DK152649B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af en 4-oen-(3',4'-dihydroxybenzyliden)-aminomethylaacyklohexan-1-carboxylsyre og derivater deraf - Google Patents

Description

DK 152649B

i

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af en hidtil ukendt 4-[N-(3',4'-dihydroxybenzyliden)aminomethyl]-cyklohexan-l-carboxylsyre med formlen (I) 5 HO—CH = N " CH2^ ^—COH (I) HC> hvori cyklohexanringen omfatter trans- og cis-formen eller 10 et alkalimetal-/ jordalkalimetal- eller ammoniumsalt eller en C^-Cg-alkylester deraf.

Nævnte salte kan således være et alk-ali- eller jord-alkalimetalsalt, såsom natriumsalt, kaliumsalt, calciumsalt, 15 magnesiumsalt, ' ellersubstitueret eller usubstitueret ammoniumsalt. Nævnte estere kan i være en methyl-, ethyl-, eller n- eller isopropylester.

De hidtil ukendte forbindelser fremstilles ifølge opfindelsen 20 ved at omsætter 3,4-dihydroxybenzaldehyd med 4-aminomethylcyklo hexan-l-carboxylsyre eller en C^-C3-alkylester deraf og om nødvendigt omdanner en derved opnået fri syre til. et alkalimetal-, jordalkalimetal- eller ammoniumsalt deraf ved reaktion med en base.

25

Reaktionen mellem 3,4-dihydroxybenzaldehyd med 4-aminomethylcy-.klohexan-carboxylsyren eller en ester deraf gennemføres i et organisk opløsningsmiddel ved en temperatur under 150°C, fortrinsvis 0-120°C, under en atmosfære af inaktiv gas. Ved en højere 3° temperatur end 150°C reduceres udbyttet af det ønskede produkt på grund af forskellige sidereaktioner. Ethvert organisk opløsningsmiddel kan anvendes til reaktionen, hvis blot det ikke deltager i reaktionen. En lavere alkohol, såsom methanol eller ethanol, benzen, toluen, dimethylformamid/ azonitril eller 35 lignende anvendes sædvanligvis som opløsningsmiddel.

2

DK 152649B

Da der under reaktionen foregår en dehydratisering, gennemføres reaktionen i nærværelse af et dehydratiseringsmiddel .eller under fjernelse af det under reaktionen dannede vand ved tilbagesvaling af opløsningsmidlet. Et anhydrid af en S lavere alkohol, såsom en vandfri methanol eller ethanol, kan anvendes som opløsningsmidlet og samtidigt som det dehydra-tiserende middel.

De ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser isoleres ved 10 at reaktionsblandingen efter reaktionen behandles efter en kendt metode..

Forbindelserne af saltform fremstilles ved den sædvanlige fremgangsmåde til neutralisation ved anvendelse af en base, 15 såsom et hydroxid, carbonat eller bicarbonat af et alkalimetal eller jordalkalimetal, f.eks. natrium, kalium, calcium eller magnesium, ammoniak eller primær, sekundær eller tertiær amin. Der opnås f.eks. et natriumsalt ved at neutralisere den fremstillede forbindelse (i syreform) opnået ved den ovennævnte 20 reaktion med en alkoholisk eller vandig opløsning af natrium hydroxid under en atmosfære af inaktiv gas ved en temperatur under 100°C, sædvanligvis ved 0-50°C.

De ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser udviser en 25 hæmmende virkning på blodpladeaggregation, polynuclear leukocyt- migration, udsondring af polynucleare leukocytter ind i betændelsesstedet og proliferation af inflammatorisk granuloma, en profylaktisk virkning på adjuvans arthritis, en antineo-plastisk virkning, en lav akut toksisitet, ingen læsion på 30 gastrisk mucosa og ingen mutagenicitet, således som det vil blive vist i eksemplerne. Forbindelserne er følgelig nyttig som lægemiddel mod forskellige sygdomme, såsom inflammation, thrombose, encepthalorrhagia, hypertension, astma eller cancer, etc., specielt mod kroniske sygdomme, såsom rheumatisk eller 3® systemisk lupus erythematosus (SLE), etc.

