DK151898B - Fremgangsmaade til hurtig paavisning af tilstedevaerelsen eller fravaerelsen af rester af antibiotikum og proevebeholder og saet til anvendelse ved fremgangsmaaden - Google Patents
Fremgangsmaade til hurtig paavisning af tilstedevaerelsen eller fravaerelsen af rester af antibiotikum og proevebeholder og saet til anvendelse ved fremgangsmaaden Download PDFInfo
- Publication number
- DK151898B DK151898B DK292674AA DK292674A DK151898B DK 151898 B DK151898 B DK 151898B DK 292674A A DK292674A A DK 292674AA DK 292674 A DK292674 A DK 292674A DK 151898 B DK151898 B DK 151898B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- sample
- indicator
- spores
- nutrients
- sample container
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 57
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 title claims description 31
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 60
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 60
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 40
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 39
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 32
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 32
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 32
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 27
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 23
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 22
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 22
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 20
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 19
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 claims description 14
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims description 12
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 9
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 7
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 claims description 7
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 7
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 claims description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 3
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002696 acid base indicator Substances 0.000 claims description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 3
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 claims description 3
- 239000002824 redox indicator Substances 0.000 claims description 3
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011247 coating layer Substances 0.000 claims 2
- XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-amino-4-(trifluoromethyl)-1,3-thiazole-5-carboxylate Chemical group CCOC(=O)C=1SC(N)=NC=1C(F)(F)F XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 claims 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 81
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 32
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 7
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 5
- 108010087702 Penicillinase Proteins 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 4
- 229950009506 penicillinase Drugs 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 4
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 3
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical class [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000003570 air Substances 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 3
- PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASXBYYWOLISCLQ-UHFFFAOYSA-N Dihydrostreptomycin Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(NC)C1OC1C(CO)(O)C(C)OC1OC1C(N=C(N)N)C(O)C(N=C(N)N)C(O)C1O ASXBYYWOLISCLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 2
- 229930195708 Penicillin V Natural products 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 241001281435 Viola guadalupensis Species 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 229960002222 dihydrostreptomycin Drugs 0.000 description 2
- ASXBYYWOLISCLQ-HZYVHMACSA-N dihydrostreptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](CO)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O ASXBYYWOLISCLQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 2
- 229940056367 penicillin v Drugs 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N phenoxymethylpenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)COC1=CC=CC=C1 BPLBGHOLXOTWMN-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical class OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 241000451942 Abutilon sonneratianum Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 1
- 239000004099 Chlortetracycline Substances 0.000 description 1
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 1
- 239000004104 Oleandomycin Substances 0.000 description 1
- RZPAKFUAFGMUPI-UHFFFAOYSA-N Oleandomycin Natural products O1C(C)C(O)C(OC)CC1OC1C(C)C(=O)OC(C)C(C)C(O)C(C)C(=O)C2(OC2)CC(C)C(OC2C(C(CC(C)O2)N(C)C)O)C1C RZPAKFUAFGMUPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006328 Styrofoam Polymers 0.000 description 1
- PJSFRIWCGOHTNF-UHFFFAOYSA-N Sulphormetoxin Chemical compound COC1=NC=NC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1OC PJSFRIWCGOHTNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000012080 ambient air Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N chlorotetracycline Natural products C1=CC(Cl)=C2C(O)(C)C3CC4C(N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)C4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004475 chlortetracycline Drugs 0.000 description 1
- 235000019365 chlortetracycline Nutrition 0.000 description 1
- CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N chlortetracycline Chemical compound C1=CC(Cl)=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N 0.000 description 1
- 229960003326 cloxacillin Drugs 0.000 description 1
- LQOLIRLGBULYKD-JKIFEVAISA-N cloxacillin Chemical compound N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)C1=C(C)ON=C1C1=CC=CC=C1Cl LQOLIRLGBULYKD-JKIFEVAISA-N 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 229920006248 expandable polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 229960001625 furazolidone Drugs 0.000 description 1
- PLHJDBGFXBMTGZ-WEVVVXLNSA-N furazolidone Chemical compound O1C([N+](=O)[O-])=CC=C1\C=N\N1C(=O)OCC1 PLHJDBGFXBMTGZ-WEVVVXLNSA-N 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- RZPAKFUAFGMUPI-KGIGTXTPSA-N oleandomycin Chemical compound O1[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@H](C)[C@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@]2(OC2)C[C@H](C)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C RZPAKFUAFGMUPI-KGIGTXTPSA-N 0.000 description 1
- 229960002351 oleandomycin Drugs 0.000 description 1
- 235000019367 oleandomycin Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008261 styrofoam Substances 0.000 description 1
- 229960004673 sulfadoxine Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/02—Food
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/02—Food
- G01N33/04—Dairy products
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/02—Food
- G01N33/12—Meat; Fish
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
- Y10S435/839—Bacillus subtilis
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 151898 B
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til hurtig påvisning af tilstedeværelsen eller fraværelsen af rester af antibiotikum, f.eks. penicillin, i væsker, f.eks. mælk, og presset kød, ved hvilken man indfører sporer af en mikroorganisme, som har stor følsomhed over for det antibiotikum, der skal påvises, i et agarmedium på en sådan måde, at sporer forhindres i at starte med at spire i mangel af næringsstoffer, men forbliver i live, hvorhos der podes med et så stort antal sporer, at der efter tilsætning af næringsstoffer og inkubering ved eller nær ved optimal temperatur er sket en tilstrækkelig vækst til, at den er visuelt observerbar, inden for ca. 1,5 til 4 timer, fortrinsvis inden for 2 til 3 timer.
Fremgangsmåder til påvisning af antibiotikumrester, nærmere angivet penicillinrester, i mælk og lignende væsker, har været kendt i lang tid, og flere 2
DK 151898 B
standardmetoder er officielt anerkendt til formålet i nogle lande» Ekaemplo. v*; = på er den såkaldte TTC-metode (der indebærer anvendelse af 2,3,5-triphenyI-tetrazolium-chlorid), såsom den metode, der er angivet af Neal et al., J. Dairy Science 38 (1955), 629-633, og en metode, hvorved der anvendes Bacillus stearo-thermophilus eller B. calidolactis, og som er angivet af Galesloot et al., Neth. Milk & Dairy J. 16 (1962), 89-95, baseret på en metode, der er angivet af Vincent et al·., Proc.Soc.exp.Biol.Med. 162 (1944), 55, og den metode, der er angivet af Jacobs et al., Tijdschr. v. Diergeneesk. J9_ (1972):9, 548-550. Den metode, der er angivet af Galesloot et al., udføres ved at anbringe papirskiver, som er gennemvædet i den mælk, der skal afprøves, på agarkulturer af Bacillus stearother-mophilus eller B. calidolactis i petriskåle og 'inkubere dem ved 55°C i 2 1/2 time. Dannelse af hæmningszoner er et tegn på tilstedeværelsen af penicillin (eller andre stoffer, der hæmmer disse bacilli) i mælken.
Den af Galesloot et al. angivne metode har en følsomhed på ca. 0,0025 IE (Internationale Enheder) af penicillin pr. ml, men denne metode er ikke egnet til at udføres af ukyndige personer, da det er nødvendigt at anvende friske kulturer af de nævnte bacilli. Desuden er denne prøves pålidelighed forholdsvis ringe, når den udføres af mindre øvede personer.
For at forøge pålideligheden af Galesloot’s metode, anvender H. Mol, Neth. Milk & Dairy J. 23 (1969), 153-162, sporer af Bacillus sterothermophilus var. calidolactis præpareret i petriskåle. En næringsskive, der er opnået ved gennemrodning af et stykke filtrerpapir i en vandig opløsning af 20¾ pepton og 20¾ glukose og efterfølgende tørring, gennemvædes før anvendelse i mælkeprøven og anbringes på agaren . Petriskålen inkuberes i 6 timer ved 63°C og tilstedeværelsen af penicillin kan erkendes ved tilstedeværelsen af en haanningszone.
Selvom pålideligheden forøges med Mol's metode, har denne metode stadig flere ulemper. For det første er det vanskeligt at erkende hæmningszonen, navnlig for uøvede personer. Endvidere er prøverumfanget ikke i tilstrækkelig grad reproducerbart .
