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Technisches
Gebiet
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Die
vorliegende Erfindung betrifft ein neues vorbeugendes und/oder therapeutisches
Mittel für
Fettleibigkeit.
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Eine
pharmazeutische Zubereitung der vorliegenden Erfindung besitzt ausgezeichnete
vorbeugende und/oder therapeutische Wirkungen für Fettleibigkeit und ist nützlich als
ein Medikament.
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Hintergrund
des Standes der Technik
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Fettleibigkeit
ist ein Risikofaktor von Krankheiten, wie zum Beispiel Diabetes
mellitus, Bluthochdruck und Herzkrankheiten, welche die Gesundheit
der Bevölkerung
in den entwickelten Ländern
bedrohen. Fettleibigkeit bedeutet physische Bedingungen, bei denen
sich die Fettgewebe in abnormaler Weise angehäuft haben. Fettgewebe sind
spezielle Organe, in denen ein Überschuss
von in vivo-Energien als Fett oder als Triglyceride gespeichert
werden, und es ist aus Fibroblasten aufgebaut, einschließlich Adipocyten
und ihrer Vorläufer,
sowie aus Macrophagen, Blutgefäßen, welche
die Zellen umgeben, Blutzellen und dergleichen.
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Man
sagt, dass Adipocyten 1/3 bis 2/3 der Zellen ausmachen, die im Fettgewebe
vorhanden sind, und die Fette oder Triglyceride darin anhäufen. Adipocyten
differenzieren und reifen durch einen Vorgang, der seinen Ausgang
bei den mesenchymalen multipotenten Stammzellen nimmt, und sie wachsen
zu Lipoblasten, die eine Grundlage als Adipocyten erworben haben, Vorläufer-Adipocyten
ohne Fetttröpfchen,
die jedoch anfängliche
Kennzeichen von Adipocyten besitzen, unreifen Adipocyten, die Fetttröpfchen enthalten,
und schließlich zu
reifen Adipocyten, die eine große
Menge an angehäuften
Fetten enthalten. Adipocyten von Erwachsenen, die an leichter Fettleibigkeit
leiden, wachsen in hypertropher Weise aufgrund der Zunahme der Menge
der angehäuften
Triglyceride. Die Zahl der Adipocyten nimmt in dem Maße zu, wie
der Grad der Fettleibigkeit auffällig wird.
Von der Abnahme der Zahl der Adipocyten durch Kontrolle der Differenzierung
und Reifung oder von der Unterdrückung
der Hypertrophie gereifter Adipocyten erwartet man, den Fortschritt
der Fettleibigkeit zu stoppen, indem das Ansteigen der Menge der
angehäuften
Fette unterdrückt
wird, und die Fettleibigkeit zu behandeln. Es wurde bewiesen, dass
die Kontrolle der Adipocyten-Differenzierung
in vivo sowohl positiv oder negativ verläuft, entsprechend einer Zahl
von Faktoren, die sich von Umweltfaktoren ableiten, wie zum Beispiel
der Nahrungsaufnahme, der körperlichen
Betätigung
und dergleichen. Von den Cytokinen, welche die Differenzierung von
Adipocyten aus Adipocyten-Vorläufern
kontrollieren, wurden Tumornekrosefaktor-Alpha (TNF-Alpha: Torti
F. M. et al., Science, Bd. 229, S. 867 (1985)), transforming growth
factor-β (Ignotz
R. A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Bd. 82, S. 8530 (1985)),
Präadipocytenfaktor-1
(Pref-1: Smas C. M. et al., Cell, Bd. 73, S. 725 (1993)), und dergleichen
beschrieben. Darüber
hinaus wurde beschrieben, dass Leptin, das Translationsprodukt eines
ob-Gens, das kürzlich
geklont wurde, möglicherweise
die Menge der aufgenommenen Nahrung und das Gewicht des Fettgewebes über das
Zentralnervensystem herabsetzt (Levin N. et al. Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, Bd. 93, S. 1726, 1996).
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Darüber hinaus
lenken das intracerebrale Peptid-Neuropeptid Y, welches eine starke
appetitanregende Wirkung besitzt, und sein Rezeptor die Aufmerksamkeit
auf sich als Materialien für
die Entwicklung eines die Fettleibigkeit unterdrückenden Medikaments (Sainsburg
A. et al, Diabetologia, Bd. 39, S. 353, 1996). Von diesen Cytokinen
erwartet man, dass sie zu einem therapeutischen Mittel für Fettleibigkeit
aufgrund ihrer die Adipocyten unterdrückenden Wirkung bei der Anhäufung von
Fett werden können.
