CN106442979A - 一种用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条，包括底板以及设置在底板上沿层析方向依次设置的样品垫、滤血膜、金标垫、NC膜和吸水纸，所述金标垫上喷涂有采用胶体金或者荧光微球对PCⅢ、IV‑C、LN、HA第一抗体进行标记的标记物涂层；NC膜上包被固定有PCⅢ、IV‑C、LN、HA第二抗体，第二抗体作为检测线T，NC膜上设置有质控线C；本发明采用双抗体夹心法原理，采用胶体金或者荧光微球，对肝纤检测中抗原的第一抗体进行标记形成标记物，喷涂在金标垫上；将第二抗体包被在NC膜上；使用便捷、操作人员无需特别培训；灵敏度高，可达到1ng/ml的水平；检测快速，从加样到出结果仅需15分钟；特异性高、成本低廉；具有广阔的临床应用前景。

Description

一种用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条
技术领域
本发明涉及临床医学诊断技术领域，具体是一种用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条。
背景技术
肝纤四项即肝纤维化四项检查，包括PCⅢ(III型前胶原)、IV-C(IV型胶原)、LN(层粘连蛋白)和HA(透明质酸酶)，主要用来检查诊断慢性肝病患者病情发展状况和治疗效果，是衡量炎症活动度、纤维化程度的重要依据；传统的检测方法包括肝穿刺病理活检法、血清免疫化学发光法、血清酶联免疫吸附法；肝穿刺病理活检虽然视为“金标准”，但取样过程复杂、病人比较痛苦，需要必要的护理和抗感染措施，检查后需要3-5天时间才能出结果；血清免疫化学发光法敏感度、特异性及重复性均很好，但操作过程繁杂、价格昂贵；血清酶联免疫吸附法操作过程繁杂、不易规范、速度慢；基于上述原因，迫切需要一种快速、准确的用于检测肝纤四项的技术，以改善现有技术的缺点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种使用便捷、灵敏度高、特异性高、成本低廉、检测快速的用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条，包括吸水纸、NC膜、底板、金标垫、滤血膜和样品垫；所述底板上沿层析方向依次设置有样品垫、滤血膜、金标垫、NC膜和用于吸收检测样品中多余液体的吸水纸，所述金标垫上喷涂有采用胶体金或者荧光微球对PCⅢ、IV-C、LN、HA第一抗体进行标记的标记物涂层；所述NC膜上包被固定有PCⅢ、IV-C、LN、HA第二抗体。
作为本发明进一步的方案：所述样品垫上粘附标有指示线的胶带。
作为本发明再进一步的方案：所述标记物涂层在金标垫上通过烘干固定。
作为本发明再进一步的方案：所述PCⅢ、IV-C、LN、HA第二抗体包被在NC膜上烘干固定。
作为本发明再进一步的方案：所述样品垫上设置有加样孔。
作为本发明再进一步的方案：所述NC膜上设置有质控线C，质控线C上固化包被有二抗抗体；所述第二抗体作为检测线T。
作为本发明再进一步的方案：所述用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条的使用方法，包括以下步骤：
1)采集样本，样本为全血、血清或血浆，稀释样本，并取60-80μl稀释后的样本加样到样品垫的加样孔内，放入仪器检测区内；
2)稀释的样本经过滤血膜过滤后流至金标垫，干燥的标记物被溶解，样本中的抗原与第一抗体反应，形成“胶体金或荧光微球-第一抗体-抗原”复合物；
3)复合物层析到NC膜上，与NC膜上包被的第二抗体反应，形成“胶体金或荧光微球-第一抗体-抗原-第二抗体”复合物，过量的未反应标记物层析到用二抗抗体包被的质控线而被捕捉，从而，在NC膜上，形成被特异性捕捉的检测线T和被二抗捕捉形成的质控线C；
4)仪器对检测线T、质控线C的光反射进行测试，其比值与样本中的抗原浓度成正相关，按照样本浓度与T/C比值建立的函数关系，形成条形码；
5)仪器根据检测到的T/C比值以及条形码中的函数换算关系，计算出样本中抗原的浓度。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明使用便捷、灵敏度高、特异性高、成本低廉、检测快速；样本采用全血、血清、血浆均可，因此提高了临床使用科室的便利程度；样本被稀释后，加样到样品垫的加样孔，再放入仪器检测区内即可，操作便捷，操作人员无需特别培训；从加样到出结果仅需15分钟，检验快速，是目前最快的检测和定量方法；灵敏度可达到1ng/ml的水平，可以与目前最灵敏的化学发光法媲美；特异性高，在研究阶段，筛选出的四种抗原各自的第一抗体和第二抗体，均互不干扰，也不与血液中的其它成份如类风湿因子、胆红素、CRP、抗凝剂反应；肝纤检测的四个项目可以组合在1—4根试纸条上，方便临床对某些项目的跟踪和连续检测；于4—30℃条件下可保存一年，干燥后的抗体稳定性、保质期均明显高于化学发光和酶联免疫法中的液体试剂；生产成本很低，极大的降低临床检验成本，具有广阔的临床应用前景。
附图说明
图1为本发明的结构示意图。
其中，1-吸水纸；2-NC膜；3-底板；4-金标垫；5-滤血膜；6-样品垫。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
请参阅图1，一种用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条，包括吸水纸1、NC膜2、底板3、金标垫4、滤血膜5和样品垫6；所述底板3上沿层析方向依次设置有样品垫6、滤血膜5、金标垫4、NC膜2和用于吸收检测样品中多余液体的吸水纸1，所述样品垫6上粘附标有指示线的胶带，样品垫6上还设置有加样孔；所述金标垫4上喷涂有采用胶体金或者荧光微球对PCⅢ、IV-C、LN、HA第一抗体进行标记的标记物涂层，标记物涂层在金标垫4上通过烘干固定；所述NC膜2上包被固定有PCⅢ、IV-C、LN、HA第二抗体，PCⅢ、IV-C、LN、HA第二抗体包被在NC膜2上烘干固定作为检测线T；所述NC膜2上设置有质控线C，质控线C上固化包被有二抗抗体。
所述用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条的使用方法，包括以下步骤：
1)采集样本，样本为全血、血清或血浆，稀释样本，并取60-80μl稀释后的样本加样到样品垫6的加样孔内，放入仪器检测区内，样本多元化，扩大了临床使用科室的便利，操作便捷，操作人员不需要特别培训；
2)稀释的样本经过滤血膜5过滤后流至金标垫4，干燥的标记物被溶解，样本中的抗原与第一抗体反应，形成“胶体金或荧光微球-第一抗体-抗原”复合物；
3)复合物层析到NC膜2上，与NC膜2上包被的第二抗体反应，形成“胶体金或荧光微球-第一抗体-抗原-第二抗体”复合物，过量的未反应标记物层析到用二抗抗体包被的质控线而被捕捉，从而，在NC膜上，形成被特异性捕捉的检测线T和被二抗捕捉形成的质控线C；
4)仪器对检测线T、质控线C的光反射进行测试，其比值与样本中的抗原浓度成正相关，按照样本浓度与T/C比值建立的函数关系，形成条形码；
5)仪器根据检测到的T/C比值以及条形码中的函数换算关系，计算出样本中抗原的浓度。
在临床检测中，采用本发明的免疫试纸条，从样本滴加到样品垫的加样孔内进行层析，到仪器根据检测到的T/C比值以及条码中的函数换算关系，计算出样本中抗原的浓度，仅需要15min，检测和定量快速准确，灵敏度可达到1ng/ml，筛选出的四种抗原的各自的第一和第二抗体，均互不干扰，也不与血液中的其它成份如类风湿因子、胆红素、CRP、抗凝剂反应，特异性高，四个肝纤项目可以组合在1—4根试纸条上，方便临床对某些项目的跟踪和连续检测；本发明的免疫试纸条在4—30℃温度条件下保存时间可达一年，干燥后的抗体稳定性、保质期均明显高于化学发光和酶联免疫法中的液体试剂。
上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下做出各种变化。

