DE69807097T2

DE69807097T2 - Aktiver synergistischer komplex und kosmetisches und/oder pharmazeutisches produkt das diesen komplex enthält

Info

Publication number: DE69807097T2
Application number: DE69807097T
Authority: DE
Inventors: Gilles Pauly
Original assignee: Cognis France SAS
Current assignee: BASF Health and Care Products France SAS
Priority date: 1997-02-03
Filing date: 1998-01-22
Publication date: 2003-04-17
Anticipated expiration: 2018-01-23
Also published as: FR2758984A1; ES2181163T3; WO1998033475A1; DE69807097D1; ATE221768T1; EP1019016B1; AU5994498A; EP1019016A1; FR2758984B1; US6184199B1

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf das Gebiet der Kosmetik und Pharmakologie, insbesondere der vorbeugenden und wiederaufbauenden Kosmetik und Pharmakologie, und bezieht sich auf einen synergistischen Wirkkomplex gegen Streß, sowie ein Kosmetikprodukt bzw. Arzneimittel mit diesem Wirkkomplex.
Bei Zellen von Organismen, insbesondere des Menschen, kann der Streß entweder durch äußere Faktoren wie Hitze, xenobiotische Faktoren (Cadmium, Natriumarsenit), Sonnenbestrahlung, oder durch Glukosemangel, Sauerstoffmangel (Anoxie) oder auch durch endogene Induktoren wie Zellteilung und Zelldifferenzierung, hervorgerufen werden.
Alle lebenden Organismen, von den einfachsten (Archeobakterien) zu den am höchsten entwickelten (Säugetieren) haben die Fähigkeit, auf Streß durch die Synthese einer Gruppe von Proteinen, die unter der Bezeichnung HSP (heat shock protein, Hitzeschockproteine) bekannt sind und je nach ihrem Molekulargewicht in unterschiedliche Familien eingeteilt werden, zu reagieren.
Die obengenannten Faktoren führen zu einer Denaturierung von Zellproteinen ("Proteotoxinen"), und die Streßproteine (ASP) nehmen an der "Renaturierung" dieser Proteine oder an ihrer Ausscheidung teil. Außerdem gestatten sie den Zellen, dem Streß zu widerstehen.
Während des Stresses wird des weiteren die Aktivität der Proteine des HSP-Typs verlegt, nicht nur, um das Erbgut (DNA), sondern auch um dessen Expressionsmodus (Nukleolus, Ribosom, Messenger-RNA) zu schützen.
Im physiologischen Normalzustand läßt sich die Expression der meisten Streßproteine, insbesondere eine starke Expression der Proteine der HSP70-Familie, jedoch auch der HSP27-Familie, in der Haut beobachten. HSP72 ist vorzugsweise in der Basalschicht und HSC70 (konstitutives HSP) in den Suprabasalschichten lokalisiert.
Bei unterschiedlichen Hautstreßbelastungen verstärkt sich die HSP-Expression bei Zellen signifikant, und diese Proteine können als echte Zellstreßmarker betrachtet werden.
So wurde an kultivierten Keratinocyten nachgewiesen, daß ein Hitzeschock (1 Stunde bei 42ºC oder 15 Minuten bei 47ºC) die Expression von HSP72, HSP78, HSP90 und HSP110 induzierte und daß ein Hitzeschock (1 Stunde bei 45ºC) bei organtypisch kultivierter menschlicher Haut die Expression von HSP72 und HSP27 induzierte.
Außerdem wird bei der menschlichen Haut in vivo HSP72 nach Hitzeschock in den Epidermis- und Dermiszellen induziert, und ein durch UV-B-Strahlung hervorgerufener Hautstreß induziert das Auftreten von HSP72 in organtypischen Kulturen der menschlichen Haut und von HSP27 in vivo in der Haut der Maus.
Außerdem wurde ebenfalls nachgewiesen, daß eine Behandlung mit UV-A (5 J/cm² bis 80 J/cm²) die Expression von HSP72 in Zellkulturen (Fibrosarcomzellinie HT1080) induziert.
So ist insbesondere gut bekannt, daß bei physikalischen Faktoren wie Hitze oder UV-Strahlung die Proteine des HSP-Typs stark in der Hautepidermis induziert werden. Sie stellen dann einen ausgezeichneten Marker für das Ausmaß des Hautstresses unter diesen Bedingungen dar: Ultraviolettstrahlung mit oder ohne Temperaturerhöhung.
Diese Marker (HSP) lassen sich daher sehr gut zur Untersuchung der Wirkstoffe und/oder Kosmetikprodukte, insbesondere von Sonnenschutzmitteln (Sonnenmittel oder Mittel gegen das vorzeitige Altern der Haut) verwenden.
Zur Bewertung von Sonnenschutzprodukten bezüglich ihrer Schutzwirkung auf die Haut gegen die Schäden von Sonnenlicht existieren zur Zeit mehrere Verfahren: Messung des LSF (Lichtschutzfaktors), Zählung der SBC ("Sunburn Cells", Zellen, die Sonnenbrand aufweisen) in der Epidermis sowie Messung der Wirkung gegen Radikale.
Die Auswertung von HSP, insbesondere HSP27 und HSP72, stellt ein neues Verfahren zur Messung der Lichtschutzwirkung von Kosmetikprodukten, Sonnenschutzmitteln oder von Mitteln zur Verhinderung der lichtinduzierten vorzeitigen Hautalterung dar.
Außerdem ist bekannt, daß Glutathion, ein Tripeptid, das aus drei Aminosäuren besteht, von denen das Cystein, das dem Tripeptid eine Thiolgruppe verleiht (-SH), in reduzierter Form (GSH) oder in oxidierter Form (GS-SG-Disulfidbrücke) in der Zelle aufgrund eines enzymatischen Umwandlungssystems existiert, durch das es von einer Form in die andere übergehen kann, und daß Glutathion in der Haut in hohen Mengen vorliegt.
Im Vergleich zur Dermis liegt es in der doppelt so hohen Menge in der Epidermis, der Schicht der lebenden Zellen und in der Schicht der toten Zellen oder im Stratum corneum vor.
Es ist gut bekannt, daß das Glutathion bei der Entgiftung von Radikalen und Peroxiden sowie beim Schutz der Membranen lebender Zellen und von Strukturproteinen des Stratum corneum (Keratin) eine Funktion ausübt.
Dieses Entgiftungsvermögen und Schutzvermögen tritt bei unterschiedlichen Streßbedingungen und -arten wie Oxidationsstreß, Hitzestreß oder Strahlungsstreß auf.
Wie oben angegeben, führt die ultraviolette UV-B- sowie UV-A-Strahlung zu einer Erniedrigung des Glutathionspiegels in in-vitro kultivierten Zellen oder bei der Maus in vivo, und es wurde nachgewiesen, daß diese Erniedrigung die Bildung von Zellen des Sonnenbrandtyps in der Epidermis verstärkt.
Außerdem wurde beschrieben, daß UV-R-Strahlung zu einem Ansteigen von Disulfidbrücken (S-S) führt, was histochemisch in der Epidermis, insbesondere bei den nach Bestrahlung aufgetretenen Sonnenbrandzellen, nachgewiesen wurde.
Diese Disulfidbrücken sind außerdem als Vorstufe der UV-induzierten Apoptosis (programmierter Zelltod) bekannt.
Der Thiolgruppengehalt und daher der Glutathiongehalt, sowie der Disulfidbrückengehalt in der Epidermis sind daher gute Indikatoren einer Entwicklung auf eine beschleunigte Alterung bzw. einen beschleunigten Zelltod hin, und es scheint, daß die Anreicherung von Thiogruppen, insbesondere Glutathion, in der Epidermis ein gutes Mittel zum Sonnenschutz und gegen lichtbeschleunigtes Altern darstellt.
Aus der Druckschrift WO8602833 ist die Verwendung von Erbsenextrakt in der Kosmetik und in Kosmetikzusammensetzungen bekannt.