For at være en passende hurtig prøve må følgende fordringer være opfyldt; (i) den må være hurtig, (ii) den må vise stor følsomhed for et bredt område af i praksis anvendte antibiotika, (iii) beholderne, der indeholder prøvematerialet, må kunne oplagres i rimelig lang tid (flere måneder eller længere), (iv) prøven må være billig, (v) prøven må give pålidelige resultater, selv når den udføres af uøvede personer, og når prøven f.eks. tilpasses til at vise tilstedeværelsen af ar, forudbestemt koncentration af antibiotikum, må den give tilstrækkelige pålidelige positive eller negative resultater» 3
DK 151898 B
Selvom Mol1s metode opfylder fordringer (i) til (iv) til en vis grad, er fordring (v) ikke opfyldt, og det er nødvendigt med kvalificerede personer til udførelse af metoden til opnåelse af pålidelige resultater.
Under hensyntagen til de ovennævnte betragtninger er der nu blevet udviklet en fremgangsmåde til hurtig 'påvisning af antibiotikum i væsker, hvilken fremgangsmåde opfylder alle de ovennævnte 5 fordringer og således let kan udføres, selv af uøvede personer.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at man lader sporekulturen størkne i opretstående prøvebeholdere med et tværsnitsmål på 3-20 mm, fortrinsvis 6-14 mm, og en højde på 3-30 mm, fortrinsvis 5-10 mm, og i en mængde, der efterlader tilstrækkelig plads til indføring af et bestemt rumfang væske, som skal undersøges, samt at man anbringer væksten nødvendige næringsstoffer, inkorporeret i en skive eller tablet, på agaren, hvorefter man, om ønsket efter en forinkuberingsperiode, sætter det forudbestemte rumfang af prøvevæske til prøvebeholderen og inkuberer prøvebeholderens indhold under de ovenfor definerede betingelser og i et bestemt tidsrum, således at udstrækningen eller hæmningen af mikroorganismens vækst, observeret i lodret retning gennem farven af en indikator, som er inkorporeret i enten sporekulturen eller skiven eller tabletten med næringsstoffer, viser fraværelse eller tilstedeværelse af antibiotiket.
Fra US-patentskrift nr. 3.063.916 kendes en fremgangsmåde, der i det væsentlige er den samme som den ovennævnte Mol1s metode, men sidstnævnte er dog en "reverse phase" version af den førstnævnte. Om disse to fremgangsmåder kan der under et anføres følgende.
Ved disse fremgangsmåder anvendes der en agarplade, og resultaterne bestemmes ved iagttagelse af en hæmnings- eller vækstzone, afhængig af om der virkelig er et antibiotikum til stede i den prøve, der skal afprøves. Dette kræver faguddannet personale til udførelse af prøven.
Prøven sættes til prøvemediet ved hjælp af en papirskive eller absorberende pude, som bringes i kontakt med prøvevæsken, indtil den er våd, og derpå presses let mod agarpladen. Det er klart, at der herved indføres et usikkerhedsmoment med hens3m til den faktiske mængde af prøvevæske, som anvendes ved prøven, og at prøvemetodens reproducerbarhed følgelig vil være tvivlsom. Dette forudsætter igen nogen erfaring eller øvelse hos den person, der udfører prøven.
Ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse opnås resultaterne derimod ved iagttagelse af en farveændring hos mediet som følge af den under prøven tilstedeværende indikator. Dette kræver ikke særlig dygtighed eller erfaring hos den person, som udfører prøven, da der ikke er tale om en bedømmelse af farvenuancer, men iagttagelse af en fuldstændig farveændring i prøvemediet.
DK 151898B
4
Det er en typisk "ja*' eller "nej” prøvea
Endvidere er det fra beskrivelsen til dansk patentansøgning nr. 4S9/6t kendt at bestemme antibiotikum i næringsmidler, f.eks. mælk, ved hjælp af et prøveudstyr udformet som et legeme med fordybninger, i hvilke der er bakteriekultur og prøvevæske. Fordybningerne kan have varierende størrelse og form.
Af den nævnte ansøgnings beskrivelse fremgår det imidlertid, at formen og størrelsen af fordybningerne eller hullerne kan variere inden for vide grænser og faktisk ikke udgør en karakteriserende del af den beskrevne fremgangsmåde. Selv om størrelsen og formen af hullerne i en bestemt udførelsesform for den fra den nævnte ansøgning kendte fremgangsmåde (eksempel 4) kommer i nærheden af dimensionerne af de ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse anvendte prøvebeholdere, fremgår det klart af kravene i den nævnte ansøgning, at denne størrelse og form end ikke er en foretrukken udførelsesform, da hverken størrelse eller form er nævnt i nogen af kravene i nævnte ansøgning.
Det fremgår klart, at situationen er en helt anden ved den foreliggende opfindelse, hvor kernen i opfindelsen bl.a. ligger i højden af prøvemediet og prøvebeholderens dimensioner som angivet i krav 1. I det følgende skal det forklares, hvorfor den nævnte højde spiller så vigtig en rolle ved den foreliggende opfindelse. For nemheds skyld skal det beskrives, hvad der virkelig sker under prøven, når man f.eks. afprøver mælk for tilstedeværelse af antibiotiske stoffer.
Under selve prøven diffunderer bestanddele fra mælken sammen med næringsstoffer, og efter omstændighederne indikator, ind i agarmediet. Som følge af den forhøjede temperatur (f.eks. 64°C) og næringsstofferne begynder mikroorganismerne i mediet at udvikle sig, hvorved der dannes syre. Når der er dannet en tilstrækkelig mængde syre, vil indikatorens farve ændre sig fra f.eks. violet til gul. Dette er et negativt prøveresultat, som betyder, at der ikke er antibiotikum i påviselige mængder til stede i mælken. Når mælkeprøven derimod indeholder antibiotiske stoffer, f.eks. penicillin, vil mikroorganismens vækst blive begrænset eller endog fuldstændig forhindret. Der bliver ikke dannet syre eller en tilstrækkelig mængde syre, og mediet med indikator bevarer dets oprindelige farve (f.eks. violet).
Hvis højden af agarmediet er mere end et par centimeter, f.eks. 10 cm; er der, hvis der ikke er antibiotiske stoffer til stede i mælkeprøven, ingen forskel sammenlignet med det ovenstående eksempel: mikroorganismerne udvikler sig frit, og der dannes syre, som ændrer indikatorens farve fra f.eks. violet til gul, dvs. negativt prøveresultat. Hvis mælken imidlertid indeholder antibiotiske stoffer , f.eks. penicillin, vil processen i det øvre lag af agarmediet være den samme som beskrevet i det ovenstående eksempel, dvs. forhindring af vækst i dette øvre lag, f.eks. i de første par centimeter under overflader 5
DK 151898 B
af agarmediet, men penicillinet kan ikke nå den resterende del af agarmediet under prøveperioden på f.eks. 21/2 time, da det diffunderer temmelig langsomt i dette medium. Resultatet er, at mikroorganismerne kan vokse frit i den resterende del af agarmediet ved deres optimale temperatur, ernæret med nogle af næringsstofferne, som kan vandre tilstrækkelig hurtigt gennem agarmediet, og disse mikroorganismer vil danne syre, som diffunderer ind i den Øvre del af mediet, idet de små syremolekyler vandrer temmelig hurtigt gennem mediet, og bevirker, at indikatoren skifter farve fra violet til gul. Dette betyder, at prøven vil give et falsk resultat, thi selv om der er antibiotiske stoffer i mælkeprøven, skifter indikatoren alligevel farve.
Det fremgår heraf klart, at højden af agarmediet i prøvebeholderen er absolut væsentlig, når der er en indikator til stede under prøven. Denne højde skal ikke overskride den strækning, som de antibiotiske stoffer kan diffundere ind i mediet i løbet af prøvetidsrummet, hvilken strækning kun er et par centimeter.