Klinische Tests als ein therapeutisches oder vorbeugendes Mittel
gegen Fettleibigkeit sind bei einigen dieser Cytokine, wie zum Beispiel Leptin,
am Laufen.
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Derzeit
ist ein therapeutisches oder vorbeugendes Mittel gegen Fettleibigkeit
in den USA im Handel unter der Bezeichnung ReduxTM (American
Home Products Co.) erhältlich.
Andere Arzneimittel, wie zum Beispiel Meridia (Kunol Co.) und Xenical
(Roche Co.) werden in den USA als ein Mittel zur Behandlung von
Fettleibigkeit oder als ein Hemmstoff für die Fettabsorption zugelassen
werden. Die Behandlungsverfahren unter Verwendung dieser Arzneimittel
sind jedoch in den Wirkungen und den therapeutischen Ergebnissen
nicht notwendigerweise zufrieden stellend. Die Entwicklung eines
neuen Mittels, das erhältlich
ist, zeigt eine höhere
heilende Wirkung für
diese Arzneimittel, und es wurden solche mit geringen Nebenwirkungen
gewünscht.
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Offenbarung
der Erfindung
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In
Anbetracht der vorstehenden Umstände
haben die vorliegenden Erfinder eine Substanz eingehend erforscht,
die eine Wirkung gegen Fettleibigkeit oder eine die Fettleibigkeit
heilende Wirkung zeigt, und sie haben als ein Ergebnis gefunden,
dass Stanniocalcin (STC: Olsen H. S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
Bd. 93, S. 1792 (1996)), welches als ein Protein bekannt ist, das
den Mineralstoffwechsel kontrolliert, eine die Entstehung von Fettgewebe
hemmende Wirkung oder eine hemmende Wirkung auf die Differenzierung
und/oder die Reifung von Adipocyten zeigt, wobei diese physiologische
Wirkung von Stanniocalcin in der Vergangenheit überhaupt nicht erwartet worden
ist. Dementsprechend ist es eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung,
ein vorbeugendes und/oder therapeutisches Mittel für Fettleibigkeit
bereitzustellen, das eine neue Substanz als einen wirksamen Bestandteil
enthält.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein vorbeugendes und/oder therapeutisches
Mittel für
Fettleibigkeit, welches Stanniocalcin als einen wirksamen Bestandteil
enthält.
Die pharmazeutische Zubereitung entsprechend der vorliegenden Erfindung
kann ausgezeichnete vorbeugende und/oder therapeutische Wirkungen
des Mittels für
Fettleibigkeit zeigen, und sie ist nützlich als ein Arzneimittel.
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Stanniocalcin
wurde zunächst
in Fischen entdeckt, und es wurde der Reihe nach aufgeklärt, dass
es in Säugetieren
einschließlich
des Menschen existiert. Anschließend wurde die cDNA eines menschlichen
Embryos mittels eines gentechnologischen Verfahrens auf der Grundlage
der strukturellen Ähnlichkeit
isoliert. Menschliches Stanniocalcin kann erhalten werden, indem
die erhaltene cDNA in verschiedenen Arten von Zellen unter Verwendung
von gentechnologischen Verfahren exprimiert wird.
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Es
war gut bekannt, dass Stanniocalcin den Calciumspiegel in vivo reduziert,
wenn es Fischen verabreicht wird, und ebenso die Ausscheidung von
Phosphat in den Urin hemmt, wenn es an Ratten verabreicht wird (Proc.
Natl. Acad. Sci. USA, 93, 1792 (1996)). Jedoch war nicht bekannt,
dass Stanniocalcin ausge zeichnete vorbeugende und therapeutische
Wirkungen für
Fettleibigkeit besitzt.
