置及其制备方法 |
| CN105572387A (zh) * | 2016-01-26 | 2016-05-11 | 河南生生医疗器械有限公司 | 一种免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒及其制备方法 |
| CN106153927A (zh) * | 2016-04-12 | 2016-11-23 | 上海奥普生物医药有限公司 | 一种快速定量同时检测cTnI、CKMB、Myo的时间分辨荧光免疫层析试剂及制备方法 |
| CN106442979A (zh) * | 2016-10-17 | 2017-02-22 | 赵军理 | 一种用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条 |
| CN107045057A (zh) * | 2017-04-11 | 2017-08-15 | 内蒙古自治区农牧业科学院 | 一种牛源肌酸激酶同工酶胶体金免疫层析快速检测试纸条 |
| CN108593919A (zh) * | 2018-03-13 | 2018-09-28 | 深圳市第二人民医院 | 一种胶体金免疫层析试纸及其制备方法和应用 |
| CN111896745A (zh) * | 2020-07-29 | 2020-11-06 | 泰安京泰生物技术有限公司 | 一种利用胶体金法联合检测心肌标志物的试剂盒及其制备方法、应用 |
| CN113189351A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-07-30 | 瑞吉瑞得医药生物科技(无锡)有限公司 | 用于冠心病血液肌红蛋白检测的胶体金试纸及其检测方法 |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004011947A1 (en) * | 2002-07-29 | 2004-02-05 | I-Stat Corporation | Multiple hybrid immunoassay |
| US20050164405A1 (en) * | 2004-01-27 | 2005-07-28 | Wei Zhao Lu | Non-specific "bridge" link specific "sandwich" immuno-complex to the solid phase in the lateral flow immunoassay |
| CN1866017A (zh) * | 2005-05-16 | 2006-11-22 | 艾博（武汉）生物技术有限公司 | 急性心肌梗死早期诊断三合一检测试剂板 |
| JP2007322310A (ja) * | 2006-06-02 | 2007-12-13 | Nippon Kayaku Co Ltd | 検体中の分析対象物質の検出あるいは測定方法 |
| CN201087837Y (zh) * | 2007-03-30 | 2008-07-16 | 万华普曼生物工程有限公司 | 人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌钙蛋白i诊断试纸 |
| EP1787121B1 (en) * | 2004-07-29 | 2010-08-25 | Relia Diagnostic Systems, LLC | Lateral flow system and assay |
| CN102323422A (zh) * | 2011-05-30 | 2012-01-18 | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 | 半定量同时检测cTnI和Myo的免疫层析试纸条及其制备 |
| CN102520192A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-06-27 | 深圳康美生物科技股份有限公司 | 一种定量检测肌钙蛋白i/肌酸激酶同工酶/肌红蛋白的荧光免疫层析方法及其试剂盒 |
| CN202433374U (zh) * | 2011-11-09 | 2012-09-12 | 北京乐普医疗科技有限责任公司 | 三联试纸免疫层析检测卡 |
| CN102928589A (zh) * | 2012-11-15 | 2013-02-13 | 南京凯基生物科技发展有限公司 | 呼吸道疾病IgG抗体的胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法 |
| CN102928587A (zh) * | 2012-11-16 | 2013-02-13 | 南京凯基生物科技发展有限公司 | 一种肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法 |
-
2013
- 2013-05-06 CN CN2013101682535A patent/CN103267855A/zh active Pending
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004011947A1 (en) * | 2002-07-29 | 2004-02-05 | I-Stat Corporation | Multiple hybrid immunoassay |
| US20050164405A1 (en) * | 2004-01-27 | 2005-07-28 | Wei Zhao Lu | Non-specific "bridge" link specific "sandwich" immuno-complex to the solid phase in the lateral flow immunoassay |
| EP1787121B1 (en) * | 2004-07-29 | 2010-08-25 | Relia Diagnostic Systems, LLC | Lateral flow system and assay |
| CN1866017A (zh) * | 2005-05-16 | 2006-11-22 | 艾博（武汉）生物技术有限公司 | 急性心肌梗死早期诊断三合一检测试剂板 |
| JP2007322310A (ja) * | 2006-06-02 | 2007-12-13 | Nippon Kayaku Co Ltd | 検体中の分析対象物質の検出あるいは測定方法 |
| CN201087837Y (zh) * | 2007-03-30 | 2008-07-16 | 万华普曼生物工程有限公司 | 人肌红蛋白/肌酸激酶同工酶/心肌钙蛋白i诊断试纸 |
| CN102323422A (zh) * | 2011-05-30 | 2012-01-18 | 中国科学院上海微系统与信息技术研究所 | 半定量同时检测cTnI和Myo的免疫层析试纸条及其制备 |
| CN202433374U (zh) * | 2011-11-09 | 2012-09-12 | 北京乐普医疗科技有限责任公司 | 三联试纸免疫层析检测卡 |
| CN102520192A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-06-27 | 深圳康美生物科技股份有限公司 | 一种定量检测肌钙蛋白i/肌酸激酶同工酶/肌红蛋白的荧光免疫层析方法及其试剂盒 |
| CN102928589A (zh) * | 2012-11-15 | 2013-02-13 | 南京凯基生物科技发展有限公司 | 呼吸道疾病IgG抗体的胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法 |
| CN102928587A (zh) * | 2012-11-16 | 2013-02-13 | 南京凯基生物科技发展有限公司 | 一种肺炎支原体IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法 |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104165995A (zh) * | 2014-08-11 | 2014-11-26 | 上海应用技术学院 | 一种血中tnni3k的浓度的检测试剂盒及其制备方法和应用 |
| CN105548534A (zh) * | 2015-04-04 | 2016-05-04 | 吉林双正医疗科技有限公司 | 心肌标志物的联合检测装置及其制备方法 |
| CN105092861A (zh) * | 2015-09-14 | 2015-11-25 | 广州市微米生物科技有限公司 | 一种crp/saa定量联合检测免疫荧光层析试纸及其制备方法 |
| CN105572387A (zh) * | 2016-01-26 | 2016-05-11 | 河南生生医疗器械有限公司 | 一种免疫荧光层析法检测核基质蛋白22用试剂盒及其制备方法 |
| CN106153927A (zh) * | 2016-04-12 | 2016-11-23 | 上海奥普生物医药有限公司 | 一种快速定量同时检测cTnI、CKMB、Myo的时间分辨荧光免疫层析试剂及制备方法 |
| CN106442979A (zh) * | 2016-10-17 | 2017-02-22 | 赵军理 | 一种用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条 |
| CN107045057A (zh) * | 2017-04-11 | 2017-08-15 | 内蒙古自治区农牧业科学院 | 一种牛源肌酸激酶同工酶胶体金免疫层析快速检测试纸条 |
| CN108593919A (zh) * | 2018-03-13 | 2018-09-28 | 深圳市第二人民医院 | 一种胶体金免疫层析试纸及其制备方法和应用 |
| CN111896745A (zh) * | 2020-07-29 | 2020-11-06 | 泰安京泰生物技术有限公司 | 一种利用胶体金法联合检测心肌标志物的试剂盒及其制备方法、应用 |
| CN111896745B (zh) * | 2020-07-29 | 2021-05-25 | 泰安京泰生物技术有限公司 | 一种利用胶体金法联合检测心肌标志物的试剂盒及其制备方法、应用 |
| CN113189351A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-07-30 | 瑞吉瑞得医药生物科技(无锡)有限公司 | 用于冠心病血液肌红蛋白检测的胶体金试纸及其检测方法 |
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