DE69803710T2

DE69803710T2 - Langwirkende, injezierbare, parasitizide Zubereitung und Verfahren zu ihrer Herstellung

Info

Publication number: DE69803710T2
Application number: DE69803710T
Authority: DE
Inventors: Jorge Carlos Lamberti
Original assignee: Biogenesis SA
Current assignee: Biogenesis SA
Priority date: 1997-03-21
Filing date: 1998-03-17
Publication date: 2002-11-21
Anticipated expiration: 2018-03-18
Also published as: AU5936798A; ES2173545T3; ATE212849T1; ZA981925B; EP0867186B1; NZ330005A; EP0867186A1; AU726556B2; US6054140A; DE69803710D1

Description

Eine Aufgabe dieser Erfindung ist eine langwirkende injizierbare parasitentötende Zusammensetzung und das Verfahren zu deren Herstellung.
Ivermectin ist ein semisynthetisches Derivat, hergestellt durch ein Gemisch aus zwei Komponenten, nämlich 22,23-Dihydroavermectin B1a und 22,23- Dihydroavermectin B1b. Das Ausgangs-Avermectin B&sub1; ist ein makrozyklisches Lacton, erhalten aus einer Kulturfermentationsbrühe von Streptomyces avermectilis, und die selektive Hydrierung der bestehenden Doppelbindungen an der Position C22-C23 der Avermectin-B&sub1;-Makrolid-Strukturen führt zur Synthese von Ivermectin, wie es in der Literatur beschrieben ist.
Ivermectin, ein makrozyklisches Lacton, deren entwickelte Formel
ist, wobei R2 Isopropyl (20%) oder sek.-Butyl (80%) ist, ist ein Breitband- Antiparasitikum nicht nur gegen interne Parasiten sondern auch gegen externe Parasiten und sogar gegen Endoparasiten-Stadien einiger Arthropoden. Es wirkt gegen Nematoden-Gattungen, welche Haustiere und Vieh befallen, wie die Superfamilien von Trichostrongyloidea, Strongyloidea, Metastrongyloidea, Rhabditoidea, Ascaridoidea, Oxyuroidea, Spiruroidea, Filaroidea und Trichurioidea. Ivermectin wird aufgrund seiner hohen Fettlöslichkeit, hohen Körperdurchdringungsfähigkeit und durchschnittlichen Langzeitlebensdauer weithin als Anthelminthikum verwendet.
Der normale Weg zur Verabreichung von Antiparasitka an Großtiere erfolgt oral. Die Patente EP 473223, EP 537000, EP 537998 und US 4 440 740 beschreiben feste Ivermectin-Formulierungen.
Hochwirksame injizierbare Formulierungen sind ebenfalls beschrieben und ihre praktische Anwendung steuerte das Aussehen einer Reihe von Präparaten, wie diejenigen, die in den nachstehenden Patenten, welche flüssige Verabreichungsformen betreffen, beschrieben sind: EP 146414, EP 413538, EP 535734, EP 538750 und US 4 389 397.
Das Patent EP 146414 schützt bestimmte nichtwässrige flüssige Formulierungen, die Ivermectin enthalten, und genauer, solche, die Ivermectin zu 1% in einem Vehikel enthalten, das durch eine Mischung von 40% Formal- Glycerin - 60% Propylenglycol erhalten wird.
Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist eine neue injizierbare langwirkende parasitentötende Zusammensetzung, die Ivermectin enthält und vergleichbar bessere pharmakokinetische Eigenschaften als andere Formulierungen bietet.
Diese neue langwirkende injizierbare parasitentötende Zusammensetzung bietet hinsichtlich der totalen Sicherheitsbedingungen zudem akzeptable Rückstände für den Verzehr des Fleischs durch den Menschen. Die Europäische Union hat die maximal zulässigen Rückstandsmengen für Ivermectin in Rindern auf 100 ug/kg in Leber und 40 ug/kg in Fett angesetzt.
Entsprechend ist eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ein Verfahren zur Herstellung der neuen injizierbaren langwirkenden parasitentötenden Zusammensetzung.
Die erfindungsgemäße Aufgabe ist daher eine injizierbare, langwirkende parasitentötende Zusammensetzung, umfassend hinreichend Ivermectin, dass eine Endkonzentration von etwa 1% (Gew./Gew.) erzielt wird, Benzilalkohol in einer Konzentration von 1,5 bis 2% (Gew./Gew.), Polyvinylpyrrolidon in einer Konzentration von 7 bis 11% (Gew./Gew.), N-Methyl-2-pyrrolidon in einem Anteil von 40-65 (Vol./Gew.) der Gesamtformulierung und Glycerin bis zum Erreichen von 100% Endgewicht.
Neben diesen Komponenten kann die Formulierung Stabilisatoren, Antioxidantien, wie Thiodipropionsäure, Acetylcystein, Cystein, Natriumdisulfit, EDTA, Natrium-EDTA, Natriumcitrat, N-Propylgallat, Butylhydroxytoluol oder eine Mischung von mehr als einem dieser Produkte in einem Anteil von 0,01 bis 2% (Gew./Gew.). Die Formulierung kann gegebenenfalls ebenfalls einen Farbstoff, wie Betacarotin, in einem Anteil von 0,005-0,05% (Gew./Gew.) enthalten.
Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist das Verfahren zur Herstellung einer injizierbaren langwirkenden parasitentötenden Zusammensetzung, umfassend das Mischen von genügend Ivermectin, dass eine Endkonzentration von etwa 1% (Gew./Gew.) erzielt wird, mit Benzilalkohol in einer Konzentration von 1,5 bis 2% (Gew./Gew.) und Polyvinylpyrrolidon in einer Konzentration von 7 bis 11%, sowie die anschließende Zugabe der Mischung zu N-Methyl-2-pyrrolidon, das in einem Anteil von 40-65 (Vol./Gew.) der Formulierung zugegen ist. Danach wird nötigenfalls das in Wasser gelöste Antioxidans oder Antioxidantiengemisch zugegeben. Das Gemisch wird bis zur vollständigen Auflösung geschüttelt, und Glycerin wird bis zum Erreichen von 100% Endgewicht zugegeben.
Das in der erfindungsgemäßen Zusammensetzung verwendete Polyvinylpyrrolidon ist Kollidon K® 17 PF mit einem K16-18-Wert und einer relativen Viskosität der Lösung in destilliertem Wasser bei 5% von 1250-1370.
Die Aufgabe der nachstehenden Beispiele ist die Veranschaulichung der Erfindung, so dass man diese besser versteht, ohne dass man versucht, Einschränkungen einzufügen.