DK 152649 B

3

De ifølge opfindelsen, fremstillede forbindelser kan administreres peroralt, rektalt eller ved injektion i de forskellige doseringsfor-5 mer som et produkt sammen med en farmeceutisk acceptabel bærer og/eller et hjælpestof. I disse tilfælde kan der anvendes en blanding af to eller flere af de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser eller en branding-af en eller flere :sådanne forbindelser med· andre farmaceutiske aktive stoffer 10 som aktiv bestanddel af et farmaceutisk produkt.

Produktets doseringsform kan være tablet, sublingual tablet, pulver, kapsel, sugetablet, vandig eller olieagtig opløsnings, suspension, emulsion, sirup, vandig eller olieagtigt injek-15 tionspræparat. Et eksempel på den ovennævnte bærer er vand, gelatine, lactose, stivelse, pektin, magnesiumstearat, stearinsyre, talkum, vegetabilsk olie, gummi arabicum, poly= alkylglycol, vaseline, sorbitantrioleat, polyoxyethylen= sorbinmonooleat, alkylphenol, alifatisk alkohol, polyvinyl= 20 pyrrolidon eller lignende. I produktet kan der om nødvendigt også indgår blødgøringsmiddel, aromastof, farvende middel, konserveringsmiddel, salt til osmoseregulering eller puffer, dvs. de sædvanlige farmaceutiske hjælpestoffer.

25 Indholdet af de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser i det farmaceutiske produkt kan varieres efter ønske, men det er 0,01-100 vægt%,fortrinvis 0,05-80 vægt% af produktet.

Det farmaceutiske produkt administreres parenteralt, 30 til et menneske, eller et dyr, f.eks. rektalt ved injektion (hypodermisk, intramuskulært eller intravenøst eller ved infusion), f. eks. peroralt (f.eks. sublingualt, etc).

35 4

DK 152649B

En dosis er det farmaceutiske produkt er 0,1-500 mg, fortrinsvis 0,5-200 mg/dag pr. 1 kg legemsvægt i tilfældet med peroral administration til et menneske og 0,01-200 mg, fortrinsvis 0,1-100 mg i tilfældet af parente-5 ral administration, og de farmaceutiske produkter administreres en eller fire gange dagligt. Den anvendte dosis af det farmaceutiske produkt afhænger imidlertid af alder, indLvidi-elle forhold, sygdomstilstanden, etc. for et menneske eller dyr, og der kan anvendes en dosis inden for det ovennævnte 10 område.

Eksempel· 1 15 Fremstilling af trans-4-[N-(3 f-41-dihydroxybenzyliden) ami norne thy1]cyk1ohex an-l'-c arboxy1syre 1,753 g (12,7 mmol) 3,4-dihydroxybenzaldehyd blev opløst i 30 ml dehydratiseret og renset methanol. Den resulterende opløsning blev hældt i 1,994 g (12,7 mmol) trans-4-amino= 20 methylcyklohexan-l-carboxylsyre under en nitrogenatmosfære, og den blandede opløsning blev tilbagesvalet i 3 timer under omrøring. Efter afkøling af reaktionsblandingen til stuetemperatur blev de udfældede orangegule krystaller filtreret fra, vasket med methanol og vakuumtørret. Der 25 blev opnået 2,9 g trans-4-[N-(3',41-dihydroxybenzyliden)- aminomethyl]cyklohexan-l-carboxylsyre i et udbytte på 82,7%.

De karakteristiske data for den således ifølge:opfindelsen opnåede forbindelse (syreform) var som følger: 30 (1) smp.: 222°Cunder dekcmponering (målt ved hjælp af kapillarmetoden) (2) elementaranalyse 5

DK 152649B

C(%) H (%) N (%) teoretisk: 64,97 6,91 5,05 eksperimentelt: 64,6 7,1 5,0 (3) kernemagnetisk resonans (NMR). spektrum i dimethylsulfoxid; 5 6 = 0,9-2,0 (9H, m) 2,1-2,2 (IH), 3,33 (2H, d), 6,73 (IH, d), 6,97 (IH, d)., 7,19 (IH, s), 8,03 (IH, s), (4) infrarødt absorptions (IR) spektrum ved KBr-tabletmetoden; 10 vist i fig. 1.