Når fremgangsmåden ifølge opfindelsen standardiseres, kan prøven let udføres med pålidelige resultater, selv af uøvede personer, og i nogle tilfælde kan der endog foretages en grov kvantitativ bestemmelse af den i prøven tilstedeværende mængde antibiotikum. Agarmediets størkning med prøvebeholderen i opretstående stilling, kombineret med stadardiserede mængder af prøve og medium, har den fordel, at størrelsen af agarmediets overfladeareal er veldefineret, således at der efter indføring af næringsstofferne opnås pålidelige inkuberingsresulta-ter, der kan være semikvantitative.
Der kan benyttes forskellige hensigtsmæssige udførelsesformer for fremgangsmåden ifølge opfindelsen som angivet i krav 2-12.
Der sættes en indikator til det sporeholdige agarmedium eller til næringsstofferne. Hvis der inkorporeres en indikator i agarmediet, opnås der en bedre fordeling i mediet, før prøven udføres. Endvidere er prøvens følsomhed større, og for andre væsker end mælk forurenes farven mindre af fra prøvevæsken stammende forureninger. Indikatoren kan være en syre-base-indikator, såsom bromeresoIpurpur eller phenolrødt, eller en redox-indikator, såsom 2,3,5-triphenyl-tetrazoliumchlorid. Til bestemmelse af penicillin foretrækkes det at anvende bromeresolpurpur.
Mediets pH-værdi er vigtig såvel for prøveorganismens optimale væksthastighed som for aktiviteten af de antibiotika, der skal afprøves, og således for mikroorganismens følsomhed over for antibiotikaene. For f.eks. Bacillus stearo-thermophilus var. calidolactis skal mediets pH-værdi være ca. 7 i begyndelsen af prøveperioden for at opnå en optimal væksthastighed. Ved anvendelse af en egnet indikator, såsom bromeresolpurpur, kan der opnås en meget kort prøveperiode.
6
DK 151898 B
Selvom prøveperioden vil blive noget længere, kan prøvens følsomhed ov&z for visse antibiotika, navnlig aminoglucoside antibiotika, såsom streptomycinr dihydrostreptomycin, kanamycin og neomycin, forøges ved at starte prøven med et medium, med en pH-værdi på ca. 8. En egnet indikator i dette tilfælde er f.eks. phenolrødt. Følsomheden over for de andre antibiotika påvirkes imidlertid ikke i uheldig retning, når mediets pH-værdi under prøven aftager på en sådan måde, at hvert antibiotikum ved en for dette passende pH-værdi hæmmer væksten af mikroorganismen. pH-området mellem prøvens start og afslutning kan om ønsket udvides ved anvendelse af blandede indikatorer.
Prøvens følsomhed over for visse antibiotika kan afpasses ved anvendelse af bedre egnede sporer eller kombinationer af sporer.
Til udøvelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan der anvendes sporer fra alle bakterier, som kan danne sporer og er tilstrækkelig følsomme over for det eller de antibiotika, der skal afprøves for. Et passende spektrum af følsomheder over for forskellige antibiotika kan opnås ved anvendelse af sporer af en art eller stamme eller ved anvendelse af en blanding af sporer af forskellige organismer. Egnede sporer er sporer fra sporedannende organismer af slægten Bacillus med passende følsomhed over for de pågældende antibiotika såsom Bacillus calidolactis (Hussong et al., J. Bact. 15 (1928), 179-188), Bacillus subtilis, Bacillus stearothermophilus (Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology, 7. udgave, (1957), 613-693), de termofile bacilli beskrevet af Galesloot et al., Neth. Milk & Dairy J. 13 (1959), 155-179, Bacillus stearothermophilus var. calidolactis (Mol, Neth. Milk & Dairy J. 23 (1969), 153-162, og Bacillus calidolactis stamme C 953 fra Netherlands Institute for Dairy Research i Ede, Holland (Galesloot et al., Neth. Milk & Dairy J. 16 (1962), 89-95. Der anvendes fortrinsvis sporer af Bacillus stearothermophilus v.ar. calidolactis, der er deponeret ved Laboratory for Microbiology i Delft, Holland, og tildelt nummeret L.M.D. 74.1. Denne mikroorganisme har stor følsomhed over for. penicillin-G og penicillin-V, og en meget stor væksthastighed, og den har den yderligere fordel, at dens optimale væksttemperatur er en forholdsvis høj temperatur, ved hvilken andre mikroorganismer normalt ikke vokser, således at risikoen fer infektion formindskes. Sporer af denne mikroorganisme er ikke blot følsomme overfor penicillin-G og penicillin-V og andre naturlige penicilliner, men er også følsomme over for flere andre antibiotika, såsom semisyntetiske penicilliner, f.eks. nafeillin og cloxacillin; cephalosporiner; aminoglucoside antibiotika, f.eks. streptomycin, dihydrostreptomycin, neomycin og kanamycin· j tetracydiner, f.eks. chlortetracyclin; chloramphenicol; macrolide antibiotika, f.eks. oleandomycin og erythromycin; polypeptide antibiotika; og adskillige ) chemotherapeutica, f.eks. trimetroprim, sulfadoxin og furazolidon, således at fremgangsmåden ifølge opfindelsen også er nyttig til angivelse af tilstede- 7
DK 151898 B
værelsen af disse antibiotika og chemotherapeutica, om nødvendigt efter afpasning af pH-værdien.
Til anvendelse ifølge opfindelsen indeholder kulturen fortrinsvis 10^ til 8 6 7 10 sporer af mikroorganismen pr. ml agarmedium og navnlig 10 til 10 sporer pr. ml medium. En egnet måde ved fremstilling af sporekulturen består i dyrkning af mikroorganismen i overfladekultur på agar eller i en submers flydende kultur, f.eks. i rysteflasker eller i en fermenteringsbeholder, som beskrevet af Yao et al., Appl. Microbiol. 15 (1967), 455. Sporerne inkorporeres som nævnt i agarmediet på en sådan måde, at sporerne forbliver i live, men forhindres i spiring. Der kan sættes fysiologisk saltopløsning og/eller en indikator til agaren, men den må ikke indeholde næringsstoffer for mikroorganismen.
Det er en yderligere fordel ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, at indvirkningen af inhibitorer, f.eks. produkter produceret af leukocytter, som normalt er til stede i mælk og andre til afprøvning foreliggende væsker, og som ikke er antibiotika, formindskes i betydelig grad, hvilket normalt ikke er tilfældet ved de kendte fremgangsmåder. Denne formindskelse af disse inhibitorers indvirkning skyldes den omstændighed, at de ikke eller ikke i væsentlig grad diffunderer ind i agaren inde i prøvebeholderne,f.eks, prøverørglas. Det er klart, at denne omstændighed forøger pålideligheden af fremgangsmåden ifølge opfindelsen, som den har den yderligere fordel, at den er en praktisk og bekvem prøvemetode, da forbehandling af mælken til inaktivering af disse inhibitorer normalt ikke er nødvendig, selv når der foreligger mælkeprøver med et lidt ændret udseende.
Det sporene indeholdende agarmedium lader man størkne i opretstående prøvebeholdere. Disse beholdere har forudbestemte størrelser, for at prøveresultaterne skal blive tilstrækkeligt pålidelige. Prøvemetoden ifølge opfindelsen er endog i nogen grad kvantitativ, da antibiotiket, når prøven udføres under visse forudbestemte omstændigheder, diffunderer ind i agaren og danner en gradient af aftagende koncentrationer i agaren. I det område, hvor antibiotikets koncentration ligger under et vist niveau, vil der ikke ske væksthæmning, således at mediet påvirkes af mikroorganismens vækst, og en eventuel tilstedeværende indikator ændrer sin farve. I det område, hvor antibiotikets koncentration ligger over det niveau, sker der væksthæmning, og indikatoren vil ikke ændre sin farve. Den højde af agarmediet i prøvebeholderen, f.eks. et prøverørglas, hvor indikatorens farve ændres, bestemmer prøvens følsomhed. Man kan forvisse sig om følsomheden i prøvebeholderne ifølge opfindelsen ved at standardisere højden af den størknede agar i beholderen. Dette træk kan fordelagtigt anvendes til udvikling af en prøve, ved hvilken højden af den sporeholdige agar vælges på en sådan måde, at indikatoren ændrer sin farve, når antibiotiket er til stede i en kon
DK 151898B
8 centration under en vis værdi, men ikke ændrer sin farve, når koncentrationer, af antibiotiket er over denne værdi. Prøvebeholdernes tværsnitsmål er $om nævnt 3-20 mm og fortrinsvis 6-14 mm, og højden er således, at beholderne kan indeholde en mængde af medium og prøve svarende til en højde på 3-30 mm. Når prøven indrettes som en kvantitativ prøve, dvs. en prøve ved hvilken visse kvantitative resultater kan aflæses ud fra højden af hæmningszonen, er denne højde fortrinsvis 20-30 mm. Når prøven indrettes som en prøve, ved hvilken man kan aflæse, om en vis koncentration af antibiotikum er til stede eller ej, er højden fortrinsvis 5-15 mm.
