DK149064B

DK149064B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af enkefalin-analoge tetrapeptidhydrazidderivater eller farmaceutisk acceptable salte deraf

Info

Publication number: DK149064B
Application number: DK178279A
Authority: DK
Inventors: Masahiko Fujino; Susumu Shinagawa; Kiyohisa Kawai
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date: 1978-05-02
Filing date: 1979-05-01
Publication date: 1986-01-06
Also published as: DK178279A; HU182051B; CA1144542A; DK149064C; DE2962325D1; EP0005248A3; EP0005248B1; EP0005248A2

Description

149066 i

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangs-måde til fremstilling af hidtil ukendte enkefalin-analoge tetrapeptidhydrazidderivater med den almene formel

OH

Λ

T O

S1 CiS1 R2 R3Th R4 \ I ? f i 2 / ^•N-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH„-CO-N-CH-CO-NH-N^ 1 2 3 4 .

hvor R , R , R og R har de i kravets indledning angivne betydninger, eller farmaceutisk acceptable salte deraf. Disse forbindelser har analgetisk. virkning.

Hughes et al har fra en grisehjerne isoleret et par pentapeptider, alment betegnet enkefalin, som giver morfino-mimetisk virkning ved intracerebral indgift, og har identificeret dem til at være henholdsvis H-^Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OH og H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-OH (Nature 258, side 577 (1975)).

Skønt disse forbindelser udviser en morfinmimetisk virkning når de indgives direkte ad den intracerebrale vej har de ingen analgetisk virkning ved intravenøs indgift.

Fra DK patentansøgningerne nr. 4245/77 og 3264/77 kendes forskellige enkefalin-analoge peptidderivater, hvoraf der som eksempler kan nævnes forbindelserne hhv. H-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-MeMet-NH2 og H-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-CH2-CH2~CH2-CH2-CH3· Ved en sammenlignende bestemmelse af den analgetiske virkning ved varm-plade prøve på mus har det vist sig at de her omhandlede forbindelser med formel I er overlegne med hensyn til analgetisk virkning ved subkutan indgift sammenlignet med de nævnte kendte forbindelser.

fi-Endorfin, som tydeligvis er afledt fra 3-lipotropins karboxyterminal giver dybe analgetiske virkninger ved intravenøs indgift, men da det er et polypeptid bestående af 31 aminosyregrupper, er det yderst vanskeligt at fremstille den ved en organisk kemisk proces, og derfor at gøre den tilgæn- 149064 2 gelig som et lægemiddelprodukt i kommerciel målestok. Det er forsøgt at tilvejebringe kommercielt fordelagtige forbindelser, som ville være stabile og i stand til at fremkalde en passende befrielse for smerte ved intravenøs eller subkutan indgift, og det har vist sig at visse tetrapeptidderivater er velegnet til dette formål. Denne opdagelse blev efterfulgt af yderligere research som har resulteret i den foreliggende opfindelse. Den foreliggende opfindelse angår således en analogifremgangsmåde til fremstilling af enkefalin-analoge tetrapeptidhydrazidderivater eller farmaceutisk acceptable salte deraf, hvilke derivater har den almene formel

OH

Φ Q

R1 <rH2 ?3f2 y ^N-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH0-CQ-N-CH-CO-NH-N^ ' h/

1 2 hvor R er hydrogen eller alkyl med 1-6 kulstofatomer, R

er hydrogen eller sidekæden i en af de i kravet angivne D- a-aminosyrer, R^ er hydrogen eller alkyl med 1-2 kulstofato-4 mer, R er. hydrogen, en ætoxykarbonylgruppe eller en mættet eller umættet ligekædet eller forgrenet alifatisk acylgruppe med 2-6 kulstofatomer som eventuelt kan være substitueret med hydroxy, amino, alkoxy med 1-4 kulstofatomer, halogen, oxo, al-kyltio med 1-4 kulstofatomer eller alkyltiooxyd med 1-4 kulstofatomer.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved at man fjerner beskyttelsesgruppen eller samtidig eller i vilkårlig rækkefølge beskyttelsesgrupperne fra en forbindelse . med den almene formel 149064 3 ΟΥ2 I I 11

V V

„1 CH, „2* R3 τ’" 2 r4' R I 2 f ΐ I /

^N-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH -CO-N-CH-CO-NH-1T

Yl/ 2 \Y3 hvor R1 er hydrogen eller en alkylgruppe med 1-6 kusltofatomer, 2' R er hydrogen eller sidekæden fra en af de i kravet nærmere . . 3 angivne D-a-ammosyrer som eventuelt kan være beskyttet, R er 4' hydrogen eller en alkylgruppe med 1-2 kul s tof atomer, R er hydrogen, en ætoxykarbonylgruppe eller en mættet eller umættet lige eller forgrenet alifatisk acylgruppe med 2-6 kulstofatomer som eventuelt kan være substitueret med hydroxy, amino, alkoxy med 1-4 kulstofatomer, halogen, oxo, alkyltio med 1-4 kulstofatomer eller alkyltiooxyd med 1-4 kulstofatomer og som kan være beskyt- 1 2 3 tet, Y er en beskyttende gruppe, Y og Y hver for sig er et hydrogenatom eller en beskyttende gruppe, hvorefter den vundne forbindelse om ønsket omdannes til et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

I nærværende beskrivelse og krav er aminosyrer og peptider betegnet enten ved de almindeligt inden for fagområdet anvendte forkortelser eller ved de forkortelser, der er vedtaget af IUPAC-IUB's Committee on Chemical Nomenclature. I det følgende angives nogle af disse forkortelser:

Ala : alanin

Gly : glycin

Leu : leucin

Phe : fenylalanin

MePhe : N-metyl-fenylalanin

Tyr : tyrosin

MeTyr : N-metyl-tyrosin

Gin : glutamin

Thr : treonin

Ser : serin

Nva : norvalin

Met(O) : metioninsulfoxyd 4 149064

MettOj) ϊ metioninsulfon

Lys s lysin

His : histidin

Glu : glutaminsyre

De forbindelser, som der gentagne gange refereres til, er i nærværende beskrivelse betegnet med følgende forkortelsers DCC s N,N'-dicyklohexylkarbodiimid HONB s N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dikarboximid ONB s HONB-ester Z : benzyloxykarbonyl OEt : ætylester ONP s p-nitrofenylester

Tos : tosyl BOC s t-butoxykarbonyl

Bu^ s t-butyl DMF : diraetylformamid

Bzl · s benzyl HOBT : N-hydroxybenzotriazol

MeOH s metylalkohol

AcOEt : ætylacetat TEA : triætylamin THF : tetrahydrofuran TFA : trifluoreddikesyre DOHA : dicyklohexylamin OCH^ : metylester

Cl-Z : p-klorbenzyloxykarbonyl

Overalt i nærværende beskrivelse, hvor en hvilken som helst aminosyre eller dens gruppe betegnes med en forkortelse på den ovenfor nævnte måde, repræsenterer den L-formen med mindre andet er angivet, mens D-formen af en hvilken som helst aminosyre eller aminosyregruppe specificeres med (D)— eller D-. -

Idet der nu henvises til de ovenfor viste almene formler I og II er alkylgruppen R1 en lige- kædet eller forgrenet alkylgruppe med 1-6 kulstofatomer, såsom metyl, ætyl, propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, s-butyl, t-butyl, n-pentyl, isopentyl, s-amyl, t-amyl, n-hexyl, isohexyl, 3-metylpentyl, neohexyl eller 2,3-dimetylbutyl.

2

Sidekæden af en D-a-aminosyre repræsenteret ved R eller 21 o R er sidekæden af en hvilken som helst sådan aminosyre valgt blandt 5 149064 D-leucinf D-alanin, D-metionin, D-metioninsulfoxyd, D-serin, D-treonin, D-fenylalanin, D-histidin, D-tryptofan, D-tyrosin, D-metioninsulfon, D-glutamin, D-asparagin, D-arginin, D-lysin, D-ornitin, D-glutaminsyre, D-asparaginsyre, D-cystein, S-metyl-D-cystein, S-æty1-D-cystein, S-metyl-D-cysteinsulfoxyd, S-ætyl-D-cysteinsulfoxyd, D-a-aminosmørsyre, D-valin, D-norvalin, D-norleucin, D-isoleucin og S-metyl-D-metionin.

— 3

Alkylgruppen R er en alkylgruppe med 1 eller 2 kulstofatomer, såsom metyl og ætyl.

Den mættede eller umættede og ligekædede eller forgre- 4 nede alifatiske acylgruppe R er en gruppe med 2-6 kulstofato- 4 mer, og R er særlig foretrukket en gruppe med 3-5 kulstofatomer.

Eksempler på mættede, ligekædede eller forgrenede alifatiske acylgrupper er acetyl, propionyl, isopropio-nyl, n-butyryl, isobutyryl, n-valeryl, isovaleryl, hexanoyl og isohexanoyl som en moderacylgruppe.

Eksempler på umættede, ligekædede eller forgrenede acylgrupper er krotonoyl, metakryl og akryl som moderacylgruppe.

Som eksempler på det halogenatom, som kan være til stede som en substituent på de ovenfor nævnte acylgrupper, kan nævnes fx klor, fluor eller brom. Den alkoxygruppe, som kan være substituent på acylgrupperne, er en alkoxygruppe med 1-4 kulstofatomer, såsom raetoxy, ætoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy eller t-butoxy. Særlig ønskelig er metoxy, ætoxy og n-propoxy.

Den alkyltiogruppe, som kan være substituent i acylgrupperne, er en alkyltiogruppe med 1-4 kulstofatomer, såsom metyltio, ætyltio, n-propyltio, isopropyltio, n-butyl-tio, isobutyltio og t-butyltio. Særligt ønskelige er metyltio, ætyltio, n-butyltio og isobutyltio.

Den alkyltiooxydgruppe, som kan være substituent i acylgruppen, er en alkyltiooxydgruppe med 1-4 kulstofatomer, såsom metyltiooxyd, ætyltiooxyd, n-propyl-tiooxyd, isopropyltiooxyd, n-butyltiooxyd, isobutyltiooxyd og t-butyltiooxyd. Særligt ønskelige er metyltiooxyd, ætyltiooxyd, n-butyltiooxyd og isobutyltiooxyd.

149064 6 4

De typiske eksempler på en substitueret acylgruppe R er hydroxyacetyl, 2-hydroxypropionyl, 3-hydroxypropionyl, 2- hydroxybutyryl, 3-hydroxybutyryl, 4-hydroxybutyryl, 2,3-dihydroxypropionyl, aminoacetyl, 2-aminopropionyl, 3-amino-propionyl, 4-aminobutyryl, metoxyacetyl, 3-metoxypropionyl, 3- ætoxypropionyl, 4-metoxybutyryl, kloracetyl, dikloracetyl, 2-klorpropionyl, 3-klorpropionyl, 2,3-diklorpropionyl, 2-klor-butyryl, 3-klorbutyryl, 4-klorbutyryl, 3-oxobutyryl, 3-oxo-valeryl, 4-oxovaleryl, metyltioacetyl, 3-metyltiopropionyl, ætyltioacetyl, 3-ætyltiopropionyl, metyltiooxydacetyl, 3-metyltiooxypropionyl, ætyltiooxydacetyl og 3-ætyltiooxyd-propionyl.

Som eksempler på beskyttelsesgruppen Y^ i de ovenfor viste almene formler kan nævnes benzyloxykarbonyl, t-butoxy- karbonyl, t-amyloxykarbonyl, isobornyloxykarbonyl, adamantyl- oxykarbonyl, klor- eller nitro-substitueret benzyloxykarbonyl, o-fenyltio og difenylfosfinmetyl.

2

Beskyttelsesgruppen Y kan fx være benzyl eller t-butyl.

2' 4»

Med hensyn til beskyttelsesgrupperne på R og R kan beskyttelsesgruppen til beskyttelse af hydroxygruppen og/eller karboxylgruppen på hver modergruppe fx være en af de grupper 2 der er nævnt for Y , og beskyttelsesgruppen for aminogruppen i hver modergruppe kan fx være en af dem der er nævnt for Y^.

3 1

Beskyttelsesgruppen Y kan være en af dem der er nævnt for Y .

Et tetrapeptidhydrazidderivat med den kemisk strukturelle formel II fremstilles ved at kondensere den N-terminale aminosyre eller et peptidfragment af tetrapeptidhydrazidet med 149064 7 formel II indeholdende den N-terminale aminosyre, med den resterende del af tetrapeptidhydrazidet med formel II. Således kan der fx anvendes følgende alternative metoder til dette formål.

Der kan anvendes metoderne beskrevet i M. Bodansky og M.A. Ondetti: Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966, F.M. Finn og K. Hofman: The Proteins, bind 2, redigeret af H. Nenrath, R.L. Hill, Academic Press Inc., New York, 1976, eller Nobuo Izumiya et al: Peptide Gosei (Peptide Synthesis), Maruzen Inc., 1975. Således kan fx nævnes azidmetoden, kloridmetoden, syre-anhydridmetoden, blandet syreanhydrid-metoden, DCC-metoden, aktiv ester-metoden, den metode som indebærer anvendelsen af Woodward's reagens K, karbodiimidazolmetoden, reduktions-oxydations-metoden og DCC/HONB-metoden. Der er tilfælde hvor man kan anvende NCA-metoden (N-karboxyanhydrid-metoden) dys. en metode som indebærer anvendelsen af en intramolekylær cyklisk karbonylforbindelse svarende til aminosyren uden anvendelse af en beskyttelsesgruppe.

Forud for kondensationsreaktionen kan man beskytte karboxyl- og/eller aminogrupper i udgangsmaterialet, som ikke skal deltage i reaktionen, eller de karboxyl- eller aminogrupper i udgangsmaterialet, som skal deltage i reaktionen, kan i forvejen aktiveres.

Beskyttelsesgrupperne til udgangsmaterialet kan være de ovenfor nævnte beskyttelsesgrupper. En karboxylgruppe i udgangsmaterialet kan også beskyttes i form af et metalsalt (fx natriumsalt eller kaliumsalt), et t-alkylaminsalt (fx triætylaminsalt eller N-metylmorfolinsalt) eller som en ester (fx metylester, ætylester, benzylester, p-nitrobenzylester, t-butylester eller t-amylester). Som eksempler på beskyttelsesgruppen til aminogruppen i udgangsmaterialet kan nævnes benzyloxykarbonyl, t-butoxykarbonyl og isobornyloxykarbonyl. Iminogruppen i histidin kan beskyttes med benzyl, tosyl, 2,4-dinitrofenyl, t-butyloxykarbonyl eller karbobenzoxy. Hydroxygruppen i tyrosin kan beskyttes i æterformen med benzyl eller t-butyl. Guanidingruppen i arginin kan beskyttes med nitro, tosyl, karbobenzoxy, isobornyloxykarbonyl eller adaman-tyloxykarbonyl.

Som eksempler på den aktiverede form af karboxylgruppen i udgangsmaterialet kan nævnes det tilsvarende syreanhydrid, 8 um* azid eller aktiv ester, dvs. estere med alkoholer, fx penta-klorfenol, 2,4,5-triklorfenol, 2,4-dinitrofenol, cyanmetylalkohol, p-nitrofenol, N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dikarboximid, N-hydroxysuccinimid, N-hydroxyftalimid og N-hydroxybenzo-triazol. Som et eksempel på den aktiverede form for amino-gruppen i udgangsmaterialet kan nævnes det tilsvarende fosforsyreamid.

Idet man antager at udgangsmaterialerne er A og B kan de ovenfor nævnte kombinationer af karboxylgrupper og amino-grupper i udgangsmaterialerne være som vist i følgende tabel.

Kombinations- Udgangsmaterialer

eksempler Å B

cooh nh2 cooh nh2 1X fri beskyttet beskyttet fri 2 aktiveret beskyttet fri fri 3 fri beskyttet beskyttet aktiveret I det med en asterisk angivne tilfælde er der fortrinsvis et dehydreringsmiddel (fx et karbodiimidreagens såsom dicyklohexylkarbodiimid) til stede i reaktionssystemet.

Reaktionen kan gennemføres i et opløsningsmiddel. Dette opløsningsmiddel vælges blandt de opløsningsmidler som hidtil er kendte som velegnede til peptidsyntesereaktioner. Således kan der fx nævnes vandfrit eller vandig dimetylformamid, dimetylsulfoxyd, pyridin, kloroform, dioxan, diklormetan og tetrahydrofuran såvel som passende blandinger af sådanne opløsningsmidler.

Reaktionstemperaturen vælges inden for det område som hidtil har været kendt som velegnet til peptidsyntesereaktioner og den kan normalt ligge fra mellem ca. -20°C til ca.

30°C. Prækursorforbindelserne (beskyttede peptider) for de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser kan let fremstilles ved synteseprocesser i fast fase.

Den således vundne beskyttede forbindelse med formel II underkastes en afbeskyttelsesreaktion hvor de beskyttende grupper fjernes. Idet afbeskyttelsesreaktionen afhænger af den type beskyttelsesgruppe der er involveret, foretrækkes det til kommercielle formål at denne reaktion er en sådan som fjerner alle beskyttelsesgrupperne i et enkelt trin uden at 149064 9 påvirke peptidbindingerne. Derfor udvælges beskyttelsesgrupperne under hensyntagen til denne mulighed. I tabel 1 vises nogle kombinationer af forskellige typer beskyttelsesgrupper og typiske afbeskyttelsesbetingelser.

Tabel 1 N. Beskyttelses- Beskyt- Beskyt- gruppe telses- telses- gruppe gruppe

Betingel- på på ser for l 2 2' 4» -¾

fjernelse_Y Y R__IT__Y

i^/katalysator Z Bzl - - Z

H2/katalysator Z - -

CP3COOH BOC Bufc Bufc But BOC

2N-HC1 fBOC - -

(i eddikesyre) LBOC - - BOC

CH3S03H Z - BOC

Idet tabel 1 er en liste over nogle afbeskyttelsesreak-tioner, såsom katalytisk reduktion indebærende anvendelsen af palladium-sort, palladium-på-kulstof, platin eller lignende katalysator og syrehydrolyse med trifluoreddikesyre, fortyndet saltsyre eller metansulfonsyre, kan der også nævnes andre metoder såsom reduktion med metallisk natrium i flydende ammoniak og syrehydrolyse under anvendelse af trifluorme-tansulfonsyre, en opløsning af hydrogenbromid i iseddikesyre, hydrogenfluorid eller lignende. Disse reaktioner gennemføres sædvanligvis ved passende temperaturer fra -20°C til 40°C, og i tilfælde af syrehydrolyse er tilsætning af en kation-accep-tor såsom anisol, fenol eller tioanisol*. fordelagtig.

Når det ønskes at forbindelsen med formel I har en D-metioninsulfoxyd som D-a-aminosyrekomponent kan den nødvendige indføring af oxyd gennemføres på et hvilket som helst mellemprodukt som indeholder en metioningruppe i forløbet af syntesen af udgangsforbindelsen med formlen II.