Eksempel 2

Fremstilling af natrium-trans-4-[N-(3*,41-dlhydroxybenzyliden)-aminomethyl]c yklohexan-1-carboxylat 1,00 g (3,61 mmol) af den i eksempel 1 opnåede trans-4-[N-(3', 15 41-dlhydroxybenzyliden)aminomethyl]cyklohexan-l-carboxylsyre blev sat til 3,6 ml IN methanolisk opløsning af natriumhydroxid og opløst under omrøring i 20-30 min. ved stuetemperatur under nitrogenatmosfære. Efter filtrering blev methanol afdampet, og det blev opnået 1,121 g natrium-trans-4-[N-(31,4*-20 dlhydroxybenzyliden)aminomethyl]cyklohexan-l-carboxylat.

IR-spektret (KBr-tabletmetode) af den således opnåede forbindelse ifølge opfindelsen (natriumsalt) er vist i fig. 2. I ultraviolet (UV) absorptionsspektrum i methanol blev der observeret følgende to maksima; 25 Amax: 271,5 my og 309 my.

Eksempel 3

DK 152649B

e

Fremstilling af ethy1-trarts-4-[N-(3*,41-dlhydroxybenzyliden)-ami nomethyl ] cyk l o hexan—1-c'a'rb oxylat 0,835 g 3,4-dihydroxybenzaldehyd og 1,2 g ethyl-trans-4-5 aminomethylcyklohexan-l-carboxylat blev opløst i 20 ml methanol. Den resulterende opløsning blev tilbagesvalet til omsætning i 1 time under en nitrogenatmosfære. Efter reaktionsblandingens henstand natten over ved 0°C blev de aflejrede purpurfarvede pladekrystaller filtreret fra 10 og tørret til opnåelse af 1,525 g af den ifølge opfindelsen fremstillede .forbindelse (ethylester).

De karakteristiske data for den således opnåede ethylester var som følger: (1) smp.: 50-62°C, (målt ved hjælp af kapillarmefcoden) 15 (2) elementaranalyse, C(%) H(%) N{%) teoretisk: 66,86 7,59 4,59 eksperimentelt: 66,2 7,7 4,3 (3) IR-spektrum; vist i fig. 3.

20 Eksempel 4

Fremstilling af cis-4- [N- (3'r, 4 ?-dihydroxybenzyliden) -aminomethylj cyklohexan-l-carboxylsyre 0,395 g (2,86 mmol) 3,4-dihydroxybenzaldehyd blev tilbagesvalet i dehydratiseret og renset methanol til omsætning 25 med 0,450 g (2,86 mmol). cis^4-aminomethylcyklohexan-l- carboxylsyre i 1 time. Efter afdampning af methanol under reduceret tryk fra den jævnt orangefarvede reaktionsblanding blev der opnået 0,7910 g gult pulver af cis-4-[N-(3’, 41-dihydroxybenzyliden)aminomethylj cyklohexan-l-carboxyl= 7

DK 152649B

De karakteristiske data for den således ifølge opfindelsen opnåede forbindelse (cisrform) var. som følger: (1) smp.: 121-129°C, {nålt ved hjælp af varm plade metoden) (2) NMR i dimethylsulfoxid, 5 6 = 1,02-1,84 (9H, m), 2,0-2,1 (IH), 3,35 (2H, d)., 6,82 (ΊΗ, d) , 6,97 (IH, d) ,· 7,20 (IH, s)., 8,04 (IH, s) .·-

Eksempel 5 10 Inhiberende virkning på blodpladeaggregation og polynuclear leukocytmigratibn og akut toksicitet

Farmakologiske virkninger og akut toksicitet af .den ifølge: opfindelsén fremstillede forbindelse blev undersøgt. Der blev undersøgt følgende prøver: 15 Prøve I: Natrium-trans-4-[N-[3f ,-4 '-dihydroxybenzyliden) aminomethyl] cyklohexan-l'-carboxylat, der blev opnået i eksempel 2, II: Natriumsalt af cis-4-[N-(3*,4?-dihydroxybenzyliden) aminomethyljcyklohexan—1-carboxylsyre, der blev op-20 nået i eksempel 4.