Zur Bekämpfung der Auswirkungen von Sonnenstrahlung wurden unterschiedliche Kosmetikprodukte, sogenannte "Sonnenmttel" und "Mittel gegen die lichtbedingte Alterung" entwickelt bzw. weiterentwickelt, wobei ihre Entwicklung vom Anfang bis zum heutigen Tag in unterschiedliche Schritte eingeteilt werden kann, von denen jeder im wesentlichen dem Zusatz eines weiteren Wirkstoffs entspricht.
Ganz zu Beginn führte man bekannte UV-B-Filter (zur Vermeidung von Sonnenbrand) und anschließend UV-A- Filter (Wirkung gegen die chronische lichtbedingte Alterung und die Entstehung von Krebs) in diese Produkte ein.
Ein dritter Schritt bestand darin, daß man Antioxidantien und Substanzen gegen Radikale (Bekämpfung der Bildung von Sonnenbrandzellen) beigab, dann folgte die Einführung von prämelanogenen Substanzen (Beschleunigung der Bräunung durch die Produktion von Automelanin) und schließlich wurden Cytophotoimmunprotektoren (Schutz der Immunkapazität der Haut, die von den Langerhans-Zellen in der Epidermis dargestellt wird) als neueste Entwicklung eingeführt.
Unabhängig von der obengenannten Entwicklung, die zu Produkten mit einer steigenden Anzahl an Bestandteilen führte, die jedoch untereinander keine wirkliche synergistische Wirkung aufwiesen, haben die Erfinder der vorliegenden Erfindung nach einem neuen Weg gesucht bzw. einen solchen entwickelt, der darin besteht, daß man den natürlichen Selbstschutz der Haut verstärkt, d. h. auf die molekularbiologische Ebene des Schutzes und der des Wiederaufbaus der Haut bei Sonne mittels einerseits synergistischer gleichzeitiger Wirkungen auf die Stimulation der Autobiosynthese von reduziertem Glutathion und andererseits auf die Hemmung des Auftretens von Streßproteinen, die molekulare Marker für Faktoren, die auf die Epidermis einwirken, darstellen, einwirkt.
Aufgrund dieser Forschungsarbeiten gelangte man zu einem synergistischen Komplex, der insbesondere Lichtschutzwirkungen gegen molekularbiologisch schädliche Faktoren aufweist und insbesondere dazu bestimmt ist, in ein Kosmetikprodukt bzw. Arzneimittel zur topischen Verwendung für die Haut bzw. die Epithelanhanggebilde eingearbeitet zu werden, das mindestens einen peptidhaltigen Extrakt von Pisumsativum-Körnern, einem Extrakt einer Pflanze der Familie der Meliaceen, der tanninhaltig bzw. cumarinderivathaltig (und gegebenenfalls triterpenoidhaltig bzw. saponosidhaltig) ist, und gegebenenfalls mindestens eine Aminosäure in Form eines komplexen Salzes bzw. von komplexen Salzen enthält.
Dieser synergistische Wirkkomplex liegt vorzugsweise in konzentrierter Form vor und ist leicht mittels Kosmetikformulierungen anzuwenden.
Gemäß einem ersten Merkmal der Erfindung enthält der synergistische Komplex 0,05 Gew.-% bis 40 Gew.-%, vorzugsweise 1 Gew.-% bis 40 Gew.-% peptidhaltigen Pisum-sativum-Extrakt in entwässerter oder nicht entwässerter Form.
Das Verfahren zur Herstellung des Peptidextrakts von Pisum-sativum-Körnern (Erbsen) kann zum Beispiel darin bestehen, daß man die Erbsen in der Gegenwart von angesäuertem Wasser zerkleinert und bei 50ºC rührt, dann zentrifugiert und die erhaltene Suspension ultrafiltriert und schließlich das Retentat filtriert und gegebenenfalls durch Zerstäuben oder. Lyophilisieren entwässert.
Gemäß einem weiteren Merkmal der Erfindung enthält der synergistische Komplex 0,005 Gew.-% bis 10 Gew.-%, vorzugsweise 0,1 Gew.-% bis 10 Gew.-% tanninhaltigen bzw. cumarinderivathaltigen Pflanzenextrakt der Famile der Meliaceen.
Der Pflanzenextrakt der Familie der Meliaceen besteht vorzugsweise aus einem entwässerten wäßrigen, alkoholischen oder wäßrig/alkoholischen Extrakt von Khaya senegalensis, vorzugsweise einem Extrakt der Rinde dieser Pflanze oder gegebenenfalls einem Extrakt von Blättern oder Samen dieser Pflanze.
Das Verfahren zur Herstellung des Rindenextrakts von Khaya senegalensis kann zum Beispiel darin bestehen, daß man die Rinde dieser Pflanze zerkleinert, sie anschließend in 20% destilliertem Wasser suspendiert und zwei Stunden bei 90ºC rührt oder zwei Tage bei Umgebungstemperatur mazerieren läßt und anschließend eine Trennung, Filtration und gegebenenfalls im Anschluß daran eine Entwässerung (Zerstäubung oder Lyophilisierung) durchführt.
Die Extraktion der wirkstoffhaltigen Fraktion (die insbesondere Tannine bzw.. Coumarinsäurederivate enthält) kann jedoch auch unter den gleichen Bedingungen mit Ethanol oder einer Mischung aus Wasser und Ethanol als Lösungsmittel durchgeführt werden. Gemäß einem weiteren Merkmal der Erfindung gehört die vorliegende Aminosäure, bzw. gehören die vorliegenden Aminosäuren, zur Gruppe Histidin, Arginin und Tyrosin, wobei diese Aminosäure(n) in Form von Bernsteinsäure- bzw. Asparaginsäuresalzen vorliegt bzw. vorliegen.
Die Aminosäuren liegen vorteilhafterweise in reiner Form, in Form von Bernsteinsäure- bzw. Asparaginsäuresalzen bzw. in Form von Mischungen dieser Art (Aminosäuresalz oder Aminosäure/Bernsteinsäure oder Asparaginsäure) vor, wobei sie gemeinsam 0,05 Gew.-% bis 40 Gew.-%, vorzugsweise 0,1 Gew.-% bis 40 Gew.-% des synergistischen Wirkkomplexes ausmachen.
Außer den obengenannten Bestandteilen kann der erfindungsgemäße synergistische Komplex außerdem (i) 0,05 Gew.-% bis 5 Gew.-% eines wasserlöslichen Hefezellextrakts des Typs Saccharomyces cerevisiae, (ii) 0,05 Gew.-% bis 10 Gew. -% Osen, Polyoside und/oder Polysaccharide, insbesondere Saccharose und/oder Glycogen, und/oder (iii) 0,01 Gew.-% bis 10 Gew.-% eines oder mehrerer B-Vitamine wie insbesondere Pyridoxin und/oder Niacinamid enthalten.
Unter Einbeziehung der unterschiedlichen obengenannten Eigenschaften kann eine gewichtsbezogene Formulierung eines erfindungsgemäßen synergistischen Wirkkomplexes die folgende Zusammensetzung aufweisen:
1) Peptidextrakt von Pisum-ativum- 1 bis 40% Körnern (Erbsen)
2) wäßriger oder wäßrig-alkoholischer Extrakt der Rinde von Khaya senegalensis 0,1 bis 10%
3) Aminosäuren (Histidin, Arginin und/oder Tyrosin) in Form von Bernsteinsäure- und/oder Asparaginsäuresalzen 0,1, bis 40%
4) wasserlöslicher Hefeextrakt 0,05 bis 5%
5) Vitamin B (Pyridoxin und/oder Niacinamid) 0,01 bis 10%
6) Polyosid (Glycogen) 0,05 bis 10%
7) Träger und/oder Lösungsmittel ad 100%
Der genannte synergistische Komplex kann in unterschiedliche Arzneiformen gebracht werden, wie zum Beispiel eine Flüssigkeit, einen gelösten Stoff, eine Paste, ein Pulver, Liposomen, Mikrosphären, Mikrokapseln, Nanopartikeln und dergleichen.
Die folgenden Beispiele 1 bis 7 veranschaulichen unterschiedliche mögliche gewichtsbezogene Formulierungen (in %) des erfindungsgemäßen synergistischen Wirkkomplexes, was jedoch nicht als Einschränkung aufzufassen ist.