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Die beste
Art zur Ausführung
der Erfindung
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Stanniocalcin
oder der wirksame Bestandteil entsprechend der vorliegenden Erfindung
kann durch das Verfahren von Olsen H. S. et al. (Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, Bd. 93, S. 1792 (1996)) erhalten werden. Insbesondere
können
die vorstehend beschriebenen Literatur-Referenzen oder Gendatenbanken
oder dergleichen danach abgesucht werden, um die Sequenz der cDNA
von Stanniocalcin zu finden, und auf der Grundlage der Sequenzinformation
kann die cDNA von Stanniocalcin durch Anwendung des PCR-Verfahrens etc.
erhalten werden. Zellen zur Expression von Stanniocalcin können durch
Transfektion des Expressionsvektors in Tierzellen etc. erhalten
werden, wobei dieser Expressionsvektor durch Insertion der erhaltenen
cDNA erhalten wird. Anschließend
kann Stanniocalcin durch Kultivierung der erhaltenen Zellen für die Expression von
Stanniocalcin erhalten werden, gefolgt von einer Reinigung der erhaltenen
Kulturlösung
mittels der in herkömmlicher
Weise verwendeten Verfahren. Die das Entstehen von Fettgewebe hemmende
Wirkung kann durch Abschätzung
der unterdrückenden
Wirkung bezüglich
der Adipogenese, welche durch Dexamethason induziert wird, anhand
der Verzögerung
der Anhäufung
der Triglyceride bestimmt werden, indem eine Präadipocytenzelle aus der Maus
als eine Zielzelle entsprechend dem Verfahren von Kodama H. et al.
(Journal of Cellular Physiology, Bd. 112, S. 83 (1982)) verwendet
wird.
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Stanniocalcin
oder der wirksame Bestandteil der vorliegenden Erfindung kann sicher
an Menschen und Tiere in Form einer pharmazeutischen Zusammensetzung
verabreicht werden, die für die
Verwendung zur Vorbeugung und/oder zur Behandlung der Fettleibigkeit
vorgesehen ist. Stanniocalcin kann zu pharmazeutischen Zubereitungen
verarbeitet werden, und entweder oral oder parenteral verabreicht
werden. Beispiele einer pharmazeutischen Zusammensetzung umfassen
Zusammensetzungen für
die Injektion, Zusammensetzungen für Tropfen, Zäpfchen,
Nasenmittel, sublinguales Mittel, Mittel für die perkutane Absorption,
und dergleichen. Diese pharmazeutischen Zubereitungen werden entsprechend
den bekannten pharmazeutischen Zubereitungsverfahren formuliert,
unter Verwendung pharmazeutisch akzeptabler Trägerstoffe, Exzipienzien, Stabilisatoren,
Färbemittel,
grenzflächenaktiver
Mittel und anderer Zusatzstoffe, und sie werden zu den gewünschten
Zubereitungen verarbeitet. Im Falle der Zusammensetzungen für die Injektion
kann eine pharmakologisch wirksame Menge von Stanniocalcin, welches
der wirksame Bestandteil der vorliegenden Erfindung ist, mit einem
pharmazeutisch akzeptablen Exzipient oder Aktivator gemischt werden,
wie zum Beispiel Aminosäuren,
Zucker, Cellulosederivate und andere organische/anorganische Verbindungen,
welche im allgemeinen den Zusammensetzungen für die Injektion zugegeben werden
können.
Falls notwendig, können
Mittel zur Einstellung des pH-Wertes, Puffermittel, Stabilisatoren,
Mittel zur Solubilisierung, etc. zugegeben werden, um dadurch verschiedene
injizierbare Lösungen
in Übereinstimmung
mit den herkömmlichen
Verfahren zu ergeben.
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Deren
Verabreichung erfolgt normalerweise an erwachsene Menschen bei einer
täglichen
Dosis von 10 μg
bis 10 mg/kg Körpergewicht,
aufgeteilt in einige Portionen, entweder oral oder parenteral. Die
besonders bevorzugte Dosierungsform ist die intravenöse Verabreichung.
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Beispiel
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Die
nachfolgend gegebenen Beispiele beschreiben die vorliegende Erfindung
in Einzelheiten, wobei diese Beispiele lediglich erläuternd sind,
und die vorliegende Erfindung soll in keiner Weise so verstanden
werden, als sei sie durch sie beschränkt.
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Beispiel 1
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Herstellung von Stanniocalcin
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i) Isolation von Poly(A)+ RNA aus IMR-90-Zellen (Lungenfibroblasten
aus menschlichem Embryo, ATCC CCL-186)
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Etwa
10 μg Poly(A)+ RNA wurde isoliert aus 1 × 108 IMR-90-Zellen unter Verwendung des „Fast Track mRNA
Isolation Kits" (Invitrogen
Inc.) entsprechend dem Protokoll von Invitrogen Inc..