Sammenligningsprøve III; Indomethacis, IV: Homochlorcyklizin.

Eammenligningsprøverne III og IV, der har lignende farmakologiske virkninger som den ifølge opfindelsen fremstillede 25 forbindelse, er i handelen i Japan.

Undersøgelsen blev gennemført i overensstemmelse med de i det følgende beskrevne metoder.

8

DK 152649B

(1) Metode til undersøgelse af hæmmende virkning på blod-pladeaggregation

Kanin-blopladerig plasma (PRP) blev anvendt til aggregationsundersøgelser. PRP blev fremstillet ved at centrifugere blod 5 opsamlet fra kaninørevene og fortyndet til talkoncentration 300.000/μ1 med blopladefattig plasma. Blodpladeaggregation blev fremkaldt ved hjælp af natriumarachidonat og overvåget (målt) med en firekanals-blodpladeaggregations-tracer PAT-4A (Niko Bioscience Co., Japan). Aggregations-tracer-rør inde-10 holdende 230 μΐ PRP blev forinkuberet ved 37°C i 5 min. ved hver prøve.

(2) Metode til undersøgelse af inhiberende virkning på polynuclear leukocyt-bevægelse

Polynuclear leukocyt-bevægelse hos rotte blev undersøgt ved 15 hjælp af Boyden-metoden (jvf. Japanese J. Clin. Med., 27(9), 172 (1969)) som følger; en blanding af 10 volumendele kultur-filtrat af E. coli og 1 volumendel serum blev inkuberet ved 37°C i 1 time og fortyndet til et volumen på 5 gange ved hjælp af fysiologisk saltopløsning og den resulterende blan-2Q ding blev anvendt som tiltrækningsmiddel. Efter forinkube-ring af polynuclear-leukocyt-suspensionen med hver prøve i 10 min. blev polynuclear-leukocytternes bevægelse undersøgt.

(3) Metode til undersøgelse for akut toksicitet 25 Akut toksicitet blev undersøgt ved peroralt at administrere en vandig opløsning af hver prøve til hun JCL-ICR mus 5-6 uger efter fødselen.

Resultaterne er angivet i tabel I

·; - DK 152649 B

9 jS·"-

• TABEl·’ I

Prøve Blodplade- Hæmnirigsrate for poly- Akut aggregation nuclear leukocyt-bevæ- toksicitet ,, ID100 (uM)1)· · gelse (%) 2>......;......., . LD50 (mg/mg) ; :--;-— . .1 .yM. .10 .yM. .100 yM. .1000 yM. . . - I 13-20 · 15 44 81 100 >3000 4i II .12.0 .... . . . ........4.5.,.9. . . . . ..... . >3000 III 0,5-1 0 0 25 79 30 IV *1000 15 48 80 100 350

Fodnoter: 1) Den mindste koncentration (yM) af hver prøve til fuldstændig hæmning (100%) af natriumarachidonats-blodpladeaggregerende virkning (undersøgt ved 5 400 yM)..

2) Gennemsnitsværdien for hæmningsarate (%) af poly= nuclear leukocyt-bevægelse ved hver koncentration (yM) af hver prøve.

3) Middel dødelig dosis (LD5q), dys. den dosis, som 10 får 50% af musene til at dø, i enheden mg pr, 1 kg legemsvægt af mus.

Som vist i tabel I har forbindelsen den ifølge opfindelsen, fremstillede forbindelse hæmmende virkninger på blodpladeag-gregation og polynuclear leukocyt-bevægelse og en lav akut 15 toksicitet. Forbindelsen kan følgelig anvendes som et antiin-flammatorisk middel og et middel imod forskellige andre sygdomme.

10

DK 152649B

Eksempel 6 Hæmmende virkning på polynuclear ieukocytéksudat

Natrium-ttans-4-[N- (3',4’-dihydroxybenzyliden)aminomethyl]-cyklohexan—l—carboxylathæinmende virkning på udsondring af 5 polynuclear 1-eukocytter i betændelsesområder blev undersøgt ved anvendelse af hanrotter (Donryu) med en legemsvægt på ca. 150 g og Granuloma CMC lommemetode (jvf, Yakugaku Zasshi, 88, 1472, (1968)).