Beispiel 1:

Zerstäubter Peptidextrakt von Pisum sativum 30,00
Lyophilisierter wäßriger Rindenextrakt von Khaya senegalensis 2,00
Sorbit ad 100,00

Beispiel 2:

Peptidextrakt von Pisum sativum 30,00
Lyophilisierer wäßriger Rindenextrakt von K. senegalensis 2,00
Bernsteinsäure, Histidinsalz 2,00
Bernsteinsäure, Argininsalz 3,00
Argininaspartat 2,00
Tyrosin 1,00
Wasserlöslicher Extrakt von Saccharomyces cerevisiae 2,00
Sorbit ad 100,00

Beispiel 3:

Peptidextrakt von Pisum sativum 30,00
Wäßrig-alkoholischer Rindenextrakt von K. senegalensis 0,50
Bernsteinsäure, Histidinsalz 1,00
Bernsteinsäure, Argininsalz 5,00
Argininaspartat 0,50
Tyrosin 1,00
Wasserlöslicher Extrakt von Saccharomyces cerevisiae 2,00
Mannit ad 100,00

Beispiel 4:

Peptidextrakt von Pisum sativum 15,00
Rindenextrakt von K. senegalensis 5,00
Histidin- und Argininsuccinat 10,00
Tyrosin 1,00
Glycogen 5,00
Sorbit ad 100,00

Beispiel 5:

Zerstäubter Peptidextrakt von Pisum sativum 10,00
Rindenextrakt von K. senegalensis (Lyophilisat) 5,00
Bernsteinsäure, Histidin- und Argininsalz 20,00
Argininaspartat 2,00
Tyrosin 1,00
Pyridoxin - HCl 3,00
Sorbit ad 100,00

Beispiel 6

Peptidextrakt von Pisum sativum 20,00
Wäßrig-alkoholischer Rindenextrakt von K. senegalensis (Lyophilisat) 0,50
Bernsteinsäure, Histidin- und Arginisalz 10,00
Argininaspartat 5,00
Tyrosin 1,50
Wasserlöslicher Extrakt von Saccharomyces cerevisiae 3,00
Mannit ad 100,00