Claims (7)

1.一种用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条，包括吸水纸(1)、NC膜(2)、底板(3)、金标垫(4)、滤血膜(5)和样品垫(6)；其特征在于，所述底板(3)上沿层析方向依次设置有样品垫(6)、滤血膜(5)、金标垫(4)、NC膜(2)和用于吸收检测样品中多余液体的吸水纸(1)，所述金标垫(4)上喷涂有采用胶体金或者荧光微球对PCⅢ、IV-C、LN、HA第一抗体进行标记的标记物涂层；所述NC膜(2)上包被固定有PCⅢ、IV-C、LN、HA第二抗体。
2.根据权利要求1所述的用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条，其特征在于：所述样品垫(6)上粘附标有指示线的胶带。
3.根据权利要求1所述的用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条，其特征在于：所述标记物涂层在金标垫(4)上通过烘干固定。
4.根据权利要求1所述的用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条，其特征在于：所述PCⅢ、IV-C、LN、HA第二抗体包被在NC膜(2)上烘干固定。
5.根据权利要求1所述的用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条，其特征在于：所述样品垫(6)上设置有加样孔。
6.根据权利要求1所述的用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条，其特征在于：所述NC膜(2)上设置有质控线C，质控线C上固化包被有二抗抗体；所述第二抗体作为检测线T。
7.根据权利要求1-7任一所述的用于检测肝纤四项的快速定量免疫试纸条的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)采集样本，样本为全血、血清或血浆，稀释样本，并取60-80μl稀释后的样本加样到样品垫(6)的加样孔内，放入仪器检测区内；
2)稀释的样本经过滤血膜(5)过滤后流至金标垫(4)，干燥的标记物被溶解，样本中的抗原与第一抗体反应，形成“胶体金或荧光微球-第一抗体-抗原”复合物；
3)复合物层析到NC膜(2)上，与NC膜(2)上包被的第二抗体反应，形成“胶体金或荧光微球-第一抗体-抗原-第二抗体”复合物，过量的未反应标记物层析到用二抗抗体包被的质控线而被捕捉，从而，在NC膜上，形成被特异性捕捉的检测线T和被二抗捕捉形成的质控线C；
4)仪器对检测线T、质控线C的光反射进行测试，其比值与样本中的抗原浓度成正相关，按照样本浓度与T/C比值建立的函数关系，形成条形码；
5)仪器根据检测到的T/C比值以及条形码中的函数换算关系，计算出样本中抗原的浓度。
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