Beispiel 1: Herstellung der Zusammensetzung

1,000 g Ivermectin, 8,977 g Kollidon K 17® PF und 1,795 Benzilalkohol in 53,860 ml N-Methyl-2-pyrrolidon (Pharmasolve) wurden in einem Edelstahlbehälter gelöst. Später wurden 0,03 g N-Propylgallat dazu gegeben. Das Gemisch wurde solange geschüttelt, bis es vollständig gelöst war. Dies wurde mit Glycerin auf 100,000 g eingestellt. Die resultierende Lösung wurde vorfiltriert und anschließend in einen Nylon 66- oder Teflon-Endfilter mit 0,45 Mikron Porendurchmesser vorfiltriert.

Beispiel 2: Pharmakokinetisches Verhalten von 1% (Gew./Gew.) Ivermectin in N-Methyl-2-pyrrolidon und Polyvinylpyrrolidon-Zusammensetzung, hergestellt gemäß Beispiel 1

6 kastrierte männliche gesunde argentinische Holstein-Tiere wurden getrennt. Ihr Gewicht lag zwischen 150-200 kg. Die Tiere wurden 20 Tage vor dem Testbeginn mit einem Benzolimidazol-Produkt entwurmt. Die in Beispiel 1 beschriebene Zusammensetzung wurde den Tieren subkutan in einer Rate von 1 ml pro 50 kg Körpergewicht subkutan verabreicht. Die Blutproben wurden vor und nach der Verabreichung gemäß dem nachstehenden Schema in heparinisierten Spritzen entnommen: und zwar nach 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 15, 20, 25 und 30 Tagen. Das Plasma wurde durch Zentrifugation getrennt und bis zum Test aufbewahrt. Der Versuch erfolgte mit Hochdruckflüssigkeitschromatographie mit Ultraviolettnachweis. Die Proben wurden daher durch Flüssigkeits-Feststoff-Extraktion in C18-Patronen behandelt. Nach diesem Verfahren wurden sie in den Chromatographen injiziert. Der Prozentsatz an Ivermectin-Extraktion betrug 80%. Die Quantifizierungsmenge des Verfahrens betrug 0,5 ng/ml. Die Wiederholbarkeit hatte für eine Konzentration von 5 ng/ml eine Variation von weniger als 2%. Die pharmakokinetische Analyse wurde mit einem linearen Regressionsprogramm namens Strip (Brown und Manno, 1978) durchgeführt. Die pharmakokinetischen Parameter wurden durch klassische Verfahren erhalten.
Die Ivermectin-Konzentrationen gegen die Zeit sind in der Tabelle 1 gezeigt. Das Ivermectin-Plasmaprofil lässt ich aus Fig. 1 ersehen, in der die Konzentration gegen die Zeit aufgetragen ist. Die Fläche unter der Kurve (AUC), die in diesem Fall 300 beträgt, zeigt, welcher Prozentsatz Dosierung effizient das Plasma erreicht und zur pharmakologischen Wirkung beiträgt. Die pharmakokinetischen Parameter sind in der Tabelle II gezeigt.
