DE903738C

DE903738C - Verfahren zur Herstellung von haltbaren, therapeutisch wirksamen Enzympraeparaten

Info

Publication number: DE903738C
Application number: DER3245A
Authority: DE
Inventors: Dr Josef Krebs; Dr Med Guenther Will; Dr Med Hellmuth Will
Original assignee: Roehm and Haas GmbH
Current assignee: Roehm GmbH Darmstadt
Priority date: 1950-08-06
Filing date: 1950-08-06
Publication date: 1954-02-08

Description

Verfahren zur Herstellung von haltbaren, therapeutisch wirksamen Enzympräparaten Es ist bekannt, daß tryptisch wirksame Fermente die Auflösung von nekrotischen Geweben und eiweißartigen Stoffen bewirken, und es sind auf Grundlage dieser Fermente therapeutisch wirksame Heilmittel hergestellt worden. Die bisher auf Grundlage von Tr tasen hergestellten Präparate wiesen jedoch eine' he von Nachteilen auf, die ihre Anwendungsmöglichkeiten entscheidend einschränken. Die wesentliche Ursache ist die Tatsache, daB die Tryptasen, selbst wenn sie einer sorgfältigen Reinigung unterzogen sind, auf das gesunde Gewebe eine erhebliche Reizwirkung ausüben. Weiterhin ist die Verwendung von Harnstoff als Wundbehandlungsmittel bekannt.
Es hat sich gezeigt, daB katheptisch wirksame Proteasen in Gegenwart von Harnstoff, Thioharnstoff oder deren Derivaten oder Homologen wesentlich verstärkte nekrolytische Wirkungen aufweisen, ohne eine unerwünschte Reizwirkung auf gesunde Gewebe auszuüben. Derartige Präparate sind aber auf üblichem Weg nicht herstellbar, da Harnstoff und. die genannten verwandten Verbindungen auf das Ferment eine rasch zerstörende Wirkung ausüben. Es wurde gefunden, äaB sich für derartige therapeutische Zwecke gut brauchbare Präparate herstellen lassen, wenn man die in diesen Präparaten zu vereinigenden Komponenten vor ihrer Mischung bei einer jeweils verträglichen Temperatur einer Trocknung bis zur Gewichtskonstanz unterwirft und die Mischung unter Ausschluß jeder Feuchtigkeit vornimmt. Für die Herstellung derartiger Fermentpräparate verwendet man katheptisch wirksame Proteasen, wie Schimmelpilzproteasen aus z. B. Aspergillus oryzae, Papain und ähnliche. Auch Zusätze von kleinen Mengen tryptisch wirksamer Fermente sind zweckmäßig, wobei die Zusätze so gering gehalten werden müssen, daß keine unerträglichen Reizlvirkungen erfolgen.
Die Trocknung dieser empfindlichen Substanzen muß unter besonderen Vorsichtsmaßregeln erfolgen, insbesondere dürfen höhere Temperaturen während des Trockenprozesses nicht auftreten. Zweckmäßig ist es, die Geschwindigkeit des Trockenprozesses durch Vakuum zu unterstützen.
Es ist zweckmäßig, den Enzymen bekannte aktivierende Substanzen, z. B. schwefelhaltige Aminosäuren, wie Cystein, Glutathion und ähnliche Substanzen, zuzusetzen. Dieser Zusatz kann vor oder nach der Trocknung der Enzyme erfolgen. Erfolgt er nach der Trocknung, so müssen die :Aktivatoren scharf getrocknet sein.
Das gleiche gilt für zweckmäßigerweise noch zuzufügende antibakteriell wirkende Substanzen, wie bakterizid, bakteriostatisch und antibiotisch wirkende Stoffe.
Der verwendete Harnstoff und die genannten verwandten Verbindungen müssen ebenfalls in völlig trockenem Zustand angewendet werden. Dies ist wesentlich, da gerade diese Verbindungen die Eigenschaft haben, in Gegenwart geringer oder größerer Mengen Wasser die Enzyme rasch zu zerstören. Der Mischungsprozeß muß, wie aus obigem hervorgeht, unter vollständigem Ausschluß von Feuchtigkeit durchgeführt werden.
Die so erhaltenen Präparate lassen sich in ihrer Haltbarkeit dadurch wesentlich verbessern, daß man noch Feuchtigkeit adsorbierende Stoffe, wie z. B. hochdisperse Kieselsäure, zusetzt. Ein Zusatz von geringen Mengen (i bis 3 Gewichtsprozent) derartiger Feuchtigkeit adsorbierender Stoffe genügt, um haltbare und lagerfähige Präparate herzustellen. Diese Zusatzstoffe dürfen keine unerwünschten physiologischen Nebenwirkungen haben. Die erwähnte Kieselsäure hat den besonderen Vorteil, granulationsanregend zu wirken und somit einen therapeutischen Effekt zu erzielen.
Mit Hilfe der nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten Präparate ist es möglich, therapeutische Wirkungen zu erreichen, wie sie bisher noch nicht beobachtet worden sind.
Durch die Behandlung mit den erfindungsgemäß hergestellten Präparaten war es möglich, jahrelang erfolglos behandelte Osteomyelitiden in kürzester Zeit (Behandlungszeit etwa 14 Tage bis 3 Wochen) zur Ausheilung zu bringen. Auch die bekanntlich nach Antrotomien länger andauernden Eiterungen, die weder mit Antibiotika noch bakteriostatischen Mitteln. zu beherrschen sind, konnten in kürzester Frist zur Abheilung gebracht werden. Zahlreiche offene Operations- und Unfallwunden, die sich durch starke Nekrosebildung auszeichneten, waren in kürzester Zeit mit entsprechenden Präparaten gereinigt und nach Tagen epithelisiert.