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ii) Konstruktion eines
Expressionsvektors für
humanes Stanniocalcin
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Eine
einzelsträngige
cDNA wurde synthetisiert unter Verwendung des „Super-Script II cDNA-Synthesis-Kits" (Gibco BRL Inc.),
und 1 μg
der isolierten Poly(A)
+ RNA wurde als ein
Templat verwendet, entsprechend dem Protokoll von Gibco BRL Inc..
Ein cDNA-Fragment von Stanniocalcin (STC) wurde erhalten, indem eine
PCR unter Verwendung des erhaltenen cDNA-Templats und des Primers
STCF1N (Sequenz-Identifikation Nr. 1) und des Primers STCR1Xh (Sequenz-Identifikation
Nr. 2) durchgeführt
wurde, die entsprechend der Nucleotidsequenz des menschlichen Stanniocalcins
konstruiert wurden. Die Zusammensetzung der PCR-Lösung ist
wie folgt:
10 × Ex Taq
Puffer (Takara Shuzo Co.) | 10 μl |
2,5
mM dNTP | 8 μl |
cDNA-Lösung | 1 μl |
Ex
Taq (Takara Shuzo Co.) | 0,5 μl |
Destilliertes
Wasser | 74,5 μl |
20 μM Primer
STCF1N | 5 μl |
100 μM Primer
STCR1Xh | 1 μl |
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Die
vorstehend beschriebenen Lösungen
wurden in einem Mikrozentrifugen-Röhrchen gemischt, und die PCR
wurde unter den folgenden Bedingungen durchgeführt: nach einer Vorbehandlung
bei 95°C
für 3 Minuten
wurde die Reaktion der drei Schritte bei 95°C für 30 Sekunden, bei 55°C für 30 Sekunden
und bei 72°C für 2 Minuten
30 mal wiederholt. Anschließend
wurde die Reaktionsmischung bei 70°C 5 Minuten lang inkubiert.
Ein Teil der Reaktionsmischung wurde der Agarose-Gelelektrophorese
unterzogen, und ein gleichförmiges
DNA-Fragment von etwa 900 Basenpaaren wurde identifiziert. Das Fragment
wurde mittels eines herkömmlichen
Verfahrens sequenziert, und es wurde bestätigt, dass eine cDNA erhalten
wurde, die für
das Stanniocalcin-Gen codiert. Die cDNA-Sequenz und die Aminosäuresequenz
sind in den Sequenz-Identifikations-Nummern 3 bzw. 4 der Sequenztabelle
gezeigt.
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Das
erhaltene DNA-Fragment von etwa 900 Basenpaaren wurde unter Verwendung
von QIAEX II DNA-Extraktionskit (QUIAGEN Inc.) gereinigt, und die
gereinigte DNA wurde durch die Restriktionsenzyme XhoI und NheI
geschnitten (Takara Shuzo Co.) und unter Verwendung von QIAEX II
DNA-Extraktionskit gereinigt (STC XhoI-NheI-Fragment). Das Plasmid
pCEPSTC, welches die DNA enthält,
die für
das Stanniocalcin-Gen codiert, wurde durch Ligation des STC XhoI-NheI-Fragments
in den pCEP4 (Invitrogen Inc.) erhalten, der durch die Restriktionsenzyme
XhoI und NheI geschnitten wurde, mittels des Ligationskits Ver.
2 (Takara Shuzo Co.). E. coli (DH5α; Gibco BRL Inc.), welches das
Plasmid enthält,
wurde unter dem Namen DH5α/pCEP-STC
und unter der Zugangs-Nr. FERM BP-6736 im National Institute of
Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and
Technology, The Ministry of International Trade and Industry, Adresse:
1–3 Higashi
1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, Japan (postal code 305-8566)
am 31. Mai 1999 hinterlegt. Es wurde mittlerweile durch DNA-Sequenzierung
bestätigt,
dass keine irrtümliche
Aufnahme von Basen in den DNA-Abschnitt, der sich von der PCR-Reaktion
ableitet, während
der DNA-Synthese erfolgt ist.