Die erhaltenen Ergebnisse zeigen höhere Plasma-Peaks und Plasma- Konzentrationen, die länger anhalten als die vorher genannten klassischen Ivermectin-Präparate, wie diejenigen, die in Propylenglycolglycerin hergestellt werden. In diesem Fall wurden einen durchschnittliche Maximalkonzentration (Cmax) von 30 ng/ml (Tabelle 1, Tag 3) und eine AUC von 300 (Fig. 1) gefunden. Die deutlichste Eigenschaft bezüglich der bekannten Formulierungen findet sich hinsichtlich der Eliminierungshalbwertszeit (T1/2 β in Tabelle II). Diese betrug gegenüber den bekannten Formulierungen, die Eliminierungshalbwertszeiten von etwa 5-6 Tagen ergaben, erfahrungsgemäß fast 9 Tage im Durchschnitt. Entsprechend ergaben Konzentrationen an Tag 30 in diesem Experiment einen Durchschnitt von 2,81 ng/ml, wohingegen dieser für die erwähnten klassischen Zusammensetzungen 1 ng/ml betrug. Tabelle I: Tabelle II:

Beispiel 3: Bestimmung der Ivermectin-Rückstände nach der Verabreichung einer 1% Gew./Gew. Ivermectin-Zusammensetzung in N- Methyl-2-pyrrolidon und Polyvinylpyrrolidon gemäß Beispiel 1.

21 Kälber zwischen 100 bis 150 kg wurden getrennt. Die in Beispiel 1 identifizierte Zusammensetzung wurde ihnen subkutan verabreicht, und zwar 1 ml je 50 kg. Vom Zeitpunkt 0 (Verabreichung) wurden 3 Tiere wöchentlich von der dritten bis zur neunten Woche getötet.
Es wurden Proben von Plasma, Leber, Fett, Muskel, dem Muskel mit dem Injektionsbereich sowie Nieren entnommen.
5 g-Proben wurden im Ultra-Turrax 2 min mit 15 ml Acetonitril homogenisiert. Das Homogenat wurde 5 min bei 300 U/min zentrifugiert. 15 ml Überstand wurde in Gefäße überführt und mit Wasser gelöst, bis eine 70%ige wässrige Lösung erhalten wurde. Es wurden 50 ul Triethylamin zugeführt.
Elutions-Patronen mit C8-Bindungen wurden mit Acetonitril und Acetonitril : Wasser (30 : 70) aktiviert. Die Gesamtprobe wurde durch Patrone C8 geleitet. Die Patrone wurde mit 5 ml Acetonitril eluiert, und das Eluat wurde unter Stickstoff eingeengt. Der Rückstand wurde in 1 ml Methanol resuspendiert. Proportional wurden 500 ul in ein silanisiertes Röhrchen überführt und eingeengt. 100 ul Derivatisierungsmittel (1-Methylimidazol-Essigsäureanhydrid- Dimethylformamid) (2 : 6 : 9) wurden dazu gegeben, und das Röhrchen wurde 1 Std. in einem Ofen bei 95ºC inkubiert. Nach dem Kühlen wurden 1 ml Chloroform dazu gegeben, es wurde mit dem Vortex-Gerät aufgewirbelt und in Sep-Pack-Patronen überführt. Die Patrone wurde mit 9 ml Chloroform eluiert, eingedampft und in 500 ml Methanol resuspendiert und in das Hochdrucksystem der Flüssigkeitschromatographie unter fluorometrischen Nachweis (HPLC) injiziert. Die Chromatographiebedingungen waren: Mobile Phase: Acetonitril : Wasser (97 : 3); Fluss: 1 ml/min; Anregung: 364 mm.
Die Ergebnisse sind in ppb als Mittelwerte der beobachteten Konzentrationen je Tier-Trio in Tabelle III angegeben.
Gemäß den von der Europäischen Union angesetzten Rückstandsgrenzwerten zeigten die in dieser Studie verwendeten Versuchstiere einen Konzentrationsdurchschnitt im Zielgewebe innerhalb des für den Verbrauch verträglich Bereichs, und zwar ab Tag 41 nach der Verabreichung. Tabelle III:

Beispiel 4: Wirksamkeitsstudie der neuen injizierbaren 1%igen Ivermectin- Formulierung, erhalten gemäß Beispiel 1, gegen die gemeine Rinderzecke Boophilus microplus (Kan.) in Stallfärsen mit experimentellem Befall.

30 junge Absetzertiere im Alter von 9-12 Monaten einer Hereford-Färsen- Herde wurden gewogen, markiert, und 1¹/&sub2; Monate für einen Domestizierungs- und Fütterungsaufenthalt in einem einzelnen großen Halbschattengehege gehalten. Während der letzten drei Wochen wurden sie mit 20000 Boophilus microplus-Larven pro Woche (etwa 6666 Larven in 3 wöchentlichen Beimpfungen) durch Verteilen und hintere Lumbarextension experimentell verseucht.
Die 20 Tiere mit mehr Parasiten wurden am Tag 0 der Behandlung ausgewählt und alternativ zwei Gruppen zugeteilt, und zwar der behandelten Gruppe (TG) und der Kontrollgruppe (CG), wobei TG zufallsgemäß bestimmt wurde. Die Tiere wurden in einzelne überdachte Ställe überführt und mit Kopfzaum und Seil an einem Ring befestigt, so dass ein Aufbäumen verhindert wurde. Jeder Stall war mit einem sorgfältig befestigten Boden zum Auffangen der ausgeschiedenen Teleoginas (weibliche adulte Zecken, welche als Larve mit dem Futter in den Körper aufgenommen wurden) versehen. Den Tieren der behandelten Gruppe wurden subkutane Dosen von 1 ml/50 kg Lebendgewicht der erfindungsgemäßen Zusammensetzung verabreicht.
Das Auffangen, Zählen und Wiegen der ausgeschiedenen Teleoginas erfolgte täglich. Diese wurden in Petrischalen untergebracht und in Öfen bei 28ºC und 80% REH (relative Feuchtigkeit in der Umgebung) überführt. Am Tag 10 nach dem Verwerfen der toten Proben wurde der Prozentsatz der Überlebenden erfasst. Am Tag 18 nach dem Beginn der Brut wurde das Gesamtgewicht der Brut jeder Schale erfasst, und nach Überführen von 1 g der Gesamtmenge in ein Teströhrchen konnte der Prozentsatz der Geschlüpften festgestellt werden. Sämtliche mit diesen Verfahren erhaltenen Daten wurden in Formeln eingesetzt, die eine Definition der Effizienz des Produktes ermöglichten. Die angewendeten Formeln beruhen auf den Drummond-Originalen, modifiziert von Weidhass et al., (1989) am CSIRO (Australien) und von Rodriguez et al., (1990) am "Centro de Ingeneria Genetica y Biotecnologica" (CIGB) in La Habana (Kuba). Diese Formeln sind wie folgt:

a) Abtötungswirkung der Teleoginas (Tg)