Når prøvebeholderne er fyldt med en forudbestemt mængde af det flydende agarmedium, lader man indholdet størkne, medens prøvebeholderne befinder sig i opretstående stilling, således at der opnås en vandret agaroverflade. Prøvebeholderne indeholdende det sporeholdige størknede agarmedium kan lukkes, og i denne tilstand kan de oplagres i mindst flere måneder, om nødvendigt i et køleskab, uden at sporerne mister deres levedygtighed.
Når man udfører prøvens bestemmelse af tilstedeværelsen af et antibiotikum, anbringer man først de nødvendige næringsstoffer, som kan indeholde en indikator, på overfladen af det sporeholdige agarmedium i prøvebeholderen. Selv om en forudbestemt mængde af næringsstofferne i flydende form kan anbringes på overfladen af agarmediet, foretrækkes det at anvende næringsstofferne i tør form, fortrinsvis i form af filterpapirskiver eller -tabletter, der indeholder de nødvendige næringsstoffer i tør tilstand, således at næringsstofferne har en bedre lagerstabilitet. Skiverne eller tabletterne må være mindre end beholderens tværsnitsareal, således at man undgår indeslutning af luft, når skiven eller tabletten lægges på mediet. Indeslutning af luft vil påvirke diffusionsmønstret i agaren. De næringsstoffer, der skal anvendes, må i det mindste indeholde en assimilerbar carbonkilde og nitrogenkilde, fortrinsvis i form af glucose og pepton, afhængig af den anvendte stamme. Næringsskiverne eller -tabletterne kan indeholde en indikator og/eller puffer.
Efter anbringelse af næringsstofferne på agarmediets overflade sættes der en forudbestemt mængde af den væske, der skal afprøves, almindeligvis mælk eller kød, til prøvebeholderens indhold. Dette kan gøres umiddelbart efter anbringelse af næringsstofferne på agarmediets overflade eller efter en forinkuberingsperi-ode. Når næringsstofferne er i tør form, kan der ved fremgangsmåden med forir1'utaring også tilsættes noget vand eller fysiologisk saltopløsning. Den sidstnævnte fremgangsmåde har den fordel, f.eks. når en sending mælk ankommer til en behandlingsstation, hvor den anvendes til visse formål, f.eks. til fordeling som mælk til menneskeføde, til smør- og ostefremstilling eller til yoghurtfermentering, hvilket kun kan ske efter, at man har fastslået fraværelsen af rester af penieil- 9
DK 151898 B
lin (eller andre antibiotica), at det tidsrum, hvori sendingen må vente før yderligere anvendelse, indtil prøveresultaterne kendes, kan blive kortere. Ved anvendelse af en forinkuberingsperiode kan inkuberingen i nærværelse af den prøve, der skal afprøves, være af kortere varighed, end når der ikke anvendes en forinkube-ringsperiode. Forinkuberingsperioden kan afhængig af omstændighederne være op til ca. 1 time.
Det er også muligt på mere økonomisk måde at udnytte den tid, hvori den væske, der skal afprøves, almindeligvis mælk, transporteres til behandlingsstationen ved at starte prøven under transporten under anvendelse af termoblokke til at holde temperaturen konstant. Der kan også anvendes en kombination af de ovennævnte forans taltninger.
Inkuberingsperioden (indfattet forinkuberingsperioden) afhænger af omstændighederne, f.eks. de anvendte sporer og de benyttede næringsstoffer og temperaturer. Ved anvendelse af sporer af Bacillus stearothermophilus var. calidolactis ligger egnede inkuberingstemperaturer på 55-70°C, fortrinsvis 60-65°^, og de inkuberingsperioder, inden for hvilke der kan opnås pålidelige resultater, er forholdsvis korte og varierer fra ca. 1 1/2 til 4 timer, fortrinsvis fra 2-3 timer.
Selv om prøvemetoden er blevet udviklet specielt til anvendelse på mælk, kan den også anvendes på andre materialer, såsom kød, f.eks. et lille stykke kød anbragt på agaren, kødsaft udpresset fra en kødprøve eller afdrypsvæske fra dyb-frosset og optøet kød. Til dette formål må næringsstofferne være indrettet til at neutralisere forstyrrende faktorer. Dette kan gøres ved tilsætning af passende kemikalier, f.eks. pH-puffere, til prøven. Forstyrrende faktorer, såsom lactoferin og seroferin, kan neutraliseres ved tilsætning af ferrosulfat. Som en forudgående frasorterende prøve for rester af antibiotica i slagtedyr kan prøven anvendes på urin, da antibiotica ophobes heri. Til afprøvning af ufortyndet urin skal pH-vær-dien afpasses efter prøven ved anvendelse af passende pH-puffere i tabletten.
Urinprøver kan også afprøves uden anvendelse af tilsætningsstoffer, men i dette tilfælde er det imidlertid nødvendigt at fortynde prøverne ca. 10 gange med vand.
Til bestemmelse af, om et i en prøve tilstedeværende antibioticum er en penicillin eller et andet antibioticum, er det muligt at udføre prøven med to prøvebeholdere. Til den ene af prøvebeholderne sættes der en næringstablet eller en yderligere tablet eller skive indeholdende penicillinase, medens der til den anden beholder sættes en næringstablet uden peniciHAiasetiIsætning. Når der er penicillinase til stede, vil de ikke-penicillinaseresistente penicilliner sønderdeles under prøven. Man kunne også anvendes en anden specifik penicillin-inaktivator i stedet for penicillinase, såsom cystein.
DK 151898B
10
Opfindelsen angår også en prøvebeholder eller serie af prøvebeholdere, kombineret til en blok af gennemskinneligt materiale forsynet med et antal huller udformet til dannelse af prøvebeholdere, til udøvelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen, hvilken prøvebeholder er ejendommelig ved, at den indeholder sporer af en mikroorganisme, som har stor følsomhed over for det antibiotikum, der skal påvises, i et agarmedium, hvorhos der er podet med et så stort antal sporer, at der efter tilsætning af næringsstoffer og inkubering ved eller nær ved optimal temperatur er sket en tilstrækkelig vækst til, at den er visuelt observerbar, inden for ca. 1,5 til 4 timer, fortrinsvis 2 til 3 timer, og agarmediet er bragt til at størkne i en eller flere prøvebeholdere, der har et tværsnitsmål på 3-20 mm, fortrinsvis 6-14 mm, og en højde på 3-30 mm, fortrinsvis 5-10 mm, og er anordnet i opretstående stilling.
Hensigtsmæssige udførelsesformer for prøvebeholderen ifølge opfindelsen er angivet i krav 14-23.
Som nævnt ovenfor kan de agarmediet indeholdende prøvebeholdere oplagres i et langvarigt tidsrum afhængig af opretholdelsen af passende oplagringsbetingelser, navnlig passende temperaturer.
pH-værdien af agarmediet i prøvebeholderen påvirkes under oplagring af den omgivende luft, sandsynligvis som følge af tilstedeværelsen af carbondioxid i luften. Prøvebeholderne, såsom ampuller, lukkes derfor fortrinsvis lufttæt til under oplagring.