Beispiel 7

Peptidextrakt von Pisum sativum (Zerstäubungsprodukt) 10,00
Wäßriger Rindenextrakt von K. senegalensis (Lyophilisat) 1,00
Bernsteinsäure/Histidin (25/75) 4,50
Arginin/Asparaginsäure (75/25) 4,75
Tyrosin 1,00
Wasserlöslicher Extrakt von Saccharomyces cerevisiae (Lyophilisat) 1,50
Pyridoxin - HCl 1,00
Mannit ad 100,00
Außerdem betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung eines wie oben beschriebenen synergistischen Komplexes als Wirkstoff zur Herstellung eines Kosmetikprodukts bzw. einer Kosmetikzusammensetzung oder eines Arzneimittels bzw. einer Arzneimittelzusammensetzung zur topischen Verwendung für die Haut und/oder die Epithelanhanggebilde.
Der synergistische Komplex kann als Wirkstoff gegen Hautstreß eingesetzt werden, was anhand einer verringerten Expression von unter der Bezeichnung HSP, insbesondere HSP27, bekannten Streßproteinen, die infolge von UV-A-, UV-B- und sichtbaren Sonnenstrahlen und/oder einer Erhitzung der Haut in der Epidermis gebildet werden, nachgewiesen wird.
So verhindert oder inhibiert er das Auftreten von durch Sonnenstrahlen induzierten Streßproteinen und verringert daher die schädlichen Auswirkungen einer lokalen Entzündung sowie die durch diese Strahlungen gebildeten Radikale.
Außerdem kann der synergistische Komplex des weiteren einerseits als Stimulans für die Autosynthese von reduziertem Glutathion durch die Haut- oder Kapillarzellen und/oder andererseits als Mittel gegen das Auftreten von durch akute Sonnenstrahlen induzierten oder infolge von chronischer lichtinduzierter Hautalterung entstandenen Disulfidbrücken eingesetzt werden.
Er wird vorzugsweise in ein Sonnenschutzmittel oder After-Sun-Mittel eingearbeitet, und zwar allein oder gemeinsam mit ergänzenden Sonnenschutzfiltern, oder in ein Hautpflegeprodukt für den Tag mit einer vorbeugenden und/oder wiederaufbauenden Wirkung bei Alterungserscheinungen und/oder gegen Umweltverschmutzung (mit oder ohne Sonnenschutzfiltern).
Außerdem betrifft die vorliegende Erfindung ebenfalls ein Kosmetikprodukt bzw. Arzneimittel für die Haut und/oder die Epithelanhanggebilde (Flüssigkeit, Lotion, Emulsion, Creme oder entsprechendes), das inbesondere eine molekulare Lichtschutzwirkung auf die Zelle aufweist, dadurch gekennzeichnet, daß es 0,01 Gew.-% bis 90 Gew.-%, vorzugsweise 0,05 Gew.-% bis 20 Gew.-%, eines wie oben beschriebenen synergistischen Wirkkomplexes, gegebenenfalls gemeinsam mit Sonnenschutzfiltern, enthält.
Das genannte Kosmetikprodukt bzw. Arzneimittel enthält vorzugsweise 1 bis 10 Gew.-% des erfindungsgemäßen synergistischen Wirkkomplexes; im Anschluß an topische äußerliche Anwendungen des Produkts läßt sich eine Schutzwirkung, eine Schutzwirkung gegen Licht und eine lokal entzündungshemmende Wirkung beboachten.
Als praktische Ausführungsbeispiele der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen sollen anschließend unterschiedliche Produkte oder Kosmetikpräparate, die den genannten synergistischen Wirkkomplex enthalten, beschrieben werden, ohne daß dies als Einschränkung aufzufassen ist; Beispiel B, das den beanspruchten Extrakt nicht enthält, veranschaulicht eine Zusammensetzung des Stands der Technik.

Beispiel 1:

Ein Kosmetikprodukt in Form einer erfindungsgemäßen Anti-Streß-Emulsion für das Gesicht kann zum Beispiel eine gewichtsbezogene Zusammensetzung aus den folgenden Bestandteilegruppen A, B und C wie unten angegeben aufweisen.

Bestandteilsgruppe A:

- Glycerinstearat und PEG-100-Stearat 1,500
- Glycerinstearat und CETETH-20 1,500
- Cetylalkohol 1,000
- Caprylsäure-/Caprinsäuretriglycerid 5,000
- Cetostearylisononanoat 4,000
- Octyldodecanol 3,000
- Dimeticon 0,500
- Elestab 4121 (Laboratoires Sérobiologiques) 0,300

Bestandteilsgruppe B:

- Wasser 73,550
- Elestab 4112 (Laboratoires Sérobiologiques) 0,400
- Glycerin 5,000
- Xanthangummi 0,500
- Synergistischer Wirkkomplex (Beispiel 6) 5,000

Bestandteilsgruppe C:

- Polyacrylamid und Isoparaffin und Laureth-7 0,750
Das Verfahren zur Herstellung und Produktion der obengenannten Emulsion für das Gesicht besteht im wesentlichen darin, daß man die Bestandteilsgruppe E herstellt (Lösen von Elestab 4112 in Wasser und Zugabe des Glycerins bei 75ºC, anschließend Zugabe des Xanthangummis und Lösung des synergistischen Komplexes), die Bestandteilsgruppe A bei 75ºC herstellt und sie bei 75ºC unter Rühren mit dem Turborührer in die Fraktion B gießt, anschließend die Fraktion C bei 60ºC unter Rühren mit dem Turborührer zugibt, die Mischung abkühlen läßt und beginnend bei 50ºC mit einem Planetenrührwerk bis zum Erreichen der Umgebungstemperatur rührt.

Beispiel 2:

Ein Kosmetikprodukt in Form einer erfindungsgemäßen Schutzcreme und alterungshemmenden Halscreme kann zum Beispiel eine gewichtsbezogene Zusammensetzung aus den folgenden Bestandteilsgruppen A und B wie unten angegeben aufweisen.

Bestandteilsgruppe A:

- Sorbitpalmitat 3,500
- Glycerinstearat 1,500
- Cetylalkohol 2,500
- Cetostearylisononanoat 7,000
- Octyldodecanol 2,500
- Paraffinöl 3,000
- Dimeticon 2,000
- Elestab 4121 (Laboratoires Sérobiologiques) 0,300

Bestandteilsgruppe B:

- Wasser 69,100
- Elestab 4112 (Laboratoires Sérobiologiques) 0,400
- Glycerin 4,000
- Natriumcetostearylsulfat 1,200
- Synergistischer Wirkkomplex (Beispiel 3) 2,000
Das Verfahren zur Herstellung und Produktion der genannten Creme besteht im wesentlichen darin, daß man die Bestandteilsgruppe B bei 75ºC herstellt, sie unter Rühren mit dem Turborührer mit der Bestandteilsgruppe A bei 80ºC versetzt, die Mischung abkühlen läßt und weiter mit dem Turborührer bis zum Erreichen von 50ºC rührt und anschließend unter Rühren mit einem Planetenrührwerk bis zum Erreichen der Umgebungstemperatur weiter abkühlt.