1. Prozentuale Reduktion der Teleoginas
TRC (Teleoginas-Reduktionskoeffizient) = 100 · (1-%TR)

b) Wirkung gegenüber ausgeschiedenen Teleoginas

2. Prozentsatz Mengenreduktion
wobei
( ) Tg-Gewicht = Tg-Gesamtgewicht des inkubierten Aliquots/Gesamtgewicht der Tg-Überlebenden
RRC (Mengenreduktionskoeffizient) = 100 · (1-%RR)
3. Prozentsatz der Überlebenden-Reduktion (Tg-Mortalität)
SRC (Überlebens-Reduktionskoeffizient) = 100 · (1-%SR)
4. Prozentsatz der Brutreduktion
wobei
( ) Tg-Brutgewicht = Tg-Gesamtbrutgewicht der überimpften Tg/Gesamtmenge der Tg-Überlebenden
HRC (Brutreduktionskoeffizient) = 100 · (1-%HR)
5. Prozentsatz der Fertilitätsreduktion (des Schlüpfens)
wobei
( ) Larven-Gewicht = Gesamt-Larvengewicht/Menge der inkubierten Eier in Gramm
FRC (Fertilitätsreduktionskoeffizient) = 100 · (1-%FR)
6. Prozentsatz der Effizienz
%EP = 100 · (1-TRC · HRC · FRC)
Die analysierten Parameter und beide Gruppen (behandelt und Kontrolle) zwischen den Tagen 0 und 23 inkl. ergaben die nachstehenden Ergebnisse:
Prozentsatz der Teleoginas-Reduktion (Abtötung): 92,92%
Prozentsatz der Mengenreduktion: 23,60%
Prozentsatz der Überlebenden-Reduktion: 27,64%
Prozentsatz der Brutreduktion: 59,29%
Prozentsatz der Fertilitätsreduktion (Schlüpfen): 51,97%
Prozentsatz der Effizienz (23 Tage nach der Behandlung): 98,62%
Die Studie zeigt, dass die erfindungsgemäße Formulierung eine hohe Abtötungsrate und eine hohe Teleoginas-Sterblichkeitsrate bietet. Während der ersten 24 Std. nach der Behandlung wies TG nur 181 Proben auf, wohingegen CG (Kontrolle) 270 aufwies (67,4% Reduktion). Dies zeigt eine hohe Mortalität gegenüber dem nicht ausgeschiedenen Tier. In den nachfolgenden 72 Std. wurden 65 ausgeschiedene Teleoginas (durchschnittlich 21,6 pro Tag) und 781 von der CG (täglicher Durchschnitt 260) erhalten, und zwar wahrscheinlich aufgrund unreifer Elemente, die ihren Zyklus aufgrund der Behandlung nicht beenden konnten. Ab Tag 5 nach der Behandlung und während des restlichen Versuchs wurden bei TG keine Teleoginas aufgefangen, wohingegen CG dieses Adultstadium weiter bis zum Tag 23 ausschied, und zwar insgesamt 3516 (durchschnittlich 152,8 am Tag).

Beispiel 5: Wirksamkeitsstudie der neuen injizierbaren 1% Ivermectin- Formulierung, erhalten gemäß Beispiel 1 in einzelnen subkutanen Dosen gegenüber Schafsräude (Psoroptes ovis).

Es wurden 65 Correidale und gekreuzte Schafe zwischen 14 und 87 kg gehalten, die jeweils eine natürliche aktive Räudeninfektion aufwiesen, welche in ausgedehnten Verletzungen über etwa 30% der Körperfläche verteilt waren. Am Tag 0 wurden 3 Gruppen gebildet: Gruppe I (grüne Markierung) erhielt 2 Dosen der gemäß Beispiel 1 erhaltenen Zusammensetzung, und zwar mit einem 7-Tage- Intervall (200 ug/kg), was 0,5 ml/25 kg Lebendgewicht entsprach; Gruppe II (rote Markierung) erhielt Einzeldosen (300 ug/kg) entsprechend 1 ml/30 kg Lebendgewicht, wohingegen Gruppe III zur Kontrollierung der Unschädlichkeit mit 30% Überdosen beimpft wurde.
Jedes Schaf wurde gewogen und der Befall wurde in einer gesonderten Form erfasst, die speziell für diese Versuche entwickelt wurde, und nach dem Zuordnen in die Gruppe wurden sie nötigenfalls behandelt (wobei die Zuordnung der Gruppe und deren Behandlung zufällig erfolgt) und danach während der gesamten Studie in gesonderten Ställen untergebracht.
Die Gruppen I und II wurden am Tag 15 und 35 nach der Behandlung der zweiten oder einzigen Dosis behandlungsgemäß überprüft, wohingegen Gruppe III (Unschädlichkeit) 5 Tage untersucht wurde, um Nebensymptome zu überwachen. Am Tag 15 waren sämtliche Schafe (Gruppen I und II) frei von lebenden Acariden und verblieben so bis zum Tag 35. Die Heilung der Verletzungen zeigte sich an Tag 35 und war an Tag 35 vollständig. Es wurden bei keinem Schaf der drei Gruppen, einschließlich Gruppe III, die die Überdosen erhielt, Nebenreaktionen beobachtet.
Diese Ergebnisse ermöglichten die Bestimmung vergleichender Vorteile der langlebigen erfindungsgemäßen Formulierung. Formulierungen des Standes der Technik zeigten Wirksamkeit gegen Psoroptes ovis durch Anwendung von 200 ug/kg in zwei Dosen mit einem dazwischen liegenden Intervall von 7 bis 9 Tagen. Die Änderung des pharmakokinetischen Profils dieser neuen injizierbaren besonders langwirkenden Formulierung aus 1% Avermectin in N-Methyl-2- pyrrolidon und Polyvinylpyrrolidon ermöglichte die Eliminierung der Räude bei Schafen (Psoroptes ovis) mit einer einzigen subkutanen Injektion von 300 ug/kg.
Die Möglichkeit der Gabe einzelner Dosen für Schafsräude bietet eindeutige Vorteile, wie niedrigere Laborkosten und in Bezug auf das Produkt, die Zeiteinsparung bei der sanitären Betreuung von Herden.