Agaren har undertiden tilbøjelighed til at løsne sig fra beholderens væg. Denne tilbøjelighed kan formindskes ved til agaren at sætte et klæbemiddel, der ikke må virke som et næringsstof eller en inhibitor for sporerne. Eksempler på egnede klæbemidler er natriumcarboxymethylcellulose og sorbitanestere betegnet "Tween"®.
Opfindelsen angår endvidere et sæt til hurtig påvisning af rester af antibiotikum, f.eks. penicillin, i væsker, f.eks. mælk, eller presset kød, hvilket sæt er ejendommeligt ved, at det omfatter en eller flere prøvebeholdere som angivet i et vilkårligt af kravene 13-21, og desuden omfatter en tilsvarende mængde af skiver eller tabletter indeholdende de nødvendige næringsstoffer i tørret form. Et sådant sæt, eller et sæt omfattende en eller flere prøvebeholdere som angivet i krav 22 eller 23;kan hensigtsmæssigt ifølge opfindelsen desuden omfatte instrumenter til anbringelse af en forudbestemt mængde prøvevæske på overfladen af agarmediet. Sådanne sæt kan eventuelt også omfatte instrumenter til anbringelse af en skive eller tablet på overfladen af agarmediet. Sådanne sæt kan emballeres i et passende emballeringsmateriale, såsom "Styropor""plastmateriale (et opskummet polystyren).
Prøvebeholderne ifølge opfindelsen kan^ifølge det ovenstående, i sig 11
DK 151898 B
indeholde næringsskiverne eller -tabletterne. Da skiverne eller tabletterne trækker fugtighed til sig fra agarmediet, overtrækkes de til dette formål med et lag, som hindrer fugtighedstransport fra mediet til tabletterne eller skiverne ved sædvanlige temperaturer eller oplagringstemperaturer, men som tillader næringsstoftransport under prøvebetingelserne. Et eksempel på et passende overtræk er et voksovertræk med en smeltetemperatur på 35-55 C, fortrinsvis 40-45°C.
Sættet kan også omfatte andet nyttigt tilbehør, f.eks. et kontrolbillede, på basis af hvilket man ud fra højden af hæmningszonen kan foretage en grov bestemmelse af indholdet af penicillin (eller andet antibiotikum). Sættet kan yderligere omfatte en indretning til indføring af en forudbestemt prøvemængde i prøvebeholderen. Der kan fortrinsvis inkorporeres én blindprøve uden penicillin eller andet antibiotikum, f.eks. almindeligt vand, til kontrol af, at sættet fungerer godt.
Som anført ovenfor kan fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes til bestemmelse af antibiotikumrester, f.eks. penicillinrester, i mælk. Imidlertid kan der ved hjælp af fremgangsmåden ifølge opfindelsen også bestemmes rester af anti-tiotika i andre væsker, f.eks. rester i den væske, der opnås ved presning af kød, organer og nyrer, i afdrypningsvæsker, fødevarer og foderstoffer og i andre væsker, såsom blodserum og urin. Om nødvendigt kan der tilsættes puffere’ til regulering af pH-værdien. Pufferne kan være forskellige afhængig af dyret.
I praktisk anvendelse kan der selvsagt anvendes andre mikroorganismer til påvisning af andre antibiotika. Dette kan naturligvis medføre, at mediet, næringsstofferne og inkuberingsbetingelserne afpasses derefter.
Opfindelsen belyses nærmere ved hjælp af de efterfølgende eksempler.
Eksempel 1
Tilberedning af prøverørglas.
En kultur af Bacillus stearothermophilus var. calidolactis L.M.D.74.1 podes på et medium bestående af:
Bacto-næringsagar, MDif£o'’^ode 0001 ("Difco” er et handelsnavn) 15 g ® , _
Bacto-agar, "Difco" kode 0140 5 g dextrose §
MnS04o.H20 30 destilleret vand til 1000 ml steriliseret i 20 minutter ved 120°C.
DK 151898B
12
Efter podning inkuberes mediet ved 60°C i mindst 48 timer, indtil der iagttages god sporedannelse. Sporerne opsamles, vaskes med destilleret vand og oplagres ved 4°C, Mængden af levedygtige sporer bestemmes ved afprøvning på et medium bestående af:
Bacto-agar, ”Difcon ko^ 0140 20 g
Bacto-Trypton, "Difco" kode 0123 8,5 g
Phytone-Pepton, BBL kode 11905 1,5 g dextrose 5 g destilleret vand til 1000 ml steriliseret i 20 minutter ved 120°C.
Efter podning inkuberes mediet i 48 timer ved 60°C, hvorefter kolonierne optælles. Der sættes destilleret vand til eller fjernes vand fra sporesuspensionen, g indtil suspensionen indeholder ca. 10 levedygtige kim pr. ml. 1 % af den oven- g nævnte sporesuspension in^jioIdende 10 kim pr. ml sættes til følgende opløsning: Bacto-agar, "Difco" kode 0140 12 g natriumchlorid 9 g destilleret vand til 1000 ml steriliseret i 20 minutter ved 120°C.
o φ
Mediet gøres flydende ved opvarmning og afkøles til 60 C.
Sterile rørglas med tværsnitsmål på ca. 9 mm fyldes hver med 0,5 ml af det således opnåede medium. Man lader indholdet i rørglassene størkne, idet rørglassene holdes i opretstående stilling. Rørglassene oplagres ved en temperatur på 4°C.
Fremstilling af næringsskiver.
Der fremstilles følgende medier:
(a) Bromcresol purpur (0,1 g) opløst i 9,2 ml 0,02 N
NaOH fortyndes med destilleret vand til en rumfang på 25 ml.
(b) dextrose 50 g destilleret vand 50 ml (c) Bacto-Trypton, "Difco’^Kode 0123 34 g
Phyton-Pepton, BBL kode 11905 6 g destilleret vand 100 ral.
Opløsningerne (a) og (b) steriliseres ved passage gennem et Seitz-filter, og medium (c) steriliseres ved 110°C i 30 minutter, hvorved medium (c) forbliver en suspension. 5 dele af opløsning (a), 2 dele af opløsning (b) og 3 dele af suspension (c) blandes, og 0,04 ml af den opnåede opløsning bringes i kontakt med filtrerpapirskiver med et tværsnitsmål på ca. 8 mm, hvorefter skiverne tørres.
13
DK 151898 B
Eksempel 2
Forskellige mængder af penicillin-G sattes til frisk komælk til opnåelse af koncentrationer på 0,1, 0,03, 0,01, 0,003 og 0,001 IE pr. ml, medens én prøve af komælk uden penicillin-G køres som blindprøve. 6 Prøverørglas tilberedt efter fremgangsmåden i eksempel 1, forsynes hver med en næringsskive,og 0,2 ml af hver af prøverne sættes til prøverørglassene, Prøveglassene anbringes straks i et vandbad på 65°G. Der foretages observationer efter 3 og 4 timers forløb. Der opnåedes følgende resultater:
Blindprøve: agaren farves gul, prøverne med mindre end 0,01 IE pr. ml: agaren farves gul, prøverne med 0,01 ΓΕ pr. ml og mere: mediet farves violet.
Eksempel 3
Prøvens følsomhed sammenlignet med kendte prøvers følsomhed.
I nedenstående tabel sammenlignes følsomheden af prøven ifølge eksempel 1 med følsomheden af kendte prøver til bestemmelse af rester af antibiotika, hvilke kendte prøver er en i Holland foreskrevet nyre-prøve beskrevet af Schothorst og Peelen-Knol i Tijdschr. v. Diergeneesk. 95 (1970), 438-445, og en tysk metode udviklet af det tyske Bundesgesundheits-Amt, jvf. Levetzow, Bundesgesundheitsblatt 14 (1971), 30-42, og Barteis et al., Die Fleischwirtschaft 52 (1972), 479-482. Prøven ifølge opfindelsen udførtes på to måder, idet den dels udførtes med de nedenfor anførte antibiotica opløst i saltopløsning, dels med mælk forurenet med de anførte antibiotika. Den første måde giver et indtryk af, hvad der kan forventes, når prøven udføres som en kødprøve.