Die Wirkung der erfindungsgemäßen Präparate ist verständlich, wenn man berücksichtigt, daß nach den Arbeiten von Schade u. a. das pH im nekrotischeu Mittelpunkt der Entzündung 5 bis 6 beträgt, während es in der gesunden Peripherie bis auf 7,3 ansteigt. Da die katheptisch wirksamen Proteasen auch im schwach saueren Gebiet volle Wirksamkeit entfalten, ist ihre besondere Wirksamkeit verständlich, wenn auch die Verhältnisse so kompliziert liegen, daß die besondere Wirkung der erfindungsgemäß hergestellten Präparate keineswegs vorausgesehen werden konnte. Beispiele Die am zweckmäßigsten alkoholgefällten Proteasen werden bei niedrigen Temperaturen vorgetrocknet, fein gemahlen und im Vakuum bei niedrigen Temperaturen bis zu z5° völlig von Feuchtigkeit befreit. Sie werden mit den ebenfalls völlig getrockneten anderen Bestandteilen entsprechend den unten angeführten Beispielen unter Ausschluß von Feuchtigkeit innig vermischt.

i. Schimmelpilzprotease (z. B. aus

aspergillus oryzae) ........... 3o,o

Harnstoff .................... 6o,o

Zinc. oxyd. ad .. .. .. .. .. .. ... ioo,o

a. Schimmelpilzprotease (z. B. aus

aspergillus oryzae) ........... 30,0

Harnstoff .................... 6o,o

Cystein .. .. .. .. .. ............ 0,03

Zinc. oxyd. ad .. .. .. .. .. .. ... ioo,o

3. Papain ...................... 28,0

Sulfonamid .................. 10,0

Harnstoff ad ................. ioo,o

Schimmelpilzprotease (z. B. aus

aspergillus oryzae) ........... 30,0

Cystein .. .. .. .. .. ............ 0,08

kolloid. Kieselsäure .......... i,0

Harnstoff ad ................. ioo,o

j. Schimmelpilzprotease (z. B. aus

aspergillus oryzae) ........... 30,0

Harnstoff .................... 6o,o

@Cystein .. » ................... o,o6

Penicillin . . . . . . . . . . . . . . . ioo ooo IE

Zinc. oxy d. ad . . . . . . . . . . . . . . . ioo,0

6. Papain ...................... 28,o

Trypsin ..................... 2,0

Harnstoff .................... 6o,o

Zinc. oxyd. ad .. .. .. .. .. .. ... ioo,o

7. Schimmelpilzprotease (z. B. aus

aspergillus oryzae) ... ... .. ... 30,0

Thioharnstoff ................ 5,0

Penicillin .. . . .. .. . . . . . . . ioo ooo IE

Zinc. oxyd. ad .. .. .. .. .. .. ... ioo,o

Claims

PATENTANSPRÜCHE: i. Verfahren zur Herstellung von haltbaren therapeutisch wirksamen Enzympräparaten, dadurch gekennzeichnet, daß katheptisch wirksame Proteasen und Harnstoff oder Thioharnst6ff oder deren Derivate oder Homologen, gegebenenfalls mit schwefelhaltigen Aminosäuren, wie Cystein oder Glutathion und gegebenenfalls mit antibakteriell wirksamen Substanzen bei einer jeweils verträglichen Temperatur bis zur völligen Trockenheit entwässert und unter AusschluB von Feuchtigkeit miteinander vermischt werden.
2. Verfahren nach Anspruch i, dadurch gekennzeichnet, daB Tryptasen schonend entwässert und unter AusschluB von Feuchtigkeit zugesetzt werden. Angezogene Druckschriften: Biergin, Lehrbuch der Enzymologie, 1939, S. 9i u. ff.; O p p e n h e i m e r, Fermente und ihre Wirkungen, Supplement, Lieferung 6, 1936, S. 9o4.