Beispiel 6: Wirksamkeits-Untersuchung der neuen 1%igen injizierbaren Ivermectin-Formulierung, erhalten gemäß Beispiel 1, in einzelnen subkutanen Dosen gegen Melophagus ovinus (Linnaeus, 1785) beim Schaf.

Melophagus ovinus gehört zur Pupipara-Gruppe (Familie Hippoboscidae, Letreille 1769) (Soulsby, 1993). Diese echte Fliege ohne Flügel, die auch als "Falsche Zecke" bezeichnet wird, ist an das Parasitenleben angepasst. Sie kommt ausschließlich bei Schafen vor und ernährt sich im adulten Stadium von Blut. Sie saugt alle 12 Std. und beschädigt das Leder für die herstellende Industrie. 1985 wurden die Verluste in den USA auf 41 Millionen Dollar geschätzt.
Bezüglich der Behandlung wurden Aufgießformulierungen aus 2% Cyalothrin, 6% Cypermethrin und 1% Decamethrin bewertet, wobei man mit keinem dieser Produkte 10 Tage nach der Behandlung eine 100%ige Bekämpfung belegen konnte. Grundsätzlich sollte ein Melophaguizid-Produkt, das während oder unmittelbar nach der Schur aufgebracht wird, eine 95%ige oder größere Effizienz an Tag 14 (Bekämpfung der adulten Proben), eine 100%ige Effizienz nach 28 Tagen (Bekämpfung der aus den Puppen neu hervorgehenden Generation) zeigen, und diese Bekämpfung bis zum Tag 42 halten und es sollte die Qualität des Vlieses oder die Gesundheit des Tiers nicht beeinträchtigen. Immersionsprodukte, Dorsalguss, Besprühen und Besprenkeln (Merck Veterinary Manual, 1986) erfüllen diese Vorraussetzungen nicht. Klassische 1% Einzeldosen, injizierbare klassische Endoparasitizide können keine Minimalmengen der Medikamenten-Plasmakonzentration nach 4 Wochen aufrecht halten, damit die neue Generation oder ein Neubefall bekämpft wird. Mit einer herkömmlichen 1%igen injizierbaren Ivermectin-Formulierung (in Propylen-Glycerin) bedarf es des Einsatzes von 2 Injektionen mit einem 21-tägigen Zwischenraum zur Erzielung einer Säuberung (Tag 49) und eines Schutzes gegenüber Neubefall (42 Tage) von 100%.
Eine Arbeit, die die Bewertung der Effizienz der neuen injizierbaren langwirkenden 1%igen Ivermectin-Zusammensetzung in einer Einzeldosis von 300 ug/kg für die Bekämpfung von Melophagus ovinus ermöglichte, ist nachstehend beschrieben. Die Verwendung von bei der Schur aufgebrachten Einzeldosen ist ein positiver Beitrag für die zeitgleiche Bekämpfung von Melophagus ovinus und Schafsräude (Psoropfes ovis), wie in Beispiel 5 beschrieben.
40 nicht geschorene Lämmer und Merino-Hammel wurden ausgewählt. Ihr Befall wurde erfasst, und sie wurden zufallsgemäß 2 Gruppen zugeordnet (der behandelten Gruppe I, GI, und der Kontrollgruppe II, GII). Beide Gruppen wurden geschoren und an gesonderten Weidepfählen festgemacht. GI wurde mit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung (Beispiel 1) subkutan mit 1 ml/30 kg Lebendgewicht behandelt. Nach der Behandlung erfolgten Beobachtungen an Tag 14, 28 und 40.
Die Ergebnisse der Auszählung adulter Melophagen in Gruppe I (Behandelt) und Gruppe II (Kontrolle) ist in der nachstehenden Tabelle zusammengefasst.
(1) Gesamt-Parasiten. (2) Arithmetisches Mittel der Gesamtzahl adulter Fliegen in 20 Schafen der Gruppe; (3) Menge der Schafe mit Parasiten.
Die Parasitenmenge wurde im Wesentlichen an Tag +14 lediglich aufgrund der Schur verringert, die in der GII (Kontrolle) 80% der Gesamtzahl adulter Fliegen erreichte, wohingegen bei 11/20 Schafen keine Proben entdeckt wurde (55%). Die Möglichkeit der Behandlung direkt nach der Schur wurde erstens festgestellt, da ein Großteil des Befalls zusammen mit dem Vlies eliminiert wurde, und zwar Adulte und Puppen, und zweitens dass das im geschorenen Tier erzeugte Mikroklima für das Überleben der falschen Zecke weniger vorteilhaft war. In dieser unbehandelten Gruppe blieb der Parasitenbefall während der 40tägigen Untersuchung wenn auch in geringeren Mengen erhalten, und ermöglichte eine vergleichende Bewertung der Effizienz des injizierten Produktes. In der GI (behandelt) erzielte die Freisetzung der falschen Zecke an Tag +14 99,6% (p< 0,01), und die einzige Probe wurde in einem 76 kg Hammel entdeckt, der mit nur 2 ml unterdosiert war. Die Bekämpfung war an Tag 28 vollständig (100%) und blieb 40 Tage nach der Behandlung stabil. Dies bedeutete, dass der Ivermectin-Plasmaspiegel in der erfindungsgemäßen langwirkenden Zusammensetzung effizient auf die neue Fliegengeneration wirkte, als sie aus den L3 der Puppen schlüpfte.