Det fremgår tydeligt af tabellen, hvori følsomheden er angivet i pg/ml, at prøven ifølge opfindelsen er mere følsom end nyre-prøven på de fleste af de anførte antibiotika. Dette gælder også ved sammenligning med den tyske prøvemetode, hvor det klart fremgår, at prøven ifølge opfindelen er meget mere følsom over for penicillin.
DK 151898B
14 rHCMiO'd'lO·. ΌΓ^ΟΟΟ'Ο ι-l CM m -sf m νΟΓ^ΟΟΟ'Ο
r—ί Η !—1 t-»4 ^1 i—I ^ H i-i CM
s n o <11 O O CG -tf O O O " ^-s m n <f n in o
CQ i—i O-· -3" O
ojtn o σ' i—i <N oo cm •-f' <fr O · i-ι ’TJ ·Η EC Λ Λ Λ Λ Λ Λ Λ Λ CD A Co ο r-1 ft Ο Ο Ο Ο Ο Ο CM Ο0 Ο 00 Ο Ο 00 Ν CM ο _ jj ·η--- 1 _ Ρ φ u ο ο go Ο Ο 1-1 13 3 ο 0-1 I"- ,Μ co νΟ ι-ι Ο οο cm ·Λ _ μ ο cMinomo· · co ο cm >. « πο ί ο ™ ο ο "
HfQ ftOcoi-ii-icM cm Α> ο ο ο ο ο m -ί »-ι o m i"· m ο
a) H
•ft cm
u O
Q. · Ο O 1““* 1 μ 1-4 0 O Is* oft co cm mm ’-'i! °, J_| Ο Ο Ο -ΐ · O r-l r-l · M r-l «ί >\i—< DO n \D .> ·>·>(β a" λα® O " * eg ftOi-ii-^i-to οοϋΉΑο'ίΌοΑ ϋ 00 co ο o
4J O
<U CM-- -----
ω co o H
0<D O O O _ g O
•j-i 4j oo o o o -tf o
U_J p Q) r-l VO i—J ·* VO
•r-i ι-l Ό VO CM I i“j CO
Ό <0 O · · cO · <sQ OvO i-4·· · CM
n « i ffi AtdcdO * οί * Λ Λ * cd fiJ O tf *
gcoCLJp-OOO^O rv 0 CM O CM Ο Ο <1* O 0 OcSOi-iO
Q)
rH > ^ H
d) Ol co i*i Ο O
,ημαίο. oo o oo 2 o ^ S
rtftu ooo m ·> oo^o,
c-ι 1 3 ·-< 0) CMvDO i-ι O »-I CM ·« ι-l CM
¢1 i-ι 6 fl <f i-ι o to co μ too · - I CM 1-1 · <f- « O co cm I · _ · -cr
>>«Oi—i *> co co O I iceinJl " 1 " ”! 2 H ?! r-T
Sco-iftooocoi-i oo o cm o cm o i-ι m ο σ om ooo i o 2 c c .ϋ o -tf CM o β 60 8! h « <1- -ί O O *
co o }m 8J O m*>*>"<f « _ σο O
1-i oflSI "000«0 O" I
ø 0 m o cMco oil i o m ι ο o m n g T3M«-HOm cMiooimmcol«i-i Ο I “ g -h g 3 J4 o loo I rn r-l 1-1 CM 1-1 1-1 O CM P- O 00 r-l vO c- O O ft •rl<U>(U « O 1 00 ·> l J. " " " J" " I " I A “ 1 I * £* ih^o-ojOcmcmi-ii-i m A ooo o o m o c— o r-ι e-· ο o CL ^ 0- -- *> •H OO g 0 e .§ 00 <U & -H Γ 1- ι to to C Π -ft ft ·Η to Ί-1 M-t to 00 -ft hn
ft ft O i—I
Oflr-J ft K
0 Ο O -si- .
>0-rl+JO »O 5 -, 2 •ftiHtot-iO oo i-io r-l o vo <r !-l > >1 tfl r Ο Ο - *1 " " Λ " - ft fO. n-itoOi-icMi-ioin o O o oo o m Mto -J· ___ti
•H
i—< ® cd c tft ·Η r4 ΰ [ ft 1-1 O -rl Ο _ Ή co ·Ησ®ου ft ft 1-1 g a ft ft ft 1-1 >1 1 ce-H -rl -rl ft B Ί .5.5.5 u ο β u ft c .ϋ νί ft OOOCr'ift-rl 4J(D OW >>ft-rl
^ *H ft >,>,>.· rIOI-IrM ft ·Η<ΰβΤ3Π) g-Hr-IOJ
jj r-l-HCgg g O CO +J ϋ ·Η φ Ά rl ·ι-Ι N 2^1-^ S
o 1-1 O 1-1 O O O^l^Ø^iUCOØr-li-l Φ •rl •H>iO-lJl-lrft£*l-,*l-1^ >, .O CO i—IO g -rlgoo
J2 U g >, a ft C6 0) ll fl gll^.rlN CO 4JOCOO
ίί -riSgø+j coi-i+jo^ ra^iSoocom
id CftSk>s0-H>ir-l4JM-lfti-llWHi-l CDftO
ft (Uc0a)4JH 1-1 Λ X ,13 0 ·Η -rl ft to 3 ft ^-S ο. «Η I-Η /-S
< ft ji ft 10 II OMOO-U ^1660¾1^ Cfl i—l CO 1—1 O r-l
Claims (25)
1. Fremgangsmåde til hurtig påvisning af tilstedeværelsen eller fraværelsen af rester af antibiotikum, f.eks. penicillin, i væsker, f.eks. mælk, og presset kød, ved hvilken man indfører sporer af en mikroorganisme, som har stor følsomhed over for det antibiotikum, der skal påvises, i et agarmedium på en sådan måde, at sporerne forhindres i at starte med at spire i mangel af næringsstoffer, men forbliver i live, hvorhos der podes med et så stort antal sporer, at der efter tilsætning af næringsstoffer og inkubering ved eller nær ved optimal temperatur er sket en tilstrækkelig vækst til, at den er visuelt observerbar, inden for ca. 1,5 til 4 timer, fortrinsvis inden for 2 til 3 timer, kendetegnet ved, at man lader sporekulturen størkne i opretstående prøvebeholdere med et tværsnitsmål på 3-20 mm, fortrinsvis 6-14 mm, og en højde på 3-30 mm, fortrinsvis 5-10 mm, og i en mængde, der efterlader tilstrækkelig plads til indføring af et bestemt rumfang væske, som skal undersøges, samt at man anbringer væksten nødvendige næringsstoffer,inkorporeret i en skive eller tablet, på agaren, hvorefter man, om ønsket efter en forinkube-ringsperiode, sætter det forudbestemte rumfang af prøvevæske til prøvebeholderen og inkuberer prøvebeholderens indhold under de ovenfor definerede betingelser og i et bestemt tidsrum, således at udstrækningen eller hæmningen af mikroorganismens vækst, observeret i lodret retning gennem farven af en indikator, som er inkorporeret i enten sporekulturen eller skiven eller tabletten med næringsstoffer, viser fraværelse eller tilstedeværelse af antibiotiket.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at indikatoren er en syre-base-indikator.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2,kendetegnet ved, at indikatoren er bromcresolpurpur eller phenolrødt.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1,kendetegnet ved, at indikatoren er en redox-indikator.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1,kendetegnet ved, at der anvendes sporer af arter af slægten Bacillus.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at der anvendes sporer af Bacillus calidolactis, Bacillus subtilis, Bacillus stearothermo-philus eller Bacillus stearothermophilus var. calidolactis.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 6,kendetegnet ved, at der anvendes sporer af Bacillus stearothermophilus var. calidolactis (L.M.D. 74. 1).
8. Fremgangsmåde ifølge krav 1,kendetegnet ved, at sporekul· 5 8 turen indeholder 10 til 10 sporer af mikroorganismen pr. ml ag armed iuiru
9. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de på DK 151898 B agaroverfladen anbragte næringsstoffer anvendes i tør form,
10. Fremgangsmåde ifølge krav 9, kendetegnet ved, at næringsstofferne er i form af filtrerpapirskiver eller -tabletter,
11. Fremgangsmåde ifølge krav 10,kendetegnet ved, at næringsstofferne i form af tabletter overtrækkes med et lag, som hindrer fugtigheds-transport fra mediet til tabletterne ved sædvanlige temperaturer eller oplagringstemperaturer, men tillader næringsstoftransport under prøvebetingelserne,
12. Fremgangsmåde ifølge krav 11, kendetegnet ved, at overtrækslaget består af voks med en smeltetemperatur på ca. 33-55°C, fortrinsvis 40-45°C.