Beispiel 3:

Ein Kosmetikprodukt in Form einer Sonnencreme kann zum Beispiel eine gewichtsbezogene Zusammensetzung aus den folgenden Bestandteilsgruppen A und B wie unten angegeben aufweisen.

Bestandteilsgruppe A:

- Cetylalkohol 5,000
- Caprylsäure/Caprinsäuretriglycerid 6,100
- Paraffinöl 3,750
- Lanolin 1,000
- Glycerinstearat 2,000
- Dimeticon 0,250
- Octyldodecanol 4,500
- Octylstearat 8,150
- Octylmethoxycinnamat 6,800
- Butylmethoxybenzoylmethan 2,000
- Elestab 4121 (Laboratoires Sérobiologiques) 0,300

Bestandteilsgruppe B:

- Wasser 53,750
- Elestab 4112 (Laboratoires Sérobiologiques) 0,400
- Glycerin 3,000
- Kaliumcetylphosphat 3,000
Das Verfahren zur Herstellung und Produktion der genannten Sonnencreme besteht im wesentlichen darin, daß man die Bestandteilsgruppe A und die Bestandteilsgruppe B bei 75ºC herstellt, anschließend die Bestandteilsgruppe B bei 75ºC unter Rühren mit einem Turborührer mit der Fraktion A versetzt und die Mischung unter Rühren mit einem Planetenrührwerk auf Umgebungstemperatur abkühlen läßt.

Beispiel 4:

Ein Kosmetikprodukt in Form einer erfindungsgemäßen Sonnencreme kann zum Beispiel eine gewichtsbezogene Zusammensetzung aus den Bestandteilsgruppen A und B wie unten angegeben aufweisen.

Bestandteilsgruppe A:

- Cetylalkohol 5,000
- Caprylsäure/Caprinsäuretriglycerid 6,100
- Paraffinöl 3,750
- Lanolin 1,000
- Glycerinstearat 2,000
- Dimeticon 0,250
- Octyldodecanol 4,500
- Octylstearat 8,150
- Octylmethoxycinnamat 6,800
- Butylmethoxybenzoylmethan 2,000
- Elestab 4112 (Laboratoires Sérobiologiques) 0,300

Bestandteilsgruppe B:

- Wasser 50,750
- Elestab 4112 (Laboratoires Sérobiologiques) 0,400
- Glycerin 3,000
- Kaliumcetylphosphat 3,000
- Synergistischer Komplex (Beispiel 7) 3,000
Das Verfahren zur Herstellung und Produktion der genannten Sonnencreme besteht im wesentlichen darin, daß man die Bestandteilsgruppe A bei 80ºC und die Bestandteilsgruppe B bei 75ºC herstellt, anschließend die Bestandteilsgruppe B bei 75ºC mit der Bestandteilsgruppe A bei 80ºC unter Rühren mit dem Turborührer versetzt und die Mischung unter Rühren mit einem Planetenrührwerk auf Umgebungstemperatur abkühlen läßt.
Zur Veranschaulichung und zum Nachweis der Vorteile der komplexen Mittel nach den obengenannten Beispielen (ihrer ursprünglichen Eigenschaften und ihrer Wichtigkeit und Spezifität als UV-B- und UV-A- Sonnenschutzfilter), wurden mit dem dem obenbeschriebenen Beispiel 7 entsprechenden synergistischen Wirkkomplex die folgenden Objektivierungstests (A, B, C, D und E) durchgeführt.
Die Ergebnisse dieser Tests wurden graphisch in den Fig. 1 bis 8 der beigelegten Zeichnungen dargestellt:
- Fig. 1 ist eine graphische Darstellung des Glutathionspiegels von menschlichen MRC5-Fibroblasten im Überlebenstest (Aktivitätstest A) [Student's t-Test - (**) bedeutet, daß p Irrtumswahrscheinlichkeit < 0,01];
- Fig. 2 ist eine graphische Darstellung des PGE2 (Prostaglandin E2)-Spiegels von menschlichen NCTC2544-Keratinocyten unter UV-B-Bestrahlung (30 mJ/cm²) - Aktivitätstest C [Student's t-Test - (*) bedeutet, daß p < 0,05 und (**) bedeutet, daß p < 0,01];
- Fig. 3 ist eine graphische Darstellung des LDH-Spiegels (der in den Kulturmediumüberstand abgegebenen Lactatdehydrogenase) bei menschlichen NCTC2544-Keratinocyten unter UV-B-Bestrahlung (30 mJ/cm²) - Aktivitätstest C/Simultanbehandlung [Student's t-Test - (*) bedeutet, daß p < 0,005 und (**) bedeutet, daß p < 0,001];
- Fig. 4 ist eine graphische Darstellung der Lipoxygenasehemmung in Prozent durch mengenmäßige Bestimmung der im Reagenzglas gebildeten Superoxidanionen - Aktivitätstest C;
- Fig. 5 ist eine graphische Darstellung des MDA (Malonaldialdehyd)-Spiegels von MRC5-Fibroblasten unter W-A-Bestrahlung (15 J/cm²) - Aktivitätstest D/vorbeugende Behandlung [(*) bedeutet, daß p < 0,05];
- Fig. 6 ist eine graphische Darstellung des GSH (reduzierten Glutathion)-Spiegels bei MRC5- Fibroblasten unter UV-A-Bestrahlung (15 J/cm²) - Aktivitätstest D/vorbeugende Behandlung [Student's t-Test - (*) bedeutet, daß p < 0,05];
Fig. 7 ist eine graphische Darstellung, die die ex-vivo-Schutzwirkung auf menschliche Haut in organtypische Kultur vor Bestrahlung mit einem Sonnensimulator in bezug auf die Induktion des Streßproteins HSP27 zeigt, was immunhistochemisch an den lebenden Schichten der Epidermis veranschaulicht wird - Aktivitätstest E [U-Test nach Mann und Whitney - (**) gibt an, daß p < 0,001 und (NS) bedeutet "nicht signifikant"]; und
Fig. 8 ist eine graphische Darstellung, die die ex-vivo-Schutzwirkung auf menschliche Haut in organtypische Kultur vor Bestrahlung mit einem Sonnensimulator in bezug auf die Induktion von S-S- Brücken zeigt, was immunhistochemisch an den lebenden Schichten der Epidermis veranschaulicht wird - Aktivitätstest E [U-Test nach Mann und Whitney - (**) gibt an, daß p < 0,001 und, (NS) bedeutet "nicht signifikant"].