Fx (1) anvendes D-metioninsulfoxyd som udgangsforbindelse, eller (2) et mellemprodukt til fremstilling af en forbindelse med formlen 149064 ίο

OH

Λ Γ A

I I I III

u fi X CH0 3 CH0 ! I ί I 4 R-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH^-CO-N-CH-CO-NH-NH-R* 1 3 4 (D) hvor R, RJ og Br har de tidligere angivne betydninger, oxyderes, og derpå underkastes den resulterende forbindelse peptidsyntese.

Som eksempler på oxydationsmidler der kan anvendes til oxydationen kan nævnes hydrogenperoxyd, natriumperklorat, na-triumperborat, kloramin T,tribromkresol, N-klorsuccinimid og hydrogenauriklorid.

Mængden af oxydationsmidlet er sædvanligvis ikke under ca. 1 ækvivalent, fortrinsvis ca. 1-10 ækvivalenter af forbindelsen med formlen III.

Det opløsningsmiddel der kan anvendes til denne reaktion er fx vand, eddikesyre, alkohol (fx metylalkohol eller ætylalkohol) eller blandinger heraf.

Reaktionstemperaturen er sædvanligvis -20°C til 40°C.

Efter at reaktionen er tilendebragt isoleres det således fremstillede peptidderivat med formel I ved hjælp af metoder som er kendte til separation af peptidderivater, dvs. ved ekstraktion, fordeling, genudfældelse, omkrystallisation eller søjlekromatografi.

Peptidet med formel I kan vindes i form af et salt, fx et organisk syresalt eller et uorganisk syresalt, fortrinsvis et acetat, citrat, tartrat, hydrogenklorid eller sulfat.

I det følgende angives resultater af farmakologiske ' undersøgelser med de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser med formel I.

1Λ906Λ 11

Forsøg 1 Varmplade-prøye;

Der anvendtes Ta:CF^-mus der var fire uger gamle og med legemsvægt 18-22 g. Når et forsøgsdyr anbringes på en varm kobberplade som holdes ved 55 + 0,5°C viser den bestemte reaktioner på varmestimuleringen såsom at det slikker sålerne på bagpoterne eller springer op for at undslippe. De mus som viste sådanne reaktioner inden 20 sekunder efter anbringelsen på den varme plade blev udvalgt i grupper på 10 , dyr. Det under afprøvning værende lægemiddel indsprøjtedes intravenøst eller subkutant og efter 5, 10, 20, 30, 45 og 60 minutter måltes deres reaktionstider og blev sammenlignet med reaktionstiderne for ubehandlede dyr (kontrolgrupper).

For at undgå ureversible beskadigelser af sålerne valgtes 60 sekunder som den maximale prøvetid. Indexerne for analge-tisk virkning (forlængelsesgrad for reaktion i %) bestemtes ved hjælp af følgende ligning, og der udførtes t-test til bedømmelse af lægemidlets effektivitet.

Reaktionstid efter _ Reaktionstid før indgift (sek)_ indgift (sek) χ 60 - reaktionstid før indgift (sek)

De ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser med den almene formel I i doser på ikke over 2 mg/kg fortrinsvis 1 mg/kg.eller 200 yg/kg udviste ved den ovenfor beskrevne prøve analgetiske virkninger svarende til en forlængelsesgrad på ikke under 40% med en top som fremkommer ved 5-60 minutter, fortrinsvis 5-30 eller 5-20 minutter, og nogle særligt effektive typer af forbindelser med den almene formel I udviste udtalt smertelindring selv i små doser som ikke overskred 0,5 mg/kg, fortrinsvis ikke overskridende 0,1 mg/kg eller ikke over 20 yg/kg.

Som nævnt ovenfor giver de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser med den almene formel I en klar analgetisk virkning som vist ved resultater fra varmplade-prøver med mus, ved dosisniveauer mellem ca. 0,05-10 mg, fortrinsvis ca. 0,05 mg til ca. 2 mg/kg, eller ca. 0,2-1 mg/kg, og i betragtning af den overlegne effektivitet i sammenligning med B-endorfin er 149064 12 de omhandlede forbindelser værdifulde som analgetiske lægemidler. .

Forsøg 2

Der er foretaget et biologisk sammenligningsforsøg med undersøgelse af følgende forbindelser: A. H-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH2-CH3 B. Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH3 C. H-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-MeMet-NE^ D. Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3

Blandt disse forbindelser er forbindelse A og B fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, mens forbindelse C er kendt fra dansk patentansøgning nr. 4245/77 og forbindelse D er kendt fra dansk patentansøgning nr. 3264/77.

Analgetisk virkning: Varm-plade-prøve.

Der anvendtes 4 uger gamle Ta:CF^-mus med legemsvægt 18-22 g. Når dyrene anbringes på en varm kobberplade holdt på 55 + 0,5°C udviser de visse reaktioner på varmestimuleringen, såsom slikning af bagpoternes fodsåler eller de springer op for at slippe bort. De.mus, der viser en sådan reaktion inden for 20 sekunder efter anbringelse på den varme plade, blev udvalgt i grupper på 10 dyr. Det under afprøvning værende lægemiddel indsprøjtedes subkutant og efter 10, 30 og 60 minutter måltes deres reaktionstider og disse blev sammenlignet med reaktionstiderne for ubehandlede dyr (kontrolgrupper). For at undgå uoprettelige skader på fodsålerne valgtes 60 sekunder som den maksimale prøvetid. Indekserne for analgetisk virkning (reaktionsforlængelsesgrad, %) bestemtes ved hjælp af følgende ligning og der blev foretaget t-test til bedømmelse af det pågældende lægemiddels effektivitet.

reaktionstid for reaktionstid for prøvegruppe (sek.) - kontrolgruppe (sek.) χ 60 - reaktionstid for kontrolgruppe (sek.) 13 U9064

Resultaterne er vist i følgende tabel:

Dosis, s.c. Reaktionsforlængelsesgrad, %

Forbindelse (mg/kg) 10 min 30 min 60 min _ _ 37,3XX 25,2 -0,9 __;__2__79,4XXX 65, Qxxx 29,8 B__1__33,6_40,4X_9,7 C 2 - -2,0 4,3

__10__:_43,9X_28,6X

D 1 4,5 4,9 -8,4 5 30,8 31,7 -14,4 10 14,7 -12,2 -5,3 x: P< 0,05, xx: P< 0,01, xxx: P< 0,001 (P: sandsynlighed)

Det fremgår af de foretagne forsøg, at de omhandlede forbindelser er værdifulde som analgetiske lægemidler.

14 14908«

Derfor kan forbindelser med den almene formel I og farmakologisk acceptable syreadditionssalte deraf fx anvendes som analgetika til lindring af smerter, indbefattet smerten på et fremskredent stadium af cancer og som lægemidler til behandling af gastrointestinale sygdomme såsom diarré hos pattedyr såsom mus, rotter, kaniner, hunde, aber og mennesker, eller som lægemidler til behandling af mentale sygdomme.

De omhandlede forbindelser med den almene formel I såvel som syreadditionssalte deraf, som fremstilles ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, har yderst lav toxicitet idet man ikke iagttog dødsfald selv ved 200 mg/kg, som er en dosis der ligger langt ud over den effektive dosis.

Den omhandlede forbindelse kan indgives i fri form eller som et syreadditionssalt deraf. X tilfælde af den frie forbindelse med formlen I er den rigtige dosis sædvanligvis i området fra 0,01-50 mg/kg, fortrinsvis 0,05 mg til 30 mg/kg eller 0,1-20 mg/kg. Dosering af syreadditionssaltet med formel I kan også sædvanligvis ligge fra 0,01-50 mg/kg, fortrinsvis 0,05 mg til 30 mg/kg eller 0,1-20 mg/kg ligesom for den frie forbindelse med formel I. Den omhandlede forbindelse eller et salt deraf indgives hovedsagelig af andre veje end den orale, fx intravenøst, subkutant eller rektalt, selv om forbindelserne kan indgives oralt i afhængighed af betingelserne. Særligt nyttig er kontinuerlig infusion eller inddrypning i løbet af en kirurgisk operation.

Anvendelige doseringsformer indbefatter injektionsopløsninger, suppositorier, pulvere osv. selv om også præparationer til inddrypning er nyttige. Idet de omhandlede forbindelser er stabile kan de lagres i opløst tilstand i fysiologisk saltvand, men de kan også tilvejebringes i form af et frysetørret ampulpræparat sammensat med mannitol eller sorbitol til opløsning og anvendelse på stedet.

I tilfælde af intravenøs og subkutant indsprøjtning ligger koncentrationerne fortrinsvis inden for området fra 1-25 mg/ml, fortrinsvis 10-25 mg/ml eller 10-20 mg/ml i fysiologisk saltvand.

15 1A 9 O 6 Λ

De omhandlede forbindelser med formel I har også pro-laktin-virkninger eller væksthormon-udløsende-virkning, in-hiberende virkning på tyndtarmens motoriske aktivitet og modulerende virkning på centralnervesystemet.

I de følgende eksempler beskrives fremgangsmåden ifølge opfindelsen i yderligere detaljer. I disse anvendes "Se-phadex" ®LH-20 til rensning af slutprodukterne ("Sephadex" ® er et i Danmark indregistreret varemærke) og renheden af hver af de fremstillede forbindelser afprøvedes ved tyndtlagskro- matografi på kiselgel 60F-254 ("Merck" ®J under anvendelse af følgende opløsningsmiddelsystemer:

Rf: kloroform/metanol/eddikesyre i forholdet 9:1:0,5.

R^: ætylacetat/pyridirf/eddikesyre/vand i forholdet 60:20:6:10.

3 R^: n-butanol/eddikesyre/vand i forholdet 4:1:1.

Referenceeksempel 1

Z-Tyr-(Dj-Leu-Gly-OH

(I) Z-(D)-LeU-Gly-OH

I 20 ml vand opløses 3,3 g glycin og der tilsættes 3,4 g natriumhydrogenkarbonat. Derpå tilsættes under omrøring en opløsning (100 ml) af 17,0 g (40 mmol) Z-(D)-Leu-ONB i DMF. Blandingen omrøres ved s tuetemperatur natten over. Næste morgen sidestilleres DMF og 200 ml AcOEt og 50 ml IN vandig saltsyre sættes til remanensen. AcOEt-laget vaskes med vand og tørres over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres derpå og remanensen krystalliseres med petroleumsæter. Omkrystallisation fra AcOEt/petroleumsæter giver 9,8 g (75%) af ' Λ»! den ovenfor angivne forbindelse med smp. 110-111°C, [a]^ = +24,3° (c = 0,1, MeOH), Rf1 = 0,42.

Beregnet for ci6H22®5^2: C 59,61 H 6,88 N 8,69 Fundet: C 59,59 H 6,85 N 8,74%.

16 149084

(II) Z-Tyr-(D)-Leu-Gly-OH

I 100 ml MeOH opløses 7,0 g (22 mmol) Z-(D)-Leu-Gly-OH og katalytisk reduktion gennemføres med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra, MéOH afdestilleres og remanensen suspenderes i THF/vand (100 ml/10 ml). Suspensionen afkøles og opløses ved dråbevis tilsætning af 3 ml TEA.

Til denne opløsning sættes 10,5 g Z-Tyr-ONB og blandingen omrøres ved stuetemperatur natten over. THF afdestilleres og til remanensen sættes 200 ml AcOEt og 25 ml IN vandig saltsyre. AcOEt-laget vaskes med vand og tørres over vandfrit natriumsulfat. Derefter afdestilleres AcOEt og remanensen behandles med diætylæter og omkrystalliseres fra AcOEt. 8,2 g (78%), Smp. 179-181°C, [a]27 = +45,2° (c = 0,5, MeOH),

Rf1 = 0,38.

Beregnet for C25H3l°7N3: c 61,68 H 6,51 N 8,64 Fundet: C 61,84 H 6,44 N 8,66%.

Eksempel 1 Η-Tyr- (D) -Beu-Gly-Phe-NH-NH,, (I) Z-Tyr-(D)-Beu-Gly-Phe-OMe I 50 ml THF opløses 1,45 g Z-Tyr-(D)-Leu-Gly-OH og 590 mg HONB, og under afkøling til 0°C tilsættes 680 mg DCC Og blandingen omrøres i 4 timer. Det som biprodukt dannede urinstofderivat filtreres fra, der sættes 750 mg H-Phe-OMe-hydroklorid og 0,5 ml TEA til filtratet og blandingen omrøres ved stuetemperatur natten over. Derpå afdestilleres THF, remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt. og ekstrakten vaskes med 5%s vandigt natriumhydrogenkarbonat og tørres over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen renses ved udfældning med petroleumsæter og omkrystalliseres fra AcOEt/diætylæter. 1,73 g (89%), Smp. 100-101°C, [a]22 = -2,6° (c = 0,5, DMF), Rf1 = 0,68.

Beregnet for C35H42°8N4: c 65/00 H 6,55 N 8,66 Fundet: C 64,97 H 6,95 N 8,62%.

17

14906A

(II) 2-Tyr-(D)-Leu-Gly-Phe-NH-NEU

Til 5 ml DMF sættes 517 mg Z-Tyr-'(D) -Leu-Gly-Phe-OMe og efter tilsætning af 0,1 ml N^-NH^/^O får opløsningen lov til at stå ved stuetemperatur i 3 dage. Derefter afdestilleres DMF og remanensen behandles med vand, ved filtrering og renses ved genudfældning med MeOH/diætylæter. 410 mg (80%), . smp. 176-177°C (sønderdeling), [a]22 = -22,7° (c = 0,4, DMF),

Rf1 = 0,20.

Beregnet for C^gHg^O^Ng, 1/2^0: C 62,27 H 6,45 N 12,82 Fundet: C 62,03 H 6,57 N 12,64%.

(III) Η-Tyr- (D)-Leu-Gly-Phe-NH-NH,, I 50 ml MeOH opløses 350 mg Z-Tyr-(D)-Leu-Gly-Phe-NH-NH2 og efter tilsætning af 0,1 ml eddikesyre gennemføres der katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra, filtratet koncentreres og remanensen opløses i en lille mængde IN vandig eddikesyre og anbringes på en kolonne af "Sephadex" ®LH-20 (2,5 x 120 cm). Der gennemføres eluering med IN vandig eddikesyre og fraktioner fra 22 320-340 ml opsamles og frysetørres. 21Q mg (60%), [a]n = +22,6° (c = 0,38, MeOH), Rf^ = 0,34, aminosyreanalyse (syre-hydrolysat): Gly 1,00, Leu 1,00, Tyr 0,90, Phe 1,02, middel-genudvindelsesgrad 70%.

Eksempel 2 ™ Hi Μ Μ M MK ψΒ Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH^

(I) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-OH

I 200 ml MeOH opløses 8,2 g Z-(D)-Ala-Gly-OBut og der gennemføres katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator.

Katalysatoren filtreres fra, MeOH afdestilleres og remanensen opløstes i 7Q ml trifluoreddikesyre og henstår ved stuetemperatur i 40 minutter. Trifluoreddikesyren afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter og opsamles ved filtrering. Det således vundne pulver suspenderes i 50 ml vand og opløses ved tilsætning af 4,7 g natriumhydrogenkarbonat. Til denne opløsning sættes 100 ml af en THF-opløsning inde- 18

ΙΑ906A

holdende 13,3 g (28 mmol) Z-Tyr-ONB og blandingen omrøres ved stuetemperatur natten over. Reaktionsblandingen neutraliseres med IN saltsyre og ekstraheres med 150 ml AcOEt. Ekstrakten vaskes med vand og tørres oyer vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen behandles med diætyl-æter, opsamles ved filtrering og omkrystalliseres fra AcOEt.

8,5 g (69%), smp. 184-185°C, [a]22 = +25,6° (c = 0,5, MeOH),

Rf1 = 0,16.

Beregnet for C22H25°7N3: c 59,58 H 5,68 N 9,48 Fundet: C 59,29 H 5,81 N 9,32%.

(II) Z-Phe-NHNH-BOC

I 100 ml THF opløses 18,4 g Z-Phe-ONB og 5,3 g NH2-NH-B0C. Opløsningen omrøres ved stuetemperatur natten over. Derpå afdestilleres THF, remanensen ekstraheres med 150 ml AcOEt og ekstrakten vaskes med vandig citronsyre og 5%s vandigt natriumhydrogenkarbonat, tørres over Na2S04 og destilleres til fjernelse af AcOEt. Remanensen behandles med petroleumsæter, opsamles ved filtrering og omkrystalliseres fra AcOEt/petroleumsæter. 13,2 g (80%), smp. 107-109°C, [a]J9 = -23,4° (c « 0,5, MeOH), Rf1 = 0,71.

Beregnet for C22H27°5N3: C ^3,90 H 6,58 N 10,16 Fundet: C 64,18 H 6,61 N 9,88%.

(III) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-BQC

I 100 ml MeOH opløses 3,6 g Z-Phe-NH-NH-BOC og efter tilsætning af 0,5 ml eddikesyre gennemføres der katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra, 10 ml DMF sættes til filtratet og MeOH afdestilleres. Ved siden af opløses 3,5 g Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-OH og 1,56 g HONB i 50 ml THF og under afkøling til 0°C tilsættes 1,80 g DCC. Blandingen omrøres ved 0°C i 6 timer. De uopløselige bestanddele filtreres fra, filtratet kombineres med amin-komponenten og blandingen omrøres ved stuetemperatur natten over. THF afdestilleres, remanensen ekstraheres med 150 ml AcOEt og ekstrakten vaskes med 5%s vandigt natriumhydrogenkarbonat og med vandig citronsyre og tørres over vandfrit na- 19 1490 6 å triumsulfat. Derpå afdestilleres AcOEt og remanensen behandles med petroleumsæter og omkrystalliseres fra AcOEt/petro-leumsæter. 3,7 g (67%), smp. 143-146°C (sønderdeling), [alp2 « -25,4° (c = 0,5, DMF), Rf1 = 0,38.

Beregnet for C36H4409Ng: C 61,35 H 6,29 N 11,93 Fundets C 61,05 H 6,42 N 11,58%.

(IV) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH^ I 30 ml trifluoreddikesyre opløses 3,5 g Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-BOC og opløsningen får lov at stå ved stuetemperatur i 20 minutter. Trifluoreddikesyren destilleres fra og remanensen behandles med diætylæter og opsamles ved filtrering. Det resulterende pulver opløses i 10 ml DMF og omrøres med 1,4 ml TEA. DMF sidestilleres og remanensen behandles med vand, opsamles ved filtrering og renses ved genudfældning med metanol/diætylæter. 2,8 g (96%), smp. 182-184°C (sønderdeling), [a]22 = -23,0° (c = 0,5, DMF), Rf1 = 0,17.

Beregnet for C3lH3607Ng: C 61,58 H 6,00 N 13,90 Fundet: C 61,32 H 5,91 N 13,72%.