13. Prøvebeholder eller serie af prøvebeholdere, kombineret til en blok af gennemskinneligt materiale forsynet med et antal huller udformet til dannelse af prøvebeholdere,til udøvelse af fremgangsmåden ifølge krav 1, kendetegne t ved, at den indeholder sporer af en mikroorganisme, som har stor følsomhed over for det antibiotikum, der skal påvises, i et agarmedium, hvorhos der er podet med et så stort antal sporer, at der efter tilsætning af næringsstoffer og inkubering ved eller nær ved optimal temperatur er sket en tilstrækkelig vækst til, at den er visuelt observerbar, inden for ca. 1,5 til 4 timer, fortrinsvis 2 til 3 timer, og agarmediet er bragt til at størkne i en eller flere prøvebeholdere, der har et tværsnitsmål på 3-20 mm, fortrinsvis 6-14 mm, og en højde på 3-30 mm, fortrinsvis 5-10 mm, og er anordnet i opretstående stilling.
14. Prøvebeholder ifølge krav 13,kendetegnet ved, at der er en indikator tilstede i sporekulturen i prøvebeholderen.
15. Prøvebeholder ifølge krav 14, kendetegnet ved, at indikatoren er en Syre-base-indikator.
16. Prøvebeholder ifølge krav 15, kendetegnet ved, at indikatoren er bromcresolpurpur eller phenolrødt.
17. Prøvebeholder ifølge krav 14, kendetegnet ved, at indikatoren er en redox-indikator.
18. Prøvebeholder ifølge krav 13, kendetegnet ved, at sporekulturen er en sporekultur af en art af slægten Bacillus.
19. Prøvebeholder ifølge krav 18, kendetegnet ved, at sporekulturen er en sporekultur af Bacillus calidolactis, Bacillus subtilis, Bacillus stearothermophilus eller Bacillus stearothermophilus var. calidolactis.
20. Prøvebeholder ifølge krav 19,kendetegnet ved, at sporekulturen er en sporekultur af Bacillus stearothermophilus var. calidolactis (L.M.D. 74.1). DK 151898B
21. Prøvebeholder ifølge krav 13, kendetegnet ved, at spore- 5 8 kulturen indeholder 10 til 10 sporer af mikroorganismer pr. ml agarmedium.
22. Prøvebeholder ifølge krav 13, kende tegnet ved, at beholderen foruden sporekulturen i agarmediet indeholder næringsstofferne i form af tabletter overtrukket med et lag, som hindrer fugtighedstransport fra mediet til tabletterne ved sædvanlige temperaturer eller oplagringstemperaturer, men tillader næringsstoftransport under forsøgsbetingelserne.
23. Prøvebeholder ifølge krav 22, kendetegnet ved, at overtrækslaget består af voks med en smeltetemperatur på 35-55°C, fortrinsvis 40-45°C. ·
24. Sæt til hurtig påvisning af rester af antibiotikum, f.eks. penicillin, i væsker, f.eks. mælk, eller presset kød, til udøvelse af fremgangsmåden ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det omfatter en eller flere prøvebeholdere som angivet i et vilkårligt af kravene 13-21, og desuden omfatter en tilsvarende mængde af skiver eller tabletter indeholdende de nødvendige næringsstoffer i tørret form.
25. Sæt ifølge krav 24, eller sæt omfattende en eller flere prøvebeholdere som angivet i et vilkårligt af kravene 22-23, til udøvelse af fremgangsmåden ifølge krav 1, kendetegnet ved at det desuden omfatter instrumenter til anbringelse af en forudbestemt mængde prøvevæske på overfladen af agarmediet,
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB2594773 | 1973-05-31 | ||
| GB2594773A GB1467439A (en) | 1973-05-31 | 1973-05-31 | Method for determination of the presence of antibiotics |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK292674A DK292674A (da) | 1975-01-20 |
| DK151898B true DK151898B (da) | 1988-01-11 |
| DK151898C DK151898C (da) | 1988-07-18 |
Family
ID=10235918
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK292674A DK151898C (da) | 1973-05-31 | 1974-05-30 | Fremgangsmaade til hurtig paavisning af tilstedevaerelsen eller fravaerelsen af rester af antibiotikum og proevebeholder og saet til anvendelse ved fremgangsmaaden |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US3941658A (da) |
| JP (1) | JPS5832879B2 (da) |
| AR (1) | AR210724A1 (da) |
| BE (1) | BE815759A (da) |
| BR (1) | BR7404400D0 (da) |
| CA (1) | CA1040517A (da) |
| CH (1) | CH611033A5 (da) |
| DK (1) | DK151898C (da) |
| FR (1) | FR2231966B1 (da) |
| GB (1) | GB1467439A (da) |
| IE (1) | IE39293B1 (da) |
| IT (1) | IT1043931B (da) |
| NL (1) | NL162138C (da) |
| SE (1) | SE418621B (da) |
| ZA (1) | ZA743465B (da) |
Families Citing this family (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL7806086A (nl) * | 1978-06-05 | 1979-12-07 | Gist Brocades Nv | Analyse-unit. |
| IL59723A (en) * | 1980-03-27 | 1983-05-15 | Teva Pharma | Determination of antibacterial agents |
| US5070014A (en) * | 1982-09-30 | 1991-12-03 | Wadley Technologies, Inc. | Stabilization of specimens for microbial analysis |
| US4774173A (en) * | 1984-12-06 | 1988-09-27 | Orgenics Ltd. | Microbiological assay kit and method for detecting de novo biomolecular synthesis inhibitors |
| US5354663A (en) * | 1988-05-04 | 1994-10-11 | Charm Sciences, Inc. | Microbial inhibition test kit and method |
| CZ251094A3 (en) * | 1993-02-11 | 1995-02-15 | Gist Brocades Nv | Unit for detecting residues of antibacterial substances in liquids |
| DE9302423U1 (de) * | 1993-02-19 | 1993-04-15 | Müller, Frank Joachim, 4150 Krefeld | Mikrotitrationseinheit |
| US5512488A (en) * | 1994-05-05 | 1996-04-30 | Carrington Laboratories, Inc. | Colorimetric assay for bioactive polysaccharide |
| NZ260609A (en) * | 1994-05-26 | 1995-07-26 | Food Industry Research & Dev I | Detecting antimicrobial compound presence in a sample by growing a microorganism susceptible to the compound in media containing the sample and using an electrical parameter of the culture to indicate growth |
| NZ301691A (en) * | 1995-02-01 | 1997-03-24 | Gist Brocades Bv | Detecting antibacterial compounds in a liquid sample using bacillus or streptoccus |
| US5792622A (en) * | 1995-11-16 | 1998-08-11 | New Mexico State University Technology Transfer Corporation | Assay for chemicals |
| US6383773B2 (en) | 1998-04-23 | 2002-05-07 | Massachusetts Institute Of Technology | Penicillin conversion |
| WO2001025471A2 (en) * | 1999-10-04 | 2001-04-12 | Dsm N.V. | Method for the detection of antimicrobial residues |
| KR100540864B1 (ko) * | 2001-01-29 | 2006-01-12 | 모리나가 뉴교 가부시키가이샤 | 고체 배지 및 이의 제조방법 |
| US7052837B2 (en) * | 2001-03-13 | 2006-05-30 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Histoplasma capsulatum catalase sequences and their use in the detection of Histoplamsa capsulatum and histoplasmosis |
| US6613534B2 (en) | 2001-03-20 | 2003-09-02 | Wake Forest University Health Sciences | MAP-2 as a determinant of metastatic potential |
| CN1300332C (zh) | 2001-10-15 | 2007-02-14 | Dsmip资产有限公司 | 检测样品中多余残留物的设备和方法 |
| US7217519B1 (en) | 2002-11-21 | 2007-05-15 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Histoplasma capsulatum chitin synthase sequences and their use for detection of Histoplasma capsulatum and histoplasmosis |