A) Nährwirkung und eutrophierende Wirkung auf in-vitro-gezüchtete menschliche Fibroblasten.

Die eutrophierende Wirksamkeit von erfindungsgemäßen synergistischen Wirkkomplexen wurde an einem. Überlebenstest an menschlichen MRC5-Fibroblasten ausgewertet. Die zu prüfenden Dosen wurden zuvor mittels eines Toxizitätstests an MRC5-Fibroblasten bestimmt.
Für den Überlebenstest wurde das Produkt in DMEM-Standardkulturmedium gelöst und drei Tage nach dem Einsetzen der MRC5-Zellen mit diesen in Kontakt gebracht. Nach siebentägiger Inkubation bei 37ºC (CO&sub2; = 5%) wurde das Überleben der Zellen durch Quantifizierung des intrazellulären Glutathions (GSH) mittels einer Fluoreszenzsonde (OPTH) nach dem Verfahren von P. J. HISSIN und R. HILF ausgewertet.
Der Anti-Streß-Komplex verbesserte den GSH-Spiegel der überlebenden MRC5-Zellen signifikant: +64% sowie +74% am Tag 7 bei 0,1 bzw. 0,2% (siehe Fig. 1).

B) Wirksamkeit gegen Radikale (Reagenzglastests)

Die Wirksamkeit gegen Radikale wurde in einer Reihe von Tests ausgewertet, bei denen die anfänglichen radikalischen Formen sowie die induzierten reaktionsfähigen Formen von Sauerstoff wiedergefunden werden.
1) Test gegen DPPHº- Radikale: Bei diesem Test wurden Fähigkeiten des synergistischen Komplexes ausgewertet, ein gefärbtes Radikal, nämlich Diphenylpicrylhydrazyl (DPPHº), zu seinem stabilen Leukoderivat zu stabilisieren.
2) Test gegen Hydroxyl-Radikale (OHº) nach der Fenton-Reaktion: bei diesen Tests wurden die Fähigkeiten, die durch Eisen mit H&sub2;O&sub2; gebildeten OHº einzufangen, ausgewertet und mittels Salicylsäure (Farbreaktion) oder Deoxyribose (bei der Deoxyribose handelt es sich um eine essentielle Verbindung der DNA, ihre Oxidationsprodukte aufgrund von OHº werden mit Thiobarbitursäure nachgewiesen) nachgewiesen. Außerdem wird ein Versuch ohne EDTA durchgeführt, um die Fähigkeiten, Eisen einzufangen (Asiderosewirkung) zu bestimmen.
3) Tests gegen. Superoxidanionen (O&sub2;- ): O&sub2;- wird während Oxidationsstreßsituationen durch Induktion der Xanthinoxidase produziert, die die Coenzyme NAD(P) und Hypoxanthin im Überschuß durch Einstellen des Energiestoffwechsels in den Geweben abbauen wird (O&sub2;- dismutiert spontan oder in der Gegenwart von Superoxiddismutase zu H&sub2;O&sub2;).
Diese biochemischen Tests werden dadurch durchgeführt, daß man Hypoxanthin und Xanthinoxidase mischt und die, O&sub2;- mittels Luminal nachweist oder die O&sub2;- und H&sub2;O&sub2; mittels Luminol + Mikroperoxydase nachweist.
Die Ergebnisse (Tabelle unten) zeigten, daß der erfindungsgemäße synergistische Wirkkomplex ein breites Wirkungsspektrum gegen Radikale aufwies, das sowohl die anfänglichen radikalischen Formen (DPPHº) als auch die induzierten reaktionfähigen Formen von Sauerstoff (OHº, OH&sub2;- und H&sub2;O&sub2;) sowie eine durch Fenton-Reaktion an Desoxyribose ohne EDTA (HK50 = 0,23%) nachgewiesene Asiderosewirkung gut abdeckte (HK50 = Produktkonzentration, die die Intensität der Enzymreaktion um 50% verringert; w/v = Gewicht/Volumen).
Tests HK50 (in % w/v)
Chemische Tests:
DPPHº HK50 = 0,36%
Fenton-Reaktion: Salicylsäure HK50 = 0,12%
Desoxyribose mit EDTA HK50 = 0,14%
ohne EDTA HK50 = 0,23%
Biochemische Tests:
Luminol-Methode HK50 = 0,04%
Luminol + Mikroperoxydase- Methode HK50 = 0,70%

C) Entzündungshemmende Lichtschutzwirkung auf Zellen gegenüber UV-B (in-vitro-Test)