Efter klipning af et område med en diameter på ca. 5 cm på 10 ryggen af rotten blev der hypodermisk injiceret 5 ml luft på dette sted til dannelse af en lomme. Efter 24 timers forløb blev der injiceret 5 ml vandig 2% (vægt/volumen) opløsning af CMC natriumsalt ved 37°C i lommen, og sam-tidigt blev en vandig opløsning af den ifølge opfindelsen 15 fremstillede forbindelse administreret peroralt til rotten i en dosis på 50, 100 og 200 mg/kg. Til sammenligning blev der peroralt til rotten administreret indomethacin i en dosis 10 mg/kg i form af en vandig suspension.

Efter injektionen af CMC blev væsken i lommen opsamlet efter-20 ‘ hånden i en mængde på 0,5 ml og farvet. Derpå optaltes antallet af de i lommen udsondrede polynuclear-leukocytter. Resultaterne er vist i fig. 4. Som vist i fig. 4 kan den ifølge opfindelsen fremstillede forbindelse justere udsondringen af polynuclear-leukocytter. i afhængighed af dosen.

25 Ethyl-trans-4-[N-(3 f,41-dihydroxybenzyliden)aminomethyl]-cyklohexan-l-carboxylat blev desuden undersøgt på samme måde og også esteren inhiberede udsondringen af polynuclear^ leukocytter. .

11

DK 152649B

Eksempel 7 Hæmmende virkning på proliferation af inflammatorisk granuloma Hæmmende virkning af natrium-trans-4-[N-(3? ,4f-dihydroxy= 5 benzyliden)aminomethyl]cyklohexan-l-carboxylat på prolife-ration af inflammatorisk granuloma blev undersøgt ved anvendelse af 5 uger gamle hanrotter (Duriryu) og fremgangs-måden ifølge Fujimura et al. (jvf. Pharmacometrics, 19 (3), 329 (1980)).

10 Et stykke filterpapir med en diameter på 13 mm og en tykkelse på 0,26 mm blev neddyppet i en vandig 2% opløsning af CMC indeholdende 0,1 mg/ml dihydroxystreptomycin og penir cillin (million enheder).. Det behandlede ark blev således indsat hypodermisk i den bedøvede rottes ryg. Efter at de 15 er kommet sig af bedøvelsen, blev den ifølge opfindelsen fremstillede forbindelse administreret peroralt én gang om dagen i. otte dage i én dosis på 25, 50 og 100 mg/kg/dag, og til sammenligning blev indomethacin administreret på samme måde i en dosis på 3 mg/kg/dag. Legemsvægtøgelsen, vægten af 20 granuloma og læsionen på maveslimhinden blev undersøgt den niende dag.

Resultaterne er vist i tabel II

12

TABEL II

DK 152649B

Læge- Dosis Antal . Granulana..... Legens- Læsion middel mg/kg anvendte --- vægt- på mave- rotter Tør vægt Hastnings- øgelse slimr- (mg) rate (%) (%) hinde- . membranen

Kontrol^ 0 4 330,2Ϊ73,9 - 29 Ingen

Forbin- 25 4 155,6±13,8 52,92) 28 Ingen 50 4 118,8ί46,0 64,O21 32 Ingen • lÆÆ-9e ' o) opfin- 100 5 73,6-31,3 77 trl 37 Ingen delsen .........

Indo- 3 5 160,5±73,1 51,431 23 Brand-4) metha- feber cin ............

---- > - *_* * 1

Fodnoter: 1) Æn i-fwiy (-pFirdpIflm forestillede forbindelse admnistreres ilds, 2) P< 0,01, P betegner statistisk konfidens, 3) P< 0,05, 5 4) Brandfeber blev observeret i to rotter.

Som vist i tabel II hæmmer forbindelsen ifølge opfindelsen effektivt proliferationen af inflammatorisk granuloma afhængigt af den administrerede dosis og den hæmmer ikke vægt-øgelsen ved administration. Der observeres desuden ingen 10 bivirkninger, såsom læsionen af maveslimhindemembranen, som ses ved anvendelse af de konventionelle, ikke-steroide antiinflammatoriske middel.