(V) Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH^ I 50 ml MeOH opløses 250 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH2 og efter tilsætning af 0,1 ml eddikesyre gennemføres katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra, filtratet opløses i en lille mængde IN vandig eddikesyre og opløsningen anbringes på en kolonne med VSephadex" R LH-20 (2,5 x 120 cm). Der gennemføres elue-ring med IN vandig eddikesyre og fraktionerne fra 310 ml til 335 ml forenes og frysetørres. 95 mg (38%), tot]22 = +'20,5° 2 ^ (c = 0,2, MeOH), Rf =0,22, aminosyreanalyse (hydrolyseret med HCl): Gly 1,00, Ala 1,05, Tyr 0,89, Phe 1,01, middelgen-udvindingsgrad 81%.

Eksempel 3 20 149064 Η-Tyr- (D) -Leu-Gly-Phe-NH-TS[H-CO-CH3 (I) Z-Phe-NH-MH-CO-CH^ I 50 ml THF opløses 2,03 g (6,5 mmol) Z-Phe-NH-N^ °? under afkøling tilsættes dråbevis 1,4 ml eddikesyreanhydrid og 0,9 ml TEA. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Krystallerne opsamles ved filtrering, vaskes med diætylæter og omkrystalliseres fra AcOEt. 1,9 g (83%), smp. 205-206°C.

[a]p3 = -16,4° (c = 0,5, DMF), Rf1 = 0,60.

Beregnet for C2qH23°5N3: C 62,32 H 6,02 N 10,90 Fundet: C 62,38 H 6,09 N 10,49%.

(IX) Z-Tyr-(D)-Leu-Gly-Phe-NH-MH-CO-CH^ I 5Q ml MeOH opløses 700 mg Z-Phe-NH-NH-CO-CH^ og efter tilsætning af 0,2 ml eddikesyre gennemføres der katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtereres fra, MeOH afdestilleres og remanensen opløses i 20 ml THF. Ved siden af opløses 680 mg (1,4 mmol) Z-Tyr-(D)-Leu-Gly-OH og 300 mg HONB i 20 ml THF, og efter afkøling tilsættes 330 mg DCC og der omrøres ved 0°C i 5 timer. De uopløselige bestanddele filtreres fra, filtratet forenes med den tidligere fremstillede aminkomponent og blandingen omrøres ved stuetemperatur natten over. THF afdestilleres og remanensen behandles med AcOEt, opsamles ved filtrering og renses ved genudfældning med metanol/AcOEt.0,71 g (74%) , smp. 184-185°C, [a]p3 = -13,4° (c = 0,5, DMF), Rf1 = 0,28.

Beregnet for C36H44°8N6: C 62,77 H 6,44 N 12,20 Fundet: C 62,52 H 6,81 N 12,04%.

(III) Η-Tyr-(D)-Leu-Gly—Phe-NH-NH-CQ-CH^ I 50 ml MeOH opløses 500 ml Z-Tyr-(D)-Leu-Gly-Phe-NH- NH-CO-CH^ og efter tilsætning af 1 ml eddikesyre gennemføres der katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator.

Katalysatoren filtreres fra, opløsningsmidlet afdestilleres, remanensen behandles med vand og de uopløselige bestanddele filtreres fra. Filtratet frysetørres og det resulterende ..

S) pulver anbringes på en kolonne af "Sephadex" LH-20 (2,5 x .21 14*064 120 cm).

Der gennemføres eluering med IN vandig eddikesyre og fraktionerne fra 320 ml til 345 ml forenes og frysetørres.

245 mg (50%), [al^3- +26,7° (c = 0,3, MeOH), Rf2 = 0,41, aminosyreanalyse (hydrolyseret med HCl): Gly 1,00, Leu 1,05,

Tyr 0,93, Phe 1,02, middelgenudvindingsgrad 82%.

Eksempel 4 Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-(CH;, )j-CH3 (I) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-(C&Jg-CHj I 5 ml DMF opløses 604 mg (1 mmol) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH2, 297 mg HOBT og 0,2 ml CH3(CH2)3COOH. Efter afkøling af opløsningen til 0°C tilsættes der 454 mg DCC og blandingen omrøres ved 0°C i 4 timer og ved stuetemperatur natten over.

De uopløselige bestanddele filtreres fra, DMF afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt, vaskes med 5%s vandigt natriumhydrogenkarbonat og tørres over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og den gelagtige remanens behandles med diætylæter, opsamles ved filtrering og renses ved genudfældning med metanol/AcOEt. 480 mg (70%), smp. 178-179°C, [a]23 = -22,4° (c = 0,16, DMF), Rf1 0,46.

Beregnet for C36H44G8N6:C 62,77 H 6,44 N 12,20 Fundet: C 62,71 H 6,77 N 11,98%.

(II) Η-Tyr- (D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO- (ClhJ j-CHj I 50 ml MeOH opløses 430 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH—CO—(CH2)3~CH^ og efter tilsætning af 1 ml eddikesyre gennemføres der katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra, MeOH afdestilleres og remanensen opløses i en lille mængde IN vandig eddikesyre og anbringes på en kolonne af "Sephadex" ®LH-20 (2,5 x 120 cm) idet der gennemføres eluering med IN vandig eddikesyre. Fraktionerne fra 325 mg til 340 ml forenes og frysetørres. 240 mg (56%), [ot]23 = +24,5° (c = 0,2, MeOH), Rf2 » 0,47, aminosyreanalyse (hydrolyseret med HCl): Gly 1,00, Ala 0,95, Tyr 0,88,

Phe, 1,01, middelgenudvindingsgrad 82%.

Eksempel 5 22 149064 Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH^-CH(CH^)2 (I) Z-Tyr- (D) -Ala-Gly-Phe-HH-NH-CO-CH^-CH(CH-,) ^

Den i eksempel 4-(i) beskrevne procedure gentages med den forskel at der i stedet anvendes 530 mg (0,88 mmol) Z-Tyr- (D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH2 og 0,15 ml (CH3)2CH-CH2“COOH. 320 mg (53%), smp. 228-230°C, [a]23 = -23,9° (c = 0,28, DMF), Rf1 = 0,46.

Beregnet for C3gH440gNg! C 62,77 H 6,44 N 12,20 Fundet: C 62,58 H 6,35 N 11,95%.

(II) Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-lrø-NH-CO-CH.^-CHCCH.^)2

Den i eksempel 4-(II) beskrevne procedure gentages med den forskel at der anvendes 170 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH(CH3)2. 105 mg (62%), [a]23 = +21,1° (c = 0,18, MeOH), Rf3 = 0,49, aminosyreanalyse (hydrolyseret med HC1),

Gly 1,00, Ala 1,02, Tyr 0,96, Phe 1,02, middelgenudvindings-grad 80%.

Eksempel 6 Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-(CH2)2~Cl (I) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-(CH2)2~C1

Den i eksempel 4-(l) beskrevne procedure gentages med den forskel at der anvendes 513 mg (0,85 mmol) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH2 og 120 mg Cl-CH2-CH2-COOH. 360 mg (59%), smp. 169-170°C, [a]23 = -21,1° (c = 0,37, DMF).

Beregnet for C34H39°8N6'C1: C 58,74 H 5,65 N 12,09 Cl 5,10 Fundet: C 58,61 H 5,59 N 11,81 Cl 4,92%.

(II) Η-Tyr- (D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO- (CH^-Cl

Den i eksempel 4-(II) beskrevne fremgangsmåde gentages bortset fra at der anvendes 250 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO- (CH2)T2-C1. 150 mg (60%), [alp3 = +20,5° (c = 0,2, MeOH),

Rf2 = 0,42, aminosyreanalyse (syrehydrolysat): Gly 1,01, Ala 0,95, Tyr 0,88, Phe 0,98, middelgenudvindingsgrad 79%.

Eksempel 7 149064 23

Η-Tyr-(D)-Åla-Glv-Phe-MH-MH-CO-CH2-CH2-OH

(I) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-MH-NH-CQ-CH^CHv.-OH

Den i eksempel 4-(I) beskrevne fremgangsmåde gentages bortset fra at der anvendes 540 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH2 og 0,12 ml HO-CH2-CH2-COOH. 320 mg (53%), smp. 178-179°C, (a]p3 =-22,3° (c = 0,3, DMF), Rf1 = 0,10.

Beregnet for C^H^gOgNgi C 60,34 H 5,96 N 12,42 Fundet: C 59,98 H 5,85 N 12,18%.

(II) Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH2-OH

Den i eksempel 4-(II) beskrevne fremgangsmåde gentages bortset fra at der anvendes 250 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH2-OH. Udbytte 100 mg (40%), [a]23 = +19,5° (c = 0,21, MeOH), Rf2 = 0,32, aminosyreanalyse (syrehydrolysat):

Gly 1,00, Ala 1,05, Tyr 0,92, Phe 1,00, middelgenudvindings-grad 79%.

Eksempel 8 Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH3

(I) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH,J

Den i eksempel 4-(I) beskrevne fremgangsmåde gentages bortset fra at der anvendes 495 mg (0,82 mmol) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH2 og 0,1 ml CH3-CH2-COOH. 350 mg (65%), smp.

190-191°C, [a]23 = -20,5° (c = 0,3, DMF), Rf1 = 0,26.

Beregnet for C34H4ø°8N6: C 61'80 h 6/1° N 12,72 Fundet: C 61,53 H 6,02 N 12,65%.

(IX) Η-Tyr-(D) -Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH3

Den i eksempel 4-(11) beskrevne fremgangsmåde gentages med den undtagelse at der anvendes 250 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH3. 130 mg (52%), [a]23 = +25,5° (c = 0,23,

MeOH), Rf2 = 0,42, aminosyreanalyse (syrehydrolysat): Gly 1,00, Ala 0,95, Phe 1,01, Tyr 0,95, middelgenudvindingsgrad 81%.

Eksempel 9 24 149064 Η-Tyr- (D) ~Ala-Glv-I>h.é-NH-UH-CO~CH2-CH2^H2

(I) Z-Tyr- (D) -Ala-Gly*Phe-HH-NH-C0-CH2-CH2-NH-Z

I 10 ml DMF opløses 495 mg (0,82 mmol) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH2 og 390 mg Ζ-β-Ala-ONB. Efter afkøling af opløsningen tilsættes der 0,14 ml TEA og blandingen omrøres ved stuetemperatur natten over. DMF afdestilleres, remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt, vaskes med 5%s vandigt natrium-hydrogenkarbonat og tørres over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter, opsamles ved filtrering og renses ved genudfældning med metanol/

AcOEt. 370 mg (56%), smp, 231-233°C, [<x]^3 = -21,5° (c = 0,27, DMF), Rf1 = 0,26.

Beregnet for C^H^O^qN^ : C 62,28 H 5,85 N 12,10 Fundet: C 61,99 H 5,94 N 11,95%.

(II) Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH^CH^HH,,

Den i eksempel 4-(II) beskrevne fremgangsmåde gentages bortset fra at der anvendes 280 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH2-NH-Z. 160 mg (61%), [a]J3 = +16,7° (c = 0,27,

MeOH), Rf3 = 0,07, aminosyreanalyse: Gly 1,00, Ala 0,95, 3-Ala 0,99, Tyr 0,89, Phe 1,00, middelgenudvindingsgrad 79%.

Eksempel 10 Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-(CH.Jj-CHj (D Z-Phe-MH-NH-CO-CH2-CH2-CH:i I 30 ml DMF opløses 2,5 g (8 mmol) Z-Phe-NH-NH2 og under afkøling tilsættes 0,9 ml CH2CH2CH2C0C1 og 1,1 ml TEA. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 5 timer. Til denne reaktionsblanding sættes vand og de resulterende krystaller opsamles ved filtrering, tørres og omkrystalliseres fra AcOEt/ petroleumsæter. 2,6 g (85%), smp. 150-156°C, [a]p3 = -27,2° (c = 0,5, MeOH), Rf1 = 0,71.

Beregnet for C2iH25°4N3: C 65,46 H 6,48 N 10,87 Fundet: C 65,78 H 6,57 N 10,96%.

149064 25 (II) Z-Tyr- (D) -Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO^-C^^CH^CHj I 50 ml MeOH opløses 505 mg Z-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH2~CH3 og der gennemføres katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra, MeOH afdestilleres og remanensen opløses i 20 ml THF. Ved siden af opløses 530 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-OH og 237 mg HONB i 50 ml THF og under afkøling til 0°C tilsættes 271 mg DCC og blandingen omrøres ved 0°C i 4 timer. Det som biprodukt dannede urinstofderivat filtreres fra, filtratet forenes med den ovenfor fremstillede aminkomponent og blandingen omrøres ved stuetemperatur natten over.

THF afdestilleres derpå, remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt og ekstrakten vaskes med 5%s vandigt natriumhy-drogenkarbonat og tørres over vandfrit natriumsulfat. Derpå afdestillerers AcOEt og remanensen behandles med diætylæter, opsamles ved filtrering og renses ved genudfældning med AcOEt.

420 mg (50%), smp. 203-206°C,[a]23 = -0,4° (c « 0,5, MeOH),

Rf1 - 0,28.

Beregnet for C35H42OgN6: C 62,30 H 6,27 N 12,46 Fundet: C 62,60 H 6,52 N 12,18%.

(III) Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH^CK^CHj I 50 ml MeOH opløses 250 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-C^-C^-CHj og efter tilsætning af 0,2 ml eddikesyre gennemføres der katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra, filtratet koncentreres og remanensen opløses i en lille mængde IN vandig eddikesyre og anbringes på en kolonne af "Sephadex" ®LH-20 (2,5 x 120 cm). Der gennemføres eluering med IN vandig eddikesyre og fraktionerne fra 320 ml til 340 ml forenes og frysetørres. 110 mg (44%), [a]23 = +23,2° (c » 0,25, MeOH), Rf2 = 0,40, aminosyreanalyse (hydrolyseret med saltsyre): Gly 1,06,

Ala 1,00, Tyr 0,93, Phe 0,93, middelgenudvindingsgrad 90%.

Eksempel 11 26 149064 Η-Tyr- (D) -Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-OCHV-CHj (I) Z-Phe-NH-NH-CO-OCH^-CH^

Den fremgangsmåde, der er beskrevet i eksempel 10-(I), gentages med den undtagelse at der anvendes 1,8 g (5,7 mmol) Z-Phe-NH-NH2 og 0,7 ml ætylklorkarbonat. 1,5 g (69%), smp.

134°C, [a]p = -20,6° (c = 0,5, DMF), Rf1 - 0,69.

Beregnet for C20H23O5N3: C 62,32 H 6,02 N 10,90

Fundet: C 62,38 H 6,09 N 10,49%.

(II) Z-Tyr-(D) -Åla-Gly-Phe-NH-KH-CO-OCH^CHj

Den fremgangsmåde, der er beskrevet i eksempel 10-(II), gentages bortset fra at der anvendes 580 mg (1,3 mmol) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-OH og 620 mg Z-Phe-NH-NH-CO-OCH2-CH3 til syntese af den i overskriften angivne forbindelse. 820 mg (93%), smp. 154-155°C, [a]p3 = -24,2° (c = 0,45, DMF), Rf1 = 0,40.

Beregnet for C34H4o°9N6: c 60»34 H 5,96 N 12,42 Fundet: C 60,09 H 5,87 N 12,21%.

(III) Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-OCHo-CHj

Den fremgangsmåde der er beskrevet i eksempel 10-(III) gentages bortset fra at der anvendes 450 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO~OCH2-CH3 til syntese af den i overskriften angivne forbindelse. 240 mg (53%), [a]^3 = +18,1° (c = 0,2, MeOH), 2 u Rf = 0,49, aminosyreanalyse: Gly 1,00, Ala 0,98, Tyr 0,88,

Phe 1,02, middelgenudvindingsgrad 78%.

Eksempel 12

Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-IffiU

(I) Z-Tyr- (D) -Ala-Gly-MePhe-OCH..

I 20 ml MeOH opløses 1,8 g (5,7 mmol) Z-MePhe-OH, og efter tilsætning af 20 ml 5N saltsyre/dioxan henstår opløsningen ved stuetemperatur natten over. Opløsningsmidlet afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt, vaskes med vand og tørres over vandfrit natriumsulfat. Derpå afdestilleres AcOEt hvorved der vindes 1,5 g af en olie. En por- 149064 27 tion på 1,1 g af denne olie opløses i 50 ml MéOH og der gennemføres katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra, MeOH afdestilleres og remanensen opløses i 20 ml DMF. Til denne opløsning sættes der 1,55 g (3,5 mmol) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-OH og 0,75 g HONB og under afkøling til 0°C tilsættes 0,80 g DCC. Blandingen omrøres ved 0°C i 5 timer og ved stuetemperatur natten over. Det som biprodukt vundne urinstofderivat filtreres fra og DMF sidestilleres. Remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt, vaskes med 5%s vandigt natriumhydrogenkarbonat og tørres over vandfrit natriumsulfat. AcOEt sidestilleres og remanensen behandles med diætylæter og renses ved., genudfældning med MeOH/diætylæter. 1,2 g (56%), smp. 103-104°C, ία]33 = -17,2° (c = 0,31, MeOH), Rf1 = 0,68. Beregnet for C33H38°8N4* C 64,06 H 6,19 N 9,06

Fundet: C 63,91 H 6,05 N 8,89%.

(II) Z-Tyr- (D) -Ala-Gly-MePhe-HEI-NH^ På samme måde som beskrevet i eksempel l-(II) behandles 1/0 g (1,6 mmol) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-OCH3 med 0,5 ml NH2-NH2,H20 hvorved den i overskriften angivne forbindelse vindes. 820 mg (82%), smp. 95-96°C (sønderdeling), [a]33 = -26,8° (c = 0,5, DMF), Rf1 = 0,29.

Beregnet for C32H3807N6: C 62,12 H 6,19 N 13,59

Fundet: C 61,85 H 6,28 N 13,09%.

(III) Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH^ 300 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH2 behandles på samme måde som beskrevet i eksempel 4-(II) hvorved der vindes den i O *3 overskriften angivne forbindelse. 155 mg (52%), [ctj„ = +12,0° 2 υ (c = 0,2, MeOH), Rf = 0,46, aminosyreanalyse (syrehydrolysat):

Gly 1,00, Ala 0,98, Tyr 0,91, middelgenudvindingsgrad 79%.

Eksempel 13 Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NHNH-COCH2-CH2-CH2-Cl (I) Z“Phe-MHNH-COCH2-CH^-CH2-Cl I 40 ml DMF opløses 3,13 g (10 mmol) Z-Phe-NHNH2 og 1,27 g (10 mmol) γ-klorsmørsyre og under afkøling til 0°C til- 149064 28 sættes 2,2 g DCC. Blandingen omrørea ved stuetemperatur i 2Q timer. Reaktionsblandingen filtreres og koncentreres under nedsat tryk. Remanensen opløses i 15Q ml ætylacetat, vaskes med vand, IN saltsyre og 4%s natriumhydrogenkarbonat i den nævnte rækkefølge. Derpå tørres den over vandfrit natriumsulfat, koncentreres til tørhed under nedsat tryk og krystalliseres fra ætylacetat/petroleumsæter. Ved den ovenfor beskrevne fremgangsmåde vindes 3,6 g nåle (85,7%) med smp. 185-186°C,

Rf1 = 0,32.

Beregnet for c2iH2404N2C1: C 60,35 H 5,79 N 10,06 Cl 8,49 Fundet: C 60,51 H 5,60 N 10,15 Cl 8,27%.

(II) Η-Tyr- (D) -Ala-Gly-Phe-NHNH-COCH^CH^CH^-Cl I 50 ml metanol reduceres 420 ml Z-Phe-NHNHCOCH2-CH2~ CH2~C1 katalytisk under anvendelse af palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra og filtratet koncentreres til tørhed. Denne remanens og 445 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-OH opløses i 10 ml DMF hvorefter der tilsættes 180 mg HONB. Derpå tilsættes under afkøling til 0°C 250 mg DCC. Blandingen omrøres ved 0°C i 3 timer og ved stuetemperatur i 12 timer.

De uopløselige bestanddele filtreres fra, DMF afdestilleres under nedsat tryk og remanensen opløses i 100 ml af en blanding af n-butanol og ætylacetat i forholdet 1:2. Opløsningen vaskes med IN saltsyre, 4%s vandigt natriumhydrogenkarbonat og vand i den nævnte rækkefølge. Opløsningsmidlet afdestilleres derpå under nedsat tryk og remanensen opløses i 50 ml metanol. Efter tilsætning af 1 ml iseddikesyre gennemføres der katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra, filtratet koncentreres til tørhed under nedsat tryk og remanensen opløses i 10 ml IN vandig eddikesyre.

De uopløselige bestanddele filtreres fra og filtratet føres gennem en kolonne af "Sephadex" ® LH-20 (3 x 45 cm) og der gennemføres eluering med IN vandig eddikesyre. Da det ønskede produkt elueres i fraktionerne fra 215 ml til 236 ml forenes disse fraktioner og frysetørres hvorved der vindes 360 mg af den ovenfor angivne forbindelse. Rf^ = 0,485, [a]^ ~ +18,2° (c = 0,28, MeOH), aminosyreanalyse: Gly 1,00, Ala 1,02, Tyr 0,89, Phe 1,00, middelgehudvindingsgrad 78%.

Eksempel 14 29 149064 Η-Tyr- (D) -Åla“Gly-MePhe-NH-MH-CO-CH2-CH3 (I) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly'-MePhe-'NH-NH-CO-CH^'-’CH·, I 5 ml DMF opløses 426 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH2 og 0,07 ml propionsyre og under afkøling til 0°C tilsættes der 130 mg HOBT og 200 mg DCC. Blandingen omrøres ved 0°C i 5 timer og ved stuetemperatur natten over. De uopløselige bestanddele filtreres fra, DMF afdestilleres og remanensen eks-traheres med 50 ml AcOEt, vaskes med vand og tørres over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter og opsamles ved filtrering. Udbytte 410 mg (87%), smp. 139-141°C, Rf1 = 0,35, [a]^4 = -32,0° (c = 0,43, DMF) .

Beregnet for C35H42°8N6: C 57'68 H 6^63 N 1;L'53 Fundet: C 57,55 H 6,42 N 11,33%.

(Ιϊ) Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CHo-CH^ I 50 ml MeOH opløses 250 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH3 og der gennemføres katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra,

MeOH afdestilleres, remanensen opløses i 50 ml vand og de uopløselige bestanddele filtreres fra hvorefter der frysetørres.

Det resulterende pulver opløses i en lille mængde IN vandig eddikesyre og føres på en kolonne af "Sephadex" ® LH-20 (2,5 x 120 cm), og der gennemføres eluering med IN vandig eddikesyre. Fraktionenerne fra 290 ml til 315 ml opsamles og frysetørres hvorved der vindes 100 mg af den i overskriften angivne forbindelse. Rf^ = 0,47, [a]^4 = -7,7° (c = 0,16, MeOH), amino-syreanalyse: Gly 1,00, Ala 1,03, Tyr 0,92, middelgenudvindings-grad 81%.

Eksempel 15 Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH2-CH2 (I) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly—MePhe-NH-NH-CO-CK^-CH^-CH^

Under anvendelse af 426 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH2 og 0,08 ml n-smørsyre fulgtes den i eksempel 14-(1) beskrev- 1A9064 30 ne fremgangsmåde hvorved der vandtes 395 mg af den i overskriften angivne forbindelse (83%). Smp. 135-137°C, Rf^ = 0,37, [ot]q5 = -31,5° (c = 0,3, DMF).

Beregnet for C^H^OgNgj C 62,77 H 6,44 N 12,20 Fundet; C 62,48 H 6,31 N 11,95%.

(II) Η-Tyr- (D) -Åla-Gly-MePhe-MH-NH-CO-C^-CH^CHj

Ved anvendelse af samme fremgangsmåde som beskrevet i eksempel 14-(11) fjernedes beskyttelsesgruppen fra 250 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH2-CH3 og det rensedes hvorved der vandtes 110 mg af den i overskriften angivne forbindelse. Rf2 = 0,48, [a]2^ = -7,2° (c = 0,2, MeOH), aminosyre-analyse; Gly 1,00, Ala 0,98, Tyr 0,86, middelgenudvindingsgrad 83%.

Eksempel 16 Η-Tyr- (Dj -Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH^CH^-CO-CH-,

Under anvendelse af 482 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH2 og 0,13 ml 4-oxo-n-valerianesyre fulgtes den i eksempel 14-(1) beskrevne fremgangsmåde hvorved der vandtes den i overskriften angivne forbindelse. 390 mg (70%), smp. 139-140°C,

Rf1 « 0,49, [a]24 = -27,6° (c = 0,27, DMF).

Beregnet for C37H44°gN6'H20: C 60,48 H 6,31 N 11,44 Fundet; C 60,19 H 6,25 N 11,28%.

(II) Η-Tyr- (D) -Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH^CH^CO-CH^

Under anvendelse af 340 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH2-CO-CH3 fulgtes den i eksempel 14-(11) beskrevne fremgangsmåde til opnåelse af 170 mg af den i overskriften angivne forbindelse. Rf2 = 0,49, [a]24 = -6,0° (c = 0,3, MeOH), aminosyreanalyse: Gly 1,00, Ala 0,98, Tyr 0,97, middelgenudvindingsgrad 85%.

Eksempel 17 H-MeTyr-(D)-Åla-Gly-Phe-HH-HH-CO-CH2-CH: (I) Z-(Dj-Ala-Gly-Phe-OEt I 20 ml DMF opløses 0,90 g Z-(D)-Ala-Gly-OH og 0,63 g 149064 31 HONB og under afkøling til 0°C tilsættes 0,75 g DCC. Blandingen omrøres i 4 timer hvorefter de uopløselige bestanddele filtreres fra.

Til filtratet sættes 0,81 g H-Phe-OEt,hydroklorid og 0,5 ml TEA hvorefter der omrøres ved stuetemperatur natten over. Opløsningsmidlet afdampes, remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt og ekstrakten vaskes med IN vandig saltsyre og med 5%s vandigt natriumhydrogenkarbonat og tørres over vandigt natriumsulfat. Fjernelse af AcOEt ved destillation efterlader krystaller, som opsamles ved filtrering og omkrystalliseres fra AcOEt/petroleumsæter. 1,2 g (83%), smp. 109-110°C,

Rf1 = 0,78, [<x]£7 = +1,6° (c = 0,44, DMF).

Beregnet for ^24Η29°6Ν3: c 63,28 H 6,42 N 9,23

Fundet: C 63,38 H 6,47 N 9,03%.

(II) Z-(Dj-Åla-Gly-Phe-NHNH2 I 50 ml MeOH opløses 3,3 g Z-(D)-Ala-Gly-Phe-OEt og efter at der er tilsat 1 ml hydrazinhydrat henstilles opløsningen ved stuetemperatur i 2 dage. Derpå behandles den med diætylæter, opsamles ved filtrering og omkrystalliseres fra ætanol. 3,0 g (94%), smp. 196-197°C, Rf1 = 0,34, [a]^7 = +2,4° (c = 0,37, DMF).

Beregnet for C22H27°5N5: c 59,85 H 6,16 N 15,86

Fundet: C 59,62 H 6,12 N 16,13%.

(III) Z-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH^-CHj I 10 ml DMF opløses 1,1 g Z-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH2 og 0,22 ml propionsyre og efter afkøling til 0°C tilsættes 0,44 g HOBT og 0,62 g DCC.

Blandingen omrøres, ved 0°C i 4 timer og derpå ved stuetemperatur natten over. De uopløselige bestanddele filtreres fra, DMF afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt. Ekstrakten vaskes med vandigt natriumhydrogenkarbonat og tørres over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og den gelagtige remanens opsamles ved filtrering. Pulveret vaskes ved kogning med AcOEt. 0,95 g (77%), smp. 197-198°C,

Rf1 = 0,46, [a]£7 = +4,8° (c = 0,27, DMF).

149064 32

Beregnet for C 60,34 H 6,28 N 14,08

Fundet: C 60,14 H 6,36 N 13,65%.

(IV) Z-MeTyr (But) - (D) -Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-C^-CHj I 50 ml MeOH opløses 497 mg Z- (D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-C^-CH^ og der gennemføres katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra, MeOH afdestilleres og remanensen opløses i 10 ml DMF. Ved siden af opløses 385 mg Z-MeTyr (Bu1")-OH og 215 mg HONB i 10 ml THF og efter afkøling til 0°C tilsættes 227 mg DCC. Blandingen omrøres ved 0°C i 4 timer og derefter filtreres de uopløselige bestanddele fra mens filtratet forenes med den ovenfor fremstillede DMF-oplØsning af aminkomponenten hvorefter der omrø-res ved stuetemperatur natten over. Opløsningsmidlet afdestilleres, remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt og ekstrakten vaskes med 5%s vandigt natriumhydrogenkarbonat og tørres over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres derefter og den gelagtige remanens opsamles ved filtrering. 620 mg (85%), smp. 143-144°C, Rf1 = 0,63, [a]£7 = -43,7° (c = 0,4, DMF).

Beregnet for C39H5o°8N6i c 64,09 H 6,90 N 11,50 Fundet: . * C 64,33 H 7,21 N 11,40%.

(V) H-MeTyr- (D) -Ala-Gly-Phe-HH-NH-CO-CHo-CH-, I 50 ml MeOH opløses 500 mg Z-MeTyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-OE^-CHj og der gennemføres katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra, filtratet destilleres og remanensen opløses i en lille mængde IN vandig eddikesyre. Opløsningen overføres på en kolonne af "Sephadex" ® LH-20 (2,5 x 120 cm) og der gennemføres eluering med IN vandig eddikesyre.

Fraktionerne fra 330 ml til 370 ml forenes og frysetørres. 360 mg. En portion på 200 mg af det frysetørrede produkt opløses i 2 ml trifluoreddikesyre og opløsningen henstår ved stuetemperatur i 30 minutter. Opløsningsmidlet afdestilleres og remanensen tørres, opløses i 50 ml vand og føres på en kolonne af "Amberlite"® IRA-410 (acetatform, 2 x 6 cm). Elua-tet og vaskevæskerne forenes og frysetørres. 170 mg. Dette 33 14906Λ pulveragtige produkt opløses i en lille mængde IN vandig eddikesyre. Opløsningen føres på en kolonne af "Sephadex" ® LH-20 (2 x 120 cm), og der gennemføres, eluering med IN vandig eddikesyre. Fraktionerne fra 285 ml til 300 ml forenes og frysetørres. 70 mg. Rf^ = 0,33, [a]^ = +32,8° \c = 0,21,

MeOH), aminosyreanalyse; Gly 1,00, Ala 0,92, Phe 1,02, middel-genudvindingsgrad 78%.

Eksempel 18 H-MeTyr-(D)-Aia-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH^-CH^ (I) Z - (D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH^ i 50 ml MeOH opløses 1,1 g Z-MePhe-OMe og der gennemføres katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra, MeOH afdestilleres og remanensen opløses i 10 ml DMF. Ved siden af opløses 0,92 g Z-(D)-Ala-Gly-OH og 0,71 g HONB i 10 ml DMF og under afkøling til 0°C tilsættes 0,75 g DCC. Blandingen omrøres ved 0°C i 4 timer og derefter frafiltreres de uopløselige bestanddele mens filtratet forenes med den ovenfor angivne aminkomponent og omrøres ved stuetemperatur natten over. DMF afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt, vaskes med 5%s vandigt na-triumhydrogenkarbonat og tørres over vandfrit natriumsulfat.

AcOEt afdestilleres hvorved der vindes 2,5 g af en olie. Denne olie opløses i 20 ml MeOH og efter tilsætning af 1,5 ml hydrazinhydrat henstår opløsningen ved stuetemperatur natten over. '

MeOH afdestilleres, remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt og ekstrakten vaskes med vand og tørres over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen behandles med diætyl-æter og opsamles ved filtrering. 2,0 g (80%), smp. 85-87°C,

Rf1 = 0,55.

Beregnet for C23H29^5N5: c 60,64 H 6,42 N 15,38 Fundet: C 60,51 H 6,55 N 15,11 (II) Z-MeTyr (But)-(D) -Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH3

I 2Q ml THF opløses 0,91 g Z-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH2 og 0,19 ml propionsyre og ved 0°C tilsættes der 0,38 g HOBT

. 34 149064 og 0,45 g DCC. Blandingen omrøres ved 0°C i 4 timer og derpå ved stuetemperatur natten over. De uopløselige bestanddele filtreres fra, THF afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt, vaskes med en vandig opløsning af natrium-hydro genkarbonat og tørres over vandfrit natriumsulfat.

AcOEt bliver derpå afdestilleret hvorved der vindes 1,0 g af en olie. Denne olie opløses i 50 ml MeOH og der gennemføres katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra, MeOH afdestilleres og remanensen opløses i 10 ml THF. Ved siden af opløses 0,73 g Z-MeTyr(Bu^)OH og 0,41 g HONB i 10 ml THF og ved afkøling til 0°C tilsættes 0,43 g DCC. Opløsningen omrøres ved 0°C i 4 timer. De uopløselige bestanddele filtreres fra og filtratet forenes med den ovenfor fremstillede THF-opløsning af aminkom-ponenten og omrøres ved stuetemperatur natten over. THF afdestilleres, remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt og vaskes med 5%s vandigt natriumhydrogenkarbonat. Efter tørring over vandfrit natriumsulfat afdestilleres AcOEt og remanensen renses ved udfældning med diætylæter. 1,2 g (86%), smp. 110-112°C,

Rf1 * 0,61, [a]25 = -54,7° (c = 0,45, DMF).

Beregnet for C40H52°8N6S c 64*50 H 7,04 N 11,28 Fundet: C 64,25 H 7,16 N 11,35%.

(Ill) H-MeTyr- (D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH^CHj På samme måde som beskrevet i eksempel 17-(V) reduceres 600 mg Z-MeTyr(But)-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH3 katalytisk, behandles med TFA og rengøres ved gelfiltrering og det ønskede produkt opsamles. 150 mg, Rf2 = 0,48, [a]25 = +14,4° (c = 0,24, MeOH), aminosyréanalyse: Gly 1,00, Ala 0,95, middel-genudvindingsgrad 81%.

Eksempel 19 Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH^ (I) Z-Tyr- (D) -Ala-Gly-MePhe-NH-MH-COCHj På samme måde som beskrevet i eksempel 14-(1) anvendes der 426 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH2 °<J 0,06 ml eddikesyre til fremstilling af 405 mg af den i overskriften angivne for- 149064 35 bindelse (85%). Smp. 142-143°C, Rf1 = 0,33, [a]£7 = -31,8° (c = 0,4, DMF).

Beregnet for c34H4o°8N6: C 61,80 H 6,10 N 12,72 Fundet: C 61,65 H 6,02 N 12,66%.

(II) Η-Tyr- (D) -Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO^-CHj På samme måde som beskrevet i eksempel 14-(11) fjernes beskyttelsesgruppen fra 250 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH- CO-CH_ og forbindelsen renses hvorved der vindes 130 mg af den •j 2 25 o i overskriften angivne forbindelse. Rf^ = 0,44, [a]p = -6,9° (c = 0,3, MeOH), aminosyreanalyse: Gly 1,00, Ala 0,99, Tyr 0,92, middelgenudvindingsgrad 82%.

Eksempel 20 Η-Tyr-(Dj-Ala-Gly-MePhe-NE-NH-CO-CH2-Cg2-0-CH2-CH3 (I) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-l)nJ-C0-CH2-CH2-0-CH2-CH3 '

Under anvendelse af 358 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH2 og 0,08 ml β-ætoxypropionsyre gentages den i eksempel 14-(1) beskrevne fremgangsmåde til opnåelse af 300 mg af den i overskriften angivne forbindelse (73%), smp. 122-124°C,

Rf1 = 0,39, [a]p5 = -31,6° (c = 0,24, DMF).

Beregnet for C37H4409Ng: C 62,00 H 6,19 N 11,72 Fundet: C 61,73 H 6,24 N 11,58%.

(II) Η-Tyr-(Dj-Ala-Gly-MePhe-MH-NH-CO-CH2-CH2-Q-CH2-CH2 På samme måde som beskrevet i eksempel 14-(11) fjernes beskyttelsesgruppen fra 150 mg Z-Tyr-(D)-Aia-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2“CH2“0-CH2-CH3 og den vundne forbindelse renses hvorved der vindes 75 mg af den i overskriften angivne forbindelse.

Rf^ = 0,47, [djp** = +2,0° (c = 0,2, MeOH), aminosyreanalyse:

Gly 1,00, Ala 0,97, Tyr 0,96, middelgenudvindingsgrad 81%.

Eksempel 21 Η-Tyr- (D) -Ala-Gly-MePhe-MH-MH-CO-CH2-CH (CH2) 2 (I) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH“NH-CO-CH2-CH(CHj)2

Under anvendelse af 426 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-

IA906A

36 NH-NH2 og 0,09 ml isovalerianesyre gentages den i eksempel 14-(1) beskrevne fremgangsmåde til opnåelse af 390 mg af den i overskriften angivne forbindelse (82%). Smp. 129-133°C,

Rf1 = 0,40, [o]^5 = -32,0° (c = 0,5, DMF).

Beregnet for C37H46°8N6: C 63,23 H 6,60 N 11,96 Fundet: C 63,05 H 6,45 N 11,72%.

(II) Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH^-CH(CHj)2 På samme måde som beskrevet i eksempel 14-(11) fjernes beskyttelsesgruppen fra 300 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH(CH3)2 og den vundne forbindelse renses hvorved der vindes 170 mg af den i overskriften angivne forbindelse. Rf^ = 0,48, [a]j^ =-7,1° (c = 0,2, MeOH), aminosyreanalyse: Gly 1,00,

Ala 1,05, Tyr 0,89, middelgenudvindingsgrad 79%.

Eksempel 22 Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CHp-CH2-C1 (I) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CQ-CH2-CH2-Cl

Under anvendelse af 482 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH2 og 0,12 g 3-klorpropionsyre gentages den i eksempel 14-(1) beskrevne fremgangsmåde til opnåelse af 420 mg af den i overskriften angivne forbindelse (85%) . Smp. 126-129°C,

Rf1 = 0,38, [a]J5 = -28,6° (C = 0,5, DMF).

Beregnet for C35H4i°8N6'Cl: C 59,27 H 5,82 N 11,85 Cl 5,00 Fundet: C 59,33 H 5,94 N 11,61 Cl 4,88%.

(II) Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH2-Cl På samme måde som beskrevet i eksempel 14(11) fjernes beskyttelsesgruppen fra 250 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-C0-CH2-CH2-C1 og den vundne forbindelse renses hvorved der vindes 105 mg af den i overskriften angivne forbindelse.

0 ΛΓ Λ

Rf = 0,50, [a]p = -6,9 (c = 0,2, MeOH), aminosyreanalyse:

Gly 1,00, Ala 0,96, Tyr 0,92, middelgenudvindingsgrad 81%.

Eksempel 23 Η-Tyr- (p) -Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH (OH) -CH^ 149064 37 (I) Z-Tyr- (D)’-Ala-GlV-MePhe^MH-NH^CO-CH(OHj-CH^

Under anvendelse af 426 mg Z-Tyr-(D) -Ala-Gly-MePhe-NH-NH2 og 0,08 ml mælkesyre gentages den i eksempel 14-(1) beskrevne fremgangsmåde til opnåelse af 380 mg af den i overskriften angivne forbindelse (81%). Smp. 131-134°C, Rf·*- = 0,29, [a]p5 = -29,6° (c = 0,4, DMF).

Beregnet for C35H42°9N6: c 60,85 H 6,12 N 12,16 Fundet: C 60,77 H 5,96 N 12,03%.

(II) Η-Tyr-(D)-Ala-Glv-MePhe-NH-NH-CO-CH(OH)-CH? På samme måde som beskrevet i eksempel 14-(11) fjernes beskyttelsesgruppen fra 300 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH- CO-CH(OH)-CH, og den vundne forbindelse renses hvorved der J 2 vindes 160 mg af den i overskriften angivne forbindelse. Rf = 25 o 0,41, [a]D =-7,1 (c = 0,2, MeOH), aminosyreanalyse: Gly 1,00, Ala 0,98, Tyr 0,91, middelgenudvindingsgrad 82%.

Eksempel 24 Η-Tyr- (Dj -Ala-Gly-MePhe-NH-NH-C0'-0-CH2-CH3 (I) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-C0-0-CH2-CH3 I 5 ml DMF opløses 426 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH2 og efter afkøling tilsættes der 90 mg ætylklorkarbonat og 0,11 ml TEA. Blandingen omrøres ved 0°C i 2 timer. Til reaktionsblandingen sættes en vandig opløsning af natriumklorid og blandingen ekstraheres med 100 ml AcOEt og vaskes med vand.

under nedsat tryk

AcOEt-laget tørres over vandfrit natriumsulfat og destillere^ derefter behandles remanensen med diætylæter, opsamles ved filtrering og genudfældes fra ætanol/diætylæter. 360 mg (73%), smp. 131-133°C, Rf1 = 0,40, [al£5 = -32,0° (c = 0,3, DMF).

Beregnet for C35H42°9N6: c 60,85 H 6,13 N 12,16

Fundet: C 60,67 H 6,30 N 12,11%.

(II) Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-C0-0-CH2-CH3 På samme måde som beskrevet i eksempel 14-(11) fjernes beskyttelsesgruppen fra 250 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-O-CEL-CH-, og den vundne forbindelse renses og der vindes 105 mg af den i overskriften angivne forbindelse. Rf^ = 0,47, 14*064 38 25 o [α]β = “6,7 (c = 0,2, MeOH), aminosyreanalyse: Gly 1,00,

Ala 0,99, Tyr 0,88, middelgenudvindingsgrad 79%.

Eksempel 25 Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH2“CH2“CH3 (I) Z-Tyr- (D)-Ala-Gly-MePhe-UH-NH-CO-CH::-CH2-CH2-GH3

Under anvendelse af 426 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH2 og 0,09 ml n-valerianesyre gentages den i eksempel 14-(Γ) beskrevne fremgangsmåde til opnåelse af den i overskriften angivne forbindelse. 390 mg (82%), smp. 131-133°C,

Rf1 = 0,40, [ajp5 = -31,4° (c - 0,3, DMF) .

Beregnet for C^H^OgNg: C 63,23 H 6,60 N 11,96 Fundet: C 63,42 H 6,71 N 11,72%.

(II) Η-Tyr- (D) -Ala-Gly-MePhe-NH-MH-CO-CH^-CHo-CHo-CH-, På samme måde som beskrevet i eksempel 14-(11) fjernes beskyttelsesgruppen fra 300 mg Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-NH-NH-CO-C^-C^-C^-CHg og den vundne forbindelse renses hvorved der vindes 150 mg af den i overskriften angivne forbindelse.

Rr = 0,49, [<*]D = -6,4° (c = 0,2, MeOH), aminosyreanalyse:

Gly 1,00, Ala 1,00, Tyr 0,94, middelgenudvindingsgrad 80%.

Eksempel 26 Η-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH3 (I) Z-Phe-NH-HHp I 200 ml MeOH opløses 59 g Z-Phe-OH hvorefter der tilsættes 5 ml 6N saltsyre/dioxan og blandingen får lov at stå natten over ved stuetemperatur. MeOH afdestilleres og remanensen opløses i 300 ml diætylæter efterfulgt af vask med vand.

Efter tørring over vandfrit natriumsulfat afdestilleres di-ætylæteren og remanensen opløses i 150 ml MeOH.

Der sættes 16 ml hydrazinhydrat til opløsningen som derpå henstilles ved stuetemperatur i 2 dage. MeOH afdestilleres og de udfældede krystaller opsamles ved filtrering med petroleumsæter, vaskes grundigt med diætylæter og omkrystalliseres fra AcOEt/petroleumsæter. Derved vindes 49 g (79%) af 149064 39 1 01 det ønskede produkt med smp. 159-160°C, Rf = 0/62, [α]β = -9,8° (c = 0,8, DMF).

Beregnet for ^17^2.9^3^3s c 65,16 H 6,11 N 13,41

Fundet: C 65,02 H 6,32 N 13,20%.

(II) Z-Fhe-NH-NH-CO-CHp-CHj I 30 ml DMF opløses 12,5 g Z-Phe-NH-NH2 og efter afkøling tilsættes 5,8 ml vandfri propionsyre og 3 ml pyridin og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Der sættes vand til reaktionsopløsningen og bundfaldet opsamles ved filtrering. Omkrystallisation fra MeOH/acetonitril giver 9,8 g (68%) af det ønskede produkt med smp. 203-204°C, Rf1 = 0,60, [a]^1 = -17,6° (c = 0,46, DMF).

Beregnet for c2oH23°4N3: C 65'92 H 6'27 N iO»25

Fundet: C 65,87 H 6,72 N 9,93%.

(III) Z-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH2 I 50 ml MeOH opløses 2,2 g Z-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH3 og der gennemføres katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Efter fjernelse af katalysatoren ved filtrering afdestilleres MeOH og remanensen opløses i 10 ml DMF.

Der sættes 2,2 g Z-Gly-ONB til opløsningen som omrøres natten over ved stuetemperatur. DMF afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt efterfulgt af vask med vand og tørring over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og de udfældede krystaller opsamles ved filtrering og omkrystalliseres fra AcOEt/acetonitril. På denne måde vindes 1,8 g (71%) af det i overskriften angivne produkt med smp. 151-152°C,

Rf1 = 0,46, [a]^1 = -1,2° (c = 0,5, DMF).

Beregnet for C22H26°5^4: C *>1,96 H 6,15 N 13,14 Fundet: C 62,25 H 6,23 N 12,85%.

(IV) BOC-(D)-Met(Oj-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH3 I 50 ml MeOH opløses 1,0 g Z-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH3 og der gennemføres katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Efter fjernelse af katalysatoren ved filtrering afdestilleres MeOH og remanensen opløses i 20 ml aceto- 143064 40 nitril.

BOC-D-Met-ONB (fremstillet ved DCC-metoden ud fra 600 mg BOC-D-Met-OH og 470 mg HONB) sættes til opløsningen som omrøres natten over ved stuetemperatur.

Til reaktionsopløsningen sættes 0,5 ml af en 30%s vandig hydrogenperoxydopløsning hvorefter der omrøres ved stuetemperatur i 10 timer. Overskud af hydrogenperoxyd sønderdeles med palladium-sort og acetonitrilet afdestilleres. Den resulterende remanens ekstraheres med 100 ml n-butanol og ekstrakten vaskes med vand. n-Butanol afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter. På denne måde vindes 1,1 g (88%) af det ønskede produkt med smp. 121-122°C, Rf^ = 0,40, [alp1 =0° (c = 0,5, DMF).

Beregnet for ^24¾ 7®gN,-S, 1/21^0: C 52,53 H 6,97 N 12,76 S 5,84 Fundet: C 52,41 H 6,99 N 12,46 S 5,61%.

(V) BOC-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH3 I 10 ml TFA opløses 0,82 g BOC-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CE^-CHg og blandingen får lov at stå ved stuetemperatur i 20 minutter. TFA afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter efterfulgt af udvinding ved filtrering.

Det resulterende pulver opløses i 10 ml DMF og efter tilsætning af 710 mg BOC-Tyr-ONB og 0,3 ml TEA omrøres blandingen natten over ved stuetemperatur. DMF afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml n-butanol hvorefter der vaskes med vand. n-Butanol afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter. På denne måde vindes 0,75 g (72%) af det ønskede produkt i form af krystaller med smp. 134-135°C, Rf^ = 0,20, [a]^1 = 0° (c = 0,5, DMF).

Beregnet for C33H46°9N6S,H20: C 54,98 H 6,71 N 11,66 S 4,44 Fundet: C 54,72 H 6,82 N 11,16 S 4,43%.

(VI) Η-Tyr- (D) -Met (O) -Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH3 I 4 ml TFA opløses 400 mg BOC-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH3 og blandingen får lov til at stå ved stuetemperatur i 20 minutter. TFA afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter efterfulgt af opsamling ved filtrering.

41 149004

Det resulterende pulver opløses i 30 ml vand og opløsningen føres gennem en kolonne pakket med "Amberlite" ® IRA-410 (eddikesyretype, 2x6 cm) hvorefter efflueringsmidlet og vaskevæskerne forenes og underkastes frysetørring. Det resulterende pulver opløses i en lille mængde af 0,1N vandig eddikesyreopløsning og opløsningen føres gennem en kolonne pakket med " Sephadex"^ LH-20 hvorefter der elueres med 0,1N vandig eddikesyreopløsning. Eluatfraktionerne fra 310 ml til 330 ml opsamles og frysetørres. På denne måde vindes 310 mg af det ønskede produkt med Rf"*· = 0,35, [a]^" = +24,3° (c = 0,35,

MeOH), aminosyreanalyse (saltsyrehydrolysat)s Gly 1,00, Met 0,57, Tyr 0,88, Phe 1,00.

Eksempel 27 Η-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-HH-CO-CH^-CHg-CH^ (I) Z-Tyr-(P)-Met(O')-Gly-Phe-OEt I 50 ml acetonitril opløses 4,8 g H-Phe-OEt,hydroklo-rid. Efter afkøling tilsættes 2,8 ml TEA og 7,4 g Z-Gly-ONB og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdestilleres og remanensen ekstraheres med 200 ml AcOEt efterfulgt af vask med vand og tørring over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen opløses i 100 ml MeOH for at gennemføre katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Efter fjernelse af katalysatoren ved filtrering afdestilleres MeOH og remanensen opløses i 50 ml acetonitril. BOC-(D)-Met-ONB (fremstillet ved DCC-metoden ud fra 4,7 g BOC-(D)-Met-OH og 3,7 g HONB) sættes til opløsningen som derpå omrøres natten over ved stuetemperatur. Der sættes 1 ml vandig l n saltsyreopløsning og 2,2 ml 30%s vandig hydrogenperoxydopløsning til reaktionsopløsningen som omrøres ved stuetemperatur i 10 timer. Overskuddet af hydrogenperoxyd sønderdeles med palladium-sort og acetonitri-let afdestilleres. Den resulterende remanens ekstraheres med 200 ml AcOEt efterfulgt af vask med vand og tørring over vand-frit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen opløses i 30 ml TFA. Opløsningen får lov at stå ved stuetemperatur i 20 minutter. TFA afdestilleres og remanensen behandles med di- 149064 42 ætylæter og opsamles ved filtrering. Det resulterende pulver opløses i 60 ml acetonitril og efter afkøling sættes der 2,5 ml TEA og 7,2 g Z-Tyr-ONB til opløsningen som omrøres natten over ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdestilleres og remanensen ekstraheres med 200 ml AcOEt efterfulgt af vask med vand og tørring over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og de udfældede krystaller opsamles ved filtrering. Omkrystallisation fra AcOEt giver 6,9 g af det ønskede produkt med smp. 162-163°C, Rf1 = 0,42, [a]^1 = -3,2° (c = 0,37, DMF).

Beregnet for C35H42°9W4S: C 60,50 H 6,09 N 8,06 S 4,61 Fundet: C 60,45 H 6,38 N 8,07 S 4,37%.

(II) Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH^ 6,0 g Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-OEt opløses i et blandet opløsningsmiddel af 20 ml ætylalkohol og 20 ml DMF og der sættes 2 ml hydrazinhydrat til opløsningen som derpå får lov at stå ved stuetemperatur i 2 dage. Ætylalkoholen afdestilleres hvorefter der tilsættes diætylæter og de udfældede krystaller opsamles ved filtrering. Krystallerne koges med acetonitril til vask. Udbyttet af produktet er 5,0 g, smp. 182-184°C, Rf1 = 0,10, [a]^1 = -13,4° (c = 0,44, DMF).

Beregnet for C33H4o°8N6S* C 58,21 H 5,92 N 12,34 S 4,71

Fundet: C 57,95 H 5,98 N 12,10 S 4,55%.

(III) Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CB2-CH2-CH3 I 5 ml DMF Opløses 0,51 g Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NHNH2 og 0,08 ml n-smørsyre. Efter afkøling til 0°C sættes 120 mg HOBT og 190 mg DCC til blandingen som omrøres ved 0°C i 5 timer og derpå ved stuetemperatur natten over. DMF afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter efterfulgt af rensning ved genudfældning med MeOH/acetonitril. På denne måde vindes 410 mg af det ønskede produkt med smp. 161-163°C,

Rf1= 0,31, [a]^1 = -8,8° (c = 0,34, DMF).

Beregnet for C^H^gOgNgS: C 59,18 H 6,17 N 11,19 S 4,27

Fundet: C 58,85 H 6,02 N 10,86 S 4,05%.

149064 43 (IV) Η-Tyr- (D)-Met (0) -Gly-Phe-Iffl-NH-CO-CH^-CB^-CHj I 3 ml metansulfonsyre i nærværelse af 0,3 ml anisol opløses 300 mg Z-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH-C0-CH2-CH2-CH3.

Efter henstand ved stuetemperatur i 30 minutter sættes der diætylæter til reaktionsopløsningen som derpå får lov at stå ved -20°C i 30 minutter. Efter fjernelse af den ovenstående opløsning opløses det resulterende olieagtige stof i 30 ml vand og føres gennem en kolonne pakket med "Amberlite" ® IRA-410 (eddikesyretype, 2x6 cm). Effluenten og vaskevæskerne forenes og frysetørres. Det resulterende pulver opløses i en lille mængde 0,1N vandige eddikesyreopløsning og føres gennem en kolonne pakket med "Sephadex" ® LH-20 (2,5 x 125 cm) efterfulgt af eluering med 0,1N vandig eddikesyreopløsning.

Elueringsfraktionerne fra 275 ml til 290 ml opsamles og fryse- 2 tørres. På denne måde 110 mg af det ønskede produkt med Rf = 0,37, [a]^1 = +23,7° (c = 0,32, MeOH), aminosyreanalyse (salt-syre-hydrolysat): Gly 1,00, Met 0,38, Tyr 0,91, Phe 1,05.

Eksempel 28 Η-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH(CH^) (I) Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH(CH^)2

Under anvendelse af 0,51 g Z-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH2 og 0,08 ml isosmørsyre vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(111) 440 mg af det ønskede produkt med smp. 181-183°C, [a]^1 = -8,3° (c = 0,37, DMF), Rf1 = 0,32.

Beregnet for C^H^gOgNgS: C 59,18 H 6,17 N 11,19 S 4,27 Pundet: C 58,77 H 6,01 N 10,82 S 4,15%.

(II) Η-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH(CH.,)2

Under anvendelse af 300 mg Z-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH (CH3)2 vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(IV) 105 mg af det ønskede produkt med Rf^ = 0,37, [a]^1 = +26,8° (c = 0,32, MeOH), aminosyreanalyse (saltsyre-hydrolysat): Gly 1,00, Met 0,38, Tyr 0,89, Phe 1,02.

Eksempel 29 44 149064 Η-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH., (I) Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH^

Under anvendelse af 0,51 g Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH2 og 0,06 ml eddikesyre vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(111) 405 mg af det ønskede produkt med smp. 180-182°C, Rf1 = 0,28, [aj^1 -9,1° (c = 0,30, DMF).

Beregnet for c 56,75 H 5,72 N 11,34 S 4,33

Fundet: C 56,48 H 5,62 N 11,08 S 4,05%.

(II) Η-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH^

Under anvendelse af 300 mg Z-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CHg vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(IV) 130 mg af det ønskede produkt med Rf^ = 0,30, [a]p1= +19,6° (c = 0,27, MeOH), aminosyreanalyse (saltsyrehydroly-sat): Gly 1,00, Met 0,35, Tyr 0,91, Phe 1,02.

Eksempel 30 Η-Tyr- (D) -Met (O) -Gly-Phe-NH-NH-CO- (CH^-CH^ (I) Z-Tyr- (D) -Met (O) -Gly-Phe-NH-NH-CO- (CH^-OL·,

Under anvendelse af 0,47 g Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NHj og 0,1 ml n-valerianesyre vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(111) 0,39 g af det ønskede produkt med smp. 159-161°C, Rf1 = 0,33, [a]^1 = -8,6° (c = 0,4, DMF).

Beregnet for C38H48°9N6S: C 59,66 H 6,32 N 10,98 S 4,19 Fundet: C 59,39 H 6,42 N 10,69 S 4,06%.

(II) Η-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-(CH,J3~CH3

Under anvendelse af 300 mg Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH- NH-CO-(CH~) .,-CH, vindes på samme måde som beskrevet i eksempel * Λ Λ 2 21 27-(IV) 110 mg af det ønskede produkt med Rf = 0,38, [a]p = +24,8° (c = 0,32, MeOH), aminosyreanalyse (syrehydrolysat):

Gly 1,00, Met 0,29, Tyr 0,89, Phe 1,00.

Eksempel 31 45 149066 Η-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-(CHJ^-CH^ (Ϊ) Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-(CH )

Under anvendelse af 0,51 g Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH2 og 0,09 ml n-kapronsyre vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(111) 430 mg af den ønskede forbindelse med smp. 170-172°C, Rf1 « 0,34, [a]21 = -9,1° (c » 0,48, DMF) .

Beregnet for C^gH^OgNgS: C 60,13 H 6,47 N 10,79 S 4,11 Fundet: C 59,88 H 6,42 N 10,53 S 4,22%.

(II) Η-Tyr- (D) -Met (O) -Gly-Phe-NH-NH-CO- (CH.,) ^-CH.,

Under anvendelse af 350 mg Z-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH-CO-(CH2)4~CH3 vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(IV) 210 mg af det ønskede produkt med Rf2 = 0,42, [a]2"*· = +25,7° (c = 0,30, MeOH), aminosyreanalyse (saltsyre-hydrolysat): Gly 1,00, Met 0,29, Tyr 0,88, Phe 0,99.

Eksempel 32 Η-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-MH-CO-(CH,,),,-0-CH2-CH3 (I) Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-KH-CO-(CH,,)2-0-CH,,-CH3

Under anvendelse af 0,51 g Z-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH2 og 0,09 ml β-ætoxypropionsyre vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(111) 440 mg af det ønskede produkt med smp. 159-161°C, Rf1 = 0,32, [a]21 = -7,5° (c = 0,48, DMF). Beregnet for C38H48°10N6S: C ^8/44 H 6,19 N 10,76 S 4,10 Fundet: C 58,22 H 6,31 N 10,59 S 3,99%.

(II) Η-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-(CH2)2-0-CH2-CH3

Under anvendelse af 350 mg Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO—(CH_)o-0-CH~-CH^ vindes på samme måde som beskrevet 2 & ώ o 2 i eksempel 27-(IV) 105 mg af det ønskede produkt med Rf = 0,40, [a]21 =+25,1° (c = 0,37), aminosyreanalyse (syrehydro-lysat): Gly 1,00, Met 0,32, Tyr 0,89, Phe 0,98.

Eksempel 33 46 149064 Η-Tyr-(D)-Met(O)-gly-Phe-ME-MH-CO-O-CH^-CHj (I) BOC-(D)-Met-Gly-OEt I 100 ml THF opløses 10,0 g BOC-(D)-Met-OH og 7,9 g HONB efterfulgt af afkøling til 0°C og tilsætning af 9,0 g DCC og blandingen omrøres ved 0°C i 6 timer. Oopløselige bestanddele filtreres fra og der sættes 5,9 g H-Gly-OEt,HCl-salt og 5,6 ml TEA til filtratet som derpå omrøres natten over ved stuetemperatur. THF afdestilleres og remanensen eks-traheres med 100 ml AcOEt efterfulgt af vask med vand og tørring over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen krystalliseres med petroleumsæter. Omkrystallisation fra AcOEt/petroleumsæter giver 9,8 g af det ønskede produkt med smp. 55-56°C, Rf1 = 0,70, ta]^1 = +12,5° (c = 0,67, DMF). Beregnet for c 50,28 H 7,83 N 8,37 S 9,59

Fundet: C 50,88 H 7,99 N 8,46 S 9,42%.

(II) BOC-Tyr-(D)-Met-Gly-OEt I 15 ml TFA opløses 3,0 g BOC-(D)-Met-Gly-OEt og blandingen får lov til at stå ved stuetemperatur i 10 minutter.

TFA afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter efterfulgt af udvinding ved filtrering. Det resulterende pulver opløses i 20 ml THF. Efter afkøling tilsættes 1,6 ml TEA og 4.0 g BOC-Tyr-ONB og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. THF afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt efterfulgt af vask med vand og tørring over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen krystalliseres med petroleumsæter. Omkrystallisation fra AcOEt giver 3.1 g af det ønskede produkt med smp. 121-122°C, Rf^· = 0,62, [a]^1 = +16,8° (c = 0,40, DMF).

Beregnet for C23H35°7N3S: c 55,51 H 7,09 N 8,44 S 6,44 Fundet: C 55,32 H 6,93 N 8,25 S 6,27%.

(III) BOC-Tyr-(D)-Met-Gly-OH

I 30 ml MeOH opløses 2,8 g BOC-Tyr-(D)-Met-Gly-OEt.

Efter afkøling tilsættes 12 ml N-vandig natriumhydroxydopløs- 149064 47 ning og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time. Efter afkøling tilsættes der 60 ml 0,2N vandig saltsyre og de udfældede krystaller opsamles ved filtrering efterfulgt af vask med koldt vand. Derved vindes 2,3 g af det ønskede produkt med smp. 184-186°C, Hf1 = 0,24, [a]^1 - +13,3° (c = 0,46, DMF). Beregnet for C21H3107N3S: C 53,71 H 6,65 N 8,94 S 6,83 Fundet: C 54,32 H 6,71 N 8,49 S 6,70%.

(IV) BOC-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-OH

I et blandet opløsningsmiddel bestående af 10 ml MeOH og 5 ml eddikesyre opløses 2,2 g BOC-Tyr-(D)-Met-Gly-OH efterfulgt af tilsætning af 0,6 ml 30%s vandig hydrogenperoxydop-løsning og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 5 timer.

Efter tilsætning af en lille mængde palladium-sort omrøres blandingen. Katalysatoren filtreres fra og opløsningsmidlet afdestilleres hvorved de udfældede krystaller opsamles ved filtrering. På denne måde vindes 2,1 g af det ønskede produkt med smp. 185°C (sønderdeling), Rf^ = 0,20, [a]p^ = +1,8° (c = 0,5, DMF).

Beregnet for C 50,08 H 6,20 N 8,35 S 6,36

Fundet: C 49,77 H 6,32 N 8,25 S 6,10%.

(V) BOC-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-MH-C0-0-CH2CH3 I 50 ml MeOH opløses 450 mg Z-Phe-NH~NH-CO-0-CH2-CH3 og der gennemføres katalytisk reduktion med anvendelse af palladium-sort som katalysator. Efter filtrering af katalysatoren afdestilleres MeOH og remanensen opløses i 10 ml DMF.

Ved siden af opløses 485 mg BOC-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-OH og 215 mg HONB i 5 ml DMF og efter afkøling til 0°C tilsættes 230 mg DCC og blandingen omrøres ved 0°C i 6 timer. Efter filtrering af de uopløselige bestanddele kombineres filtratet med aminkomponenten og blandingen omrøres ved stuetemperatur natten over. DMF afdestilleres og remanensen ekstraheres med 50 ml n-butanol efterfulgt af vask med vand. n-Butanolen afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter efterfulgt af opsamling ved filtrering. På denne måde vindes 330 mg af det Ønskede produkt med smp. 145-147°C, Rf1 = 0,28, fa]= -3,6° (c = 0,5, DMF).

149064 48

Beregnet for C^H^gO^NgS: C ^5,13 Η 6,45 Ν 11,69 S 4,46 Fundet: C 54,85 Η 6,29 Ν 11,45 S 4,35%· (VI) H-Tyr-(D)-Met(Ο)-Gly-Phe-NH-NH-CO-O-Cf^-CI^

Under anvendelse af 350 mg BOC-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-C0-0-CH2-CH3 vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 26 (IV) det ønskede produkt i et udbytte på 205 mg,

Rf2 = 0,39, [a]21 = +15,0° (c = 0,38, MeOH), aminosyreanalyse (syrehydrolysat): Gly 1,00, Met 0,22, Tyr 0,88, Phe 1,00.

Eksempel 34 Η-Tyr- (D) -Met (O) -Gly-Phe-NH-NH-CO-CH^-S-CH-, (I) BOC-Phe-13H-NH-CO-CH2-S-CH3 I 20 ml acetonitril opløses 1,4 ml ætyltioglykolat og der tilsættes 1 ml metyljodid. Mens blandingen omrøres under afkøling tilsættes dråbevis 2,1 ml TEA og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer. Acetonitrilet afdestilleres og remanensen ekstraheres med diætylæter efterfulgt af vask med vand og tørring over vandfrit natriumsulfat. Diætylæte-ren afdestilleres og remanensen opløses i MeOH efterfulgt af tilsætning af 0,7 ml hydrazinhydrat og henstand ved stuetemperatur i 2 dage. MeOH afdestilleres og remanensen opløses i 20 ml DMF. Til opløsningen sættes 3,2 g BOC-Phe-ONB og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. DMF afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt efterfulgt af vask med vand og tørring over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og de udfældede krystaller opsamles ved filtrering. Omkrystallisation fra AcOEt/petroleumsæter giver 2,3 g af det ønskede produkt med smp. 151-152°C, Rf1 = 0,66, [a]2"*" = -18,6° (c = 0,5, DMF).

Beregnet for C17H25°4N3S: C 55,55 H 6,86 N 11,44 S 8,73 Fundet: C 55,59 H 6,89 N 11,23 S 8,33%.

(II) BOC-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-HH-CO-CH2-S-CH3 I 4 ml TFA opløses 420 mg BOC-Phe-NH-NH-CO-CH2-S-CH3 og blandingen henstår, ved stuetemperatur i 20 minutter. TFA afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter efterfulgt af opsamling ved filtrering. Det resulterende pulver 149064 49 opløses i 10 ml DMF og til opløsningen sættes der 0,16 ml TEA.

Ved siden af opløses i 5 ml DMF 485 rag BOC-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-OH og 215 mg HONB og efter afkøling til 0°C tilsættes der 230 mg DCC og blandingen omrøres ved 0°C i 6 timer. Efter fra-filtrering af de uopløselige bestanddele kombineres filtratet med den i forvejen fremstillede aminkomponent og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. DMF afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter. På denne måde vindes 630 mg af det ønskede produkt med smp. 154-156°C, Rf1 = 0,25, [alp1 = -2,0° (c = 0,46, DMF).

Beregnet for C33H4609N6S2: C 53,93 H 6,31 N 11,43 S 8,72 Fundets C 53,64 H 6,42 N 11,25 S 8,45%.

(III) Η-Tyr-(Dj-Met(0)-Glv-Phe-NH-NH-C0-CH2-S-CH2

Under anvendelse af 300 mg BOC-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-S-CH3 vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 26(IV) 220 mg af det ønskede produkt med Rf^ = 0,42,

Λ I

[α]ρ = +15,4 (c = 0,33, MeOH), aminosyreanalyse (syrehydro-lysat): Gly 1,00, Met 0,38, Tyr 0,58, Phe 1,02.

Eksempel 35 50 149064 Η-Tyr- (D) -Met (ύ) -Gly-MePhe-MH^NH-CO-CH^CHj

(I) BOC- (D)-Met-Gly-OH

I 20 ml ætylalkohol opløses 4,7 g BOC-(D)-Met-Gly-OEt.

Efter afkøling tilsættes 16 ml N vandig natriumhydroxydopløs-ning og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time. Ætylalkoholen afdestilleres og efter tilsætning af citronsyreopløsning til neutralisering ekstraheres remanensen med 100 ml ætylacetat efterfulgt af vask med vand og tørring over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen krystalliseres med petroleumsæter. Omkrystallisation fra AcOEt/petroleums-æter giver et udbytte på 3,8 g af det ønskede produkt med smp. 124-125°C, Rf1 = 0,41, [a]^1 = +12,3° (c = 0,59, DMF) .

Beregnet for ci2H22°5N2S: C 47'04 H 7'23 N 9/14 s 10'46 Fundet: C 46,79 H 7,45 N 9,20 S 10,21%.

(II) BOC- (D) -Met(O) -Glv-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH3 I 50 ml MeOH opløses 4,7 g Z-MePhe-OH og der tilsættes 2 ml 6N saltsyre/dioxan efterfulgt af henstand natten over ved stuetemperatur. MeOH afdestilleres og efter vask med vand ekstraheres remanensen med 100 ml AcOEt efterfulgt af vask med vand og tørring over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen opløses i 50 ml MeOH efterfulgt af tilsætning af 1,5 ml hydrazinhydrat og henstand ved stuetemperatur i 3 dage. MeOH afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt efterfulgt af vask med vand og tørring over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen opløses i 20 ml THF hvorefter der tilsættes 1,4 ml propionsyreanhydrid. Efter afkøling tilsættes der 1,4 ml TEA og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 5 timer. THF afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt hvorefter der vaskes med 5%s vandigt natriumbikarbonatopløsning og der tørres over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres hvorved der vindes 3,8 g Z-MePhe-NH-NH-CO-CH2,-CH3 i form af et olieagtigt produkt hvorfra 2,3 g opløses i 50 ml MeOH til gennemføring af katalytisk reduktion med palladium-sort Som katalysator. Katalysatoren filtreres fra og MeOH afdestilleres hvorefter den resulterende re- 149064 51 manens opløses i 10 ml DMF.

Ved siden af opløses 1,85 g BOC-(D)-Met-Gly-OH og 1,2 g HONB i 20 ml acetonitril. Efter afkøling til 0°C tilsættes der 1,4 g DCC og blandingen omrøres ved 0°C i 4 timer. Efter frafiltrering af de uopløselige bestanddele kombineres filtratet med aminkomponenten og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdestilleres og remanensen opløses i 100 ml AcOEt og vaskes med vand. AcOEt-opløs-ningen koncentreres til 20 ml hvortil der sættes 5 ml eddikesyre og 0,5 ml 30%s vandig hydrogenperoxydopløsning efterfulgt af omrøring ved stuetemperatur i 5 timer. Reaktionsopløsningen ekstraheres med 50 ml n-butanol og vaskes med vand. n-Bu-tanolen afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter efterfulgt af opsamling ved filtrering. Derved vindes 1,9 g af det ønskede produkt med smp. 116-117°C, Rf^ = 0,20, [a]^1 = -25,7° (c = 0,38, DMF).

Beregnet for C25H39°7N5S: C 54,22 H 7,09 N 12,65 S 5,79 Pundets C 54,05 H 6,98 N 12,41 S 5,48%.

(III) BOC-Tyr- (D) -Met (O) -Gly-MePhe~NH-NH-CO-CH2'-CHo I 4 ml TFA opløses 420 mg B0C-(D)-Met(0)-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2“CH3 og blandingen henstår ved stuetemperatur i 20 minutter. TFA afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter efterfulgt af opsamling ved filtrering og tørring.

Det resulterende pulver opløses i 10 ml DMF og efter afkøling tilsættes 0,14 ml TEA. Efter tilsætning af 330 mg BOC-Tyr-ONB omrøres blandingen natten over ved stuetemperatur. DMF afdestilleres og remanensen ekstraheres med 50 ml n-butanol efterfulgt af vask med vand. n-Butanolen afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter og opsamles ved filtrering. Genudfældning fra metano1/diætylæter giver 310 mg af det ønskede produkt med smp. 138-139°C, Rf1 = 0,20, [a]^ = -21,3° (c = 0,55, DMF).

Beregnet for C34H4809N6S: c 56,96 H 6,74 N 11,72 S 4,47 Fundet; C 56,58 H 6,48 N 11,58 S 4,23%.

U9064 52 (IV) Η-Tyr-(D)"Met(O)-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH3 I 2 ml TFA opløses 150 mg B0C-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-MePhe-NH-NH-CO-C^-CHg og blandingen får lov til at stå ved stuetemperatur i 30 minutter. TFA afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter efterfulgt af opsamling ved filtrering.

Det resulterende pulver opløses i en lille mængde vand og opløsningen føres gennem en kolonne (2x4 cm) af "Amberlite" ® IRA-410 (eddikesyretype) idet effluenten og vaskevæskerne kombineres for at blive frysetørret. Det vundne pulver renses på tilsvarende måde som i eksempel 26-(VI) og der vindes 60 mg af det ønskede produkt med Rf ^ = 0,33, [a]^ = +4,1° (c = 0,21, MeOH), aminosyreanalyse (syrehydrolysat): Gly 1,00,

Met 0,24, Tyr 0,91.

Eksempel 36 H-MeTyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH-C0-CH2-CH3 (I) Z-MeTyr(Bufc)-(D)-Met(O) -Gly-Phe-NH-MH-CO-C^-CHj I 4 ml TFA opløses 470 mg BOC-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH-CO-C^-CHg og blandingen får lov til at stå ved stuetemperatur i 10 minutter. TFA afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter efterfulgt af udvinding ved filtrering.

Det resulterende pulver opløses i 10 ml DMF. Efter afkøling tilsættes 0,15 ml TEA og Z-MeTyr-(Bu^)-ONB (fremstillet ved DCC-metoden ud fra 380 mg Z-MeTyr-(Bu*")-OH og 215 mg HONB) og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. DMF af-destilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt efterfulgt af vask med vand og tørring over vandfrit natriumsulfat.

AcOEt afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter til opsamling ved filtrering. På denne måde vindes 450 mg af det ønskede produkt med Rf1 = 0,46, [a]p = -30,0° (c = 0,5, DMF).

Beregnet for C^gH^^OgNgS: C 62,46 H 6,85 N 9,34 S 4,27 Fundets C 62,15 H 6,63 N 9,05 £ 3,91%.

(II) H-MeTyr- (D) -Met (O) -Gly-Phe-NH-NH-CO-CH^CH-,

Under anvendelse af 350 mg Z-MeTyr-(But)-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2*'CHg fremstilles på samme måde som beskre- 149064 53 vet i eksempel 27-(IV) 120 mig af det ønskede produkt med Rf ^ = 0,34, [a]j^ = +19,5° (c = 0,20, MeOH), aminosyreanaly-se (syrehydrolysat): Gly 1,00, Met 0,32, Phe 0,98.

Eksempel 37 H-MeTyr-(D)-Met(O)-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH3 (I) Z-MeTyr-(But)- (D)-Met(O)-Gly-MePhe-MI-NH-CO-CH2-CH3 I 4 ml TFA opløses 550 mg BOO (D)-Met(0)-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH2 og blandingen får lov til at stå ved stuetemperatur i 10 minutter. TFA afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter efterfulgt af opsamling ved filtrering og tørring. Det resulterende pulver opløses i 10 ml DMF og efter afkøling tilsættes 0,16 ml TFA. Efter tilsætning af Z-MeTyr-(But)-ONB (fremstillet ved DCC-metoden ud fra 385 mg Z-MeTyr-(Bu^)-OH og 210 mg HONB) omrøres blandingen natten over ved stuetemperatur. DMF afdestilleres og remanensen eks-traheres med 100 ml AcOEt efterfulgt af vask med vand og tørring over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen behandles med diætylæter til opsamling ved filtrering. Derved vindes 450 mg af det ønskede produkt med smp. 121-123°C, Rf1 = 0,48.

Beregnet for C42H56°9N6S,H20: C 60,12 H 6,97 N 10,01 S 3,82 Fundet: C 59,88 H 6,86 N 9,75 S 3,91%.

(II) H-MeTyr-(p)-Met(0)-Gly-MePhe-im-NH-CO-CH^-CH3

Under anvendelse af 250 mg Z-MeTyr-(Bu )-(D)-Met(O)-Gly-MePhe-NH-NH-CO-CH2-CH^ fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(IV) 105 mg af det ønskede produkt med 2

Rf = 0,36, aminosyreanalyse (saltsyrehydrolysat): Gly 1,00,

Met 0,31.

Eksempel 38 Η-Tyr- (D) -Met (O) -Gly-Phe-NH-NH-CO-CH^C^Cl (I) Z-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CH2-CH2-Cl

Under anvendelse af 510 mg Z-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-phe-NH-NH2 og 100 mg β-klorpropionsyre vindes på samme måde som 54 US064 beskrevet i eksempel 27-(III) 410 mg af det ønskede produkt med smp. 172-175°C, Rf1 = 0,26, [aj21 = -8,9° (c = 0,50, DMF).

Beregnet for C36H43°9N6SC1'H2°: C 54,78 H 5,74 N 10,65 S 4,06 Cl 4,49 Fundet: C 54,45 H 5,62 N 10,54 S 4,12 Cl 4,03%.

(II) Η-Tyr-(D) -Met (O)-Gly-Phe-NH-MH-CO-CH2-CH2-Cl

Under anvendelse af 300 mg Z-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH-CO-C^-C^-Cl fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(IV) 120 mg af det ønskede produkt med Rf2 = 0,37, [a]21 = +25,4° (c = 0,40, MeOH), aminosyreanalyse (syrehydro-lysat): Gly 1,00, Met 0,40, Tyr 0,92, Phe 0,98.

Eksempel 39 Η-Tyr- (D) -Met (O) -Gly-Phe-NH-NH-CO-C^-CH,, -CQ-CH^ (I) Z-Tyr- (D) -Met (0) -Gly-Phe-NH-Mi-CO-CHn-CE^-CO-CH·^

Under anvendelse af 510 mg Z-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH2 og 110 mg lævulinsyre fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(111) 380 mg af det ønskede produkt med smp. 161-162°C, Rf1 = 0,25, [a]21 = -7,6° (c = 0,35, DMF).

Beregnet for c38H46°10N6S'H2O: C 57,27 H 6,07 N 10,54 S 4,02 Fundet: C 57,05 H 6,12 N 10,23 S 3,85%.

(II) Η-Tyr- (D) -Met (0) -Gly-Phe-NH-NH-CO-CH^-CH^-CO-CH·,

Under anvendelse af 350 mg Z-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH-CO-CK^-CI^CO-CH^ fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(IV) 130 mg af det ønskede produkt med Rf2 = ΟΙ Λ 0,35, [α]β =+26,0 (c =0,25, MeOH), aminosyreanalyse (syre-hydrolysat): Gly 1,00, Met 0,33, Tyr 0,98, Phe 1,02.

Eksempel 40

Η-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-?he-NK-NH-eo-CK2-CK2-OH

(I) BOC-Tyr-(D)-Met (O) -Gly-Phe-NH-NH-CO-C^-CH^-OH

Under anvendelse af 460 mg Z-Phe-NH-NH-CO-C^-C^-OH og 485 mg BOC-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-OH fremstilles på samme måde som beskrevet i eksempel 33-'(V) 620 mg af det 149064 55 ønskede produkt med smp. 148-150°C, Rf1 =0,20, [a]21 = -2,6° (C = 0,40, DMF).

Beregnet for C35H4gOioN6^: C ^5,13 H 6'^5 N ^S 4,46 Pundet: C 54,86 H 6,25 N 11,42 S 4,19%.

(II) Η-Tyr- (D) -Met (O) -Glv-Phe-NH-NH-CO-CH:,-CH2-^OH

Ved at behandle 350 mg BOC-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NH-NH-CO-C^-C^-OH på samme måde som beskrevet i eksempel 26- (VI) vindes 150 mg af det ønskede produkt med Rf2 = 0,30, [a]21 = +19,4° (c = 0,35, MeOH), aminosyreanalyses Gly 1,00,

Met 0,32, Tyr 0,89, Phe 1,00.

Eksempel 41 Η-Tyr-(D) -Met(0)-Gly-Phe-NH-NH^ (I) Η-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH^

Onder anvendelse af 300 mg Z-Tyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NH-NH2 vundet på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(11) vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(IV) 140 mg af det ønskede produkt med Rf2 = 0,20, [.o]^1 = +33,0° (c = Q,35, MeOH), aminosyreanalyse (sy rehydro lysat).: Gly 1,00, Met 0,29, Tyr 0,95, Phe 1,00.

Eksempel 42 Ή-Tyr- (D) -Thr-Gly-Phe-NH-NH'-CO- (CH2) 3~CH3 (I) Z-(D)-Thr-Gly-OBu1 I 50 ml THF opløses 5,0 g Z-(D)-Thr-0H og 3,6 g H-Gly-OBu^. Efter afkøling tilsættes 3,9 g HONB og 4,5 g DCC og blandingen omrøres natten over. Opløsningsmidlet afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt efterfulgt af vask med vand og tørring over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdestilleres og remanensen behandles med petroleumsæter. Omkrystallisation fra AcOEt/petroleumsæter giver 5,0 g af den Ønskede forbindelse med smp, 56-57°C, [a]23 = +13,8° (c = 0,5, MeOH),

Rf1 = 0,69.

Beregnet for ci8H26®6N2: C H 7,15 N 7,65

Pundet: C 58,73 H 7,11 N 7,87%.

149064 56

(II) Z-Tyr-(Dj-Thr-Giy-OH

I 100 ml MeOH opløses 4,6 g Z-(D)-Thr-Gly-OBu^ og der gennemføres katalytisk reduktion med palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra. Efter afdestillation af MeOH opløses remanensen i 50 ml THF. Hertil sættes 5,9 g Z-Tyr-ONB og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdampes og remanensen opløses i 100 ml AcOEt. AcOEt-opløsningen vaskes med vand efterfulgt af tørring over vandfrit natriumsulfat. AcOEt afdampes og remanensen behandles med æter til dannelse af et pulver. Pulveret som udgør 3,7 g behandles med 40 ml TFA i 40 minutter ved stuetemperatur. Efter inddampning tritureres remanensen med diætylæter. Bundfaldet opsamles. Efter tørring krystalliseres pulveret fra AcOEt hvorved der vindes et udbytte på 2,9 g med smp. 143-144°C, [<x]23 = +18,2° (c = 0,5, MeOH), Rf2 = 0,49.

Beregnet for C23H2708N3,1/2H20: C 57,25 H 5,85 N 8,87

Fundet: C 57,57 H 5,92 N 8,55%.

(III) Z-Tyr-(D)-Thr-Gly-Phe-OCHj

Under anvendelse af 1,5 Z-Tyr-(D)-Thr-Gly-OH og 0,73 g H-Phe-OCH_,hydroklorid vindes den ønskede forbindelse på samme ^ _ Λ Λ måde som beskrevet i eksempel 1—(X) med smp. 102-103 C [a]p = +20,3° (c = 0,33, MeOH), Rf1 - 0,44.

Beregnet for C33H38°9N4: c 62»45 H 6/04 N 8,83

Fundet: C 62,31 H 6,28 N 8,59%.

(IV) Z-Tyr- (t>) -Thr-Gly-Phe-NHNHp

Under anvendelse af 1,5 g Z-Tyr-(D)-Thr-Gly-Phe-OCH3 og 0,5 ml NH2NH2,H20 vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 1-(II) 1,4 g af den Ønskede forbindelse med smp. 212-213°C, [a]23 = -25,9° (c = 0,32, DMF), Rf1 ·» 0,12.

Beregnet for C^HggOgNgi C 60,55 H 6,04 N 13,24 Fundet; C 60,31 H 6,25 N 12,98%.

(V) Z-Tyr- (D) -Thr-Gly-Phe-NHNH-CO- (CHLJ j-CHj

Under anvendelse af 0,54 g Z-Tyr-(D)-Thr-Gly-Phe-NHNH2 og 0,14 ml n-valerianesyre vindes på samme måde som beskrevet 149064 57 i eksempel 4-(i) 0,42 g af den ønskede forbindelse med smp. 172-173°C, [a]24 = -17.,5° (c = 0,39, DMF), Rf1 = 0,45.

Beregnet for C^yH^.gO^NgS C 61,82 H 6,45 N 11,69 Fundet: C 61,66 H 6,44 N 11,43%.

(VI) Η-Tyr- (D) -Thr-Gly-Phe-NHNH-CQ-

Under anvendelse af 0,25 g Z-Tyr-(D)-Thr-Gly-Phe-NH- NH-CO-(CH2)3"CH3 vindes 105 mg af den ønskede forbindelse på samme måde som beskrevet i eksempel 4-(II). Rf2 = 0,50, 24 o [a]D = +10,8 (c = 0,31, MeOH), aminosyreanalyse (hydrolyseret med saltsyre): Thr 0,97, Gly 1,00, Tyr 1,10, Phe 1,15.

Eksempel 43 Η-Tyr-(D)-Nva-Gly-Phe-NHNH-CO-CHj (D 2-Phe-NHNH-CO-CH3 115 g Z-Phe-ONB opløses i 300 ml THF og hertil sættes der 20 g acetylhydrazin. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 10 timer. De dannede krystaller opsamles ved filtrering, vaskes med vand og omkrystalliseres fra acetonitril, udbytte 71 g, smp. 200-201°C, [a]23 = -17,2° (c = 0,5, DMF), Rf1 = 0,65.

Beregnet for C 64,21 H 5,96 N 11,83

Fundet: C 64,05 H 5,83 N 11,69%.

(II) Z-Gly-Phe-NHUH-CO-CH^ 42,6 g Z-Phe-NHNH-CO-CH3 hydrogeneres over palladiumsort i 400 ml MeOH. Blandingen filtreres til fjernelse af katalysatoren og filtratet inddampes. Remanensen opløses i 100 ml DMF og hertil sættes der 44 g Z-Gly-ONB.

Blandingen omrøres i 10 timer ved stuetemperatur og inddampes. Remanensen behandles med diætylæter til dannelse af et pulver som krystalliseres fra vandigt acetonitril. Udbytte 45,2 g, smp. 154-155°C,[a]23 = -0,9° (c = 0,5, DMF),

Rf1 = 0,52.

Beregnet for C2iH24®5^4: ^ *>1/15 H 5,87 N 13,59 Fundet: C 60,89 H 5,62 N 13,40%.

149064 58 (III) Z-(D)-Nva-Gly-?he-NHNH-COCH3 5 g Z-Gly-Phe-NHNH-COCH^ hydrogeneres over palladium-sort som katalysator i 100 ml MeOH. Katalysatoren filtreres fra og filtratet inddampes hvorved der vindes 3,5 g H-Gly-Phe-NHNH-COCH3 i form af krystaller. I 10 ml DMF opløses 0,89 g H-Gly-Phe-NHNH-COCH3 og Z-(D)-Nva-ONB, som er fremstillet ud fra 0,80 g Z-(D)-Nva-OH og 0,63 g Η0ΝΒ ved DCC-metoden. Blandingen omrøres i 10 timer ved stuetemperatur og inddampes. Remanensen behandles med diætylæter til dannelse af et pulver som krystalliseres fra acetonitril. Udbytte 1,3 g, smp. 235-237°C, [a]23 = +3,4° (c = 0,45, DMF), Rf1 = 0,44.

Beregnet for C26H33°6N5: C 61,04 H 6,50 N 13,69 Fundet: C 61,33 H 6,62 N 13,66%.

(IV) Z-Tyr-(D)-Nva-Gly-Phe-NHNH-CO-CH3 0,92 g Z-(D)-Nva-Gly-Phe-NHNH-COCH3 hydrogeneres over palladium-sort i 50 ml MeOH. Katalysatoren filtreres fra og filtratet inddampes. Remanensen opløses i 10 ml DMF og der tilsættes 0,86 g Z-Tyr-ONB. Blandingen omrøres i 10 timer ved stuetemperatur og inddampes. Remanensen behandles med diætylæter til dannelse af et pulver som krystalliseres fra acetonitril. Udbytte 0,85 g, smp. 210-211°C, [a]33 = -18,3° (c = 0,48, DMF), Rf1 = 0,38.

Beregnet for C35H4208N6: C 62'30 H 6'27 N 12,46 Fundet: C 62,15 H 6,06 N 12,33%.

(V) Η-Tyr-(D)-Nva-Gly-Phe-NH-NH-COCH^

Under anvendelse af 0,40 g Z-Tyr-(D)-Nva-Gly-Phe-NH-NH-COCH3 vindes 0,16 g af den ønskede forbindelse på samme måde som beskrevet i eksempel 4-(11). Rf2 = 0,36, [a]23 = +22,6° (c = 0,30, MeOH), aminosyreanalyse (hydrolyseret med saltsyre):

Gly 1,00, Nva 1,10, Tyr 0,99, Phe 1,07.

149064 59

Eksempel 44 Η-Tyr- (D) -Gln-Giy-phe-NHNH-COCH., (I) BOC-(D)-Gln-Gly-Phe-NHNH-COCHj

Under anvendelse af 0,96 g BOC-(D)-Gln-ONP og 0,72 g H-Gly-Phe-NHNH-COCHg vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 45-(111) 0,95 g af den ønskede forbindelse med smp. 198-199°C, [a]33 = -0,8° (c - 0,50, DMF), Rf1 = 0,19.

Beregnet for C23H34°7N6! C 54,53 H 6,77 N 16,59 Fundets C 54,29 H 6,81 N 16,65%.

(II) Z-Tyr-(D)-Gln-Gly-Phe-NHNH-COCHj

Under anvendelse af 0,55 g BOC-(D)-Gln-Gly-Phe-NHNH-COCH3 og 0,52 g Z-Tyr-ONB fremstilles den ønskede forbindelse i et udbytte på 0,60 g på samme måde som beskrevet i eksempel 26-(V). Smp. 209-210°C, [aj33 = -21,5° (c = 0,40, DMF), Rf1 = 0,12.

Beregnet for C^H^O^: C 59,73 H 5,87 N 13,93 Fundet: C 59,72 H 5,92 N 13,86%.

(III) Η-Tyr-(D)-Gln-Gly-Phe-NHNH-COCH^

Under anvendelse af 0,40 g Z-Tyr-(D)-Gln-Gly-Phe-NHNH- CQCH, fremstilles 0,18 g af den ønskede forbindelse på samme 0 2 23 måde som beskrevet i eksempel 4-(II). Rf = 0,25, [a]D = +14,5° (c = 0,35, MeOH), aminosyreanalyse (hydrolyseret med saltsyre): Glu 0,88, Gly 1,00, Tyr 0,90, Phe 0,98.

Eksempel 45 Η-Tyr-(D)-Phe-Gly-Phe-NHNH-COCH^ (I) BOC-(D)-Phe-Gly-Phe-NHNH-COCH^

Under anvendelse af 0,44 g H-Gly-Phe-NHNH-COCH3 og 0,68 g BOC-(D)-Phe-ONB vindes 0,68 g af den ønskede forbindelse på samme måde som beskrevet i eksempel 45-(111), smp. 208-209°C, [d]J3 = +3,3° (c = 0,45, DMF), Rf1 - 0,51.

Beregnet for C27H35°6N5! c 61*70 H 6/71 N 13,33 Fundet: C 61,45 H 6,65 N 13,46%.

149064 60 (XI) Z-Tyr-(D)-Phe-Gly-Phe-NHNH-COCHj

Under anvendelse af 0,51 g BOC-(D)-Phe-Gly-Phe-NHNH-COCHj og 0,46 g Z-Tyr-ONB vindes den ønskede forbindelse på samme måde som beskrevet i eksempel 26-(V). Smp. 203-204°C, [a]p3 = -13,0° (c = 0,44, DMF), Rf1 = 0,38.

Beregnet for C 64,80 H 5,86 N 11,63

Fundet: C 64,70 H 5,95 N 11,40%.

(III) Η-Tyr- (D) -Phe-Gly-Phe-NHNH-COCH-, 0,45 g Z-Tyr-(Dj-Phe-Gly-Phe-NHNH-COCHg hydrogeneres i 50 ml MeOH over palladium-sort som katalysator. Katalysatoren filtreres fra og filtratet inddampes. Den resulterende remanens behandles med diætylæter til dannelse af et pulver 2 som krystalliseres fra acetonitril. Udbytte 0,22 g, Rf = Λ Λ 0,37, [α]^ = -11,4 (c = 0,35, MeOH), aminosyreanalyse (hydrolyseret med saltsyre): Gly 1,00, Tyr 0,98, Phe 0,95.

Eksempel 46 Η-Tyr-(D)-Lys-Glv-phe-NHNH-COCHj (I) BOC-(D)-Lys-(Cl-Z)-Gly-Phe-NHNH-COCH^

Under anvendelse af 0,58 g H-Gly-Phe-NHNHCOCH^ og 1,15 g BOC-(D)-Lys(Cl-Z)-ONB vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 45-(111) 1,05 g af den ønskede forbindelse med smp. 169-171°C, [a]33 = +4,7° (c = 0,47, DMF), Rf1 = 0,45.

Beregnet for C^H^OgNgCl: C 57,00 H 6,27 N 12,46 Cl 5,26 Fundet: C 56,88 H 6,05 N 12,29 Cl 5,35%.

(II) BOC-Tyr-(D)-Lys(Cl-Z)-Gly-Phe-NHNH-COCHj

Under anvendelse af 0,70 g BOC-(D)-Lys(Cl-Z)-Gly-Phe-NHNH-COCHg og 0,50 g BOC-Tyr-ONB vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 26-(V) 0,71 g af den ønskede forbindelse med smp. 196-198°C, [<x]£3 = -2,0° (c * 0,47, DMF), Rf1 = 0,46. Beregnet for C41H5i0xqN7C-*-: C 58,80 H 6,13 N 11,70 Fundet: C 58,69 H 6,25 N 11,49%.

(III) Η-Tyr-(D)-Lys(Cl-Z)-Gly-Phe-NHNH-COCH2

Under anvendelse af 0,65 g BOC-Tyr-(D)-Lys(Cl-Z)-Gly-

Phe-NHNH-COCH- vindes på samme måde som beskrevet i eksempel J 2 26-(VI) 0,33 g af den ønskede forbindelse med Rf =0,42, 149064 61 Λη Λ ta]|j = +16,5° (c = 0,26, MeOH), aminosyreanalyse (hydrolyseret med saltsyre): Lys 0,85, Gly 1,00, Tyr 0,88, Phe 1,00.

(IV) Η-Tyr-(D)-LysrGly-Phe-NHNH-COCHj 0,18 g H-Tyr-(D)-Lys(Cl-Z)-Gly-Phe-NHNH-COCH3 hydrogeneres oyer palladium-sort i 50 ml MeOH. Katalysatoren filtreres fra og filtratet inddampes til dannelse af et råprodukt som renses på samme måde som beskrevet i eksempel 4-(il). udbytte 0,10 g, Rf3 = 0,15, [a]£3 = +26,1° (c = 0,36, MeOH), aminosyreanalyse (hydrolyseret med saltsyre)s Lys 0,98, Gly 1,00, Tyr 0,99, Phe 1,02.

Eksempel 47 Η-Tyr-(D)-Ser-Gly-Phe-NHNH-COCHj (I) Z-(D)-Ser-Gly-Phe-NHNH-COCHj

Under anvendelse af 0,69 g H-Gly-Phe-NHNH-COCH^ og 1,08 g Z-(D)-Ser-ONB vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 45-(111) 1,25 g af den ønskede forbindelse med smp. 168-169°C, [a]p3 =+3,4° (c = 0,5, DMF), Rf1 = 0,25.

Beregnet for C24H29°7N5: c 57'72 H 5,85 N 14,02

Fundet: C 57,48 H 5,99 N 13,80%.

(II) Z-Tyr- (D) -Ser-Gly-Phe-MHNH-COCH.j

Under anvendelse af 0,75 g Z-(D)-Ser-Gly-Phe-NHNH-COCH3 og 0,72 g Z-Tyr-ONB vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 45-(IV) den ønskede forbindelse med smp. 184-186°C, [a]33 = -18,3° (c = 0,30, DMF), Rf1 = 0,19.

Beregnet for C^H^OgNg: ^ ^ 5,78 N 12,68

Fundet: C 59,59 H 5,82 N 12,51%.

(III) Η-Tyr-(D)-Ser—Gly—Phe-NHNH-COCHj

Under anvendelse af 0,40 g Z-Tyr-(D)-Ser-Gly-Phe-NHNH- COCH, vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 4-(II) J 2 23 0,21 g af den ønskede forbindelse med Rf =0,21, Ια]D= +11,4° (c = 0,31, MeOH), aminosyreanalyse (hydrolyseret med 149064 62 saltsyre): Ser 0,85, Gly 1,00/ Tyr 0,90, Phe 0,92.

Eksempel 48 Η-Tyr- (D) -His-Gly-Phe'-HHMH-COCH^CHj (I) BOC-(D)-His (Tos)-Gly-Phe-NHNH-CQCH^H^

Under anvendelse af 0,85 g Z-Gly-Phe-NHNH-COC^CH^ og 1,15 g BOC-(D)-His(Tos)-ONB vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 26-(IV) den ønskede forbindelse med smp. 178-179°C, [a]23 = -1,7° (c = 0,47, MeOH), Rf1 = 0,48.

Beregnet for C^H^OglS^S: C 56,21 H 6,04 N 14,34 S 4,69 Fundet: C 56,32 H 6,01 N 14,15 S 4,38%.

(II) BOC-(D)-His-Gly-Phe-MHNH-COCH2CH3 I 15 ml MeOH suspenderes der 0,55 g BOC-(D)-His(Tos)-Gly-Phe-NHNH-COCH2CH3 og ved 0°C tilsættes der 1 ml IN natri-umhydroxydopløsning. Blandingen omrøres i 60 minutter ved stuetemperatur og inddampes. Remanensen behandles med acetonitril til dannelse af et pulver som vaskes med vand og tørres. Udbytte 0,29 g, smp. 261-263°C, [a]23 = +9,5° (c = 0,40, DMF),

Rf2 = 0,38.

Beregnet for C25H35°6N7/H20: C 54,83 H 6,44 N 17,90

Fundet: C 54,61 H 6,13 N 17,80%.

(III) Z-Tyr-(D)-His-Gly-Phe-NHNH-COCHoCH^

Under anvendelse af 0,25 g BOC-(D)-His-Gly-Phe-NHNH-COC^CH^ og 0,24 g Z-Tyr-ONB vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 26-(V) den ønskede forbindelse i et udbytte på 0,31 g med smp. 181-182°C, ta]23 = -10,5° (c = 0,38, DMF),

Rf2 = 0,56.

Beregnet for C37H42°8N8,H20: C 59,67 H 5,68 N 15,03

Fundet: C 59,31 H 5,92 N 14,81%.

dV) Η-Tyr- (D) -His-Gly-Phe-NHNH-COCH2CH3

Under anvendelse af 0,20 g Z-Tyr-(D)-His-Gly-Phe-NHNH-C0CH2CH3 vindes 90 mg af den ønskede forbindelse på samme måde som beskrevet i eksempel 4-(II). Rf2 = 0,15, aminosyreanalyse:

His 0,95, Gly 1,00, Tyr 0,85, Phe 1,02.

149064 63

Eksempel 49 Η-Tyr-(D)-Met(02)-Glv-Phe-NHNH-CO-CH3

(I) BOC-(D)-Met(0^)-OH,DCHA

I en blanding af 10 ml MeOH, 10 ml eddikesyre og 10 ml IN svovlsyre opløses 1,7 g BOC-(D)-Met-OH. Der tilsættes 5 ml 30Ss vandig hydrogenperoxyd. Blandingen omrøres i 24 timer ved stuetemperatur og inddampes. Remanensen ekstraheres med 50 ml AcOEt. AcOEt-opløsningen vaskes med vand pg tørres over vandfrit natriumsulfat. Til AcOEt-opløsningen sættes der 0,9 ml DCHA og de dannede krystaller opsamles ved filtrering. Udbytte 1,8 g, smp. 201°C, [a]23 = -16,5° (c - 0,18, DMF),

Rf2 = 0,61.

Beregnet for C22H42°6N2S: C 57,11 H 9,14 N 6,05 S 6,93

Fundet: C 57,43 H 9,25 N 6,10 S 7,08%.

(II) BOC-(D)-Met(02)-Gly-Phe-NHNH-COCHj

Under anvendelse af 0,69 g H-Gly-Phe-NHNH-COCH^ og 0,66 g B0C-(D)-Met(02)-0H vindes 0,67 g af den ønskede forbindelse på samme måde som beskrevet i eksempel 45-(111) og med smp. 198-199°C (sønderdeling), [a]23 = “2,5° (c = 0,49, DMF),

Rf1 = 0,25.

Beregnet for C23H35°8N5S: C 51,00 H 6,51 N 12,93 S 5,92

Fundet: C 50,92 H 6,63 N 12,75 S 5,68%.

(III) BOC-Tyr- (D) -Met (O ) -Gly-Phe-NHNH-COCH

Under anvendelse af 0,52 g BOC-(D)-Met(02)-Gly-Phe-NHNH-C0CH3 og 0,46 g BOC-Tyr-ONB vindes den ønskede forbindelse på samme måde som beskrevet i eksempel 26-(V) og med smp. 176-177°C, [a]23 - -2,9° (c = 0,24, DMF), Rf1 = 0,23.

Beregnet for C^H^O^NgS: C 54,52 H 6,29 N 11,92 S 4,55

Fundet: C 54,61 H 6,32 N 11,99 S 4,62%.

(IV) Η-Tyr-(D)-Met(02)-Gly-Phe-NHNH-COCH3

Under anvendelse af 0,35 g BOC-Tyr-(D)-Met(02)-Gly-Phe- NHNH-COCH, vindes der 0,21 g af den ønskede forbindelse på ^ 2 samme måde som beskrevet i eksempel 26-(Vi). Rf = 0,19, ΛΛ Λ [a]p = +19,0° (c = 0,33, MeOH), aminosyreanalyse: Gly 1,00, 149064 64

Tyr 0,95, Phe 1,05.

Eksempel 50 Η-Tyr-(D)-Åla-Gly-Phe-NH-NH-CO-CHj (I) Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NH-NH-CO-CHj

Under anvendelse af 0,66 g Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-OH og 0,59 g Z—Phe-NH-NH-COCH^ vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 11-(II) 0,82 g af det ønskede produkt med smp.

210-211°C, [a]33 = -22,9° (c = 0,31, DMF), Rf1 = 0,20.

Beregnet for C33H380gNg,H20: C 59,63 H 6,07 N 12,64 Pundet: C 59,99 H 6,28 N 12,62%.

(II) Η-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NHNH-CO-CH.,

Under anvendelse af 0,35 g Z-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NHNH-CO-CH3 vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 10-(III) 0,16 g af det ønskede produkt med Rf3 = 0,40, [a]33 = +21,6° (c = 0,3, MeOH), aminosyreanalyse (saltsyrehydrolysat)s Gly 1,00, Ala 1,02, Tyr Q,85, Phe 0,99.

Eksempel 51 B-Tyr-(D)-Ala-Gly—Phe—ΜΗΝΗ—CO-CH2CH2CH3,hydroklorid 80 mg H-Tyr-(D)-Ala-Gly-Phe-NHNH-CO-CH2CH2CH3 vundet på samme måde som beskrevet i eksempel 10 opløses i 7,5 ml 0,02N saltsyreopløsning og opløsningen frysetørres til dannelse af et fint pulver, som krystalliseres fra en blanding af ætanol og acetonitril. Udbytte 55 mg, smp. 169-170°C, [a]34 = +33,1° (c = 0,26, DMF).

149064 65

Eksempel 52 Η-Tyr·— (Dj -Met (O) -Gly-MePhe-MHNH-CO-CHj

(I) BOC-(D)-Met(O)-OH

I 200 ml acetonitril opløses 37 g BOC-(D)-Met-OH hvorpå der tilsættes 19 ml 30%s vandig hydrogenperoxydopløsning og blandingen omrøres i 8 timer ved stuetemperatur. Der sættes palladium-sort til reaktionsblandingen og blandingen omrøres derpå i 1 time. Palladium-sort filtreres fra hvorefter acetonitrilen afdestilleres. Remanensen ekstraheres med 300 ml n-butanol. n-Butanol-laget vaskes med en vandig opløsning af NaCl hvorefter n-butanol afdestilleres. Remanensen omkrystalliseres fra diætylæter og derefter fra AcOEt/diætylæter hvor- _ Λ<3 ved der vindes 32 g krystaller med smp. 125-126°C, [aj^ = +7,2° (c * 0/5, DMF), Rf1 = 0,27.

Beregnet for C-^H^O^S: C 45,26 H 7,21 N 5,27 S 12,08 Pundet: C 45,31 H 7,27 N 5,01 S 11,83%.

(II) BOC- (D) -Met (O) -Gly-MePhe-NHNH-CO-CH-j I 20 ml THF opløses 3,1 g Z-MePhe-OH og 1,9 g HONB hvorefter der under isafkøling tilsættes 2,3 g DCC. Blandingen omrøres i 4 timer ved 0°C. De uopløselige! bestanddele fjernes ved filtrering og der sættes 0,9 g NH2-NH-COCH3 til filtratet hvorefter der oxnrøres i 3 timer ved stuetemperatur.

THF afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt. Ekstrakten vaskes med vand og tørres over vandfrit natriumsulfat.

AcOEt afdestilleres og remanensen opløses i 100 ml MeOH for at gennemføre katalytisk reduktion med palladiumsort som katalysator.

Efter fjernelse af katalysatoren ved filtrering afdestilleres MeOH hvorved der udskiller sig krystaller. Til krystallerne sættes 10 ml petroleumsæter og krystallerne genudvindes ved filtrering fra blandingen. I 30 ml acetonitril opløses 1,3 g af krystallerne og 2,0 g BOC-Gly-ONB og blandingen 149064 66 omrøres natten over ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet a£-destilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml AcOEt. Ekstrakten vaskes med vand og tørres derpå over vandfrit natriumsulfat hvorefter AcOEt fjernes ved destillation til dannelse af 2,3 g af et olieagtigt produkt. Det olieagtige produkt opløses i 20 ml TFA og blandingen får lov til at stå i 20 minutter ved stuetemperatur. TFA afdestilleres og der sættes diætyl-æter til remanensen.

Blandingen vaskes ved dekantering. Til det således vund-ne produkt sættes der 20 ml DMF. Til blandingen sættes 0,8 ml TEA og 1,3 g B0C-(D)-Met(0)-0NB (fremstillet ved hjælp af DCC-metoden med 1,3 g BOC-(D)-Met(O)-OH og 1,0 g HONB) under isafkøling hvorefter der omrøres natten over ved stuetemperatur.

DMF afdestilleres og remanensen ekstraheres med 100 ml n-buta-nol. Ekstrakten vaskes med vand og n-butanol afdestilleres. Remanensen behandles med diætylæter og genudfældes med metanol/ diætylæter til dannelse af 1,5 g bundfaid.med smp. 119-121°C, [a]24 = -29,0° (c = 0,38, DMF), Rf1 - 0,19.

Beregnet for C24H3yD^N3S,H20: C 51,69 H 7,05 N 12,56 S 5,05 Fundet: C 51,64 H 7,18 N 12,11 S 5,76%.

(I]CI) BOC-Tyr- (Dj -Met (O) -Gly-MePhe-NHNH-CO-CHj

Under anvendelse af 0,54 g BOC-(D)-Met(O)-Gly-MePhe-NHNH-CO-CH^ og 0,46 g BOC-Tyr-ONB vindes der på samme måde som beskrevet i eksempel 36-(111) 0,46 g af det ønskede produkt med smp. 141-142°C, [a]22 = -25,4° (c = 0,48, DMF), Rf1 = 0,22.

Beregnet for C33H4609N6S/2H20! C 53,64 H 6,81 N 11,37 S 4,34 Fundet: C 53,15 H 6,65 N 10,77 S 4,23%.

(IV) Η-Tyr-(D) -Met(O)-Gly-MePhe-NHNH-CO-CHj

Under anvendelse af 0,35 g BOC-Tyr-(D)-Met(O)-Gly-MePhe-NHNH-CO-CH- vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 36- j O O r\ (IV) 0,19 g af det ønskede produkt med [a]n - 0° (c = 0,25, 2 u MeOH), Rf = Q,16, aminosyreanalyse: Gly 1,00, Met 1,00, Tyr 1,20.

14906A

67

Eksempel 5 3 H-MeTyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NHNH-CO-GH^ (Ϊ) Z-Phe-NHNH-CO-CH^ I 50 ml THF opløses 2,0 g Z-Phe-NHNH2 hvorefter der tilsættes 1,4 ml vandfri eddikesyre og 0,9 ml TEA under isafkøling og blandingen omrøres i 2 timer ved stuetemperatur.

De udfældede krystaller opsamles ved filtrering, vaskes grundigt med diætylæter og omkrystalliseres fra ætylacetat hvorved der vindes 1,9 g krystaller med smp. 205-206°C, [a]33 = -16,4° (c = 0,50, DMF), Rf1 = 0,60.

Beregnet for ^20^3^51^ c H 6,02 N 10,90

Fundet: C 62,38 H 6,09 N 10,49%.

(II) Z-Gly-Phe-NHNH-CO-CHj

Under anvendelse af 2,1 g Z-Phe-NHNH-CO-CH^ og 2,2 g Z-Gly-ONB vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 26- (III) det ønskede produkt med smp. 154-155°C, [a]33 = -0,9° (c = 0,50, DMF), Rf1 = 0,52.

Beregnet for C21®24^5^4: ^ 61,15 H 5,87 N 13,59

Fundet: C 60,98 H 5,68 N 13,27%.

(III) BOC-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NHNH-CO-CH:

Under anvendelse 0,60 g BOC-(D)-Met-OH og 1,0 g Z-Gly-Phe-NHNH-CO-CHg vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 26-(IV) 1,0 g af det ønskede produkt med smp. 122-123°C, [a]31 « 0° (c = 0,5, DMF), Rf1 = 0,38.

Beregnet for (-23^5^7^5^5 C 52,56 H 6,72 N 13,32 S 6,09

Fundet: C 52,35 H 6,62 N 13,12 S 5,93%.

(IV) Z-MeTyr (BU*1) - (D) -Met (O) -Gly-Phe-NHNH-CO-CH..

Under anvendelse af 0,55 g BOC-(D)-Met(O)-Gly-Phe-NHNH-CO-CH3 og 0,39 g Z-MeTyr(But)-OH vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 37-(1) 0,61 g af det ønskede produkt med smp. 140-142°C, [a]31 = -29,0° (c = 0,5, DMF), Rf1 « 0,43.

Beregnet for C4qH52°9N6Ss C 60,59 H 6,61 N 10,59 S 4,04

Fundet: C 60,28 H 6,55 N 10,28 S 3,88%.

149064 68 (V) H-MeTyr-(D)-Met(0)-Gly-Phe-NHNH-CO-CH„ ^ t '

Under anvendelse af 300 mg Z-MeTyr(Bu )-(D)-Met(0)-

Gly-Phe-NHNH-CO-CH·, vindes på samme måde som beskrevet i J 21 eksempel 27-(IV) 110 mg af det ønskede produkt med [a]_ = r\ O ^ +18,5° (c = 0,25/ MeOH), Rf^ = 0,29. Aminosyreanalyse:

Gly 1,00, Met 0,35, Phe 0,99.

Eksempel 54 H-MeTyr-(D)-Met(O)-Gly-MePhe-MHNH-CQ-CH^ (I) Z-MeTyr(Bufc)-(D)-Met(O)-Gly-MePhe-MHNH-CO-CH^

Under anvendelse af 0,50 g BOC-(D)-Met(O)-Gly-MePhe-NHNH-CO-CH^ og 0,39 g Z-MeTyr (Bu*") -OH vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 38-(1) 0,40 g af det Ønskede produkt med smp. 120-122°C, Rf^ = 0,46.

Beregnet for C4iH5409NgS: C 61,02 H 6,74 N 10,42 S 3,97 Fundets C 60,79 H 6,82 N 9,92 S 3,81%.

(II) H-MeTyr-(D)-Met(0)-Gly-MePhe-NHNH-CO-CH

Under anvendelse af 0,20 g Z-MeTyr(Bu j-(D)-Met(O)-Gly-MePhe-NHNH-CO-CHg vindes på samme måde som beskrevet i eksempel 27-(IV) 0,90 g af det ønskede produkt med Rf^ = 0,34. Aminosyreanalyse: Gly 1,00, Met 0,38.

Claims

149064 Analogifremgangsmåde til fremstilling af enkefalin-ana-loge tetrapeptidhydrazidderivater med den almene formel Φ Q r1 ch2 r2 R3 9H2 r4 R\ 1 ? f I / ^N-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH_-CO-N—CH-CO-NH-N hvor er hydrogen eller en alkylgruppe med 1-6 kulstof atomer,

2 R er et hydrogenatom eller sidekæden af en D-o-ammosyre valgt blandt D-leucin, D-alanin, D-metionin, D-metioninsulfoxyd, D-serin, D-treonin, D-fenylalanin, D-histidin, D-tryptofan, D-tyrosin, D-metioninsulfon, D-glutamin, D-asparagin, D-argi-nin, D-lysin, D-ornitin, D-glutaminsyre, D-asparaginsyre, D-cystein, S-metyl-D-cystein, S-ætyl-D-cystein, S-metyl-D-cyste-insulfoxyd, S-ætyl-D-cysteinsulfoxyd, D-a-aminosmørsyre, D-valin, D-norvalin, D-norleucin, D-isoleucin og S-metyl-D-me- 3 tionin, R er et hydrogenatom eller en alkylgruppe med 1-2 4 kulstofatomer, R er et hydrogenatom, en ætoxykarbonylgruppe eller en mættet eller umættet, ligekædet eller forgrenet ali-fatisk acylgruppe med 2-6 kulstofatomer, som eventuelt kan være substitueret med hydroxy, amino, alkoxy med 1-4 kulstofatomer, halogen, oxo, alkyltio med 1-4 kulstofatomer eller alkyltiooxyd med 1-4 kulstofatomer, eller farmaceutisk acceptable salte deraf, kendetegnet ved at man fjerner beskyttelsesgruppen eller samtidig eller i vilkårlig rækkefølge beskyttelsesgrupperne i en forbindelse med den almene formel