UV-B-Strahlen lösen einen entzündlichen Prozeß aus (Erythem, Oedem), und zwar dadurch, daß sie ein Enzym, nämlich Phospholipase A2, die Arachidonsäure (eine ungesättigte Fettsäure) aus biologischen Membranen freisetzt, aktivieren.
Arachidonsäure ist ein Vorläufer von entzündungsfördernden Stoffen wie Prostaglandinen und Leucotrienen.
Prostaglandine (auch PGE2) werden durch Einwirkung der Cyclooxygenasen gebildet und anschließend aus der Zelle sezerniert; sie wirken durch spezifische Rezeptoren (Oedem, Erythem, Immunsuppression).
Leucotriene werden durch Lipoxygenasen gebildet und wirken (wie auch Prostaglandine) auf spezifische Rezeptoren. So zieht das Leucotrien LTB4 vielkörnige Neutrophile an und aktiviert diese, und diese werden Radikale und Proteasen, die das Gewebe zerstören, freisetzen.
Die Lipoxygenaseaktivität führt auch zu Superoxidanionen, die durch die Prostaglandine undLeucotriene induzierten Oxidationsstreß noch verstärken.
Die anti-PGE2-Wirkung des erfindungsgemäßen synergistischen Wirkkomplexes wurde anhand einer konfluenten in-vitro-Kultur von menschlichen Keratinocyten ausgewertet.
Das Wachstumsmedium wird durch eine mit Glucose versetzte Kochsalzlösung (die den synergistischen Komplex in unterschiedlichen Konzentrationen enthält) ersetzt, und anschließend werden die Kulturen bestrahlt. (30 mJ/cm²; W-B-Leuchtstoffröhren) und nochmals über Nacht bei 37ºC mit 5% CO&sub2; inkubiert.
Die Zellzahl wurde nach Trypsinbehandlung mit einem Partikelzähler quantitativ bestimmt. Im Mediumüberstand wurde der PGE2-Spiegel mit einem ELISA-Test ausgewertet, während der LDH (Lactatdehydrogenase)-Spiegel über eine Enzymreaktion quantitativ gemessen wurde (OD bei 340 nm).
Die Lipoxygenasehemmung wurde im Reagenzplas durch quantitative Auswertung der Superoxidanionen (mittels Lumineszenz), die von diesem Enzym in Gegenwart von ungesättigten Fettsäuren produziert werden, bestimmt.
Der erfindungsgemäße synergistische Komplex (0,2% w/v) (siehe Fig. 2, 3 und 4) verringerte den Spiegel an nach UV-B-Bestrahlung freigesetztem PGE2 und LDH stark (-71% bzw. -41%).
Der synergistische Komplex weist eine IC50 von 0,27% (w/v) gegenüber lipoxygenaseinduzierten Superoxidanionen auf.
Im Vergleich zu Aspirin ist der Anti-Streß- Komplex gegenüber PGE2 weniger wirksam, jedoch gegenüber LDH (die die Membranschädigung angibt) und gegenüber Lipoxygenase stärker wirksam.
Der erfindungsggemäße synergistische Komplex weist nach Bestrahlung mit UV-R eine entzündungshemmende Wirkung auf, und zwar nicht nur dadurch, daß er die Cyclooxygenase hemmt und die biologischen Membranen der Zellen gegen Licht schützt, sondern auch dadurch, daß er die durch die auf die ungesättigten Fettsäuren ausgeübte Lipoxygenaseaktivität produzierten, Superoxidanionen fängt.

D) Lichtschutzwirkung auf Zellen gegenüber UV-A und Stimulationswirkung auf die Glutathion-Autosynthese (in-vitro-Test an menschlichen MRC5-Fibroblasten).

MRC5-Fibroblasten wurden bis zur Konfluenz des Zellrasens im Wachstumsmedium kultiviert.
Das Wachstumsmedium wurde anschließend durch ein Standardmedium, das den zu testenden synergistischen Komplex in unterschiedlichen Dosierungen enthielt, ersetzt.
Nach 48stündiger Inkubation bei 37ºC wurden die unterschiedlichen Medien durch eine Kochsalzlösung ersetzt, und die MRC5 wurden anschließend (mit UV-A- Röhren) bestrahlt.
Nach Ende der Bestrahlung wurde die Kochsalzlösung entfernt, um den Malonaldialdehyd (MDA) mittels Reaktion mit Thiobarbitursäure unter heißen Bedingungen (Fluoreszenz bei 560 nm) quantitativ zu bestimmen. Die MRC5-Zellen wurden zur quantitativen Bestimmung der Proteine (Bradford-Methode) und des Glutathions (GSH) mittels einer Fluoreszenzsonde gewonnen (MDA ist ein Abbauprodukt der ungesättigten Lipide, aus denen die biologischen Membranen bestehen, und führt zu Brückenbildungen, die die Enzyme hemmen und Lipofuscine (Altersflecken) bilden und möglicherweise mutagen ist).
Die Ergebnisse (siehe Fig. 5 und 6) zeigen, daß UV-A (15 J/cm²) die Sekretion von MDA (10x) stark induzierten und den GSH-Spiegel in den MRC5 um ungefähr 25% reduzierten.
Der erfindungsgemäße synergistische Wirkkomplex reduzierte die durch UV-A induzierte Lipoperoxidation um -32% bei einer Dosis von 0,2% (w/v).
Der synergistische Komplex hemmte die Zerstörung von GSH durch UV-A um +41% bei einer Dosis von 0,2% (w/v).
Der synergistische Komplex verringerte daher die durch UV-A induzierte Lipoperoxidation von Fibroblasten, insbesondere durch Erhöhung des Gehalts an reduziertem Glutathion.

E) Wirkung gegen Streßproteine und gegen Disulfidbrücken (ex-vivo-Test an der menschlichen Haut).

Ziel dieser letzten Untersuchung war die Prüfung der Sonnenschutzwirksamkeit des synergistischen Wirkkomplexes in einer Konzentration von 3% in Kombination mit einer Mischung aus UV-A- + UV-B-Filtern im Vergleich mit nur diesen Sonnenschutzfiltern bei Bestrahlung der Haut ex vivo mit einem Sonnensimulationsgerät.
Um die Sonnenschutzwirkung des Anti-Streß- Komplexes zu bestimmen, wurde eine Bestrahlung von menschlichen Häuten in organtypische Kultur (ex vivo) mit oder ohne topischer Behandlung mit den zu testenden Sonnenprodukten, deren Zusammensetzung in den obengenannten Beispielen 3 und 4 genau angegeben wurde, durchgeführt.
Die Wirkung der Produkte wurde anschließend immunhistochemisch sowie durch Imaging anhand von zwei Sonnenstreß-Markern ausgewertet, nämlich der Induktion des Streßproteins HSP27 und dem Auftreten von Disulfidbrücken (S-S) in den lebenden Schichten der Epidermis.
Aufgrund der Versuchsergebnisse (siehe Fig. 7 und 8) läßt sich folgendes feststellen:
- in der Epidermis der normalen, nicht unter Streß stehenden menschlichen Haut wird das Streßprotein HSP27 nicht exprimiert und Disulfidbrücken liegen nur beim Stratum corneum vor,
- bei den drei untersuchten Bestrahlungen wurde eine stark erhöhte Induktion des Streßproteins beobachtet,
- bei den lebenden Schichten der Epidermis wurde bei den beiden stärksten Bestrahlungen das Auftreten einer Vielzahl an Disulfidbrücken beobachtet,
- die Anwendung von Cremen mit Sonnenschutzfiltern vor der Bestrahlung beschränkt in den meisten Fällen teilweise die Induktion des Streßproteins und in allen Fällen das Auftreten von S- S-Brücken,
- im Gegensatz dazu wird durch Auftragen der den synergistischen Wirkkomplex enthaltenden Creme vor der Bestrahlung die Expression des Streßproteins HSP27 und das Auftreten von S-S-Brücken- in den lebenden Schichten der menschlichen Epidermis praktisch völlig verhindert.
Die Erfindung ist natürlich nicht auf die beschriebene und in den beigelegten Zeichnungen dargestellte Ausführungsform beschränkt. Modifikationen sind nach wie vor möglich, insbesondere bezüglich der Zusammensetzung unterschiedlicher Elemente oder dadurch, daß Techniken durch entsprechende Techniken ersetzt werden, ohne den Schutzbereich der Erfindung zu verlassen.