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iii) Expression des humanen
Stanniocalcins
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E.
coli DH5α mit
pCEPSTC, wie es in Beispiel 1-ii erhalten wurde, wurde durch Schütteln in
2 ml Teriffic Broth (Life Technologies Inc.) über Nacht bei 37°C kultiviert,
das 50 μg/ml
Ampicillin (Sigma Inc.) und 4,7% Glycerin enthielt, und die Plasmid-DNA
wurde aus den Bakterienzellen unter Verwendung des QIAWELL-Kits (QIAGEN
Inc.) gereinigt. 293-EBNA-Zellen
(Invitrogen Inc.) in IMDM (Life Technologies Inc.), welches 10%
fötales
Kälberserum
enthielt, wurden in jeden Napf einer 24-Napfplatte mit 2 × 105 Zellen/Napf/ml überimpft, gefolgt von einer
Kultivierung in einem CO2-Inkubator (5 Vol-%
CO2) bei 37°C über Nacht. pCEPSTC oder pCEP4 wurden
in 293-EBNA-Zellen
unter Verwendung von Fugene 6 (Boehringer Mannheim Co.) transfiziert.
DNA und Fugene 6 wurden in Portionen von 0,5 μg bzw. 1 ml verwendet. Nach
der Transfektion wurden die transfizierten Zellen in einem CO2-Inkubator (5 Vol-% CO2)
bei 37°C
3 Tage lang kultiviert. Die erhaltene Kulturlösung wurde auf ihre die Adipogenese
hemmende Wirkung mittels des nachfolgend beschriebenen Verfahrens überprüft.
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iv) Bestimmung der hemmenden
Wirkung bezüglich
der Adipogenese
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Die
hemmende Wirkung bezüglich
der Adipogenese wurde mittels des folgenden Verfahrens, bestimmt
entsprechend dem Verfahren von Kodama H. et al. (Journal of Cellular
Physiology, Bd. 112, S. 83 (1982)): das heißt, unter Verwendung des Präadipocyten-Zellstammes MC3T3-G2/PA6
(RIKEN GENE BANK, RCB1127) als einer Zielzelle wurde die durch Dexamethason
induzierte Adipogenese anhand der Anhäufung der Triglyceride bestimmt
als ein Index für
seine hemmende Wirkung. Die Kulturlösung aus der Probe (Beispiel 1-iii),
die mit α-MEM
(Gibco BRL Inc.) verdünnt
wurde, das 10% fötales
Rinderserum enthält,
die Kulturlösung der
Zellen, die lediglich den Vektor transfiziert enthalten, sowie die
Kulturlösung
reiner 293-EBNA-Zellen wurden jeweils in Portionen von 50 μl auf 96-Napf-Mikroplatten
verteilt, und es wurden 3 × 103 Zellen des Präadipocyten-Zellstammes MC3T3-G2/PA6, nachdem sie
in 50 μl α-MEM suspendiert
wurden, das 2 × 10–7 M
Dexamethason und 10% fötales
Rinderserum enthielt, überimpft,
gefolgt von einer Kultivierung bei 5 Vol-% CO2, 37°C und 100%
Feuchtigkeit für
eine Woche. Nach einer Kultivierung für 7 Tage wurde das Kulturmedium durch
Absaugen entfernt, anschließend
luftgetrocknet und zur Bestimmung der in den Adipocyten angehäuften Triglyceride
unter Verwendung eines Triglycerid-Messkits (Triglyceride G-Test
Wako, Code Nr. 274-69802, Wako Pure Chemicals Ind. Co.) einem Assay
unterzogen. Die Abnahme der optischen Dichte bei 510 nm wurde für die Bestimmung
der hemmenden Wirkung bezüglich
der Adipogenese verwendet. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle
1 gezeigt. Als ein Ergebnis wurde bestätigt, dass Stanniocalcin in der
erhaltenen Kulturlösung
eine hemmende Wirkung bezüglich
der Adipogenese zeigt.