Beispiel 7: Wirksamkeits-Untersuchung der neuen 1%igen injizierbaren Ivermectin-Formulierung, erhalten gemäß Beispiel 1, gegen Dermatobia hominis (Linnaeus, 1781) in Kälbern mit Befall in zwei gesonderten Feldstudien

Dermatobia hominis ist eine charakteristische Fliege Südamerikas, deren Larven schwere Schäden beim Rind verursachen. Der Tod von Kälbern aufgrund von Abszessen oder unterbrochenem Saugen, sekundärer Miasis, ein verzögerter und reduzierter Kälberpreis beim Absetzen, schwere Verzögerung bei der Mast, geringere Milchproduktion, Preisabwertung der Häute sind einige der Schäden, die von diesem Ektoparasiten verursacht werden, der in Argentinien und Paraguay als "Ura" bekannt ist.
Auf zwei geografisch weit auseinander liegenden Höfen ("San Cristobal" und "San Justo") wurden zwei zeitgleiche Feldstudien mit 1 bis 3 Monate alten Kälbern durchgeführt. Drei Gruppen mit jeweils 10 natürlich befallenen Kälbern wurden für jede Untersuchung gebildet. Die Kälber vom Hof "San Cristobal" gehörten zur Rasse Indic, die in "San Justo" zur Rasse Brangus und Braford.
Gruppe A wurde mit einer herkömmlichen 1%igen injizierbaren Ivermectinformulierung (Propylenglycol-Formal) in einer subkutanen Dosis von 200 ug/kg (1 ml/kg Lebendgewicht) behandelt. Gruppe B wurde mit der erfindungsgemäßen injizierbaren langwirkenden Zusammensetzung, erhalten gemäß Beispiel 1, d. h. 1% Ivermectin in N-Methyl-2-pyrrolidon und Polyvinylpyrrolidon, in einer 200 ug/kg-Dosis (1 ml/kg Lebendgewicht) behandelt. Gruppe C war die nicht behandelte Kontrollgruppe. Dies waren Kälber mit einer geringeren Menge Knoten mit lebendigen Larven. Die Ergebnisse sind nachstehend gezeigt. A) "San Cristobal"-Gehöft (Provinz Misiones) 1) Gesamtzahl der Knoten in den drei Gruppen (n = 10)
a = Werte mit verschiedenen Buchstaben in der Spalte sind signifikant verschieden (p< 0,05)
(*) behandelt an Tag 21 mit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung.
(311) Werte von GC an Tag 21, projiziert auf die Tage 28, 35 und 42. 2) Prozentsatz der Effizienz 3) Prozentsatz Schutz B) "San Justo"-Gehöft (Provinz Corrientes) 1) Gesamtzahl der Knoten in den drei Gruppen (n = 10)
a = Werte mit verschiedenen Buchstaben in der Spalte sind signifikant verschieden (p< 0,05)
(*) behandelt an Tag 21 mit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung.
(211) Werte von GC an Tag 28, projiziert auf die Tage 35 und 42. 2) Prozentsatz der Effizienz 3) Prozentsatz Schutz
Unter anderen Ergebnissen wurde ein schneller Tod der Larven in GB (100%) beobachtet, und zwar hauptsächlich zwischen 12 und 24 Std. und der Gesamt-Tod vor 48 Std. nach der Behandlung, ihre Austreibung (> 90%) erfolgte vor Tag 7; die Eliminierung der verbleibenden toten Larven in ihren Knoten war an Tag 14 beendet. Die Knoten von GB heilten verglichen mit GA (herkömmliches injizierbares 1% Ivermectin) in einem trockenen Prozess ohne infektiöses Material, wohingegen GA-Knoten in erheblicher Menge eiterten. Bei auf 56 und 63 Tage erweiterten Studien (die Studien wurden aufgrund von außerhalb der Untersuchung liegenden Gründen beendet) ließ der an Tag 42 mit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung erhaltene hohe Prozentsatz an Schutz auf die Erzielung einer angemessenen Bekämpfung 8 und 9 Wochen nach der Behandlung schließen.

Claims

1. Langwirkende injizierbare parasitizide Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, daß sie Ivermectin in einer 1%-igen (GIG) Konzentration, Benzilalkohol in einer Konzentration von 1,5-2% (GIG), Polyvinylpyrrolidon in einer Konzentration von 7-11% (G/G), N-methyl-2-pyrrolidon in einem Anteil zwischen 40-65% (V/G) der Gesamtheit der Zubereitung, Hilfsmittel und Glyzerin bis zum Erreichen von 100% Endgewicht umfaßt.

2. Parasitizide Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Hilfsmittel Antioxidantien/Stabilisatoren sind.

3. Parasitizide Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Antioxidantien/Stabilisatoren aus Thiodipropionsäure, Acetylcystein, Cystein, Natriumdisulfit, EDTA, Natrium-EDTA, Natriumcitrat, N-propylgallat, Butylhydroxytoluol ausgewählt sind.

4. Verfahren zur Herstellung einer injizierbaren parasitiziden Ivermectin- Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, daß es ein Mischen von ausreichend Ivermectin zur Erzielung einer Endkonzentration von 1% (GIG) mit Benzilalkohol in einer Konzentration von 1,5-2% (G/G) und Polyvinylpyrrolidon in einer Konzentration von 7-11% (G/G), ein Zusetzen von Hilfsmitteln zu diesem Gemisch gefolgt vom Zusetzen des Gemisches zu N-methyl-2-pyrrolidon umfaßt, wobei das letztere in einem 40-65%igen (V/C) Anteil der Gesamtheit der Zubereitung vorliegt, wobei das Gemisch bis zur vollständigen Auflösung geschüttelt wird und Glycerin bis zum Erreichen von 100% Endgewicht zugesetzt wird.

5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Hilfsmittel, die zugesetzt werden, Antioxidantien/Stabilisatoren sind.

6. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Antioxidantien/Stabilisatoren, die zugesetzt werden, aus Thiodipropionsäure, Acetylcystein, Cystein, Natriumdisulfit, EDTA, Natrium- EDTA, Natriumcitrat, N-propylgallat, Butylhydroxytoluol ausgewählt sind.