Claims

1. Synergistischer Komplex, insbesondere zur Einarbeitung in ein Kosmetik- oder Arzneimittelpräparat zur topischen Verwendung für die Haut und/oder die Epithelanhanggebilde, dadurch gekennzeichnet, daß er mindestens einen peptidhaltigen. Extrakt von Pisum sativum-Körnern, einen tannin- und/oder cumarinderivathaltigen Pflanzenextrakt der Familie der Meliaceen und gegebenenfalls mindestens eine Aminosäure in Form des komplexen Salzes bzw. komplexer Salze enthält.

2. Synergistischer Komplex nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß er 0,05 Gew.-% bis 40 Gew.-%, vorzugsweise 1 Gew.-% bis 40 Gew.-% peptidhaltigen Extrakt von Pisum sativum in entwässerter oder nicht entwässerter Form enthält.

3. Synergistischer Komplex nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß er 0,005 Gew.-% bis 10 Gew.-%, vorzugsweise 0,1 Gew.-% bis 10 Gew.-%, tannin- und/oder cumarinderivathaltigen Pflanzenextrakt der Familie der Meliaceen enthält.

4. Synergistischer Komplex nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß der Pflanzenextrakt der Familie der Meliaceen aus einem entwässerten wäßrigen, alkoholischen oder wäßrig-alkoholischen Extrakt von Khaya senegalensis, vorzugsweise einem Rindenextrakt dieser Pflanze, besteht.

5. Synergistischer Komplex nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß die vorliegende(n) Aminosäure(n) zur Gruppe Histidin, Arginin und Tyrosin gehört bzw. gehören.

6. Synergistischer Komplex nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß die Aminosäuren in Form von Bernsteinsäure- und/oder Asparaginsäuresalzen vorliegen.

7. Synergistischer Komplex nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß die Aminosäuren in reiner Form, in Form von Bernsteinsäure- und/oder. Asparaginsäuresalzen und/oder in Form von solchen Mischungen (Aminosäuresalz oder Aminosäure/Bernsteinsäure oder Asparaginsäure) vorliegen und gemeinsam 0,05 Gew.-% bis 40 Gew.-%, vorzugsweise 0,1 Gew.-% bis 40 Gew.-% des synergistischen Wirkkomplexes ausmachen.

8. Synergistischer Komplex nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß er außerdem 0,05 Gew.-% bis 5 Gew.-% eines wasserlöslichen Extrakts von Hefezellen der Art Saccharomyces cerevisiae enthält.

9. Synergistischer Komplex nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß er außerdem 0,05 Gew.-% bis 10 Gew.-% an Osen, Polyosiden und/oder Polysacchariden, insbesondere Saccharose und/oder Glycogen, enthält.

10. Synergistischer Komplex nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß er außerdem 0,01 Gew.-% bis 10 Gew.-% B-Vitamin(e) wie inbesondere Pyridoxin und/oder Niacinamid, enthält.

11. Verwendung eines synergistischen Komplexes nach einem der Ansprüche 1 bis 10 als Wirkstoff zur Herstellung eines Kosmetikprodukts bzw. einer Kosmetikzusammensetzung und/oder eines Arzneimittels bzw. einer Arzneimittelzusammensetzung zur topischen Verwendung für die Haut und/oder die Epithelgebilde.

12. Verwendung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß der synergistische Komplex als Wirkstoff gegen Hautstreß verwendet wird, was anhand einer Verringerung der Expression von unter der Bezeichnung HSP, insbesondere HSP27, bekannten Streßproteinen belegt wird.

13. Verwendung nach Anspruch 11 oder 12, dadurch gekennzeichnet, daß der synergistische Wirkkomplex als Stimulans für die Autosynthese von reduziertem Glutathion durch die Haut- oder Kapillarzellen verwendet wird.

14. Verwendung nach einem der Ansprüche 11 bis 13, dadurch gekennzeichnet, daß der synergistische Komplex als Mittel gegen das Auftreten von durch akute Sonnenstrahlung induzierten oder aufgrund der chronischen lichtinduzierten Hautalterung entstandenen Disulfidbrücken verwendet wird.

15. Verwendung nach einem der Ansprüche 11 bis 14, dadurch gekennzeichnet, daß der synergistische Wirkkomplex in ein Sonnenschutzmittel oder in ein Tagesprodukt für die Hautpflege mit einer vorbeugenden und/oder wiederaufbauenden Wirkung gegen Alterungserscheinungen eingearbeitet wird.

16. Kosmetikprodukt für die Haut und/oder die Epithelanhanggebilde mit insbesondere einer molekularen Lichtschutzwirkung auf die Zellen, dadurch gekennzeichnet, daß es 0,01 Gew.-% bis 90 Gew.-% eines erfindungsgemäßen synergistischen Komplexes nach einem der Ansprüche 1 bis 10 enthält.

17. Arzneimittel für die Haut und/oder die Epithelanhanggebilde mit insbesondere einer molekularen Lichtschutzwirkung auf die Zellen, dadurch gekennzeichnet, daß es 0,01 Gew.-% bis 90 Gew.-% eines erfindungsgemäßen synergistischen Komplexes nach einem der Ansprüche 1 bis 10 enthält.