| EP1639123A1 (en) * | 2003-07-02 | 2006-03-29 | DSM IP Assets B.V. | Improved method for the determination of the presence of an antibiotic in a fluid |
| US20070092929A1 (en) * | 2003-07-02 | 2007-04-26 | Angelina Dekker | Test system for the determination of the presence of an antibiotic in a fluid |
| ATE414784T1 (de) * | 2003-09-11 | 2008-12-15 | Dsm Ip Assets Bv | Blut- und urintest |
| US7897365B2 (en) * | 2003-11-18 | 2011-03-01 | Charm Sciences, Inc. | Method for adjusting antibiotic sensitivity of a test culture |
| IL163821A0 (en) * | 2004-08-31 | 2005-12-18 | Ravgalai Ltd Rapax Consortium | Software for management of legal motions Methods and kits for the detection of biotoxic andantibiotic residues |
| ES2443341T3 (es) | 2006-02-08 | 2014-02-19 | Dsm Ip Assets B.V. | Combinación de un dispositivo lector y una incubadora |
| US8476064B2 (en) * | 2006-05-09 | 2013-07-02 | Charm Sciences, Inc. | Inhibition assay method and device for detection of antibiotics |
| US9689021B2 (en) * | 2011-10-14 | 2017-06-27 | Université de Liège | Method for measuring beta-lactam antibiotics |
| RU2703784C1 (ru) * | 2015-11-20 | 2019-10-22 | Сентриент Фармасьютикалз Недерландз Б.В. | Анализ для определения антибиотиков в отходах |
| CN105586383A (zh) * | 2015-12-28 | 2016-05-18 | 台州职业技术学院 | 一种快速鉴定或筛选产抑菌活性物质的微生物的方法 |
| CN111808912B (zh) * | 2020-07-07 | 2022-11-08 | 广西大学 | 一种微载体检测抑制物的测定方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK49968C (da) * | 1933-07-28 | 1935-03-04 | H Th Boehme Ag | Fremgangsmaade til Fremstilling af bestandige, iltafgivende Vaskemidler. |
| US3063916A (en) * | 1960-04-26 | 1962-11-13 | Frank V Kosikowski | Methods for detecting the presence of antibiotics |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3126325A (en) * | 1964-03-24 | Kzhpox | ||
| US2967132A (en) * | 1959-09-03 | 1961-01-03 | Lawrence E Sacks | Process of using bacterial spores as indicator system for determination of antibacterial activity |
-
1973
- 1973-05-31 GB GB2594773A patent/GB1467439A/en not_active Expired
-
1974
- 1974-05-22 US US05/472,511 patent/US3941658A/en not_active Expired - Lifetime
- 1974-05-29 ZA ZA00743465A patent/ZA743465B/xx unknown
- 1974-05-29 IE IE1129/74A patent/IE39293B1/xx unknown
- 1974-05-30 CH CH741574A patent/CH611033A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-05-30 AR AR253988A patent/AR210724A1/es active
- 1974-05-30 SE SE7407176A patent/SE418621B/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-05-30 NL NL7407251.A patent/NL162138C/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-05-30 FR FR7418859A patent/FR2231966B1/fr not_active Expired
- 1974-05-30 DK DK292674A patent/DK151898C/da not_active IP Right Cessation
- 1974-05-30 JP JP49061389A patent/JPS5832879B2/ja not_active Expired
- 1974-05-30 IT IT68702/74A patent/IT1043931B/it active
- 1974-05-30 BE BE144937A patent/BE815759A/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-05-30 BR BR4400/74A patent/BR7404400D0/pt unknown
- 1974-05-30 CA CA201,293A patent/CA1040517A/en not_active Expired
-
1985
- 1985-10-11 US US06/786,810 patent/US4946777A/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK49968C (da) * | 1933-07-28 | 1935-03-04 | H Th Boehme Ag | Fremgangsmaade til Fremstilling af bestandige, iltafgivende Vaskemidler. |
| US3063916A (en) * | 1960-04-26 | 1962-11-13 | Frank V Kosikowski | Methods for detecting the presence of antibiotics |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NL7407251A (da) | 1974-12-03 |
| FR2231966A1 (da) | 1974-12-27 |
| DK151898C (da) | 1988-07-18 |
| DK292674A (da) | 1975-01-20 |
| JPS5033897A (da) | 1975-04-01 |
| US4946777A (en) | 1990-08-07 |
| IT1043931B (it) | 1980-02-29 |
| FR2231966B1 (da) | 1977-03-11 |
| SE418621B (sv) | 1981-06-15 |
| BR7404400D0 (pt) | 1975-01-07 |
| IE39293B1 (en) | 1978-09-13 |
| AR210724A1 (es) | 1977-09-15 |
| CA1040517A (en) | 1978-10-17 |
| NL162138C (nl) | 1980-04-15 |
| ZA743465B (en) | 1975-05-28 |
| CH611033A5 (da) | 1979-05-15 |
| DE2425999A1 (de) | 1974-12-19 |
| IE39293L (en) | 1974-11-30 |
| SE7407176L (da) | 1974-12-02 |
| BE815759A (fr) | 1974-12-02 |
| DE2425999B2 (de) | 1976-02-19 |
| US3941658A (en) | 1976-03-02 |
| GB1467439A (en) | 1977-03-16 |
| NL162138B (nl) | 1979-11-15 |
| JPS5832879B2 (ja) | 1983-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK151898B (da) | Fremgangsmaade til hurtig paavisning af tilstedevaerelsen eller fravaerelsen af rester af antibiotikum og proevebeholder og saet til anvendelse ved fremgangsmaaden | |
| US3814670A (en) | Test article for use in microbiology | |
| DK153333B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af en enhed til bestemmelse af antibiotika - og sulfonamidrester i biologiske vaesker samt enheder fremstillet ved fremgangsmaaden | |
| EP2455455B1 (en) | Optical method and device for detection and enumeration of microorganisms | |
| JP2001511654A (ja) | 微生物を検出するためのセンサー器具、及びそのための方法 | |
| US3416998A (en) | Method of detecting or classifying microorganisms using agar reagent sheets | |
| SK123496A3 (en) | A rapid microbiological test for the detection of antibacterial compounds | |
| US4381343A (en) | Determination of antibacterial agents | |
| US10144947B2 (en) | Method for detecting, identifying and enumerating micro-organisms in a porous support dry-impregnated with a dehydrated reaction medium | |
| US4766063A (en) | Process and device for detecting the activity of a substance on a micro-organism or on a mixture of micro-organisms | |
| GB2059990A (en) | Enhancement of the sensitivity of viable microbial cell count by bioluminescent assay of ATP and its use for identification of microbes by means of a short incubation in nutrient media | |
| EP1216307B2 (en) | Method for the detection of antimicrobial residues | |
| WO2001025795A2 (en) | One step test to detect antimicrobial residues in eggs | |
| CA1060764A (en) | E. coli detection broth for clinical use with automated microbial analyzer | |
| AU2014261436B2 (en) | Method for the determination of the presence of an antibiotic in a fluid | |
| JPS6339239B2 (da) | ||
| GB2102947A (en) | Process and apparatus for indicating the presence of contaminating microorganisms | |
| KR920008386B1 (ko) | 황색포도상구균의 간이검사용시험지와 그의 제조방법 | |
| NO134009B (da) | ||
| JP2002000257A (ja) | ブドウ球菌検出用試験シート及び検出方法 | |
| WO1996040981A1 (en) | Testing device for determining the susceptibility of microorganisms to inhibitory agents | |
| PART | BP Dey, Richard H. Reamer and Sandra L. Kamosa | |
| Water | Gardnerella Selective Agar with 5% Human Blood Prepared Plated Media, Ready-to-Use | |
| JP2001136998A (ja) | 目的細菌の検出方法、サルモネラ検出用選択培地、及び半流動選択培地が充填された容器 | |
| MXPA96004494A (en) | A rapid microbiological test for the detection of antibacteria compounds |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |