DK147305B - Fremgangsmaade til selektiv inaktivering af amylase i amylase-protease-blandinger - Google Patents
Fremgangsmaade til selektiv inaktivering af amylase i amylase-protease-blandinger Download PDFInfo
- Publication number
- DK147305B DK147305B DK161877AA DK161877A DK147305B DK 147305 B DK147305 B DK 147305B DK 161877A A DK161877A A DK 161877AA DK 161877 A DK161877 A DK 161877A DK 147305 B DK147305 B DK 147305B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- amylase
- protease
- mixture
- enzyme
- approx
- Prior art date
Links
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 title claims description 53
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 title claims description 47
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 title claims description 47
- 239000004365 Protease Substances 0.000 title claims description 45
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 title claims description 45
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 title claims description 44
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 title claims description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 31
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 title description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 38
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 38
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Inorganic materials Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- -1 hypochlorite ions Chemical class 0.000 claims description 15
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 9
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 7
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 4
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 claims description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims description 2
- 229910019093 NaOCl Inorganic materials 0.000 claims 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 3
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 claims 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims 1
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 claims 1
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 claims 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 claims 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 claims 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 35
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 28
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 21
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 13
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 10
- 229910001919 chlorite Inorganic materials 0.000 description 8
- 229910052619 chlorite group Inorganic materials 0.000 description 8
- QBWCMBCROVPCKQ-UHFFFAOYSA-N chlorous acid Chemical compound OCl=O QBWCMBCROVPCKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 7
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- BZSXEZOLBIJVQK-UHFFFAOYSA-N 2-methylsulfonylbenzoic acid Chemical compound CS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O BZSXEZOLBIJVQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 3
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M sodium perchlorate Chemical compound [Na+].[O-]Cl(=O)(=O)=O BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229910001488 sodium perchlorate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NHYCGSASNAIGLD-UHFFFAOYSA-N Chlorine monoxide Chemical compound Cl[O] NHYCGSASNAIGLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 2
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 2
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 2
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 2
- QBWCMBCROVPCKQ-UHFFFAOYSA-M chlorite Chemical compound [O-]Cl=O QBWCMBCROVPCKQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002218 sodium chlorite Drugs 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N Chlorine Chemical compound ClCl KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 239000012080 ambient air Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- ZJRXSAYFZMGQFP-UHFFFAOYSA-N barium peroxide Chemical compound [Ba+2].[O-][O-] ZJRXSAYFZMGQFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229940005993 chlorite ion Drugs 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000004362 fungal culture Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- YZQBYALVHAANGI-UHFFFAOYSA-N magnesium;dihypochlorite Chemical compound [Mg+2].Cl[O-].Cl[O-] YZQBYALVHAANGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- UKLNMMHNWFDKNT-UHFFFAOYSA-M sodium chlorite Chemical compound [Na+].[O-]Cl=O UKLNMMHNWFDKNT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/99—Enzyme inactivation by chemical treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
- C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
- Y10S435/836—Bacillus licheniformis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
- Y10S435/839—Bacillus subtilis
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
147305
Den foreliggende opfindelse angår en særlig fremgangsmåde til selektiv inaktivering af amylase i blandinger af protease og amylase.
Proteolytiske enzympræparater opnås ved velkendte teknikker ud fra bakterie- og funguskulturer såvel som dyreorganer, såsom pankreas. Specielt er fremstillingen af proteaseholdige enzymblandinger ud fra bakteriekilder velkendt. Amylaseenzymer medproduceres sædvanligvis under væksten af mikroorganismen. Til visse formål ønsker man at få et proteaseholdigt præparat, som i det væsentlige er fri for noget amylaseenzym. F.eks. vil' man til anvendelsesområder, som kræver enzymatisk indvirkning på proteinfasen i et materiale, uden at dets 2 147305 stivelsesindhold påvirkes, ønske at anvende et protease-enzympræparat, som er fri for amylolytisk aktivitet. Ved behandlingen af sojamel med protease er det således til visse formål ønskeligt at anvende et amylasefrit enzympræparat.
Forskellige kendte metoder til rensning og isolering af enzymer indbefatter fraktioneret udfældning med uorganiske salte såsom natrium- og ammoniumsulfater eller polymere fældningsmidler; organiske opløsningsmidler såsom alkoholer og ketoner; ionbytningskromatografi; selektiv absorption og eluering med calciumphosphat-geler; adskillelse på kolonner af CMC eller DEAE cellulose; "Sephadex"-gelfiltrering; differentieret inaktivering med varme ved forskellige pH-værdier; isoelektrisk udfældning; ultrafiltrering; og ultracentrifugering. Nærmere beskrivelse af konventionelle teknikker til enzymrensning og isolering findes i Process Biochemistry, August 1973, p. 9 et seq., og de deri citerede referencer.
En særlig virkningsfuld fremgangsmåde til fjernelse af uønsket enzymaktivitet fra råpræparater indbefatter behandling af præparatet til inaktivering af det forurenende enzym, mens den ønskede aktivitet efterlades i det væsentlige intakt. Skønt det inaktive forurenende stof er til stede i præparatet, er det derfor lige så effektivt neutraliseret, som hvis det var blevet fjernet fysisk. Inaktivering er i denne sammenhæng en irreversibel inaktivering snarere end ren inhibering. Efter fjernelse eller fortynding af det inaktiverende middel viser aktiviteten af det inaktiverede enzym sig således ikke igen. Omkostningerne ved disse inaktiveringsfremgangsmåder er betragteligt lavere end ved rensningsteknikker, som kræver bekostelige reagenser og multiple bearbejdnings- og adskillelsestrin. En sådan inaktiveringsfremgangsmåde beskrives i USA-patentskrift nr. 2.683.682, hvor pH-værdien af et proteinase- og alfa-amylase præparat indstilles til differentiel inaktivering af enten proteinase eller alfa-amylase.
Med den foregående kendte teknik i tankerne er det formålet med frsre-gangsmåden ifølge opfindelsen at tilvejebringe proteolytiske enzympraqparater, som er blevet gjort i det væsentlige fri for amylaseaktivitet uden behov for langvarige adskillelsestrin eller brug af bekostelige reagenser.
3 147305
Det har nu vist sig, at proteasen i et blandet protease-amylase enzympræparat kan blive befriet for amylaseaktiviteten ved behandling af præparatet med et oxidationsmiddel i form af chlorit- og/eller hypochloritioner.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er i overensstemmelse hermed ejendommelig ved det i krav l’s kendetegnende del anførte.
Ionerne sættes til enzymblandingen i en mængde, som er tilstrækkelig til i højere grad at inaktivere amylasen end proteasen. Dette vil sædvanligvis medføre, at amylasen i det væsentlige inaktiveres, mens proteasen efterlades med i det væsentlige den oprindelige aktivitet i det ubehandlede præparat. Da ionerne i høj grad forbruges af præparatet under inaktiveringen af amylasen, og da den inaktiverede amylase blot er et enzymatisk uskadeligt protein, er der ikke noget behov for nogen adskillelses- eller rensningstrin efter behandling med ionerne. Efter behandling er præparatet lagringsstabilt.
En yderligere fordel ved fremgangsmåden er, at ionerne vil reducere eller eliminere mikroorganisme-populationen i præparaterne. Disse populationer kunne ellers til sidst resultere i enten ødelæggelse af præparaterne eller negative virkninger på produkterne fremstillet ved brug af præparaterne.
Det er kendt at kombinere oxidations- eller blegningsmidler, inklusive hypochloritioner, med enzymer; se f.eks. USA-patentskrifter nr. 2.262.138, 3.709.790, 3.755.085 og 3.795.586 samt "Chemical Abstrac.ts" 75:107533 p (1973) . Bariumperoxid er blevet anyendt til inaktivering af såvel amylaser som proteinaser (USA-patentskrift nr. 2.647.854). Desuden er det almindelig kendt at reducere den mikrobielle forurening af materialer og overflader ved behandling af dem med hypochlorit. Det kan imidlertid ikke af nogen af disse referencer udledes, at amylase i protease-amylase'blandinger kan inaktiveres differentielt. I realiteten vækker referencen ifølge "Chemical Abstracts" formodning om det modsatte.
4 147305 I det efterfølgende beskrives foretrukne udførelsesformer.
Hypochloritionen (CIO-) kan f. eks. fås fra chlorundersyrling eller et alkalimetalsalt af chlorundersyrling, f.eks. natrium-, kalium-, calcium- eller magnesiumhypochlorit. På lignende måde kan chlorit-ionen (ClC^-) fås direkte som chlorsyrling eller et alkalimetalsalt deraf. Som anvendt heri er det hensigten at endelsen "it" skal referere til en ion afgivet enten af syren eller saltet. Almindeligvis vil hver af ionerne blive anvendt alene i vandig opløsning, men blandinger af de to ioner kan imidlertid anvendes. Endvidere kan de hidrøre fra en in situ reaktion, som vil give den ene eller begge ionerne ud fra prækursorer, som er sat til præparatet. Reaktionen og udgangsmaterialerne dertil må naturligvis ikke være skadelige for proteasen. Desuden bør reaktionen og udgangsmaterialerne fortrinsvis være ufarlige. Således foretrækkes det f.eks. ikke at indføre anhydridet af hypochlorit, chlormonoxid (C^O) i et vandigt enzympræparat til dannelse af hypochlorit in situ. Snarere foretrækkes det at sætte natriumhypochlorit i fortyndet vandig opløsning til enzympræparatet. En let tilgængelig fortyndet vandig opløsning af natriumhypochlorit, som indeholder 5,25% natriumhypochlorit og 94,75% inerte materialer, fås i handelen under varemærket "Clorox"N^
Egnede enzympræparater, som kan inaktiveres selektivt i overensstemmelse med fremgangsmåden ifølge opfindelsen, indbefatter præparater, som fås fra bakterier og dyr. Fra dyr hidrørende præparater er f. eks. fra pankreas, en rig kilde for fordøjelsesenzymer, inklusive protease og amylase. Pankreatin, som er et velkendt materiale indeholdende lipase, esterase, protease og amylase, er et pankreas-enzympræparat, som er egnet til behandling i overensstemmelse med fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
Til brug ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er amylaseholdige proteaser fra mange forskellige bakterier egnede. Særligt foretrukket er proteaserne fra Bacillus subtilis og Bacillus licheniformis.
Effektiviteten eller udstrækningen af den differentielle inaktivering af amylase i proteasepræparater kan afhænge af mange faktorer. F.eks. kan forholdet mellem koncentrationen af den ene eller begge ionerne og mængden af protein i det blandede protease-amylase-præparat, fortyndingen af præparatet og pH-værdien, temperaturen og tidsrummet, hvori ionerne bringes i kontakt med præparatet, påvirke 147305 5 resultatet, som opnås. Sådanne faktorer kan let afbalanceres af den, der arbejder inden for dette område, således at amylasen inaktiveres i den ønskede grad, mens proteaseaktiviteten i det væsentlige bevares. Det ønskes sædvanligvis at inaktivere i det mindste ca. 80% af amylasen, mens proteaseaktiviteten reduceres mindre end ca. 20%. I overensstemmelse med fremgangsmåden ifølge opfindelsen er det almindeligvis muligt at opnå en reduktion i amylaseaktivitet på mere end 95%, mens samtidig proteaseaktiviteten reduceres mindre end 5%. Inaktiveringen kan efterfølges af en hvilken som helst af de velkendte analyser for proteolytisk og amylolytisk aktivitet.
Ønskelige resultater fås ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen over et bredt område af vægtforhold mellem enzympræparat og tilsatte ioner* men fortrinsvis anvendes ca. 0,1% til ca. 5% ioner på basis af den tørre vægt i omgivende luft af det pulveriserede enzympræparat. Det foretrækkes yderligere at anvende fra ca. 0,2% til ca. o,5% hypochloritioner eller fra ca. 0,2% til ca. 2% chloritioner. De mest foretrukne koncentrationer af ionerne, når de anvendes adskilt, er ca. 0,30% hypochlorit og ca. 0,35% chlorit. Sædvanligvis kan der for ennver given mængde chlorit anvendes noget mindre hypochlorit. Sammenfattende er mængden af ioner, som anvendes, ikke kritisk. For lidt vil resultere i relativt høj rest-amylaseaktivitet, skønt dette kan være ønskeligt til nogle anvendelser for det behandlede præparat, mens for meget er spild af reagens.
Enzympræparaterne, som skal behandles, kan være hovedsagelig eller i det væsentlige cellefri opløsninger, såsom fermenteringssubstratfiltrater, rå dyreorganekstrakter eller opløsninger af tørrede fermenteringssubstratfiltrater. Præparaterne kan indeholde ikke blot et fermenteringssubstrat, men også cellerne fra den anvendte mikroorganisme alene eller i kombination med flere andre arter til frembringelse af de blandede protease-amylasepræparater. Derudover kan et hvilket som helst af de forannævnte præparater indeholde forurenende celler. Disse celler vil blive dræbt ved behandlingen, en yderligere fordel ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Det er således unødvendigt ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen at anvende et adskilt trin med det formål at gøre præparatet fri for levende celler. Det bør bemærkes, at celler i stort antal vil forbruge så meget af ioner 6 147305 ne, at det kan være nødvendigt at supplere de tilsatte ioner for at sikre den ønskede inaktivering af amylase.
Egende kilder af blandede protease-amylase enzymsystemer, som kan anvendes som udgangsmaterialer ifølge den foreliggende opfindelse, er kendte og kan fås ved mikrobiel fermentering under anvendelse af velkendte fermenteringsfremgangsmåder, såsom fremgangsmåderne, der er generelt beskrevet i Kirk-Othmer, Encyclopedia of Chemical Technology, 8, 173-230, og de deri citerede referencer. Specielt er brugen af bakteriekilder til frembringelse af blandede proteolytiske og amylolytiske enzymsystemer ved fermentering beskrevet i USA-patentskrift nr. 2.530.210.
En særlig egnet kilde for et proteaseholdigt enzympræparat er Bacillus subtilis. Denne mikroorganisme er en bakterieart, som er vidt udbredt, og som er sporedannende, aerob og catalase-positiv.
Den er klassificeret i Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, pp. 613-621 (7. udgave 1957), Williams and Wilkins Co., Baltimore, Md., og i Aerobic Spore Forming Bacteria, Agricultural Monograph No. 16, U.S. Department of Agriculture. Denne mikroorganisme er let tilgængelig for offentligheden i kraft af dens vide udbredelse i naturen. Desuden er talrige kulturer af denne mikroorganisme tilgængelige på offentlige deponeringssteder, som tilbyder opbevaring af det deponerede i permanent tilstand, og hvorfra offentligheden let kan få dem. Et eksempel på en sådan kultur er kulturen, som er blevet deponeret i American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, under betegnelsen ATCC 6051a. Et andet eksempel på denne mikroorganisme er kulturen, som er deponeret hos United States Department of Agriculture, Agricultural Research Service, Northern Utilization Research and Development Division, Peoria, Illinois under accessionsnummeret NRRL B-3411. Yderligere eksempler vil fremgå for fagmanden ved reference til forskellige velkendte offentlige deponeringssteder for mikroorganismer over hele verden.
Enzympræparatet kan være tørt, i opløsning eller være en opslæmning, når det bringes i kontakt med oxidationsmidlet. Koncentrationen af præparatet i opløsning er ikke kritisk. Der anvendes almindeligvis et område på fra ca. 5% til ca. 75% faststof på vægtbasis i vand eller puffer med ca. 20% som det foretrukne. Koncentrationen, som udvælges, vil i høj grad afhænge af, hvilke behandlingsteknikker, der anvendes før eller efter behandlingen. F.eks. er et lavt faststofindhold almindeligvis karakteristisk for fermenteringssubstrater, og disse kan behandles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen uden 7 147305 yderligere behandling. Hvis på den anden side der ønskes et koncentreret slutprodukt, kan præparatopløsningen afvandes i passende grad før behandlingen.
Der kan til behandlingen udvælges en hvilken som helst pH-værdi, som ikke indvirker ugunstigt på proteaseaktiviteten. Proteaseaktivi-teten som funktion af pH-værdien vil variere afhængigt af enzympræpa-ratkilden. I praksis indeholder de fleste rå præparater fra enten bakterie- eller animalsk kilde forskellige proteaser, som hver er aktive i forskellige pH-områder. Det er fordelingen af disse proteaser, som bestemmer pH-aktivitetsområdet for enzymerne. Hvor et enzym inden for et pH-område på ca. 3 til ca. 10 vil udvise den bedste proteaseaktivitet, afhænger således at fordelingen af proteaser i præparatet. Ved anvendelse af B. subtilis enzymblandingen er et område på fra ca. 5,8 til ca. 7 foretrukket, og ca. 6,3 er optimalt. Indstilling af enzymblandingen til den ønskede pH-værdi kan, såfremt den er nødvendig, foretages bekvemt ved tilsætning af en passende mængde fortyndet syre eller alkali.
Hverken temperaturen eller tidsrummet for ionbehandlingen er kritisk, dog bør temperaturen ikke være så høj, at proteasen inaktive-res. Til illustration kan opløsninger ved temperaturer fra lidt over frysepunktet til ca. 60°C behandles i ca. nogle minutter til 3 timer. Almindeligvis er længere behandlingstidsrum nødvendige ved lavere temperaturer og ionkoncentrationer. Det foretrækkes at behandle opløsningerne i ca. 1 time og 15 minutter ved en temperatur omkring stuetemperatur. Udvælgelsen af disse parametre er i høj grad et spørgsmål om økonomi.
Efter behandlingen med oxidationsmidlet kan opløsningen behandles på en hvilken som helst konventionel måde for at gøre produktet klart til videre brug. Almindeligvis lyofiliseres det eller spraytørres, fremgangsmåder, som også fjerner resterende chlorit- eller hypochlorit-ioner.
Den foreliggende opfindelse illustreres i det efterfølgende nærmere ved eksempler.
Eksempel 1
Et alkalisk proteasepræparat ud fra B. subtilis, som sælges af "Wallerstein Co." under navnet "Alkaline Protease", opløstes i ledningsvand til en koncentration på 20 vægtprocent baseret på lokale-tørvægten af præparatet. Det blev ikke forsøgt at fjerne uopløseligt materiale, skønt dette om ønsket let kunne gøres. pH-værdien af 8 147305 denne opløsning var 6,3. Til 26 g portioner af proteaseopløsningen sattes under omrøring vandige opløsninger af natriumhypochlorit og natriumchlorit i mængder, som var tilstrækkelige til at give forskellige natriumhypochlorit og -chloritkoncentrationer baseret på lokale-tørvægten af enzympræparatet. Disse koncentrationer er udtrykt i Tabel I som procenter. De varierende forøgelser af opløsningen af inaktiverende ion udlignedes ved tilsætning af vand. Tilsætningen af de inaktiverende ioner ændrede ikke begyndelses-pH-værdien af enzymopløsningen af betydning. Ionerne forblev i kontakt med enzymopløsningen i ca. 1 1/4 time. Opløsningen analyseredes dernæst for protea-se- og amylaseaktivitet. Resultaterne er vist i Tabel I.
TABEL· I
Indvirkning af chlorit- og hypochlorittilsætning på protease- og amylaseaktivitet_
Ionsalt % Amylase- ^ % Protease- % tilsat Ionsalt aktivitet1 tab aktivitet2 tab 0 282 - 40.300
Natrium- 0,152 151 47 40.800 0 chlorit 0,304 14 g5 40.800 0 0,486 3 99 39.900 1 1,94 2 99 37.200 8
Natrium- 0 583 - 25.900 hypochlorit o,125 242 55 25.100 3 0,25 16 97 25.900 0 0,40 11 98 24.600 5 2. Amylase og protease bestemtes ved de i
Food Chemicals Codex, 1. tillæg, 2. udgave, hhv. p. 66 og 89 rapporterede fremgangsmåder.
Sammenligningseksempel (a) 2
Fremgangsmåden fra Eksempel 1 blev gentaget, bortset fra, at det anvendte ionsalt var natriumchlorat eller natriumperchlorat. Saltene anvendtes henholdsvis i mængder på fra 0,179% til 2,29% og fra 0,236% til 3,02% på basis af vægten af det lokaletørre enzympulver. Disse mængder af natriumchlorat og natriumperchlorat er de omtrentlige molære ækvivalenter til natriumhypochloritkoncentrationer på fra 0,125% til 1,6%. Ingen af disse salte havde nogen virkning på 9 147305 protease- eller amylaseaktiviteten på trods af, at både natrium-chlorat og natriumperchlorat er nært beslægtede med chlorit og hypochlorit. Dette understreger den yderst selektive og overraskende opførsel af hypochlorit- og chloritionerne, der anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen til selektiv inaktivering af amylasen.
Sammenligningseksempel (b)
Chlorgas bobledes ved stuetemperatur gennem 25 g af den i Eksempel 1 ovenfor beskrevne enzymopløsning. Både protease og amylase in-aktiveredes fuldstændigt. Chlor er et velkendt blegemiddel. Ikke destomindre viser det sig overraskende, at der ikke opnås den selektive amylase-inaktivering, som kan fås med hypochlorit- og chloritionerne,der anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
Eksempel 2
En enzymopløsning fremstilledes som i Eksempel 1 og indstilledes til en pH-værdi på 6,4. Til 976 g af den pH-indstillede opløsning sattes natriumhypochlorit til opnåelse af en koncentration på 0,3% natriumhypochlorit baseret på vægten af enzympræparatet. Den samlede vægt blev bragt op på 1000 g med ledningsvand. Slut-pH-værdien var 6,5. Denne fremgangsmåde blev så gentaget, bortset fra at der blev tilsat hydrogenperoxid til opnåelse af en koncentration på 0,15% baseret på vægten af enzympræparatet. pH-værdien var 6,4. Denne hydrogenperoxidkoncentration er 9,5% mere end en mængde, som ville være ækvimolær med mængden af natriumhypochlorit anvendt ved en koncentration på 0,3%. Den resterende del af behandlingen er som beskrevet i Eksempel 1. Protease - og amylaseaktiviteten er rapporteret i Tabel II.
TABEL II
Sammenligning af virkningen af hydrogenperoxid og hypochlorit _på protease-amylase-blandinger_
Oxidationsmiddel Amylaseaktivitet Proteaseaktivitet
Natriumhypochlorit 3 27.365
Hydrogenperoxid 236 29.579
De behandlede opløsninger blev dernæst spraytørret, genopløst og analyseret.
Resultaterne vises i Tabel III.
10 147305
TABEL· III
Analyse af spraytørret produkt
Oxidationsmiddel- Amylaseaktivitet Proteaseaktivitet
Natriumhypochlorit 15 147.650
Hydrogenperoxid 1250 157.512
De i Tabel II og III anførte data viser, at hydrogenperoxid, et velkendt oxidationsmiddel, er betragteligt mindre effektivt til selektivt at inaktivere amylase end hypochloritet, der anvendes ifølge opfindelsen.
Eksempel 3
Pancreatin fra Cudahy Co. blev opløst i isotonisk saltopløsning (0,9% NaCl) til en koncentration på 3,13 g i 25 g opløsning. Opløs-.ningens pH-værdi var 6,5. Der tilsattes natriumhypochlorit-opløsning ("Clorox" ), og mængdeforøgelserne udjævnedes ved tilsætning af isotonisk saltopløsning. Den isotoniske saltopløsning anvendes for at undgå styrkeforringelse af opløsningen ved henstand. Saltet har ingen indvirkning på den i Tabel IV nedenfor anførte differentielle inaktivering. En lignende mangel på virkning noteredes, når der anvendtes en enzymopløsning med en pH-værdi på 5,8 frem for 6,5. Enzymblandingen behandledes i 1 1/4 time ved stuetemperatur og analyseredes dernæst for protease og amylaseaktivitet. Som i de foregående eksempler er natriumhypochlorit-procenten baseret på faststofindholdet i enzymopløsningen. Resultater er anført i Tabel IV.
- i .
TABEL· IV
Indvirkning på pancreatin af hypochlorittilsætning % Natrium- Amylase- . % Protease-, % hypochlorit aktivitetx tab aktivitet2 tab 0 1075 - 27.300 1,8 467 57 28.400 0 3,6 31 97 24.800 9 7,2 3 100 19.100 30 10,8 *0 100 11.200 59 1 2.. Amylase- og proteaseaktiviteten analyseredes ved hjasip af samme teknikker som anført i Tabel I.
Claims (5)
1. Fremgangsmåde til selektiv inaktivering af amylase i en blanding af protease og amylase, kendetegnet ved, at blandingen bringes i kontakt med et oxidationsmiddel i form af hypochloritioner og/eller chloritioner i en mængde, som er effektiv til at inaktivere amylasen i væsentligt højere grad end proteasen, fortrinsvis ca. 0,1% til ca. 5% på basis af vægten af blandingen.
2. Fremgangsmåde.ifølge krav 1, kendetegnet ved, at oxidationsmidlet er hypochloritioner,og at der anvendes ca. 0,2% til ca. 0,5% af midlet på basis af vægten af blandingen.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at oxidationsmidlet er chloritioner, og at der anvendes ca. 0,2% til ca. 2% af midlet på basis af vægten af blandingen.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at enzymblandingen hidrører fra arter af slægten Bacillus, fortrinsvis Bacillus subtilis eller Bacillus licheniformis.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetgnet ved, at enzymblandingen hidrører fra pankreaskirtler. o
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US67538576 | 1976-04-09 | ||
| US05/675,385 US4086139A (en) | 1976-04-09 | 1976-04-09 | Differential inactivation of amylase in amylase-protease mixtures |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK161877A DK161877A (da) | 1977-10-10 |
| DK147305B true DK147305B (da) | 1984-06-12 |
| DK147305C DK147305C (da) | 1985-01-07 |
Family
ID=24710255
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK161877A DK147305C (da) | 1976-04-09 | 1977-04-12 | Fremgangsmaade til selektiv inaktivering af amylase i amylase-protease-blandinger |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4086139A (da) |
| JP (1) | JPS52134091A (da) |
| CA (1) | CA1080146A (da) |
| DE (1) | DE2715893A1 (da) |
| DK (1) | DK147305C (da) |
| FR (1) | FR2347380A1 (da) |
| GB (1) | GB1538739A (da) |
| NL (1) | NL7703872A (da) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK145679A (da) * | 1979-04-09 | 1980-10-10 | Novo Industri As | Fremgangsmaade til termisk destabilisering af mikrobiel osteloebe |
| US4716116A (en) * | 1980-12-04 | 1987-12-29 | Owens-Illinois Glass Container Inc. | Protein modification to provide enzyme activity |
| GB2156821A (en) * | 1984-04-03 | 1985-10-16 | Simmons James W | Process for purifying chymopapain |
| FR2589479B1 (fr) * | 1985-11-05 | 1988-02-05 | Hoechst France | Nouvel enzyme, son procede d'obtention et son application a la preparation de n-(l-aspartyl-1)l-phenylalaninate de methyle |
| EP0371994B1 (en) * | 1987-07-17 | 1995-07-05 | Modrovich, Ivan Endre | Stable, single-liquid alpha-amylase reagent |
| CN1203627A (zh) * | 1995-12-07 | 1998-12-30 | 诺沃挪第克公司 | 酶活性的选择性灭活 |
| FR2742765B1 (fr) * | 1995-12-21 | 1998-02-13 | Armines | Procede d'inactivation irreversible d'enzymes en solution |
| WO2003052092A2 (en) * | 2001-12-19 | 2003-06-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Method for the inactivation of amylase in the presence of protease |
| US7670821B2 (en) * | 2002-05-29 | 2010-03-02 | Dsm Ip Assets B.V. | Method for the purification of microbial protease |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US1892247A (en) * | 1930-01-31 | 1932-12-27 | Kalle & Co Ag | Process of preparing proteinases free from peptidases |
| US2262138A (en) * | 1936-11-07 | 1941-11-11 | Standard Brands Inc | Method for the control of proteolytic activity |
| US2647854A (en) * | 1949-11-25 | 1953-08-04 | Wallerstein Co Inc | Inactivation of enzymes by barium peroxide |
| US2683682A (en) * | 1950-02-06 | 1954-07-13 | Research Corp | Differential inactivation of enzymes |
| US3795586A (en) * | 1969-08-11 | 1974-03-05 | Pabst Brewing Co | Recovery of enzymes |
| US3578462A (en) * | 1969-12-02 | 1971-05-11 | Caravan Prod Co Inc | Yeast leavened bread dough composition and process of manufacture |
| US3755085A (en) * | 1970-09-30 | 1973-08-28 | Procter & Gamble | Prevention of enzyme deactivation by chlorine |
| US3709790A (en) * | 1970-10-05 | 1973-01-09 | W Warner | Proteolytic enzyme formulation |
| GB1422795A (en) * | 1972-05-31 | 1976-01-28 | Bunyan J | Antiseptic and non-toxic substance and a method of making the same |
-
1976
- 1976-04-09 US US05/675,385 patent/US4086139A/en not_active Expired - Lifetime
-
1977
- 1977-04-07 GB GB14968/77A patent/GB1538739A/en not_active Expired
- 1977-04-07 NL NL7703872A patent/NL7703872A/xx not_active Application Discontinuation
- 1977-04-07 CA CA275,800A patent/CA1080146A/en not_active Expired
- 1977-04-08 FR FR7710728A patent/FR2347380A1/fr active Granted
- 1977-04-09 JP JP4087677A patent/JPS52134091A/ja active Pending
- 1977-04-09 DE DE19772715893 patent/DE2715893A1/de not_active Withdrawn
- 1977-04-12 DK DK161877A patent/DK147305C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2347380A1 (fr) | 1977-11-04 |
| FR2347380B1 (da) | 1982-10-22 |
| CA1080146A (en) | 1980-06-24 |
| NL7703872A (nl) | 1977-10-11 |
| DK147305C (da) | 1985-01-07 |
| US4086139A (en) | 1978-04-25 |
| DK161877A (da) | 1977-10-10 |
| JPS52134091A (en) | 1977-11-09 |
| GB1538739A (en) | 1979-01-24 |
| DE2715893A1 (de) | 1977-10-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bhange et al. | Simultaneous production of detergent stable keratinolytic protease, amylase and biosurfactant by Bacillus subtilis PF1 using agro industrial waste | |
| Sousa et al. | A novel metalloprotease from Bacillus cereus for protein fibre processing | |
| Kembhavi et al. | Salt-tolerant and thermostable alkaline protease from Bacillus subtilis NCIM No. 64 | |
| US4927558A (en) | Proteolytic detergent additive and compositions containing the same | |
| Krishnan et al. | Purification and characterization of α-amylase from Bacillus licheniformis CUMC305 | |
| Oh et al. | Protease produced by Pseudomonas aeruginosa K-187 and its application in the deproteinization of shrimp and crab shell wastes | |
| Moridshahi et al. | Biochemical characterization of an alkaline surfactant-stable keratinase from a new keratinase producer, Bacillus zhangzhouensis | |
| Prakash et al. | Purification and characterization of extreme alkaline, thermostable keratinase, and keratin disulfide reductase produced by Bacillus halodurans PPKS-2 | |
| HU193936B (en) | Detergent additive containing fusarium oxysporum lipase | |
| JPH04271785A (ja) | 酵素固形製剤及びその製造方法 | |
| DK146964B (da) | Proteolytisk enzymprodukt og fremgangsmade til dets fremstilling | |
| Hamamoto et al. | Characterization of a protease from a psychrotroph, Pseudomonas fluorescens 114 | |
| Parinayawanich et al. | Application of recombinant hyperthermostable keratinase for degradation of chicken feather waste | |
| DK147305B (da) | Fremgangsmaade til selektiv inaktivering af amylase i amylase-protease-blandinger | |
| Mokashe et al. | Optimal production and characterization of alkaline protease from newly isolated halotolerant Jeotgalicoccus sp | |
| DK143164B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af sur protease | |
| Ghareib et al. | Thermostable alkaline protease from Thermomyces lanuginosus: optimization, purification and characterization | |
| US5427921A (en) | Method of preparing yeast extract containing hydrolyzed non-yeast protein with yeast autolytic enzymes | |
| Vyas et al. | Production and optimization of α-amylase from a novel thermoalkalophilic Bacillus sonorensis GV2 isolated from mushroom compost | |
| Patel et al. | Production, partial purification, characterization and detergent compatibility of alkaline protease from soil isolate Bacillus cereus AG1 | |
| Madhumithah et al. | Utilization of vegetable wastes for production of protease by solid state fermentation using Aspergillus niger | |
| Abdullah et al. | Production, optimization, purification, kinetic analysis, and applications of alkaline proteases produced from Bacillus subtilis through solid-state fermentation of agricultural byproducts. | |
| EP0865485A1 (en) | Selective inactivation of enzyme activities | |
| El-Ayouty et al. | Purification and characterization of a keratinase from the feather-degrading cultures of Aspergillus flavipes | |
| Kekos et al. | Some nutritional factors affecting α-amylase production by Calvatia gigantea |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed | ||
| PBP | Patent lapsed |