Eksempel 8 Læsion på maveslimhinde 15 De sædvanlige antiinflammatoriske midler kan ofte give læ sion af maveslimhinden som en bivirkning. Muligheden for at .den ifølgé opfindelsen fremstillede forbindelse forårsager en sådan læ-

DK 152649B

13 sion blev undersøgt ved anvendelse af metoden ifølge Fujimura et al. som i eksempel 7.

Efter faste af hun JCL-SD rotte i 24 timer blev der til rotten peroralt administreret natrium-trans^-fN-H1,4f-5 dihydroxybenzyliden). aminomethyl] cyklohexan-l-carboxylat,

Efter 3 timers forløb blev rotten aflivet. Derpå blev mayen udtaget,og længden (mml af læsionen på maveslimhinden blev målt ved hjælp af metoden ifølge Okabe et al. (jvf. Phar-macometrics, 18 (1), 1 (1979Π. Den samlede sum af længden 10 blev anvendt som ulcus-indekset. Til sammenligning blev indo-methacin administreret peroralt i en dosis på 30 mg/kg. Resultaterne er vist i tabel III.

TABEL- III

I 1 r" ' ~ ] ' 1 -I

Lægemidler Dosis (mg/kgl Antal rotter Ulcus- 15 ............ ................ . . indeks.

Kontrol . .........0. ............. .2 . . 0

Forbindelse fremstil- 200 2 <5 let ifølge opfindelsen .2.)......5.0.0...............3. ... 0

Indomethacin ^ .30..... .3 ....... . 30,5 1 2 3 4 5 6

Som vist i tabel III forårsagede den ifølge opfindelsen frem stillede forbindelse selv i en så høj dosis som 500 mg/kg,· ikke læsion af maveslimhindemembranen.

Fodnoter; 2 1) Den ifølge qpfmMsai fremstillede fa±dnMæ admmstreces ilte, 3 2) administreret peroralt i form af en vandig opløs 4 ning , 5 3) administreret peroralt i form af en vandig sus- 6 pension, 14

DK 152649B

Eksempel 9

Profylaktisk virkning på ad'jWant-arthritis

Profylaktisk virkning af den ifølge opfindelsen fremstillede forbindelse på adjuvant-arthritisk blev undersøgt ved anvendelse af 5 6-7 uger gamle hun JCL-SD rotter som én gruppe og den sædvanlige metode (jvf. Fujihira et al./ Pharraacometrics, 5 (2)/169-183 (1971).

Freund's komplette adjuvans (0,6 mg/0,1 ml), blev indpodet i den bedøvede rottes højre bagpote. Efter at den er kommet 10 sig efter bedøvelsen igen, blev natrium-trans-4-[N- (3 ', 4 ' -dihydroxybenzyliden)aminomethyl]cyklohexan-l-carboxylatet administreret peroralt én gang dagligt i 24 på hinanden følgende dage. Ændringen af bagpotevolumen og legemsvægt på grund af adjuyans-arthritisk blev undersøgt som tiden gik.

15 - Til sammenligning blev et steroid (prednisolon) administreret peroralt på samme måde.

Resultaterne er vist i figurerne 5 og. 6. I fig. 5 betegner "blind", at der ikke er sket indpodning af adjuvans. Som vist i figurerne 5 og 6 hindrede den ifølge opfindelsen frem-20 stillede forbindelse effektivt adjuvans-arthritisk uden nogen legems-vægtsreduktion hos rotten, hvilket ofte ses hos rotter, der får tilført et steroid.

Rotten blev desuden aflivet 25 dage efter indpodningen af adjuvanset, og vægten af hvert af rottens organer blev be-25 stemt. Der blev ikke observeret nogen thymusinvolution i rotterne, der fik den ifølge opfindelsen fremstillede forbindelse, medens der bley konstateret signifikant thymusinvolution i rotter, som fik steroidet (prednisolonl. Den ifølge, opfindelsen fremstillede forbindelse;kan således anvendes som et middel mod 30 kroniske sygdomme, såsom rheumatisme.