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Beispiel 2
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Bestimmung der hemmenden
Wirkung bezüglich
der Adipogenese unter Verwendung von Präadipocyten des Zellstammes
3T3/L1 aus einer Maus
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Unter
Verwendung des Präadipocyten-Zellstammes
3T3-L1 (hinterlegt unter der ATCC-Zugangs-Nr. CL173) als einer Zielzelle
wurde die Bildung von Adipocyten, die durch Dexamethason und 1-Methyl-3-isobutylxanthin
induziert wurde, mittels der Anhäufung
der Triglyceride gemessen, um die unterdrückende Wirkung gegen die Bildung
der Adipocyten zu bestimmen. Insbesondere wurden 50 μl einer Probe,
die derjenigen in Beispiel 1 äquivalent
war, und die mit α-MEM
(Gibco BRL Inc.) verdünnt
wurde, das 10% fötales
Rinderserum enthielt, in eine 96-Napf-Mikroplatte gegeben, und 5 × 103 Zellen eines Maus-Präadipocyten 3T3-LI wurden in 50 μl α-MEM suspendiert,
das 4 × 10–7 M
Dexamethason, 2 × 10–5 M
1-Methyl-3-isobutylxanthin und 10% fötales Rinderserum enthielt,
und anschließend überimpft,
gefolgt von einer Kultivierung bei 5 Vol.-% CO2,
27°C und
100% Feuchtigkeit für
eine Woche. Nach einer Kultivierung über 7 Tage wurde das Kulturmedium
durch Absaugen entfernt, und die Zellen wurden luftgetrocknet, um
die in den Adipocyten angehäuften
Triglyceride zu messen, unter Verwendung eines Triglycerid-Assay-Kits
(Triglyceride G-Test Wako, Code Nr. 274-69802, Wako Pure Chemicals
Ind. Co.). Die Abnahme der optischen Dichte bei 510 nm wurde als
eine hemmende Wirkung bezüglich
der Adipogenese angesehen. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle
2 gezeigt. Als ein Ergebnis wurde bestätigt, dass Stanniocalcin in
der Kulturlösung
eine hemmende Wirkung bezüglich
der Adipogenese zeigt, wie in Beispiel 1, in dem 3T3-L1-Zellen als
Zielzellen verwendet wurden.
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Beispiel 3
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Beispiele für pharmazeutische
Zubereitungen
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Beispiel 1 einer pharmazeutischen
Zubereitung: Herstellung einer Injektionszubereitung
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1
mg Stanniocalcin, das in Beispiel 1 erhalten wurde, sowie 50 mg
humanes Serumalbumin wurden in 100 ml einer 0,01 M Phosphatpufferlösung (PBS,
pH 7,0) gelöst,
und die Lösung
wurde sterilisiert, auf Gefäße verteilt
(jeweils 2 ml), lyophilisiert und verschlossen.
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Beispiel 2 einer pharmazeutischen
Zubereitung: Herstellung einer Injektionszubereitung
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50
mg Stanniocalcin, die in Beispiel 1 erhalten wurden, 1 mg Tween
80 und 50 mg humanes Serumalbumin wurden in 100 ml 0,01 M Phosphatpufferlösung (PBS,
pH 7,0) gelöst,
und die Lösung
wurde sterilisiert, auf Gefäße aufgeteilt
(jeweils 2 ml), lyophilisiert und verschlossen.
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Beispiel 3 einer pharmazeutischen
Zubereitung: Herstellung einer Injektionszubereitung.
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100
mg Stanniocalcin, das in Beispiel 1 erhalten wurde, 50 mg humanes
Serumalbumin und 4 g Sorbitol wurde in 20 ml 0,01 M Phosphatpuffer-Lösung (PBS,
pH 7,0) gelöst,
und die Lösung
wurde sterilisiert, auf Gefäße aufgeteilt,
lyophilisiert und verschlossen.
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Gewerbliche
Anwendbarkeit
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Entsprechend
der vorliegenden Erfindung wird ein neues vorbeugendes und/oder
therapeutisches Mittel für
Fettleibigkeit be reitgestellt, welches Stanniocalcin als einen wirksamen
Bestandteil enthält.
Die pharmazeutische Zubereitung der vorliegenden Erfindung kann
ausgezeichnete vorbeugende und/oder therapeutische Wirkungen gegen
Fettleibigkeit zeigen und ist nützlich
als ein Arzneimittel.
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Bezugnahme auf die hinterlegten
Mikroorganismen
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- a. Name und Anschrift der Organisation für die Hinterlegung,
bei der die betreffenden Mikroorganismen hinterlegt wurden:
Name:
National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of
Industrial Science and Technology, The Ministry of International
Trade and Industry
Adresse: 1–3 Higashi 1-chome, Tsukuba-shi,
Ibaraki-ken, Japan (postal code 305-8566)
- b. Das Datum, an dem die Hinterlegung bei der Organisation von
a. erfolgt ist: 31. Mai 1999 (wie von Bikoken Nr. P-16933 übertragen,
das am 11. August 1989 hinterlegt wurde).
- c. Zugangs-Nr., die dem hinterlegten Gut durch die Organisation
von a. mitgegeben wurde: FERM BP-6736
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