Eksempel 10 15

DK 152649B

Antirieoplastisk virkning

Deri.antineoplastiske virkning af en ifølge opfindelsen fremstillet forbindelse blev undersøgt.

£ 5 1 x 10 celler af Sarcoma-180 blev implanteret i ICR*rJCL- mus infraaxillære sted. Efter 24 timers implantation blev opløsningen af natrium-trans-4-[N-(3r,4l-dihydroxybenzyliden)-aminomethylj cyklohexan-l-carboxylat opløst i det sterillise-rede og rensede vand til injektion, administreret peroralt 10 én gang daglig i 21 på hinanden følgende dage i en dosis på 100 og 500 mg/kg. Den 22. dag efter implantationen blev neoplastisk tuberculum udskrallet, og hæmningsraten (I.R: i %\ blev regnet ifølge den efterfølgende formel; (1 - T/e) x 100 = I.R. (%)., 15 hvori T og e betegner henholdsvis middelvægten af neoplasma fra administrerede og ^kontrolgrupper.

I.R.-værdier var 55,8 og 45,3% ved en dosis på henholdsvis 100 og 500 mg af den ifølge opfindelsen fremstillede forbindelse.

E k s empe l' '11 20 Mu t ageriici t e t

Mutageniciteten af en ifølge opfindelsen fremstillet; forbindelse blev bestemt ved hjælp af Rec-prøven.

Bacillus subtilis M 45 (en stammer, der mangler evnen til rekombinatiønshelingl og B. subtilis H 17 (en stamme, der 25 bevarer rekombinatiorisheling) blev streget på B~II agar-kultur, således at startpunkterne for de to streger ikke overlappede. B-II agarkulturen blev fremstillet ved at 16

DK 152649B

opløse 10 g kødekstrakt, 10 g polypepton, 5 g natriumchlorid og 15 g agar i 1000 ml destilleret vand og indstille pH-værdien på 7,0.

Så snart en opløsning af natriura-trans-4-[N-(31,4 *-dihydroxy= 5 benzyliden) aminomethyl]cyklohexan-l-carboxylat blev absorberet i et cirkulært filtrerpapir (skive) med en diameter på 8 mm, blev startpunkterne for de to streger dækket med .filtrerpapiret. Efter inkubering af stammerne ved 37°C natten over blev længden af vokset hæmningszone målt. Kanamycin 10.· blev anvendt som negativ kontrol og mitomycin som positiv kontrol. Resultaterne er vist i tabel IV.

' TABEL IV

Lægemidler Koncentration . . Væksthæroningszone (ram) (yg/ski ve) --- 15 . M4.5 . H17 For skel

Forbindelse frem- · 100 0 0 0 stillet ifølge 500 0 0 0 opfindelsen 1000 0 00 ........5.0.0 0...... 3..... 3 ... 0 20 Kanamycin 10 651 .........10.0........10......10........0

Mitomycin 0,05 4 0 4 ...... ........0,50......1.5......9......6.....

Som vist i tabel IV udviste forbindelsen fremstillet ifølge 25 opfindelsen ingen mutagenicitet, og det har vist sig, at den har stor sikkerhed.

Resultaterne fra eksemplerne 5-11 viser, at forbindelsen ifølge opfindelsen har meget specifikke farmakologiske virkninger, er ugiftig og ikke har bivirkninger. Forbindelsen fremstillet 30 ifølge opfindelsen Jean følgelig anvendes til et farmaceutisk produkt, som er meget sikkert og er et middel til behandling af eller

Claims (1)

10 HO * hvori cyklohexanringen omfatter trans- og cis-formen eller et alkalimetal-, jordalkalimetal- eller ammoniumsalt eller en C^-C^-alkylester deraf, kendetegnet ved, at 15 man omsætter 3,4-dihydroxybenzaldehyd med 4-aminomethylcyklo-hexan-l-carboxylsyre eller en C-alkylester deraf og om nødvendigt omdanner en derved opnået fri syre til et alkali- ΰ metal-, jordalkalimetal- eller ammoniumsalt deraf ved reaktion med en base. 20 25 1 35